NO134605B - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- NO134605B NO134605B NO740780A NO740780A NO134605B NO 134605 B NO134605 B NO 134605B NO 740780 A NO740780 A NO 740780A NO 740780 A NO740780 A NO 740780A NO 134605 B NO134605 B NO 134605B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- chalcomycin
- medium
- culture
- liters
- fermentation
- Prior art date
Links
- KLGADJPDTCIJLO-LJUCOGSUSA-N Chalcomycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H](C)[C@@H](CO[C@H]2[C@@H]([C@H](OC)[C@H](O)[C@@H](C)O2)OC)[C@H]2O[C@@H]2/C=C/C(=O)[C@@](C)(O)C[C@@H]1C KLGADJPDTCIJLO-LJUCOGSUSA-N 0.000 claims description 87
- IJESDYFOSZHYNR-UHFFFAOYSA-N chalcomycin Natural products COC1CC(C)OC(OC2CCC(C)(O)C(=O)C=CC3OC3C(COC4OC(C)C(O)C(OC)C4OC)C(C)OC(=O)C=CC2)C1O IJESDYFOSZHYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 86
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 34
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 19
- 241000186992 Streptomyces bikiniensis Species 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 53
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 38
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 38
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 15
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 15
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 14
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 13
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 13
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 13
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 10
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 8
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 8
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 7
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 7
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 5
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- HHURSJAUVYNJBT-UHFFFAOYSA-M sodium;heptadecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O HHURSJAUVYNJBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005789 organism growth Effects 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 description 2
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N anhydrous amyl acetate Natural products CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N iodoform Chemical compound IC(I)I OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound OCC(O)CO.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 239000005905 Hydrolysed protein Substances 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000192023 Sarcina Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZKXLOZHHUHGNV-UHFFFAOYSA-N Viomycin Natural products NCCCC(N)CC(=O)NC1CNC(=O)C(=CNC(=O)N)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC1=O)C2CC(O)NC(=N)N2 OZKXLOZHHUHGNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015940 Viomycin Proteins 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910001959 inorganic nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000005453 ketone based solvent Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N viomycin Chemical compound N1C(=O)\C(=C\NC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](N)CCCN)CNC(=O)[C@@H]1[C@@H]1NC(=N)N[C@@H](O)C1 GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N 0.000 description 1
- 229950001272 viomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M29/00—Dilators with or without means for introducing media, e.g. remedies
- A61M29/02—Dilators made of swellable material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
- A61B17/42—Gynaecological or obstetrical instruments or methods
- A61B2017/4216—Operations on uterus, e.g. endometrium
- A61B2017/4225—Cervix uteri
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Thermotherapy And Cooling Therapy Devices (AREA)
- Media Introduction/Drainage Providing Device (AREA)
- Surgical Instruments (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
Fremgangsmåte til fremstilling av et nytt antibiotikum, chalcomycin.
Foreliggende oppfinnelse angår en
fremgangsmåte til fremstilling av et nytt
antibiotikum som er kalt chalcomycin, ved
fermentasjon av en utvalgt Streptomyces-organisme under kunstige betingelser. Vi-dere omfatter oppfinnelsen metoder til isolering av den nye forbindelse fra dyrk-ningsmediene og metoder til rensning av
forbindelsen.
Chalcomycin er en nøytral, hvit, krystallinsk forbindelse som bare inneholder
elementene kullstoff, hydrogen og oxygen.
Den er oppløselig i alkylestere av lavere
fettsyrer som etylacetat og amylacetat, i
lavere alkanoler som metanol og etanol, i
aromatiske kullvannstoffer som toluen og
benzen, i etylendiklorid og i kloroform, lite
oppløselige i kullstofftetraklorid, i vann og
i eter, og relativt uoppløselig i petroleter.
Chalcomycin er optisk aktiv idet det
27
har en spesifikk dreining på [aj D = — 43,5° (c = 1 % i etanol). Forbindelsens
smeltepunkt varierer med oppvarmings-hastigheten og det anvendte apparat. På
oppvarmede blokker observeres en verdi på
121—123° C. Chalcomycin inneholder ca.
60 % kullstoff (området for eksperiméntelt
bestemte verdier er fra 59,5 til 59,97 %), ca.
8 % hydrogen (området for eksperimentelt
bestemte verdier er fra 8,08 til 8,32 %) og
ca. 32 % oxygen (området for eksperimentelt bestemte verdier er fra 31,43 til
32,05 %). Chalcomycinets molekyl vekt er
ca. 600 (området for eksperimentelt bestemte verdier er fra 575 til 592).
I de vedføyede tegninger viser fig. 1 chalcomycinets spektrum i det ultrafiolette område (0,00228% i absolutt etanol). Et absorpsjonsmaksimum viser seg ved 218
m^, E j1 ^ = 319. Der er en avtrapning i området omkring 240 m^.
Chalcomycinets absorpsjonsspektrum i det infrarøde område er i høy grad karakteristisk for dette stoff. I fig. 2 vises dette spektrum bestemt i kloroformoppløsning. De viktigste absorpsjonsmaksima ligger ved ved ca. 2,83, 3,34, 3,40, 5,83, 5,89, 6,00, 6,13, 6,86, 7,23, 7,40, 7,53, 7,78, 8,00, 8,54, 8,70, 9,00, 9,22, 9,41, 9,67, 10,20, 10,71, 11,20, 11,57 og 11,69 mikroner. I fig. 3 vises chalcomycinets absorpsjonsspektrum i det infrarøde område, bestemt i en kaliumbromid-skive. De viktigste absorpsjonsmaksima ligger ved ca. 2,84, 3,35, 3,40, 5,81, 5,89, 6,02, 6,12, 6,84, 7,20, 7,38, 7,51, 7,77, 8,08, 8,52, 9,22, 9,40, 9,63, 10,15, 11,19, 11,59 og 12,70 mikroner.
Chalcomycin avfarver vandige per-manganatoppløsninger ved romtemperatur, adderer brom når forbindelsen er oppløst i kullstofftetraklorid ved romtemperatur og gir direkte en positiv hydroxamatreaksjon. Det gir en negativ Tollens reaksjon, en negativ Fehlings reaksjon og en negativ jodo-formreaksjon.
Chalcomycin viser et laktons kjemiske egenskaper. Umettede bindinger og for-esterbare hydroxylgrupper er også tilstede. Ved acetylering av chalcomycin med eddiksyreanhydrid i pyridin ved romtemperatur får man den krystallinske forbindelse chalcomycindiacetat.
Chalcomycin absorberer hydrogen i nærvær av edelmetalkatalysatorer og under lempelige betingelser så at der dannes en rekke hydreringsprodukter. Ett av disse hydreringsprodukter er tetrahydrochalcomycin som dannes ved hydrering av chalcomycin oppløst i etanol, ved romtemperatur og atmosfæretrykk samt i nærvær av en palladiumkatalysator. Denne forbindelse karakteriseres lett ved det krystallinske tetrahydrochalcomycin-diacetat.
Antibakterievirkningene av chalcomycin, av oppløsninger og blandinger som inneholder denne forbindelse samt av derivater av chalcomycin bestemmes hensiktsmessig ved å måle den hemmende (inhi-berende) virkning av slike preparater på Sarcina lutea. Den sterke aktivitet som chalcomycin viser mot denne organisme, går tapt ved sur eller alkalisk hydrolyse av forbindelsen og særlig ved å oppvarme den under tilbakeløpskjøling i 10 minutter med en 1-molar oppløsning av saltsyre i vandig metanol eller ved å la forbindelsen henstå ved romtemperatur i 24 timer i en 0,1-molar oppløsning av natriumhydroxyd i vandig metanol.
De stoffer som dannes ved sur og alkalisk hydrolyse av chalcomycin, er kry-
stallinske og nyttige ved identifisering og karakterisering av chalcomycin.
De ovenfor nevnte derivater og produkter som dannes ved endring av chalcomycin, vil bli beskrevet nærmere i eksemplene i det følgende.
Chalcomycin er ytterligere karakteristisk ved dets spektrum for antibakteriell aktivitet. Det antibakterielle spektrum for forbindelsen, uttrykt som den minimale hemmende konsentrasjon i mikrogram pr. milliliter, overfor flere forskjellige mikro-organismer fremgår av nedenstående tabell 1. Det flertall av angivelser som fin-nes under visse arter i denne tabell, repre-senterer forskjellige stammer av vedkom-mende organisme og hensikten med dem er å vise de variasjoner som er observert for forskjellige stammer av en og samme art. Den soyakultur som ble brukt i disse forsøk var «Trypticase Soy Broth» hvis sammensetning er angitt i «Products for the Microbiological Laboratory», Fourth Edition, Bal-timore Biological Laboratory, Inc., Balti-more, Maryland. Sterk aktivitet mot en organisme påvises ved en hemning av organismens vekst ved en chalcomycinkonsentrasjon som er mindre enn 1 mikrogram pr. ml, mens en relativ inaktivitet mot en organisme påvises ved en hemning av dens vekst ved en chalcomycinkonsentrasjon som er så høy som 25 mikrogram pr. ml eller høyere.
