MXPA06009681A

MXPA06009681A - Analogos de fosfolipido para el diagnostico y tratamiento del cancer.

Info

Publication number: MXPA06009681A
Application number: MXPA06009681A
Authority: MX
Inventors: Jamey Weichert; Marc Longino; Anatoly Pinchuk
Original assignee: Cellectar Llc
Priority date: 2004-03-02
Filing date: 2005-03-02
Publication date: 2007-03-15
Also published as: WO2005084716A3; CA2557698A1; ZA200607042B; HK1130186A1; JP2014210803A; WO2005084716A2; ES2440257T3; KR20070015518A; ES2330951T3; US9550002B2; DE602005015687D1; JP2017173339A; JP2012097113A; EP1729824B1; JP2007528374A; CN1929869B; US20050196339A1; EP2044961A2; AU2005219412A1; EP2044960A2

Abstract

En una modalidad preferida, la presente invencion proporciona un metodo para detectar y localizar cancer de pulmon, cancer adrenal, melanoma, cancer de colon, cancer colorrectal, cancer de ovario, cancer de prostata, cancer de higado, cancer subcutaneo, cancer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cancer cervical en un sujeto quien tiene o que es sospechoso de tener cancer. El metodo comprende los pasos de: (a) administrar un analogo de eter de fosfolipido al sujeto; y (b) determinar si un organo sospechoso de tener cancer del sujeto retiene un mas alto nivel del analogo que la o las regiones circunvecinas, en donde una region de retencion mas alta indica la deteccion y localizacion del cancer. En otra modalidad mas, la invencion proporciona un metodo para el tratamiento del cancer en un sujeto. El metodo comprende la administracion de una cantidad efectiva de una molecula que comprende un analogo de eter de fosfolipido.

Description

ANÁLOGOS DE FOSFOLIPIDO PARA EL DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO DEL C NCER CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere en general a la formación de imágenes de diagnóstico de tumores, específicamente se refiere a la formación de imágenes de diagnóstico de tumores utilizando análogos de fosfolípidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La detección temprana del cáncer ha sido una de las metas primarias de la tecnología moderna de formación de imágenes, ya que la identificación de un tumor sospechoso en una etapa localizada mejora significativamente las oportunidades de tratamiento exitoso y eliminación del tejido canceroso. Un gran número de estrategias de formación de imágenes han sido por lo tanto diseñadas, utilizando una variedad de técnicas y modalidades, para ayudar al médico a realizar el diagnóstico preciso tan tempranamente como sea posible. Desafortunadamente, las técnicas convencionales de formación de imágenes tales como las tomografías computarizadas (CT, por sus siglas en inglés) y MRI (Formación de imagen por resonancia magnética) están limitadas en su habilidad para proporcionar un diagnóstico REF.: 175359 concluyente de una lesión sospechosa, ya que éstas son únicamente capaces de observar diferencias en la densidad o morfología de los tejidos. Un procedimiento de biopsia más invasor y costoso es a menudo necesario para proporcionar un diagnóstico definitivo. En contraste, las técnicas de medicina nuclear tales como la tomografía de emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés) y la tomografía de emisión de fotones simples (SPECT, por sus siglas en inglés) pueden proporcionar información funcional o bioquímica con respecto a un órgano o área particular de interés. No obstante, el éxito de estas técnicas de formación de imagen nuclear depende en gran parte de la captación selectiva y detección de los productos radiofarmacéuticos apropiados. La captación selectiva, a su vez, depende del desarrollo de los productos radiofarmacéuticos, por un alto grado de especificidad para el tejido objetivo. Desafortunadamente, los agentes de localización del tumor desarrollados hasta ahora para aplicaciones oncológicas, han tenido únicamente aplicación limitada. Por ejemplo, uno de estos compuestos de la técnica anterior, el citrato de galio 67Ga, fue originalmente identificado por su habilidad para acumularse en el tejido tumoral. Desafortunadamente, el citrato de galio 6Ga es captado por una variedad de otras lesiones no cancerosas también, incluyendo lesiones inflamatorias, y cantidades inaceptables de radioactividad pueden también acumularse en el hígado y en el tejido del bazo. La acumulación rápida de un producto radiofarmacéutico en estos órganos puede interferir seriamente con la formación de la imagen de las lesiones cercanas, y también impacta de manera negativa la dosificación que puede ser dada de manera segura a un paciente . Un procedimiento alternativo ha sido desarrollar anticuerpos monoclonales radiomarcados (Mabs por su abreviatura en inglés), dirigidos a los antígenos específicos del tumor. No obstante, estos anticuerpos monoclonales son específicos únicamente para el tejido tumoral particular para el cual éstos han sido producidos, y por lo tanto, no se localizarán en general en el tejido neoplásico. Además, el uso de los Mabs para la formación de imagen de diagnóstico ha conducido a problemas adicionales, incluyendo grados variantes de expresión de antígeno, baja captación tumoral, enlace no específico y reacciones inmunogénicas adversas. En un intento para enfrentar estos problemas, los presentes inventores han identificado recientemente y desarrollado una serie de nuevos compuestos que demuestran la especificidad tumoral útil. Ver por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,925,649; 4,965,391; 5,087,721; 5,347,030 y 6,417,384; todas las cuales son incorporadas por referencia en la presente. Se cree que éstos análogos de éter de fosfolípido, radioyodados, toman ventaja de una característica bioquímica única de las células tumorales malignas; por ejemplo, la gran concentración de lípidos de éter de origen natural en las membranas de las células tumorales, con relación a los tejidos normales correspondientes. Aunque el mecanismo preciso de acción no es completamente entendido, la hipótesis prevaleciente es que los análogos de éter de fosfolípido se llegan a atrapar en las membranas tumorales. En consecuencia, éstos compuestos se localizan en el tejido tumoral y permanecen en el sitio para aplicaciones de diagnóstico y/o terapéuticas . La retención selectiva de los análogos de éter de fosfolípido radiomarcados descritos en las patentes anteriores han sido demostrados en una variedad de xenoinjertos tumorales de roedor y de animal, y no en modelos tumorales espontáneos que se piensa imitan más estrechamente la enfermedad humana. Desafortunadamente, los datos obtenidos de estos estudios han demostrado también un despejo relativamente rápido del compuesto radiofarmacéutico de la sangre, y una acumulación indeseable por los tejidos no objetivo. Como se anotó anteriormente, la captación del tejido no objetivo puede disminuir la eficacia de la formación de imagen radiodiagnóstica mediante la creación de alta actividad de fondo o antecedente, o al provocar exposición excesiva de los tejidos radiosensibles a la radioactividad inyectada. En consecuencia, sigue existiendo una necesidad significativa en la técnica para productos radiofarmacéuticos que muestren un despejo rápido de los tejidos objetivo, así como una vida media prolongada en el plasma, mientras que todavía conserven su especificidad y avidez por el tejido neoplásico. Tal agente no debe ayudar únicamente en la formación de imagen . no invasora de los tumores primarios y metástasis, sino que debe servir también como un portador para un agente citotóxico para la erradicación específica del sitio, del tejido tumoral maligno, especialmente, en cuanto a que éste se - refiere a las formas más frecuentemente diagnosticadas de cánceres. Es deseable además, que los productos radiofarmacéuticos sean selectivos para tumores malignos y no tejidos precancerosos, incluyendo adenomas e híperplasia. Aproximadamente 147,000 nuevos casos de cáncer colorrectal son diagnosticados cada año en los Estados Unidos. De este modo, el cáncer colorrectal es el cuarto cáncer más común, representando 60,000 muertes al año.1 El tratamiento depende principalmente de la etapa del cáncer, pero puede incluir cirugía, radiación, quimioterapia y/o radiofrecuencia o crioablación. En seguimientos rutinarios para los pacientes con cáncer colorrectal, no obstante, la determinación del antígeno carcinoembrionario (CEA) , un marcador del tumor colorrectal, y las colonoscopias5 repetidas falla en detectar la enfermedad recurrente en más del 50% en pacientes6. Por lo tanto, existe una necesidad para el desarrollo de métodos adicionales para la detección de la enfermedad recurrente. Además, durante el tratamiento y diagnóstico utilizando la exploración por CT y la ablación por RF, la información funcional proveniente de la exploración de CT, es difícil de obtener. Con CT helicoidal mejorada en contraste, la vascularidad del tumor puede ser evaluada en cierto grado, pero no existe manera de determinar de manera precisa si las células tumorales viables permanecen dentro de la lesión de RF. Además, las lesiones térmicas creadas por RF normalmente tienen una orilla de inflamación que las rodea en las exploraciones de CT post-procedimiento por hasta 6 meses del procedimiento. La exploración PET ha sido utilizada para seguir a los pacientes post-ablación, pero la orilla de la inflamación que rodea las lesiones térmicas de RF normalmente muestra captación incrementada, incluso en ausencia de tumor viable. Esto disminuye la sensibilidad y especificidad para la detección temprana del tumor recurrente. En consecuencia, agentes como NM404 que son selectivos para y retenidos indefinidamente por las células tumorales malignas, son preferibles, de manera contraria a FDG que no es selectivo para las células tumorales y va hacia sitios infecciosos e hiperplasias (esófago de Barret) . Además, los compuestos como NM404 que contiene 12I, que tiene una vida media de 4 días, y puede ser embarcado a cualquier sitio en el mundo, son preferibles en comparación a FDG que tiene una vida media de 110 minutos, y por lo tanto puede únicamente tener distribución limitada dentro de 320 km (200 millas) del sitio de producción. Los compuestos adicionales como NM404 que sufren de retención prolongada (no metabolizado) son preferibles ya que es más probable que éstos puedan tener potencial terapéutico significativo cuando se acoplan con un radioisótopo apropiado como 131I. También, los compuesto como NM404, que pueden ser marcados con una variedad de isótopos del yodo y tienen versatilidad expandida (diagnóstico y terapia, así como una herramienta para estudios en animales experimentados) son preferibles en comparación a FDG, que está limitado a 18F para la exploración PET o potencialmente 19F (estable) para la formación de imagen de resonancia magnética, aunque a niveles de sensibilidad muy bajos. No obstante de su habilidad de dirección a los tumores, FDG debido a su metabolismo rápido en las células tumorales, no tiene potencial para la terapia. Por lo tanto, son necesarios otros compuestos para investigar las recurrencias locales post-RF. De igual modo, si el tumor se vuelve metastático, ya sea por progresión o recurrencia del tumor local, una modalidad de formación de imagen híbrida (combinación de PET y CT) , reemplazando la exploración separada de CT y PET post-procedimiento, es altamente deseable . Además, incluso donde la quimioterapia es el modo de tratamiento, el monitoreo mejorado de la respuesta a la quimioterapia es esencial. Por lo tanto, es deseable el desarrollo de un marcador temprano para estudiar la respuesta a la quimioterapia, para permitir que los medios descontinúen rápidamente el uso de regímenes quimioterapéuticos no efectivos sin exponer a los pacientes a la toxicidad de -los __ tratamientos prolongados. Donde la Terapia por Radiación de Haz Externo es un tratamiento alternativo para pacientes con tumores de histología "similar, los tumores pueden tener respuestas dramáticamente diferentes a la terapia por radiación externa, de intento curativo (XRT, por sus siglas en inglés) . Algunos pacientes con cáncer rectal tratados con radiación pre-operatoria tendrán una respuesta completa, mientras que otros con histología similar (al nivel de microscopía de luz) tendrán una pobre respuesta al tratamiento y la enfermedad será recurrente. La respuesta a la radiación es un factor predictivo para el control tumoral final y la supervivencia para muchos cánceres, incluyendo muchos cánceres gastrointestinales, cáncer de pulmón, cáncer de cabeza y cuello, y cánceres ginecológicos. La mayoría de los métodos de caracterización de respuesta, mientras que son muy predictivos de la respuesta, son realizados después de la terminación del tratamiento, mientras que algunas evaluaciones clínicas intra-tratamiento son útiles en ajustar el tratamiento,14 en la mayoría de los casos no existe método preciso para predecir la respuesta tumoral durante el tratamiento efectivo. Tal prueba, especialmente una aplicable a una amplia gama de sitios tumorales e histologías, podría obviamente ser muy útil y deseable. Otros métodos de tratamiento de diagnóstico incluyen ensayos moleculares que han sido propuestos para predecir la respuesta a la terapia, y los esfuerzos recientes incluyen el uso de los microarreglos de ADN para identificar cambios genéticos que correlacionan con la respuesta o falta de respuesta al tratamiento. Estos son de investigación y ninguno de ellos está en uso clínico rutinario. Otros métodos adicionales de diagnóstico y de tratamiento incluyen el uso de modalidades de formación de imagen para predecir la respuesta durante el tratamiento por XRT. Las exploraciones PET intra-tratamiento utilizando FDG están bajo investigación activa, en donde la captación del isótopo en el tumor primario a mitad de camino a través de la terapia con radiación, es comparada a la captación pretratamiento. Varios estudios retrospectivos sugieren que los pacientes con fuerte captación continua durante el tratamiento tienen resultados más pobres de control del tumor que los pacientes cuyos tumores son menos ávidos por FDG durante el tratamiento.15 No obstante, los métodos de selección, diagnóstico y tratamiento más efectivos para diversos cánceres son extremadamente deseables. Otros tumores bien observados incluyen gliomas malignos que son el tipo más común de tumores primarios de cerebro. A pesar del tratamiento agresivo con la cirugía, radiación y quimioterapia, la mayoría de los pacientes que albergan estos tumores tienen menos de una supervivencia de dos años después del diagnóstico. Avances recientes en neurorradiología y formación de imagen de resonancia magnética (MRI) han realizado un impacto significativo en el diagnóstico y tratamiento tempranos de estos tumores. La mayoría de los gliomas malignos, no obstante, tienen un componente infiltrativo, que es pobremente diferenciado del tejido cerebral edematoso por las técnicas actuales de formación de imagen. Es frecuentemente, este componente del tumor el que es más difícil de tratar y responsable de la recurrencia local. Indudablemente, la mejor visualización de las células de glioma invasor es deseable para el tratamiento terapéutico significativo. De igual modo, el cáncer pancreático es una enfermedad altamente letal con la probabilidad más pobre de supervivencia entre .todas las malignidades mayores. Esta es la quinta causa principal de muerte por cáncer en los Estados Unidos y de todos los cánceres recién diagnosticados en los Estados Unidos, 2% por año son debidos al cáncer pancreático. No obstante, ésta es una de las enfermedades más altamente letales que representan 5% de todas las muertes por cáncer. Miller BA, et al., NIH Pub. No. 96-4104. Bethesda, MD. 1996. Esto es demostrado por el hecho de que no existen sobrevivientes de cinco años en los * pacientes con enfermedad no operable. Además, aunque la resección quirúrgica ofrece la única esperanza para la curación, la supervivencia de cinco años después de la resección es únicamente del 20%. Geer RJ, Brennan MF, Am J Surg 1993; 165:68-72; Yeo CJ, Cameron JL, et al., Ann Surg 1997. Aunque la exploración o escaneo PT con 18-FDG ha mostrado ser promisoria en la formación de imagen de una variedad de otros cánceres primarios, ésta parece tener únicamente habilidad limitada para mejorar después de la capacidad de formación de imagen de la exploración por CT, para pacientes con cáncer pancreático, particularmente en la evaluación para la enfermedad metastática. Kasperk RK, Riesener KP, et al., World J Surg 2001; 25:1134-1139; Sendler A, Avril N, et al., World J Drug 2000; 24:1121-1129. De este modo, sigue existiendo una necesidad para un método de formación de imagen precisa de pacientes con cáncer pancreático metastático oculto. El cáncer hepatocelular es la malignidad de órgano sólido más común en el mundo, debido a su etiología común de daño hepático crónico por hepatitis o alcoholismo. Las proporciones de incidencia varían marcadamente de 2.1 por 100,000 en Norte América hasta 80 por 100,000 en regiones de alta incidencia en China. El riesgo de desarrollar HCC en pacientes con cirrosis es del 1-6% al año. Aunque la resección es la única opción curativa, únicamente 10-30% de los pacientes son candidatos para la cirugía al tiempo de la presentación, debido a la pobre reserva hepática o la presencia de enfermedad no resectable o metastática. Atestiguando la naturaleza agresiva de esta enfermedad, la supervivencia a cinco años es únicamente 15 a 35% después de la resección curativa. Treiber G. Digestive Diseases (2001) 19:311-323. El cáncer de mama es un problema de salud mayor para las mujeres en los Estados Unidos hoy en día. Se anticipó que casi 216,000 mujeres en los Estados Unidos únicamente serían diagnosticadas con cáncer de mama en 2004 y de estas 40,000 se esperaba que murieran. La evaluación precisa de la dispersión metastática local, regional y distante es crítica para el tratamiento y manejo óptimo de la enfermedad. El desarrollo de una modalidad de formación de imagen no invasora que pudiera permitir la detección y/o la caracterización de las metástasis de cáncer de mama local o distantes incluyendo el involucramiento del nodulo linfático podría representar un avance significativo en el manejo de esta enfermedad. Aunque la mamografía es el método de selección actual de elección para la detección inicial del cáncer de mama, la confirmación histológica y la dispersión regional a los nodulos linfáticos vecinos, son típicamente evaluadas por medio de biopsia. Los métodos más sofisticados de formación de imagen que incluyen exploración cintigráfica con 99mTc-Sestamibi y la exploración con 18F-FDG de PET han sido ahora extensamente examinadas, pero no han impactado la planificación del tratamiento significativamente principalmente debido a la especificidad impredecible. Wahl RL. Waurt J of Nucí Med (1998) 42:1-7. El papel de la exploración de PET ha indicado eficacia, no obstante, en el monitoreo de la respuesta tumoral a la quimioterapia. Smith IC, Welch AE, et al., J of Clin Oncol (2000) 18:1676-1788; Schelling M, Avril N, et al., J. of Clin Oncol (2000) 18:16989-1695. La terapia con radiación tiene un papel bien establecido en el tratamiento del cáncer de mama, principalmente debido a la sensibilidad de muchos tumores epiteliales sólidos, incluyendo el carcinoma ductal de infiltración, a la radiación ionizante. DeVita V. Hellman S, Rosenberg S. Cáncer: Principies and Practice of Oncology, 6a. edición, Philadelphia (PA) ; Lippincott, Williams y Wilkins, 2002, pp. 1667-1680. La indicación más común para radiación en el cáncer de mama es como tratamiento adyuvante después de la lumpectomía o mastectomía. En este contexto, la terapia con radiación ha mostrado que disminuye dramáticamente la incidencia de recurrencia local y regional por estabilización de los depósitos microscópicos en estos tejidos. La quimioterapia es ofrecida cuando la paciente tiene enfermedad metastática o es considerada como poseedora de un riesgo incrementado para metástasis ocultas. En esta última indicación, aquella de la administración de quimioterapia con adyuvante, los estudios confirman supervivencia mejorada en pacientes que reciben quimioterapia con adyuvante o terapia hormonal. La radiación es también utilizada en el tratamiento paliativo con buen efecto en la reducción del dolor y los efectos de volumen de las metástasis en órganos sólidos y el hueso. Muchos pacientes recaen después de la terapia definitiva por razones que son multifactoriales . La resistencia adquirida a la radiación y a la quimioterapia indudablemente contribuyen a la recurrencia después de la terapia primaria. Además, el uso de la radiación está asociado con toxicidades específicas que son en general de ocurrencia tardía y limitantes de la dosis. La fibrosis, el daño nervioso, y la necrosis a los tejidos suaves pueden ser severos si se utilizan dosis excesivas de radiación. El linfedema del brazo es la toxicidad más común y la temida toxicidad para los pacientes con cáncer de mama, y los resultados más frecuentemente provenientes de la combinación de la disección axilar (realizada para fines de diagnóstico) y radiación con adyuvante a la axila. En contraste a los nuevos fármacos anticancerosos que están dirigidos en gran medida a los receptores de moléculas específicas para cada tipo de tumor particular, los nuevos compuestos que confían en un mecanismo común aplicable a una variedad de diferentes tipos de tumor, son extremadamente deseables. Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad clínica abrumadora para las técnicas de formación de imagen de cáncer de mama no invasor, que proporcionen alta sensibilidad y especificidad. Además, el potencial para distribuir una dosis terapéutica de yodo 131 simultáneamente a tumores primarios y metastáticos, es un beneficio agregado significativo . El cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC, por sus siglas en inglés) es la causa principal de muerte por cáncer en los Estados Unidos hoy en día. La resección quirúrgica en pacientes apropiadamente seleccionados ofrece la mejor oportunidad para la supervivencia a largo plazo y puede ser curativa. La evaluación pre-operatoria precisa de la dispersión metastática local, regional y distante es de este modo crítica para el manejo óptimo. La evaluación del estado del nodulo linfático mediastinal, es esencial debido a la metástasis nodal, que ocurre en casi la mitad de todos los pacientes con NSCL, es probablemente la barrera más frecuentemente de curar. La preparación precisa puede también ahorrarle a los pacientes la morbididad de los procedimientos quirúrgicos no curativos, innecesarios. La formación de imagen con la exploración FDG-PET se está volviendo rápidamente el estándar de oro para la formación de imagen de NSCLC, debido a las proporciones de sensibilidad mejoradas, particularmente cuando se compara con la formación de imagen CT. No obstante, ésta es una prueba cara de formación de imagen que no está disponible en las prácticas de la mayoría de las comunidades. : Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad para una técnica de formación de imagen que sea sensible, específica y utilice los recursos que están ya disponibles para la mayoría de los pacientes. La exploración • por tomografía de emisión de positrones (PET) con 18F-FDG ha generado considerable interés como una técnica de formación de imagen. Un estudio reciente comparó prospectivamente la habilidad de un procedimiento estándar a la preparación para NSCLC (CT, ultrasonido, exploración ósea) , y la exploración PET para detectar metástasis en los nodulos linfáticos mediastinales y sitios distantes. Pieterman RM, vanPutten JWG, Meuzzelaar JJ, Mooyaart EL, Valburg W, Koeter GH, Fidler V, Pri J, Groen HJM, Preopera tive Staging of Nong-Small Cell Lung cáncer with Positron-Emission Tomography. New Eng J. Med 343:254-261, 20000. El involucramiento mediastinal fue confirmado histopatológicamente, y las metástasis distantes fueron confirmadas por otras pruebas de formación de imagen. La sensibilidad y la especificidad de PET para detectar las metástasis mediastinales fueron de 91% y 86%, respectivamente, para detectar las metástasis distantes, 82% y 93%, respectivamente. Esto se compara a la sensibilidad y especificad para la exploración CT del involucramiento mediastinal de 75% y 66%, respectivamente. Otro estudio más comparó la formación de imagen con FDG-PET, CT y • los resultados de histología. La sensibilidad completa, la especificidad y la precisión de PEG para la preparación de los nodulos mediastinales (n = 168 en 54 pacientes) fue del 96%, 93% y 94%, en comparación a 68%, 65% y 6% con CT. Gupta NC, Graeber GM, Bishop HA. Compara tive efficacy of positrón emisión tomography with fluorodeoxyglucose in evalúate of small (< 1 cm) , intermedíate (1 to 3 cm) , and large (> 3 cm) lymph node lesions . Chest 117 (3) : 773-778, 2000. Las limitaciones de la exploración PET, no obstante, incluyen el costo, la disponibilidad limitada, la incapacidad para detectar lesiones por debajo de 1 cm, y la falta de especificidad, particularmente en pacientes con enfermedad inflamatoria o granulomatosa. Stokkel MP, Bakker PF, Heine R, Schlosser NJ, Lammers JW, Van Rijk PP. Staging of lymph nodes with FDG dual headed PET in patients with non-small cell lung cáncer. Nucí Med Communications 20 (1) : 1001-1007, 1999; Kapuco LO, Meltzer CC, Townsend DW, Keenan RJ, Luketich JD. Fluorine-18-fluoro-deoxyglucose uptake in pneumonia . J Nucí Med 38 (7 ): 267-1269, 1998. Las técnicas convencionales de formación de imagen anatómica tales como la exploración CT tampoco son tan buenas para- predecir la supervivencia después del tratamiento, a pesar del encogimiento del tumor después de la terapia. • En un estudio reciente que involucró 56 pacientes con NSCLC que recibieron tratamiento con quimio/radioterapia basada en cisplatino, concurrente, o radioterapia sola para la enfermedad avanzada, la respuesta por formación de imagen CT convencional no correlacionó con la supervivencia. MacManus MP, Hicks RJ, Wada M, Hoff A, Matthews J, Wirth A, Rischin D, Ball DL. Early F-18 FDG-PET response to radical chemoradiotherapy correlates strongly with survival in unresectable non-small cell lung cáncer. Proc ASCO 19:483a, 2000. La respuesta por las exploraciones FDG-PET, no obstante, sí correlacionó fuertemente con la supervivencia (p = 0.0006). La supervivencia a partir de la fecha de una exploración PET de seguimiento fue 84%, y 84% a los 1 y 2 años respectivamente para 24 pacientes quienes habían logrado una respuesta completa sobre PET, pero únicamente 43% y 31% de los 32 pacientes quienes no la tuvieron (p = 0.010). Estos resultados corroboran hallazgos similares reportados recientemente por otros autores. Patz EF Jr, Connolly J, Herndon J. Prognostic valué of thoracic FDG PET imaging after treatment for non-small cell lung cáncer. Am J Roentgenology 174(3) :769-774, 2000; Vansteenkiste JF, Stroobants SG, Dupont PJ, DeLeyn PR, Verbeken EK, Deneffe GJ, Mortelmans LA, Demedts MG. Prognostic importance of the standarized uptake valué on (18) F-fluoro-2-deoxy-glucose positrón emission tomography sean in non-samall cell lung cáncer: An analysis of 125 cases . J Clin Oncol 1 (10) : 3201-3206, 1999; Ahuja V. Coleman RE, Herndon, J. Patz EF Jr. The prognostic significance of fluorodeoxyglucose positrón emission tomography - imaging for patients with non-small cell . lung carcinoma . Cáncer 83 (5) : 918-924. 1998. Por lo tanto, un producto radiofarmacéutico fácilmente disponible que podría identificar de manera precisa y potencialmente tratar la enfermedad metastática temprana en los pacientes con NSCLC, tendría un impacto importante sobre el cuidado del paciente, en términos de preparación y respuesta a la terapia. Aunque los procedimientos de formación de imagen PET están ganando efectividad en esta área, el costo y la inaccesibilidad limitan severamente su aplicación práctica. Sigue existiendo. una necesidad para una técnica de formación de imagen, funcional, precisa, basada en una función específica del tumor, que pueda seleccionar no invasivamente el cuerpo entero utilizando dispositivos de formación de imagen relativamente baratos y ampliamente disponibles.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona en general los métodos y técnicas para la detección y tratamiento de diversos cánceres. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para detectar y localizar el cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical en el sujeto que tiene o que está sospechoso de tener cáncer. El método comprende los pasos de: a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; b) determinar si un órgano sospechoso de tener cáncer del sujeto retiene un nivel más alto del análogo que la o las regiones circunvecinas, en donde una región de retención más alta indica la detección y localización del cáncer. En este método el análogo de fosfolípido se selecciona de: O donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. En este método, X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I, 123I, 124I, 125I y 131I . Preferentemente, en este método, el éter de fosfolípido es 18- (p-yodofenil) octadecil-fosfocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil] -1, 3-propanodiol-3-fosfocolina, ó 1-0-[18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3-fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo. En otra modalidad más, la presente invención proporciona un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto. El método comprende administrarle al sujeto una cantidad efectiva de una molécula que comprende un análogo de éter de fosfolípido, como se describe anteriormente. En este método, el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical, glioma, cáncer de mama, cáncer pancreático, carcinosarcoma y cáncer de próstata. La presente invención también contempla el uso de un análogo de éter de fosfolípido para la producción de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer. Estos análogos de fosfolípidos se seleccionan del grupo discutido anteriormente. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un método para diferenciar la inflamación, el adenoma y la hiperplasia de la neoplasia en un sujeto. El método comprende los pasos de: a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; y b) determinar si un órgano sospechoso de tener inflamación, adenoma, hiperplasia o neoplasia del sujeto, retiene un nivel más alto del análogo que la o las regiones circunvecinas. Cuando el sujeto exhibe una región de retención más alta, esto implica la detección y localización de la neoplasia, y cuando el sujeto muestra una región de retención menor, esto indica la presencia de un órgano sospechoso de tener el adenoma, la hiperplasia o la inflamación. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un método para detectar la neoplasia en una muestra de tejido que tiene una fosfolipasa D (PLD, por sus siglas en inglés) . El método comprende el paso de: (a) cuantificar el nivel de actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm de PLD en la muestra de tejido; y (b) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel de actividad de proteína que la o las regiones de tejido circunvecinas, en donde una región de menor actividad indica la detección y localización de la neoplasia, o (c) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel de ARNm que la o las regiones de tejido vecinas, en donde una región de menor nivel de ARNm, indica la - detección y localización de la neoplasia. En este método, la actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm pueden ser cuantificados al poner en contacto la muestra de tejido con un análogo de PLE, como se describió anteriormente. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un agente antitumoral seleccionado por un método de selección de una muestra de tejido que tiene un PLD que comprende el paso de: (a) cuantificar la actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm de PLD, en donde la actividad reducida de la proteína PLD o el nivel reducido del ARNm, comparados a la o las regiones de tejido circunvecinas, es indicadora de una neoplasia. La actividad de la proteína PLD o el nivel de ARNm pueden ser cuantificados al poner en contacto la muestra de tejido con un análogo de PLD, como se describe anteriormente. Otros objetivos y ventajas del presente invención serán aparentes a partir de la descripción detallada, los dibujos y las reivindicaciones anexas a la especificación.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Hipótesis de formación de imagen de células tumorales por PLE. Figura 2 Cintigrafía del pecho anterior del paciente 03, adquirida a los 1, 2 y 6 días después de la administración IV de 1 mCi de 131I-NM324. La captación es observada en el cáncer pulmonar ungular izquierdo (T) con proporciones cada vez mayores de tumor-a-antecedente sobre el tiempo. Figura 3 Estructuras de los análogos de PLE. Figura 3A. Un análogo de NM404.

