JP3018553B2 - クラミジア・トラコマティス抗体測定方法及びクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤 - Google Patents
クラミジア・トラコマティス抗体測定方法及びクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤Info
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- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
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- G01N33/56927—Chlamydia
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、クラミジア・トラコマ
ティス感染症を診断するための特異性の高いクラミジア
・トラコマティス抗体測定方法およびそれに用いられる
診断用製剤に関するものである。
ティス感染症を診断するための特異性の高いクラミジア
・トラコマティス抗体測定方法およびそれに用いられる
診断用製剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａ
ｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）は、宿主の細胞
内でのみ生存可能な偏性細胞内寄生体である。その増殖
サイクルは特殊で、形態学的には細胞外にあるクラミジ
ア基本小体（ｅｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｂｏｄｙ：ＥＢ）
が食菌作用により細胞内に取り込まれて空胞封入体を形
成し、網膜体（ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ ｂｏｄｙ：Ｒ
Ｂ）に変化する。ＲＢは増殖力はあるが感染力を欠いて
おり、細胞内で増殖したＲＢはやがてＥＢに変化し、封
入体を破り細胞膜を破壊して細胞外に出る。ＥＢは増殖
力を欠くが感染力を持つ。人がこのＥＢに感染すると、
眼のトラコーマ、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）、非リ
ン菌性尿道炎（ＮＧＵ）や子宮頚管炎などの眼や生殖器
の病気を発症する。
ｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）は、宿主の細胞
内でのみ生存可能な偏性細胞内寄生体である。その増殖
サイクルは特殊で、形態学的には細胞外にあるクラミジ
ア基本小体（ｅｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｂｏｄｙ：ＥＢ）
が食菌作用により細胞内に取り込まれて空胞封入体を形
成し、網膜体（ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ ｂｏｄｙ：Ｒ
Ｂ）に変化する。ＲＢは増殖力はあるが感染力を欠いて
おり、細胞内で増殖したＲＢはやがてＥＢに変化し、封
入体を破り細胞膜を破壊して細胞外に出る。ＥＢは増殖
力を欠くが感染力を持つ。人がこのＥＢに感染すると、
眼のトラコーマ、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）、非リ
ン菌性尿道炎（ＮＧＵ）や子宮頚管炎などの眼や生殖器
の病気を発症する。
【０００３】近年、性行為感染症（ｓｅｘｕａｌｌｙ
ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ）の原因微生
物の１つとしてクラミジア・トラコマティスが注目を集
めており、アメリカではクラミジア・トラコマティス感
染症の新患者数が年間３００万人から１，０００万人
（熊本悦明ら：クラミジア感染症、Ｍｅｄｉｃ、２０、
１−８、１９８５による）と言われており、わが国でも
クラミジア・トラコマティス感染症の実態が徐々に明ら
かにされるにつれて関心が高まってきている。
ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ）の原因微生
物の１つとしてクラミジア・トラコマティスが注目を集
めており、アメリカではクラミジア・トラコマティス感
染症の新患者数が年間３００万人から１，０００万人
（熊本悦明ら：クラミジア感染症、Ｍｅｄｉｃ、２０、
１−８、１９８５による）と言われており、わが国でも
クラミジア・トラコマティス感染症の実態が徐々に明ら
かにされるにつれて関心が高まってきている。
【０００４】クラミジア・トラコマティス感染症の最も
感度の高い血清診断法はワング（Ｗａｎｇ）およびグレ
イストン（Ｇｒａｙｓｔｏｎ）（Ｔｒａｃｈｏｍａ ａ
ｎｄｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｃａｕｓｅ
ｄ ｂｙ ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ａｇｅｎｔｓ、Ｅｘ
ｃｅｒｐｔａ Ｍｅｄｉｃａ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、ｐ
ｐ．２７３−２８８、１９７１参照）の間接ミクロ免疫
蛍光抗体測定法（マイクロ−ＩＦ法）である。しかしな
がらマイクロ−ＩＦ法はその試験手技が困難なため臨床
検査室では診断法としては採用されていない。標準的な
マイクロ−ＩＦ法は１５種のクラミジア・トラコマティ
ス血清型の精製基本小体（ＥＢ）を必要とする。マイク
ロ−ＩＦ法は、免疫蛍光反応を行うために同定微生物の
完全な形態または構造を必要とする。したがってＥＢの
形態または構造を変えたり破壊したりする方法は使用で
きない。このＥＢは伝染性があり、かつ毒性をもってい
るため、そのまま抗原材料として使用するためには感染
防禦を施した特別な施設を必要とする。従って、通常は
ホルムアルデヒドやアセトンなどの固定化剤処理した抗
原を用いている。
感度の高い血清診断法はワング（Ｗａｎｇ）およびグレ
イストン（Ｇｒａｙｓｔｏｎ）（Ｔｒａｃｈｏｍａ ａ
ｎｄｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｃａｕｓｅ
ｄ ｂｙ ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ａｇｅｎｔｓ、Ｅｘ
ｃｅｒｐｔａ Ｍｅｄｉｃａ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、ｐ
ｐ．２７３−２８８、１９７１参照）の間接ミクロ免疫
蛍光抗体測定法（マイクロ−ＩＦ法）である。しかしな
がらマイクロ−ＩＦ法はその試験手技が困難なため臨床
検査室では診断法としては採用されていない。標準的な
マイクロ−ＩＦ法は１５種のクラミジア・トラコマティ
ス血清型の精製基本小体（ＥＢ）を必要とする。マイク
ロ−ＩＦ法は、免疫蛍光反応を行うために同定微生物の
完全な形態または構造を必要とする。したがってＥＢの
形態または構造を変えたり破壊したりする方法は使用で
きない。このＥＢは伝染性があり、かつ毒性をもってい
るため、そのまま抗原材料として使用するためには感染
防禦を施した特別な施設を必要とする。従って、通常は
ホルムアルデヒドやアセトンなどの固定化剤処理した抗
原を用いている。
【０００５】一方、近年開発された酵素免疫測定法（Ｅ