Ifølge oppfinnelsen fremstilles chaco-mycin ved å dyrke en utvalgt, i det følgen-de nærmere beskrevet stamme av organismen Streptomyces bikiniensis under kunstige betingelser i et passende nærende medium inntil mediet har fått en vesentlig antibakteriell aktivitet. Etter dyrknings-eller inkubasjonsperioden kan chalcomycin utvinnes fra mediet ved fremgangsmåter som vil bli beskrevet i det følgende, og kan underkastes ytterligere rensning i den ønskede grad.
Stammer fra Streptomyces bikiniensis som er egnet til fremstilling av chalcomycin er erholdt ved å bestråle actinomyceter fra jordbunn på Cuba med ultrafiolette stråler. Den organisme som brukes i frem-gangsmåten ifølge oppfinnelsen ble erholdt fra en actinomycet som opprinnelig ble isolert ved seriefortynning på plater av næringsagar, fra en jordbunnprøve oppsamlet på en maisåker i San Vicente, Cuba. Denne actinomycet frembragte bare en liten antibiotisk virkning mot gram-nega-tive organismer. Dens evne til å produsere antibiotikum ble endret ved å utsette den for bestråling med ultrafiolette stråler og formere de organismer som overlevet denne bestråling.
Behandlingen ble utført på følgende måte: Kulturen av den opprinnelige actinomycet ble spredt på en maltose-agar-plate og inkubert i 7 døgn. Sporene fra denne plate ble tilsatt til 10 ml steril 0,85 %'s natriumkloridoppløsning og den herved erholdte suspensjon ble rystet i 30 min. Spo-resuspensjonen ble derpå anbragt i en steril Petri-skål uten lokk og bestrålet i 1 min. med en 4 watts lampe for utsendelse av ultrafiolette germicide stråler, idet lampens pære ble anbragt 11,4 cm fra suspensjonen. Den bestrålte suspensjon ble overført på Andersons maltose-agar og inkubert i 7 døgn ved 28° C. Platene ble derpå anbragt i kjøleskap i 10 døgn. Deretter ble enkelte kolonier utvalgt og overført til plater som var fremstilt med Anderson's maltose-agar. Platene ble inkubert i 8' døgn ved 28° C. Den actinomycet som man erholdte fra en av disse plater, er den stamme av Streptomyces bikiniensis som anvendes til fremstilling av chalcomycin ved fremgangsmå-ten ifølge oppfinnelsen.
Kulturer av denne organisme er depo-nert i United States Department of Agri-culture, Northern Utilization Research & Development Division, Peoria, Illinois og oppbevares i denne institusjons permanen-te kultursamling under betegnelsen NRRL 2737.
Organismen er et aeorobt og i luften, sporedannende medlem av ordenen Actino-mycetales. Den tilhører arten Streptomyces som beskrevet i syvende utgave av «Bergey's Manual of Determinative Bacteriology». Dens makroskopiske kulturkarakteristika på medier som er fordelaktig til identifisering av medlemmer av denne art, vises i nedenstående tabell 2.
Når organismen dyrkes på visse agar-medier er luftmyceliet først hvitt og blir senere grått. Luftmyceliet er fløyelsaktig, leilighetsvis litt dunet og er ofte dugget med klare og gjennomsiktige små dråper. Substratmyceliet er hvitt til gult eller gul-brunt og blir senere grått. På medier som inneholder komplekse kilder for nitrogen, blir substratmyceliet i alminnelighet brunt, brungrått eller sort og der dannes et mør-kebrunt eller sort, oppløselig pigment i sub-stratet.
Lufthyfene er gjennomsiktige og klare samt rettlinjede eller bølgeformede med leilighetsvis forekommende endeløkker ved anvendelse av noen av medier som glycerol-asparagin-agar og glykose sammen med nærings-agar. Lufthyfene varierer i lengde og forgrener seg heterogent. Spredte distale deler av lufthyfene deler seg opp i spore-kjeder hvis lengde varierer fra ca. 10 til 200 mikroner. De vegetative hyfer er gjennomsiktige og klare samt fra omkring 0,6 til 1,4 mikroner brede. Sporene er i alminnelighet avlange, leilighetsvis ovale eller kuleform-ede. Deres diameter varierer fra ca. 0,6 til
1,5 mikroner og deres lengde varierer fra 0,8 til 2,0 mikroner.
I forsøk med utnyttelse av kullstoff-holdige materialer ble en god til temmelig god vekst oppnådd med de følgende kilder for kullstoff hver for seg: dekstrose, maltose, D-mannose og stivelse. Ingen eller dårlig vekst inntraff ved anvendelse av: L-arabinose, adonitol, cellulose, i-inositol, inulin, laktose, D-mannitol, melezitose, me-libiose, raffinose, rhamnose, D-sorbitol, sukrose og trehalose.
I luftmyceliets farve og i flere hense-ender med hensyn til hyfe-mikromorfolo-gien ligner organismen Streptomyces bikiniensis som beskrevet av D. B. Johnstone og S. A. Waksman (J. Bact. 55, 317 (1948)). I visse andre karakteristika er organismen bemerkelsesverdig forskjellig fra S. bikiniensis som beskrevet av Johnstone og Waksman (Tabell 3) så vel som fra den S. bikiniensis-lignende organisme som er beskrevet av Hamada (Tabell 4). Organismen iføl-ge oppfinnelsen betraktes derfor som en ny og distinkt stamme av Streptomyces bikiniensis og denne stamme identifiseres ved kulturnummeret NRRL 2737.
Ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles chalcomycin ved å pode et sterilt, vandig næringsmedium med en chalcomycin-produserende stamme av Streptomyces bikiniensis, utføre en fermentasjon under aseptiske, aerobe btingelser ved en temperatur mellom ca. 20 og 35° C inntil dyrkningskulturen har fått vesentlig antibakteriell aktivitet og derpå isolere chalcomycinet fra kulturen.
Til podningen kan der brukes sporer eller conidia av den utvalgte kultur av Streptomyces bikiniensis. Vandige suspen-sjoner av sporer eller conidia som inneholder en liten mengde såpe eller andre fukt-ningsmidler kan hensiktsmessig anvendes. For fermentas joner i større målestokk er det fordelaktig å bruke kraftige, unge, luftede og omrørte kulturer av mikroorganismen.
Egnede vandige næringsmedier er dem som inneholder assimilerbare kilder for kullstoff og nitrogen og som har en pH-verdi mellom ca. 6 og 8,5. Blant de kilder for kullstoff som er assimilerbare og tilfredsstillende for anvendelse i fremgangs-måten, er rene kullhydrater som kan nyt-tiggjøres av organismen såvel som i han-delen tilgjengelige blandinger av kullhydrater. Noen eksempler på de materialer som er egnet for dette formål, er glukose, maltose, mannose, stivelse og modifiserte stivelsesarter, maissirup, maltholdige væs-ker, «black-strap» melasse, glycerol og lignende. Konsentrasjonen av kullhydratet i næringsmediet er ikke særlig kritisk og kan variere fra 0,5 til 5 vektprosent beregnet på mediets vekt. Mengdeforhold som ligger noe utenfor dette område kan også anvendes.
Kildene for nitrogen i næringsmediet kan være av organisk, anorganisk eller både organisk og anorganisk natur. Noen eksempler på de mange nitrogenholdige stoffer som kan brukes i næringsmediet er aminosyrer, peptoner, hydrolyserte eller ikke hydrolyserte proteiner, fiskemel, soya-bønnemel, maisstøpvæske, avvannet mais-støpvæske, kjøttekstrakter, jordnøttmel, anorganiske nitrater, urinstoff og ammo-niumsalter. På grunn av at de fleste lett tilgjengelige kilder for nitrogen er urene, varierer den mengde som bør tilsettes til mediet i overensstemmelse med stoffenes renhet og det lar seg ikke angi bestemte mengdeforhold mellom nitrogenholdig materiale og mediets øvrige bestanddeler. Det kan imidlertid sies at for praktiske formål behøver ikke mengden av nitrogenholdig materiale å overstige 6 % av hele dyrk-ningsmediets vekt og det kan være tilstede i betydelig lavere konsentrasjoner.
