NO148142B - Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma - Google Patents

Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma

Info

Publication number
NO148142B
NO148142B NO772978A NO772978A NO148142B NO 148142 B NO148142 B NO 148142B NO 772978 A NO772978 A NO 772978A NO 772978 A NO772978 A NO 772978A NO 148142 B NO148142 B NO 148142B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
factor
plasma
feiba
activity
vii
Prior art date
Application number
NO772978A
Other languages
English (en)
Other versions
NO148142C (no
NO772978L (no
Inventor
Johann Eibl
Otto Schwarz
Fritz Elsinger
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of NO772978L publication Critical patent/NO772978L/no
Publication of NO148142B publication Critical patent/NO148142B/no
Publication of NO148142C publication Critical patent/NO148142C/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829Blood
    • Y10S530/83Plasma; serum
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01Peptide or protein sequence
    • Y10S930/28Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat av menneskelig blodplasma som inneholder et nytt blodkoaguleringsvirksomt stoff, kalt "FEIBA".
Dette stoff påvirker på ny måte blodkoaguleringen og be-virker en omgåelse av faktor VIII-virkningen, hvilket betyr at blodkoaguleringen normaliseres uten tilførsel av faktor VIII. Preparatet er særlig egnet for behandling av hemofili A-pasienter med inhibitor. Forkortelsen "FEIBA" står for "Factor Eight Inhibitor-Bypassing Activity".
Hemofili A er en lenge kjent sykdom (blødersykdom), ved hvilken blodkoaguleringsforløpet er forstyrret ved mangelen av aktiviteten av en blodkoaguleringsfaktor. Denne faktor betegnes som antihemofil-faktor (AHF) eller faktor VIII. En helbredelse av denne medfødte, av defekte gener betingede sykdom som sådan er ikke mulig. Behandlingen kan, i tilfelle av en blødning, bare skje ved intravenøs tilførsel av tilsvarende mengder av faktor VIII, som stammer fra blodet fra en sunn giver. Mens man tidligere var henvist til fullblod, hhv. fullplasma, av hvilke store mengder måtte anvendes, finnes det i dag preparater som inneholder faktor VIII i konsentrert form og også stabil, frysetørret form. Behandlingen med disse preparater fører i de fleste tilfelle til
en hurtig blodstilning.
Det finnes imidlertid også pasienter ved hvilke det ikke
bare foreligger en feil i faktor Vlll-aktiviteten, men som også har et mot faktor VIII rettet hemningsstoff (inhibitor), som, alt efter den tilstedeværende mengde, tilintetgjør virkningen av til-ført faktor VIII ved nøytralisasjon (inhibering). Ved disse faktor Vlll-inhibitor-pasienter har det hittil vært liten utsikt for en vellykket behandling. Den eneste mulighet besto i fjern-elsen av inhibitoren før behandlingen med faktor Vlll-konsentrater, hvilket bare er mulig ved plasmautbytte av pasient-
plasmaet mot plasma fra en sunn giver, eller med plasmaerstat-ningsmiddel. Dette krever en stor teknisk og medisinsk innsats. Plasmautbytningen må gjentaes ved fornyet behandling, da inhibitoren, spesielt efter tilførsel av ny faktor VIII som antigen ved "boostereffekt", igjen efterdannes. En behandling av inhibitor-pasienten med såkalt "immunsuppressiva" for undertrykningen av in vivo-syntesen av inhibitoren har hittil for det meste vært resultatløs.
For kort tid siden viste der seg en ny mulighet for behandling av faktor Vlll-inhibitor-pasienter. Kurczynski og Penner, New Engl. J. Med., bd. 291, sider 164 til 167, 1974, beretter som
de første om en vellykket behandling av faktor Vlll-inhibitor-pasienter med såkalte "aktiverte" prothrombinkompleks-konsentrater. Også i publikasjoner av Sultan, Brouet og Debre, New Engl. J. Med.,
bd. 291, side 1087, 1974, og Abildgaard, Britton og Roberts,
Blood, bd. 44, side 933, 1974, berettes om klinisk resultatrik anvendelse av aktiverte prothrombinkompleks-preparater på blød-
ende faktor Vlll-inhibitor-pasienter.
Den såkalte aktivering av disse prothrombinkompleks-konsentrater er øyensynlig å tilbakeføre til ukjente forurensninger. Preparatene kunne ikke prøves med hensyn til sitt virksomme
prinsipp og ikke standardiseres. Resultatene er derfor usikre og neppe reproduserbare.
US-PS 3 998 946 angår en fremgangsmåte for behandling av blod, plasma eller plasmafraksjoner med kolloidalt SiC^» med det formål å stabilisere plasmaproteinproduktet for langvarig lagring, hvorved plasmaproteiner slik som fibrinogen, plasmin(ogen), cholesterin, lipo-proteiner og triglycerider ble fjernet ved Si02~behandlingen. Når det gjelder generering og etterfølgende isolering, kan man ikke finne noe angitt i US-PS 3 998 946. Fra patentskriftet fremgår det ikke annet enn at siliciumdioxydet er en adsorbent.
DE-OS 2 262 520 angår en fremgangsmåte for fremstilling av et lagringsdyktig blodkoaguleringskonsentrat fra humant plasma, hvilken fremgangsmåte består av forskjellige absorpsjons- og elueringstrinn. Generering av en substans med FEIB-aktivitet finnes ikke angitt i motholdet, tvert om. er det på side 6, 2. avsnitt, uttrykkelig angitt at preparatet er fritt for trombin, den aktiverte form av faktor X, og at koagulasjonsfaktorene II, VII, IX og X ikke inneholdes i ' aktivert form.