ＬＩＳＡ）は、簡便かつ迅速に多数検体の処理ができる
利点を有している。このＥＬＩＳＡを用いたクラミジア
・トラコマティス抗体の測定に関する報告がなされてい
るが、そのほとんどがクラミジア・トラコマティスＬ２
株のＥＢをそのまま、または、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナ
トリウム、ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａ
ｔｅ）処理してＥＬＩＳＡ用の抗原材料として用いる。
そのため、精製純度の低い抗原を用いることによるクラ
ミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・シタシ抗体
との交叉反応を含む非特異的反応の存在が知られてい
る。これは、主としてクラミジア・トラコマティスの複
雑な抗原性に起因している。クラミジア・トラコマティ
スの抗原性には、属（ｇｅｎｕｓ）特異的抗原、種（ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）特異的抗原および血清型（ｂｉｏｂａ
ｒ）特異的抗原があると考えられている。代表的な属特
異的抗原として、リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏ
ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）が知られており、
これは一部腸内細菌のＲｅミュータントＬＰＳと共通抗
原性を有している。
ＬＩＳＡ）は、簡便かつ迅速に多数検体の処理ができる
利点を有している。このＥＬＩＳＡを用いたクラミジア
・トラコマティス抗体の測定に関する報告がなされてい
るが、そのほとんどがクラミジア・トラコマティスＬ２
株のＥＢをそのまま、または、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナ
トリウム、ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａ
ｔｅ）処理してＥＬＩＳＡ用の抗原材料として用いる。
そのため、精製純度の低い抗原を用いることによるクラ
ミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・シタシ抗体
との交叉反応を含む非特異的反応の存在が知られてい
る。これは、主としてクラミジア・トラコマティスの複
雑な抗原性に起因している。クラミジア・トラコマティ
スの抗原性には、属（ｇｅｎｕｓ）特異的抗原、種（ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）特異的抗原および血清型（ｂｉｏｂａ
ｒ）特異的抗原があると考えられている。代表的な属特
異的抗原として、リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏ
ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）が知られており、
これは一部腸内細菌のＲｅミュータントＬＰＳと共通抗
原性を有している。
【０００６】一方、代表的な種特異抗原、血清型特異抗
原としては、クラミジア・トラコマティス主要外膜ペプ
チド（Ｍａｊｏｒ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ：ＭＯＭＰ）が知られており、これはクラ
ミジア・トラコマティス外膜タンパク質の約６０％を占
めるといわれている。しかしながらこのＭＯＭＰにも属
特異的抗原性の存在が知られている（Ｃｏｌｌｅｔｔ
ら、Ａｎｎｕ．Ｍｅｅｔ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ．Ｄ．Ｃ．、Ａｂｓｔ
ｒａｃｔ Ｎｏ．Ｄ−１５９、１９８６）。ＭＯＭＰ以
外のクラミジア・トラコマティス外膜抗原は主として属
特異的抗原であるが、同時に種特異的抗原性の存在する
ものもある。サルコシル不溶性の分子量約５９．５ダル
トンペプチドはこの範疇にはいる。
原としては、クラミジア・トラコマティス主要外膜ペプ
チド（Ｍａｊｏｒ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ：ＭＯＭＰ）が知られており、これはクラ
ミジア・トラコマティス外膜タンパク質の約６０％を占
めるといわれている。しかしながらこのＭＯＭＰにも属
特異的抗原性の存在が知られている（Ｃｏｌｌｅｔｔ
ら、Ａｎｎｕ．Ｍｅｅｔ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ．Ｄ．Ｃ．、Ａｂｓｔ
ｒａｃｔ Ｎｏ．Ｄ−１５９、１９８６）。ＭＯＭＰ以
外のクラミジア・トラコマティス外膜抗原は主として属
特異的抗原であるが、同時に種特異的抗原性の存在する
ものもある。サルコシル不溶性の分子量約５９．５ダル
トンペプチドはこの範疇にはいる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上述したようにクラミ
ジア・トラコマティスのもつ抗原性は非常に複雑であ
る。クラミジア・トラコマティス感染者の有するクラミ
ジア・トラコマティス抗体は、クラミジア・トラコマテ
ィスの複雑な抗原性に対応した多様性を示し、感染者に
よってそのパターンは異なる。そのため特定の１種類の
クラミジア・トラコマティス蛋白を用いて、クラミジア
・トラコマティス抗体を測定することは事実上不可能で
ある。従って、クラミジア・トラコマティス感染者の有
するクラミジア・トラコマティス抗体を高精度かつ高感
度で、クラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・
シタシ抗体との交叉反応を含む非特異的反応を抑えて測
定するためには、用いる抗原材料の適切な選択が必要と
なる。
ジア・トラコマティスのもつ抗原性は非常に複雑であ
る。クラミジア・トラコマティス感染者の有するクラミ
ジア・トラコマティス抗体は、クラミジア・トラコマテ
ィスの複雑な抗原性に対応した多様性を示し、感染者に
よってそのパターンは異なる。そのため特定の１種類の
クラミジア・トラコマティス蛋白を用いて、クラミジア
・トラコマティス抗体を測定することは事実上不可能で
ある。従って、クラミジア・トラコマティス感染者の有
するクラミジア・トラコマティス抗体を高精度かつ高感
度で、クラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・
シタシ抗体との交叉反応を含む非特異的反応を抑えて測
定するためには、用いる抗原材料の適切な選択が必要と
なる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、少なくとも約
７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５
Ｋダルトンの分子量をもつポリペプチド混合物クラミジ
ア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドからなる膜画
分を抗原材料とすることによって、上述したＥＢそのも
のあるいはＳＤＳ処理したＥＢを抗原材料としてクラミ
ジア・トラコマティス抗体を測定する従来のＥＬＩＳＡ
法におけるクラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジ
ア・シタシ抗体との交叉反応性を含む非特異的反応の問
題点を解消したものである。