Figura 4 . Comparación de NM324 y NM404 en el modelo de tumor pulmonar A549 de ratón SCID, después de la administración IV . Nótese que la mayor parte de la actividad de NM324 es encontrada en el intestino y no en el tumor ( implantado en el muslo) mientras que NM404 identificó un tumor en cada muslo . Figura 4A. Imágenes cintigráficas de NM404 de tumores de próstata metastáticos IXinning R3327 en una rata Copenhagen con el sitio del tumor primario (pata) quirúrgicamente removido. Fueron verificados dos tumores del nodulo linfático post-mortem. Figura 5. Gráfica del crecimiento del tumor CT26 en el modelo murino subcutáneo en donde se muestra el crecimiento del tamaño del tumor (mm) conforme a los días . Figura 6A-6C. Foto digital (A) del tumor CT-26 extirpado (T) y nodulos linfáticos izquierdo y derecho (LN) . Imagen de Bioscan (B) e imagen fusionada de foto/Bioscan (C) que muestra la correlación de la radioactividad en el tumor . Figura 7A-7D. Imágenes MicroCT del ratón vivo de la figura 6 que muestra el tamaño y la localización del CT-26 (flechas) . Superficie tridimensional proporcionada e imágenes de empalme planas (A, B) así como rebanadas coronal C) y 6 axial (D) (espesor de 40 µm) . Figura 8. Sección histológica (H&E) del tumor CT-26 normal (izquierda) y eliminado por RF (derecha) . La sección sometida a ablación ha perdido la integridad de la membrana y aparece pignótica. Figura 9A-9C. Foto magen de Bioscan/ foto digital in vivo, fusionada, de ratón con tumor pancreático c-myc, 4 días después de la inyección de 15I-NM404 (A) . Imagen ex vivo de los tumores extirpados (B) para comparación con la foto digital (C) . La gama de colores es igual que en la figura 10. Figura 10A-10E. Imágenes de Bioscan del ratón con tumor pancreático c-myc, 4 días después de la administración de 125I-NM404. La imagen in vivo (A) comparada con la foto digital del ratón disectado (B) que muestran la presencia de un tumor pancreático grande (T) (2 cm) . Tres tumores fueron extirpados y la carcasa remanente fue explorada (C) . Los tumores extirpados fueron explorados (D) para comparación con la foto digital (E) . La escala de colores va de 0 (negro) hasta 40 (blanco) cpm. Figura 11A-11D. Exploraciones axiales de MicroCT de ratones que poseen tumor pancreático. Dos tumores grandes (T) son fácilmente observados en la imagen axial en el panel A. La imagen de un ratón diferente en B describe un tumor pancreático (flecha) localizado adyacente al bazo. En ratones, el páncreas es un tejido ubicuo. Una foto digital del bazo extirpado y el tumor acoplado se muestra en 11C para comparación. Figura 12A-12B. Imagen de Bioscan (4 días después de la inyección de 125I-NM404) de cerebro de rata control negativo (A) y la misma imagen de Bioscan superpuesta sobre la fotografía digital correspondiente del cerebro extirpado de rata, que muestra bajo nivel antecedente de NM 04 en el tejido cerebral normal. Figura 13A-13D. Fotografía digital (A) e imagen de Bioscan correspondiente de cerebro de rata que posee el glioma C6, extirpado (B) 4 días después de la inyección IV de 125I-NM404. La imagen de Bioscan fusionada en posición y de igual tamaño y la fotografía (C) indica localización intensa de NM404 en el tumor. La presencia del tumor fue histológicamente confirmada en la muestra teñida con H & E en D. Figura 14. Exploración microCT coronal (izquierda) e imagen de exploración dorsal (derecha) de un ratón que posee el hematoma TGFa, 10 días después de la inyección de 125I-NM404. El hígado es aumentado en la imagen microCT con ITG, y el agente de contraste CT selectivo de hepatocitos (Tumor = T) . Figura 15A-15D. Fotografía (A) e imagen de Bioscan (B) del hígado de ratón que posee el tumor CT-26 extirpado, 7 días después de la inyección de NM404. El involucramiento del tumor hepático fue extenso. El implante tumoral ocurrió 15 días antes de esta exploración. La imagen de Bioscan (C) y la fotografía (D) de los tumores disectados, extirpados (T) y el hígado no involucrado normal (L) . Figura 16. MicroCT del mismo ratón presentado en la figura 17, que muestra la presencia de múltiples tumores CT26. El hígado fue aumentado utilizando ITG, un agente de contraste selectivo a hepatocitos. Estas imágenes fueron adquiridas 10 días después de la implantación de la célula tumoral y 5 días antes de las imágenes de Bioscan anteriores. (Los tumores descritos por flechas y la vesícula biliar = GB) . Figura 17. Imágenes de Bioscan de NM404 del ratón Min con tumor mamario axilar derecho espontáneo (de 10 mm de diámetro) a diversos tiempos después de la administración IV de 125I-NM 0 (15 µCi) . Imagen coronal microCT (no aumentada en contraste) es mostrada para comparación anatómica (panel izquierdo, T = tumor) . Figura 18A-18F. Fotografías teñidas de carmín (A, C) e imágenes de Bioscan (B, D) de las glándulas mamarias abdominales izquierda y derecha extirpadas . Nótese el tumor de 2 mm en el panel A (T) que es fácilmente detectado en la imagen de Bioscan (B) de la glándula izquierda. El nodulo linfático (flecha pequeña en A) no muestra captación de NM404. No fueron visualmente detectados tumores en la glándula derecha (C, D) . La fotografía (E) y la imagen de Bioscan (F) del colon indican ausencia de captación de NM404 en los pólipos adenomatosos (flechas) . Figura 19A-19C. Exploraciones MicroCT del ratón Min de la figura 18. El panel A es una superficie de baja densidad que muestra un' tumor mamario axilar izquierdo, grande. El panel B es la superficie de alta densidad que se presenta después de que fue administrado el agente de contraste para CT de combinado sanguíneo BP10, para ayudar a localizar los bazos alimentadores del tumor. El panel C es una imagen de CT coronal compuesta y . la superficie de alta densidad que muestra la localización absoluta del bazo alimentador. - La orientación es desde abajo en el panel C, mientras que los paneles A y B son observados desde arriba. Figura 20. Imágenes de la exploración NM404 del ratón Min con adenocarcinoma mamario axilar derecho espontáneo (10 mm de diámetro) a diversos puntos después de la administración IV de 125I-NM404 (15 µCi) . La imagen microCt coronal (no aumentada en contraste) es mostrada para comparación anatómica (panel izquierdo tumor = T) . Figura 21A-21E. Imagen de Bioscan de glándulas mamarias extirpadas (A) y colon (E) provenientes de un ratón FVBxB6Min, 8 días después de la administración de NM404. La foto digital correspondiente de los mismos tejidos extirpados en B y D, respectivamente. La fotografía C agrandada, teñida de carmín muestra la presencia de hiperplasias (flechas) pero no la actividad focal correspondiente en la imagen de Bioscan (A) . La captación del tumor sobre la imagen de Bioscan (A) corresponde al adenocarcinoma más grande en B. La fotografía y la imagen de Bioscan en (E) del colon extirpado indica ausencia de captación en NM404 en pólipos adeno atosos (flechas) . Figura 22A-22C. Exploraciones MicroCT de ratón Min mostradas en la figura 21. El panel A es una superficie de baja densidad que se presenta mostrando un tumor mamario axial izquierdo, grande. El panel B es la superficie de alta densidad que se presenta después de que se administró el agente de contraste para CT de combinado sanguíneo BP10, para ayudar a localizar los vasos alimentadores del tumor. El panel C es una imagen de CT coronal, compuesta y la superficie de alta densidad que se presenta mostrando la localización absoluta de los vasos alimentadores. La orientación es desde abajo en el panel C, mientras que los paneles A y B son observados desde arriba. Figura 23A-23D. Comparación de la captación de 125I-NM404 (A y B) y NM324 (C y D) en pulmones de ratón SCID extirpados, que contienen microrredes de CA de pulmón A549 (< 1 mm de diámetro) . Figura 24. Metabolismo enzimático de PL?'s. Figura 25. Tiempo para el primer tumor en ratones Min/+ tratados con ENU. El tiempo para el primer tumor mamario expresado como días después de ENU. Ratones hembra Min/+ fueron tratados con ENU y verificados dos veces a la semana para la presencia de tumores mamarios. El tiempo después del tratamiento con ENU para el primer tumor es trazado gráficamente en intervalos de 5 días para B6Min/+ (n = 45) (D) , BRB6 Min/+ (n = 18) (?) , FVBB6 Min/+ (n = 18) (0) Figura 26A-26C. Imágenes de Bioscan de ratones FVBxB6Min propensos 1 (A) y 7 (B) días después de la administración de 125I-NM404 indica la presencia de tumor mamario axilar grande. La imagen de Bioscan de las glándulas mamarias extirpadas (C) 10 días después de la inyección, muestra la incorporación de NM404 en adenocarcinoma grande de 10 mm y el tumor adyacente más pequeño de 10 mm que no fue visible en la exploración in vivo. Figura 27. Imágenes MicroCT del mismo ratón FVBxB6Min, como se muestra en la figura 26, mostrando el tumor mamario axilar grande. Rebanadas coronales y axiales son mostradas en A y B, mientras que las rebanadas de superficie tridimensional (oro) y coronales son mostradas simultáneamente en las vistas posterior (C) y anterior (D) . Figura 28. Regresión tumoral aparente de SCC 1 y 6, después de la inyección de 125I-NM404. Figura 29. Imágenes de cámara gamma del paciente 1 (panel izquierdo) a los 4 y 11 días después de la inyección de 131I-NM404 que muestra retención intensa y prolongada del agente en tumores NSCLC (flechas) . Exploraciones axiales de CT (panel derecho) que muestran la localización del tamaño de la lesión focal de 3 cm en el pulmón izquierdo (A) y la masa infiltrativa grande en el pulmón derecho (B) (flechas) . Figura 30. Imágenes de medicina nuclear plana del cuerpo entero, anterior y posterior del paciente 2 (panel izquierdo) después de la administración iv de 131I-NM404. Las exploraciones axial (A) y coronal (B) de CT (panel derecho) que muestran localización de NSCLC de 6 cm grande (flechas) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Descripción general de la invención: Antes de que se describan los presentes métodos, se debe entender que esta invención no está limitada a la metodología, protocolos, líneas celulares y reactivos particulares descritos, ya que éstos pueden variar. Se debe entender también que la terminología utilizada en la presente es para fines de describir las modalidades particulares únicamente, y no está destinada a limitar el alcance de la presente invención que será limitada únicamente por las reivindicaciones anexas. Se debe notar que como se utiliza en la presente y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un", "una" y "el", "la" incluyen la referencia plural a no ser que el contexto lo dicte claramente de otro modo. De este modo, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y equivalentes de las mismas, conocidos por aquellos expertos en la técnica, y así sucesivamente. También, los términos "un" (o "una"), "uno o más" y "al menos uno o una" pueden ser utilizados intercambiablemente en la presente. Se debe notar también que los términos "que comprende", "que incluye" y "que tiene" pueden ser utilizados intercambiablemente. A no ser que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente, tienen los mismos significados que son comúnmente comprendidos por una persona de experiencia ordinaria en la técnica a la cual pertenece la invención. Aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en la presente pueden ser utilizados en la práctica o prueba de la presente invención, los métodos y materiales preferidos son ahora descritos. Todas las publicaciones mencionadas en la presente son incorporadas aquí por referencia para fines de describir y detallar los productos químicos, líneas celulares, vectores, animales, instrumentos, análisis estadísticos y metodologías, que son reportados en las publicaciones que pueden ser utilizadas en conexión con la invención. Nada en la presente tiene que ser considerado como una admisión de que la invención no está autorizada para antefechar tal descripción en virtud de la invención previa. Como se definen en la presente, el término "isómero" incluye, pero no está limitado a, los isómeros ópticos y análogos, isómeros estructurales y análogos, isómeros conformacionales y análogos y similares. En una modalidad, esta invención abarca el uso - de diferentes isómeros ópticos de un compuesto antitumoral de la Fórmula 3A. Podrá ser apreciado por aquellos expertos en la técnica que los compuestos antitumorales útiles en la presente invención pueden contener al menos un centro quiral. En consecuencia, los compuestos utilizados en los métodos de la presente invención pueden existir en, y ser aislados en, formas ópticamente activas o racémicas. Algunos compuestos pueden también mostrar polimorfismo. Se debe entender que la presente invención puede abarcar el uso de cualquier forma racémica, ópticamente activa, polimórfica o estereoisomérica, o mezclas de las mismas, y la forma posee propiedades útiles en el tratamiento de condiciones relacionadas a tumores, descritas y reclamadas en la presente. En una modalidad, los compuestos antitumorales pueden incluir (R) -isómeros puros. En una modalidad, los compuestos antitumorales pueden incluir (S)-isómeros puros. En otra modalidad, los compuestos pueden incluir una mezcla de los isómeros (R) y (S) . En otra modalidad, los compuestos pueden incluir una mezcla racémica que comprende ambos isómeros (R) y (S) . Es bien sabido en la técnica cómo preparar las formas ópticamente activas (por ejemplo, mediante resolución de la forma racémica mediante técnicas de recristalización, mediante síntesis a partir de materiales iniciales ópticamente activos, mediante síntesis quiral, o mediante separación cromatográfica utilizando una fase estacionaria quiral) . La invención incluye el uso de sales farmacéuticamente aceptables de compuestos sustituidos con amino con ácidos orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, ácido cítrico y ácido clorhídrico. La invención también incluye los N-óxidos de los sustituyentes amino de los compuestos descritos en la presente. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden ser también preparadas a partir de los compuestos fenólicos mediante tratamiento con bases inorgánicas, por ejemplo, hidróxido de sodio. También, los esteres de los compuestos fenólicos pueden ser elaborados con ácidos carboxílicos alifáticos y aromáticos, por ejemplo, esteres de ácido acético y benzoico. Como se utiliza en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a un compuesto formulado a partir de un compuesto bases, que logra sustancialmente el mismo efecto farmacéutico que el compuesto base. Esta invención incluye además el método que utiliza los derivados de los compuestos antitumorales. El término "derivados" incluye pero no está limitado a derivados de éter, derivados de ácido, derivados de amida, derivados de éster y similares. Además, esta invención incluye adicionalmente los métodos que utilizan hidratos de los compuestos antitumorales. El término "hidrato" incluye pero no está limitado a, hemihidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato y similares. Esta invención incluye además los métodos para utilizar los metabolitos de los compuestos antitumorales. El término "metabolito" significa cualquier ' sustancia producida a partir de otra sustancia, mediante metabolismo o un proceso metabólico. Como se define en la presente, "puesta en contacto" significa que el compuesto antitumoral utilizado en la presente invención es introducido dentro de una muestra que contiene el receptor en un tubo de ensayo, matraz, cultivo de tejidos, chip, arreglo, placa, microplaca, capilar o similar, y se incuba a una temperatura y tiempo suficientes para permitir el enlace del compuesto antitumoral a un receptor. Los métodos para poner en contacto las muestras con el compuesto antitumoral u otros componentes de enlace específico son conocidos por aquellos expertos en la técnica y pueden ser seleccionados dependiendo del tipo de protocolo de ensayo que va a ser corrido. Los métodos de incubación son también estándares y son conocidos por aquellos expertos en la técnica. En otra modalidad más, el término "puesta en contacto" significa que el compuesto antitumoral utilizado en la presente invención es introducido dentro de un paciente que recibe tratamiento, y el compuesto se deja entrar en contacto in vivo. Como se utiliza en la presente, el término "tratamiento" incluye el tratamiento preventivo así como remitente del trastorno. Como se utiliza en la presente, los términos "reducción", "supresión", e "inhibición" tienen su significado comúnmente entendido de aminoramiento o disminución. Como se ilustra en la presente, el término "progresión" significa el incremento en alcance o severidad, avance, desarrollo o empeoramiento. Como se utiliza en la presente, el término "recurrencia" significa el retorno de una enfermedad después de una remisión. Como se utiliza en la presente, el término "administración" se refiere a poner al paciente, tejido, órgano o células, en contacto con' un compuesto éter fosfolipídico antitumoral. Como se utiliza en la presente, la administración puede ser lograda in vitro, por ejemplo, en un tubo de ensayo, o in vivo, por ejemplo, en células o tejidos de organismos vivientes, por ejemplo, humanos. En ciertas modalidades, la presente invención abarca la administración de los compuestos útiles en la presente invención, a un paciente o sujeto. Un "paciente" o "sujeto", utilizado equivalentemente en la presente, se refiere a un mamífero, preferentemente un humano, que: (1) tiene ya sea un trastorno remediable o bien tratable por la administración de la sustancia antitumoral, utilizando un compuesto de éter fosfolipídico o (2) es susceptible a un trastorno que es prevenible por administración del compuesto antitumoral utilizando un compuesto éster de fosfolípido. Como se utiliza en la presente, "composición farmacéutica" significa cantidades terapéuticamente efectivas del compuesto antitumoral, junto con diluyentes, conservadores, solubilizantes, emulsificantes y adyuvantes adecuados, colectivamente denominados "portadores farmacéuticamente aceptables". Como se utiliza en la presente, los términos "cantidad efectiva" y "cantidad terapéuticamente efectiva" se refieren a la cantidad del agente terapéutico suficiente para producir una respuesta terapéutica deseada, sin efectos colaterales adversos indebidos tales como toxicidad, irritación o respuesta alérgica. La "cantidad efectiva" específica, obviamente variará con factores tales como la condición particular que se trate, la condición física del paciente, el tipo de animal que se trate, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente (si la hay) , y las formulaciones específicas empleadas y la estructura de los compuestos o sus-derivados. En este caso, la cantidad sería considerada terapéuticamente efectiva si diera como resultado uno o más de los siguientes: (a) la prevención de la enfermedad (por ejemplo, cáncer pancreático, cáncer de mama) ; y (b) la reversión o estabilización de tal enfermedad. Las cantidades efectivas óptimas pueden ser fácilmente determinadas por una persona de experiencia ordinaria en la técnica, utilizando experimentación rutinaria. Las composiciones farmacéuticas son líquidas o liofilizadas o de otro modo son formulaciones secadas e incluyen diluyentes de diversos contenidos de amortiguador (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato) , pH y fuerza iónica, aditivos tales como albúmina o gelatina para prevenir la absorción a las superficies, detergentes (por ejemplo, Tween (polisorbato) 20, Tween 80, Pluronic F68, sales de ácidos biliares),- agentes de solubilización (por ejemplo, glicerol, . polietilen-glicerol) , anti-oxidantes (ácido ascórbico, metabisulfito de sodio) , conservadores (por ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenos), sustancias de volumen o modificadores de la tonicidad (por ejemplo, lactosa, manitol) , enlace covalente de los polímeros tales como polietilenglicol a la proteína, formaciones de complejos con iones metálicos, o incorporación de material dentro o sobre preparaciones particuladas de compuestos poliméricos tales como ácido poliláctico, ácido poliglicólico, hidrogeles, etc., o sobre liposomas, microemulsiones, micelas, vesículas unilaminares o multilaminares, eritrocitos fantasmas o esferoplastos. Tales composiciones influirán el estado físico, la solubilidad, la estabilidad, la velocidad de liberación in vivo, y la velocidad de despejo in vivo. Las composiciones de liberación controlada o sostenida incluyen la formulación en depósitos lipofílicos (por ejemplo, ácidos grasos, ceras, aceites) . También abarcados por la invención están los métodos de administración de las composiciones particuladas recubiertas con polímeros (por ejemplo, poloxámeros o poloxaminas) . Otras modalidades de las composiciones incorporan formas particuladas de recubrimientos protectores, inhibidores de proteasas o aumentadores de la permeación para diversas rutas de administración, incluyendo las rutas tópica parenteral, pulmonar, nasal y oral. En una modalidad, la composición farmacéutica es administrada parenteralmente paracanceralmente, transmucosalmente, transdérmicamente, intramuscularmente, intravenosamente, intradérmicamente, subcutáneamente, intraperitonealmente, intraventricularmente, intracranealmente e intratumoralmente. Además, como se utiliza en la presente, "portadores farmacéuticamente aceptables" son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica e incluyen, pero no están limitados a, 0.01-0.1 M y preferentemente 0.05 M de amortiguador de fosfato o solución salina al 0.9%. Adicionalmente, tales portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser soluciones, suspensiones, y emulsiones acuosas o no acuosas. Los ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva, y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución salina y medios amortiguados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, aceites de Ringer lactatados y aceites fijos. Los vehículos intravenosos