NO147570B - Fremgangsmaate for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin Download PDFInfo
- Publication number
- NO147570B NO147570B NO762324A NO762324A NO147570B NO 147570 B NO147570 B NO 147570B NO 762324 A NO762324 A NO 762324A NO 762324 A NO762324 A NO 762324A NO 147570 B NO147570 B NO 147570B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- phenylhydantoin
- hydantoin
- culture
- enzymatic conversion
- phenylgyline
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 8
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 5
- 150000001469 hydantoins Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- ZGUNAGUHMKGQNY-SSDOTTSWSA-N D-alpha-phenylglycine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 229940053195 antiepileptics hydantoin derivative Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 229940091173 hydantoin Drugs 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- GIOUOHDKHHZWIQ-UHFFFAOYSA-N 2-(carbamoylamino)-2-phenylacetic acid Chemical compound NC(=O)NC(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GIOUOHDKHHZWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- WJRBRSLFGCUECM-UHFFFAOYSA-N hydantoin Chemical compound O=C1CNC(=O)N1 WJRBRSLFGCUECM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 3
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJCWONGJFPCTTL-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyphenylglycine Chemical compound OC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LJCWONGJFPCTTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXQJDVBMMRCKQG-UHFFFAOYSA-N 5-phenylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)NC1C1=CC=CC=C1 NXQJDVBMMRCKQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102100036238 Dihydropyrimidinase Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241001510071 Pyrrhocoridae Species 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CVXBEEMKQHEXEN-UHFFFAOYSA-N carbaryl Chemical group C1=CC=C2C(OC(=O)NC)=CC=CC2=C1 CVXBEEMKQHEXEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005286 carbaryl Drugs 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 108091022884 dihydropyrimidinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
- C12N9/86—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides, e.g. penicillinase (3.5.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av D-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av D,L-fenylhydantoin og etterfølgende avspalting av karbamyIresten, og det særegne ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er at D,L-fenylhydantoin ved temperaturer fra 10 til 6 0°C og pH fra 7 til 10 hydrolyseres ved hjelp av hydrolaser erholdt ved dyrking av mikroorganismer fra slekten Pseudomonas som anvender hydantoin-derivater som eneste nitrogenkilde, fortrinnsvis stammen CBS 145.75 eller 146.75.
Disse trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravet.
Et fåtall aminosyrer, spesielt fenylglycin og p-hydroksy-fenylglycin er viktige utgangsforbindelser for fremstilling av-fbrbinderlserrmed :vid7 anvende!se ■=• innen- den farmasøytrske-" industri.
Et antall forsøk er tidligere gjort på fremstilling av D-aminosyrer, men ingen av disse metoder kunne gjennomføres i industriell målestokk.
De kjemiske metoder som hittil er anvendt for separering av optiske isomerer er meget dyre og gir lavere utbytter. De er basert på bruken av kamfer-sulfonsyre.
En annen metode går ut på selektiv hydrolyse av D-acyl-aminosyre med acylaseenzym. D-acylasene er imidlertid forholdsvis sjeldne og alltid urene med hensyn til L-acylase og dette gjør metoden vanskelig og fører til oppnåelse av et produkt med dårlig optisk renhet.
Enzymhydrolysen som er gjenstanden for den foreliggende oppfinnelse, tillater derimot fremstilling av en enkel stereo-isomer form av fenylglycin fra en racemisk for-bindelse, nemlig fenylhydantoin.
En metode for enzymatisk separering av visse D,L-aminosyrer er allerede tidligere foreslått i det norske patentskrift 141.b89« Denne metode omfatter hovedsakelig trinnet med at man underkaster den racemiske form av hydantoin-forbindelser med den generelle formel
hvori R er metyl eller isopropyl for en enzymatisk hydrolyse ved hjelp av dihydropyrimidinase ekstrahert fra kalvelever. Hydrolysen i samsvar med oppfinnelsen foregår i henhold til skjemaet.
hvoretter karbaraylresten avspaltes fra karbamylderivatet for oppnåelse av D-fenylglycinet.
Ved den enzymatiske separering i samsvar med oppfinnelsen anvendes hydrol<y>ser som tilveiebringes av mikroorganismer av slekten Pseudomonas, som kan anvende hydantoin som eneste nitrogenkilde.
