NO135528B

NO135528B -

Info

Publication number: NO135528B
Application number: NO4845/70A
Authority: NO
Inventors: Andor Fuerst; Marcel Mueller; Peter Mueller; Arno Johannes Schocher; Elisabeth Becher
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1969-12-17
Filing date: 1970-12-16
Publication date: 1977-01-10
Also published as: CH531486A; AT316774B; DE2061183B2; YU298070A; HU162802B; CH531487A; IL35790A; CH529734A; CH531493A; AT316772B; CA955931A; AT308292B; FI47484C; CH531485A; CH531494A; FR2081369B1; JPS4920774B1; CH525872A; AT316773B; DE2061183A1

Description

Oppfinnelsen vedrorer en analogifremgangsmåte for fremstilling av anti-inflammatorisk virksomme steroider av pregnanrekken og.med den generelle formel

hvor Rg og Rg betyr uavhengig av hverandre, hydrogen, fluor, klor eller brom;

R-i 7 og R215 uavhengig av hverandre, hydroksy eller C-j^^-alkanoyloksy og Z karbonyl eller (3-hydroksymetylen,

og deres 1,2-dehydroderivater.

En foretrukket gruppe av forbindelser med formel I er en hvor Rg og Rg betegner hydrogen eller fluor, R-j^ og R22 hydroksy eller C-^g-alkanoyloksy og Z (3-hydroksymetylen.

Forbindelser med formel I kan ifolge oppfinnelsen erholdes ved at man

a) dehydrerer en forbindelse med formel

eller hydroksy1erer dennes 1,2-dehydroderivat i 11-stillingen ved hjelp av mikroorganismer" av den taksonomiske enhet Fungi eller Schizomycetes eller fra disse mikroorganismer utvunnede enzymer; eller b) dehydrering av en forbindelse med formel I i 1,2-stilling; eller c) anlagring av underklorsyrling eller under bromsyrling ved 9,11-dobbeltbindingen av en forbindelse med formel,

eller dennes 1,2-dehydroderivat; eller

d) behandling av en forbindelse med formel,

eller dennes 1,2-dehydroderivat med fluor-, klor- eller brom-hydrogenj eller

e) behandling av en forbindelse med formlene,

med et f luorerings-, klorerings- eller bromerings-middel; eller

f) acylering av en forbindelse med formel,

eller dennes 1,2-dehydroderivat5 eller

g) forsåpning av en C1_6-alkanoyloksygruppe i en forbindelse med formel,

eller dennes 1,2-dehydroderivat, eller

h) dehyd"— - en forbindelse med formei]

eller

" <rSdUSerer> - <*> - forbi„delse raed ^eZ,

eller dennes 1,2-dehydroderivat til hydroksygruppen under beskyttelse av 3- og 20-ketogruppene5 eller j) oksydering av 11-hydroksygruppen i en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat til ketogruppe under beskyttelse av nærværende 17- og/eller 21-hydroksygruppe; eller k) oksydering av 17(20)-dobbeltbindingen i et steroid med den generelle formel,

til hydroksyketongruppering; eller

1) dehydrohalogenering av en forbindelse med formel,

hvorved i de ovennevnte formlene R^, Rg, R^y<»><R>2<l>°^ Z har de oven angitte betydninger,

X betyr klor eller brom,

R en g-alkanoyloksy- eller alkoksygruppe og

Ac en C^_g-alkanoylgruppe.

Hydroksyleringen ifolge fremgangsmåtevariant a) kan foretas ved hjelp av metoder som er kjente fra mikrobiologisk innforing av en ll-hydroksygruppe i steroiden. For 11-hydroksylering aktuelle mikroorganismer av de taksonomiske gruppene fungi og schizomycetes, kommer spesielt undergruppene ascomycetes, phycomycetes, basidiomycetes og actinomycetales i betraktning. Man kan også anvende de ad kjemisk vei, f.eks. ved behandling med nitritt, eller ad fysikalisk vei, f.eks. ved bestråling, fremstilte mutasjoner såvel som av mikroorganismer cellefrie enzympreparater.

1,2-dehydreringen av en steroid med formel I (fremgangsmåtevariant b) kan f.eks. foretas ad mikrobiologisk vei eller ved hjelp av dehydreringsmidler, som f.eks. jodpentoksyd, perjod-syre eller selendioksyd, 2,3-diklor-5,6-dicyanobenzokinon, kloranil eller blytetraacetat.