DI>AS 2 4 59 291 ar.yår en frongar.gsn-.åte for fremstilling av
et antihemofilt globulinholdig konsentrat hvor man ved siden av et faktor Vlll-holdig protein og et protrombinkompleks fremstiller en stabil løsning av serumproteiner. Kolloidal kiselsyre anvendes for å befri supernatanten for labile proteiner etter isolering av protrombinkomplekset, for å oppnå en stabil løsning av serumproteiner.
Denne fremgangsmåte har således svært lite til felles med foreliggende fremgangsmåte.
Foreliggende oppfinnelse tar sikte på å overvinne de omtalte ulemper og vanskeligheter og har stilt seg som mål å løse den oppgave å fremskaffe et preparat som på reproduserbar og tilsiktet vis sikrer en dannelse av den ønskede faktor VIII-inhibitor-bypass-aktivitet. Faktor Vlll-inhibitor-bypass-aktiviteten skal være målbar og standardiserbar ved hjelp av et egnet forsøks-system. Preparatet skal være klinisk virksomt og forlikelig,
dvs. ved blødende faktor Vlll-inhibitor-pasienter føre til en blodstilling og ikke vise noen uønskede bivirkninger.
Oppfinnelsen angår således en fremgangsmåte ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma, som inneholder et nytt blodkoaguleringsvirksomt stoff kalt Factor-Eight-Inhibitor-Bypassing-Activity sammen med protrombinets faktorer II, VII, IX, X, hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at menneskelig citrationholdig plasma, fra hvilken faktorer VIII etter behov er fjernet og som inneholder protrombinkomplekset, i fravær av fri calciumioner behandles med vannuoppløselige uorganiske koagulenngsfysiologisk-overflateaktive stoffer slik som silicagel, diatoméjord eller kaolin ved et pH-område på 5,5 - 8,5 og ved en temperatur på 0 - 3 0°C, hvorved det nye stoff benevnt FEIBA dannes, hvoretter de vannuoppløselige stoffer fraskilles og den ovenstående væske derpå i og for seg kjent måte behandles med basiske ionebyttere, slik som diethylaminoethyl-gruppeholdige molekylære stoffer på hvilke FEIBA absorberes sammen med faktorene II, VII, IX, X, hvoretter ionebytteren vaskes med en fortynnet saltløsning og behandles med en saltløsning med høyere konsentrasjon enn vaskeoppløsningen for å eluere FEIBA og faktor II, VII, IX, X i.et aktivitetsforhold på 0,1 - 10, fortrinnsvis 0,5 - 2, hvoretter eluatet dialyseres og deretter konsentreres ved lyofilisering.
Det nye stoff med FEIBA-aktiviteten er et protein med en høyere molekylvekt enn den for de ikke aktiverte faktorer II, VII, IX, X (protrombinkompleks). Mens de sistnevnte faktorer har en molekylvekt på ca. 7 0.ooo, har det nye s♦toff en molekylvekt i om-rådet av ca. 100.000.
Som utgangsmateriale ved fremstillingen av det nye preparat anvendes menneskelig citratplasma, som inneholder alle koa-guleringsfaktorene i naturlig form; videre kan også anvendes plasmafraksjoner, som fås etter fraskillelse av faktor VIII (AHF), som f.eks. et over kryopresipiat eller over presipitat I ifølge Cohn stående plasma.
Dannelsen av stoffet FEIBA skjer under over-
holdelse av et pH-område fra 5,5 til 8,5 og en temperatur på
0 - 30°C.
Hensiktsmessig anvendes herved de vannuoppløselige uorgan-. iske koaguleringsfysiologisk-overflateaktive stoffer i en mengde på 0,05 til 5%, fortrinnsvis 0,1 til 1%, beregnet på mengden av plasmaet.
For behandling av plasmaet kan anvendes stoffer som for størstedelen består av findelt siliciumdioxyd, f.eks. stoffer av gruppen diatoméjord, som celit , eller stoffer som er sammensatt av siliciumdioxyd og aluminiumtrioxyd, f.eks. kaolin. Generelt er de stoffer egnet som er kjent som "overflateaktive" i koagul-eringssystemet, hhv. de som ved sin overflateaktivitet er i stand til å innlede kontaktfasen av blodkoaguleringen. Mens overflateaktivebare koaguleringsfaktorer (faktorene XI og
XII) absorberes av disse stoffer i sin aktiverte "form i dette trinn, forblir faktorene II, VII, IX, X sammen med det dannede stoff FEIBA i den overstående væske og kan efter fraskillelse av de overflateaktive, vannuoppløselige stoffer fraskilles under anvendelse av kjente metoder, og anrikes. Til det siste skritt kan f.eks. svakt basiske ioneutbyttere anvendes; diethylaminoethyl-aminoethyl (DEAE) -gruppe-holdiqe, høymolekylære stoffer,f.eks.DEAE
•bundet til cellulose eller tverrbundne dextraner, har vist seg særlig.vellykket. Ved adsorpsjon på de nevnte ioneutbyttere, vasking og eluering av det adsorberte plasmaprotein med øket ione-styrke kan proteinfraksjonen som nå inneholder FEIB-aktiviteten 1 renset og anriket form, isoleres. Efter fjernelse av saltene
ved dialyse og påfølgende frysetørring får man den rå, FEIB-aktivitet inneholdende fraksjon i tørr, stabil, form. Av denne dannes det ferdige preparat ved gjenoppløsning i vann, tilsetning av salter, pH-innstilling, sterilfiltrering og fornyet fryse-tørring .
