NL8802595A - Derivaten van monofosforyl-lipide a en werkwijze voor de bereiding daarvan. - Google Patents
Derivaten van monofosforyl-lipide a en werkwijze voor de bereiding daarvan. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8802595A NL8802595A NL8802595A NL8802595A NL8802595A NL 8802595 A NL8802595 A NL 8802595A NL 8802595 A NL8802595 A NL 8802595A NL 8802595 A NL8802595 A NL 8802595A NL 8802595 A NL8802595 A NL 8802595A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- group
- mpl
- lipid
- acid
- formula
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 96
- -1 3- (2-pyridyldithio) propionyl) group Chemical group 0.000 claims description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 12
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 10
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 8
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 5
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 5
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011149 active material Substances 0.000 claims description 4
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N chloro formate Chemical compound ClOC=O FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 1
- XMJHPCRAQCTCFT-UHFFFAOYSA-N methyl chloroformate Chemical compound COC(Cl)=O XMJHPCRAQCTCFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 36
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 9
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 8
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 5
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 4
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 230000000091 immunopotentiator Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- QQWYQAQQADNEIC-UHFFFAOYSA-N tert-butyl [[cyano(phenyl)methylidene]amino] carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)ON=C(C#N)C1=CC=CC=C1 QQWYQAQQADNEIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SOZNVTRORYUXFD-NPIQVXMPSA-N [1-[[(2r,3r,4r,5r)-5,6-dihydroxy-1-oxo-4-phosphonooxy-3-tetradecanoyloxyhexan-2-yl]amino]-1-oxotetradecan-3-yl] tetradecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CCCCCCCCCCC)CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@H]([C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC SOZNVTRORYUXFD-NPIQVXMPSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNIVFXCKHNRSRL-VKHMYHEASA-N Hydroxyglutamic acid Chemical compound ON[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NNIVFXCKHNRSRL-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000012461 cellulose resin Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N glucosamine group Chemical group OC1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000015286 negative regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- NFBAXHOPROOJAW-UHFFFAOYSA-N phenindione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C1C1=CC=CC=C1 NFBAXHOPROOJAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000280 phenindione Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000015323 positive regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- RINCXYDBBGOEEQ-UHFFFAOYSA-N succinic anhydride Chemical class O=C1CCC(=O)O1 RINCXYDBBGOEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
- C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
- C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
- C07H13/06—Fatty acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/05—Immunological preparations stimulating the reticulo-endothelial system, e.g. against cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
·£ * - Derivaten van monofosforyl-lipide A en werkwijze voor de bereiding daarvan -
De uitvinding heeft in het algemeen betrekking op bepaalde nieuwe derivaten van monofosforyl-lipide A.
Volgens een aspect heeft de uitvinding betrekking op nieuwe deriva-vaten van monofosforyl-lipide A met één of meer al dan niet ge-5 substitueerde aminogroepen. Volgens een ander aspect heeft de uitvinding betrekking op nieuwe derivaten die conjugaten van monofosforyl-lipide A met bepaalde biologisch actieve stoffen zijn.
Volgens nog een ander aspect heeft de uitvinding betrekking op werkwijzen voor de bereiding en toepassing van de derivaten volgens 10 de uitvinding.
Er zijn talrijke literatuurplaatsen waarin melding wordt gemaakt van de reactie van lipopolysaccharïde (LPS) met cyclische anhydriden, in het bijzonder ftaalzuur- en barnsteenzuur-anhydride. Met uitzondering van een literatuurplaats is echter 15 geen melding gemaakt van het combineren van monofosforyl-lipide A (MPL) met deze of andere anhydriden.
In een artikel van A. Hasegawa, et al, J.
Carbohydrate Chem. 5 : 371 is de covalente koppeling beschreven van muramyldipeptide (MDP) met een derivaat van lipide A overeenkomend 20 met de niet-reducerende glucosaminerest. Dit lipide A derivaat, aangeduid met GLA-27, werd geblokkeerd aan zowel het fosfaat als aan alle andere potentieel reactieve plaatsen, behalve de hydroxyl-groep waaraan men wilde koppelen ( de primaire hydroxylgroep aan C6). De in deze literatuurplaats toegepaste koppelingsstrategie 25 behelsde het introduceren van een vrije carboxylgroep in GLA-27 aan C6 via barnsteenzuuranhydride en een vrij amine in MDP, en daarna het vormen van een amidebinding tussen deze twee groepen. Een belangrijk verschil tussen deze literatuurplaats en de onderhavige uitvinding is dat in de genoemde literatuurplaats het lipide A-30 derivaat volledig geblokkeerd moest worden teneinde nevenreacties tijdens de condensatie ( dat is de vorming van de amidebinding) te vermijden . De onderhavige uitvinding vermijdt deze moeilijkheid door introductie van een vrije aminogroep in MPL . Het koppelen van MPL met andere componenten wordt vervolgens teweeg gebracht onder 35 .8802595 - 2 - * toepassing van reagentia welke specifiek met aminen reageren (bijvoorbeeld aldehyden), of door activering van een geschikte groep op de andere component voorafgaand aan het combineren met amino-MPL.
De acylering van lipopolysacchariden 5 door cyclische anhydriden heeft waarschijnlijk plaats in het 0- antigeen en kerngebieden die in monofosforyl-lipide A afwezig zijn.
De acylering van LPS in de bekende literatuurplaatsen had tot doel de toxiciteit ervan te verminderen, en niet om een functionele groep te introduceren teneinde covalente conjugaten met andere 10 stoffen te vormen.
De uitvinding heeft tot doel bepaalde nieuwe derivaten van monofosforyl-lipide A en een werkwijze voor de bereiding daarvan te verschaffen. De uitvinding heeft voorts tot doel een nieuwe werkwijze te verschaffen voor de bereiding van 15 derivaten van monofosforyl-lipide A waarbij functionele groepen niet geblokkeerd behoeven te worden teneinde de gewenste groepen in het molecuul in te voeren.
Voorts heeft de uitvinding tot doel nieuwe derivaten te verschaffen die conjugaten van monofosforyl-lipide A 20 met biologisch actieve stoffen zoals antigenen, antilichamen, immuno-modulatoren en dergelijke zijn. Een ander doel is het verschaffen van nieuwe conjugaten van de derivaten met biologische verbindingen zoals antigenen , die een verhoogde biologische activiteit vertonen.
Voorts heeft de uitvinding tot doel een 25 werkwijze te verschaffen voor de bereiding van derivaten van mono-fosforyl-lipide A in betrekkelijk zuivere vorm en nagenoeg zonder ongewenste nevenprodukten.
Voorts heeft de uitvinding tot doel methoden voor de toepassing van de conjugaten te verschaffen, 3Q De uitvinding heeft in de ruimste zin betrekking op bepaalde nieuwe derivaten van monofosforyl-lipide A, bepaalde tussenprodukten, een werkwijze voor de bereiding ervan en de toepassing ervan . De nieuwe derivaten worden weergegeven door de formule t van bijgaand formuleblad, waarin Z en R en de cirkel 35 de hierna gedefinieerde betekenis hebben.
Deze derivaten worden op conventionele wijze • & 8 0 2 5 9 5 *
A
- 3 - bereid door reactie van monofosforyl-lipide A met een verbinding die een groep of groepen bevat welke geneigd is (zijn) om een bindingsvormende reactie te ondergaan met een in MPL aanwezige groep of groepen. De toepassing van een verbinding die geactiveerd 5 is voorafgaand aan de reactie met MPL vermijdt de noodzaak om eerst beschermende groepen in het MPL-molecuul te introduceren.
