MXPA06011990A - Microcapsulas de liberacion sostenida a base de poli(lactido-co-glicolido) que comprenden un polipeptido y un azucar. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe composiciones para la liberacion sostenida de polipeptidos biologicamente activos, y metodo para formar y usar dichas composiciones, para la liberacion sostenida de polipeptidos biologicamente activos; las composiciones de liberacion sostenida de esta invencion, comprenden un polimero biocompatible que tiene dispersado en este, un polipeptido biologicamente activo y un azucar.

Description

MICROCAPSULAS DE LIBERACIÓN SOSTENIDA A BASE DE POLKLACTIDO-CO-GLICOLIDOI QUE COMPRENDEN UN POLIPEPTIDO Y UN AZÚCAR SOLICITUDES, RELACIONADA(S) Esta solicitud reclama el beneficio de la Solicitud Provisional Estadounidense No. 60/563,245, presentada el 15 de Abril de 2004, y USSN , presentada en Abril de 2005 (Correo Urgente No. EV 57190029 US), titulada "Polymer-Based Sustained Reléase Device" ("Dispositivo de Liberación Sostenida a Base de Polímero"), Documento del Abogado Designado No. 1733.2056 US1 , con inventores listados Steven G. Wright, Troy Christensen, T ean Yeoh, Michael Rickey, Joyce Hotz, Rajesh Kumar, y Henry R. Constantino. Las enseñanzas completas de la(s) solicitud(es) anteriores están incorporadas en este documento por referencia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Numerosas proteínas y péptidos, colectivamente referidos en este documento como péptidos, presentan actividad biológica in vivo y son útiles como medicamentos. Muchas enfermedades o condiciones requieren administración de un nivel sostenido de medicamento para proporcionar los efectos profilácticos y/o terapéuticos más efectivos. Los niveles sostenidos son a menudo logrados por la administración de polipéptidos biológicamente activos por inyecciones subcutáneas frecuentes, las cuales a menudo resultan en niveles fluctuantes de medicamento y escasa comodidad al paciente. Como una alternativa, el uso de materiales biodegradables, tales como polímeros, que encapsulan el medicamento, se pueden emplear como un sistema de suministro sostenido. El uso de polímeros biodegradables, por ejemplo, en la forma de micropartículas o microportadores, puede proporcionar una liberación sostenida de medicamento, utilizando la inherente capacidad de biodegradación del polímero para controlar la liberación del medicamento, con ello, proporcionando un nivel más consistente, sostenido de medicamento y comodidad mejorada al paciente. Sin embargo, estos dispositivos de liberación sostenida pueden a menudo, presentar estallidos iniciales elevados de medicamento y mínima liberación posterior, resultando en niveles de fármaco en el suero fuera de la ventana terapéutica y/o escasa biodisponibilidad del medicamento. Además, la presencia de polímero, temperaturas fisiológicas y respuesta corporal a la composición de liberación sostenida, puede ocasionar que el medicamento sea alterado (por ejemplo, degradado, agregado), con ello, interfiriendo con el perfil de liberación deseado para el medicamento. Además, métodos usados para formar liberación sostenida, pueden resultar en pérdida de actividad del medicamento debido a la inestabilidad del medicamento y los efectos degradativos de las etapas de procesamiento. Los efectos degradativos son particularmente problemáticos cuando el medicamento es un polipéptido. Por lo tanto, existe una necesidad de medios para administrar polipéptidos biológicamente activos en una forma sostenida en donde la cantidad de polipéptido administrado está en niveles terapéuticos, y retiene actividad y potencia por el periodo deseado de liberación. Mientras se ha desarrollado mucho trabajo que dirige estos problemas, se requieren nuevas soluciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al descubrimiento de que perfiles de liberación superior (tales como aquellos caracterizados por una relación de Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos), se pueden lograr con una formulación que contiene algunos componentes, controlando la relación del agente coacervante al solvente de polímero, tal como la relación de aceite de silicona a solvente de polímero, en el procedimiento de manufacturación, con ello, logrando un bajo volumen de poro. Además, se ha encontrado que este perfil superior de liberación deseado, se puede lograr controlando el procedimiento de coacervación, tal como la longitud de tiempo de adición del agente coacervante tal como aceite de silicona, la longitud del periodo de mantenimiento después de la adición, y la longitud de la transferencia a un agente de templado. También se ha encontrado que las composiciones de liberación sostenida de bajo volumen de poro, tales como micropartículas, se pueden lograr controlando el tamaño de la gotita de emulsión interna. Además, se ha encontrado que controlando el tamaño de partícula y la distribución del tamaño de partícula, además de proporciona y contribuye a perfiles superiores de liberación deseados (tales como caracterizados por una relación Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos) y un perfil lote a lote más consistente. Esta invención se refiere a composiciones para la liberación sostenida de agentes, tales como polipéptidos biológicamente activos, y métodos para formar y usar tales composiciones, para la liberación sostenida de polipéptidos biológicamente activos. Las composiciones de liberación sostenida de esta invención, comprenden un polímero biocompatible, un agente, tal como un polipéptido biológicamente activo y un azúcar. El polipéptido y azúcar son preferiblemente dispersados en el polímero. El polipéptido y azúcar pueden ser dispersados separadamente o, preferiblemente, juntos. La composición de liberación sostenida proporciona un perfil de liberación deseable y consistente. En una modalidad particular, el perfil es caracterizado por tener una relación de Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos. En una modalidad preferida, el polipéptido biológicamente activo es un polipéptido glucoregulador o antidiabético, tal como GLP-1 , GLP-2, exendina-3, exendina-4 o un análogo, derivado o agonista del mismo, preferiblemente exendina-4. El azúcar es preferiblemente sacarosa, manitol o una combinación de los mismos. Una combinación preferida incluye exendina-4 y sacarosa y/o manitol. Adicionalmente o alternativamente, la composición de liberación sostenida comprende un polímero biocompatible, un agente, tal como un polipéptido biológicamente activo y un azúcar, en donde la composición tiene un volumen de poro total de aproximadamente 0.1 ml/g o menos. En una modalidad específica, el volumen de poro total es determinado usando porosimetría de intrusión de mercurio. Adicionalmente o alternativamente, la composición de liberación sostenida consiste esencialmente de, o, consiste alternativamente de, un polímero biocompatible, exendina-4 a una concentración de aproximadamente 3% en p/p y sacarosa a una concentración de aproximadamente 2% en p/p. El polímero biocompatible es preferiblemente un polímero poli láctido coglicólido. La invención también incluye un método para formar composiciones para la liberación sostenida de agentes biológicamente activos, tales como polipéptidos, los cuales comprenden formar una mezcla combinando una fase acuosa que comprende agua, un agente, tal como un polímero soluble en agua, y un azúcar con una fase aceitosa que comprende un polímero biocompatible y un solvente para el polímero, formando una emulsión agua en aceite, mediante, por ejemplo, sonicando u homogenizando la mezcla; agregando aceite de silicona a la mezcla para formar micropartículas embriónicas; transfiriendo las micropartículas embriónicas a un solvente templado para endurecer las micropartículas; colectar las micropartículas endurecidas, y secar las micropartículas endurecidas. En una modalidad particular, el aceite de silicona se agrega en una cantidad suficiente para lograr una relación de aceite de silicona a solvente de polímero de aproximadamente 1.5:1. Adicionalmente o alternativamente, el polímero está presente en la fase aceitosa a aproximadamente 10% en p/v o menos. El agente o polipéptido, por ejemplo, exendina-4, puede estar presente en la composición descrita en este documento, a una concentración de aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 10% en p/v, basada en el peso total de la composición final. Además, el azúcar, por ejemplo, sacarosa, pueden estar presentes en una concentración de aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 5% en p/p del peso final de la composición. La composición de esta invención se puede administrar a un humano, u otro animal, por inyección, implante (por ejemplo, subcutáneamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, intracranealmente, e intradermalmente), administración a membranas mucosales (por ejemplo, intranasalmente, intravaginalmente, intrapulmonarmente o por medio de supositorio), o suministro in situ (por ejemplo, por enema o rocío de aerosol). Cuando la composición de liberación sostenida ha incorporado en esta una hormona, particularmente un péptido anti-diabético o glucoregulador, por ejemplo, GLP-1 , GLP-2, exendina-3, exendina-4, o agonistas, análogos o derivados de los mismos, la composición es administrada en una cantidad terapéuticamente efectiva para tratar un paciente que sufre de diabetes mellitus, tolerancia a la glucosa deteriorada (IGT), obesidad, trastorno cardiovascular (CV) o cualquier otro trastorno que puede ser tratado por uno de los polipéptidos o derivados anteriores, análogos o agonistas de los mismos.

El uso de un azúcar en las composiciones de liberación sostenida de la invención, mejora la biodisponibilidad del polipéptido biológicamente activo incorporado, por ejemplo, péptidos anti-diabéticos o glucoreguladores, y minimiza la pérdida de actividad debido a inestabilidad y/o interacciones químicas entre el polipéptido y otros componentes contenidos o usados en la formulación de la composición de liberación sostenida, mientras se mantiene un excelente perfile de liberación. En una modalidad, la composición contiene agente activo exendina-4 a aproximadamente 5%, azúcar a aproximadamente 2% y biopolímero. En otra modalidad, la composición contiene agente activo de exendina-4 a aproximadamente 3%, azúcar a aproximadamente 2% y biopolímero. En una modalidad adicional, la composición contiene un polímero PLGA. En aún una modalidad adicional, la composición contiene un polímero PLG 4A, el cual comprende aproximadamente una relación de 50 por ciento en mole de DL láctido a 50 por ciento en mole de glicólido, con un grupo de extremo de ácido carboxílico libre no tapado (designación "4A"). En aún una modalidad adicional, la composición es formada como una micropartícula que tiene un tamaño de partícula, distribución de tamaño de partícula, y volumen de poro total, como se describe en este documento. En aún una modalidad adicional, el volumen de poro total es menos de aproximadamente 0.1 ml/g, el tamaño de partícula medio DV50 puede ser aproximadamente 50 micrones con una distribución de un límite inferior DV10 de aproximadamente 30 micrones y un límite superior DV90 de aproximadamente 90 micrones. En aún una modalidad adicional, se forman las micropartículas, obtenidas por o que se pueden obtener por los procedimientos descritos en este documento. En una de tal modalidad, el procedimiento es un procedimiento de agua/aceite/aceite ("W/O/O"), en donde el tamaño de la emulsión ¡nterna es como se describe en este documento. Además, el procedimiento puede incluir un aceite de silicona coacervado, el cual puede estar aproximadamente a una relación 1.5 a 1 con un solvente de polímero. Además, el procedimiento puede incluir controlar la etapa de coacervación como se describe en este documento, y aún además, en donde una transferencia de coacervado a la emulsión interna ocurre en aproximadamente 3 minutos o menos, una etapa de mantenimiento de aproximadamente 1 minuto o menos, y una etapa de transferencia rápida durante un periodo de menos de aproximadamente 3 minutos a un solvente templado/endurecido. En una modalidad adicional, el solvente es un solvente dual, preferiblemente una mezcia de heptano/etanol. En una modalidad adicional, las composiciones de la invención pueden ser además, formuladas a una forma adecuada para inyección a través de una aguja en un hospedero. Una composición inyectable puede comprender composiciones de micropartícula como se describe en este documento, en un vehículo de inyección acuoso de viscosidad apropiada. El vehículo de inyección acuosa puede tener una viscosidad de al menos 20 cp a 20°C, y además, puede tener una viscosidad mayor de 50 cp y menos de 60 cp a 20°C. Las micropartículas pueden ser suspendidas en el vehículo de inyección a una concentración mayor de aproximadamente 30 mg/ml para formar una suspensión, la fase fluida de la suspensión tiene una viscosidad de al menos 20 cp a 20°C. La composición pude también comprender un agente mejorador de la viscosidad, un agente mejorador de la densidad, un agente mejorador de la tonicidad, y/o un agente humectante. La viscosidad del vehículo de inyección proporciona inyectabilidad de la composición a través de una aguja que varía en diámetro desde aproximadamente calibre 18-23, más preferiblemente, aproximadamente aguja de calibre 18-25, y aún más preferiblemente, aproximadamente una guja de calibre 25. En una modalidad adecuada para el paso a través de una aguja de calibre 23, el vehículo de inyección comprende carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v), y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) u originalmente a 0.5% en agua. La solución es opcionalmente regulada en pH. En una modalidad adicional, las micropartículas que contienen exenátida como se describe anteriormente, son suspendidas en un vehículo de inyección de carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v), y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1% (v/v) u opcionalmente a 0.5% en agua. En una modalidad adicional, la concentración de micropartículas de exenátida es mayor de aproximadamente 30 mg/ml. Típicamente aproximadamente 100 hasta 200 mg de micropartículas secas se suspenden por ml de vehículo. Las ventajas de las formulaciones de liberación sostenida como se describen en este documento, incluyen comodidad y aceptación incrementada al paciente y elimina la necesidad de administración repetida, beneficio terapéutico incrementado eliminando fluctuaciones en la concentración de agente activo en niveles de la sangre, proporcionando un perfil de liberación deseado, y un potencial de disminución de la cantidad total de polipéptido biológicamente activo necesario para proporcionar un beneficio terapéutico reduciendo estas fluctuaciones. En aún otras modalidades, que incluyen las composiciones y procedimientos en este documento, el agente es exendina-4 que tiene una sustitución de aminoácido de leucina por metionina en la posición 14. Por ejemplo, una modalidad es una composición inyectable adecuada para el paso a través de una aguja de calibre 18-23, más preferiblemente, una aguja de calibre 25, que comprende una composición de liberación sostenida, que comprende un polímero DL PLG 4A 50:5, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 que tiene una sustitución de aminoácido de leucina por metionina en la posición 14, y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en donde la relación de Cmax a Cprom es de aproximadamente 3 o menos y el volumen de poro total de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos, suspendido en un vehículo de inyección que comprende carboximetiicelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v), y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1% (v/v) en agua.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica que muestra la relación entre el diámetro de poro promedio y la liberación in vitro para las composiciones de liberación sostenida descritas en este documento (A. S. = Sulfato de amonio). La Figura 2 es una gráfica que muestra el efecto de porosidad en la liberación in vitro de exendina-4 de micropartículas y el impacto que las condiciones de procesamiento, es decir, la relación de aceite de silicona a cloruro de metileno, tiene en la porosidad de las micropartículas formadas. Las Figuras 3A-3B son exploraciones de SEM criogénicos para formulaciones de micropartículas seleccionadas, descritas en este documento. Las Figuras 4A-4D son exploraciones de SEM criogénicos para formulaciones de micropartículas seleccionadas, descritas en este documento. La Figura 5 es un trazo de % residual de etanol y cloruro de metileno contra Tg para las formulaciones de micropartículas descritas en este documento. La Figura 6 es una curva farmacocinética representativa (concentración, pg/ml contra tiempo, días dentro del la inserción que muestra las concentraciones durante el primer día) para la Formulación 2-1 (3% de exendina-4 y 2% de sacarosa), Formulación 1 (3% de exendina-4 sola) y Formulación 4 (3% de exendina-4 y 0.5% de sulfato de amonio). La Figura 7 es una gráfica del perfil de liberación in vivo para las tres Formulaciones de micropartículas, 2, 2-1 y 2-2. La Figura 8 es una gráfica de los datos farmacocinéticos para Formulaciones de micropartículas 5-1 , 5-2 y 5-3. La Figura 9 es una gráfica que ilustra la relación entre los parámetros de procesamiento y el tamaño de emulsión ¡nterna logrado por el procedimiento.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones para la liberación sostenida de polipéptidos biológicamente activos, y métodos para formar y usar dichas composiciones, para la liberación sostenida de polipéptidos biológicamente activos. Las composiciones de liberación sostenida de esta invención, comprenden un polímero biocompatible, y agente, tal como un polipéptido biológicamente activo y un azúcar. El agente y azúcar son dispersados en el polímero biocompatible, separadamente o, preferiblemente juntos. En una modalidad particular, la composición de liberación sostenida es caracterizada por un perfil de liberación que tiene una relación de concentración de suero máxima (Cmax) a concentración de suero promedio (Cprom) de aproximadamente 3 o menos. Como se usa en este documento, los términos un o una, se refieren a una o más.

