NL9301303A - Werkwijze voor de bereiding van L-fenylalanine methylester en werkwijze voor het daaruit bereiden van alfa-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester. - Google Patents

Description

Korte aanduiding: Werkwijze voor de bereiding van L- fenylalanine methylester en werkwijzevoor het daaruit bereiden van a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voorhet bereiden van L-fenylalanine methylester door het veres-teren van L-fenylalanine met methanol in de aanwezigheidvan een sterk zuur, gevolgd door het isoleren van hetprodukt.

Een dergelijke werkwijze is bekend uit het Amerikaanseoctrooischrift 4680403. Deze bekende werkwijze omvat hetveresteren van L-fenylalanine (hierna ook aangeduid als "L-Phe") met methanol in de aanwezigheid van een katalysatorin de vorm van een sterk zuur, bijvoorbeeld zwavelzuur, hettoevoegen aan de verkregen oplossing van een waterigebasische oplossing om de zure katalysator te neutraliserenen het toevoegen van een met water niet-mengbaar organischoplosmiddel, zoals bijvoorbeeld tolueen, om de aldus berei¬de vrije L-fenylalanine methylester (hierna ook aangeduidals "PM") te extraheren, en het verzamelen van de organi¬sche laag, waarin de PM is opgelost.

Deze werkwijze volgens de stand van de techniek heeftechter een aantal nadelen, zoals bijvoorbeeld een lageopbrengst; omdat water wordt gevormd tijdens het vereste¬ren, is de reactietijd van deze stap lang en wordt eenonzuiver eindprodukt bereid, dat bijvoorbeeld oc,β-L-aspar-tyl-L-fenylalanine dimethylester (hierna ook aangeduid als"α,β-ΜΑΡΜ") als nevenprodukt bevat. Eveneens kan tijdens deneutralisatie van het L-fenylalanine methylester-sterkzuur-zout een aanmerkelijke hydrolyse van de PM niet verme¬den worden en het gebruik van tolueen als extractiemiddelgeeft aanleiding tot milieuverontreiniging als gevolg vande afvoer van tolueen.

De onderhavige uitvinding heeft ten doel een werkwijzevoor de bereiding van PM te verschaffen, die de hierbovengenoemde nadelen niet heeft.

De werkwijze van het hiervoor beschreven type volgensde uitvinding wordt gekenmerk, doordat de werkwijze devolgende stappen omvat: a) het continu verwijderen van het geproduceerde watertijdens de veresteringsreactie van L-fenylalanine om het L-fenylalanine methylester-sterk zuur-zout te bereiden; b) het neutraliseren van genoemd L-fenylalanine methyles-ter-sterk zuur-zout met een methanolische base om eenkristalmengsel van het gewenste produkt te bereiden; c) het filtreren van genoemd verkregen kristalmengsel enhet verdampen van het methanol om L-fenylalanine methyles-ter te vormen.

De werkwijze volgens de uitvinding heeft niet dehiervoor genoemde nadelen van de werkwijze volgens de standvan de techniek, omdat door de continue verwijdering vanhet tijdens de veresteringsstap gevormde water de reac¬tietijd wordt verkort en een hogere opbrengst wordt verkre¬gen. Het gebruik van een methanolische base in de neutrali-satiestap leidt tot een vermindering van de hydrolyse vande PM.

Andere werkwijzen voor de bereiding van PM zijn be¬schreven in de Amerikaanse octrooischriften 3492131 en3833553, welke werkwijzen de stappen omvatten van hetbereiden van een PM.HCl-zout, het neutraliseren van hetPM.HCl-zout in een waterige oplossing en het extraheren vanPM met een met water niet-mengbaar organisch oplosmiddel.Deze werkwijzen hebben eveneens de hierboven vermeldenadelen ten aanzien van reactietijd, zuiverheid en op¬brengst .

In een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens deuitvinding wordt het water in stap a) verwijderd met eenwaterbindend middel. Bij voorkeur is het waterbindendmiddel watervrij CaCl2; andere bekende waterbindende midde¬len zoals watervrij Na2S04, MgS04 enz. zijn echter ookbruikbaar.

In een andere uitvoeringsvorm van de werkwijze volgensde uitvinding wordt het water in stap a) verwijderd doorverdamping.