incluyen reabastecedores de fluidos y nutrientes, reabastecedores de electrolitos tales como aquellos basados en dextrosa de Ringer, y similares. Pueden estar también presentes conservadores y otros aditivos, tales como por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes de colación, gases inertes y similares. Las composiciones de liberación controlada o sostenida, administrables de acuerdo a la presente invención, incluyen la formulación en depósitos lipofílicos (por ejemplo, ácidos grasos, ceras, aceites) . También comprendidas por la invención están las composiciones particuladas recubiertas con polímeros (poloxámeros o poloxáminas) y el compuesto acoplado a los anticuerpos dirigidos contra receptores específicos de tejidos, ligandos o antígenos, o acoplados a ligandos de receptores específicos de tejidos. Otras modalidades de las composiciones administradas de acuerdo a la invención, incorporan formas particuladas, recubrimientos protectores, inhibidores de proteasa o aumentadores de la permeación para diversas rutas de administración, incluyendo parenteral, pulmonar, nasal y oral. Los compuestos modificados por el acoplamiento covalente de los polímeros solubles en agua tales como polietilenglicol, copolímeros o polietilenglicol y polipropilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivínilico, polivinilpirrolidona o poliprolina, se sabe que muestran vidas medias sustancialmente más prolongadas en la sangre después de la inyección intravenosa que los compuestos correspondientes no modificados (Abuchowski et al., 1981; Newmark et al., 1982; y Katre et al., 1987). Tales modificaciones pueden también incrementar la solubilidad del compuesto en solución acuosa, eliminar la agregación, aumentar la estabilidad física y química del compuesto y reducir en gran medida la inmunogenicidad y la reactividad del compuesto. Como resultado, la actividad biológica deseada in vivo puede ser lograda por la administración de tales aductos de polímero-compuesto, menos frecuentemente o en dosis menores que con el compuesto no modificado. En otro método más de acuerdo a la invención, una composición farmacéutica puede ser distribuida en un sistema de liberación controlada. Por ejemplo, el agente puede ser administrado utilizando infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, un parche transdérmico, liposomas, u otros modos de administración. En una modalidad, puede ser utilizada una bomba (ver Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989) . En otra modalidad más, pueden ser utilizados materiales poliméricos. En otra modalidad más, puede ser colocado un sistema de liberación controlada en proximidad al objetivo terapéutico, por ejemplo, el hígado, requiriendo de este modo únicamente una fracción de la dosis sistémica (ver por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Reléase, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984) . Otros sistemas de liberación controlada son discutidos en la revisión por Langer (Science 249:1527-1533 (1990). La preparación farmacéutica puede comprender el compuesto antitumoral solo, o puede incluir además un portador farmacéuticamente aceptable o puede estar en forma sólida o líquida tales como tabletas, polvos, cápsulas, pellas, soluciones, suspensiones, elíxires, emulsiones, geles, cremas o supositorios, incluyendo supositorios rectales y uretrales. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen gomas, almidones, azucares, materiales celulósicos y mezclas de los mismos. La preparación farmacéutica que contiene el compuesto antitumoral puede ser administrada a un paciente, por ejemplo, mediante implantación subcutánea de una pella. En una modalidad adicional, una pella proporciona liberación controlada del compuesto antitumoral en un periodo de tiempo. La preparación puede ser además administrada mediante inyección intravenosa, intraarterial, intramuscular, de una administración oral, de preparación líquida, de una preparación sólida o líquida, o mediante aplicación tópica. La administración puede ser también lograda mediante el uso de un supositorio rectal o un supositorio uretral. Las preparaciones farmacéuticas administrables por la invención pueden ser preparadas mediante procesos conocidos de disolución, mezclado, granulación o formación de tabletas. Para la administración oral, los compuestos antitumorales o sus derivados fisiológicamente tolerados tales como sales, esteres, N-óxidos, y similares son mezclados con aditivos acostumbrados para este propósito, tales como vehículos, estabilizadores o diluyentes inertes, y convertidos mediante métodos acostumbrados a formas adecuadas para la administración, tales como tabletas, tabletas recubiertas, cápsulas de gelatina suave o dura, soluciones acuosas, alcohólicas o aceitosas. Los ejemplos de vehículos inertes adecuados son bases de tableta convencionales tales como lactosa, sucrosa, o almidón de maíz, en combinación con aglutinantes tales como acacia, almidón de maíz, gelatina, agentes desintegradores, tales como almidón de maíz, almidón de papa, ácido algínico, o con un lubricante tal como ácido esteárico o estearato de magnesio. Los ejemplos de vehículos aceitosos adecuados o solventes son aceites vegetales o animales tales como aceite de girasol o aceite de hígado de pescado. Las preparaciones pueden ser efectuadas como granulos secos o como granulos húmedos. Para la administración parenteral (inyección subcutánea, intravenosa, intra-arterial o intramuscular) , y los compuestos antitumorales o sus derivados fisiológicamente tolerados tales como sales, esteres, N-óxidos y similares, son convertidos a una solución, suspensión o emulsión, si se desea, con las sustancias acostumbradas y. adecuadas para este propósito, por ejemplo, solubilizadores u otros auxiliares. Los ejemplos son líquidos estériles tales como agua y aceites, con o sin la adición de un surfactante y otros adyuvantes farmacéuticamente aceptables. Los aceites ilustrativos son aquellos de petróleo, animales, vegetales, o de origen sintético, por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral. En general, el agua, solución salina,, dextrosa acuosa y soluciones de azúcar relacionadas, y glicoles tales como propilenglicol, polietilenglicoles, son portadores líquidos preferidos particularmente para soluciones inyectables. La preparación de las composiciones farmacéuticas que contienen un componente activo es bien comprendida en la técnica. Tales composiciones pueden ser preparadas como aerosoles distribuidos a la nasofaringe o como inyectables, ya sea como soluciones o suspensiones líquidas; sin embargo, las formas solubles adecuadas para la solución en, o suspensión en, líquido antes de la inyección, pueden ser también preparadas. La preparación puede también ser emulsificada. El ingrediente terapéutico activo es a menudo mezclado con excipientes que son farmacéuticamente aceptables y compatibles con el ingrediente activo. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol, etanol, o similares, o cualquier combinación de los mismos . Además, la composición puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes, agentes amortiguadores del pH que aumentan la efectividad del ingrediente activo. Un componente activo puede ser formulado en la composición como formas salinas farmacéuticamente aceptables, neutralizadas. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales por adición de ácido, las cuales son formadas con ácidos inorgánicos, tales como por ejemplo, ácido clorhídrico o fosfórico, o ácidos tales como los ácidos acético, oxálico, tartárico, mandélico, y similares. Las sales formadas a partir de los grupos carboxilo libres pueden también ser derivados de bases inorgánicas tales como por ejemplo, hidróxido de sodio, de potasio, de amonio, de calcio o férrico, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaina y similares. Para la administración tópica a las superficies ' corporales utilizando, por ejemplo, cremas, geles, gotas y similares, ' los compuestos antitumorales o sus derivados fisiológicamente tolerados tales como sales, esteres, N-óxidos y similares, son preparados y aplicados como soluciones, suspensiones o emulsiones en un diluyente fisiológicamente aceptable con o sin un portador farmacéutico. En otro método de acuerdo a la invención, el compuesto activo puede ser distribuido en una vesícula, en particular un liposoma (ver Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treta et al., en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease an Cáncer, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, N.Y., pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein ibid. , pp. 317-327; ver en general ibid) . Para el uso en medicina, las sales del compuesto antitumoral pueden . ser sales farmacéuticamente aceptables. Otras sales pueden, no obstante, ser útiles en la preparación de los compuestos de acuerdo a la invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables, adecuadas, de los compuestos incluyen sales por adición de ácido, las cuales pueden, por ejemplo, ser formadas mediante el mezclado de una solución del compuesto de acuerdo a la invención con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metansulfónico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido oxálico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. En general, NM404 es un nuevo agente formador de imágenes de diagnóstico, selectivo de tumores, para monitorizar la respuesta al tratamiento de varias modalidades de tratamiento contra tumores. NM404 radioyodado, un análogo de éter de fosfolípido de segunda generación, había mostrado selectividad tumoral notable en 10/10 modelos de tumor xenoinjertado y más recientemente en otros 14/14 modelos de tumor de roedor espontáneo. Debido a una falta de enzimas metabólicas de fosfolipasa en las membranas de las células tumorales, la hipótesis prevalente de este procedimiento es que los análogos de éter de fosfolípido se llegan a atrapar exclusivamente en las membranas de células tumorales debido a su incapacidad para ser metabolizados y eliminados. De este modo, las velocidades o proporciones de despejo diferenciales de los éteres de fosfolípido desde las células normales, versus las células tumorales viables, forman la base de este concepto. Los resultados obtenidos en una variedad de modelos tumorales, indican que NM404 es secuestrado y selectivamente retenido por las células tumorales viables y se localizan las lesiones primaria y metastática, no obstante de la localización anatómica, incluyendo aquellas encontradas en los módulos linfáticos. De manera contraria a FDG, este agente no se localiza en sitios infecciosos. Otras ventajas de NM404 sobre FDG incluyen las siguientes: NM404 es selectivo para y retenido indefinidamente por las células tumorales malignas, mientras que FDG no es selectivo para las células tumorales y va hacia los sitios infecciosos y las hiperplasias (Esófago de Barret) . Además, ya que el 124I tiene una vida media- física de 4 días, éste puede ser embarcado a cualquier sitio en el mundo, mientras que FDG con su vida media de 110 minutos, puede tener distribución limitada dentro de 320 km (200 millas) del sitio de producción. NM404 sufre retención prolongada (no metabolizada) y por lo tanto proporciona un potencial terapéutico significativo cuando es acoplado con un radioisótopo apropiado como I, mientras que FDG no posee ningún potencial terapéutico. NM404 puede ser marcado con una variedad de isótopos del yodo, expandiendo su versatilidad (diagnóstico y terapia, así como una herramienta para estudios en animales experimentales) mientras que FDG está limitado a 18F para la exploración PET o potencialmente 19F (estable) para la formación de imagen por resonancia magnética, aunque a niveles de sensibilidad muy bajos. No obstante de su habilidad para dirigirse al tumor, debido a su metabolismo rápido en células tumorales, éste no tiene potencial para la terapia. NM404 proporciona el potencial no solamente para predecir de manera precisa la respuesta tumoral local a diversas modalidades de tratamiento, sino también permite la detección de las lesiones metastáticas distantes en casos de tratamiento tumoral primario sub- terapéutico. La presente invención proporciona en general los métodos y técnicas para la detección y tratamiento de diversos cánceres. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para detectar y localizar el cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical en el sujeto que tiene o que está sospechoso de tener cáncer. El método comprende los pasos de: a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; b) determinar si un órgano sospechoso de tener cáncer del sujeto retiene un nivel más alto del análogo que la o las regiones circunvecinas, en donde una región de retención más alta indica la detección y localización del cáncer. En este método el análogo de fosfolípido se selecciona de: O (CH2)nOPOCH2CH2 y donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. En este método X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I, 123I, 12I, 125I y 131I. Preferentemente, en este método, el- éter de fosfolípido es 18- (p- yodofenil) octadecil-fosfocolina, l-0-[18- (p- yodofenil) octadecil] -1, 3-propanodiol-3-fosfocolina, ó 1-0- [18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3- fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo. Diversos éteres de fosfolípido y metodologías relacionadas para la fabricación y uso de los compuestos de éster de fosfolípidos son descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,925,649; 4,965,391; 5,087,721; 5,347,030; 6,255,519 y 6,417,384, todas las cuales se incorporan por referencia en la presente. En otra modalidad más, la presente invención proporciona un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto. El método comprende administrarle al sujeto una cantidad efectiva de una molécula que comprende un análogo de éter de fosfolípido, como se describe en la presente. En este método, el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical, glioma, cáncer de mama, cáncer pancreático, carcinosarcoma y cáncer de próstata. La presente invención también contempla el uso de un análogo de éter de fosfolípido para la producción de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer. Estos análogos de fosfolípido son seleccionados del grupo discutido anteriormente. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un método para diferenciar la inflamación, el adenoma, la hiperplasia, de la neoplasia en un sujeto. El método comprende los pasos de: (a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; y (b) determinar si un órgano sospechoso de tener inflamación, adenoma, hiperplasia o neoplasia del sujeto conserva un más alto nivel del análogo que la o las regiones circunvecinas. Cuando el sujeto muestra una región de retención más alta, esto indica la detección y localización de la neoplasia, y cuando el sujeto muestra una región de retención más baja, ésta indica la presencia de un órgano sospechoso de tener el adenoma, la hiperplasia o la inflamación. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un método para detectar la neoplasia en una muestra de tejido que tiene una fosfolipasa D (PLD) . El método comprende el paso de: (a) cuantificar el nivel de actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm de PLD en la muestra de tejido; y (b) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel de actividad de proteína que la o las regiones de tejidos circunvecinas, en donde una región de menor actividad indica la detección y localización de la neoplasia, o (c) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel de ARNm que la o las regiones de tejido circunvecinas, en donde una región de menor nivel del ARNm indica la detección y localización de la neoplasia. En este método, la actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm pueden ser cuantificados al poner en contacto la muestra de tejido con un análogo de PLE, como se describió anteriormente. Otra modalidad más de la presente invención proporciona un agente antitumoral seleccionado de un método de selección de una muestra de tejido que tiene una PLD, que comprende el paso de: (a) cuantificar la actividad de la proteína PLD, o el nivel de ARNm de PLD, en donde la actividad reducida de la proteína PLD o el nivel reducido del ARNm en comparación a la región tisular circunvecina, es indicador de neoplasia. La actividad de la proteína PLD o el nivel del ARNm pueden ser cuantificados al poner en contacto la muestra de tejido con un análogo de PLD, como se describe anteriormente . Las siguientes secciones discuten el uso y método relacionados únicamente a ciertos compuestos de éster de fosfolípidos, no obstante, tales usos son ejemplares y no deben ser considerados como reductores del alcance de la presente invención. Por ejemplo, NM404 un éter de fosfolípido ha demostrado especificidad mostrada para el tejido neoplásico pero no en tejido preneoplásico en muchos modelos tumorales experimentales. La alta avidez del tumor al antecedente y la selectividad tumoral de NM404, sugieren que éste puede ser potencialmente superior a la exploración PET de 18F-FGT para la formación de imagen tumoral intratratamiento. El mecanismo preciso de especificidad tumoral de NMG404 está bajo investigación, y actualmente no es tan bien descrito como el mecanismo de utilización de glucosa para la captación de 18F-FDG. No está bien establecido sin la captación de NM404 en el tejido neoplásico depende de la viabilidad de ese tejido, o si este fenómeno de captación está relacionado a algún componente de la membrana o de la matriz que es independiente de la viabilidad del tejido. Si esta captación y especificidad están vinculadas a la viabilidad tumoral, seguiría que la captación de NM404 en tumores recientemente esterilizados por radiación sería no existente o pobre, mientras que los tumores resistentes a la radiación podrían mostrar captación continua. Recientemente, los inventores mostraron la captación de NM404 y la muerte en células cancerosas escamosas sensibles a la radioterapia y resistentes a la radioterapia (SCCI y 6) en ratones desnudos. Tal ensayo sería invaluable en el manejo de pacientes tratados con radioterapia, ya que los pacientes que no manifiestan localización de NM404 postratamiento indicarían curación, mientras que aquellos con tumores resistentes (captación continua de MN404) podrían ser ofrecidos con otras opciones diferentes a la radiación (cirugía, quimioterapia, etc. ) Un procedimiento para el desarrollo de exámenes de formación de imagen más disponibles, sensibles, es diseñar moléculas portadoras que sean capaces de distribuir selectivamente una sonda radiofarmacéutica al tejido objetivo deseado. El procedimiento de los inventores ha sido capitalizar sobre las propiedades bioquímicas o farmacológicas únicas de las moléculas que muestran un alto grado de selectividad' de tejido o de tumor. Snyder y colaboradores16'17 observaron que una variedad de células tumorales en animales y humanos contienen concentraciones mucho más altas de los lípidos de éter de origen natural en las membranas celulares que el tejido normal. Ellos propusieron que la acumulación de los lípidos de éter en tumores era un resultado de una menor capacidad de las células tumorales a metabolizar estos lípidos, debido a una falta de enzimas metabólicas clave.. Los inventores han capitalizado sobre esta observación mediante la síntesis de un número de análogos de éter de fosfolípido radioyodados (PLE) como agentes potenciales de formación de imagen, selectivos del tumor. Varios de estos análogos de PLE han mostrado una habilidad sorprendente y aparentemente universal para localizarse en, y ser selectivamente retenidos por una amplia variedad de modelos tumorales espontáneos y trasplantados, de rata, murinos y humanos (24/24) . La hipótesis prevaleciente de los . inventores (figura 1) es que los éteres de fosfolípido son atrapados en las membranas de _las células tumorales, viables, debido a su incapacidad para ser metabolizados y eliminados. La extracción de los tumores después de la administración de los éteres de fosfolípidos radioyodados, mostró la presencia únicamente del agente intacto, mientras que el análisis de la orina y las heces reveló únicamente los metabolitos. De este modo, son las velocidades de despejo diferenciales de los éteres de fosfolípido de las células normales versus las células tumorales, las que forman la base de este concepto. Los resultados preliminares obtenidos en más de 24 modelos tumorales de xenoinjerto y espontáneos han mostrado universalmente que NM404 sufre captación selectiva y retención prolongada en tumores. Debido a que el agente es metabolizado en cierto grado en el hígado, los inventores evitaron la evaluación temprana del compuesto en modelos tumorales hepáticos debido a los altos niveles de radioactividad antecedente en hígado. Además, debido a que NM404 proporciona menores niveles antecedentes en hígado que sus predecesores, los inventores expandieron la evaluación hacia tumores hepáticos a la luz dei hecho de que ha sido problemática la formación de imágenes de pacientes con HCC. Muchos pacientes tienen cirrosis subyacente y por lo tanto es difícil distinguir los nodulos en regeneración de HCC sobre la formación de imagen en sección transversal. Además, los estudios preliminares que evalúan la exploración PET con FDG han mostrado únicamente una sensibilidad de 20-50% en la detección de la enfermedad. Verhoef C, Valkema R. et al., Liver 82002 22:51-56. Además, PET-FDG no es útil en la selección de diagnóstico en el cerebro. Similarmente, FDG no es útil en la evaluación de la enfermedad en hígado, debido a la alta captación natural por los hepatocitos. Los siguientes ejemplos describen las modalidades preferidas de la presente invención, y son para fines ilustrativos únicamente. Estos ejemplos no deben ser considerados como reductores del alcance de la presente invención.