Mer detaljert går fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen ut på trinnene med å frembringe det spesifikke enzym som dannes under dyrking av mikroorganismer av Pseudomonas-slekten oghydrolysere DyL-fenylhydantoin til karbamylderivatet, hvori enzymet kan anvendes direkte som en bakteriesuspensjon eller et dyrkingsmedium, eller kan ekstraheres fra cellene og dyrkingsmediet. Avspaltingen av karbamylresten foretas på i og for seg kjent måte.
Testen for den selektive hydrolyse av racemisk hydan-toinderivat ved hjelp av enzymer fra mikroorganismer ble gjennomført på følgende måte:
Bakteriestammene, isolert fra jord, planter, avfall av forskjellige typer, etc, såvel som stammer fra bakterie-kolleksjoner ble inokulert fra skrå-agar i 250 ml's kolber inneholdende 50 ml av følgende dyrkingsmedium:
Sterilisering 30 min. ved 110°C.
Etter 20 til 2 4 timers inkubering (orbitalomrøring) ved 30°C ble 30 ml kolber inneholdende 100 ml av det samme medium inkubert med 5 ml av den ovennevnte forkultur.
Etter 18 til 22 timer.s. ytterligere inkubering ble den enzymatiske reaksjon med de hvilende celler gjennomført i prøverør med 10 ml<1>s fosfatbuffer, 0,07 M, pH=8,5,
med 20 mikromol/ml 5-(D,L)-fenylhydantoin, det ble tilsatt 1 ml av bakteriesuspensjonen (tørr vekt omtrent 50 mg pr. ml). Etter 30 min. inkubering ved 30°C ble reaksjonen med p-dimetylaminobenzaldehyd gjennomført for den kvantitative bestemmelse av det derved dannede karbamylderivat (J.Biol.Chem., 238, 3325(1963)). De stammer som ble anvendt er gjengitt i tabell 1. De av dem som er betegnet med nummere 942 og 945 er deponert i Centraal-bureau voor Schimmelcultures hvor de er gitt betegnelsene CBS 145.75 henhv. 146.75.
De bakteriestammer som er gjengitt i tabell 1 vokser
godt i alle vanlige laboratoriemedia. De er alle i stand til å anvende hydantoin som en eneste nitrogenkilde. Veksten finner sted ved en temperatur på fra 5 til 40°C med optimal temperatur mellom 25 og 30°C.
Med hensyn til klassifikasjonen ble skjemaet i Bergey's Manual, 7.utgave fulgt sammen med forslag av Lysenko, J.Gen. Microbio]. 25, 379 (1961) og Stainer, Palleroni, Doudoroff, J.Gen. Microbiol.43, 159-271 (1966).
Det er funnet at under den enzymatiske hydrolyse av D-hydantoin ved alkalisk pH (7-10) foregår det en ikke-enzymatisk racemisering av det resterende L-hydantoin.
Av denne grunn, og som en følge av den kontinuerlige fjernelse av D-hydantornet ved den enzyma ti ske:- hvÆrtriysev vil alt karbamylderivatet oppnås i D-formen ved avsluttet reaksjon.
Identititen av D(-)-N-karbamylfenylglycin ble vist etter krystallisering av reaksjonsproduktet, på basis av IR, NMR, massespektra og elementæranalyse.
25
Den spesifikke rotasjon er /ca/ = -137°
(c = 1% i 1N NH^OH) tilsvarende den som er gjengitt i litteraturen.
Racemiseringshastigheten av L-hydantoin er en funksjon
av temperaturen og pH og er desto større ved høyere temperatur og mer basisk pH. Ved imidlertid å arbeide ved en pH i nærheten av 7,5, er racemiseringshastigheten tilstrekkelig høy til ikke å begrense reaksjonshastig-heten.
Temperaturen av den enzymatiske reaksjon kan holdes mellom 10 og 60°C Ken av praktiske grunner foretrekkes temperaturer mellom 25 og 40°C.
