MXPA03000564A - Compuestos y metodos para el tratamiento y diagnostico de infeccion clamidial. - Google Patents

Compuestos y metodos para el tratamiento y diagnostico de infeccion clamidial.

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Abstract

Se describen compuestos y metodos para el diagnostico y tratamiento de infeccion Clamidial. Los compuestos proporcionados incluyen polipeptidos que contienen al menos una porcion antigenica de un antigeno Chlamydia y secuencias de ADN que codifican tales polipeptidos. Las composiciones farmaceuticas y vacunas que comprenden tales polipeptidos o secuencias de ADN tambien se proporcionan, junto con anticuerpos dirigidos contra tales polipeptidos. Los equipos de diagnostico que contienen tales polipeptidos o secuencias de ADN y un reactivo de deteccion adecuado pueden utilizarse para la deteccion de infeccion Clamidial en pacientes y en muestras biologicas.

Description

enfermedad cardiaca coronaria como individuos seronegativos . Las infecciones clamidiales de esta manera constituyen un problema de salud significativo tanto en los E . U . como en todo el mundo. La infección clamidial con frecuencia es asintomática. Por ejemplo, por el tiempo que una mujer busca atención módica para PI D, puede haber ya ocurrido daño irreversible resultando en infertilidad . De esta manera, aún permanece una necesidad en la materia de vacunas mejoras y composiciones farmacéuticas para la prevención y tratamiento de infecciones Chlamydia. La presente invención satisface esta necesidad y proporciona además otras ventajas relacionadas.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona composiciones y métodos para el diagnóstico y terapia de infección Chlamydia. En un aspecto, la presente invención proporciona polipéptidos que comprenden una porción inmunogénica de un antígeno Chlamydia, o una variante de tal antígeno. Ciertas porciones y otras variantes son inmunogénicas, de manera que la habilidad de la variante para reaccionar con antisueros específicos de antígeno no se disminuye substancialmente . Dentro de ciertas modalidades, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de polinucíeótidos seleccionada del grupo que consiste de (a) una secuencia de SEQ ID NO. 358-3T1 , 366-385 , 406-430, 455-489, 516-517, 523-559 y 582-596; (b) los complementos de dichas secuencias; y (c) secuencias que se hibridizan a la secuencia de (a) o (b) bajo condiciones moderadas a altamente severas. En modalidades específicas, los polipéptidos de la presente invención comprenden al menos una porción de una proteina Chlamydia que incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias citadas en SEQ I D NO: 362-365, 386-405, 431 -454, 490-515, 518-522, 560-581 y 597-599 y variantes de las mismas. La presente invención proporciona además polinucleótidos que codifican un polipéptido como se describe arriba, o una porción del mismo (tal como una porción que codifica al menos 1 5 residuos de aminoácidos de una proteína Chlamydia), vectores de expresión que comprenden tales polinucleótidos y células huésped transformadas o transfectadas con tales vectores de expresión . En un aspecto relacionado, también se proporcionan las secuencias de polinucleótidos que codifican los polipéptidos anteriores, vectores de expresión recombinante que comprende una o más de estas secuencias de polinucleótidos y células huésped transformadas o transfectadas con tales vectores de expresión. En otro aspecto, la presente invención proporciona proteínas de fusión que comprenden un polipéptido inventivo, o, alternativamente, un polipéptido inventivo y un antígeno Chlamydia conocido, así como también polinucleótidos que codifican tales proteínas de fusión, en combinación con un vehículo fisiológicamente aceptable o inmunoestimulante para utilizarse como composiciones farmacéuticas y vacunas de las mismas. La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden: (a) un anticuerpo, tanto policlonal como monoclonal , o fragmento de unión al antígeno del mismo que se una específicamente a una proteína Chlamydial; y (b) un vehículo fisiológicamente aceptable. Dentro de otros aspectos, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más polipóptidos Chlamydia descritos en la presente, por ejemplo, un polipéptido de acuerdo a SEQ I D NO: 362-365, 386-405, 431 -454, 490-515, 518-522 y 597-599, o una molécula de polinucleótido que codifica tal polipéptido, tal como un polinucleótido de acuerdo a SEQ I D NO: 358-361 , 366-385, 406-430, 455-489, 516-517, 523-559 y 582-596, y un vehículo fisiológicamente aceptable. La invención también proporciona vacunas para propósitos profilácticos y terapéuticos que comprenden uno o más de los polipéptidos descritos y un inmunoestimulante, como se define en la presente, junto con vacunas que comprenden una o más secuencias de polinucleótidos que codifican tales polipéptidos y un inmunoestimulante. En todavía otro aspecto, se proporcionan métodos para inducir inmunidad protectora en un paciente, que comprenden administrar a un paciente una cantidad eficaz de una o más de las vacunas o composiciones farmacéuticas anteriores. En todavía otro aspecto, se proporcionan los métodos para el tratamiento de infección Chlamydia en un paciente, los métodos comprendiendo obtener células mononucleares sanguíneas periféricas (PBMC) del paciente, incubar las PBMC con un polipéptido de la presente invención (o un polinucleótido que codifica tal polipéptido) para proporcionar células T incubadas y administrar las células T incubadas al paciente. La presente invención proporciona adicionalmente métodos para el tratamiento de infección Chlamydia que comprenden incubar células que presentan antígeno con un polipéptido de la presente invención (o un polinucleótido que codifica tal polipéptido) para proporcionar células que presentan antfgeno incubadas y administrar las células que presentan antígeno incubadas al paciente. Las células proliferadas pueden, pero no necesitan, clonarse antes de la administración al paciente. En ciertas modalidades, las células que presentan antfgeno se seleccionan del grupo que consiste de células dendríticas, macrófagos, monocitos, células B, y fibroblastos. Las composiciones para el tratamiento de infección Chlamydia que comprenden células T o células que presentan antígeno que se han Incubado con un polipéptido o polinucleótido de la presente invención también se proporcionan. Dentro de aspectos relacionados, se proporcionan vacunas que comprenden: (a) una célula que presenta antígeno que expresa un polipéptido como se describe arriba y (b) un ¡nmunoestimulante. La presente invención proporciona además, dentro de otros aspectos, métodos para remover células infectadas con Chlamydia de una muestra biológica, que comprenden contactar una muestra biológica con células T que reaccionan específicamente con una proteína Chlamydial, en donde la etapa de contactar se realiza bajo condiciones y por un tiempo suficiente para permitir el retiro de células que expresan la proteína de la muestra. Dentro de aspectos relacionados, se proporcionan métodos para inhibir el desarrollo de infección Chlamydial en un paciente, que comprende administrar a un paciente una muestra biológica tratada como se describe arriba. En aspectos adicionales de la invención sujeto, se proporcionan métodos y equipos de diagnóstico para detectar infección Chlamydia en un paciente. En una modalidad , el método comprende: (a) contactar una muestra biológica con al menos uno de los polipóptidos o proteínas de fusión descritas en la presente; y (b) detectar en la muestra la presencia de agentes de unión que se unen al polipéptido o proteína de fusión , detectando así infección Chlamydia en la muestra biológica . Las muestras biológicas adecuadas incluyen sangre completa, esputo, suero, plasma , saliva, fluido cerebroespinal y orina. En una modalidad , los equipos de diagnóstico comprenden uno o más de los polipéptidos o proteínas de fusión descritas en la presente en combinación con un reactivo de detección . En todavía otra modalidad, los equipos de diagnóstico comprende ya sea un anticuerpo monoclonaí o un anticuerpo policlonal que se une con un polipéptido de la presente invención . La presente invención también proporciona métodos para detectar infección Chlamydia que comprende: (a) obtener una muestra biológica de un paciente; (b) contactar la muestra con al menos dos cargas de inicio de oligonucleótido en una cadena de reacción de polimerasa, al menos una de las cargas de inicio de oligonucleótido siendo específica para una secuencia de polinucleótidos descrita en la presente; y (c) detectar en la muestra una secuencia de polinucleótidos que se amplifica en la presencia de las cargas de inicio de oligonucleótido. En una modalidad, la carga de inicio de oligonucleótido comprende al menos aproximadamente 10 nucleótidos contiguos de un péptido de secuencia de polinucleótidos descrito en la presente, o de una secuencia que se hibridiza al mismo.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un método para detectar infección Chlamydia en un paciente que comprende: (a) obtener una muestra biológica del paciente; (b) contactar la muestra con una sonda de oligonucleótido especifica para una secuencia de polinucleótidos descrita en la presente; y (c) detectar en la muestra una secuencia de polinucleótido que se hibridiza a la sonda de oligonucleótido. En una modalidad, la sonda de oligonucleótido comprende al menos aproximadamente 15 nucleótidos contiguos de una secuencia de polinucleótidos descrita en la presente, o una secuencia que se hibridiza a la misma. Estos y otros aspectos de la presente invención serán aparentes en la referencia a la siguiente descripción detallada. Todas las referencias descritas en la presente se incorporan en la presente para referencia en su totalidad como si cada una se incorporará individualmente.
I DENTI FI CADORES DE SECUENCIA SEQ I D NO : 1 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 -B1 -66 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 2 es la secuencia de ADN determinada para el clon 4-D7-28 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 3 es la secuencia de ADN determinada para el clon 3-G3- 1 0 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 4 es la secuencia de ADN determinada para el clon 10-C 10-31 de C. trachomatis.
SEQ ID NO: 5 es la secuencia de aminoácidos predicha para 1-B1-66. SEQ ID NO: 6 es la secuencia de aminoácidos predicha para 4-D7-28. SEQ ID NO: 7 es una primer secuencia de aminoácidos predicha para 3-G3-10. SEQ ID NO: 3 es una segunda secuencia de aminoácidos predicha para 3-G3-10. SEQ ID NO. 9 es una tercer secuencia de aminoácidos predicha para 3-G3-10. SEQ ID NO: 10 es una cuarta secuencia de aminoácidos predicha para 3-G3-10. SEQ ID NO. 11 es una quinta secuencia de aminoácidos predicha para 3-G3-10. SEQ ID NO: 12 es la secuencia de aminoácidos predicha para 10-C10-31. SEQ ID NO: 13 es la secuencia de aminoácidos del péptido sintético 1-?1-ßß/48-ß7.. SEQ ID NO: 14 es la secuencia de aminoácidos del péptido sintético 1-B1-66/58-77. SEQ ID NO: 15 es la secuencia de ADN determinada para el clon 2C7-8 serovar LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 16 es una secuencia de ADN de una estructura de lectura abierta putativa de una región del genoma de serovar D C. trachomatis a la cual 2C7-8 se traza.
SEQ I D NO: 17 es la secuencia de aminoácidos predicha codificada por la secuencia de ADN de SEQ I D NO: 16. SEQ I D NO: 18 es la secuencia de ami noácidos del péptido sintético CtC7.8- 12. SEQ I D NO: 19 es la secuencia de ami noácidos del peptido sintético CtC7.8- 13. SEQ ID NO: 20 es la secuencia de aminoácidos predicha codificada por una segunda lectura abierta putativa de serovar D C. trachomatis. SEQ ID NO: 21 es la secuencia de ADN determinada para el clon 4C9- 18 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 22 es la secuencia de ADN determinada homologa a Dehidrogenasa de Lipoamida de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 23 es la secuencia de ADN determinada homologa a proteína Hipotética de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 24 es la secuencia de ADN determinada homologa a Metiltransferasa de Ubiquinina de LGV I I C. trachomatis. SEQ ID NO : 25 es la secuencia de ADN determinada para clon 4C9- 1 8#2 BL21 pLysS de LGV I I C. trachomatis. SEQ ID NO: 26 es la secuencia de aminoácidos predicha para 4C9- 18#2 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 27 es la secuencia de ADN determinada para Cp-SWIB de la cepa TWAR de C. pneumonía. SEQ I D NO: 28 es la secuencia de aminoácidos predicha para Cp-SWIB de la cepa TWAR de C. pneumonía.
SEQ I D NO: 29 es la secuencia de ADN determinada para Cp-S13 (CT509) de la cepa TWAR de C. pneumonía. SEQ ID NO: 30 es la secuencia de aminoácidos predicha para Cp-S 1 3 de la cepa TWAR de C. pneumonía. SEQ I D NO: 31 es la secuencia de aminoácidos para un póptido de consenso 10mer de CtC7.8- 12 y CtC7.8-13. SEQ I D NO: 32 es la secuencia de aminoácidos predicha para el clon 2C7-8 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 33 es la secuencia de ADN que corresponde los nucleótidos 597304-597145 del genoma de serovar D C. trachomatis (NCBI , búsqueda BLASTN), que muestra homología al clon 2C7-8. SEQ ID NO: 34 es la secuencia de aminoácidos predicha codificada por la secuencia de SEQ I D NO: 33. SEQ I D NO: 35 es la secuencia de ADN para C. p. SWI B Nde (carga de inicio 5') de C. pneumonía. SEQ I D NO: 36 es la secuencia de ADN para C . p. SWI B EcoRI (carga de inicio 3') de C. pneumonía. SEQ ID NO: 37 es la secuencia de ADN para C. p. S13 Nde (carga de inicio 5 ) de C. pneumonía. SEQ ID NO: 38 es la secuencia de ADN para C. p. S1 3 EcoRI (carga de inicio 3 ) de C. pneumonía. SEQ I D NO: 39 es la secuencia de aminoácidos para el póptido CtSwib 52-67 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 40 es la secuencia de aminoácidos para el póptido CpSwib 53-68 de C. pneumonía.
SEQ ID NO: 41 es la secuencia de aminoácidos para el péptido HuSwib 288-302 de dominio SW1 Humano. SEQ ID NO: 42 es la secuencia de aminoácidos para el péptido CtSWI-T 822-837 de la fusión de topoisomerasa-SWIB de C. trachomatis. SEQ ID NO: 43 es la secuencia de aminoácidos para el péptido CpSW1-T 828-842 de la fusión de topoisomerasa-SWIB de C. pneumonía. SEQ ID NO: 44 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon 19783.3,jen.seq(1>509)CTL2#11-3' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 3'. SEQ ID NO. 45 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon 19783.3,jen.seq(1>481)CTL2#11-5' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 46 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19784CTL2_12consenso.seq(1>427)CTL2#12 de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 47 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19785.4,jen.seq(1>600)CTL2#16-5' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 48 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon 19786.3,jen.seq(1 >600)CTL2#18-3' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 3'. SEQ ID NO: 49 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon 19786.4,jen.seq(1>600)CTL2#18-5' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 50 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19788CTL2_21consenso.seq(1>406)CTL2#21 de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 51 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19790CTL2_23consenso.seq(1>602)CTL2#23 de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 52 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19791CTL2_24consenso.seq(1>145)CTL2#24 de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 53 es la secuencia de ADN determinada para el clon CTL2#4 de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 54 es la secuencia de ADN determinada para el clon CTL2#8b de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 55 es la secuencia de ADN determinada para el clon 15-G1-89 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen de dehidrogenasa de lipoamida CT557. SEQ ID NO: 56 es la secuencia de ADN determinada para el clon 14-H1-4 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen antioxidante específico de tiol CT603. SEQ ID NO: 57 es la secuencia de ADN determinada para el clon 12-G3-83 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con la proteína hipotética CT622. SEQ ID NO: 58 es la secuencia de ADN determinada para el clon 12-B3-95 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen de dehidrogenasa de lipoamida CT557. SEQ ID NO: 59 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -H4-28 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gen dnaK CT396. SEQ ID NO: 60 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -?3-T8 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con la proteína de virulencia PG P6-D y gen ribosomal L1 CT318. SEQ I D NO: 61 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -G 1 -34 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gel de dehidrogenasa de malato CT376 y con el gen hidrolasa de glucógeno CT042. SEQ ID NO: 62 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -G10-46 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con la proteína hipotética CT610. SEQ ID NO: 63 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -C12-91 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gen OMP2 CT443. SEQ I D NO: 64 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 1 -A3-93 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gen de la superfamilia HAD CT103. SEQ ID NO: 65 es la secuencia de aminoácidos determinada para el clon 14-H 1 -4 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen antioxidante específico de tiol CT603. SEQ I D NO: 66 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#9 de LGV II C. trachomatis.
SEQ ID NO: 67 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#7 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 68 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#6 de LGV I I C. trachomatis. SEQ ID NO: 69 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#5 de LGV I I C. trachomatis. SEQ ID NO: 70 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#2 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 71 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2#1 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 72 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon 23509.2CtL2#3-5' de LGV I I C. trachomatis, que representa el extremo 5". SEQ I D NO: 73 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon 23509.1 CtL2#3-3' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 3' . SEQ ID NO: 74 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon 221 21 .2CtL2#10-5' de LGV I I C. trachomatis, que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 75 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon 22121 .1 CtL2#10-3' de LGV I I C. trachomatis, que representa el extremo 3'. SEQ I D NO: 76 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19787.6CtL2#19-5' de LGV II C. trachomatis, que representa el extremo 5'.
SEQ ID NO: 77 es la secuencia de ADN determinada para el clon CpS1 3-His de LGV I I C. pneumoniae. SEQ I D NO: 78 es la secuencia de ADN determinada para el clon Cp_SWI B-His de LGV II C. pneumoniae. SEQ I D NO: 79 es la secuencia de ADN determinada para el clon 23-G7-68 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología parcial con la proteína ribosomal L1 1 , L10 y L1 . SEQ I D NO: 80 es la secuencia de ADN determinada para el clon 22-F8-91 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gen pmpC. SEQ I D NO: 81 es la secuencia de ADN determinada para el clon 21 -?8-T5 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con los genes CT610-CT613. SEQ ID NO: 82 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 9-F 12-57 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con los genes CT858 y recA. SEQ ID NO: 83 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 9-F12-53 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen CT445 que codifica la sintetasa tARN de glutamilo. SEQ ID NO: 84 es la secuencia de ADN determinada para el clon 19-A5-54 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con el gen de plásmido críptico. SEQ I D NO: 85 es la secuencia de ADN determinada para el clon 17-E1 1 -72 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología parcial con los genes OppC_2 y pmpD.
SEQ ID NO: 86 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 7-C 1 -77 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología parcial con las estructuras de lectura abierta CT857 y CT858. SEQ ID NO: 87 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 5-H2-76 de LGV I I C. trachomatis, que comparte homología con los genes pmpD y SycE, y con el ORF CT089. SEQ ID NO: 88 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 5-A3-26 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el ORF CT858. SEQ ID NO: 89 es la secuencia de aminoácidos determinada para el clon Cp_SWI B-His de C. pnuemoniae. SEQ ID NO: 90 es la secuencia de aminoácidos determinada para el clon CtL2_LPDA_F L de LGV II C. trachomatis. SEQ ID NO: 91 es la secuencia de aminoácidos determinada para el clon CpS13-His de C. pnuemoniae. SEQ ID NO: 92 es la secuencia de aminoácidos determinada para el clon CtL2_TSA_FL de LGV I I de C. trachomatis. SEQ I D NO: 93 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 43-61 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 94 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 48-67 de LGV I I C. trachomatis. SEQ ID NO: 95 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 52-71 de LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 96 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 58-77 de LGV I I C. trachomatis.
SEQ I D NO: 97 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 63-82 de LGV II C. trachomatis. SEQ I D NO: 98 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 51 -66 de LGV II C. trachomatis. SEQ I D NO: 99 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Cp-Swib 52-67 de C. pneumonía. SEQ I D NO: 100 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Cp-Swib 37-51 de C. pneumonía. SEQ I D NO: 101 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Cp-Swib 32-51 de C. pneumonía. SEQ I D NO: 102 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Cp-Swib 37-56 de C. pneumonía. SEQ I D NO: 103 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-Swib 36-50 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 104 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-S13 46-65 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 105 es la secuencia de aminoácidos para el péptido C.-S 13 60-80 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 106 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-S 13 1 -20 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 107 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-S 13 46-65 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 108 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Ct-S 13 56-75 de C. trachomatis, SEQ I D NO: 109 es la secuencia de aminoácidos para el péptido Cp-S1356-75 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 110 es la secuencia de ADN determinada para el clon 21-G12-60 de LGV II C. trachomatis, que contiene estructuras de lectura abierta parcial para proteínas hipotéticas CT875, CT229 y CT228. SEQ ID NO: 111 es la secuencia de ADN determinada para el clon 22-B3-53 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el ORF CT110 de GroEL. SEQ ID NO: 112 es la secuencia de ADN determinada para el clon 22-A1-49 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con ORFs CT660 y CT659. SEQ ID NO: 1 3 es la secuencia de ADN determinada para el clon 17-E2-9 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con ORFs CT611 y CT610. SEQ ID NO: 1 4 es la secuencia de ADN determinada para el clon 17-C10-31 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con ORF CT858. SEQ ID NO: 115 es la secuencia de ADN determinada para el clon 21-C7-8 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con el gen similar a dnaK. SEQ ID NO: 116 es la secuencia de ADN determinada para el clon 20-G3-45 de LGV II C. trachomatis, que contiene parte del gen pmpB CT413. SEQ ID NO: 117 es la secuencia de ADN determinada para el clon 18-C5-2 de LGV II C. trachomatis, que comparte homología con la proteína ribosomal S1 ORF.
SEQ I D NO: 1 1 8 es la secuencia de ADN determinada para el clon 1 7-C5-19 de LGV I I C. trachomatis, que contiene parte de los ORFs para CT431 y CT430. SEQ I D NO: 1 1 9 es la secuencia de ADN determinada para el clon 16-D4-22 de LGV I I C. trachomatis, que contiene secuencias parciales de ORF3 y ORF4 del plásmido para el crecim iento dentro de células mamíferas. SEQ I D NO: 120 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 121 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predic a para el gen Cap í CT529 de serovar LGV I I C. trachomatis. SEQ I D NO: 122 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar E C. trachomatis. SEQ I D NO: 123 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar E C. trachomatis. SEQ ID NO: 124 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar 1 A C. trachomatis. SEQ I D NO: 125 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar 1 A C. trachomatis. SEQ ID NO: 126 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Cap í CT529 de serovar G C. trachomatis. SEQ ID NO: 127 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar G C. trachomatis. SEQ ID NO: 128 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar F 1 Nl l C. trachomatis. SEQ I D NO: 129 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar F 1 Nl l C. trachomatis. SEQ I D NO: 130 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar L1 C. trachomatis. SEQ I D NO: 131 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar L1 C. trachomatis. SEQ I D NO: 1 32 es la secuencia de A DN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar L3 C. trachomatis. SEQ ID NO: 133 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar L3 C. trachomatis. SEQ ID NO: 134 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar Ba C. trachomatis. SEQ ID NO: 135 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Capí CT529 de serovar Ba C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 36 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen Capí CT529 de serovar MOPN C. trachomatis. SEQ ID NO: 137 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen Cap í CT529 de serovar MOPN C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 38 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #124- 139 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 39 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #132-147 de serovar L2 C. trachomatis.
SEQ ID NO: 140 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #138- 1 55 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ I D NO: 141 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #146-163 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ I D NO: 142 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #154-171 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ I D NO: 143 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí #162- 178 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ I D NO: 144 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí #138- 147 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 145 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí #139-147 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 146 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Cap #140-147 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 147 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido ORF CT529 Capí #138-146 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 148 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí #138-145 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 149 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí #F140-> I de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 50 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí ##S139>Ga de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 151 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido ORF CT529 Capí ##S139>Gb de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 52 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido # 2 C7.8-6 del ORF 216aa de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 53 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido # 2 C7.8-7 del ORF 2 6aa de serovar L2 C. trachomatis, SEQ ID NO: 154 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido # 2 C7.8-8 del ORF 216aa de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 55 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido # 2 C7.8-9 del OR F 216aa de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 56 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido # 2 C7.8- 10 del ORF 216aa de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 57 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido de residuo de aminoácido 53 del ORF 216aa dentro del clon 2C7.8 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 58 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido de residuo de aminoácido 52 del ORF CT529 dentro del clon 2C7.8 de serovar L2 C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 5T es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (delantera) para clonar serovar L2 CT529 de longitud completa . SEQ ID NO: 160 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (inversa) para clonar serovar L2 CT529 de longitud completa. SEQ ID NO: 161 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (delantera) para clonar serovares CT529 de longitud completa diferentes a L2 y MOPN . SEQ ID NO: 162 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (inversa) para clonar serovares CT529 de longitud completa diferentes a L2 y MOPN . SEQ ID NO: 163 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (delantera) para clonar serovar CT529 de longitud MOPN . SEQ ID NO: 164 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (inversa) para clonar serovar CT529 de longitud MOPN . SEQ ID NO: 165 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (delantera) para pBI B-KS. SEQ ID NO: 166 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' (inversa) para pBI B-KS. SEQ ID NO: 167 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido de epítopo 9-mer Cap 1 #139- 147 de serovar L2. SEQ ID NO: 168 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido de epítopo 9-mer Cap 1 #139- 147 de serovar D. SEQ ID NO: 169 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpl (CT874) C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 70 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpG C. trachomatis. SEQ ID NO: 171 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpE C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 72 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpD C. trachomatis.
SEQ ID NO: 173 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ ID NO: 174 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el gen pmpB C. trachomatis. SEQ ID NO: 175 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpl C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 76 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpG C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 77 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpE C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 78 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpD C. trachomatis. SEQ I D NO: 17T es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ ID NO: 180 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el gen pmpB C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 81 es la secuencia de ADN determinada menos la secuencia de señal para el gen pmpl C. trachomatis. SEQ I D NO: 1 82 es una secuencia de ADN de longitud completa subsecuentemente determinada para el gen pmpG C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 83 es la secuencia de A DN determinada menos la secuencia de señal para el gen pmpE C. trachomatis. SEQ ID NO: 184 es una primer secuencia de ADN determinada que representa el término carboxi para el gen pmpD C. trachomatis.
SEQ I D NO: 185 es una segunda secuencia de ADN determinada que representa el término amino menos la secuencia de señal para el gen pmpD C. trachomatis. SEQ ID NO: 186 es una primer secuencia de ADN determinada que representa el término carboxi para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ I D NO: 187 es una segunda secuencia de ADN determinada que representa el término amino menos la secuencia de señal para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ ID NO: 188 es la secuencia de ADN determinada que representa el gen pmp serovar MOMPS C. pneumoniae en una molécula de fusión con a12. SEQ I D NO: 18T es la secuencia de aminoácidos predicha menos la secuencia de señal para el gen pmpl C. trachomatis. SEQ ID NO: 190 es una secuencia de aminoácidos subsecuentemente predicha para el gen pmpG C. trachomatis. SEQ I D NO: 191 es la secuencia de aminoácidos predicha menos la secuencia de señal para el gen pmpE C. trachomatis. SEQ I D NO: 192 es una primer secuencia de aminoácidos predicha que representa el término carboxi para el gen pmpD C. trachomatis. SEQ ID NO: 193 es una segunda secuencia de aminoácidos predicha que representa el término Amino menos la secuencia de señal para el gen pmpD C. trachomatis. SEQ ID NO: 194 es una primer secuencia de aminoácidos predicha que representa el término Carboxi para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ ID NO: 195 es una segunda secuencia de aminoácidos predicha que representa el término Amino para el gen pmpC C. trachomatis. SEQ ID NO: 1 96 es la secuencia de aminoácidos predicha que representa el gen pmp serovar MOMPS C. pneumoniae en una molécula de fusión con Ra12. SEQ ID NO: 1 97 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpC C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 1 98 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpC C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 1 99 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpC C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ I D NO: 200 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpD C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 201 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpD C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ I D NO: 202 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpD C. trachomatis en el vector de vacuna SKB.
SEQ ID NO; 203 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 204 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 205 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 206 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ ID NO: 207 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar la porción de término amino del gen pmpC C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 208 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar la porción de término amino del gen pmpC C. trachomatis en el vector pEH 7b. SEQ ID NO: 209 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar la porción de término carboxi del gen pmpC C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 210 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar la porción de término carboxi del gen pmpC C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 21 1 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar la porción de término amino del gen pmpD C. trachomatis en el vector pET 7b. SEQ ID NO: 212 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar la porción de término amino del gen pmpD C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 213 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar la porción de término carboxi del gen pmpD C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 214 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar la porción de término carboxi del gen pmpD C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 215 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 216 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 217 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector pET1 b. SEQ ID NO: 218 es la secuencia de aminoácidos para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpE C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 219 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el - 2T -vector pET17b. SEQ ID NO: 220 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ I D NO: 221 es la secuencia de aminoácidos para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 222 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 5' oligo para clonar el gen pmpl C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 223 es la secuencia de ADN determinada para la carga de inicio 3' oligo para clonar el gen pmpl C. trachomatis en el vector pET17b. SEQ ID NO: 224 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido Swib 1 -20 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 225 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido Swib 6-25 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 226 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido Swib 12-31 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 227 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido Swib 17-3T de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 22T es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido Swib 22-41 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 22T es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 27-46 de C. pneumoniae.
SEQ ID NO: 230 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 42-61 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 231 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 46-65 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 232 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 51-70 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 233 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 56-75 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 234 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 61-80 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 235 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido Swib 66-87 de C. pneumoniae. SEQ ID NO: 236 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 103-122 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 237 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 108-127 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 238 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 113-132 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 239 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 118-137 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 240 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 123-143 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 241 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 128-147 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 242 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 133-152 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 243 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 137- 156 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 244 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 142-161 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 245 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 147-166 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 246 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 152-171 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 247 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 157-176 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 248 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 162-181 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 249 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 167-186 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 250 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 171 -190 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 251 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 171 -186 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 252 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 175-186 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 252 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido OMCB 175-186 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 253 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptido OMCB 185-198 de C. trachomatis.
SEQ ID NO: 254 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 96- 1 1 5 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 255 es la secuencia de aminoácidos determinada para el póptído TSA 101 - 120 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 256 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 106-125 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 257 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 1 1 1 - 1 30 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 258 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 1 16- 1 35 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 25T es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 121 - 140 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 260 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 126-145 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 261 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 131 - 1 50 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 262 es la secuencia de aminoácidos determinada para el péptido TSA 136- 1 55 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 263 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el serovar I de gen CT529/Cap 1 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 2T4 es la secuencia amino de longitud completa predicha para el serovar I de gen CT529/Cap 1 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 265 es la secuencia de ADN de longitud completa determinada para el serovar K de gen CT529/Cap 1 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 266 es la secuencia amino de longitud completa predicha para el serovar ? de gen CT529/Cap 1 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 267 es la secuencia de ADN determinada para el clon 17-G4-36 de C. trachomatis que comparte homología con el ORF de la subunidad-CT315 beta de polimerasa ARN dirigida por ADN en serD. SEQ ID NO: 268 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia parcial del gen CT016 de C. trachomatis en clon 2E10. SEQ ID NO: 269 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia parcial del gen de sintasa tARN de C. trachomatis en clon 2E10. SEQ ID NO: 270 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia parcial del gen dpX de C. trachomatis en clon 2E10. SEQ ID NO: 271 es una primer secuencia de ADN para el clon Ctl_2gam-30 de C. trachomatis que representa el extremo 5". SEQ ID NO: 272 es una segunda secuencia de ADN para el clon Ctl_2gam-30 de C. trachomatis que representa el extremo 3'. SEQ ID NO: 273 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-28 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 274 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2gam-27 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 275 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-26 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 276 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-24 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 277 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-23 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 278 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2gam-21 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 279 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-18 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 280 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-17 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 281 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-15 de C. trachomatis que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 282 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-15 de C. trachomatis que representa el extremo 3'. SEQ ID NO: 283 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-13 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 284 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-10 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 285 es la secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-8 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 286 es una primer secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-6 de C. trachomatis que representa el extremo 5'. SEQ ID NO: 287 es una segunda secuencia de ADN determinada para el clon Ctl_2gam-6 de C. trachomatis que representa el extremo 3'. SEQ ID NO: 288 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2gam-5 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 289 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2gam-2 de C. trachomatis. SEQ ID NO: 290 es la secuencia de ADN determinada para el clon CtL2gam- 1 de C. trachomatis. SEQ I D NO: 291 es la secuencia de A DN de longitud completa determinada el homólogo C. trachomatis del gen CT529. SEQ I D NO: 292 es la secuencia de aminoácidos de longitud completa predicha para el homólogo C. pneumoniae del gen CT529. SEQ I D NO: 293 es la secuencia de ADN determinada para la secuencia de inserción para clonar el gen pmpG C. trachomatis en el vector de vacuna SKB. SEQ I D NO: 294 es la secuencia de aminoácidos de una estructura de lectura abierta de clon CT603. SEQ I D NO: 295 es la secuencia de aminoácidos de una primer estructura de lectura abierta de clon CT875. SEQ I D NO: 296 es la secuencia de aminoácidos de una segunda estructura de lectura abierta de clon CT875. SEQ I D NO: 297 es la secuencia de aminoácidos de una primer estructura de lectura abierta de clon CT858. SEQ I D NO: 298 es la secuencia de aminoácidos de una segunda estructura de lectura abierta de clon CT858. SEQ I D NO: 299 es la secuencia de aminoácidos de una estructura de lectura abierta de clon CT622. SEQ I D NO: 300 es la secuencia de aminoácidos de una estructura de lectura abierta de clon CT61 0. SEQ I D NO: 301 es la secuencia de aminoácidos de una estructura de lectura abierta de clon CT396. SEQ I D NO: 302 es la secuencia de aminoácidos de una estructura de lectura abierta de clon CT318. SEQ ID NO: 304 es la secuencia de aminoácidos para C. trachomatis, serovar L2 rCt529d-125 que tienen una secuencia de terminal N modificada (6-His tag). SEQ ID NO: 305 es la secuencia de aminoácidos para C. trachomatis, serovar L2 rCt529c1 -125. SEQ ID NO: 306 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la protefna de fusión PmpA(N-term). SEQ ID NO: 307 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpA(N-term). SEQ ID NO: 308 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpA(N-term). SEQ ID NO: 309 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpA(N-term). SEQ ID NO: 310 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpA(C-term). SEQ ID NO: 31 1 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpA(C-term). SEQ ID NO: 312 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpA(C-term). SEQ ID NO: 313 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpA(C-term) . SEQ ID NO: 314 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpF(N-term). SEQ ID NO: 315 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpF(N-term). SEQ ID NO: 316 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpF(N-term). SEQ ID NO: 317 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpF(N-term). SEQ ID NO: 318 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpF(C-term). SEQ ID NO: 319 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpF(C-term). SEQ ID NO: 320 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpF(C-term). SEQ ID NO: 321 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpF(C-term). SEQ ID NO: 322 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpH (CT412) (N-term). SEQ ID NO: 323 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpH(N-term). SEQ ID NO: 324 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpH(N-term). SEQ I D NO: 325 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpH(N-term). SEQ ID NO: 326 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpH (C-term).
SEQ ID NO: 327 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpH(C-term). SEQ ID NO: 328 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpH(C-term). SEQ I D NO: 329 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpH(C-term). SEQ ID NO: 330 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(1 ). SEQ ID NO: 331 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(1 ). SEQ ID NO: 332 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpB(1 ). SEQ I D NO: 333 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpB(1 ). SEQ ID NO: 334 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(2). SEQ ID NO: 335 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(2). SEQ I D NO: 336 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpB(2). SEQ I D NO: 337 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpB(2). SEQ ID NO: 338 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(3). SEQ ID NO: 339 es la carga de inicio antisensible utilizada en - 3T -la síntesis de la proteína de fusión PmpB(3). SEQ I D NO: 340 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpB(3). SEQ I D NO: 341 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpB(3). SEQ ID NO . 342 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(4). SEQ ID NO: 343 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpB(4) . SEQ I D NO: 344 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpB(4). SEQ I D NO: 345 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpB(4). SEQ ID NO: 346 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC( 1 ). SEQ ID NO: 347 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC(1 ) . SEQ I D NO: 348 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpC(1 ). SEQ I D NO: 34T es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpC( 1 ). SEQ I D NO: 350 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC(2). SEQ I D NO: 351 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC(2) .
SEQ ID NO: 352 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpC(2). SEQ ID NO: 353 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpC(2). SEQ ID NO: 354 es la carga de inicio sensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC(3). SEQ ID NO: 355 es la carga de inicio antisensible utilizada en la síntesis de la proteína de fusión PmpC(3). SEQ ID NO: 356 es la secuencia de ADN que codifica la proteína de fusión PmpC(3). SEQ ID NO: 357 es la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión PmpC(3). SEQ ID NO: 358 es la secuencia de ADN de la proteína oppA1 , exenta del primer dominio de trans-membrana. SEQ ID NO: 359 es la secuencia de ADN de longitud completa de CT139. SEQ ID NO: 360 es la secuencia de ADN de longitud completa de ORF-3. SEQ ID NO: 361 es la secuencia de ADN de longitud completa de CT61 1 . SEQ I D NO: 362 es la secuencia de aminoácidos oppA1 que inicia del aminoácido 22. SEQ ID NO: 363 es la secuencia de aminoácidos de CT139. SEQ ID NO: 364 es la secuencia de aminoácidos de ORF-3. SEQ ID NO: 365 es la secuencia de aminoácidos de CT61 1 .
SEQ ID NO: 366 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0275, del gen Chlamydia trachomatis CT190. SEQ ID NO: 367 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0407, del gen Chlamydia trachomatis CT103. SEQ ID NO: 368 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0720, del gen Chlamydia trachomatis CT659. SEQ ID NO: 369 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0716, del gen Chlamydia trachomatis CT660. SEQ ID NO: 370 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0519, del gen Chlamydia trachomatis CT430. SEQ ID NO: 371 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0520, del gen Chlamydia trachomatis CT431. SEQ ID NO: 372 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0078, del gen Chlamydia trachomatis CT318. SEQ ID NO: 373 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0628, del gen Chlamydia trachomatis CT509. SEQ ID NO: 374 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0540, del gen Chlamydia trachomatis CT414. SEQ I D NO: 375 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, pmp20, del gen Chlamydia trachomatis CT413. SEQ I D NO: 376 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0081 , del gen Chlamydia trachomatis CT315. SEQ ID NO: 377 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0761 , del gen Chlamydia trachomatis CT610. SEQ ID NO: 378 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0557, del gen Chlamydia trachomatis CT443. SEQ ID NO: 379 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0833, del gen Chlamydia trachomatis CT557. SEQ ID NO: 380 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0134, del gen Chlamydia trachomatis CT604. SEQ ID NO: 381 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0388, del gen Chlamydia trachomatis CT042. SEQ ID NO: 382 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn1028, del gen Chlamydia trachomatis CT376. SEQ I D NO: 383 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0875, del gen Chlamydia trachomatis CT734. SEQ I D NO: 384 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0908, del gen Chlamydia trachomatis CT764. SEQ I D NO: 385 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0728, del gen Chlamydia trachomatis CT622. SEQ ID NO: 386 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae , CPn0275, del gen Chlamydia trachomatis CT190. SEQ ID NO: 387 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0407, del gen Chlamydia trachomatis CT103. SEQ ID NO: 388 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0720, del gen Chlamydia trachomatis CT659. SEQ ID NO: 389 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0716, del gen Chlamydia trachomatis CT660. SEQ I D NO: 390 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0519, del gen Chlamydia trachomatis CT430.