De reactie-omstandigheden, waaronder de reactie vol¬gens stap a) bij voorkeur wordt uitgevoerd, zijn een tempe¬ratuur van ongeveer 70-90°C en een reactietijd van drieuur.

De hoeveelheden reactanten zijn bij voorkeur zodaniggekozen dat men eerst voor 1 mol L-fenylalanine 200-1000 mlmethanol en 1,0-2,0 mol sterk zuur laat reageren en menvervolgens ongeveer 500-2000 ml methanol continu toevoegten methanol en water daaruit verwijdert.

Onder de hierboven weergegeven reactie-omstandighedenen met de hierboven vermelde hoeveelheden wordt een hogereopbrengst aan PM verkregen en is de reactietijd korter danbij de bekende werkwijzen.

De basische verbinding, die in de methanolische basevoor het neutraliseren van het L-fenylalanine methylester-sterk zuur-zout wordt toegepast, is bij voorkeur gekozenuit de groep, die bestaat uit NaOH, KOH, MgO en CaO. Dezeverbinding is bij voorkeur aanwezig in een hoeveelheid vanongeveer 1-20% in het methanol.

Als katalysator voor het veresteren van L-fenylalaninewordt op voordelige wijze zwavelzuur toegepast.

De uitvinding heeft eveneens betrekking op een werk¬wijze voor het bereiden van α-L-aspartyl-L-fenylalaninemethylester, welke de stappen omvat van: het condenseren van L-fenylalanine methylester en N-formyl-L-aspartylzuuranhydride om een kristalmengsel van N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester te bereiden; het deformyleren van de genoemde verkregen N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester; en het isoleren van α-L-aspartyl-L-fenylalanine methyles¬ter kristallen.

Een dergelijke werkwijze is eveneens bekend uit hethierboven genoemde Amerikaanse octrooischrift 4680403. Dezebekende werkwijze bestaat uit het laten reageren van L-fenylalanine methylester en N-formyl-L-aspartylzuuranhy-dride. Vervolgens wordt de beschermende formylgroep uit deverkregen N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester(hierna ook aangeduid als "α-FAPM") verwijderd en de kris¬ tallen α-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester (hierna ookaangeduid als "a-APM") worden als zout (hierna ook aange¬duid als "a-APM.zout") gewonnen. De opbrengst a-APM.zout¬kristallen is echter laag.

De uitvinding heeft voorts ten doel deze opbrengst teverhogen.

De werkwijze voor het bereiden van a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester volgens de uitvinding wordt geken¬merkt, doordat L-fenylalanine methylester wordt gebruikt,dat bereid is volgens de hierboven beschreven werkwijzevoor het bereiden van L-fenylalanine methylester volgens deuitvinding en dat voorafgaand aan de condensatie opgelostis in een met water niet-mengbaar oplosmiddel, waarbij dedeformylering van de verkregen N-formyl-L-aspartyl-L-fenyl-alanine methylester wordt uitgevoerd onder gebruikmakingvan een geen alcohol bevattende zuuroplossing, terwijlmeerdere kristalporties van a-L-aspartyl-L-fenylalaninemethylester tijdens de isolatie daarvan worden bereid, dieworden gecombineerd. Op deze wijze kan de a-APM met eenhogere opbrengst worden verkregen. De a-APM-kristallenkunnen als zoetstof, het zogenoemde Aspartaam, toegepastworden.

Het Amerikaanse octrooischrift 4684745 openbaart hetgebruik van waterig methanol met HCl om de beschermendegroep te verwijderen, omdat methanol in het reactiemediumde vrije carboxylgroep van het aspartylzuurdeel van de α,β-APM kan aanvallen, wordt 5-10% van de α,β-ΑΡΜ omgezet inα,β-L-aspartyl-L-fenylalanine dimethylester (α,β-ΜΑΡΜ). Dealdus verkregen α,β-ΜΑΡΜ kan niet worden gewonnen, zodathet verloren gaat. De opbrengst- aan gewonnen a-APM.HCLkristallen uit α-FAPM bedraagt zodoende ongeveer 70-80%.