El agente En una modalidad preferida, el agente es un polipéptido biológicamente activo tal como un polipéptido antidiabético o glucororegulador, que incluye GLP-1 , GLP-2, exendina-3, exendina-4 o un análogo, derivado o agonista del mismo. Más específicamente, el polipéptido es exendina-4. Sin embargo, otros agentes pueden tomar ventaja de los descubrimientos hechos en este documento. Los polipéptidos biológicamente activos como se usan en este documento, se refieren colectivamente a proteínas y péptidos biológicamente activos y las sales de los mismos farmacéuticamente aceptables, los cuales están en su forma molecular, biológicamente activa cuando se liberan in vivo, con ello, poseyendo las propiedades terapéuticas, profilácticas y/o diagnósticas deseadas in vivo. Típicamente, el polipéptido tiene un peso molecular entre 500 y 200,000 Daltons. Los polipéptidos biológicamente activos adecuados incluyen, pero no se limitan a, glucagón, péptidos similares al glucagón tales como GLP-1 , GLP-2 u otros análogos de GLP, derivados o agonistas de Péptidos Similares a Glucagón, exendinas tales como, exendina-3, exendina-4, derivados, agonistas y análogos de los mismos, péptido intestinal vasoactivo (VIP), inmunoglobulinas, anticuerpos, citocinas (por ejemplo, linfocinas, monocinas, quimiocinas), interleucinas, factores de activación del macrófago, interferonas, eritropoyetina, nucleasas, factor necrosis del tumor, factores de estimulación de la colonia (por ejemplo, G-CSF), insulina, enzimas (por ejemplo, dismutasa de superóxido, activador del plasminógeno, etc.), supresores tumorales, proteínas sanguíneas, hormonas y análogos de hormonas y agonistas (por ejemplo, hormona de estimulación del folículo, hormona de crecimiento, hormona adrenocorticotrópica y hormona de liberación de la hormona luteinizante (LHRH), vacunas (por ejemplo, antígenos turnorales, bacterianos y virales), antígenos, factores de coagulación sanguínea, factores de crecimiento (NGF y RGF), gastrina, GRH, péptidos antibacterianos, tales como defensina, encefalinas, bradiquininas, calcitonina y muteínas, análogos, variantes de truncación, supresión y sustitución y sales farmacéuticamente aceptables de todos los mencionados anteriormente. La exendina-4 es un polipéptido de 39 aminoácidos. L secuencia de aminoácido de exendina-4 se puede encontrar en la Patente Estadounidense No. 5,424,286, publicada por Eng el 13 de Junio de 1995, contenido total de la cual está por este medio, incorporado por referencia. AC2993 y exenátida, son sinónimos con el término exendina-4. La exendina-4 se ha mostrado en humanos y animales para estimular la secreción de insulina en la presencia de concentraciones elevadas de glucosa en la sangre, pero no durante periodos de bajas concentraciones de glucosa en la sangre (hipoglicemia). También se ha mostrado suprimir la secreción del glucagón, vacío gástrico lento y afectar la absorción de alimento y peso corporal, así como también otras acciones. Como tal, la exendina-4 y análogos y agonistas de la misma, pueden ser empleados en el tratamiento de diabetes mellitus, IGT, obesidad, etc. La cantidad de polipéptido biológicamente activo, el cual está contenido dentro de la matriz polimérica de una composición de liberación sostenida, es una cantidad terapéuticamente, diagnósticamente o profilácticamente efectiva, la cual puede ser determinada por una persona de habilidad ordinaria en la técnica, tomando en consideración factores tales como peso corporal, condición a ser tratada, tipo de polímero usado y relación de liberación del polímero. Las composiciones de liberación sostenida generalmente contienen desde aproximadamente 0.01% (p/p) hasta aproximadamente 50% (p/p) del agente, por ejemplo, polipéptido biológicamente activo (tal como exendina-4) (peso total de la composición). Por ejemplo, la cantidad de polipéptido biológicamente activo (tal como exendina-4), puede ser desde aproximadamente 0.1% (p/p) hasta aproximadamente 30% (p/p) del peso total de la composición. La cantidad de polipéptido variará dependiendo del efecto deseado, potencia del agente, niveles planeados de liberación, y el tiempo transcurrido sobre el cual el péptido será liberado. Preferiblemente, el intervalo de carga es entre aproximadamente 0.1% (p/p) hasta aproximadamente 10% (p/p), por ejemplo, 0.5% (p/p) hasta aproximadamente 5% (p/p). Los perfiles de liberación superior se obtienen cuando el agente, por ejemplo, exendina-4, se carga a aproximadamente 3% p/p, y además cuando es aproximadamente 4% o aproximadamente 5%.

El azúcar Un azúcar, como se define en este documento, es un monosacárido, disacárido u oligosacárido (desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 monosacáridos) o derivado del mismo. Por ejemplo, alcoholes de azúcar de monosacáridos, son derivados adecuados incluidos en la presente definición de azúcar. Como tal, el manitol alcohol de azúcar, por ejemplo, el cual es derivado de mañosa monosacárido, está incluido en la definición de azúcar como se usa en este documento. Los monosacáridos adecuados incluyen, pero no se limitan a, glucosa, fructuosa y mañosa. Un disacárido, como se define además en este documento, es un compuesto el cual después de la hidrólisis, proporciona dos moléculas de un monosacárido. Disacáridos adecuados incluyen, pero no se limitan a, sacarosa, lactosa y trehalosa. Los oligosacáridos adecuados incluyen, pero no se limitan a, rafinosa y acarbosa. La cantidad de azúcar presente en la composición de liberación sostenida puede variar desde aproximadamente 0.01 % (p/p) hasta aproximadamente 50% (p/p), tal como desde aproximadamente 0.01% (p/p) hasta aproximadamente 10% (p/p), tal como desde aproximadamente 0.1 % (p/p) hasta aproximadamente 5% (p/p) del peso total de la composición de liberación sostenida. Se obtienen excelentes perfiles de liberación incorporando aproximadamente 2% de sacarosa (p/p). Alternativamente, la cantidad de azúcar presente en la composición de liberación sostenida puede ser referida a una relación en peso con el agente o polipéptido biológicamente activo. Por ejemplo, el polipéptido y azúcar pueden estar presentes en una relación desde aproximadamente 10:1 hasta aproximadamente 1 :10 en peso:peso. En modalidades particularmente preferidas, la relación del polipéptido (por ejemplo, exendina-4) a azúcar (por ejemplo, sacarosa), es aproximadamente 3:1 (p/p), 4:2 (p/p) y 5:2 (p/p). Las combinaciones de dos o más azúcares también se pueden usar. La cantidad de azúcar, cuando se emplea una combinación, es la misma como los intervalos mencionados anteriormente. Cuando el polipéptido es exendina-4, el azúcar es preferiblemente sacarosa, manitol o una combinación de los mismos.

El polímero Los polímeros adecuados para formar la composición de liberación sostenida de esta invención, son polímeros biocompatibles los cuales pueden ser ya sea polímeros biodegradables o no biodegradables o mezclas o copolímeros mismos. Un polímero es biocompatible si el polímero y cualquiera de los productos de degradación del polímero, no son tóxicos al recipiente y también no poseen efectos ¡ndeseados o deletéreos significantes en el cuerpo del recipiente, tal como una reacción inmunológica sustancial en el sitio de la inyección. Biodegradable, como se define en este documento, significa que la composición degradará o erosionará in vivo para formar unidades más pequeñas o especies químicas. La degradación puede resultar, por ejemplo, por procedimientos enzimáticos, químicos y físicos. Los polímeros biocompatibles, biodegradables adecuados incluyen, por ejemplo, poli(láctidos), poli(glicólidos), poli(láctido-co-glicólidos), poli(ácidos lácticos), poli(ácidos glicólicos), policarbonatos, poliesteraminas, polianhídridos, poli(aminoácidos), poliortoésteres, poli(dioxanonas), polo(alquilatos de alquileno), copolímeros o polietilenglicol y poliortoésteres, poliuretano biodegradable, mezclas de los mismos y copolímeros de los mismos.

Polímeros biocompatibles, no biodegradables adecuados, incluyen, polímeros no biodegradables seleccionados del grupo que consiste de poliacrilatos, polímeros de acetatos de etilen-vinilo y otros acetatos de celulosa acilo sustituidos, poliuretanos no degradables, poliestirenos, polivinilcloruro, polivinilfluoruro, poli(vinil imidazol), poliolefinas de clorosulfonato, óxido de polietileno, mezclas de los mismos, y copolímeros de los mismos. Pesos moleculares aceptables para polímeros usados en esta invención, se pueden determinar por una persona de habilidad ordinaria en la técnica, tomando en consideración factores tales como la relación deseada de degradación de polímero, propiedades físicas tales como resistencia mecánica, química de grupo final y relación de disolución de polímero en el solvente. Típicamente, una escala aceptable de peso molecular es de aproximadamente 2,000 Daltons hasta aproximadamente 2,000,000 Daltons. En una modalidad preferida, el polímero es un polímero o copolímero biodegradable. En una modalidad más preferida, el polímero es un poli(láct¡do-co-glicólido) (posteriormente "PLG"), con una relación de láctido:glicólido de aproximadamente 1 :1 y un peso molecular de aproximadamente 10,000 Daltons a aproximadamente 90,000 Daltons. En una modalidad aún más preferida, el peso molecular del PLG usado en la presente invención, tiene un peso molecular de aproximadamente 30,000 Daltons hasta aproximadamente 70,000 Daltons, tal como aproximadamente 50,000 hasta aproximadamente 60,000 Daltons.