SEQ ID NO: 391 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0520, del gen Chlamydia trachomatis CT431. SEQ ID NO: 392 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0078, del gen Chlamydia trachomatis CT318. SEQ ID NO: 393 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0628, del gen Chlamydia trachomatis CT509. SEQ ID NO: 394 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0540, del gen Chlamydia trachomatis CT414. SEQ ID NO: 395 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, pmp20, del gen Chlamydia trachomatis CT413. SEQ ID NO: 396 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0081 , del gen Chlamydia trachomatis CT315. SEQ ID NO: 397 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0761 , del gen Chlamydia trachomatis CT610. SEQ ID NO: 398 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0557, del gen Chlamydia trachomatis CT443. SEQ ID NO: 39T establece la secuencia de aminoácidos para T? homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0833, del gen Chlamydia trachomatis CT557. SEQ ID NO: 400 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0134, del gen Chlamydia trachomatis CT604. SEQ ID NO: 401 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0388, del gen Chlamydia trachomatis CT042. SEQ ID NO: 402 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn1028, del gen Chlamydia trachomatis CT376. SEQ ID NO: 403 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0875, del gen Chlamydia trachomatis CT734. SEQ ID NO: 404 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0908, del gen Chlamydia trachomatis CT764. SEQ ID NO: 405 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumoniae, CPn0728, del gen Chlamydia trachomatis CT622. SEQ ID NO: 406 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT287. SEQ ID NO: 407 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT858. SEQ ID NO: 408 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT764. SEQ ID NO: 409 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT734. SEQ ID NO: 410 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT660. SEQ ID NO: 41 1 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT659. SEQ ID NO: 412 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT622. SEQ ID NO: 413 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT61 0. SEQ ID NO: 414 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT604. SEQ I D NO: 415 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT557. SEQ ID NO: 416 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT509. SEQ ID NO: 417 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT443. SEQ ID NO: 418 establece la secuencia de A DN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT431 . SEQ ID NO: 419 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT430. SEQ I D NO: 420 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT414.
SEQ ID NO: 421 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT41 3. SEQ ID NO: 422 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT396. SEQ I D NO: 423 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT376. SEQ ID NO: 424 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT31 8. SEQ ID NO: 425 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT31 5. SEQ ID NO: 426 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT104. SEQ ID NO: 427 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT1 03. SEQ ID NO: 428 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT1 02. SEQ I D NO: 429 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT098. SEQ ID NO: 430 establece la secuencia de ADN de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT042. SEQ I D NO: : 431 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT858. SEQ I D NO: 432 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT764. SEQ I D NO: 433 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT734. SEQ I D NO: 434 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT660. SEQ I D NO: 435 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT659. SEQ I D NO: 436 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT622. SEQ ID NO: 437 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT610. SEQ I D NO: 438 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT804. SEQ I D NO: 439 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT557. SEQ I D NO: 440 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT509. SEQ I D NO: 441 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT443. SEQ I D NO: 442 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT431 . SEQ I D NO: 443 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT430. SEQ ID NO: 444 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT414. SEQ ID NO: 445 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT413.
SEQ ID NO: 446 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT396. SEQ ID NO: 447 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT376. SEQ ID NO: 448 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT318. SEQ ID NO: 449 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT315. SEQ ID NO: 450 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT104. SEQ ID NO: 451 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT103. SEQ ID NO: 452 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT102. SEQ ID NO: 453 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT098. SEQ ID NO: 454 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D de longitud completa del gen Chlamydia trachomatis CT042. SEQ ID NO: 455 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0894, que es el homólogo de CP de CT751 (amn), que se identifica en los clones CTL2-1 y CTL2-5. SEQ ID NO: 456 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0074, que es el homólogo de CP de CT322 (tuf), que se identifica en el clon CTL2-2. SEQ ID NO: 457 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0122, que es el homólogo de CP de CT032 (metG), que se identifica en los clones CTL2gam2, CTL2-3(5') y CTL2-4. SEQ I D NO: 458 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0121 , que es el homólogo de CP de CT031 , que se identifica en el clon CTL2-3(5')(3'). SEQ ID NO: 459 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0120, que es el homólogo de CP de CT030 (gmK) , que se identifica en los clones CTL2-3(3') y CTL2-21 . SEQ ID NO: 460 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0359, que es el homólogo de CP de CT064 (lepA), que se identifica en el clon CTL2gam5. SEQ ID NO: 461 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0414, que es el homólogo de CP de CT265 (accA), que se identifica en el clon CTL2-6. SEQ ID NO: 462 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0413, que es el homólogo de CP de CT264 (msbA), que se identifica en el clon CTL2-6. SEQ ID NO: 463 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0394, que es el homólogo de CP de CT256 que se identifica en los clones CTL2gam6(5') y CTL2- 1 1 (5') . SEQ ID NO: 464 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0395, que es el homólogo de CP de CT257 que se identifica en los clones CTL2gam6(5') y CTL2- 1 1 (5'). SEQ I D NO: 465 corresponde a la secuencia de A DN de CPn0487, que es el homólogo de CP de CT384 que se identifica en los clones CTL2gam6(3') y CTL2-11(3'). SEQ ID NO: 4T6 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0592, que es el homólogo de CP de CT473, que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 467 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0593, que es el homólogo de CP de CT474, que se identifica en el clon CTL2-8D. SEQ ID NO: 4T8 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0197, que es el homólogo de CP de CT139 (oppA1), que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 469 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0363, que es el homólogo de CP de CT060 (flhA), que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 470 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0301, que es el homólogo de CP de CT242, que se identifica en el clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 471 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0302, que es el homólogo de CP de CT243 (1pxD), que se identifica en el clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 472 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0324, que es el homólogo de CP de CT089 (IcrE), que se identifica en los clones CTL2-9, CTL2gam1, CTL2gam17 y CTL2-19(5'). SEQ ID NO: 473 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0761, que es el homólogo de CP de CT610, que se identifica en el clon CTL2-10(5')(3').
SEQ ID NO: 474 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0760, que es el homólogo de CP de CT61 1 , que se identifica en el clon CTL2-10(5'). SEQ ID NO: 475 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0329, que es el homólogo de CP de CT154, que se identifica en los clones CTL2gam10 y CTL2gam21 . SEQ I D NO: 476 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0990, que es el homólogo de CP de CT833 (infC), que se identifica en el clon CTL2-I2. SEQ ID NO: 477 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0984, que es el homólogo de CP de CT827 (nrdA), que se identifica en los clones CTL2-16(3') y CTL2gam 15(3'). SEQ ID NO: 478 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0985, que es el homólogo de CP de CT828 (nrdB), que se identifica en los clones CTL2-16(3') y CTL2gam15(3'). SEQ ID NO: 479 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0349, que es el homólogo de CP de CT067 (ytgA), que se identifica en el clon CTL2gam 18. SEQ ID NO: 480 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0325, que es el homólogo de CP de CT088 (sycE), que se identifica en el clon CTL2-19(5'). SEQ ID NO: 481 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0326, que es el homólogo de CP de CT087 (malQ), que se identifica en el clon CTL2-19(5') . SEQ ID NO: 482 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0793, que es el homólogo de CP de CT588 (rbsu) , que se identifica en el clon CTL2gam23. SEQ ID NO: 483 corresponde a la secuencia de ADN de CPn01 99, que es el homólogo de CP de CT199 (oppB1 ) , que se identifica en el clon CTL2gam24. SEQ ID NO: 484 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0666, que es el homólogo de CP de CT545 (dnaE), que se identifica en el clon CTL2-24. SEQ ID NO: 485 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0065, que es el homólogo de CP de CT288, que se identifica en el clon CTL2gam27. SEQ ID NO: 486 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0444, que es el homólogo de CP de CT41 3 (pmpB) , que se identifica en el clon CTL2gam30(5')(3'). SEQ I D NO: 487 corresponde a la secuencia de ADN de CPn- ORF5, que es el homólogo de CP de CT-ORF3, que se identifica en los clones CTL2gam 15(5'), CTL2- 16(5'), CTL2- 18(5') y CTL2-23. SEQ I D NO: 488 corresponde a la secuencia de ADN de CPn-ORF6, que es el homólogo de CP de CT-ORF4, que se identifica en el clon CTL2- 1 8(3'). SEQ I D NO: 489 corresponde a la secuencia de ADN de CP-ORF7, que es el homólogo de CP de CT-ORF5, que se identifica en el clon CTL2- 18(3'). SEQ I D NO: 490 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0894, que es el homólogo de CP de CT751 (amn) , que se identifica T? los clones CTL2- 1 y CTL2-5. SEQ I D NO: 491 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0074, que es el homólogo de CP de CT322 (tuf) , que se identifica en el clon CTL2-2. SEQ I D NO: 492 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0122 , que es el homólogo de CP de CT032 (metG), que se identifica en los clones CTL2gam2, CTL2-3(5') y CTL2-4. SEQ I D NO: 493 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0121 , que es el homólogo de CP de CT031 , que se identifica en el clon CTL2-3(5')(3') . SEQ I D NO: 494 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0120, que es el homólogo de CP de CT030 (gm K), que se identifica en los clones CTL2-3(3') y CTL2-21 . SEQ I D NO: 495 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0359, que es el homólogo de CP de CT064 (IepA), que se identifica en el clon CTL2gam5. SEQ ID NO: 496 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0414, que es el homólogo de CP de CT265 (accA) , que se identifica en el clon CTL2-6. SEQ I D NO: 497 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0413, que es el homólogo de CP de CT264 (msbA), que se identifica en el clon CTL2-6. SEQ I D NO: 498 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0394, que es el homólogo de CP de CT256 que se identifica en los clones CTL2gam6(5') y CTL2-1 1 (5') .
SEQ ID NO: 499 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0395, que es el homólogo de CP de CT257 que se identifica en los clones CTL2gam6(5') y CTL2-11(5'). SEQ ID NO: 500 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0487, que es el homólogo de CP de CT384 que se identifica en los clones CTL2gam6(3') y CTL2-11(3'). SEQ ID NO: 501 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0592, que es el homólogo de CP de CT473, que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 502 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0593, que es el homólogo de CP de CT474, que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 503 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0197, que es el homólogo de CP de CT139 (oppA1), que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 504 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0363, que es el homólogo de CP de CT060 (flhA), que se identifica en el clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 505 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0301, que es el homólogo de CP de CT242, que se identifica en el clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 506 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0302, que es el homólogo de CP de CT243 (1pxD), que se identifica en el clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 507 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0324, que es el homólogo de CP de CT089 (IcrE), que se identifica en los clones CTL2-9, CTL2gam1, CTL2gam17 y CTL2-19(5'). SEQ ID NO: 508 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0761, que es el homólogo de CP de CT610, que se identifica en el clon CTL2-10(5')(3'). SEQ ID NO: 509 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0760, que es el homólogo de CP de CT611, que se identifica en el clon CTL2-10(5'). SEQ ID NO: 510 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0329, que es el homólogo de CP de CT154, que se identifica en los clones CTL2gam10 y CTL2gam21. SEQ ID NO: 511 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0990, que es el homólogo de CP de CT833 (infC), que se identifica en el clon CTL2-I2. SEQ ID NO: 512 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn-ORF5, que es el homólogo de CP de CT ORF3, que se identifica en los clones CTL2gam 5(5"), CTL2-16(5'), CTL2-18(5') y CTL2-23. SEQ ID NO: 513 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0984, que es el homólogo de CP de CT827 (nrdA), que se identifica en los clones CTL2-16(3') y CTL2gam15(3'). SEQ ID NO: 514 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0985, que es el homólogo de CP de CT828 (nrdB), que se identifica en los clones CTL2-16(3') y CTL2gam15(3I). SEQ ID NO: 515 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0349, que es el homólogo de CP de CT067 (ytgA), que se identifica ß? el clon CTL2gam 18. SEQ ID NO: 516 corresponde a la secuencia de ADN de CPn-ORF6, que es el homólogo de CP de CT-ORF4, que se identifica en el clon CTL2- 18(3'). SEQ ID NO: 51 7 corresponde a la secuencia de ADN de CP- ORF7, que es el homólogo de CP de CT-ORF5, que se identifica en el clon CTL2- 18(3'). SEQ ID NO: 518 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0326, que es el homólogo de CP de CT087 (malQ), que se identifica en el clon CTL2-19(5') . SEQ I D NO: 519 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0325, que es el homólogo de CP de CT088 (sycE), que se identifica en el clon CTL2- 1 9(5'). SEQ I D NO: 520 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0793, que es el homólogo de CP de CT588 (rbsu), que se identifica en el clon CTL2gam23. SEQ I D NO: 521 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0199, que es el homólogo de CP de CT199 (oppB 1 ) , que se identifica en el clon CTL2gam24. SEQ I D NO: 522 corresponde a la secuencia de aminoácidos de CPn0666, que es el homólogo de CP de CT545 (dnaE) , que se identifica en el clon CTL2-24. SEQ I D NO: 523 corresponde a la secuencia de A DN de CPn0065, que es el homólogo de CP de CT288, que se identifica en el clon CTL2gam27.
SEQ ID NO: 524 corresponde a la secuencia de ADN de CPn0444, que es el homólogo de CP de CT413 (pmpB) , que se identifica en el clon CTL2gam30(5')(3'). SEQ ID NO: 525 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homologa a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT751 (amn) identificada de los clones CTL2-1 y CTL2-5. SEQ ID NO: 526 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT322 (tuff) identificada en el clon CTL2-2. SEQ I D NO: 527 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT032 (metG) identificada de los clones CTL2gam2 , CTL2-3(5') y CTL2-4. SEQ I D NO: 528 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT031 identificada del clon CTL2-3(5')(3') . SEQ ID NO: 529 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT030 (gmK) identificada de los clones CTL2-3(3') y CTL2-21 . SEQ I D NO: 530 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT064 (lepA) identificada del clon CTL2gam5. SEQ ID NO: 531 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT265 (accA) identificada del clon CTL2-6. SEQ I D NO: 532 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homologa a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT624 (msbA) identificada de los clones CTL2-6. SEQ I D NO: 533 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT256 identificada de los clones CTL2gam6(5') y CTL2-1 1 (5') . SEQ ID NO: 534 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT257 identificada de los clones CTL2gam6(5') y CTL2-1 1 (5') . SEQ I D NO: 535 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT384 identificada de los clones CTL2gam6(3') y CTL2-1 1 (3') . SEQ I D NO: 536 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT473 identificada del clon CTL2-8b. SEQ I D NO: 537 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT474 identificada de los clones CTL2-8b. SEQ ID NO: 538 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT139 (oppA1 ) identificada de los clones CTL2-8b.
SEQ ID NO: 539 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT060 (flhA) identificada del clon CTL2-8b. SEQ ID NO: 540 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT242 identificada del clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 541 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT243 (1 pxD) identificada del clon CTL2gam8. SEQ ID NO: 542 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT089 identificada de los clones CTL2-9, CTL2gam 1 , CTL2gam 17 y CTL2- 19(5') . SEQ ID NO: 543 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT610 identificada del clon CTL2- 10(5')(3'). SEQ I D NO: 544 establece la secuencia de A DN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT61 1 identificada del clon CTL2- 10(5'). SEQ I D NO: 545 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT154 identificada de los clones CTL2gam10 y CTL2gam21 . SEQ I D NO: 546 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT833 (infC) identificada del clon CTL2-I2. SEQ ID NO: 547 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT827 (nrdA) identificada de los clones CTL2-16(3') y CTL2gam 1 5(3') . SEQ ID NO: 548 establece la secuencia de A DN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT828 (nrd B) identificada de los clones CTL2- 16(3') y CTL2gam 15(3') . SEQ ID NO: 549 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT067 (ytgA) identificada del clon CTL2gam 18. SEQ I D NO: 550 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT088 (sycE) identificada del clon CTL2- 19(5') . SEQ I D NO: 551 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT087 identificada del clon CTL2-19(5'). SEQ I D NO: 552 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT588 (rbsu) identificada del clon CTL2gam23. SEQ I D NO: 553 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CP de CT199 (oppB 1 ) identificada del clon CTL2gam24. SEQ I D NO: 554 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CP de CT545 (dnaE) identificada del clon CTL2-4. SEQ ID NO: 555 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CP de CT288 identificada de los clones CTL2gam27. SEQ ID NO: 556 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT413 (pmpB) identificada del clon CTL2gam30(5')(3"). SEQ ID NO: 557 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT-ORF3 identificada de los clones CTL2gam 15(5') , CTL2- 16(5'), CTL2-18(5') y CTL2-23. SEQ I D NO: 558 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para pCT-ORF4 identificada del clon CTL2-18(3') . SEQ I D NO: 559 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT-ORF5 identificada del clon CTL2-1 8(3') . SEQ I D NO: 560 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT751 (amn) identificada de los clones CTL2- 1 y CTL2-5. SEQ ID NO: 561 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT322 (tuff) identificada en el clon CTL2-2.
SEQ ID NO: 562 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homologa a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT032 (metG) identificada de los clones CTL2gam2, CTL2-3(5') y CTL2-4. SEQ I D NO: 563 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT031 identificada del clon CTL2-3(5")(3'). SEQ I D NO: 564 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT030 (gmK) identificada de los clones CTL2-3(3') y CTL2-21 . SEQ I D NO: 565 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT064 (lepA) identificada del clon CTL2gam5. SEQ I D NO: 566 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT265 (accA) identificada del clon CTL2-6. SEQ ID NO: 567 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT624 (msbA) identificada de los clones CTL2-6. SEQ ID NO: 568 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT256 identificada de los clones CTL2gam6(5') y CTL2- 1 1 (5') - SEQ ID NO: 5T9 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homologa a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT257 identificada de los clones CTL2gam6(5') y CTL2- 1 1 (5') . SEQ I D NO: 570 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homologa a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT384 identificada de los clones CTL2gam6(3') y CTL2- 1 1 (3') . SEQ I D NO: 571 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT473 identificada del clon CTL2-8b. SEQ I D NO: 572 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT474 identificada de los clones CTL2-8b. SEQ I D NO: 573 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT1 39 (oppA I ) identificada de los clones CTL2-8b. SEQ I D NO: 574 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT060 (flhA) identificada del clon CTL2-8b. SEQ I D NO: 575 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT242 identificada del clon CTL2gam8. SEQ I D NO: 576 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT243 (1 pxD) identificada del clon CTL2gam8. SEQ I D NO: 577 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT089 identificada de los clones CTL2-9, CTL2gam1 , CTL2gam 17 y CTL2- 19(5') . SEQ ID NO: 578 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT610 identificada del clon CTL2- 1 0(5')(3') . SEQ I D NO: 579 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT61 1 identificada del clon CTL2- 10(5') . SEQ I D NO: 580 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT154 identificada de los clones CTL2gam 10 y CTL2gam21 . SEQ I D NO: 581 establece la secuencia de aminoácidos de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT833 (infC) identificada del clon CTL2-I2. SEQ I D NO: 582 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT-ORF3 identificada de los clones CTL2gam 15(5') , CTL2- 16(5'), CTL2- 18(5') y CTL2-23. SEQ I D NO: 583 establece la secuencia de A DN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT827 (nrdA) identificada de los clones CTL2- 16(3') y CTL2gam 1 5(3') . SEQ ID NO: 584 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT828 (nrdB) identificada de los clones CTL2- 16(3') y CTL2gam 1 5(3'). SEQ I D NO: 585 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT067 (ytgA) identificada del clon CTL2gam 18. SEQ I D NO: 586 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para pCT-ORF4 identificada del clon CTL2-1 8(3') . SEQ I D NO: 587 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT-ORF5 identificada del clon CTL2-18(3'). SEQ ID NO: 588 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CT087 identificada del clon CTL2- 19(5'). SEQ I D NO: 589 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT088 (sycE) identificada del clon CTL2- 1 9(5') . SEQ I D NO: 590 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT588 (rbsu) identificada del clon CTL2gam23. SEQ I D NO: 591 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CP de CT199 (oppB1 ) identificada del clon CTL2gam24. SEQ ID NO: 592 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CP de CT545 (dnaE) identificada del clon CTL2-4. SEQ ID NO: 593 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV II C. trachomatis para CP de CT288 identificada de los clones CTL2gam27. SEQ ID NO: 594 establece la secuencia de ADN de serovar D C. trachomatis de longitud completa homóloga a la secuencia LGV I I C. trachomatis para CT413 (pmpB) identificada del clon CTL2gam30(5')(3'). SEQ ID NO. 595 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumonía, CPn0406, del gen Chlamydia trachomatis CT102. SEQ ID NO. 596 establece la secuencia de ADN para el homólogo de Chlamydia pneumonía, CPn0315, del gen Chlamydia trachomatis CT098. SEQ ID NO. 597 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumonía, CPn0406, del gen Chlamydia trachomatis CT102. SEQ ID NO. 598 establece la secuencia de aminoácidos para el homólogo de Chlamydia pneumonía, CPn0315, del gen Chlamydia trachomatis CT098. SEQ ID NO: 599 establece la secuencia de aminoácidos para proteína CT287 de serovar D Chlamydia trachomatis.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra la inducción de I FN-? de una estirpe T específica de Chlamydia activada por células objetivo que expresan el clon 4C9- 1 8#2. La Figura 2 ilustra vectores retrovirales pBIB-KS 1 , 2,3 modificados para contener un sitio de iniciación de traducción Kosak y codones de detención . La Figura 3 muestra lisis específica en análisis de liberación de cromo de células P81 5 impulsadas con péptidos Chlamydia CtC7.8-12 (SEQ I D NO: 18) y CtC7.8- 1 3 (SEQ ID NO: 19) . La Figura 4 muestra concentraciones de isotipo de anticuerpo en ratones C57B 1 /6 inmunizados con proteína SWIB C. trachomatis. La Figura 5 muestra respuestas proliferativas de la célula T específica de Chlamydia en esplenocitos de ratones C3H inmunizados con proteína SWI B C. trachomatis. La Figura 6 ilustra las secuencias de carga de inicio 5' y 3' designadas de C. pneumonlae que se utilizan para aislar los genes SWI B y S13 de C. pneumoniae. Las Figuras 7A y 7B muestran inducción de I FN-? de una estirpe T anti-c j/amyoVa humana (TLC-8) capaz de reaccionar con C. trachomatis y C. pneumonía en la activación de células dendríticas derivadas de monocito que expresan proteínas clamidlales. La Figura 8 muestra la identificación de epítopos de célula T en proteína S13 ribosomal Clamidial con estirpe T TCL 8 EB/DC. Las Figuras 9A y B ilustran la respuesta proliferativa de cólulas T CP-21 generadas contra células dendríticas infectadas con C. pneumoniae para proteína SWI B C. pneumonía recombinante, pero no proteína SWI B C. trachomatis. La Figura 1 0 muestra las respuestas proliferativas SWI B específicas de C. trachomatis de una estirpe 7 primaria (TCT-10 EB) de un donador asintomático. La Figura 1 1 ilustra la identificación del epítopo de célula T en SWI B C. trachomatis con una estirpe T específica de antígeno (TCL-1 0 EB). La Figura 12 muestra las respuestas proliferativas específicas de C. trachomatis de estirpes T primarias generadas de dos pacientes contra antígenos específicos CT CT622 , CT875 y CT EB.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se observa arriba, la presente invención se dirige generalmente a composiciones y métodos para el diagnóstico y tratamiento de infección Clamidial. En un aspecto, las composiciones de la invención sujeto incluyen polipéptidos que comprenden al menos una porción inmunogénica de un antígeno Chlamydia, o una variante del mismo. En modalidades específicas, la invención sujeto describe polipéptidos que comprende una porción inmunogénica de un antígeno Chlamydia, en donde el antígeno Chlamydia comprende una secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de polinucleótido descrita en la presente, los complementos de dichas secuencias de nucleótidos, y variantes de tales secuencias.
Como se utiliza en la presente, el término "polipóptido" comprende cadenas de aminoácido de cualquier longitud, incluyendo proteínas de longitud completa (es decir, antígenos), en donde los residuos de aminoácidos se enlazan por uniones de péptido covalentes. De esta manera, un polipóptido que comprende una porción inmunogónica de uno de los antígenos inventivos puede consistir completamente de la porción inmunogénica, o puede contener secuencias adicionales. Las secuencias adicionales pueden derivarse del antígeno Chlamydia nativo o pueden ser heterólogas, y tales secuencias pueden (pero no necesitan) ser imunogónicas. El término "polinucleótido(s)", como se utiliza en la presente, significa un polímero de un solo o doble filamento de bases de ribonucleótido o deoxiribonucleótido e incluye ADN y moléculas de ARN correspondientes, incluyendo moléculas mARN y HnARN, ambas filamentos anti-sensibles y sensibles, y comprende cADN, ADN genómico y ADN recombinante, así como también polinucleótidos completa o parcialmente sintetizados. Una molécula HnARN contiene intrones y corresponde a una molécula de ADN en una manera generalmente una a una. Una molécula mARN corresponde a una molécula ADN y HnARN de la cual se han cortado los intrones. Un polinucleótido puede consistir de un gen entero, o cualquier porción del mismo. Los polinucleótidos anti-sensibles operables pueden comprender un fragmento del polinucleótido correspondiente, y la definición de "polinucleótido" por lo tanto incluye tales fragmentos antisensibles operables. Una "porción inmunogónica" de un antígeno es una porción que es capaz de reaccionar con sueros obtenidos de un individuo infectado con Chlamydia (es decir, genera una lectura de absorbencia con sueros de individuos infectados que es al menos tres desviaciones estándar arriba de la absorbencia obtenida con sueros de individuos no infectados, en un análisis ELISA representativo descrito en la presente). Tales porciones inmunogónicas generalmente comprenden al menos aproximadamente 5 residuos de aminoácidos, más preferentemente al menos aproximadamente 1 0, y más preferentemente al menos aproximadamente 20 residuos de aminoácidos. Los métodos para preparar e identificar porciones inmunogónicas de antígenos de secuencia conocida se conocen bien en la materia e incluye aquellos resumidos en Paul , Fundamental ¡mmunology, 3rd ed . , Raven Press, 1 993, pp. 243-247 y referencias citadas en la presente. Tales técnicas incluyen elegir polipéptidos por su habilidad para reaccionar con anticuerpos específicos de antígeno, antisueros y/o estirpes T o clones. Como se utiliza en la presente, los antisueros y anticuerpos son "específicos de antígeno" si se unen específicamente a un antígeno (es decir, reaccionan con la proteína en un ELISA u otro imunoanálisis, y no reaccionan detectablemente con proteínas sin relacionar) . Tales antisueros y anticuerpos pueden prepararse como se describe en la presente, y utilizando técnicas bien conocidas. Una porción inmunogénica de una proteína Chlamydia nativa es una porción que reacciona con tales antisueros y/o células T en un nivel que no es substancialmente menor que la reactividad del poiipéptido de longitud completa (por ejemplo, en una ELISA y/o análisis de reactividad de célula T) . Tales porciones inmunogónicas puede reaccionar con tales análisis en un nivel que es similar a o mayor que la reactividad del polipéptido de longitud completa. Tales elecciones pueden realizarse generalmente utilizando métodos bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia, tales como aquellos descritos en Harlow and Lañe , Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Por ejemplo, un polipéptido puede inmovilizarse en un soporte sólido y contactarse con sueros del paciente para permitir la unión de anticuerpos dentro de los sueros al polipéptido inmovilizado. Los sueros sin unir pueden removerse entonces y los anticuerpos unidos detectados utilizando, por ejemplo, Proteína A marcada con 126l . Ejemplos de porciones inmunogénicas de antígenos contemplados por la presente invención incluyen, por ejemplo, los epítopos que estimulan la célula T proporcionados en SEQ I D NO: 9, 1 0, 18, 1 9, 31 , 39, 93-96, 98, 100-102 , 106, 108, 138- 140, 158, 167, 168, 246, 247 y 254-256. Los polipéptidos que comprenden al menos una porción inmunogénica de uno o más antígenos Chlamydia como se describe en la presente pueden generalmente utilizarse, solos o en combinación , para detectar infección Clamidial en un paciente. Las composiciones y métodos de la presente invención también comprenden variantes de los polipéptidos anteriores y moléculas de polinucleótido. Tales variantes incluyen , pero no se limitan a, variantes alélicas que ocurren naturalmente de las secuencias inventivas. En particular, las variantes incluyen otros serovares Chlamydiae, tales como serovores D, E y F, así como también varios serovares LGV que comparten homología con el polipéptido inventivo y moléculas de polinucleótido descritas en la presente. Preferentemente, los homólogos de serovar muestran 95-99% de homología con la(s) secuencia(s) de polipéptido correspondiente(s) descrita(s) en la presente. Un polipéptido "variante", como se utiliza en la presente, es un polipéptido que difiere del polipéptido recitada solamente en substituciones y/o modificaciones conservadoras, de manera que las propiedades antigénicas del polipéptido se retienen. En una modalidad preferida, los polipéptidos variantes difieren de una secuencia identificada por substitución, eliminación o adición de cinco aminoácidos o menos. Tales variantes pueden identificarse generalmente al modificar una de las secuencias de polipéptido anteriores, y evaluar las propiedades antigénicas del polipéptido modificado utilizando, por ejemplo, los procedimientos representativos descritos en la presente. En otras palabras, la habilidad de una variante para reaccionar con antisueros específicos de antígeno puede aumentarse o no cambiarse, relativa a la proteína nativa, o puede disminuirse por menos de 50%, y preferentemente menos de 20%, relativa a la proteína nativa. Tales variantes pueden identificarse generalmente al modificar una de las secuencias de polipéptidos de arriba y evaluar la reactividad del polipéptido modificado con antisueros o anticuerpos específicos de antígeno como se describe en la presente. Las variantes preferidas incluyen aquellas en las cuales una o más porciones, tales como una secuencia guía de termina N o dominio de transmembrana, se han removido. Otras variantes preferidas incluyen variantes en las cuales una porción pequeña (por ejemplo, 1-30 aminoácidos, preferentemente 5-15 aminoácidos) se ha removido de la terminal N y/o C de la proteína madura. Como se utiliza en la presente, una "substitución conservativa" es una en la cual un aminoácido se substituye por otro aminoácido que tiene propiedades similares, de manera que un experto en la materia de química de póptido esperaría la estructura secundaria y naturaleza hidrofática del polipéptido para no cambiarse substancialmente. Las substituciones de aminoácido pueden hacerse generalmente en la base de similitud en polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicidad, hidrofilicidad y/o la naturaleza anfifática de los residuos. Por ejemplo, los aminoácidos cargados negativamente incluyen ácido aspártico y ácido glutámico; los aminoácidos cargados positivamente incluyen lisina y arginina; y aminoácidos con grupos superiores polares sin cargas que tienen valores de hidrofilicidad similares incluyen leucina, isoleucina y valina; glicina y alanina; asparagina y glutamina; y serina, treonina, fenilalanina y tirosina. Otros grupos de aminoácidos que pueden representan cambios conservativos incluyen: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; y (5) phe, tyr, trp, his. Una variante también puede, o alternativamente, contener cambios no conservativos. En una modalidad preferida, los polipéptidos variantes difieren de una secuencia nativa por substitución, eliminación o adición de cinco aminoácidos o menos. Las variantes también (o alternativamente) pueden modificarse por, por ejemplo, la eliminación o adición de aminoácidos que tienen influencia mínima en la inmunogenicidad, estructura secundaria y naturaleza hidrofática del polipéptido. Las variantes también pueden, o alternativamente, contener otras modificaciones, incluyendo la eliminación o adición de aminoácidos que tienen influencia mínima en las propiedades antigénicas, estructura secundaria y naturaleza hidrofática del polipéptido. Por ejemplo, un polipéptido puede conjugarse con una secuencia de señal (guía) en el extremo de terminal N de la proteína que se dirige co-translacional o post-translacionalmente la transferencia de la proteína . El polipéptido puede conjugarse a un enlazador u otra secuencia para facilidad de síntesis, purificación o identificación del polipéptido (por ejemplo, poli-His), o para aumentar la unión del polipéptido al soporte sólido. Por ejemplo, un polipéptido puede conjugarse con una región Fe de inmunoglobulina. U n polinucleótido "variante" es una secuencia que difiere de la secuencia de nucleótidos recitada en que tiene una o más eliminaciones, substituciones o adiciones de nucleótido, de manera que la inmunogenicidad del polipéptido codificado no se disminuye, relativa a la proteína nativa. El efecto en la inmunogenicidad del polipéptido codificado puede valorarse generalmente como se describe en la presente. Tales modificaciones pueden introducirse fácilmente utilizando técnicas de mutagénesis estándar, tal como mutagénesis específica del sitio dirigido por oligonucleótido como se enseña, por ejemplo, por Adelman et al., {DNA, 2. 1 83, 1 983). Las variantes de nucleótido pueden ser variantes alélicas que ocurren naturalmente como se trata abajo, o variantes que no ocurren naturalmente. Los polipéptidos proporcionados por la presente invención incluyen variantes que se codifican por secuencias de polinucleótidos que son substancialmente homólogas a una o más de las secuencias de polinucleótidos específicamente citadas en la presente.