Monofosforyl-lipide A ( MPL) is een fosforbevattende polyheterocyclische verbinding met alifatische ester- en amidegroepen met lange keten, en wordt verkregen als een endotoxisch extract uit Enterobacteriaciae. De verbinding, ook aangeduid als "MPL" , wordt bereid op een wijze zoals beschreven in de Amerikaanse octrooischriften 4.436.727 en 4.436.728 , welke hier bij referentie zijn opgenomen. Endotoxineextracten van het type dat gebruikt wordt als de uitgangsstof voor de bereiding van 15 MPL kunnen worden verkregen uit alle Enterobacteriaciae met inbegrip van ouderorganismen en mutanten. De bovengenoemde octrooischriften beschrijven de typen microorganismen die gebruikt kunnen worden voor het verkrijgen van de uitgangsstof , en verscheidene werkwijzen voor de bereiding van de uitgangsstof. MPL 20 kan ook worden bereid met synthetische en genetische manipulatie- methoden. De voorkeursmethode van dit ogenblik voor het verkrijgen van het endotoxische extract is die welke beschreven is door Chen, et al, J, Infect. Dis. 128 543 (1973).
MPL heeft als kenmerken dat het geen detec-25 teerbaar 2-keto-3-deoxyoctanoaat heeft, tussen ongeveer 350 en 475 nmol/mg fosfor en tussen ongeveer 1700 en 2000 nmol/mg vetzuren bevat. Hoewel de werkwijze voor de bereiding van gezuiverd , van vergiftigde stoffen ontdaan endotoxine (MPL) in het boven genoemde Amerikaanse octrooischrift 4.436.727 werd beschreven, was 50 de chemische structuur op dat tijdstip niet volledig bekend en was het derhalve noodzakelijk MPL als een met een bepaalde werkwijze verkregen produkt te beschrijven. De volledige structuur van de hexaacylvorm van MPL, verkregen uit lipopolysacchariden van Salmonella minnesota R595 is thans bekend en is weergegeven door de 55 structuurformule 11.
MPL is een belangrijke verbetering ten opzichte van endotoxische extracten uit Enterobacteriaciae, omdat • 8802595 * 4 - 4 - MPL van vergiftige stoffen ontdaan is en derhalve niet de zeer toxische bestanddelen bevat welke endotoxische extracten ongeschikt voor therapeutische toepassing hebben gemaakt.(Zie Peptides as Requirements for Immunotherapy of Guinea Pig Line-10 Tumor with 5 Endotoxins, Ribi, et al, Cancer Immunol. Immunother., Vol. 7, p. 43-58, 1979). De gunstige effecten van MPL ten opzichte van andere endotoxische extracten zijn bijvoorbeeld beschreven in de Amerikaanse octrooischriften 4.436.727 en 4.436.728 en in Ribi, E., Journal of Biological Response Modifiers, Vol. 3, 10 p. 1-9, 1984. Vanwege het feit dat monofosforyl-lipide A niet- toxisch is, heeft het recent toepassing gevonden als een toevoegsel voor vaccins , en in andere farmaceutische preparaten die bruikbaar zijn bij de behandeling van verschillende aandoeningen zoals kanker-tumoren bij warmbloedige dieren en dergelijke.
15 De doeltreffendheid van MPL als een adjuvans voor bepaalde antigenen kan worden verhoogd door MPL direkt aan deze antigenen te koppelen. Bovendien kunnen covalente conjugaten bestaande uit MPL en andere'immunologisch potentierende verbindingen biologische activiteiten vertonen welke versterkt 20 zijn ten opzichte van die van de vrije (niet-gêconjugeerde bestand delen.
Traditionele methoden voor het vormen van covalente conjugaten kunnen worden verdeeld in twee kategorieën, afhankelijk van het feit of de moleculen worden geactiveerd met 25 betrekking tot de koppeling voordat ze worden gemengd,of dat ze in situ worden geactiveerd nadat ze zijn gemengd. Geen van beide benaderingen is geschikt met niet- gemodificeerd MPL wegens de structurele configuratie daarvan. De eerste benadering behelst bijvoorbeeld de introductie van een groep in één van de moleculen 30 die gemakkelijk reageert met een slechts in het tweede molecuul
aanwezige groep, zoals een amino- of sulfhydrylgroep. Deze benadering is niet geschikt met niet-gemodificeerd MPL aangezien dit geen functionele groepen bevat die kunnen worden geactiveerd of die zullen reageren met groepen welke eerder zijn geactiveerd 35 op andere moleculen . De tweede benadering werkt evenmin met MPL
aangezien onder de algemeen gebruikte omstandigheden voor in situ activering, MPL de neiging heeft met zichzelf te reageren, wat tot .8802595
P
* - 5 - een aantal ongewenste nevenprodukten leidt en de opbrengst van het gewenste conjugaat sterk vermindert of geheel teniet doet.
Een geschikte functionele groep zoals een primair amine kan echter worden ingebouwd in MPL met de 5 werkwijze volgens de uitvinding; hierdoor wordt het mogelijk normale koppelingsmethoden te gebruiken teneinde andere stoffen aan het verkregen gemodificeerde MPL vast te maken.
De functionele groepen die MPL bevat, zijn een primaire hydroxylgroep aan C-6’, 3 tot 6 secundaire 10 hydroxylgroepen en éln fosfaatgroep aan C-4’. Ter vereenvoudiging van de reacties die optreden bij de werkwijze volgens de uitvinding wordt het monofosforyl-lipide A molecuul weergegeven met de formule 2, waarin de bovenste hydroxylgroep de enkele primaire hydroxylgroep voorstelt ,. de onderste hydroxylgroep 15 een representatieve secundaire hydroxylgroep voorstelt, OPO^I^ de fosfaatgroep voorstelt, en de cirkel de rest van het monofosforyl-lipide A molecuul voorstelt.
Zoals hierboven is aangegeven worden de derivaten volgens de uitvinding weergegeven door de formule 1, 20 waarin Z waterstof of de groep
Y—< A
voorstelt, R een tweewaardige groep bestaande uit koolstof, waterstof en eventueel één of meer zuurstof-, stikstof- of 25 zwavelatomen voorstelt en 2 tot 60 koolstofatomen, bij voorkeur 2 tot 20 koolstofatomen bevat, A een tweewaardige koppelgroep voorstelt die R kan koppelen aan Y via tenminste 2 onafhankelijke functionele groepen, waarbij A 2 tot 60 koolstofatomen en eventueel één of meer zuurstof-, stikstof- of zwavelatomen 3Q bevat, Y een biologisch actief materiaal voorstelt, zoals anti- genen, antilichamen, immunomodulatoren en dergelijke, en n 0 of 1 is.
Eén uitvoeringsvorm van de uitvinding heeft betrekking op derivaten met de algemene formule 1 waarin 25 Z waterstof is. Deze monofosforyl-lipide A derivaten bevatten een esterzijketen welke vastzit aan het koolstofatoom van lipide A dat de primaire hydroxylgroep droeg (dat is het C-6' koolstofatoom).
.8802595 's - 6 -
De verbindingen kunnen worden weergegeven door de formule 3, waarin R een groep bestaande uit koolstof, waterstof en eventueel zuurstof, stikstof en/of zwavel voorstelt, en 2 tot 60 koolstofatomen, bij voorkeur 2 tot 20 koolstofatomen, bevat.