７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５
Ｋダルトンの分子量をもつポリペプチド混合物クラミジ
ア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドからなる膜画
分を抗原材料とすることによって、上述したＥＢそのも
のあるいはＳＤＳ処理したＥＢを抗原材料としてクラミ
ジア・トラコマティス抗体を測定する従来のＥＬＩＳＡ
法におけるクラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジ
ア・シタシ抗体との交叉反応性を含む非特異的反応の問
題点を解消したものである。
【０００９】すなわち本発明は、少なくとも約７５Ｋダ
ルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５Ｋダルト
ンの分子量をもつクラミジア・トラコマティス外膜複合
体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチ
ド混合物並びに該クラミジア・トラコマティス外膜複合
体を固相担体に固定化した固相化抗原を含有してなる特
異性の高いクラミジア・トラコマティス感染症診断用製
剤に関する。
ルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５Ｋダルト
ンの分子量をもつクラミジア・トラコマティス外膜複合
体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチ
ド混合物並びに該クラミジア・トラコマティス外膜複合
体を固相担体に固定化した固相化抗原を含有してなる特
異性の高いクラミジア・トラコマティス感染症診断用製
剤に関する。
【００１０】以下に本発明を詳細に述べる。本発明に用
いる、少なくとも約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダル
トン及び約３９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジ
ア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドを含有するク
ラミジア・トラコマティス外膜複合体、又はクラミジア
・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物は、カル
ドウェル（Ｃａｌｄｗｅｌｌ）らのＩｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．、３１、１１６１−１１
７６、１９８１等に記載される公知の方法を用いて調製
することができる。
いる、少なくとも約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダル
トン及び約３９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジ
ア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドを含有するク
ラミジア・トラコマティス外膜複合体、又はクラミジア
・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物は、カル
ドウェル（Ｃａｌｄｗｅｌｌ）らのＩｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．、３１、１１６１−１１
７６、１９８１等に記載される公知の方法を用いて調製
することができる。
【００１１】即ち、まずクラミジア・トラコマティスＥ
Ｂを常套手段により精製し、次いで精製されたクラミジ
ア・トラコマティスＥＢを、界面張力低下の作用が温和
なイオン性界面活性剤、好ましくはアニオンサルコシン
界面活性剤、特に好ましくはサルコシル（Ｎ−ラウロイ
ルサルコシンナトリウム）によって抽出し、可溶分を除
去した後の残渣成分とする。この後、好ましくはデオキ
シリボ核酸分解酵素（ＤＮａｓｅ）及びリボ核酸分解酵
素（ＲＮａｓｅ）でヌクレアーゼ処理を行う。
Ｂを常套手段により精製し、次いで精製されたクラミジ
ア・トラコマティスＥＢを、界面張力低下の作用が温和
なイオン性界面活性剤、好ましくはアニオンサルコシン
界面活性剤、特に好ましくはサルコシル（Ｎ−ラウロイ
ルサルコシンナトリウム）によって抽出し、可溶分を除
去した後の残渣成分とする。この後、好ましくはデオキ
シリボ核酸分解酵素（ＤＮａｓｅ）及びリボ核酸分解酵
素（ＲＮａｓｅ）でヌクレアーゼ処理を行う。
【００１２】以上をさらに具体的に示せば、まず精製ク
ラミジア・トラコマティスＥＢを２％サルコシル、１．
５ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ（ｐＨ８．０）で抽出
し、サルコシル可溶性成分を抽出除去した後、ＤＮａｓ
ｅ ＲＮａｓｅ処理して、サルコシル不溶性画分（残渣
成分）として調製することができる。
ラミジア・トラコマティスＥＢを２％サルコシル、１．
５ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ（ｐＨ８．０）で抽出
し、サルコシル可溶性成分を抽出除去した後、ＤＮａｓ
ｅ ＲＮａｓｅ処理して、サルコシル不溶性画分（残渣
成分）として調製することができる。
【００１３】この方法は、もともとはグラム陰性菌であ
る大腸菌の外膜調製法として開発されたものである（Ｆ
ｉｌｉｐら、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１１５、７１
７−７２２、１９７３）。このようにして得られるクラ
ミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドを含有す
るクラミジア・トラコマティス外膜複合体は、電子顕微
鏡による形態観察で、完全なクラミジア・トラコマティ
ス細胞（ＥＢ）から細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）と細
胞質膜（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）
が欠落した細胞壁（ｃｅｌｌ ｗａｌｌ）であることが
わかる。このようにクラミジア・トラコマティス外膜
は、グラム陰性細菌の外膜（細胞壁）と共通した構造
的、機能的特徴を有している。
る大腸菌の外膜調製法として開発されたものである（Ｆ
ｉｌｉｐら、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１１５、７１
７−７２２、１９７３）。このようにして得られるクラ
ミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチドを含有す
るクラミジア・トラコマティス外膜複合体は、電子顕微
鏡による形態観察で、完全なクラミジア・トラコマティ
ス細胞（ＥＢ）から細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）と細
胞質膜（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）
が欠落した細胞壁（ｃｅｌｌ ｗａｌｌ）であることが
わかる。このようにクラミジア・トラコマティス外膜
は、グラム陰性細菌の外膜（細胞壁）と共通した構造
的、機能的特徴を有している。
【００１４】以上のようにして得られたクラミジア・ト
