DK157939B - Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet - Google Patents

Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet Download PDF

Info

Publication number
DK157939B
DK157939B DK151982A DK151982A DK157939B DK 157939 B DK157939 B DK 157939B DK 151982 A DK151982 A DK 151982A DK 151982 A DK151982 A DK 151982A DK 157939 B DK157939 B DK 157939B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
reagent
thromboplastin
coagulation
buffer
blood coagulation
Prior art date
Application number
DK151982A
Other languages
English (en)
Other versions
DK151982A (da
DK157939C (da
Inventor
Helmut Jering
Udo Becker
Peter Roeschlau
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of DK151982A publication Critical patent/DK151982A/da
Publication of DK157939B publication Critical patent/DK157939B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK157939C publication Critical patent/DK157939C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/10—Anilides
    • C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Description

i
DK 157939B
Opfindelsen angår et reagens .til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet (Quick-test) indeholdende thromboplastin, et syntetisk thrombi nsubstrat og en puffer.
5 Koagulationsfysiologiske undersøgelser finder i vidt omfang anvendelse på hospitaler, i lægepraksiser og på laboratorier, blandt andet til præoperative undersøgelser, til erkendelse af en blødnings- eller thrombose-risiko, til overvågning af anti-koagulationsterapi hos thrombosetruede patienter og ved kon-10 trol af forløbet af talrige sygdomme, f.eks. svære infektioner, leverfunktionsskader og ondartede sygdomme.
De oftest gennemførte koagulationsprøver er globalprøver, hvor funktionen af flere af de i koagulationsforløbet deltagende 15 komponenter samtidigt bestemmes. Som vigtigste globalprøve er den såkaldte prothrombintidsprøve (Quick-test, A.J. Quick, Am.
J. Physiol. 118, 260 (1937)) og den såkaldte aktiverede partielle thromboplastin-tidsprøve (PTT). I det følgende skal ved "Quick-test" forstås bestemmelsen af det exogene koagulations-20 systems blodkoagulationsforhold. Dette system sættes i gang via frigørelsen af thromboplastin fra beskadiget væv. Quick-testen tilvejebringer oplysninger om funktionstilstanden af komponenterne, der henregnes til det såkaldte exogene koagulationssystem. PTT-prøven giver kendskab til funktionstilstanden 25 af komponenterne, der deltager i det endogene koagulations system, som udløses ved kontaktaktivering af Faktor XII. Når forsøgsresultaterne tyder på en patologisk tilstand, kan defekten til at begynde med ikke henføres til nogle bestemte komponenter. Disse må derefter følges af en bestemmelse af 30 enkelte koagulationsfaktorer, hvortil lige så egnede prøvesystemer er kendte.
Ved gennemførelsen af koagulationsfysiologiske prøver er den sædvanlige målestørrelse for det meste koagulationstiden.
35 Derved registreres den tid, som forløber efter tilsætning af reagenset til undersøgelsesvæsken indtil dannelse af et koa-gulat. Uafhængig af arten af koagulationsfaktorerne, der skal 2
DK 157939B
bestemmes, er de kendte prøver således anlagt, at omdannelsen af fibrinogen til fibrin via enzymet thrombin til slut udløses. Omdannelsen af fibrinogen (opløseligt) til fibrin (uopløseligt) tjener derfor som indikatorreaktion, med undtagelse 5 af, når fibrinogen selv skal bestemmes.
Til måling af koagulationsindtrædelsen kendes talrige metoder. Hyppigst indføres periodisk en lille platinkrog i koagulationsmediet, som ved dannelsen af et koagulat udtrækker en 10 fibrintråd af opløsningen. Dette tidspunkt registreres derpå som koagulationsslutpunktet. Registreringsforløbet kan ske manuelt ved hjælp af et stopur eller elektrisk ved udløsning af en kontakt, når platinkrogen anvendes som elektrode. En automatisering med tanke på almindelige kl inisk-kemiske ana-15 lyser er ikke mulig ifølge dette system, eftersom en kontinuerlig produktion af prøver ikke er mulig, koagulaterne ikke automatisk kan skylles ud, og krogene ikke kan renses tilstrækkeligt mellem analyserne.
