MXPA03008659A - Inhibidores de rho-cinasa. - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos y derivados de los mismos, su sintesis y su uso como inhibidores de Rho-cinasa. Estos compuestos de la presente invencion son utiles para inhibir el crecimiento de tumores, para el tratamiento de disfuncion erectil y para el tratamiento de otras indicaciones mediadas por Kho-cinasa, por ejemplo la enfermedad coronaria cardiaca.

Description

INHIBIDORES DE LA RHO-C NASA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta solicitud reclama el beneficio de la fecha de presentación de la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/277,974, presentada en Marzo 23, 2001 y la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/315,338, presentada en Agosto 29, 2001. La presente invención se relaciona con compuestos y derivados de los mismos, su síntesis, y su uso como inhibidores de la Rho-cinasa. Estos compuestos de la presente invención son útiles para inhibir el crecimiento de tumores, tratar la disfunción eréctil, y tratar otras indicaciones mediadas por la Rho-cinasa, por ejemplo, la enfermedad cardiaca coronaria.

ANTECEDENTES La patología de varias enfermedades humanas y animales, incluyendo la hipertensión, la disfunción eréctil, los deterioros circulatorios cerebrales coronarios, los trastornos neurodegenerativos y el cáncer, pueden ligarse directamente a los cambios en el citoesqueleto de la actina. Estas enfermedades representan una seria necesidad médica no satisfecha. El citoesqueleto de la actina está compuesto de una malla de filamentos de P03/131-BC actina y proteínas que se unen a la actina encontrada en todas las células eucarióticas . En las células del músculo liso, el montaje y desmontaje del citoesqueleto de la actina es la fuerza motriz principal responsable de la contracción y relajación del músculo liso. En las células no musculares, los rearreglos dinámicos del citoesqueleto de la actina son responsables de regular la morfología celular, la motilidad celular, la formación de fibras tensionadas de actina, la adhesión celular y funciones celulares especializadas, tales como la retracción de las neuritas, la fagocitosis o- citocinesis (Van Aelst, et al. Genes Dev 1997, 11, 2295) . El citoesqueleto de la actina está controlado por una familia de proteínas que son un subconjunto de la superfamilia Ras de las GTPasas. Este subconjunto consiste actualmente de los isoformos RhoA hasta E y RhoG (referidos colectivamente como Rho) , Rae 1 y 2, Cdc42Hs y G25K y TC10 (Mackay, et al. J Biol Chem 1998, 273, 20685). Estas proteínas son proteínas que se unen al GTP (guanina nucleótido trifosfato) , con actividad de GTPasa intrínseca. Actúan como interruptores moleculares y ciclan entre los estados del enlace de GDP inactivo (guanina nucleótido difosfato) y el enlace de GTP activo. Utilizando manipulaciones bioquímicas y genéticas, ha sido posible asignar funciones a cada miembro de la familia. Tras la P03/131-BC activación, las proteínas Rho controlan la formación de las fibras tensionadas de actina, haces gruesos de filamentos de actina, y la aglomeración de integrinas a los complejos de adhesión focales. Cuando se activan, las proteínas Rae controlan la formación de lamelopodios o arrugas en la membrana sobre la superficie celular y el Cdc42 controla la formación de filopodios. Junta, está familia de proteínas juega una parte crítica en el control de funciones celulares clave, incluyendo el movimiento celular, la guía axonal, la citocinesis, y los cambios en la morfología, forma y polaridad celular. Dependiendo del tipo celular y del receptor activante, las proteínas Rho pueden controlar diferentes respuestas biológicas. En las células del músculo liso, las proteínas Rho son responsables de la sensibilización al calcio durante la contracción del músculo liso. En las células que no son de músculo liso, las Rho GTPasas son responsables de las respuestas celulares a un agonista, tal como el ácido lisofosfatídico (LPA) , trombina y tromboxano A2 (Fukata, et al. Trends Pharcol Sci 2001, 22, 32) . La respuesta al agonista está acoplada a través de las proteínas G heterotriméricas Gaifal2 o Gaifai3 (Goetzl, et al. Cáncer Res 1999, 59, 4732; Buhl, et al . J Biol Chem 1995, 270, 24631) , aunque pueden estar involucrados otros receptores. Tras la activación, las