ラコマティス外膜複合体（サルコシル不溶性画分）は、
このまま本発明の方法における抗原として用いることが
できるが、より本発明に好適な固層への吸着が均一とな
る抗原とするために、次いで前記のイオン性界面活性剤
より界面張力低下の作用が強力な他のイオン性界面活性
剤、好ましくはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）によ
り可溶化する。こうして本発明に使用するクラミジア・
トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物が得られ
る。
ラコマティス外膜複合体（サルコシル不溶性画分）は、
このまま本発明の方法における抗原として用いることが
できるが、より本発明に好適な固層への吸着が均一とな
る抗原とするために、次いで前記のイオン性界面活性剤
より界面張力低下の作用が強力な他のイオン性界面活性
剤、好ましくはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）によ
り可溶化する。こうして本発明に使用するクラミジア・
トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物が得られ
る。
【００１５】このようにして得られるクラミジア・トラ
コマティス外膜構成ポリペプチド混合物を、後述する条
件によりＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動を行って解
析したところ、約１５５Ｋダルトン、約１０２Ｋダルト
ン、約７９Ｋダルトン、約７５Ｋダルトン、約５９．５
Ｋダルトン、約４９．５Ｋダルトン、約４２Ｋダルト
ン、約３９．５Ｋダルトン、約３１Ｋダルトン、約１
２．５Ｋダルトン等のポリペプチドから構成されてい
る。ここで約３９．５Ｋダルトンペプチドは、全体の約
６０％を占め、主要外膜ペプチド（ＭＯＭＰ）と呼ばれ
ているものである。一方、約１２．５Ｋダルトンペプチ
ドは、システィン含有量の高いペプチドでクラミジア・
トラコマティス種に特有のペプチドでありクラミジア・
シタシ種には存在しない（Ｂａｒｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、ＣＲＣ Ｐ
ｒｅｓｓ Ｉｎｃ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉ
ｄａ、４８−５０、１９８８）。また、約５９．５Ｋダ
ルトンペプチドには、種特異的抗原性が存在することが
明らかとなっている。
コマティス外膜構成ポリペプチド混合物を、後述する条
件によりＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動を行って解
析したところ、約１５５Ｋダルトン、約１０２Ｋダルト
ン、約７９Ｋダルトン、約７５Ｋダルトン、約５９．５
Ｋダルトン、約４９．５Ｋダルトン、約４２Ｋダルト
ン、約３９．５Ｋダルトン、約３１Ｋダルトン、約１
２．５Ｋダルトン等のポリペプチドから構成されてい
る。ここで約３９．５Ｋダルトンペプチドは、全体の約
６０％を占め、主要外膜ペプチド（ＭＯＭＰ）と呼ばれ
ているものである。一方、約１２．５Ｋダルトンペプチ
ドは、システィン含有量の高いペプチドでクラミジア・
トラコマティス種に特有のペプチドでありクラミジア・
シタシ種には存在しない（Ｂａｒｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、ＣＲＣ Ｐ
ｒｅｓｓ Ｉｎｃ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉ
ｄａ、４８−５０、１９８８）。また、約５９．５Ｋダ
ルトンペプチドには、種特異的抗原性が存在することが
明らかとなっている。
【００１６】本発明においては、前記のようにして調製
された、クラミジア・トラコマティス外膜複合体又は多
種のポリペプチドを含むクラミジア・トラコマティス外
膜構成ポリペプチド混合物をそのまま抗原として用いる
のが好ましいが、前述の各分子量のポリペプチドのうち
少なくとも約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及
び約３９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジア・ト
ラコマティス外膜複合体又はクラミジア・トラコマティ
ス外膜構成ポリペプチド混合物を抗原として用いること
もできる。その場合、抗体としてＩｇＧ又はＩｇＡを使
用するときは、約３９．５Ｋダルトンペプチド（ＭＯＭ
Ｐ）及び約５９．５Ｋダルトンペプチドを含むものとさ
れ、抗体としてＩｇＭを使用するときは、約７５Ｋダル
トンペプチド及び約５９．５Ｋダルトンペプチドを含む
ものとされる。ここでペプチドの分子量に約をつけたの
は、測定毎の誤差を考慮したためである。また、ＳＤＳ
電気泳動の分子量の測定条件によっては、記載する分子
量と異なった分子量値となることもあるが、本発明で規
定する分子量のポリペプチドと同一のものであるなら
ば、それをも含むものである。
された、クラミジア・トラコマティス外膜複合体又は多
種のポリペプチドを含むクラミジア・トラコマティス外
膜構成ポリペプチド混合物をそのまま抗原として用いる
のが好ましいが、前述の各分子量のポリペプチドのうち
少なくとも約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及
び約３９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジア・ト
ラコマティス外膜複合体又はクラミジア・トラコマティ
ス外膜構成ポリペプチド混合物を抗原として用いること
もできる。その場合、抗体としてＩｇＧ又はＩｇＡを使
用するときは、約３９．５Ｋダルトンペプチド（ＭＯＭ
Ｐ）及び約５９．５Ｋダルトンペプチドを含むものとさ
れ、抗体としてＩｇＭを使用するときは、約７５Ｋダル
トンペプチド及び約５９．５Ｋダルトンペプチドを含む
ものとされる。ここでペプチドの分子量に約をつけたの
は、測定毎の誤差を考慮したためである。また、ＳＤＳ
電気泳動の分子量の測定条件によっては、記載する分子
量と異なった分子量値となることもあるが、本発明で規
定する分子量のポリペプチドと同一のものであるなら
ば、それをも含むものである。
【００１７】なお、本発明では、前述のように少なくと
も約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３
９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジア・トラコマ
ティス外膜複合体又はクラミジア・トラコマティス外膜
構成ポリペプチド混合物を抗原として用いることが重要
であり、仮にどれか１つのポリペプチド、例えば約３
９．５Ｋダルトンペプチド（ＭＯＭＰ）に精製したもの
を用いたのでは、臨床上非常に大きな問題である凝陰性
反応が生じ、また、十分な種特異性が得られるものとも
言い難い。
も約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３
９．５Ｋダルトンの分子量をもつクラミジア・トラコマ
ティス外膜複合体又はクラミジア・トラコマティス外膜
構成ポリペプチド混合物を抗原として用いることが重要
であり、仮にどれか１つのポリペプチド、例えば約３
９．５Ｋダルトンペプチド（ＭＯＭＰ）に精製したもの
を用いたのでは、臨床上非常に大きな問題である凝陰性
反応が生じ、また、十分な種特異性が得られるものとも