Het Amerikaanse octrooischrift 4071511 openbaart hetgebruik van met water niet-mengbare organische oplosmidde¬len, zoals bijvoorbeeld isopropanol, aceton, acetonitrilenz. om de vorming van α,β-ΜΑΡΜ te vermijden. Echter 10-30%van het α-L-aspartyl-L-fenylalanine (hierna aangeduid als"a-AP"), dat gevormd wordt door hydrolyse van a-APM, kanniet in a-APM omgezet worden als gevolg van de afwezigheid van methanol. De opbrengst aan gewonnen α-APM.HCL-kristal-len uit α-FAPM bedraagt zodoende ongeveer 70%.

Het Amerikaanse octrooischrift 4173562 openbaart hetgebruik van HCl/CH3OH/water om de formylgroep van N-formyl-a-AP te verwijderen om het verkregen a-APM te veresteren ente laten kristalliseren in a-APM.HCL.

Het Amerikaanse octrooischrift 3933781 openbaarteveneens het gebruik van HCI/CH3OH/water om het a-AP tot a-APM te veresteren en het laten kristalliseren van a-APM alsa-APM.HCL.

Bij de werkwijze voor de bereiding van a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester volgens de uitvinding wordt hetverkregen PM eerst opgelost in een met water niet-mengbaaroplosmiddel. Dit oplosmiddel is bij voorkeur gekozen uit degroep die bestaat uit tolueen, benzeen, tetrachloormethaan,chloroform, methyleenchloride en ethylacetaat.

Daarna wordt de condensatiereactie van PM en N-formyl-L-aspartylzuuranhydride uitgevoerd om een kristalmengselvan N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester teverkrijgen.

Vervolgens wordt de beschermende formylgroep uit dezekristallen verwijderd door het uitvoeren van een deformyle-ringsreactie onder gebruikmaking van een geen alcoholbevattende zuuroplossing. Deze laatste oplossing bestaatbij voorkeur uit geconcentreerd chloorwaterstofzuur inwater. Op voordelige wijze wordt de deformylering uitge¬voerd met chloorwaterstof zuur in een hoeveelheid van 35vol.% en een volume/gewichtsverhouding van 0,3-1 en metwater, dat een volume/gewichtsverhouding van 0,3-2 heeft,beide gebaseerd op N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalaninemethylester. De deformyleringsreactie wordt bij voorkeuruitgevoerd bij een temperatuur van 30-90°c.

Tijdens deze werkwijze worden meerdere kristalportiesvan a-APM verkregen, die worden gecombineerd. Op voordeligewijze wordt na de deformylering het isoleren van a-L-aspar-tyl-L-fenylalanine methylester kristallen uitgevoerd door: e) het koelen en filtreren van het verkregen mengsel omeen eerste kristalportie van het gewenste produkt en een eerste filtraat te verkrijgen; f) het concentreren van genoemd eerste filtraat om eengeconcentreerd eerste filtraat te vormen, waarin het gehal¬te a-L-aspartyl-L-fenylalanine 20-40 vol.% bedraagt; g) het toevoegen van geconcentreerd chloorwaterstofzuuren methanol aan genoemd geconcentreerd eerste filtraat omα-L-aspartyl-L-fenylalanine te veresteren om a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester als een tweede kristalportie tebereiden; h) het combineren van de eerste en de tweede kristalpor-ties van α-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester; en i) het neutraliseren met een base en het filtreren van degecombineerde kristalporties om a-L-aspartyl-L-fenylalaninemethylester te bereiden.

Bij voorkeur zijn de concentraties van het toegevoegdemethanol en chloorwaterstofzuur in stap g) 20-30% respec¬tievelijk 5-10% van het uiteindelijke concentraat. Deesterificering volgens stap g) wordt bij voorkeur uitge¬voerd bij een temperatuur van 20-60°C.

Andere doelen en een verder bereik van de toepasbaar¬heid van de onderhavige uitvinding zullen duidelijk wordenuit de gedetailleerde beschrijving, voorbeelden en figuren,die hierna zijn gegeven. Men zal echter begrijpen dat degedetailleerde beschrijving en de specifieke voorbeelden,die op voorkeursuitvoeringsvormen van de uitvinding betrek¬king hebben, slechts gegeven zijn ter verduidelijking,omdat uit deze gedetailleerde beschrijving verschillendeveranderingen en modificaties binnen de uitvindingsgedachteen het bereik van de uitvinding voor de vakman duidelijkzullen zijn.