Rho GTPasas activan P03/131-BC varios efectores corriente abajo incluyendo la PIP5-cinasa, Rhotecina, Rhofilina, PKN y los isoformos de la Rho-Cinasa ROCK-l/ROKbeta y ROCK-l/ROKalfa ( ackay y Hall «7 Biol Chem 1998, 273, 20685; Aspenstrom Curr Opin Cell Biol 1999, 11, 95; Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44) . La Rho-cinasa se identificó como una proteína que interactúa con RhoA aislada de cerebro de bovino (Matsui, et al. Embo J 1996, 15, 2208) . Es un miembro de la familia de la distrofia miotónica de la proteína cinasa y contiene un dominio de serina/treonina cinasa en el término amino, un dominio de pliegue enrollado en la región central, y un dominio de interacción de la R o en el término carboxi (Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44). Su actividad cinasa es aumentada tras la unión a una RhoA unida a GTP, y cuando se introduce en las células, puede reproducir muchas de las actividades de la RhoA activada. En las células del músculo liso, la Rho-Cinasa media la sensibilización al calcio y la contracción del músculo liso y la inhibición de la Rho-cinasa bloquea la contracción del músculo inducida por 5-HT y el agonista fenilefrina. Cuando se introduce en células de que no son de músculo liso, la Rho-cinasa induce la formación de fibras tensionadas y se requiere para la transformación celular mediada por RhoA (Sahai, et al. Curr Biol 1999, 9, 136) . La Rho-cinasa regula varias proteínas corriente abajo a través de la fosforilación, incluyendo la P03/131-BC cadena ligera de la miosina (Somlyo, et al. J" Physiol (Lond) 2000, 522 Pt 2, 177), la subunidad que se une a la fosfatasa de la cadena ligera de la miosina (Fukata, et al. J Cell Biol 1998, 141, 409) y LIM-cinasa 2 (Sumí, et al . J Blo Chem 2001, 276, 670) . La inhibición de la actividad de la Rho-cinasa en modelos animales ha demostrado varios beneficios de los inhibidores de la Rho-cinasa para el tratamiento de enfermedades humanas . Han aparecido varias patentes que reclaman el diclorhidrato monohidratado de (+) -trans-4- (1-aminoetil) -1- (piridin-4- ilaminocarbonil) ciclohexano (WO-00078351, WO- 00057913) y compuestos sustituidos de isoquinolinsulfonilo (EP-00187371) , como inhibidores de la Rho-cinasa con actividad en modelos animales. Estos incluyen modelos de enfermedades cardiovasculares tales como la hipertensión (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990), aterosclerosis (Retzer, et al. FEBS Lett 2000, 466, 70), restenosis (Eto, et al. ?? J Physiol Heart Circ Physiol 2000, 278, H1744; Negoro, et al. Bioche Biophys .Res Commun 1999, 262, 211), isquemia cerebral (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990; Seasholtz, et al. Circ Res 1999, 84, 1186; Hitomi , et al. Life Sci 2000, 67, 1929; Yamamoto, et al . J Cardiovasc Pharmacol 2000, 35, 203) , vasoespasmo cerebral (Sato, et al. Circ Res 2000, 87, 195; Kim, et al. Neurosurgery 2000, 46, 440) , disfunción eréctil peneana P03/131-BC (Chitaley, et al. Nat Med 2001, 7, 119), trastornos del sistema nervioso central, tales como la degeneración neuronal y lesión de la médula espinal (Hará, et al. J" Neurosurg 2000, 93, 94; Toshima, et al. Stroke 2000, 31, 2245) y en neoplasias en donde la inhibición de la Rho-cinasa ha demostrado inhibir el crecimiento celular de tumores y metástasis (Itoh, et al. Nat Med 1999, 5, 221; Somlyo, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 652), angiogénesis (Uchida, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 633; Gingras, et al. Biochem J 2000, 348 Pt 2, 273) , trastornos trombóticos arteriales tales como la agregación de plaquetas (Klages, et al . J" Cell Biol 1999, 144, 745; Retzer, et al. Cell Signal 2000, 12, 645) y agregación de leucocitos (Kawaguchi, et al. Sur J" Pharmacol 2000, 403, 203; Sánchez-Madrid, et al. Embo J 1999, 18, 501) , asma (Setoguchi, et al. Br J Pharmacol 2001, 132, 111; Nakahara, et al. Eur J Pharmacol 2000, 389, 103), regulación de la presión intraocular (Honjo, et al. Jnvest Ophthalmol Vis Sci 2001, 42, 137) y resorción ósea (Chellaiah, et al. J Biol Che 2000, 275, 11993; Zhang, et al. J Cell Sci 1995, 108, 2285) . La inhibición de la actividad de la Rho-cinasa en pacientes tiene beneficios para controlar los vasoespasmos y la isquemia cerebral después de una hemorragia de la subaracnoides (Pharma Japan 1995, 1470, 16) .

