MXPA04003255A - Utilizacion de acido hidrocioleico y compuestos analogos del mismo en la fabricacion de medicamentos. - Google Patents

Abstract

Utilizacion del acido hidroxioleico y compuestos analogos del mismo en la fabricacion de medicamentos. Se describe la utilizacion del acido hidroxioleico de formula general I: COOH-CHR-(CH2) m-CH=CH-(CH2)n-CH3, en el que m y n tienen independientemente un valor de 0-15 y R puede ser cualquier residuo de masa molecular inferior a 200 Da, en la fabricacion de medicamentos utiles en el tratamiento del cancer, la hipertension, la obesidad o de enfermedades mediadas por alteracion de la estructura de membrana y la consiguiente regulacion de proteinas G o de los receptores acoplados a las mismas.

Description

UTILIZACIÓN DEL ÁCIDO HIDROXIOLEICO Y COMPUESTOS ANÁLOGOS DEL MISMO EN LA FABRICACIÓN DE MEDICAMENTOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a la aplicación del ácido hidroxioleico (2-hidroxioleico) y moléculas de estructura análoga como agentes antitumorales, como agentes con actividad hipotensora y como agentes que permiten inducir reducciones del peso corporal. La presente invención también se refiere a la utilización del ácido 2-hidroxioleico y análogos para regular la estructura de membrana, regular la actividad y/o localización de proteínas G y regular la actividad de receptores acoplados a proteínas G a través de la regulación de la estructura de membrana . La presente invención también se refiere a la utilización del ácido 2-hidroxioleico y análogos para la fabricación de medicamentos destinados al tratamiento del cáncer, de medicamentos destinados al tratamiento de enfermedades cardiovasculares y de medicamentos destinados al tratamiento de problemas de peso corporal u obesidad.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los ácidos grasos son moléculas de amplia utilización tanto en alimentación como en industria. El ácido 2-hidroxioleico, cuya síntesis ha sido descrita con anterioridad (Adam et al . , 1 998, Eur. J . Org . Chem. 9, 2013-2018), ha sido utilizado de forma industrial como emulsionante para preparaciones de productos cosméticos.

Así, por ejemplo, por un lado, la patente JP 101 82338 se refiere a una composición emulsionante de aceite en agua que muestra baja irritabilidad y elevada compatibilidad con sales, que contiene: [A] tensioactivos no iónicos tales como monolaurato de polioxietileno sorbitol, monooletato de polioxietileno sorbitol y monoestearato de polioxietileno sorbitol, [B] ácidos grasos 2-hidroxi C10-C22 tales como el ácido 2-hidroxiesteárico, [C] aceites y [D] ,agua, en donde la relación A/B está comprendida entre 1 :0,01 y 1 :2. También la patente JP 091 10635 se refiere a composiciones, útiles como productos farmacéuticos, cosméticos y productos alimentarlos que contiene [A] ésteres de ácido graso poliglicerilo, [B] ácidos grasos 2-hidroxi C10 -C22 , [C] aceites y [D] agua, donde la relación en pesó de A/C y B/C es de 2,0 y 0,5 respectivamente, y muestra tamaños de partícula medio comprendidos entre 10 y 300 nm. Estas composiciones muestran buena estabilidad incluso en condiciones ácidas o de baja viscosidad o en presencia de elevadas cantidades de sales, siendo por tanto compatibles con la piel. Por otro lado, este ácido graso, también ha sido empleado como inhibidor de la oleamida hidrolasa, acción que se asocia al efecto de inducción del sueño de esta sustancia (Patentes US 6096784 y WO 9749667). Así, por ejemplo, la patente US 6096784 se refiere al diseño y síntesis de inhibidores de oleamida hidrolasa, responsables de la hidrólisis de un lípido (cis-9-octadecenamida) inductor del sueño. Los inhibidores más potentes poseen un grupo carbonilo electrofílico capaz de formar de manera reversible un (tio)hemiacetal o un (tio)hemicetal para imitar el estado de transición de una reacción catalizada por una proteasa de tipo cisteína o serina. Además de la actividad inhibitoria, algunos de los inhibidores mostraron actividad agonista lo cual induce el sueño en animales de laboratorio.