For gjennomføring av fremgangsmåtevariantene c) og d) er det hensiktsmessig å lose utgangssteroiden i et egnet opplosnings-middel, f.eks. eter, såsom tetrahydrofuran eller dioksan;

et klorert hydrokarbon, såsom metylenklorid eller kloroform, eller et keton, som aceton. På dette lar man underklorsyrling eller underbromsyrling innvirke. Det er hensiktsmessig å fremstille underklorsyrlingen eller underbromsyrlingen direkte i reaksjonsblåndingen, f.eks. av N-brom eller N-klor-amider eller -imider, såsom N-klorsuccinimid eller N-bromacetamid og en sterk syre, fortrinnsvis .perklorsyre.

Kloreringen (eller bromeringen) av en steroid med formel V

eller Va kan foretas f.eks. ved omsetning med et klorerings-(eller bromerings)-middel, såsom elementært klor eller brom, eller et N-klor (eller brom)-imid, som f.eks. N-klorsuccinimid. Fluoreringen kan hensiktsmessig foretas ved behandling med perklorylfluorid.

Acyleringen av de frie hydroksygruppene i 17- eller 21-stiIling av en steroid med formel VI, eller dennes 1,2-dehydroderivat (fremgangsmåte f), kan skje på kjent måte ved behandling med et acyleringsmiddel, såsom et acylklorid eller -anhydrid,

f.eks. acetylklorid, i nærvær av et syrebindende middel, såsom pyridin.

Acyleringen av 17-hydroksygruppe foretas hensiktsmessig i nærvær av en sur katalysator, såsom p-toluensulfonsyre.

Forsåpningen av en acyloksygruppe i en steroid med formel

VTI eller dennes 1,2-dehydroderivat (fremgangsmåtevariant g) kan f.eks. foretas med vandig-metanolisk kaliumkarbonat-losning.

Dehydratiseringen ifolge fremgangsmåtevariant h) kan foretas ved behandling med en syre, f.eks. en mineralsyre, som saltsyre.

For utfdreise av fremgangsmåtevariant i) beskyttes forst ketogruppen i 3- og 20-stillingen f.eks. ved ketalisering.

I tilfelle R,_ og R.^ samtidig betegner hydroksygrupper,

kan en 20-ketogruppe også beskyttes ved dannelse av 17,20* eller 20,21-bis-metylendioksy-derivatet. Reduksjonen av 11-ketogruppen i den beskyttede forbindelsen med formel IX kan foretas ved hjelp av komplekse metallhydrider, såsom litium-aluminiumhydrid, natriumborhydrid eller diisobutylaluminium-hydrid.

Oksydasjonen av en 11-hydroksygruppe (fremgangsmåtevariant j) kan foretas ved hjelp av kromsyre, f.eks. med jones' reagens.

Oksydasjonen av 17(20)-dobbeltbindingen i en forbindelse med formel XI (fremgangsmåte k) kan f.eks. foretas med oksydasjonsmidler, såsom et tertiært amin-N-oksyd-peroksyd i tert.-butanol/pyridin i nærvær av en katalytisk virksom mengde av osmiumtetraoksyd. Eksempler på tertiære amin-N-oksyd-peroksyder er N-metylmorfolin-N-oksyd-peroksyd og trietyl-aminoksyd-peroksyd. videre kan man ved hjelp av oksydasjonsmidler såsom osmiumtetroksyd eller permanganat oksydere til 17,20-glykol, og oksydere denne forbindelse til hydroksy-keton ved hjelp av oksydasjonsmidler, som kcømsyre.

Dehydrohalogeneringen av en forbindelse med formel XII (frem-gangsmåt evar i ant 1) kan foretas ved hjelp av baser, som f.eks. organiske baser, såsom pyridin.

Utgangsstoffer for fremgangsmåten ifolge oppfinnelsen kan,

når disse ikke er kjente eller senere beskrevet, fremstilles ifolge kjente eller senere beskrevne metoder.

Steroidene med formel I er endocrin, spesielt anti-inflammatorisk virksomme. Eksempler viste at oral administrasjon av 3 mg lip ,17a,21-trihydroksy-15 ,16|3-metylen-pregna,l ,4-dien-3 ,20-dion (eksempel 2) og subkutan administrasjon av 10 mg 11(3,17a, 21-trihydroksy-15 ,16{3-metylen-pregn-4-en-3, 20-dion (eksempel 1) virker granulasjonshemmende på rotter ved"Filz-Pellet'-testen.