Nærvær av mineralsalter i visse mengder samt av vekstfaktorer med ukjent sammensetning er fordelaktig for oppnåelse av optimale utbytter av chalcomycin. Mange lett tilgjengelige materialer som maisstøp-væske, butanolaceton-fermentasjonsresi-duer, gjærpreparater, soyabønnemel og andre produkter av lignende natur inneholder slike anorganiske salter og vekstfaktorer og tilstedeværelse av ett eller flere av slike materialer i fermentasjonsmediet er ferdelaktig. For å sikre nærvær av mediets mineralbestanddeler i tilstrekkelige mengder, er det også i mange tilfelle fordelaktig å tilsette anorganiske salter som natrium-klorid, natriumbikarbonat, kalsiumkarbo-nat, natriumacetat og lignende. De foretrukne konsentrasjoner av mineralsalter ligger mellom 0,1 og 1 vektprosent beregnet på næringsmediets vekt.
Dyrkningen av den utvalgte stamme av Streptomyces bikiniensis i det vandige næringsmedium kan utføres på flere forskjellige måter. Således kan f. eks. organismen dyrkes under aerobe betingelser på mediets overflate eller den kan dyrkes under mediets overflate, dvs. under submerse betingelser, forutsatt at man sørger for til-strekkelig tilførsel av oxygen.
Den foretrukne metode til fremstilling av chalcomycin i stor målestokk består i fermentasjon av en chalcomycin-produser-ende stamme av Streptomyces bikiniensis i submerse kulturer eller dypkulturer. Iføl-ge denne utførelsesform for oppfinnelsen poder man sterile, vandige næringsmedia med den utvalgte kultur og inkuberer mediet under omrøring og luftning ved en temperatur mellom ca. 20 og 35° C, for-trinnsvis omkring 23—30° C inntil chalcomycinet er tilstede i kulturvæsken i høy konsentrasjon. Det tidsrom som kreves for å oppnå et optimalt utbytte av chalcomycin, varierer med den anvendte apparaturs størrelse og type, hastighetene for omrøring og luftning, den spesielle organisme som brukes og med andre faktorer. I fermentasjon i stor målestokk for industriell frem-stiling hvor fermentasjonen utføres i dyrk-ningskar av tank-typen, oppnåes den mak-simale produksjon av chalcomycin etter ca. 1 til 4 døgn. Kortere dyrkningsperioder kan også brukes, men gir i alminnelighet et
lavere utbytte av chalcomycin. Når dyrkningen utføres i kolber som rystes, kan den nødvendige tid for oppnåelse av maksimal produksjon av chalcomycin være noe len-ger enn ved anvendelse av store dyrknings-kar.
Under submerse dyrkningsbetingelser utvikler mikroorganismen seg som relativt distinkte partikler som er dispergert i næringsmediet, i motsetning til den relative kontinuerlige hinne som danner seg på mediets overflate ved anvendelse av over-flatedyrkning. På grunn av denne fordeling av organismen gjennom hele mediet kan store volum av det podede næringsmedium brukes ved dyrkning av organismen i tan-ker og andre kar som vanlig brukes i fer-mentasjonsindustrien. Stasjonære fermen-tasjonskar forsynt med røreverk og anordninger for luftning er særlig godt egnet for fremstilling av chalcomycin i stor målestokk, imidlertid kan fermentasjonsutsty-ret av annen art også brukes. Til fremstilling av chalcomycin i mindre mengder eller til fremstilling av kulturer av organismen for anvendelse som podningsmiddel for fermentasjoner i stor målestokk kan den submerse dyrkningsmetode utføres i små kolber eller krukker som rystes eller hvis innhold omrøres med passende mekaniske anordninger.
I den submerse kulturmetode kan om-røring og luftning av kulturmediet utføres på flere måter. Omrøringen kan frembringes ved turbiner, skovler, sentrifugalrøre-verk eller andre mekaniske anordninger for omrøring, ved å rotere eller ryste fermentasjonsbeholderen, ved forskjellige pumpe-anordninger eller ved å lede luft eller oxygen gjennom mediet. Luftningen kan frembringes ved å blåse luft eller oxygen inn i dyrkningsmediet gjennom åpne rør, per-forerte rør eller rør forsynt med en porøs del gjennom hvilken gassen kan dif f un-dere, eller luftningen kan frembringes ved å sprøyte, skvette eller helde mediet inn i eller gjennom en oxygenholdig atmosfære.
Et alternativ til den foretrukne submerse dyrkningsmetode er anvendelse av overflatekulturmetoden til fremstilling av chalcomycin. I denne metode podes et tynt skikt, i alminnelighet med tykkelse mindre enn 2 cm av et sterilt, vandig næringsmedium med en chalcomycin-produseren-de stamme av Streptomyces bikiniensis, hvorpå detipodede medium inkuberes under aerobe betingelser ved en temperatur mellom ca. 20 og 35° C. Produktet isoleres derpå på en måte lignende dem som beskrives i det følgende i forbindelse med den submerse dyrkningsmetode.
Den mengde eller konsentrasjon av chalcomycin som er tilstede etter dyrknings-perioden eller på et hvilket som helst tids-punkt under denne periode, kan bestemmes ved biologisk analyse. For dette formål uttas en representativ prøve fra dyrkningsmediet og filtreres for å fjerne faste stoffer. Mediets antibiotiske potensial kan derpå bestemmes ved å måle den grad i hvilket det hemmer veksten av mikroorganismen Sarcina lutea under betingelser som normalt er gunstige for denne organismes vekst. Ved utførelsen av denne biologiske analyse fremstiller man en plate agar-kultur av forsøksorganismen. Filtrerpapir - skiver som inneholder en avmålt mengde av en fastslått fortynning av mediet, an-bringes mot agar-kulturens overflate og hemningen i organismens vekst observeres etter en viss inkubasjonsperiode. Denne biologiske analyse beror på den kjennsgjer-ning at chalcomycin på |en karakteristisk måte motvirker organismens vekst med det resultat at den hemningssone som omgir filtrerparpirskiven varierer med den mengde chalcomycin som er fordelt i filtrerpa-pirskiven. Angivelsen av verdien for potensialet er basert på den fortynning av kulturmediet som kreves for å frembringe en vilkårlig valgt diameter for hemningssonen under stardardiserte forsøksbetingelser således som det vil bli beskrevet nærmere i eksemplene i det følgende.
Potensialet av chalcomycin-kulturme-dier kan også bestemmes ved hjelp av andre metoder som f. eks. ved å måle den fortynning av kulturmediet som kreves for å gi en veksthemning på 50 % i en turbidi-metrisk prøve med mikroorganismen Agro-bacterium tumefaciens etter en 2<3>4 times inkubasjonsperiode ved 37° C, på kulturme-dium av hjerne-hjerteekstrakt.
Etter fullføring av fremgangsmåtens fermentasjonstrinn er det ønskede produkt særlig tilstede i kulturvæsken og isoleres fra denne væske. Ved fremstilling av chalcomycin ved den submerse dyrkningsmetode er det fordelaktig å fraskille myceliet ved midler som filterering eller sentrifu-gering og derpå ekstrahere den filtrerte væske med et oppløsningsmiddel som ikke er blandbart med vann, f. eks. etylendiklorid, kloroform, etylacetat, amylacetat. Det erholdte ekstrakt som altså inneholder chalcomycinet, underkastes ytterligere behandling som er avhengig av sluttproduk-tets ønskede renhet. Således kan f. eks. det organiske ekstrakt vaskes med en fortynnet base, en fortynnet syre og vann og inndampes til tørrhet. Det erholdte residuum bestående av chalcomycin i form av råprodukt, ekstraheres med et ikke polart oppløsningsmiddel som benzen og ekstrak-tet helles i en kromatografisk kolonne som er fyllt med aluminiumoxyd. Ved utvikling og eluering av kolonnen med i økende grad polare oppløsningsmidler og blandinger av oppløsningsmidler får man eluater som inneholder chalcomycin i høy konsentrasjon. Når så ønskes, utføres ytterligere rensning ved gjentatt kromatografi, omkrystallisa-sjon fra oppløsningsmidler, ved fordeling mellom oppløsningsmidlet ved ekstraksjon i motstrøm eller ved å kombinere disse eller lignende operasjoner. Etter en foreløpig rensning ved kromatografi i aluminiumoxyd eller fordeling mellom oppløsnings-midler kan ytterligere rensning utføres ved kromatografi i aktivert kull som eventuelt kan være blandet med diatomé jord. Utvik-lingen og elueringen av kolonnen bestående av aktivt kull kan utføres med hydro-xylgruppeholdige oppløsningsmidler eller keton-oppløsningsmidler som metanol, vandig metanol, aceton eller vandig aceton.