Las estructuras hexagonales de membrana. Los lípidos de membrana son capaces de ordenarse en mayor número de estructuras secundarias que las proteínas y ácidos nucleicos. La bicapa lipídica típica de las membranas biológicas es sólo una de dichas configuraciones secundarias. Se desconoce mucho sobre la abundancia y papeles de otras estructuras secundarias en células vivas. En un trabajo previo de los inventores se aporta una función de estas estructuras: aumentar la afinidad de unión de proteínas G a membranas (Escribá PV, Ozaita A, Ribas C, Miralles A, Fodor E, Farkas y García-Sevilla JA; 1997 Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 94, 1 1375-1 1380). El concepto de estructura de membrana va mucho más allá de lo expuesto en algunas de las patentes del estado de la técnica (WO 87/04926 y WO 80/1 1286), en las que sólo se menciona la fluidez de membrana y se extiende el concepto a un campo mucho más amplio: la estructura de membrana. Las moléculas recogidas en nuestra patente actúan sobre la transición o paso de estructura lamelar a hexagonal. (Figura 1 ). A la vista de los antecedentes citados, no existe todavía en el estado de la técnica otras aplicaciones relacionadas con el ácido 2-hidroxioleico o de análogos del mismo que sean de especial interés en el campo terapéutico del cáncer, de las patologías cardiovasculares y/o del control del peso corporal. Tan sólo se describen productos dietéticos (GB 2140668, EP 061 1 568 y WO 02/0042) o extractos de cultivos de M. cryophilus (WO 89/1 1286), que consisten en mezclas complejas de diferentes compuestos que incluyen alguno de los descritos en la invención, tales como los ácidos grasos, particularmente el oleico y el palmioleico, por ejemplo, y el uso de estas mezclas en el tratamiento de la hipertensión arterial, para el control de la obesidad o como antitumorales, pero sin adscribir a ninguno de los integ rantes de la mezcla contemplados en la presente invención , un papel específico en dicho efecto terapéutico tan sólo WO 02/051406 y WO 94/01 100, describen el uso de ciertos ácidos grasos (C1 - C2o) en el tratamiento del cáncer de próstata, que no es objeto de la presente invención, exclusivamente cuando se utilicen d ichos ácidos grasos descritos en el estado de la técnica .

OBJETO DE LA INVENCIÓN La presente invención tiene por objeto encontrar nuevas aplicaciones del ácido 2-hidroxioleico y compuestos análogos del mismo no relacionadas con las descritas en el estado de la técnica . Un primer objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos poseen actividad como agentes antitumorales.