P03/131-BC SUMARIO DE LA INVENCIÓN Los compuestos y sus derivados presentados en esta invención son útiles como inhibidores de la Rho-Cinasa, y por lo tanto, tienen actividad en el tratamiento de la hipertensión, aterosclerosis , restenosis, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, degeneración neuronal, lesión de la médula espinal, cánceres de mama, colon, próstata, ovarios, cerebro y pulmón y sus metástasis, trastornos trombóticos, asma, glaucoma y osteoporosis . Además, los compuestos de la invención son útiles para tratar la disfunción eréctil, es decir, la disfunción eréctil mediada por Rho-cinasa. La disfunción eréctil puede definirse como la incapacidad para obtener o mantener una erección adecuada para el coito, O 94/28902, Patente de los Estados Unidos 6,103,765 y Patente de los Estados Unidos 6,124,461. La invención proporciona compuestos de las fórmulas P03/131-BC P03/131-BC La presente invención también está dirigida a las sales farmacéuticamente aceptables de las Fórmulas I-VI. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas son bien conocidas por aquéllos con experiencia en la técnica e incluyen sales básicas de ácidos inorgánicos y orgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, ácido sulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido fenilacético, y ácido mandélico. Además, las sales P03/131-BC farmacéuticamente aceptables incluyen las sales acidas de bases inorgánicas, tales como las sales que contienen cationes alcalinos (por ejemplo, Li+, Na+ o K+) , cationes alcalinotérreos (por ejemplo, g+, Ca+ o Ba+) , el catión amonio, así como también sales acidas de bases orgánicas, incluyendo amonio sustituido alifático o aromático, y cationes de amonio cuaternario, tales como aquéllos que surgen de la protonación o peralquilacíón de la trietilamina, iV/N-dietilamina, N,jff-diciclohexilamina, piridina, N,.W-dimetilaminopiridina (DMA.P) , 1,4-diazabiclo[2.2.2]octano (DABCO) , 1,5-diazabiciclo [4.3.0] ???-5-eno (DBN) y 1,8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno (DBU) . Varios de los compuestos de las Fórmulas I-VI poseen carbonos asimétricos y por lo tanto, pueden existir en las formas racémicas y ópticamente activas . Los métodos de separación de las mezclas enantioméricas y diastereoméricas son bien conocidos por aquellos son experiencia en la técnica. La presente invención abarca cualquier forma racémica u ópticamente activa aislada de los compuestos descritos en las Fórmulas I-VI, que posean actividad inhibidora de la Rho-cinasa. La invención también incluye composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de las Fórmulas I-VI, y un portador fisiológicamente aceptable.