Undersøkelser over egenskapene av de ifølge oppfinnelsen fremstilte preparater brakte bevis for at faktorene Ila (thrombin) og Xa, ikke bidrar noe til FEIB-aktiviteten. Thrombin i spor som det kan være tilstede i de ifølge oppfinnelsen fremstilte preparater, gir ingen forkortelse av den aktiverte partielle thromboplastintid av faktor Vlll-inhibitorplasma. Heller ikke soya-bønne -t rypsininhibitor , en kjent inhibitor for faktor Xa-aktivitet , hemmer FEIB-aktiviteten av preparatet. på grunnlag av gel-kromatografiske undersøkelser har det vist seg at det nye stoff har en høyere molekylvekt enn de kjente faktorer av prothrombinkomplekset II, VII, IX og X. Da videre de aktiverte faktorer av prothrombinkomplekset opstår ved enzymatisk avspaltning av et brudd-stykke av den tilsvarende naturlige (ikke aktiverte) koaguler-ingsfaktor, altså mindre molekyler oppstår enn molekylet for de tilsvarende ikke-aktiverte faktorer, kan med sikkerhet antaes at FEIB-aktiviteten i preparatene fremstilt ifølge oppfinnelsen,
ikke bevirkes av en aktivert faktor av prothrombinkomplekset, men nettopp av det nydannede stoff med høyere molekylvekt.
For karakterisering av det nye stoff kan på den ene side trekkes frem forholdet av aktivitetene av koagulerings-
faktorene II, VII, IX og X til FEIB-aktiviteten: disse forhold, uttrykt i enheter, ligger mellom 0,1 og 10, fortrinnsvis mellom 0,5 og 2, idet en enhet av faktor II-VII-IX-X tilsvarer aktiviteten av disse faktorer, som gjennomsnittlig inneholdes i 1 ml friskt menneskelig eit ratplasma, og en FEIBA-enhet er definert som den FEIB-aktivitet som forkorter den aktiverte partielle thromboplastintid av et -faktor VII-inhibitorplasma med høy titor til halvparten av tiden jevenført med tiden i et blindforsøk.
På den annen side kan til karakterisering av det nye stoff også anvendes dets amidolytiske aktivitet. Ved amidolytisk aktivitet forstår man et stoffs evne, til å avspalte p-nitroanilin i standari-serte peptidforbindelser som over en amidbinding er bundet til kromoforen p-nitroanilin, hvilket bestemmes fotcmetrisk. Slike standardiserte peptidpreparater fremstilles f.eks. av firmaet Kabi i Sverige. således er peptidet S-2l6o N-benzoyl-L-f enyla lany1-L-valyl-L-arginin-p-nit roanilid.HCl (kortform: Bz-Phe-Va 1-Arg-p-nit roa nil id . HC1) spesifikt for thrombin, S-2222 N-benzoyl-L-isoleucyl-L-glutamyl-L-glycyl-L-arginyl-p-nitroanilid.HC1 (kort form: Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitro - anilid.HCl) for Xa og S-2251 D-valy1-L-leucyl-L-lysyl-p-nitroanilid.2HCl (kort form: D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilid.2HC1) for plasmLn. Prøver man de ifølge oppf innelsen, f remst ilt e preparater mot de nevnte substrater, finner man en forsvinnende liten amidolytisk aktivitet. På den annen side ville en prøve av et preparat med et innhold av thrombin og/eller faktor Xa, når dette innstilles på den samme FEIB-aktivitet, som de ifølge oppfinnelsen fremstilte preparater oppviser, vise en høy amidolytisk aktivitet.
Et videre kjennetegn på preparatene fremstilt ifølere oppfinnelsen ligger også i at de bare har en liten thrombinaktivitet hvis de overhodet har noen. Forholdet mellom thrombinaktiviteten og FEIB-aktiviteten overskrider ikke 0,02, idet thrombinaktiviteten er. uttrykt i NIH-enheter (NIH = US-National Institute of Health), og FEIB-aktiviteten er uttrykt i FEIBA-enheter.
Foreliggende fremgangsmåte og egenskapene av de derved fremstilte preparater er nærmere beskrevet i de følgende eksempler og forsøksresultater.
Eksempel 1
Friskt frosset plasma opptines ved 0 til +4°C, og det derved dannede kryopresipitat fraskilles ved sentrifugering. Den kryo-overstående væske innstilles på pH 7,0 med 0,5 N saltsyre, tilsettes 5 g kaolin pr. 1 liter kryo-overstående væske, og omrøres ved +4°C i 1 time. Derpå fraskilles kaolinet ved sentrifugering. Det dannede stoff FEIBA blir nu, sammen med faktorene av prothrombinkomplekset, adsorbert på DEAE- Sephadex®.
Til dette formål tilsettes 0,5 g DEAE- Sephadex<®>A-50 pr.
1 liter kaolin-overstående væske, og der omrøres i en halv time ved +4°C. DEAE- Sephadexet<®> fraskilles, det overstående plasma kan anvendes for utvinning av gamma-globulin og albumin. DEAE-Sephadex underkastes en to gangers vaskeprosess med en tri-natriumcitrat-natriumkloridoppløsning, idet der anvendes en pH-verdi på 7,5-
For eluering omrøres det erholdte DEAE- Sephadex med 3% natriumklorid, O,1% trinatriumcit rat.2H20 (2% av det opprinnelige plasmavolum) i 20 minutter, og eluatet utvinnes ved filtrering. Dette dialyseres over natten mot 0,05% t rinat riumcit rat .2H,,0 ,
0,1% nat riumkloridoppløsning ved pH 7,0 ved +4°C, fryses så og underkastes en første lyofiliseringsbehandling (bulk). I bulk-materialet bestemmes FEIB-aktiviteten såvel som aktiviteten av faktorene av prothrombinkomplekset.