Un segundo objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos poseen actividad como agentes hipotensores. Un tercer objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos poseen actividad como agentes que inducen reducción del peso corporal. Un cuarto objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos tienen aplicación como agentes reguladores de la transición de estructura lamelar a hexagonal de las membranas celulares. Dicha regulación de la estructura de membrana influye en la actividad de proteínas G, asi como de las entidades moleculares de su vía de transducción, es decir, de su ruta de propagación de señales. Un elevado número de fármacos actúa sobre los receptores acoplados a proteínas G mediante interacción directa con este tipo de moléculas o con los mecanismos relativos a las señales celulares derivadas de su actividad. El ácido 2-hidroxioleico y sus análogos, sin embargo, actúan sobre la estructura de membrana. Las aplicaciones que se describen a continuación para el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos no han sido citadas por nadie previamente y su uso puede resultar beneficioso para el tratamiento de ciertas patologías. En particular, se ha encontrado que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos presentan actividad antitumoral, actividad hipotensora (o anti-hipertensora) e inducen reducciones del peso corporal. En la presente invención se justifican las nuevas aplicaciones del ácido 2-hidroxioleico y sus análogos utilizando modelos experimentales, en particular sistemas de análisis in vitro, sistemas de cultivos celulares y organismos vivos. Todos estos modelos de análisis indican, sin, lugar a dudas, que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos son unas moléculas que pueden utilizarse para fabricar medicamentos destinados al tratamiento del cáncer, destinados al tratamiento de enfermedades cardiovasculares y destinados al tratamiento de sujetos con problemas de peso corporal u obesidad, así como de otras enfermedades o estados carenciales basados en la regulación de señales asociadas a proteínas G, mediada por la transición lamelar a hexagonal de la estructura de membrana.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En la presente invención por "ácido 2-hidroxioleico" se entiende ácido cc-hidroxioleico, ácido octadecenoico C18: 1 cis ?9 o ácido cis-2-Hidroxi-9-octadecenoico. Por sus análogos se entienden aquellos ácidos grasos que tengan el doble enlace desplazado una o dos posiciones de la zona central y/o que tengan el doble enlace desplazado de una a cinco posiciones de la zona central y/o tengan de uno a seis átomos de carbono (Grupos CH2) más o menos a cada lado del doble enlace y/o que tengan un residuo (R) en posición 2 diferente al OH, con una masa atómica pequeña (Mw igual o inferior a 200 Da). Es indiferente que el estereoisómero correspondiente a la proyección del grupo R sea R o S . En función de las diferentes moléculas ensayadas, se ha observado que aquellas que tienen las fórmulas generales indicadas a continuación presentan unos efectos similares al ácido hidroxioleico y que, por lo tanto, se pueden catalogar como análogos del mismo. Fórmula general I: COOH-CHR-(CH2)m-CH=CH-(CH2)n-CH3 en donde m y n tienen independientemente un valor de 0-1 5 y R puede ser H, OH, NH2, CH3, u otro residuo de masa molecular inferior a 200 Da. En la presente invención por "Proteínas G" se entiende proteínas fijadoras de nucleótidos de guanina, formadas por tres subunidades (una alfa, una beta y una gamma) que transmiten señales de receptores acoplados a proteínas G hacia efectores (adenilil ciclasa, guanilil ciclasa, fosfolipasa C, canales iónicos, etc.). En la presente invención se entiende por estructura de membrana la estructura secundaria u ordenación de los lípidos en membranas naturales o sintéticas (liposomas). En la presente invención por "efecto agudo" se entiende el efecto que se produce en un plazo de tiempo comprendido entre minutos y algunas horas después de una única administración de un fármaco. En la presente invención por '"efecto crónico" se entiende el efecto que se produce en un plazo de tiempo comprendido entre pocos días y varias semanas de administración continua de un fármaco. En la presente invención se entiende por formas farmacéuticamente aceptables, cualquiera de las usadas rutinariamente en el sector, incluyendo, de forma no limitativa: ésteres, especialmente los etílicos por sus propiedades solubilizantes de ácidos grasos, éteres, amidas, sales, etc . Un objetivo de la presente invención es la aplicación del ácido 2-hidroxioleico y sus análogos en la regulación la transición de estructura lamelar a hexagonal de las membranas celulares. Las bases moleculares de este fenómeno radican en la interacción del ácido 2-hidroxioleico y sus análogos con membranas y en la modulación de la composición y/o estructura de membrana (Tablas 1 y 2) . Tabla 1 . Efecto de la unión de ácido 2-hidroxioleico sobre la temperatura de transición de estructura lamelar a hexagonal (HM). DEPE .2QHOA (mol: mol) THa (°C) 1 : 0 (DEPE puro ) 63 40: 1 54 20: 1 48 1 0 : 1 41 aTH indica la temperatura de transición de estructura lamelar hexagonal . Tabla 1 . Indica los valores de temperatura de transición de estructuras lamelares a hexagonales en membranas Dielaidoil fosfatidiletanolamina (DEPE). El valor control (en ausencia de 2-hidroxioleico) es de 63°C. La disminución (dependiente de concentración) inducida por el ácido 2-hidroxioleico (20 HOA) indica que esta molécula estabiliza la presencia de estructuras no lamelares. Esta importante alteración de la membrana celular tiene importantes consecuencias sobre la función molecular y celular. Todos los análogos al 2-hidroxioleico ensayados que tienen actividad terapéutica inducen también efectos sobre la estructura de membrana (Tabla 2) . Tabla 2. Efecto de diferentes análogos del ácido hidroxioleico (fosfol ípido:análogo 20: 1 mok mol) sobre la transición lamelar-hexaganal del fosfolípido dielaidoil-fosfatidil-etanolamina (DEPE) Ácido oleico 45 Ácido aminoléico 49 Ácido metiloleico 50 Ácido cis-vaccénico 53 Ácido nervónico 55 La modulación de la transición lamelar a no lamelar regula la actividad de proteínas G. El ácido hidroxioleico y los compuestos análogos al mismo son capaces de modular la actividad de las proteínas G, medida por la unión de [35S] GTPyS (Figura 5) . Esto se debe a que estas moléculas influencian la interacción de proteínas G con membranas y por lo tanto, su localización celular, tal y como se muestra en las fotografías de microscopía confocal (Figura 2) . El efecto del ácido hidroxioleico y sus análogos sobre la localización y actividad de proteínas G no se debe a una interacción directa sobre ellas. En la Figura 6 se muestra el efecto que tienen estas moléculas sobre la actividad de proteínas G purificadas, en ausencia de membrana. A diferencia de lo que ocurre cuando las proteínas G están asociadas a membranas, la daunomicina (DNM) y el hidroxioleico (20HOA), así como los análogos de éste, no tuvieron influencia sobre la actividad de estas proteínas (que son activadas sólo cuando están en membranas en contacto con receptores asociados a proteínas G). Los receptores acoplados a proteínas G son ubicuos, constituyendo el 80% de los receptores de membrana que