P03/131-BC I 11 La invención abarca además, tratar las indicaciones mediadas por . ho-cinasa, administrando un compuesto de las Fórmulas I-VI, o una composición farmacéutica que contenga un compuesto de las Fórmulas I-VI. Así, la invención abarca tratar las enfermedades cardiovasculares tales como la hipertensión, aterosclerosis, restenosis e isquemia cerebral, o trastornos de vasoespasmo del sistema nervioso central, tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal, disfunción eréctil, por ejemplo, en pacientes que no tienen una respuesta satisfactoria a los inhibidores de PDE-5, y cáncer (por ejemplo, crecimiento del tumor), mediado por Rho-cinasa, administrando, por ejemplo, a un huésped en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de un compuesto de las Fórmulas I-VI. Los cánceres y tumores mediados por Rho-cinasa incluyen cánceres de mama, colon, próstata, ovarios, cerebro y pulmón y sus metástasis. Los compuestos pueden administrarse oralmente, tópicamente, parenteralmente, por inhalación o rocío, vaginalmente, rectalmente o sublingualmente en formulaciones de dosificación unitaria. El término "administración por inyección", incluye inyecciones intravenosas, intraarticulares , intramusculares, subcutáneas y parenterales, así como el uso de técnicas de infusión. La administración dérmica puede incluir la P03/131-BC administración tópica o la administración transdérmica . Uno o más compuestos pueden estar presentes en asociación con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, no tóxicos, y si se desea, otros ingredientes activos. Las composiciones pretendidas para el uso oral, pueden prepararse de acuerdo con cualquier método adecuado conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas. Tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de diluyentes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, y agentes preservadores , con el fin de proporcionar preparaciones agradables. Las tabletas contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes no tóxicos, farmacéuticamente aceptables, los cuales son adecuados para la fabricación de tabletas . Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y desintegrantes, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido alginico; y agentes aglutinantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden no estar recubiertas o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y adsorción en el tracto gastrointestinal, y por lo tanto, proporcionar una acción sostenida durante un periodo más P03/131-BC largo. Por ejemplo, puede emplearse un material que retrase el tiempo, tal como el monoestearato de glicerilo o el diestearato de glicerilo. Estos compuestos pueden también prepararse en una forma sólida, de liberación rápida . Las formulaciones para el uso oral, pueden también presentarse como cápsulas de gelatina dura, en donde el ingrediente activo está mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. También pueden utilizarse suspensiones acuosas que contengan los materiales activos en mezcla con los excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropil-metilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma de acacia; agentes dispersantes o humectantes que pueden ser un fosfátido natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de polioxietileno, o productos de condensación del óxido de etileno con alcoholes alifáticos P03/131-BC de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilen oxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ásteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, tales como el monooleato de polioxietilen sorbitol, o productos de condensación del óxido de etileno con esteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilen sorbitan. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más preservativos, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sucrosa o sacarina. Los polvos y granulados dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa, mediante la adición de agua, proporcionan al ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más preservativos. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por aquéllos ya mencionados anteriormente. También- pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes. Los compuestos también pueden estar en la forma de una formulación líquida no acuosa, por ejemplo, suspensiones oleosas que pueden formularse suspendiendo los P03/131-BC ingredientes activos en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de cacahuate, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por e emplo cera de abejas, parafina sólida o alcohol cetílico. Puede agregarse agentes edulcorantes, tales como aquéllos expuestos anteriormente, y agentes saborizantes , para proporcionar preparaciones orales agradables. Estas composiciones pueden preservarse por la adición de un antioxidante, tal como ácido ascórbico . Los compuestos