Produktene ifolge fremgangsmåten kan finne anvendelse som legemidler, f.eks. i form av farmasøytiske preparater, og da i blanding med for enteral, perkutan eller parenteral administrasjon egnet farmasbytisk, organisk eller uorganisk inert bæremateriale, som f.eks. vann, gelatin, gummi arabicum, melke-sukker, stivelse, magnesiumstearat, talkum, planteoljer, polyalkylenglykoler, vaselin, osv. De farmasoytiske preparatene kan foreligge i fast form, som f.eks. tabletter, dragéer, suppositorier, kapsler; i "halvfast form, som f.eks. salver;

eller i flytende form, som f.eks. losninger, suspensjoner

eller emulsjoner. De er eventuelt sterilisert og inneholder hjelpestoffer, såsom konserverings-, stabiliserings-, fukte-eller emulgeringsmidler og salter som puffer eller for å endre det osmotiske trykket. De kan også inneholde andre tera-peutiske verdifulle stoffer.

I de folgende eksempler er temperaturene angitt i Celsiusgrader.

EKSEMPEL 1

Skråagar, som besto av 5% havremel og 2% agar i destillert vann, innpodes med Coniothyrium hellebori cooke & Massee CBS 159.58 og inkubert 8 dager ved 22°. En næringslosning, som består av 2% sakkarose, 0,3% gjærekstrakt, 0,1% natriumnitrat, 0,1% glycin, 0,1% primært kaliumfosfat, 0,05% magnesiumsulfat-heptahydrat, 0,05% kaliumklorid og 0,001% jern-II-sulfat-heptapydrat i destillert vann, innpodes med denne kulturen. Porsjoner på 100 ml av' substratet steriliseres for innpodningen skjer. pH-verdien efter steriliseringen er 5,1. Disse kulturene

inkuberes 40 timer ved 22° under rysting.

En fermenterings-beholder ("Kleinfermenter") med 8 liter av den oven beskrevne næringsløsningen steriliseres og innpodes med 100 ml ryste-kultur. Man inkuberer 48 timer under omrøring ved 22° og lufter med 3-4 liter luft pr. minutt. Derefter tilsettes en oppløsning av 17oc,21-dihydroksy-l5,16|3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion i 120 ml aceton. Fermenterings-

forlopet kontrolleres ved at prover, som fåes ved å ekstrahere fermenteringslosningen med eddikester, analyseres ved hjelp av tynnskiktskromatografi. Efter ca. 86 timer er fermenteringen avsluttet.

Ved å sentrifugere gjæringslosningen avskilles mycel-masse fra losningen. Mycelen. oppslemmes to ganger med en liter vann og filtreres. Gjæringslosningen og vaskevannet ekstraheres 15 minutter 3 ganger med 5 liter diklormetan. De forenede ekstraktene tbrkes over natriumsulfat og inndampes under redusert trykk. Det således erholdte rå ekstraktet kromatograferes med 120 g silikagel. Med benzen-aceton (4:1) elueres det rene lip,17a-,21-trihydroksy-15,16p-metylen-pregn-4-en-3,20-dion. Smeltepunktet er 219 - 221° (i aceton). [a]^<5> = +120°, UV: E 240 = 16400.

EKSEMPEL 2

Skråagar, som består av 0,15% kjottekstrakt, 0,6% pepton, 0,3% gjærekstrakt og 2% agar i ledningsvann, innpodes med Coryne-bacterium simplex ATCC 6946 og inkuberes 2 dager ved 28°.

Denne kulturen blir i sin tur innpodet en næringslosning som inneholder 0,1% gjærekstrakt i 1/15 mol fosfatpuffer (pH 7). Substratet steriliseres for innpodingen og kulturen inkuberes

24 timer ved 28° under rysting.

