JPH11124396A - 樹状ポリペプチド - Google Patents
樹状ポリペプチドInfo
- Publication number
- JPH11124396A JPH11124396A JP10202681A JP20268198A JPH11124396A JP H11124396 A JPH11124396 A JP H11124396A JP 10202681 A JP10202681 A JP 10202681A JP 20268198 A JP20268198 A JP 20268198A JP H11124396 A JPH11124396 A JP H11124396A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- groups
- reagent
- same
- dendron
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 焦点となる基に結合した、樹状に結合したア
ミノ酸単位、好ましくはリジン単位を各々有する２つの
デンドロンを有する樹状化合物を提供する。 【解決手段】 デンドロンの１つは、疎水性単位からな
るアンカー基を有する末端枝を有しており、第２デンド
ロンは、活性配位子又は当部分に結合している又は結合
していてもよい末端枝を有している。脂質アミノ酸試薬
を含む固相ペプチド合成法を用いた該デンドロンの合成
方法を開示する。多抗原性ペプチド又はドラッグデリバ
リーシステムの基礎となる化合物。
ミノ酸単位、好ましくはリジン単位を各々有する２つの
デンドロンを有する樹状化合物を提供する。 【解決手段】 デンドロンの１つは、疎水性単位からな
るアンカー基を有する末端枝を有しており、第２デンド
ロンは、活性配位子又は当部分に結合している又は結合
していてもよい末端枝を有している。脂質アミノ酸試薬
を含む固相ペプチド合成法を用いた該デンドロンの合成
方法を開示する。多抗原性ペプチド又はドラッグデリバ
リーシステムの基礎となる化合物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、例えばカルボン酸
又はアミン基のような反応性基を側鎖に有するアミノ酸
から形成された樹状に結合した単位を有するポリペプチ
ド化合物に関する。各々の分子は、２つのデンドロン
（dendron）を有している。一方のデンドロンの少なく
とも２つの末端枝には、アンカー基が結合しており、そ
れらの各々の基は少なくとも１つの親油性基を有してい
る。他方の少なくとも１つのデンドロンの末端単位は、
様々な種類のリゴン（ligon）と結合していなくてもよ
いし、結合していてもよい。該デンドロンは、ペンダン
ト（pendant）糖分子を任意に有する直鎖状のオリゴペ
プチドを含んでいてもよい核に結合している。
又はアミン基のような反応性基を側鎖に有するアミノ酸
から形成された樹状に結合した単位を有するポリペプチ
ド化合物に関する。各々の分子は、２つのデンドロン
（dendron）を有している。一方のデンドロンの少なく
とも２つの末端枝には、アンカー基が結合しており、そ
れらの各々の基は少なくとも１つの親油性基を有してい
る。他方の少なくとも１つのデンドロンの末端単位は、
様々な種類のリゴン（ligon）と結合していなくてもよ
いし、結合していてもよい。該デンドロンは、ペンダン
ト（pendant）糖分子を任意に有する直鎖状のオリゴペ
プチドを含んでいてもよい核に結合している。
【０００２】
【従来の技術】タム（Tam）らは、プロシーディング オ
ブ ザ ナショナル アカデミー オブサイエンス オブ ユ
ナイテッド ステイツ オブ アメリカ（Proc.Nat.Acad.S
ci.USA）(1988) 85, 5409-5413において、樹状に結合し
たポリリジン部分を含む化合物を開示している。該化合
物の焦点にあるリジンには、リジン単位のカルボン酸基
に結合したペプチドを通じて親油性部分が結合してい
る。樹状部分の末端枝には、抗原性が向上したワクチン
の有効成分を提供するために、ペプチド抗原が結合して
いてもよい。
ブ ザ ナショナル アカデミー オブサイエンス オブ ユ
ナイテッド ステイツ オブ アメリカ（Proc.Nat.Acad.S
ci.USA）(1988) 85, 5409-5413において、樹状に結合し
たポリリジン部分を含む化合物を開示している。該化合
物の焦点にあるリジンには、リジン単位のカルボン酸基
に結合したペプチドを通じて親油性部分が結合してい
る。樹状部分の末端枝には、抗原性が向上したワクチン
の有効成分を提供するために、ペプチド抗原が結合して
いてもよい。
【０００３】WO-A-94/02506において、トス（Toth）ら
は、アンカー部分が親油性アミノ酸から形成された、タ
ムの発明の改良を開示している。これにより、該化合物
は、慣用されている固相ペプチド合成法を用いて合成す
ることができる。その第一段階において、親油性アミノ
酸は、結合して、例えば３単位の直鎖状のオリゴペプチ
ドを形成し、焦点にあるリジン単位が最後の親油性アミ
ノ酸に結合し、そして、樹状核部分が該焦点となるリジ
ン単位の２つのアミノ基に結合する。引き続いて、ペプ
チド抗原を、樹状核の末端枝に直接合成してもよく、全
工程は、固体基質担体からポリペプチドを切断すること
なく行われる。トスらの生成物を製造するために用いる
合成法は、リジン試薬の２つのアミノ基をブロックする
同じ保護基を有する開始アミノ酸試薬を使用することが
必要であった。従って、樹状部分が合成される工程の
間、同一の試薬がそれぞれのアミン部分に添加される。
は、アンカー部分が親油性アミノ酸から形成された、タ
ムの発明の改良を開示している。これにより、該化合物
は、慣用されている固相ペプチド合成法を用いて合成す
ることができる。その第一段階において、親油性アミノ
酸は、結合して、例えば３単位の直鎖状のオリゴペプチ
ドを形成し、焦点にあるリジン単位が最後の親油性アミ
ノ酸に結合し、そして、樹状核部分が該焦点となるリジ
ン単位の２つのアミノ基に結合する。引き続いて、ペプ
チド抗原を、樹状核の末端枝に直接合成してもよく、全
工程は、固体基質担体からポリペプチドを切断すること
なく行われる。トスらの生成物を製造するために用いる
合成法は、リジン試薬の２つのアミノ基をブロックする
同じ保護基を有する開始アミノ酸試薬を使用することが
必要であった。従って、樹状部分が合成される工程の
間、同一の試薬がそれぞれのアミン部分に添加される。
【０００４】トスらの生成物においては、脂質アミノ酸
（lipidic amino acid）がペプチド結合によって互いに
直接結合していること、及び脂質アミノ酸が担体基質に
結合できることが必須であり、その結果合成が該単位の
ペプチド結合による担体への結合及び別の脂質アミノ酸
単位のペプチド結合による樹状部分への結合を必然的に
伴う。従って、固相ペプチド合成法は、最終生成物の各
々の部分を互いに結合させるために用いることができ
る。対照的に、タムらにおいては、樹状ポリリジン及び
ペプチド抗原は固相ペプチド合成法により合成できる
が、ポリリジン−ポリ抗原化合物を、親油性アンカー部
分に結合するのに先立って、焦点となるリジン基のカル
ボン酸単位を通じて担体基質から切断しなければならな
い。タムの親油性アンカーを合成する試薬は、１つの反
応性基しか有していない。
（lipidic amino acid）がペプチド結合によって互いに
直接結合していること、及び脂質アミノ酸が担体基質に
結合できることが必須であり、その結果合成が該単位の
ペプチド結合による担体への結合及び別の脂質アミノ酸
単位のペプチド結合による樹状部分への結合を必然的に
伴う。従って、固相ペプチド合成法は、最終生成物の各
々の部分を互いに結合させるために用いることができ
る。対照的に、タムらにおいては、樹状ポリリジン及び
ペプチド抗原は固相ペプチド合成法により合成できる
が、ポリリジン−ポリ抗原化合物を、親油性アンカー部
分に結合するのに先立って、焦点となるリジン基のカル
ボン酸単位を通じて担体基質から切断しなければならな
い。タムの親油性アンカーを合成する試薬は、１つの反
応性基しか有していない。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明の新規な樹状化合物は、核
を含んでいる。該核は、焦点となる基を有しており、該
基から少なくとも２つのデンドロンが広がっている。各
々のデンドロンは、樹状に結合したアミノ酸単位Ｉ
を含んでいる。該核は、焦点となる基を有しており、該
基から少なくとも２つのデンドロンが広がっている。各
々のデンドロンは、樹状に結合したアミノ酸単位Ｉ
【０００６】
【化１１】 （式中、Ｒ1はＣ1-6−アルキレンであり、Ｘは−Ｏ−、
−Ｓ−、−ＮＨ−及び−ＣＯ−からなる群より選択さ
れ、デンドロンのそれぞれの単位は同一又は異なる基Ｒ
1及びＸを有していてもよい。）を有しており、デンド
ロンのうち、第１のデンドロンは、ｎ（ｎは１又はそれ
以上）レベルの樹状に結合したアミノ酸単位及び２n個
の末端枝を有しており、その末端枝のうちｐ（ｐは少な
くとも２）個の末端枝にはアンカー基
−Ｓ−、−ＮＨ−及び−ＣＯ−からなる群より選択さ
れ、デンドロンのそれぞれの単位は同一又は異なる基Ｒ
1及びＸを有していてもよい。）を有しており、デンド
ロンのうち、第１のデンドロンは、ｎ（ｎは１又はそれ
以上）レベルの樹状に結合したアミノ酸単位及び２n個
の末端枝を有しており、その末端枝のうちｐ（ｐは少な
くとも２）個の末端枝にはアンカー基
【０００７】
【化１２】 （式中、Ｙは、−ＣＯ−、−ＮＨ−、−Ｏ−及び−Ｓ−
から選択される。Ｘ及びＹの少なくとも１つが−ＣＯ−
である場合、Ｒ2は、Ｃ6-24−アルキル、−アルケニル
又は−アルキニル基の少なくとも１種を有する有機基で
あり、Ｒ3は、水素、アミン、ブロックアミン、ヒドロ
キシル、Ｃ1-24アルコキシ、チオール、ＣＯＯＨ、及び
Ｃ6-24−アルキル，−アルケニル若しくは−アルキニ
ル，Ｃ1-6−アルカノイルオキシ又はＣ1-6−アルカンア
ミド基の少なくとも１種を有する有機基からなる群より
選択されるものであり、いずれも活性配位子又は糖分子
により置換されていてもよい。）が結合している。
から選択される。Ｘ及びＹの少なくとも１つが−ＣＯ−
である場合、Ｒ2は、Ｃ6-24−アルキル、−アルケニル
又は−アルキニル基の少なくとも１種を有する有機基で
あり、Ｒ3は、水素、アミン、ブロックアミン、ヒドロ
キシル、Ｃ1-24アルコキシ、チオール、ＣＯＯＨ、及び
Ｃ6-24−アルキル，−アルケニル若しくは−アルキニ