transmiten señales iniciadas por neurotransmisores, hormonas, neuromoduladores, cítocinas, factores de crecimiento, etc. Entre otros procesos fisiológicos regulan la presión arterial, la proliferación y crecimiento celular o el peso corporal. Por ello, las moléculas descritas en casta invención pueden regular dichos procesos fisiológicos. - Ensayos sobre estructura de membrana - La técnica más eficaz y poderosa para estudiar la estructura de membrana es la difracción/scattering de rayos X. Mediante esta técnica hemos determinado que la estructura de la membrana es alterada por, el ácido 2-hidroxioleico y análogos. La reducción en la temperatura de transición de estructura lamelar a hexagonal indica un efecto importante sobre la reordenación de las moléculas lipídicas en la membrana. Esta regulación de la reordenación es la base del efecto que tienen el ácido 2-hidroxioleico y análogos. Todos los análogos estudiados, que cumplen con la fórmula general, tienen actividad de modular la membrana y de regular la proliferación celular efectividad en cáncer) , la presión sanguínea (efectividad en procesos cardiovasculares) y el peso corporal (efectividad en obesidad). Un objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y análogos poseen actividad como agentes antitumorales. En primer lugar, el ciclo celular se encuentra regulado por factores de crecimiento que se unen a receptores específicos de la superficie celular. La unión de dichos factores de crecimiento con los receptores da lugar a una cascada de reacciones destinadas a activar quinasas mitogénicas (cdk) que forman complejos diméricos con las proteínas asociadas a ciclo celular denominadas ciclinas. Los complejos cdk/ciclina regulan las fases del ciclo celular y la progresión de este para producir la mitosis y la división celular. Muchos receptores específicos de la superficie celular están acoplados a proteínas G, de manera que cuando se da la interacción del factor de crecimiento con el receptor se activa la proteína G. desencadenándose la cascada de reacciones anteriormente mencionada. Por tanto, una modulación de la localización y actividad de proteínas G permitiría controlar la división y crecimiento celular. El mecanismo asociado a los efectos antitumorales del ácido 2-hidroxioleico y análogos se basa en el hecho que inducen la modulación de la localización y actividad de proteínas G y otras proteínas periféricas, como la proteína quinasa C o las proteínas G pequeñas (tipo Ras, Raf, etc.). Esta modulación está asociada a la regulación de la estructura de los lípidos de membrana. Se ha encontrado que el ácido 2-hidroxioleico actúa como inhibidor de la traslocación de proteínas G al núcleo (Figura 2). De esta manera se consigue la inhibición de la proliferación celular, lo que queda confirmado por los aumentos marcados y significativos de los niveles de la proteína p21 y las disminuciones de las proteínas de ciclo celular cdk2 y ciclinas B y, D3 (Figura 3 A y B) . Asimismo, se han observado que en células en cultivo, el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos inducen incrementos significativos de la proteína kinasa C (entre el 40% y el 120% de incremento). Dicha alteración en la localización celular de proteínas G produce modulaciones en su función, superiores a las producidas por el fármaco daunomicina, de amplia utilización en el tratamiento del cáncer. Estas alteraciones tienen importantes efectos inhibitorios sobre la proliferación y la supervivencia de células tumorales (Figura 4). Un importante regulador del ciclo celular es la proteína p53 , que ejerce un control de tipo negativo frenando la división celular a nivel de G 1 (etapa previa a la mitosis). Esta proteína es sintetizada por la propia célula en respuesta a la aparición o alteraciones del ADN. Si el ADN replicado puede influir negativamente en las células hijas, la proteína p53 se activa dando lugar a la apoptosis (muerte celular programada). La activación de dicha proteína p53 hace que se expresen otros genes que codifican para proteínas reguladores como la p21 , p27, p 16, etc. , que inhiben la actividad/expresión de las ciclinas y cdks (involucradas en el proceso del ciclo celular). En muchos tipos de células tumorales, la proteína p53 aparece mutada e/o inactiva, produciéndose la proliferación de células transformadas (cancerosas). La presencia de ácido 2-hidroxioleico y/o análogos en las células induce la activación de la ruta de señales asociada a p53, lo cual induce el inicio de la apoptosis o la parada del ciclo celular en diferentes tipos de células tumorales. Con el fin de llevar a cabo el primer objetivo de la presente invención se han utilizado modelos ¡n vitro e in vivo. En este sentido , el ácido 2-hidroxioleico y todos los análogos estructurales que cumplen con la fórmula general I descrita anteriormente han mostrado tener una capacidad antitumoral importante. Las moléculas análogas al ácido 2-hidrox¡ole¡co(2-hidroxi-cis-9-octadecenoico) ensayadas han sido: ácido 2-metil-oleico (2-metil-cis-9-octadecenoico), 2-amino-oleico (2-amino-cis-9-octadecenoico), ácido oleico (cis-9-octadecenoico), ácido palmitoleico (cis-9-hexadecenoico), ácido cis vaccénico (cis-1 1 -octadecenoico) y ácido nervónico (cis-1 5-tetracosenoico). Estas moléculas han mostrado detener la proliferación celular o ind ucir la muerte de diferentes tipos de células tumorales (p. ej . , células humanas de cáncer de pulmón A549, linfocitos T jurkat, etc. (Figura 4). Estos resultados demuestran la actividad antitumoral de los ácidos grasos descritos y que la estructura básica del ácido 2-hidroxioleico puede presentar pequeñas variaciones sin que se altere su actividad antitu moral. Otros modelos moleculares han permitido confirmar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos poseen una actividad antitumoral superior a la que presentan otros fármacos antitumorales, como por ejemplo las antraciclinas, y por lo tanto se trata de compuestos de elevado interés terapéutico. En membranas de fibroblastos 3T3, se ha podido comprobar que la presencia de 200 µ? de ácido 2-hidroxioleico y/o ácido oleico (uno de los análogos del ácido 2-hidroxioleico) induce una inhibición del 75-84% en la actividad de proteínas G en células NIH 3T3, mientras que 200 µ? de daunomicina ind uce una inhibición del 46% en dicha actividad (Figura 5). La efectividad antitumoral del ácido 2-hidroxioleico y su análogo el ácido oleico aparece en la Figura 8, donde se observa la desaparición de unas metástasis tumorales cerebrales, formadas a partir de un adenocarcinoma pulmonar, tras el tratamiento con ácido 2-hidroxioleico. El tratamiento con esta ácido 2-hidroxioleico y ácido oleico produjo la desaparición total del cáncer. Estos resultados demuestran que (a) el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos son unas moléculas que pueden ser utilizadas para la fabricación de medicamentos destinados al tratamiento del cáncer; (b) que su espectro de acción es amplio (ha sido efectivo sobre diferentes tipos de células tumorales en cultivo o en organismos vivos) y (c) que supera a otras moléculas utilizadas para él tratamiento del cáncer por su potencia antitumoral, por su ausencia de efectos secundarios y por ser su administración por vía oral, aunque también pueda realizarse por vía intravenosa o subcutánea.