For fremstilling av det farmasøytisk anvendbare preparat med FEIB-aktivitet skal forholdet av enheter av faktor II-VII-IX-X til FEIBA-enheter ligge mellom 0,5 og 2. Dette kan skje ved blanding av egnede bulk-satser. Bulk-materialet oppløses i destillert, pyrogenfritt vann, slik at FELB-aktivit et en utgjør mellom 10 og 50 FEIBA-enheter pr. ml (i foreliggende fall 25 FEIBA-enheter pr. ml). Efter tilsetning av de nødvendige salter for dannelse av en isoton oppløsning og innstilling av pH mellom 7,0 og 7,5, klares oppløsningen ved membranfi 11 rering og steril - filtreres til slutt gjennom et 0,2 [ im membra nf i lt er. Oppløsningen fylles under sterile betingelser til 20 ml i sluttbeholderne, dypfryses og 1yofi lise res.
Eksempel 2
Som utgangsmateriale tjener igjen friskt frosset plasma, hhv. den derav resulterende kryo-overstående væske. Den kryo-overstående væske tilsettes uten pH-innstilling (naturlig pH = 7,8) 10 g "Celit 512" pr. 1 liter kryo-overstående væske, og omrøres i 3 timer ved +4°C. Efter fraskilling av "Celit" ved sent r i.f ugering skjer opparbeidelsen av preparatet med det dannede stoff FEIBA på samme måte som i eksempel 1.
På de ferdige preparater ble der foruten de vanlige sikker-hetsprøver på sterilitet, uskadelighet, pyrogenfrihet, fravær av HB^-antigen, utført prøver på virksomhet (FEIB-aktivitet), innhold av prothrombinkompleks-faktorer, thrombininnhold såvel som den amidolytiske aktivitet med de tre substrater S-2l6o, S-2222 og S-2251.
De foretatte prøver ble utført på den nedenfor beskrevne måte:
1. Virksomhetsprøve (bestemmelse av FEIBA-enheter).
a) Reagenser:
Faktor V111-inhibitorplasma:
Citratplasma av en pasient med hemofili A lyofilisert.med en inhibitor mot faktor VIII (inhibitortiter minst 10 enheter pr. ml). Under forsøksperioden ble inhibitorplasmaet anbrakt i isbad.
Fosfolipid-kaolin-suspensjon:
Fosfolipid-konsentratet ("Tachostyptan") fortynnes 1:200 i Owrens puffer og tilsettes 0,5% kaolin G/V (0,5 g/lOO ml). Blandingen oppbevares dypfrossen. Under forsøksperioden holdes den ved værelsetemperatur.
Citrat-/koksaltoppløsning som fortynningsmiddel for prøver:
0,7% natriumklorid/O,7% nat riumcitrat.2H20
m/20 calciumklorid:
Under forsøksperioden holdes den ved 37°C.
b) Forsøksmetode:
Efter oppløsning av fraksjon FEIBA-prøven som skal undersøkes
og et FEIBA st andardpreparat med definerte FEIBA-enheter
pr. ml i den angitte mengde destillert vann, fremstilles seks geometriske fortynninger under anvendelse av citrat/ koksaltoppløsningen idet man begynner med 5 FEIBA-enheter pr. ml. Disse fortynninger blir under forsøksperioden holdt i et isbad. Reagensene pipetteres på følgende måte i små glassrør: 0,05 ml faktor Vlll-inhibitorplasma 0,05 ml prøve (fortynninger av forsøksprøven og standarden, såvel som eit rat-/koksaltoppløsning som blindprøve)
0,05 ml fosfolipid-kaolin-suspensjon inkuberes i 6 minutter ved 37°C
0,05 ml m/20 calciumklorid
Tiden fra calciumkloridtilsetningen til koagulatdannelse måles med en stoppeklokke (helling på forsøksrørene eller anvendelse av et automatisk koagulometer).
c) Beregning av FEIBA-enhetene pr. flaske:
Der settes opp en målekurve idet man oppfører koaguleringstidene (i sekunder) for fortynningene av FEIBA-standard-preparatet mot de tilsvarende konsentrasjoner (i FEIBA-enheter pr. ml) på dobbelt logaritmisk millimeterpapir. FEIB-aktiviteten av forsøksprøvefortynningene beregnes under anvendelse av målekurven og ved multiplikasjon med den tilsvarende fortynningsfaktor. Middelverdien av disse resultater tilsvarer FEIB-aktiviteten i forsøksprøven, uttrykt i FEIBA-enheter pr. ml. Multipliserer man denne verdi med oppløsningsvolumet (i ml), får man totalmengden av FEIBA-enheter pr. flaske. 2. Bestemmelse av aktiviteten av koagulasjonsfaktorene II, VII, IX og X.
A) Faktor II-bestemmelse:
a) Reagenser:
Serum: Blod fra en sunn giver (uten antikoagulans) inkuberes i 24 timer ved 37°C. Serumet skilles fra det koagulerte blod, sentrifugeres, oppdeles i porsjoner og oppbevares dypfrosset.
Okse-oxalatplasma absorbert med bariumsulfat (som kilde til faktor V og som fortynningsmiddel for prøver): 9 deler okseblod blandes med 1 del 1,34%-ig natrium-oxalat. Det resulterende plasma absorberes med 10% bariumsulfat. Efter sentrrfugering oppbevares det absorberte plasma oppfylt i porsjoner og dypfrosset.