Chalcomycin er et verdifullt antibiotisk middel for behandling av bakterieinfeksjo-ner. Således er det f. eks. aktivt mot forskjellige gram-positive organismer. Det er i alminnelighet effektivt mot stafylokokker og pneumokokker og likeledes mot noen stammer av streptokokker. Chalcomycin er særlig fordelaktig for behandling av bak-terieinfeksjoner forårsaket av flere stafylokokk-organismer som er motstandsdyktige mot andre antibiotiske midler. Som et spe-sielt eksempel på anvendelse av chalcomycin, nevnes at det kan brukes i form av sal-ver for lokal anvendelse til bekjempelse av lokale stafylokokk-infeksjoner.
I det følgende beskrives som eksempler noen utførelsesformer for oppfinnelsen.
Eksempel 1: Fremstilling og undersøkelse av kulturvæsker som inneholder chalcomycin.
Der ble fremstillet et næringsmedium med følgende sammensetning: 2 liter av dette medium ble i 250 ml porsjoner fordelt i åtte 1-liters Erlenmeyer-kolber med vid åpning og som var lukket med bomullsgas og fibre. Kolbenes innhold ble sterilisert ved 120° C i 25 min. Man lot derpå kolbene avkjøle og podet hver av kolbenes innhold med 0,5 ml av en sporesuspensjon av Streptomyces bikiniensis tilsvarende NRRL 2737. Denne sporesuspensjon ble fremstillet fra en sporeholdig agar-plate av Anderson's maltose-agar ved å suspendere sporene i 12 ml steril 0,1 % na-trium-heptadecylsulfatoppløsning. Kolbene ble derpå inkubert ved 27° C i 72 timer, hvorunder luftning og omrøring ble besør-get av et roterende rysteapparat som be-skrev en sirkel med 6 cm's diameter ved 160 omdreininger pr. min.
Ved slutten av inkubasjonsperioden ble kulturvæskens chalcomycin-innhold bestemt ved en papirskiveagar-diffusjonsme-tode i skål lignende den metode som er beskrevet for undersøkelse av viomycin av Ehrlich, Iverson og Kohberger, «Antibiotics and Chemotharapy», 1, (3) : 211—216 (juni 1951). Ved tilpasning av denne metode for undersøkelse av chalcomycin gjorde man følgende modifikasjon: Den anvendte for-søksorganisme var Sar eina lutea PCI 1001 W. Podningsmediet for kulturskiktet ble fremstillet ved å la kulturen vokse på et medium som «Penassay Seed Agar» (Difco) i Roux-flasker ved 28° C i 18 timer. Cellene ble derpå innhøstet i et medium som «Penassay-Broth» (Difco). Sammensetningen av «Pennassay Seed Agar» og «Penassay Brotn» er beskrevet i «Difco Manual of Dehydrated Culture Media and Reagents for Microbiological and Clinical Laboratory Procedures», 9. utgave, og «Compilation of Tests and Methods of Assay for Antibiotic Drugs», Federal Security Agency, Food & Drug Administration. Agar og kulturvæsker med lignende sammensetning kan.også anvendes. Cellesuspensjonen fortynnes derpå med ytterligere mengder «Penassay Broth» slik at en fortynning i forholdet 1 : 10 gir 16 % lystransmisjon i et Coleman Jr. spek-trofotometer, modell 6A ved en bølgelengde på 550 m\ i. Den cellesuspensjon som er erholdt før fortynningen i forholdet 1 : 10 for spektrofotometrisk bestemmelse anvendes i den biologiske analyse.
Denne cellesuspensjon fortynnes i forholdet 1 : 600 med «Penassay Seed Agar» og 25 ml av den fortynnede suspensjon hel-des i hver skål. Man anvender ikke noe grunnskikt i denne prøve. Inkubasjonen ut-føres ved 37° C i 18 timer.
Den antibiotika-holdige kulturvæske som ble erholdt i dette eksempel, ble gitt
et potensial på 8 enheter pr. ml. Denne an-givelse av potensialet er basert på den kjensgjerning at en åtte gangers fortynning av kulturvæsken med fosfatpuffer med pH-verdi 7,8 (sluttelige pufferkonsen-trasjon 0,1 M) ga en vilkårlig valgt gjen-nomslittlig diameter for hemningssonen på 13,9 mm ved prøvning under de foran angitte undersøkelsesbetingelser.
Når man baserer seg på potensialen-heter som er definert på denne måte, gir rent, krystallinsk chalcomycin et potensial på 1025 enheter pr. mg. En enhet represen-terer følgelig ca. 1 mikrogram chalcomycin.
Ved undersøkelse av chalcomycin-kulturvæsker fortynnes den standardprøve der refereres til samt prøvene av kulturvæsker i fosfatpuffer-oppløsninger til man får en pufferoppløsning med sluttkonsen tras jon tilsvarende 0,1 M. Når legemsvæsker under-søkes, fortynnes standardprøven og prøv-ene i den væske som skal undersøkes.
Eksempel 2: Fremstilling og isolering av chalcomycin.
Der ble fremstillet et næringsmedium
med følgende sammensetning:
12 liter av dette medium ble anbragt og omrørt i en 30 liters krukke forsynt med anordning for fordeling av gass, sentrifu-galrøreverk, støtvegger og ledning for ut-tagning av prøver. Mediet ble sterilisert ved å oppvarme det til 121° C i 90 min. En sporesuspensjon ble fremstillet fra 2-agar-plater med sporeholdig Streptomyces bikiniensis tilsvarende NRRL 2737, på Ander-son^ maltose agar, samt 20 ml av en steril 0,1 % natriumheptadecylsulfat-oppløsning. Denne sporesuspensjon ble anvendt til å pode det avkjølede dyrkningsmedium som etter podningen ble inkubert ved 26° C i 46 timer. Under inkuberingens forløp ble der omrørt med en hastighet av 210 omdreininger pr. min. mens luft ble tilført med en hastighet på 12 liter pr. min. Skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov. 64 liter næringsmedium med den ovenfor angitte sammensetning ble anbragt i like store porsjoner i fire 30 liters fermen-tasjonskrukker med røre verk. Etter sterili-sering og avkjøling ble hver krukkes innhold podet med 800 ml av den ovenfor angitte 46 timers fermentasjonsblanding. In-kuberingen ble utført ved 26° C i 24 timer under omrøring med en hastighet av 200 omdreininger pr. min. samt luftning med 16 liter luft pr. min. Skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov.
Fermentas jonsblandingen ble bragt sammen og filtrert, hvorved man fikk ca. 57,5 liter dyrkningsmedium. Dette dyrkningsmedium ble ekstrahert to ganger med 2,25 liters porsjoner etylendiklorid. Det erholdte organiske ekstrakt ble vasket med 2 %'s vandig natriumkarbonatoppløsning, 0,01 N saltsyre og sluttelig med vann. Derpå ble oppløsningsmidlet fordampet og residuet ekstrahert med benzen. Benzenek-straktet ble filtrert og heldt i en kromatografi-kolonne som var fyllt med 350 g aluminiumoxyd (pH-verdi 6,9) fra en benzen-suspensjon. Etter utvikling av kolonnen med 250 ml etylacetat ble den eluert med metanol. De enkelte metanol-eluater ble oppsamlet og residuet fra hvert eluat ble undersøkt på antibiotisk aktivitet. De ak-tive eluater ble derpå blandet og inndampet til tørrhet. En oppløsning av det erholdte residuum i 30 ml 18 %'s vandig aceton ble heldt i en kromatografikolonne fremstillet av 5,5 g aktivt kull. Som aktivt kull kan der brukes Darco G-60. Kolonnen ble utviklet med 18 %'s vandig aceton og produktet oppsamlet ved eluering med aceton. De aceton-eluater som viste antibiotisk aktivitet ble blandet og blandingen inndampet til tørrhet, hvorved man fikk det ønske-D
de chalcomycin, [a] 27 = — 4^>5° (c =
1% i etanol). Ved mikroanalyse ble det funnet at dette produkt inneholdt 59,84% kullstoff og 8,3 % hydrogen.
Eksempel 3: Fremstilling, rensning og karakterisering av chalcomycin.
Der ble fremstillet et næringsmedium (her betegnet «Medium C») på følgende måte:
37,85 liter av Medium C ble anbragt i en fermentasjonsbeholder av rustfritt stål med volum 113 liter. Mediet ble tilsatt 175 ml av et skumningshindrende middel som besto av en blanding av talg i form av råprodukt og mineraloljer inneholdende mo-no- og diglycerider. Mediet ble derpå sterilisert i 1 time ved 121° C, avkjølt og podet med 30 ml av en sporesuspensjon. Denne sporesuspensjon var fremstillet av tre plater inneholdende sporeholdig Streptomyces bikiniensis om tilsvarte NRRL 2737 ved å suspendere sporene fra hver av platene i 10 ml steril, 0,1 % natriumheptadecylsul-fat-oppløsning. Fermentas jonsblandingen ble inkubert i 32 timer ved 26° C under luftning og omrøring som ble frembragt ved å blåse inn luft med en hastighet på 184 liter pr. min. Ytterligere mengder skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov.