"Homología substancial", como se utiliza en la presente, se refiere a secuencias de polinucleótidos que son capaces de hibridizarse bajo condiciones moderadamente exigentes. Las condiciones moderadamente exigentes adecuadas incluyen prelavar en una solución de 5X SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0); hibridizar a 50°C-65eC. 5X SSC, durante la noche o, en el vaco de homología de especies cruzadas; a 45eC con 0.5X SSC; seguido por lavar dos veces a 65°C por 20 minutos con cada uno de 2X, 0.5X y 0.2X SSC que contienen 0.1 % SDS. Tales secuencias de polinucleótidos de hibridización también se encuentran dentro del alcance de esta invención, como lo están las secuencias de nucleótidos que, debido a la degeneración de código, codifican un polipóptido que es el mismo que un polipóptido de la presente invención. Dos secuencias de polipéptidos o nucleótidos se dice que son "idénticas" si la secuencia de nucleótidos o residuos de aminoácidos en las dos secuencias es la misma cuando se alinea para correspondencia máxima como se describe abajo. La comparación entre dos secuencias se realiza típicamente al comparar las secuencias sobre una ventana de comparación para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una "ventana de comparación" como se utiliza en la presente, se refiere a un segmento de al menos aproximadamente 20 posiciones contiguas, usualmente 30 a aproximadamente 75, 40 a aproximadamente 50, en las cuales una secuencia puede compararse con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de que dos secuencias se alinean óptimamente. La alineación óptima de secuencias para su comparación puede conducirse utilizando el programa Megalign en la suite Lasergen de software de bioinformática (DNASTAR, Inc., Madison, Wl), utilizando parámetros de falla. Ese programa incluye varios esquemas descritos en las siguientes referencias: Dayhoff, M.O. (1978) A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distan relationships. En Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, Natinal Biomedical Research Foundation. Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein . (1990) Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp.626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M. (1989) Fast and sensitivo múltiple sequence alignments on a microcomputer CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W. (1988) Optimal alignments in linear space CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D. (1971) Comb. Theor 77:105; Santou, N. Nes, M. (1987) The neighbor joining method. A new method for reconstructing phylogenetic tress Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R. (1973) Numerical Taxonomy - the Principies and Practico of Numérica! Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J. (1983) Rapid similarity searches of nucleic acid and protein data banks Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80:726-730. Alternativamente, la alineación óptima de secuencias para su comparación puede conducirse por el algoritmo de identidad lógica de Smith and Waterman (1981) Add. APL. Math 2:482, por el algoritmo de alineación de identidad de Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, por la búsqueda de métodos de similitud de Pearson and Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. (U.S. A) 85:2444, por implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, and TFASTA en Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG) , 575 Science Dr. , Madison , Wl), o por inspección . U n ejemplo ilustrativo de algoritmos que son adecuados para determinar el por ciento de identidad de secuencia y similitud de secuencia son los algoritmos BLAST y BLAST 2.0 , que se describen en Altschul er al. , (1 977) Nuc. Acids. Res. 25: 3389-3402 y Altschul et al., (1 990) J . Mol . Biol. 21 5:403-410, respectivamente. BLAST y BLAST 2.0 pueden utilizarse, por ejemplo con los parámetros descritos en la presente, para determinar el por ciento de identidad de secuencia para los polinucleótidos y polipéptidos de la invención. El software para realizar análisis BLAST se encuentra públicamente disponible a través del National Center for Biotechnology Information (http://www. ncbi.nlm. nih.gov/) . En un ejemplo ilustrativo, las puntuaciones acumulativas pueden calcularse utilizando, para secuencias de nucleótidos, los parámetros M (puntuación de recompensa para un par de residuos de acoplamiento; siempre >0) y N (puntuación de penalidad para residuos sin acoplamiento; siempre <0) . Para secuencias de aminoácidos, una matriz de puntuación puede utilizarse para calcular la puntuación acumulativa. La extensión de los aciertos de palabra en cada dirección se interrumpen cuando: la puntuación de alineación acumulativa cae por la cantidad X de su valor máximo logrado; la puntuación acumulativa va a cero o por debajo, debido a la acumulación de una o más alineaciones de residuo de puntuación negativa; o el final de cualquier secuencia se alcanza. Los parámetros de algoritmo BLAST W, T y X determinan la sensibilidad y velocidad de la alineación. El programa BLASTN (para secuencias de nucleótidos) utiliza como falla una longitud de palabra (W) DE 11 , y expectación (E) de 10, y alineación de matriz de puntuación BLOSU 62 (ver Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 1091 5), (B) de 50, expectación (E) de 10, M=5, N=4 y una comparación de ambos filamentos. Preferentemente, el "porcentaje de identidad de secuencia" se determina al comparar dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación de al menos 20 posiciones, en donde la porción del polinucleótido o secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, espacios) de 20 por ciento o menos, usualmente 5 a 15 por ciento, o 10 a 12 por ciento, en comparación con las secuencias de referencia (que no comprende adiciones o eliminaciones) para alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje se calcula al determinar el número de posiciones en las cuales las bases de ácido nucleico idénticas o residuo de aminoácido ocurren en ambas secuencias para producir el número de posiciones acopladas, dividiendo el número de posiciones acopladas por el número total de posiciones en la secuencia de referencia (es decir, el tamaño de ventana) y multiplicando los resultados por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia. Por lo tanto, la presente invención proporciona secuencias de polipéptidos y polinucleótidos que tienen identidad substancial a las secuencias descritas en la presente, por ejemplo, aquellas que comprenden al menos 50% o más de identidad de secuencia, preferentemente, al menos 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ó 99% o más, identidad de secuencia en comparación con una secuencia de polipéptidos o polinucleótidos de esta invención utilizando los métodos descritos en la presente, (por ejemplo, análisis BLAST utilizando parámetros estándar, como se describe abajo). Un experto en la materia reconocerá que estos valores pueden ajustarse apropiadamente para determinar la identidad correspondiente de proteínas codificadas por dos secuencias de polinucleótidos al tomar en cuenta degeneración de codón, similitud de aminoácido, colocación de la estructura de lectura y lo similar. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona polipéptidos o polinucleótidos aislados que comprenden varias longitudes de estiramientos contiguos de la secuencia idéntica a o complementaria a una o más de las secuencias descritas en la presente. Por ejemplo, los polinucleótidos y polipéptidos comprendidos por esta invención pueden comprender al menos aproximadamente 15, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 ó 1000 o más nucleótidos contiguos de una o más de las secuencias descritas, así como también todas las longitudes intermedias entre ellas. Se entenderá fácilmente que las "longitudes intermedias" en este contexto, significan cualquier longitud entre los valores citados, tales como 16, 17, 18, 19, etc. ; 21 , 22, 23, etc. ; 30, 31 , 32, etc. , 50, 51 , 52, 53, etc. ; 100, 101 , 102, 103, etc. , 1 50, 151 , 152, 153, etc. ; incluyendo todos los números enteros de 200-500; 500-1000, y lo similar. Los polinucleótidos de la presente invención, o fragmentos de los mismos, sin considerar la longitud de la secuencia de codificación por sí misma, pueden combinarse con otras secuencias de ADN , tales como promotores, señales de poliadenilación, sitios de enzima de restricción adicionales, sitios de clonación múltiple, otros segmentos de codificación, y lo similar, de manera que su longitud total puede variar considerablemente. Por lo tanto, se contempla que un fragmento de ácido nucleico de casi cualquier longitud puede emplearse, con la longitud total preferentemente limitándose por la facilidad de preparación y uso en el procedimiento de ADN recombinante propuesto. Por ejemplo, segmentos de ADN ilustrativos con longitudes totales de aproximadamente 10,000, aproximadamente 5000, aproximadamente 3000, aproximadamente 2,000, aproximadamente 1 ,000, aproximadamente 500, aproximadamente 200, aproximadamente 100, aproximadamente 50 pares base en longitud, y lo similar (incluyendo todas las longitudes intermediaste contemplan por ser útiles en muchas implementaciones de esta invención. También se incluye en el alcance de la presente invención los alelos de los genes que codifican las secuencias de nucleótidos citadas en la presente. Como se utiliza en la presente, un "alelo" o "secuencia de alelo" es una forma alternativa del gen que puede resultar de al menos una mutación en la secuencia de ácidos nucleicos. Los alelos pueden resultar en mARNs alterados o polipéptidos cuya estructura o función puede o no alterarse. Cualquier gen dado puede tener ninguna, una o muchas formas alélicas. Los cambios mutacionales comunes que dan origen a los alelos se atribuyen generalmente a eliminaciones, adiciones, o substituciones naturales de nucleótidos. Cada uno de estos tipos de cambios puede ocurrir solo o en combinación con los otros, una o más veces en una secuencia dada. En modalidades específicas, la Invención sujeto describe polipéptidos que comprenden al menos una porción inmunogénica de un antígeno Chlamydia (o una variante de tal antígeno) , que comprende una o más secuencias de aminoácidos por (a) una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ I D NO: 358-361 , 407-430, 525-559, 582-598; (b) los complementos de tales secuencias de ADN o (c) secuencias de ADN substancialmente homólogas a una secuencia en (a) o (b) . Como se trata en los Ejemplos de abajo, varios de los antígenos Chlamydia descritos en la presente reconocen una estirpe T que reconoce células dendríticas derivadas de monolito infectadas tanto con Chlamydia trachomatis como Chlamydia pnemoniae. Los antígenos, de esta manera, pueden emplearse en una vacuna tanto para infecciones del tracto genital por C. trachomatis como infecciones por C. pneumonías. La caracterización adicional de estos antígenos Chlamydia de Chlamydia trachomatis y Chlamydia pnemoniae para determinar el grado de reactividad cruzada se proporciona en el Ejemplo 6. Adicionalmente, el Ejemplo 4 describe fragmentos de cADN (SEQ I D NO: 1 5, 1 T y 33) aisladas de C. trachomatis que codifican proteínas (SEQ ID NO: 1 7- 19 y 32) capaces de estimular una estirpe CD8 + T de murino específica de Chlamydia. En general, los antígenos Chlamydia, y secuencias de polinucleótidos que codifican tales antígenos, pueden prepararse utilizando cualquiera de una variedad de procedimientos. Por ejemplo, las moléculas de polinucleótido que codifican antígenos Chlamydia pueden aislarse de una biblioteca de expresión de cADN o genómica Chlamydia al seleccionar con una estirpe T específica de Chlamydia como se describe abajo, y secuenciarse utilizando técnicas bien conocidas por aquellos expertos en la materia. Adicionalmente, un polinucleótido puede identificarse, como se describe en más detalle abajo, al seleccionar un microconjunto de cADNs para expresión asociada con Chlamydia (es decir, expresión que es al menos dos veces mayor en células infectadas con Chlamydia que en controles, como se determina utilizando un análisis representativo proporcionado en la presente). Tales selecciones pueden realizarse utilizando un microconjunto Synteni (Palo Alto, CA) de acuerdo a las instrucciones del fabricante (y esencialmente como se descrie por Schena eí al., Proc. Nati, Acad. Sci. USA 93: 1 0614-1 0619 , 1996 y Heller et el. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:21 50-2155, 1997). Alternativamente, los polipéptidos pueden amplificarse de cADN preparado de células que expresan las proteínas descritas en la presente. Tales polinucleótidos pueden amplificarse a través de reacción en cadena de polimerasa (PCR) . Para este planteamiento, las cargas de inicio específicas de la secuencia pueden diseñarse en base a las secuencias proporcionadas en la presente, y pueden comprarse o sintetizarse. Los antígenos pueden producirse recombinantemente, como se describe abajo, al insertar una secuencia de polinucleótidos que codifican el antígeno en un vector de expresión y expresar el antígeno en un huésped apropiado. Los antígenos pueden evaluarse por una propiedad deseada, tal como la habilidad para reaccionar con sueros obtenidos de un individuo infectado con Chlamydia como se describe en la presente, y pueden secuenciarse utilizando, por ejemplo, química Edman tradicional . Ver Edman and Berg . Eur. J. Biochem. 50: 1 16-132, 1967. Las secuencias de polinucleótidos que codifican antígenos también pueden obtenerse al seleccionar una biblioteca de ADN genómico o cADN Chlamydia apropiado para secuencias de polinucleótidos que se hibridizan para degenerar oligonucleótidos derivados de secuencias de aminoácidos parciales de antígenos aislados. Las secuencias de oligonucleótidos degeneradas para utilizarse en tal selección pueden designarse y sintetizarse, y la selección puede realizarse, como se describe (por ejemplo) en Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratorios, Cold Spring Harbor, NY (y referencias citadas en la presente). La reacción en cadena de polimerasa (PCR) también puede emplearse, utilizando los oligonucleótidos anteriores en métodos bien conocidos en la materia, para aislar una sonda de ácido nucleico de un cADN o biblioteca genómica. La selección de biblioteca puede realizarse entonces utilizando la sonda aislada. Una porción amplificada puede utilizarse para aislar un gen de longitud completa de una biblioteca adecuada (por ejemplo, una biblioteca de ADN Chlamydia) utilizando técnica conocidas. Dentro de tales técnicas, una biblioteca (cADN o genómica) se selecciona utilizando una o más sondas de polinucleótido o cargas de inicio adecuadas para amplificación. Preferentemente, una biblioteca se selecciona por tamaño para incluir moléculas más grandes. Las bibliotecas cargadas aleatorias también pueden preferirse para identificar regiones 5' y aguas arriba de genes.
Las bibliotecas genómicas se prefieren para obtener intrones y secuencias 5' de extensión. Para técnicas de hibridización, una secuencia parcial puede marcarse (por ejemplo, por traducción de corte o marcado final con 32P) utilizando técnicas bien conocidas. Una biblioteca de bacteriófagos o bacteriana se selecciona entonces al hibridizar filtros que contienen colonias bacterianas desnaturalizadas (o céspedes que contienen placas de fago) con la sonda marcada (ver Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Las colonias de hibridización o placas se seleccionan y expanden, y el AND se aisla para análisis adicional. Los clones de cADN pueden analizarse para determinar la cantidad de secuencia adicional por, por ejemplo, PCR utilizando una carga de inicio de la secuencia parcial y una carga de inicio del vector. Los mapas de restricción y secuencias parciales pueden determinarse entonces utilizando técnicas estándar, que pueden incluir el generar una serie de clones de eliminación. Las secuencias de recubrimiento resultantes se ensamblan entonces en una secuencia contigua única. Una molécula de cADN de longitud completa puede generarse al ligar fragmentos adecuados, utilizando técnicas bien conocidas. Alternativamente, existen numerosas técnicas de amplificación para obtener una secuencia de codificación de longitud completa de una secuencia de cADN parcial. Dentro de tales técnicas, la amplificación se realiza generalmente a través de PCR. Cualquiera de una variedad de equipos comercialmente disponibles puede utilizarse para realizar la etapa de amplificación. Las cargas de inicio pueden diseñarse utilizando técnicas bien conocidas en la materia (ver, por ejemplo, Mullís et al. , Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 57:263, 1 987; Erlich ed. , PCR Technology, Stockton Press, NY, 198T) , y software bien conocido en la materia también puede emplearse. Las cargas de inicio son preferentemente de 22-30 nucleótidos en longitud, tienen un contenido GC de al menos 50% y se templan a la secuencia objetivo a temperaturas de aproximadamente 68°C a 72°C. La región amplificada puede secuenciarse como se describe arriba, y las secuencias de recubrimiento ensamblarse en una secuencia contigua . Una técnica de amplificación es PCR inversa (ver Triglia et al., Nucí. Acids Res. f 6:81 86, 1988), que utiliza enzimas de restricción para generar un fragmento en la región conocida del gen. El fragmento se circularía entonces por ligación intramolecular y utiliza como un templado para PCR con cargas de inicio divergentes derivadas de la región conocida. Dentro de un planteamiento alternativo, las secuencias adyacentes a una secuencia parcial pueden recuperarse por amplificación con una carga de inicio a una secuencia enlazadora y una carga de inicio específica para una región conocida. Las secuencias amplificadas se someten típicamente a una segunda vuelta de amplificación con la misma carga de inicio enlazadora y una segunda carga de inicio específica para una región conocida . Una variación en este procedimiento, que emplea dos cargas de inicio que inician la extensión en direcciones opuestas de la secuencia conocida, se describe en WO 96/38591 . Las técnicas adicionales incluyen PCR de captura (Lagerstrom et al., PCR Methods Applic. 7:111-19, 1991) y PCR caminante (Parker et a/., Nucí. Acids. Res. 79.3055-60, 1991). Amplificación Mediada por Transcripción, o TMA es otro método que puede utilizarse para la amplificación de ADN, rARN o mARN, como se describe en la Patente No. PCT/US91/03184. Este método en base a no PCR isotérmico y autocatalítico utilizada dos cargas de inicio y dos enzimas: polimerasa de ARN y transcriptasa inversa. Una carga de inicio contiene una secuencia promotora para polimerasa de ARN. En la primer amplificación, el promotor-carga de inicio se hibridiza al rARN objetivo en un sitio definido. La transcriptasa inversa crea una copia de ADN del rARN objetivo por extensión del extremo 3' del promotor-carga de inicio. El ARN en el complejo resultante se degrada y una segunda carga de inicio se une a la copia de ADN. Un nuevo filamento de ADN se sintetiza del extremo de la carga de inicio por transcriptasa inversa creando ADN de doble filamento. La polimerasa de ARN reconoce la secuencia promotora en el templado de ADN e inicia la transcripción. Cada uno de los amplicones de ARN recientemente sintetizados re-introduce el proceso TMA y sirve como un templado para una nueva vuelta de replicación que conduce a la expansión exponencial del ampllcón de ARN. Otros métodos que emplean amplificación también pueden utilizarse para obtener una secuencia de cADN de longitud completa. En ciertos casos, es posible obtener una secuencia de cADN de longitud completa por el análisis de secuencias proporcionadas en una base de datos de etiqueta de secuencia expresada (EST), tal como aquella disponible de GenBank. Las investigaciones para ESTs de recubrimiento pueden realizarse generalmente utilizando programas bien conocidos (por ejemplo, investigaciones NCBI BLAST) y tales ESTs pueden utilizarse para generar una secuencia de longitud completa contigua. Las secuencias de cADN de longitud completa también pueden obtenerse por análisis de fragmentos genómicos. Las variantes de polinucleótido pueden prepararse generalmente por cualquier método conocido en la materia, incluyendo síntesis química por, por ejemplo, síntesis química de fosfaramidita de fase sólida. Las modificaciones en una secuencia de polinucleótidos también puede introducirse utilizando técnicas de mutagénesis estándar, tal como mutagénesis específica de sitio dirigida por oligonucleótido (ver Adelman ef al., DNA 2: 183, 1 983) . Alternativamente, las moléculas de ADN pueden generarse por transcripción in vitro o in vivo de secuencias de A DN que codifican una proteína Chlamydia , o porción de la misma, siempre que el ADN se incorpore en un vector con un promotor de polimerasa de ARN adecuado (tal como T7 o SP6). Ciertas porciones pueden utilizarse para preparar un polipéptido codificado, como se describe en la presente. Además, o alternativamente, una porción puede administrarse a un paciente de manera que el polipéptido codificado se genera in vivo (por ejemplo, al transfectar células que presentan antígeno, tal como células dendríticas, con una construcción de cADN que codifica un polipéptido Chlamydia, y administrar las células transfectadas al paciente) . U na porción de una secuencia complementaria a una secuencia de codificación (es decir, un polinucleótido antisensible) también puede utilizarse como una sonda o para modular expresión génica. Las construcciones de cADN que pueden transcribirse en ARN antisensible también pueden introducirse en células de tejidos para facilitar la producción de ARN antisensible. Puede utilizarse un polinucleótido antisensible, como se describe en la presente, para inhibir la expresión de una proteína Chlamydia. La tecnología antisensible puede utilizarse para controlar la expresión gónica a través de formación de triple hélice, que compromete la habilidad del doble hélice para abrirse suficientemente para la unión de polimerasas, factores de transcripción o moléculas reguladoras (ver Gee er al., en Huber and Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Futura Publishing Co. (Mt. Kisco, NY: 1994)). Alternativamente, una molécula antisensible puede designarse para hibridizarse con una región de control de un gen (por ejemplo, promotor, aumentador o sitio de iniciación de transcripción) , y bloquear la transcripción del gen; o bloquear la traducción al inhibir la unión de una transcripción a ribosomas. U na porción de una secuencia de codificación , o de una secuencia complementaria , puede también designarse como una sonda o carga de inicio para detectar expresión génica. Las sondas pueden marcarse con una variedad de grupos reportadores, tales como radinuclidos y enzimas, y son preferentemente al menos 10 nucleótidos en longitud, más preferentemente al menos 20 nucleótidos en longitud y aún más preferentemente al menos 30 nucleótidos en longitud. Las cargas de inicio, como se observa arriba , son preferentemente de 22-30 nucleótidos en longitud. Cualquier polinucleótido puede modificarse además para incrementar la estabilidad ¡n vivo. Las posibles modificaciones incluyen, pero no se limitan a, la adición de secuencias de flanqueo en los extremos 5' y/o 3'; el uso de fosforotioato o 2' O-metil preferentemente que enlaces de fosfodiesterasa en la estructura principal; y/o la inclusión de bases no tradicionales tales como inopina, queosina y wibutosina; así como también acetilo, metilo, tio y otras formas modificadas de adenina, histidína, guanina, tiamina y uridina. Las secuencias de nucleótidos como se describen en la presente, pueden unirse a una variedad de otras secuencias de nucleótidos utilizando técnicas de ADN recombinante, establecidas. Por ejemplo, un polinucleótido puede clonarse en cualquiera de una variedad de vectores de clonación, incluyendo plásmidos, fagemidos, derivados de fago lambda y cósmidos. Los vectores de particular interés incluyen vectores de expresión, vectores de replicación , vectores de generación de sonda y vectores de secuenciación. En general , un vector contendrá un origen de replicación funcional en al menos un organismo, sitios de endonucleasa de restricción conveniente y uno o más marcadores seleccionares. Otros elementos dependerán del uso deseado, y serán aparentes para aquellos de experiencia ordinaria en la materia. Los polipéptidos sintéticos que tienen menos de aproximadamente 1 00 aminoácidos, y generalmente menos de aproximadamente 50 aminoácidos, pueden generarse utilizando técnicas bien conocidas en la materia. Por ejemplo, tales polipéptidos pueden sintetizarse utilizando cualquiera de las técnicas de fase sólida comercialmente disponibles, tal como el método de síntesis de fase sólida de Merrifield , en donde los aminoácidos se agregan secuencialmente a una cadena de aminoácidos en crecimiento . Ver Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2146, 1963. El equipo para síntesis automática de polipéptidos se encuentra comercialmente disponible de proveedores tales como Perkin Elmer/Applied BioSystemas División, Foster City, CA, y pueden operarse de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Como se observa arriba, las porciones inmunogénicas de antigenos Chlamydia pueden prepararse e identificarse utilizando técnicas bien conocidas, tales como aquellas resumidas en Paul , Fundamental Immunology, 3d ed. , Raven Press, 1993, pp. 243-247 y referencias citadas en la presente. Tales técnicas incluyen seleccionar porciones de polipóptido del antígeno nativo por propiedades inmunogénicas. Las ELISAs representativas descritas en la presente pueden emplearse generalmente en estas selecciones. Una porción inmunogénica de un polipéptido es una porción que, dentro de tales análisis representativos, genera una señal en tales análisis que es substancialmente similar a aquella generada por el antígeno de longitud completa. En otras palabras, una porción inmunogénica de un antígeno Chlamydia genera al menos aproximadamente 20% , y preferentemente aproximadamente 100% , de la señal inducida por el antígeno de longitud completa en un modelo ELISA como se describe en la presente. Las porciones y otras variantes de antígenos Chlamydia pueden generarse por medios recombinantes o sintéticos. Las variantes de un antígeno nativo pueden prepararse generalmente utilizando técnicas de mutagénesis estándar, tal como mutagénesis específica de sitio dirigida por oliginucleótido. Las secciones de la secuencia de polinucleótidos también pueden removerse utilizando técnicas estándar para permitir la preparación de polipéptidos truncados. Los polipéptidos recombínantes que contienen porciones y/o variantes de un antígeno nativo pueden prepararse fácilmente de una secuencia de polinucleótidos que codifica el péptido utilizando una variedad de técnicas bien conocidas por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. Por ejemplo, los sobrenadantes de sistemas de huésped/vector adecuados que secretan proteína recombinante en medio de cultivo pueden concentrarse primero utilizando un filtro comercialmente disponible. Después de la concentración, el concentrado puede aplicarse a una matriz de purificación adecuada tal como una matriz de afinidad o una resina de intercambio iónico. Finalmente, una o más etapas de HPLC de fase inversa pueden emplearse para purificar además una proteína recombinante. Cualquiera de una variedad de vectores de expresión conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia pueden emplearse para expresar polipéptidos recombínantes como se describe en la presente. La expresión puede lograrse en cualquier célula huésped apropiada que se ha transformado o transfectado dentro de un vector de expresión que contiene una molécula de polinucleótido que codifica un polipéptido recombinante. Las células huésped adecuadas incluyen procariotas, levadura y células eucarióticas elevadas. Preferentemente, las células huésped empleadas son E. coli, levadura o una estirpe mamifera, tal como COS o CHO. Las secuencias de AON expresadas en esta manera pueden codificar antfgenos que ocurren de manera natural, porciones de antígenos que ocurren de manera natural, u otras variantes de los mismos. En general, sin considerar el método de preparación, los polipéptidos descritos en la presente se preparan en una forma aislada, substancialmente pura. Preferentemente, los polipéptidos son al menos aproximadamente 80% puros, más preferentemente al menos aproximadamente 90% puros y más preferentemente al menos aproximadamente 99% puros. Dentro de ciertas modalidades específicas, un polipéptido puede ser una proteína de fusión que comprende múltiples polipéptidos como se describe en la presente, o que comprende al menos un polipéptido como se describe en la presente y una secuencia sin relacionar, tal como una proteína Chlamydial conocida. Un patrón de fusión puede, por ejemplo, ayudar a proporcionar epítopos ayudantes T (un patrón de fusión inmunológico) , preferentemente los epítopos ayudantes T reconocidos por humanos, o pueden ayudar a expresar la proteína (un aumentador de expresión) a producciones más elevadas que la proteína recombinante nativa . Ciertos patrones de fusión preferidos son tanto patrones de fusión que aumentan la expresión como inmunológicos. Otros patrones de fusión pueden seleccionarse para incrementar la solubilidad de la proteína o para permitir que la proteína sea el objetivo para compartimentos intracelulares deseados. Todavía las proteínas de fusión incluyen etiquetas de afinidad , que facilitan la purificación de la proteína . U na secuencia de ADN que codifica una proteína de fusión de la presente invención puede construirse utilizando técnicas de ADN recombinante para ensamblar secuencias de ADN separadas que codifican, por ejemplo, los polipéptidos, primero y segundo, en un vector de expresión apropiado. El extremo 3' de una secuencia de ADN que codifica el primer polipéptido se liga, con o sin un enlazador de póptido, al extremo 5' de una secuencia de ADN que codifica el segundo polipéptido de manera que las estructuras de lectura de las secuencias se encuentran en fase para permitir la traducción de mARN de las dos secuencias de ADN en una proteína de fusión única que retiene actividad biológica de ambos polipéptidos, primero y segundo. Una secuencia enlazadora de péptido puede emplearse para separar los polipéptidos, primero y segundo, por una distancia suficiente para asegurar que cada polipéptido se doble en sus estructuras, secundaria y terciaria. Tal secuencia enlazadora de póptido se incorpora en la proteína de fusión utilizando técnicas estándar bien conocidas en la materia. Las secuencias enlazadoras de péptido adecuadas pueden elegirse en base a los siguientes factores: (1) su habilidad para adoptar una conformación extendida flexible; (2) si inhabilidad para adoptar una estructura secundaria que interactuaría con epítopos funcionales en los polipéptidos, primero y segundo; y (3) la falta de residuos cargados o hidrofóbicos que pueden reaccionar con los epítopos funcionales de polipéptido. Las secuencias enlazadoras de péptido preferidas contienen residuos Gly, Asn y Ser. Otros aminoácidos neutrales próximos, tales como Thr y Ala también pueden utilizarse en la secuencia enlazadora. Las secuencias de aminoácidos que pueden emplearse útilmente como enlazadoras incluyen aquellas descritas en Maratea et al., Gene 40:39-46, 1985; Murphy et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83:8258-8562, 1986; Patente de E. U. No. 4.935,233 y Patente de E. U. No. 4, 751 , 180. La secuencia enlazadora puede ser de 1 a aproximadamente 50 aminoácidos en longitud. Como una alternativa para el uso de una secuencia enlazadora de péptido (cuando se desee) , uno puede utilizar regiones de aminoácido de terminal N no esencial (cuando están presentes) en los polipéptidos, primero y segundo, para separar los dominios funcionales y evitar el impedimento estérico. Las secuencias de ADN ligadas se enlazan operativamente a elementos reguladores traducibles o transcripcionales. Los elementos reguladores responsables de la expresión de ADN se ubican solamente 5' para la secuencia de ADN que codifica los primeros polipéptidos. De manera similar, los codones de detención requeridos para señales de terminación de transcripción y traducción finales están solamente presentes 3' para la secuencia de ADN que codifica el segundo polipéptido. Las proteínas de fusión también se proporcionan, las cuales comprenden un polipéptido de la presente invención junto con una proteína inmunogónica no relacionada. Preferentemente, la proteína ¡nmunogónica es capaz de producir una respuesta de rellamada. Ejemplos de tales proteínas incluyen tétanos, tuberculosis y proteínas de hepatitis (ver, por ejemplo, Stoute et al. , New. Engl. J. Med. 336:86-91 , 1 997) . Dentro de modalidades preferidas, un patrón de fusión inmunológico se deriva de una proteína D, una proteína de superficie de influenza B Haemophilus de bacteria gramnegativa (WO 91 /1 8926) . Preferentemente, un derivado de proteína D comprende aproximadamente T? primer tercio de la proteína (por ejemplo, los primeros 100-1 1 0 aminoácidos de terminal N) , y un derivado de proteína puede lipldarse. Dentro de ciertas modalidades preferidas, los primeros 1 09 residuos de un patrón de fusión de Lipoproteína D se incluyen en el término N para proporcionar el polipéptido con epítopos de célula T exógenos adicionlaes y para incrementar el nivel de expresión en E. coli (funcionando así como un aumentador de expresión). La parte posterior lípida asegura la presentación óptima del antígeno a células que presentan antígeno. Otros patrones de fusión incluyen la proteína no estructural del virus de influenza, NSI (hemaglutinina) . Típicamente, los 81 aminoácidos de terminal N se utilizan , aunque diferentes fragmentos que incluyen epítopos de ayudante T pueden utilizarse. En otra modalidad, el patrón de fusión inmunológica es la proteína conocida como LYTA, o una porción de la misma (preferentemente una porción de terminal C) . LYTA se deriva de Streptococcus pneumoniae, que sintetiza una amidasa de N-acetil-L-alanina conocida como LYTA amidasa (codificada por el gen LytA; Gene 43: 265-292 , 1986). LYTA es una autolisina que degrada específicamente ciertas uniones en la estructura principal de peptidoglucano. El dominio de terminal C de la proteína LYTA es responsable de la afinidad a la colina o algunos análogos de colina tal como DEAE . Esta propiedad se ha explotado para el desarrollo de plásmidos que expresan C-LYTA de E. coli útiles para la expresión de proteínas de fusión . La purificación de proteínas híbridas que contienen el fragmento C-LYTA el los términos amino se ha descrito (ver Blotechnology 0: 795-798, 1992). Dentro de una modalidad preferida, una porción de repetición de LYTA puede incorporarse en una proteína de fusión. Una porción repetida se encuentra en la región de terminal C iniciando en el residuo 178. Una porción de repetición particularmente preferida incorpora residuos 188-305. En otra modalidad, un polinucleótido Ra12 derivado de tuberculosis de Mycobacteria se enlaza a al menos una porción inmunogénica de un polinucleótido de esta invención. Las composiciones Ra12 y métodos para su uso para aumentar la expresión de secuencias de polinucleótido heterólogas se describen en la Solicitud de Patente de E. U. 60/158,585, la descripción de la cual se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Brevemente, Ra 12 se refiere a una región de polinucleótido que es una subsecuencia de un ácido nucleico MTB32A Mycobacterium tuberculosis. MTB32A es una proteasa de serina de peso molecular de 32 KD codificada por un gen en cepas avirulentas y virulentas de M. tuberculosis. La secuencia de nucleótidos y secuencia de aminoácidos de MTB32A se han descrito (Solicitud de Patente de E.U. 60/158,585; ver también, Skeiky et al., Infection and Immun. (1999) 67:3998-4007, incorporada en la presente para referencia). En una modalidad, el polipéptido Ra12 utilizado en la producción de polipéptidos de fusión comprende un fragmento de terminal C de la secuencia de codificación MTB32A que es eficaz para aumentar la expresión y/o inmunogenicidad de polipéptidos antigénicos Clamidiales heterólogos con cada uno que se fusiona. En otra modalidad, el polioéptido Ra12 corresponde a un fragmento de terminal C de 14 KD aproximadamente de MTB32A que comprende alguno o todos los residuos de aminoácidos 192 a 323 de MTB32A. Los ácidos nucleicos recombinantes, que codifican un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido Ra12 y un polipéptido Clamidia heterólogo de interés, pueden construirse fácilmente por técnicas de formación genética convencionales. Los ácidos nucleicos recombinantes se construyen de manera que, preferentemente, una secuencia de polinucleótidos Ra12 se ubica 5' para una secuencia de polinucleótidos de Clamidia heteróloga, seleccionada. También puede ser apropiado colocar una secuencia de polinucleótidos Ra12 3' para una secuencia de polinucleótidos heteróloga seleccionada o para insertar una secuencia de polinucleótidos heteróloga en un sitio dentro de una secuencia de polinucleótidos Ra12. Además, cualquier polinucleótido adecuado que codifica un Ra12 o una porción u otra variante del mismo puede utilizarse para construir los polinucleótidos de fusión recombinantes que comprenden Ra12 y uno o más polinucleótidos Clamidia descritos en la presente. Los polinucleótidos Ra12 preferidos generalmente comprenden al menos aproximadamente 15 nucleótídos consecutivos, al menos aproximadamente 30 nucleótídos, al menos aproximadamente 60 nucleótídos, al menos aproximadamente 100 nucleótídos, al menos aproximadamente 200 nucleótídos, o al menos aproximadamente 300 nucleótídos que codifican una porción de un polipéptido Ra12. Los polinucleótidos Ra12 pueden comprender una secuencia nativa (es decir, una secuencia endógena que codifica un polipéptido Ra12 o una porción del mismo) o pueden comprender una variante de tal secuencia. Las variantes de polinucleótido Ra12 pueden contener una o más substituciones, adiciones, eliminaciones y/o inserciones de manera que la actividad biológica del polipéptido de fusión codificado no se disminuye substancialmente, relativa a un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido Ra12 nativo. Las variantes preferentemente muestran al menos aproximadamente 70% de identidad, más preferentemente al menos aproximadamente 80% de identidad y más preferentemente al menos aproximadamente 90% de identidad a una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido Ra12 o una porción del mismo. En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para utilizar uno o más de los polipéptidos de arriba o proteínas de fusión (o polinucleótidos que codifican tales polipéptidos o proteínas de fusión) para inducir la inmunidad protectora contra infección Clamidial en un paciente. Como se utiliza en la presente, un "paciente" se refiere a cualquier animal de sangre caliente, preferentemente un humano. Un paciente puede padecer una enfermedad, o puede estar libre de infección y/o enfermedad detectable. En otras palabras, la inmunidad protectora puede inducirse para prevenir o tratar infección Clamidial. En este aspecto, el polipéptido, protefna de fusión o molécula de polinucleótido está generalmente presente dentro de una composición farmacéutica o una vacuna. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender uno o más polipéptidos, cada uno de los cuales puede contener una o más de las secuencias de arriba (o variantes de las mismas), y un vehículo fisiológicamente aceptable. Las vacunas pueden comprender uno o más de los polipéptidos de arriba y un inmunoestimulante, tal como un adyuvante o una liposoma (en la cual el polipéptido se incorpora). Tales composiciones farmacéuticas y vacunas también pueden contener otros antígenos Ra 1 2 Chlamydia, ya sea incorporados en un polipéptido en combinación o presentes dentro de un polipéptido separado. Alternativamente, una vacuna puede contener polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos o proteínas de fusión como se describe arriba, de manera que el polipéptido se genera in situ. En tales vacunas, los polinucleótidos puede estar presentes dentro de cualquier variedad de sistemas de suministro conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia, incluyendo sistemas de expresión de ácido nucleico, sistemas de expresión viral y bacteriana. Los sistemas de expresión de ácido nucleico apropiados contienen las secuencias de polinucleótidos necesarias para la expresión en el paciente (tal como un promotor adecuado y señal de terminación). Los sistemas de suministro bacterianos incluyen la administración de una bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerrin) que expresa una porción inmunogénica del polipéptido en su superficie celular. En una modalidad preferida, los polinucleótidos pueden introducirse utilizando un sistema de expresión viral (por ejemplo, vacuna u otro virus de erupción, retrovirus o adenovirus), que puede incluir el uso de un virus no patogénico (defectivo). Las técnicas para incorporar polinucleótidos en tales sistemas de expresión se conocen bien por aquellos de experiencia ordinaria en la materia . Los polinucleótidos también pueden administrarse como vectores de plásmido "desnudos" como se describe, por ejemplo, en Ulmer et al., Science 259: 1745-1749, 1 993, y revisado por Cohén , Science 259: 1691 -1692 , 1993. Las técnicas para incorporar ADN en tales vectores se conocen bien por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. Un vector retroviral puede transferir adicionalmente o incorporar un gen para un marcador seleccionable (para ayudar en la identificación o selección de células traducidas) y/o una porción objetivo, tal como un gen que codifica un ligando para un receptor en una célula objetivo específica, para volver al vector específico de objetivo. El objetivo también puede realizarse utilizando un anticuerpo, por métodos conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. Otras formulaciones para propósitos terapéuticos incluyen sistemas de dispersión coloidal, tales como complejos de macromolécula, nanocápsulas, microesferas, perlas y sistemas a base de lípido incluyendo emulsiones de aceite en agua , micelas, micelas mezcladas, y liposomas. Un sistema coloidal preferido para utilizarse como un vehículo de suministro in vitro y in vivo es un liposoma (es decir, una vesícula de membrana artificial). La toma de polinucleótidos desnudos puede incrementarse al incorporar los polinucleótidos en y/o sobre perlas biodegradables, que se transportan eficazmente en las células. La preparación y uso de tales sistemas se conocen bien en la materia. En un aspecto relacionado, una vacuna de polinucleótido como se describe arriba puede administrarse simultáneamente con o secuencialmente a ya sea un polipéptido de la presente invención o un antígeno Chlamydia conocido. Por ejemplo, la administración de polinucleótidos que codifican un polipéptido de la presente invención, ya sea "desnudo" o en un sistema de suministro como se describe arriba , puede seguirse por la administración de un antígeno con objeto de aumentar el efecto inmunoprotector inmune de la vacuna. Los polipéptidos y polinucleótidos descritos en la presente también pueden emplearse en inmunoterapia adoptiva para el tratamiento de infección Chlamydial. La inmunoterapia adoptiva puede clasificarse ampliamente en ya sea inmunoterapia activa o pasiva . En inmunoterapia activa, el tratamiento se basa en la estimulación in vivo del sistema inmune huésped endógeno con la administración de agentes que modifican la respuesta inmune (por ejemplo, vacunas, adyuvantes bacterianos y/o citoquinas). En inmunoterapia pasiva, el tratamiento incluye el suministro de reactivos biológicos con reactividad inmune establecida (tales como células efectuoras o anticuerpos) que pueden mediar directa o indirectamente efectos ant'\-Chlamydia y no necesariamente dpeende en un sistema inmune huésped intacto. Ejemplos de células efectuoras incluyen llnfocitos T (por ejemplo, linfocito T CD8+citotóxico, CD4+ayudante T) , células asesinas (tales como células Asesinas Naturales, célula asesinas activadas por linfoquina) , células B, o células que presentan el antígeno (tales como células dendríticas y macrófagos) que expresan los antígenos descritos. Los polipéptidos descritos en la presente pueden utilizarse para generar anticuerpos o anticuerpos anti-idiotípicos (como en la Patente de E. U . No. 4, 918, 164), para inmunoterapia pasiva. El método predominante para procurar números adecuados de células T para inmunoterapia adoptiva es desarrollar células T inmunes in vitro. Las condiciones de cultivo para expandir células T especificas de antígeno únicas a varios billones en número con retención de reconocimiento de antígeno ¡n vivo se conocen bien en la materia. Estas condiciones de cultivo in vitro típicamente utilizan estimulación intermitente con antígeno, con frecuencia en la presencia de citoquinas, tal como IL-2, y células alimentadoras sin división. Como se observa arriba, los polipéptidos inmunoreactivos descritos en la presente pueden utilizarse para expandir rápidamente los cultivos de célula T específica de antígeno con objeto de generar número suficiente de células para inmunoterapia. En particular, las células que presentan antígeno, tales como dendríticas, macrófago, monocito, fibroblasto, o células B, pueden impulsarse con polipéptidos inmunoreactivos, o secuencia(s) de polinucleótido pueden introducirse en células que presentan antígeno, utilizando una variedad de técnicas estándar bien conocidas en la materia, por ejemplo, las células que presentan antígeno pueden transfectarse o traducirse con una secuencia de polinucleótido, en donde dicha secuencia contiene una región promotora apropiada para incrementar la expresión, y puede expresarse como parte de un virus recombinante u otro sistema de expresión. Varios vectores virales pueden utilizarse para traducir una célula que presenta antígeno, incluyendo virus de erupción, virus de vacuna, y adenovirus; también, las células que presentan antígeno pueden transfectarse con secuencias de polinucleótidos descritas en la presente por una variedad de medios, incluyendo tecnología de pistola de gen, suministro mediado por lípido, electroporación, choque osmótico, y mecanismos de suministro de partículas, resultando en niveles de expresión aceptables y eficaces como se determina por alguien de experiencia ordinaria en la materia. Para que las células T cultivadas sean eficaces para terapia, las células T cultivadas deben ser capaces de desarrollarse y distribuirse ampliamente y sobrevivir por largo tiempo in vivo. Los estudios han demostrado que las células cultivadas T pueden inducirse para desarrollarse in vivo y para sobrevivir largo tiempo en números substanciales por estimulación repetida con antígeno complementado con I L-2 (ver, por ejemplo, Cheever, . , et al. , "Therapy With Cultured T Cells: Principies Revisited", Immunological Reviews, 157: 77, 1 997) . Los polípéptidos descritos en la presente también pueden emplearse para generar y/o aislar células T reactivas clamidiales, que pueden administrarse entonces al paciente. En una técnica, las estirpes T específicas del antígeno pueden generarse por inmunización in vivo con péptidos cortos que corresponde a porciones inmunogénicas de los polipéptidos descritos. Los clones de células T CD4+ o CD8+ específicos del antígeno pueden aislarse del paciente, expandirse utilizando técnicas de cultivo de tejido estándar, y regresarse al paciente. Alternativamente, los péptidos que corresponde a porciones inmunogénicos de los polipéptidos pueden emplearse para generar subconjuntos de célula T reactiva Chlamydia por estimulación in vitro selectiva y expansión de células T autólogas para proporcionar células T específicas de antígeno que pueden transferirse subsecuentemente al paciente como se describe, por ejemplo, por Chang et al., (Crit. Rev. Oncol. Hematol. , 22(3), 213, 1996). Las células del sistema inmune, tales como células T, pueden aislarse de la sangre periférica del paciente, utilizando un sistema de separación de célula comercialmente disponible, tal como Sistema Isolex™, disponible de Nexell Therapeutics, Inc. I rvine, CA. Las células separadas se estimulan con uno o más polipéptidos inmunoreactivos contenidos dentro de un vehículo de suministro, tal como una microesfera, para proporcionar células T específicas de antígeno. La población de células T específicas de antigeno se expande entonces utilizando técnicas estándar y las células se administran de nuevo al paciente. En otras modalidades, la célula T y/o receptores de anticuerpo específicos para los polipéptidos descritos en la presente pueden clonarse, expandirse, y transferirse en otros vectores o células efectuoras para utilizarse en inmunoterapia adoptiva. En particular, las células T pueden transfectarse con los genes apropiados para expresar los dominios variables de anticuerpos monoclonales específicos de clamidia como los elementos de reconocimiento extracelular y unirse a las cadenas que señalan el receptor de célula T, resultando en activación de la célula T, lisis específica, y liberación de citoquina . Esto permite a la célula T redirigir su especificidad en una manera independientemente de MHC. Ver, por ejemplo, Eshhar, Z. , Cáncer Immunol Immunother, 45(3-4): 131 -6, 1 997 y Hwu, P. , et al. , Cáncer Res. 55(15):3369-73, 1995. Otra modalidad puede incluir la transfección de cadenas receptoras de célula T alfa y beta especificas del antígeno clamidia en células T alternas, como en Colé, DJ , er a/. , Cáncer Res, 55(4) :748-52, 1995. En una modalidad adicional , las células dendrfticas singenéicas o autólogas pueden impulsarse con péptidos que corresponde a al menos una porción inmunogénica de un polipéptido descrito en la presente. Las células dendríticas específicas de antígeno resultantes pueden ya sea transferirse en un paciente, o emplearse para estimular las células T para proporcionar células T específicas del antígeno que pueden , a su vez, administrarse a un paciente. El uso de células dendríticas impulsadas por péptido para generar células T específicas del antígeno y el uso subsecuente de tales células T específicas de antígeno para erradicar la enfermedad en un modelo murino se ha demostrado por Cheever et al., Immunological Reviaws, 757: 177, 1997). Adicionalmente, los vectores que expresan los polinucleótidos descritos pueden introducirse en células germinales tomadas del paciente y probadas clonalmente in vitro para transplante autólogo de nuevo hacia el mismo paciente. Dentro de ciertos aspectos, los polipéptidos, polinucleótidos, células T y/o agentes de unión descritos en la presente pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas o composiciones inmunogénicas (es decir, vacunas). Alternativamente, una composición farmacéutica puede comprender una célula que presenta antígeno (por ejemplo, una célula dendrítica) transfectada con un polinucleótido Chlamydial de manera que la célula que presenta el antígeno expresa un polipéptido Chlamydial. Las composiciones farmacéuticas comprenden uno o más de tales compuestos y un vehículo fisiológicamente aceptable. Las vacunas pueden comprender uno o más de tales compuestos y un inmunoestimulante. U n inmunoestimulante puede ser cualquier substancia que aumenta o potencia una respuesta inmune a un antígeno exógeno.