El PLG puede poseer grupos de extremo ácido o grupos de extremo bloqueados, tales como se pueden obtener esterificando el ácido. Se obtienen resultados excelentes con un PLG con un grupo de extremo ácido. También se pueden seleccionar polímeros basados en la viscosidad inherente del polímero. Las viscosidades inherentes adecuadas incluyen aproximadamente 0.06 hasta 1.0 dL/g, tal como aproximadamente 0.2 hasta 0.6 dL/g, más preferiblemente, entre aproximadamente 0.3 hasta 0.5 dL/g. Los polímeros preferidos son elegidos de manera tal que degradarán en 3 a 4 semanas. Los polímeros adecuados se pueden adquirir de Alkermes, Inc. bajo el nombre comercial Medisorb®, tal como aquellos vendidos como 5050 DL 3A ó 5050 DL 4A. También se pueden usar de Boehringer Ingelheim Resomer® PLG, tal como Resomer® RG503 y 503H. La composición de liberación sostenida de esta invención, se puede formar en muchas formas tales como una película, una pelotilla, un cilindro, un disco o una micropartícula. Una micropartícula, como se define en este documento, comprende un componente de polímero que tiene un diámetro de menos de aproximadamente un milímetro y tiene polipéptido biológicamente activo dispersado o disuelto en este. Una micropartícula puede tener una forma esférica, no esférica o irregular. Típicamente, la micropartícula será de un tamaño adecuado para inyección. Una escala de tamaño típico para micropartículas es 1000 micrones o menos. En una modalidad particular, la micropartícula varía desde aproximadamente uno hasta aproximadamente 180 micrones en diámetro. En aún modalidades adicionales, los perfiles de liberación superior se obtienen cuando las micropartículas varían desde aproximadamente 1 hasta 100 micrones, desde aproximadamente 30 hasta 90 micrones, desde aproximadamente 50 hasta 70 micrones y aún además, el tamaño de partícula medio puede ser desde aproximadamente 50 hasta 60 micrones. En una modalidad, el tamaño de partícula medio no es menos de o igual a aproximadamente 50, 60 ó 70 micrones, y preferiblemente, menos de aproximadamente 80, 90 ó 100 micrones. A tamaños de partículas más grandes, las partículas son preferiblemente sustancialmente no agregadas para permitir el paso a través de una aguja de calibre 23, aún más preferiblemente, una aguja de calibre 25. En aún otra modalidad, se obtienen perfiles de liberación superior y consistente, controlando la distribución del tamaño de partícula. En una modalidad, un tamaño de partícula medio es aproximadamente 50 micrones y la escapa inferior y superior de partículas son de aproximadamente 30 y 90 micrones, respectivamente. La distribución de micropartículas puede ser descrita usando un diámetro medio de volumen. El diámetro medio de la distribución de volumen representa el centro de gravedad de la distribución y es un tipo de "tamaño de partícula promedio". En una modalidad, una composición tiene un diámetro medio de la distribución de volumen de aproximadamente 50 hasta JO micrones, aproximadamente 50 hasta 60 micrones o aproximadamente 50, 60 ó 70 micrones, con una Distribución de Volumen (DV) de menos de, o aproximadamente 5%, 10%, ó 15% a 30 micrones y una DV mayor de, o aproximadamente 80%, 85%, 90%, ó 95% a 90 micrones. En una modalidad, una composición tiene un diámetro medio de la distribución del volumen de aproximadamente 60 micrones, con una Distribución de Volumen (DV) de menos de o aproximadamente 10% a 30 micrones y una DV mayor de o aproximadamente 90% a 90 micrones.

Excipientes Adicionales Mientras es posible que se puedan agregar excipientes adicionales a las formulaciones de la invención reivindicada como es bien conocido en la técnica, un descubrimiento excelente de la presente invención es que un excelente perfil de liberación se puede lograr con las formulaciones simples descritas en este documento. Tales excipientes adicionales pueden incrementar o disminuir la relación de liberación del agente, y/o promover su estabilidad u otra propiedad deseable del agente. Los ingredientes los cuales pueden sustancialmente incrementar la relación de liberación, incluyen, agentes que forman poro, y excipientes los cuales facilitan la degradación del polímero. Por ejemplo, la relación de hidrólisis de polímero se incrementa en un pH no neutral. Por lo tanto, un excipiente acídico o básico tal como un ácido inorgánico o base inorgánica, se puede agregar a la solución de polímero, usada para formar las micropartículas, para alterar la relación de erosión del polímero. Los ingredientes los cuales pueden sustancialmente disminuir la relación de liberación incluyen, excipientes que disminuyen la solubilidad del agua del agente. Una modalidad preferida de las formulaciones de liberación sostenida descritas, consiste esencialmente del polímero biocompatible, el agente y el azúcar. Por "consiste esencialmente de", significa la ausencia de ingredientes los cuales incrementan sustancialmente la relación de liberación del agente activo de la formulación. Ejemplos de excipientes adicionales los cuales no se podría esperar incrementen sustancialmente o disminuyan la relación de liberación del agente, incluyen agentes activos adicionales e ingredientes inertes. En aún otra modalidad, la formulación consiste del polímero biocompatible, el agente y el azúcar. Por "consiste de", significa la ausencia de componentes o ingredientes distintos a aquellos listados y niveles residuales de materiales de partida, solventes, etc., de los procedimientos. Ha sido un descubrimiento sorprendente que agentes reguladores de pH tales como acetato, citrato, fosfato u otros reguladores de pH biológicamente compatibles, no son necesarios en la fase acuosa para lograr una formulación de liberación sostenida con el agente, por ejemplo, exendina-4, con buena a excelente biodisponibilidad. También fue sorprendente descubrir que la salación de sales fue innecesaria para controlar el estallido del agente, por ejemplo, exendina-4. Como tal, las composiciones de la invención también incluyen composiciones como se describe en este documento, en la ausencia sustancial (o completa) de regulador de pH y/o salación de sales. Alternativamente o adicionalmente, la composición de liberación sostenida de la invención tiene baja porosidad. En tales modalidades, la composición de liberación sostenida comprende un polímero biocompatible, un polipéptido biológicamente activo y un azúcar, en donde la composición tiene un volumen de poro total de aproximadamente 0.1 ml/g o menos. Además el volumen de poro total puede ser desde 0.0 hasta 0.1 ml/g y desde 0.01 hasta menos de 0.1 ml/g. Se ha encontrado que este volumen de poro total muy pequeño, conduce a un estallido inicial pequeño (liberación) de agente, y además, promueve un perfil de liberación sostenido más lento y/o más largo, que las formulaciones convencionales, y permite cambios de una Cmax a un tiempo posterior en un perfil. En una modalidad específica, el volumen de poro total es determinando usando porosimetría de intrusión de mercurio, por ejemplo, como se describe en más detalle abajo. En otra modalidad, cuando las composiciones de liberación sostenida tienen una baja porosidad como se describe en este documento, la cual sirve tanto para reducir la liberación inicial como para proporcionar liberación sostenida prolongada con una relación Cmax a Cprom deseable, pueden estar presentes excipientes adicionales. Tales agentes preferiblemente tienen poco o ningún efecto sustancial en la relación de liberación. Tales excipientes pueden incluir aquellos que proporcionan o mejoran la estabilidad del agente, ya sea durante la manufacturación, almacenamiento o liberación. Los estabilizadores adecuados incluyen, por ejemplo, carbohidratos, aminoácidos, ácidos grasos y agentes tensioactivos, y son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Además, estabilizadores incluyen "antioxidantes" tales como metionina, vitamina C, vitamina E y ácido maleico. El antioxidante puede estar presente como parte de una formulación acuosa estabilizada o agregado en la fase polimérica. Además, un regulador de pH se puede agregar. Los reguladores de pH son soluciones que contienen ya sea un ácido débil y una sal relacionada del ácido, o una base débil y una sal de la base. Los reguladores de pH pueden mantener un pH deseado para estabilizar la formulación durante cualquier etapa de manufacturación, almacenamiento o liberación. Por ejemplo, el regulador de pH puede ser una sal de fosfato monobásico o sal de fosfato dibásico o combinaciones de las mismas o un regulador de pH volátil, tal como bicarbonato de amonio. Otros reguladores de pH incluyen pero no se limitan a, acetato, citrato, succinato y aminoácidos tales como glicina, arginina e histidina. El regulador de pH puede estar presente en la formulación desde aproximadamente 0% hasta aproximadamente 10% del peso total, y preferiblemente menos de aproximadamente 10, 15, 20, 25 ó 30 nM. En vista de los nuevos aspectos físicos sorprendentes de las micropartículas de la invención y ¡os nuevos métodos de manufactura como se describen en este documento, se cree que la invención proporciona nuevas micropartículas y procedimientos aún cuando los excipientes están presentes que afectan la relación de liberación. Las nuevas propiedades de las micropartículas pueden contar o reducir los efectos de liberación indeseados de un excipiente necesario (tal como una sal estabilizante). En otras modalidades, los excipientes están presentes a niveles que afectan sustancialmente la relación de liberación para mejorar además un perfil de liberación deseado. Administración Las composiciones de la invención se pueden administrar de conformidad con métodos generalmente conocidos en la técnica. La composición de la invención se puede administrar a un paciente (por ejemplo, un humano en necesidad del agente) y otro animal, por inyección, implante (por ejemplo, subcutáneamente, ¡ntramuscularmente, intraperitonealmente, intracranealmente e intradermalmente), administración a membranas mucosales (por ejemplo, intranasalmente, intravaginalmente, intrapulmonarmente o por medio de un supositorio), oralmente, por inyección libre de agua (véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses No. 5312335 y 5630796, las cuales son incorporadas en este documento por referencia) o suministro in situ (por ejemplo, por enema o rocío de aerosol). La composición de liberación sostenida se puede administrar usando cualquier programa de dosificación, el cual logra los niveles terapéuticos deseados para el periodo de tiempo deseado. Por ejemplo, la composición de liberación sostenida se puede administrar y el paciente monitorear hasta que los niveles del fármaco sean suministrados de regreso a la línea base. Después de un retorno a la línea base, la composición de liberación sostenida se puede administrar nuevamente. Alternativamente, la administración subsecuente de la composición de liberación sostenida puede ocurrir antes de lograr los niveles de línea base en el paciente. Por ejemplo, cuando la composición de liberación sostenida ha incorporado en esta una hormona, particularmente un péptido anti-diabético o glucoregulador, por ejemplo, GLP-1 , GLP-2, exendina-3, exendina-4 o agonistas, análogos o derivados de los mismos, la composición es administrada en una cantidad terapéuticamente efectiva para tratar un paciente que sufre de diabetes mellitus, IGT, obesidad, trastorno cardiovascular (CV) o cualquier otro trastorno que puede ser tratado por uno de los péptidos o derivados anteriores, análogos o agonistas de los mismos. Otras condiciones las cuales pueden ser tratadas administrando la composición de liberación sostenida de la invención incluyen, diabetes Tipo I y Tipo II, la cual puede ser tratada con una composición de liberación sostenida que tiene insulina incorporada en esta. Además, cuando el polipéptido incorporado es FSH o análogos del mismo, la composición de liberación sostenida puede ser usada para tratar la infertilidad. En otros casos, la composición de liberación sostenida se puede usar para tratar Esclerosis Múltiple cuando el polipéptido incorporado es beta interferona o una muteína del mismo. Como se puede realizar, la composición de liberación sostenida se puede usar para tratar enfermedades las cuales responden a la administración de un polipéptido dado. En una modalidad adicional, la composición de liberación sostenida de la presente invención puede ser co-ad ministrada con un corticoesteroide. La coadministración de la composición de liberación sostenida de la invención con un corticoesteroide, puede además, incrementar la biodisponibilidad del polipéptido biológicamente activo de la composición de liberación sostenida. La coadministración de un corticoesteroide en combinación con composiciones de liberación sostenida, se describe en detalle en la Aplicación de Patente Estadounidense 60/419,430, titulada, "Method of Modifying the Reléase Profile of Sustained Reléase Compositions" ("Método para Modificar el Perfil de Liberación de Composiciones de Liberación Sostenida), por Dasch et al., el contenido completo de la cual es por este medio, incorporado por referencia. Los corticoesteroides, como se definen en este documento, se refieren a agentes anti-inflamatorios esteroidales, también referidos como glucocorticoides. Los corticoesteroides adecuados incluyen, pero no se limitan a, 21-Acetoxipregnenolona, Alclometasona, Algestona, Amcinonido, Beclometasona, Betametasona, Budesónido, Cloroprednisona, Clobetasol, Clobetasona, Clocortolona, Cloprednol, Corticoesterona, Cortisona, Cortivazol, Deflazacort, Desónido, Desoximetasona, Dexametasona, Disflorasona, Difiucortolona, Difluprednato, Enoxolona, Fluazacort, Fluclorónido, Flumetasona, Flunisólido, Flucinolona Acetónido, Fluocinónido, Fluocortin Butilo, Flucortolona, Fluorometolona, Acetato de Fluperolona, Acetato de Fluprednideno, Fluprednisolona, Flurandrenólido, Propionato de Fluticasona, Formocortal, Halcinónido, Propionato de Halobetasol, Halometasona, Acetato de Halopredona, Hidrocortamato, Hidrocortisona, Etabonato de Loteprednol, Mazipredona, Medrisona, Meprednisona, Metilprednisolona, Furoato de Mometasona, Parametasona, Prednicarbato, Prednisolona, Prednisolona 25-Dietilamino-acetato, Fosfato Sódico de Prednisolona, Prednisona, Prednival, Prednilideno, Rimexolona, Tixocortol, Triamcinolona (todas las formas), por ejemplo, Acetónido de Triamcinolona, éster metílico del ácido 21-oico de Acetónido de Triamcinolona, Benetónido de Triamcinolona, Hexacetónido de Triamcinolona, Diacetato de Triamcinolona, mezclas de los mismos farmacéuticamente aceptables y sales de los mismos y cualquiera de otros derivados y análogos del mismo. En una modalidad, el corticoesteroide puede ser co-incorporado en la composición de liberación sostenida que comprende el polímero biocompatible y el agente polipéptido biológicamente activo incorporado en este. En otra modalidad, el cortiocoesteroide puede ser separadamente incorporado en un segundo polímero biocompatible. El segundo polímero biocompatible puede ser el mismo o diferente del primer polímero biocompatible, el cual tiene el agente polipéptido biológicamente activo incorporado en este. En aún otra modalidad, el corticoesteroide puede estar presente en un estado no encapsulado, pero mezclado con la composición de liberación sostenida. Por ejemplo, el corticoesteroide puede ser solubilizado en el vehículo usado para suministrar la composición de liberación sostenida. Alternativamente, el corticoesteroide puede estar presente como un sólido suspendido en un vehículo apropiado. Además, el corticoesteroide puede estar presente como un polvo, el cual es mezclado con la composición de liberación sostenida. Se entiende que el corticoesteroide está presente en una cantidad suficiente para incrementar la biodisponibilidad del polipéptido biológicamente activo de la composición de liberación sostenida. La biodisponibilidad incrementada se refiere a un incremento en la biodisponibilidad del polipéptido biológicamente activo de la composición de liberación sostenida cuando se co-administra con un corticoesteroide, en comparación con la administración en la ausencia de un corticoesteroide durante un periodo de tiempo comenzando dos días posteriores a la administración y terminando al final del ciclo de liberación para la formulación particular. Como se usa en este documento, paciente se refiere a humanos, tales como en humano en necesidad del agente o terapia, profilaxis o método de diagnóstico. Como se define en este documento, una liberación sostenida del polipéptido biológicamente activo, es una liberación dei polipéptido de la composición de liberación sostenida de la invención, la cual ocurre durante un periodo el cual es más prolongado que el periodo durante el cual una cantidad biológicamente significante del polipéptido podría ser disponible después de la administración directa de una solución del polipéptido. Se prefiere que una liberación sostenida sea una liberación la cual ocurre sobre un periodo de al menos aproximadamente una semana, tal como al menos, aproximadamente dos semanas, al menos aproximadamente tres semanas o al menos aproximadamente cuatro semanas. La liberación sostenida puede ser una liberación continua o discontinua, con relaciones de liberación relativamente constantes o variantes. La continuidad de la liberación y el nivel de liberación se pueden afectar por el tipo de composición de polímero usada (por ejemplo, relaciones de monómeros, peso molecular, composiciones de bloque y combinaciones variantes de polímeros), carga de péptido y/o selección de excipientes para producir el efecto deseado. Como se usa en este documento, una cantidad terapéuticamente efectiva, cantidad profilácticamente efectiva o cantidad diagnósticamente efectiva, es la cantidad de la composición de liberación sostenida necesaria para provocar la respuesta biológica deseada después de la administración. La Cmax como se usa en este documento, es la concentración de fármaco del suero máxima la cual ocurre durante el periodo de liberación el cual es monitoreado. La cprom como se usa en este documento, es la concentración de fármaco del suero promedio, suministrada dividiendo el área bajo la curva (AUC) del perfil de liberación por la duración de la liberación. Se prefiere que la relación de Cmax a Cprom sea aproximadamente 3 ó menos. Este perfil es particularmente deseable de polipéptidos antidiabéticos o glucoreguladores, tales como aquellos descritos anteriormente, Una relación de aproximadamente 3 ó menos, puede proporcionar un Cprom en una ventana terapéutica mientras evita efectos adversos colaterales de fármaco, los cuales pueden resultar de relaciones superiores. Además, se ha encontrado que controlando los aspectos físicos de la composición de liberación sostenida, como se describe en este documento, se pueden lograr y controlar otras características deseadas de un perfil de liberación deseado superior. El procedimiento proporciona que las composiciones de la invención puedan tener un estallido superior reducido (es decir, liberación inicial; por ejemplo, Cma? a 0-1 día). En una modalidad, el estallido inicial es menos de aproximadamente 1 % del agente total. En otra modalidad, la liberación inicial es menos de aproximadamente 0.75% y además, menos de aproximadamente 0.5%. En este sentido, la relación Cmax a Cprom es menos de aproximadamente 3, y además, puede ser aproximadamente 1 hasta 3, y además puede ser aproximadamente 2 a 3. Además, si se presenta una Cmax, puede ser cambiado a un tiempo durante el periodo de liberación sostenida distinto del periodo de liberación inicial o estallido, en la "fase sostenida" de liberación. En una modalidad, la Cmax puede ocurrir al menos a 7, 14, 21 , 28, 35 ó 42 días posteriores a la administración y puede ocurrir en cualquier día completo entre estos. En una modalidad adicional, la Cma? es de aproximadamente 21 a 35 días después de la administración y en aún una modalidad adicional, es de aproximadamente 28 a 31 días, y además de aproximadamente 28 días después de la administración. En una modalidad adicional, la concentración máxima del fármaco (por ejemplo, concentración de plasma), ocurre al menos a 7, 14, 21 , 28, 35 ó 42 días posteriores a la administración y puede ocurrir en cualquier día completo entre estos. En aún una modalidad adicional, la concentración máxima del fármaco ocurre en aproximadamente 21 a 35 días después de la administración, particularmente en el caso de agentes glucoreguladores, tales como exendina-4, GLP-1 , GIP o sus análogos.