Et annet næringsmedium (her betegnet «medium D») ble fremstillet på følg-ende måte:
Ca. 1135 liter av medium D ble anbragt i en fermentasjonsbeholder av rustfritt stål med volum 1900 liter og etter tilsetning av 1 liter skumningshindrende middel ble mediet sterilisert i 1 time ved 121° C. Man lot det heretter avkjøle og podet det med 37,85 liter av 32 timers fermentasjonsblanding. Der ble så inkubert i 24 timer ved 26° C. Omrøring ble besørget av et røreverk som arbeidet med 85 omdreininger pr. min. Luft ble ført inn i fermentas jonsblandingen med en hastighet på 1274 liter pr. min. Ytterligere mengder skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov.
4,542 m<3> Medium D og 10 liter skumningshindrende middel ble anbragt i en fermentasjonsbeholder av rustfritt stål med volum 7,57 m<3> og blandingen ble sterilisert i 1 time ved 121° C. Den ble derpå avkjølet og podet med 568 liter av 24 timers fermentasjonsblandingen fra 1900 liters fermentasjonsbeholderen. Inkubasjonen ble utført i 40 timer ved 26° C under luftning med 3,396 m<3> luft pr. min. og ytterligere omrøring med et røreverk som arbeidet med 125 omdreininger pr. min. Ytterligere 8,2 liter skumningshindrende middel ble
tilsatt når det var nødvendig for å minske skumningen.
Etter inkubasjonsperioden ble fermentas jonsblandingen (volum 5,072 m<3>) oppsamlet og filtrert. Filtratet ble ekstrahert med etylacetat i en sentrifugalekstraktor som arbeidet etter motstrømsprinsippet
(en Podbielniak-esktraktor kan anvendes)
i et mengdeforhold på 1 del oppløsnings-middel til 4 deler vandig filtrat. Etylacetat-ekstraktet ble blandet med etylacetatek-strakter erholdt på samme måte fra tre lignende fermentasjoner med i det hele 14,232 m<3> kulturvæske. De blandede ekstrakter ble vasket godt med vann, hvorpå etylacetatet ble fjernet ved fordampning og erstattet med 24,1 liter etylendiklorid.
En kromatografi-kolonne med diameter 15,2 cm ble fyllt med 18 kg aluminiumoxyd (pH-verdi 4) fra en suspensjon i etylendiklorid. En porsjon på 13,9 liter av ety-lendikloridekstraktet (tatt ut fra oppløs-ningen av fermentasjonsproduktet i 24,1 liter etylenklorid) ble tørret over vannfritt natriumsulfat og derpå heldt i aluminiumoxyd-kolonnen. Kolonnen ble utviklet og eluert ved suksessiv tilsetning av (a) 4,5 liter 1 : 1 etylacetat, etylendiklorid, (b) 18,25 liter etylacetat, (c) 20 liter 1 : 9 metanol : etylacetat, (d) 6,4 liter 1 : 1 metanol : etylacetat og sluttelig (e) 8 liter 1 : 1 vann : etanol. De angitte mengdeforhold mellom oppløsningsmidlene er volumforhold. Eluatet fra kolonnen ble oppsamlet i fraksjoner og de fraksjoner som ved biologisk un-dersøkelse ble funnet å ha bemerkelsesverdig antibiotisk aktivitet, ble blandet og inndampet til tørrhet. Residuet ble oppløst i aceton, hvorved man fikk en oppløsning som hadde ca. 60 000 enheter chalcomycin pr. ml.
1,5 liter av denne oppløsning ble tilsatt til 6,5 liter vann og den uklare suspensjon man herved fikk, ble heldt i en kromatografikolonne fylt med 1,6 kg aktivert kull og 1,6 kg diatomé jord. Som aktivt kull kan der brukes Darco G-60 og Celite 545. Kolonnen ble utviklet og eluert med vandig aceton i porsjoner med øende acetoninnhold og sluttelig med aceton. Eluatet ble oppsamlet i fraksjoner og de fraksjoner som viste antibiotisk aktivitet, ble blandet og inndampet til tørrhet. En oppløsning av residuet i et lite volum benzen ble lyofili-sert, hvorved man fikk chalcomycin som et amorft pulver. Dette produkt viste en spesi-27
fik dreining [a] D = 143,5° (c = 1 % i etanol). To ganger utførte mikroanalyse gav som resultat 59,72 %, 59,97 % kullstoff og 8,32 %, 8,29 % hydrogen.
Dette produkts renhet kan betraktes ved å underkaste det motstrømsekstrak-sjon. Når man f. eks. bruker en 25-platers Craig motstrømsekstraktor og et oppløs-ningsmiddel-system som består av n-butanol, cyklohexan og vann (9 : 41 : 50, k = I, 07), isoleres chalcomycinet fra plater nr.
13. Ved mikroanalyse finner man at dette
produkt inneholder 59,84 %, 59,56 % kullstoff, 8,15 %, 8,08 hydrogen og 32,05 % oxygen. En C-metylgruppe-analyse gir en verdi på 10,9 %. Absorpsjonsspektret i det ultrafiolette område, bestemt i etanol, viser et maksimum ved 218 m|x, E ^ ^ = 319 og en avtrapning i området omkring 240 mjx.
Oppløst i kloroform viser chalcomycin absorpsjonsmaksima i det infrarøde område ved omkring 2,83, 3,34, 3,40, 5,83, 5,89, 6,00, 6,13, 6,86, 7,23, 7,40, 7,53, 7,78, 8,00, 8,54, 8,70, 9,00, 9,22, 9,41, 9,67, 10,20, 10,71, II, 20, 11,57 og 11,69 mikroner. Bestemt i en kaliumbromidskive viser absorpsjonsspektret i det infrarøde område maksima omkring 2,84, 3,35, 3,40, 5,81, 5,89, 6,02, 6,12, 6,84, 7,20, 7,38, 7,51, 7,77, 8,08, 8,52, 9,22, 9,40, 9,63, 10,15, 11,19, 11,59, og 12,70 mikroner.
Eksempel 4: Fremstilling av chalcomycin i industriell målestokk.
Der ble fremstillet et næringsmedium
som følger:
Ca. 1200 ml av dette medium ble inn-stillet på en pH-verdi av 7,5 ved tilsetning av 10 N natriumhydroxydoppløsning og 600 ml av mediet ble anbragt i hver sin av to 2-liters Erlenmeyer-kolber. Etter steriliser-ing av mediet ved 121° C i 15 min. ble mediet i begge kolber tilsatt 5 ml av en sporesuspensjon som var fremstillet ved å sus-pandere sporer fra en agar-plate med sporeholdig Streptomyces bikiniensis svarende til NRRL 2737 og dyrket på Anderson's maltose agar i 10 ml steril 0,1 % natriumhep-tadecylsulfat-oppløsning. Der ble så inkubert i 32 timer ved 27° C under omrøring og luftning frembragt av en roterende plate med 200 omdreininger pr. min. i sirkel med diameter 6 cm.
75,7 liter av et medium med den ovenfor angitte sammensetning ble blandet med
175 ml skumningshindrende middel og sterilisert i 62 min. ved 121° C i en 190 liters fermentasjonsbeholder av rustfritt stål. Blandingen ble avkjølet og derpå podet med 200 ml av produktet fra 32 timers fermentasjon samt inkubert i 40 timer ved 26° C under effektiv omrøring og gjennomled-ning av 275 liter luft pr. min.
1135,5 liter av et medium med den sammensetning som er angitt i begynnel-sen av dette eksempel ble blandet med 1 liter skumningshindrende middel og sterilisert i 65 min. ved 121° C i en 1900 liters fermentasjonsbeholder av rustfritt stål. Blandingen ble derpå avkjølet og podet med 75,7 liter av produktet fra 40 timers fermentasjon erholdt fra 190 liters fermentasjonsbeholderen og man utførte en fermentasjon i 24 timer ved 26° C under om-røring med 91 omdreininger pr. min. og luftning med 1274 liter luft pr. min. Skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov, der ble anvendt ca. 300 ml.
Ca. 13,62 m<3> av et medium med den sammensetning som er angitt i begynnel-sen av dette eksempel, ble sterilisert i 66 min. ved 121° C i en 19 m<3> fermentasjonsbeholder av rustfritt stål og under tilsetning av skumningshindrende middel etter behov. Blandingen ble avkjølet og podet med 1135 av produktet fra 24 timers fermentasjon erholdt fra fermentasjonsbeholderen med volum 1900 liter. Fermentasjonen ble utført i 40 timer ved 26° C under omrøring med 112 omdreininger pr. min. og luftning med 6,23 m3 luft pr. min. Skumningshindrende middel ble tilsatt etter behov.