20 En anden mulighed for registrering af koagulationstider udgøres af den ved koagulationen optrædende uklarhed, som fremkaldes ved dannelsen af det uopløselige fibrin. Optisk registrerede koagulometre, som arbejder efter dette princip, er kendte. I praksis begrænses dette princip imidlertid, da mange 25 plasmaer fremviser en høj grad af egénuklarhed, de anvendte reagenser er til dels selv uklare, og koagulationen kan ske så langsomt ved patologisk undersøgelsesmateriale, at intet entydigt signal fremkommer.
30 Den enkleste mulighed for at undgå uklarhedsproblemer ved anvendelse- af chromogene substrater i Quick-testen ville være at arbejde ved større fortynding. Dette er dog ikke uden videre muligt ved den kendte fremgangsmåde, da reaktionstiden samtidigt med fortyndingen stærkt forlænger koagulationsprøven, og 35 den mulige fordel ved automation, nemlig korte måletider, ophæves igen på grund af forlængede reaktionstider.
r 3
DK 157939B
Fra en bestemt fortynding er det i prøven indeholdte fibrinogen ikke mere tilstrækkeligt til indikatorreaktionen, som består i omdannelsen af fibrinogen til fibrin. 1:10 fortyndet plasma har f.eks. i forhold til ufortyndet plasma i Quick-test 5 en ca. 3 - ca. 5 gange forlænget koagulationstid. Omfanget af forlængelsen af koagulationstiderne ved fortynding blev kvantitativt beskrevet af blandt andet Biggs, Proceedings of the Royal Society (6B) 173, 421-441 (1969) og Girolami, Blut 28, 351-360 (1974).
10 Særligt stærkt forlængede reaktionstider opnås, når reagenserne ud over prøvefortyndingen yderligere fortyndes (s. Biggs).
En reagensfortynding skal dog ligeledes ses som en betingelse for en optisk måling af koagulationsforløbene uden uklarheds-15 problemer. De til koagulationsdiagnostikken tilsatte reagenser besidder nemlig en med deres funktion umiddelbar forbunden egenuklarhed. De til gennemførelse af Quick-testene anvendte vævsthromboplastiner er mælkeagtige uklare suspensioner af pattedyrsvæv, f.eks. kaninhjerne.
20
Metoder og reagenser, som er egnede til gennemførelse af globale koagulationsprøver i et fortyndet medium, er allerede beskrevet (jf. Paulsen m.fl. Clinica Chimica Acta 92, 465-468 (1979), Yamada m.fl. Thrombosis Research 15, 351-358 (1979) og 25 EP-OS nr. 0014039). De beror på anvendelsen af et syntetisk chromogent peptidsubstrat til gennemførelse af indikatorreaktionen, der, som omtalt, ikke mere er tilstrækkelig ved forfortynding af fibrinogenindholdet i prøven. Det syntetiske chromogene substrat træder derved i stedet for det naturlige 30 substrat fibrinogen. Det optiske signal opstår ved spaltning af substratet ved hjælp af thrombin, som frigør et optisk bestemme! igt fragment.
En ulempe ved fremgangsmåden med anvendelse af et syntetisk 35 substrat og thromboplastin til den optiske Quick-test består deri, at det ikke er muligt at fremskaffe et forudblandet 1-komponent-reagens, som indeholder samtlige til gennemførelse
DK 157939B
4 af prøven nødvendige substanser. Thromboplastin fremviser nemlig en proteolytisk aktivitet, som fører til en spaltning af substratet og forfalsker dermed substratspaltningen ved hjælp af det dannede thrombin. Desuden ville et sådant reagens hel-5 ler ikke være godt at lagre.
Formålet med opfindelsen er at løse dette problem og at fremskaffe et reagens, som indeholder samtlige til gennemførelsen af prøven nødvendige substanser forudblandet, som er godt at 10 lagre og som giver rigtige resultater.
Ifølge opfindelsen opnås dette ved hjælp af et reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet (Quick-test), indeholdende thromboplastin, et syntetisk thrombi nsubstrat og 15 en puffer, hvilket reagens er ejendommeligt ved, at det har et indhold af ikke-proteolytisk aktivt thromboplastin, der kan opnås ved fremstilling af et acetonetørpulver fra hjerne, inkubation af en neutral vandig opløsning af acetonetørpulveret ved 25 til 40°C, udvinding af den uopløselige fraktion, be-20 handling af en suspension af denne fraktion i fortyndet saltopløsning med et overfladeaktivt middel under tilstedeværelse af formiat og tørring af den fraskilte opløselige fraktion.
Med "acetonetørpulver" forstås i den foreliggende tekst hjer-25 nevæv, som er blevet ekstraheret med acetone og lyofi 1iseret.
Hver fremstilling af et acetonetørpulver ud fra vævsmaterialet kan ske efter kendte metoder til acetonetørpulverfremsti 1-ling. En egnet fremgangsmåde er f.eks. beskrevet i R. Biggs, 30 "Human Blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis", Black-well Scientific Publication Oxford 1976, side 663.