I henhold til oppfinnelsen foregår hydrolysen av hydan-toinet ikke bare i nærvær av mikroorganismer som er dyrket eller i nærvær av intakte celler av disse, men også i ekstrakter av de angitte mikroorganismer. Mikroorgan-ismene kan dyrkes, f.eks. i et flytende næringsmedium for å oppnå en akkumulering av hydrolase i cellene og DL-hydantoinet kan deretter tilsettes til dyrkingskulturen. Den enzymatiske reaksjon kan.-også gjennomføres_med. så^ kalte hvilende celler.
I dette tilfelle utvinnes bakteriecellene fra dyrkingsmediet, vaskes og suspenderes i et passende buf-ret medium hvortil det racemiske hydantoin tilsettes.
I tillegg er det mulig å anvende preparater som inneholder hydrolasene, som f.eks. ekstrakter eller konsentrater av dem, rå eller rensede hydrolasepreparater som er opp-nådde fra celler av de ovenfor angitte mikroorganismer. Endelig" kan rå elTer rensede hydrolaser anvendes, som er immobilisert ved kombinasjoner med makromolekylære forbindelser .
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
EKSEMPEL 1
Til 100 ml av en flytende kultur i det ovenfor angitte medium av stammen Pseudomonas sp. 942 i en 500 ml kolbe tilsettes etter 24 timers inkubasjon (orbital omrøring) ved 30°C, 100 ml av en fosfatbuffer (0,14 M) pH=8,5,
som inneholdt 30 mikromol/ml5-(D,L)-fenylhydantoin.
Etter ytterligere 5 timers inkubasjon, under de samme betingelser, ble mengden av derved dannet N-karbamylfenylglycin bestemt.
Fra 530 mg 5-(D,L)-fenylhydantoin ble det dannet 525 mg N-karbamylfenylglycin, tilsvarende et utbytte på omtrent 90%.
EKSEMPEL 2
En dyrkingsvæske ble fremstilt, med den ovennevnte
•
sammensetning og inneholdende 1 g pr. liter 5-(D,L)-metylhydantoin.
pH ble innstilt til 7,2 med soda og mediet ble fordelt i 50 ml porsjoner i 250 ml kolber. Etter sterilisering ved 110°C i 30 min. ble kolbene inokulert med en kultur av Pseudomonas sp. 942 fra skrå-agar som inneholdt det samme medium med 2% agar (DIFCO) og inkubert ved 30°C i 20 timer med orbitalomrøring (220 omdreininger pr. min.).
Med denne forkultur (optisk densitet ved 550 nm: 0,400; fortynning (1:10) ble de inokulert 5 ml i 500 ml kolber som inneholdt 100 ml av det samme medium og kulturen ble inkubert ved 30°C med orbitalomrøring (220 omdreininger pr. minutt) i 18 timer (siste fase av eksponentiell vekst). Cellene ble så samlet ved sentrifugering (5000 g, 20 min) og vaskes 3 ganger i bufret fysiologisk saltløsning og tilslutt oppslemmet i en fosfatsaltbuffer pH-8,5 med 0,07 M for hvilende celler.
For den enzymatiske hydrolyse ble det inkubert ved 30°C med orbitalomrøring (220 omdreininger pr. minutt) i 250 ml kolber, 64 ml av reaksjonsblandingen sammensatt av: 260 ml bakterier (tørr vekt) og 20 mikromol/ml D,L-fenylhydantoin (=3,52 mg/ml). Ved forskjellige tids-intervaller ble produktet fra hydrolysen, d.v.s. D-karbamylfenylglycin, bestemt med den kolorimetriske metode angitt J.Biol. Chem. 238, 3325 (1963) ved 438 nm. Fig-uren viser resultatene, som prosent av teoretisk utbytte av det derved dannede karbamylderivat. På abscissen er angitt tid i timer og på ordinaten prosent dannet D (-)-N-karbamylfenylglycin.
EKSEMPEL 3
Det ble fremstilt et halvsyntetisk medium med følgende sammensetning:
Mediet ble fordelt i 50 ml porsjoner i 250 ml kolber og
i 100 ml porsjoner i 500 ml kolber og sterilisert i 30 min, ved 110°C.
For forkulturen ble 250 ml kolber inokulert fra skrå-agar med en kultur, av P.se.udamonas_.s_p-.... 94.2_-s_tammen-_o.g^ inkubert som i eksempel 2 i 24 timer ved 30°C.