10 Erlenmeyer-glass med hver 100 ml av den ovennevnte nærings-løsningen innpodes med 2% av denne forkulturen. Man inkuberer 24 timer ved 28° på ristemaskinen og tilsetter derefter hvert glass 25 mg lip,17a,21-trihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, opplost i 1 ml dimetylformamid. Efter 15 timer avsluttes fermenteringen. Innholdet i ryste-kolben forenes og ekstraheres fire ganger med samme volum eddikester. De forenede ekstraktene torkes over natriumsulfat, og losningsmidlet fjernes under redusert trykk. Råproduktet kromatograferes ved hjelp av 40 g silikagel. Med benzen-aceton (3:1) elueres rent lip ,17a, 21-trihydroksy-15 ,16|3-metylen-pregna-l ,4-dien-3,20dion. Smeltepunktet er 176 - 180° (i aceton-heksan) ^243 = 1530°-

EKSEMPEL 3

2,4 g 21-acetoksy-9,lip-epoksy-17a-hydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion opploses i loo ml metylenklorid.

Losningen tilsettes 12 g vannfri fluorhydrogensyre i 20 ml tetrahydrofuran ved -60°. Reaksjonsblandingen holdes 1 time ved -60° og tilslutt 24 timer ved 0°. Derefter heller man reaksjonsblandingen til en iskald natriumhydrogenkarbonatlosning og ekstraherer med metylenklorid. Ekstraktet opparbeides og den av dette erholdte resten oppvarmes 30 min.

på dampbad med 20 ml pyridin og 10 ml acetanhydrid. Reaksjonsblandingen inndampes under redusert trykk, og inndampningsresten kromatograferes ved hjelp av 50-ganger så meget silikagel og med metylenklorid-aceton. De ensartede fraksjonene fra tynnskiktskromatograferingen forenes og omkrystalliseres i

aceton-heksan. Man erholder 21-acetoksy-9a-fluor-lip,17a-dihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion ^239<=> 1^600.

Utgangsmaterialet kan fremstilles som folger:

En blanding av 375 mg lip ,17a,21-trihydroksy-15,16p-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, 10 ml pyridin og 10 ml acetanhydrid holdes 16 timer ved romtemperatur. Derefter inndampes blandingen under redusert trykk, blandingen opptas med toluen og inndampes ennå en gang til torrhet. Det således erholdte rå 21-actat opploses i 5 ml dimetylformamid og efter å ha tilsatt 0,2 ml pyridin og 0,2 ml metansulfoklorid oppvarmes losningen 2 timer ved 100°. Man heller losningen til en kald natriumhydrogenkarbonatlosning og ekstraherer med metylenklorid-eter. Opparbeidelsen av det organiske ekstraktet gir et råprodukt, som kromatograferes ved hjelp.av-silikagel. Man erholder således 21-acetoksy-17a-hydroksy-15,16P-metylen-pregna-4,9(11)-dien-

3,20-dion med smeltepunkt 217 - 220° (i aceton-heksan) UV:

e 239<=> 17300.

Til en opplosning av 3,98 g av det foran beskrevne dienet i

80 ml dioksan tilsettes 3 ml 0,5-n perklorsyre og derefter i lopet av 30 minutter 1,65 g N-bromacetamid i tre porsjoner. Reaksjonsblåndingen omrores 5 timer, helles til 200 ml 5%'ig natriumhydrogenkarbonatlosning og ekstraheres med metylenklorid. Opparbeidelsen av ekstraktet gir 21-acetoksy-9a-brom-lip,17a-dihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion.

Det således erholdte bromhydrin opploses i 300 ml aceton og losningen oppvarmes med 8 g vannfritt natriumacetat 7 timer under tilbakelop. Derefter avdestilleres losningsmidlet under redusert trykk, og resten tilsettes vann og ekstraheres med metylenklorid. Opparbeidelse av ekstraktet gir 21-acetoksy-9,ll(3-epoksy-17a-hydroksy-15 ,15|3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion;

£240 = 1630°-

EKSEMPEL 4

En opplosning av 1,4 g 21-acetoksy-9a-fluor-lip,17a-dihydroksy-15 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion og 0,7 g selendioksyd i 120 ml tert.-butanol oppvarmes efter tilsetning av 0,15 ml pyridin 72 timer under tilbakelop. Reaksjonslosningen filtreres, filtratet inndampes under redusert trykk, inndampningsresten opploses i etylacetat, vaskes forst med natriumhydrogenkarbonatlosning og derefter med vann og torkes. Råproduktet som erholdes efter at losningsmidlet er avdampet kromatograferes ved hjelp av 50 g silikagel. Man erholder 21-acetoksy-9a-f luor-lip ,17a-dihydroksy-15 ,16(3-metylen-pregna-l ,4-dien-3,20-dion; £"238<=> 155°°'