ル，Ｃ1-6−アルカノイルオキシ又はＣ1-6−アルカンア
ミド基の少なくとも１種を有する有機基からなる群より
選択されるものであり、いずれも活性配位子又は糖分子
により置換されていてもよい。）が結合している。
【０００８】デンドロンのうち、第２のデンドロンは、
上記式Ｉ（式中、基Ｒ1及びＸは互いに同一又は異なっ
ていてもよく、第１のデンドロン中のアミノ酸単位のも
のと同一又は異なっていてもよい。）で示す樹状に結合
したアミノ酸単位をｍレベル（ｍは１又はそれ以上）及
び２m個の末端枝を有している。各末端枝は共役してお
らず、ＮＨ2、Ｎ+Ｈ2Ｒ11（Ｒ11は水素又はＣ1-4アルキ
ルである。）、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ-、ＯＨ及びＳＨから
なる群から選択される基であるか、又は、末端の−Ｘ
−、−ＮＨ−若しくは−ＣＯ−基を介して基Ｒ12（Ｒ12
は、メチロール基、活性配位子（上記したようなアンカ
ー基であってもよい）若しくは糖部分を有する有機基）
と共役しているかのいずれかである。
上記式Ｉ（式中、基Ｒ1及びＸは互いに同一又は異なっ
ていてもよく、第１のデンドロン中のアミノ酸単位のも
のと同一又は異なっていてもよい。）で示す樹状に結合
したアミノ酸単位をｍレベル（ｍは１又はそれ以上）及
び２m個の末端枝を有している。各末端枝は共役してお
らず、ＮＨ2、Ｎ+Ｈ2Ｒ11（Ｒ11は水素又はＣ1-4アルキ
ルである。）、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ-、ＯＨ及びＳＨから
なる群から選択される基であるか、又は、末端の−Ｘ
−、−ＮＨ−若しくは−ＣＯ−基を介して基Ｒ12（Ｒ12
は、メチロール基、活性配位子（上記したようなアンカ
ー基であってもよい）若しくは糖部分を有する有機基）
と共役しているかのいずれかである。
【０００９】本発明において、核の焦点単位は、共有結
合により少なくとも２つのデンドロンに結合している。
核は、該焦点単位以外に、他の成分を、例えば１又はそ
れ以上のさらなる共有結合により焦点単位に結合して含
んでいてもよい。好ましくは、焦点単位は、例えば、式
（Ｉ）
合により少なくとも２つのデンドロンに結合している。
核は、該焦点単位以外に、他の成分を、例えば１又はそ
れ以上のさらなる共有結合により焦点単位に結合して含
んでいてもよい。好ましくは、焦点単位は、例えば、式
（Ｉ）
【００１０】
【化１３】 （式中、Ｘ及びＲ1は前記に同じ。）を有しているアミ
ノ酸単位である。
ノ酸単位である。
【００１１】好ましくは、Ｘは、−ＮＨ−又は−ＣＯ−
のいずれかである。Ｘが−ＣＯ−の場合、２つのデンド
ロンは２つの−ＣＯ−部分に結合している。ＸがＮＨの
場合、上記２つのデンドロンはそれぞれＮＨ基に結合し
ている。好ましくは、焦点単位は、リジン又はオルニチ
ンから形成されている。第３の結合は、有機部分に結合
している。
のいずれかである。Ｘが−ＣＯ−の場合、２つのデンド
ロンは２つの−ＣＯ−部分に結合している。ＸがＮＨの
場合、上記２つのデンドロンはそれぞれＮＨ基に結合し
ている。好ましくは、焦点単位は、リジン又はオルニチ
ンから形成されている。第３の結合は、有機部分に結合
している。
【００１２】核は、焦点部分以外の単位を有していても
よい。そのような単位としては、アミノ酸が基本となる
単位が連続したペプチドが好ましい。付加的な核の単位
は、単にスペーサーとしてのみ機能してもよいし、或い
は親油性基、親水性基若しくは活性配位子のような官能
性基、例えばターゲッティング基を有していてもよい。
化合物は、焦点単位を通して、例えばスペーサーを介し
て樹脂に結合することができる。
よい。そのような単位としては、アミノ酸が基本となる
単位が連続したペプチドが好ましい。付加的な核の単位
は、単にスペーサーとしてのみ機能してもよいし、或い
は親油性基、親水性基若しくは活性配位子のような官能
性基、例えばターゲッティング基を有していてもよい。
化合物は、焦点単位を通して、例えばスペーサーを介し
て樹脂に結合することができる。
【００１３】本発明は、樹状化合物の合成において、焦
点単位を形成するための、それぞれ連続して反応するこ
とができる少なくとも３つの反応性基を有する試薬を用
いることにより可能となった。本発明の好ましい実施形
態において、焦点単位は、式Ｉ（式中、Ｘ基は−ＮＨ−
である）のアミノ酸単位であり、焦点単位を得るための
試薬は、異なる条件の下で脱離可能な２つの異なる保護
基により保護されている２つのアミン基を有している。
従って、各々のアミン基を逐次連続反応工程において保
護し、活性化し、そして反応させることができる。これ
により２つの異なるデンドロンを合成できる。
点単位を形成するための、それぞれ連続して反応するこ
とができる少なくとも３つの反応性基を有する試薬を用
いることにより可能となった。本発明の好ましい実施形
態において、焦点単位は、式Ｉ（式中、Ｘ基は−ＮＨ−
である）のアミノ酸単位であり、焦点単位を得るための
試薬は、異なる条件の下で脱離可能な２つの異なる保護
基により保護されている２つのアミン基を有している。
従って、各々のアミン基を逐次連続反応工程において保
護し、活性化し、そして反応させることができる。これ
により２つの異なるデンドロンを合成できる。
【００１４】本発明は、該新規化合物の合成方法をも含
むものであり、該方法においては、２つの反応性基を有
する焦点試薬（focal reagent）を、第１デンドロン製
造工程の第１シリーズにおいて以下のように反応させ
る： １．式II
むものであり、該方法においては、２つの反応性基を有
する焦点試薬（focal reagent）を、第１デンドロン製
造工程の第１シリーズにおいて以下のように反応させ
る： １．式II
【００１５】
【化１４】 （式中、Ｒ1及びＸは前記に同じ。
【００１６】Ｒ14は、Ｘが−Ｏ−、−Ｓ−若しくは−Ｎ
Ｈ−の場合にＨであり、Ｘが−ＣＯ−の場合にＯＨであ
り、又は保護基であり、Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒ
ドロキシル又はカルボン酸活性基であり、Ｒ16は、Ｈ、
アミン保護基又はアミン活性基である。
Ｈ−の場合にＨであり、Ｘが−ＣＯ−の場合にＯＨであ
り、又は保護基であり、Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒ
ドロキシル又はカルボン酸活性基であり、Ｒ16は、Ｈ、
アミン保護基又はアミン活性基である。
【００１７】但し、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも２
つは活性基ではなく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも
１つは保護基ではない。）で表されるアミノ酸試薬を、
少なくとも２つの反応性基を有する焦点試薬と反応させ
る。
つは活性基ではなく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも
１つは保護基ではない。）で表されるアミノ酸試薬を、
少なくとも２つの反応性基を有する焦点試薬と反応させ
る。
【００１８】該反応は、必要に応じて焦点試薬の所望の
反応性基及び／又は−ＸＲ14、−ＣＯＲ15及び−ＮＨＲ
16の中の１つの基を脱保護及び／又は活性化する工程の
後であってもよく、それにより焦点試薬の反応性基がＲ
14Ｘ−、Ｒ15−ＣＯ−及びＲ16−ＮＨ−の基の１つと反
応する； ２．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護及び／又は活性化し、一般式ＩＩ
反応性基及び／又は−ＸＲ14、−ＣＯＲ15及び−ＮＨＲ
16の中の１つの基を脱保護及び／又は活性化する工程の
後であってもよく、それにより焦点試薬の反応性基がＲ
14Ｘ−、Ｒ15−ＣＯ−及びＲ16−ＮＨ−の基の１つと反
応する； ２．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護及び／又は活性化し、一般式ＩＩ
【００１９】
【化１５】 （式中、Ｒ1、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は、第１工程での定
義と同じであり、第１工程において使用する３官能性の
試薬と同一又は異なっている。） で表される３官能性試薬の少なくとも２当量と反応させ
る；３．ｎレベルの樹状に結合したアミノ酸が形成され
るまで、第２工程を（ｎ−１）回繰り返す。その際、第
２工程のｑ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少なくと
も２(q+1)当量の３官能性試薬を用いる； ４．２n個の基Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−の
少なくとも２つを、必要に応じて脱保護及び／又は活性
化して、一般式III
義と同じであり、第１工程において使用する３官能性の
試薬と同一又は異なっている。） で表される３官能性試薬の少なくとも２当量と反応させ
る；３．ｎレベルの樹状に結合したアミノ酸が形成され
るまで、第２工程を（ｎ−１）回繰り返す。その際、第
２工程のｑ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少なくと
も２(q+1)当量の３官能性試薬を用いる； ４．２n個の基Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−の
少なくとも２つを、必要に応じて脱保護及び／又は活性
化して、一般式III
【００２０】
【化１６】 （式中、Ｙ、Ｒ2及びＲ3は前記に同じ。Ｒ17は、Ｙが−
ＣＯ−の場合はＯＨ又はカルボン酸活性基であり、或い
は、Ｒ17は、Ｙが−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−の場合は
それぞれＨ若しくはアミン、ヒドロキシル又はチオール
活性基である）で表される親油性試薬と反応させるアン
カー基の結合工程であり、ここで、前記少なくとも２つ
の基がＲ17Ｙ−と反応して、
ＣＯ−の場合はＯＨ又はカルボン酸活性基であり、或い
は、Ｒ17は、Ｙが−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−の場合は
それぞれＨ若しくはアミン、ヒドロキシル又はチオール
活性基である）で表される親油性試薬と反応させるアン