Los perfiles de liberación sostenida superior de la presente invención, permiten un método de administración de un agente activo o agentes en dosis que evitan un efecto indeseable (colateral), tal como náusea, reduciendo un estallido inicial indeseablemente alto. Además, los perfiles de liberación sostenida superior, permiten un método de administración de un agente activo o agentes en una dosis que es inferior que la terapéuticamente efectiva después de la dosificación de liberación sostenida múltiple logra una concentración terapéuticamente efectiva en el paciente. Esta concentración es entonces fácilmente mantenida por dosificación sostenida adicional. Una ventaja de este procedimiento de tratamiento permitido por la presente invención, es que los efectos indeseables (colaterales), tales como náusea, son reducidos o eliminados reduciendo estallidos indeseablemente elevados del fármaco y además, permitiendo a un paciente, adaptarse para incrementar gradualmente concentraciones del agente o agentes. Por consiguiente, en una modalidad, se proporcionan dosis de liberación sostenida múltiples, de manera tal que cada dosis sucesiva incrementa la concentración del agente o agentes en el paciente, en donde una concentración terapéuticamente efectiva de agente o agentes se logra en el paciente. En una modalidad adicional, cada dosis de liberación sostenida sucesiva es administrada de manera tal que su fase sostenida traslapa con la fase sostenida de la dosis previa. Además, una Cmax de dosis o su concentración máxima de agente, pueden traslaparse con ya sea la Cmax o concentración mínima de agente de la dosis previa. La biodisponibilidad, como tal término se usa en este documento, se refiere a la cantidad de terapéutico que alcanza el sistema de circulación. La biodisponibilidad puede ser definida como el Área Bajo la Curva calculada (AUC) para el perfil de liberación de un polipéptido particular durante el periodo de tiempo de inicio a la administración posterior y terminando en un punto de tiempo predeterminado. Como se entiende en la técnica, el perfil de liberación es generado graficando los niveles de suero de un agente biológicamente activo en un sujeto (eje Y) a puntos de tiempo predeterminados (eje X). La biodisponibilidad es a menudo referida en términos de % de biodisponibilidad, en la cual, la biodisponibilidad se logra para un polipéptido particular después de la administración de una composición de liberación sostenida, dividida por la biodisponibilidad lograda por un polipéptido particular después de la administración intravenosa de la misma dosis de fármaco, multiplicada por 100. Se puede confirmar una modificación del perfil de liberación por monitoreo farmacocinético apropiado del suero del paciente, para determinar la presencia del agente de polipéptido biológicamente activo. Por ejemplo, una prueba a base de anticuerpo (por ejemplo, ELISA e IRMA), como es bien conocido en la técnica, se puede usar para determinar la concentración de ciertos agentes polipéptidos biológicamente activos en el suero del paciente. Un ejemplo de tales pruebas se describe en este documento para exendina-4. Se puede usar monitoreo farmacodinámico del paciente para monitorear los efectos terapéuticos del agente después del paciente, para conformar la retención de la actividad biológica del agente liberado. Los métodos para monitorear los efectos farmacodinámicos se pueden seleccionar basados en el agente de polipéptido biológicamente activo siendo administrado usando técnicas ampliamente disponibles.

Manufactura Se conocen un número de métodos por los cuales se pueden formar las composiciones de liberación sostenida (matrices de polímero/polipéptido biológicamente activo) de la invención, particularmente composiciones que tienen baja porosidad como se describe en este documento. Los procedimientos detallados para algunos métodos de formación de micropartícula se exponen en los Ejemplos de Trabajo. En una modalidad preferida, el método de la invención para formar una composición para la liberación sostenida de polipéptido biológicamente activo, incluye formar una mezcla combinando una fase acuosa que comprende agua, agente, tal como un polipéptido soluble en agua, y un azúcar con una fase aceitosa que comprende un polímero biocompatible y un solvente para el polímero; formar una emulsión agua en aceite; agregar un agente de coacervación, por ejemplo, aceite de silicona, aceite vegetal o aceite mineral a la mezcla, para formar micropartículas embriónicas; transferir las micropartículas embriónicas a un solvente templado para endurecer las micropartículas; colectar las micropartículas endurecidas; y secar las micropartículas endurecidas. Este procedimiento es generalmente referido en este documento como un procedimiento agua en aceite (W/O/O).