Acetonetørpulveret suspenderes i en neutral vandig opløsning og inkuberes under omrøring ved den angivne temperatur, hvor-35 ved thromboplastin udløses fra acetonetørpulveret. En temperatur mellem 35 og 40°C foretrækkes. Under disse betingelser varer inkubationen omkring en halv time. pH-værdien under r
DK 157939 B
5 inkubationen bør ligge mellem. 6,0 og 8,0, fortrinsvis mellem 6,7 og 7,3. Hensigtsmæssigt holdes den konstant ved hjælp af en egnet puffer. Den uopløselige fraktion lader sig skille fra ved hjælp af centrifugering, f.eks. ved 2.500 G. Den ved cen-5 tri fugeringen fraseparerede udfældning suspenderes på ny i en fortyndet saltopløsning og behandles fortrinsvis med et overfladeaktivt middel af cholsyregruppen under tilstedeværelse af formiat. Til saltopløsningen foretrækkes kogsalt. Egnede koncentrationer ligger mellem 0,2 og 2, fortrinsvis 0,5 til 1%.
10 Koncentrationen af overfladeaktive midler ligger fortrinsvis mellem 0,01 og 0,2%, især når det foretrukne cholat anvendes. Andre overfladeaktive midler kan dog også anvendes.
Som formiat kommer alkali- og jordalkaliformiater først og 15 fremmest i betragtning. Særligt foretrukket er calciumformiat. Koncentrationen ligger fortrinsvis mellem 0,005 og 0,05 mol/1. Behandlingen foretrækkes ligeledes gennemført i temperaturområdet mellem 25 og 40°C, varigheden stemmer overens med den tilsvarende ved inkubationen af tørpuTveret. Til slut centri-20 fugeres, f.eks. ved 2.500 x G, og den opnåede suspension af et ikke mere proteolytisk virksomt thromboplastin frysetørres, eventuelt efter forudgående tilsætning af de andre bestanddele af reagenset ifølge opfindelsen. Reagenset kan dog også sammenblandes af de faste tørrede substanser i de ønskede mængde-25 forhold.
Som syntetisk thrombi nsubstrat kan principielt anvendes ethvert af de kendte syntetiske thrombinsubstrater. Talrige sådanne thrombi nsubstrater er almindelige i handelen. Foretruk-30 ket er substratet Tos-Gly-Pro-Arg-pNA (der kan fås fra Boehringer Mannheim GmbH), såvel som det af Kabi AB, Sverige under betegnelsen S-2238 solgte H-D-Phe-Pip-Arg-pNA. Disse substrater frembringer ved den enzymatiske spaltning farvede spaltningsprodukter, der optisk let lader sig kvantitativt bestem-3 5 me.
Reagenset ifølge opfindelsen indeholder fortrinsvis thromboplastin i en koncentration på 3 til 20 vo1umen%, særligt fore-
DK 157939B
6 trukket 6 til 10 volumen%, med en aktivitet som beskrevet i eksempel 1, syntetisk thrombi nsubstrat i en mængde på 2 x 10-5 til 20 x 10"5 mol/1 såvel som en puffer med pH-værdi 7,2 til 8,5. Pufferkoncentrationen ligger fortrinsvis mellem 0,05 og 5 0,25 mol/1. I princippet er enhver puffer, der er virksom i det angivne pH-område, egnet. Særligt foretrukket er dog trispuffer. De bedste resultater opnås med 0,1 mol/1 puffer, pH-værdi 8,1. Den særligt foretrukne substratkoncentration ligger på omkring 5 x 10-5 mol/1.
10
Reagenset ifølge opfindelsen indeholder desuden fortrinsvis calciumsalt i en koncentration på 2 til 10 mmol/1, ligesom de ovenstående angivelser regnet som den færdige reagensopløsning.
15
Som calciumsalt egner sig ethvert let vandopløseligt calciumsalt, f.eks. et halogenid eller acetat. Foretrukket er cal-ciumchlorid.
20 Fortrinsvis indeholder reagenset yderligere 0,5 til 3 vægt% urinstof. Særligt foretrukket er 1,4 til 1,6%.
Et reagens ifølge opfindelsen med den ovenstående sammensætning er ganske vist i form af den brugsfærdige opløsning et 25 fortyndet system, men reaktionsvarigheden, sammenlignet med de kendte prøver i ufortyndede systemer, er kun uvæsentligt forlænget. Bestemmelsen varer ved normalplasma ca. 30 sekunder, ved plasmaer fra personer, som er under thromboseprofylakse ved hjælp af oralt antikoagulationsmiddel, ca. 60 til 120 30 sekunder. Ved den kendte ufortyndede Quick-tests med de ovenfor beskrevne ulemper ligger de tilsvarende tider for normalplasma på ca. 15 sekunder, ved de nævnte patologiske plasmaer på 30 til 60 sekunder. Heroverfor behøver de kendte prøver, der med hensyn til fortynding er sammenlignelige med reagenset 35 ifølge opfindelsen, omtrent den femdobbelte reaktionstid.
Reagenet ifølge opfindelsen anvendes hensigsmæssigt således, at tiden indtil opnåelsen af en bestemt absorption ved en 7
DK 157939B