カー基の結合工程であり、ここで、前記少なくとも２つ
の基がＲ17Ｙ−と反応して、
【００２１】
【化１７】 基をＸ、ＣＯ−又はＮＨ−と共役させる；そして、デン
ドロン形成の第２シリーズは、 ５．焦点試薬の他の反応基を、好ましくは上記第１工程
と分離した工程において、式II
ドロン形成の第２シリーズは、 ５．焦点試薬の他の反応基を、好ましくは上記第１工程
と分離した工程において、式II
【００２２】
【化１８】 （式中、Ｒ1及びＸは前記に同じ。
【００２３】Ｒ14は、Ｘが−Ｏ−、−Ｓ−若しくは−Ｎ
Ｈ−の場合にＨであり、Ｘが−ＣＯ−の場合にＯＨであ
り、又は保護基であり、Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒ
ドロキシル又はカルボン酸活性基であり、Ｒ16は、Ｈ、
アミン保護基又はアミン活性基である。
Ｈ−の場合にＨであり、Ｘが−ＣＯ−の場合にＯＨであ
り、又は保護基であり、Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒ
ドロキシル又はカルボン酸活性基であり、Ｒ16は、Ｈ、
アミン保護基又はアミン活性基である。
【００２４】但し、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも２
つは活性基ではなく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも
１つは保護基ではない。）で表されるアミノ酸試薬と反
応させる。該反応は、焦点試薬の所望の反応性基を脱保
護及び／又は活性化した後に行ってもよく、それによっ
て焦点試薬のもう１つの反応性基がＲ14Ｘ−、Ｒ15−Ｃ
Ｏ−及びＲ16−ＮＨ−の基の１つと反応する； ６．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護及び／又は活性化し、一般式ＩＩ
つは活性基ではなく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも
１つは保護基ではない。）で表されるアミノ酸試薬と反
応させる。該反応は、焦点試薬の所望の反応性基を脱保
護及び／又は活性化した後に行ってもよく、それによっ
て焦点試薬のもう１つの反応性基がＲ14Ｘ−、Ｒ15−Ｃ
Ｏ−及びＲ16−ＮＨ−の基の１つと反応する； ６．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護及び／又は活性化し、一般式ＩＩ
【００２５】
【化１９】 （式中、Ｒ1、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は、第１工程の定義
に同じであり、第５工程において使用する３官能性試薬
と同一又は異なる。）で表される３官能性試薬の少なく
とも２当量と反応させる； ７．ｍレベルの樹状に結合したアミノ酸が形成されるま
で、第６工程を（ｍ−１）回繰り返す。その際、第６工
程のｐ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少なくとも２
(p+1)当量の３官能性試薬を用いる；好ましい反応にお
いて、式VI
に同じであり、第５工程において使用する３官能性試薬
と同一又は異なる。）で表される３官能性試薬の少なく
とも２当量と反応させる； ７．ｍレベルの樹状に結合したアミノ酸が形成されるま
で、第６工程を（ｍ−１）回繰り返す。その際、第６工
程のｐ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少なくとも２
(p+1)当量の３官能性試薬を用いる；好ましい反応にお
いて、式VI
【００２６】
【化２０】 （式中、Ｒ17、Ｒ18及びＲ19は、それぞれ前記Ｒ14、Ｒ
16及びＲ15と同じ基から選ばれる。）で表される焦点試
薬を、基ＸＲ17、−ＮＨＲ18及び−ＣＯＲ19の１つと反
応できるペンダント基を有する基質と反応させる予備的
な工程がある。該工程は、必要に応じて前記ペンダント
基又は焦点試薬の前記基の１つの脱保護及び／又は活性
化の後で行ってもよい。これにより焦点試薬が基質に結
合する。
16及びＲ15と同じ基から選ばれる。）で表される焦点試
薬を、基ＸＲ17、−ＮＨＲ18及び−ＣＯＲ19の１つと反
応できるペンダント基を有する基質と反応させる予備的
な工程がある。該工程は、必要に応じて前記ペンダント
基又は焦点試薬の前記基の１つの脱保護及び／又は活性
化の後で行ってもよい。これにより焦点試薬が基質に結
合する。
【００２７】該工程において、親油性部分Ｒ2を有する
デンドロンを形成するために用いられる一連の反応は、
他のデンドロンを形成する一連の反応の前又は後に行っ
てもよい。両方のデンドロンが同一の場合、シリーズ１
〜４は、第５〜７工程のシリーズと同時に行ってもよ
い。このように、前後関係が明記されない限り、工程の
第１シリーズ及び工程の第２シリーズの表示は、これら
シリーズを行う順番を意味するものではない。
デンドロンを形成するために用いられる一連の反応は、
他のデンドロンを形成する一連の反応の前又は後に行っ
てもよい。両方のデンドロンが同一の場合、シリーズ１
〜４は、第５〜７工程のシリーズと同時に行ってもよ
い。このように、前後関係が明記されない限り、工程の
第１シリーズ及び工程の第２シリーズの表示は、これら
シリーズを行う順番を意味するものではない。
【００２８】本発明において、親油性部分−Ｙ−ＣＨ
（Ｒ2）Ｒ3において、Ｒ2は、好ましくはＣ6-24−アル
キル、−アルケニル若しくは−アルキニルから選択され
るものであるか、又は、基IV
（Ｒ2）Ｒ3において、Ｒ2は、好ましくはＣ6-24−アル
キル、−アルケニル若しくは−アルキニルから選択され
るものであるか、又は、基IV
【００２９】
【化２１】 ［式中、Ｒ4は、結合又はＣ1-6−アルキレン基を示し、
Ｒ5は、水素、Ｃ1-6−アルキル若しくはＣ1-24−アルカ
ノイル基又は基ＣＨ2ＳＣＨ2ＣＨ（ＯＣＯＲ20）ＣＨ2
ＯＣＯＲ20（Ｒ20は、Ｃ6-24−アルキル、−アルケニル
又は−アルキニル基を示す。）を示し、Ｒ6は、水素、
Ｃ6-24−アルキル、−アルコキシ、アルカノイル又は−
アルカノイルオキシ基を示す。］であるか、或いは、Ｒ
2は、一般式IV
Ｒ5は、水素、Ｃ1-6−アルキル若しくはＣ1-24−アルカ
ノイル基又は基ＣＨ2ＳＣＨ2ＣＨ（ＯＣＯＲ20）ＣＨ2
ＯＣＯＲ20（Ｒ20は、Ｃ6-24−アルキル、−アルケニル
又は−アルキニル基を示す。）を示し、Ｒ6は、水素、
Ｃ6-24−アルキル、−アルコキシ、アルカノイル又は−
アルカノイルオキシ基を示す。］であるか、或いは、Ｒ
2は、一般式IV
【００３０】
【化２２】 （式中、Ｒ8、Ｒ21及びＲ7は、それぞれＣ2-6−アルキ
レンであり、Ｒ9は、グリセリルであり、Ｒ10は、それ
ぞれ独立してＣ6-24−アルキル、−アルケニル、−アル
キニル、−アルカノイル、−アルケノイル又は−アルキ
ノイルから選択されるものである。但し、Ｒ5及びＲ6が
同時に水素、低級アルキル、アルケニル及びアルキニル
基でないことを条件とする。）である。或いは、Ｒ
2は、活性配位子又は糖分子を含有する基であってもよ
い。
レンであり、Ｒ9は、グリセリルであり、Ｒ10は、それ
ぞれ独立してＣ6-24−アルキル、−アルケニル、−アル
キニル、−アルカノイル、−アルケノイル又は−アルキ
ノイルから選択されるものである。但し、Ｒ5及びＲ6が
同時に水素、低級アルキル、アルケニル及びアルキニル
基でないことを条件とする。）である。或いは、Ｒ
2は、活性配位子又は糖分子を含有する基であってもよ
い。
【００３１】基Ｒ2が式IVで表される基である場合であ
って、特にＲ4が結合である場合、化合物は、式Ｖ
って、特にＲ4が結合である場合、化合物は、式Ｖ
【００３２】
【化２３】 （式中、Ｒ6は、前記に同じ。）で表される脂質アミノ
酸由来である。
酸由来である。
【００３３】脂質アミノ酸が第１デンドロンの末端枝と
共役する工程において、末端枝と反応させたくないＣＯ
ＯＨ及びＮＨ2基はどれも、適当な保護基を用いて一般
にブロックされている。
共役する工程において、末端枝と反応させたくないＣＯ
ＯＨ及びＮＨ2基はどれも、適当な保護基を用いて一般
にブロックされている。
【００３４】多くの場合、式VIの脂質アミノ酸の代わり
に、アンカー部分を提供するための、単官能性の試薬、
例えば脂肪酸又は脂肪アミンを用いるのがより都合がよ
い。
に、アンカー部分を提供するための、単官能性の試薬、
例えば脂肪酸又は脂肪アミンを用いるのがより都合がよ
い。
【００３５】本発明の樹状化合物は、固体支持体、例え
ば固体ペプチド合成の支持体として用いられる樹脂に結
合していてもよい。従って、核は、焦点単位を通して必
要に応じてスペーサー、例えばオリゴペプチドスペーサ
ーを介して、固体支持体、例えば樹脂と結合していても
よい。本発明化合物は、使用前に支持体から切断されて
もよく、派生的でない（underivatised）末端枝のいず
れかがさらに反応した後であってもよい。従って、未反
応の末端枝は、遊離の、又は保護されたカルボン酸、ア
ミン、ヒドロキシル又はチオール基であってもよい。
ば固体ペプチド合成の支持体として用いられる樹脂に結
合していてもよい。従って、核は、焦点単位を通して必
要に応じてスペーサー、例えばオリゴペプチドスペーサ
ーを介して、固体支持体、例えば樹脂と結合していても
よい。本発明化合物は、使用前に支持体から切断されて
もよく、派生的でない（underivatised）末端枝のいず
れかがさらに反応した後であってもよい。従って、未反
応の末端枝は、遊離の、又は保護されたカルボン酸、ア
ミン、ヒドロキシル又はチオール基であってもよい。
【００３６】本発明の好ましい態様において、樹状化合
物は、数個の末端第１級アミノ基を有しているか、又
は、対応するアンモニウム塩の形である。一般に、第２
デンドロンの全ての末端基はアミン又はアンモニウム基
である。
物は、数個の末端第１級アミノ基を有しているか、又
は、対応するアンモニウム塩の形である。一般に、第２
デンドロンの全ての末端基はアミン又はアンモニウム基
である。
【００３７】本発明生成物のさらに好ましい態様におい
ては、第２デンドロンの少なくともいくつかの末端基
が、糖分子を有する有機基に結合している。
ては、第２デンドロンの少なくともいくつかの末端基
が、糖分子を有する有機基に結合している。
【００３８】樹状化合物において、２つのデンドロンに
おける樹状に結合したアミノ酸単位のレベルｎ及びｍの
数は、同一であってもよく、又は通常は異なっている。