Ejemplos de inmuno-estimulantes incluyen adyuvantes, microesferas biodegradables (por ejemplo, galactida poliláctida) y liposomas (en los cuales el compuesto se incorpora, ver, por ejemplo., Fullerton , Patente de E. U. No. 4,235, 877). La preparación de vacuna se describe generalmente en, por ejemplo, M. F. Powell and M.J . Newman, ed . , "Vaccine Design (la subunidad y planteamiento adyuvante) ," Plenum Press (NY, 1995) . Las composiciones farmacéuticas y vacunas dentro del alcance de la presente invención también pueden contener otros compuestos, que pueden ser biológicamente activos o inactivos. Por ejemplo, una o más porciones inmunogénicas de otros antígenos Chlamydia pueden estar presentes, ya sea incorporarse en un polipéptido de fusión o como un compuesto separado, dentro de la composición o vacuna. Una composición farmacéutica o vacuna puede contener ADN que codifica uno o más polipéptidos como se describe arriba, de manera que el polipéptido se genera in situ. Como se observa arriba, el ADN puede estar presente dentro de cualquiera de una variedad de sistemas de suministro conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia, incluyendo sistemas de expresión de ácido nucleico, bacterias y sistemas de expresión viral. Numerosas técnicas de suministro de gen se conocen bien en la materia, tales como aquellas descritas por Rolland, Crit. Rev. Therap. Drug. Carriar. Systems 15: 143-198, 1998, y referencias citadas en la presente. Los sistemas de expresión de ácido nucleico apropiados contienen las secuencias de ADN necesarias para la expresión en el paciente (tal como un promotor adecuado y señal de terminación) . Los sistemas de suministro bacterianos incluyen la administración de una bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerrin) que expresa una porción inmunogónica del polipéptido en su superficie celular o secreta tal epftopo. En una modalidad preferida, el ADN puede introducir utilizando un sistema de expresión viral (por ejemplo, vacuna u otro virus de erupción, retrovirus, adenovirus, baculovirus, togavirus, bacteriófago y lo similar), que con frecuencia incluye el uso de un virus competente de replicación , no patogénico (defectivo). Por ejemplo, se proporcionan muchos vectores de expresión viral derivados de virus de la familia retroviridae. Esta familia incluye los virus de leucemia de murino, los virus de tumor mamífero, los virus espumosos de humano, virus de sarcoma Rous, y los virus de inmunodeficiencia, incluyendo humano, simio y felino. Las consideraciones cuando se diseñan los vectores de expresión retorviral se tratan en Comstock et al. , (19T7) . Los vectores de expresión viral en base a virus de leucemia de murino excelente (MLV) se han desarrollado por Kim et al. , (1998). Para crear los vecotres MLV, Kim ef al., encontraron que la secuencia gag completa, junto con la región aguas arriba intermedia, podría eliminarse si afectar significativamente empacado viral o expresión genética. Además, se encontró que casi la región U3 completa podría reemplazarse con el promotor inmediatamente temprano de citomegalovirus humano sin efectos dañinos. Adicionalmente, MCR y sitios de entrada de ribosoma internos (IRES) podrían agregarse sin efectos adversos. En base a sus observaciones, Kim et el. , han diseñado una serie de vectores de expresión en base a MVL que comprende una o más de las características descritas arriba. Como se ha aprendido acerca del virus espumoso de humano (H FV), las características de H FV que son favorables para su uso como un vector de expresión se han descubierto. Estas características incluyen la expresión de pol por la separación e indicio de traducción en un codón de inicio definido. Otros aspectos de vectores de expresión viral H FV se revisan en Bodem ef al., (1997) . Murakami ef al., (1 T97) describen vectores de retrovirus avian competentes con la replicación en base al virus de sarcoma Rous (RSV), IR1 e IR2 para expresar un gen heterólogo a un nivel elevado. En estos vectores, los I RES derivados de virus de encefalomiocarditis (EMCV) se inserta entre el gen env y el gen heterólogo. El vector IR1 retiene el sitio separación-aceptador que está presente aguas abajo del gen env mientras el vector I R2 carece de él. Murakami ef al., han mostrado expresión de nivel elevado de diferentes genes heterólogos por estos vectores. Recientemente, un número de vectores de expresión retrovirales en base a lentivirus se ha desarrollado. Kafri et al. , (1 997) ha mostrado expresión sostenida de genes suministrados directamente en el hígado y músculo por un vector de expresión en base al virus de inmunodeficiencia humana (VI H) . Un beneficio del sistema es la habilidad inherente de VI H para traducir células sin división. Debido a que los virus 1 de Kafri ef al., se pseudotipifican con glucoproteína de virus G de estomatitis vascular (VSVG), pueden traducir un amplio rango de tejidos y tipos celulares. Un gran número de vectores de expresión en base a adenovirus se ha desarrollado, principalmente debido a las ventajas ofrecidas por estos vectores en aplicaciones de terapia de gen. Los vectores de expresión de adenovirs y métodos para utilizar tales vectores son el sujeto de un número de patentes de Estados Unidos, incluyendo Patente de Estados Unidos No. 5,698,202, Patente de Estados Unidos No. 5 ,616,323, Patente de Estados Unidos No. 5, 585 ,362 y Patente de Estados Unidos No. 5,51 8,91 3, todas incorporadas en la presente para referencia. Las construcciones adenovirales adicionales se describen en Khatri et al. , (1997) y Tomanin et al., (1 997). Khatri et al., describen vectores de expresión de adenovirus ovino nuevo y su habilidad para infectar turbinato nasal de bovino y células de riñón de conejo así como también un rango de tipo celular humano, incluyendo fibroblastos de piel frontal y pulmón así como también hígado, próstata, mama , colón y líneas retínales. Tomanin et al., describen vectores de expresión adenoviral que contienen el gen de polimerasa de ARN 17. Cuando se introducen en células que contiene un gen heterólogo operablemente enlazado a un promotor T7, los vectores son capaces de accionar la expresión genética del promotor T7. Los autores sugieren que este sistema puede ser útil para la clonación y expresión de genes que codifican proteínas citotóxicas. Los virus de erupción se utilizan ampliamente para la expresión de genes heterólogos en células mamíferas. Durante los años, los vectores se han mejorado para permitir la expresión elevada del gen heterólogo y simplificar la integración de múltiples genes heterólogos en una molécula única. En un esfuerzo por disminuir los efectos citofáticos e incrementar la seguridad, el mutante del virus de vacuna y otros virus de erupción que experimenta infección abortiva en células mamíferas reciben atención especial (Oertli eí al., (1997) . El uso de virus de erupción como vectores de expresión se revisa en Carroll and Moss (1997) . Los vectores de expresión togaviral, que incluye vectores de expresión alfaviral se han utilizando para estudiar la estructura y función de proteínas y para propósitos de producción de proteína . Las características atractivas de vectores de expresión togaviral son expresión genética rápida y eficiente, rango de huésped amplio, y genomas de ARN (H uang, 1 996) . También, las vacunas recombinantes en base a vectores de expresión aifavrial se han mostrado que inducir una respuesta inmune celular y humoral fuerte con buena memoria inmunológica y efectos protectores (Tubulekas et al., 1997). Los vectores de expresión alfaviral y su uso se tratan , por ejemplo, en Lundstrom (1997). En un estudio, Li and Garoff (1996) utilizaron vectores de expresión del virus Semliki Forest (SFV) para expresdar genes retrovirales y para producir partículas retrovirales en células BH K-21 . Las partículas producidas por este método tuvieron actividad de transcriptasa inversa y proteasa y fueron infecciosas. Además, ningún virus ayudante podría detectarse en las reservas de virus. Por lo tanto, este sistema tiene características que son atractivas para su uso en procedimientos de terapia genética. Los vectores de expresión baculoviral se han utilizado tradicionalmente para expresar proteínas heterólogas en células de insectos. Ejemplos de proteínas incluyen receptores de quemoquina mamífera (Wang et al., 1997) , proteínas reportadoras tal como proteína fluorescente verde (Wu et al., 1997), y proteínas de fusión FLAG (Wu et al., 1997; Koh et al., 19T7). Los avances recientes en tecnología de vector de expresión baculoviral, incluyendo su uso en vectores de despliegue de virión y expresión en células mamfferas se revisan por Posee (1997). Otras revisiones en vectores de expresión baculoviral incluyen Jones and orikawa (1996) y O'Reilly (1997). Otros sistemas de expresión viral adecuados se describen, por ejemplo, en Fisher-Hoch ef al., Proc. Nati. Acad. Sel. USA 86:317-321, 19T9; Flexner ef al., nn. N.Y. Acad. Sc¡. 569:86-103, 1989; Flexner et al., Vaccine 8.17-21, 1990; Patentes de E.U. Nos. 4,603,112, 4,769,330 y 5,017,487; WO 89/01973; Patente de E.U. No. 4,777,127; GB 2,200,651; EP 0,345,242; WO 91/02805; Berkner, Biotachniques 6:616-627, 1988; Rosenfeld ef al., Science 252:431-434, 1991; Kolls ef al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97:215-219, 1994; Kass-Eisler ef al., Proc. Nati. Acad. Scí. USA 90:11498-11502, 1993; Guzman ef al., Circulation 88:2838-2848, 1993; y Guzman et al., Cir. Res. 73:1202-1207, 1993. Las técnicas para incorporar ADN en tales sistemas de expresión se conocen bien en aquellos de experiencia ordinaria en la materia. En otros sistemas, el ADN puede introducirse como ADN "desnudo", como se describe, por ejemplo, en Ulmer et al., Science 259:1745-1749, 1993 y revisada por Cohén, Science 259:1691-1692, 1993. La toma de ADN desnudo puede incrementarse al revestir el ADN en perlas biodegradables, que se transportan eficazmente en las células. Será aparente que una vacuna puede comprender un polinucleótido y/o un componente de polipéptido, según se desee. (por ejemplo, salina regulada neutral o salina regulado de fosfato) , carbohidratos (por ejemplo, glucosa, mañosa, sucrosa o dextranos) , manitol, proteínas, polipéptidos o aminoácidos tales como glicina, antioxidantes, bacterioestatos, agentes de quelación tales como EDTA o glutationa, adyuvantes (por ejemplo, hidróxido de aluminio), solutos que vuelven la formulación isotónica , hipotónica o débilmente hipertónica con la sangre de un recipiente, agentes de suspensión , agentes de espesamiento y/o conservadores. Alternativamente , las composiciones de la presente invención pueden formularse como un liofilizato. Los compuestos también pueden encapsularse dentro de liposomas utilizando tecnología bien conocida. Cualquiera de una variedad de inmunoestimulantes puede emplearse en las vacunas de esta invención. Por ejemplo, un adyuvante puede incluirse. La mayoría de los adyuvantes contienen una substancia diseñada para proteger el antígeno de catabolismo rápido, tal como hidróxido de aluminio o aceite mineral, y un estimulador de respuestas inmunes, tales como proteínas derivadas de Mycobacterium tuberculosis o Bortadella pertussi de lípid A. Los adyuvantes adecuados se encuentran comercialmente disponibles como, por ejemplo, Adyuvante Incompleto de Freund y Adyuvante Completo (Difco Laboratories, Detroit, M I) ; Adyuvante 65 Merck (Merck and Company, Inc. Rahway, NJ) ; AS-2 (SmithKIine Beecham , Philadelphia, PA) ; sales de aluminio tal como gel de hidróxido de aluminio (alum) o fosfato de aluminio; sales de calcio, hierro o zinc; una suspensión insoluble de tirosina acilada; azucares aciladas; polisacáridos catiónica o amónicamente derivados; polifosfacenos; microesferas biodegradables; monofosforil lípido A y quil A. Citoquinas, tales como GM-CSF o interleuquina-2, -7, o -12, también pueden utilizarse como adyuvantes. Dentro de las vacunas proporcionadas en la presente, bajo circunstancias seleccionadas, la composición adyuvante puede diseñarse para inducir una respuesta inmune predominanemente del tipo Th1 o tipo Th2. Niveles elevados de citoquinas tipo Th 1 (por ejemplo, I FN-?, TN Fa, IL-2 e I L- 12) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes mediadas por célula a un antígeno administrado. En contraste, los niveles elevados de citoquinas tipo Th2 (por ejemplo, I L-4, I L-5, I L-6 e IL-10) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes humorales. Después de la aplicación de una vacuna como se proporciona en la presente, un paciente soportará una respuesta inmune que incluye respuestas tipo Th2 y Th 1 . Dentro de una modalidad preferida, en la cual una respuesta es predominantemente tipo Th1 , el nivel de citoquinas tipo Th 1 aumentará a un grado mayor que el nivel de citoquinas tipo Th2. Los niveles de estas citoquinas pueden valorarse fácilmente utilizando análisis estándar. Para una revisión de las familias de citoquinas, ver Mosmann and Coffman , Ann. Rev. Immunol. 7:145- 173, 1989. Los adyuvantes preferidos para utilizarse para producir una respuesta predominantemente tipo Th 1 incluyen , por ejemplo, una combinación de mofosforilo lípido A, preferentemente monofosforilo lípido 3-de-O-acilado (3D-MPL) , junto con una sal de aluminio. Los adyuvantes M PL se encuentran disponibles de Corixa Corporation (Seattie, WA; ver Patentes de E. U . Nos . 4,436, 727; 4,877,61 1 , 4,866,034 y 4, 912,094). Los oligonucleótidos que contienen CpG (en los cuales el dinucleótido CpG no se metila) también inducen una respuesta predominantemente Th1 . Tales oligonucleótidos se conocen bien y se describen, por ejemplo, en WO 96/02555 y WO 99/33488. Las secuencias de ADN inmunoestimuladoras también se describen, por ejemplo, por Sato et al. , Science 273:352, 1 996. Otro adyuvante preferido es una saponina, preferentemente QS21 (Aquila Biopharmaceuticals Inc. , Framingham, MA), que puede utilizarse solo o en combinación con otros adyuvantes. Por ejemplo, un sistema aumentado incluye la combinación de un monofosforilo de lípido A y derivado de saponina, tal como la combinación de QS21 y 3D- PL como se describe en WO 94/00153, o una composición reactogénica menor en donde el QS21 se enfría con colesterol , como se describe en WO 96/33739. Otras formulaciones preferidas comprenden una emulsión de aceite en agua y tocoferol. U na formulación adyuvante particularmente potente incluyendo QS21 , 3D-MPL y tocoferol en una emulsión de aceite en agua se describe en WO 95/17210. Otros adyuvantes preferidos incluyen Montanide ISA 720 (Seppic, Francia), SAF (Chiron, California, Estados Unidos), ISCOMS (CSL) , F-59 (Chiron) , las series SBAS de adyuvantes (ver, SBAS-2 o SBAS-4, disponibles de SmithKIine Beecham , ixensart, Bélgica), Detox (Corixa Corporation; Seattle, WA), RC-529 (Corixa Corporation, Seattle, WA) y otros 4-fosfatos de glucosaminida de aminoalquilo (AGPs), tales como aquellos descritos en las Solicitudes de Patente de E. U. pendiente Nos de Series 08/853,826 y 09/074, 720, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia en sus totalidad.
Cualquier vacuna proporcionada en la presente puede prepararse utilizando métodos bien conocidos que resultan en una combinación de antígeno, inmunoestimulante y un vehículo o excipiente adecuado. Las composiciones descritas en la presente pueden administrarse como parte de una formulación de liberación sostenida (es decir, una formulación tal como una cápsula , esponja o gel (compuesto de polisacáridos, por ejemplo), que efectúa una liberación lenta de compuesto después de la administración) . Tales formulaciones pueden prepararse generalmente utilizando tecnología bien conocida (ver, por ejemplo, Coombes et ai., Vaccine 14.1429-1438, 199T) y administrarse por, por ejemplo, implantación rectal o subcutánea, o por implantación en el sitio objetivo deseado. Las formulaciones de liberación sostenida pueden contener un polipéptido, polinucleótido o anticuerpo disperso en una matriz vehículo y/o contenerse dentro de un recipiente rodeado por una membrana que controla la velocidad . Los vehículos para utilizarse dentro de tales formulaciones son biocompatibles, y pueden también ser biodegradables, preferentemente la formulación proporciona un nivel relativamente constante de liberación del componente activo. Tales vehículos incluyen micropartículas de poli(láctida-co-glucolido), así como tam bién poliacrilato, látex, almidón , celulosa y dextran . Otros veh ículos de liberación retrasada incluyen biovectores supramoleculares, que comprenden un núcleo hidrofílico no líquido (por ejemplo, un oligosacárido o polisacárido degradado) y, opcionalmente, una capa externa que comprende un compuesto anfifílico, tal como un fosfolípido (ver, por ejemplo, Patente de E. U . No. 5, 151 ,254 y Solicitudes de PCT WO 94/20078, WO 94/23701 y O 96/06638. La cantidad de compuesto activo contenido dentro de una formulación de liberación sostenida depende del sitio de implantación, la velocidad y duración esperada de liberación y la naturaleza de la condición a tratarse o prevenirse. Cualquiera de una variedad de vehículos de suministro puede emplearse dentro de composiciones farmacéuticas y vacunas para facilitar la producción de una respuesta inmune específica de antígeno que tiene como objetivo células infectadas por Chlamydia. Los vehículos de suministro incluyen células que presentan antígeno (APCs), tales como células dendríticas, macrófagos, células B. monocitos y otras células que pueden formarse para ser APCs eficaces. Tales células pueden, pero no necesitan, modificarse genéticamente para incrementar la capacidad de presentar el antígeno, para mejorar la activación y/o mantenimiento de la respuesta de la célula T, para tener efectos Chlamydia par se y/o para ser inmunológicamente incompatibles con el receptor (es decir, haplotipo HLA acoplado). APCs pueden generalmente aislarse de cualquiera de una variedad de fluidos biológicos y órganos, y pueden ser células autólogas, alogénicas, singenéicas o xenogenéicas. Ciertas modalidades preferidas de la presente invención utilizan células dendríticas o progenitores de las mismas como células que presentan antígeno. Las células dendríticas son APCs altamente potentes (Banchereau and Steinman, N ature 392:245-251 , 1998) y se ha mostrado que son eficaces como un adyuvante fisiológico para producir imnmunidad terapéutica o profiláctica (ver Timmerman and Levy, Ann. Rav. Mad. 50:507-529, 1999). En general, las células dendríticas pueden identificarse en base a su forma típica (estelato in situ, con procesos citoplásmicos marcados (dendritos) visibles in vitro), su habilidad para tomar, procesar y presentar antígenos con eficacia elevada, y su habilidad para activar respuestas de célula T inocentes. Las células dendríticas pueden , por supuesto, formarse para expresar receptores de superficie celular específicos o ligandos que no se encuentran comúnmente en células dendríticas in vivo o ex vivo, y tales células dendríticas modificadas se contemplan por la presente invención . Como una alternativa a las células dendríticas, las células dendríticas cargadas con antígeno de vesículas secretadas (llamadas exosomas) pueden utilizarse dentro de una vacuna (ver Zitvogel et al., Nature Meó. 4.594-600, 1998). Las células dendríticas y progenitores pueden obtenrse de sangre periférica, médula ósea, nodos linf, bazo, piel, sangre del cordón umbilical y cualquier otro fluido o tejido adecuado. Por ejemplo, las células dendríticas pueden diferenciarse ex vivo al agregar una combinación de citoquinas tales como GM-CSF , I L-4, IL- 3 y/o TN Fa a cultivos de monocitos recolectados de sangre periférica. Alternativamente, las células positivas CD34 recolectadas de sangre periférica, sangre del cordón umbilical o médula ósea pueden diferenciarse en células dendríticas al agregar al medio de cultivo combinaciones de GM-CSF, IL-3 , TNFa, ligando CD40, LPS, ligando flt3 y/u otro(s) compuesto(s) que inducen diferenciación, maduración y proliferación de células dendríticas. Las células dendríticas se categorizan convenientemente como células "inmaduras" y "maduras", que permiten una manera simple de discriminar entre dos fenotipos bien caracterizados. Sin embargo, esta nomenclatura no debe construirse para excluir todas las etapas intermedias de diferenciación , posibles. Las células dendríticas inmaduras se caracterizan como APC con una alta capacidad para toma y procesamiento de antígeno, que se correlaciona con la expresión elevada de receptor Fcy y receptor de mañosa. El fenotipo maduro se caracteriza típicamente por una expresión inferior de estos marcadores, pero una expresión elevada de moléculas de superficie celular responsables de la activación de la célula T tal como M HC clase I y clase I I , moléculas de adhesión (por ejemplo, CD54 y CD1 1 ) y moléculas coestimuladoras (por ejemplo, CD40, CD80, CD86 y 4- 1 BB) . APCs pueden transfectarse genéticamente con un polinucleótido que codifica una proteína Chlamydial (o porción u otra variante de la misma) de manera que el polipéptido Chlamydial, o una porción inmunogénica del mismo, se expresa en la superficie celular. Tal transfección puede tener lugar ex vivo, y una composición o vacuna que comprende tales células transfectadas puede utilizarse entonces para propósitos terapéuticos, como se describe en la presente, alternativamente, el vehículo de suministro de gen que tiene como objetivo una célula dendrítica u otra que presenta antígeno puede administrarse a un paciente, resultando en transfección que ocurre in vivo. La transfección in vivo y ex vivo de células dendríticas, por ejemplo, puede realizarse generalmente utilizando cualquier método conocido en la materia, tal como aquellos descritos en WO 97/2447 , o el planteamiento de pistola de gen descrito por Mahvi et al., Immunology and cell Biology 75:456-460, 1997.
La carga de antígeno de células dendríticas puede lograrse al incubar células dendríticas o células progenitoras con el polipéptido Chlamydial, ADN (desnudo o dentro de un vector de plásmido) o A RN; o con virus o bacteria recombinante que expresa antígeno (por ejemplo, vacuna, erupción, adenovirus o vectores de lentivirus) . Antes de cargar, el polipéptido puede conjugarse covalentemente con un patrón inmunológico que proporciona ayuda a la célula T (por ejemplo, una molécula vehículo) . Alternativamente, una célula dendrítica puede impulsarse con un patrón inmunológico conjugado, por separado o en la presencia del polipéptido. Las vías y frecuencias de administración de composiciones farmacéuticas y vacunas, así como también la dosis, variarán de individuo a individuo. En general, las composiciones farmacéuticas y vacunas pueden administrarse por inyección (por ejemplo, intracutánea, intramuscular, intravenosa o subcutánea) , intranasalmente (por ejemplo, por aspiración) u oralmente. Entre 1 y 3 dosis pueden administrarse por un periodo de 1 -36 semanas. Preferentemente, 3 dosis se administran , en intervalos de 3-4 meses, y vacunaciones de refuerzo para pacientes individuales. Una dosis adecuada es una cantidad de polipéptido o ADN que, cuando se administra como se describe arriba , es capaz de originar una respuesta inmune en un paciente inmunizado suficiente para proteger al paciente de infección Chlamydial por al menos 1 -2 años. En general , la cantidad de polipéptido presente en una dosis (o producida ¡n situ por el ADN en una dosis) varía de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped, típicamente desde aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg, y preferentemente desde aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg . Los tamaños de dosis adecuados variarán con el tamaño del paciente, pero típicamente variarán desde aproximadamente 0.1 m L a aproximadamente 5 mL Aunque cualquier vehículo adecuado conocido por aquellos de experiencia ordinaria en la materia puede emplearse en las composiciones farmacéuticas de esta invención, el tipo de vehículo variará dependiendo del modo de administración . Para administración parenteral , tal como inyección subcutánea, el vehículo comprende preferentemente agua, salina, alcohol , una grasa, una cera o un regulador. Para administración oral , cualquiera de los vehículos anteriores o un vehículo sólido, tal como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa , glucosa, sucrosa, y carbonato de magnesio, puede emplearse. Las microesferas blodegradables (por ejemplo, galactida poliláctica) también pueden emplearse como vehículos para las composiciones farmacéuticas de esta invención. Las microesferas biodegradables adecuadas se describen , por ejemplo, en las Patentes de E. U . Nos. 4, 897,268 y 5,075, 109. En general , una dosis apropiada y régimen de tratamiento proporciona el(los) compuesto(s) activo(s) en una cantidad suficiente para proporcionar beneficio profiláctico y/o terapéutico. Tal respuesta puede monitorearse al establecer un resultado clínico mejorado en pacientes tratados en comparación con pacientes no tratados. Los incrementos en respuestas inmunes preexistentes a una proteína Chlamydial generalmente se correlacionan con un resultado clínico mejorado. Tales respuestas inmunes pueden generalmente evaluarse con un resultado clínico mejorado. Tales respuestas inmunes pueden generalmente evaluarse utilizando proliferación estándar, citotoxicidad o análisis de citoquina, que pueden realizarse utilizando muestras obtenidas de un paciente antes y después de tratamiento. En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para utilizar los polipéptidos descritos arriba para diagnosticar infección Clamidial. En este aspecto, se proporcionan métodos para detectar infección Clamidial en una muestra biológica, utilizando uno o más de los polipéptidos anteriores, ya sea solos o en combinación. Para claridad, el término "polipéptido" se utilizará cuando se describen modalidades específicas de los métodos de diagnóstico inventivos. Sin embargo, será claro para un experto en la materia que las proteínas de fusión de la presente invención también pueden emplearse en tales métodos. Como se utiliza en la presente, una "muestra biológica" es cualquier muestra que contiene anticuerpo obtenida de un paciente. Preferentemente, la muestra es sangre completa, espeto, suero, plasma, saliva, fluido cerebroespinal u orina. Más preferentemente, la muestra es sangre , suero o muestra de plasma obtenida de un paciente. Los polipéptidos se utilizan en un análisis, como se describe abajo, para determinar la presencia o ausencia de anticuerpos al (los) polipéptido(s) en la muestra , relativa a un valor de corte predeterminado. La presencia de tales anticuerpos indica la sensibilización previa a antígenos Chlamydial que pueden ser indicativos de infección por Chlamydia. En modalidades en las cuales más de un polipéptido se emplea, los polipéptidos utilizados son preferentemente complementarios (es decir, un polipéptido componente tenderá a detectar infección en muestras en donde la infección no se detectaría por otro polipéptido componente). Los polipéptidos complementarios pueden identificarse generalmente al utilizar cada polipéptido individualmente para evaluar las muestras de suero obtenidas en una serie de pacientes conocidos por estar infectados con Chlamydia. Después de determinar que muestras son positivas en la prueba (como se describe abajo) con cada polipéptido, las combinaciones de dos o más polipéptidos pueden formularse, que son capaces de detectar infección en la mayoría, o todas las muestras probadas. U na variedad de formatos de análisis son conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia para utilizar uno o más polipéptidos para detectar anticuerpos en una muestra . Ver, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988, que se incorpora en la presente para referencia. En una modalidad preferida, el análisis incluye el uso de polipéptido inmovilizado en un soporte sólido para unirse a y remover el anticuerpo de la muestra. El anticuerpo unido puede detectarse entonces utilizando un reactivo de detección que contiene un grupo reportador. Los reactivos de detección adecuados incluyen anticuerpos que se unen al complejo de anticuerpo/polipéptido y el polipéptido libre marcado con un grupo reportador (por ejemplo, en un análisis semi-competitivo) . Alternativamente, un análisis competitivo puede utilizarse, en el cual un anticuerpo que se une al polipóptido se marca con un grupo reportador y se deja unir al antígeno inmovilizado después de la incubación del antígeno con la muestra. El grado al cual los componentes de la muestra inhiben la unión del anticuerpo marcado al polipéptido es indicativo de la reactividad de la muestra con el polipéptido inmovilizado. El soporte sólido puede ser cualquier material sólido conocido por aquellos de experiencia ordinaria en la materia a la cual el antígeno puede unirse. Por ejemplo, el soporte sólido puede ser una cavidad de prueba en una placa de microconcentración, o una nitrocelulosa y otra membrana adecuada . Alternativamente, el soporte puede ser una perla o disco, tal como un vidrio, fibra de vidrio, látex o un material plástico tal como poliestireno o polivinilcloruro. El soporte también puede ser una partícula magnética o un sensor de fibra óptica, tal como aquel descrito, por ejemplo, en la Patente de E . U . No. 5.359,681 . Los polipéptidos pueden unirse al soporte sólido utilizando una variedad de técnicas conocidas por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. En el contexto de la presente invención , el término "unido" se refiere tanto asociación no covalente, tal como absorción, como unión covalente (que puede ser un enlace directo entre el antígeno y grupos funcionales en el soporte o puede ser un enlace por medio de un agente de degradación). La unión por absorción a una cavidad en una placa de microconcentración o a una membrana se prefiere. En tales casos, la absorción puede lograrse al contactar el polipéptido, en un regulador adecuado, con el soporte sólido por un periodo de tiempo adecuado. El tiempo de contacto varía con la temperatura, pero es típicamente entre aproximadamente 1 hora y 1 día . En general, el contacto de una cavidad de una placa de microconcentración de plástico (tal como poliestireno o polivinilcloruro) con una cantidad de polipéptido que varía de aproximadamente 10 ng a aproximadamente 1 µg, y preferentemente aproximadamente 100 ng, es suficiente para unir una cantidad adecuada de antigeno. La unión covalente de polipéptido a un soporte sólido puede generalmente lograrse al reaccionar primero el soporte con un reactivo bifuncional que reaccionará con tanto el soporte como un grupo funcional, tal como un grupo amino o hidroxilo, en el polipéptido. Por ejemplo, el polipéptido puede unirse a soportes que tienen un revestimiento de polímero apropiado utilizando benzoquinona o por condensación de un grupo aldehido en el soporte con una amina y un hidrógeno activo en el polipéptido (ver, por ejemplo, Pierce Immunotechnology Catalog and Handbook, 1991 , en A 12-A13) . En ciertas modalidades, el análisis es un análisis inmunoabsorbente enlazado a enzima (ELISA) . Este análisis puede realizarse al contactar primero un antígeno de polipéptido que se ha inmovilizado en un soporte sólido, comúnmente la cavidad de una placa de microconcentración, con la muestra, de manera que los anticuerpos al polipéptido dentro de la muestra se dejan unir al polipéptido inmovilizado. La muestra sin unir se remueve entonces del polipéptido inmovilizado y un reactivo de detección capaz de unirse al complejo de anticuerpo-polipéptido inmovilizado se agrega. La cantidad de reactivo de detección que permanece unido al soporte sólido se determina entonces utilizando un método apropiado para el reactivo de detección específico. Más específicamente, una vez que el polipéptido se inmoviliza T G? el soporte como se describe arriba, los sitios de unión de la proteína restantes en el soporte se bloquean típicamente. Cualquier agente de bloque adecuado conocido por aquellos de experiencia ordinaria en la materia, tal como albúmina de suero de bovino (BSA) o Tween 20™ (Sigma Chemical Co. , St. Louis, MO) puede empelarse. El polipéptido inmovilizado se incuba entonces con la muestra, y el anticuerpo se deja unir al antígeno. La muestra puede diluirse con un diluyente adecuado, tal como salina regulada por fosfato (PBS) antes de incubación. En general, un tiempo de contacto adecuado (es decir, tiempo de incubación) es aquel periodo de tiempo que es suficiente para detectar la presencia de anticuerpo dentro de una muestra infectada con HGE. Preferentemente, el tiempo de contacto es suficiente para lograr un nivel de unión que es al menos 95% de aquel logrado en equilibrio entre el anticuerpo unido y sin unir. Aquellos de experiencia ordinaria en la materia reconocerán que el tiempo necesario para lograr equilibrio puede determinarse fácilmente al analizar el nivel de unión que ocurre durante un periodo de tiempo. A temperatura ambiente, un tiempo de incubación de aproximadamente 30 minutos es generalmente suficiente. La muestra sin unir puede entonces removerse al lavar el soporte sólido con un regulador apropiado, tal como PBS que contiene 0.1 % Tween 20™. El reactivo de detección puede entonces agregarse al soporte sólido. Un reactivo de detección apropiado es cualquier compuesto que se une al complejo de anticuerpo-polipóptido inmovilizado y que puede detectarse por cualquiera de una variedad de medios conocidos por aquellos en la materia. Preferentemente, el reactivo de detección contiene un agente de unión (tal como, por ejemplo, Proteína A, Proteína G, inmunoglobulina, lectina o antígeno libre) conjugado con un grupo reportador. Los grupos reportadores preferidos incluyen enzimas (tal como peroxidasa de rábano picante, substratos, cofactores, inhibidores, tintes, radionucleótidos, grupos lumínescentes, grupos fluorescentes y biotina. La conjugación de agente de unión al grupo reportador puede lograrse utilizando métodos estándar conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. Los agentes de unión comunes también pueden compare conjugados con una variedad de grupos reportadores de muchas fuentes comerciales (por ejemplo, Zymed Laboratories, San Francisco, CA, and Pierce, Rockford, I L) . El reactivo de detección se incuba entonces con el complejo de anticuerpo-polipéptido inmovilizado por una cantidad de tiempo suficiente para detectar el anticuerpo unido. Una cantidad apropiada de tiempo puede generalmente determinarse de las instrucciones del fabricante o al analizar el nivel de unión que ocurre durante un periodo de tiempo. El reactivo de detección sin unir se remueve entonces y el reactivo de detección unido se detecta utilizando el grupo reportador. El método empleado para detectar el grupo reportador depende de la naturaleza del grupo reportador. Para grupos radioactivos, el conteo de centelleo o métodos autoradiográficos son generalmente apropiados. Los métodos espectroscópicos pueden utilizarse para detectar tintes, grupos lumínescentes y grupos fluorescentes. La biotina puede detectarse utilizando avidina , acoplada a un grupo reportado diferente (comúmmente un grupo fluorescente o radioactivo o una enzima) . Los grupos reportadores de enzima pueden detectarse generalmente por la adición de substrato (generalmente por un periodo de tiempo específico) , seguida por análisis espectroscopio u otro de los productos de reacción . Para determinar la presencia o ausencia de anticuerpos anti-Chlamydia en la muestra, la señal detectada del grupo reportador que permanece unido al soporte sólido se compara generalmente con una señal que corresponde a un valor de corte predeterminado. En una modalidad preferida, el valor de corte es la señal media promedio obtenida cuando el antígeno inmovilizado se incuba con muestras de un paciente sin infectar. En general, una muestra que genera una señal que es tres desviaciones estándar arriba del valor de corte predeterminado se considera positiva para infección por Chlamydia. En una modalidad preferida alterna, el valor de corte se determina utilizando una Curva Operadora del Receptor, de acuerdo al método de Sackett et al., Ctinical Epidemology: A Basic Science for Clinicai Medicine, Little Bro n and Co. , 1985, pp. 106-107. Brevemente, en esta modalidad, el valor de corte puede determinarse de un diagrama de pares de tasas positivas verdaderas (es decir, sensibilidad) y tasas positivas falsas (100% de especificidad) que corresponde a cada valor de corte posible para el resultado de prueba del diagnóstico . El valor de corte en el diagrama que es más próximo a la esquina a mano izquierda superior (es decir, el valor que comprende el área más larga) es el valor de corte más exacto, y una muestra que genera una señal que es más elevada que el valor de corte determinado por este método puede considerarse positiva. Alternativamente, el valor de corte puede desviarse a la izquierda a lo largo del diagrama, para minimizar la tasa positiva falsa, o a la derecha, para minimizar la tasa negativa falsa. En general, una muestra que genera una señal que es más elevada que el valor de corte determinado por este método se considera positiva para infección Clamidial. En una modalidad relacionada, el análisis se realiza en un flujo rápido directo o formato de prueba de separación, en donde el antígeno se inmovliza en una membrana, tal como nitrocelulosa. En la prueba de flujo directo, los anticuerpos dentro de la muestra se unen al polipéptido inmovilizado a medida que la muestra pasa a través de la membrana . Un reactivo de detección (por ejemplo, oro coloidal de proteina A) se une entonces al complejo de anticuerpo-polipéptido a medida que la solución que contiene el reactivo puede realizarse entonces como se describe arriba. En el formato de prueba de separación, un extremo de la membrana a la cual el polipéptido se une se sumerge en una solución que contiene la muestra. La muestra migra a lo largo de la membrana a través de una región que contiene reactivo de detección y al área de polipéptido inmovilizado. La concentración del reactivo de detección en el polipéptido indica la presencia de anticuerpos anti-Chlamydia en la muestra. Típicamente, la concentración de reactivo de detección en ese sitio general un patrón, tal como una línea, que puede leerse visualmente. La ausencia de tal patrón indica un resultado negativo. En general, la cantidad de polipéptido inmovilizado en la membrana se selecciona para generar un patrón visualmente discernible cuando la muestra biológica contiene un nivel de anticuerpos que sería suficiente para generar una señal positiva en un ELISA, como se trata arriba. Preferentemente, la cantidad de polipéptido inmovilizado en la membrana varía desde aproximadamente 25 ng a aproximadamente 1 g, y más preferentemente de aproximadamente 50 ng a aproximadamente 500 ng . Tales pruebas puede realizarse típicamente con una cantidad muy pequeña (por ejemplo, una gota) de sangre o suero del paciente. Por supuesto, numerosos otros procedimientos de análisis existen, los cuales son adecuados para utilizarse con los polipéptidos de la presente invención . Las descripciones anteriores se proponen para ser ejemplificativas solamente. Un ejemplo de un procedimiento de análisis alternativo que puede emplearse útilmente en tales métodos es un Western blot, en donde las proteínas presentes en una muestra biológica se separan en un ge!, antes de su exposición a un agente de unión . Tales técnicas se conocen bien por aquellos de experiencia en la materia. La presente invención proporciona además agentes, tales como anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de los mismos, que se unen específicamente a una proteína Chlamydial. Como se utiliza en la presente, un anticuerpo, o fragmento de unión al antígeno del mismo, es decir para "unirse específicamente" a una proteína Chlamydial si se reacciona a un nivel detectable (dentro, por ejemplo, de un ELISA) con una proteína Chlamydial, y no reacciona detectablemente con proteínas sin relacionar bajo condiciones similares. Como se utiliza en la presente, "unión" se refiere a una asociación no covalente entre dos moléculas separadas de manera que un complejo se forma. La habilidad para unirse puede evaluarse al, por ejemplo, determinar una unión constante para la formación del complejo. La constante de unión es el valor obtenido cuando la concentración del complejo se divide por el producto de las concentraciones componente. En general, dos compuesto se dice que se "unen", en el contexto de la presente invención, cuando la constante de unión para formación de complejo excede aproximadamente 103 L/mol. La constante de unión puede determinarse utilizando métodos bien conocidos en la materia. Los agentes de unión pueden ser capaces además de diferenciarse entre pacientes con o sin una infección Chlamydial utilizando los análisis representativos proporcionados en la presente. En otras palabras, los anticuerpos u otros agentes de unión que se unen a una proteína Chlamydial generarán una señal que indica la presencia de una infección Chlamydial en al menos aproximadamente 20% de pacientes con la enfermedad , y generará una señal negativa que indica la ausencia de la enfermedad en al menos aproximadamente 90% de individuos sin infección. Para determinar si un agente de unión satisface este requerimiento, las muestras biológicas (por ejemplo, sangre, suero, orina de espeto y/o biopsias de tejido) de pacientes con o sin infección Chlamydial (como se determina utilizando pruebas clínicas estándar utilizando) puede valorarse como se describe en la presente para la presencia de polipéptidos que se unen al agente de unión. Será aparente que un número estadísticamente significativo de muestras con y sin la enfermedad debe analizarse. Cada agente de unión satisfaría los criterios anteriores, sin embargo, aquellos de experiencia ordinaria en la materia reconocerán que los agentes de unión pueden utilizarse en combinación para mejorar la sensibilidad.