given bølgelængde måles. En kinetisk vurdering er dog også mulig, hvorved en kalibreringskurve hensigtsmæssigt lægges til grund for vurderingen. Den i forhold til kendte optiske Quick-tests på basis af syntetiske substrater væsentligt for-5 ringede bestemmelsesvarighed skyldes en synergistisk virkning af de uden for det fysiologiske område liggende ionstyrker og pH-værdier, og den under KM (Michael is-konstanten) liggende substratkoncentration.
10 De følgende eksempler illustrerer opfindelsen.
Eksempel 1 A) Fremstilling af ikke-proteolytisk thromboplastin: 15
Ud fra en frisk udvundet kaninhjerne fremstilles et tørpulver ved hjælp af en acetonebehandling efter fremgangsmåden i R. Biggs, "Human Blood Coagulation, Haemostatis and Thrombosis" Blackwell Scientific Publications Oxford 1976, S. 663, og 20 tørres til konstant vægt.
2,5 g af ovennævnte pulver suspenderes i 50 ml 0,1 mol/1 natriumacetat-puffer, pH 7, og omrøres i 30 minutter ved 37eC. Derpå centrifugeres i 15 minutter ved 2.500 G, og udfældningen ^25 omrøres på ny i 30 minutter ved 37°C i 50 ml 0,7% natriumchlo-ridopløsning, som indeholder 0,05% natriumdesoxycholat, og 0,0125 mol/1 calciumform i at. Derpå centrifugeres i 15 minutter ved 2.500 G.
30 Denne ovenstående væske indeholder thromboplastin uden proteo-lytisk aktivitet.
Thromboplastinsuspensionens aktivitet bestemmes ved hjælp af Quick-test, som gennemføres ifølge DIN 58910. Et ifølge DIN 35 58910 fremstillet normalt referenceplasma viser en koagula tionstid på 12 ± 2 sekunder.
DK 157939 B
8 B) Fremstilling af en reagensblanding til gennemførelse af en optisk Quick-test:
Opløsning 1: 0,1 mol tris/HCl, pH 8,1, indeholdende 2% glycin.
5
Opløsning 2: Vandig opløsning af Tos-Gly-Pro-Arg-pNA-acetat 497 mg/dl.
Opløsning 3: Thromboplastinsuspension fremstillet efter A.
10 10 volumenenheder opløsning 1 blandes med 4 volumenenheder opløsning 3 og 1 volumenenhed opløsning 2 og lyofiliseres i 3 mial iquotmængder.
15 Eksempel 2
Gennemførelse af en optisk Quick-test.
Til gennemførelse af testen opløses 3 ml af lyofilisatet i 20 eksempel 1 B i 30 ml tris/HCl-puffer, pH 8,1, som yderligere indeholder 1,5% urinstof og 6 mmol/1 CaCl2· Reaktionsblandingen bringes til 37eC. Fotometerindsti 11 ing: Måletemperatur 370C, bølgelængde 405 nm.
25 50 μΐ prøver (citratplasma, henholdsvis fortyndinger af ci tratplasma i fysiologisk NaCl) pipetteres over i kuvetter, og reaktionen med 750 μΐ reaktionsblanding startes. Samtidigt startes en skriver (lo cm/min).
30 Der opnås de i fig. 1 tegnede kurver på den medfølgende tegning, når der efter hinanden anvendes henholdsvis ufortyndet, 1:2, 1:4 og 1:10 forfortyndede plasmaer.
Eksempel 3 35
Ud fra de i eksempel 2 opnåede kurver bestemmes tiden indtil opnåelsen af en 30 mE højere ekstinktion i forhold til ud 9
DK 157939B
gangsekstinktionen. Disse tider afbi Ides mod den reciprokke plasmafortynding. Man opnår en lige linie. Den forudgivne ekstinktion på 30 mE kan varieres inden for et bredt område, f.eks. fra 10 til 150 mE. Man opnår altid en ret linie.
5
Eksempel 4 (sammenligning)
Svarende til eksempel 2 prøves 60 plasmaer fra patienter, som er under oral antikoaguleringsterapi, ufortyndet, og tiden 10 indtil opnåelsen af en 30 mE over udgangsværdien liggende ekstinktion registreres. De samme plasmaer prøves ved hjælp af den sædvanlige Quick-test under anvendelse af et koagulometer efter Schnitker og Gross, og koagulationstiderne registreres.
De i begge systemer opnåede data underkastes en lineær regres-15 sionsanalyse. Det resulterer i en korrelationskoefficient på r = 0,96.
Eksempel 5 (sammenligning) 20 Svarende til eksempel 1 B fremstilles en reagensblanding under anvendelse af et ifølge eksempel 1 A fremstillet ikke-proteo-lytisk thromboplastin, såvel som et thromboplastin, der er almindeligt i handelen (thromboplastin a, Boehringer Mannheim). Reagensblandingen fortyndes med tris/HCl-puffer, pH 8,1, sva-25 rende til eksempel 2 til den færdige reaktionsblanding, og denne lagres ved stuetemperatur (ca. 20°C). Med bestemte tidsintervaller måles egenekstinktionen af reaktionsblandingen ved 405 nm. Resultatet er vist i tabel 2. Man finder ved thromboplastin, der er almindelig i handelen, en hurtig eks-30 tinktionsforøgelse, der er forårsaget af en spaltning af det tilsatte chromogene peptidsubstrat.
35