EKSEMPEL 5

En opplosning av 5 g 21-acetoksy-9a-fluor-lip,17a-dihydroksy-15,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion i 100 ml absolutt dioksan tilsettes 10 ml ortomaursyreetylester og 300 mg:p-toluensulfonsyre, og dette holdes 2 timer ved romtemperatur. Denne losningen tilsettes 12 ml pyridin og derefter langsomt

500 ml isvann, hvorefter losningen ekstraheres med metylenklorid.

Ekstraktet vaskes noytralt med vann, torkes over natriumsulfat

o

og inndampes ved 40 under redusert trykk. Den således erholdte rå enoleteren opploses i 100 ml aceton og 80 ml

etanol. Losningen tilsettes 2 g vannfri kaliumacetat og behan-dles 3 timer med perklorylfluorid. Det efter opparbeidelsen av reaksjonsblandingen erholdte råproduktet (5,5 g) kromatograferes ved hjelp av 500 g silikagel. Forst elueres 21-acetoksy-6|3, 9oc-di f luor-lip, 17a-dihydroksy-15 ,16p-metylen.7-pregn-4-en-3 ,20-dion; £ 234 = 13300. Det efterfolgende eluatet gir 21-acetoksy-6a,9a-difluor-lip,17a-dihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion; ^2 36 = l6000-

EKSEMPEL 6

Ifblge eksempel 1 erholder man av 6a-fluor-17a,21-dihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion 6a-fluor-lip,17a,21-trihydroksy-15p,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, ^238 = 161°°*

Utgangsmaterialet kan fremstilles som folger: 17a,21-dihydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion overfores ved behandling med pyridin/acetanhydrid i 21-acetoksy-17a-hydroksy-15,16p-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, smeltepunkt 237 - 239° (aceton-heksan); O]^<5> + 127° £ = 17000.

En blanding av 18,8 g 21-acetoksy-17a-hydroksy-15,16P-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, 18,8 ml ortomaursyremetylester,

900 mg p-toluensulfonsyre, 1,0 ml metanol og 900 ml dioksan oppbevares i morke ved romtemperatur 16 timer. For opparbeidelse helles dette til en iskald Na2C03-losning, hvorefter det ekstraheres med metylenklorid. Det organiske ekstraktet vaskes med vann, torkes med Na2S0^ og inndampes i vakuum. Inndampningsresten opploses i heksan-aceton (8:1)

og filtreres gjennom 800 g silikagel. Man erholder 16,8 g krystallinsk 21-acetoksy-17a-hydroksy-3-metoksy-15,16p~metylen-pregna-3,5-dien-20-on. Dette opploses i 800 ml aceton og 800 ml dioksan og tilsettes ved 0° en opplosning av 8,3 g kaliumacetat i 250 ml alkohol. Derefter ledes i lopet av 3 timer en moderat strom av perklorylfluorid gjennom den godt omrorte losningen, og til slutt blåses i lopet av 15 minutter argon gjennom reaksjonslosningen for derved å fordrive et

overskudd av perklorylfluorid. Reaksjonslosningen helles til isvann og ekstraheres med metylenklorid. De forenede ekstrakter vaskes med vann, torkes med Na2SO^ og inndampes i vakuum. Inndampningsresten kromatograferes ved hjelp av silikagel. Med isopropyleter-metanol (98:2) elueres forst 21-acetoksy-6(3-f luor-17oc-hydroksy-15,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, smp. 231 - 233°,£235 = 11800.

De efterfolgende fraksjoner gir ren 21-acetoksy-6oc-fluor-17a-hydroksy-15,16|3-metylen-pregn-4-en-3,20-on, smp. 235 - 236°,

€ 237 = 1520°-

1,0 g 21-acetoksy-6oc-f luor-17a-hydroksy-l5,16|3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion opploses i 100 ml metanol. Denne losningen tilsettes 1,5 g natriumbikarbonat i 20 ml vann, og blandingen omrores 4 timer i argon-atmosfære. For opparbeidelse helles losningen til en mettet NaCl-losning, og derefter ekstraheres det med metylenklorid. Det organiske ekstraktet vaskes noytralt med vann, torkes med Na2S0^ og inndampes i vakuum. Man erholder således 6a-f luor-17a, 21-dihydroksy-15 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion.