In de bijgevoegde tekening is fig. la een reactieschema van de bereiding van PMvolgens de uitvinding; fig. lb een reactieschema van de bereiding van a-APM,uitgaande van PM, volgens de uitvinding; fig. 2 geeft de reactievergelijkingen van de tijdensde bereiding van PM respectievelijk a-APM optredende reac¬ties weer; en fig. 3 toont de opbrengst aan PM en de hoeveelheid vanhet resterende water als functie van de reactietijd tijdensde veresteringsstap van L-fenylalanine.

In fig la zijn schematisch de opeenvolgende stappenvoor de bereiding van PM volgens de uitvinding weergegeven,die hieronder worden besproken.

Bij de werkwijze voor de bereiding van PM volgens deonderhavige uitvinding wordt L-Phe (bijvoorbeeld 1 mol)veresterd met bijvoorbeeld 200-1000 ml watervrij methanolen bijvoorbeeld 1-2 mol sterk zuur (reactievergelijking 2van fig. 2) , terwijl de verestering wordt uitgevoerd metcontinue destillatie om het water te verwijderen, dattijdens de esterificering wordt geproduceerd. Derhalvewordt de reactietemperatuur voldoende hoog gehouden, bij¬voorbeeld 70-90°C, en het continu toegevoerde methanol,bijvoorbeeld 500-2000 ml, verwijdert het water, dat tijdensde veresteringsreactie wordt gevormd.

Fig. 3 toont het watergehalte van verdampt methanol,dat gecondenseerd werd, en de PM-opbrengst als functie vande reactietijd, wanneer eerst 1 mol L-fenylalanine, 2 molenH2S04 en 300 ml methanol zijn geladen in een reactor, enmethanol continu toegevoerd wordt aan de reactor, wanneerde reactietemperatuur ongeveer 70-90°C bedraagt.

Een methanolische base, zoals natriumhydroxide opge¬lost in methanol, wordt gebruikt om het PM-sterk zuur-zoutte neutraliseren, gevolgd door het filtreren van het ver¬kregen zout, het verdampen van het methanol en het toevoe¬gen van een met water niet-mengbaar oplosmiddel, zoalstolueen, chloroform, methyleenchloride, ethylacetaat enz.als het reactiemedium voor de daarop volgende condensatie-reactie (reaktievergelijking 3 van fig. 2).

Omdat het zout, dat gevormd is door het gebruik vaneen methanolische base, zoals NaOH, KOH, MgO en Cao prak¬tisch onoplosbaar is in methanol, kan het gemakkelijkworden verwijderd uit de oplossing door filtratie. Daaromis het gewonnen en gedroogde zout voldoende zuiver omgebruikt of verkocht te worden voor andere doeleinden.Tijdens de neutralisatie van het zout PM.H2S04 is de hydro¬ lyse van PM verwaarloosbaar en de opbrengst uit L-fenylala-nine is nagenoeg stoechiometrisch. Ter vergelijking geefthet gebruik van een waterige base volgens de stand van detechniek, zoals een natriumcarbonaatoplossing, om het PM-sterk zuur-zout te neutraliseren 3-7% hydrolyse van PM.

Vanwege de verwijdering van het water, dat geprodu¬ceerd wordt tijdens de verestering, wordt de reactietijdverlaagd en de PM wordt in een verhoogde opbrengst gevormd.Bij de onderhavige uitvinding wordt het met water niet-mengbare oplosmiddel eveneens gebruikt als het reactiemedi-um voor de condensatiereactie, terwijl in de stand van detechniek het oplosmiddel wordt gebruikt als een extractie¬middel .

De condensatiereactie (reaktievergelijking 3 van fig.2) kan worden uitgevoerd onder gebruikmaking van gebruike¬lijke werkwijzen, zoals met met water niet-mengbare oplos¬middelen, die een organisch zuur bevatten, bijvoorbeeldazijnzuur, mierezuur enz. om N-formyl-a-aspartyl-L-fenyla-lanine methylester te bereiden.

Het N-formyl-L-aspartylzuuranhydride kan op gebruike¬lijke wijze bereid worden uit L-aspartylzuur, mierezuur enazijnzuuranhydride (vergelijking 1 van fig. 2).