III. EJEMPLOS A. Ejemplo 1: Síntesis, radiomarcación y formulación de NM404: El procedimiento sintético de los inventores estuvo basado en la reacción de acoplamiento cruzado catalizada por el cobre, de los reactivos de Grignard con tosilatos de alquilo o haluros de alquilo para el alargamiento de la cadena de alquilo (ver el esquema de reacción siguiente) . La síntesis fue iniciada a partir del alcohol p-yodobencílico 1 que fue convertido al bromuro de p-yodobencilo 2 mediante reacción con bromuro de trimetilsililo. El bromuro de p-yodobencilo 2 fue además acoplado con el reactivo de Grignard 3 en presencia de Li3CuCl4 como un catalizador. El 12- (p-yodofenil) dodecanol 5 obtenido después de la desprotección del primer producto de acoplamiento 4 fue convertido al tosilato 6. En el siguiente paso, el tosilato 6 fue acoplado con el reactivo de Grignard 7 que contenía 6 átomos de carbono y esto completó el proceso de alargamiento de la cadena. La desprotección con THP del compuesto 8 dio el 18- (p-yodofenil) octadecanol 9 que fue convertido a 10 (NM-404) mediante un procedimiento de dos pasos como se muestra en el esquema de reacción.

M?3SiBr ^ /== BrMg(CH2)??OTHP 3 1— ^ — CH2OH 1— O— CH2Br — *- 84% -? U2CuCI4 (cat) 1 2 55% PPTS (cat}' /= TsCl DMAP I— _" ~* (CHaJf=OTHP l- , ~(CH2>120H -*- ETQH ^— 'J 96% 4 90% 5 Además, el proceso de síntesis rápida de alto rendimiento para la marcación de NM404 con- cualquier isótopo del yodo, incluyendo 124I, 125I y 131I, fue llevado a cabo mediante el siguiente proceso: Primeramente, un aparato de bloque de calentamiento de aluminio fue precalentado a 145°C y se preparó un condensador utilizando un barril de jeringa desechable de 5 ml equipado con una aguja desechable de calibre 18 de 3.8 cm (1.5 pulgadas) doblada, y un septo de caucho en la parte superior. En segundo lugar, el sistema de HPLC fue iniciado y el deposito fue llenado con el solvente desgasificado, filtrado, (hexano/isopropanol/agua (40:52:8). El sistema fue equilibrado, seguido por una verificación sistemática de los sistemas auxiliares tales como la bomba, los detectores, los registradores de diagrama y los integradores de computadora. En tercer lugar, una trampa de carbón mineral de jeringa desechable de 3 mm fue preparada mediante el uso de un tapón de lámina de vidrio en el fondo, rellenando la jeringa con 2.5 ml de carbón mineral granulado, agregando otro tapón de lana de vidrio e insertando un septo sobre la parte superior. Una aguja adaptadora de tubería corta fue colocada sobre la jeringa y se insertó una aguja de calibre 18 a través del septo sobre la parte superior. La trampa de carbón mineral fue conectada a la parte superior del condensador y ventilada hacia la atmósfera a través de una trampa de tiosulfato de sodio. En cuarto lugar, 5 mg de sulfato de amonio fueron agregadas en 20 µm de agua desionizada en un frasco de vidrio de borosilicato de 2 ml, seguido por 2 µm de NM404 sin marcar en 20 µl de etanol absoluto al frasco. El frasco fue suavemente agitado o golpeado para asegurar el mezclado y se agregaron también 6 esferas de vidrio de borosilicato (3 mm) al frasco. El frasco fue luego sellado con un septo de caucho de butilo recubierto con teflón y una tapa para engargolado de aluminio. El septo fue puncionado con una aguja de calibre 18 y se agregó la cantidad deseada del yoduro-131 de sodio acuoso (en hidróxido de sodio 0.1 N, típicamente 5 mCi en 15 µl) por medio de una microjeringa Hamilton a través del septo. El frasco fue nuevamente agitado o golpeado para asegurar el mezclado. El frasco fue evaluado en un calibrador de dosis.

En quinto lugar, una jeringa con trampa de carbón mineral fue insertada dentro del frasco de reacción, y el frasco de reacción se descendió hacia el pozo de bloque de calentamiento (llenando la mitad con arena) . El frasco de reacción se calentó a 145°C por 40 minutos durante los cuales la mayor parte del solvente se destiló y se condensó en el condensador. Una corriente de aire (4 x 25 ml) fue lentamente insertada a través del frasco de reacción con una jeringa de 25 ml. La temperatura del frasco de reacción se incrementó a 155°C y el calentamiento se continuó por 30 minutos adicionales. El frasco de reacción se retiró del calentador de bloque y el montaje de condensador/trampa se desconectó y se desechó, y el frasco se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. En sexto lugar, se agregaron 0.5 ml de etanol absoluto al frasco de reacción. El frasco fue suavemente agitado y evaluado en el calibrador de dosis. En séptimo lugar, fue conducido un análisis de radio-TLC de la mezcla del producto marcado crudo, sobre gel de sílice (cloroformo/metanol/agua (65/35/4) . En octavo lugar, la columna de resina Amberlite IRA 400-OH fue preparada mediante prehumedecimiento de 1.0 g de resina en 5 ml de etanol absoluto por 30 minutos. El etanol fue decantado y la resina fue enjuagada con dos porciones adicionales de 5 ml de etanol. La resina húmeda fue agregada dentro de un barril de jeringa desechable de 3 ml con un tapón de lana de vidrio en el fondo y ajustado con un filtro Acrodisc y un tapón de 1 sola vía. La solución etanólica del producto radioyodado crudo fue gradualmente eluida a través de la columna de la resina hacia un frasco de 5 ml. En noveno lugar, se insertó un septo y el solvente fue soplado con una corriente de nitrógeno. Una jeringa de carbón mineral fue acoplada sobre la salida del frasco antes de iniciar el flujo del nitrógeno. Una vez seco, se utilizaron 50 µl para diluir y transferir los contenidos a un frasco de 300 µl en v. El frasco fuente fue enjuagado con un segundo lavado de 50 µl de etanol y transferido al frasco en v. En décimo lugar, la bomba de HPLC fue estabilizada y fue establecido un flujo de solvente de 1.0 ml/minuto. La mezcla de reacción fue purificada mediante HPLC sobre una columna de sílice de cartucho Perkin-Elmer (4.3 x 33 mm, sílice de 3 µm) eluida con hexano/isopropanol/agua (40:52:8) a 1.0 ml/minuto. La detección pico fue realizada mediante UV a 230 y 254 nm y mediante radioactividad. Una vez que se recolectó el pico apropiado en un frasco estéril, se retiró una muestra pequeña para el análisis de radio-TLC y el solvente remanente fue evaporado con una corriente de nitrógeno para dar el compuesto deseado como un residuo seco.

La actividad específica fue calculada como fuera necesaria. En decimoprimer lugar, se agregó polisorbato 20 a una proporción de 0.1 µl/1.0 µg de NM-404 al matraz proveniente de una solución de reserva de 5% de polisorbato 20 en etanol absoluto. El polisorbato 20 es el grado farmacéutico del Tween 20 que es ahora utilizado en estudios en humanos y en animales con NM404. El solvente fue retirado mediante evaporación rotatoria por 10 minutos a <30°C. El residuo fue disuelto con mezclado con suficiente, agua estéril para producir una solución de 2% de polisorbato 20. El producto formulado se hizo pasar a través de un filtro Pall-Gelman Acrodisc estéril de 0.2 µm (13 ram) dentro de un frasco de dosis múltiples, estéril, seco (Hollister-Stier) ventilado con otro filtro estéril de 0.2 µm. 100 µl de la solución del producto se desviaron hacia un frasco para el análisis de control de calidad. En decimosegundo lugar, la radioactividad fue medida en el calibrador de dosis, y se realizaron las pruebas de control de calidad (esterilidad, apirogenicidad) . Todo el NM404 no marcado fue tomado del lote de reserva original que recientemente sufrió la prueba de toxicología aguda, con el fin de reducir al mínimo las diferencias sintéticas potenciales entre estudios. La radioyodación del NM404 fue rutinariamente lograda mediante una reacción de intercambio de isótopos en un fundido de ácido piválico desarrollado por los inventores19 o mediante el nuevo método descrito en la presente y preparado para la inyección de acuerdo a los métodos estándares descritos por los inventores22. Este procedimiento fue utilizado efectivamente para preparar material estéril para las pruebas iniciales en humanos con NM324, el predecesor de NM404, y ha sido utilizado más de 40 veces para preparar NM404 marcado con 125I y con 131I. En general, después de la purificación y la cuantificación de masa precisa por HPLC, el producto radiofarmacéutico fue disuelto en etanol absoluto (50-500 µl) y polisorbato 20 (0.1 µl/µg del compuesto). El etanol es removido a vacío y el residuo disuelto en agua estéril para dar una solución final que no contiene más de 2-3% de polisorbato 20. La esterilización fue llevada a cabo mediante filtración a través de una unidad de filtro estéril de 0.2 µm. La pureza radioquímica final debe exceder 97% antes de utilizarse en animales. La cuantificación y el cálculo de la actividad específica final fueron logrados mediante el análisis de HPLC utilizando estándares de masa conocidos, y la cuantificación de la radioactividad (125I) fue lograda mediante dilución y conteo en un contador gamma PE Wallac, con el fin de evitar los problemas de atenuación. La cuantificación de los isótopos de mayor energía incluyendo 131I fue realizada con un calibrador de dosis con ajustes integrales para estos isótopos. Fueron típicamente logradas actividades específicas de 1 mCi por 100 µg de NM404 radioyodado. Los volúmenes de inyección fueron típicamente de alrededor de 100 µl por ratón. Los datos de distribución tisular fueron expresados como una dosis inyectada porcentual (+SEM) por gramo de tejido y también como la dosis porcentual inyectada, por órgano, cuando los órganos enteros fueron pesados de acuerdo a . los procedimientos publicados establecidos por los inventores22. En cada punto de tiempo, las proporciones de tumor a tejido fueron calculadas sobre una dosis inyectada porcentual por gramo de base tisular. Análisis de la distribución general del tejido (TD) : Estudios de biodistribución fueron realizados en ratones hembra de acuerdo al procedimiento estándar desarrollado por los inventores27. NM404 radiomarcado (5 µCi en 100 µl) fueron administrados vía inyección en la vena de la cola. A los puntos de tiempo predeterminados los animales (3/punto de tiempo) fueron sacrificados mediante sangrado mientras estaban bajo anestesia con pentobarbital. Se extirparon un total de 16 tejidos incluyendo sangre, plasma, glándulas adrenales, vejiga, médula ósea, grasa, corazón, riñon, hígado, pulmón, músculo, bazo, ovarios, piel, tiroides y tumor, se enjuagaron y se disectaron para liberarlos de tejido extraño. Los órganos grandes fueron desmenuzados y muestras de tejido por duplicado fueron pesadas y colocadas en tubos de plástico para el conteo de los isótopos. La reactividad en el sitio de inyección y en la carcasa residual fueron también determinadas en un contador de pozos. Estos procedimientos estándares han sido utilizados por muchos años en el laboratorio del inventor bajo cuidado animal apropiado y aprobación de seguridad en radiación. Las tablas de distribución de tejido fueron generadas por un programa de computadora que produce los datos de concentración de radioactividad del tejido, corregidos en decaimiento, en un por ciento de dosis inyectada/g, por ciento de dosis por kilogramo, y la dosis porcentual inyectada/órgano + SEM base. En cada punto de tiempo, se calcularon las proporciones de tumor a tejido con base en una dosis inyectada porcentual por gramo de base tisular. Se realizó un estudio TD control (3 ratones/punto de tiempo, total 15 ratones) sobre ratones que poseen tumor a los 4, 7, 14, 21 y 28 días después de la inyección de NM404, con el fin de establecer tablas de TD comparativas para todos los regímenes terapéuticos. Protocolos generales de formación de imagen: Los animales recibieron 125I-NM404 (10 µCi) por inyección en la vena de la cola y a los puntos de tiempo predeterminados después de esto fueron anestesiados (anestesia con pentobarbital sódico, 0.06 mg/g bw) y sufrieron exploración con radionúclido utilizando el escáner Bioscan AR2000 radio- TLC modificado para la formación de imagen en ratones (colimador de alta resolución de 1 mm/1 minuto de tiempo de adquisición por banda/incrementos de banda de 1 mm) . Los datos fueron cuantificados y presentados utilizando el software Wiscan 2D de Bioscan. Una vez extirpados, los tumores control y tratados fueron también explorados ex vivo sobre la unidad Bioscan, con el fin de permitir el análisis ROÍ preciso mediante la eliminación de la atenuación de radionúclido en el cuerpo entero. Los animales (anestesia con pentobarbital sódico, 0.06 mg/g bw) sufrieron exploración microCT (Imtek MicroCAT I, adquisición en 390 pasos/43Kvp/410 µA) utilizando los parámetros de adquisición de resolución media. Los ajustes de los datos fueron reconstruidos tridimensionalmente y son visualizados con el software de visualización tridimensional AMIRA-3D. El software permite el análisis de la densidad ROÍ y la medición conveniente en pantalla.