Ensayos antitumorales Se ha demostrado la eficacia antiproliferativa del ácido hidroxioleico en células de cáncer de pulmón humano A549 y de leucemia humana .(Jurkat). En la Figura 3 se muestra la inducción de la proteína antiproliferativa p21 , que viene acompañada por la disminución de las proteínas cdk2, ciclina B y ciclina D3, necesarias para que las células tumorales puedan dividirse. Efectos similares los produjeron todos los análogos ensayados que cumplían la fórmula general estructural enunciada arriba. Este efecto antiproliferativo del ácido 2-hidroxioleico y sus análogos quedó demostrado por la reducción de la densidad celular en células tumorales en cultivo (Figura 4). Este efecto antiproliferativo se ha observado también utilizando otras técnicas y otros tipos celulares: en astrocitos primarios de rata, estos ácidos grasos tienen un efecto antiproliferativo, que he estudiado mediante la incorporación de timidina tritiada. Asimismo, el hidroxioleico y sus análogos son capaces de inducir apoptosis o muerte celular programada en células de cáncer humanas. Por un lado, la degradación de la PARP (Figura 3C), por otro la alteración de la morfología celular y la presencia de residuos celulares (Figura 4) demuestran el efecto inductor de muerte celular del 2-hidroxioleico y sus análogos. 25 Mediante experimentos de citometría de flujo, se determinó que en presencia de ácido 2-hidroxioleico la cantidad de células de leucemia humana (Jurkat) vivas era solo un 10% de las que quedaron vivas con etopósido, un conocido agente antitumoral. Finalmente, el estudio del efecto en humanos ha revelado que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos pueden constituir una familia de fármacos antítumorales de gran relevancia. En la Figura 8 se muestra el efecto del tratamiento con ácido 2-hidroxioleico y ácido oleico sobre tumores en humanos. El caso mostrado corresponde a una paciente en la que quimio- y radioterapia suministradas anteriormente no produjeron reducciones de los tumores cerebrales. Un objetivo de la presente invención es demostrar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos son agentes con actividad hipotensora. La regulación de la actividad de proteínas G regula la presión arterial. Existe una relación entre los fármacos de la invención y la actividad de proteínas G y la presión arterial. Un dato que confirma lo expuesto, antes es un estudio realizado en humanos y en el que hemos visto que los individuos hipertensos tienen alteraciones en los niveles de lípídos de membrana (Tabla 3). Los lípidos de membrana influyen sobre la transición lamelar-hexagonal, que a su vez determina la localización y funcionalidad de proteínas G. De hecho, en hipertensos se observa una alteración en los niveles de proteínas G asociadas a la membrana que se debe a la mencionada alteración de los lípidos de membrana y de la facilidad para formar hexagonales. Si la modulación de las estructuras no lamelares de membrana y la consiguiente relocalización de las proteínas G. produce hipertensión, a través de la regulación de la transición lamelar-hexagonal de los lípidos de membrana se puede conseguir la regulación de la localización de las proteínas de membrana y, finalmente, de la presión arterial (Figura 7).