de la invención también pueden administrarse transdérmicamente, utilizando métodos conocidos por aquellos con experiencia en la técnica (véase, por ejemplo: Chien; "Transdermal Controlled Systemic Medications" ; Marcel Dekker, Inc.; 1987. Lipp et al. WO94/04157 3 Mar 94) . Por ejemplo, una solución o suspensión de un compuesto de la Fórmula I en un solvente volátil adecuado, que contenga opcionalmente agentes que mejoren la penetración, puede combinarse con aditivos adicionales conocidos por aquellos con experiencia en la técnica, tales como materiales de matriz y bactericidas. Después de la esterilización, la mezcla resultante puede formularse siguiendo los procedimientos conocidos en formas de dosificación. Además, con el tratamiento con agentes P03/131-BC emulsificantes y agua, puede formularse una solución o suspensión de un compuesto de la Fórmula I en una loción o bálsamo . Los solventes adecuados para procesar los sistemas de suministro transdermico se conocen por aquellos con experiencia en la técnica, e incluyen alcoholes inferiores tales como etanol o alcohol isopropilico, cetonas inferiores tales como acetona, ésteres de ácidos carboxílicos inferiores tales como acetato de etilo, éteres polares tales como tetrahidrofurano, hidrocarburos inferiores tales como hexano, ciclohexano o benceno, o hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, cloroformo, triclorotrifluoroetano, o triclorofluoroetano . Los solventes adecuados pueden incluir mezclas de uno o más materiales seleccionados de alcoholes inferiores, cetonas inferiores, ésteres de ácidos carboxílicos inferiores, éteres polares, hidrocarburos inferiores, hidrocarburos halogenados . Los materiales que mejoran la penetración adecuados para el sistema de suministro transdérmico, se conocen por aquellos con experiencia en la técnica, e incluyen, por ejemplo, monohidroxi o polihidroxi alcoholes tales como etanol, propilenglicol o alcohol bencílico, alcoholes grasos de C8-C18 saturados o no saturados, tales como alcohol laurílico o alcohol cetílico, ácidos grasos de P03/131-BC C8-Ci8 saturados o no saturados, tales como ácido esteárico, ésteres grasos saturados o no saturados con hasta 24 carbonos, tales como metil, etil, propil, isopropil, n-butil, sec-butil, isobutil, terbutil o monoglicerin ésteres de ácido acético, ácido caprónico, ácido láurico, ácido miristínico, ácido esteárico, o ácido palmítico, o diésteres de ácidos dicarboxílicos saturados o no saturados con un total de hasta 24 carbonos, tales como adipato de diisopropilo, adipato de ~ diisobutilo, sebacato de diisopropilo, maleato de diisopropilo o fumarato de diisopropilo. Los materiales adicionales, que mejoran la penetración, incluyen los derivados de fosfatidilo, tales como la lecitina o cefaliña, terpenos, amidas, cetonas, ureas y sus derivados, y éteres tales como el monoetil éter de dimetil isosorbida y dietilenglicol . Las formulaciones que mejoran la penetración adecuadas, pueden también incluir mezclas de uno o más materiales seleccionados de monohidroxi o polihidroxi alcoholes, alcoholes grasos de C8-C18 saturados o no saturados, ácidos grasos de C8-Ci8 saturados o no saturados, ésteres grasos saturados o no saturados con hasta 24 carbonos, diésteres de ácidos dicarboxílicos saturado o no saturados con un total de hasta 24 carbonos, derivados de fosfatidilo, terpenos, amidas, cetonas, ureas y sus derivados y éteres. Los materiales aglutinantes adecuados para los P03/131-BC sistemas de suministro transdérmico se conocen por aquellos con experiencia en la técnica e incluyen poliacrilatos , silicones, poliuretanos, polímeros de bloques, copolímeros de estireno-butadieno y hules naturales y sintéticos . También pueden utilizarse éteres de celulosa, polietilenos derivados, y silicatos como los componentes de la matriz. Pueden agregarse aditivos adicionales, tales como resinas o aceites viscosos para incrementar la viscosidad de la matriz . Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en la forma de emulsiones aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuate, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o mezclas de éstos. Los agentes emulsificantes adecuados pueden ser gomas naturales, por ejemplo goma de acacia o goma de tragacanto, fosfátidos naturales, por ejemplo, soya, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitan, y productos de condensación de los ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitan. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y saborizantes . Los jarabes y elíxires pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilenglicol , P03/131-BC sorbitol o sucrosa. Tales formulaciones también pueden contener un demulcente, un preservativo y agentes saborizantes y colorantes. Los compuestos también pueden administrarse en la forma de supositorios para la administración rectal o vaginal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado, el cual es sólido a temperaturas ordinarias, pero líquido a la temperatura rectal o a la temperatura vaginal, y por lo tanto se fundirá en el recto o la vagina para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao y polietilenglicoles . Además, para el · tratamiento de la disfunción eréctil, las composiciones farmacéuticas presentes pueden tomar cualquier forma que sea adecuada para la administración al pene, vía inyección en el cuerpo cavernoso o administración transuretral , o aplicarse tópicamente al meato uretral . En el caso de inyecciones en el cuerpo cavernoso, la composición farmacéutica está, de manera adecuada, en la forma de una solución salina. De manera preferida, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para la administración transuretral, y en este caso, la composición está típicamente en la forma de una solución, un ungüento, o un supositorio. Típicamente, la composición farmacéutica se administra de 1 a 50 P03/131-BC minutos, de manera preferida de 10 a 20 minutos, antes del momento de empezar el intercambio sexual . Para todos los regímenes de uso descritos aquí, para los compuestos de la Fórmula I, el régimen de dosificación oral diario será, de manera preferida de 0.01 a 200 mg/kg de peso corporal total. La dosis diaria para la administración mediante inyección, incluyendo las inyecciones intravenosas, intramusculares, subcutáneas y parenterales, y el uso de técnicas de infusión, será de manera preferida de 0.01 a 200 mg/kg de peso corporal total . El régimen de dosificación vaginal diario será de manera preferida de 0.01 a 200 mg/kg de peso corporal total . El régimen de dosificación tópica diario será de manera preferida de 0.01 a 200 mg administrados una a cuatro veces diariamente. La concentración transdérmica será, de manera preferida, aquélla requerida para mantener una dosis diaria de 0.1 a 200 mg/kg. El régimen de dosificación por inhalación diario, será de manera preferida de 0.01 a 10 mg/kg de peso corporal total. Se apreciará por aquéllos con experiencia en la técnica que el método de administración particular dependerá de varios" factores, todos los cuales se consideran de manera rutinaria cuando se administran agentes terapéuticos. También se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente P03/131-BC dado, dependerá de una variedad de factores, incluyendo, la actividad del compuesto específico empleado, la edad del paciente, el peso corporal del paciente, la salud general del paciente, el género del paciente, la dieta del paciente, el tiempo de administración, la ruta de administración, velocidad de excreción, combinaciones de fármacos y la severidad de la afección que sufre terapia. Se apreciará además, por alguien con experiencia en la técnica, que el curso óptimo del tratamiento, es decir, el modo del tratamiento y el modo de dosis diarias de un compuesto de la Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, dado durante un número definido de días, puede determinarse por aquéllos con experiencia en la técnica utilizando pruebas de tratamiento convencionales. Los compuestos y composiciones presentes, exhiben actividad inhibidora de la Rho-cinasa, y por lo tanto, son útiles para tratar las indicaciones listadas anteriormente, por ejemplo, indicaciones mediadas por Rho-cinasa. Por indicaciones mediadas por Rho-cinasa, se entiende enfermedades o afecciones cuya progresión procede, al menos en parte, vía la trayectoria de la Rho. La actividad inhibidora de la Rho-cinasa, por ejemplo, inhibición del ROCK-1, puede evaluarse como sigue: El dominio de la cinasa del ROCK-1 humano, los aminoácidos 27-530, se aisla como una proteína de fusión de P03/131-BC glutation S-transferasa de células de insecto Sf9. La proteína se purifica parcialmente mediante purificación por afinidad con glutation Sepharose 4B (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) . Las reacciones se llevan a cabo en placas de 96 pozos en un volumen total de 100 uL que contienen ácido N- [2 -Hidroxietil] piperacin-N' - [2-etansulfónico] 50 mM, pH 7.5, MgCl2 5 mM, ditiotreitol 1 mM, ATP 6 µ?, [33P]ATP 0.2 µ?? (NEN, Boston, MA) , 1 µg de proteína de mielina básica y 0.1 µg de ROCK-1. Los compuestos de prueba se disuelven en dimetilsulfóxido al 100%, se diluyen a la concentración apropiada y se agregan a la reacción. La concentración final del dimetilsulfóxido no excede de 0.5%. La reacción se corre durante una hora a temperatura ambiente. La reacción se detiene con la adición de 7 mL de HCL 1 N, se transfiere a membranas P30 y la cantidad de [33P]ATP, como conteos por minuto (c.p.m.) incorporada en el sustrato, proteína de mielina básica, se lee en un Lector BetaPlate (Packard Instrument Co., Meriden, CT.). (Todos los reactivos se compraron de Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, a menos que se indique de otra manera) . El porcentaje de inhibición se mide por la cantidad de