Preferiblemente, el polímero puede estar presente en la fase aceitosa en una concentración que varía desde aproximadamente 3% p/p hasta aproximadamente 25% p/p, preferiblemente, desde aproximadamente 4% p/p hasta aproximadamente 15% p/p, tal como desde aproximadamente 5% p/p hasta aproximadamente 10% p/p. Se obtienen excelentes resultados en este documento usando una concentración de 6% p/p de PLG en la fase aceitosa. El polímero es generalmente combinado con un solvente de polímero. En donde el polímero es un PLG, tal como aquellos preferidos en este documento, el polímero es agregado a un solvente para PLG. Tales solventes son bien conocidos en la técnica. Un solvente preferido es cloruro de metileno. El agente y azúcar son agregados en la fase acuosa, preferiblemente en la misma fase acuosa. La concentración de agente es preferiblemente 10 a 100 mg/g, preferiblemente entre 50 a 100 mg/g. La concentración de azúcar es preferiblemente 10 a 50 mg/g y 30 a 50 mg/g. Las dos fases son entonces mezcladas para formar una emulsión. Se prefiere que la emulsión se forme de manera tal que el tamaño de la gotita de emulsión interna sea menos de aproximadamente 1 micrón, preferiblemente menos de aproximadamente 0J micrones, más preferiblemente menos de aproximadamente 0.5 micrones, tal como aproximadamente 0.4 micrones. Además, el tamaño de gotita de emulsión interna puede ser de aproximadamente 0.1 hasta 1.2 micrones, y aún además, puede ser de aproximadamente 0.1 hasta 1.0 micrones, y aún además, puede ser de aproximadamente 0.2 hasta 0.4 micrones. El límite inferior es determinado en gran parte por el deseo de minimizar la degradación del polímero, tal como por corte o agente de degradación, tal como por calor generado durante la formación de emulsión. Por consiguiente, en una modalidad, los métodos para formar una emulsión, por ejemplo, por homogenización, por alto corte o por sonicación, son aplicados intermitentemente y/o por periodos relativamente cortos, de manera tal que por ejemplo, la formación de calor en la emulsión es minimizada y/o se deja disipar. Por ejemplo, la homogenización se puede realizar por pasos discretos de emulsión de volumen. Los sonicadores y homogenizadores se pueden usar para formar tal emulsión. Un agente de coacervación como se usa en este documento, se refiere a cualquier aceite en el cual la solución polimérica (polímero y solvente) no es fácilmente solubilizada en y con ello, forma una fase distinta con la solución polimérica. Los agentes de coacervación adecuados para uso en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aceite de silicona, aceite vegetal, y aceite mineral. En una modalidad particular, el agente de coacervación es aceite de silicona y se agrega en una cantidad suficiente para lograr una relación de aceite de silicona a solvente de polímero desde aproximadamente 0.75:1 hasta 2:1. En una modalidad particular, la relación de aceite de silicona a polímero es desde aproximadamente 1 :1 hasta aproximadamente 1.5:1. En una modalidad preferida, la relación de aceite de silicona a polímero es aproximadamente 1.5:1. Las relaciones de otros agentes coacervantes se espera, sean similares, o puedan ser determinadas en detalle adicional usando las relaciones anteriores como puntos de partida. En una modalidad, una etapa de coacervación incluye un periodo de adición (o transferencia) de aproximadamente 1 a 5 minutos de agente de coacervación a la emulsión, o viceversa, de emulsión a agente de coacervación, además, tal etapa de adición o transferencia puede ser de aproximadamente 2 a 4 minutos, y aún además, es de aproximadamente 3 minutos. En aún otra modalidad, la etapa de adición o transferencia es menos de o igual a aproximadamente 1 , aproximadamente 2, aproximadamente 3 o aproximadamente 3.5 minutos. En una modalidad adicional, cuando la etapa de adición o transferencia es controlada como se describe en este documento, el agente de coacervación es un aceite de silicona como se describe en este documento. En aún otra modalidad, el volumen de agente de coacervación a volumen de solvente polimérico, es como se describe en este documento, por ejemplo aproximadamente 1.5 hasta 1 (por ejemplo, aceite de silicona a cloruro de metileno). En aún una modalidad adicional, una emulsión interna puede tener un tamaño de gotita de menos de aproximadamente 1 micrón, y aún además, puede ser de un tamaño como se describe en este documento. En una modalidad, el agente es un péptido glucoregulador tal como exendina-4, GLP1 , GIP o sus análogos y aún además, puede ser a concentraciones de carga como se describe en este documento. En aún una modalidad adicional, el polímero es PLGA como se describe en este documento, preferiblemente una forma aproximada 50:50 de láctido a glicólido. En una modalidad, cualquiera o ambas, la solución polimérica o solución acuosa que comprende la emulsión previo a la coacervación, pueden contener excipientes como se desee. La etapa de coacervación puede además, incluir un periodo de mantenimiento, en donde la mezcla del agente de coacervación y emulsión, se mantienen por un periodo corto de tiempo, por ejemplo, de aproximadamente 1 minuto hasta aproximadamente 5 minutos antes de proceder a la etapa de endurecimiento. Además, el periodo de mantenimiento puede ser de aproximadamente 30 a 90 segundos, y aún además, puede ser de aproximadamente 1 minuto. Además, en otras modalidades, el periodo de mantenimiento el cual puede ser opcional, puede ser menos de aproximadamente 1 minuto y además, puede ser menos de 30 segundos. En una modalidad adicional, la mezcla de coacervación es tratada para prevenir o minimizar la separación de los componentes agua/aceite/aceite. Tales tratamientos pueden ser por cualquier medio, por ejemplo, sacudimiento, homogenización, agitación, sonicación, mezclado, remover y presurización. Se eligen las condiciones para minimizar la degradación de los componentes de la composición, que incluyen destrucción del polímero embriónico/composición de agente, sea una micropartícula u otra forma. La etapa de coacervación además incluye la transferencia de la mezcla de coacervación a una solución de templado o endurecimiento. El templado puede comprender un no solvente polimérico. Los no solventes poliméricos son generalmente bien conocidos en la técnica. Un templado particularmente preferido comprende una mezcla de solvente de un solvente de endurecimiento y un solvente de lavado, por ejemplo, sistema de solvente heptano/etanol, por ejemplo, como se describe en la Patente Estadounidense No. 6,824,822, la cual es incorporada en este documento por referencia. Esta etapa de transferencia puede ocurrir inmediatamente, tan rápidamente como sea posible, y en modalidades adicionales, puede ser menos de aproximadamente 0.5, 1 , 2, 3 ó 4 minutos. El fármaco sólido puede también ser encapsulado usando una versión modificada del procedimiento descrito anteriormente. Este procedimiento modificado puede ser referido como un sólido/aceite/aceite (S/O/O): Por ejemplo, la exendina-4 sólida se suspende en cloruro de metileno que contiene PLG al 6% y es sonicada por aproximadamente cuatro minutos en hielo. El procesamiento subsecuente se conduce en una manera análoga al método W/O/O. En una modalidad, la composición contiene el agente activo exendina-4 a aproximadamente 5%, azúcar a aproximadamente 2% y biopolímero. En otra modalidad, la composición contiene agente activo de exendina-4 a aproximadamente 3%, azúcar a aproximadamente 2% y biopolímero. En una modalidad adicional, la composición contiene un polímero PLGA. En aún una modalidad adicional, la composición contiene un polímero PLG 4A, el cual comprende aproximadamente una relación de 50 por ciento en mole de láctido DL hasta 50 por ciento en mole de glicólido, con un grupo de extremo de ácido carboxílico libre no tapado (designación "4A"). En aún una modalidad adicional, la composición es formada como una micropartícula que tiene un tamaño de partícula, distribución de tamaño de partícula y volumen de poro total como se describe en este documento. En aún una modalidad adicional, el volumen de poro total es menos de aproximadamente 0.1 ml/g, el tamaño de partícula medio puede ser de aproximadamente 50 micrones, con una distribución de un límite ¡nferior de aproximadamente 30 micrones y un límite superior de aproximadamente 90 micrones. En aún una modalidad adicional, se forman micropartículas, obtenidas por o que se obtienen por los procedimientos descritos en este documento. En una de tal modalidad, el procedimiento es un procedimiento de agua/aceite/aceite ("W/O/O"), en donde el tamaño de la emulsión interna es como se describe en este documento. Además, el procedimiento puede incluir un coacervado de aceite de silicona, el cual puede estar a una relación de aproximadamente 1.5 a 1 con el solvente de polímero. Además, los procedimientos pueden ¡ncluir controlar la etapa de coacervación como se describe en este documento, y aún además, en donde ocurre una transferencia de coacervado a la emulsión ¡nterna en aproximadamente 3 minutos o menos, una etapa de mantenimiento de aproximadamente 1 minuto o menos, y una etapa de transferencia rápida durante un periodo de menos de aproximadamente 3 minutos a un solvente de templado/endurecimiento. En una modalidad adicional, el solvente es un solvente dual, preferiblemente una mezcla de heptano/etanol.

En una modalidad adicional, las composiciones de la invención pueden ser además, formuladas en una forma adecuada para inyección a través de una aguja en un hospedero. Una composición inyectable puede comprender composiciones de micropartículas como se describe en este documento en un vehículo de inyección acuoso viscoso, por ejemplo, como se describe en la Patente Estadounidense 6,495,164, la cual se incorpora en este documento por referencia. El vehículo de inyección acuoso puede tener una viscosidad de al menos 20 cp a 20°C, y además puede tener una viscosidad mayor de 50 cp y menos de 60 cp a 20°C. Las micropartículas pueden ser suspendidas en el vehículo de inyección a una concentración mayor de aproximadamente 30 mg/ml para formar una suspensión, la fase de fluido de la suspensión tiene una viscosidad de al menos 20 cp a 20°C. En otras modalidades, la fase fluida de la suspensión, tiene una viscosidad a 20°C de al menos aproximadamente 30 cp, 40 cp, 50 cp y 60 cp. La composición puede también comprender un agente mejorador de la viscosidad, un agente mejorador de la densidad, un agente mejorador de la tonicidad y/o un agente humectante. La viscosidad del vehículo de inyección proporciona inyectabilidad de la composición a través de una agua, que varía en diámetro de aproximadamente calibre 18-23, aún más preferiblemente, aproximadamente aguja de calibre 25. Como se conoce por un experto en la técnica, una aguja de pared regular (WR) de calibre 18, tiene un diámetro interno nominal (ID) de 0.033 in. y una aguja de pared regular de calibre 22, tiene un diámetro interno nominal de 0.016 in. El vehículo de inyección puede contener un agente que mejora la viscosidad. En una modalidad, el agente que mejora la viscosidad es carboximetilcelulosa de sodio, aunque se pueden usar también otros agentes adecuados que mejoran la viscosidad. El vehículo de inyección puede también comprender un agente que mejora la densidad, que incrementa la densidad del vehículo de inyección. En una modalidad adicional, el agente que mejora la densidad es sorbitol aunque otros agentes que mejoran la densidad adecuados se pueden usar también. El vehículo de inyección puede también contener un agente que ajusta la tonicidad, para ajustar la tonicidad para evitar problemas de toxicidad y mejorar la biocompatibilidad. Un agente que ajusta la tonicidad preferido es cloruro de sodio, aunque pueden también usarse otros agentes adecuados que ajustan la tonicidad. El vehículo de inyección puede también comprender un agente humectante para asegurar la completa humectación de las micropartículas por el vehículo de inyección. Agentes humectantes incluyen polisorbato 20 (Tween 20), polisorbato 40 (Tween 40) y polisorbato 80 (Tween 80). Las micropartículas se pueden suspender en el vehículo de inyección a una concentración mayor de aproximadamente 30 mg/ml. En una modalidad, las micropartículas se suspenden a una concentración de aproximadamente 150 mg/ml hasta aproximadamente 300 mg/ml. En otra modalidad, las micropartículas se suspenden a una concentración de aproximadamente 100 mg/ml hasta aproximadamente 400 mg/ml. Sin embargo se entenderá que la invención no se limita a una concentración particular. En una modalidad adecuada para pasar por la aguja de calibre 23, el vehículo de inyección comprende carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v) y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) u opcionalmente a 0.5% en agua. La solución es opcionalmente regulada de pH. En una modalidad adicional micropartículas que contienen exenátida como se describe anteriormente se suspenden en vehículo de inyección de carboximetilcelulosa a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v) y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) u opcionalmente a 0.5% en agua. En una modalidad adicional la concentración de micropartículas de exenátida suspendidas es mayor que aproximadamente 30 mg/ml. Típicamente se suspenden aproximadamente 100 hasta 200 mg de micropartículas secas por ml de vehículo. En modalidades adicionales de la invención, se excluyen micropartículas específicas encontradas en la publicación WO200436186, publicada el 29 de Abril de 2004. Más específicamente excluidas son aquellas micropartículas que no contienen una cantidad de sulfato de amonio que sustancialmente afecta la liberación. Tales micropartículas específicas incluyen aquellas designadas como IF-1 , IF-2, IF-3, IF-4, M1 a M4, M7-M14, M18, M19. La invención será adicional y específicamente descrita por los siguientes ejemplos.

EJEMPLOS Preparación I de micropartículas Las composiciones de liberación sostenida descritas en este documento se preparan por un procedimiento de separación de fase. El procedimiento general se describe abajo para micropartículas que contienen exendina-4 y sacarosa para un tamaño de lote de 1 kg.

A. Formación de Emulsión Agua en Aceite Interna Se creó una emulsión de agua en aceite con la ayuda de un homogenizador. Los homogenizadores adecuados incluyen un homogenizador Megatron en línea MT-V 3-65 F/FF/FF, Kinematica Ag, Suiza. Se preparó la fase aguosa de la emulsión disolviendo exendina-4 y excipientes tales como sacarosa en agua. La concentración del fármaco en la solución resultante puede ser de aproximadamente 50 mg/g hasta aproximadamente 100 mg/g.

Por ejemplo, cuando el fármaco es exendina-4, la concentración del fármaco en solución puede ser de aproximadamente 30 g hasta aproximadamente 60 g por 600 g de agua. En una modalidad particular, se disolvieron 50 g de exendina-4 y 20 g de sacarosa en 600 g de agua por irrigación (WFI). Las cantidades especificadas listadas anteriormente, representan una carga nominal sin ajuste para compensar la firmeza del contenido de péptido específico para el lote de exendina-4 usado. Se preparó la fase aceitosa de la emulsión disolviendo polímero PLGA (por ejemplo, 930 g de DL4A PLGA 50:50 purificado (Alkermes, Inc.) en cloruro de metileno (14.6 kg o 6% p/p). Después se agregó la fase acuosa a la fase aceitosa para formar una emulsión espesa con un mezclador de pie por aproximadamente tres minutos. Después, la emulsión revestida se homogenizó a aproximadamente 21300 rpm a temperatura ambiente por tres periodos discretos. Esto resultó en un tamaño de gota de emulsión interna de menos de 1 micrón. Se entenderá que la formación de emulsión ¡nterna se puede lograr usando cualquier medio adecuado. Medios adecuados de formación de emulsión incluyen, pero no se limitan a, homogenización y sonicación como se describe anteriormente.

B. Formación de Coacervado Después se realizó una etapa de coacervación agregando aceite de silicona (21.8 kg de Dimeticona, NF, 350 cs) durante aproximadamente un periodo de tiempo de cinco minutos a la emulsión interna. Esto es equivalente a una relación de 1.5:1 , aceite de silicona a cloruro de metileno. El cloruro de metileno de la solución de polímero se divide en el aceite de silicona y empieza a precipitar el polímero alrededor de la fase acuosa que contiene exendina-4, que conduce a microencapsulación. Las microesferas embriónicas así formadas son suaves y requieren endurecimiento. Frecuentemente, las microesferas embriónicas de dejan reposar por un periodo de tiempo corto, por ejemplo, de aproximadamente 1 minuto hasta aproximadamente 5 minutos antes de proceder a la etapa de endurecimiento de la microesfera.

C. Endurecimiento y Enjuague de Microesfera Las microesferas embriónicas entonces se transfieren inmediatamente en una mezcla de solvente heptano/etanol. El volumen de mezcla heptano/etanol necesario se puede determinar basado en el tamaño de lote de microesfera, típicamente a una relación 16:1 de cloruro de metileno a solvente heptano/etanol. En el presente ejemplo, se usaron aproximadamente 210 kg de heptano y 23 kg de etanol en un tanque agitado, enfriado a 3°C. Esta mezcla de solvente endurece las microesferas extrayendo cloruro de metileno adicional de las microesferas. Esta etapa de endurecimiento se puede también referir como templado. Después de ser apagada por 1 hora a 3°C, la mezcla del solvente es ya sea decantada y se agrega heptano fresco (13 kg) a 3°C y se mantiene por 1 hora hasta enjuagar el aceite de silicona, etanol y cloruro de metileno residual en la superficie de la microesfera o se bombea directamente a la etapa de colección.