"Thromborel" (calciumholdig, menneske-thromboplast in) .
b) Forsøksmetode:
Reagensene (de oppbevares med unntagelse av "Thromborel",
under forsøket i et isbad), pipetteres i små glassrør på følgende måte:
O ,05 nil serum
0,05 ml prøve (rekkefortynninger av prøven som skal undersøkes, hhv. et "normalplasma" eller en standard)
inkuberes i 1 minutt ved 37°C
0,2 ml "Thromborel" (holdes under forsøket på 37°C) Tiden fra tilsetningen av "Thromborel" inntil koagulatdannelse måles med en stoppeklokke.
c) Beregning av faktor II-konsentrasjonen:
Av forenede plasmaprøver fra minst 15 sunne givere fremstilles en standardplasma. Denne "poolplasma" gjelder som "normalplasma", og dens faktor II-aktivitet settes til 100%. Derpå oppsettes en målekurve idet man på dobbelt logaritmisk millimeterpapir oppfører koagulasjons-tidene for plasmarekkefortynningene av dette "normalplasma" (ufortynnet, 1:2, 1:4, 1=8, •••) mot de tilsvarende konsentrasjoner. Faktor II-konsentrasjonene av prøvefortynningene uttrykkes i % av normalplasmaet under anvendelse av målekurven og multipliseres med den tilsvarende fortynningsfaktor. Gjennomsnittsverdien av disse resultater tilsvarer aktiviteten av forsøks-materialet i % av faktor IT. Mengden av faktor II som er tilstede i en flaske, beregnes efter følgende formel:
En enhet av faktor II er ekvivalent med den faktor II-aktivitet som gjennomsnittlig er tilstede i 1 ml friskt eit ratplasma.
B) Faktor VII-bestemmelse:
a) Reagenser:
Faktor Vll-mangelplasma: Citratplasma fra en pasient med
sterk faktor VII-mangel (faktor VII under 1%), oppbevares
i dypfrossen tilstand og lyofiliseres efter tilsetning av IO g/l HEPES, med en pH-verdi på 7,0.
Citrat-/koksaltoppløsning som fortynningsmiddel for prøven: 0,7% t rinat riumcit rat . 211^0 , 0,7% nat r iumklor id .
"Thromborel" (calciumholdig menneske-thromboplast in)
b) Forsøksmetode:
Mangelplasraaen og fortynningene av prøven oppbevares i
isbad. "Thromborel" oppbevares under forsøkene ved 37°C. Reagensene pipetteres i små glassrør på følgende måte:
0,05 ml faktor VII-mangelplasma
0,05 ml prøve (rekkefortynninger av prøven som skal undersøkes, hhv. et "normalplasma" eller en standard)
1 minutts inkubering ved 37°C
0,2 ml "Thromborel"
Tiden fra "Thromborel"-tilsetningen inntil koagulatdannelse måles med stoppeklokke. c) Beregning av faktor VII-konsentrasjonen: Beregningen av faktor VII-konsentrasjonen skjer på samme
måte som beskrevet for faktor II.
C) Faktor IX-bestemmelse:
a) Reagenser:
Faktor IX-mangelplasma: Citratplasma fra en pasient med
alvorlig hemofili B (faktor IX under 1%), oppbevares i dypfrossen tilstand.
Fosfolipid/kaolin-suspensjon: Fosfolipid-konsent rat ("Tachostyptan") fortynnes 1:200 i Owrens puffer, tilsettes kaolin (0,5 g/100 ml) og oppbevares dypavkjølt. Okse-oxalatplasma absorbert med bariumsulfat som fortynningsmiddel for prøver: 9 deler okseblod blandes med 1 del 1,34%-ig nat riumoxalat . Det resulterende plasma absorberes med 10% bariumsulfat. Efter sent rifugering fylles det absorberte plasma i porsjoner og oppbevares dypf rosset .
m/20 calciumklorid
b) Forsøksmetode:
Inkubasjon av faktor IX-mangelplasma med fosfol ipid/kaolin-suspensjon: Den nødvendige mengde mangelplasma blandes med-et like stort volum fosfo1ipid/kao1in-suspensjon, inkuberes i 5 minutter ved 37°C og oppbevares derpå i 30 minutter i et isbad.
Reagensene (de oppbevares, med unntagelse av calciumklorid, under forsøket i et isbad), pipetteres, i små glassrør på følgende måte: 0,2 ml inkubert mangelplasma-fosfolipid/kaolin-suspensjon
0,1 ml prøve (rekkefortynninger av prøven som skal undersøkes, hhv. et "normalplasma" eller en st andard)
inkubering i 1 minutt ved 37°C
0,1 ml m/20 calciumklorid (måles under forsøket ved 37°C)
Tiden fra tilsetningen av calciumkloridet inntil koagulat-dannelsen måles med stoppeklokke.
c) Beregning av faktor IX-konsentrasjonen:
Beregningen av faktor IX-konsentrasjonen skjer på samme
måte som beskrevet for faktor II.
D) Faktor X-bestemmelse:
a) Reagenser:
Faktor X-mangelplasma: Citratplasma fra en pasient med
alvorlig faktor x-mangel (faktor X under 1%) oppbevares dypavkjølt eller lyofiliseres efter tilsetning av 10 g/l HEPES og innstilling av pH-verdien på 7,0.
Citrat-koksaltoppløsning som fortynningsmiddel for prøver: 0,7% natriumklorid/O,7% natriumcitrat.2H20 "Thromborel" (calciumholdig, menneskelig thromboplastin).
b) Forsøksmetode:
Reagensene (de oppbevares, med unntagelse av "Thromborel"
under forsøket i et isbad), pipetteres i små glassrør på følgende måte:
0,05 ml faktor X-mangelplasma
0,05 ml prøve (rekkefortynninger av prøven som skal undersøkes, hhv. av "normalplasmaet" eller en standard)
inkubering i 1 minutt ved 37°C
0,2 ml "Thromborel" (holdes under forsøket ved 37°C)
Tiden fra tilsetningen av "Thromborel" inntil koagulatdannelse måles med stoppeklokke.
c) Beregning av en faktor X-konsentrasjon: Beregningen av faktor X-konsentrasjonen skjer på samme
måte som beskrevet for faktor II.