incorporación de radioactividad en la presencia del compuesto de prueba, cuando se compara con la cantidad de incorporación en la ausencia del compuesto de prueba. La actividad inhibidora también puede evaluarse P03/131-BC midiendo la formación de fibras tensionadas, realizado esencialmente como se describe por Ridley, A. J. , y A. Hall, Cell 70:389-399 (1992). Las células de fibrosarcoma humano HT1080 (CCL-121, American Type Culture Collection, Manassas, VA) , se cultivaron en placas en cubreobjetos de vidrio del #1 de 22 X 22 mm, en placas de cultivo de tejido de seis pozos (Costar) a 2.5 X 104 células/pozo en Medio de Eagle modificado con Delbeco [sic] (DMEM, Gibco) , suplementado con suero de ternero fetal al 10%. Las células se mantienen en una atmósfera de C02 al 5%, humidificada, a 37°C. Después de 24 horas, el medio de cultivo se remueve y se reemplaza con medio sin suero de ternero fetal al 10%, y las células se cultivan durante 48 horas adicionales . Los compuestos de prueba se disuelven en dimetilsulfóxido al 100%, diluido a la concentración apropiada y agregado al medio de cultivo 60 minutos antes de la inducción de la formación de fibras tensionadas . La concentración final del dimetilsulfóxido no excedió de 0.25%. Las formación de fibras tensionadas se induce por la adición de ácido lisofosfatídico (l-oleoil-2-hidroxi-sn-glicerol-3-fosfato, Avanti Polar-Lipids , Alabaster, Al) , a una concentración final de 10 µ? en Medio de Eagle modificado con Delbeco que contiene seroalbúmina bovina libre de ácido graso al 0.1% durante 15 minutos a 37°C. Las células se fijan con paraformaldehído al 4% (Poly P03/131-BC Scientific, Bay Shore, NJ) , en una solución salina amortiguada con fosfato (PBS) durante 15 minutos. A continuación las células se lavan 3 veces en PBS , y se permeabilizan utilizando una solución que contiene ácido piperacin-JV-N' bis [2-etansulf nico] 40 mM, ácido N-[2-hidroxietil] piperacin-N' - [2-etansulfónico] 50 mM, Tritón X-100 al 0.1%, NaCl 75 mM, MgCl2 mM, EGTA 0.5 mM, pH 7.2 durante 2 minutos a temperatura ambiente. Las células se lavaron 3 veces durante 5 minutos, cada vez en PBS y a continuación las fibras tensionadas de actina se tiñen utilizando 10 unidades/mL de rodamin faloidina (Molecular Probes, Eugene, OR) , en PBS durante 60 minutos a temperatura ambiente . Las células se lavaron 3 veces con PBS y los cubreobjetos se montaron en portaobjetos de vidrio de microscopio. El porcentaje de células positivas a las fibras tensionadas en cada portaobjetos se determinó visualmente utilizando un microscopio Nikon Labphoto-2. Se contaron al menos 100 células por portaobjeto, y los experimentos se hicieron por duplicado. El porcentaje de inhibición es medido contando el número de células positivas a las fibras tensionadas en la presencia del compuesto de prueba, cuando se compara con el número de células positivas a las fibras tensionadas en la ausencia del compuesto de prueba. Utilizando los protocolos anteriores, se P03/131-BC determinó que todos los compuestos descritos aquí, tienen actividad inhibidora de la Rho-cinasa. Los compuestos de la invención pueden hacerse de acuerdo con los métodos químicos convencionales, de rutina, y/o como se describe posteriormente, a partir de materiales de inicio, los cuales están comercialmente disponibles o pueden producirse de acuerdo con los métodos químicos de rutina convencionales. Los métodos generales para la preparación de los compuestos se dan posteriormente, y la preparación de los compuestos representativos se ilustra específicamente en los Ejemplos.

ABREVIATURAS Y ACRONI OS Cuando las siguientes abreviaturas se utilizan aquí, tienen el significado siguiente: Ac20 anhídrido acético Anhi anhidro n-BuOH n-butanol t-BuOH t-butanol CD3OD metanol-d4 Celite8 agente filtrante de tierra diatomácea, ® Celite Corp. C¾C12 cloruro de metileno CI-MS espectroscopia de masas por ionización P03/131-BC química Conc concentrado Dec descomposición DME dimetoxietano DMF N, iV-dimetilformam da DMSO dimetilsulfóxido ELSD detector evaporativo de dispersión de la luz EtOAc acetato de etilo EtOH etanol (100%) Et20 Éter dietilico Et3N Trietilamina CLAR ER cromatografía líquida de alto rendimiento-espectroscopia de masas por electrorrocío MM 4-metilmorfolina P 3P trifenilfosfina Pd(dppf) Cl2 [1,1'- bis (difenilfosfino) ferrocen] dicloro- paladio (II) Pd(PP 3)4 tetracis (trifenilfosfin) paladio (0) Pd(OAc)2 acetato de paladio P(0)C13 oxicloruro de fósforo TR tiempo de retención (HPLCO ta temperatura ambiente P03/131-BC THF Tetrahidrofurano TFA ácido trifluoroacético CCF cromatografía en capa f Métodos Generales de Preparación En las fórmulas utilizadas para describir los siguientes métodos generales, R1 y R2 son hidrógeno o metoxi, y R3 es metoxietilo, ciclopropilo, 4-fluorofenilo o 4-piridilo, seleccionados de manera apropiada con el fin de preparar los compuestos I-VI de la Invención.