D. Secado y Colección de Microesfera Al final de la etapa de templado o decantado/lavado, las microesferas son transferidas y colectadas en un Filtro/Secador Sweco Pharmasep de 2" Modelo PH12Y6. El filtro/secador usa un tamiz de colección de capas múltiples de 20 micrones y se conecta a un monitor que hace vibrar el tamiz durante la colección y secado. Se realiza un enjuague final con heptano (6 Kg a 3°C) para asegurar la transferencia lineal máxima y remoción de cualquier exceso de aceite de silicona. Las microesferas después se secaron bajo vacío con una purga constante de gas de nitrógeno a una relación controlada de conformidad con el siguiente esquema: 6 horas a 3°C; 6 horas saltando a 41 °C; y 84 horas a 41 °C. Después de la terminación del secado, las microesferas se descargaron en un recipiente de colección, tamizado a través de un tamiz de 150 µm, y se almacenaron a aproximadamente -20°C hasta llenado. Para todas las formulaciones de micropartícula las cuales se prepararon en este documento, la cantidad de polipéptido, por ejemplo, exendina-4 y excipientes presentes en las formulaciones preparadas, se expresa como un % (p/p) basado en el peso final de la composición de liberación sostenida. El % (p/p) es un porcentaje nominal excepto en donde se indica.

Preparación II de micropartículas A. Formación de Emulsión Aqua en Aceite Interna Se creó una emulsión de agua en aceite con la ayuda de un sonicador. Sonicadores adecuados incluyen Vibracell VCX 750 con cabeza de sonda modelo CV33, Sonics and Materials Inc., Newton, CT. La fase acuosa de la emulsión se preparó disolviendo exendina-4 y excipientes tal como sacarosa en agua. La concentración del fármaco en la solución resultante puede ser de aproximadamente 50 mg/ml hasta aproximadamente 100 mg/ml. Por ejemplo, en donde el fármaco es exendina-4, la concentración del fármaco en solución puede ser de aproximadamente 3.28 g hasta aproximadamente 6.55 g por 65.5 g de agua. En una modalidad particular, se disolvieron 5.46 g de exendina-4 y 2.18 g de sacarosa en 65.5 g de agua para irrigación o WFI. Las cantidades especificadas listadas anteriormente representan un 4% de excedente a la carga objetivo para compensar la pérdida de esterilización del filtro de los componentes. La fase aceitosa de la emulsión se preparó disolviendo polímero PLGA (por ejemplo, 97.7 g de 50:50 de DL4A PLGA purificado (Alkermes, Inc.)) en cloruro de metileno (1539 g o 6% p/v). La fase acuosa después se agregó a la fase aceitosa por aproximadamente un periodo de tres minutos mientras se sónico a 100% de amplitud a temperatura ambiente. La fase acuosa se bombeó a través de un tubo de acero inoxidable de VA" (8 mm) con un extremo de tubo HPLC de 1" (2.54 cm) (ID = 20/1000") a 5 psig, se agregó debajo de la sonda de sonicación dentro de la zona de sonicación. El reactor después se agitó a 1400 hasta 1600 rpm, con sonicación adicional a 100% de amplitud por 2 minutos, seguido por un mantenimiento de 30 segundos, y después 1 minuto más de sonicación. Esto resultó en un tamaño de gota de emulsión ¡nterna de menos de 0.5 micrones. Se entenderá que la formación de emulsión ¡nterna se puede lograr usando cualquier medio adecuado. Medios adecuados de formación de emulsión incluyen, pero no se limitan a, sonicación como se describe anteriormente y homogenización.

B. Formación de Coacervado Después de realizó una etapa de coacervación agregando aceite de silicona (2294 g de Dimeticona, NF, 350 cs) por aproximadamente un periodo de tiempo de cinco minutos a la emulsión interna. Esto es equivalente a una relación de 1.5:1 de aceite de silicona a cloruro de metileno. El cloruro de metileno de la solución de polímero se divide en el aceite de silicona y empieza a precipitar el polímero al rededor de la fase acuosa que contiene exendina-4, que conduce a microencapsulación. Las microesferas embriónicas así formadas son suaves y requieren endurecimiento. Frecuentemente, las microesferas embriónicas se dejan reposar por un periodo de tiempo corto, por ejemplo, de aproximadamente 1 minuto hasta aproximadamente 5 minutos antes de proceder a la etapa de endurecimiento de microesferas.

C. Endurecimiento y Enjuague de Microesfera Las microesferas embriónicas inmediatamente después se transfirieron en una mezcla de solvente heptano/etanol. El volumen de la mezcla heptano/etanol necesario se puede determinar basado en el tamaño de lote de microesfera. En el presente ejemplo, se usaron aproximadamente 22 kg de heptano y 2448 g de etanol en un tanque agitado (350 a 450 rpm), enfriado a 3°C. Esta mezcla de solvente endureció las microesferas extrayendo cloruro de metileno adicional de las microesferas. Esta etapa de endurecimiento también se puede referir como templado. Después de ser apagada por 1 hora a 3°C, la mezcla del solvente se decantó y se agregó heptano fresco (13 kg) a 3°C y se mantuvo por 1 hora hasta enjuagar el aceite de silicona residual, etanol y cloruro de metileno en la superficie de la microesfera.

D. Secado y Colección de Microesfera Al final de la etapa de enjuague, las microesferas se transfirieron y colectaron en un tamiz de capas múltiples de 20 micrones, 6" (15.24 cm) de diámetro dentro de la cámara de secado en forma de cono la cual actúa como un filtro de extremo muerto. Se realizó un enjuague final con heptano (6 Kg a 4°C) para asegurar la transferencia lineal máxima. Las microesferas después se secaron con una purga constante de gas de nitrógeno a una relación controlada de conformidad con el siguiente esquema: 18 horas a 3°C; 24 horas a 25°C; 6 horas a 35°C; y 42 horas a 38°C. Después de la terminación del secado, las microesferas se descargaron en un recipiente de colección, esterilizado de teflón/acero inoxidable unido al cono de secado. Este recipiente de colección se selló, se removió del cono de secado y se almacenó a -20 ± 5 °C hasta llenado. El material restante en el cono desmontado para limpieza se tomó para análisis de contenido de fármaco. El rendimiento es aproximadamente 100 gramos de microesferas. Para todas las formulaciones de micropartícula las cuales se prepararon en este documento, la cantidad de polipéptido, por ejemplo, exendina-4 y excipientes presentes en las formulaciones preparadas, se expresa como un % (p/p) basado en el peso final de la composición de liberación sostenida. El % (p/p) es un porcentaje nominal excepto en donde se indica.

Polímero Se listan abajo ejemplos de polímeros PLG específicos adecuados para uso. Todos los polímeros empleados en los siguientes ejemplos se muestran en la lista y todos los polímeros listados se obtienen de Alkermes, Inc., de Cincinnati, OH y se pueden describir como sigue: Polímero 2A: Poli(láctido-co-glicólido); relación 50:50 de láctido:glicólido; 12.3 kD Mol. Peso; I V = 0.15 (dL/g). Polímero 4A: Poli(láctido-co-glicólido); relación 50:50 de láctido:glicólido; Mol. Peso 45- 64 kD; IV=0.45-0.47 (dL/g).

PURIFICACIÓN DE PLG: Se conoce en la técnica (Véase, por ejemplo, Acilación de Péptido por Poli(Esteres de a-Hidroxi) por Lucke et al., Pharmaceutical Research, Vol. 19, No. 2, p. 175-181 , Febrero 2002) que proteínas y péptidos los cuales se incorporan en matrices PLG, se pueden alterar indeseablemente (por ejemplo, degradados o modificados químicamente), como un resultado de interacción con productos de degradación de PLG o impurezas restantes después de la preparación del polímero. Como tal, los polímeros PLG usados en la preparación de la mayoría de formulaciones de micropartículas descritas en este documento se purificaron antes de la preparación de las composiciones de liberación sostenida usando métodos de purificación reconocidos en la técnica.

Métodos de caracterización Se ha determinado que los siguientes métodos de caracterización son adecuados para identificar micropartículas las cuales proporcionan un perfil de liberación deseable de agente activo.

SEM Se usó SEM para valorar el tamaño de partícula, características de forma y superficie de las micropartículas. La formación de imágenes SEM se realizó en un sistema Personal SEM® (ASPEX™, LLC). Todas las muestras se depositaron vía espátula en salientes SEM estándar cubiertos con tapas de doble lado de carbono. Las muestras se revistieron rociadas con Au por aproximadamente 90 segundos a emisión 18 mA actual usando un "Mini" Revestidor de Rocío Modelo SC 7620 (Energy Bean Sciences). Todas las formaciones de imágenes SEM se realizaron utilizando un haz de electrón 20 KeV sobre un intervalo de amplificación de aproximadamente 250 hasta 2500X.

SEM criogénico Se estudió la sección transversal de micropartículas usando SEM criogénico. La mezcla de partícula se mezcló con Solución HISTO PREP® (Fischer) y se recuperó en un criostato a -20°C durante la noche. Las micropartículas endurecidas se montaron en un cubre objetos de vidrio y después se seccionaron usando una navaja de metal. Las partículas seccionadas se montaron en salientes de aluminio, revestidos con rocío de Platino y Paladio y se observaron bajo Microscopio de Electrón de Exploración (Phillips 525M). La observación visual de las secciones proporciona un método para determinar el grado de porosidad para las micropartículas.

Medición de porosidad - intrusión de mercurio Se determinó la distribución de volumen de poro en micropartículas usando un Porosímetro de Intrusión de Mercurio SutoPor IV 9500 Moden (Micromeritics, Norcross, GA). Brevemente, el mercurio se forzó en una cantidad conocida de micropartículas en un penetrómetro aplicando presión en una manera de etapas hasta una presión máxima de 60000 Psia. Se midió el volumen de mercurio introducido en los poros a varias presiones. Este método cuantifica la distribución de poro en las micropartículas. Eso es, el tamaño de los poros que se introducen es inversamente relacionado a la presión aplicada. El equilibrio de las fuerzas internas y externas en el sistema de líquido-sólido-vapor se puede describir por la ecuación Washburn. La relación entre presión aplicada y el tamaño de poro en el cual el mercurio es forzado a entrar se describe por: D ^ = 4 , y eos ? P en donde: D = diámetro de poro Y = tensión de superficie (constante) ? = ángulo de contacto (constante) P = presión Por lo tanto, el tamaño del poro en el cual el mercurio se introducirá es inversamente proporcional a la presión aplicada. Asumiendo que todos los poros son cilindros estrechos, el diámetro de poro promedio (D=4V/A) se calcula dividiendo el volumen de poro (V=pD2h/4) por el área de poro (A=pDh).

Solventes residuales Se usó un método único para cuantificación de heptano, etanol y cloruro de metileno. El equipamiento consiste de un cromatógrafo de gas HP 5890 Serie 2 con una columna Rtx 1301 , 30 cm x 0.53 mm. Se disolvieron aproximadamente 130 mg de micropartículas en 10 ml de N,N-dimetilformamida. Se usó acetato propílico como el estándar interno. La preparación de muestra se ajustó para que las concentraciones de cloruro de metileno tal bajas como 0.03% puedan ser cuantificadas.

Preparación de micropartículas Se prepararon lotes de micropartícula mostrados en el Cuadro I como se describe anteriormente, a la escala de 100 gramos usando el polímero 4A y una relación de aceite de silicona a cloruro de metileno de ya sea 1.5:1 o 1 :1 y el. aceite de silicona tiene una viscosidad de 350 cs. También se exponen en el Cuadro 1 , la cantidad de exendina-4 y los excipientes usados en la formulación.

CUADRO 1 * TODAS LAS FORMULACIONES TIENEN 3% DE CARGA DE FÁRMACO CON LA EXCEPCIÓN DE POROSIDAD DEL #5 El volumen de intrusión total obtenido de la porosimetría de intrusión de mercurio y los diámetros de poro promedio calculado, se dan en el Cuadro 2. La relación entre el diámetro de poro promedio y la liberación in vivo se muestran en la FIG 1.

CUADRO 2 La FIG. 1 , muestra el efecto de sulfato de amonio en la liberación inicial in vitro. Los datos indican que la liberación inicial in vitro se correlaciona al diámetro de poro de micropartícula. Las formulaciones se hacen con sulfato de amonio mostrando niveles variados de liberación in vitro y porosidad variable diferente a las formulaciones sin sulfato de amonio las cuales exhiben porosidad y liberación consistente. Durante la manufacturación de micropartículas, la presencia de sulfato de amonio en la fase acuosa puede ser sal fuera de la sustancia del fármaco durante la preparación de emulsión interna. Las diferencias en el micro-ambiente de los precipitados pueden contribuir a las diferencias en porosidad y por lo tanto, en la variación de liberación inicial. No se observó el efecto en las formulaciones preparadas sin sulfato de amonio. Formulaciones con sacarosa y exendina-4 muestran un nivel más deseable y consistente de liberación inicial comparado a las formulaciones que tienen exendina-4, sacarosa y sulfato de amonio. La FIG. 2, muestra además, el efecto de porosidad en la liberación in vitro y el impacto que las condiciones precedentes, es decir, la proporción de aceite de silicona a cloruro de metileno, tiene en la porosidad de micropartículas formadas. Brevemente, las formulaciones de micropartícula preparadas usando una relación de aceite de silicona a cloruro de metileno de 1 :1 (Formulaciones 2-4 y 2-5 del Cuadro 1 ), tienen una liberación inicial mayor que las mismas formulaciones preparadas usando una relación de silicona a cloruro de metileno de 1.5:1 (Formulaciones 2, 2-1 y 2-2 del Cuadro 1 ). La FIG. 2, sugiere que una relación mayor de aceite de silicona a cloruro de metileno resulta en una porosidad menor la cual resulta en liberación inicial menor.