EKSEMPEL 7

Analogt eksempel 3 erholder man av 9, ll(3-epoksy-15,16(3-metylen-17,20 5 20,21-bis-(metylendioksy)-pregn-4-en-3-on og f luorhydrogen 9a-f luor-lip-hydroksy-15 ,16(3-metylen-17,20; 20,21-bis(metylendioksy)-pregn-4-en-3-on.

0,85 g 9a-fluor-lip-hydroksy-15,16P-metylen-17,20520,21-bis(metylendioksy)-pregn-4-en-3-on oppvarmes med 80 ml 50%'ig eddiksyre 2 timer ved 90°. For opparbeidelse helles losningen til isvann og ekstraheres flere ganger med etylacetat. De organiske ekstrakter forenes, vaskes med NaHCO-j-losning og vann, torkes med Na2SO^ og inndampes i vakuum. Resten kromatograferes ved hjelp av silikagel. Metylenklorid-aceton-eluatet (7:3) gir ren 9oc-fluor-ll|3,17a,21-trihydroksy-15,16p-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, £2^0 = 16300.

Utgangsmaterialet kan fremstilles som folger:

En opplosning av lg lip ,17a, 21-trihydroksy-15 ,16|3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion i 50 ml kloroform tilsettes en blanding av 20

ml 37%'ig vandig formaldehydlosning og 20 ml konsentrert saltsyre og omrores en time ved romtemperatur. Den organiske fasen opparbeides og resten kromatograferes ved hjelp av silikagel. Man erholder ll(3-hydroksy-15,16|3-metylen-17,20;20,21-bis (metylendioksy)-pregn-4-en-3-on ^24o = l^00*

375 mg av den tidligere beskrevne bis-metylendioksyforbindelsen oppvarmes med 5 ml dimetylformamid, 0,25 ml pyridin og 0,2 ml metansulfoklorid 2 timer ved 100°. Reaksjonsblandingen helles til en kald natriumhydrogenkarbonatlosning, og losningen ekstraheres med metylenklorid-eter. Opparbeidelsen av det organiske ekstraktet gir et råprodukt, som kromatograferes ved hjelp av silikagel. Man erholder 15 ,16(3-metylen-17,20520,21-bis(metylendioksy)-pregna-4,9-(11)-dien-3-on ^239 = l7000-

Til en opplosning av 4,0 g 15,16P-metylen-17,20;20,21-bis-(metylendioksy)-pregna-4,9(11)-dien-3-on i 80 ml dioksan tilsetter man 3,0 ml 0,5-n perklorsyre, hvorefter losningen

i lopet av 30 minutter tilsettes 1,65 g N-bromacetamid i tre porsjoner. Det omrores ytterligere 5 timer, hvorefter losningen helles til 200 ml av en 5%'ig NaHS03-losning. Produktet ekstraheres med metylenklorid og ekstraktet opparbeides. Man erholder 9a-brom-lip-hydroksy-15,16P-metylen-17,20;20,21-bis-(metylendioksy)-pregn-4-en-3-on, som kan anvendes direkte ved neste trinn.

Det således erholdte bromhydrin opploses i 300 ml aceton og oppvarmes under tilbakelop med 8 g vannfri natriumacetat 7 timer. Acetonet avdestiUeres i vakuum, resten tilsettes vann og ekstraheres med metylenklorid. Av dette ekstraktet erholder man 9,llp-epoksy-15,16p-metylen-l7,20;20,21-bis-(mety1endioksy)-pregn-4-en-3-on,g239 = 16400.

EKSEMPEL 8

En opplosning av 3,0 g 17a , 21-diacetoksy-ll(3-hydroksy-15,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion i 30 ml pyridin tilsettes en blanding av 3,1 g kromtrioksyd i 30 ml pyridin. Reaksjonsblandingen holdes 20 timer ved romtemperatur og helles derefter til isvann og ekstraheres med etylacetat. Det organiske ekstraktet vaskes noytralt med vann, torkes med Na2S0^ og inndampes i vakuum. Inndampningsresten gir efter omkrystallisering i aceton-heksan ren 17a , 21-diacetoksy-15,16|3-metylen-pregn-4-en-3,ll, 20-trion,

t 240 = 16100.