Fra denne., kultur .-.(optisk, densitet, ved 550 nm: 0,245; for^-tynning 1:10) ble det inokulert 5 ml i 500 ml kolber. Etter en 19 timers'inkubering ved 30°C, som ovenfor, ble de hvilende celler fremstilt som i eksempel 2.
Enzymatisk hydrolyse ble gjennomført ved 30°C i en reaksjonsblanding som inneholdt i 24 ml buffer 280 mg bakterier (på basis av tørr vekt) og 20 mikromol /ml 5-(D,L)-fenylhydantoin. Etter 5, 10 og 15 min. ble mengden av det derved dannede karbamylderivat bestemt.
EKSEMPEL 4
Bakterieceller ble fremstilt av stammen Pseudomonas
sp. 942 som beskrevet i eksempel 2. En suspensjon av dem (42 mg pr. ml av tørre celler) i en fosfatsaltbuffer,
0,1 M, pH=8, ble utsatt for mekanisk knusing ved anvend-
else av en "Manto-Gaulin" homogenisator som arbeidet ved et trykk på 850 kg/cm ved en temperatur under 24°C.
Celle-massen ble skilt fra ekstrakten ved sentrifuger-
ing (25,000 g 30 min:).
Til 950 ml fosfatsaltbuffér, pH=7,7, inneholdende 2,12 g 5-(D,L)-fenylhydantoin ble det tilsatt 50 ml av ekstrakten som inneholdt 8.5 00 U av enzymet (1U er den mengden enzym som i en fosfatbuffer, pH=7,7 ved 30°C, inneholdende 12 mikromol/ml 5-(D,L)-fenylhydantoin, omdanner 1 mikromol/ml av substratet i løpet av 60 min.).
Etter 1 time ved 30°C hadde det dannet seg 1,7 g D-karbamylderivat tilsvarende omtrent 80% total hydrolyse.
EKS EMBEJL— 5~ .
Som i eksempel 4 ble det tilsatt til 993 ml substrat,
7 ml av et preparat av den- ekstrakt som var...renset omtrent 7 ganger. Etter 1 time ved 30°C var det dannet 1,7 g D-karbamylderivat tilsvarende omtrent 80% av total hydrolyse.
EKSEMPEL 6
Under de samme betingelser som i eksempel 2, ble det
etter 30 min. ved 30°C, med stammen Pseudomonas sp.
945, fra 352 mg 5-(p,L)-fenylhydantoin, oppnådd 220 mg N-karbamylfenylglycin, tilsvarende omtrent 57% av det teoretiske utbytte.
Claims (1)
- Fremgangsmåte for fremstilling av D-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av D, L-f enylhydantoin._og. etter-følgende avspalting av karbamylresten,karakterisert ved av D,L-fenylhydantoin ved temperaturer fra 10 til 60°C og pH fra 7 til 10 hydrolyseres ved hjelp av hydrolaser erholdt ved dyrking av mikroorganismer fra slekten Pseudomonas som anvender hydantoin-derivater som eneste nitrogenkilde, fortrinnsvis stammen CBS 145.75 eller 146.75.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO77771998A NO147452C (no) | 1975-07-10 | 1977-06-08 | Hydrolasepreparat for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT25252/75A IT1039757B (it) | 1975-07-10 | 1975-07-10 | Complessi enzimatici atti a trasformare idantoine raceme in am minoacidi otticamente attivi e loro applicazione |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO762324L NO762324L (no) | 1977-01-11 |
| NO147570B true NO147570B (no) | 1983-01-24 |
| NO147570C NO147570C (no) | 1983-05-04 |
Family
ID=11216134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO762324A NO147570C (no) | 1975-07-10 | 1976-07-02 | Fremgangsmaate for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4111749A (no) |
| JP (1) | JPS5210484A (no) |
| AU (1) | AU502630B2 (no) |
| BE (1) | BE843991A (no) |
| CA (1) | CA1070254A (no) |
| CH (1) | CH629179A5 (no) |
| DD (1) | DD126424A5 (no) |
| DE (1) | DE2631048C3 (no) |
| DK (1) | DK152765C (no) |
| FR (1) | FR2317357A1 (no) |
| GB (1) | GB1534426A (no) |
| HU (1) | HU172190B (no) |
| IT (1) | IT1039757B (no) |
| LU (1) | LU75348A1 (no) |
| NL (1) | NL175435C (no) |
| NO (1) | NO147570C (no) |