Den oppsamlede fermentasjonsblanding (volum ca. 14,383 m<3>) ble filtrert på to trommelfiltere under anvendelse av 56,8— 68,1 kg diatoméjord som filterdekke og 182 —227 kg diatoméjord som filtreringshjelpe-middel for hvert trommelfilter. Som diatoméjord kan der brukes produkter som «Celite 545». Den filtrerte kulturvæske ble ekstrahert med halvparten av sitt volum etylendiklorid. Det erholdte ekstrakt ble blandet med etylendiklorid-ekstrakter erholdt på samme måte fra ytterligere 393,9 m<3> av en lignende fermentasjonsblanding. De blandede etylendikloridekstrakter ble konsentrert til en sirup under forminsket trykk ved 35° C. Den erholdte sirup ble opp-løst i 178 liter metanol og oppløsningen ekstrahert i en motstrøms sentrifugalekstraktor med 6,737 m<3> heptan som var met-tet med metanol. Heptanekstraktet som har liten antibiotisk aktivitet, ble kastet vekk.
Metanolfasen ble inndampet under
forminsket trykk og ved en temperatur på mindre enn 20° C til et volum på 37,85 liter. En kromatografi-kolonne med diameter ca.
30 cm ble fylt med 37,4 kg aktivt stenkull
og 37 kg diatoméjord fra en metanolsus-pensjon. Som diatoméjord er «Darco G-60» og «Celite 545» tilfredsstillende. De 37,85 liter metanoloppløsning ble heldt i denne kromatografikolonne som derpå ble utviklet og eluert med i det hele 2,09 m<3> metanol og i det hele 1,117 m<3> aceton. Metanolelu-atene ble oppsamlet i 11 fraksjoner og ace-toneluatene i 7 fraksjoner. Hver av de således erholdte 18 eluatf raks joner ble un-derkastet biologisk analyse på antibiotisk aktivitet og de fraksjoner som viste en sterk aktivitet, ble for seg inndampet til tørrhet under forminsket trykk ved en temperatur under 25° C. Residuene fra disse fraksjoner ble oppløst i tertiær butanol og de erholdte oppløsninger ble lyofili-sert. De herved erholdte faste stoffer ble blandet og omkrystallisert fra tertiær butanol. Det herved erholdte krystallinske produkt ble oppsamlet på filter, vasket med tertiær butanol og tørret i vakuum i 56 timer. Det erholdte produkt er chalcomycin som inneholder tertiær butanol fra kry-stillisasjonsvæsken. Denne tertiære butanol kan ikke fjernes ved tørring ved romtemperatur under et trykk på 100 mikron i 1 uke. Det på denne måte erholdte produkt viser et absorpsjonsmaksimum i det ultrafiolette område ved 220 m(.i i absolutt etanol. E ^ ^ = 294. Den spesifikke drei-28
ning er [a]' D = 39,5° (c = 1 % i etanol). Ved mikroanalyse fant man etter tap av 12,77 % ved fordampning følgende verdier: 59,50 %, 59,78% kullstoff, 8,15%, 8,14 % hydrogen, 31,43 % oxygen og 0,32% aske.
Chalcomycin som inneholder tertiær butanol som krystallisasjonsvæske viser seg ved biologisk undersøkelse å være om-trentlig 85 % så aktivt mot Sarcina lutea PCI 1001 W som rent chalcomycin.
For å få rent chalcomycin, ble 1445 g av det krystallinske chalcomycin som inneholder tertiær butanol som krystallisasjonsvæske, oppløst i 2890 ml absolutt etanol som var oppvarmet til 55° C. Der ble derpå tilsatt 11 560 ml vann under stadig omrøring med påfølgende tilsetning av 300 ml etanol. Den klare oppløsning ble filtrert og filtratet holdt ved £0—24° C i 20 timer, derpå ved 5—8° C i 24 timer. De store, vel-definerte krystaller som herved skilte seg ut, ble oppsamlet på filter, vasket med is-vann og derpå tørret i vakuum. Det således erholdte produkt er chalcomycin som smelter på en oppvarmet blokk ved ca. 121—123° C. Produktet er i det vesentlige identisk med hensyn til sammensetning og fysikal-ske egenskaper med rent chalcomycin som erholdt ved å gå frem som angitt i de fore-gående eksempler.
Eksempel 5: Fremstilling av chalcomycindiacetat.
En oppløsning av 200 mg chalcomycin i 3 ml pyridin og 2 ml eddiksyreanhydrid hensettes ved ca. 25° C i 48 timer, hvorpå den inndampes til tørrhet i vakuum. Det erholdte residuum omkrystalliseres fra vandig metanol, hvorved man får chalcomycin-diacetat med smeltepunkt 148,5—150° C. Ved mikroanalyse ble det funnet at produktet inneholder 59,02 %, 58,85 % kullstoff, 7,51%, 7,67 % hydrogen og 10,50 %, 11,42 % acetyl. Absorpsjonsspektret i det ultrafiolette område viser et maksimum ved 217 m|x. E 1 c^ = 281. Oppløst i kloroform observeres fremtredende absorpsjonsmaksima i spektrets infrarøde område ved 2,83, 3,30, 3,37, 5,74, 5,84, 5,92, 6,04, 6,14, 6,85, 7,25, 7,38, 7,50, 7,80, 8,00, 8,51, 8,90, 9,17, 9,37, 9,50, 9,68, 10,19, 10,35, 11,20, 11,53 og 11,68 mikroner. Denne forbindelse er inaktiv mot Sarcina lutea ved en konsentrasjon på 500 mikrogram/ml.
Eksempel 6: Fremstilling av tetrahydrochalcomycin- diacetat.
0,896 g chalcomycin oppløst i 20 ml etanol rystes i kontakt med hydrogen ved romtemperatur og atmosfæretrykk i nærvær av palladium-på-kalsiumkarbonat-katalysator med 5 % palladium. En kataly-sator bestående av 5 % palladium på kull kan også brukes. Etter forbruk av ca. 2 mol hydrogen pr. mol chalcomycin ble kataly-satoren fraskilt ved filtrering og filtratet inndampet til tørrhet under forminsket trykk. Residuet består av tetrahydrochalcomycin i form av råprodukt og med mindre enn 5 % av chalcomycinets aktivitet mot Sarcina lutea. 250 mg av dette stoff ble oppløst i en blanding av 3 ml pyridin og 3 ml eddiksyreanhydrid. Man lot oppløs-ningen stå ved romtemperatur i 48 timer, hvorpå man inndampet den til tørrhet under forminsket trykk. Ved omkrystallisa-sjon av residuet fra vandig metanol fikk man tetrahydrochalcomycin-diacetat med smeltepunkt 178—179° C. Ved mikroanalyse fant man 58,79 %, 58,70 % kullstoff og
8,43 %, 8,17 % hydrogen. Ved bestemmelse i en kaliumbromidskive viser maksima i det infrarøde område seg ved 2,87, 3,40, 5,72, 5,84, 6,85, 7,24, 8,05, 8,28, 8,53, 8,87, 9,10, 9,34, 9,96 og 10,36 mikroner. I etanolopp-løsning observeres et absorpsjonsmaksimum i det ultrafiolette område ved 286 m\ i. 2 cm = 0,63. Denne forbindelse er inaktiv mot Sarcina lutea ved en konsentrasjon på 1 mg/ml.
Eksempel 7: Sur hydrolyse av chalcomycin.
En oppløsning av 908 mg chalcomycin i 40 ml 50 %'s vandig metanol, 1-molar med hensyn til saltsyren ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 10 min. Metanolen ble derpå fjernet ved destillasjon under forminsket trykk og det vandige residuum ekstrahert med tre porsjoner kloroform. Klo-roformekstraktene ble blandet og inndampet til tørrhet, hvorpå residuet ble omkrystallisert fra en blanding av isopropyleter og aceton. Det krystallinske produkt erholdt ved sur avbygning av chalcomycin smelter ved ca. 187—189° C og viser seg ved mikroanalyse å inneholde 60,35 %, 60,19% kullstoff og 7,95 %, 8,08 % hydrogen. Et absorpsjonsmaksimum i det ultrafiolette om-1 °Io
råde observeres ved 308 mjx. E j cm = 1,13.
Spekteret i det infrarøde område bestemt i en kaliumbromidskive er karakteristisk ved absorpsjonsmaksima ved 2,90, 3,36, 3,43, 3,54, 5,80, 5,85, 5,93, 6,08, 6,87, 7,24, 7,35, 7,59, 7,90, 8,56, 8,76, 8,91, 9,21, 9,38, 9,56, 10,26, 10,45, 10,87, 11,62, 12,54, 13,27 og 14,13 mikroner. Denne forbindelse er inaktiv mot Sarcina lutea ved en konsentrasjon på 1 mg/ml.