B. Ejemplo II: Estudios Preclínicos con Análogos de PLE de Primera Generación: Los éteres de fosfolípido pueden ser fácilmente marcados con radioisótopos de yodo utilizando un método de intercambio de isótopos desarrollado por los inventores.19 Los análogos de éter de yodofenil-fosfolípido son específicamente diseñados de modo que el radioyodo fijado a cada molécula es estable para facilitar la desyodación in vivo. Más de 20 compuestos PLE radiomarcados fueron sintetizados y probados in vitro e in vivo.20-22 Dos de estos, a saber NM294 y NM324 [12- (3-yodofenil) -dodecil-fosfocolina] , mostraron inicialmente el panorama más promisorio en los estudios de localización de tumores en animales. Estos compuestos . prototipo, marcados con yodo-125, selectivamente localizados en tumores sobre el tiempo en los siguientes modelos de tumores en animales; 1) rata Sprague-Dawley que posee el carcinosarcoma Walter 256; 2) rata Lewis que., posee tumor mamario; 3) rata Copenhagen que posee tumores de próstata Dunning R3327; 4) conejos que poseen tumores Vx2; y 5) ratones atímicos que poseen tumores de mama humano (HT39), de pulmón de células pequeñas (NCI-69) , colorrectal (LS174T) , de ovario (HTB77IP3) , y melanoma. La localización tumoral óptima de estos agentes toma de uno a varios días. Estudios mecanísticos con análogos de PLE: NM324 y NM404 son similares en estructura a la miltefosina (hexadecilfosfocolina) , un lípido de éter antitumoral estudiado más extensamente en Europa. Las propiedades antitumorales de la miltefosina y otros varios análogos de éter de fosfolípido antitumorales han sido demostrados en una amplia gama de líneas celulares tumorales incluyendo carcinomas de próstata, de vejiga, y teratocarcinomas, leucemias murinas y humanas, así como cánceres de pulmón, de colon, de ovario, de mama y de cerebro.23 En contraste a muchos fármacos anticancerosos, estos análogos de éter de fosfolípido no se enlazan directamente al ADN y no son mutagénicos . Aunque no ha sido determinado todavía el mecanismo preciso de acción antiproliferativa, éstos actúan aparentemente en varios sitios de células tumorales. Estos compuestos han sido asociados con una variedad de efectos celulares incluyendo el transporte, la promoción de la formación de citocina, la inducción de la apoptosis, y la interferencia con una variedad de enzimas clave del metabolismo de los lípidos y de señalización celular, la mayoría de las cuales están localizadas en la membrana celular. Aunque existe un debate respecto al modo de captación hacia las células, la mayoría de los reportes apoyan ahora la idea de que estos lípidos de éter son directamente adsorbidos en las membranas celulares donde éstos se acumulan. Una creencia difundida es que estos agentes actúan al perturbar el metabolismo de los fosfolípidos de la membrana; sin embargo, estudios de distribución celular con estos agentes han sido limitados por la redistribución compartimental celular espontánea, durante los procedimientos de homogenización y fraccionamiento subcelular. En contraste a las dosis de formación de imagen rastreadora (varios µg) que los inventores han empleado, son observados efectos antitumorales únicamente a dosis que exceden en general 300 a 1000 mg por día.23 Los estudios de metabolismo formales fueron conducidos sobre varios análogos de PLE incluyendo NM324, el predecesor de NM404. En estos estudios, cada agente fue examinado para determinar su habilidad para servir como substrato para las enzimas asociadas con el metabolismo de PLE. Como se muestra en la figura 24, están involucradas tres vías enzimáticas mayores en el metabolismo de PLE. La O-alquil-glicerol-monooxigenasa (AGMO) es responsable de la escisión del enlace éter de alquilo en C-1 para formar ya sea el alcohol graso de cadena larga o subsecuentemente, el ácido graso correspondiente. Las fosfolipasas C (PLC) y D (PLD), por otra parte, dan origen al glicerol o a los productos de ácido fosfatídíco, respectivamente. Utilizando una preparación de enzima AGMO microsomal, NM324 no fue un substrato para esta enzima cuando se comparó a [3H] -liso-PAF (factor de activación de plaquetas), que fue extensamente metabolizado. De una manera similar, NM324 fue analizado como un substrato para PLC aislado de Bacillus cerus y no fue hidrolizado con relación a la l-palmitoil-2- [3H] -palmitoil-L-3-fosfatidilcolina (DPPC), que sufrió hidrólisis significativa. Finalmente, varios análogos de PLE fueron sometidos a un ensayo de PLD. El PLD que fue aislado a partir de la col o repollo, es similar a la PLD de mamífero ya que la forma del repollo proporciona productos tipo fosfatidil-etanol además del ácido fosfatídico, cuando la reacción enzimática es realizada en presencia de etanol. Varios de los análogos de PLE sometidos a estas condiciones de ensayo sí dieron origen al aducto de fosfatidil-etanol, indicando la posible interacción con PLD. Varios precursores de NM404 fueron también sometidos a estudios de metabolismo in vitro en diversas líneas celulares, incluyendo las células tumorales Walter7 músculo de rata (H9c2), y hepatocitos de rata. En estos estudios, el grado de metabolismo fue determinado con base en los productos radiomarcados formados después de la incubación por varios periodos de tiempo, y los resultados normalizados al número de células o a la cantidad de proteína celular. La extracción de lípidos subsecuente del medio de incubación, y la suspensión celular, demostraron poca generación de metabolitos de PLE en las células tumorales Walter, mientras que una producción significativa de los metabolitos fue observada en las células musculares y en los hepatocitos en un periodo de tiempo de 48 horas, estudiado. Estos resultados correlacionan muy bien con los estudios de biodistribución in vivo completados sobre todos los análogos. Aunque han sido completados varios estudios, el papel del atrapamiento metabólico de la captación y retención de los análogos de PLE radiomarcados en células tumorales, no está bien definido y actualmente sigue siendo un área activa de examen. Evaluación clínica de NM404: De varios análogos de PLE de primera generación, promisorios, NM404 fue más fácilmente sintetizado y fue de este modo seleccionado como el compuesto líder para los estudios clínicos iniciales. Aunque las imágenes obtenidas en 5 pacientes con cáncer pulmonar humano detectaron tumores, las imágenes fueron complicadas por la alta radioactividad hepática (figura 2) . Análogos de PLE de segunda generación: Con el fin de disminuir la captación hepática y prolongar la' fase plasmática, fueron sintetizados 9 análogos estructurales de NM404 y radiomarcados con 125I para el análisis de la imagen inicial en ratas Copenhagen que poseen tumores de próstata Dunning R3327. Con base en esta selección inicial, NM347 NM404 [18- (4-yodofenil) -octadecilfosfocolina] y NM412 (figura 3) fueron seleccionados para sufrir análisis de formación de imagen y biodistribución en modelos de tumores animales. Estudios de formación de imagen más recientes con NM404 y NM412 en modelos animales mostraron que ambos fueron superiores a NM324 en la visualización de una variedad de tumores. Significativamente, las metástasis de nodulo linfático fueron claramente delineadas en un modelo tumoral de próstata metastático después de la administración intravenosa ya sea de NM404 o NM412. De manera .más importante, el rastreador no fue retenido por los nodulos linfáticos no involucrados.24 (Figura 4A) . Aunque se condujo en un modelo de próstata, este hallazgo es particularmente relevante para el cáncer de mama en donde el involucramiento del nodulo linfático es un indicador de pronóstico muy importante. El estudio piloto preliminar conducido en ratones SCID que poseen tumores humanos A549 NSCLC fueron alentadores y demostraron que NM404 supera el problema del alto despejo de primer paso de NM324 por el hígado. NM404 muestra excelente visualización tumoral, especialmente sorprendente en las imágenes retardadas, con captación hepática y renal mínima en comparación con NM324 (figura 4) . Los estudios de biodistribución tisular confirmaron además los altos niveles de radioactividad que residen en los tumores. Aunque los resultados de formación de imagen fueron similares con NM404 y NM412, los datos de dosimetría obtenidos en ratas revelaron que fueron encontradas menores dosis renales con NM404 con relación a NM412, y de este modo NM404 fue seleccionado para estudios posteriores. Los datos de biodistribución comparativos para NM324 y NM404 en ratones SCID con modelo de tumor de próstata y cáncer pulmonar A549, han revelado altas proporciones de tumor a tejido normal y captación tumoral que excede 25% de la dosis inyectada con NM404.

Los estudios de formación de imagen en animales realizados en modelos de ratón dirigidos a determinar las características de captación en una amplia variedad de modelos tumorales, son resumidos en la Tabla 1. Los resultados preliminares en ratones B6 ApcMxn/+ indican que NM404 no es captado por los pólipos adenomatosos, pero es recogido y retenido por los adenocarcinomas mamarios en este modelo, indicando de este modo una posible especificidad para células tumorales malignas. Estos estudios están dirigidos a determinar el potencial de NM404 para caracterizar no invasoramente los tumores. NM404 ha mostrado captación tumoral significativa y retención en cada modelo de adenocarcinoma estudiado.

Relevancia del modelo de tumor murino CT26: Los inventores exploraron NM404 como un predictor de la respuesta tumoral en un modelo murino (ratones BALB/C) con inoculación subcutánea de células CT26 en los flancos del ratón. La línea celular CT26 es un adenocarcinoma murino pobremente diferenciado que fue inducido por la inyección rectal de N-nitroso-N-metiluretano en ratones BALB/c. La línea celular es simple de desarrollar in vitro y da como resultado un patrón de crecimiento predecible cuando se inyecta en la vasculatura (inyección en la vena de la cola, modelo metastático) , o dentro de la piel (figura 5) o el hígado.25'26 Debido a que la línea celular es derivada de un cáncer colorrectal, este modelo murino es clínicamente altamente relevante para estos estudios. Resultados preliminares en la formación de imagen con NM404 en tumores CT26: En un experimento preliminar para mostrar que NM404 se localiza en xenoinjertos CT26 subcutáneos, dos animales fueron inyectados (IV en la vena de la cola) con 125I-NM404 (10 µCi) y subsecuentemente imaginados sobre- un escáner Bioscan AR2000 radio TLC modificado (equipado con un colimador de 1 mm de alta resolución y software de adquisición bidimensional y de análisis), a los 1, 4 y 7 días después de la inyección. En el día 7, el animal fue sacrificado y el tumor removido, fotografiado y explorado ex vivo sobre el Bioscan (figura 6) . La exploración ex vivo es el protocolo estándar en el laboratorio del inventor, debido a los xenoinjertos de atenuación tisular asociados con el yodo. Cada animal también sufrió exploración microCT (figura 7) en el día 7 antes de la eutanasia y la disección del tumor. Los puntos críticos focales correlacionaron visualmente con todos los tumores sobre las imágenes de Bioscan ex vivo (figura 6) . Aunque los nodulos linfáticos son visibles, no fue asociada radioactividad con ellos, indicando una falta de infiltración de células tumorales. El tumor principal en las figuras 6 y 7 fue histológicamente categorizado como un adenocarcinoma. Los inventores han explorado una amplia variedad de tumores subcutáneos vía microCT y todos son muy fácilmente detectables a menos de 300 micrómetros de diámetro. La ablación por RF inicial de un tumor CT26 de ratón, subcutáneo, fue exitosa y dio como resultado daño celular severo (figura 8) como es indicado por la pérdida de membranas celulares en la sección tratada teñida con HyE.

C. Ejemplo III: Cáncer Pulmonar de células no Pequeñas Los estudios de formación de imagen y de biodistribución fueron realizados en ratones SCID (mutación de deficiencia inmune combinada severa) que poseen la línea celular A549 de adenocarcinoma NSCLC (el adenocarcinoma se ha vuelto el tipo histológico de cáncer pulmonar humano más frecuente) . Los resultados piloto preliminares en cinco animales fueron alentadores y demostraron que el nuevo agente NM404 supera una limitación del compuesto NM-324. Mientras que existe captación tumoral razonablemente buena con NM324, la formación de imagen es comprometida por un alto despejo de primer paso por el hígado. No obstante, NM404 muestra excelente visualización del tumor, especialmente sorprendente en las imágenes retardadas, con captación hepática y renal mínima. Además, los estudios de biodistribución tisular confirmaron además los altos niveles de radioactividad residentes en los tumores. Una comparación de las imágenes de NM324 y NM404 en un modelo de ratón SCID-NSCLC humano se muestran en la figura 4. Nótese la falta relativa de actividad hepática, renal e intestinal con NM404, aunado con la excelente visualización del tumor. Aunque los resultados de la formación de imagen fueron similares con NM404 y NM412, los datos de dosimetría recientes obtenidos en ratas, revelaron que fueron encontradas menores dosis renales con NM404 con relación a NM412, y de este modo NM404 ha sido seleccionado para estudios posteriores. Los ' datos de biodistribución extensos para el agente prototípico 125I-NM324 en varios modelos tumoral-es, han sido previamente recopilados. Counsell RE, Schwendner SW, Meyer KL, Haradahira T, Gross MD. Tumor visualization with a radio iodina ted phospholipid ether. J Nucí Med 31 (3) : 332-336,1990; Plotzke 1 (P, Fisher SJ, Wahl RL, 011 (en NM, Skinner S, Gross MD, Counsell RE.. selective localization of a radioiodina ted phospholipid ether analog in human tumor xenografts . J Nucí Med 34 (5): 787-792,1993 ; Rampy MA, Brown RS, Pinchuk AN, Weichert JP, Skinner RW, Fisher SJ, Wahl RL, Gross MD, Etheir SP, Counsell RE. Biological disposition and imaging of a radioiodinated alkylphosphocholine in two rodent models of breast cáncer. J Nucí Med 37 (9) : 1 540-1 545, 1996. Proporciones de tumor a sangre que exceden 8:1 fueron observadas a Tiempos retardados después de la inyección. Por ejemplo, en un modelo de tumor mamario en rata, las proporciones de tumor a tejido normal alcanzaron un máximo a las 96 horas con una proporción de tumor a sangre de 8.6 y una proporción de tumor a músculo de 20:1. Rampy MA, Brown RS, Pinchuk AN, Weichert JP, Skinner RW, Fisher SJ, Wahl RL, Gross MD, Etheir SP, Counsell RE. Biological disposition and imaging of a radioiodinated alkylphosphocholine in two rodent models of breast cáncer. J Nucí Med 37 (9): 1 540-1 545,1996. Además, la biodistribución de la radioactividad asociada PLE es heterogénea en el tumor, como es demostrado por los estudios de microautorradiografía que muestran que la radioactividad de PLE reside exclusivamente en las células tumorales viables localizadas hacia las regiones externas, en vez de las regiones necróticas centrales. Rampy MA, Brown RS, Pinchuk AN, Weichert JP, Slcinner RW, Fisher SJ, Wahl RL, Gross MD, Etheir SP, Counsell RE. Biological disposition and imaging of a radioiodinated alkylphosphocholine in two rodent models of breast cáncer. J Nucí Med 37 (9) : 1540-1545, 1996. Los datos de biodistribución comparativos para NM324 y NM404 en ratones SCID de este modo, han sido únicamente realizados hasta ahora en modelos de tumor de cáncer pulmonar A549 y de próstata. Estos estudios han revelado altas proporciones de tumor a tejido normal y captación tumoral que excede 25% de la dosis inyectada con NM404, apoyando de este modo nuestro deseo de estudiar la biodistribución de los análogos de PLE en modelos tumorales más espontáneos y en humanos. Un estudio adicional que se dirige a la sensibilidad relativa de NM404 a NM324, se realizó en un 5. modelo de cáncer pulmonar A549 en ratón SCID. Los pulmones de cada animal fueron extirpados 10 días después de la administración de dosis iguales de cada agente, y formados en imagen ex vivo por una hora con el fin de aumentar la resolución. Las imágenes de baja resolución y altamente 0 amplificadas mostradas en la Figura 23, revelaron la presencia de radioactividad focal en los pulmones' de ambos animales imaginados, con NM404 y poca o ninguna captación en el par NM324. El análisis patológico subsecuente confirmó la presencia de micrometástasis A549 pequeñas (menos de 1 mm de diámetro) en los 4 animales. La proporción de cuenta en los ratones NM404 fue mayor de 2.5 veces que en los ratones NM324 correspondientes, indicando nuevamente una superioridad de NM404 sobre NM324. Es probable que debido a que la estrategia de dirección al tumor parezca involucrar la retención tumoral selectiva sobre el tiempo, los núcli'dos de vida relativamente corta tales como 18F o incluso 99mtc no son prácticos para la marcación al tiempo actual. No obstante, como con el uso temprano de los anticuerpos monoclonales, los cuales fueron marcados exclusivamente con radioisótopos de yodo, puede ser posible en el futuro marcar análogos de PLE con marcadores alternativos, tales como yodo-124, en donde la vida media física se ajusta bien con la captación tumoral de PLE y la cinética de retención. De hecho, la utilidad de NM404 marcado con 124I como un agente de PET selectivo del tumor, es el objeto de un proyecto piloto para nuestra adquisición de microPET. El objetivo de este proyecto es evaluar la factibilidad de marcación de NM404 con yodo 124, un isótopo de positrones relativamente nuevo con una vida media física de 4 días, y evaluar su potencial promisorio para la formación de imágenes de PET de los tumores en modelos de animales pequeños. Además de la capitalización sobre el aumento de resolución y de las capacidades tridimensionales que la formación de imagen PET proporciona con relación a la formación de imagen de cámara gama tradicional, este procedimiento podría complementar el uso de flúor-18 FDG ya que la captación de las células tumorales ocurre vía un mecanismo bioquímico diferente que la utilización de glucosa. Como se ha discutido anteriormente, la utilidad de los rastreadores actualmente disponibles (por ejemplo 67GA y 18F-GDG) está limitada por la falta de especificidad para distinguir el neoplasma de la inflamación. No obstante, estudios preliminares con agentes PLE han ofrecido una promesa en la superación de esta limitación clínicamente significativa, en donde los granulomas inducidos por carragenano en ratas fallaron en visualizarse por arriba de la actividad antecedente o de fondo y no mostraron retención de tejido- Counsell RE, Schwendner SW, Meyer KL, Haradahira T, Gross MD. Tumor visualization wi th a radioiodinated phospholipid ether. J Nucí Med 31 (3): 3 32-336,1990. El citrato de galio, no obstante, utilizado como un control en ese estudio, sí se concentró significativamente en el granuloma. Tales hallazgos justifican además la extensión de los estudios de los inventores con los agentes análogos de PLE como agentes de formación de imágenes selectivas de tumores, potencialmente útiles. Estudios en Humanos: Con base en la farmacocinética muy promisoria y los datos promisorios de formación de imágenes en animales, los inventores fueron alentados a mover los estudios de éteres de fosfolípidos radiomarcados hacia la arena clínica. NM404 no marcado fue inicialmente evaluado por sus efectos tóxicos agudos sobre ratas y conejos en estudios conducidos en el Centro de Investigación de Toxicología, de la Universidad Estatal New (SUNY) en Búfalo. No fueron observados efectos tóxicos a un nivel de dosis de 3.2 mg/kg (>150 veces la dosis humana anticipada más alta) en estos estudios de toxicología de dosis aguda. Además, no fueron demostradas propiedades de activación de plaquetas a este nivel de dosis alta. NM324 no marcado fue administrado a cinco humanos normales, libres de enfermedad, con el fin de obtener la aprobación del agente radiomarcado para la administración en humanos por el Comité de Investigación de Fármacos Radioactivos (RDRC por sus siglas en Inglés) . Estos sujetos no tuvieron evidencia de toxicidad, como se puso de manifiesto por los síntomas, el examen clínico, signos vitales y químicas sanguíneas secuenciales. Como un proyecto de factibilidad piloto, 4 pacientes con cáncer pulmonar fueron estudiados bajo la aprobación de la RDRC con NM324 marcado con 131I en el hospital Ann Arbor, Michigan VA. Los tumores pulmonares fueron claramente visualizados en los tres pacientes con cáncer pulmonar (dos con NSCLL y uno con el cáncer pulmonar de células pequeñas), descrito con detalle más adelante. El grado de captación tumoral, a diversos puntos de tiempo, varió de 1 + (escasamente perceptible por arriba del antecedente) hasta 3+ (captación intensa, mucho mayor que las estructuras normales) . Nótese que los pacientes seleccionados para estos estudios iniciales fueron aquellos con cánceres relativamente grandes, conocidos. No se pretendió en esta etapa estudiar a los pacientes en quienes existieran problemas del montaje tumoral. Historias de Casos: La paciente 01 fue una mujer de 55 años de edad con una masa pulmonar del lóbulo intermedio derecho que se erosiona hacia las costillas derechas, histológicamente un adenocarcinoma productor de mucina de probable origen pulmonar. Las imágenes cintigráficas iniciales de 131I-NM324 a las 6 horas mostraron un foco de captación en el pulmón medio lateral derecho. Por razones no relacionadas al estudio cintigráfico, los pacientes fueron incapaces de regresar al hospital más allá de 6 horas para la sesión de formación de imagen adicional. El paciente 02 fue un sujeto masculino de 62 años de edad con una masa mediastinal lobulada grande (9x7x7.5 cm) • que se extendía desde la ventana aortopulmonar y el hilum derecho. El tipo de tejido fue un carcinoma no diferenciado de células pequeñas (célula avena) . Las imágenes cintigráficas de 131I-NM324 revelaron un foco de captación en el pulmón superior izquierdo, que se incrementó en intensidad sobre el tiempo con relación a la actividad antecedente normal . El paciente 03, fue un sujeto masculino de 74 años de edad con un NSCLL de lóbulo superior derecho, (adenocarcinoma) tratado 5 meses previamente con radioterapia. La enfermedad recurrió en la língula izquierda (masa de 2.5 x 2 x 3 cm) , la espina torácica inferior (aproximadamente T8) y el lóbulo derecho del hígado. La cintigrafía de 131I-NM324 mostró captación bien definida en la masa pulmonar y lesión en la espina torácica, que demostró proporciones cada vez mayores del objetivo al antecedente, sobre el tiempo (figura 2) . La captación en la metástasis hepática no pudo ser resuelta por arriba de antecedente hepático normal. Estos estudios proporcionaron una visión breve temprana del panorama promisorio químico de los análogos de PLE radiomarcados. Aunque 131I es un agente subóptimo para fines de formación de imágenes, la captación de los tres tumores pulmonares fue claramente descrita. Como se esperaba, con base en los experimentos de biodistribución en animales previos, la activad en los tumores se incrementó con el tiempo, como es demostrado claramente en los pacientes 02 y 03. En el paciente 03, las proporciones del tumor al tejido normal se incrementaron de 2.74 a los dos días hasta 4.23 a los 7 días. El paciente 01 regresó para las sesiones posteriores de formación de imagen más allá de 6 horas. Las proporciones de objetivo a antecedente cada vez mayores constituyen fuerte evidencia de que el mecanismo para la visualización tumoral no es uno basado meramente en el flujo sanguíneo anormal o en la hipervascularidad tumoral. Más bien, los estudios en animales utilizando albúmina sérica humana marcada con 99mTc confirmaron esto.1 Prueba Clínica que Evalúa a los Pacientes con Carcinoma Pulmonar de Células no Pequeñas (NSCLC) utilizando NM404 Aunque NM404 ha mostrado retención tumoral selectiva y prolongada en el xenoinjerto 25/25 y modelos de reoedores espontáneos, un médico patrocinado por IND recientemente inició la evaluación clínica del agente en la etapa 4 con pacientes con cáncer pulmonar de células no pequeñas, humanos con el fin de determinar si este podría o no mostrar captación tumoral similar y propiedades de retención similares en humanos. A la fecha, dos pacientes con NSCL avanzado fueron imaginados después de una inyección de < 1 mCi de 131I-NM404. Se recolectaron muestras de sangre y orina a los tiempos predeterminados, y la formación de imagen gama se realizó a varios puntos de tiempo después de la administración. En ambos pacientes, la captación tumoral significativa y la retención de NM404 fueron demostradas en el tumor pulmonar primario, como se observa en las figuras 29 y 30. Con relación a los valores de alta captación hepática observados previamente con su predecesor de primera generación, NM324, la actividad hepática y abdominal son mucho menores con NM404, sugiriendo la factibilidad de evaluar este agente en otros cánceres abdominales, incluyendo pancreático, de colon y de próstata. Materiales y Métodos: Después de la inyección intravenosa de NM404 marcado con yodo 131 (1 mCi/20 µg) , los pacientes con NSCLL avanzado fueron explorados a las 3, 6, 24, 48, 96 horas y a los días 7 y 11 sobre un escáner GE Maxxus dual Head SPECT. Se recolectaron muestras de sangre y orina para el análisis farmacocinética así como el bioanálisis hemato-lógico clínico, renal y hepático. Resultados: Los resultados de la formación de imagen cualitativa, iniciales indican que NM404 marcado con yodo 131 se localiza claramente en las masas pulmonares bilaterales, tan tempranamente como a las 24 horas "después de la inyección, y es selectivamente retenido ' en estos tumores por más de 11 días. Además, la radioactividad de fondo o antecedente en el hígado y la región abdominal inferior incluyendo la vejiga urinaria, los riñones y los intestinos, fue significativamente menor que aquella observada previamente con su predecesor, NM324. No se observaron reacciones adversas en ninguno de los pacientes. Conclusiones: Estos hallazgos preliminares sugieren que NM404 muestra captación tumoral similar y propiedades de retención similares en NSCLC humano como fue previamente observado en modelos de roedor. Aunque basado únicamente en dos pacientes en este punto, parece que NM404 verdaderamente sí se localiza en y sufre retención tumoral selectiva prolongada en el cáncer pulmonar de células no pequeñas en humano. Paciente 1: Masculino de 65 años de edad con lóbulo izquierdo bilateral de 3 cm. y lóbulo derecho infiltrativo NSCLC, y una metástasis cerebral, y una masa adrenal derecha pequeña. El ha participado en numerosos regímenes de tratamiento estándares y experimentales. Las imágenes son incluidas en la figura 29. Paciente 2: Masculino de 70 años de edad recientemente diagnosticado con masa celular no pequeña en el lóbulo superior de 6 cm, una masa hepática de 5 mm, una metástasis en el hueso ileal y una metástasis cerebral muy pequeña. El ha completado recientemente quimioterapia con carboplatino/taxol de baja dosis y radioterapia paliativa para las metástasis ileal y cerebral la semana previa al inicio de la prueba con NM404. Las imágenes son mostradas en la figura 30.