言い難い。
【００１８】このようなクラミジア・トラコマティス外
膜複合体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリ
ペプチド混合物をクラミジア・トラコマティス抗体測定
のための抗原原料として用いる本発明の製剤では、該抗
原を固相担体としてポリスチレンや塩化ビニールなどの
プラスチック材料、ニトロセルロースやナイロンなどの
繊維材料及びガラスやシリカゲルなどの無機材料等に固
定化することができ、その形状は、タイタープレート、
ビーズ、磁性ビーズ、ペーパーディスク、糸などあらゆ
る形が可能である。中でも特にポリスチレンビーズ又は
ポリスチレンマイクロタイタープレートが好ましいもの
として使用される。また、本発明の製剤は、上記した固
相担体に物理的吸着に基づく方法で固相化させる方法に
限らず、原理的には抗原材料をＢｒＣＮ2等を用いた共
有結合法によって担体に固相化したものでもかまわな
い。
膜複合体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリ
ペプチド混合物をクラミジア・トラコマティス抗体測定
のための抗原原料として用いる本発明の製剤では、該抗
原を固相担体としてポリスチレンや塩化ビニールなどの
プラスチック材料、ニトロセルロースやナイロンなどの
繊維材料及びガラスやシリカゲルなどの無機材料等に固
定化することができ、その形状は、タイタープレート、
ビーズ、磁性ビーズ、ペーパーディスク、糸などあらゆ
る形が可能である。中でも特にポリスチレンビーズ又は
ポリスチレンマイクロタイタープレートが好ましいもの
として使用される。また、本発明の製剤は、上記した固
相担体に物理的吸着に基づく方法で固相化させる方法に
限らず、原理的には抗原材料をＢｒＣＮ2等を用いた共
有結合法によって担体に固相化したものでもかまわな
い。
【００１９】本発明の製剤を使用するヒトのクラミジア
・トラコマティス抗体測定方法は、検体試料として主に
ヒト血清が用いられる。しかしながら本発明の方法によ
れば、非特異的反応性が低いためにクラミジア・トラコ
マティス抗体価の低い検体試料にも適用できる。従っ
て、ヒト涙、ヒト子宮頚管内膜分泌物及び，尿道より圧
出した前立腺液ヒト精液も検体試料として用いることが
できる。
・トラコマティス抗体測定方法は、検体試料として主に
ヒト血清が用いられる。しかしながら本発明の方法によ
れば、非特異的反応性が低いためにクラミジア・トラコ
マティス抗体価の低い検体試料にも適用できる。従っ
て、ヒト涙、ヒト子宮頚管内膜分泌物及び，尿道より圧
出した前立腺液ヒト精液も検体試料として用いることが
できる。
【００２０】上述の抗原固定化固相担体を、適当な希釈
を施したクラミジア・トラコマティスに対する抗体を含
有している疑いのある検体試料と接触させ、一定時間保
温し、反応させた後、未反応の検体試料成分を除去し
て、担体上にクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリ
ペプチド抗原とクラミジア・トラコマティス抗体の複合
体を得る。次に、この抗原／抗体複合体に、検体試料に
由来する抗体に対する標識抗体、好ましくは酵素標識抗
ヒトＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ抗体と接触させ、反応
させる。その後、未反応の標識抗体を除去し、結合した
標識抗体上の標識物質量を測定することによって、検体
試料中に存在するＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ性のクラ
ミジア・トラコマティス抗体を測定する。
を施したクラミジア・トラコマティスに対する抗体を含
有している疑いのある検体試料と接触させ、一定時間保
温し、反応させた後、未反応の検体試料成分を除去し
て、担体上にクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリ
ペプチド抗原とクラミジア・トラコマティス抗体の複合
体を得る。次に、この抗原／抗体複合体に、検体試料に
由来する抗体に対する標識抗体、好ましくは酵素標識抗
ヒトＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ抗体と接触させ、反応
させる。その後、未反応の標識抗体を除去し、結合した
標識抗体上の標識物質量を測定することによって、検体
試料中に存在するＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ性のクラ
ミジア・トラコマティス抗体を測定する。
【００２１】標識物質は放射性同位元素、蛍光色素など
でもよく、酵素に限定されるものではない。また、標識
酵素としてはマレートデヒドロゲナーゼ（酵素番号１．
１．１．３７）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素
（同１．１．１．４９）、グルコースオキシダーゼ（同
１．１．３．４）、西洋ワサビパーオキシダーゼ（同
１．１１．１．７）、アセチルコリンエステラーゼ（同
３．１．１．７）、アルカリフォスファターゼ（同３．
１．３．１）、グルコアミラーゼ（同３．２．１．
３）、リゾチーム（同３．２．１．１７）、β−ガラク
トシダーゼ（同３．２．１．２３）などを用いることが
できるが、好ましくはアルカリフォスファターゼまたは
西洋ワサビパーオキシダーゼを用いる。なお、標識物質
の定量は、標識物質の種類に応じて選択される常法に従
って行うことができる。
でもよく、酵素に限定されるものではない。また、標識
酵素としてはマレートデヒドロゲナーゼ（酵素番号１．
１．１．３７）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素
（同１．１．１．４９）、グルコースオキシダーゼ（同
１．１．３．４）、西洋ワサビパーオキシダーゼ（同
１．１１．１．７）、アセチルコリンエステラーゼ（同
３．１．１．７）、アルカリフォスファターゼ（同３．
１．３．１）、グルコアミラーゼ（同３．２．１．
３）、リゾチーム（同３．２．１．１７）、β−ガラク
トシダーゼ（同３．２．１．２３）などを用いることが
できるが、好ましくはアルカリフォスファターゼまたは
西洋ワサビパーオキシダーゼを用いる。なお、標識物質
の定量は、標識物質の種類に応じて選択される常法に従
って行うことができる。
【００２２】このようにして測定された検体試料中のク
ラミジア・トラコマティス抗体価は、クラミジア・トラ
コマティス感染症の臨床像をよく反映することが明らか
になっている。即ち、クラミジア・トラコマティスによ
る体表面への感染によりＩｇＭ抗体は感染後１〜２週間
で出現し、ＩｇＧ抗体も比較的早期に認められ時間とと
もに減少するが長時間持続すると考えられている。一
方、分泌型のＩｇＡ抗体は細胞性免疫と同様に再感染防
禦に役立っていると考えられている。クラミジア・トラ
コマティスのヒト性器感染に関しては、特に女性の場
合、血清中と子宮頚管内膜分泌物中にＩｇＧ、ＩｇＡ、
ＩｇＭ抗体が検出され、ＩｇＡ抗体量は病原体クラミジ
ア・トラコマティスの減少と逆比例の関係にあり病原体
の排出拡散を規制していることが知られている（Ｂｒｕ
ｎｈａｍら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、３９、１４
９１−１４９４、１９８３）。
ラミジア・トラコマティス抗体価は、クラミジア・トラ
コマティス感染症の臨床像をよく反映することが明らか