3. Thrombinprøve.
a) Reagenser:
1%-ig fibrinogenoppløsning av menneskelig opprinnelse.
Standardisert thrombin ("Topostasin", Roche, 3000 NIH-thrombin-enheter pr. flaske).
0,7% natriumklorid/O,7% natriumcitrat.2H20 som fortynningsmiddel (citrat-/koksaltoppløsning).
b) Forsøksmetode:
Efter oppløsning av det lyofiliserte produkt i den angitte
mengde destillert vann fremstilles 6 geometriske fortynninger under anvendelse av citrat-/koksaltoppløsning og 8 geometriske fortynninger av det standardiserte thrombin, idet man begynner med 1 NIH-enhet pr. ml.
Forsøksf remgangsmåte:
0,2 ml 1%-ig fibrinogenoppløsning og 0,2 ml prøve (fraksjon FEIBA- og thrombinfortynninger,
såvel som en blindprøve med citrat-/koksaltoppløs-ning)
inkuberes ved 37°C. Tiden inntil koagulatdannelse måles ved tipping av forsøksrørene med stadig større tidsrom, og således fra 10 minutter inntil 1 time. Denne prosess strekker seg over minst 6 timer. En siste tipping av rørene skjer efter inkubasjon over natten. Blindprøven (fortynningsmiddel som prøve) må forbli stabil over natten (ingen koagulatdannelse).
c) Beregning av thrombin-konsentrasjonen:
Der oppstilles en målekurve idet man på dobbelt logaritmisk
millimeterpapir avsetter koaguleringstidene av de geometriske fortynninger av st andardthrombinet mot de tilsvarende konsentrasjoner (thrombinenheter pr. ml). Thrombin-konsentrasjonene av forsøksprøvefortynningene beregnes under anvendelse av målekurven og ved multiplikasjon med den tilsvarende fortynningsfaktor. Middelverdien av disse resultater tilsvarer thrombinaktiviteten av forsøksprøven, uttrykt i thrombinenheter pr. ml. Multipliserer man denne verdi med oppløsningsvolumet i ml, får man totalmengden av thrombinenheter pr. flaske.
4. Bestemmelse av den amidolytiske aktivitet,
a) Reagenser:
Kromogene substrater:
S-2l60: N-benzoyl-L-fenylalanyl-L-valyl-L-arginin-p- nit roanilid .HC1
(Kort form: Bz-Phe-Val-Arg-p-nitroanilid.HC1)
0,5 mg/ml H20 = 0,73 m molar
S-2222: N-benzoyl-L-isoleucyl-L-glutamyl-L-glycyl-L-arginyl-p-nitroanilid.HC1
(Kort form: Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilid. HC1)
1,4 mg/ml H20 = 1,91 m molar
S-2251: D-valyl-L-leucyl-L-lysyl-p-nitroanilid.2HC1
(Kort form: D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilid.2HC1)
1,65 mg/ml H20 = 2,99 m molar
Puffer:
6,06 g "Tris" (tris-(hydroxymethyl)-aminomethan)
= 0,05 molar
10,6 g nat riumklorid = 0,18 molar oppløses i 1 liter destillert vann. pH innstilles med konsentrert saltsyre på 7,4-
b) Forsøksfremgangsmåte:
1,0 ml puff er
0,1 ml forsøksprøve (preparat inneholdende FEIBA) 0,2 ml substrat (S-2160 hhv. S-2222 hhv. S-2251)
Denne blanding fylles i en ved 37°C temperert kyvette (skikttykkelse 1 cm) og økningen av optisk tetthet måles i et fotometer ved 405 nm i tidsintervaller på 1 minutt.
c) Beregning:
Av minst 5 enkeltmålinger beregnes den gjennomsnittlige
økning av den optiske tetthet pr. minutt og multipliseres med 1000. Denne verdi betegnes med AOD.lO^/min, og tjener til å karakterisere den amidolytiske aktivitet (enzym-aktivitet) av den undersøkte prøve med hensyn til det i hvert tilfelle anvendte substrat.
Divideres nu den målte AOD.10 -3/min-vercli med aktiviteten av forsøksprøven i FEIBA-enheter pr. 0,1 ml (anvendt prøve-mengde) hhv. i faktor II, VII, IX, X-enheter pr. 0,1 ml, får man en for angjeldende forsøksprøve, under de nevnte forsøksbetingelser, karakteristisk "spesifikk amidolytisk aktivitet", dvs. den til 1 enhet FEIBA, hhv. 1 enhet faktor II, VII, IX, X svarende A0C.10J/min-verdi.
De i eksempel 1 og 2 fremstilte preparater viste ved de på den beskrevne måte utførte prøver, de i nedenstående tabell angitte egenskaper.
Tallene i parentes angir i hvert tilfelle forholdet til FEIBA-enhetene. Ved de amidolytiske aktiviteter er tallene i parentes den "spesifikke amidolytiske aktivitet", dvs. den angjeldende AOD. 10 ,/min-verdi pr. en i det beskrevne f orsøkssyst em anvendt FEIBA-enhet.