一般的に、第１デンドロンの末端枝の全てが親油性アン
カー部分を有することが好ましい。このような部分を２
又は４個有することが、化合物全体として適当な親油性
を呈するのに適していることがわかった。従って、第１
デンドロンは、樹状に結合したアミノ酸単位を２レベル
（即ち、ｎが２）有するのが好ましい。
おける樹状に結合したアミノ酸単位のレベルｎ及びｍの
数は、同一であってもよく、又は通常は異なっている。
一般的に、第１デンドロンの末端枝の全てが親油性アン
カー部分を有することが好ましい。このような部分を２
又は４個有することが、化合物全体として適当な親油性
を呈するのに適していることがわかった。従って、第１
デンドロンは、樹状に結合したアミノ酸単位を２レベル
（即ち、ｎが２）有するのが好ましい。
【００３９】第２デンドロンは、一般に樹状に結合した
アミノ酸単位を少なくとも３レベル、好ましくは樹状に
結合したアミノ酸単位を４又は時には５レベル（即ち、
ｍが３〜５）有している。樹状に結合したアミノ酸単位
のレベルが５又はそれ以上である場合、立体障害により
基、例えばさらなる樹状部分の、末端枝への完全な樹状
結合が妨げられるであろう。従って、樹状に結合したア
ミノ酸単位のレベルは５を越えない、好ましくは４であ
ることが好ましい。
アミノ酸単位を少なくとも３レベル、好ましくは樹状に
結合したアミノ酸単位を４又は時には５レベル（即ち、
ｍが３〜５）有している。樹状に結合したアミノ酸単位
のレベルが５又はそれ以上である場合、立体障害により
基、例えばさらなる樹状部分の、末端枝への完全な樹状
結合が妨げられるであろう。従って、樹状に結合したア
ミノ酸単位のレベルは５を越えない、好ましくは４であ
ることが好ましい。
【００４０】以下の詳細な実施例において示されるよう
に、脂質アミノ酸単位である４つのアンカー基を第１デ
ンドロンのアミノ末端基に結合して有し、第２デンドロ
ンに対して３−、４−及び５−レベルの樹状結合アミノ
酸単位の各末端基にフリーのアミノ基を有している本発
明のデンドリマーは、赤血球溶解によって測定される毒
性が、樹状に結合したアミノ酸（リジン）単位を同じ数
有するデンドリマーの焦点となるリジンに結合して３個
の脂質アミノ酸の直鎖状オリゴペプチドアンカー部分を
有する我々の先出願ＷＯ−Ａ−９４−０２５０６に開示
された脂質ペプチドデンドリマーと比較して、低いこと
がわかった。
に、脂質アミノ酸単位である４つのアンカー基を第１デ
ンドロンのアミノ末端基に結合して有し、第２デンドロ
ンに対して３−、４−及び５−レベルの樹状結合アミノ
酸単位の各末端基にフリーのアミノ基を有している本発
明のデンドリマーは、赤血球溶解によって測定される毒
性が、樹状に結合したアミノ酸（リジン）単位を同じ数
有するデンドリマーの焦点となるリジンに結合して３個
の脂質アミノ酸の直鎖状オリゴペプチドアンカー部分を
有する我々の先出願ＷＯ−Ａ−９４−０２５０６に開示
された脂質ペプチドデンドリマーと比較して、低いこと
がわかった。
【００４１】本発明の化合物は、ＷＯ−Ａ−９４−０２
５０６に開示されたものと同様の用途を有する。従っ
て、一方若しくは他方の、又は両方の末端枝、好ましく
は第２デンドロンへに、ペプチド抗原、薬物部分、ター
ゲッティング部分、例えば抗体若しくは糖基、又は親水
性を高めるための他の基（例えば、糖分子、ポリエチレ
ングリコール分子又はイオン部分）を共役させてもよ
い。
５０６に開示されたものと同様の用途を有する。従っ
て、一方若しくは他方の、又は両方の末端枝、好ましく
は第２デンドロンへに、ペプチド抗原、薬物部分、ター
ゲッティング部分、例えば抗体若しくは糖基、又は親水
性を高めるための他の基（例えば、糖分子、ポリエチレ
ングリコール分子又はイオン部分）を共役させてもよ
い。
【００４２】
【実施例】以下の実施例において、更に本発明を説明す
る。
る。
【００４３】材料及び方法 アミノメチル化ポリスチレン（ＰＡＭ）樹脂、ノヴァバ
イオケム（Novabiochem）からのＢＯＣ−保護アミノ
酸、フェーズ セパレーションズ エルティーディー（Ph
ase Separations Ltd）からの２−（１Ｈベンゾトリア
ゾール−リル）−１，３，３−テトラメチルウロニウム
ヘキサフルオロフォスフェート（ＨＢＴＵ）、ハロカー
ボン プロダクツ コーポレーション（Halocarbon Produ
cts Corporation）からのトリフルオロ酢酸（ＲＦ
Ａ）、ビーオーシー（BOC）からのフッ化水素ガス（Ｈ
Ｆ）、フルカ（Fluka）からのジイソプロピルエチルア
ミン（ＤＩＥＡ）及びラスバーン（Rathburn）からのジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）を入手そのままの状態で
用いた。保護された脂質アミノ酸は、ギボンズ，ダブリ
ュエー（Gibbons WA）ら（1990）リービッヒス アニュ
アル オブ ケミストリー（Liebigs Ann.Chem.）1177-1
183に記載されたようにして我々の研究所において合成
し、精製した。
イオケム（Novabiochem）からのＢＯＣ−保護アミノ
酸、フェーズ セパレーションズ エルティーディー（Ph
ase Separations Ltd）からの２−（１Ｈベンゾトリア
ゾール−リル）−１，３，３−テトラメチルウロニウム
ヘキサフルオロフォスフェート（ＨＢＴＵ）、ハロカー
ボン プロダクツ コーポレーション（Halocarbon Produ
cts Corporation）からのトリフルオロ酢酸（ＲＦ
Ａ）、ビーオーシー（BOC）からのフッ化水素ガス（Ｈ
Ｆ）、フルカ（Fluka）からのジイソプロピルエチルア
ミン（ＤＩＥＡ）及びラスバーン（Rathburn）からのジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）を入手そのままの状態で
用いた。保護された脂質アミノ酸は、ギボンズ，ダブリ
ュエー（Gibbons WA）ら（1990）リービッヒス アニュ
アル オブ ケミストリー（Liebigs Ann.Chem.）1177-1
183に記載されたようにして我々の研究所において合成
し、精製した。
【００４４】実施例１ 固相ペプチド合成法を、置換度が０.４６ｍｍｏｌ／ｇ
樹脂であるポリアクリルアミド樹脂を用いて行った。反
応シーケンスを図１のスロー（slow）ダイアグラムに示
すが、Ｂｏｃの保護を含む工程は、１００％トリフルオ
ロ酢酸中で行った。保護アミン基を有するアミノ酸試薬
のカルボン酸基と、結合化合物のペンダントアミン基と
カップリングを、３倍過剰のＨＢＴＵ及びジメチルホル
ムアミド中で活性化されたＢｏｃ−アミノ酸を用いてジ
イソプロピルエチルアミンの存在下で行った。リポアミ
ノ酸の脱保護されたＢｏｃ基の酸性化を、ジイソプロピ
ルエチルアミンの存在下において行った。第２デンドロ
ン形成のためのＦｍｏｃ基の脱保護を、適当な系におい
て行った。
樹脂であるポリアクリルアミド樹脂を用いて行った。反
応シーケンスを図１のスロー（slow）ダイアグラムに示
すが、Ｂｏｃの保護を含む工程は、１００％トリフルオ
ロ酢酸中で行った。保護アミン基を有するアミノ酸試薬
のカルボン酸基と、結合化合物のペンダントアミン基と
カップリングを、３倍過剰のＨＢＴＵ及びジメチルホル
ムアミド中で活性化されたＢｏｃ−アミノ酸を用いてジ
イソプロピルエチルアミンの存在下で行った。リポアミ
ノ酸の脱保護されたＢｏｃ基の酸性化を、ジイソプロピ
ルエチルアミンの存在下において行った。第２デンドロ
ン形成のためのＦｍｏｃ基の脱保護を、適当な系におい
て行った。
【００４５】樹脂ペプチドを、それぞれの脱保護の工程
の前後に、注意深くフロー洗浄した。最終生成物を、ジ
クロロメタンを用いて洗浄し、空気中で乾燥した。ペプ
チドを、高ＨＦ法（樹脂ペプチド２ｇ、ＨＦ２０ｍｌ、
−５℃にて１.５時間）により樹脂支持体から除去して
粗ペプチドを得、９５％酢酸溶液に溶解して、凍結乾燥
した。
の前後に、注意深くフロー洗浄した。最終生成物を、ジ
クロロメタンを用いて洗浄し、空気中で乾燥した。ペプ
チドを、高ＨＦ法（樹脂ペプチド２ｇ、ＨＦ２０ｍｌ、
−５℃にて１.５時間）により樹脂支持体から除去して
粗ペプチドを得、９５％酢酸溶液に溶解して、凍結乾燥
した。
【００４６】精製 合成したデンドリマーの分析用ＨＰＬＣ分離を、孔径５
μｍであって内径４．６ｍｍの２５ｃｍヴィダック（Vy
dac）Ｃ18アールエーシー（ＲＡＣ）カラム上で行っ
た。標準的な脱ガス技術に続いて、膜フィルターを用い
て粒状物質をＨＰＬＣ等級のアセトニトリルと水から除
去した。
μｍであって内径４．６ｍｍの２５ｃｍヴィダック（Vy
dac）Ｃ18アールエーシー（ＲＡＣ）カラム上で行っ
た。標準的な脱ガス技術に続いて、膜フィルターを用い
て粒状物質をＨＰＬＣ等級のアセトニトリルと水から除
去した。
【００４７】分析用分離を、１．２ｍｌ ｍｉｎ-1の一
定流量において、０％アセトニトリルから始まり２０分
かけて６０％アセトニトリルに増加させ、該濃度に２０
分間保ち、１０分間かけて徐々に０％まで減少させる溶
媒グラジエントを用いて行った。プレパラティブ用の分
離のために、孔径１０μｍ、内径２．５ｃｍのティーエ
スケー−ゲル（ＴＳＫ−ＧＥＬ）プレパラティブＣ18カ
ラムを用いた。分離を、８ｍｌ ｍｉｎ-1の一定流量に
おいて、０％アセトニトリルから始まり、６０分で１８
％アセトニトリル、次いで８０分で６０％アセトニトリ
ルとなるよう一定に増加させ、該濃度にさらに３０分間
保ち、３０分間かけて徐々に０％アセトニトリルまで減
少させる溶媒グラジエントを用いて行った。該グラジエ
ントは、マイクロプロセッサーで制御された２つのギル
ソン（Gilson） ３０２ 単一ピストンポンプを用いて行
った。化合物は、ウォーターズ ４８６ 整調可能吸光度
検出器（Waters 486 tunable absorbance detector）を
用いて２１４ｎｍで検出するか、或いはホロクローム
ＵＶ−ＶＩＳ 検出器（Holocrome UV-VIS detector）を
用いて２２０ｎｍで検出した。質量スペクトルを、窒素
レーザーから発生する波長３３７ｎｍにおけるマトリッ
クスアシストレーザー脱離（ＭＡＬＤ）イオン化を用い
てＶＧ分析用トフスペック計測器（VG Analytical Tofs
pec instrument）上で行った。
定流量において、０％アセトニトリルから始まり２０分
かけて６０％アセトニトリルに増加させ、該濃度に２０
分間保ち、１０分間かけて徐々に０％まで減少させる溶
媒グラジエントを用いて行った。プレパラティブ用の分