. De werkwijze voor de bereiding van a-APM.HCL (zie ookfig. lb) omvat verder de stappen van het verwijderen van deformylgroep uit het α-FAPM (reaktievergelijking 4 van fig.2) in HC1 (ongeveer 5,5 N)/water bij een temperatuur vanongeveer 30-90°C, bij voorkeur ongeveer 45-60°C gedurendeongeveer 30 minuten, het koelen van het medium om de' ge¬vormde a-APM.HCL te kristalliseren, het filtreren en winnenvan de kristallen (vergelijking 5 van fig. 2) . Bij dezestap wordt de formylgroep van α-FAPM volledig verwijderd.Omdat het chloorwaterstofzuur het gevormde a-APM gedeelte¬lijk kan hydrolyseren tot a-AP (reaktievergelijking 5 vanfig. 2) met ongeveer 30%, bevat de moedervloeistof α-AP nahet winnen van a-APM.HCL.

De onderhavige uitvinding geeft ook een nieuwe werk¬wijze voor het opwerken van a-AP, welke omvat het concen¬treren van de moedervloeistof om een uiteindelijke concen¬ tratie van α-ΑΡ van 20-30% te geven, het toevoegen vanmethanol en chloorwaterstofzuur (reaktievergelijking 6 vanfig. 2) om een eindconcentratie van 20-30% respectievelijk5-10% te geven om het a-AP in a-APM om te zetten en hetkristalliseren van het a-APM als a-APM.HCL. De reactiewordt uitgevoerd bij 20-60°C gedurende 1-3 uur.

De verkregen a-APM.HCl-kristallen kunnen met een NaOH-oplossing geneutraliseerd (reactievergelijking 7 van fig.2)worden, vervolgens gefiltreerd en gedroogd om de zuivere a-APM-kristallen te winnen. Uit de na de tweede kristallisa¬tie van a-APM.HCL-kristallen resterende moedervloeistof ende na de neutralisatie met de NaOH-oplossing, gefiltreerdemoedervloeistof kunnen desgewenst de uitgangsstoffen, L-Pheen L-aspartylzuur, met behulp van hydrolyse met een zuuropnieuw verkregen worden.

De instelling van de concentratie van a-AP is zeerbelangrijk, omdat als deze te laag is de werkzaamheid vande reactie wordt verlaagd, terwijl als deze te hoog is eenaanmerkelijke nevenreactie kan plaatsvinden. De hoeveelheidtoe te voegen methanol is eveneens belangrijk, omdat het devorming van a-MAPM kan beïnvloeden. Zodoende wordt deopbrengst uit α-FAPM aanzienlijk verhoogd tot een waardevan 85-89%.

De onderhavige uitvinding zal nu in meer detail wordenbeschreven aan de hand van de volgende voorbeelden, dieslechts bedoeld zijn ter verduidelijking en niet ter beper¬king van de onderhavige uitvinding.

VOORBEELD 1

Aan een suspensie van 165 gr (1,0 mol) L-fenylalaninein 500 ml ch3oh worden lil ml van geconcentreerd H2S04(97%, 2,0 mol) langzaam toegevoegd, terwijl de temperatuurvan de oplossing op 30-40°C wordt gehouden. Daarna wordt deoplossing verwarmd tot 84-86°C. Aan de oplossing worden1200 ml CH30H toegevoegd gedurende 3 uur, terwijl 1250 mlverdampt, waterig CH30H wordt verwijderd uit de reactor. Deopbrengst van het verkregen PM.H2S04 bedraagt 99,8%, geba¬seerd op L-fenylalanine, zoals weergegeven is in de volgen¬de tabel I.

TABEL I

PM OPBRENGST (%)

De bereide PM.H2S04-oplossing wordt geneutraliseerd met10%1 s methanolisch NaOH om Na2S04-kristallen te vormen. Degeneutraliseerde oplossing wordt daarna gefiltreerd enverdampt om het CH3OH te verwijderen. Aan het concentraatwordt 760 ml tolueen toegevoegd om het PM in oplossing tebrengen, waarna het resterende methanol wordt verwijderddoor verdamping. Het uiteindelijke PM.tolueen wordt geana¬lyseerd met HPLC. De opbrengst aan PM bedraagt 98,7%,gebaseerd op de PM.H2S04-oplossing.