Cualquier agente que satisface los requerimientos anteriores puede ser un agente de unión . Por ejemplo, un agente de unión puede ser una ribosoma, con o sin un componente de péptido, una molécula de ARN o un polipéptido. En una modalidad preferida, un agente de unión es un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo. Los anticuerpos pueden prepararse por cualquiera de una variedad de técnicas conocidas por aquellos de experiencia ordinaria en la materia, ver, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1 968. En general, los anticuerpos puede producirse por técnicas de cultivo celular, incluyendo la generación de anticuerpos monoclonales como se describe en la presente, o a través de transfección de genes de anticuerpo en huéspedes celulares de mamífero o bacteria, con objeto de permitir la producción de anticuerpos recombinantes. En una técnica, un inmunogen que comprende el polipéptido se inyecta inicialmente en cualquiera de una amplia variedad de mamíferos (por ejemplo, ratones, ratas, conejos, oveja o cabras) . En esta etapa , el polipéptido de esta invención puede servir como el inmunogen sin modificación. Alternativamente, particularmente para polipéptidos relativamente cortos, una respuesta inmune superior puede producirse i el polipéptido se une a una proteína vehículo, tal como albúmina de suero de bovino o hemocianina de lapa clave. El inmunogen se inyecta en el huésped animal, preferentemente de acuerdo a un programa predeterminado que incorpora una o más inmunizaciones de refuerzo, y los animales sangran periódicamente. Los anticuerpos policlonales específicos para el polipéptido pueden purificarse entonces de tales antisueros por, por ejemplo, cromatografía de afinidad utilizando el polipéptido acoplado a un soporte sólido adecuado. Los anticuerpos monoclonales específicos para un polipéptido antígénico de interés pueden prepararse, por ejemplo, utilizando la técnica de Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol. 6: 51 1 -519, 1976 y mejoras a la misma. Brevemente, estos métodos incluyen la preparación de estirpes inmortales capaces de producir anticuerpos que tienen la especificidad deseada (es decir, reactividad con el polipéptido de interés) . Tales estirpes pueden producirse, por ejemplo, de células de bazo obtenidas de un animal inmunizado como se describe arriba. Las células de bazo se inmortalizan por, por ejemplo, fusión con un patrón de fusión de célula mieloma, preferentemente uno que es singéneico con el animal inmunizado. Una variedad de técnicas de fusión pueden emplearse, por ejemplo, las células de bazo y células de mieloma pueden combinarse con un detergente no iónico por unos pocos minutos y después se colocan en las placas a baja densidad en un medio selectivo que soporta el crecimiento de células h íbridas, pero no células de mieloma. Una técnica de selección preferida utiliza selección HAT (hipoxantina, aminoproteína, timidina). Después de un tiempo suficiente, usualmente aproximadamente 1 a 2 semanas, las colonias de híbridos se observan . Las colonias únicas se seleccionan y sus sobrenadantes de cultivo se prueban para actividad de unión contra el polipéptido. Los hibridomas que tienen especificidad y reactividad elevada se prefieren . Los anticuerpos monoclonales pueden aislarse de los sobrenadantes de colonias de hibridoma en crecimiento. Además, varias técnicas pueden emplearse para aumentar la producción, tal como inyección de la estirpe de hibridoma en la cavidad peritoneal de un huésped vertebrado adecuado, tal como un ratón. Los anticuerpos monoclonales pueden recolectarse entonces del fluido de ascito o la sangre. Los contaminantes pueden removerse de los anticuerpos mediante técnicas convencionales, tal como cromatografía , filtración de gel , precipitación y extracción . Los polipéptidos de esta invención pueden utilizarse en el proceso de purificación en, por ejemplo, una etapa de cromatografía de afinidad. Dentro de ciertas modalidades, el uso de fragmentos de unión al antígeno de anticuerpos puede preferirse. Tales fragmentos incluyen fragmentos Fab, que pueden prepararse utilizando técnicas estándar, brevemente, las inmoglobulinas pueden purificarse de suero de conejo por cromatografía de afinidad en columnas de perlas de Proteína A (Harlow and Lañe, Antiboides: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 19TT) y se digieren por papaína para producir fragmentos Fab y Fe. Los fragmentos Fab y Fe pueden separarse por cromatografía de afinidad en columnas de perla de Proteína A. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención pueden acoplarse a uno o más agentes terapéuticos. Los agentes adecuados en este aspecto incluyen radionulclidos, inductores de diferenciación , medicamentos, toxinas y derivados de los mismos. Los radionuclidos incluyen ß0?, 1 3l , 25l , 3 , 1 MRe, 1"Re, 21 1At y 212Bi . Los medicamentos preferidos incluyen metotrexato, y análogos de purina y pirimidina. Los inductores de diferenciación preferidos incluyen ásteres de forbol y ácido butírico. Las toxinas preferidas incluyen ricina, abrina, difteria, toxina, toxina de colera, gelonina, exotoxina de pseudomonas, toxina Shigella, y proteína antiviral de picaduras. Un agente terapéutico puede acoplarse (por ejemplo, covalentemente unido) a un anticuerpo monoclonal adecuado ya sea directa o indirectamente (por ejemplo, a través de un grupo enlazado). Una reacción directa entre un agente y un anticuerpo es posible cuando cada uno posee un substituyeme capaz de reaccionar entre sí. Por ejemplo, un grupo nucleoffiico, tal como un grupo sulfihidrilo o amino, uno puede ser capaz de reaccionar con un grupo que contiene carbonilo, tal como un anhídrido o un haluro ácido, o con un grupo alquilo que contiene un grupo saliente bueno (por ejemplo, un haluro) en el otro. Alternativamente, puede ser deseable acoplar un agente terapéutico y un anticuerpo a través de un grupo enlazador. Un grupo enlazador puede funcionar como un espaciador para distanciar un anticuerpo de un agente con objeto de evitar la ¡nferferencia con capacidades de unión. Un grupo enlazador también puede servir para incrementar la reactividad química de un substituyante o un agente o un anticuerpo, y de esta manera incrementar la eficacia de acoplamiento. Un incremento en reactividad química también puede facilitar el uso de agentes, o grupos funcionales en agentes, que de otra manera no sería posible. Será evidente por aquellos expertos en la materia que una variedad de reactivos bifuncionales o polifuncionales, tanto homo como hetero funcionales (tales como aquellos descritos en el catálogo de Pierce Chemical Co., Rockford, IL), pueden emplearse como el grupo enlazador. El acoplamiento puede efectuarse, por ejemplo, a través de un grupo amino, grupos carboxilo, grupos sulfihidrilo o residuos de carbohidrato oxidados. Estas son numerosas referencias numéricas que describen tal metodología, por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,671,958 para Rodwell et al. Cuando un agente terapéutico es más potente cuando está libre de la porción de anticuerpo de los inmunoconjugados de la presente invención, puede ser deseable utilizar un grupo enlazador que se separa durante o en la internalización en una célula. Un número de diferentes grupos enlazadores separables diferentes se ha descrito. Los mecanismos para la liberación intracelular de un agente de estos grupos enlazadores incluyen separación por reducción de un enlace de disulfuro (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,489,710 para Spitler), por irradiación de una unión fotolábil (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,625,014, para Senter et al.,), por hidrólisis de cadenas laterales de aminoácidos derivadas (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,638,045, para Kokn et al.,), por hidrólisis mediada por complemento (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,671,958, para Rodwell et al.,) e hidrólisis catalizada por ácido (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,569,789, para Blattler er al.,). Puede ser deseable acoplar más de un agente a un anticuerpo. En una modalidad, múltiples moléculas de un agente se acoplan a una molécula de anticuerpo. En otra modalidad, más de un tipo de agente puede acoplarse a un anticuerpo. Sin considerar la modalidad particular, los inmunoconjugados con más de un agente pueden prepararse en una variedad de maneras. Por ejemplo, más de un agente puede acoplarse directamente a una molécula de anticuerpo, o enlazadores que proporcionan múltiples sitios para su unión pueden utilizarse. Alternativamente, puede utilizarse un vehículo. Un vehículo puede llevar agentes en una variedad de maneras, incluyendo unión covalente ya sea directamente o a través de un grupo enlazador. Los vehículos adecuados incluyen proteínas tales como albúminas (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,507,234, para Kato et al.,), péptidos y polisacáridos tal como aminodextran (por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,699,784, para Shih et al.,). Un vehículo puede también llevar un agente por unión no covalente o por encapsulación, tal como dentro de una vesícula de liposoma (por ejemplo, Patentes de E.U. Nos. 4,429,008 y 4,873,088). Los vehículos específicos para agentes de radionuclido incluyen moléculas pequeñas radiohalogenadas y compuestos de quelación. Por ejemplo, la Patente de E.U. No. 4,735,792 describe moléculas pequeñas radiohalogenadas y sus síntesis. Un quelato de radionuclido puede formarse de compuestos de quelación que incluyen aquellos que contienen átomos de azufre y nitrógeno como los átomos donadores para unión del metal, u óxido de metal, radionuclido. Por ejemplo, Patente de E.U. No. 4,673,562 para Davison et al., describe compuestos de quelación representativos y sus síntesis. Una variedad de vías de administración para los anticuerpos e inmunoconjugados puede utilizarse. Típicamente, la administración será intravenosa, intramuscular, subcutánea o en regiones específicas de sitio por métodos apropiados. Será evidente que la dosis precisa del anticuerpo/inmunoconjugado variará dependiendo del anticuerpo utilizado, la densidad del antfgeno, y la tasa de espacio para el anticuerpo. Los anticuerpos pueden utilizarse en pruebas de diagnóstico para detectar la presencia de antígenos Chlamydia utilizando análisis similares a aquellos detallados arriba y otras técnicas bien conocidas por aquellos de experiencia en la materia , proporcionado así un método para detectar infección Clamidial en un paciente. Los reactivos de diagnóstico de la presente invención pueden comprender secuencias de ADN que codifican uno o más de los polipéptidos anteriores, o una o más porciones de los mismos. Por ejemplo, al menos dos cargas de oligonucleótido pueden emplearse en un análisis en base a una reacción en cadena de polimerasa (PCR) para amplificar el cADN específico de Chlamydia derivado de una muestra biológica, en donde al menos una de las cargas de inicio de oligonucleótido es específica para una molécula de ADN que codifica un poiipéptido de la presente invención. La presencia del cADN amplificado se detecta entonces utilizando técnicas bien conocidas en la materia, tal como electroforesis de gel. De manera similar, las sondas de oligonucleótidos específicas para una molécula de ADN que codifica un poiipéptido de la presente invención pueden utilizarse en un análisis de hibridización para detectar la presencia de un poiipéptido inventivo en una muestra biológica. Como se utiliza en la presente, el término "sonda/carga de inicio de oligonucleótido específica para una molécula de ADN" significa una secuencia de oligonucleótido que tiene al menos aproximadamente 80%, preferentemente al menos aproximadamente 90% y más preferentemente al menos aproximadamente 95% de identidad a la molécula de ADN en cuestión . Las cargas y/o sondas de oligonucleótido que pueden emplearse útilmente en los métodos de diagnóstico inventivos preferentemente tienen al menos aproximadamente 10-40 nucleótidos. En una modalidad preferida, las cargas de inicio de oligonucleótido comprenden al menos aproximadamente 1 0 nucleótidos contiguos de una molécula de ADN que codifica uno de los polipéptidos descritos en la presente. Preferentemente, las ondas de oligonucleótidos para utilizarse en los métodos de diagnóstico comprenden al menos aproximadamente 1 5 oligonucleótidos contiguos de una molécula de ADN que codifica uno de los polipéptidos descritos en la presente. Las técnicas tanto para análisis a base de PCR como análisis de hibridización se conocen bien en la materia (ver, por ejemplo, Mullís at al., Ibid; Ehrlich, Ibid) . Las cargas de inicio o sondas pueden de esta manera utilizarse para detectar secuencias específicas de Chlamydia en muestras biológicas. Las cargas de inicio o sondas de ADN que comprende secuencias de oligonucleótidos descritas arriba pueden utilizarse solas o en combinación ente sí. Los siguientes Ejemplos se ofrecen a manera de ilustración y no a manera de limitación . EJ EM PLO 1 AI SLAM IENTO DE SECU ENCIAS DE ADN QU E CODIFICAN ANTÍGENOS CHLAMYDIA Los antígenos Chlamydia de la presente invención se aislan por clonación de expresión de una biblioteca de ADN genómica de LGV II Chlamydia trachomatis esencialmente como se describe por Sanderson ef al., {J. Exp. Meó. , 1995, 82: 1751 -1 757) y se muestra que inducen proliferación PBMC y IFN-? en una estirpe T inmunoreactiva. Una estirpe T específica de Chlamydia se genera al estimular PBMCs de un donador normal sin historia de infección del tracto genital clamidial con cuerpos elementales de LGV I I Chlamydia trachomatis. Esta estirpe T, referida como TCL-8, se encuentra que reconoce células dendríticas derivadas de monocito infectadas tanto con Chlamydia trachomatis como Chlamydia pneumonía. Una biblioteca genómica aleatoriamente compartida de LGV I I Chlamydia trachomatis se construye en Lambda ZAP (Stratagene, La Joya, CA) y la biblioteca amplificada colocada en placas de microconcentración de 96 cavidades a una densidad de 30 clones/cavidad . Las bacterias se inducen para expresar proteína recombinante en la presencia de 2 mM I PTG por 3 hr, después se forman en bolitas y resuspenden en 200 µ? de RPM I 10% FBS. 10 µ? de la suspensión bacteriana inducida se transfiere a placas de 96 cavidades que contienen células dendríticas derivadas de monocito autólogo. Después de una incubación de 2 h , las células dendríticas se lavan para remover E. coli y células T específicas de Chlamydia se agregan. Los grupos de E. coli positivo se identifican al determinar la producción de I FN-y y proliferación de las células T en respuesta a los grupos. Cuatro grupos positivos se identifican , los cuales se interrumpen para producir cuatro clones puros (referidos como 1 -B 1 -66, 4-D7-28, 3-G3-10 y 1 0-C10-31 ) , con tamaños de inserción de 481 pb, 183 pb, 1 10 pb y 1400 pb, respectivamente. Las secuencias de ADN determinadas para 1 -B1 -66, 4-D7-28, 3-G3-10 y 10-C10-31 se proporcionan en SEQ I D NO: 1 -4, respectivamente. El clon 1 -B1 -66 se encuentra aproximadamente en una región 536T90 del genoma C. trachomatis (base de datos de C. trachomatis de NCBI) . Dentro del clon 1 -B 1 -66, una estructura de lectura abierta (ORF) se ha identificado (nucleótidos 1 1 5-375) que codifica una proteína 9 kDa previamente identificada (Stephens, et al., No. de Acceso ai Banco Genético AE001320) , la secuencia de la cual se proporciona en SEQ I D NO: 5) . El clon 4-D7-28 es una región más pequeña de la misma ORF (aminoácidos 22-82 de 1 -? 1 -T6) . El clon 3-G3-10 se encuentra aproximadamente en la región 74559 del genoma C. trachomatis. La inserción se clona en la orientación antisensible con respecto a su orientación en el genoma. El clon 10-C10-31 contiene una estructura de lectura abierta que corresponde a una secuencia previamente publicada para proteína ribosomal S1 3 de Chlamydia trachomatis (Gu, L. , et al., J. Bacteriology, 177:2594-2601 , 1995) . Las secuencias de proteínas predichas para 4-D7-28 y 1 0-C 10-31 se proporcionan en SEQ I D NO: 6 y 12, respectivamente. Las secuencias de proteínas predichas para 3-G3-10 se proporcionan en SEQ I D NO: 7-1 1 . En una serie relacionada de estudios de selección, una estirpe T adicional se utiliza para seleccionar la biblioteca de ADN genómica de LGV I I Chlamydia trachomatis descrita arriba . Una estirpe T específica de Chlamydia (TCT-1 ) se deriva de un paciente con una infección del tracto genital clamidial al estimular PBMC del paciente con células dendríticas derivadas de monocito autólogo infectadas con cuerpos elementales de LGV I I Chlamydia trachomatis. Un clon, 4C9- 18 (SEQ ID NO: 21 ) que contiene una inserción de 1256 bp, produjo una respuesta inmune específica, como se mide por análisis de proliferación estándar de la estirpe T especifica de Chlamydia TCT- 1 . El análisis subsecuente reveló que este clon contiene tres secuencias conocidas: dehidrogenasas de lipoamida (No. de Acceso al Banco Genético AE001326) descrita en SEQ I D NO: 22; una proteína hipotética CT429 (No. de Acceso al Banco Genético AE001316), descrita en SEQ I D NO. 23; y parte de una estructura de lectura abierta de metiltransferasa de ubiquinona CT428 (No. de Acceso al Banco Genético ??0 131 T) , descrita en SEQ I D NO: 24. En estudios adicionales que incluyen el clon 4C9-18 (SEQ I D NO: 21 ) , la secuencia de aminoácidos de longitud completa para dehidrogenasa de lipoamida (SEQ I D NO: 22) de C. trachomatis (LGV II) se expresa en el clon CtL2-LPDA-FL, como se describe en SEQ I D NO : 90. Para caracterizar además la estructura de lectura abierta que contiene el(los) epítopo(s) que estimula(n) la célula T, un fragmento de cADN que contiene nucleótidos 1 -695 del clon 4C9- 18 con una secuencia de cADN que codifica una tag 6X-Histidina en el término amino se subclona en el sitio Ndel/EcoRI del vector pET17b (Novagen, adison, Wl) , referido como el clon 4C9- 18#2 BL21 pLysS (SEQ I D NO: 25, con la secuencia de aminoácidos proporcionada en SEQ I D NO: 26) y se transforma en E. coli. La inducción selectiva de E. coli transformado con 2 m IPTG por tres horas resultó en la expresión de una proteína 26 kDa del clon 4C9-18#2 BL21 pLysS, como se evidencia por SDS-PAGE coloreado con Coomassie estándar. Para determinar la inmunogenicidad de la proteína codificada por el clon 4C9- 18#2 BL21 pLysS, E. coli que expresa la proteína 26 kDa se concentra en 1 x 104 células dendríticas derivadas de monocito e incuba por dos horas. Los cultivos de células dendríticas se lavan y 2.5 x 104 células T (TCT-1 ) se agregan y se dejan incubar por un adicional de 72 horas , tiempo en el cual el nivel de IFN-? en el sobrenadante de cultivo se determina por ELISA, Como se muestra en la Figura 1 , la estirpe T TCT-1 se encuentra que responde a cultivos inducidos como se mide por I FN-?, indicando una respuesta de célula T específica de Chlamydia contra la secuencia de dehidrogenasa de lipoamida. De manera similar, la proteína codificada por el clon 4C9- 18#2 BLS21 pLysS se muestra que estimula la estirpe T TCT- 1 por análisis de proliferación estándar. Los estudios subsecuentes para identificar antígenos Chlamydia trachomatis adicionales utilizando la técnica de clonación de la expresión de la célula T CD4+ arriba descrita produjo clones adicionales. Las estirpes T específicas de Chlamydia TCL-8 y TCT-1 , así como también la estirpe T TCP-21 se utilizan para seleccionar biblioteca genómica de LGVI I Chlamydia trachomatis. La estirpe T TCP-21 se deriva de un paciente que tiene una respuesta inmune humoral a Chlamydia pnemoniae. La estirpe TCT-1 identificó 37 grupos positivos, la estirpe TCT-3 identificó 41 grupos positivos y la estirpe TCP-21 identificó 2 grupos positivos. Los siguientes clones se derivan de 10 de estos grupos positivos. El clon 1 1 -A3-93 (SEQ I D NO: 64), identificado por la estirpe TC9-21 , es un fragmento genómico de 1339 pb que comparte homología con la superfamilia HAD (CT103) . La segunda inserción en el mismo clon comparte homología con el gen fab I (CT104) presente en al filamento complementario. El clon 11-C12-91 (SEQ ID NO: 63) identificado utilizando la estirpe TCP-21, tiene una inserción de 269 pb que es parte del gen OMP2 (CT443) y comparte homología con la cisteína 60 kDa roica en proteína de membrana exterior de C. pnemoniae. El clon 11-G10-46, (SEQ ID NO: 62), identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una inserción de 688 pb que comparte homología con la proteína hipotética CT610. El clon 11-G1-34, (SEQ ID NO: 61), identificado utilizando la estirpe TCT-3, tiene dos estructuras de lectura abierta (ORF) parciales con un tamaño de inserción de 1215 pb. Una ORF comparte homología con el gen de hidrolasa de glucógeno (CT042). El clon 11-H3-68, (SEQ ID NO: 60), identificado utilizando la estirpe TCT-3, tiene dos ORFs con un tamaño de inserción total de 1180 pb. Una ORF parcial codifica la proteína de virulencia PGP6-D codificada por plásmido mientras la segunda ORF es una ORF completa para el gen ribosolam L1 (CT318). El clon 11-H4-28, (SEQ ID NO: 59), identificado utilizando la estirpe TCT-3, tiene un tamaño de inserción de 522 pb y es parte de la ORF para el gen dnaK (CT396). El clon 12-B3-95, (SEQ ID NO: 58), identificado utilizando la estirpe TCT-1, tiene un tamaño de inserción de 463 pb y es una parte de la ORF para el gen de dehidrogenasa de lipoamida (CT557). Los clones 15-G1-89 y 12-B3-95 son idénticos, (SEQ ID NO: 55 y 58, respectivamente), identificados utilizando la estirpe TCT-1, tienen un tamaño de inserción de 463 pb y es parte de la ORF para el gen de dehidrogenasa de lipoamida (CT557). El clon 12-G3-83, (SEQ ID NO: 57), identificada utilizando la estirpe TCT-1, tiene un tamaño de inserción de 1537 pb y tiene parte de la ORF para la proteína lipotética CT622. El clon 23-G7-68, (SEO. I D NO: 79), identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una inserción de 950 pb y contiene una parte pequeña de la ORF ribosomal L1 1 , la ORF completa para la proteína ribosomal L1 y una parte de la ORF para la proteína ribosomal L10. Además, este clon también identificó las líneas del paciente CT4, CT5, CT 1 1 , CT12 y CH H037. El clon 22-F8-91 , (SEQ ID NO: 80), identificado utilizando la estirpe TCT- , contiene una inserción de 395 pb que contiene una parte de la ORF pmpC en el filamento complementario del clon. El clon 21 -E8-95, (SEQ I D NO: 81 ) , identificado utilizando la estirpe TCT-3. contiene una inserción de 2 ,085 pb que contiene parte de ORF CT613, la ORF completa para CT612, la ORF compelta para CT61 1 y parte de la ORF para CT610. El clon 19-F 12-57, (SEQ I D NO: 82) , identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una inserción de 405 pb que contien parte de la ORF CT 858 y un parte pequeña de la OR F recA. El clon 19-F12-53, (SEQ I D NO: 83) , identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una inserción de 379 pb que es parte de la ORF para CT455 que codifica la sintasa de tARN de glutamilo. El clon 19-A5-54, (SEQ I D NO: 84), identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una inserción de 71 5 pb que es parte de la ORF3 (filamento complementario del clon) del plásmido críptico. El clon 17-E1 1 -72, (SEQ ID NO: 85), identificado utilizando la estirpe TCT-1 . contiene una inserción de 476 pb que es parte de la ORF para Opp_2 y pmpD. La región pmpF de este clon se cubre por la región pmpD del clon 15-H2-76. El clon 1 7-C 1 -77, (SEQ I D NO: 86) , identificado utilizando la estirpes del paciente CT3, CT1 , CT4 y CT12 , contiene una inserción de 1 551 pb que es parte de la ORF CT857, así como también parte de la ORF CT858. El clon 1 5-H2-76, (SEO. ID NO. 87), identificado utilizando la estirpe TCT- , contiene una inserción de 3,031 pb que contiene una gran parte de la ORF pmpD, parte de la ORF CT089, así como también parte de la ORF para SycE. El clon 1 5-A3-26, (SEQ I D NO: 88), contiene una inserción de 976 pb que contiene parte de la ORF para CT858. El clon 17-G4-36, (SEQ I D NO: 267), identificado utilizando las líneas del paciente CL8, TCT-10, CT1 , CT5, CT13 y CHH037, contiene una inserción de 680 pb que se encuentra en estructura con beta-gal en el plásmido y comparte homología con parte de la ORF de subunidad beta de polimerasa de ARN dirigida por ADN (CT31 5 en SerD). Varios de los clones descritos arriba comparten homología con varias proteínas de membrana polimórficas. La secuencia genómica de Chlamydia trachomatis contiene una famil ia de nueve genes de protelna de membrana polimórfica, referidos como pmp. Estos genes se designan pmpA, pmpB, pmpC, pmpD, pmpE, pmpF, pmpG . pmpH y pmpl . Las proteínas expresadas de estos genes se cree que son de relevancia biológica para generar una respuesta inmune protectora a una infección Chlamydial. En particular, pmpC, pmpD, pmpE y pmpl contienen póptidos de señal predecibles, que sugieren que son proteínas de membrana exterior, y por lo tanto, objetivos ¡nmunológicos potenciales. En base a la secuencia de serovar LGVI I Chlamydia trachomatis, los pares de carga de inicio se designan para PCR para amplificar los fragmentos de longitud completa de pmpC, pmpD, pmpE, pmpG, pmpH y pmpl . Los fragmentos resultantes se subclonan en el vector de vacuna de ADN JA4304 o JAL, que es JA4304 con un enlazador modificado (SmithKIine Beecham , Londres, Inglaterra) . Específicamente, pmpC se sublcona en el vector JAL utilizando el oligo 5' GAT AGG CGC GCC GCA ATC ATG AAA TTT ATG TCA GCT ACT GCT G y el oligo 3' CAG AAC GCG TTT AGA ATG TCA TAC GAG CAC CGA A como se proporciona en el SEQ ID NO: 197 y 198, respectivamente. La amplificación PC del gen bajo condiciones bien conocidas en la materia y ligación en los sitios 5' ASCI/3' Mlul del vector JAL se completa después de insertar la secuencia de nucleótidos corta GCAATC (SEQ ID NO: 199) aguas arriba de ATG para crear una secuencia como Kozak. El vector de expresión resultante contuvo el gen pmpC de longitud completa que comprende 5325 nucleótidos (SEQ ID NO: 173) que contienen la secuencia de señal hipotética , que codifica una proteína 187 kDa (SEQ ID NO: 179). El gen pmpD se subclona en el vector de vacuna JA4304 después de la amplificación de PCR del gen utilizando los siguientes oligos: 5' oligo-TGC AAT CAT GAG TTC CGA GAA AGA TAT AAA AAG C (SEQ ID NO: 200) y 3' oligo-CAG AGC TAG CTT AAA AGA TCA ATC GCA ATC CAG TAT TC (SEQ ID NO: 201 ) . Este gen se liga en un sitio 5' mitigado HI I I/3' Mlul del vector de vacuna JA4304 utilizando técnicas estándar bien conocidas en la materia. La CAATC (SEQ ID NO: 202) se inserta aguas arriba de ATG para crear un secuencia como Kozak. Este clon es único en que la última treonina del sitio HindI I I falta debido al procedimiento de mitigación, ya que es la última glicina de la secuencia como Kozak. La inserción, un fragmento de nucleótido 4593 (SEQ I D NO: 1 72) es el gen de longitud completa la pmpD que contiene la secuencia de señal hipotética , que codifica una proteína 161 kD (SEQ I D NO: 178) . PmpE se subclina en el vector JA4304 utilizando el 5' oligo- TGC AAT CAT GAA AAA AGC GTT TTT CTT TTT C (SEQ I D NO: 203), y 3' oligo-CAG AAC GCG TCT AGA ATC GCA GAG CAA TTT C (SEQ I D NO: 204). Después de la amplificación de PCR , el gen se liga en el sitio 5' mitigado H I I I/3' Mlul de JA4304. Para facilitar esto, una secuencia de nucleótidos corta, TGCAATC (SEQ ID NO: 293), se agrega aguas arriba del codón de iniciación para crear una secuencia como Kozak y reconstituir el sitio Hind l ll . La inserción es el gen pmpE de longitud completa (SEQ I D NO. 171 ) que contiene la secuencia de señal hipotética. El gen pmpE codifica una proteína 105 kD (SEQ I D NO: 177). El gen pmpG se amplifica por PCR utilizando el 5' oligo-GTG CAA TCA TGA TTC CTC AAG GAA TTT ACG (SEQ I D NO: 205) , y el 3' oligo-CAG AAC GCG TTT AGA ACC GGA CTT TAC TTC C (SEQ ID NO: 206) y se subclona en el vector JA4304. Las estrategias de clonación similares se siguen para los genes pmpl y pmpK. Además, los pares de cargas de inicio se diseñan para amplificar por PCR los fragmentos de recubrimiento o longitud completa de los genes pmp, que se subclonan entonces para la expresión de proteína en el vector pET1 7b (Novagen, Madison, Wl) y transfectan en E. coli BL21 pLysS para expresión y purificación subsecuente utilizando la metodología cromatografía de histidina níquel proporcionada por Novagen. Varios de los genes que codifican las proteínas recombinantes, como se describe abajo, carecen de la secuencia de señal para facilitar la expresión de la proteína. La expresión de proteína de longitud completa de pmpC se realiza a través de la expresión de dos fragmentos de recubrimiento, que representan los términos carboxi y amino. La subclonación de la porción terminal de amino pmpC, que carece de la secuencia de señal, (SEQ ID NO: 187, con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 195) utilizó el 5' oligo- CAG ACA TAT GCA TCA CCA TCA CCA TCA CGA GGC GAG CTC GAT CCA AGA TC (SEQ ID NO: 207). y el 3' oligo-CAG AGG TAC CTC AGA TAG CAC TCT CTC CTA TTA AAG TAG G (SEQ ID NO: 208) en el sito de clonación 5' Ndel/30 KPN del vector. La porción de término carboxi del gen, fragmento terminal de carboxi pmpC (SEQ I D NO: 186, con la secuencia de aminoácidos correspondientes proporcionada en SEQ ID NO: 194), se subclona en el sitio de clonación 5" Nhel/3' KPN para el vector de expresión utilizando las siguientes cargas de inicio: 5' oligo- CAG AGC TAG CAT GCA TCA CCA TCA CCA TCA CGT TAA GAT TGA GAA CTT CTC TGG C(SEQ ID NO: 209), y el 3' oligo- CAG AGG TAC CTT AGA ATG TCA TAC GAG CAC CGC AG (SEQ I D NO: 210) . PmpD también se expresa como proteínas de recubrimiento. La porción de terminal de amino pmpD, que carece de la secuencia de señal, (SEQ I D NO: 185, con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 193) contiene el codoón de iniciación de pET17b y se expresa como una proteína 80 kD. Para propósitos de purificación y expresión de proteína, una tag de histidina seis sigue al codón de iniciación y se fusiona con el aminoácido 28 (nucleótido 84) del gen. Las siguientes cargas de inicio se utilizan, 5' oligo, CAG ACA TAT GCA TCA CCA TCA CCA TCA CGG GTT AGC (SEQ I D NO: 212), para dividirse e el sitio de clonación Ndel/3' KPN del vector. La porción de término pmdD-carboxi (SEQ ID NO: 184) se expresa en una proteína 92 kD (SEQ ID NO: 192) . Para expresión y purificación subsecuente, una metionina adicional , alanina y serina se incluye, que representa el codón de iniciación y los primeros dos aminoácidos del vector pET1 7b. Una tag de istidina seis aguas debajo de la metionina, alanina y serina se fusiona en el aminoácido 691 (nucleótido 2073) del gen. El 5' oligo- CAG AGC TAG CCA TCA CCA TCA CCA TCA CCA TCA GG TGC TAT TTC TTG CTT ACG TGG (SEQ I D NO:21 3) y el 3' oligo- CAG AGG TAC TTn AAA AGA TCA ATC GCA ATC CAG TAT TCG (SEQ ID NO: 214) se utilizan para subclonar la inserción en el sitio de clonación 5' Nhel/3' KPN del vector de expresión . PmpE se expresa como una proteína 106 kD (SEQ ID NO: 183, con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 191 ). La inserción de pmpE también carece de la secuencia de señal nativa. La amplificación PCR del gen bajo condiciones bien conocidas en la materia se realiza utilizando las siguientes cargas de inicio oligo: 5' oligo- CAG AGGA ATC CAC ATC ACC ATC ACC ATC ACG GAC TAG TCA GAG AGG TTC (SEQ ID NO: 215) , y el 3' oligo-CAG AGA ATT CCT AGA ATC GCA GAG CAA TTT C (SEQ I D NO: 216) , y la inserción amplificada se liga en un sitio 5' Bam HI/3' EcoRi de JA 4304. La secuencia de nucleótido corta, como se proporciona en SEQ ID NO: 21 7, se inserta aguas arriba del codón de iniciación para carear la secuencia cono Kozak y reconstituir el sitio H indl l l . La proteína expresada contiene el codón de iniciación y los 21 aminoácidos aguas debajo del vector de expresión pET17b, es decir, MASMTGGQQMGRDSSLVPDSSDP (SEQ ID NO: 21 8). Además, una tag de histidina 6 se incluye aguas arriba de la secuencia descrita arriba y se fusiona al aminoácido 28 (nucleótido 84) del gen, que elimina el péptido de señal hipotético. Las secuencias proporcionada en SEQ ID NO: 183 con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 1 T 1 no incluye estas secuencias adicionales. El gen pmpG (SEQ I D NO: 182, con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 190) se amplificó por PCR bajo condiciones bien conocidas en la materia utilizando las siguientes cargas de inicio oligo: 5' oligo-CAG AGG TAC CGC ATC ACC ATC ACC ATC ACA TGA TTC CTC AAG GAA TTT ACG (SEQ ID NO: 219) y 3' oligo- CAG AGC GGC CGC TTA GAA CCG GAC TTT ACT TCC (SEQ ID NO: 220) y se liga en el sitio de clonación 5' KPN/3' Notl del vector de expresión. La proteína expresada contiene una secuencia de aminoácidos adicional en el extremo amino, principalmente, MAS TGGQQNGRDSSLVPHH H H H H (SEQ ID NO: 221 ), que comprende el codón de iniciación y secuencia adicional del vector de expresión pET17b. El gen pmpl (SEQ I D NO: 1 81 ), con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 189) se amplificó por PCR bajo condiciones bien conocidas en la materia utilizando las siguientes cargas de inicio 5' oligo-CAG AGC TAG CCA TCA CCA TCA CCA TCA CCA TCA CCT CTT TGG CCA GGA TCC C (SEQ ID NO: 222) y la 3' oligo-CAG AAC TAG TCT AGA ACC TGT AAG TGG TCC (SEQ ID NO: 223), y liga en el vector de expresión en el sitio de clonación 5' Nhel/3' Spel . La proteína expresada 95 kD contiene el codón de iniciación más una alanina adicional y serina del vector pET17b en el extremo amino de la proteína. Además, una tag de histidina seis se fusiona en el aminoácido 21 , que elimina el péptido de señal hipotética. El clon 14HI-4, (SEQ ID NO: 56) , identificado utilizando la estirpe TCT-3, contiene una ORF completa para el gen TSA, CT603 específica del antioxidante de tiol (ORF CT603 es una homologa de CPn0778 de C. pnemoniae). La estructura de lectura abierta TSA en el clon 14-H 1 -4 se amplifica de manera que la proteína expresada posee una metionina adicional y una tag 6x histidina (extremo de terminal amino) . Esta inserción amplificada se subclona en los sitios Nde/EcoRI del vector pET17b. En la inducción de este clon con I PTG , una proteína 22.6 kDa se purifica por cromatografía de afinidad de agarosa. La secuencia de aminoácidos determinada para la ORF del aminoácido 1 95 del clon 14-H 1 -4 que codifica el gen TSA se proporciona para SEQ ID NO: 65. El análisis adicional produjo un clon de longitud compelía para el gen TSA, referido como CTL2-TSA-FL, con la secuencia de aminoácidos de longitud completa proporcionada en SEQ I D NO: 92. Los estudios adicionales produjeron 10 clones adicionales identificados por las estirpes T TCT- 1 y TCT-3, como se describe arriba. Los clones identificados por la línea TCT-1 son: 16-D4-22 , 17-C5- 19, 18-C5-2 , 20-G3-45 y 21 -C7-66; clones identificados por la línea TCT-3 son: 17-C 10-31 , 17-E2-9 , 22-A1 -49 y 22-B3-53. El clon 21 -G12-60 se reconocen tanto por las estirpes TCT-1 y TCT-3. Además, el clon 20-G3-45, que contiene la secuencia específica para pmpB, se identifica contra las líneas del paciente CT1 y CT4. El clon 16-D4-22 (SEQ I D NO: 1 19) , identificado utilizando la estirpe TCT- 1 contiene una inserción de 953 pb que contiene dos genes, partes de estructura de lectura abierta 3 (ORF) y ORF4 y el plásmido C. trachomatis para su crecimiento dentro de las células mamíferas. El clon 17-C5-19 (SEQ I D NO: 1 18), contiene una ¡nserción de 951 pb que contiene parte de la ORF para DT431 , que codifica la proteasa clpP_1 y parte de la ORF para CT430 (epimerasa de diaminopimelato). El clon 18-C5-2 (SEQ ID NO: 1 17) es parte de la OR F para proteína ribosomal S1 con una inserción de 446 pb que se identifica utilizando la estirpe TCT-1 . El clon 20-G3-45 (SEQ ID NO: 1 16), identificado por la estirpe TCT-1 , contiene una inserción de 437 pb que es parte del gen pmpB (CT41 3). El clon 21 -C7-8 (SEQ I D NO: 1 15), identificado por la estirpe TCT- 1 , contiene una inserción de 995 pb que codifica parte de la proteína similar dnaK. La inserción de este clon no se cubre con la inserción del clon 1 1 -H4-28 TCT-3 (SEQ ID NO: 59) , que se muestra que es parte del gen dnaK CT396. El clon 17-C 10-31 (SEQ I D NO: 1 14) , identificado por la estirpe TCT-3 , contiene una inserción de 976 pb. Este clon contiene parte de la ORF para CT858, una proteasa que contiene dominios DHR y IRBP. El clon 17-E2-9 (SEQ ID NO: 1 13) contiene parte de ORFs para dos genes, CT61 1 y CT610, que expanden una inserción de 1 142 pb. El clon 22-A1 -49 (SEQ I D NO: 1 12), identificado utilizando la línea TCT-3, también contiene dos genes en una inserción de 698 pb. Parte de la ORF para CT660 (ADN girasa{gyrA_2} se presenta en el filamento superior en donde como la ORF completa para una proteína hipotética CT659 se presenta en el filamento complementario. El clon 22-B3-53 (SEQ ID NO: 1 1 1 ), identificado por la línea TCT-1 , tiene una inserción de 267 pb que codifica parte de la ORF para GroEL (CT1 10). El clon 21-G 12-60 (SEQ ID NO: 1 1 0), identificado por ambas estirpe, TCT-1 y TCT-3 contiene una inserción de 1461 pb que contiene ORFs parciales para proteínas hipotéticas CT875, CT229 y CT228.