| SE (1) | SE437851B (no) |
| SU (1) | SU810082A3 (no) |
| YU (1) | YU170176A (no) |
| ZA (1) | ZA763892B (no) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5344690A (en) * | 1976-02-04 | 1978-04-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Preparation of d-n-carbamylphenylglycine and its substituted derivatives |
| JPS5391189A (en) * | 1976-12-30 | 1978-08-10 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Preparation of d-n-carbamoyl-alpha-amino acids |
| IT1075132B (it) * | 1977-03-15 | 1985-04-22 | Snam Progetti | Complessi enzimatici atti a trasformare idantoine raceme in amminoacidi otticamente attivi e loro applicazioni |
| US4211840A (en) * | 1977-06-08 | 1980-07-08 | Ajinomoto Company, Incorporated | Method for producing D-α-amino acid |
| EP0001319A1 (en) * | 1977-08-18 | 1979-04-04 | Beecham Group Plc | Process for the preparation of hydroxyphenyl hydantoin and of hydroxyphenyl glycine, and compounds thus obtained |
| JPS5475224U (no) * | 1977-11-05 | 1979-05-29 | ||
| IT1109506B (it) * | 1978-05-23 | 1985-12-16 | Snam Progetti | Processo enzimatico-microbiologico per la produzione di amminoacidi otticamente attivi a partire da idantoine e/o carbamil-derivati racemi |
| FR2456728A1 (fr) * | 1979-05-15 | 1980-12-12 | Aec Chim Organ Biolog | Procede de preparation de d-a-aminoacides |
| DE3031151A1 (de) * | 1980-08-18 | 1982-04-15 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Verfahren zur herstellung von d-n-carbamoyl-(alpha)-aminosaeuren und mikroorganismen dafuer |
| IT1209495B (it) * | 1984-02-02 | 1989-08-30 | A San Donato Milanese Milano | Procedimento per la preparazione di l-alfa-amminoacidi. |
| ES2058121T3 (es) * | 1986-09-17 | 1994-11-01 | Beecham Group Plc | Preparacion enzimatica inmovilizada y su uso. |
| ES2121001T3 (es) * | 1990-12-07 | 1998-11-16 | Kanegafuchi Chemical Ind | Procedimiento de produccion de d-alfa aminoacidos. |
| SG84486A1 (en) * | 1990-12-07 | 2001-11-20 | Kanegafuchi Chemical Ind | Process for production of d--g(a)-amino acids |
| IT1276163B1 (it) | 1995-11-23 | 1997-10-27 | Eniricerche Spa | Procedimento migliorato per la preparazione di d-alfa-amminoacidi |
| US6087136A (en) * | 1997-03-31 | 2000-07-11 | Council Of Scientific & Industrial Research | Microbial process for the production of D(-)-N-carbamoylphenylglycine |
| US6524837B1 (en) | 1999-03-29 | 2003-02-25 | California Institute Of Technology | Hydantoinase variants with improved properties and their use for the production of amino acids |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT987278B (it) * | 1973-05-11 | 1975-02-20 | Snam Progetti | Procedimento per la preparazione di l carbamil ammino acidi e dei corrispondenti l amminoacidi |
-
1975
- 1975-07-10 IT IT25252/75A patent/IT1039757B/it active
-
1976
- 1976-06-30 ZA ZA763892A patent/ZA763892B/xx unknown
- 1976-07-02 NO NO762324A patent/NO147570C/no unknown
- 1976-07-02 AU AU15498/76A patent/AU502630B2/en not_active Expired
- 1976-07-07 CH CH873176A patent/CH629179A5/it not_active IP Right Cessation
- 1976-07-08 FR FR7620904A patent/FR2317357A1/fr active Granted
- 1976-07-08 GB GB28546/76A patent/GB1534426A/en not_active Expired
- 1976-07-09 DD DD193788A patent/DD126424A5/xx unknown
- 1976-07-09 SU SU762381854A patent/SU810082A3/ru active
- 1976-07-09 NL NLAANVRAGE7607662,A patent/NL175435C/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 DE DE2631048A patent/DE2631048C3/de not_active Expired