Tabla 3. Composición de ácidos grasos de fosfolípidos y ésteres de colesterol en membranas de eritrocitos de sujetos normotensos (control) e hipertensos (mg/100mg) Fosfolípidos Esteres Colesterol Acido Hiperten- Controles Hiper- Controles Graso sos tensos C14 : 0 0.4 ± 0.1 0.2 + 0. 0.9 ± 0.3 1.0+ 0.2 C1 : ln-5 1.7 + 0.2 .2 + 0.3 * 0.7 + 0.2 n.d. *** C16:0 23.7 ± 0.6 23.1 ± 0. 5.1 ± 0.6 14.3 ± 0.5 * C16: ln-9 0.4 + 0.0 0.3 + 0.0 3.1 + 0.6 2.5+ 0.3 ** C16: ln-7 0.5 ± 0.0 0.5 ± 0.1 2.4 ± 0.4 1.7 ± 0.1 *** C16:4n-3 2.6 ± 0.3 2.5 + 0.5 n.d. n.d.

C18-.0 16.6 + 0.3 17.1 ± 0.6 3.2 + 0.5 2.9 ± 0.5 C18:ln-9t 0.9 ± 0.1 0.6 ± 0.0 *** n.d. n.d.

C18 : ln-9 16.3 + 0.6 16.0 + 0. 18.4 + 1.2 16.7 ± 0.6 C18:ln-7 1.8 ± 0.1 2.0 ± 0.2 1.5 ± 0.1 1.7 + 0.2 C18:2 n-6 12.5 ± 0.7 13.4 ± 0.7' 45.8 ± 2.8 51.1 ± 1.6 C18:3n-6 0.4 + 0.0 n.d.*** 0.9 ± 0.2 0.8 ± 0.1 C18: 3n-3 0.3 + 0.0 0.4 + 0.1 n.d. n.d.

C20:2n-6 2.1 ± 0.1 2.1 ± 0.2 0.9 ± 0.1 0.9 + 0.1 C20:4n-6 17.0 + 0.4 16.5 + 0.4 7.0 + 0.6 6.4 + 0.9 * C22:4n-6 0.7 ± 0.3 0.6 ± 0.1 n.d. n.d.

C22:6n-3 0.7 ± 0.1 0.8 r 0.2 n.d. n.d.

C24:ln-9 1.5 ± 0.1 1.6 = 0.1 n.d. n.d.