Claims (4)

1. Reagens til optisk bestemmelse af blpdkoagulationsforhol- det (Quick-test), indeholdende thromboplastin, et syntetisk thrombinsubstrat og en puffer, kendetegnet ved, at det har et indhold af ikke-proteolytisk virksomt thromboplastin, der kan opnås ved fremstilling af et acetonetørpulver fra 20 hjerne, inkubation af en neutral vandig opløsning af acetone-tørpulveret ved 25 til 40°C, udvinding af den uopløselige fraktion, behandling af en suspension af denne fraktion i fortyndet saltopløsning med et overfladeaktivt middel under tilstedeværelse af formiat og tørring af den fraskilte opløselige 25 fraktion.
2. Reagens ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder ikke-proteolytisk thromboplastin i en koncentration på 3 til 20 volumen*, 2 x 10“5 til 20 x 10“5 mol/1 syntetisk 30 thrombinsubstrat, 0,05 til 0,25 mol/1 puffer, pH 7,2 til 8,5, og 2 til 10 mmol/1 opløseligt calciumsalt.
3. Reagens ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det yderligere indeholder 0,5 til 3% urinstof. 35
4. Reagens ifølge krav 2 eller 3, kendetegnet ved, at det indeholder trispuffer.
DK151982A 1981-04-02 1982-04-02 Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet DK157939C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3113350 1981-04-02
DE3113350A DE3113350A1 (de) 1981-04-02 1981-04-02 Reagens zur optischen bestimmung des blutgerinnungsverhaltens