離のために、孔径１０μｍ、内径２．５ｃｍのティーエ
スケー−ゲル（ＴＳＫ−ＧＥＬ）プレパラティブＣ18カ
ラムを用いた。分離を、８ｍｌ ｍｉｎ-1の一定流量に
おいて、０％アセトニトリルから始まり、６０分で１８
％アセトニトリル、次いで８０分で６０％アセトニトリ
ルとなるよう一定に増加させ、該濃度にさらに３０分間
保ち、３０分間かけて徐々に０％アセトニトリルまで減
少させる溶媒グラジエントを用いて行った。該グラジエ
ントは、マイクロプロセッサーで制御された２つのギル
ソン（Gilson） ３０２ 単一ピストンポンプを用いて行
った。化合物は、ウォーターズ ４８６ 整調可能吸光度
検出器（Waters 486 tunable absorbance detector）を
用いて２１４ｎｍで検出するか、或いはホロクローム
ＵＶ−ＶＩＳ 検出器（Holocrome UV-VIS detector）を
用いて２２０ｎｍで検出した。質量スペクトルを、窒素
レーザーから発生する波長３３７ｎｍにおけるマトリッ
クスアシストレーザー脱離（ＭＡＬＤ）イオン化を用い
てＶＧ分析用トフスペック計測器（VG Analytical Tofs
pec instrument）上で行った。
【００４８】上記した一般的な手法を用いて合成した化
合物は、以下の一般構造を有していた。
合物は、以下の一般構造を有していた。
【００４９】
【化２４】 合成した化合物は、表１に示す脂質残基の数及び第１級
アミン基の数並びに分子量の値を有している。
アミン基の数並びに分子量の値を有している。
【００５０】
【表１】 比較例１ Ｆｍｏｃ法を省略する以外は、実施例１について上記し
たものと同じ一般的な手法を用いて、下記の一般式を有
する化合物を作成した。従って、該工程は、樹脂に結合
したグリジン基に結合するリポアミノ酸単位の直鎖状ト
リペプチドを提供するための３つの連続した工程、次い
でＢｏｃ Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＨ単位を第３のリポアミ
ノ酸単位に付加する工程、次にリジンの２つのアミノ基
の脱保護及び連続的な樹状に結合したリジン部分の付加
工程を含んでいる。
たものと同じ一般的な手法を用いて、下記の一般式を有
する化合物を作成した。従って、該工程は、樹脂に結合
したグリジン基に結合するリポアミノ酸単位の直鎖状ト
リペプチドを提供するための３つの連続した工程、次い
でＢｏｃ Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＨ単位を第３のリポアミ
ノ酸単位に付加する工程、次にリジンの２つのアミノ基
の脱保護及び連続的な樹状に結合したリジン部分の付加
工程を含んでいる。
【００５１】
【化２５】 メチロール化合物を、末端に８つの遊離アミノ基を有す
る化合物を適当な試薬との反応に供して合成した。合成
した化合物を、下記の表２に示す。
る化合物を適当な試薬との反応に供して合成した。合成
した化合物を、下記の表２に示す。
【００５２】
【表２】 ラット赤血球溶解の検討 新鮮な血液をラットから心臓穿刺により得て、ヘパリン
を加えたチューブに収集し、４℃にて１５分間、１,０
００ｇにて遠心分離した。上澄みを捨て、冷却したリン
酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を用いて容量を１０ｍｌとし
た。該懸濁液を再度遠心分離し、ＰＢＳ洗浄工程を２度
繰り返した。最後に、上澄みを除去し、細胞ペレット
を、冷却ＰＢＳ中で２％ ｗ／ｖとなるように再懸濁し
た。化合物１．１〜１．７を異なる希釈度を有する試料
１００μｌを、平底エライザプレートに添加した。１％
ｗ／ｖのトリトンＸ１００をコントロールとして用い
た（１００％溶解）。赤血球の１００μｌ懸濁液を加
え、１時間、５時間及び２４時間インキュベートした。
異なる時間間隔において、プレートをはずして、懸濁液
を遠心分離した。上澄み１００μｌを除去し、新たなエ
ライザプレートに入れ、ＰＢＳをブランクとして用いて
５４５ｎｍにおける吸光度を測定した。％集団溶解を式 集団溶解のパーセント＝（吸光度/コントロール(トリト
ン)の吸光度)１００ を用いて計算した。
を加えたチューブに収集し、４℃にて１５分間、１,０
００ｇにて遠心分離した。上澄みを捨て、冷却したリン
酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を用いて容量を１０ｍｌとし
た。該懸濁液を再度遠心分離し、ＰＢＳ洗浄工程を２度
繰り返した。最後に、上澄みを除去し、細胞ペレット
を、冷却ＰＢＳ中で２％ ｗ／ｖとなるように再懸濁し
た。化合物１．１〜１．７を異なる希釈度を有する試料
１００μｌを、平底エライザプレートに添加した。１％
ｗ／ｖのトリトンＸ１００をコントロールとして用い
た（１００％溶解）。赤血球の１００μｌ懸濁液を加
え、１時間、５時間及び２４時間インキュベートした。
異なる時間間隔において、プレートをはずして、懸濁液
を遠心分離した。上澄み１００μｌを除去し、新たなエ
ライザプレートに入れ、ＰＢＳをブランクとして用いて
５４５ｎｍにおける吸光度を測定した。％集団溶解を式 集団溶解のパーセント＝（吸光度/コントロール(トリト
ン)の吸光度)１００ を用いて計算した。
【００５３】結果 化合物１．１〜１．７の毒性を、２つの異なる分子量
（３４，０００及び１０００〜４０００）の線状ポリリ
ジンと比較した。トリトン Ｘ１００を、陽性対照とし
て用いた。高い分子量のポリリジンは、濃度非依存性の
毒性を有しており、１μｇ／ｍｌ〜３０μｇ／ｍｌの濃
度の間で３５．７％〜５４．２％の集団溶解パーセント
がみられた。低い分子量のポリリジンは、ほとんど無毒
性であった。
（３４，０００及び１０００〜４０００）の線状ポリリ
ジンと比較した。トリトン Ｘ１００を、陽性対照とし
て用いた。高い分子量のポリリジンは、濃度非依存性の
毒性を有しており、１μｇ／ｍｌ〜３０μｇ／ｍｌの濃
度の間で３５．７％〜５４．２％の集団溶解パーセント
がみられた。低い分子量のポリリジンは、ほとんど無毒
性であった。
【００５４】赤血球溶解の検討は、化合物１．４〜１．
６は１μｇ／ｍｌの低濃度では２４時間後には無毒性で
あり、これに対して（２０μｇ／ｍｌを越える）高濃度
では、これら化合物は１時間のインキュベーションの後
でさえ毒性であることを示した。全化合物１．１〜１．
６は、濃度に依存する毒性を有していた。
６は１μｇ／ｍｌの低濃度では２４時間後には無毒性で
あり、これに対して（２０μｇ／ｍｌを越える）高濃度
では、これら化合物は１時間のインキュベーションの後
でさえ毒性であることを示した。全化合物１．１〜１．
６は、濃度に依存する毒性を有していた。
【００５５】化合物１．１〜１．３の毒性の検討は、毒
性が分子に結合しているアミノ基の数に対する親油性基
の割合に依存していることを示した。アミノ基を８個有
しており、アミノ基を１６及び３２個有している類似の
化合物（１．２及び１．３）よりも毒性が低いことが判
明している化合物１．１は、比較の１．４〜１．６より
も毒性が低かった。このことは、化合物１．１〜１．３
はより嵩高かったが、リポアミノ酸の結合位置が、それ
らの毒性を低くしていることを示す。
性が分子に結合しているアミノ基の数に対する親油性基
の割合に依存していることを示した。アミノ基を８個有
しており、アミノ基を１６及び３２個有している類似の
化合物（１．２及び１．３）よりも毒性が低いことが判
明している化合物１．１は、比較の１．４〜１．６より
も毒性が低かった。このことは、化合物１．１〜１．３
はより嵩高かったが、リポアミノ酸の結合位置が、それ
らの毒性を低くしていることを示す。
【００５６】連続的に結合した３個のリポアミノ酸鎖を
有する化合物１．７は、３０μｇ／ｍｌの濃度において
５時間のインキュベーションまで無毒性であり、このこ
とから毒性はリポアミノ酸の存在によるものでないこと
が示された。
有する化合物１．７は、３０μｇ／ｍｌの濃度において
５時間のインキュベーションまで無毒性であり、このこ
とから毒性はリポアミノ酸の存在によるものでないこと
が示された。
【００５７】結果を、図２及び３においてグラフを用い
て説明する。
て説明する。
【００５８】実施例２ おのおの樹状に結合したリジン単位を３レベル及びリジ
ン焦点単位を有し、トリチウム化されたアセチル部分を
含有する脂質アミノ酸アンカー基ＣＨ3（ＣＨ2）11ＣＨ
（ＮＨＣＯＣＨ3）ＣＯ−に結合した末端アミノ基をそ
れぞれ有している２つの同一のデンドロンを有する化合
物を、実施例１と同じ手法を用いて合成した。該分子か
らなる粒子の直径を、２．５ｎｍと割り出した。
ン焦点単位を有し、トリチウム化されたアセチル部分を
含有する脂質アミノ酸アンカー基ＣＨ3（ＣＨ2）11ＣＨ
（ＮＨＣＯＣＨ3）ＣＯ−に結合した末端アミノ基をそ
れぞれ有している２つの同一のデンドロンを有する化合
物を、実施例１と同じ手法を用いて合成した。該分子か
らなる粒子の直径を、２．５ｎｍと割り出した。
【００５９】安定性 トリチウム化されたデンドリマーの安定性を、血漿、血
清、及び胃腸内の掻き取り物（gastrointestinal scrap
ings）のような生物学的液体中（デンドリマー−生物学
的液体の比 １：２、１：５及び１：２０）において、
分子量カットオフ値５０００ダルトンを有する透析バッ
グ及び透析媒体としてＰＢＳを用いて試験した。又、雌
のＳＤラットへの経口及び腹腔投与（投与量：１４ｍｇ
／ｋｇ；０．２ｍｌ）後の生体分布を利用して試験し
た。
清、及び胃腸内の掻き取り物（gastrointestinal scrap
ings）のような生物学的液体中（デンドリマー−生物学
的液体の比 １：２、１：５及び１：２０）において、
分子量カットオフ値５０００ダルトンを有する透析バッ
グ及び透析媒体としてＰＢＳを用いて試験した。又、雌
のＳＤラットへの経口及び腹腔投与（投与量：１４ｍｇ
／ｋｇ；０．２ｍｌ）後の生体分布を利用して試験し
た。
【００６０】ＧＩ掻き取り物、ラット血漿及びウシ胎児
血清のような生物学的液体中でデンドリマーが分解し
た。分解によりフラグメントが形成され、透析媒体中に
検出された。１：２及び１：５のデンドリマーと生物学
的液体の比において、分解はみられず、一方、１：２０
の比においては、２４時間のインキュベーションの後、
デンドリマーの７〜２２％の分解が起こった。
血清のような生物学的液体中でデンドリマーが分解し
た。分解によりフラグメントが形成され、透析媒体中に
検出された。１：２及び１：５のデンドリマーと生物学
的液体の比において、分解はみられず、一方、１：２０