Total SFA 4 1 _ 2 ± 1 ? 4 1 1 ± Q _ -¡ 19.3+1.2 18.2 + 1.1 * Total UFA 22.6 ± 0.6 21.7 ± 0.7 * 25.9 ± 1.6 22.7 ± 0.8 *** Total PUFA 36.2 + 1.2 38.2 + 0.9 ** 54.8 + 2.4 59.1 ± 1.6 *** FUFA: SFA 0.8 ± 0.04 0.9 + 0.03 2.7 ± 0.3 3.4 + 0.3 *** PUFA: MUFA 1.6 ± 0.1 1.7 ± 0.1 2.2 ± 0.2 2.6 z C.2 *** Los valores son medias ± error standard de la media (n=28). SFA, ácidos grasos saturados; MUFA, ácidos g rasos monoinsaturados; PUFA, ácidos grasos poliinsaturados. *P < 0.0 5, **P < 0.01 , ***P < 0.001 . n.d. : no detectado. Se ha podido comprobar que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos también tienen un marcado efecto hipotensor, ya que inducen reducciones de presión arteriales sistólica y diastólica, sin modificar el ritmo cardiaco Figuras 9 a y b y 1 0) El efecto hipotensor producido por el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos es que induce una reducción de la presión arterial de forma aguda (que es evidente desde las 2 horas de tratamiento) y crónica (que se mantiene durante d ías y semanas mientras se mantenga el tratamiento). El ácido aminoleico, por ejemplo, reduce la presión arterial en 1 5 mm Hg en tratamientos crónicos de una semana. La presión arterial está controlada por varios sistemas de receptores acoplados a proteínas G, tales como receptores vasopresina, adrenérgicos, etc. La interacción, entre las hormonas involucradas en el control de la presión arterial con los receptores asociados a proteínas G estimuladoras es modulada por la acción del ácido 2-hidroxioleico y moléculas análogas. Dichos ácidos grasos regulan la comunicación entre receptor, proteína G y efector. El resultado es una modulación de las señales de AMP cíclico, fosfolipasa C y óxido nítrico, que da lugar a una reducción en la presión arterial. Dicho efecto está también relacionado con la regulación de la estructura de membrana. La mayor ventaja farmacológ ica del ácido 2-hidroxioleico y análogos es que, a diferencia de otros fármacos hipotensores, no tienen efectos sobre el ritmo cardiaco (es decir, no aumentan o disminuyen significativamente la frecuencia cardiaca) . Una ventaja adicional de estos compuestos es que controlan otros dos factores de riesgo cardiovascular: el perfil lipídicollipoproteico sérico y el peso corporal (ver adelante). Dado que el control único de la presión arterial no basta para alargar la vida del enfermo y que es necesario controlar otros factores de riesgo cardiovascular, estos ácidos grasos aventajan a otras moléculas empleadas en pacientes con patologías cardiovasculares.

- Ensayos hipotensores - El ácido 2-hidroxioleico indujo reducciones significativas en la presión arterial en ratas (Figura 9) . Estas bajadas se produjeron tanto de forma aguda (a las 2 horas del tratamiento, 19±6 mm Hg, P<0, 01 , n = 6) como de forma crónica (1 semana , 26±7 mm Hg, P<0 ,001 , n = 6) . Asimismo, tratamientos agudos y crónicos de 1 mg/kg a 1 0 mg/kg también produjeron reducciones significativas de la presión arterial y dependientes de concentración. En humanos el ácido 2-hidroxioleico también produjo disminuciones importantes y significativas de la presión arterial, véase Figura 9. Asimismo, los análogos del ácido 2-hidroxioleico que cumplen con la fórmula general indicada arriba tuvieron un efecto hipotensor (Figura 10) . En todos los casos, las disminuciones de presión arterial fueron significativas en comparación con los controles (*P<0.05, **P<0. 01 ) Estos datos indican claramente que el ácido 2-hidroxioleico y sus análogos son unos agentes eficaces para el tratamiento clínico/farmacológico de la hipertensión arterial. Un objetivo de la presente invención es demostrar que ácido 2-hidroxioleico y análogos poseen actividad como agentes que inducen reducciones del peso corporal (Figura 1 1 ). Además de la actividad antitumoral e hipotensora del ácido 2-hidroxioleico y análogos, éstos inducen reducciones del peso corporal. El peso corporal está regulado, entre otros, por factores como la capacidad metabólica del individuo y el control de la ingesta. El control de la ingesta viene determinado por la sensación de saciedad, la cual a su vez regula a nivel hormonal. Así por ejemplo, la deficiencia de nutrientes estimula la secreción de hormonas que dan lugar a una sensación de apetito después de la ingesta, una vez repuesto los nutrientes, se estimula la secreción de hormonas que dan lugar a una sensación de saciedad. Se ha encontrado que el ácido 2-hidroxioleico y análogos producen efectos de saciedad, induciendo reducciones en la ingesta de alimentos. Este control también está mediado por receptores de citoquinas, leptinas, adrenoreceptores, y otros receptores acoplados a proteínas G cuya actividad es modulada por estos ácidos grasos. En los animales tratados este efecto sobre la saciedad supuso un consumo de pienso entre un 15% y un 30% menor los animales controles.