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK151982A DK151982A (da) 1982-10-03
DK157939B true DK157939B (da) 1990-03-05
DK157939C DK157939C (da) 1990-08-27

Family

ID=6129170

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK151982A DK157939C (da) 1981-04-02 1982-04-02 Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4458015A (da)
EP (1) EP0062310B1 (da)
JP (1) JPS57178161A (da)
AT (1) ATE16944T1 (da)
CA (1) CA1198660A (da)
DD (1) DD202347A5 (da)
DE (2) DE3113350A1 (da)
DK (1) DK157939C (da)
ES (1) ES510226A0 (da)
NO (1) NO161079C (da)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1985004426A1 (en) * 1984-03-26 1985-10-10 International Health Services A method of determining the clotting time of blood and particulate reagents therefor
DE3413311A1 (de) * 1984-04-09 1985-10-17 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Reagenz zur bestimmung der thromboplastinzeit
US4755461A (en) * 1986-04-17 1988-07-05 Bio/Data Corporation Tableted blood plasma microconcentrated thromboplastin coagulation reagent
US6261792B1 (en) 1990-12-07 2001-07-17 The Liposome Company, Inc. Lipid-dependent diagnostic assays
JP3180824B2 (ja) * 1991-08-30 2001-06-25 シスメックス株式会社 血液凝固試薬
US5580744A (en) * 1992-04-27 1996-12-03 Avocet Medical, Inc. Test article and method for performing blood coagulation assays
EP0638127B1 (en) * 1992-04-27 2000-08-23 Avocet Medical, Inc. Test article and method for performing blood coagulation assays
US5358853A (en) * 1992-08-03 1994-10-25 Akzo Av Liquid thromboplastin reagent
BR0209540B1 (pt) 2001-05-09 2014-01-21 Aparelho, cartucho e dispositivo de exame e uso do aparelho de exame
DE102008030942A1 (de) 2008-07-02 2010-01-07 Christoph Miethke Gmbh & Co Kg Hirnwasserdrainagen
HUP1300542A2 (hu) * 2013-09-19 2015-03-30 Diagon Kft Eljárás és mérõrendszer véralvadási jellemzõk meghatározására
EP4004560A4 (en) * 2019-07-31 2022-11-30 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. METHODS AND KITS FOR IDENTIFYING THE ORIGIN OF A THROMBUS AND OPTIMIZING TREATMENT AFTER AN ISCHEMIC EVENT