Eksempel 8: Alkalisk hydrolyse av
chalcomycin.
En oppløsning av 1,03 g chalcomycin i 100 ml 50 %'s vandig metanol som er 0,1-molar med hensyn til natriumhydroxyd ble hensatt ved romtemperatur i 24 timer. Metanolen ble derpå fjernet ved fordampning og den tilbakeblivende vandige blanding ble vasket med tre porsjoner kloroform som ble kastet vekk. Det vandige residuum ble surgjort til en pH-verdi på 2 og ekstrahert med tre porsjoner kloroform. Kloroform - ekstraktene ble blandet og inndampet til tørrhet i vakuum. Residuet ble omkrystallisert fra en blanding av isopropyleter og metanol. Det herved erholdte krystallinske produkt smeltet ved 273—276° C og viser ikke noe bemerkelsesverdig absorpsjonsmaksimum i det ultrafiolette område fra
220 til 300 m^. Mikroanalyse viste at produktet inneholdt 59,13 % kullstoff, 8,19%
hydrogen og 31,83 % oxygen. Absorpsjons-spekteret i det infrarøde område, bestemt i
en kaliumbromidskive viser fremtredende
maksima ved 2,85, 3,39, 5,65, 5,81, 6,85, 7,20,
7,40, 8,55, 8,83, 9,20, 10,00 og 10,37 mikroner.
Denne forbindelse er inaktiv mot Sarcina
lutea ved en «konsentrasjon på 1 mg/ml.
Claims (1)
- Framgangsmåte til framstilling av etnytt antibiotikum, chalcomycin, karakterisert ved at man poder et vandfgnæringsmedium som inneholder kilder for assimilerbart kullstoff og for nitrogen med en Streptomyces bikiniensis-kultur som til-svarer NRRL 2737, hvorpå man inkuberer det podede medium under aerobe betingelser ved temperaturer mellom 20 og 35° C ved en pH-verdi mellom 6 og 8,5 inntil mediet er bibragt vesentlig antibakteriell aktivitet, hvoretter man eventuelt skiller uopp-løst fast stoff fra den resulterende blanding og isolerer chalcomycin fra den vandige oppløsning.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US338697A US3900033A (en) | 1973-03-07 | 1973-03-07 | Dilator for cervical canal |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO134605B true NO134605B (no) | 1976-08-09 |
NO134605C NO134605C (no) | 1976-11-17 |
Family
ID=23325781
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO740780A NO134605C (no) | 1973-03-07 | 1974-03-06 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US3900033A (no) |
JP (1) | JPS49126196A (no) |
AR (1) | AR197859A1 (no) |
BE (1) | BE812023A (no) |
BR (1) | BR7401695D0 (no) |
CH (1) | CH562603A5 (no) |
DE (1) | DE2410933A1 (no) |
FR (1) | FR2220284B1 (no) |
GB (1) | GB1457811A (no) |
IE (1) | IE39335B1 (no) |
IL (1) | IL44363A (no) |
IN (1) | IN139926B (no) |
NL (1) | NL7402762A (no) |
NO (1) | NO134605C (no) |
PH (1) | PH10674A (no) |
SE (1) | SE401319B (no) |
SU (1) | SU535885A3 (no) |
ZA (1) | ZA741466B (no) |
Families Citing this family (54)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3900033A (en) * | 1973-03-07 | 1975-08-19 | Ortho Pharma Corp | Dilator for cervical canal |
JPS51133194U (no) * | 1975-02-21 | 1976-10-27 | ||
NZ180784A (en) * | 1975-05-21 | 1978-06-20 | Ortho Pharma Corp | Body canal dilating device |
JPS5545353Y2 (no) * | 1976-03-02 | 1980-10-24 | ||
IT1088048B (it) * | 1977-11-29 | 1985-06-04 | Magnasco Dante | Divaricatore per applicazioni in campo medico |
US4261339A (en) * | 1978-03-06 | 1981-04-14 | Datascope Corp. | Balloon catheter with rotatable support |
US4327709A (en) * | 1978-03-06 | 1982-05-04 | Datascope Corp. | Apparatus and method for the percutaneous introduction of intra-aortic balloons into the human body |
DE2813215C3 (de) * | 1978-03-25 | 1982-01-28 | Rolf 3500 Kassel Thomas | Mit Luftdruck aufblasbarer flexibler Formkörper zur Anpassung an auszudehnende menschliche und tierische Höhlungen |
US4338943A (en) * | 1979-05-14 | 1982-07-13 | Fuji Latex Co., Ltd. | Instrument for induction of labor |
US4270541A (en) * | 1979-05-14 | 1981-06-02 | Fuji Latex Co., Ltd. | Instrument for induction of labor |
NL7907774A (nl) * | 1979-10-22 | 1981-04-24 | Arnoldus Theodorus Maria Van D | Gewapende cervixdilatatie en weerstandsmeting-ballon. |
US4237893A (en) * | 1979-11-28 | 1980-12-09 | Alza Corporation | Cervical dilator |
EP0151583A1 (en) * | 1983-06-24 | 1985-08-21 | Project U | Improved endometrial cytologic sampling apparatus and method |
US4552557A (en) * | 1983-10-21 | 1985-11-12 | Avvari Rangaswamy | Inflatable uterine hemostat |
US4669478A (en) * | 1985-03-21 | 1987-06-02 | Robertson Jack R | Device for diagnosing and relieving female incontinence |
US5312430A (en) * | 1986-12-09 | 1994-05-17 | Rosenbluth Robert F | Balloon dilation catheter |
US5527336A (en) * | 1986-12-09 | 1996-06-18 | Boston Scientific Corporation | Flow obstruction treatment method |
US4762127A (en) * | 1987-04-15 | 1988-08-09 | The Montefiore Hospital Association Of Western Pennsylvania | Apparatus and method for enlarging the ends of a vessel prior to anastomosis |
US5133732A (en) | 1987-10-19 | 1992-07-28 | Medtronic, Inc. | Intravascular stent |
US4949718B1 (en) * | 1988-09-09 | 1998-11-10 | Gynelab Products | Intrauterine cauterizing apparatus |
US6344053B1 (en) | 1993-12-22 | 2002-02-05 | Medtronic Ave, Inc. | Endovascular support device and method |
US5065772A (en) * | 1989-10-13 | 1991-11-19 | Inamed Corporation | Inflatable cerivical pessary |
ES2020435A6 (es) * | 1990-02-15 | 1991-08-01 | Frontela Carreras Luis | Procedimiento y dispositivo para la exploracion y medida del himen. |
US5549559A (en) | 1990-03-22 | 1996-08-27 | Argomed Ltd. | Thermal treatment apparatus |
US5571153A (en) * | 1991-09-20 | 1996-11-05 | Wallst+E,Acu E+Ee N; Hans I. | Device for hyperthermia treatment |
US5382261A (en) * | 1992-09-01 | 1995-01-17 | Expandable Grafts Partnership | Method and apparatus for occluding vessels |
US6849063B1 (en) | 1994-03-11 | 2005-02-01 | Wit Ip Corporation | Thermal treatment apparatus |
US5545122A (en) * | 1994-10-12 | 1996-08-13 | Spruill; Theresa | Inflatable speculum |
WO1996040171A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Neuwirth Robert S | Intrauterine chemical necrosing method and composition |
US6187346B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-02-13 | Ablation Products, Inc. | Intrauterine chemical cauterizing method and composition |
GB9519851D0 (en) * | 1995-09-29 | 1995-11-29 | Rocket Medical Plc | Device |
US5891457A (en) * | 1997-05-12 | 1999-04-06 | Neuwirth; Robert S. | Intrauterine chemical necrosing method, composition, and apparatus |
US6893430B2 (en) | 1998-02-04 | 2005-05-17 | Wit Ip Corporation | Urethral catheter and guide |
US6673008B1 (en) | 1998-04-28 | 2004-01-06 | Ronald J. Thompson | Fallopian tube and method of in vitro fertilization and embryo development |
US20020058674A1 (en) | 1999-01-08 | 2002-05-16 | Hedenstrom John C. | Systems and methods for treating a mucosal surface |
US6695859B1 (en) * | 1999-04-05 | 2004-02-24 | Coalescent Surgical, Inc. | Apparatus and methods for anastomosis |
US6716252B2 (en) | 2000-06-30 | 2004-04-06 | Wit Ip Corporation | Prostatic stent with localized tissue engaging anchoring means and methods for inhibiting obstruction of the prostatic urethra |
AUPR790901A0 (en) * | 2001-09-25 | 2001-10-18 | Mccloskey, Jenny Colleen | Inactivation of papillomavirus |