になっている。即ち、クラミジア・トラコマティスによ
る体表面への感染によりＩｇＭ抗体は感染後１〜２週間
で出現し、ＩｇＧ抗体も比較的早期に認められ時間とと
もに減少するが長時間持続すると考えられている。一
方、分泌型のＩｇＡ抗体は細胞性免疫と同様に再感染防
禦に役立っていると考えられている。クラミジア・トラ
コマティスのヒト性器感染に関しては、特に女性の場
合、血清中と子宮頚管内膜分泌物中にＩｇＧ、ＩｇＡ、
ＩｇＭ抗体が検出され、ＩｇＡ抗体量は病原体クラミジ
ア・トラコマティスの減少と逆比例の関係にあり病原体
の排出拡散を規制していることが知られている（Ｂｒｕ
ｎｈａｍら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、３９、１４
９１−１４９４、１９８３）。
【００２３】
【実施例】以下の実施例により、本発明に使用するクラ
ミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物の
単離、固相担体への固定化及びクラミジア・トラコマテ
ィス抗体の測定方法についてより詳細に記述するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
ミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物の
単離、固相担体への固定化及びクラミジア・トラコマテ
ィス抗体の測定方法についてより詳細に記述するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】Ａ）クラミジア・トラコマティス基本小体
（ＥＢ）の精製 クラミジア・トラコマティス菌株はＬ２／４３４／Ｂｕ
ｂｏを用いた。上記菌株を１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）
添加イーグル（Ｅａｇｌｅ）ＭＥＭ培地中で増殖したマ
ッコイ（ＭａＣｏｙ）細胞に接種した。クラミジア・ト
ラコマティスの接種には培養３日の細胞を用い、１５０
×ｇ、５分間遠心分離で収集しハンクス（Ｈａｎｋ’
ｓ）ＢＳＳで３回遠心洗浄した。吸着は宿主細胞あたり
１０個のクラミジア・トラコマティスを反応させ、宿主
細胞濃度１０7／ｍｌで３７℃、２時間温水中で振とう
しつつ行った。吸着後ＦＢＳ添加培地に細胞濃度が５〜
７×１０5／ｍｌになるように再浮遊させ３７℃で２日
間培養した。培養後、その一部を採取し遠心により感染
細胞を集め塗抹標本を作成し、ギムザ（Ｇｉｅｍｓａ）
染色によりＥＢが十分に増殖していることを確認した。
（ＥＢ）の精製 クラミジア・トラコマティス菌株はＬ２／４３４／Ｂｕ
ｂｏを用いた。上記菌株を１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）
添加イーグル（Ｅａｇｌｅ）ＭＥＭ培地中で増殖したマ
ッコイ（ＭａＣｏｙ）細胞に接種した。クラミジア・ト
ラコマティスの接種には培養３日の細胞を用い、１５０
×ｇ、５分間遠心分離で収集しハンクス（Ｈａｎｋ’
ｓ）ＢＳＳで３回遠心洗浄した。吸着は宿主細胞あたり
１０個のクラミジア・トラコマティスを反応させ、宿主
細胞濃度１０7／ｍｌで３７℃、２時間温水中で振とう
しつつ行った。吸着後ＦＢＳ添加培地に細胞濃度が５〜
７×１０5／ｍｌになるように再浮遊させ３７℃で２日
間培養した。培養後、その一部を採取し遠心により感染
細胞を集め塗抹標本を作成し、ギムザ（Ｇｉｅｍｓａ）
染色によりＥＢが十分に増殖していることを確認した。
【００２５】上記感染培養細胞懸濁液を超音波破砕機
（（株）日本精機製作所ＵＳ−３００）で２０ＫＨｚ、
６０秒間超音波破砕した後、２０℃、２０分間遠心し感
染培養上清を得た。この上清液５容を３０％ショ糖（ｗ
／ｖ）を含む０．０３３Ｍトリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ
緩衝液（ｐＨ７．２）１容に重層し、１０，０００×
ｇ、４℃、６０分間遠心した。この遠心沈渣に０．１４
Ｍ食塩を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＢ
Ｓ）（ｐＨ７．２）を加えて懸濁し、この懸濁液を３５
％ウログラフイン（ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ｍｅｇｌ
ｕｍｉｎｅ ａｎｄｔｒｉｚａｔｅｓｏｄｉｕｍ）及び
０．１５Ｍ食塩を含む０．０１ＭＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−Ｎ’
−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）溶液
に重層し、４３，０００×ｇ、４℃、６０分間遠心した
（日立工機（株）分離用超遠心機７０Ｐ−７２、スイン
グロータＳＰＲ２８ＳＡ）。沈渣を０．２５Ｍショ糖及
び５ｍＭグルタミン酸を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ＳＰＧ、ｐＨ７．２）に懸濁し、ウログラフ
ィン不連続密度勾配（４０％／４４％／５２％）に重層
し、４３，０００×ｇ、４℃、６０分間遠心した。４４
％と５２％ウログラフィンの界面に生じるＥＢの沈降帯
を回収し、ＳＰＧで希釈し、３０，０００×ｇ、４℃、
３０分間の遠心を繰り返すことにより残留するウログラ
フィンを除去して精製ＥＢとした。
（（株）日本精機製作所ＵＳ−３００）で２０ＫＨｚ、
６０秒間超音波破砕した後、２０℃、２０分間遠心し感
染培養上清を得た。この上清液５容を３０％ショ糖（ｗ
／ｖ）を含む０．０３３Ｍトリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ
緩衝液（ｐＨ７．２）１容に重層し、１０，０００×
ｇ、４℃、６０分間遠心した。この遠心沈渣に０．１４
Ｍ食塩を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＢ
Ｓ）（ｐＨ７．２）を加えて懸濁し、この懸濁液を３５
％ウログラフイン（ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ｍｅｇｌ
ｕｍｉｎｅ ａｎｄｔｒｉｚａｔｅｓｏｄｉｕｍ）及び
０．１５Ｍ食塩を含む０．０１ＭＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−Ｎ’
−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）溶液
に重層し、４３，０００×ｇ、４℃、６０分間遠心した
（日立工機（株）分離用超遠心機７０Ｐ−７２、スイン
グロータＳＰＲ２８ＳＡ）。沈渣を０．２５Ｍショ糖及
び５ｍＭグルタミン酸を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ＳＰＧ、ｐＨ７．２）に懸濁し、ウログラフ
ィン不連続密度勾配（４０％／４４％／５２％）に重層
し、４３，０００×ｇ、４℃、６０分間遠心した。４４
％と５２％ウログラフィンの界面に生じるＥＢの沈降帯
を回収し、ＳＰＧで希釈し、３０，０００×ｇ、４℃、
３０分間の遠心を繰り返すことにより残留するウログラ
フィンを除去して精製ＥＢとした。
【００２６】Ｂ）クラミジア・トラコマティス外膜構成
ポリペプチド抗原の精製 精製クラミジア・トラコマティスＬ２株ＥＢを２％サル
コシル（Ｓａｒｃｏｓｙｌ；Ｎ−ｌａｕｒｏｙｌｓａｒ
ｃｏｓｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ）、１．５ｍＭ
ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ ｔｅｔ
ｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）及び０．１４Ｍ食塩を含む
０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（サルコシル緩衝
液、ｐＨ８．０）に懸濁し、２０ＫＨｚ、６０秒間超音
波処理し、３７℃で１時間反応後、１００，０００×
ｇ、２０℃で６０分間遠心した。遠心後沈渣を再度少量
の上記サルコシル緩衝液に懸濁し、１００，０００×
ｇ、２０℃で６０分間遠心した。沈渣中の過剰のサルコ
シルを除くため、ＰＢＳ（ｐＨ８．０）で２回洗浄し
た。次に、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅを各々２．５μｇ／
ｍｌに溶解した１０ｍＭ ＭｇＣｌ2を含む０．０２Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に上記沈渣を懸
濁し３７℃で２時間反応後、１００，０００×ｇ、４℃
で６０分間遠心した。沈渣中に残存するＤＮａｓｅ、Ｒ
Ｎａｓｅを除くためＰＢＳ（ｐＨ８．０）で２回洗浄
し、サルコシル不溶性クラミジア・トラコマティス外膜
構成ポリペプチド（クラミジア・トラコマティス外膜複
合体）を得た。
ポリペプチド抗原の精製 精製クラミジア・トラコマティスＬ２株ＥＢを２％サル
コシル（Ｓａｒｃｏｓｙｌ；Ｎ−ｌａｕｒｏｙｌｓａｒ
ｃｏｓｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ）、１．５ｍＭ
ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ ｔｅｔ
ｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）及び０．１４Ｍ食塩を含む
０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（サルコシル緩衝
液、ｐＨ８．０）に懸濁し、２０ＫＨｚ、６０秒間超音
波処理し、３７℃で１時間反応後、１００，０００×
ｇ、２０℃で６０分間遠心した。遠心後沈渣を再度少量
の上記サルコシル緩衝液に懸濁し、１００，０００×
ｇ、２０℃で６０分間遠心した。沈渣中の過剰のサルコ
シルを除くため、ＰＢＳ（ｐＨ８．０）で２回洗浄し
た。次に、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅを各々２．５μｇ／
ｍｌに溶解した１０ｍＭ ＭｇＣｌ2を含む０．０２Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に上記沈渣を懸
濁し３７℃で２時間反応後、１００，０００×ｇ、４℃
で６０分間遠心した。沈渣中に残存するＤＮａｓｅ、Ｒ
Ｎａｓｅを除くためＰＢＳ（ｐＨ８．０）で２回洗浄
し、サルコシル不溶性クラミジア・トラコマティス外膜
構成ポリペプチド（クラミジア・トラコマティス外膜複
合体）を得た。
【００２７】このクラミジア・トラコマティス外膜複合
体を可溶化するために、２％ＳＤＳ、１０ｍＭ ＤＴＴ
（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）を含む０．０１Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．４）に懸濁し、３７
℃，１時間反応した。次に１００，０００×ｇ、２０
℃、６０分間遠心後上清を０．１％ＳＤＳ、１ｍＭ Ｄ
ＴＴを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．４）に対して１晩透析し、ＳＤＳ可溶化クラミジア
・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物を調製し
た。図１は得られたクラミジア・トラコマティス外膜構
成ポリペプチド混合物のＳＤＳポリアクリルアミドゲル
電気泳動の図である。
体を可溶化するために、２％ＳＤＳ、１０ｍＭ ＤＴＴ
（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）を含む０．０１Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．４）に懸濁し、３７
℃，１時間反応した。次に１００，０００×ｇ、２０
℃、６０分間遠心後上清を０．１％ＳＤＳ、１ｍＭ Ｄ
ＴＴを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．４）に対して１晩透析し、ＳＤＳ可溶化クラミジア
・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物を調製し
た。図１は得られたクラミジア・トラコマティス外膜構
成ポリペプチド混合物のＳＤＳポリアクリルアミドゲル
電気泳動の図である。
【００２８】この図から明らかなように、以上のような
調製方法により得られたクラミジア・トラコマティス外
膜構成ポリペプチド混合物は、１５５Ｋダルトンペプチ
ド（Ｒｆ値０．１２）、１０２Ｋダルトンペプチド（Ｒ
ｆ値０．１８）、７９Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．
２６）、７５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．２７）、
５９．５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．３３）、４
９．５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．３８）、４２Ｋ
ダルトンペプチド（Ｒｆ値０．４３）、３９．５Ｋダル
トンペプチド（Ｒｆ値０．４９）、３１Ｋダルトンペプ
チド（Ｒｆ値０．６７）、１２．５Ｋダルトンペプチド
（Ｒｆ値０．９９）が含有されるものである。
調製方法により得られたクラミジア・トラコマティス外
膜構成ポリペプチド混合物は、１５５Ｋダルトンペプチ
ド（Ｒｆ値０．１２）、１０２Ｋダルトンペプチド（Ｒ
ｆ値０．１８）、７９Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．
２６）、７５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．２７）、
５９．５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．３３）、４
９．５Ｋダルトンペプチド（Ｒｆ値０．３８）、４２Ｋ
ダルトンペプチド（Ｒｆ値０．４３）、３９．５Ｋダル
トンペプチド（Ｒｆ値０．４９）、３１Ｋダルトンペプ
チド（Ｒｆ値０．６７）、１２．５Ｋダルトンペプチド
（Ｒｆ値０．９９）が含有されるものである。
【００２９】なお、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気
泳動は次の方法で行った。Ｌａｅｍｍｌｉ（Ｌａｅｍｍ
ｌｉ、Ｕ．Ｋ．Ｎａｔｕｒｅ、２２７、６８０〜６８
５、１９７０）の方法に準じ、１２．０％アクリルアミ
ドゲル（架橋度０．８）中で泳動した。泳動条件は、濃
縮泳動時１５ｍＡ、分離泳動時２０ｍＡである。泳動試
料は、予め還元剤として、２−メルカプトエタノールを
２５％含む試料用緩衝液〔３１２．５ｍＭ トリス−塩