Los antígenos Chlamydia adicionales se obtienen al seleccionar una biblioteca de expresión genómica de Chlamydia trachomatis (serovar LGV I I) en el vector de Selección 1 Lambda (Novagen, Madison, Wl) con suero agrupado de varios individuos infectados con Chlamydia utilizando técnicas bien conocidas en la materia. Los siguientes clones inmunoreactivos se identifican y las inserciones que contienen genes Chlamydia se secuencian: CTL3#1 (SEQ ID NO: 71 ), CTL2#2 (SEQ ID NO: 70): CTL2#3-5' (SEQ I D NO: 72 , una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5') ; CTL2#3-3' (SEQ ID NO: 73, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 31); CTL2#4 (SEQ ID NO: 53); CTL2#5 (SEQ I D NO: 69) ; CTL2#6 (SEQ ID NO: 68); CTL2#7 (SEQ ID NO: 67) ; CTL2#8b (SEQ I D NO: 54); CTL2#9 (SEQ ID NO: 66); CTL2#10-5' (SEQ I D NO: 74 , una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5'); CTL2#10-3' (SEQ I D NO: 75, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 3'); CTL2# 1 -5* (SEQ ID NO: 45, una primer secuencia genómica que representa el extremo 5'); CTL2#1 1-3' (SEQ ID NO: 44, una segunda secuencia genómica que representa el extremo 3'); CTL2#12 (SEQ ID NO: 46); CTL2#16-5' (SEQ ID NO: 47); CTL2#18-5' (SEQ ID NO: 49. una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5'); CTL2#18-3' (SEQ I D NO. 48, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 3'); CTL2#21 (SEQ I D NO: 50); CTL2#23 (SEQ ID NO: 51 ; y CTL2#24 (SEQ ID NO: 52) . Los antígenos Chlamydia trachomatis adicionales se identifican por clonación de expresión serológica. Estos estudios - In utilizaron sueros agrupados de varios individuos infectados con Chlamydia, como se describe arriba, pero los anticuerpos IgA e IgM se utilizando además de IgG como un anticuerpo secundario. Los clones seleccionados por este método aumentan la detección de antígenos reconocidos por una respuesta inmune temprana a una infección Chlamydial, que es una respuesta inmune humoral mucosal. Los siguientes clones inmunoreactivos se caracterizan y las inserciones que contienen genes Chlamydia se secuenciarion: CTL2gam-1 (SEQ I D NO: 290) , CTL2gam-2 (SEQ ID NO: 289) , CTL2gam-5 (SEQ ID NO: 288) , CTL2gam-6-3' (SEQ I D NO: 287, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 3') , CTL2gam-6-5' (SEQ I D NO. 286, una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5') , CTL2gam-8 (SEQ ID NO: 285), CTL2gam-10 (SEQ ID NO: 284), CTL2gam- 13 (SEQ I D NO: 283), CTL2gam- 15-3' (SEQ ID NO: 282, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 3'), CTL2gam-15-5' (SEQ I D NO: 281 , una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5'), CTL2gam- 17 (SEQ I D NO: 280), CTL2gam-18 (SEQ ID NO: 279), CTL2gam-21 (SEQ ID NO: 278) , CTL2gam-23 (SEQ ID NO: 277) , CTL2gam-24 (SEQ ID NO. 276), CTL2gam-26 (SEQ ID NO. 275), CTL2gam-27 (SEQ ID NO: 274) . CTL2gam-28 (SEQ ID NO: 273) , CTL2gam-30-3' (SEQ ID NO: 272, una segunda secuencia genómica determinada que representa el extremo 3') y CTL2gam-30-5' (SEQ ID NO: 271 , una primer secuencia genómica determinada que representa el extremo 5 ), EJEMPLO 2 IN DUCCIÓN DE LA PROLI FERACIÓN DE CÉLU LA T Y PRODUCCIÓN DEL INTEFERON ? POR ANTÍGENOS CHLAMYDIA TRACHOMA TIS La habilidad del antígeno Chlamydia Trachomatis recombinante para inducir la proliferación de la célula T y producción del interferón ? se determina como sigue. Las proteínas se inducen por IPTG y purifican por cromatografía de afinidad de agarosa Ni-NTA (Webb et al., J.lmmunology 57:5034-5041 , 1996). Los polipéptidos purificados se seleccionan entonces por la habilidad de inducir la proliferación de célula T en preparaciones PBMC. PB Cs de pacientes con C. trachomatis así como también de donadores normales cuyas células T se sabe que se proliferan en respuesta a antígenos Chlamydia, se cultivan en medio que comprende RP I 1640 complementado con 10% de suero de humano agrupado y 50 µ?/p?? gentamicina. Los polipéptidos purificados se agregan por duplicado en concentraciones de 0.5 a 10 g/mL. Después de seis días de cultivo en placas de fondo redondo de 96 cavidades en un volumen de 200 µ?, 50 µ? de medio so remueve de cada cavidad para la determinación de niveles de I FN-?, como se describe abajo. Las placas se impulsan entonces con 1 µCi cavidad de timidina concentrada por un adicional de 18 horas, se recolectan y la concentración de tritio se determina utilizando un contador de centelleo de gas. Las fracciones que resultan en proliferación en ambas réplicas tres veces mayores que la proliferación observada en las células cultivada en medio solo se consideran positivas. INF-? se mide utilizando un análisis inmunoabsorbente enlazado a enzima (ELISA). Las placas de ELISA se revisten con un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido a IFN-? humano (Phar igen, San Diego, CA) en PBS por cuatro horas a temperatura ambiente. Las cavidades se bloquean entonces con PBS que contiene 5% (P/V) de leceh seca sin grasa por 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavan seis veces en PBS/0.2% TWEEN-20 y las muestras diluidas en 1 :2 en medio de cultivo en las placas de ELISA se incuban durante la noche a temperatura ambiente. Las placa se lavan de nuevo y un suero de IFN-? anti-humano de conejo policlonal diluido 1 :3000 en PBS/10% da suero de cabra normal se agrega a cada cavidad . Las placas se incuban entonces por dos horas a temperatura ambiente, lavan e IgG anti-conejo acoplado con peroxidasa de rábano picante (Sigma Chemical So. , St. Louis, MO) se agrega a una dilución 1 :2000 en PBS/5% de leche seca sin grasa. Después de una incubación adicional de dos horas a temperatura ambiente, las placas se lavan y el substrato TM B se agrega. La reacción se detiene después de 20 min con 1 N de ácido sulfúrico. La densidad óptica se determina a 450 nm utilizando 570 nm como una longitud de onda de referencia. Las fracciones que resultan en ambas réplicas dando un OD dos veces mayor que el OD promedio de células cultivadas en medio solo, más 3 desviaciones estándar, se consideran positivas. Utilizando la metodología anterior, una proteína 1 B 1 -66 recombinante (SEO. ID NO: 5) así como también dos póptidos sintéticos que corresponde a residuos de aminoácidos 48-67 (SEQ I D NO: 1 3, referida como 1 -B1 -66/48-67) y 58-77 (SEQ ID NO: 14, referida como 1 -B 1 -66/58-77), respectivamente, de SEQ ID NO: 5, se encuentra que inducen una respuesta proliferativa y producción de I FN-? en una estirpe T específica de Clamidia utilizada para seleccionar una biblioteca genómica de LGV I I C. trachomatis. Los estudios adicionales han identificado un epítopo de célula T específico de C. trachomatis en la proteína S 13 ribosomal. Empleando técnicas de mapeo de epítopo estándar bien conocidas en la materia con una estirpe T específica de Chlamydia del donador CL-8 (estirpe T TC L-8 EB/DC) . La Figura 8 ilustra el primer póptido, rS 13, 1 -20 (SEQ I D NO: 1 06) , es 100% idéntico con la secuencia C. pneumoniae, explicando la reactividad cruzada de la estirpe T con rS 13 C. pneumoniae y C. trachomatis. La respuesta al segundo péptido rS13 56-75 (SEQ I D NO: 1 08) es específico de C. trachomatis, indicando que la respuesta de rS 13 en este donador asintomático saludable se produce por exposición a C. trachomatis y no a C. pneumoniae, o cualquier otra infección microbiana. Como se describe en el Ejemplo 1 , Clon 1 1 -C 12-91 (SEQ I D NO: 63) , identificado utilizando la estirpe TCP-21 , tiene una inserción de 269 pb que es parte del gen OM P2 (CT443) y comparte homología con la proteína de membrana exterior rica en cisteina 60 kDa de C. pneumoniae, referida como OMCB. Para definir además el(los) epítopo(s) reactivo(s) , el mapeo de epítopo se realiza utilizando una serie de péptidos de recubrimiento y el inmunoanálisis previamente descrito. Brevemente, las respuestas proliferativas se determinan al estimular 2.5 x 104 células T TCP-21 en la presencia de 1 x 104 células dendríticas derivadas de monocito con ya sea cuerpos elementales no infecciosos derivados de C. trachomatis y C. pneumoniae, o péptidos derivados de la secuencia de proteína de proteína OMCB de C. trachomatis o C. pneumoniae (0.1 µ?/?t??) . Las células T TCP-21 respondieron a epítopos CT-OMCB #167- 186, CT-O CB #171 -190, CT-OMCB #171 -186 y a un grado menor, CT-OMCB #175-186 (SEQ ID NO: 249-252, respectivamente). Notablemente, la estirpe T TCP-21 también da una respuesta proliferativa al péptido homólogo CT-OMCB #171-186 (SEQ ID NO: 253), que es igual o mayor que la respuesta a los péptidos C. trachomatis. Las substituciones de aminoácidos en posición dos (es decir, Asp para Glu) y posición cuatro (es decir, Cys para Ser) no alteran la respuesta proliferativa de las células T y por lo tanto demuestra este epítopo que es un epítopo reactivo cruzado entre C. trachomatis y C. pneumoniae. Para definir además el epítopo arriba descrito, una estirpe T adicional, TCT-3, se utiliza en experimentos de mapeo de epítopo. Los inmunoanálisis se realizan como se describe arriba, excepto que solamente los péptidos de C. trachomatis se evalúan. Las células T dan una respuesta proliferativa a los dos péptidos, CT-OMCB #152-171 Y CT-OMCB #157-176 (SEQ I D NO: 246 y 247, respectivamente), definiendo así un epítopo ¡nmunológico adicional en la proteína de membrana exterior rica en cisteína de C. trachomatis. El clon 14H 1-4, (SEQ ID NO: 56, con la secuencia de aminoácidos de longitud completa correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 92), se identifica utilizando la estirpe TCT-3 en el sistema de clonación de expresión de célula T CD4 previamente descrito, y se mostró que contiene una ORF compelta para el gen antioxidante específico de tiol (CT603), referido como un TSA. Los inmunoanálisis de mapeo de epítopo se realizan, como se describe arriba, para definir además el epítopo. La estirpe T TCT-3 mostró una respuesta proliferativa a los póptidós de recubrimiento CT-TSA#96-115, CT-TSA#101-120 y CT-TSA#106-125 (SEQ ID NO: 254-256, respectivamente) que demuestran un epítopo inmunoreactivo en el gen antioxidante específico de tiol de serovar LGVII C. trachomatis. EJEMPLO 3 PREPARACIÓN DE POLIPÉPTIDOS SINTÉTICOS Los polipéptidos pueden sintetizarse en un sintetizador de péptidos Millipore 9050 utilizando química FMOC con activación HPTU (O-Benzotriazola-N.N.N'.N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato). Una secuencia Gly-Cys-Gly puede unirse al término amino del péptido para proporcionar un método para conjugar o marcar el péptido. La separación de los péptidos del soporte sólido puede llevarse a cabo utilizando la siguiente mezcla de separación: ácido trifluoroacét¡co:etanod¡ol:tioanisola:agua:feno (40:1:2:2:3). Después de separar por 2 horas, los péptidos pueden precipitarse en metil-t-butil-éter frío. Las bolitas de péptido pueden entonces disolverse en agua que contiene 0.1% ácido trifluoroacótico (TFA) y liofilizarse antes de la purificación por HPLC de fase inversa C18. Un gradiente de 0-60% acetonitrilo (que contiene 0.1% TFA) en agua (que contiene 0.1% TFA) puede utilizarse para producir los péptidos. Después de la liofilización de las fracciones puras, los péptidos pueden caracterizarse utilizando espectrometría de masa de electrorocío y por análisis de aminoácido. EJEMPLO 4 AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE SECUENCIAS DE ADN QUE CODIFICAN ANTÍGENOS CHLAMYDIA UTILIZANDO SISTEMAS DE - 1T2 - VECTOR DE EXPRESIÓN RET QVIRAL Y ANÁLIS IS I N M U NOLÓG ICOS SU BSECU ENTES Una biblioteca genómica de LGV I I Chlamydia Trachomatis se construye por digestiones limitadas utilizando enzimas de restricción BamH I, Bgl l l , BstYi y Mbol. Los fragmentos de digestión de restricción se ligan subsecuentemente en el sitio BamH I de los vectores retrovirales pBI B-KS1 ,2 ,3. Este conjunto vector se modifica para contener un sitio de iniciación de traducción Kosak y codones de detención con objeto de permitir la expresión de proteínas de fragmentos genómicos de ADN cortos, como se muestra en la Figura 2. Los grupos de ADN para 80 clones se preparan y transfectan en la línea de empaque retroviral Phoenix-Ampho, como se describe en Pear, W.S . , Scott, M . L. and Nolan, G. P. , Generation of H igh Titre, Helper-free Retroviruses by Transient Transfection . ethods in Molecular Medicine: Gene Therapy Protocols, Humana Press, Totowa, NJ , pp. 41 -57. La biblioteca Chlamydia en forma retroviral se traduce entonces en células P815 que expresan H2-Ld, que se utilizan entonces como células objetivo para estimular una estirpe T específica de antígeno. Una estirpe T CD8+ limitada de H2d murino, específica de Chlamydia se expande en cultivo por vueltas repetidas de estimulación con células J774 infectadas con C. trachomatis y células de bazo singenéiocas irradiadas, como se describe por Starnbach, M. , en J. Immunol., 153:5183, 1994. Esta estirpe T específica de Chlamydia se utiliza para seleccionar la biblioteca genómica Chlamydia anterior expresada por las células P8 5 retroviralmente traducidas . Los grupos de ADN positivos se identifican por la detección de producción de I FN-? utilizando análisis Elispot (ver Lalvani at al. , J. Experimental Medicine 786:859-865, 1997). Dos grupos positivos, referidos como 2C7 y 2E10, se identifican por análisis Elispot de I FN-?. Los traductores estables de las células P815 del grupo 2C7 se clonan al limitar la dilución y clones individuales se seleccionan en base a su capacidad para la producción de I FN-? de la línea CTL específica de Chlamydia. De este proceso de selección, cuatro clones positivos se seleccionan, referidos como 2C7-8, 2C7-9, 2C7-19 y 2C7-21 . De manera similar, el grupo positivo 2E10 se selecciona además, resultando en un clon positivo adicional, que contiene tres inserciones. Las tres inserciones son fragmentos de CT016, sintasa tA N y genes clpX (SEQ ID NO: 268-270, respectivamente). El ADN transgénico de estos cuatro clones 2C7 positivos se amplificaron por PCR utilizando cargas de inicio específicas de pBIB-KS para amplificar selectivamente la inserción de ADN Chlamydia. Las inserciones amplificadas se purifican por gel y secuencian. Un clon inmunoreactivo, 2C7-8 (SEQ ID NO: 15, con la secuencia de aminoácidos predicha proporcionada en SEQ I D NO: 32), es un fragmento de 160 pb con homología a los nucleótidos 597304-597145 de Chlamydia Trachomatis, serovar D (NCBI, búsqueda BLASTN; SEQ ID NO. 33 con la secuencia de aminoácidos predicha proporcionada en SEQ I D NO: 34). La secuencia del clon 2C7-8 se mapea dentro de dos estructuras de lectura abierta putativas de la región de homología elevada descrita inmediatamente arriba, y en particular, una de estas estructuras de lectura putativas, consistiendo de un fragmento de 298 aminoácidos (SEQ ID NO: 16, con la secuencia de aminoácidos predic a proporcionada en SEQ ID NO: 17) , se expone que muestra actividad inmunológica. La clonación de longitud completa del fragmento de 298 aminoácidos (referido como CT529 y/o gen Capí ) de serovar L2 se obtiene por amplificación PCR utilizando las cargas de inicio 5'-ttttgaagcaggtagggaatatg (delantera) (SEQ I D NO: 159) y 5'-ttaagaaatttaaaaaatccctta (inversa) (SEQ I D NO: 160), utilizando ADN genómico L2 C. trachomatis como templado. Este producto PCR se purifica por gel, clona en pCRBIunt (Invitrogen , Carlsbad, CA) para secuenciación y después se subclona en el sitio £coR 1 de pBI B-KMS, un derivado de pBIB-KS para expresión. El homólogo Chlamydia pneumoniae de CT529 se proporciona en SEQ ID NO: 291 , con la secuencia de aminoácidos correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 292. Los diversos serovares CT529 que codifican ADN de longitud completa se amplifican por PCR de lisatos bacterianos que contienen 106 I FU , esencialmente como se describe (Denamur, E . F C. Sayada , A. Souriau, J . Orfila, A. Rodolakis y J . Elion, 1991 , J . Gen. Microbiol . 137:225). Los siguientes serovares se amplifican como se describe: Ba (SEQ ID NO: 1 34, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 135); E (BOUR) y E ( TW447) (SEQ I D NO: 122, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 123); F (N 11 ) (SEQ I D NO: 128, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 129) ; G; (SEQ I D NO. 126, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 127) ; la (SEQ I D NO: 124, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 1 25) ; L1 (SEQ I D NO: 1 30, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 131 ), L3 (SEQ ID NO: 132, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 133); I (SEQ I D NO: 263, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 264); K (SEQ I D NO: 265, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ ID NO: 266); y MoPn (SEQ I D NO: 136, con la secuencia de aminoácidos predicha correspondiente proporcionada en SEQ I D NO: 137) . Las reacciones de PC R se realizan con equipo Advantage Genomic PCR (Clontech, Palo Alto, CA) utilizando cargas de inicio específicas para el ADN serovar 12 (externo a la ORF) . Las secuencias de carga de inicio fueron 5'-ggtataatatctctctaaattttg (delantera-SEQ ID NO: 161 ) y 5'-agataaaaaaggctgtttc' (inversa-SEQ ID NO: 162) excepto para MoPn que requiere 5'-ttttgaagcaggtaggtgaatatg (delantera-SEQ ID NO: 163) Y 5'-tttacaataagaaaagctaagcactttgt (inversa-SEQ I D NO: 164) . El ADN amplificado por PCR se purifica con el equipo de purificación QIAquick PCR (Qiagen, Valencia, CA) y clona en pCR2. 1 (Invitorgen, Carlsbad, CA) para secuenciación. La secuenciación de A DN derivada de inserciones amplificadas por PCR de clones inmunoreactivos se hace en un secuenciador automático (ABI 377) utilizando tanto una carga de inicio delantera específica de pBI B-KS 5'-ccttacacagtcctgctgac (SEQ ID NO: 165) y carga de inicio inversa 3'-gtttccgggccctcacattg (SEQ I D NO: 166) . El ADN clonado por PCRBIunt que codifica serovar L2 CT529 y ADN clonado PCR2. 1 que codifica serovar CT529 Ba, E (BOUR), E (MTW447), F(NM ), G , la, K, L1 , L3 y MoPN se secuencian utilizando carga de inicio promotora 17 y cargas de inicio, delantera M 13 e inversa M 13, universales. Para determinar si estas dos estructuras de lectura abierta putativas (SEQ ID NO: 16 y 20) codificaron una proteína con una función inmunológica asociada, los póptidos de recubrimiento (longitudes de 17-20 aminoácidos) que expanden las longitudes de dos estructuras de lectura abierta se sintetizan , como se describe en el Ejemplo 3. Un análisis de liberación de cromo estándar se utiliza para determinar el por ciento de lisis específica de células objetivo limitadas H2d impulsadas por péptido. En este análisis , las alícuotas de células P815 (H2d) se marcan a 37°C por una hora con 100 µ0 de 51Cr en la presencia o ausencia de 1 µg/ml de los péptidos indicados. Después de esta incubación, las células ?T15 marcadas se lavan para remover el exceso de 51Cr y péptido, y se colocan subsecuentemente en placas de microconcentración por duplicado a una concentración de 1 ,000 células/cavidad . CTL efectuador (células T CD8 específicas de Chlamydia) se agregan a las proporciones de efectuadon objetivo indicadas. Después de una incubación de 4 horas, los sobrenadantes se recolectan y miden por contador gamma para la liberación de s1Cr en el sobrenadante. Dos péptidos de recubrimiento de la estructura de lectura abierta de 298 aminoácidos estimularon específicamente la línea CTL. Los péptidos representados en SEQ I D NO: 1 38- 156 se sintetizan, representando la traducción del homólogo L2 a la estructura de lectura abierta de serovar D para CT529 (gen Capí ) y la estructura de lectura abierta de 216 aminoácidos. Como se muestra en la Figura 3, los póptidos CtC7.8-12 (SEQ I D NO: 1 8, también referida como Cap1 #132-147, SEQ ID NO: 139) y Ct7.8-13 (SEQ I D NO: 19, también referida como Cap1#138- 155, SEQ ID NO: 140) fueron capaces de producir 38 a 52% de lisis específica, repsectivamente, a una proporción de efectuador a objetivo de 10: 1 . Notablemente, el recubrimiento entre estos dos póptidos contuvieron un péptido de unión H2d (Kd y Ld). Un péptido de 1 0 aminoácidos se sintetiza para corresponder a esta secuencia de recubrimiento (SEQ I D NO: 31 ) y se encuentra que genera una respuesta inmune fuerte para la línea CTL ant -Chlamydia por análisis elispot. Significativamente, una búsqueda de la base de datos del Banco Genético más reciente no reveló proteínas que se han descrito previamente para este gen. Por lo tanto, la estructura de lectura abierta putativa que codifica el clon 2C7-8 (SEQ ID NO: 15) define un gen que comprende un antígeno de Chlamydia capaz de estimular las células T CD8+ específicas del antígeno en una manera limitada MHC- 1 , demostrando que este antígeno podría utilizarse para desarrollar una vacuna contra Chlamydia. Para confirmar estos resultados y mapear además el epítopo, los póptidos truncados (SEQ ID NO: 138-1 56) se hacen y prueban para reconocimiento de las células T en un análisi ELISPOT de I FN-?. Las truncaciones ya sea Ser139 (Cap1 #140- 147, SEQ I D NO: 146) o Leu 147 (Cap 1#138- 146, SEQ I D NO: 147) elimina el reconocimiento de la célula T. Estos resultados indican que el péptido 9-mer Cap1 #139- 147 (SFIGGITYL, SEQ I D NO: 145) es el epítopo mínimo reconocido por las células T específicas de Chlamydia.
Las alineaciones de secuencia de Capí (CT529) de serovares seleccionados de C. trachomatis (SEQ I D NO: 121 , 123, 125, 127, 129, 131 , 133, 135, 137 y 139) muestra que una de las diferencias de aminoácido se encuentra en la posición 2 del epítopo propuesto. El péptido serovar D homólogo es SIIGGITYL (SEQ ID NO: 168). La habilidad de SFIGGITYL y SI IGGITYL para células objetivo para su reconocimiento por las células T específicas de Chlamydia se compara. Las diluciones seriales de cada péptido se incuban con células P815 y prueba para reconocimiento por las células T en un análisis de liberación de 61Cr, como se describe arriba. Las células T específicas de Chlamydia reconocen el péptido de serovar L2 en una concentración mínima de 1 nM y el péptido de serovar D en una concentración mínima de 10 nM. Los estudios adicionales han mostrado que un clon de célula T Capí 138-1 7 reconoce células infectadas con C, trachomatis. Para confirmar que Cap113e. 1 47 se presenta en la superficie de células infectadas con Chlamydia, las células Balb-3T3 (H-2d) se infectaron con serovar L2 C. trachomatis y probaron para determinar si estas células se reconocen por un clon de célula T CD8+ específico para epítopo Cap1#139-147(SEQ ID NO: 145). El clon de célula T específico para el epítopo Cap1#139-147 se obtiene al limitar la dilución de las 69 estirpes T. El clon de célula T reconoció específicamente las células infectadas con Chlamydia. En estos experimentos, las células objetivo se infectaron con C. trachomatis (control positivo) o células Balb/3T2 sin infectar, que muestran 45%, 36% y 30% de lisis específica en proporciones de efectuadonobjetivo 30: 1 , 10: 1 y 3: 1 , respectivamente; o epítopo Cap1 #139-147 (SEQ ID NO: 145), revestido, o células P815 sin tratar, que muestran 83% , 75% y 58% de lisis específica en proporciones de efectuador: objetivo 30: 1 , 10: 1 y 3: 1 , respectivamente (controles negativos que tienen menos de 5% de lisis en todos los casos). Estos datos sugieren que el epítopo se presenta durante la infección. Los estudios in vivo muestran las células T específicas de epítopo Cap1#139-147 que se carga durante la infección de murino con C. trachomatis. Para determinar si la reacción con C. trachomatis carga una respuesta de célula T específica de epítopo Cap1 #139- 147, los ratones se infectaron i .p. con 10* de IFU de C. trachomatis serovar 12. Dos semanas después de la infección , los ratones se sacrificaron y las células de bazo se estimularon sobre células de bazo singenéico irradiado pulsado con péptido de epítopo Cap 1 #139-147. Después de 5 días de estimulación , los cultivos se utilizaron en una ensayo de liberación 61 Cr estándar para determinar si hubo células T específicas de epítopo Cap1 #139-147 presentes en el cultivo. Específicamente, las células de bazo de un ratón inmunizado por C. trachomatis serovar 12 o un ratón de control inyectado con PBS después de un cultivo de 5 días con células de bazo singenéico revestido por péptido Cap1 #139-147 y células T C D8+ capaces de reconocer específicamente el epítopo Cap 1#139- 147 dieron 73%, 60% y 32% de lisis específica en un efector a30: 1 , 1 0: 1 y 3: 1 en proporciones objetivo, respectivamente. Los ratones de control tuvieron un por ciento de lisis de aproximadamente 10% en un efector 30: 1 en proporción objetivo, y declinaron fijamente con proporciones de E:T en disminución. Estos datos sugieren que las células T específicas de péptido Cap 1#139-147 se carga durante la infección de murino con C. trachomatis.
Localización de Ct529 Se realizaron estudios demostrando que Ct529 (referido como Cap-1 ) se localiza en la membrana de inclusión de células infectadas por C. trechomatis y no se asocia con cuerpos elementales o cuerpos reticulados. Según se describe anteriormente, el Cap- 1 se identificó como un producto de Chlamydia que estimula la CTL CD8+. Estas CTL son protectoras en modelo de murino de infección, haciendo de esta manera a Cap-1 un buen candidato de vacuna. Además, ya que estos CTL son HC-1 restringido, el gen Cap-1 debe tener acceso al citosol de células infectadas, que puede ser una característica única de productos de gen de Chlamydia. Por lo tanto, la determinación de la localización celular de los productos de gen podría ser útil en la caracterización de Cap-1 como un candidato de vacuna. Para detectar la localización intracelular de Cap-1 , los anticuerpos policlonales de conejo dirigidos contra un polipéptido recombinante que comprende la terminal N de 125 aminoácidos de Cap-1 (SEQ ID NO: 305, con la secuencia de aminoácidosincluyendo la tag 6-His de terminal N proporcionada en SEQ ID NO: 304) se utilizaron para colorear las células McCoy infectadas con Chlamydiaa. Los anticuerpos policlonales de conejo-anti-Cap-1 se obtuvieron por hiper-inmunización de conejos con un polipéptido recombinante, rCt529c1-125 (SEQ ID NO: 305) comprendiendo la parte de terminal N de Cap-1. La proteína rCt529el-125 recombinante se obtuvo de E. coli transformada con un plásmido de expresión pET (según se describe anteriormente) codificando los nucleótidos 1 -375 codificando los 1 -125 aminoácidos de terminal de Cap-1 . La proteína recombinante se purificó por N i-NTA utilizando técnicas bien conocidas en la materia. Para un antisuero de control positivo, los antisueros policlonales dirigidos contra cuerpos elementales se elaboraron por inmunización de conejos con cuerpos elementales de C. trachomatis (Biodesign, Sacco, Maine). Los sueros pre-inmunes derivados de conejos antes de la inmunización con el polipóptido Cap- 1 se utilizó como un control negativo. La inmunoquímica se realizó sobre monocapas de célula McCoy creídos sobre cubiertas de vidrio inoculadas ya sea con C. trachomatis serovar L2 o C. psitacci, cepa 6BC, a una concentración de 10e IFU (Unidades de Formación de I nclusión) por mi . Después de 1 horas, el medio se aspiró y se reemplazó con medio RP-10 fresco complementado con cicloheximida (1 .0 µ?/???) . Las células infectadas se incubaron en un 7% de CO2 por 24 horas y se fijaron al aspirar el medio, enjuagando las células una vez con PBS y fijación de metanol por 5 minutos. Para la coloración de antígeno, las monocapas de célula fija se lavaron con PBS y se incubaron a 37CC por 2 horas con 1 : 100 diluciones de antisueros de control o específicos. Las células se enjuagaron con PBS y se incubaron por 1 hora con IgG de anti-conejo (KPL, Gaithersburg) marcado de (FITC) de isotiocianato y se colorearon con Evans azul (0.05%) en PBS. Se observó fluorescencia con un objetivo 100X (microscopio de epifluorescencia Zeiss) y se fotografió (Cámara Nikon U FX- 1 1 A) . Los resultados de este estudio muestran que Cap-1 se ubica en la membrana de inclusión de células infectadas de C. trachomatis. El anticuerpo especifico de Cap- 1 marcaron las membranas de inclusión de células infectadas por C. tracho atis, pero no contuvieron cuerpos elementales de Chlamydia en estas inclusiones o se liberaron por el proceso de fijación. Por el contrario, al anticuerpo de cuerpo antielemental claramente marcó los cuerpos bacterianos, no solamente dentro de las inclusiones, sino aquellos liberados por el proceso de fijación. La especificidad del anticuerpo anti-Cap- 1 se demuestra por el hecho de que no colorea las células infectadas por C. psittaci. La especificidad de la marcación de Cap- 1 también se muestra por la ausencia de reactividad en sueros pre-inmunes. Estos resultados sugieren que Cap- 1 se libera de la bacteria y llega a asociarse con la membrana de inclusión de Chlamydia. Por lo tanto, Cap-1 es un producto de gen que puede ser útil para estimular células CD8+T en el desarrollo de una vacuna contra las infecciones originadas por Chlamydia. La relevancia del gen Cap-1 como un antígeno de CTL potencial en una vacuna contra la infección de Chlamydia se ilustra además por dos series adicionales de estudios. Primero, el CTL específico para el epítopo HC- 1 de péptido Cap- 1 CT529 #138- 147 de C. trachomatis (SEO. I D NO: 144) se han mostrado para cargarse a una frecuencia alta durante la infección. Específicamente, los ratones Balb/C se inocularon con 10* I . F. U . de C. trachomatis, serova L2. Después de 2 semanas, los bazos se colectaron y cuantificaron mediante el análisis Elispot para el número de células secretoras I FN-? en respuesta a las células que presentan antígeno pulsado por péptido Cap-1 #1 38- 147. En dos experimentos, el número de células secretoras I FN-? en 1 0s esplenocitos fue aproximadamente 1 % de todas las células CD8+ T. Esta frecuencia alta de CD8+ CTL de respuesta al epítopo MHC- 1 (póptido Cap-1 CT529 #1 38-147) sugieren que el Cap- 1 es altamente inmunogénico en infecciones. Los resultados de una segunda serie de estudios han mostrado que la proteína Cap- 1 es casi inmediatamente accesible al citosol de la célula huésped en la infección . Esto se muestra en un curso de tiempo de presentación de póptido Cap- 1 #1 38- 147. En resumen, las células 3T3 se infectaron con S. trachomatis sesrovar L2 por diversas longitudes de tiempo, y después se probaron para reconocimiento por CTL específico de péptido Cap- 1 CT529 #138- 147. Los resultados muestran que las células 3T3 de C. trachomatis se objetivan para reconocimiento mediante el CTL específico de antígeno después de solamente 2 horas de infección . Estos resultados sugieren que el Cap-1 es una proteína temprana sintetizada en el desarrollo de cuerpos elementales de C. trachomatis a cuerpos reticulados. Una respuesta inmune de CD8+ CTL dirigida contra un producto de gen expresada temprana en infección puede ser particularmente eficaz en una vacuna contra la infección de Chlamydia. EJEMPLO 5 G EN ERACIÓN DE ANTICU ERPO Y RESPU ESTAS DE CÉLU LA t EN RATON ES I N M U N IZADOS CON ANTÍGENQS DE CHLAMYDIA Los estudios de inmunogenicidad se condujeron para determinar el anticuerpo y respuestas de células CD4+ T en ratones inmunizados ya sea con SWI B purificados o proteínas S13 formulados con adyuvante Montanida, o inmunizaciones a base de ADN con vectores de expresión pcADN-3 que contienen las secuencias de ADN , para SWI B o S1 3. El SWI B también se refiere como un clon 1 -B1 -66 (SEQ I D NO: 1 , con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ I D NO: 5) , y proteína ribosomal S13 también se refiere como un clon 10-C1 0-31 (SEQ I D NO: 4, con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ I D NO: 12) . En el primer experimento, los grupos de tres ratones C57BL/6 se inmunizaron dos veces y se monitorearon por anticuerpo y respuestas de célula T CD4+. La inmunizaciones de ADN fueron intradérmicas en la base de la cola y las inmunizaciones de péptido se administraron por vía subcutánea. Los resultados de ensayos de incorporación de 3H estándar de células de bazo de ratones inmunizados muestran una fuerte respuesta proliferativa del grupo inmunizado con polipéptido SWIB recombinante purificado (SEQ I D NO: 5) . El mayor análisis por ensayos de inducción de citoquina, según se describe previamente, demostró que el grupo inmunizado con polipéptido SWI B produjo una respuesta IFN-? e I L-4 medí ble. Se realizaron ensayos a base de ELISA subsecuente para determinar la respuesta de isotipo de anticuerpo predominante en el grupo experimental inmunizado con el polipéptido SWI B. La Figura 4 ilustra que el grupo inmunizado por SWI B dio una respuesta humoral que fue lgG1 predominantemente. En un segundo experimento, los ratones C3H se inmunizaron tres veces con 10 g de proteína SWI B purificada (también referida como clon 1 -B 1 -66, SEQ I D NO. 5) formulada ya sea PBS o Montanida en tres intervalos semanales y se colectaron dos semanas después de la tercera inmunización. Las valoraciones de anticuerpo dirigidas contra la proteína SWIB se determinaron medíante técnicas a base de ELISA estándar bien conocidas en la materia, demostrando que la proteína SWIB formulada con adyuvante Montanida indujo una respuesta inmune humoral fuerte. Las respuestas proliferativas de célula T se determinaron por un ensayo de base XTT (Scudiero, et al. , Cáncer Research, 1988, 48:4827) . Según se muestra en la Figura 5, los esplenocitos de ratones inmunizados con el polipóptido SWIB más Montanida produjeron una respuesta proliferativa específica de antígeno. Además, la capacidad de esplenocitos de animales inmunizados para secretar I FN-? en respuesta al polipóptido SWI B recombinante soluble se determinó utilizando el ensayo de inducción de citoquina previamente descrito. Los esplenocitos de todos los animales en el grupo inmunizado con polipéptido SWIB formulado con I FN-? secretado de adyuvante montanida secretado en respuesta a la exposición al antígeno Chlamydia SWI B, demostrando una respuesta inmune específica de Chlamydia. En un experimento más, los ratones C3H se inmunizaron en tres puntos de tiempo separados en la base de la cola con 10 µg de proteína SWI B o S13 purificada (C. trachomatis, proteína SWI B, clon 1 -B1 -66, SEQ I D NO: 5 , y proteína S 13, clon 10-C 10-31 , SEQ ID NO: 4) formulada con el adyuvante SBAS2 (Smith KIine Beecham, London, England). Las valoraciones de anticuerpo específico de antígeno se midieron por ELISA, mostrando que ambos polipóptidos indujeron una respuesta de IgG fuerte, variando en valoraciones de 1 x10"4 a 1 x10"6. Los componentes de lgG2a e I gG 1 de esta respuesta se presentaron en cantidades casi iguales. Las respuestas proliferativas de célula T específica de antígeno, determinadas por ensayos de incorporación de 3H sobre células de bazo aisladas de ratones inmunizados, fueron muy fuertes para SWIB (50,000 cpm arriba del control negativo) y aún más fuertes para s13 (100,000 cpm arriba del control negativo). La producción de IFNy se ensayó mediante técnicas ELISA estándares de sobrenadante del cultivo de proliferación. La reestimulación in vitro del cultivo con proteína S13 indujo altos niveles de producción de IFNy, aproximadamente 25 ng/ml contra 2 ng/ml para el control negativo. La reestimulación con la proteína SWIB también indujo \FNy, a pesar de un grado menor. En un experimento relacionado, los ratones C3H se inmunizaron en tres puntos de tiempo separados con 10 9 de proteína SWIB o S13 purificada (C. trachomatis, proteína SWIB, clon 1-B1-66, SEQ ID NO: 5, y proteína S13, clon 10-C10-31, SEQ ID NO: 4) mezclada con 10 µ9 de Toxina de Cólera. La inmunización mucosal fue a través de inducción intranasal. Las respuestas de anticuerpo específico de antígeno se determinaron por técnicas ELISA estándares. Los anticuerpos de IgG específico de antígeno se presentaron en la sangre de ratones inmunizados por SWIB, con valoraciones variando desde 1x10"3 a 1x10", pero no detectables en los animales inmunizados por S13. Las respuestas de célula T específicas de antígeno de esplenocitos aislados, según se mide por la producción de ????, dieron resultados similares a aquellos descritos inmediatamente arriba para inmunización sistémica. Un estudio de animal se condujo para determinar la inmunogenicidad del epítopo CT529 serovar LGVII CTL, definido por el péptido de concenso CT529 10mer (CSFIGGITYL-SEQ ID NO: 31), que se identificó como un epítopo CTL restringido H2-Kd. Los ratones BALB/c (3 ratones por grupo) se inmunizaron tres veces con 25 µg de péptido combinado con diversos adyuvantes. El péptido se administró sistémicamente en la base de la cola ya sea en Sistema Adyuvante SKB SBAS-2", SBAS-7 (SmithKIine Beecham, London, England) o Montanida . El péptido también se administró intranasalmente mezclado con 10 ug de Toxina de Cólera (CT) . Los ratones inocentes se utilizaron como un control. Cuatro semanas después de la 3ra. I nmunización , las células de bazo se volvieron a estimular con LPS-blastos pulsados con 1 0 ug/ml de péptido de concenso CT29 10mer en tres diferentes efectores a proporciones de LPS-blastos: 6, 1 .5 y 0.4 a 1 x10e cólula/ml. Después de 2 reestimulaciones, las células efectoras se probaron por su habilidad para Usar las células ?T15 pulsadas de péptido utilizando un ensayo de liberación de cromo estándar. U n péptido no relevante de ovalbúmina de huevo de gallina se utilizó como un control negativo. Los resultados demuestran que una respuesta inmune significativa se produjo hacia el péptido de concenso CT529 10mer y que las células T específicas de antígeno capaces de lisar los objetivos pulsados de péptido se produjeron en respuesta a la inmunización con el péptido. Específicamente, las actividades Ifticas especificas de antígeno se encontraron en el grupo adyuvante SBAS-7 y CT mientras que Montanida y SBAS-2" fallaron para el adyuvante de la inmunización de epítopo CTL. EJ EMPLO 6 EXPRESIÓN Y CARACTERIZAC IÓN DE GEN ES CHLAMYDIA PNEUMONIAE El estirpe de célula T humana, TCL-8, descrita en el Ejemplo 1 , reconoce la Chlamydia trachomatis así como también Chlamydia pneumonía de células dendríticas derivadas de monocito infectado, sugiriendo que Chlamydia trachomatis y pneumonía pueden codificar epítopos de célula T de reacción cruzada. Para aislar los genes de Chlamydia pneumonía homólogos a Chlamydia trachomatis LGVI I clones 1 B1 -66, también referidos como SWIB (SEQ I D NO: 1 ) y clon 10C10-31 , también referida como proteína ribosomal S 13 (SEQ I D NO: 4), las células HeLa 229 se infectaron con cepa de C. pneumonía TWAR (CDC/CWL-029) . Después de tres días de incubación, las células HeLa infectadas por C. pneumonía se colectaron, lavaron y volvieron a suspender en 200 µ? de agua y se calentaron en un baño de agua hirviente por 20 minutos . Diez microl itos de la suspensión de célula rota se utilizó como el templado PCR. Las cargas de inicio de C. pneumonía se diseñaron para clones 1 B1 -66 y 10C 10-31 de tal forma que el extremo 5' tuvo una tag 6X-Histidina y sitio Ndel insertado, y el extremo 3' tuvo un codón de detención y un sitio BamH i incluido (Figura 6) . Los productos de PCR se amplificaron y se secuenciaron por técnicas estándares bien conocidas en la materia. Los productos de PCR específicos de pneumonía se clonaron en el vector de expresión pET1 7B (Novagen , Madison, Wl) y se transfectaron en E. coli BL21 pLysS para expresión y purificación subsecuente utilizando la metodología cromatográfica de histidina-níquel proporcionada por Novagen. Dos proteínas de C. pneumonía se generaron así, una proteína 10-1 1 kDa referida como CpSWIB (SEQ ID NO: 27, y SEQ ID NO: 78 teniendo una tag 6X His, con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ I D NO: 28, respectivamente), una proteína 15 kDa referida como CpS13 (SEQ I D NO: 29, y SEQ I D NO: 77, teniendo una etiqueta 6X His, con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ I D NO: 30 y 91 , respectivamente) . EJ EM PLO 7 IN DUCC IÓN DE PROLIFERAC IÓN DE CÉLU LA T Y PRODUCCIÓN DE I NTERFERONA-Y POR ANTlGENOS DE CHLAMYDIA PNEUMONIAE La habilidad de antígenos de Chlamydia pneumoniae recombinantes para inducir la proliferación de célula T y producción de interferona-? se determina como sigue . Las proteínas se indujeron por 1 PTG y purificaron por cromatografía de afinidad de agarosa Ni-NTA (Webb et al. , J. Immunology 757: 5034-5041 , 1996) . Los polipéptidos purificados se seleccionaron así por la habilidad para inducir la proliferación de célula T en preparaciones PB C. Las PBMCs de pacientes de C. penumoniae así como también de donadores normales cuyas células T se conocen por proliferarse en respuesta a antígenos Chlamydia, se cultivan en medio que comprende RPM 1 1640 complementado con 10% de suero humano agrupado y 50 µg/ml de gentamicina. Los polipéptidos purificados se agregan en duplicado en concentraciones de 0.5 a 10 µ9/G? ? . Después de seis días de cultivo en láminas de fondo redondo de 96 cavidades en un volumen de 200 µ? , 50 µ? de medio se remueve de cada cavidad para determinación de niveles I FN-?, según se describe abajo. Las láminas se pulsaron así con 1 µ^/???