の比においては、２４時間のインキュベーションの後、
デンドリマーの７〜２２％の分解が起こった。
【００６１】経口による生体内分布 の検討 投与量１４ｍｇ／ｋｇの経口投与の後、異なる間隔をお
いた後に回収された胃腸管及び肝臓、脾臓、腎臓のよう
な他の器官並びに血液中の放射性標識の量を測定した。
小腸においては、投与量の１５％が６時間後に回収され
た。
いた後に回収された胃腸管及び肝臓、脾臓、腎臓のよう
な他の器官並びに血液中の放射性標識の量を測定した。
小腸においては、投与量の１５％が６時間後に回収され
た。
【００６２】肝臓において、最高１．２％が６時間後に
回収されたが、脾臓及び腎臓中では１％未満であった。
血液中では、投与された放射性標識の３％が６時間後に
見つかった。経口投与の後、デンドリマーのバイオアベ
イラビリティーは、３時間後には１７．３％であり、６
時間後は２６．４％で２４時間後は１．２％であった。
回収されたが、脾臓及び腎臓中では１％未満であった。
血液中では、投与された放射性標識の３％が６時間後に
見つかった。経口投与の後、デンドリマーのバイオアベ
イラビリティーは、３時間後には１７．３％であり、６
時間後は２６．４％で２４時間後は１．２％であった。
【００６３】この結果は、雌のＳＤラットにおける経口
投与後のデンドリマーの選択的な取り込み（グラム組織
当たりの）が、以下し示すように大腸ではなく小腸にお
けるリンパ系細胞を介したものであることを示す。小腸
におけるリンパ系細胞を介した取り込みは、３時間後は
１．０９％であり、６時間後（０．２３％）と１２時間
後（０．０５％）に徐々に減少した。非リンパ系を介し
た小腸の取り込みは、３、６及び１２時間後にそれぞれ
３．８％、２．５％及び０．３％であった。大腸のリン
パ系細胞を通した取り込みは、ごくわずかであり、一
方、大腸の非リンパ系を通した取り込みは、３時間での
１．０６％から１２時間での３．８％に徐々に増加し
た。
投与後のデンドリマーの選択的な取り込み（グラム組織
当たりの）が、以下し示すように大腸ではなく小腸にお
けるリンパ系細胞を介したものであることを示す。小腸
におけるリンパ系細胞を介した取り込みは、３時間後は
１．０９％であり、６時間後（０．２３％）と１２時間
後（０．０５％）に徐々に減少した。非リンパ系を介し
た小腸の取り込みは、３、６及び１２時間後にそれぞれ
３．８％、２．５％及び０．３％であった。大腸のリン
パ系細胞を通した取り込みは、ごくわずかであり、一
方、大腸の非リンパ系を通した取り込みは、３時間での
１．０６％から１２時間での３．８％に徐々に増加し
た。
【００６４】２４時間後、投与量の１％未満が回収され
た。
た。
【００６５】腹腔内の分布の検討 ３時間及び２４時間後に観測された肝臓の放射能は、腹
腔内投与量１４ｍｇ／ｋｇに対してそれぞれ２．４％及
び１０％であった。
腔内投与量１４ｍｇ／ｋｇに対してそれぞれ２．４％及
び１０％であった。
【００６６】結論 上記結果は、デンドリマーが生物学的環境において極め
て安定であることを明白に示すものであり、又生体内分
布の検討は、デンドリマーが他のコロイド状のキャリア
ーと同様の挙動をとることを示す。デンドリマーは、生
物活性分子のデリバリーのためのキャリアーとして用い
られる可能性を有する。
て安定であることを明白に示すものであり、又生体内分
布の検討は、デンドリマーが他のコロイド状のキャリア
ーと同様の挙動をとることを示す。デンドリマーは、生
物活性分子のデリバリーのためのキャリアーとして用い
られる可能性を有する。
【図１】図１は、第１デンドロン及び第２デンドロンを
示す。
示す。
【図２】図２は、デンドリマーを用いたラット赤血球の
１時間インキュベーション後のヘモグロビン放出を示
す。
１時間インキュベーション後のヘモグロビン放出を示
す。
【図３】図３は、１時間インキュベーション後、２０μ
ｇ／ｍｌにおけるアミノ基の数とヘモグロビン放出との
関係を示す。
ｇ／ｍｌにおけるアミノ基の数とヘモグロビン放出との
関係を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１０年１１月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の名称】樹状ポリペプチド ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１０年１１月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００４４】実施例１ 固相ペプチド合成法を、置換度が０.４６ｍｍｏｌ／ｇ
樹脂であるポリアクリルアミド樹脂を用いて行った。反
応シーケンスを図１（図１Ａ〜図１Ｃ）のスロー（slo
w）ダイアグラムに示すが、Ｂｏｃの保護を含む工程
は、１００％トリフルオロ酢酸中で行った。保護アミン
基を有するアミノ酸試薬のカルボン酸基と、結合化合物
のペンダントアミン基とカップリングを、３倍過剰のＨ
ＢＴＵ及びジメチルホルムアミド中で活性化されたＢｏ
ｃ−アミノ酸を用いてジイソプロピルエチルアミンの存
在下で行った。リポアミノ酸の脱保護されたＢｏｃ基の
酸性化を、ジイソプロピルエチルアミンの存在下におい
て行った。第２デンドロン形成のためのＦｍｏｃ基の脱
保護を、適当な系において行った。
樹脂であるポリアクリルアミド樹脂を用いて行った。反
応シーケンスを図１（図１Ａ〜図１Ｃ）のスロー（slo
w）ダイアグラムに示すが、Ｂｏｃの保護を含む工程
は、１００％トリフルオロ酢酸中で行った。保護アミン
基を有するアミノ酸試薬のカルボン酸基と、結合化合物
のペンダントアミン基とカップリングを、３倍過剰のＨ
ＢＴＵ及びジメチルホルムアミド中で活性化されたＢｏ
ｃ−アミノ酸を用いてジイソプロピルエチルアミンの存
在下で行った。リポアミノ酸の脱保護されたＢｏｃ基の
酸性化を、ジイソプロピルエチルアミンの存在下におい
て行った。第２デンドロン形成のためのＦｍｏｃ基の脱
保護を、適当な系において行った。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】図１Ａは、反応シーケンスを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１Ａに続く。
【図１Ｃ】図１Ｃは、図１Ｂに続く。
【図２】図２は、デンドリマーを用いたラット赤血球の
１時間インキュベーション後のヘモグロビン放出を示
す。
１時間インキュベーション後のヘモグロビン放出を示
す。
【図３】図３は、１時間インキュベーション後、２０μ
ｇ／ｍｌにおけるアミノ基の数とヘモグロビン放出との
関係を示す。
ｇ／ｍｌにおけるアミノ基の数とヘモグロビン放出との
関係を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 598095961 29／39 Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｓｑｕａｒ ｅ， Ｌｏｎｄｏｎ ＷＣ１Ｎ １ＡＸ, Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ (72)発明者 アレキサンダー ティー． フローレンス イギリス ダブリュシー１エヌ １エーエ ックス ロンドン ブルンズウィック ス クエアー 29／39 ザ スクール オブ ファーマシー， ユニヴァーシティ オブ ロンドン (72)発明者 ティー． サクチヴェル イギリス ダブリュシー１エヌ １エーエ ックス ロンドン ブルンズウィック ス クエアー 29／39 ザ スクール オブ ファーマシー， ユニヴァーシティ オブ ロンドン (72)発明者 アンドリュー エフ． ウィルダースピン イギリス ダブリュシー１エヌ １エーエ ックス ロンドン ブルンズウィック ス クエアー 29／39 ザ スクール オブ ファーマシー， ユニヴァーシティ オブ ロンドン (72)発明者 イストヴァン トス イギリス ダブリュシー１エヌ １エーエ ックス ロンドン ブルンズウィック ス クエアー 29／39 ザ スクール オブ ファーマシー， ユニヴァーシティ オブ ロンドン
Claims (20)
- 【請求項１】 １つのデンドロン及び官能基が伸張して
なる焦点の基を含む核を有する樹状化合物であって、該
デンドロンは樹状に結合したアミノ酸単位Ｉ 【化１】 （式中、Ｒ1はＣ1-6−アルキレンであり、Ｘは−Ｏ−、
−Ｓ−、−ＮＨ−及び−ＣＯ−からなる群より選択さ
れ、デンドロンのそれぞれの単位は同一又は異なる基Ｒ
1及びＸを有していてもよい。）を有しており、第１デ
ンドロンは、樹状に結合したアミノ酸単位をｎ（ｎは１
又はそれ以上）レベル及び２n個の末端枝を有してお
り、それらの末端枝のうちｐ（ｐは少なくとも２）個の
末端枝にはアンカー基 【化２】 （式中、Ｙは、−ＣＯ−、−ＮＨ−、−Ｏ−及び−Ｓ−
から選択される。Ｘ及びＹの少なくとも１つが−ＣＯ−
である場合、Ｒ2は、Ｃ6-24−アルキル、−アルケニル
又は−アルキニル基の少なくとも１種を有する有機基で
あり、Ｒ3は、水素、アミン、ブロックアミン、ヒドロ
キシル、Ｃ1-24アルコキシ、チオール、ＣＯＯＨ、及び
Ｃ6-24−アルキル，−アルケニル若しくは−アルキニル
基，Ｃ1-6−アルカノイルオキシ又はＣ1-6−アルカノイ
ルアミノ基の少なくとも１種を有する有機基からなる群
より選択されるものであり、いずれも活性配位子又は糖
分子により置換されていてもよい。）が結合しており、 第２デンドロンは、上記式Ｉ（式中、基Ｒ1及びＸは互
いに同一又は異なっていてもよく、或いは第１デンドロ
ン中のアミノ酸単位と同一又は異なっていてもよい。）
で示す樹状に結合したアミノ酸単位をｍレベル（ｍは１
又はそれ以上）並びに２m個の末端枝を有しており、そ
れらはいずれも共役しておらず、ＮＨ2、Ｎ+Ｈ2Ｒ
11（Ｒ11は水素若しくはＣ1-4アルキルである。）、Ｃ
ＯＯＨ、ＣＯＯ-、ＯＨ及びＳＨから選択される基であ
るか、又は、末端の−Ｘ−、−ＮＨ−若しくは−ＣＯ−
基を通して基Ｒ12（Ｒ12は、メチロール基、活性配位子
又は糖部分を有する有機基）と共役している樹状化合
物。 - 【請求項２】 焦点となる単位が、例えば、式（Ｉ） 【化３】 （式中、Ｘ及びＲ1は、請求項１の定義に同じであ
る。）で表されるアミノ酸単位であり、第１デンドロン
が結合の１つに結びつき、第２デンドロンが残りの２つ
の結合の１つに付き、第３の結合が有機基に結合する請
求項１に記載の化合物。 - 【請求項３】 焦点となる単位中のＸが、−ＣＯ−又は
−ＮＨ−、好ましくは−ＮＨ−である請求項１に記載の
化合物。 - 【請求項４】 焦点となる単位が、リジン又はオルニチ