SEM criogénico Se condujo el análisis SEM criogénico como se describe anteriormente en las Formulaciones de los Tipos 2, 3 y 5 del Cuadro 1. Las FIGS. 3A-3B son exploraciones de micrográficas para formulaciones seleccionadas de Tipo 2 (Formulación 2-2, FIG. 3A) y de Tipo 5 (5% de exendina-4, 2% de sacarosa, FIG. 3B). Las FIGS. 4A-D son exploraciones de micrográficas para Formulaciones 3-4, 3-5, 3-6 y 3-7, respectivamente del Cuadro 1. Nuevamente, la variación en porosidad exhibida con el uso de sulfato de amonio el cual contribuye a la variabilidad en liberación inicial, se puede observar en las secciones transversales SEM criogénico de las FIGS. 4A-D.

Niveles de solvente residual El nivel de solventes residuales en una formulación dada puede impactar el Tg de la formulación. Se determinan niveles de solvente residual para formulaciones de micropartícula de Tipos 2 y 5 del Cuadro 1. Se usó un método único para cuantificación de heptano, etanol y cloruro de metileno. El equipamiento consistió de un cromatógrafo de gas HP 5890 Serie 2 con una columna Rtx 1301 , 30 m x 0.53 mm. Se disolvieron aproximadamente 130 mg de micropartículas en 10 ml de N, N-dimetilformamida. Se usó acetato de propilo como el estándar interno. La preparación de la muestra se ajustó para que las concentraciones de cloruro de metileno tan bajas como 0.03% se puedan cuantificar. La FIG. 5 en un lote de % de etanol residual y cloruro de metileno para formulaciones de Tipos 2 y 5 del Cuadro 1 (3 ó 5% de exendina-4, 2% de sacarosa). La FIG. 5, muestra que el Tg disminuye como la cantidad de incremento de solvente residual.

Preparación de micropartículas que tienen 3% de exendina-4 y 2% de sacarosa En vista de la variación en porosidad introducida por la presencia de sulfato de amonio en las formulaciones de micropartículas y la identificación de porosidad como una característica la cual significantemente impacta la liberación inicial, no se consiguió sulfato de amonio en descubrimiento adicional.

Impacto de tamaño de gota en emulsión ¡nterna Se hicieron los siguientes estudios para determinar el impacto de parámetros de procedimiento en la formación de emulsión interna así como la estabilidad de la emulsión resultante y que resulta en 24 horas de liberación in vitro de microesferas producidas usando los parámetros de procedimiento diferentes. Se formaron emulsiones internas de la fase acuosa y fase de solvente ya sea por sonicación como se describe anteriormente para la escala de 100 g u homogenización usando un homogenizador MT5000 con un generador 36/4 (Kinematica AG, Suiza) a ya sea velocidad baja (10 800 rpm) o velocidad alta (21 300 rpm). Después de la formación de emulsión ¡nterna por las técnicas diferentes, las emulsiones se mantuvieron en el reactor con agitación suave con un agitador de pie por 5, 15 ó 60 minutos antes de que se remueva una alícuota. Después de los tiempos de retención designados, la emulsión interna se ejecutó además como se describe anteriormente en micropartículas y después de las 24 horas de liberación in vitro determinada para cada lote como se describe abajo.

Caracterización de tamaño de gota de emulsión ¡nterna se puede determinar usando el analizador de tamaño de partícula Horiba Se retiró una alícuota de emulsión ¡nterna del reactor usando una pipeta de vidrio. Usando una pipeta de transferencia, se agregaron -30 gotas de emulsión ¡nterna a -10 ml de 6% de una solución de polímero PLG 4A 50:50 Medisorb ® en un vial de escintilación de tapa de rosca de 20 cc seguido por mezclado. La solución de polímero PLG 4A 50:50 Medisorb® también sirvió como la solución en vacío de referencia. Después se transfirieron aproximadamente 9 ml de esta muestra de emulsión diluida en un soporte de muestra Horiban de 10 ml puro. Se colocó una cubierta en el soporte de muestra para prevenir la evaporación rápida del solvente de polímero. La muestra preparada está dentro del % intervalo de lectura de transmisión aceptable de 0.65% - 0.90% por la barra azul (Lamp). Se seleccionó un índice de fijación refractivo relativo de 0.94-O.OOi en el programa establecido. Las muestras después se midieron por un analizador de tamaño de partícula Horiban tal como el modelo LA 910 para tamaño de gota. Los datos que correlacionan los parámetros del procedimiento y el tamaño de emulsión interna logrado sobre los 5, 15 y 60 minutos de tiempos mantenimiento así como los resultados de liberación in vitro de 24 horas resultante (en paréntesis), se muestran en la Figura 9.

Caracterización de microesfera Se caracterizaron rutinariamente microesferas de exendina-4 con respecto al contenido de fármaco, tamaño de partícula, solventes residuales, liberación in vitro inicial y PK característicos en ratas. Se extrajo el fármaco para obtener una valoración preliminar de pureza de post-encapsulación de exendina-4 en lotes seleccionados.

Liberación inicial in vitro La liberación inicial de exendina-4 se determinó midiendo la concentración de exendina-4 después de 1 hora en regulador de pH liberado (10 mM de HEPES, 100 mM de NaCI, pH 7.4). Se colocaron 150 ± 5 mg de microesferas en 5.0 ml de 10 mM de HEPES, 100 mM de NaCI, regulador de pH a 7.4 a temperatura ambiente, se sometieron a vórtice por aproximadamente 30 segundos para suspender la solución y después se colocó en una cámara de aire a 37°C por 1 hora. Después de 1 hora, las muestras se removieron de la cámara y se invirtieron varias veces para mezcla, seguido por centrifugación a 3500 rpm por 10 minutos. Lo sobrenadante se removió y se analizó inmediatamente por HPLC usando las siguientes condiciones: Columna: TSK-GEL®, 7.8 mm x 30 cm, 5 m (TSOH BIOSEP PARTE #08540); Temperatura de Horno en Columna: Ambiente; Temperatura Automuestreo; 6°C; Relación de Flujo: 0.8 ml/minutos; Detección: 280 nm; Volumen de Inyección: 10 I; Fase Móvil: 35% de acetonitrilo/65% de agua con 0.1% de TFA/litro (v/v); Tiempo de Ejecución: Aproximadamente 20 minutos. Se usó como un estándar sustrato de fármaco de volumen de exendina-4, 0.2 mg/ml preparado en 30 mM de Regulador de pH de Acetato, pH 4.5.

Estudios animales Todos los estudios farmacocinéticos (PK) descritos en este documento, se condujeron en ratas Spraque-Dawley macho que pesan aproximadamente 500 ± 50 g. Para caracterización PK de las formulaciones de micropartícula, cada animal recibió una inyección subcutánea de micropartículas suspendidas en diluyente (3% de carboximetilcelulosa, 0.9% de NaCI, 0.1 % de Tween 20) en la región escapular ¡nterna. Generalmente, las dosis son aproximadamente de 1.0 mg de exendina-4 por rata en volumen de inyección de 0J5 ml. Se colectaron muestras sanguíneas vía la vena de cola lateral a 0.5, 2, 4, 6, 10, 24 horas, y 2, 4, 7, 10, 14, 17, 21 , 24 y 28 días después de la dosis. Las muestras sanguíneas inmediatamente se colocaron en tubos MICROTAINER® que contiene EDTA y se centrifugaron a aproximadamente 14000 X g por aproximadamente dos minutos. El plasma después se transfirió a tubos MICROTAINER® sin aditivo y se almacenaron a -70°C hasta el tiempo de ensayo. Se usó IRMA para determinar las concentraciones de exendina en plasma.

IRMA-liberación in vivo El método para cuantificar la exendina-4 en plasma, es un inmunoensayo intercalado, con el analito capturado por un anticuerpo monoclonal de fase sólida EXE4:2-8.4 y detectado por el anticuerpo monoclonal radioyodado GLP-1 :3.3. Los conteos de enlace son cuantificados de una curva de calibración estándar, Este ensayo es específico para la longitud completa o intacta de exendina-4 y no detecta exendina-4 (3-39). Un intervalo de curva estándar típico es 30 pg/ml hasta 2000 pg/ml dependiendo de la edad del anticuerpo rastreador.

Liberación in vitro e ¡n vivo Se probaron las formulaciones 2, 2-1 y 2-2 (3% de exendina-4 y 2% de sacarosa), para liberación inicial in vitro como se describe anteriormente. La liberación ¡n vitro fue de 0.4% y 0.5%, respectivamente. Todos los tres lotes también tienen una liberación inicial in vivo relativamente baja en la escala de 1154 a 155 pg/ml para Cmaxal día 0-1. La Figura 6 es una curva farmacocinética representativa para las formulaciones que tienen 3% de exendina-4 y 2% de sacarosa_(2-1 ) y también para 3% de exendina-4 sola (1) y 3% de exendina-4 y 0.5% de sulfato de amonio (4). Se usó una relación de aceite de silicona a cloruro de metileno de 1.5:1 , y la viscosidad del aceite de silicona fue de 350 cs. De la Figura 6, se puede observar que las formulaciones que no contienen sulfato de amonio presentan una liberación inicial inferior.

Aunque la formulación que tiene exendina-4 sola mostró una liberación inicial adecuada, la pureza de encapsulación posterior del fármaco fue disminuida, comparada con la formulación que tiene exendina-4 en combinación con la sacarosa. La adición de azúcar en las formulaciones disminuye la degradación del agente. El perfil de liberación in vivo para las tres formulaciones 2, 2-1 y 2-2 comparadas anteriormente, se muestra en la Figura 7. Los tres lotes presentaron una liberación inicial relativamente baja seguida "mediante" (niveles bajos de suero entre aproximadamente el día 4 al día 17), seguido por una liberación sostenida durante aproximadamente el día 21 hasta el día 28. La liberación inicial baja y la forma del perfil de liberación, fueron consistentes para las tres formulaciones.

Formulación usando una relación 1 :1 de aceite de silicona a cloruro de metileno Las formulaciones 2-3, 2-4 y 2-5 del Cuadro 1(3% de exendina-4, sacarosa al 2%), fueron preparadas usando una relación 1 :1 de aceite de silicona a cloruro de metileno. La liberación inicial fue superior para estas formulaciones que para las formulaciones 2, 2-1 y 2-2 del Cuadro 1 (3% de exendina-4, 2% de sacarosa, con una relación 1.5:1 de silicona a cloruro de metileno). Específicamente, las formulaciones de relación 1.5:1 proporcionan una liberación inicial promedio de aproximadamente 0.4%, mientras las formulaciones de relación 1 :1 proporcionan una liberación inicial promedio de aproximadamente 1.0%. La misma tendencia in vivo observada con la Cmax al día 0-1 en ratas fue de 2288 + 520 pg/ml para una relación 1 :1 , mientras la Cmax al día 0-1 en ratas fue de 1300 + 221 pg/ml para la relación 1.5:1.

Carga incrementada de fármaco Incrementando la carga de exendina-4 a 4% mientras se mantiene la sacarosa al 2%, resulta en una liberación inicial in vitro e in vivo en la misma escala como para la carga al 3%. Tres formulaciones del Tipo 5 del Cuadro I, fueron preparados (5% de carga de fármaco, 2% de sucrosa, relación 1.5:1 de aceite de silicona a cloruro de metileno). Tres lotes, 5-1 , 5-2, y 5-3, todos presentaron una liberación inicial in vitro baja, que varía desde 0.2 hasta 0.5%. De manera similar, la Cmax in vivo de las formulaciones, fue consistentemente baja variando desde 467 pg/ml a 1267 pg/ml. La Figura 8 muestra una gráfica de los datos de farmacocinética para los tres lotes probados. Comparados con el comportamiento de la formulación de exendina-4 al 3% que tiene sacarosa al 2%, las formulaciones al 5% presentaron niveles de fármaco del suero superiores durante aproximadamente el día 1 y día 2. El resto del perfil para las formulaciones al 5% fue similar con las formulaciones al 3% que tienen un canal seguido por liberación de fármaco principalmente durante el día 21 hasta el día 28. Mientras esta invención ha sido particularmente mostrada y descrita con referencia a las modalidades preferidas de la misma, se entenderá por aquellos expertos en la técnica, que se pueden hacer varios cambios en la forma y detalles sin apartarse del alcance de la invención abarcado por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (40)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Una composición para la liberación sostenida de polipéptido biológicamente activo caracterizada porque consiste esencialmente de un polímero biocompatible, un polipéptido biológicamente activo y una azúcar, en donde la relación de Cma? a Cpr0m es aproximadamente 3 o menor.

2. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el polipéptido se selecciona de glucagón, péptidos como glucagón, exendinas, agonistas de péptidos similares al glucagón, péptido intestinal vasoactivo, ¡nmunoglobulinas, anticuerpos, citocinas, ¡nterleucinas, factores que activan el macrófago, interferonas, eritropoyetinas, factor de necrosis del tumor, factores que estimulan la colonia, insulina, enzimas, supresores de tumor, proteínas sanguíneas, hormona que estimula en folículo, hormona de crecimiento, hormona adrenocorticotrópica y hormona de liberación de la hormona luteinizante, NGF, EGF, gastrina, GRH, defensina, encefalinas, y muteínas, análogos, variantes de supresión y sustitución y sales de los mismos farmacéuticamente aceptables.

3. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el polipéptido biológicamente activo es un péptido glucoregulador.

4. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque el péptido regulador se selecciona de GLP-1 , GLP-2, exendina-4 o una combinación de los mismos.

5. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque el polipéptido está presente de aproximadamente 0.1% p/p hasta aproximadamente10% p/p del peso total de la composición de liberación sostenida.

6. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque el polipéptido está presente de aproximadamente 0.5% p/p hasta aproximadamente 5% p/p del peso total de la composición de liberación sostenida.

7. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada además porque el volumen de poro total de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos, como se determina usando porosimetría de intrusión de mercurio.

8. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque el azúcar está presente de aproximadamente 0.01 % p/p hasta aproximadamente 10% p/p del peso total de la composición de liberación sostenida.

9. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque está presente de aproximadamente 0.1 % p/p hasta aproximadamente 5% p/p del peso total de la composición de liberación sostenida.

10. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada además porque el azúcar se selecciona de un monosacárido, un disacárido, un alcohol de azúcar o una combinación de los mismos.

11. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el azúcar se selecciona de sacarosa, manitol y combinaciones de los mismos.

12. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada además porque el polímero biocompatible se selecciona del grupo que consiste de poli(láctidos), poli(glicólidos), poli(láctido-co-glicólidos), poli(ácidos lácticos), poli(ácidos glicólicos), poli(ácidos lácticos-co-ácidos glicólicos), policaprolactona, policarbonatos, poliesteramidas, polianhídridos, poli(aminoácidos), poliortoésteres, policianoacrilatos, poli(p-dioxanona), poli(oxalatos de alquílenos), poliuretanos biodegradables, mezclas de los mismos y copolímeros de los mismos.

13. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada además porque el polímero comprende poli(láctido-co-glicólido).

14. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada además porque el polímero es un poli(láctido-co-glicólido) 50:50.

15. La composición de liberación sostenida de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el polímero tiene una viscosidad incrementada de entre aproximadamente 0.3 y 0.5 dL/g.

16. Una composición para la liberación sostenida de polipéptido biológicamente activo, que comprende: un polímero biocompatible que tiene exendina-4 dispersada en esta, a aproximadamente 3% p/p o más y sacarosa a aproximadamente 2% p/p o más del peso de la composición.

17. Una composición para la liberación sostenida de polipéptido biológicamente activo, que consiste esencialmente de: un polímero biocompatible, exendina-4 a aproximadamente 3% p/p o más y sacarosa a aproximadamente 2% p/p o más del peso de la composición.

18. Una composición para la liberación sostenida de polipéptido biológicamente activo, que consiste de: un polímero biocompatible, exendina-4 a aproximadamente 3% p/p o más y sacarosa a aproximadamente 2% p/p o más del peso de la composición.

19. La composición de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque el polímero biocompatible se selecciona de poli(láctidos), poli(glicólidos), poli(láctido-co-glicólidos), poli(ácidos lácticos), poli(ácidos glicólicos), poli(ácidos lácticos-co-ácidos glicólicos), y mezclas y copolímeros de los mismos.

20. La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque la relación Cmax a Cprom es aproximadamente 3 o menos.

21. La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque el volumen total de poro de la composición, es aproximadamente 0.1 ml/g o menos como se determina usando porosimetría de intrusión de mercurio.

22. El uso de una composición de liberación sostenida que consiste esencialmente de un polímero biocompatible, un agente biológicamente activo seleccionado del grupo que consiste de una exendina, análogo de exendina, derivado o agonista, y un azúcar en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un paciente que sufre de diabetes Tipo 2 que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición de liberación sostenida en donde la relación de Cmax a Cprom es 3 o menor.

23. El uso que se reclama en la reivindicación 22, en donde el agente es exendina-4.

24. El uso que se reclama en la reivindicación 23, en donde el polímero biocompatible de la composición de liberación sostenida se selecciona de poli(láctidos), poli(glicólidos), poli(láctido-co-glicólido), poli(ácidos lácticos), poli(ác¡dos glicólicos), poli(ácidos lácticos-co-ácidos glicólidos), y mezclas y copolímeros de los mismos.

25. El uso que se reclama en la reivindicación 24, en donde el azúcar está presente en la composición de liberación sostenida a una concentración de aproximadamente 0.01 % p/p hasta aproximadamente 10% p/p del peso total de la composición de liberación sostenida.

26. El uso que se reclama en la reivindicación 24, en donde el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos como se determina por porosimetría de intrusión de mercurio.

27. El uso que se reclama en la reivindicación 26, en donde la exendina-4 está presente en la composición de liberación sostenida a una concentración de aproximadamente 0.1 % hasta aproximadamente 10% del peso total de la composición.

28. El uso de una composición de liberación sostenida que consiste de un polímero biocompatible que tiene exendina-4 dispersada en este, a aproximadamente 3% p/p o más y sacarosa a aproximadamente 2% p/p o más del peso de la composición en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que sufre de diabetes Tipo 2 que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición de liberación sostenida.

29. Un procedimiento para preparar una composición para la liberación sostenida de un polipéptido, caracterizado porque comprende las etapas de: a) formar una mezcla combinando una fase acuosa que comprende polímero soluble en agua y un azúcar con una fase aceitosa que comprende un polímero biocompatible y un solvente para el polímero; b) formar una emulsión agua en aceite de la mezcla de la etapa a; c) agregar un agente de coacervación a la mezcla para formar micropartículas embriónicas, en donde el agente de coacervación es aceite de silicona agregado en una cantidad suficiente para lograr un aceite de silicona a relación de solvente de polímero de aproximadamente 1 :1 hasta aproximadamente 1.5:1 ; d) transferir las micropartículas embriónicas a un solvente templado para endurecer las micropartículas; e) colectar las micropartículas endurecidas, y f) secar las micropartículas endurecidas.

30. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque la relación de aceite de silicona a solvente de polímero es 1.5:1.

31. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque el polímero está presente en la fase aceitosa a aproximadamente 10% p/v o menos.

32. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque el polímero se selecciona del grupo que consiste de poli(láctidos), poli(glicólidos), poli(láctido-co-glicólidos), poli(ácidos lácticos), poli(ácidos glicólicos), poli(ácidos lácticos-co-ácidos glicólidos), y mezclas y copolímeros de los mismos.

33. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque el polipéptido se selecciona del grupo que consiste de: glucagón, péptidos similares al glucagón, exendinas, agonistas del glucagón similar a péptidos, péptido intestinal vasoactivo, inmunoglobulinas, anticuerpos, citocinas, interleucinas, factores que activan macrófagos, interferonas, eritropoyetinas, factor de necrosis de tumor, factor que estimula la colonia, insulina, enzimas, supresores de tumor, proteínas sanguíneas, hormona que estimula el folículo, hormona de crecimiento, hormona adrenocorticotrópico y hormona de liberación de la hormona luteinizante, NGF, EGF, gastrina, GRH, defensina, encefalinas, y muteínas, análogos, variantes de supresión y sustitución y sales de los mismos farmacéuticamente aceptable.

34. Una composición para la liberación sostenida de un agente biológicamente activo, caracterizada porque comprende 50:50 de un polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en donde la relación de Cmax a Cpr0m es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos.

35. El uso de una composición de liberación sostenida que contiene un 50:50 de polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que sufre de diabetes Tipo 2 que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición de liberación sostenida en donde la relación de Cmax a Cpr0m es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menor.

36. El uso de una composición de liberación sostenida que comprende un 50:50 de polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que sufre de diabetes Tipo 2 que comprende proveer una concentración en plasma terapéuticamente efectiva de exendina-4 a un paciente al administrar dosis múltiples de exendina-4, en donde la relación de Cma? a Cpr0m es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menor.

37. Un procedimiento para preparar una composición de la liberación sostenida de exendina-4 caracterizado porque comprende las etapas de: a) formar una mezcla combinando una fase acuosa que comprende un polipéptido de exendina-4 soluble en agua y sacarosa con una fase aceitosa que comprende un polímero 50:50 PLGA 4A biocompatible en cloruro de metileno; b) formar una emulsión agua en aceite de la mezcla de la etapa a, en donde el tamaño de la gotita de emulsión interna es de aproximadamente 0.2 hasta 0.4 micrones; ; c) agregar un agente de coacervación a la mezcla para formar micropartículas embriónicas, en donde el agente de coacervación es aceite de silicona agregado en una cantidad suficiente para lograr un aceite de silicona a relación de solvente de polímero de aproximadamente 1 :1 hasta aproximadamente 1.5:1 y en donde el aceite de silicona es agregado a la emulsión agua en aceite, en menos de o aproximadamente 3 minutos y la mezcla de coacervación es mantenida por menos de, o aproximadamente 1 minuto; g) transferir las micropartículas embriónicas a un solvente templado para endurecer las micropartículas, en donde el solvente templado es una mezcla de heptano/etanol y el tiempo de transferencia es menos de o aproximadamente 3 minutos; h) colectar las micropartículas endurecidas, y i) secar las micropartículas endurecidas.

38. Una composición inyectable adecuada para pasar a través de una aguja de calibre 25, caracterizada porque comprende una composición de liberación sostenida que comprende un 50:50 de polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en donde la relación de Cma? a Cprom es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos, suspendida en un vehículo de inyección que comprende carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v) y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) en agua.

39. Una composición inyectable adecuada para pasar a través de una aguja de calibre 25, caracterizada porque comprende una composición de liberación sostenida que comprende un 50:50 de polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 que tiene una sustitución de aminoácido de leucina por metionina en la posición 14, y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en donde la relación de Cmax a Cpr0m es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos, suspendida en un vehículo de inyección que comprende carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v) y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) en agua.

40. Un equipo para elaborar una composición inyectable para paso a través de una aguja de calibre 25, caracterizado porque comprende, un vial que comprende de una dosis terapéuticamente efectiva de una composición de liberación sostenida seca, que comprende un 50:50 de polímero DL PLG 4A, aproximadamente 3 hasta 5% (p/p) de exendina-4 y aproximadamente 2% (p/p) de sacarosa, en donde la relación de Cmax a Cpr0m es de aproximadamente 3 o menos y el volumen total de poro de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menos, suspendida en un vehículo de inyección que comprende carboximetilcelulosa de sodio a 3.0% (p/v), cloruro de sodio a 0.9% (p/v) y Polisorbato 20, NF (Tween 20) a 0.1 % (v/v) en agua, en donde existe suficiente vehículo de inyección para suspender la composición de liberación sostenida en al menos 30 mg/ml, e instrucciones. 41.- Una composición farmacéuticamente aceptable para la liberación sostenida de un polipéptido biológicamente activo que consiste esencialmente en un polímero purificado DL PLG 4A 50:5, que tiene disperso en el mismo exendina-4 a aproximadamente 5% (p/p) o más, y sacarosa a aproximadamente 2% (p/p) o más del peso de la composición, en donde dicha composición tiene una ausencia de sulfato de amonio y una relación de Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos; el volumen de poro total de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menor, y dicha composición es adecuada para administración a un humano para el tratamiento de diabetes mellitus. 42.- El uso de una composición farmacéuticamente aceptable de liberación sostenida que comprende un polímero purificado DL PLG 4A 50:50, aproximadamente 5% (p/p) de exendina-4 o más, y sacarosa a aproximadamente 2% (p/p) o más del peso de la composición, en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que padece de diabetes mellitus que comprende la administración de una cantidad de la composición efectiva a glucosa en la sangre terapéuticamente más baja en el paciente con diabetes mellitus, en donde dicha composición tiene una ausencia de sulfato de amonio y una relación de Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos; y el volumen de poro total de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menor. 43.- Un procedimiento para preparar una composición farmacéuticamente aceptable para la liberación sostenida de exendina-4 que comprende: a) formar una mezcla combinando una fase acuosa que comprende exendina-4 soluble en agua, polipéptido y sacarosa en ausencia de sulfato de amonio con una fase aceitosa que comprende un polímero purificado DL PLG 4A 50:50 en cloruro de metileno, en donde dicho polímero purificado tiene una viscosidad inherente de entre aproximadamente 0.3 y 0.5 dL/g; b) formar una emulsión agua en aceite de la mezcla de la etapa a, en donde el tamaño de gota de emulsión interna es de aproximadamente 0.2 a 0.4 micrones; c) agregar un agente de coacervación a la mezcla para formar micropartículas embriónicas, en donde el agente de coacervación es aceite de silicona agregado en una cantidad suficiente para lograr una relación de aceite de silicona a solvente de polímero de aproximadamente 1 :1 hasta aproximadamente 1.5:1 , y en donde el aceite de silicona se agrega a la emulsión de agua en aceite en menos de aproximadamente 3 minutos y la mezcla de coacervación se mantiene por menos de, o aproximadamente 1 minuto; d) transferir las micropartículas embriónicas a un solvente de templado a una relación de 16:1 (v/v) de solvente de templado a cloruro de metileno para endurecer las micropartículas, en donde el solvente de templado es una mezcla de heptano/etanol y el tiempo de transferencia es ¡nferior o es de aproximadamente 3 minutos; e) colectar las micropartículas endurecidas, y f) secar las micropartículas endurecidas; en donde dicha composición tiene una relación de Cmax a Cprom de aproximadamente 3 o menos; y el volumen de poro total de la composición es aproximadamente 0.1 ml/g o menor.