Método General ? Una mezcla de los compuestos 1 y 2 , y acetato de potasio en THF/agua se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó agua a la mezcla, dando como resultado la formación de un precipitado. El precipitado se lavó con agua, se filtró y secó bajo alto vacío para proporcionar el compuesto 3.

P03/131-BC Método General B 3 Una mezcla del compuesto 3, y una amina o anilina sustituida, se calienta a 140 °C durante 2 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se trata con éter para formar un precipitado o se purifica mediante cromatografía en columna con gel de sílice. Purificación del precipitado: El precipitado se filtra, se lava con éter varias veces, y se seca bajo alto vacío para proporcionar el producto . Sin elaboración adicional, se cree que alguien con experiencia en la técnica puede, utilizando la descripción precedente, utilizar la presente invención en toda su extensión. Las siguientes modalidades específicas preferidas son, por lo tanto, consideradas como meramente ilustrativas, y no limitantes de ninguna manera, del resto de la descripción. En lo anterior y en los siguientes ejemplos, todas las temperaturas se exponen no corregidas en grados P03/131-BC Celsius y, a menos que se indique de otra manera, todas las partes y porcentajes son en peso. Toda la descripción de todas las solicitudes, patentes y publicaciones citadas anterior o posteriormente, la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 60/277,974, presentada en Marzo 23, 2001 y la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. de Serie: 60/315,338, presentada en Agosto 29, 2001, se incorporan aquí como referencia.

Ejemplo 1 Preparación de la 2-N-5' -aminoii-,dazol-4-cloro-6,7- dimetoxiquinazolina Una mezcla de la 2 , 4-dicloro-6 , 7-dimetoxiquinazolina del paso 1 (Aldrich Chemical Co., 226 g, 0.874 mol), 5-aminoindazol (130 g, 0.98 mol), y acetato de potasio (111.5 g, 1.14 mol) en THF/agua (2 L/0.9 L) , se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se agrega agua (2 L) a la mezcla, dando como resultado la formación de un precipitado. El precipitado se lava con agua, se filtra y se seca bajo alto vacio para proporcionar el P03/131-BC producto como un polvo gris.

Ejemplo 2 Preparación de la N- [2- (2,4-diclorofenil) -4-quinazolinil] - N- (lH-indazol-5-il) amina Una mezcla de 4-cloro-2-fenilquinazolina (Aldrich Chemical Co . , 7.2 g, 30 mmol) y 5-aminoindazol (3.99 g, 30 mmol) en butanol (50 mL) , se calienta a 100°C durante la noche. Después de remover el solvente al vacio, el producto crudo se purificó por cromatografía en columna con gel de sílice (gradiente de 20% a 80% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar el Ejemplo 2 (3.6 g) . CLAR/EM: (M+H) + 338 m/z. Tiempo de retención (CLAR/EM) = 3.65 minutos.

P03/131-BC Ruta Sintética General para los Ejemplos 3-6 Ejemplo 3 Preparación de N2- (3 -fluorofenil) -N4- (lH-indazol-5-il) -6,7- dimetoxi-2,4-quinazo1indiamina Una suspensión de 2-cloro-N- (lH-indazol-5-il) -6, 7-dimetoxi-4-quinazolinamina (0.1 mmol) y 4-fluoroanilina (0.3 mmol) en n-butanol (1 mL) , se agitó a 90°C durante 72 h. El solvente se evaporó y el residuo se purificó por CLAR para proporcionar el producto puro. (M+H) + = 431, TR (LC-EM) = 2.92. Utilizando el método descrito anteriormente para el Ejemplo 3, y sustituyendo por los materiales de inicio P03/131-BC apropiados, los Ejemplos 4-6 se prepararon de manera similar y se resumen posteriormente en la Tabla 1.

Tabla 1 Los ejemplos precedentes pueden repetirse con éxito similar sustituyendo los reactivos y/o condiciones de operación descritos genérica o específicamente de esta invención, por aquéllos utilizados en los ejemplos precedentes . De la descripción anterior, alguien con experiencia en la técnica puede establecer las características esenciales de esta invención y, sin P03/131-BC