^ In het algemeen kan elk type functionele groep in MPL of verwante stoffen worden geïntroduceerd met de werkwijze volgens de uitvinding, mits de functionele groep een gedeelte is van een molecuul dat een carboxylgroep bevat of een soortgelijke groep welke kan worden geactiveerd met het jq oog op de vorming van de esterbinding voorafgaand aan de combinatie met MPL. Functionele groepen die met deze werkwijze kunnen worden geïntroduceerd omvatten, maar zijn niet beperkt tot, aminen, thiolen, aldehyden, carboxylen, N-hydroxy-imidoesters, iminoesters , arylaziden, maleimiden, pyridyldisulfiden en 15 actieve halogenen.
Dit vereiste van activering voordat met MPL kan worden gecombineerd is zeer belangrijk wegens de talrijke nevenreacties welke kunnen optreden als MPL direkt aan activerende omstandigheden wordt blootgesteld. Een voorbeeld van deze 20 benadering met voorafgaande activering is de reactie van MPL met barnstee-^nzuuranhydride, welke leidt tot de introductie van een vrije carboxylgroep in MPL. Zo kunnen derivaten zoals die met formule 4, waarin R, van formule 3 eindigt in een vrije carboxylgroep en via de estergroep aan het MPL-molecuul vastzit door 25 middel van een alifatische, aromatische of heterocyclische groep, worden bereid volgens de werkwijze van de uitvinding.
Het kan eventueel nodig zijn voorafgaand aan de activeringsstap bepaalde functionele groepen te blokkeren in het molecuul dat in MPL geïntroduceerd moet worden. Bij 30 de introductie van een aminogroep in MPL met de werkwijze volgens de uitvinding is het bijvoorbeeld nodig het amine van een geschikt aminozuur te blokkeren voorafgaand aan de activering van de carboxylgroep voor de vorming van de esterbinding. In het bovengenoemde voorbeeld met barnsteenzuuranhydride wordt voldaan 35 aan de vereisten van blokkeren en voorafgaand activeren door de vorming van het cyclische anhydride . Geschikte methoden voor het aanbrengen en verwijderen van blokkerende groepen zijn algemeen in de techniek bekend. Zie bijvoorbeeld Theodora W. Green, '8802595 Λ » - 7 - "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons,
New York, 1981 , p. 349.
Voorkeursverbindingen die met de werkwijze volgens de uitvinding kunnen worden bereid zijn de 5 aminen en gesubstitueerde aminen die kunnen worden weergegeven door de formule 5, waarin Rg een tweewaardige keten voorstelt die koolstof , waterstof en eventueel zuurstof, stikstof en/of zwavel bevat; en R^ en R£ afzonderlijk waterstof of een lage alkyl-groep voorstellen , of één van de symbolen R^ of R^ de rest van 10 een organisch substraat of drager met inbegrip van liposomen, of een biologisch materiaal zoals een antigeen, immunomodulator, antilichaam en dergelijke , kan voorstellen.
Verbindingen met formule 5 die in het bijzonder de voorkeur hebben, zijn die verbindingen waarin 15 en R2 waterstof zijn en Rg een tweewaardige groep met 2 tot 60, bij voorkeur 2 tot 20 koolstofatomen, is en bestaat uit koolstof, waterstof en eventueel zuurstof, stikstof en/of zwavel.
Tot deze derivaten behoren die verbindingen waarin Rg een rechte of vertakte koolwaterstofketen is, en polypeptiden met één of 20 meer terugkerende amidegroepen, zoals derivaten van MPL met di- en tripeptiden van glycine. Tot deze derivaten behoren die verbindingen waarin een aminozuur is geïntroduceerd in MPL op de C-6'-plaats , wat derhalve leidt tot MPL-derivaten met een zijketen welke eindigt in een primair amine. Tot de 25 kenmerkende verbindingen van dit type behoren verbindingen met for mule 6, waarin x 1 tot ongeveer 20 of meer kan zijn.
Een voorbeeld van een dergelijke verbinding is de ester van 6-aminocapronzuur wanneer x 5 is. Deze verbinding wordt aangeduid als CAP-MPL en de synthese daarvan wordt vermeld in de Voorbeelden 30 ι-m.
Een andere belangwekkende verbinding is het derivaat waarin MPL is veresterd aan het vrije carboxyleinde van peptiden bestaande uit glycine of verwante f( -aminozuren.
De verbinding met formule 7 bestaat bijvoorbeeld uit MPL, 35 veresterd aan een tripeptide van glycine.
Bijgevolg kan een verscheidenheid aan derivaten van MPL worden bereid uit bekende aminozuren. Andere .&80Z595 - 8 - 4 aminozuren die in het MPL-molecuul kunnen worden geïntroduceerd met de werkwijze volgens de uitvinding zijn bijvoorbeeld glycine, alanine, serine, threonine, methionine, valine, norvaline, ^ leucine, isoleucine, fenylalanine, tyrosine, crysteine, aspazagine- zuur, glutaminezuur, hydroxyglutaminezuur, arginine, lysine, cystine, histidine, proline, hydroxyproline, tryptofaan, asparagine en glutamine. Geschikte methoden voor het aanbrengen en verwijderen van blokkerende groepen die algemeen in de techniek bekend zijn jq kunnen desvereist worden gebruikt bij het bevestigen van deze aminozuren of combinaties daarvan aan MPL m& de werkwijze volgens de uitvinding.
Derivaten van MPL waarin een primaire amino-groep is geïntroduceerd met de werkwijze volgens de uitvinding ^ kunnen verder worden gemodificeerd tot een vorm welke doelmatig kan worden gekoppeld aan andere belangwekkende verbindingen, zoals antigenen, antilichamen en immunomodulatoren. Dergelijke MPL-derivaten hebben de algemene formule 8, waarin en R^ de hierboven beschreven betekenis hebben, R£ een groep bestaande uit 2q koolstof, waterstof en eventueel zuurstof, stikstof en/of zwavel voorstelt, en 1 tot 60 koolstofatomen, bij voorkeur 1 tot 20 koolstof atomen bevat, en R^ een groep voorstelt die een covalente binding kan vormen, ofwel selectief met aminen of sulfydrylen of niet-selectief met een grote verscheidenheid aan groepen, en die bestaat uit koolstof, waterstof, stikstof, zuurstof en/of zwavel. De met aangegeven groep stelt bijvoorbeeld N-succinimidylsuberoyl, 6-(4f-azido-2'-nitrofenyl)-hexanoyl, 3—(2— pyridyldithio)propionyl en m-maleimidobenzoyl voor. Voorbeeld IV beschrijft de bereiding van de verbinding SSC-MPL met formule 12, waarin N-succinimidylsuberoyl voorstelt , en R^ en E^ overeen komen met de in formule 8 gegeven betekenis met x = 5.
Daarna wordt het derivaat bestaande uit MPL met een koppelgroep welke vastzit aan MPL via een aminegroep, zoals SSC-MPL , verder tot reactie gebracht met een peptide 25 dat een primaire aminegroep bevat onder vorming van een conjugaat met formule 13.
De werkwijze volgens de uitvinding, zoals hierna beschreven, verschaft een unieke methode voor de introductie .8802595 ή - 9 - van een of meer nieuwe functionele groepen in monofosforyl-lipide A en verwante verbindingen. Deze functionele groepen kunnen een aanknopingspunt verschaffen voor de covalente koppeling van MPL en verwante verbindingen aan andere belangwekkende stoffen.