ンから形成され、Ｒ1が（ＣＨ2）4又は（ＣＨ2）3であ
り、Ｘがいずれの場合も−ＮＨ−である請求項３に記載
の化合物。 - 【請求項５】 ２n＝ｐである請求項１に記載の化合
物。 - 【請求項６】 ｎが２である前記請求項のいずれかに記
載の化合物。 - 【請求項７】 ｍが３〜５である請求項１に記載の化合
物。 - 【請求項８】 第２デンドロンのそれぞれの末端枝が、
−ＮＨ2又は−Ｎ+Ｈ2Ｒ11である請求項１に記載の化合
物。 - 【請求項９】 式Ｉのそれぞれの基において、基Ｒ1及
びＸが同一である請求項１に記載の化合物。 - 【請求項１０】 Ｘが−ＮＨ−であって、Ｒ1が−（Ｃ
Ｈ2）4又は（ＣＨ2）3−である請求項９に記載の化合
物。 - 【請求項１１】 核の焦点となる単位を通して、好まし
くはスペーサーを介して樹脂支持体に結合している請求
項１に記載の化合物。 - 【請求項１２】 請求項１に記載の化合物を含有する組
成物。 - 【請求項１３】 薬学的な賦形剤及び請求項１に記載の
化合物を含有する薬学的組成物。 - 【請求項１４】 ２つの反応性基を有する焦点となる試
薬を、第１デンドロン製造工程の第１シリーズにおいて
以下のように反応させる合成方法： １．式II 【化４】 （式中、Ｒ1及びＸは請求項１に同じ。Ｒ14は、Ｘが−
Ｏ−、−Ｓ−若しくは−ＮＨ−の場合にＨであるか、Ｘ
が−ＣＯ−の場合にＯＨであるか、又は保護基であり、 Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒドロキシル又はカルボン
酸活性基であり、 Ｒ16は、Ｈ、アミン保護基又はアミン活性基である。但
し、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも２つは活性基では
なく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも１つは保護基で
はない。）で表されるアミノ酸試薬を、２つの反応性基
を有する焦点となる試薬と反応させ、 該反応は、必要に応じて焦点となる試薬の所望の反応性
基を脱保護及び／又は活性化する工程の後であってもよ
く、それにより焦点となる試薬の少なくとも１つの反応
性基がＲ14Ｘ−、Ｒ15−ＣＯ−及びＲ16−ＮＨ−の基の
１つと反応する； ２．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護し、及び／又は一般式ＩＩ 【化５】 （式中、基Ｒ1、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は、第１工程に同
じであり、第１工程において使用する３官能性の試薬と
同一又は異なっている。）で表される３官能性試薬の少
なくとも２当量と反応させる； ３．樹状に結合したアミノ酸がｎレベル形成されるま
で、第２工程のｑ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少
なくとも２(q+1)当量の３官能性試薬を用いて第２工程
を（ｎ−１）回繰返す； ４．２n個の基Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−の
少なくとも２つを、必要に応じて脱保護及び／又は活性
化し、一般式III 【化６】 （式中、Ｙ、Ｒ2及びＲ3は前記に同じ。Ｒ17は、Ｙが−
ＣＯ−の場合はＯＨ又はカルボン酸活性基であり、 或いは、Ｒ17は、Ｙが−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−の場
合はそれぞれＨ若しくはアミン、ヒドロキシル又はチオ
ール活性基である）で表される親油性試薬と反応させる
アンカー基の結合工程であり、ここで、前記少なくとも
２つの基がＲ17Ｙ−と反応して、 【化７】 基をＸ、ＣＯ−又はＮＨ−と共役させる；そして、デン
ドロン形成の第２シリーズは、 ５．焦点となる試薬の他の反応性基を、好ましくは上記
第１工程と分離した工程において、式II 【化８】 （式中、Ｒ1及びＸは前記に同じ。 Ｒ14は、Ｘが−Ｏ−、−Ｓ−若しくは−ＮＨ−の場合に
Ｈであり、Ｘが−ＣＯ−の場合にＯＨであり、又は保護
基であり、 Ｒ15は、カルボン酸保護基、ヒドロキシル又はカルボン
酸活性基であり、 Ｒ16は、Ｈ、アミン保護基又はアミン活性基である。但
し、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも２つは活性基では
なく、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16の少なくとも１つは保護基で
はない。）で表されるアミノ酸試薬と反応させ、 該反応は焦点となる試薬の所望の反応性基及び／又は基
−ＸＲ14、−ＣＯＲ15及び−ＮＨＲ16を脱保護及び／又
は活性化した後であってもよく、それによって焦点とな
る試薬のもう１つの反応性基が基Ｒ14Ｘ−、Ｒ15−ＣＯ
−及びＲ16−ＮＨ−の１つと反応する； ６．第２工程においては、上記工程の生成物の未反応基
Ｒ14Ｘ−、Ｒ15ＣＯ−及びＲ16ＮＨ−のいずれもを、必
要に応じて脱保護及び／又は活性化し、一般式ＩＩ 【化９】 （式中、Ｒ1、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は、第１工程に同じ
であり、第１工程において使用する３官能性試薬と同一
又は異なる。）で表される３官能性試薬の少なくとも２
当量と反応させる； ７．樹状に結合したアミノ酸がｍレベル形成されるま
で、第６工程のｐ回目の繰返しのそれぞれの場合に、少
なくとも２(p+1)当量の３官能性試薬を用いて第６工程
を（ｍ−１）回繰返す。 - 【請求項１５】 式VI 【化１０】 （式中、Ｒ17、Ｒ18及びＲ19は、それぞれ請求項１４に
規定されたＲ14、Ｒ16及びＲ15と同じ基から選ばれる）
で表される焦点となる試薬を、基−ＸＲ17、−ＮＨＲ18
及び−ＣＯＲ19の１つと反応できるペンダント基を有す
る基質と反応させる予備的な工程であって、必要に応じ
て前記ペンダント基又は焦点となる試薬の前記基の１つ
の脱保護及び／又は活性化後であってもよく、これによ
り焦点となる試薬を基質に結合させる予備的な工程を含
む請求項１４に記載の方法。 - 【請求項１６】 基質が、固定された支持体、好ましく
は樹脂、より好ましくはポリアクリルアミド系樹脂であ
る請求項１５に記載の方法。 - 【請求項１７】 樹脂がペンダントアミン基を有してお
り、活性化化合物の存在下において基−ＣＯＲ19が前記
ペンダントアミン基と反応して、ペプチド結合を形成す
る請求項１６に記載の方法。 - 【請求項１８】 Ｒ17及びＲ18が各々異なるアミン保護
基である請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 それぞれのシリーズのそれぞれの工程
において、式IIの試薬が同じであり、好ましくは式IIの
試薬がいずれのシリーズでも同じである請求項１４に記
載の方法。 - 【請求項２０】 Ｘが−ＮＨ−であり、基Ｒ14及びＲ15
が同一のアミノ保護基である請求項１９に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97304060A EP0884327B1 (en) | 1997-06-11 | 1997-06-11 | Dendritic lysine-based polypeptides for targeted drug delivery |
| EP97304060.3 | 1997-06-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11124396A true JPH11124396A (ja) | 1999-05-11 |
Family
ID=8229369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10202681A Withdrawn JPH11124396A (ja) | 1997-06-11 | 1998-06-11 | 樹状ポリペプチド |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6194543B1 (ja) |
| EP (1) | EP0884327B1 (ja) |
| JP (1) | JPH11124396A (ja) |
| DE (1) | DE69704269T2 (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE311202T1 (de) * | 1998-09-23 | 2005-12-15 | Univ London Pharmacy | Kationische dendrimer verbindungen und deren verwendung als oligonucleotid/polynucleotid träger |
| GB9912911D0 (en) * | 1999-06-04 | 1999-08-04 | Zeneca Ltd | Chemical process |
| US6774102B1 (en) * | 1999-09-29 | 2004-08-10 | Gambro Dialysatoren Gmbh & Co. Kg | Extracorporeal endotoxin removal method |
| JP2004536027A (ja) | 2000-12-01 | 2004-12-02 | ジョーンズ・ホプキンス・ユニーバーシティー | グリコシル化／ガラクトシル化ペプチドの接合体、二官能性リンカー、およびヌクレオチドのモノマー／ポリマー、および関連する組成物および使用方法 |
| US7314956B2 (en) | 2001-08-08 | 2008-01-01 | Vaxim, Inc. | Multifunctional carrier for the delivery of a pharmacological agent or genetic material into a cell |
| KR20080031421A (ko) * | 2005-07-18 | 2008-04-08 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 양쪽성 덴드리머의 제조방법 |
| US9603941B2 (en) * | 2006-01-24 | 2017-03-28 | Minghui Chai | Method of preparing dendritic drugs |