IL149687A0 (en) * | 2002-05-15 | 2002-11-10 | Alexander Condrea | Cervical dilator |
US20040127931A1 (en) * | 2002-08-09 | 2004-07-01 | Geoffrey Kincaid | Cervical dilator |
AU2003295853A1 (en) * | 2002-11-21 | 2004-06-18 | Timothy B. Hibler | Cervical medical device, system and method |
US20050165427A1 (en) * | 2004-01-22 | 2005-07-28 | Jahns Scott E. | Vessel sealing devices |
WO2005084745A1 (en) * | 2004-03-08 | 2005-09-15 | Medilator | Catheter and method for dilating a body passageway |
US7947207B2 (en) | 2005-04-12 | 2011-05-24 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Method for retaining a vascular stent on a catheter |
NZ540710A (en) * | 2005-06-10 | 2008-07-31 | Insitu Systems Ltd | Surgical apparatus for enabling establishment of a pneumoperitoneum and for uterus manipulation during a vaginal hysterectomy procedure |
US20070276314A1 (en) * | 2006-05-26 | 2007-11-29 | Becker Bruce B | Nasolacrimal duct probing, intubating and irrigating device |
WO2008008547A2 (en) * | 2006-07-14 | 2008-01-17 | Ams Research Corporation | Balloon dilation for implantable prosthesis |
ITVI20070180A1 (it) | 2007-06-21 | 2008-12-22 | Slavica Slatinac | Dilatatore uterino di tipo monouso |
US8123773B1 (en) * | 2008-09-10 | 2012-02-28 | Utah Medical Products Inc. | Postpartum hemorrhage balloon tamponade catheter |
US8097014B2 (en) * | 2008-09-30 | 2012-01-17 | William D. Borkon | Variable rigidity vaginal dilator and use thereof |
US7951111B2 (en) * | 2008-10-10 | 2011-05-31 | Intervalve, Inc. | Valvuloplasty catheter and methods |
CN105079950A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-11-25 | 北京优尼康通医疗科技有限公司 | 一种新型前列腺扩裂导管 |
WO2019109144A1 (en) | 2017-12-05 | 2019-06-13 | Jenny Colleen Mccloskey | Device for treatment of a body canal and adjacent surfaces |
CN117858739A (zh) * | 2021-08-18 | 2024-04-09 | 属天生命科学有限责任公司 | 子宫颈扩张器 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1282881A (en) * | 1917-07-07 | 1918-10-29 | John T Landis | Pneumatic dilator. |
US1735519A (en) * | 1926-07-17 | 1929-11-12 | Arlyn T Vance | Physician's dilator |
US1690995A (en) * | 1927-12-28 | 1928-11-06 | Monte Lloyd Corp | Anorectal dilator |
GB328598A (en) * | 1929-01-28 | 1930-04-28 | Electro Thermal Company | Improvements in dilators |
US2499045A (en) * | 1948-08-16 | 1950-02-28 | Walker Frank Ray | Rectal dilator and medicator |
US2494393A (en) * | 1949-02-05 | 1950-01-10 | Otis F Lamson | Removable appliance for use as an artificial dam in cases of rectal incontinence |
US2667875A (en) * | 1951-03-30 | 1954-02-02 | American Cystoscope Makers Inc | Inflatable retention catheter |
US3046988A (en) * | 1958-12-01 | 1962-07-31 | Davol Rubber Co | Esophageal nasogastric tube |
US3095871A (en) * | 1960-01-26 | 1963-07-02 | Edward C Mann | Method for determining the condition of the uterine isthmus |
US3480017A (en) * | 1966-04-27 | 1969-11-25 | Wallace B Shute | Cervical dilator |
US3460017A (en) * | 1967-01-16 | 1969-08-05 | Reliance Electric & Eng Co | Solid state trigger for scr |
US3585983A (en) * | 1968-03-05 | 1971-06-22 | Adrian Kantrowitz | Cardiac assisting pump |
US3626949A (en) * | 1969-01-23 | 1971-12-14 | Wallace B Shute | Cervical dilator |
US3848602A (en) * | 1972-04-19 | 1974-11-19 | Gutnick Morton | Abortion facilitating device and process |
US3799170A (en) * | 1972-05-31 | 1974-03-26 | M Walsh | Therapeutic dilator, disposable or reusable |
US3900033A (en) * | 1973-03-07 | 1975-08-19 | Ortho Pharma Corp | Dilator for cervical canal |
US3882852A (en) * | 1974-01-11 | 1975-05-13 | Manfred Sinnreich | Surgical dilators having insufflating means |
-
1973
- 1973-03-07 US US338697A patent/US3900033A/en not_active Expired - Lifetime
-
1974
- 1974-02-28 NL NL7402762A patent/NL7402762A/xx not_active Application Discontinuation
- 1974-02-28 IN IN424/CAL/74A patent/IN139926B/en unknown
- 1974-03-01 GB GB932474A patent/GB1457811A/en not_active Expired
- 1974-03-04 PH PH15571A patent/PH10674A/en unknown
- 1974-03-05 SE SE7402917A patent/SE401319B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-03-06 IL IL44363A patent/IL44363A/en unknown
- 1974-03-06 SU SU2009220A patent/SU535885A3/ru active
- 1974-03-06 FR FR7407632A patent/FR2220284B1/fr not_active Expired
- 1974-03-06 ZA ZA00741466A patent/ZA741466B/xx unknown
- 1974-03-06 IE IE467/74A patent/IE39335B1/xx unknown
- 1974-03-06 NO NO740780A patent/NO134605C/no unknown
- 1974-03-06 CH CH315774A patent/CH562603A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-03-07 BE BE141775A patent/BE812023A/xx unknown
- 1974-03-07 DE DE2410933A patent/DE2410933A1/de active Pending
- 1974-03-07 AR AR252686A patent/AR197859A1/es active
- 1974-03-07 JP JP49025817A patent/JPS49126196A/ja active Pending
- 1974-03-07 BR BR1695/74A patent/BR7401695D0/pt unknown
-
1975
- 1975-05-21 US US05/579,631 patent/US4137922A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL44363A0 (en) | 1974-06-30 |
SE401319B (sv) | 1978-05-02 |
AU6621174A (en) | 1975-09-04 |
JPS49126196A (no) | 1974-12-03 |
IN139926B (no) | 1976-08-21 |
FR2220284A1 (no) | 1974-10-04 |
US4137922A (en) | 1979-02-06 |
IE39335L (en) | 1974-09-07 |
IE39335B1 (en) | 1978-09-13 |
PH10674A (en) | 1977-08-05 |
FR2220284B1 (no) | 1977-09-23 |
NO134605C (no) | 1976-11-17 |
ZA741466B (en) | 1975-10-29 |
SU535885A3 (ru) | 1976-11-15 |
AR197859A1 (es) | 1974-05-10 |
BR7401695D0 (pt) | 1974-12-03 |
DE2410933A1 (de) | 1974-09-12 |
BE812023A (fr) | 1974-09-09 |
CH562603A5 (no) | 1975-06-13 |
IL44363A (en) | 1976-09-30 |
US3900033A (en) | 1975-08-19 |
GB1457811A (en) | 1976-12-08 |
NL7402762A (no) | 1974-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO134605B (no) | ||
US2653899A (en) | Erythromycin, its salts, and method of preparation | |
SU695565A3 (ru) | Способ получени клавулановой кислоты и ее солей | |
NO118145B (no) | ||
NO115429B (no) | ||
DK158739B (da) | Svovlholdige antibiotiske og cytotoxiske forbindelser, betegnet cl-1577d og cl-1577e, fremgangsmaade til fremstilling af disse, samt farmaceutiske praeparater indeholdende forbindelserne | |
CA1079213A (en) | Antibiotic and processes for its manufacture | |
US3065137A (en) | Chalcomycin and its fermentative production | |
US3616208A (en) | Fermentation process for 9-(beta-d-arabinofuranosyl)adenine | |
JPH05504469A (ja) | A83543回収方法 | |
JPS6220984B2 (no) | ||
US3076746A (en) | New antibiotics azalomycin b and f and a process for the production thereof | |
NO123091B (no) | ||
NO127316B (no) | ||
US4335108A (en) | Paulomycin A and B and preparation thereof | |
US2996435A (en) | Process for producing azaserine | |
US3023204A (en) | Viridogrisein, and its fermentative production with griseoviridin | |
US3094461A (en) | Antimicrobial agent m-259 and method of preparation | |
US4296101A (en) | Antibiotic kristenin | |
US3647776A (en) | 1-hydroxy- and acetyloxy-3-(1-hexenylazoxy)-2-butanone | |
US3043830A (en) | Actinobolin and its fermentative production | |
JP3796540B2 (ja) | 黄色色素の製造方法 | |
NO760873L (no) | ||
US3174902A (en) | Griseoviridin | |
US2965547A (en) | Process for the production of l-6-diazo-5-oxonorleucine |