5 De werkwijze bestaat uit de volgende stappen: (1) onafhankelijk blokkeren van de andere functionele groep(en) van een geschikt carbonzuur, indien nodig; (2) activeren van de vrije carboxylgroep 10 van de geblokkeerde verbinding met het oog op de vorming van de esterbinding; (3) tot reactie brengen van het geactiveerde zuur met monofosforyl-lipide A ; en (4) verwijderen van de blokkerende 1-5 grcepaivan het verkregen MPL-derivaat, indien nodig. De werkwijze volgens de uitvinding kan worden toegelicht met de in reactieschema A weergegeven reeks reacties, waarin een amino- MPL-derivaat van het type met formule 4 wordt bereid. In deze reeks stelt t-BOC-0N t-butoxycarbonyloxyimino-2-fenylacetonitril voor.
20 Hoewel t-B0C-0N in reactieschema A als het blokkeermiddel in stap (1) wordt gebruikt , kunnen andere middelen eveneens worden toegepast. Kenmerkende blokkeermiddelen zijn bijvoorbeeld benzylchloorformiaat, 9-fluorenylmethylchloor-formiaat en 2,2,2-trichloormethylchloorformiaat, maar zijn daartoe 25 niet beperkt.
Het blokkeren van aminozuren of andere verbindingen wordt teweeg gebracht in een geschikt oplosmiddel zoals water, ethanol of dioxan, en bij temperaturen van ongeveer 0 tot ongeveer 30°C , afhankelijk van de aard van het blokkeermiddel.
30 Het activeren van het geblokkeerde zuur in stap (2) onder vorming van het anhydride kan worden bewerkstelligd met behulp van een verbinding zoals dicyclohexylcarbcdiimide of andere verbindingen zoals 1-ethyl-3~(3-dimethylaminopropyl)carbo-diimide en ethylchloorformiaat. Deze stap wordt uitgevoerd in 35 aanwezigheid van een inert oplosmiddel zoals chloroform of dichloor- methaan en bij een temperatuur van ongeveer 0 tot 30°C , afhankelijk van het reagens dat wordt gebruikt.
8802595 - 10 - 3
De reactie van het anhydride met MPL in de derde stap wordt teweeg gebracht in een oplosmiddelmengsel, zoals pyridine:chloroform involumeverhouding 1:1 en bij een temperatuur van ongeveer 0 tot ongeveer 30°C.
5 Het verwijderen van de blokkerende groep van het aminozuur of van andere verbindingen die in het MPL-molecuul zijn geïntroduceerd, kan worden teweeg gebracht met een geschikt reagens zoals trifluorazijnzuur of waterstofchloride (gas) in een geschikt oplosmiddel bij een temperatuur van ongeveer 10 -15°C tot ongeveer 0°C.
Zoals hierboven besproken is, is de werkwijze volgens deze uitvoeringsvorm van de uitvinding bijzonder bruikbaar en verschaft een unieke methode voor de introductie van vrije aminogroepen in monofosforyl-lipide A en verwante verbindingen 15 wanneer andere functionele groepen de direkte toepassing van standaard koppelingsmiddelen zoals carbodiimiden verhinderen. MPL bevat bijvoorbeeld een fosfaatgroep, een primaire hydroxylgroep en verscheidene secundaire hydroxylgroepen. In aanwezigheid van carbodiimiden of andere condenseermiddelen treden nevenreacties op 20 die leiden tot fosforzuuranhydriden, fosfaatesters en andere stoffen. De werkwijze volgens de uitvinding vermijdt dergelijke nevenreacties en verschaft bijgevolg een werkwijze voor het bereiden van de gewenste derivaten in betrekkelijk zuivere vorm.
In een andere uitvoeringsvorm heeft de 25 uitvinding betrekking op derivaten van monofosforyl-lipide A , waarin een koppelingsmiddel is bevestigd aan de verbinding met formule 3 ter verkrijging van een derivaat met de formule 9, waarin R de hierboven gedefinieerde betekenis heeft, en A een koppelgroep voorstelt waaraan de Y-groep kan worden bevestigd 30 zoals hierboven is aangegeven.
Illustratieve A-groepen die bij de uitvinding kunnen worden gebruikt zijn bijvoorbeeld de N-succinimidylsuberoyl-groep, de 6-(4,-azido-2'-nitrofenyl)-hexanoylgroep, de 3-(2-pyridyl-dithio)propionyl)groep , de m-maleimidobenzoylgroep, en dergelijke, 35 maar zijn daartoe niet beperkt.
De reactie van de koppelingsmiddelen met de verbindingen met de formule 3 kan worden teweeg gebracht met .&B02M5 η* - 11 - bekende methoden en de bepaalde keuze van omstandigheden zal variëren al naar de gebruikte reactanten.
Volgens een andere uitvoeringsvorm van de uitvinding worden derivaten van monofosforyl-lipide A verschaft 5 die bestaan uit de verbinding met formule 3, gekoppeld via de tweewaardige A-groepen aan biologisch actieve materialen.
Deze derivaten, die hierna ook worden aangeduid als "conjugaten" kunnen worden weergegeven met de formule 10, waarin A en R de hierboven gedefinieerde betekenis hebben en Y een biologisch 10 actief materiaal voorstelt. Dergelijke verbindingen combineren in één molecuul de eigenschappen van zowel het biologische materiaal als het monofosforyl-lipide A.
Illustratieve biologische materialen die aan het MPL-derivaat met formule 3 kunnen worden gekoppeld via een 15 koppelingsmiddel, zijn bijvoorbeeld , zonder dat dit als een bewerking moet worden beschouwd: immunopotentiatoren, zoals tuftsine, muramyldipeptide, celwandskelet, trehalosedimycolaat en dergelijke; cytokines, zoals interleukines , interferonen, granulocyt-monocyt activerende factor , tumornecrosefactor en der-20 gelijke; antigenen zoals die welke verband houden met infectieziekten; tumor-specifieke antilichamen; membranen zoals fosfolipide membranen, met inbegrip van structuren die deel uitmaken van membranen, zoals liposomen, en dragers, zoals latex-korrels, dextran, celluloseharsen en dergelijke.
25 De hierboven en in de voorbeelden genoemde immunopotentiator tuftsine is de verbinding L-threonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-arginine . De farmacologisch aanvaardbare zouten en derivaten en bepaalde optische isomeren daarvan zijn bruikbaar voor de stimulering of remming van fagocytose of pincytose in 30 zoogdieren. Andere therapeutisch bruikbare niet-antigene polypepti- den zijn bijvoorbeeld: L-thr-L-lys-L-pro-L-arg-L-thr-L-lys-L-pro-L-arg, D-thr-L-lys-L-pro-D-arg-D-thr-L-lys-L-pro-D-arg, D-thr-L-lys-L-pro-L-arg-L-thr-L-lys-L-pro-D-arg en farmacologisch aanvaardbare zouten en 35 derivaten daarvan.
De koppeling van de biologisch actieve component aan het MPL-derivaat met formule 9 kan met bekende in de .8802595 Λ '4 - 12 - literatuur vermelde reacties worden teweeg gebracht. In sommige gevallen , afhankelijk van de functionele groepen op de R-rest, kan men de biologisch actieve component Y direkt koppelen aan R, en in een dergelijk geval is n in de formule 10 0.