D. Ejemplo IV: Modelos de adenocarcinoma pancreático en Ratón Los inventores han estudiado la avidez tumoral de NM404, un análogo de PLE de segunda generación, en el modelo de adenocarcinoma pancreático de ratón c-myc, el cual se sabe que produce tumores invasores con el fenotipo acina/ductal mixto. Materiales y Métodos: Dos cepas murinas que son endógenas ya sea para c-myc o para k-ras, oncogenes bien conocidos, han sido desarrolladas en la Universidad de Winsconsin. Sandgren EP, Quaife CJ, et al., Proc Nati Acad Sci USA. 1991; 88: 93-97; Grippo PJ. Nowlin PS. Et al., Cáncer Research. 63 (9): 2016-9, 2003. La expresión de c-myc está dirigida a las células acinares pancreáticas, debido a que ésta está vinculada a un promotor de elastasa, que es únicamente expresado en el páncreas. Estos ratones endógenos a ela-1-myc desarrollan neoplasia acinar y ductal, que da como resultado la muerte entre 2 y 7 meses de edad. Por un mes de edad, el páncreas aparece engrosado y firme. De este modo, los ratones entre las edades de 1 a 3 meses sirven como modelos excelentes para el estudio del cáncer pancreático. La mayoría de neoplasmas pancreáticos humanos tienen una morfología ductal y las estrategias de dirección al transgen del Dr. Sandgren están dirigidas a desarrollar tumores que son específicos para el epitelio ductal pancreático. El modelo c-myc produce tumores que son adenocarcinomas invasores, con el fenotipo acinar/ductal mixto. La biología del modelo k-ras es notablemente diferente. Los tumores k-ras han sido clasificados como "carcinoma in situ", lo que significa que éstos tienen características de neoplasia, pero no invaden y en general permanecen pequeños (< 2mm) . Su apariencia celular es mucho más similar a los tumores humanos tempranos, de modo que desde una perspectiva histológica éstos son un modelo más relevante de la enfermedad humana. Además, éstos asemejan a las etapas muy tempranas de la- enfermedad humana. La habilidad para detectar el desarrollo "temprano" de los tumores k-ras versus los tumores grandes y más avanzados en los ratones c-myc, podría ser un paso excepcional importante hacia la identificación de lesiones tempranas (quizás curables) en humanos. El hecho de que las mutaciones de lras sean la causa de más de 90% de los adenocarcinomas pancreáticos humanos da apoyo adicional hacia la validez de este modelo para la evaluación de los nuevos agentes de formación de imagen tumoral . Estudios de Formación de Imagen: Con el fin de determinar si NM404 se localiza en tumores pancreáticos de ratón, seis ratones endógenos c-myc fueron escaneados sobre un escáner Bioscan AR-2000 radio TLC (modificado en el laboratorio de los inventores para formación de imagen en ratón) de 2 a 21 días después de la inyección en la vena de la cola de 125I-NM404 (15 µcI/20 g bw) . En el último día los ratones también sufrieron una exploración microCT (42 kvp, 410 µA, 390 pasos, MicroCAT-I, ImTek, Inc. Knoxville, TN) . Después de la formación de imagen in vivo de los ratones anestesiados, los tumores pancreáticos fueron extirpados y explorados ex vivo sobre el mismo escáner (equipado con colimador de alta resolución de 1 mm y software de adquisición bidimensional y análisis) con el fin de evitar la atenuación del tejido asociado con la baja energía del yodo 125 (figura 9 - 10) . En el sacrificio, los tejidos fueron extirpados, pesados y la radioactividad fue cuantificada en un contador gama . Resultados y Discusión: Los resultados de la formación de imagen iniciales con NM404 en el modelo c-myc indicaron una fuerte captación y retención prolongada (<21 días) en todos los adenocarcinomas en el intervalo de 5-12 mm de diámetro. Como se ha observado en el cultivo celular previo en estudios de modelos animales in vivo, NM404 es aparentemente metabolizado y eliminado de las células normales, pero se llega a atrapar metabólicamente en las membranas de células tumorales. Los experimentos de autorradiografía previos en otros modelos tumorales, han sugerido que únicamente las células tumorales viables, y no el tejido normal o los tejidos necróticos, son capaces de acumular NM404. Los inventores fueron también capaces de detectar los tumores pancreáticos en ratones vivos con microCT a pesar de la naturaleza ubicua del páncreas en ratones (figura 11) . Aunque el número de animales que poseen tumor pancreático es pequeño (n = 6) los datos preliminares del tumor NM404 al antecedente, parecen promisorios. Conclusiones: NM404 mostró retención selectiva y prolongada en adenocarcinomas pancreáticos espontáneos examinados en este estudio, extendiendo de este modo además la selectividad del tumor de este agente.

E. Ejemplo V: Modelo de Glioma en Rata Materiales y Métodos: Todos los animales fueron alojados y manejados de acuerdo con los lineamientos del Centro de Recursos Animales para la Investigación de la Universidad de Wisconsin. Células de glioma C6 de rata fueron propagadas en medio DMEM (Life Technologies, Gaithersburg, MD) suplementados con FBS inactivado por calor al 10% (BioWhittaker, Walkersville, MD) , 100 U/ral de penicilina G, 100 mg/ml de estreptomicina, y HEPES 0.01 M (Life Technologies, Gaithersburg, MD) . La implantación intracraneal del tumor fue realizada y descrita previamente (referencia) . En resumen 1 x 106 células C6 fueron resuspendidas en 5 ml de metilcelulosa al 1.2% e inyectadas dentro de los lóbulos frontales de ratas Wistar hembra anestesiadas (Harían, Indianápolis, IN) . Animales seudo-operados recibieron inyecciones intracraneales de un volumen equivalente de metilcelulosa sin células tumorales. Estudios de formación de imagen: Diez días después de la implantación, se confirmó la presencia de los tumores intracraneales con MRI . En resumen, las ratas anestesiadas (6) recibieron 2 ml de Gadodiamina (Gd Omniscan 287 mg/ml, Nycomed, Princeton, NJ) intraperitonealmente, y se formaron imágenes 10 minutos después utilizando un sistema clínico 1.5 Tesla MR (GE - Signa LX) y una bobina de extremo de arreglo en fase GE. Las secuencias multirrebanadas ponderadas en TI (TR = 500 ms, TE = 1.6 ms) que cubren el cerebro completo de cada rata fueron inspeccionadas para seleccionar las . ratas que poseen tumores con tamaños tumorales variantes, y las ratas pseudo-operadas para las inyecciones de NM404. NM404 [18- (4-yodofenil) -octadecilfosfocolina] (figura 3A, 100 mg) fue radioyodado con 125I vía intercambio de isótopo con Na125I en un fundido de ácido piválico. Weichert, et al Int J Appl Rad Isotopes, 1986; 37:907-913.

Después de la purificación por HPLC, se disolvió NM404 en una solución de polisorbato 20 al 2% antes de la inyección en la vena de la cola (5- 20 µCi/rata de 200 g) y cuatro ratas que poseen tumor y tres pseudo-operadas. A los días 1 (n = 1) , 2 (n = 1) y 4 (n = 2) después de la inyección de NM404, los animales fueron sacrificados (con C02) y los cerebros fueron extirpados y formados en imagen sobre un escáner Bioscan AR2000 radio TLC modificado (incrementos de 1 mm a una adquisición de 2 minutos/banda y 1 colimador de alta resolución de 1 mm) . Además, se pesaron cerebro normal, sangre, riñon, hígado, bazo, tiroides, y tejidos tumorales, y la radioactividad se contó en un contador gama. La distribución de la radioactividad en el tejido fue luego correlacionada a la histología cerebral. Resultados y Discusiones: Resultados iniciales de formación de imagen con NM404 indicaron una sorprendente captación y una retención prolongada en todos los gliomas en el intervalo de 3 a 5 mm de diámetro. La radioactividad en el tejido cerebral normal fue mínima en animales control pseudo-operados (figura 12), mientras que NM404 concentró intensamente en los gliomas (figura 13) . Las proporciones de tumor al cerebro (% de dosis inyectada/g) en ratas que poseen C6 fueron de 10.5, 12.2 y 6.7 a las 24, 48 y 96 horas, respectivamente. Como se ha observado en el cultivo celular previo y en estudios de modelos animales in vivo, NM404 es aparentemente metabolizado y eliminado de las células normales, pero se llega a atrapar metabólicamente en las membranas de las células tumorales. Los experimentos previos con autorradiografía en otros modelos tumorales, han sugerido que únicamente las células tumorales viables, y no el tejido normal o los tejidos necróticos, son capaces de acumular NM404. De manera interesante, incluso los tumores pequeños que miden unos pocos milímetros de diámetro, fueron también detectados después de la administración de NM404. Estos hallazgos preliminares sugieren que NM404 puede ser también útil para la visualización de focos tumorales invasores pequeños . Conclusión: Como ha sido el caso en todos los modelos tumorales examinados previamente, NM404 mostró retención selectiva prolongada por gliomas C6 de rata evaluados en este estudio.

F. Ejemplo VI: Tumor Hepático Murino Los resultados preliminares obtenidos en más de 14 modelos tumorales de xenoinjerto y tumores espontáneos, han mostrado universalmente que NM404 sufre captación selectiva y retención prolongada en los tumores. Además, debido a que NM404 proporciona niveles antecedentes hepáticos menores que sus predecesores, los inventores expandieron la evaluación hacia tumores hepáticos a la luz del hecho de que la formación de imágenes de pacientes con HCC ha sido problemática. Muchos pacientes han sufrido cirrosis y por lo tanto es difícil de distinguir los nodulos en regeneración de HCC sobre la formación de imagen en sección transversal. Además, los estudios preliminares que evalúan la exploración de PET con FDG han mostrado únicamente una sensibilidad del 20 al 50% en la detección de la enfermedad. Verhoef C, Valkema R. et al., Liver (2002) 22: 51-56. Materiales y Métodos: Modelo de HCC de Ratón, endógeno. El desarrollo de cáncer hepatocelular espontáneo en ratones endógenos sobre la expresión del gen de TGFa ha sido extensamente evaluado y es un modelo animal extremadamente promisorio para el estudio de esta enfermedad. Lee GH, Merlino G, Fausto N. Cáncer Research (1992) 52: 5162- 5170. TGFa es un mitógeno para células epiteliales y se enlaza al receptor de EGF; la expresión no regulada de TGFa da como resultado formación de tumor. En ratones CDl macho que expresan la TGFa transgénica bajo el control del promotor de metalotioneina 1 inducible por zinc (MT1) , 75 a 80% desarrollan HCC después de 12 meses. Sin embargo, cuando el agente alquilante dietilnitrosamina (DEN) , un carcinógeno químico, es utilizado para inducir el crecimiento del tumor a los 15 días de vida, 90% de los ratones desarrollan HCC por los 6 meses de edad. En el examen histológico, estos tumores consisten de carcinomas hepatocelulares bien diferenciados de un patrón sólido. Debido a que los tumores surgen espontáneamente, los inventores utilizan estos animales como un modelo adecuado para estudios preclínicos. Modelo de Xenoinjerto de Adenocarcinoma de Colon CT26: Además del modelo de HCC espontáneo, NM404 fue también evaluado en un modelo de tumor adenocarcinoma de colon de xenoinjerto, mediante el cual las células CT26 (5 x 105 células/50µl) fueron previamente inyectadas directamente en el parénquima hepático de ratones hembra BALB/c para la creación de tumores hepáticos focales. Estudios de formación de Imagen: NM404 (figura 3A, 100 µg) fue radioyodado con 125I vía de intercambio de isótopos en un fundido de ácido piválico. Weichert JP, et al Int J Applied Radiat Isot (1985) 37 (8 ): 907-913. Después de la purificación por HPLC éste fue disuelto en una solución acuosa de polisorbato 20 al 2% antes de la inyección en la vena de la cola (15 µCi/20 g de ratón) dentro de 3 ratones endógenos a TGFa o alternativamente dentro de 3 ratones que poseen el tumor CT26. Los ratones fueron anestesiados y explorados por hasta 21 días después de la inyección sobre un escáner (explorador) Bioscan -AR2000 radio TLC modificado (incrementos de 1 mm a una adquisición de 2 minutos/banda y colimador de alta resolución de 1 mm) y también en un escáner Imtek microCT (390 pasos) para la correlación anatómica. Las imágenes de microCT fueron visualizadas utilizando el software Amira. En el sacrificio, los hígados que poseen tumor fueron inicialmente extirpados y explorados ex vivo. Los tumores fueron luego extirpados, pesados, escaneados ex vivo y se cuantificó la radioactividad. Las muestras de lesiones fueron enviadas para la clasificación histológica. Resultados y Discusiones: Los resultados iniciales de formación de imagen con NM404 (figuras 14, 15) han mostrado una captación sorprendente (<20% de la dosis/g) y retención prolongada en carcinomas espontáneos e implantado en el hígado. La retención del tumor de NM404 persistió en estos animales por 21 días, el punto final del estudio predeterminado. Las imágenes de microCT mejoradas en contraste confirmaron la presencia y localización precisa de todos los tumores hepáticos (figuras 14, 16). La extracción de lípidos y el análisis de HPLC subsecuente del tejido tumoral indicaron que la radioactividad estuvo todavía asociada con el compuesto progenitor. Como se ha observado en el cultivo celular previo y en estudios de modelos animales in vivo, NM404 aparentemente es metabolizado y eliminado de las células normales, pero es atrapado metabólicamente en las membranas de células tumorales. Conclusiones: Como ha sido el caso en todos los modelos tumorales previos examinados, NM404 mostró retención selectiva y prolongada por modelos de tumor hepático murino espontáneos y xenoinjertados, evaluados en este estudio.

G. Ejemplo VII: Modelo de Carcinoma Mamario Espontáneo Ap Yín/+ Materiales y métodos: El modelo de ratón Apcíí2n 'f'; este modelo está comprendido de ratones que poseen el alelo Min de Apc (ratones Ap Y1"^) . Este modelo ofrece ventajas específicas sobre los modelos de xenoinjerto en que los ratones hembra ApcM?n/+ están predispuestos a desarrollar hiperplasias mamarias, y carcinomas y adenomas intestinales. En el antecedente genético C57BL/6J aproximadamente 5% de las hembras no tratadas desarrollarán un tumor mamario por los 100 días de edad. Moser AR, Dove, et al. Proc Nati Acad Sci USA (1993) 90: 8977-81. La incidencia y la multiplicidad de las lesiones mamarias puede ser incrementada por una dosis simple de la etilnitrosourea (ENU) un agente alquilante de acción directa. El tratamiento con ENU da como resultado que 90% de las hembras B6 ApcY1" * desarrollen un promedio de 3 carcinomas de células escamosas mamarias (SCC) , pero pocas lesiones hiperplásicas dentro de 60 días después del tratamiento. . Ratones ApcY1"^ poseen un cambio simple de par de base en el gen de Apc (poliposis adenomatosa cóli) . El gen APC/Apc codifica: para una proteína grande con varios dominios funcionales potenciales. Groden, J. , Thliveris, A., Samowitz, W., Carlson, M., Gelbert, L., Albertsen, H., Joslyn, G., Stevens, J. , Spirio, L., Robertson, M. y et al. Identification and characterization of the familial adenomatous polyposis coli gene. Cell, (1991) 66, 589-600; Kinzler, KW. , Nilbert, M. C, Vogelstein, B., Bryan, T. M. , Levy, D. B., Smith, K. J. , Preisinger, A. C, Hamilton, S.