EKSEMPEL 9

921 mg 21-acetoksy-17-hydroksy-15p , 16(3-metylen-pregn-4-en-3,11, 20-trion og 46 mg kaliumkarbonat ble opplost i 25 ml metanol og rort om 2 timer ved romtemperatur. For opparbeidelsen helte man på isvann og ekstraherte med metylenklorid. Ved noytral-vaskning med vann, torking med Na2S0^ og inndampning av opplos-ningsmidlet i vakuum ble 863 mg råprodukt oppnådd fra det organiske ekstrakt. Råproduktet ble kromatografert på silikagel. 17, 21-dihydroksy-15(3 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,ll, 20-trion ble isolert med benzen-propanol 9:1. Smeltepunkt 217° (spaltning).

[a]p = +180° (c = 0,1 i dioksan).

EKSEMPEL 10

300 mg 17a21-diacetoksy-ll(3-hydroksy-15(3 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion ble opplost i 30 ml metanol og rort om i 6 timer ved romtemperatur med 150 mg NaHCO^. For opparbeidelsen ble helt på isvann og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske ekstrakt ble vasket noytralt med vann, tdrket med Na2S0^ og dampet inn i vakuum. Resten ble kromatografert på 30 g silikagel. Forst ble rent21-acetoksy-ll|3,17a-dihydroksy-15(3,16|3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion eluert med benzen-propanol (95:).

De etterfolgende fraksjoner ga lip ,17a ,21-trihydroksy-15f}, 16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion, s.p. 218-220°C.

EKSEMPEL 11

Til en blanding av 2,0 g 21-acetoksy-11 (3-hydroksy-15(3 ,16-metylen-pregna-4,17(20)-dien-3-on, 25 ml metylenklorid og 60 ml tert.butanol tilsatte man under omrdring 4 ml pyridin, 6,6 ml 1,3-molar N-metyl-rnorfolinoksyd-peroksyd-oppldsning og 20 mg osmiumtetroksyd. Oppldsningen ble holdt i 5 timer ved romtemperatur, derpå igjen tilsatt 3,3 ml av det samme oksydasjonsmiddel og 10 mg OsO^. Etter ytterligere 3 timer ble det opparbeidet som vanlig. Man fikk 2,lg substans, som ble kromatografert på silikagel. Rent 21-acetoksy-lip ,17oc-dihydroksy-15(3 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,20-dion med smeltepunkt 237-239° ble erholdt med metylenklorid- eter 9:1.

EKSEMPEL 12

0,5 g 17 , 21-dihydroksy-15(3 ,16(3-metylen-pregn-4-en-3,11, 20-trion fikk henstå i 2 timer ved romtemperatur med 5 ml pyridin og 5 ml acetanhydrid. For opparbeidelsen helte man på isvann og ekstraherte med eter. Ekstraktet ble vasket noytralt med vann, tdrket med Na2S0^ og dampet inn i vakuum. Resten omkry-stalliserte nian fra aceton-heksan og fikk rent 21-acetoksy-17-hydroksy-15(3 ,16p-metylen-pregn-4-en-3,11, 20-trion med smeltepunkt 259, 5-26 2, 5°.

[oc]^ = +190° (c = 0,1 i dioksan).

EKSEMPEL 13

2,0 g 21-acetoksy-ll(3 ,17-dihydroksy-15(3 , 16(3-metyl en-pr egn-4-en-3,20-dion ble opplost i 200 ml aceton, avkjolt til 0° og ..• i lopet av 5 minutter tilsatt 1,7 ml 8N CrO^ i 2N H2S0^ (Jones-reagens) og 20 ml aceton. Det ble rort om ytterligere 10 minutter ved 0°, derpå ble 4 ml metanol tilsatt og til slutt ble reaksjonsblandingen helt på isvann. Ved ekstraksjon med metylenklorid ekstraherte man 2,0 g substans, som ble kromatografert på den 50 ganger så store mengde silikagel. Man eluerte 21-acetoksy-17-hydroksy-15(3 ,16|3-metyl en-pr egn- 4-en-3 ,11, 20-trion, smeltepunkt 259-261°, med metylenklorid-aceton 9:1.