- Ensayos de control del peso corporal - Ratas tratadas con estas moléculas disminuyeron su peso corporal durante tratamientos crónicos (de 5 a 17 días). En estos experimentos, las ratas tratadas con el ácido 2-hidroxioleico o sus análogos, en particular el acido aminoleico, tenían acceso libre a comida y agua, de forma similar al grupo de ratas tratadas control (Figura 1 1 ) En estas condiciones, las ratas experimentaron una disminución del peso corporal progresiva a partir del primer día de tratamiento, hasta 1 7 gramos en el séptimo día de tratamiento (5% del peso corporal normal de una rata 10 de Sprague- Dowley de 2-3 meses de edad). El pienso suministrado a estos animales se pesó y se pudo observar un menor consumo durante el tiempo que duró el tratamiento, lo que confirma que los tratamientos con las moléculas relativas a esta invención producen un efecto de saciedad en el animal. Experimentos similares realizados en ratones adultos, durante períodos de hasta 28 días con ácido 2-hidroxioleico, demuestran reducciones en el peso corporal de un 15% a un 25%, respecto a ratones control (tratados con vehículo).

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1 : Algunas de las muchas estructuras, además de la lamelar, que pueden adoptar las membranas. La Figura 2 muestra la localización celular de proteína Gai2 marcada con fluoresceina en astrocitos primarios de cerebro de rata. En células control, el mareaje indica la presencia de esta proteina en toda la célula, en especial en el núcleo (flecha). En células tratadas con 2-hidroxioleico (20HOA), el mareaje aparece en membrana y citosol, pero no en núcleo (flecha). La Figura 3 muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico en marcadores moleculares de proliferación y muerte celular. El panel A muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico (20HOA) sobre las proteínas de ciclo celular cdk2, ciclina B y ciclina D3 en células de cáncer de pulmón humano A549. La bajada de estas proteínas demuestra que este ácido graso induce la parada del ciclo celular, es decir, la parada de la división celular. En el panel B se muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico (20HOA) sobre la proteína p21 en células A549 tras incubación durante 24 y 48 horas. La proteína p21 inhibe el ciclo celular, por lo que es una proteína antiproliferativa. Los grandes aumentos que induce el ácido 2-hidroxioleico sobre esta proteína justifican la parada del ciclo y la proliferación de células tumorales. El panel C muestra la degradación de la Poli-ADP Ribosa polimerasa (PARP) en células de leucemia humana (Jurkat) (etopósido: 25 [E 1 ] y 250 µ? [E2] ; ácido 2-hidroxioleico: 10 [01 ], 100 [02] y 1000 µ? [03]). La disminución de los niveles de este enzima, o la evidencia de su degradación, indican el inicio de la apoptosis o muerte celular programada. En estos experimentos se empleó el etopósido como control positivo, ya que se trata de una molécula conocida como inductora de apoptosis y antitumoral. La Figura 4 muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico y sus análogos sobre la proliferación de células de cáncer de pulmón humano A549 (A) y células Jurkat de leucemia humana (B). Tanto el ácido 2-hidroxioleico (20HOA) como sus análogos, que cumplen todos la fórmula indicada anteriormente, inducen la parada de división y la muerte de células tumorales (OA: ácidooleico; VA: ácido cis vaccénico; POA: ácido palrnitoleico; NA: ácido nervónico; 2MOA: ácido 2-metil oleico; 2NOA: ácido 2-amino oleico. La Figura 5 muestra la fijación de [35S] GTPyS a membranas de células NIH 3T3 transfectadas con el adrenoceptor CC2A/D de rata. Este parámetro mide la actividad de proteínas G. La presencia de 2-hidroxioleico induce una disminución de la función de las proteínas G aun mayor que la antraciclina daunomicina (DNM). Las antraciclinas son potentes fármacos antitumorales, por lo que el 2-hidroxioleico es potencialmente más eficaz ante tumores. Los análogos del 2-hidroxioleico producen un efecto similar al del ácido 2-hidroxioleico. Figura 6: El ácido hidroxioleico y sus análogos no tuvieron efecto sobre proteínas G puras (en ausencia de membrana) Esto demuestra que su efecto sobre la actividad de proteínas G es mediado por la regulación de las estruc turas no lamelares de membrana. La daunomicina (DNM) tuvo un comportamiento similar al control. Figura 7: Niveles de proteínas G en membranas de eritrocitos de sujetos normotensos (barras vacías) e hipertensos (barras rellenas). Los niveles de proteínas Gai1 2(Gi), Gao (Go), Gas (Gs) y G Gp (Gb) son significativamente inferiores en hipertensos. Los valores de las barras son medias ± error standard de la media *P<0.05, ** P<0.01 . La Figura 8 muestra metástasis (tumores) cerebrales formadas a partir de un adenocarcinoma pulmonar. La imagen de la izquierda (8a) corresponde a los tumores antes del tratamiento y las de la derecha (8b, 8c y 8d) corresponden a los tumores después del tratamiento con 2-hidroxioleico en diferentes fechas. Como se aprecia, uno de los tumores ha desaparecido de forma más rápida y el otro dé forma más lenta. La Figura 9a muestra el efecto agudo (2 horas, barras negras) y crónico (3 inyecciones diarias durante 7 días, barras blancas) del ácido hidroxioleico (30 mg/kg) sobre la presión arterial sistólica en ratas Sprague-Dowley. Dosis inferiores de esta molécula (1 -1 0 mg/kg) produjeron efectos similares, aunque menos marcados. *P<0.01 La figura 9b muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico (30 mg/ kg) sobre la presión arterial en humanos. Esta gráfica representa la presión arterial sistólica en función del día de tratamiento. Los días anteriores al tratamiento se indican con valores negativos. *P<0.051 **P<0. 01 . La Figura 1 0 muestra el efecto de tratamientos agudos con el ácido 2-hidroxioleico (20HOA) y sus análogos 2-metil-oleico (2 OA), oleico (OA), palmitoleico (POA) , cis vaccénico (VA) y nervónico (NA). Todos los tratamientos realizados con el ácido 2-hidroxioleico y los análogos que cumplen con la fórmula general dada arriba indujeron disminuciones significativas (*P<0.05, **P<0.001 ) de la presión arterial sistólica en ratas Sprague-Dowley. La Figura 1 1 muestra el efecto del ácido 2-hidroxioleico (OHOA) y de sus análogos, los ácidos oleico (OA) y palmitoleico (POA) sobre el peso corporal (3 inyecciones diarias de 30 mg/kg) . Los animales (ratas Sprague-Dowley) tenían acceso libre a comida y agua en todo momento.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES 1 . Uso de compuestos de fórmula general I: COOH-CHR-(CH2)m-CH=CH-(CH2)n-CH3), donde R puede ser cualquier grupo de peso molecular inferior a 200 Da , m y n tienen independientemente un valor comprendido entre 0-1 5 , en la fabricación de medicamentos y formas farmacéuticamente aceptables, útiles en el tratamiento del cáncer con excepción de la utilización de los ácidos grasos C14 - C2o en la fabricación de medicamentos y formas farmacéuticamente aceptables útiles en el tratamiento del cáncer de próstata .
2. 2. Uso según la reivindicación 1 , caracterizado porque R es preferentemente H , OH , NH2 o CH3.
3. 3. Uso según las reivindicaciones 1 , 2, caracterizado porque los compuestos de fórmula general I , tienen preferentemente entre 12 y 28 átomos de carbono.
4. 4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque los compuestos de fórmula general I son preferentemente el ácido 2-hidroxioleico, el ácido 2-metil-oleico, el ácido 2-amino-oleico, el ácido vaccénico o el ácido nervónico,
5. 5. Uso de compuestos de fórmula general I: COOH-CH R-(CH2)m-CH=CH-(CH2)n-CH3, donde R puede ser cualquier grupo de peso molecular inferior a 200 Da, m y n tienen independientemente un valor comprendido entre 0-1 5, en la fabricación de medicamentos y formas farmacéuticamente aceptables útiles en el tratamiento de la hipertensión , con excepción del ácido palmitoleico cuando se utilice en la fabricación de medicamentos útiles en el tratamiento de la apoplejía cerebral.
6. 6. Uso seg ún la reivindicación 5, caracterizado porque R es preferentemente H, OH , N H2 0 CH3.
7. 7. Uso según las reivindicaciones 5 o 6 , caracterizado porque los compuestos de fórmula general I , tienen preferentemente entre 12 y 28 átomos de carbono
8. 8. Uso según las reivindicaciones 5 a 7 , caracterizado porque los compuestos de fórmula general I son preferentemente el ácido 2-hidroxioleico, el ácido 2-metil-oleico, el ácido vaccénico , el ácido nervónico , el ácido oleico, el ácido palmitoleico o el ácido aminoleico
9. 9. Uso de derivados de compuestos de fórmula general I COOH-CHR-(C H2)m-CH =CH-(C H2)n-CH3 .donde R puede ser cualquier grupo de peso molecular inferior a 200 Da , m y n tienen independientemente, un valor comprendido, entre 0-1 5, en la fabricación de medicamentos y formas farmacéuticamente aceptables útiles en el tratamiento de la obesidad. 1 0. Uso según la reivindicación 9 , caracterizado porque R es preferentemente H , OH , N H2 o CH3. 1 1 . Uso según las reivindicaciones 9 o 1 0 caracterizado porque los compuestos de fórmula general I, tienen preferentemente entre 1 2 y 28 átomos de carbono. 12. Uso según las reivindicaciones 9 a 1 1 caracterizado porque el compuesto de fórmula general I es preferentemente el ácido 2-hidroxioleico o el ácido aminoleico. 1 3. Uso de compuestos de fórmula general I : COOH-CH R-(CH2)m-CH=CH-(CH2)n-C H3, donde R puede ser cualquier grupo de peso molecular inferior a 200 Da, m y n tienen independientemente un valor comprendido entre 0-1 5, en la fabricación de medicamentos y formas farmacéuticamente aceptables útiles en enfermedades cuya etiología se base en la transición lamelar-hexagonal de la estructura de la membrana celular que impliqué la regulación o localización de proteínas G y de los receptores acoplados a las mismas. 14. Uso según la reivindicación . 1 3, caracterizado porque R es preferentemente H , OH, NH2 o CH3. 15. Uso según las reivindicaciones 1 3 o 14, caracterizado porque los compuestos de fórmula general I, tienen preferentemente entre 1 2 y 28 átomos de carbono. 16. Uso según las reivindicaciones 1 3 a 1 5, caracterizado porque el compuesto de fórmula general I es preferentemente el ácido 2-hidroxioleico.