| US9127130B2 (en) | 2006-08-11 | 2015-09-08 | Starpharma Pty Ltd. | Polylysine dendrimer contrast agent |
| CN101516969B (zh) * | 2006-08-11 | 2013-07-03 | 星药股份有限公司 | 靶向的聚赖氨酸树状聚体治疗剂改性的大分子2 |
| US20110150837A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-23 | Flamel Technologies | Amphiphilic polymer functionalized by methionine |
| CN102936337B (zh) * | 2012-10-30 | 2014-10-22 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 聚(γ-炔丙基-L-谷氨酸酯)-聚氨基酸嵌段共聚物、功能化嵌段共聚物及制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4289872A (en) * | 1979-04-06 | 1981-09-15 | Allied Corporation | Macromolecular highly branched homogeneous compound based on lysine units |
| US5338532A (en) * | 1986-08-18 | 1994-08-16 | The Dow Chemical Company | Starburst conjugates |
| GB2217319A (en) | 1988-04-19 | 1989-10-25 | Synpharm Ltd | Racemic and optically active fatty amino acids, their homo- abd hetero-oligomers and conjugates, the process of their production, their pharmaceutical composi |
| GB8812214D0 (en) | 1988-05-24 | 1988-06-29 | Hoffmann La Roche | Use of peptide from circumsporozoite protein of p falciparum as universally recognized t-cell epitope |
| US5292868A (en) * | 1989-05-26 | 1994-03-08 | Akzo N.V. | Chelating agents for attaching metal ions to proteins |
| US5580563A (en) * | 1992-05-01 | 1996-12-03 | Tam; James P. | Multiple antigen peptide system having adjuvant properties, vaccines prepared therefrom and methods of use thereof |
| GB9215780D0 (en) * | 1992-07-24 | 1992-09-09 | Univ London Pharmacy | Peptide compounds |
| EP0670728A4 (en) * | 1992-11-12 | 1996-04-17 | Molecular Dynamics Inc | PIPTIDE-BASED LIPOPHILE-BASED CARRIERS FOR TARGETED MEDICINE ADMINISTRATION USING A RATIONAL MEDICINE-BINDING DESIGN. |
| WO1995000540A1 (en) * | 1993-06-18 | 1995-01-05 | Robert Webber | Synthetic carrier and immunogen |
| US5795582A (en) * | 1996-02-07 | 1998-08-18 | Novavax, Inc. | Adjuvant properties of poly (amidoamine) dendrimers |
-
1997
- 1997-06-11 EP EP97304060A patent/EP0884327B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-11 DE DE69704269T patent/DE69704269T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-06-11 JP JP10202681A patent/JPH11124396A/ja not_active Withdrawn
- 1998-06-11 US US09/096,411 patent/US6194543B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0884327B1 (en) | 2001-03-14 |
| DE69704269D1 (de) | 2001-04-19 |
| EP0884327A1 (en) | 1998-12-16 |
| US6194543B1 (en) | 2001-02-27 |
| DE69704269T2 (de) | 2001-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Crespo et al. | Peptide and amide bond-containing dendrimers | |
| AU764144B2 (en) | Polyamide chains of precise length, methods to manufacture them and their conjugates | |
| US6217873B1 (en) | Polyoxime compounds and their preparation | |
| CA2101361A1 (en) | Low diol polyalkylene oxide biologically active proteinaceous substances | |
| JP3181276B2 (ja) | 樹枝状分岐構造を持つ両親媒性化合物 | |
| JPH08507549A (ja) | 水溶性の非免疫原性ポリアミド架橋剤 | |
| JPH06219966A (ja) | スターバーストコンジユゲート | |
| WO1996041813A9 (en) | Functionalized polymers for site-specific attachment | |
| JP2002506087A (ja) | 近位の反応性基を持つポリ（エチレングリコール）誘導体 | |
| JPH11124396A (ja) | 樹状ポリペプチド | |
| AU772167B2 (en) | Polypeptide dendrimers as unimolecular carriers of diagnostic imaging contrast agents, bioactive substances and drugs | |
| AU686153B2 (en) | Polyoxime compounds and their preparation | |
| Hudecz | 13 Synthesis of Peptide Bioconjugates | |
| WO1994025071A1 (en) | Polyoxime compounds and their preparation | |
| WO1991015242A1 (en) | Conjugate compounds of polymers with other organic molecular entities | |
| Inman et al. | Synthesis of N. alpha.-(tert-butoxycarbonyl)-N. epsilon.-[N-(bromoacetyl)-. beta.-alanyl]-L-lysine: Its use in peptide synthesis for placing a bromoacetyl cross-linking function at any desired sequence position | |
| WO1995000540A1 (en) | Synthetic carrier and immunogen | |
| CN113164613B (zh) | 二聚的肽-磷脂缀合物的优化方法 | |
| EP0536343B1 (en) | Targeted polymeric conjugates of cyclosporin and method for their preparation | |
| Hudecz | Branched polymeric polypeptides with poly [Lys] | |
| JPH10509208A (ja) | 部位特異的結合のための官能化されたポリマー | |
| Peterse | Synthesis of cyclic peptides as bioconjugation platforms | |
| Aggeli et al. | Design of Synthetic Branched Chain Polymeric Polypeptides for Targeting/Delivering Bioactive Molecules | |
| US20040005708A1 (en) | Polypeptide derivatives and nucleic acid carriers containing the same | |
| Malda | Designing dendrimers for use in biomedical applications |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050526 |
|
| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20070724 |