R., Hedge, P., Markham, A. y et al. Identification of a gene located at chromosome 5q21 that is mutated in colorectal cancers. Science, (1991) 25i, 1366-70. Las proteínas APC de ratón y de humano son 90% idénticas y son conservados todos los dominios funcionales potenciales. APC regula los niveles de ß-catenina. La ß-catenina tiene múltiples papeles en la célula, incluyendo la estabilización de la E-cadherina y la regulación de la transcripción a través de la familia LEF y TCF de factores de la transcripción. Aberle, H., Schwartz, H. y .Kemler, R. Cadherin-Catenin Complex-Protein Interactions and Their Implications For Cadherin Function. Journal of Cellular Biochemistry, (1996) 61, 514-523; Huber, O., Korn, R. , McLaughlin, J. , Ohsugi, M., Herrmann, B. G. y Kemler, R. Nuclear localization of beta-catenin by interaction with transcription factor LEF-1. Mechanisms of Development, (1996) 59, 3-10; Behrens, J. , Vonkries. J. P., Kuhl, M., Bruhn, L., Wedlich, D., Grosschedl, R. y Birchmeier, W. Functional Interaction of Beta- Catenin With the Transcription Factor Lef-1. Nature, (1996) 382, 638-642. La regulación de los niveles de ß-catenina involucra la interacción de APC, axina o conductina, y la glucógeno-sintasa cinasa 3ß (GSK3ß) con ß-catenina. Behrens, J., Jerchow, B. A., Wurtele, M., Grimm, J., Asbrand, C, Wirtz, R. , Kuhl, M. , Wedlich, D. y Birchmeier, W. Functional interaction of an axin homolog, conductin, with beta-catenin, APC, y GSK3beta. Science, (1998) 280, 596-9; ikeda, S., Kishida, S., Yamamoto, H., Murai, H., Koyama, S. and Kikuchi, A. Axin, a negative regulator of the Wnt signaling pathway, forms a complex with GSK-3beta and beta- catenin and promotes GSK;-3beta-dependent phosphorylation of beta-catenin. EMBO Journal, (1998) 17, 1371-84; Kishida, S., Yamamoto, H., Ikeda, S., Kishida, M. , Sakamoto, I., Koyama, S. y Kikuchi, A. Axin, a negative regulator of the wnt signaling pathway, directly interacts with adenomatous polyposis coli and regulates the stabilization of beta-catenin. Journal of Biological Chemistry, (1998) 273, 10823-6; Sakanaka, C. , Weiss, J. B. and Williams, L. T. Bridging of beta-catenin and glycogen synthase kinase-3beta by axin and inhibition of beta-catenin-mediated transcription. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America , (1998) 95, 3020- 3; Rubinfeld, B., Albert, I., Porfiri, E., Fiol, C, Munemitsu, S. and Polakis, P. Binding of GSK3beta to the APC-beta-catenin complex and regulation of complex assembly.

Science, (1996) 272, 1023-6; Rubinfeld, B., Souza, B., Albert, I., Muller, O., Chamberlain, S. H., Masiarz, F. R. , Munemitsu, S. and Polakis, P. Association of the APC gene product with beta-catenin. Science, (1993) 262, 1731-4; Polakis, P. The adenomatous polyposis coli (APC) tumor suppressor. Biochimica et Biophysica Acta , (1997) 7332, F127-47. Esta interacción da como resultado fosforilación de la ß-catenina, que es dirigida para la degradación por la vía de la ubiquitina-proteasoma. Rubinfeld, B., Souza, B., Albert, I., Muller, 0., Chamberlain, S. H., Masiarz, F. R., Munemitsu, S. y Polakis, P. Association of the APC gene product with beta-catenin. Science, (1993) 262, 1731-4; Su, L.K;., Vogelstein, B. y Kinzler, K. W. Association of the APC tumor suppressor protein with catenins. Science, (1993) 262, 1734-7; Polalkis, P. Mutations in the APC gene and their implications for protein structure and function. Current Opinión in Genetics & Development, (1995) 5, 66-71; Aberle, H., Bauer, A., Stappert, J., Kispert, A. y Kemler, R. beta- catenin is a target for the ubiquitin-proteasome pathway. EMBO Journal, (1997) 76, 3797-804. La mayoría de las mutaciones de línea germinal y somáticas en APC dan como resultado proteínas que carecen de algunos o todos los sitios de enlace a la ß-catenina.26'28'29 Polakis, P. Mutations in the APC gene and their implications for protein structure and function. Current Opinión in Genetics & Development, (1995) 5, 66-71; Nagase, H. and Nakamura, YMutations of the APC (adenomatous polyposis coli) gene. Human Mutation. (1993) 2,425-34; Beroud, C. y Soussi, T. Gene APC: base de datos de mutaciones de línea germinal y somáticas en tumores humanos y líneas celulares humanas. Nucleic Acids Research, (1996) 24, 121-4. Dos regiones de APC son requeridas para esta interacción; la proteína truncada codificada por el alelo Min carece de estas dos regiones; Polakis, P. Mutations in the APC gene and their implications for protein structure and function. Current Opinión in Genetics & Development, (1995) 5, 66-71; Su, L. K. , Kinzler, K. W., Vogelstein, B., Preisinger, A. C, Moser, A. R., Luongo, C, Gould, K.A. y Dove, W. F. Múltiple intestinal neoplasia caused by a mutation in the murine homolog of the APC gene. Science, (1992) 256, 668-70. APC tiene también un papel en el transporte de la ß-catenina hacia afuera del núcleo. De este modo, en ausencia de función de APC, la ß-catenina podría acumularse en el citoplasma y el núcleo, posiblemente afectando la transcripción de los genes objetivo y la interacción célula a célula a través de la E-cadherina. Las mutaciones de APC son frecuentes en varios tipos de tumores en humanos, incluyendo tumores intestinales y otros tumores epiteliales. La pérdida de heterozigocidad en el locus APC o niveles incrementados de la ß-catenina han sido encontrados en más de 25% de los cánceres de mama. Furuuchi, K., Tada, M., Yamada, H., Kataoka, A., Furuuchi, N., Hamada, J., Takahashi, M., Todo, S., y Moriuchi, T. Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers. Soma tic mutations of the APC gene in primary breast cancers, American Journal of Pathology. (2000) 156:: 1997-2005; Jonsson, M. , Borg, A., Nilbert, M., y Andersson, T. Involvement of adenomatous polyposis c.oli (APC) /beta-catenin signaling in human breast cáncer. Involvement of adenoma tous polyposis coli (APC/beta-catenin signaling in human breast cáncer, European Journal of Cáncer. (2000) 36: 242-248. De este modo, los tipos de lesiones que aparecen en estos ratones serán molecular e histológicamente similares a los cánceres de mama en humanos. El antecedente genético puede afectar la incidencia, la latencia, y el tipo de lesiones mamarias que se desarrollan. Por ejemplo, ratones hembra FVBxBd ApcM?n/+ desarrollan un promedio de 0.2 tumores mamarios por ratón, pero 4 hiperplasias por ratón dentro de 120 días de tratamiento. Ratones BALB/xB6 ApcMln/+ desarrollan un promedio de 1.8 tumores mamarios y 0.6 hiperplasias por ratón. Moser AR, Hegge LF, Cardiff RD. Cáncer Research (2001) 61: 3480-3485. Ratones FVBxB6 y BALBxBd ApcMin/+ desarrollan SCC mamario y adenocarcinomas (AC) . Las lesiones hiperplásicas en ratones FVBxB6 ApcM?n/+ pueden ser clasificadas ya sea como hiperplasias alveolares o nodulos escamosos. Moser, A. R. , Hegge, L. F., and Cardiff, R. D. Genetic background affects susceptibility to mammary tumors and hyperplasias in ApcMxn/+ mice, Genetic background affects susceptibility to mammary tumors and hyperplasias in Ap Y^x mice. Cáncer Research (2001) 61: 3480-3485. Las hiperplasias alveolares son precursoras de los adenocarcinomas y los nodulos escamosos son lesiones precursoras para SCC. De este modo, mediante la manipulación del antecedente genético, los ratones que desarrollan múltiples tipos de hiperplasias y carcinomas pueden ser generados, frecuentemente dentro del mismo animal. Las hiperplasias alveolares se asemejan a los lóbulos atípicos (tipo A) comúnmente encontrados en muestras de mamas humanas.

Cardiff, R. D. and Wellings, S. R. The comparative pathology of human and mouse mammary glands. The compara tive pathology of human and mouse mammary glands, Journal of Mammary Gland Biology& Neoplasia . (1999) 4: 105-22. Estos lóbulos atípicos son más comunes en mamas cancerosas o en la mama contralateral en mujeres con cáncer de mama. Mientras que SCC no es un tipo frecuente de tumor de mama, el AC se asemeja a un tipo común de tumor de mama humano. Además, los tumores con alteraciones en la vía APC son comunes en cánceres de mama humanos. La pérdida de la heterozigocidad en el locus de APC o los niveles incrementados de la ß-catenina han sido encontrados en más de 25% de los cánceres de mama. Furuuchi, K., Tada, M. , Yamada, H., Kataoka, A., Furuuchi, N., Hamada, J. , Takahashi, M. , Todo, S., y Moriuchi, T. Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers. Soma tic muta tions of the APC gene in primary breast cancers , American Journal of Pa thology. (2000) 756:. 1997-2005. 35. Jonsson, M., Borg, A., Nilbert, M. , y Andersson, T. Involvement of adenomatous polyposis coli (APC) /beta-catenin signaling in human breast cáncer. Involvement of adenoma tous polyposis coli (APC) /beta-catenin signaling in human breast cáncer, Eur Journal of Cáncer. (2000) 36. 242-248. De este modo, los tipos de lesiones que aparecen en estos ratones serán molecular e histológicamente similares a los cánceres de mama en humanos. Uno de los aspectos únicos y fuerzas de este modelo es la habilidad para generar ratones que desarrollan múltiples tipos de hiperplasias mamarias y carcinomas, frecuentemente dentro del mismo animal. De este manera, se puede probar la captación y retención de NM404 en múltiples tipos de hiperplasias y tumores dentro del mismo animal . La infección por el virus del polioma de ratones, conduce al desarrollo de numerosos tipos de tumores incluyendo tumores mamarios. Los ratones endógenos que expresan el antígeno T intermedio del polioma (PyVT) bajo el control del virus LTR del tumor mamario del ratón (MMTV) desarrollan displasias mamarias multifocales y tumores rápidamente. Amy Moser; Guy, C. T., Cardiff, R. D., and Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene : a endogenous mouse model for metastatic disease . Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene : a transgenic mouse model for metastatic disease, Molecular & Cellular Biology. (1992) 72: 954-61. La evidencia para el carcinoma in situ puede ser observada tan tempranamente como a las tres semanas de edad, con 100% de incidencia de tumores mamarios por tan tempranamente como a las 5 semanas de edad. Los tumores son principalmente clasificados como AC y/o adenocantomas . Los ratones desarrollan múltiples lesiones metastáticas en el pulmón dentro de 50 días de la aparición del tumor primario. Lifsted, T., Le Voyer, T., Williams, M. , Muller, W., Klein-Szanto, AA., Buetow, K. H. , and Hunter, K. W. Identification of inbred mouse strains harboring genetic modifiers of • mammary tumor age of onset and metastatic progression. Identifica tion of inbred mouse strains harboring genetic modifiers of mammary tumor age of onset and metastatic progression, Int J of Cáncer. (1998) 77: 640-4. De este modo, los ratones proporcionan un modelo rápido para el cáncer mamario metastático. Como con los ratones AP<Yl?n/+, el antecedente genético afecta el curso de tiempo del desarrollo del tumor y la dispersión metastático. Lifsted, T., Le Voyer, T., Williams, M. , Muller, W., Klein-Szanto, AA. , Buetow, K. H., y Hunter, K. W. Identification of inbred mouse strains harboring genetic modifiers of mammary tumor age of onset and metastatic progression. Identification of inbred mouse strains harboring genetic modifiers of mammary tumor age of onset and metastatic progression, Int J of Cáncer. (1998) 77; 640-4. De este modo, los inventores utilizan cruzas para generar ratones con un curso más lento de desarrollo tumoral. PyVT puede asociarse con miembros de la familia de cinasa SRC, la fosfatidilinositol-3"-cinasa, la proteína adaptadora de SHC y la proteína fosfatasa 2A. Dankort, D. L. y Muller, W. J. Transgenic models of breast cáncer metástasis. Transgenic models of breast cáncer metástasis , Cáncer Treatment & Research . (1996) 83: 71-88. La activación de las cinasas de la familia SRC es frecuentemente observada en tumores de mama humanos. Amy Moser; Muthuswamy, S. K. y Muller, W. J. Activation of the Src family of tyrosine kinases in mammary tumorigenesis. Activa tion of the Src family of tyrosine kinases in mammary tumorigenesis , Advancesin Cáncer Research (1994) 64. 111-23. Estudios de Formación de Imagen: NM404 (figura 3A, 100 µg) fue radioyodado con 125I vía intercambio de isótopos en un fundido de ácido piválico. Después de la purificación por HPLC éste se disolvió en una solución acuosa al 2% de tween 20 antes de la inyección en la vena de la cola (15 µCi/20 g de ratón) en 6 ratones hembra APCM?n/+ . Los ratones fueron anestesiados y explorados por hasta 50 días después de la inyección sobre, un escáner modificado Bioscan AR2000 radio-TLC (incrementos de 1 mm a adquisiciones 2 min/banda y colimador de alta resolución de 1 mm) y también en un escáner ImTek microCT (390 pasos) para la comparación anatómica. Las imágenes de microCT fueron visualizadas utilizando el software Amira. En el sacrificio las glándulas mamarias o los tumores extirpados fueron imaginados ex vivo, las lesiones fueron extirpadas, pesadas y se cuantificó la radioactividad. Las muestras de las lesiones fueron enviadas para la clasificación, histológica. Si era necesario un agente de contraste de combinado sanguíneo CT de acción prolongada (BP10) desarrollado en el laboratorio de los inventores, adecuado para los tiempos de adquisición prolongados de microCT, se inyectó intravenosamente antes de la exploración CT, con el fin de ayudar en la visualización de los vasos sanguíneos (figura 19) . Weichert JP, et al Radiology (2000) 216: 865-871. Resultados y Discusiones: Este modelo es único ya que las lesiones mamarias hiperplásicas, los carcinomas mamarios y los adenomas intestinales se desarrollan en el mismo ratón. Los resultados de la formación de imagen inicial con NM404 (figuras 17 y 18) han mostrado captación sorprendente (>20% de la dosis/g) y retención prolongada en todos los carcinomas mamarios espontáneos en el intervalo de 2 a 15 mm de diámetro. Aunque la localización del tumor parece rápida, persiste la radioactividad antecedente por varios días en el hígado y el intestino durante las fases de despejo corporal. El análisis de HPLC de la orina y heces radioactivas indicó la presencia de metabolitos y no NM404 progenitor. La retención del tumor de NM404 persistió por 50 días, el punto final predeterminado del estudio. NM404 no se localizó, no obstante, en los pólipos adenomatosos intestinales encontrados frecuentemente en estos ratones (figura 18) . Las imágenes de microCT confirmaron la presencia y localización precisa de todos los tumores mamarios (figura 19) . La extracción de lípidos y el análisis de HPLC subsecuente del tejido tumoral indicó que la radioactividad estaba todavía con el compuesto progenitor.

Como ha sido observado en los estudios de cultivo celulares previos, NM404 aparentemente es metabolizado y eliminado de las células normales pero se llega a atrapar metabólicamente en las membranas de las células tumorales. Conclusiones: NM404 ha mostrado avidez tumoral sorprendente en modelos de tumores de xenoinjerto en animales y humanos, examinados hasta la fecha. Además, mientras que éste mostró retención selectiva y prolongada por los tumores mamarios en este modelo tumoral espontáneo, no se localizó en los pólipos adenomatosos intestinales asociados.

H. Ejemplo VIII: Especificidad para Hiperplasia versus Neoplasia en el modelo de Adenocarcinoma Mamario Endógeno APCMin/+ Materiales y Métodos: Modelo de Ratón APCwin/+: Este modelo está comprendido de ratones que poseen el alelo Min de AP MÍJ1/+ (ratones APCMín/+ ) . Este modelo ofrece ventajas específicas sobre los modelos de xenoinjerto en que los ratones hembra APCf?n/+ están predispuestos a desarrollar hiperplasias mamarias y carcinomas, y adenomas intestinales. Sobre el antecedente genético C57BL/6J aproximadamente 5% de las hembras no tratadas desarrollarán un tumor mamario por los 100 días de edad. Moser AR, Dove, et al. Proc Nati Acad Sci USA (1993) 90 : 8977-81. La incidencia y multiplicidad de las lesiones mamarias puede ser incrementada por una dosis simple de etilnitrosourea (ENU) , un agente alquilante de acción directa. El tratamiento con ENU da como resultado que 90% de las hembras B6 APCM?n/+ desarrollen un promedio de 3 carcinomas de células escamosas mamarias (SCC) , pero pocas lesiones hiperplásicas dentro de 60 días después del tratamiento. El antecedente genético puede afectar la incidencia, la latencia y el tipo de lesiones mamarias que se desarrollan. Por ejemplo, los ratones hembra FVBxBd APCM?n/+ desarrollan un promedio de 0.2 tumores mamarios por ratón, pero 4 hiperplasias por ratón dentro de 120 días de tratamiento. BALB/xB6 APCM?n/+ desarrollan un promedio de 1.8 tumores mamarios y 0.6 hiperplasias por ratón. Moser AR, Hegge LF, Cardiff RD. Cáncer Research (2001) 61: 3480-3485. Los ratones FVBxBd y BALBxB6 APCMin/+ desarrollan SCC mamario y adenocarcinomas (AC) . Estudios de Formación de Imagen: NM404 (figura 3A, 100 µg) fue radioyodado con 125I vía intercambio de isótopos en un fundido de ácido piválico. Después de la purificación por HPLC éste se disolvió en una solución acuosa al 2% de tween 20 antes de la inyección en la vena de la cola (15 µCi/20 g de ratón) en 6 ratones hembra APCM?n/+ . Los ratones fueron anestesiados y explorados por hasta 30 días después de la inyección sobre un escáner modificado Bioscan AR2000 radio-TLC (incrementos de 1 mm a adquisiciones 2 min/banda y colimador de alta resolución de 1 mm) y también en un escáner ImTek microCT (390 pasos) para la comparación anatómica. Las imágenes de microCT fueron visualizadas utilizando el software Amira. En el sacrificio las glándulas mamarias o los tumores extirpados fueron imaginados ex vivo, las lesiones fueron extirpadas, pesadas y se cuantificó la radioactividad. Las muestras de las lesiones fueron enviadas para la clasificación histológica. Si era necesario un agente de contraste de combinado sanguíneo CT de acción prolongada (BP20) desarrollado en el laboratorio de los inventores, adecuado para los tiempos de adquisición prolongados de microCT, se inyectó intravenosamente antes de la exploración CT, con el fin de ayudar en la visualización de los vasos sanguíneos (figura 22) . Weichert JP, et al Radiology (2000) 216: 865-871. Resultados y Discusiones: Este modelo es único ya que las lesiones mamarias hiperplásicas, los carcinomas mamarios y los adenomas intestinales se desarrollan en el mismo ratón. Los resultados de la formación de imagen inicial con NM404 (figuras 20, 21) han mostrado captación sorprendente (>20% de la dosis/g) y retención prolongada en todos los carcinomas mamarios espontáneos en el intervalo de 2 a 15 mm de diámetro. Aunque la localización del tumor parece rápida, persiste la radioactividad antecedente por varios días en el hígado y el intestino durante las fases de despejo corporal. El análisis de HPLC de la orina y heces radioactivas indicó la presencia de metabolitos y no NM404 progenitor. La retención del tumor de NM404 persistió por >21 días, el punto final predeterminado del estudio. NM404 no se localizó, no obstante, ya sea en hiperplasias alveolares focales o en pólipos adenomatosos intestinales encontrados frecuentemente en estos ratones (figura 21) . Las imágenes de MicroCT confirmaron la presencia y localización precisa de todos los tumores mamarios (figura 22) . NM404 aparentemente es metabolizado- y eliminado de las células normales pero es atrapado metabólicamente en las membranas de las células tumorales. Conclusiones: NM404 ha mostrado una avidez tumoral sorprendente en 20/20 modelos de tumor de xenoinjerto animal y humano examinados hasta la fecha. Además, mientras que éste mostró retención selectiva y prolongada por los carcinomas de células escamosas y adenocarcinomas mamarios en este modelo tumoral espontáneo, éste no se localizó en las hiperplasias alveolares focales o en los pólipos adenomatosos intestinales y de este modo parece ser selectivo para las células tumorales malignas.