VOORBEELD 2

Aan 113 g L-aspartyIzmir (1,0 mol) worden 84,5 g van98%'s HCOOH and 298,8 g van 97%'s azijnzuuranhydride toege¬voegd om te reageren bij 45-50°C gedurende ongeveer 3,5uur. De opbrengst van het gevormde N-formyl-L-aspartylzuur-anhydride bedraagt 98,8%. Daarvan worden 45 ml verdampt bij40-45°c onder een druk van 100 torr. Aan de oplossingworden 30 ml azijnzuur en 100 ml tolueen toegevoegd om eensuspensie te vormen. 940 Ml PM.tolueen-oplossing, die 179 gPM bevat, die zoals in voorbeeld 1 bereid is, wordt drup¬pelsgewijs toegevoegd aan de suspensie, die op een reactie-temperatuur van 25-30°C wordt gehouden gedurende 30 minutenen vervolgens geroerd gedurende 30 minuten. De verkregenoplossing wordt verwarmd tot 40°C en geroerd gedurende nogeens 30 minuten. De opbrengst aan α-FAPM bedraagt 82,8% endie van β-FAPM bedraagt 13,4%, sodat een Λ/β-verhouding van6,2 wordt verkregen.

VOORBEELD 3 1000 Ml PM.tolueen-oplossing die 179 g PM bevat, wordtdruppelsgewijs toegevoegd aan de suspensie, die in voor¬beeld 2 is bereid, en vervolgens geroerd gedurende 1 uurbij ongeveer 25-35°C. De opbrengst aan α-FAPM bedraagt84,4% en de verkregen α/β-verhouding bedraagt 5,53.

VOORBEELD 4

Aan de suspensie van α,β-FAPM, die 1 mol α,β-isomeer(α,β=5) bevat, worden 250 ml geconcentreerd HC1 en 140 mlwater toegevoegd en de verkregen oplossing wordt gedurende45 minuten bij 45°C geroerd. De oplossing wordt daarnaafgekoeld tot 5°C en gedurende 5 uur geroerd. Het aldus ge¬vormde α-APM.HCL wordt gefiltreerd en gewonnen. De op¬brengst aan α-APM.HCl.2H20 bedraagt 70% (197,7 g) , geba¬ seerd op α-FAPM. De moedervloeistof wordt geconcentreerdtot 240 ml. Daarna worden 64 ml methanol en 20 ml geconcen¬treerd chloorwaterstofzuur aan het concentraat toegevoegd.De oplossing wordt geroerd gedurende 1 uur bij 45-50°C envervolgens gekoeld tot 5°C en gedurende 2 dagen geroerd. Dealdus gevormde kristallen worden gefiltreerd en gewonnen.De totale opbrengst aan α-APM.HCl.2H20 bedraagt 88,8%(271,2 g) gebaseerd op a-FAPM.

Het zal duidelijk zijn dat de zo beschreven uitvindingop vele wijzen gevarieerd kan worden. Dergelijke verande¬ringen moeten niet als een afwijking van de uitvindingsge-dachte of het bereik van de uitvinding beschouwd worden, enalle modificaties, die voor de vakman voor de hand liggen,zijn bedoeld om binnen het bereik van de volgende conclu¬sies te liggen.

Claims (18)

1. Werkwijze voor het bereiden van L-fenylalanine methyl-ester door het veresteren van L-fenylalanine met methanolin de aanwezigheid van een sterk zuur, gevolgd door hetisoleren van het produkt, met het kenmerk dat de werkwijzede volgende stappen omvat: a) het continu verwijderen van het geproduceerde watertijdens de veresteringsreactie van L-fenylalinine om het L-fenylalanine methylester-sterk zuur-zout te bereiden; b) het neutraliseren van genoemd L-fenylalanine methyles¬ter-sterk zuur-zout met een methanolische base om eenkristalmengsel van het gewenste produkt te bereiden; c) het filtreren van genoemd verkregen kristalmengsel enhet verdampen van het methanol om L-fenylalanine methyles-ter te vormen,

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk dat hetwater in stap a) wordt verwijderd met een waterbindendmiddel.

3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk dat hetwaterbindend middel watervrij CaCl2 is.

4. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk dat hetwater in stap a) door verdamping wordt verwijderd.

5. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk dat genoemde reactie volgens stap a) wordt uitgevoerd bij eentemperatuur van ongeveer 70-90° c.

6. Werkwijze volgens conclusie 5, met het kenmerk dat genoemde reactie volgens stap a) gedurende drie uur wordtuitgevoerd.

7. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk dat meneerst voor 1 mol genoemd L-fenylalanine 200-1000 ml ge¬ noemd methanol en 1,0-2,0 mol genoemd sterk zuur laatreageren en men vervolgens ongeveer 500-2000 ml methanolcontinu toevoegt en methanol en water daaruit verwijdert.

8. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk dat debasische verbinding in genoemde methanolische base volgensstap b) is gekozen uit de groep, die bestaat uit NaOH, KOH,MgO en CaO.

9. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk dat debasische verbinding in de methanolische base aanwezig is ineen hoeveelheid van ongeveer 1-20% in het methanol.

10. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk datgenoemd sterk zuur zwavelzuur is.

11. Werkwijze voor het bereiden van a-L-aspartyl-L-fenyl-alanine methylester, welke de stappen omvat van: het condenseren van L-fenylalanine methylester en N-formyl-L-aspartylzuuranhydride om een kristalmengsel van N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester te bereiden; het deformyleren van de genoemde verkregen N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester; en het isoleren van α-L-aspartyl-L-fenylalanine methyles¬ter kristallen, met het kenmerk dat L-fenylalanine methyl¬ester wordt gebruikt, dat bereid is volgens de werkwijzeovereenkomstig één van de conclusies 1-10 en dat vooraf¬gaand aan de condensatie opgelost is in een met water niet-mengbaar oplosmiddel, waarbij de deformylering van de ge¬noemde verkregen N-formyl-L-aspartyl-L-fenylalanine methyl¬ester wordt uitgevoerd onder gebruikmaking van een geenalcohol bevattende zuuroplossing, terwijl meerdere kristal-porties van α-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester tijdensde isolatie daarvan worden bereid, die worden gecombineerd.

12. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk datgenoemd met water niet-mengbaar oplosmiddel is gekozen uit de groep, die bestaat uit tolueen, benzeen, tetrachloride-methaan, chloroform, methyleenchloride en ethylacetaat.

13. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk datgenoemde geen alcohol bevattende zuuroplossing een oplos¬sing is van geconcentreerd chloorwaterstofzuur in water.

14. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk datgenoemde deformylering bij een temperatuur van 30-90°Cwordt uitgevoerd.

15. Werkwijze volgens conclusie 13, met het kenmerk datgenoemde deformylering wordt uitgevoerd met chloorwater-stofzuur in een hoeveelheid van 35 vol.% en een volume/ge-wichtsverhouding van 0,3-1 en het genoemde water een volu-me/gewichtsverhouding van 0,3-2 heeft, gebaseerd op N-formyl-a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester.

16. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk dat nade deformylering het isoleren van a-L-aspartyl-L-fenylala-nine methylester kristallen wordt uitgevoerd door: e) het koelen en filtreren van het verkregen mengsel omeen eerste kristalportie van het gewenste produkt en eeneerste filtraat te verkrijgen; f) het concentreren van genoemd eerste filtraat om eengeconcentreerd eerste filtraat te vormen, waarin het gehal¬te α-L-aspartyl-L-fenylalanine 20-40 vol.% bedraagt; g) het toevoegen van geconcentreerd chloorwaterstofzuur enmethanol aan genoemd geconcentreerd eerste filtraat om a-L-aspartyl-L-fenylalanine te veresteren om a-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester als een tweede kristalportie tebereiden; h) het combineren van genoemde eerste en genoemde tweedekristalporties van α-L-aspartyl-L-fenylalanine methylester;en i) het neutraliseren met een base en het filtreren van degecombineerde kristalporties om α-L-aspartyl-L-fenylalaninemethylester te bereiden.

17. Werkwijze volgens conclusie 16, met het kenmerk dat deconcentraties van genoemd toegevoegd methanol en chloorwa-terstofzuur in stap g) 20-30% respectievelijk 5-10% van hetuiteindelijke concentraat bedragen.

18. Werkwijze volgens conclusie 16, met het kenmerk datgenoemde verestering volgens stap g) bij een temperatuurvan 20-60°C wordt uitgevoerd.