- 1976-07-09 DK DK311776A patent/DK152765C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 JP JP51081040A patent/JPS5210484A/ja active Pending
- 1976-07-09 HU HU76SA00002945A patent/HU172190B/hu unknown
- 1976-07-09 LU LU75348A patent/LU75348A1/xx unknown
- 1976-07-09 BE BE168795A patent/BE843991A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 SE SE7607907A patent/SE437851B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 YU YU01701/76A patent/YU170176A/xx unknown
- 1976-07-09 CA CA256,692A patent/CA1070254A/en not_active Expired
- 1976-07-09 US US05/703,966 patent/US4111749A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2317357B1 (no) | 1978-12-22 |
| NO147570C (no) | 1983-05-04 |
| SU810082A3 (ru) | 1981-02-28 |
| DE2631048A1 (de) | 1977-01-13 |
| LU75348A1 (no) | 1977-02-28 |
| CH629179A5 (it) | 1982-04-15 |
| NL175435C (nl) | 1984-11-01 |
| YU170176A (en) | 1983-01-21 |
| NL7607662A (nl) | 1977-01-12 |
| IT1039757B (it) | 1979-12-10 |
| DE2631048B2 (de) | 1981-04-30 |
| DK152765B (da) | 1988-05-09 |
| AU1549876A (en) | 1978-01-05 |
| FR2317357A1 (fr) | 1977-02-04 |
| AU502630B2 (en) | 1979-08-02 |
| NL175435B (nl) | 1984-06-01 |
| DD126424A5 (de) | 1977-07-13 |
| ZA763892B (en) | 1977-05-25 |
| US4111749A (en) | 1978-09-05 |
| DE2631048C3 (de) | 1982-04-15 |
| JPS5210484A (en) | 1977-01-26 |
| CA1070254A (en) | 1980-01-22 |
| HU172190B (hu) | 1978-06-28 |
| SE7607907L (sv) | 1977-01-11 |
| BE843991A (fr) | 1977-01-10 |
| DK152765C (da) | 1988-10-10 |
| SE437851B (sv) | 1985-03-18 |
| NO762324L (no) | 1977-01-11 |
| DK311776A (da) | 1977-01-11 |
| GB1534426A (en) | 1978-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO147570B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin | |
| JP3717535B2 (ja) | 新規微生物およびＬ−α−アミノ酸の製法 | |
| CS211400B2 (en) | Method of microbiological enzymatic production of d-aminoacids | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| IL34956A (en) | Production of lipase | |
| US4226941A (en) | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| GB2031896A (en) | A process for the optical resolution of D,L-2-amino-4- methylphosphinobutyric acid | |
| AU717771B2 (en) | The bioresolution of n-acylazetidine-2-carboxylic acids | |
| JPH066069B2 (ja) | （十）‐トランス‐シクロプロパンカルボン酸の製造方法 | |
| JPH0253029B2 (no) | ||
| HU181488B (en) | Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex | |
| WO1994020635A1 (en) | Enantioselective hydrolysis of ketoprofen esters by beauveria bassiana and enzymes derived therefrom | |
| NO315750B1 (no) | Resolusjon av arylalkansyrer | |
| US4011135A (en) | Production of L(+)-tartaric acid | |
| US20020037559A1 (en) | Process for producing n-protected d-proline derivatives | |
| NO147452B (no) | Hydrolasepreparat for fremstilling av d-fenylglycin ved enzymatisk omdannelse av d,l-fenylhydantoin | |
| DK171744B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af pyrodruesyre | |
| Sambale et al. | Microbial hydrolysis of amino acid carbamates | |
| US5496715A (en) | Process for preparing indigo | |
| NO155698B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av stereospesifikke karbamylderivater av aaa-hydroksysyrer. | |
| US4956285A (en) | Process for the preparation of S-2,2-R1,R2 -1,3 -dioxolane-4-methanols | |
| KR100260837B1 (ko) | 광학활성 카본산 및 그 거울상 이성체 에스테르의 제조방법 | |
| CZ76393A3 (en) | Micro-biological process for preparing derivatives of malonyl-7-aminocephalosporanic acid | |
| JPS6221509B2 (no) | ||
| JPH07188A (ja) | 新規微生物及びそれを用いるｄ−リンゴ酸の製造法 |