^ de timidina valorada por un adicional de 18 horas, se colectaron y se determinaron por toma de tritio utilizando un contador de cintilación de gas. Las fracciones que se dan como resultado en la proliferación en ambos replicados tres pliegues más que la proliferación observada en células cultivadas en medio solo se consideran positivas. I FN-? se midió utilizando un ensayo inmunabsorbente unido por enzima (ELI SA) . Las láminas ELI SA se revisten con un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido a I FN-? humano (PharMingen , San Diego, CA) en PBS por cuatro horas a temperatura ambiente. Las cavidades se bloquearon así con PBS conteniendo 5% (P/V) de leche seca sin grasa por 1 hora a temperatura ambiente. Las láminas se lavan seis veces en PBS/0.2% de TWEEN-20 y las muestras diluidas 1 : 2 en medio de cultivo en las láminas ELISA se incuban durante la noche a temperatura ambiente. Las láminas nuevamente se lavan y un suero de IFN-? anti-humano de conejo policlonal diluido en PBS/10% de suero de cabra normal se agrega a cada cavidad. Las láminas se incubaron así por dos horas a temperatura ambiente, se lavaron e IgG de anti-conejo acoplado por peroxidasa de rábano picante (Sigma Chemical So. , St. Louis, MO) se agrega a cada dilución 1 :2000 en PBS/5% de leche seca sin grasa. Después de un adicional de dos horas de incubación a temperatura ambiente, las láminas se lavan y el substrato TMB se agrega. La reacción se detiene después de 20 minutos con 1 N de ácido sulfúrico. La densidad óptica se determina en 450 nm utilizando 570 nm como una longitud de onda de referencia. Las fracciones que se dan como resultado en ambos replicados dando un OD de dos pliegues mayores que el OD promedio de células cultivadas en medio solo, más 3 desviaciones estándares, se consideran positivas. Una estirpe de célula T anti-C a/nyd/a humana (TCL-8) capaz de reaccionar a C. trachomatis y C. pneumonía se utilizó para determinar si las proteínas expresadas descritas en el ejemplo anterior, (es decir, CpSWI B, SEQ I D NO: 27, y SEQ I D NO: 78 teniendo una tag 6X His, con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ ID NO: 28, respectivamente, y la proteína 15 kDa referida como CpS 13 SEQ ID NO: 29, y SEQ I D NO: 77, teniendo una tag 6X His, con la secuencia de aminoácidoscorrespondiente proporcionada en SEQ I D NO: 30 y 91 , respectivamente), poseyó epítopos de célula T comunes tanto para C. trachomatis, y C. pneumonía. En resumen, las proteínas Chlamydial que expresan E. coli se valoraron en 1 x104 de células dendríticas derivadas de monocito. Después de dos horas, los cultivos de células dendríticas se lavaron y 2.5x104 de células T (TLC-8) se agregaron y se permitieron para incubarse por un adicional de 72 horas. La cantidad de I FN-? en el sobrenadante de cultivo se determinó así por ELISA . Según se muestra en las Figuras 7A y 7B, la estirpe de célula T TCL-8 reconoció específicamente la proteína ribosomal S13 tanto para C. trachomatis como C. pneumonía según se demuestra por la inducción específica de antígeno de I FN-?, mientras que solamente la proteína SWI B de C. trachomatis se reconoció por la estirpe de célula T. Para validar estos resultados, el epítopo de célula T de SWI B de C. trachomatis se identificó por el mapeo de epítopo utilizando las células objetivo pulsadas con una serie de póptidos de recubrimiento y la estirpe de célula T TCL-8. Los póptidos homólogos correspondientes a la SWI B de secuencia de C. pneumoniae (SEQ ID NO: 40), la fusión de topoisomerasa-SWI B de C. pneumoniae (SEQ I D NO: 43) y C. trachomatis (SEQ I D NO: 42) así como también el dominio SWI humano (SEQ I D NO: 41 ) se sintetizaron y se probaron en el ensayo anterior. La estirpe de célula T TCL-8 solamente reconoció el póptido C. trachomatis de SEQ I D NO: 39 y no el péptido C. pneumoniae correspondiente (SEQ I D NO: 40) , o los otros póptidos correspondientes anteriormente descritos (SEQ ID NO: 41 -43) . Las estirpes de célula T específicas de Chlamydia se generaron del donador CP-21 con una valoración de suero positivo contra C. pneumoniae al estimular el donador PBMC ya sea con células dendríticas derivadas de monocito infectado de C. trachomatis o C. pneumoniae, respectivamente . Las células T generadas contra C. pneumoniae respondieron a C. pnet/mon/ae-SWIB pero no C. trachomatis-SWI B, mientras que la estirpe de célula t generada contra C. trachomatis no respondió ya sea a C. trachomatis- o C. pneumon/ae-SWI B (ver Figura 9) . La respuesta inmune específica de C. pneumoniae-$W\ B del donador CP-21 confirma la infección de C. pneumoniae e indica la producción de células específicas de C. pneumon ae-SWI B durante la infección de C. pneumoniae in vivo. El mapeo de epítopo de la respuesta de célula T a C. pneumoniae-S\N\B ha mostrado que las células T específicas de Cp-SWIB respondieron a los póptidos de recubrimiento Cp-SWI B 32-51 (SEQ I D NO . 101 ) y Cp-SWI B 37-56 (SEQ I D NO: 102), indicando un epítopo de célula T específica de C. pneumon/ae-SWIB Cp-SWIB 37-51 (SEQ I D NO: 100). En experimentos adicionales, las estirpes de célula T se generaron del donador CP1 , también un donador seropositivo C. pneumoniae, al estimular PBMC con cuerpos elementales no infecciosos de C. trachomatis y C. pneumoniae, respectivamente. En particular, las respuestas proiiferativas se determinaron al estimular las células T 2.5 x 104 en la presencia de 1 x104 de células dendríticas derivadas de monocito, o ya sea la proteína de SWIB de C. trachomatis o C. pneumoniae recombinante. La respuesta de célula t contra SWI B consideró los datos obtenidos con estirpes de célula T de CP-21 en que C. pneumon/ae-SWI B , pero no C. trachomati$-QW\ B produjo una respuesta por la estirpe de célula T C. pneumoniae. Además, la estirpe de célula T C. trachomatis no proliferó en respuesta ya sea SWIB de C. trachomatis o C. pneumoniae, a pesar de que no proliferó en respuesta tanto para los cuerpos elementales CT como CP. Según se describe en el Ejemplo 1 , el clon 1 1 -C 12-91 (SEQ I D NO: 63) , identificado utilizando la estirpe de célula TCP-21 , tiene una inserción de 269 pb que es parte del gen OM P2 (CT443) y comparte homología con la cisteína 60 kDa rica fuera de la proteína de membrana de C. pneumoniae, referida como OMCB. Para definir además el (los) epítopo (s) reactivo (s) , el mapeo de epítopo se realizó utilizando una serie de péptidos de recubrimiento y el inmunoensayo anteriormente descrito. En resumen, las respuestas proiiferativas se determinaron al estimular 2.5 x104 TCP-21 de células T en la presencia de 1 x104 de células dendríticas derivadas de monocito ya sea con cuerpos elementales no infecciosos derivados de C. trachomatis y C. pneumoniae, o péptidos derivados de la secuencia de proteína de protefna OMBC de C. trachomatis o C. pneumoniae (0.1 µ9/p??). Las células T TCP-21 respondieron a epítopos CT-OMCB #167-1 86, CT-O CB #171 -190, CT-OMCB #171 - 186, y a un grado menor, CT-OMCB #175- 1 86 (SEQ I D NO: 249-252 , respectivamente) .
De manera notable, la estirpe de célula T TCP-21 también dio una respuesta proliferativa al péptido C. pneumoniae CP-OMCB #171 -186 (SEQ ID NO: 253) , que fue igual o mayor a la respuesta a los péptidos C. trachomatis. Las sustituciones de aminoácido en posición dos (es decir, Asp para Glu) y posición cuatro (es decir, Cys para Ser) no alteraron la respuesta proliferativa de las células T y por lo tanto demostrando este epítopo por ser un epítopo reactivo entre C. trachomatis y C. pneumoniae. EJEMPLO 8 RESPU ESTAS I NMU N ES DE PBMC H UMANO Y ESTI RPES DE CÉLU LA T CONTRA ANTÍGENOS DE CHLAMYDIA Los ejemplos proporcionados en la presente sugieren que existe una población de donadores saludables entre la población general que se han infectado con C. trachomatis y generaron una respuesta inmune protectora controlando la infección de C. trachomatis. Estos donadores permanecieron clínicamente asintomáticos y seronegativos para C. trachomatis. Para caracterizar las respuestas inmunes de donadores normales contra antígenos de chlamydia que se habían identificado por la clonación de expresión de CD4, PBMC obtenido de 12 donadores saludables se probaron contra un panel de antígenos de chlamydia recombinantes incluyendo C. trachomatis-, C-pneumoniae-S\N\ B y C. trachomatis-, C. pneumoniae-S '\ 3. Los datos se resumen en la Tabla 1 de abajo. Todos los donadores fueron seronegativos para C. trachomatis, mientras que 6/12 tuvo una valoración de C. pneumoniae positiva. Utilizando un índice de estimulación de >4 como una respuesta positiva, 1 1 /12 de los sujetos respondieron a los cuerpos elementales de C. trachomatis y 12/12 respondieron a los cuerpos elementales de C. pneumoniae. Un donador, AD104, respondieron a la proteína C. pneumon/ae-S 13 recombinante, indicando una respuesta específica de C. pneumoniae. Tres fuera de 12 donadores tuvieron un C. trachomatis-SWIB, pero no una respuesta específica de C. p/ieumowae-SWIB, confirmando una infección de C. trachomatis. C. trachomatis y C. pneumoniae-S'\3 produjeron una respuesta en 8/12 donadores sugiriendo una infección clamidial. Estos datos demuestran la habilidad de SWIB y S13 para producir una respuesta de célula T en PBMC de sujetos de estudio normal. Tabla I Respuesta Inmune de Sujetos de Estudio Normal Contra Chlamydia Donador Sexo Título IgG CT CP CT CP CT CP CT CT de EB EB Swib Swib S13 S13 IpdA TSA Chlamydia AD100 masculino negativo ++ +++ + ++ ++ - n.t.
AD104 femenino negativo +++ ++ - - ++ - n.t.
AD108 masculino CP1:256 ++ ++ + +/- + + + n.t.
AD112 femenino negativo ++ ++ + + - +/- n.t.
AD120 masculino negativo - + - - - - n.t.
AD124 femenino CP1:128 ++ ++ - - - - n.t.
AD128 masculino CP1:512 + ++ - ++ + ++ - AD132 femenino negativo ++ ++ - + + - - AD136 femenino CP1:128 + ++ - +/- - - - AD140 masculino CP1:256 ++ ++ - + + - - AD142 femenino CP1:512 ++ ++ - + + + - AD146 femenino negativo ++ ++ ++ + + CT = Chlamydia trachomatis, CP = Chlamydia pneumoniaa; EB = cuerpos elementales de Chlamydia; Swib = proteína de Swib Chlamydia recombinante; S13 = proteína de S13 de Chlamydia recombinante; IpdA = proteína de IpdA de Chlamydia recombinante; TSA = proteína de TSA de Chlamydia recombinante. Los valores representan los resultados de los ensayos de proliferación estándar. Las respuestas proliferativas se determinaron al estimular 3 x 105 PBMC con 1 x 104 células dendríticas derivadas de monocito, pre-incubadas con los antígenos o anticuerpos elementales (EB) recombinantes, respectivos. Los ensayos se recolectaron después de 6 días con un impulso de 3H-timidina durante las últimas 18 horas. SI : índice de Estimulación +/-: Sl~ 4 + ; Sl> 4 ++: SI 10-30 +++: Sl> 30 En una primer serie de experimentos , las líneas celulares T se generaron a partir de un individuo hembra saludable (CT-1 0) con una historia de exposición genital a C. trachomatis mediante estimulación de células T con cuerpos elementales de LGV II C. trachomatis, como se describió previamente. Aunque el sujeto de estudio se expuso a C. trachomatis, no experimentó seroconversión y no desarrolló s íntomas clínicos, sugiriendo que el donador CT- 10 puede haber desarrollado una respuesta inmune protectora contra C. trachomatis. Como se muestra en la figura 10, una línea celular T específica de Chlamydia primaria, derivada del donador CT- 10 respondió a C. rracftomaf/s-SWIB, pero no a proteínas recombinantes de C.pnaumoniae-SW\B, confirmando la exposición de CT-1 0 a C. trachomatis. La representación gráfica de la respuesta de célula T a C.írac/Jomar/s-SWI B mostró que este donador respondió al mismo epítopo Ct-SWI B 52-67 (SEQ I D NO: 39) como línea de célula T TCL-8, como se muestra en la figura 1 .
Las líneas de célula T adicionales se generaron como se describe arriba para diversos pacientes de C.trachomatis. En la Tabla II se presenta un sumario del perfil clínico y respuestas proliferativas de pacientes a diversos cuerpos elementales de C.trachomatis y C.pn&umoniaa y proteínas recombinantes como sigue: Respuesta Prollferatlva de pacientes de C.trachomatis Paclent Manifestación Título CT CP CT CP CT CP CT CT es clínica igG EB EB Swi swib S13 S13 IpdA TSA b CT-1 NGU Negativo + + - - + + + + + + + CT-2 NGU Negativo + + + + - - + +/- - - CT-3 Asintomátlco CT1:512 + + + + Shed Eb CP:1:1054 Dx fue HPV Cps:1:256 CT-4 Asintomátlco Ct1:1024 + + - - - - - - Shed Eb CT-5 BV Ct1:256 + + + + - - + - - - Cp1:256 CT-6 Salpullido Cp1:1024 + + periniel Descarga CT-7 BV Ct1:512 + + + + - Úlcera genital Cp1:1024 CT-8 Desconocido No exam. + + + + - - - - - CT-9 Aslntomatico Ct1:128 + + + + + - - + + + + - Cp1:128 CT-10 Irritación Vulvar Negativo + + + + - - - - - - media CT-11 BV Ct1:512 + + + + + + - - + + + + + + Pap anormal CT-12 Asintomátlco Cp1:512 + + + + - - + + + + - NGU = Uretrltls No Gonococal; BV = V+aginosls Bacteriana; CT = Chlamydia trachomatis; CP = Chlamydia pneumoniaa, EB = cuerpos elementales de Chlamydia; Swib = proteína Swlb de Chlamydia recombinante; S13 = protetna de S13 de Chlamydia recombinante; IpdA = proteína de IpdA de Chlamydia recombinante; TSA = proteína de TSA de Chlamydia recombinante. Los valores representan los resultados de los ensayos de proliferación estándar. Las respuestas proliferativas se determinaron al estimular 3 x 106 PBMC con los antígenos o cuerpos elementales (EB) recombinantes, respectivos. Los ensayos se recolectaron después de 6 días con un impulso de 3H-tlmid¡na durante las últimas 18 horas. SI: índice de Estimulación +/-: Sl~ 4 + ; Sl> 4 + + : SI 10-30 + + + ; Sl> 30 Utilizando el panel de sujetos de estudio asintomáticos (según se define arriba) y pacientes de C. trachomatis, según se resume en las Tablas I y I I , se condujo un estudio comprensivo de las respuestas inmunes de PBMC derivadas de los dos grupos. En resumen, PBMCs de pacientes de C.pneumoniae así como también de donadores normales, se cultivan en un medio que comprende RPM I 1640 complementado con 10% de suero humano depositado y 50 µg ml de gentamicina. Los polipéptidos purificados, un panel de antígenos recombinantes clamidienos incluyendo C. trachomatis-, c.pneumon/ae-SWI B y S1 3, así como también IpdA y TSA de C. trachomatis se agregan por duplicado en concentraciones de 0.5 hasta 10 µ9/?t??_. Después de seis días de cultivo en placas de fondo redondo de 96 cavidades en un volumen de 200 µ? , 50 µ? de medio se retiró de cada cavidad para la determinación de los niveles de I FN-?, como se describe a continuación. Las placas se impulsan después con 1 µ??/????a^ de timidina tritiada durante 18 horas adicionales, se recolectaron y la captura de tritio se determinó mediante el uso de un contador de centelleo de gas. Las fracciones que dieron como resultado de la proliferación en ambas reproducciones tres veces mayores que la proliferación observada en células cultivadas en medio solo, se consideran positivas. Las respuestas proliferativas a los antígenos de Chlamydiae recombinantes demostraron que la mayoría de los donadores asintomáticos y los pacientes de C.trachomatis reconocieron el antígeno S13 de C. trachomatis (8/12) y una mayoría de los pacientes de C. trachomatis reconoció el antígeno de C, pneumonía S 1 3 (8/12), reconociendo también 4/12 donadores asintomáticos el antígeno S 13 de C. pneumonía. También, seis de doce de los pacientes de C. trachomatis y cuatro de doce de los donadores asintomácticos dieron una respuesta proliferativa al antígeno de IpdA de C.trachomatis. Estos resultados demostraron que el antígeno S13 de C. trachomatis y C. pneumonía, el antígeno Swib de C. trachomatis y el antígeno IpdA de C.trachomatis se reconocieron por los donadores asintomáticos, indicando que estos antígenos fueron reconocidos durante la exposición a Chlamydie y se produjo una respuesta inmune contra ellos. Esto implica que estos antígenos pueden jugar un papel en el otorgamiento de inmunidad protectora en un huésped humano. Además, el antígeno de C. trachomatis y C. pneumonía S13 se reconoce igualmente bien entre los pacientes de C. trachomatis, indicando por consiguiente que pueden existir epítopes compartidos entre C. trachomatis y C. pneumonía en la proteína S13. La Tabla III resume los resultados de estos estudios. Tabla I I I Se iniciaron una serie de estudios para determinar la respuesta inmune celular a líneas de célula T de corto plazo generadas a partir de donadores asintomáticos y pacientes de C.trachomatis. Las respuestas inmunes celulares se midieron mediante ensayos de proliferación estándares e I FN-?, como se describe en el Ejemplo 7. Específicamente, la mayoría de los antígenos se encontró en la forma de clonas de E.coli solas que expresan antígenos Clamidianos, aunque también se utilizaron algunas proteínas recombinantes en los ensayos. Las clonas de E.coli solas se titularon sobre células dendríticas derivadas de 1 x 104 monocitos y después de dos horas, el cultivo se enjuagó y se agregaron 2.5 x 1 04 células T. El ensayo que utiliza proteínas recombinantes se llevó a cabo como se describió previamente. La proliferación se determinó después de cuatro días con un impulso estándar de 3H-timidina durante las últimas 18 horas. La inducción de I FN-? se determinó a partir de sobrenadantes de cultivo cosechados después de cuatro días mediante el uso de ensayos ELIS estándares , como se describe arriba. Los resultados muestran que todos los antígenos de C. trachomatis examinados, excepto C.T. Swib, produjeron una respuesta proliferativa a partir de una o más líneas de célula T diferentes, derivadas de pacientes de C. trachomatis. además, las respuestas proliferativas se produjeron a partir tanto de pacientes de C. trachomatis como de donadores asintomáticos para los siguientes genes de Chlamydia, CT622, groEL, pmpD, CT610 y rS13. La clona 12G3-83 también contiene secuencias para CT734 y CT764 en adición a CT622 y, por consiguiente, esta secuencia de genes también puede tener epítopes inmunoreactores. De manera similar, la clona 21 G12-60 contiene secuencias para los genes de proteína hipotéticos CT229 y CT228 además de CT875; y 15H2-76 también contiene secuencias de CT812 y CT088, así como también comparten homología con el gen sycE. La clona 1 H3-61 también contiene secuencias que comparten homología con la proteína de virulencia PGP6-D. Tabla IV EJEMPLO 9 ESTUDIOS DE PROTECCIÓN MEDIANTE EL USO DE ANTÍGENOS DE CHLAMYDIA 1. SWIB Se condujeron estudios de protección en ratones para determinar si la inmunización con antígenos clamidianos puede impactar sobre la enfermedad del tracto genital, resultante de la inoculación clamidiana. Se utilizaron dos modelos; un modelo de inoculación intravaginal que utiliza un aislado humano que contiene una cepa de Chlamydia psíttaci (MTW447) y un modelo de inoculación intrauterina que involucra un aislado humano identificado como Chlamydia trachomatis, serovar F (cepa N 1 1 ). Ambas cepas inducen la inflamación en el tracto genital superior, lo cual se asemeja a la endometritis y salpingitis originada por Chlamydia trachomatis en mujeres. En el primer experimento, los ratones C3H (4 ratones por grupo) se inmunizaron tres veces con 100 µg de vector de expresión pcADN-3 que contiene ADN de SWI B C. trachomatis (SEQ ID NO: 1 , con la secuencia amino ácida correspondiente proporcionada en la SEQ ID NO: 5). Las inoculaciones se encontraron en la base de la cola para inmunización sistémica. Dos semanas después de la última inmunización, los animales se trataron con progesterona y se infectaron, ya sea a través de la vagina o mediante inyección del inóculo en el útero. Dos semanas después de la infección, los ratones fueron sacrificados y los tractos genitales seccionados, se tiñeron y examinaron respecto a histopatología. El nivel de inflamación se calificó (desde + para muy suave, hasta +++++ para muy severo). Las calificaciones atribuidas a cada oviducto/ovario individual se sumaron y dividieron entre el número de órganos examinados para obtener una calificación media de inflamación para el grupo. En el modelo de inoculación uterina, los animales inmunizados con control negativo que recibieron un vector vacío mostraron una inflamación consistente con una calificación de inflamación media de ovario/oviducto de 6.12, en contraste, hasta 2.62 para el grupo inmunizado con ADN . En el modelo de inoculación vaginal e infección ascendente, los ratones inmunizados con control negativo tuvieron una calificación de inflamación media de ovario/oviducto de 8.37, versus 5.00 para el grupo inmunizado con ADN . También, en el último modelo, los ratones vacunados no mostraron señales de oclusión tubal mientras que los grupos vacunados con control negativo tuvieron células inflamatorias en el espacio del oviducto. En un segundo experimento, los ratones C3H (4 ratones por grupo) se inmunizaron tres veces con 50 µg de vector de expresión pcADN-3 que contiene ADN SWIB de C. trachomBtis (SEQ ID NO: 1 , con la secuencia amino acida correspondiente proporcionada en la SEQ ID NO: 5) encapsulado en microesferas co-Glicólidas Poli Láctidas (PLG); las inmunizaciones se realizaron de manera intraperitoneal. Dos semanas después de la última inmunización, los animales se trataron con progesterona e infectaron mediante inoculación de C.psittaci en la vagina. Dos semanas después de la infección, los ratones fueron sacrificados y los tractos genitales seccionados, teñidos y examinados para hispatologfa. El nivel de inflamación se calificó como se describió previamente. Las calificaciones atribuidas a cada oviducto/ovario individual se sumaron y dividieron entre el número de órganos examinados para obtener una media de inflamación para el grupo. Los animales inmunizados con control negativo que recibieron un vector vacío encapsulado en PLG, mostraron inflamación consistente con una calificación de inflamación media de ovario/oviducto de 7.28, versus 5.71 para el inmunizado con ADN encapsulado en PLG . La inflamación en el peritoneo fue de 1 .75 para el grupo vacunado versus 3.75 para el control . En un tercer experimento, los ratones C3H (4 por grupo) se inmunizaron tres veces con 1 0 de proteína recombinante purificada, ya sea SWIB (SEQ I D NO: 1 , con la secuencia amino ácida correspondiente proporcionada en la SEQ I D NO: 5) o S13 (SEQ I D NO: 4, con la secuencia amino ácida correspondiente proporcionada en la SEQ ID NO: 12) mezcladas con Toxina de Cólera (CT) ; la preparación se administró de manera intranasal después de la anestesia en un volumen de 20 uL. Dos semanas después de la última inmunización , los animales se trataron con progesterona y se infectaron, ya sea mediante inoculación vaginal de C.pisttaci o mediante inyección de serovar F de C. trachomatis en el útero. Dos semanas después de la infección, los ratones se sacrificaron y se seccionaron los tractos genitales, se tiñeron y examinaron para hispatología. El grado de inflamación se calificó como se describe arriba. Las calificaciones atribuidas a cada oviducto/ovario individual se sumaron y dividieron entre el número de órganos examinados para obtener una puntuación media de inflamación para el grupo. En el modelo de inoculación uterina, los animales inmunizados con control negativo que recibieron toxina de cólera sola mostraron una puntuación de inflamación media de ovario/oviducto de 4.25 (solamente 2 ratones analizados; otros 2 murieron) versus 5.00 para el grupo inmunizado con toxina de cólera más S1 3, y 1.00 para la toxina de cólera más SWI B. Los animales infectados no tratados tuvieron una puntuación de inflamación media de ovario/oviducto de 7. En el modelo de inoculación vaginal e infección ascendente, los ratones inmunizados con control negativo tuvieron una puntuación de inflamación media de ovario/oviducto de 7.37 versus 6.75 para el grupo inmunizado con toxina de cólera más S 1 3 y 5.37 para el grupo inmunizado con toxina de cólera más SWI B. Los animales infectados sin tratar tuvieron una puntuación de inflamación media de ovario/oviducto de 8. Los tres experimentos arriba descritos sugieren que puede obtenerse la protección específica de SWIB. Este efecto protector es más marcado en el modelo de infección homóloga pero es aún presente en una infección heteróloga con C.psittaci. 2. CT529/Cap1 CT529/Cap1 se identificó anteriormente como un producto de Chlamydia que estimula CD8 + CTL. En este ejemplo, pensamos confirmar que la inmunización con Capí sería protectora en un modelo animal de infección con Chlamydia. Para generar virus de vaccinia recombinante para el suministro de un fragmento inmunogónico de Cap í , un fragmento que contiene una secuencia Kozak modificada y pares base 319-530 del gen cap í (CT529) se amplificó a partir de ADN genómico de C.trachomatis L12 mediante el uso de PCR™ y se ligaron en pSC 1 1 SS (Earl PL, Koenig S, Moss B (1991 ) Propiedades biológicas e inmunológicas de la glicoproteína de envoltura virus de inmunodeficiencia humano de tipo 1 : análisis de proteínas con truncaciones y omisiones expresadas por virus de vaccinia recombinantes. J. Virol. 65: 31 -41 ). El ADN se digirió con Sal í y Stul . La porción del gen capí ligado en pSC 1 1 ss codifica amino ácidos 139-147. La plásmida resultante se utilizó para transfectar células CV- 1 (ATCC# CCL-70; Jensen FC et al. (1 964) I nfección de cultivos de tejido humano y de simio con Virus de Sarcoma Rous. Proc. Nati . Acad . Sci. U SA 52 : 53-59), las cuales se infectaron subsecuentemente con virus de vaccinia de tipo silvestre. La recombinación homóloga entre el virus de tipo silvestre y el ADN de plásmida generó virus de vaccinia recombinante que se seleccionaron sobre la base tanto de expresión de beta-galactosidasa como de la inactivación de quinasa de timidina , como se describe previamente (Chakrabarti ef al. , Mol Cell Biol. 1985, 5(12): 3403-9). El virus recombinante se purificó por placa tres veces y se tituló después de desarrollarse en células TK- 143B humanas. Las preparaciones de virus se trataron con un volumen igual de 0.25 mg/ml de tripsina durante 30 minutos a 37°C y se diluyeron en PBS antes de la inmunización de ratones. Se utilizaron grupos de 5 ratones para todos los experimentos y grupos de control . Los datos presentados a continuación son representativos de tres experimentos independientes. U n grupo de ratones se inmunizó con 1 0* de vaccinia recombinante i. p. y se permitió recuperar durante 3 semanas. Los grupos de control negativo se inmunizaron con regulador solo o vaccinia de tipo silvestre. Como control positivo, un grupo de ratones se infectó i .v. con 10* i.f. u, de C.trachomatis. El número de organismos dado al grupo de control positivo ha mostrado previamente limpiarse en 2 semanas. Después de 3 semanas, los animales en cada uno de los grupos se estimularon i.v. con 10* i .f. u. de C.trachomatis. Tres días después de la estimulación los ratones se sacrificaron y el número de i.f. u . por bazo se determinó. El número medio de organismos encontrados en los bazos de animales inmunizados con el virus de vaccinia que expresan Cap í (7.1 x 1 04) fue 2.6 veces menor (p<0.01 ; análisis de Suma de Rangos de Wilcoxon) que los animales en los grupos de control inmunizados con ya sea regulador (1 .8 x 10s) o vaccinia de tipo silvestre (1 .9 x 1 06) . Los animales en el grupo positivo tuvieron 77 veces menos organismos (2.4 x 103) por bazo que los animales en los grupos de control negativo (p>0.01 ; análisis de Suma de Rangos de Wilcoxon) . Estos datos demostraron que la inmunización con un fragmento inmunogénico de Capí puede producir un nivel significativo de protección contra infección por C.trachomatis. EJ EMPLO 10 PROTEÍNAS DE FUSIÓN Pmp/Ra 12 Se generaron diversas construcciones de fusión Pmp/Ra12 al sintetizar primero fragmentos de PCR de un gen de Pmp mediante el uso de cargas de inicio que contienen un sitio de restricción Not 1 . Cada fragmento de PCR se ligó después en el sitio de restricción Not1 de pCRX1 . El vector pC RX1 contiene la porción 6HisRa 12 de la fusión. La porción Ra 12 de la construcción de fusión codifica un polipéptido correspondiente a los residuos amino ácidos de 192-323 de Mycobecteríum tuberculosis MTB32A , como se describe en la Solicitud de Patente de E. U . No. 60/158,585, la exposición de la cual se incorpora en la presente para referencia. La orientación correcta de cada inserción se determinó por su patrón de enzima de restricción y se verificó su secuencia. Se realizaron múltiples construcciones de fusión para PmpA, PmpB, PmpC, PmpF y PmpH, como se describe adicionalmente abajo: Proteínas de Fusión PmpA PmpA es una proteína de 107 kD que contiene 982 aa y se clonó a partir de serovar E. La proteína PmpA se dividió en 2 fragmentos de sobreposición, las porciones PmpA(terminal N) y (terminal C). PmpA(terminal N) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCATGTTTATAACAAAGGAACTTATG (SEQ ID NO: 306) GAGAGCGGCCGCTTACTTAGGTGAGAAGAAGGGAGTTTC (SEQ ID NO: 307), respectivamente. La fusión de construcción resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 308, codificando una proteína de 66 kD (619 aa) que expresa el segmento 1-473 aa de PmpA. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 309. PmpA(terminal C) se amplificó por las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCCATTCTATTCATTTCTTTTGATCCTG(SEQ ID NO:310) GAGAGCGGCCGCTTAGAAGCCAACATAGCCTCC (SEQ ID NO: 311) Respectivamente. La construcción de fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 312, que codifica una proteína de 74 kD (691 aa) que expresa el segmento 438-982 aa de PmPA. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 313. Proteínas de Fusión PmpF PmpF es una proteína de 112 kD que contiene 1034 aa y se clonó a partir de serovar E. La proteína PmpF se dividió en 2 fragmentos de sobreposición, las porciones PmpF(terminal N) y (terminal C). PmpF(terminal N) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCATGATTAAAAGAACTTCTCTATCC (SEQ ID NO: 314) GAGAGCGGCCGCTTATAATTCTGCATCTCTTCTATGGC (SEQ ID NO: 315) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 316, que codifica una proteína de 69 kD (646aa) que expresa el segmento 1-499 aa de PmpF. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 317. PmpF(terminal C) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCCCTCGACATACGAACTCTGATGGG (SEQ ID NO: 318) GAGAGCGGCCGCTTAAAAGACCAGAGCTCCTCC (SEQ ID NO: 319) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 320, que codifica una protefna de 77 kD (715aa) que expresa el segmento 466-1034aa de PmpF. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 321. Proteínas de Fusión PmpH PmpH es una proteína de 108 kD que contiene 1016 aa y se clonó a partir de serovar E. La proteína PmpH se dividió en 2 fragmentos de sobreposición, las porciones PmpH(terminal N) y (terminal C). PmpH(terminal N) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCATGCCTTTTTCTTTGAGATCTAC (SEQ I D NO: 322) GAGAGCGGCCGCTTACACAGATCCATTACCGGACTG (SEQ I D NO: 323) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 324, que codifica una proteína de 64 kD (631 aa) que expresa el segmento 1 -484 aa de PmpH. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 325. La línea donadora CHH037 se encontró reactiva contra esta proteína. PmpH(terminal C) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGATCCTGTAGTACAAAATAATTCAGC (SEQ I D NO:326) GAGAGCGGCCGCTTAAAAGATTCTATTCAAGCC (SEQ I D NO: 327) respectivamente. La construcción de fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 328, que codifica una proteína de 77 kD (715aa) que expresa el segmento 449-1016aa de PmpH. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ I D NO: 329. La línea de paciente CT12 se encontró reactiva en respuesta a esta proteína. Proteínas de Fusión PmpB PmpB es una proteína de 183 kD que contiene 1750 aa y se clonó a partir de serovar F. La proteína PmpB se dividió en 4 fragmentos de sobreposición, PmpB (1), (2), (3) y (4). PmpB(1) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCATGAAATGGCTGTCAGCTACTGCG (SEQ ID NO: 330) GAGAGCGGCCGCTTACTTAATGCGAATTTCTTCAAG (SEQ ID NO: 331 ) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 332, que codifica una proteína de 53 kD (518aa) que expresa el segmento 1-372 aa de PmpB. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 333. PmpB(2) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGGTGACCTCTCAATTCAATCTTC (SEQ I D NO: 334) GAGAGCGGCCGCTTAGTTCTCTGTTACAGATAAGGAGAC (SEQ ID NO: 335) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 336, y codifica una proteína de 60 kD (585aa) que expresa el segmento 330-767aa de PmpB. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 337. Las líneas celulares derivadas de líneas de paciente CT1 , CT3, CT4 respondieron a esta proteína de pmpB recombinante. PmpB(3) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGACCAACTGAATATCTCTGAGAAC (SEQ ID NO: 338) GAGCGGCCGCTTAAGAGACTACGTGGAGTTCTG (SEQ I D NO: 339) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ I D NO: 340, y codifica una proteína de 67 kD (654aa) que expresa el segmento 732-1236aa de PmpB. La secuencia amino ácida de la protefna de fusión se establece en la SEQ I D NO: 341 . PmpB(4) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGGAACTATTGTGTTCTCTTCTG (SEQ I D NO: 342) GAGAGCGGCCGCTTAGAAGATCATGCGAGCACCGC (SEQ I D NO: 343) respectivamente. La construcción de fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ I D NO: 344, y codifica una proteína de 76 kD (700aa) que expresa el segmento 1 160-1750aa de PmpB. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ I D NO: 345. Proteínas de Fusión PmpC PmpC es una proteína de 187 kD que contiene 1774 aa y se clonó a partir de serovar E/L2. La proteína PmpC se dividió en 3 fragmentos de sobreposición, PmpC (1 ) , (2) y (3) . PmpC(1 ) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección : GAGAGCGGCCGCTCATGAAATTTATGTCAGCTACTGC (SEQ I D NO: 346) GAGAGCGGCCGCTTACCCTGTAATTCCAGTGATGGTC (SEQ ID NO: 347) respectivamente. La construcción de fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ I D NO: 348 y codifica una protelna de 51 kD (487aa) que expresa el segmento 1 -340 aa de PmpC. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ I D NO: 349. PmpC(2) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGATACACAAGTATCAGAATCACC (SEQ I D NO: 350) GAGAGCGGCCGCTTAAGAGGACGATGAGACACTCTCG (SEQ I D NO: 351 ) respectivamente. La fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ I D NO: 352, y codifica una proteína de 60 kD (583aa) que expresa el segmento 305-741aa de PmpC. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 353. PmpC(3) se amplificó mediante las cargas de inicio de detección y anti-detección: GAGAGCGGCCGCTCGATCAATCTAACGAAAACACAGACG (SEQ ID NO: 354) GAGAGCGGCCGCTTAGACCAAAGCTCCATCAGCAAC (SEQ ID NO: 355) respectivamente. La construcción de fusión resultante tiene una secuencia de ADN establecida en la SEQ ID NO: 356, y codifica una proteína de 70 kD (683aa) que expresa el segmento 714-1250aa de PmpC. La secuencia amino ácida de la proteína de fusión se establece en la SEQ ID NO: 357. EJEMPLO 11 INMUNOGENICIDAD DE CT622 Las líneas de células T específicas de Chlamydia se generaron a partir de dos pacientes con infecciones de Chlamydia y las líneas se designaron CT1 y CT13. Las líneas celulares T se generaron ya sea contra células dendríticas derivadas de monocito infectadas con serovar E de C.trachomatis durante 72 horas (CT1-ERB) o contra cuerpos elementales (EB) de serovar E eliminados (CT13-EEB). Una vez generadas, las líneas se examinaron contra la proteína específica de Chlamydia recombinante, CT622 en un ensayo de proliferación. Los ensayos de proliferación se llevaron a cabo mediante la estimulación de 2.5 x 104 células T en presencia de 1 x 104 células dendríticas derivadas de monocito con ya sea antígenos CT recombinantes (2 µg/m\) o Ebs de Chlamydia (1 µ?/???). El ensayo se incubó durante 4 días con un impulso de 3H-timidina durante las últimas 18 horas. La línea celular CT1-ERB demostró respuestas proliferativas significativamente por encima de los controles medios cuando se estimularon con CT622, CT875 y CT EB. La línea celular CT13-EEB demostró una respuesta proliferativa significativamente por encima de los controles medios cuando se estimularon con CT622, CT875 y CT EB (ver figura 12). EJEMPLO 12 CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE GENES DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS DE LONGITUD COMPLETA CT611. ORF3 Y QppA1 La expresión de proteína recombinante de las estructuras de lectura de longitud completa se llevó a cabo para clonas que contienen genes CT611, ORF-3 y oppA1. Las clonas que contuvieron los genes de interés fueron CtL2-8 (SEQ ID NO: 285) que codificó 4 ORFs (CT474, CT473, CT060 y CT139), CtL2-10 (SEQ ID NO: 284) que codificó los ORFs de CT610 y CT611 y clonas 16CtL2-16 (SEQ ID NO: 47), 16-D4-22 (SEQ ID NO: 119) y 19-A5-54 (SEQ ID NO: 84) todos los cuales contuvieron secuencias relacionadas con ORF-3. Las secuencias dentro de CtL2-10 (Ct-610) y CtL2-16 (ORF-3) también se identificaron de manera independiente por el enfoque de clonación de la expresión de célula T. La clona CtL2-8 se investigó además ya que esta clona había estimulado las respuestas proliferativas y la producción de IFN-gamma por dos líneas celulares T generadas contra serovar E. Clonación v expresión de secuencias de clona: CtL2-10 se encontró que codifica dos estructuras de lectura abierta (ORFs), CT61 0 y CT61 1 y estas se encontraron organizadas adyacentes entre sí dentro de la clona genómica. El ORF de longitud completa de CT610 (que contiene un dominio de síntesis de PQQ) se expresó y demostró previamente para estimular las respuestas proliferativas de las líneas de célula T generadas contra Chlamydia. Para determinar si el segundo ORF, CT61 1 también se reconoció por células T, la secuencia de longitud completa de CT61 1 se amplificó por PCR y se diseño para la expresión de proteína. La secuencia de nucleótidos se expone en la SEQ ID NO: 361 con la secuencia amino ácida correspondiente expuesta en la SEQ I D NO: 365. La segunda clona serológica, CtL2-8, se encontró que contiene 4 ORFs (CT474, CT473, CT060 y CT1 39) . La sobreposición de póptidos en los tres OR Fs predichos, más pequeños, (CT474, CT473 y CT060) no estimularon las respuestas proliferativas de líneas celulares T. Esto sugirió que el antígeno inmunoestimulador reside en el cuarto ORF, CT139. El ORF de CT139 es de aproximadamente 450 nucleótidos. La secuencia de nucleótidos de longitud completa se expone en la SEQ I D NO: 359 y la secuencia amino ácida de longitud completa se expone en la SEQ I D NO: 363. La comparación de secuencia amino ácida de GenbanK reveló que es una proteína de enlace oligo-péptido (oppA1 ) así como también que pertenece a la familia transportadora de ABC péptida. Esta proteína es de 462 amino ácidos de largo con un tamaño predicho de 48.3 kDa y parece contener 2 regiones de trans-membrana . Para expresar la secuencia de longitud completa de oppA1 , los oligonucleótidos se designaron con secuencias específicamente amplificadas que inician desde el residuo amino ácido 22 (exento del primer dominio de transmembrana), la secuencia de nucleótidos para la cual se expone en la SEQ I D NO: 358 y la secuencia amino ácida de la cual se expone en la SEQ ID NO: 362. Esto se mostró para expresar la proteína en E.coli. La clonación de longitud completa y la expresión de proteína recombinante de ORF-3 también se logró. Las secuencias de nucleótidos y de amino ácido se exponen en las SEQ I D NOs: 360 y 364, respectivamente. EJ EMPLO 13 ANTÍGENOS CLAM I DIANOS RECOMBINANTES RECONOCIDOS POR LÍN EAS DE CÉLU LA T Las líneas de célula T de pacientes se generaron a partir de los siguientes donadores: CT1 , CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8, CT9, CT10, CT1 1 , CT12, CT13, CT14, CT15 y CT16, algunos de los cuales se discutieron arriba. Un resumen de sus detalles se incluye en la Taba V. Tabla V: pacientes de C.trachomatls Pacientes Sexo Edad Manifestaciones Serovar Título de Infecciones Clínicas IgG Múltiples CT1 M 27 NGU LCR Negativo No CT2 M 24 NGU D Negativo E CT3 M 43 Asintomático J Ct 1 :512 No Shed Eb Cp Dx fue H PV 1 : 1024 Cps 1 :256 CT4 F 25 Asintomático J Ct Y Shed Eb 1 : 1024 CT5 F 27 BV LCR Ct:1:256 F/F CP 1:256 CT6 M 26 Salpullido G CP. N perinial 1:1024 Descarga, Disuria CT7 F 29 BV E Ct 1:512 N Úlcera genital Cp 1:1024 CT8 F 24 Desconocido LCR NA CT9 M 24 Asintomático LCR Ct:1:128 N Cp 1:128 CT10 M 20 Irritación vulvar negativo negativo 12/1/98 media CT11 F 21 BV J Ct 1:512 F/FJ/E/E Pap anormal PID 6/96 Olor CT12 m 20 Asintomático LCR Cp N 1-512 Cp 1:256 CT15 F 21 Muco-purulento cultura Ct:1:256 N Cervicitis Ct IgM Descarga 1:320 vaginal Cp 4:64 CT16 M 2T Asintomático/ LCR NA N contacto CL8 M 38 Sin historia negativo negativo N clínica de enfermedad NGU = Uretritis No Gonococal; BV = Vaginosis Bacteriana; CT = Chlamydia trachomatis; Cp = Chlamydia pneumoniae; Eb = cuerpos elementales de Chlamidia; HPV = virus de papiloma humano; Dx = diagnóstico; PID = enfermedad inflamatoria pélvica; LCR = reacción en cadena de ligasa. PBMC se recolectó de una segunda serie de donadores y las líneas de célula T se han generado a partir de un subconjunto de estos. Un resumen de los detalles de tres tales líneas celulares se listan abajo en la tabla.