I. Ejemplo IX: Mecanismo de Retención Selectiva de NM404 Introducción: Ciertos análogos del éter de fosfolípido, rales como NM404, son selectivamente retenidos dentro de muchos tipos de células tumorales por un tiempo prolongado. Los inventores buscaron evaluar el mecanismo de retención selectiva de NM404 en células tumorales utilizando un ensayo enzimático para evaluar la actividad de la proteína fosfolipasa D (PLD) y la PCR cuantitativa. Los inventores lanzaron la hipótesis de que los niveles reducidos de PLD en células tumorales dan como resultado una disminución en la habilidad para metabolizar y excretar NM404. Métodos: Suspensiones de células simples de líneas celulares de tumor murino que incluye hepa-1 (hematoma) , CT26 (adenocarcinoma colorrectal) y TS/A (adenocarcinoma de mama) fueron analizadas con dos ensayos: (1) el ensayo Amplex® Red, utilizando un equipo comercialmente disponible (Molecular Probes) que evalúa la actividad de la proteína PLD utilizando un lector de microplacas de fluorescencia, y (2) la PCR cuantitativa para determinar el nivel de ARNm de PLD. Las líneas celulares tumorales fueron comparadas al .tejido hepático normal, que muestra más altos niveles de captación y eliminación de NM404 y de este modo probablemente tiene menores niveles de PLD que otros tejidos normales. Para el ensayo Amplex® Red, la proteína total fue extraída utilizando una solución de detergente (Triton-X-100) y la cantidad de PLD fue comparada a un control positivo estándar. Para la PCR el ARNm fue purificado y convertido a ADNc utilizando la transcriptasa inversa (Promega) . Las condiciones para la amplificación del ADNc para la PCR en tiempo real incluyeron: 94°C, 30 segundos; 65°C, 30 segundos; y 72°C, 30 segundos) por 50 ciclos (iCycle, iQmix, Bio-Rad) . El cebador para PLD1, (sentido) TCTGGTTTCACCCCGTCAGAA- 3', (antisentido) 5'- TTGCTCATATCTGCGGCGAT-3' , fue utilizado. El producto fue comparado a un ADNc estándar (GAPDH, Biosource) diluido a partir . de 1 µg hasta 10"7 µg. Todos los ensayos fueron realizados por duplicado. Resultados: La PLD fue cuantificada como se muestra en la tabla 3. La actividad de proteína PLD y los- niveles de ARNm fueron significativamente menores que el tejido hepático normal (p<0.05, prueba T) en todas las líneas celulares. Conclusión: La actividad reducida de proteína PLD y una disminución en el ARNm de PLD fueron observadas en líneas celulares de tumor murino. De este modo, el mecanismo de retención selectiva de NM404 puede ser debido a una disminución en el rompimiento de NM404 por PLD. La actividad disminuida de PLD en el tumor puede servir como un objetivo molecular potencial para agentes antitumorales.

Tabla 3 Célula/tejido Actividad de la proteína PLD ARNm (µg x lO"5/0.01 µg - ' (mU/fluorescencia/µg de de ADNc total) proteína/ml) Hepa-1 3 . 3 6. 2 CT26 7 . 8 2 . 4 TS/A 2 . 8 4 . 0 Hígado normal 14 . 1 12 . 2 J. Ejemplo X: Atributos Terapéuticos del Modelo de Tumor Mamario Murino Endógeno Modelos para el estudio de la terapia con NM404: Aunque la supervivencia a largo plazo no es esencial para los estudios de formación de imagen, ésta es ventajosa para los estudios de terapia propuestos. Los modelos utilizados para estudios de formación de imagen sufren de tumores intestinales concomitantes que usualmente conducen a la muerte del animal . Con el fin de incrementar el número de tumores que se desarrollan por ratón y disminuir el número de tumores intestinales con la esperanza de incrementar el lapso de vida de los ratones que poseen tumores, el Dr Moser ha cruzado recientemente ratones macho B6 Min/+ con ratones hembra C57BR/cdJ (BR) . Los ratones hembra resultantes BRB6 Fl Min/+ desarrollaron significativamente más tumores mamarios que los que desarrollaron los ratones B6 Min/+ (P = 0.016), un promedio de casi 5. El número de ratones con tumores y el tiempo para el primer tumor no fueron diferentes entre estas dos cepas (P ) 1 y P = 0.06, respectivamente) ' (figura 25) . El número incrementado de tumores mamarios de los ratones BRB6 Fl puede ser debido, en parte, a los tiempos de supervivencia significativamente más prolongados de los _ ratones híbridos BRB6 Fl Min/+ con relación a los ratones B6 Min/+ (P = 2 x 10"7) . - Los ratones B6 y BRB6 Fl Min/+ fueron muy similares con respecto al fenotipo de glándulas mamarias, pero muy diferentes en susceptibilidad a los tumores intestinales. Las cepas B6 y BR pueden ser consideradas antecedentes sensibles para la tumorigénesis mamaria inducida por Min, ya que los ratones desarrollaron un gran número de tumores dentro de un tiempo corto después del tratamiento con ENU. No obstante, la cepa BR lleva alelos de resistencia dominantes en los locus modificadores que afectan el desarrollo de los tumores intestinales, que pueden probar ser relevantes para el estudio de terapia propuesto. Una comparación de estas cepas se presenta en la tabla 2.

Tabla 2 El antecedente genético afecta el desarrollo de tumor mamario e intestinal en ratones Min/+ a Información sobre 16 ratones ya que los intestinos de 2 ratones se perdieron en el procesamiento . Los ratones fueron generados mediante el cruce de hembras de cada cepa con machos B6 Min/+. Ratones hembra fueron tratados con ENU cuando estaban entre los 30 y 45 días de edad y se sacrificaron cuando estaban moribundos . Únicamente los resultados de los ratones Min/+ son mostrados. Los tumores mamarios son definidos como aquellos tumores identificados en la necropsia, mientras que las lesiones mamarias son las lesiones focales pequeñas notadas en las cantidades enteras de la primera, cuarta y quinta glándulas mamarias . Los tumores intestinales fueron contados en tres secciones de 4 cm provenientes del intestino delgado (duodeno, yeyuno e íleon) , y el colon completo. Todos los ratones Min/+ desarrollaron tumores intestinales los valores son las medias ± la desviación estándar.

Resultados de Formación- de Imagen preliminares con NM404 en ratones Min: En un experimento preliminar para mostrar que NM404 se localiza en tumores de mama de ratón endógeno BFVxB6 APCM?n/+, dos animales fueron inyectados (intravenosamente en la vena de la cola) con 125I-NM404 (15 µCi) y se imaginaron sobre un escáner Bioscan AR2000 radio-TLC modificado (equipado con un colimador de alta resolución de 1 mm y software de adquisición de análisis bidimensional) a los 1, 4 y 7 días después de la inyección (figura 27 A, B) .

Cada animal sufrió exploración microCT (figura 27) en el día 10 antes de la eutanasia y la disección para remover las glándulas mamarias y los tumores asociados. Los puntos críticos focales correlacionaron visualmente con todos los tumores sobre las imágenes de Bioscan ex vivo (figura 27C) . Aunque los nodulos linfáticos son visibles, no se asoció radioactividad con ellos indicando una falta de infiltración de las células tumorales. El tumor principal en la figura 27C fue histológicamente categorizado como un adenocarcinoma. Existieron cuatro tumores mamarios en ambos ratones y todos fueron fácilmente detectables en las imágenes Bioscan ex vivo de las glándulas mamarias extirpadas. Potencial Radioterapéutico de NM404: Durante el curso de los recientes estudios de captación y retención tumoral en ratón con dosis de "formación de imagen" (15-20. µCi/29 g ratón) de NM404 marcado con 125I han sido observadas varias respuestas terapéuticas aparentes (resultados no publicados) . En un modelo de tumor mamario de ratón APCM?n/+ se ha notado en general que el crecimiento de tumor permanece estático después de una inyección intravenosa simple de NM404. Algunos de estos animales también perdieron todo el pelo por arriba de los tumores mamarios más grandes alrededor de los" 8 días después de la inyección. Además, estos ratones también obtienen tumores intestinales y usualmente sufren de sangrado intestinal dando como resultado anemia severa, que los hace tener sus patas blancas. El Dr. Moser notó que las patas de estos ratones se habían revertido a un color rosado alrededor de 5 días después de una inyección simple de NM404. ' Después de la eventual disección de estos animales, se notó que únicamente muy pocos de ellos, si los había, de los 20 esperados o aproximadamente, tumores intestinales usualmente encontrados en esta etapa efectivamente permanecieron. El fenómeno de "patas blancas a rosadas" fue también observado en un modelo de adenocarcinoma intestinal de ratón, separado pero más agresivo, en donde la disección a los 12 días después de la administración con NM404, reveló nuevamente que la mayoría, sino es que todos, los tumores intestinales esperados se habían ido. En ambos modelos intestinales, los animales que recibieron NM404 sobrevivieron fácilmente a sus compañeros de camada no tratados. Estos hallazgos coincidentes fueron reconfirmados en dos grupos separados de igual edad cada uno involucrando más de 6 ratones. Estas observaciones con 125I-NM404 indican el potencial para las aplicaciones en radioterapia, particularmente si se marcan con yodo 131. La captación cuantitativa del tumor y los estudios de retención descritos en este modelo de tumor mamario propuesto, también- proporcionará datos suficientes para iniciar un análisis de dosimetría integral para este agente, con el fin de estimar su verdadero potencial radioterapéutico . Elección del Isótopo: Debido a su vida media física de 60 días y emisión de fotones de baja energía de 28 KeV, el yodo 125 es adecuado para experimentos de formación de imágenes en ratones y ratas. El yodo 125 también proporciona características terapéuticas y es actualmente utilizado en implantes permanentes de braquiterapia de próstata. En un experimento de formación de imágenes, 2 ratones desnudos fueron inoculados con implantes de células tumorales escamosas subcutáneas 1 y 6 sobre los flancos opuestos. Las células SCC 1 y 6 fueron utilizadas debido a que una es radiosensible con relación a la otra. Después de 14 días cuando el tamaño del tumor promedio (4 en total) se aproximó a 0.5 cm de diámetro, uno de los ratones recibió 20 µCi de NM404 marcado con 125I y el otro recibió NM404 no marcado en una dosis en masa igual. El ratón que había recibido únicamente el compuesto no marcado tuvo que ser sacrificado 20 días después de la inyección debido a que ambos tumores alcanzaron el límite de tamaño de terminación, como es definido en nuestro protocolo de uso de animales. Ambos tumores en el ratón con 125I-NM404 regresaron dramática e inesperadamente en el curso de varias semanas (figura .28) . De hecho, los tumores de este ratón nunca alcanzaron el tamaño terminal y el ratón fue efectivamente sacrificado después de 90 días con el fin de recolectar secciones para histología. A este tiempo, el centro del tumor se había vuelto necrótico, mientras que la orilla periférica aparecía algo viable. El examen histológico confirmó un centro necrótico y una orilla viable. Mientras que los factores de suministro de sangre pueden contribuir a tales observaciones, es también posible que la emisión de fotones provenientes de 125I dieran como resultado un pobre equilibrio electrónico en la periferia del tumor, dando como resultado una subdosificación de la "corteza o pellejo" del tumor. Este problema de equilibrio electrónico es crítico en la oncología de radiación. Los fotones viajan a una distancia finita, determinada por su energía, antes de interactuar con el tejido y ejercer su efecto biológico. Un fotón con una energía demasiado alta puede dar como resultado subdosificación de la periferia del nodulo del tumor, ya que los fotones que se apartan del. nodulo viajan lejos (fuera del tumor) antes de depositar su dosis. Esto podría ser un problema con los fotones de 125I, no obstante, la baja energía asegura una deposición muy local. Los cálculos con Complex Monte Cario podrían refinar tales estimados, pero el mejor método para determinar la selección óptima del isótopo es la experimentación, ya que existen muchos factores en juego que no pueden ser modelados de manera precisa (detalles de distribución tisular, paso . múltiple, etc). La única ventaja de 125I es que todos los fotones son de baja energía, asegurando una exposición muy limitada de los tejidos normales que rodean el tumor. El yodo 131 ha sido utilizado con mayor eficacia en el tratamiento del cáncer de tiroides. Dosis muy seguras de 131I pueden controlar los depósitos subclínicos del cáncer de tiroides bien diferenciado, que concentra el yodo muy ávidamente como lo hace la tiroides normal. Este proceso de captación activa ayuda a limitar la dosis a los tejidos normales. El yodo 131 tiene emisiones beta y varias emisiones gama, pero la dosis predominante en el tejido surge de las emisiones beta. Los inventores han seleccionado el NM404 marcado con 131I con base en el éxito clínico con el cáncer de tiroides, aunado con los resultados obtenidos con Bexxar (un agente basado en anticuerpo marcado con yodo 131) en pacientes con linfoma de bajo grado. Las emisiones beta predominantes y principalmente las emisiones gama de baja energía optimizan la homogeneidad de la dosis dentro del nodulo tumoral mismo. También, la vida media más corta (8 días) proporciona intensidad de dosis más clínicamente relevante en comparación a la vida media en 60 días del yodo 125. Estos factores permitirán que los inventores realicen la mejor evaluación de la eficacia antitumoral de este agente. Una desventaja potencial del yodo 131 es que existe una emisión gama de alta energía también, la cual podría exponer efectivamente los tejidos circunvecinos adyacentes a más radiación que lo que podría ocurrir con el yodo 125. Los tumores en el modelo endógeno propuesto en la presente están periféricamente localizados en las glándulas mamarias, y de este modo no deben representar una amenaza inmediata al bienestar general del animal. Ya que la toxicidad a órganos es también uno de los puntos finales del estudio, es evaluada la reacción del tejido circunvecino y los sistemas de órganos clave (médula, hígado, riñones, intestino, cerebro, etc) . Los" datos de distribución tisular y la dosimetría efectiva del NM404 radiomarcado, determinarán su potencial terapéutico óptimo, es posible que diferentes isótopos se complementarán uno con el otro en el establecimiento terapéutico. Se entiende que los ejemplos y modalidades descritos en la presente son para fines ilustrativos únicamente, y que serán sugeridas diversas modificaciones o cambios a la luz de los mismos para las personas expertas en la técnica, y tienen que ser incluidos dentro del espíritu y panorama de' esta solicitud y alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente son incorporadas por referencia en la presente en su totalidad, para todos propósitos .

IV. REFERENCIAS (1) Cáncer Facts and Figures. American Cáncer Society 2001. (2) Penna C, Nordlinger B. Colorectal metástasis (liverand lung) . Surg Clin North Am 2002 ; 82: 1075-lOxi. (3) Fong Y, FortnerJ, Sun RL, Brennan MF, Blumgart LH. Clinical score for predicting recurrence after hepatic resection for metastatic colorectal cáncer: analysis of 1001 consecutive cases. Ann Surg 1999 ; 230: 309-318. (4) Ike H, Shimada H, Ohki S, Togo S, Yamaguchi S, Ichikawa Y. Results of aggressive resection of lung metastases from colorectal carcinoma detected by intensive follow-up. Dis Colon Rectum 2002; 45: 468-473. (5) O'Dwyer PJ, Stevenson JP, Haller DG, Rotman N, Giantonio BJ Follow-up of stage B and C colorectal cancerin the United Sta tes and France . Seminars in Oncology 2001; 28: Suppl-9. (6) Wichmann MW, Lau-Werner U, Muller C, Hornung HM, Stieber P, Schildberg FW, The Colorectal Cáncer Study Group. 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Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para detectar y localizar el cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical en el sujeto que tiene o que está sospechoso de tener cáncer, caracterizado el método porque comprende los pasos de: a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; y b) determinar si un órgano sospechoso de tener cáncer del sujeto retiene un nivel más alto del análogo que la o las regiones circunvecinas, en donde una región de retención más alta indica la detección y localización del cáncer, en donde el análogo de fosfolípido se selecciona de: donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I ; 123I f 12 I 125-,-- y 131-^
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el éter de fosfolípido es 18- (p-yodofenil) octadecil-fosfocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil] -1, 3-propanodiol-3-fosfocolina, ó 1-0-[18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3-fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo. . Un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto, caracterizado porque comprende el paso de: (a) administrarle al sujeto una cantidad efectiva de una molécula que comprende un análogo de éter de fosfolípido, en donde el análogo de fosfolípido se selecciona de: (CH2)nOPOCH2CH2- donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2/ NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH y NR y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer pulmonar, cáncer adrenal, melanoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer subcutáneo, cáncer intestinal, carcinoma hepatocelular, retinoblastoma, cáncer cervical, glioma, cáncer de mama, cáncer pancreático,' y carcinosarcoma. 6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I, 123I, 124I, 125I y 131I . 7. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el éter de fosfolípido es 18- (p-yodof enil) octadecil-f osf ocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil] -1, 3-propanodiol-3-f osf ocolina, ó 1-0-[18- (p-yodof enil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3-f osf ocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo . 8. El uso de un análogo de éter de fosfolípido para la producción de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer , en donde el análogo de fosf olípido se selecciona de : (CH2)nOPOCH2CH2 Y 0" donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es. un sustituyente alquilo o arilalquilo. 9. El uso de conformidad con la reivindicación 8, en donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I, 123I, 124I, 125I y 131I. 10. El uso de conformidad con la reivindicación 8, en donde el éter de fosfolípido es 18- (p-yodofenil) octadecil- fosfocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil] -1, 3-propanodiol- 3-fosfocolina, ó l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3-fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo . 11. Un método para diferenciar la inflamación, el adenoma y la hiperplasia de la neoplasia en un sujeto, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) administrar un análogo de éter de fosfolípido al sujeto; y (b) determinar si un órgano sospechoso de tener inflamación, adenoma, hiperplasia o neoplasia del sujeto, conserva un más alto nivel del análogo que la o las regiones circunvecinas, en donde una región de más alta retención indica detección y localización de la neoplasia, y en donde una región de menor retención indica la presencia de un órgano sospechoso de tener el adenoma, la hiperplasia o la inflamación, en donde el análogo de fosfolípido se selecciona o de: (CH2)nOP?CH2CH2 y donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 1 2I , 123I , 124I , 125I y 131I . 13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el éter de fosfolípido es 18- (p-yodofenil) octadecil-fosfocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil] -1,3-propanodiol-3-fosfocolina, ó 1-0- [18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3- fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo . 1
4. Un método para detectar la neoplasia en una muestra de tejido que tiene una fosfolipasa D (PLD) , caracterizado el método porque comprende los pasos de: (a) cuantificar el nivel de actividad de la proteína PLD o el nivel de ARNm de PLD en la muestra de tejido; y -" - (-b) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel de actividad de la proteína PLD que la o las regiones de tejido circunvecinas, donde una región de menor actividad indica detección y localización de la neoplasia, o (c) determinar si la muestra de tejido tiene un menor nivel del ARNm de PLD que la o las regiones de tejido circunvecinas , en donde una región de menor nivel del ARNm indica detección y localización de la neoplasia. 1
5. Un agente antitumoral que tiene selectividad para un tejido neoplásico seleccionado mediante un método de selección de una muestra de tejido que tiene una fosfolipasa D (PLD) , caracterizado el agente antitumoral porque ha sido puesto en contacto con la muestra de tejido y la o las regiones tisulares circunvecinas, que comprende los pasos de: (a) cuantificar la actividad de proteína PLD o el nivel del ARNm de PLD, en donde la actividad reducida de la proteína PLD o el nivel reducido del ARNm, en comparación a la región o regiones de tejido circunvecino, es indicador de neoplasia; y (b) cuantificar el agente antitumoral en la muestra de tejido y la región o regiones de tejido circunvecino del paso (a) , en donde un nivel incrementado de concentración del agente antitumoral, en comparación a la región o "regiones de tejido circunvecino, es indicador del agente antitumoral que tiene selectividad por el tejido neoplásico. 1
6. El agente antitumoral de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el agente antitumoral es un análogo de PLE seleccionado de: o , (CH2)nOPOCH2CH2 y donde X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; e Y se selecciona del grupo que consiste de NH2, NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o donde X es un isótopo radioactivo del yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo que consiste de H, OH, COOH, COOR y OR, y Z se selecciona del grupo que consiste de NH2 y NR2 y NR3, en donde R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. 1
7. El agente antitumoral de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque X se selecciona del grupo que consiste de isótopos radioactivos de yodo, que consisten de 122I, 123I, 124I, 125I y 131I . 1
8. El agente antitumoral de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el análogo de PLE es 18- (p-yodofenil) octadecil-fosfocolina, l-0-[18- (p-yodofenil) octadecil]-l, 3-propanodiol-3-fosfocolina, ó 1-0-[18- (p-yodofenil) octadecil]-2-0-metil-rac-glicero-3-fosfocolina, en donde el yodo está en la forma de un isótopo radioactivo .