Zoals hierboven is aangegeven , is mono-fosforyl-lipide A een immunostimulans en kan het , wanneer het gekoppeld is /aan andere verbindingen met gewenste biologische eigenschappen, aan dergelijke verbindingen een sterkere biologische activiteit geven. De doeltreffendheid van MPL als een 10 ...
adjuvans voor antigenen kan bijvoorbeeld worden versterkt wanneer het antigeen wordt gekoppeld aan MPL onder toepassing van de derivaten volgens de uitvinding. Deze conjugaten kunnen worden gebruikt als sterkere immunopotentierende verbindingen, betere adjuvantia voor betrekkelijk niet-immunogene antigenen , en 15 . .
als hulpmiddelen voor immunologisch onderzoek. De conjugaten met de eerder gegeven formule zijn bijgevolg bruikbaar bij de detectie van verschillende biologische componenten welke aanwezig zijn in lichaamsvloeistoffen zoals bloed en urine, en ook bij biologisch onderzoek. Conjugaten, zoals die van monofosforyl-lipide A met 20 immunopotentiatoren of cytokines kunnen worden gebruikt bij de stimulering van specifieke en niet-specifieke immunoresponsen. Conjugaten waarin antilichamen zijn gekoppeld aan MPL zijn bruikbaar bij de stimulering van een specifieke immunorespons, bij affiniteitschromatografie, immunologische bepalingen, cellulaire 25 .
adsorptie op vaste dragers en dergelijke. Conjugaten waarin antigenen zijn gekoppeld aan MPL zijn eveneens bruikbaar bij de stimulering van een specifieke immunorespons. MPL kan ook worden geconjugeerd met dragers ten gebruike bij biologisch onderzoek.
^ Voorbeeld I
Synthese van N-t-butoxycarbonyl-6-aminocapronzuuranhydride (t-BOC-CAP-anhydride) N-t-Butoxycarbonyl-6-aminocapronzuur (t-BOC-25 CAP) werd bereid uit t-butoxycarbonyloxyimino-2-fenylacetonitril (BOC-ON) en 6-aminocapronzuur , volgens de werkwijze van W.J. Paleveda, F.W. Holly, D.F. Veber, Organic Syntheses 63^ , 8802595 - 13 -
171 (1984) . 100 mg (4,32 x 10 ^ mol) van het verkregen t-BOC-CAP
werd omgezet tot het anhydride door behandeling met 50 mg (2,42 x -4 10 mol) dicyclohexylcarbodiimide in droge CHCl^· Na de gebruikelijke opwerkmethoden en herkristallisatie uit diethylether/hexaan 5 werd 76 mg t-BOC-CAP-anhydride verkregen. (IR - 3480, 1821, -1 1 1751, 1719 cm ; H-NMR - geen carboxylproton).
Voorbeeld II
Synthese van (N-t-butoxycarbonyl-6-aminocaproyl)-monofosforyl-lipide 10 A (t-BOC- CAP-MPL)
Aan een 100 ml rondbodemkolf werd 410 mg -4 (ongeveer 2,7x10 mol) monofosforyl-lipide A,opgelost in chloroformrmethanol in volumeverhouding 4:1 , toegevoegd . Het oplosmiddel werd verwijderd door flitsverdamping,en de inhoud van de kolf werd gedurende de nacht gevriesdroogd ter verwijdering van de laatste sporen oplosmiddel en vocht. Aan het gedroogde -4 residu werd 171 mg t-BOC-CAP-anhydride (3,84x10 mol) en 12 ml van zowel chloroform als pyridine , die beide over 4A moleculaire zeef waren gedroogd, toegevoegd. Het reactiemengsel werd onder 20 stikstof geroerd. De voortgang van de reactie werd gevolgd met dunnelaagehromatografie (TLC) op silicagel 60 TLC-platen (EM) , onder toepassing van een oplosmiddelsysteem bestaande uit chloroform: methanol:water:ammoniumhydroxyde in volumeverhouding 50:31:6:2.
De ontwikkelde TLC-platen werden zichtbaar gemaakt door besproeiing 25 met 7% fosfomolybdaat in ethanol gevolgd door verhitting bij 150°C. De reactie leek volledig te zijn na de eerste 24 uur.
De reactie werd gestopt na 52 uur door toevoeging van 30 ml 0,10 M
Na2C0^ ( pH 10) en krachtig roeren gedurende 30 min. Het mengsel werd vervolgens overgebracht in een scheidtrechter, 12 ml 30 chloroform en 12 ml methanol werden toegevoegd en de scheidtrechter werd geschud. De organische fase werd verwijderd en de waterfase werd opnieuw geextraheerd met nog een portie chloroform:methanol in volumeverhouding 2:1. De organische fasen werden gecombineerd en uitgewassen met 1N HC1 tot een zure pH in de waterfase werd 35 verkregen (210 ml nodig). De organische fase werd 1 maal gewassen met water en daarna onderworpen aan flitsverdamping en volledig gedroogd in een vriesdroger. Het gewicht van het verkregen residu » *802595 i * - 14 - was 491 mg.
Voorbeeld III
Omzetting van t-BOC-CAP-MPL in CAP-MPL
468 mg t-BOC-CAP-MPL werd in een 50 ml rondbodemkolf gedroogd met behulp van een vriesdroger ter verwijdering van de laatste sporen oplosmiddel en vocht. De kolf werd vervolgens voorzien van een magnetische roerstaaf en geplaatst in een droogijs/ethyleenglycolbad (~15°C) . Aan de kolf werd 20 ml -1 n υ koud trifluorazijnzuur (TFA) toegevoegd dat tevoren was gedroogd door vacuumdestillatie vanaf (destillatiekolf op -15°C, opvangkolf op-77°C). De reactieoplossing werd 20 min krachtig geroerd , waarna het TFA door destillatie werd verwijderd.
De laatste sporen TFA werden verwijderd met chloroform, wat leidde IR ...
1 tot 450 mg van een glasachtig roodbruin residu.
Het ruwe produktmengsel werd gefractioneerd door ionenuitwisselende chromatografie op een 2,5 x 20 cm kolom DEAE-cellulose in de acetaatvorm (Indion HA-3). Na opbrengen van 447 mg ruw CAP-MPL werd de kolom gespoeld met 220 ml chloroform: 20 methanol m volumeverhouding 4:1 en 220 ml chloroform:methanol: water in volumeverhouding 2:3:1 , en vervolgens geelueerd met een lineaire zoutgradiënt bestaande uit 900 ml chloroform:methanol:water
in volumeverhouding 2:3:1 tegen 900 ml chloroform:methanol:0,2 M
ammoniumacetaat in volumeverhouding 2:3:1 . In totaal werd 25 312 mg monogesubstitueerd CAP-MPL verkregen bij de 4:1 en 2:3:1 voorlopen. Nog eens 116 mg materiaal , voornamelijk overeenkomend met onomgezet MPL , werd tijdens de elutie met de zoutgradient verkregen.
Een verdere fractionering van CAP-MPL 30 in afzonderlijke componenten werd uitgevoerd op silicagel (BioSil HA) onder toepassing van een lineaire gradiënt van 1000 ml chloroform tegen 1000 ml chloroform:methanol:water in volumeverhouding 590:400:10. De fracties die overeenkwamen met het hexaacylhomoloog van CAP-MPL werden verzameld en onderworpen aan een verdere 35 . . . . , zuivering op 500 jim silicagel H preparatieve TLC-platen (Analtech) onder toepassing van chloroform:methanol:water:ammoniumhydroxyde in volumeverhouding 50:31:6:2 als de ontwikkelvloeistof. Het .8802595 - 15 - massaspectrum van het verkregen gezuiverde hexaacyl-CAP-MPL vertoonde een enkele component met een m/e van 1830, wat overeenkomt met de verwachte massa voor hexaacyl-MPL gecombineerd met een 6-aminocaproylgroep.