El donador CHH01 1 es un donador femenino de 49 años de edad, saludable, sero-negativo para C trachomatis. PMBC produjo mayores cantidades de IFN-gamma en respuesta a cuerpos elementales de Ctrachomatis en comparación con cuerpos elementales de C.pneumoniae, indicando una respuesta específica de Ctrachomatis. El donador CHH037 es un donador femenino de 22 años de edad, saludable, sero-negativa para Ctrachomatis. PMBC produjo mayores cantidades de IFN-gamma en respuesta a cuerpos elementales de C trachomatis en comparación con cuerpos elementales de C.pneumoniae, indicando una respuesta específica de C trachomatis, CHH042 es un donador femenino de 25 años de edad, saludable con un título de IgG de 1 : 16 para C.pneumoniae. PBMC produjo cantidades mayores de IFN-gamma en respuesta a cuerpos elementales de C.trachomatis en comparación con cuerpos elementales de C.pnaumoniaa, indicando una respuesta específica de C.trachomatis. Las proteínas recombinantes para varios genes de Chlamydia trachomatis se generaron como se describe arriba. Las secuencias para MO P se derivaron de serovar F. Los genes CT875, CT622, pmp-B-2, pmpA y CT529 se derivaron de serovar E y secuencias para los genes gro-EL, Swib, pmpD, pmpG, TSA, CT610, pmpC, pmpE, S13, IpdA, pmpl y pmpH-C se derivaron de Lll. Varias de las líneas de pacientes y donadores arriba descritas se examinaron contra las proteínas recombinantes de Chlamydia. La Tabla IV resume los resultados de las respuestas de célula T a estas proteínas de Chlamydia recombinantes.
Tabla VII: Antfgenos de Chlamydia Recombinantes Reconocidos por Líneas de Célula T Antígeno Sero# C CT CT1 CT3 CT4 CT5 CT CT CT CH CH var bits L8 10 E E L2 E 1 1 12 13 H- H- L2 E E E E 01 1 037 E E Gro-EL L2 10 + + + + + + + + + + (CT1 10) MompF F 10 + + + + + + + + + + (CT681 ) CT875 E 8 - + + - + + + + + - + SWIB L2 8 + + + + + + + (CT460) pmpD L2 5 + + + + + + (CT812) pmpG L2 6 + + + + nt + + (CT871 ) TSA L2 6 + + + + + + (CT603) CT622 E 3 - - + - + - - - + - - CT610 L2 3 - + - + - - - + - - - PmpB-2 E 3 + + + (CT41 3) pmpC L2 4 + + + + (CT414) pmpE L2 3 + + + (CT869) S 13 L2 2 + + (CT509) IpdA L2 3 + + + (CT557) pmpl L2 2 + + (CT874) pmpH-C L2 1 + (CT872) pmpA E 0 (CT412) CT529 E 0 Aunque la presente invención se ha descrito en cierto detalle a manera de ilustración y de ejemplo para propósitos de claridad de entendimiento, pueden llevarse a cabo cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención que se intenta se limite solamente por el alcance de las reivindicaciones anexas.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1 . Una composición para producir una respuesta inmune que comprende una proteína Capí Clamidia o un fragmento inmunogónico de la misma y un inmunoestimulante. 2. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque el fragmento inmunogónico comprende al menos un epítopo CTL que consiste esencialmente de aminoácidos 139-147 de una proteína Capí . 3. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la proteína Capí comprende una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ I D NO: 21 o una secuencia que tiene al menos aproximadamente 90% de identidad con la secuencia establecida en SEQ I D NO: 21 . 4. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la proteína Capí o fragmento inmunogónico de la misma comprende una secuencia establecida en cualquiera de una de las secuencias SEQ I D NOs: 121 , 123, 125, 127 , 129, 1 31 , 133, 1 35, 137 y 1 39. 5. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque el fragmento inmunogónico comprende aminoácidos 107-176 de una proteína Capí . 6. La composición según la reivindicación 5, caracterizada porque el fragmento inmunogónico comprende aminoácidos 107- 176 de una proteína Capí que tiene una secuencia de aminoácidos establecida en cualquiera de SEQ I D NOs: 121 , 123, 125, 127, 129, 131 , 1 33, 135, 137 y 139. 7. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque el fragmento inmunogénico es inmunológicamente reactivo con una célula T CD8+ de un animal infectado con Clamidia. 8. Un método para estimular una respuesta de célula T específica de Clamidia en un animal que comprende administrar a un animal una cantidad eficaz de una composición según la reivindicación 1 . 9. Un método para inhibir el desarrollo de una infección Clamidia en un animal , que comprende administrar a un animal una cantidad eficaz de una composición según la reivindicación 1 . 1 0. Una composición para producir una respuesta inmune que comprende un polinucleótido aislado que codifica una proteína Cap í Clamidia o un fragmento inmunogénico de la misma y un inmunoestimulante. 1 1 . La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque el fragmento inmunogénico comprende al menos una secuencia de epítopo CTL que consiste esencialmente de aminoácidos 139- 147 de una proteína Cap í . 12. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque la proteína Capí comprende una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ I D NO: 121 o una secuencia que tiene al menos aproximadamente 90% de identidad a la secuencia establecida en SEQ I D NO: 121 . 13. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque la proteína Cap í o fragmento inmunogénica de la misma comprende una secuencia establecida en cualquiera de SEQ ID NOs: 121 , 123, 125, 127, 129, 1 31 , 133, 135, 137 y 139. 14. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque el fragmento inmunogónico comprende aminoácidos 1 07- 176 de una región Cap 1 . 1 5. La composición según la reivindicación 14, caracterizada porque el fragmento inmunogónico comprende aminoácidos 1 07-176 de una proteína Capí que tiene una secuencia de aminoácidos establecida en cualquiera de SEQ ID NOs: 121 , 123, 125, 127, 129, 131 , 1 33, 135, 1 37 y 139. 16. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque el fragmento inmunogónico es inmunológicamente reactivo con una célula T CD8+ de un animal infectado con Clamidia. 17. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque el polinucleótido aislado se enlaza operativamente dentro de un vector de suministro viral . 18. La composición según la reivindicación 17, caracterizada porque el vector de suministro viral es un vector de suministro del virus de vacuna. 19. U n método para estimular una respuesta de célula T específica de Clamidia en un animal que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de una composición según la reivindicación 10. 20. Un método para inhibir el desarrollo de una infección Clamidia en un animal, que comprende administrar a un animal dicha cantidad eficaz de una composición según la reivindicación 10. 21 . Un método para inhibir el desarrollo de una infección Clamidia en un animal, que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de una composición según la reivindicación 18. 22. Un poiinucleótido aislado que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste de: (a) secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:358- 361 ; (b) complementos de las secuencias proporcionadas en SEQ I D NO:358-361 ; (c) secuencias que consisten de al menos 20 residuos contiguos de una secuencia proporcionada en SEQ I D NO:358-361 ; (d) secuencias que se hibridizan a una secuencia proporcionada en SEQ I D NO: 358-361 , bajo condiciones altamente severas; (e) secuencias que tienen al menos 95% de identidad con una secuencia de SEQ I D NO: 358-361 ; (f) secuencias que tienen al menos 99% de identidad con una secuencia de SEQ ID NO:358-361 ; y (g) degenerar variantes de una secuencia proporcionada en SEQ ID NO.358-361 . 23. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de. (a) secuencias codificadas por un poiinucleótido de la reivindicación 22 ; (b) secuencias que tienen al menos 95% de identidad con una secuencia codificada por un polinucleótido de la reivindicación 22 ; y (c) secuencias que tienen al menos 99% de identidad con una secuencia codificada por un polinucleótido de la reivindicación 22. 24. U n polipéptido aislado que comprende al menos un fragmento inmunogénico de una secuencia de polipéptidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de polipéptidos establecida en SEQ I D NO: 362-365, (b) una secuencia de polipéptidos que tiene al menos 95% de identidad con una secuencia establecida en SEQ I D NO: 362-365, y (c) una secuencia de polipéptidos que tiene al menos 99% de identidad con una secuencia establecida en SEQ I D NO: 362-365. 25. Un vector de expresión que comprende un polinucleótido de la reivindicación 22 operativamente enlazado a una secuencia de control de expresión . 26. Una célula huésped transformada o transfectada con un vector de expresión según la reivindicación 25. 27. Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión a antigeno del mismo, que se une específicamente a un polipéptido de cualquiera de una de las reivindicaciones 23 y 24. 28. Un método para detectar la presencia de Clamidia en un paciente, que comprende las etapas de: (a) obtener una muestra biológica del paciente; (b) contactar la muestra biológica con un agente de unión que se une a un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 23 y 24; (c) detectar en la muestra una cantidad de polipéptido que se une al agente de unión; y (d) comparar la cantidad de polipéptido con un valor de corte predeterminado y de ahí determinar la presencia de Clamidia en el paciente. 29. Una proteína de fusión que comprende al menos un polipéptido según la reivindicación 23 o reivindicación 24. 30. Un oligonucleótido que se hibridiza a una secuencia citada en SEQ I D NO. 358-361 bajo condiciones altamente severas. 31 . Un método para estimular y/o expandir las células T específicas para una proteína Clamidia, que comprende contactar las células T con al menos un componente seleccionado del grupo que consiste de: (a) un polipéptido de acuerdo a la reivindicación 23 o la reivindicación 24; (b) un polinucleótido de acuerdo a la reivindicación 22; y (c) una célula que presenta antígeno que expresa un polinucleótido según la reivindicación 22, bajo condiciones y por un tiempo suficiente para permitir la estimulación y/o expansión de células T. 32. U na población de la célula T aislada , que comprende células T preparadas según el método de la reivindicación 31 . 33. Una composición que comprende un primer componente seleccionado del grupo que consiste de vehículos fisiológicamente aceptables y inmunoestimulantes, y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste de: (a) un polipéptido según la reivindicación 23 o la reivindicación 24; (b) un polinucleótido según la reivindicación 22; (c) un anticuerpo según la reivindicación 27; (d) una proteína de fusión según la reivindicación 29; (e) una población de célula T según la reivindicación 32; y (f) una célula que presenta antígeno que expresa un polipéptido según la reivindicación 23 o la reivindicación 24. 34. Un método para estimular una respuesta inmune en un paciente, que comprende administrar al paciente una composición seleccionada del grupo que consiste de; (a) una composición de la reivindicación 33; (b) una secuencia de polinucleótidos de cualquiera de SEQ I D NO:407-430, 525-559 y 582-598; y (c) una secuencia de polipéptidos de cualquiera de SEQ I D NO:431 -454 y 560-581 . 35. Un método para el tratamiento de infección Clamidia en un paciente, que comprende administrar al paciente una composición seleccionada del grupo que consiste de: (a) una composición de la reivindicación 33; (b) una secuencia de polinucleótidos de cualquiera de SEQ I D NO:407-430, 525-559 y 582-598; y (c) una secuencia de polipéptidos de cualquiera de SEQ I D NO:431 -454 y 560-581 . 36. Un método para determinar la presencia de Clamidia en un paciente, que comprende las etapas de: (a) obtener una muestra biológica del paciente; (b) contactar la muestra biológica con un oligonucleótido según la reivindicación 30; (c) detectar en la muestra una cantidad de un polinucleótido que se hibridiza al oligonucleótido; y (d) comparar la cantidad de polinucleótido que se hibridiza al oligonucleótido a un valor de corte predeterminado, y por lo tanto determinar la presencia del cáncer en el paciente. 37. Un equipo de diagnóstico que comprende al menos un oligonucleótido según la reivindicación30. 38. Un equipo de diagnóstico que comprende al menos un anticuerpo según la reivindicación 27 y un reactivo de detección, en donde T? reactivo de detección comprende un grupo reportador. 3T. Un método para incubar el tratamiento de Clamidia en un paciente, que comprende las etapas de: (a) incubar células T CD4+ y/o CD8+ aisladas de un paciente con al menos un componente seleccionado del grupo que consiste de: (i) un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 23 y 24; (ii) una secuencia de polipóptidos de cualquiera de SEQ I D NO: 431 -454 y 506-581 ; (iii) un polinucleótido según la reivindicación 22; (iv) una secuencia de polinucieótidos de cualquiera de SEQ I D NO:407-430, 525-559 y 582-598; (v) una célula que presenta un antfgeno que expresa una secuencia de polipóptidos establecida en cualquiera de las reivindicaciones 23 y 24; (vi) una célula que presenta antígeno que expresa una secuencia de polipóptidos de cualquiera de SEQ I D NO:431 -454 y 560-581 , de manera que las células T se proliferan; y (b) administrar al paciente una cantidad eficaz de las células T proliferadas. RESU MEN Se describen compuestos y métodos para el diagnóstico y tratamiento de infección Clamidial. Los compuestos proporcionados incluyen polipéptidos que contienen al menos una porción antigénica de un antígeno Chlamydia y secuencias de ADN que codifican tales polipéptidos. Las composiciones farmacéuticas y vacunas que comprenden tales polipéptidos o secuencias de ADN también se proporcionan, junto con anticuerpos dirigidos contra tales polipéptidos. Los equipos de diagnóstico que contienen tales polipéptidos o secuencias de ADN y un reactivo de detección adecuado pueden utilizarse para la detección de infección Clamidial en pacientes y en muestras biológicas.
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Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5629167A (en) * 1994-04-19 1997-05-13 Biocine S.P.A. Detection of antibodies against Chlamydia trachomatis pgp3 antigen in patient sera by enzyme-linked immunosorbent assay
US7459524B1 (en) 1997-10-02 2008-12-02 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia protein, sequence and uses thereof
US6686339B1 (en) 1998-08-20 2004-02-03 Aventis Pasteur Limited Nucleic acid molecules encoding inclusion membrane protein C of Chlamydia
AU5365999A (en) 1998-08-20 2000-03-14 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid molecules encoding pomp91a protein of (chlamydia)
EP1105490A1 (en) 1998-08-20 2001-06-13 Aventis Pasteur Limited Nucleic acid molecules encoding inclusion membrane protein c of chlamydia
US6649370B1 (en) 1998-10-28 2003-11-18 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
US6607730B1 (en) 1998-11-02 2003-08-19 Aventis Pasteur Limited/Aventis Pasteur Limitee Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
AU3790900A (en) 1998-12-01 2000-06-19 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
US20080213264A1 (en) * 1998-12-08 2008-09-04 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6555115B1 (en) * 1998-12-08 2003-04-29 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
WO2000034483A2 (en) 1998-12-08 2000-06-15 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US20020061848A1 (en) * 2000-07-20 2002-05-23 Ajay Bhatia Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
US7297341B1 (en) 1998-12-23 2007-11-20 Sanofi Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
ATE384738T1 (de) 1998-12-28 2008-02-15 Aventis Pasteur Chlamydia antigene, entsprechende dna fragmente und ihre verwendungen
US6808713B1 (en) 1998-12-28 2004-10-26 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
GB9902555D0 (en) 1999-02-05 1999-03-24 Neutec Pharma Plc Medicament
WO2000055326A1 (en) 1999-03-12 2000-09-21 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US20030095973A1 (en) 1999-05-03 2003-05-22 Murdin Andrew D. Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
ATE384793T1 (de) 1999-09-20 2008-02-15 Aventis Pasteur Chlamydia antigene und entsprechende dna- fragmente und ihre verwendungen
US6632663B1 (en) 1999-09-22 2003-10-14 Aventis Pasteur Limited DNA immunization against chlamydia infection
ATE463575T1 (de) 1999-12-22 2010-04-15 Aventis Pasteur Chlamydia antigene, entsprechende dns fragmente und ihre verwendungen
US6919187B2 (en) * 2000-04-21 2005-07-19 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
ATE389020T1 (de) 2000-04-21 2008-03-15 Corixa Corp Verbindungen und verfahren zur behandlung und diagnose von chlamydia-infektionen
CA2408199A1 (en) 2000-05-08 2001-11-15 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
EP1297005B1 (en) 2000-07-03 2009-08-26 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia pneumoniae
US7537772B1 (en) 2000-10-02 2009-05-26 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia protein, gene sequence and the uses thereof
US7731980B2 (en) * 2000-10-02 2010-06-08 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia PMP proteins, gene sequences and uses thereof
US20030059896A1 (en) * 2000-12-21 2003-03-27 Shire Biochem Inc. Novel chlamydia antigens and corresponding DNA fragments
GB2370838A (en) * 2001-01-06 2002-07-10 Benedikt Timmerman Immunogenic complex
JP4413617B2 (ja) * 2001-12-12 2010-02-10 カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する免疫化
GB0203403D0 (en) 2002-02-13 2002-04-03 Chiron Spa Chlamydia cytotoxic-T cell epitopes
BRPI0411857A (pt) * 2003-06-26 2006-05-23 Chiron Corp composições imunogênicas para chlamydia trachomatis
EP1689867A4 (en) * 2003-11-20 2007-08-22 Sanofi Pasteur Ltd IMMUNIZATION AGAINST CHLAMYDIA INFECTIONS
UA97943C2 (ru) * 2005-03-31 2012-04-10 ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а. Вакцина против инфекции chlamydia
US8541007B2 (en) 2005-03-31 2013-09-24 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccines against chlamydial infection
CA2608278A1 (en) * 2005-05-12 2006-12-28 Guido Grandi Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
WO2007030879A1 (en) * 2005-09-13 2007-03-22 Diatech Pty Ltd Diagnostic markers and uses therefor
WO2007082105A2 (en) * 2006-01-16 2007-07-19 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chlamydia vaccine
EP1970708A1 (de) * 2007-03-07 2008-09-17 Mikrogen Molekularbiologische Entwicklungs-GmbH Biochip und Verfahren zum selektiven Nachweis von Chlamydia trachomatis-Infektionen
EP2162460A4 (en) * 2007-06-14 2012-06-06 Emergent Product Dev Gaithersburg Inc VACCINES AGAINST CHLAMYDIA INFECTIONS
US20100260791A1 (en) * 2007-08-03 2010-10-14 President And Fellows Of Harvard Chlamydia antigens
CA2744739A1 (en) * 2007-12-03 2009-06-11 President And Fellows Of Harvard College Chlamydia antigens
CN102438650A (zh) 2009-03-06 2012-05-02 诺华有限公司 衣原体抗原
CN102918155B (zh) 2010-03-23 2015-12-16 和光纯药工业株式会社 沙眼衣原体检测用引物和探针、以及使用该引物和探针的沙眼衣原体的检测方法
WO2012054755A1 (en) * 2010-10-20 2012-04-26 Genocea Biosciences, Inc. Chlamydia antigens and uses thereof
US20130095487A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-18 University Of South Florida Interferon-Gamma Response as a Diagnostic Test for Persistent Chlamydial Infections
JP6173479B2 (ja) * 2012-12-05 2017-08-02 ザヴァックス ジェネティクス ワクチン カンパニー リミテッドＴｈｅｖａｘ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 抗原特異的ｔ細胞反応を誘導するための免疫原エンハンサーとしての融合タンパク質
CN113801191B (zh) * 2021-08-18 2022-05-17 南京大学 一种检测衣原体的多肽探针及其应用

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4118469A (en) * 1976-04-27 1978-10-03 Research Corporation Antigen for trachoma lymphogranuloma venereum (LGV) and non-gonococcal urethritis (NGU)
US4497899A (en) * 1982-04-12 1985-02-05 Abbott Laboratories Immunoassay for Chlamydia trachomatis antigens
US4497900A (en) 1982-04-12 1985-02-05 Abbott Laboratories Immunoassay for Neisseria gonorrhoeae antigens
US4497863A (en) * 1984-03-07 1985-02-05 Milliken Research Corporation Laminated weft insertion fabric
DE3650571T2 (de) 1985-01-14 1997-02-27 Chiron Corp Hauptprotein der Aussenmembran von Chlamydia
US5785973A (en) * 1988-02-01 1998-07-28 Praxis Biologics, Inc. Synthetic peptides representing a T-cell epitope as a carrier molecule for conjugate vaccines
EP0348725A3 (en) 1988-06-29 1990-10-24 Miles Inc. Species-specific epitode of chlamydia trachomatis and antibodies that recognize the same
JPH04504416A (ja) * 1989-02-17 1992-08-06 コセルコ・ミモトープス・ピィ・ティ・ワイ．エル・ティ・ディ． ペプチドの使用方法と合成方法
US5869608A (en) * 1989-03-17 1999-02-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Nucleotide and amino acid sequences of the four variable domains of the major outer membrane proteins of Chlamydia trachomatis
US5166053A (en) * 1990-02-23 1992-11-24 Miles Inc. Specimen adequacy control for chlamydia assays
JP3018553B2 (ja) * 1990-05-08 2000-03-13 日立化成工業株式会社 クラミジア・トラコマティス抗体測定方法及びクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤
US5725863A (en) 1991-09-06 1998-03-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Polypeptides useful in prevention of chlamydia infection
JP3755890B2 (ja) 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
AU669000B2 (en) 1992-09-18 1996-05-23 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Synthetic peptide vaccine for chlamydia trachomatis
US5549978A (en) * 1992-10-30 1996-08-27 Kabushiki Kaisha Toshiba Magnetoresistance effect element
US5629167A (en) * 1994-04-19 1997-05-13 Biocine S.P.A. Detection of antibodies against Chlamydia trachomatis pgp3 antigen in patient sera by enzyme-linked immunosorbent assay
ES2321346T3 (es) 1994-09-20 2009-06-04 Hitachi Chemical Co., Ltd. Polinucleotidos que codifican un polipeptido antigenico de chlamydia pneumoniae.
GB9506863D0 (en) 1995-04-03 1995-05-24 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9626864D0 (en) 1996-12-24 1997-02-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9516293D0 (en) 1995-08-09 1995-10-11 Immunova Ltee Novel peptides and their use as vaccines
CN1223589A (zh) * 1996-05-06 1999-07-21 美国拜尔公司 包含鹦鹉热衣原体的猫疫苗及其制备方法
AU723235B2 (en) 1996-07-12 2000-08-24 University Of Manitoba DNA immunization against Chlaymdia infection
US6464979B1 (en) 1996-09-12 2002-10-15 Aventis Pasteur Limited Chlamydial vaccines and methods of preparation thereof
US7459524B1 (en) 1997-10-02 2008-12-02 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia protein, sequence and uses thereof
JP4249279B2 (ja) 1997-10-22 2009-04-02 デンカ生研株式会社 クラミジア・トラコマティス主要外膜蛋白質及びその製造方法、並びにクラミジア・トラコマティスの抗体測定方法及び抗体測定試薬
EP1032674B1 (en) 1997-11-21 2007-01-24 Serono Genetics Institute S.A. (chlamydia pneumoniae) genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
DE69841894D1 (de) * 1997-11-21 2010-10-21 Merck Serono Biodevelopment Sa Äusseres Membranpolypeptid von Chlamydia pneumoniae sowie Fragmente davon und deren Verwendung, insbesondere zur Diagnose, Prävention und Behandlung einer Infektion
EP2218730A1 (en) * 1997-11-28 2010-08-18 Merck Serono Biodevelopment Chlamydia trachomatis genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
US7041490B1 (en) * 1997-11-28 2006-05-09 Serono Genetics Institute, S.A. Chlamydia trachomatis polynucleotides and vectors, recombinant host cells, DNA chips or kits containing the same
PL202844B1 (pl) 1998-04-07 2009-07-31 Corixa Corp Immunogeniczny polipeptyd, polinukleotyd, polipeptyd, kompozycja farmaceutyczna, wektor ekspresji, kompozycja szczepionki, polipeptyd do stosowania w leczeniu lub zapobieganiu infekcjom Mycobacterium tuberculosis, polinukleotyd do stosowania w leczeniu lub zapobieganiu infekcjom Mycobacterium tuberculosis i sposób wytwarzania polipeptydu
CA2347099C (en) * 1998-10-16 2014-08-05 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Adjuvant systems comprising an immunostimulant adsorbed to a metallic salt particle and vaccines thereof
US6607730B1 (en) * 1998-11-02 2003-08-19 Aventis Pasteur Limited/Aventis Pasteur Limitee Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
AU1722300A (en) 1998-11-12 2000-05-29 Regents Of The University Of California, The Chlamydia pneumoniae genome sequence
US6166177A (en) * 1998-12-08 2000-12-26 Corixa Corporation Compounds and methods for the treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6447779B1 (en) * 1998-12-08 2002-09-10 Corixa Corporation Compounds for the diagnosis of Chlamydial infection
US20020061848A1 (en) * 2000-07-20 2002-05-23 Ajay Bhatia Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6565856B1 (en) * 1998-12-08 2003-05-20 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6432916B1 (en) * 1998-12-08 2002-08-13 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6555115B1 (en) * 1998-12-08 2003-04-29 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6448234B1 (en) * 1998-12-08 2002-09-10 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US20080213264A1 (en) * 1998-12-08 2008-09-04 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
WO2000034483A2 (en) * 1998-12-08 2000-06-15 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
GB9902555D0 (en) 1999-02-05 1999-03-24 Neutec Pharma Plc Medicament
WO2000055326A1 (en) 1999-03-12 2000-09-21 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US20030095973A1 (en) 1999-05-03 2003-05-22 Murdin Andrew D. Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof
US6811783B1 (en) * 1999-09-07 2004-11-02 Aventis Pasteur Limited Immunogenic compositions for protection against chlamydial infection
ATE384793T1 (de) * 1999-09-20 2008-02-15 Aventis Pasteur Chlamydia antigene und entsprechende dna- fragmente und ihre verwendungen
US6632663B1 (en) 1999-09-22 2003-10-14 Aventis Pasteur Limited DNA immunization against chlamydia infection
EP2322666A3 (en) 1999-09-28 2011-08-10 Geneohm Sciences Canada, Inc. Highly conserved gene and its use to generate species-specific, genus-specific, family-specific, group-specific and universal nucleic acid probes for microorganisms.
CA2384977A1 (en) * 1999-10-14 2001-06-07 University Of Utah Research Foundation Resonant optical cavities for high-sensitivity, high-throughput biological sensors and methods
WO2001035992A1 (en) * 1999-11-19 2001-05-25 Michigan State University Recombinant chlamydia vaccine
ATE463575T1 (de) 1999-12-22 2010-04-15 Aventis Pasteur Chlamydia antigene, entsprechende dns fragmente und ihre verwendungen
US20010048927A1 (en) * 2000-02-01 2001-12-06 Richard Stephens Porin B (PorB) as a therapeutic target for prevention and treatment of infection by chlamydia
US20020146776A1 (en) * 2000-04-21 2002-10-10 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
US6919187B2 (en) 2000-04-21 2005-07-19 Corixa Corporation Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
ATE389020T1 (de) * 2000-04-21 2008-03-15 Corixa Corp Verbindungen und verfahren zur behandlung und diagnose von chlamydia-infektionen
CA2408199A1 (en) 2000-05-08 2001-11-15 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
WO2001099156A1 (en) * 2000-06-16 2001-12-27 Applied Materials, Inc. Configurable single substrate wet-dry integrated cluster cleaner
EP1297005B1 (en) 2000-07-03 2009-08-26 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia pneumoniae
EP1301726A1 (de) * 2000-07-20 2003-04-16 ZF FRIEDRICHSHAFEN Aktiengesellschaft Elektromagnetisch betätigbare, schleifringlose einflächen-reibungskupplung
US7731980B2 (en) * 2000-10-02 2010-06-08 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia PMP proteins, gene sequences and uses thereof
US7537772B1 (en) * 2000-10-02 2009-05-26 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. Chlamydia protein, gene sequence and the uses thereof
GB0103169D0 (en) * 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
AU2002306849A1 (en) * 2001-03-21 2002-10-08 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
WO2002079244A2 (en) * 2001-03-30 2002-10-10 University Of Manitoba Chlamydial protease-like activity factor responsible for degradation of host transcription factor
US20030199438A1 (en) * 2001-04-09 2003-10-23 Shaw Allan Christian Method for identification of proteins from intracellular bacteria
US20040029129A1 (en) * 2001-10-25 2004-02-12 Liangsu Wang Identification of essential genes in microorganisms
JP4413617B2 (ja) * 2001-12-12 2010-02-10 カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する免疫化
US7105171B2 (en) * 2002-03-07 2006-09-12 The Regents Of The University Of California Porin B (PorB) as a therapeutic target for prevention and treatment of infection by Chlamydia
BRPI0411857A (pt) * 2003-06-26 2006-05-23 Chiron Corp composições imunogênicas para chlamydia trachomatis
FR2869057B1 (fr) * 2004-04-16 2006-06-02 Piscines Desjoyaux Sa Sa Dispositif pour la realisation d'un haut de chainage d'un escalier
EP2314314A3 (en) 2004-10-25 2011-05-11 Statens Serum Institut Chlamydia trachomatis antigens for vaccine and diagnostic use
US8541007B2 (en) * 2005-03-31 2013-09-24 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccines against chlamydial infection
UA97943C2 (ru) * 2005-03-31 2012-04-10 ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а. Вакцина против инфекции chlamydia
CA2608278A1 (en) * 2005-05-12 2006-12-28 Guido Grandi Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
US8481057B2 (en) * 2005-12-22 2013-07-09 Novartis Vaccines & Diagnostics Srl Chlamydial antigens
WO2007082105A2 (en) * 2006-01-16 2007-07-19 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chlamydia vaccine
US20080124338A1 (en) * 2006-09-22 2008-05-29 The Scripps Research Institute Methods for treatment of inflammatory disease and chlamydia infectious disease
EP2068916A1 (en) * 2006-10-04 2009-06-17 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccines against chlamydial infection
US7892567B2 (en) * 2007-10-01 2011-02-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for immunization against chlamydial infection and disease
US9068007B2 (en) * 2008-10-09 2015-06-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for chlamydial antigens for diagnosis and treatment of chlamydial infection and disease
EP2379106A4 (en) * 2008-12-17 2012-06-13 Genocea Biosciences Inc ANTIGENS OF CHLAMYDIAS AND USES THEREOF
CN102438650A (zh) * 2009-03-06 2012-05-02 诺华有限公司 衣原体抗原
WO2011112670A2 (en) * 2010-03-09 2011-09-15 Board Of Regents, University Of Texas System Methods and compositions for chlamydial antigens for diagnosis and treatment of chlamydial infection and disease

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