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3183159A (en) * 1962-03-20 1965-05-11 Ortho Pharma Corp Stabilized partial thromboplastin reagent
US3228841A (en) * 1965-06-10 1966-01-11 Warner Lambert Pharmaceutical Diagnostic reagent composition for determining blood coagulation factors and method of use
CH622286A5 (da) * 1975-06-23 1981-03-31 Pentapharm Ag
US4169015A (en) * 1975-07-11 1979-09-25 Ab Kabi Novel chromogenic thrombin substrates
US4289498A (en) * 1979-01-08 1981-09-15 Ortho Diagnostics, Inc. One-stage prothrombin assay and compositions useful therein

Also Published As

Publication number Publication date
ES8302099A1 (es) 1983-02-01
DE3267870D1 (en) 1986-01-23
EP0062310A1 (de) 1982-10-13
EP0062310B1 (de) 1985-12-11
CA1198660A (en) 1985-12-31
NO821101L (no) 1982-10-04
DD202347A5 (de) 1983-09-07
JPS57178161A (en) 1982-11-02
US4458015A (en) 1984-07-03
JPS6356501B2 (da) 1988-11-08
NO161079B (no) 1989-03-20
DK151982A (da) 1982-10-03
NO161079C (no) 1989-06-28
DE3113350A1 (de) 1982-10-21
DK157939C (da) 1990-08-27
ES510226A0 (es) 1983-02-01
ATE16944T1 (de) 1985-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sas et al. Abnormal antithrombin III (antithrombin III ‘Budapest’) as a cause of a familial thrombophilia
Denson et al. The measurement of heparin
Niewiarowski et al. Studies on the adsorption and activation of the Hageman factor (factor XII) by collagen and elastin
US4784944A (en) Prothrombin time determining reagent and methods of using and preparing the same
JP3246749B2 (ja) 組換えウサギ組織因子に基づくプロトロンビン時間試薬
NO148142B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av et blodkoaguleringsfremmende preparat fra humant blodplasma
JP3055933B2 (ja) 改良された安定な凝固対照
US4234682A (en) Method and reagent for determining biologically active heparin in plasma
JP4176157B2 (ja) 凝固パラメーターの決定方法
DK157939B (da) Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet
CA2252983A1 (en) Method for determining the anticoagulatory potential of a sample
JPH06199673A (ja) リン脂質依存性プロトロンビン活性剤、その製造方法、凝血試験法および凝血試験キット
CA2155503C (en) A method for detecting defects in protein c/protein s mediated blood clotting
JPS588840B2 (ja) プロトロンビンの測定方法
US3880714A (en) Diagnostic reagent
Ikkala et al. Congenital deficiency of fibrin stabilizing factor
CA1060324A (en) Method for determination of factor xal in blood
DIDISHEIM Hageman factor deficiency (Hageman trait): case report and review of the literature
Bloom Changes in blood after using an extracorporeal circulation
AU1515701A (en) Use of russell's viper venom-induced plasma factor xa activity to monitor the activity of factor xa inhibitors
EP0440775B1 (en) Factor ix chromogenic assay
Sjølin The thrombin generation test in the diagnosis of classical hemophilia and Christmas disease
JPH08510057A (ja) 血液凝固の活性化部分トロンボプラスチン時間テストのための活性化剤成分としての及び血液凝固障害の検出のためのテトラヒドロキシキノン類
Triantaphyllopoulos et al. Solubility of fibrin clots in solutions of heparin
Bick Hereditary plasma protein disorders

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed
PBP Patent lapsed