5
Voorbeeld IV
Synthese van (N-succinimidylsuberoyl)-CAP-MPL (SSC-MPL)
In een 4 ml flesje met schroefdop werd 14,8mg _6 hexaacyl-CAP-HPL (8,09x10 mol) geplaatst . Aan het flesje werd 10 1,0 ral droge chloroform toegevoegd welke over 4 A moleculaire zeef was bewaard. Aan de chloroformoplossing van CAP-MPL werd 12,6 mg di-(N-succinimidyl)-suberaat (Pierce Chemical Co.; 3,23x10 ^ mol) toegevoegd, gevolgd door 1,0 ml pyridine ( 4A zeef) en een magneet-vlo. Het flesje werd stevig dichtgedraaid en vervolgens verscheidene 15 uren geroerd bij kamertemperatuur ( 24°C) tot aan de hand van TLC geoordeeld werd dat de reactie volledig was. (Het produkt verplaatst zich met een van ongeveer 0,49 onder de in Voorbeeld II gegeven TLC-omstandigheden.)Hierna werd alle oplosmiddel verwijderd door flitsverdamping, onder toepassing van een afzuigpomp 20 ter verwijdering van de chloroform en een vacuumpomp ter verwijdering van de pyridine. De temperatuur werd steeds beneden 40°C gehouden.
Het verkregen residu werd overgebracht in een 30 ml Corex-buis met behulp van een minimale hoeveelheid chloroform, en produkt werd neergeslagen door toevoegen van 20 ml aceton terwijl geschud 25 werd op een vortex. Het precipitaat werd in pelletvorm gebracht door 20 min te centrifugeren bij 12000x g. Het pellet werd gesuspendeerd in 20 ml aceton en daarna opnieuw gecentrifugeerd gedurende 20 min bij 12000 x g. De pelletfractie gaf, na verdamping van de laatste sporen oplosmiddel, 10,7 mg produkt.
30 (IR—1780 (zw), 1810 (zw) cm S TLC - R^ = 0,49 op silicagel 60 onder toepassing van chloroform:methanolrwater:ammoniumhydroxyde in volumeverhouding 50:31:6:2) .
Voorbeeld V
35 Koppelen van SSC-MPL aan tuftsine (Thr-Lys-Pro-Arg) 10,1 mg Gedeeltelijk gezuiverd SSC- MPL werd gedroogd in een 5 ml rondbodemkolf , waarbij een dunne, heldere
____S
« 8802595 9 i - 16 - film werd verkregen. 16,7 mg Tuftsine (Sigma ; 3,34 x 10 ^ mol ) werd opgelost in 1,37 ml 100 cm Hepes-buffer bij pH 7,85 , welke was bereid door de vrije zuurvorm van Hepes (Sigma) te titreren met triethylamine. De totale hoeveelheid van de tuftsine-5 oplossing in water werd toegevoegd aan de kolf tezamen met een magnetische roerstaaf van 10x3 mm , waarna de oplossing gedurende de nacht krachtig werd geroerd. De oplossing werd af en toe onderworpen aan een korte (ca. 10 sec.) sonic ering in een ultrasoon bad om het verbreken van de SSC-MPL-film te vergemakkelijken.
10 Na 24 uur werd de oplossing overgebracht in een dialysezakje (doorlaatgrens - moleculairgewicht 6000-8000) en uitputtend gedia-lyseerd tegen gedestilleerd water. Het verkregm dialysaat werd gevriesdroogd, waardoor tenslotte 12,3 mg van een wit poeder werd verkregen. (TLC-R^ = 0,12 , 0,21 ( hoofdprodukt) en 0,45 15 (nevenprodukt) op silicagel 60, ontwikkeld met chloroform:methanol: water in verhouding 65:25:4. SSC-MPL verplaatst zich met een R^ = 0,53 in dit TLC-systeem).
Het ruwe produktmengsel werd gefractioneerd met behulp van preparatieve TLC op 500 ^im silicagel H preparatievè 20 platen (Analtech) onder toepassing van het 50:31:6:2 oplosmiddel- systeem om de platen te ontwikkelen. De banden werden zichtbaar gemaakt door achterop vallend licht en de produkten werden met standaardmethoden verkregen. Twee betrekkelijk zuivere produktbanden werden gewonnen, overeenkomend met = 0,12 (2,3 mg) 25 en = 0,21 ( 4,5 mg ) in het 65:25:4 TLC-systeem.
Voorbeeld VI
Synthese van succinoyl-MPL
Aan een 2,0 ml flesje met schroefdop werd 30 een oplossing van 29 mg (1,68 x 10 mol) hexaacyl-MPL in chloroform:methanol in volumeverhouding 4:1 toegevoegd. Alle oplosmiddel werd verdampt en de laatste sporen werden verwijderd op een vriesdroger. 3,4 mg ( 3,36 x 10 ^ mol ) barnsteenzuuranhydride werd afgewogen in het flesje en een magnetische vlo werd toegevoegd, 35 gevolgd door 0,2 ml chloroform en 0,2 ml pyridine welke gedroogd c 8802595 * - 17 - waren door bewaren over 4 A moleculaire zeven. De oplossing werd 5 uur geroerd en daarna overgebracht in een 15 ml Corex centrifugebuis en afgeschrikt door roeren met 1,0 ml 0,1 M Na^CO^ (pH 10,0) gedurende 30 min. 2 ml Chloroform en 1 ml methanol ^ werden aan het afgeschrikte reactiemengsel toegevoegd, en dit werd 10 min gecentrifugeerd met 3000 omw/min om fasescheiding te verkrijgen. De organische laag werd vervolgens 2 maal met IN HC1 , en 1 maal met water uitgewassen , en vervolgens onder een stikstofstroom ingedampt onder verkrijging van 27,4 mg van een ^ glasachtig residu. Blijkens silicagel TLC (zie Voorbeeld II) bestond dit materiaal uit 50 % mono-succinyl-MPL,20% di-succinyl-MPL en 30% onomgezet MPL.
‘8802595
Claims (6)
1. Monofosforyl-lipide A derivaat , gekenmerkt door de formule 1 , waarin : R een tweewaardige groep bestaande uit koolstof, waterstof en eventueel één of meer zuurstof-, stikstof-5 of zwavelatomen voorstelt en 2 tot 60 koolstofatomen bevat , Z waterstof of Y —£ A )— voorstelt, n waarin A een tweewaardige koppelgroep voorstelt die R kan koppelen aan Y via tenminste twee onafhankelijke functio-10 nele groepen, waarbij A 2 tot 60 koolstofatomen en eventueel één of meer zuurstof-, stikstof- of zwavelatomen bevat, Y een waterstofatoom of een biologisch actief materiaal voorstelt, n 0 of 1 is, en de cirkel een monofos-15 foryl-lipide A kern, met inbegrip van de hexaacylvorm van mono fosforyl-lipide A met formule 11, voorstelt.
2. Derivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R de rest van een dicarbonzuur of een aminozuur met tenminste een vrije aminogroep is en het aminozuur glycine, alanine, 20 serine, methionine, 6-aminocapronzuur of tyrosine is.
3. Derivaat volgens conclusie 1 , met het kenmerk, dat het de formule 9 heeft, waarin A 2 tot 60 koolstof-atomen en eventueel één of meer zuurstof-, stikstof- of zwavelatomen bevat en in het bijzonder waarin A een N-succinimidylsuberoyl- 25 groep , of een 6-(4,-azido-2'-nitrofenyl)-hexanoylgroep, of een 3- (2-pyridyldithio)propionyl)-groep , of een m-maleimidobenzoylgroep is en R de gedefinieerde betekenis heeft.
4. Derivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat Ύ een organisch of anorganisch substraat is zoals 30 latexkorrels of een membraan of een biologisch materiaal uit de groep van immunomodulatoren , antilichamen of antigenen.
5. Werkwijze voor de bereiding van een monofosforyl-lipide A derivaat , met het kenmerk, dat men achtereenvolgens ‘8802595 £ % -19 - 1. de aminogroep van een aminozuur blokkeert met een amine-blokkerend middel, 2. het geblokkeerde aminozuur activeert door het geblokkeerde aminozuur om te zetten in het overeenkomstige zuuranhydride, 3. het zuuranhydride laat reageren met monofosforyl-lipide A , 4. de blokkerende groepen van de aminegroe- pen verwijdert met een geschikt reagens, en 10 . 5. het monofosforyl-lipide A derivaat wint.
6. Werkwijze volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat het amine-blokkerende middel t-butoxycarbonyl- oxyimino-2-fenylacetonitriet, benzylchloorformiaat, 9-fluorenyl-15 methylchloorformiaat of 2,2,2-trrchloormethylchloorformiaat is, en het middel voor het verwijderen van de blokkerende groepai tri-fluorazijnzuur of waterstofchloride is, en het aminozuur glycine, alanine, serine, methionine, 6-aminocapronzuur of tyrosine is. 20 -0-0-0- 8802595
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/112,742 US4987237A (en) | 1983-08-26 | 1987-10-22 | Derivatives of monophosphoryl lipid A |
| US11274287 | 1987-10-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8802595A true NL8802595A (nl) | 1989-05-16 |
Family
ID=22345625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8802595A NL8802595A (nl) | 1987-10-22 | 1988-10-21 | Derivaten van monofosforyl-lipide a en werkwijze voor de bereiding daarvan. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4987237A (nl) |
| JP (1) | JPH01146891A (nl) |
| BE (1) | BE1003250A5 (nl) |
| CA (1) | CA1308711C (nl) |
| CH (1) | CH676715A5 (nl) |
| DE (1) | DE3836006C2 (nl) |
| FR (1) | FR2622192A1 (nl) |
| GB (1) | GB2211502B (nl) |
| IT (1) | IT1230592B (nl) |
| NL (1) | NL8802595A (nl) |
Families Citing this family (55)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5158939A (en) * | 1989-07-21 | 1992-10-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of stimulating the immune systems of animals and compositions useful therefor |
| AU651949B2 (en) * | 1989-07-14 | 1994-08-11 | American Cyanamid Company | Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines |
| US5498708A (en) * | 1989-07-18 | 1996-03-12 | Montefiore Medical Center | Method of synthesizing polyesters |
| EP0482206A4 (en) * | 1990-04-12 | 1992-08-19 | Japan Tobacco Inc. | 4,6-o-hydroxyphosphorylglucosamine derivative |
| US5653974A (en) * | 1990-10-18 | 1997-08-05 | Board Of Regents,The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
| US5164375A (en) * | 1991-09-27 | 1992-11-17 | Merck & Company, Inc. | Antifungal agent |
| US5648343A (en) * | 1994-02-28 | 1997-07-15 | The University Of Georgia Research Foundation | Method for treating LPS-mediated disorders |
| US6218166B1 (en) | 1994-12-09 | 2001-04-17 | John Wayne Cancer Institute | Adjuvant incorporation into antigen carrying cells: compositions and methods |
| US5750664A (en) * | 1995-06-05 | 1998-05-12 | Eisai Co., Ltd. | Substituted liposaccharides useful in the treatment and prevention of endotoxemia |
| US6290971B1 (en) * | 1995-06-15 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Adjuvant compositions comprising a mineral salt and another immunostimulating compound |
| GB9706957D0 (en) * | 1997-04-05 | 1997-05-21 | Smithkline Beecham Plc | Formulation |
| GB9820525D0 (en) * | 1998-09-21 | 1998-11-11 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| GB0000891D0 (en) | 2000-01-14 | 2000-03-08 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| US20040002068A1 (en) | 2000-03-01 | 2004-01-01 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies |
| US20030139356A1 (en) * | 2001-05-18 | 2003-07-24 | Persing David H. | Prophylactic and therapeutic treatment of infectious and other diseases with mono- and disaccharide-based compounds |
| EP1284740B1 (en) | 2000-05-19 | 2008-05-21 | Corixa Corporation | Prophylactic and therapeutic treatment of infectious, autoimmune and allergic diseases with monosaccharide-based compounds |
| US20030138769A1 (en) * | 2000-08-16 | 2003-07-24 | Birkett Ashley J. | Immunogenic HBc chimer particles having enhanced stability |
| US7361352B2 (en) * | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
| US20030175863A1 (en) * | 2001-08-15 | 2003-09-18 | Birkett Ashley J. | Influenza immunogen and vaccine |
| US20030185858A1 (en) * | 2001-08-15 | 2003-10-02 | Birkett Ashley J. | Immunogenic HBc chimer particles stabilized with an N-terminal cysteine |
| US6911434B2 (en) * | 2002-02-04 | 2005-06-28 | Corixa Corporation | Prophylactic and therapeutic treatment of infectious and other diseases with immunoeffector compounds |
| KR100885008B1 (ko) * | 2002-02-04 | 2009-02-20 | 코릭사 코포레이션 | 신규 면역효과기 화합물 |
| US20040033213A1 (en) * | 2002-02-28 | 2004-02-19 | Corixa Corporation | Methods of modulating dendritic cells using adjuvants |
| US20030224013A1 (en) * | 2002-04-19 | 2003-12-04 | Cole Garry T. | Methods for protection against Coccidioides spp. infection using Coccidioides spp. urea amidohydrolase (Ure) protein |
| PL220778B1 (pl) | 2002-07-08 | 2016-01-29 | Corixa Corp | Sposoby wytwarzania 4-fosforanu aminoalkiloglukozaminidu oraz związki pośrednie |
| HUE026376T2 (en) | 2003-01-06 | 2016-05-30 | Corixa Corp | Certain aminoalkyl glucosamide phosphate compounds and their use |
| US7960522B2 (en) | 2003-01-06 | 2011-06-14 | Corixa Corporation | Certain aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use |
| EP1449535B1 (en) * | 2003-02-18 | 2006-05-03 | Clinique La Prairie Research SA | Compositions comprising fetal hemoglobin and bacterial endotoxin and optionally additional fetal liver components |
| EP1835935A4 (en) * | 2004-12-30 | 2009-06-17 | Univ Rockefeller | COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVED DENDRITIC CELL REPRODUCTION AND FUNCTION |
| US20060210590A1 (en) | 2005-02-03 | 2006-09-21 | Alk-Abello A/S | Minor allergen control to increase safety of immunotherapy |
| US7622128B2 (en) * | 2005-12-13 | 2009-11-24 | University Of Washington | Porphyromonas gingivalis 1435/1449 LPS as an immune modulator |
| EP2468300B1 (en) | 2006-09-26 | 2017-12-20 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| US20090181078A1 (en) * | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| MX2010001284A (es) * | 2007-08-02 | 2010-08-31 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd | Vacunas contra la influenza con multiepitope multimerico. |