Claims (2)

1. Fremgangsmåte ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma, som inneholder et nytt blodkoaguleringsvirksomt stoff kalt Factor-Eight-Inhibitor-Bypassing-Activity sammen med protrombinets faktorer II, VII, IX, X, karakterisert ved at menneskelig citrationholdig plasma, fra hvilket faktor VIII etter behov er fjernet og som inneholder protrombinkomplekset, i fravær av fri calciumioner behandles med vannuoppløselige uorganiske koaguleringsfysiologisk-overflateaktive stoffer slik som silicagel, diatoméjord eller kaolin ved et pH-område på 5,5 - 8,5 og ved en temperatur på 0 - 30°C, hvorved det nye stoff benevnt FEIBA dannes, hvoretter de vannuoppløselige stoffer fraskilles og den ovenstående væske derpå på i og for seg kjent måte behandles med basiske ionebyttere, slik som diethylaminoethyl-gruppeholdige molekylære stoffer på hvilke FEIBA absorberes sammen med faktorene II, VII, IX, X, hvoretter ionebytteren vaskes med en fortynnet saltløsning og behandles med en saltløsning med høyere konsentrasjon enn vaskeoppløsningen for å eluere FEIBA og faktor II, VII, IX, X i et aktivitetsforhold på 0,1 - 10, fortrinnsvis 0,5 - 2, hvoretter eluatet dialyseres og deretter konsentreres ved lyofilisering.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de vannuoppløselige uorganiske koaguleringsfysiologisk-overflateaktive stoffer anvendes i en mengde fra 0,05 til 5%, fortrinnsvis 0,1 til 1%, beregnet på mengden av plasma.
NO772978A 1976-08-30 1977-08-29 Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma NO148142C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT640576A AT350726B (de) 1976-08-30 1976-08-30 Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO772978L NO772978L (no) 1978-03-01
NO148142B true NO148142B (no) 1983-05-09
NO148142C NO148142C (no) 1983-08-17

Family

ID=3585985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO772978A NO148142C (no) 1976-08-30 1977-08-29 Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma

Country Status (17)

Country Link
US (1) US4160025A (no)
AR (1) AR213861A1 (no)
AT (1) AT350726B (no)
BE (1) BE858031A (no)
CA (1) CA1079191A (no)
CH (1) CH635747A5 (no)
DE (1) DE2734821C3 (no)
DK (1) DK151932C (no)
ES (1) ES461918A1 (no)
FI (1) FI57421C (no)
FR (1) FR2362633A1 (no)
GB (1) GB1554051A (no)
HU (1) HU180816B (no)
LU (1) LU78024A1 (no)
NL (1) NL170922C (no)
NO (1) NO148142C (no)
SE (1) SE443511B (no)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2902158A1 (de) * 1979-01-20 1980-07-31 Biotest Serum Institut Gmbh Verfahren zur herstellung von fibrinogen, einem die gerinnungsfaktoren ii, vii, ix und x enthaltenden prothrombinkomplex, antithrombin iii und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen
EP0044343B1 (en) * 1980-01-28 1984-08-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Prothrombin-containing therapeutic compositions and methods of producing enzymatically active blood clotting factors from prothrombin-containing blood fractions
US4286056A (en) * 1980-01-28 1981-08-25 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Method for making therapeutic enzyme compositions
US4287180A (en) * 1980-01-28 1981-09-01 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Method for treating blood clotting factor inhibitors
EP0035204B2 (en) * 1980-03-05 1991-05-22 Miles Inc. Pasteurized therapeutically active protein compositions
US4404132A (en) * 1980-05-27 1983-09-13 Cutter Laboratories, Inc. Blood coagulation promoting product
ATE15489T1 (de) * 1980-05-27 1985-09-15 Miles Lab Die blutkoagulation aktivierendes produkt und verfahren zu dessen herstellung.
US4391746A (en) * 1980-05-27 1983-07-05 Cutter Laboratories, Inc. Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them
US4361510A (en) * 1980-05-27 1982-11-30 Cutter Laboratories, Inc. Blood coagulation promoting product
US4364861A (en) * 1980-05-27 1982-12-21 Cutter Laboratories, Inc. Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them
AT368883B (de) * 1980-07-22 1982-11-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen
DE3101752A1 (de) * 1981-01-21 1982-08-26 Behringwerke Ag, 3550 Marburg "verfahren zur reinigung der blutgerinnungsfaktoren ii, vii, ix und/oder x und danach hergestellte praeparationen"
US4382083A (en) * 1981-06-25 1983-05-03 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic method for treating blood-clotting defects with factor VIIa
US4479938A (en) * 1981-06-25 1984-10-30 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic composition containing factor VIIa
JPS5866054A (ja) * 1981-10-14 1983-04-20 Sekisui Chem Co Ltd 血液検査用容器
JPS58105064A (ja) * 1981-12-17 1983-06-22 Sekisui Chem Co Ltd 血液凝固促進剤
AT389815B (de) * 1984-03-09 1990-02-12 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten
DE3625090A1 (de) * 1986-07-24 1988-01-28 Behringwerke Ag Mittel zur therapie faktor viii-resistenter haemophilie a und verfahren zu seiner herstellung
CA1330302C (en) * 1988-01-18 1994-06-21 Miroslav Rybak Concentrates of coagulation factors ii, vii, ix and x, method of their preparation and use
AT402891B (de) * 1991-06-20 1997-09-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes
AT398079B (de) * 1991-11-04 1994-09-26 Immuno Ag Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung
AT399818B (de) * 1992-04-24 1995-07-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation
WO1994013329A1 (de) * 1992-12-16 1994-06-23 Immuno Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates
DE4320294A1 (de) * 1993-06-18 1994-12-22 Immuno Ag Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen
US5677162A (en) * 1995-05-01 1997-10-14 New York Blood Center, Inc. Method for activating prothrombin to thrombin
DE19531637A1 (de) * 1995-08-28 1997-03-06 Immuno Ag Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung
EP0796623B1 (de) * 1996-03-20 2005-05-25 Baxter Aktiengesellschaft Pharmazeutisches Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen
AT405485B (de) 1997-05-28 1999-08-25 Immuno Ag Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation
AT407484B (de) * 1997-11-12 2001-03-26 Bio Prod & Bio Eng Ag Arzneimittel zur förderung der wundheilung
EP1523327A1 (de) * 2002-07-23 2005-04-20 Bio-Products & Bio-Engineering Aktiengesellschaft Thrombingenerierfahige und thrombinhaltige pharmazeutische wirkstoffzubereitungen und arzneimittel
DE50311422D1 (de) * 2002-07-23 2009-05-28 Bio & Bio Licensing Sa Thrombingenerierfähige und thrombinhaltige pharmazeutische wirkstoffzubereitungen und arzneimittel
EP2305289A1 (en) 2009-09-16 2011-04-06 Bio-Products & Bio-Engineering Aktiengesellschaft Medicinal products for the treatment of blood coagulation disorders
IS2809B (is) * 2011-03-08 2012-10-15 Haskoli Islands Blóðstorkumæling
RU2648517C1 (ru) * 2017-06-23 2018-03-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России) Способ получения лиофилизированного препарата активированного протромбинового комплекса, обладающего фактор viii-шунтирующей активностью
WO2024012853A1 (de) 2022-07-12 2024-01-18 Biomedizinische Forschung & Bio-Produkte AG Arzneimittel zur förderung der hämostase

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2262520C3 (de) * 1972-12-20 1987-02-12 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Verfahren zur Herstellung eines lyophilisierten, lagerfähigen Konzentrats aus menschlichem Plasma
DE2459291C3 (de) * 1974-12-14 1981-06-04 Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin- Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen
US3998946A (en) * 1975-04-23 1976-12-21 The Regents Of The University Of Minnesota Fibrinogen-free plasminogen-plasmin-free plasma and method of preparing and using same
DD121793A1 (no) * 1975-07-17 1976-08-20
US4027013A (en) * 1976-01-22 1977-05-31 William L. Wilson Clottable fibrinogen free factor VIII and albumin product and process

Also Published As

Publication number Publication date
ES461918A1 (es) 1978-12-16
FR2362633B1 (no) 1981-06-12
LU78024A1 (no) 1978-01-11
FI772408A (fi) 1978-03-01
FR2362633A1 (fr) 1978-03-24
DK384577A (da) 1978-03-01
FI57421B (fi) 1980-04-30
NL170922C (nl) 1983-01-17
DE2734821B2 (de) 1980-11-06
NL7708872A (nl) 1978-03-02
FI57421C (fi) 1980-08-11
AT350726B (de) 1979-06-11
DE2734821C3 (de) 1985-03-14
HU180816B (en) 1983-04-29
DE2734821A1 (de) 1978-03-02
DK151932B (da) 1988-01-18
ATA640576A (de) 1978-11-15
US4160025A (en) 1979-07-03
DK151932C (da) 1988-06-20
BE858031A (fr) 1977-12-16
NL170922B (nl) 1982-08-16
CH635747A5 (de) 1983-04-29
SE7707992L (sv) 1978-03-01
SE443511B (sv) 1986-03-03
GB1554051A (en) 1979-10-17
NO148142C (no) 1983-08-17
CA1079191A (en) 1980-06-10
AR213861A1 (es) 1979-03-30
NO772978L (no) 1978-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO148142B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma
Girolami et al. A ‘new’congenital haemorrhagic condition due to the presence of an abnormal factor X (factor X Friuli): study of a large kindred
Hougie et al. Stuart clotting defect. I. Segregation of an hereditary hemorrhagic state from the heterogeneous group heretofore called “stable factor”(SPCA, proconvertin, factor VII) deficiency
Kluft et al. A familial hemorrhagic diathesis in a Dutch family: an inherited deficiency of alpha 2-antiplasmin
Zucker et al. Aggregation and release reaction induced in human blood platelets by zymosan
JP2540541B2 (ja) 第v因子濃縮物の製法
Biggs et al. Tissue extract and the contact reaction in blood coagulation
US3717708A (en) Blood coagulation complex
US5906942A (en) Method for preparing stable coagulation controls
JPH05186369A (ja) 治療的用途のためのヒトトロンビン濃厚液の製造法
Suomela et al. The activation of factor X evaluated by using synthetic substrates
Oesterud et al. Activation of the coagulation factor VII by tissue thromboplastin and calcium
Abildgaard Inhibition of the thrombin-fibrinogen reaction by antithrombin III, studied by N-terminal analysis
Ikkala et al. Congenital deficiency of fibrin stabilizing factor
JPH0424360B2 (no)
DK147408B (da) Fremgangsmaade til udvinding af thrombinagtige enzymer fra slangegifte eller slangegiftfraktioner
EP0044343A1 (en) THERAPEUTIC COMPOSITIONS CONTAINING PROTHROMBIN AND PROCESS FOR PRODUCING ENZYMATICALLY ACTIVE BLOOD COAGULATION FACTORS FROM BLOOD FRACTIONS CONTAINING PROTHROMBIN.
DK157939B (da) Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet
US4361510A (en) Blood coagulation promoting product
EP0052874A1 (en) Method for synthesizing procoagulant factor VIII activity
Josso et al. A new variant of human prothrombin: prothrombin Metz, demonstration in a family showing double heterozygosity for congenital hypoprothrombinemia and dysprothrombinemia
EP0041174B1 (en) Blood coagulation promoting product and process of preparing same
Sala et al. Dysfunctional activated protein C (PC Cadiz) in a patient with thrombotic disease
Karpatkin et al. In vivo and in vitro binding of factor VIII to human platelets
Barrowcliffe et al. Studies of anti-Xa activity in human plasma I: Comparison of a fast-acting inhibitor with antithrombin III