EKSEMPEL 14

500 mg 17, 21-diacetoksy-5ct, 6(3-diklor-ll(3-hydroksy-5a-pregnan-3^0-dion ble opplost i 20 ml etanol og oppvarmet med 1,0 g kaliumacetat i 1 time til tilbakelopskjoling. Reaksjonsproduktet helte man på isvann og ekstraherte med metylenklorid. Ekstraktet ble vasket med vann, tdrket over Na2SO^ og dampet inn. Resten om-krystalliserte man fra alkohol og fikk rent 17,^l-diacetoksy-6a-klor-ll(3-hydroksy-pregn-4-en-3, 20-dion.

EKSEMPEL 15

1,0 g 21-acetoksy-17a-hydroksy-15,16p-metylenpregn-4-en-3,ll, 20

-trion ble opplost i 25 ml pyridin og behandlet med en opplosning av 5,4 g semikarbazid i 6 ml vann. Til denne opplosning ble en kold blanding av 25 ml pyridin og 6,2 ml konsentrert saltsyre tilsatt under omroring. Reaksjonsblandingen ble rort om ved romtemperatur i 2 timer, behandlet med 6 g natriumacetat og konsentrert under vakuum. 3,20-disemikarbazon ble felt ut ved tilsetning av vann, filtrert og torket under redusert trykk. Produktet ble derpå opplost i 10 ml N,N-dimetylformamid og 20 ml tetrahydrofuran. Denne opplosning ble tilsatt under omroring til en suspensjon av 1 g LiBH^ i 50 ml tetrahydrofuran i lopet av 30 minutter. Etter omroring i 2 timer ble reaksjonsblandingen ndy-tralisert med eddiksyre og konsentrert under redusert trykk til

et lite volum. Vann ble tilsatt og utfellingen skilt fra og opplost i 30 ml eddiksyre. Til denne opplosning ble 3,0 g pyrodrue-syre og 15 ml av en pyridinsulfatopplosning tilsatt, og blandingen ble holdt ved romtemperatur i 15 timer. Reaksjonsblandingen ble derpå helt i en stor mengde vann og ekstrahert med etylacetat. Ekstraktet ga ved kromatografi på silikagel og omkrystalli-sasjon fra aceton-isopropyleter lip , 17a , 21-trihydroksy-15p ,16(3-metylenpregn-4-en-3,20-dion med smeltepunkt 218-220°.

Claims

Analogifremgangsmåte for fremstilling av anti-inflammatorisk virksomme 11-hydroksy- eller ll-keto-15p,16p-metylenpreg-naner og med den generelle formel

hvor og Rg betyr uavhengig av hverandre hydrogen, fluor, klor eller brom, R^7 og R22 uavhengig av hverandre hydroksy eller C^_g-alkanoyloksy, og Z karbonyl eller (3-hydroksymetylen, og deres 1,2-dehydroderivater, karakterisert ved at man a) hydroksylerer i 11-stilling en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat ved hjelp av mikroorganismer av den taksonomiske enhet Fungi eller Schizomycetes eller enzymer som er utvunnet av nevnte mikroorganismer, eller b) dehydrerer en forbindelse med formel I i 1,2-stilling, eller c) anlagrer ved 9,11-dobbeltbindingen i en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat klorsyrling eller bromsyrling, eller d) behandler en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat med fluor-, klor- eller brom-hydrogen, eller e) behandler en forbindelse med formelene, med et fluorerings-, klorerings- eller bromeringsmiddel, eller f) acylerer en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat, eller g) forsåper en C^_g-alkanoyloksygruppe i en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat, eller h) dehydratiserer en forbindelse med formel, eller, i) reduserer 11-ketogruppen i en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat til hydroksygruppe under beskyttelse av 3- og 20-ketogruppen, eller j) oksyderer 11-hydroksygruppen i en forbindelse med formel, eller dennes 1,2-dehydroderivat til ketogruppe under beskyttelse av nærværende 17- og/eller 21-hydroksygruppen, eller k) oksyderer 17(20)-dobbeltbindingen i et steroid med den generelle formel til hydroksyketongruppering, eller 1) dehydrohalogenerer en forbindelse med formel, hvor Rg, Rg, R17? R21 og Z har de oven angitte betydninger, X betyr klor eller brom, R en C1_6-alkanoyloksy- eller alkoksygruppe og Ac en c^_6-alkanoylgruppe.