| US20090215710A1 (en) * | 2007-09-24 | 2009-08-27 | Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. | Carbohydrate based toll-like receptor (tlr) antagonists |
| US20090215908A1 (en) * | 2007-09-24 | 2009-08-27 | Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. | Toll like receptor (tlr) signaling antagonist |
| AU2008331800A1 (en) | 2007-12-03 | 2009-06-11 | President And Fellows Of Harvard College | Chlamydia antigens |
| CN102481312B (zh) | 2009-06-05 | 2015-07-15 | 传染性疾病研究院 | 合成的吡喃葡萄糖脂佐剂 |
| CN103517713A (zh) | 2011-02-22 | 2014-01-15 | 彼昂德瓦克斯医药有限公司 | 在改善的季节性和大流行性流感疫苗中的多聚体多表位多肽 |
| EA027236B1 (ru) | 2011-04-08 | 2017-07-31 | Иммьюн Дизайн Корп. | Иммуногенные композиции и способы применения таких композиций для индукции гуморального и клеточного иммунного ответа |
| GB201106802D0 (en) | 2011-04-21 | 2011-06-01 | Allergy Therapeutics Ltd | Process for preparing vaccine composition |
| EP3388835B1 (en) | 2012-05-16 | 2020-04-01 | Immune Design Corp. | Vaccines for hsv-2 |
| CA2900008A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Children's Medical Center Corporation | Protein antigens that provide protection against pneumococcal colonization and/or disease |
| US10166279B2 (en) | 2013-02-20 | 2019-01-01 | Bergen Teknologioverføring | Vaccine |
| CN105209047B (zh) | 2013-04-18 | 2020-08-18 | 免疫设计股份有限公司 | 用于癌症治疗的gla单一疗法 |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| EP3632458A1 (en) | 2013-07-26 | 2020-04-08 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of bacterial infections |
| WO2016180852A1 (en) | 2015-05-12 | 2016-11-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for preparing antigen-specific t cells from an umbilical cord blood sample |
| JP2020533354A (ja) | 2017-09-13 | 2020-11-19 | サノフィ・パスツールＳａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒ | ヒトサイトメガロウイルス免疫原性組成物 |
| WO2019175145A1 (en) | 2018-03-12 | 2019-09-19 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vaccines against urinary tract infections |
| US20220249644A1 (en) | 2018-08-24 | 2022-08-11 | Vestlandets Innovasjonsselskap As (Vis) | Heat-Stable Enterotoxins Mutants as Antidiarrheal Vaccine Antigens |
| KR20220107166A (ko) | 2019-10-02 | 2022-08-02 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 스타필로코커스 펩티드 및 사용 방법 |
| CN115038461A (zh) | 2020-01-16 | 2022-09-09 | 杨森制药公司 | FimH突变体、其组合物及其用途 |
| WO2022153166A1 (en) | 2021-01-12 | 2022-07-21 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Fimh mutants, compositions therewith and use thereof |
| CA3215752A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Production of e. coli o18 bioconjugates |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0414725Y2 (nl) * | 1980-09-30 | 1992-04-02 | ||
| US4436727A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| US4436728A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| JPS62129293A (ja) * | 1985-11-28 | 1987-06-11 | Toho Yakuhin Kogyo Kk | 親水性のリピドａ単糖類縁体 |
| JPS62195396A (ja) * | 1986-02-20 | 1987-08-28 | Toho Yakuhin Kogyo Kk | 親水性及び疎水性の基を置換したりピドａ単糖類縁体 |
-
1987
- 1987-10-22 US US07/112,742 patent/US4987237A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-10-14 CA CA000580545A patent/CA1308711C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-18 GB GB8824330A patent/GB2211502B/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-20 BE BE8801207A patent/BE1003250A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1988-10-21 IT IT8822399A patent/IT1230592B/it active
- 1988-10-21 CH CH3921/88A patent/CH676715A5/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-21 NL NL8802595A patent/NL8802595A/nl active Search and Examination
- 1988-10-21 DE DE3836006A patent/DE3836006C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-21 FR FR8813812A patent/FR2622192A1/fr active Granted
- 1988-10-22 JP JP63265285A patent/JPH01146891A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH075623B1 (nl) | 1995-01-25 |
| GB2211502A (en) | 1989-07-05 |
| GB8824330D0 (en) | 1988-11-23 |
| JPH01146891A (ja) | 1989-06-08 |
| DE3836006A1 (de) | 1989-05-03 |
| CH676715A5 (nl) | 1991-02-28 |
| DE3836006C2 (de) | 1996-07-11 |
| GB2211502B (en) | 1992-02-19 |
| US4987237A (en) | 1991-01-22 |
| BE1003250A5 (fr) | 1992-02-11 |
| IT1230592B (it) | 1991-10-28 |
| IT8822399A0 (it) | 1988-10-21 |
| CA1308711C (en) | 1992-10-13 |
| FR2622192A1 (fr) | 1989-04-28 |
| FR2622192B1 (nl) | 1994-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NL8802595A (nl) | Derivaten van monofosforyl-lipide a en werkwijze voor de bereiding daarvan. | |
| Berndt et al. | Synthetic lipidation of peptides and amino acids: monolayer structure and properties. | |
| US4216208A (en) | N-Acyl derivatives of glucosamines having antitumor chemotherapeutic activity | |
| IE914567A1 (en) | Acid-labile linker molecules | |
| KR950007923B1 (ko) | 활성 카보닐 그룹을 갖는 시알산 유도체 | |
| US5869606A (en) | Amino acids peptides or derivatives thereof coupled to fats | |
| WO2001016211A1 (fr) | Compose amphipathique a structure dendritique | |
| EP0232693A2 (fr) | Conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant | |
| EP0004512A1 (fr) | Composés esters de muramyl-peptide et leurs applications dans les compositions pharmaceutiques et réactifs de laboratoire | |
| JP3821305B2 (ja) | 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン | |
| HU182011B (en) | Process for producing new antigene derivatives and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0037388B1 (fr) | Formes pharmaceutiques, leur préparation et les compositions qui les contiennent | |
| JPH0371440B2 (nl) | ||
| JP4226324B2 (ja) | カルボン酸型脂質 | |
| JPH11124396A (ja) | 樹状ポリペプチド | |
| GB1562734A (en) | N - acetylmuramyl - d - alanyl - d - isoglutamine | |
| BE882541A (fr) | Nouvelles formes pharmaceutiques leur preparation et les compositions qui les contiennent | |
| EP0047197B1 (fr) | Nouveaux polymères de lysine utilisables comme supports pour la préparation de produits de diagnostic et produits obtenus | |
| WO2001007469A2 (en) | Polypeptide dendrimers as unimolecular carriers of diagnostic imaging contrast agents, bioactive substances and drugs | |
| JP2007527864A (ja) | 自然に起こる化学的連結による、多官能化ペプチドおよび／またはタンパク質の調製方法 | |
| GB2185486A (en) | Conjugate of alpha-melanotropin with p-L-sarcolysine (melphalan) | |
| EP2350120B1 (en) | Multiligand constructs | |
| CH619470A5 (en) | Process for the preparation of 2-(2-acetamido-2-deoxy-3-O-D-glucopyranosyl)-D-propionyl-L-seryl-D-iso glutamine and 2-(2-acetamido-2-deoxy-3-O-D-glucopyranosyl)-D-propionyl-L-seryl-D-glu tamic acid | |
| JPH0414120B2 (nl) | ||
| PT86489B (pt) | Processo para a preparacao de derivados de aminoacidos lipofilicos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BN | A decision not to publish the application has become irrevocable |