酸、ｐＨ６．８、０．１％ＢＰＢ（ブロムフェノールブ
ルー）、１０％ＳＤＳ、２０％グリセリン〕を０．２５
体積加え５０℃、３０分間処理した。泳動後、０．０５
％Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｒ−２５０で室温で１晩染色
し、０．７％酢酸で脱色した。なお、分子量は、同じ条
件で泳動した分子量マーカー蛋白質の易動度より推定し
た（マーカー；ウサギ筋フォスフォリラーゼ９７．４Ｋ
Ｄａ、牛血清アルブミン６６．２ＫＤａ、卵白アルブミ
ン４２．７ＫＤａ、牛炭酸脱水酵素３１ＫＤａ、大豆ト
リプシンインヒビター２１．５ＫＤａ及び卵白リゾチー
ム１４．４ＫＤａ）。
泳動は次の方法で行った。Ｌａｅｍｍｌｉ（Ｌａｅｍｍ
ｌｉ、Ｕ．Ｋ．Ｎａｔｕｒｅ、２２７、６８０〜６８
５、１９７０）の方法に準じ、１２．０％アクリルアミ
ドゲル（架橋度０．８）中で泳動した。泳動条件は、濃
縮泳動時１５ｍＡ、分離泳動時２０ｍＡである。泳動試
料は、予め還元剤として、２−メルカプトエタノールを
２５％含む試料用緩衝液〔３１２．５ｍＭ トリス−塩
酸、ｐＨ６．８、０．１％ＢＰＢ（ブロムフェノールブ
ルー）、１０％ＳＤＳ、２０％グリセリン〕を０．２５
体積加え５０℃、３０分間処理した。泳動後、０．０５
％Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｒ−２５０で室温で１晩染色
し、０．７％酢酸で脱色した。なお、分子量は、同じ条
件で泳動した分子量マーカー蛋白質の易動度より推定し
た（マーカー；ウサギ筋フォスフォリラーゼ９７．４Ｋ
Ｄａ、牛血清アルブミン６６．２ＫＤａ、卵白アルブミ
ン４２．７ＫＤａ、牛炭酸脱水酵素３１ＫＤａ、大豆ト
リプシンインヒビター２１．５ＫＤａ及び卵白リゾチー
ム１４．４ＫＤａ）。
【００３０】Ｃ）クラミジア・トラコマティス抗体測定
方法 前記の方法により得られたＳＤＳ可溶化クラミジア・ト
ラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物を抗原として
担体固定用緩衝液（１ｌ中にＮａＨＣＯ3、Ｎａ2ＣＯ2
各々２．９３ｇ、１．５９ｇを含む）で０．５μｇ／ｍ
ｌに調製し９６穴ポリスチレンマイクロタイタープレー
トの各ウェルに１００μｌずつ分注し４℃で１晩反応し
た。０．０５％トウエーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を含むＰ
ＢＳ（ｐＨ７．２）（０．０５％トウエーン２０−ＰＢ
Ｓ）３００μｌで３回洗浄し未吸着抗原を除去した。次
に５％ＢＳＡを含むブロッキング緩衝液（ＫＰＬ社製）
（ブロッキング／検体希釈用緩衝液）２５０μｌを各ウ
ェルに加え３７℃、１時間反応し、０．０５％トウエー
ン２０−ＰＢＳ ３００μｌで２回洗浄して抗原固定化
プレートを作成した。
方法 前記の方法により得られたＳＤＳ可溶化クラミジア・ト
ラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物を抗原として
担体固定用緩衝液（１ｌ中にＮａＨＣＯ3、Ｎａ2ＣＯ2
各々２．９３ｇ、１．５９ｇを含む）で０．５μｇ／ｍ
ｌに調製し９６穴ポリスチレンマイクロタイタープレー
トの各ウェルに１００μｌずつ分注し４℃で１晩反応し
た。０．０５％トウエーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を含むＰ
ＢＳ（ｐＨ７．２）（０．０５％トウエーン２０−ＰＢ
Ｓ）３００μｌで３回洗浄し未吸着抗原を除去した。次
に５％ＢＳＡを含むブロッキング緩衝液（ＫＰＬ社製）
（ブロッキング／検体希釈用緩衝液）２５０μｌを各ウ
ェルに加え３７℃、１時間反応し、０．０５％トウエー
ン２０−ＰＢＳ ３００μｌで２回洗浄して抗原固定化
プレートを作成した。
【００３１】ブロッキング／検体希釈用緩衝液で希釈し
た希釈検体血清１００μｌを上記抗原固定化プレートに
加えて３７℃、１時間反応後０．０５％トウエーン２０
−ＰＢＳ ３００μｌで３回洗浄した。西洋ワサビパー
オキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を０．０５％
トウエーン２０−ＰＢＳで１μｌ／ｍｌに希釈し各ウェ
ルに１００μｌずつ分注し３７℃で１時間反応後、０．
０５％トウエーン２０−ＰＢＳ ３００μｌで３回洗浄
した。次に、パーオキシダーゼの基質ＡＢＴＳ試薬（Ｋ
ＰＬ社）１００μｌを各ウェルに加え室温で５分間反応
後、２％シュウ酸２５μｌを加えて反応を停止し、マイ
クロタイタープレートリーダー（コロナ電気（株）、Ｍ
ＴＰ−２２形）で吸光度（λ1：４１５ｎｍ、λ2：４９
２ｎｍ）を測定した。
た希釈検体血清１００μｌを上記抗原固定化プレートに
加えて３７℃、１時間反応後０．０５％トウエーン２０
−ＰＢＳ ３００μｌで３回洗浄した。西洋ワサビパー
オキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を０．０５％
トウエーン２０−ＰＢＳで１μｌ／ｍｌに希釈し各ウェ
ルに１００μｌずつ分注し３７℃で１時間反応後、０．
０５％トウエーン２０−ＰＢＳ ３００μｌで３回洗浄
した。次に、パーオキシダーゼの基質ＡＢＴＳ試薬（Ｋ
ＰＬ社）１００μｌを各ウェルに加え室温で５分間反応
後、２％シュウ酸２５μｌを加えて反応を停止し、マイ
クロタイタープレートリーダー（コロナ電気（株）、Ｍ
ＴＰ−２２形）で吸光度（λ1：４１５ｎｍ、λ2：４９
２ｎｍ）を測定した。
【００３２】Ｄ）ヒト患者血清に対する感度及び特異性
（クラミジア・トラコマティスＩｇＧ抗体の測定）、ク
ラミジア・トラコマティス菌分離が確認されているクラ
ミジア・トラコマティス感染患者血清２０検体（抗原陽
性）、クラミジア・トラコマティス抗体陽性者血清９検
体（抗原陰性）、及び正常ヒト血清２３検体を用いて
Ｃ）に記載の測定方法（ＥＬＩＳＡ法）に従って感度及
び特異性試験を行った。対照試験法としてマイクロ−Ｉ
Ｆ法を行った。ヒト血清は１％ＢＳＡを含む検体希釈用
緩衝液で８０倍に希釈し、クラミジア・トラコマティス
抗体測定用試料液とした。測定結果を図２に示す。な
お、ＥＬＩＳＡ法は４１５ｎｍの吸光度で、マイクロ−
ＩＦ法は血清希釈倍数（力価）で示した。
（クラミジア・トラコマティスＩｇＧ抗体の測定）、ク
ラミジア・トラコマティス菌分離が確認されているクラ
ミジア・トラコマティス感染患者血清２０検体（抗原陽
性）、クラミジア・トラコマティス抗体陽性者血清９検
体（抗原陰性）、及び正常ヒト血清２３検体を用いて
Ｃ）に記載の測定方法（ＥＬＩＳＡ法）に従って感度及
び特異性試験を行った。対照試験法としてマイクロ−Ｉ
Ｆ法を行った。ヒト血清は１％ＢＳＡを含む検体希釈用
緩衝液で８０倍に希釈し、クラミジア・トラコマティス
抗体測定用試料液とした。測定結果を図２に示す。な
お、ＥＬＩＳＡ法は４１５ｎｍの吸光度で、マイクロ−
ＩＦ法は血清希釈倍数（力価）で示した。
【００３３】また本発明の効果をより一層に明らかにす
るために、クラミジア・トラコマティス抗体測定のため
に対照抗原として精製クラミジア・トラコマティスＬ２
株ＥＢ（精製ＥＢ）と精製クラミジア・トラコマティス
主要外膜ペプチド（精製ＭＯＭＰ）を用い、本発明で用
いたクラミジア・トラコマティス外膜複合体抗原と感度
及び特異性を比較した。結果を表１に示す。精製ＥＢの
調製法は既述の通りである。また、精製ＭＯＭＰは、カ
ルドウェル（Ｃａｌｄｗｅｌｌ）Ｈ、Ｄらの方法（特開
昭５７−１５８７２５号公報）に従って調製した部分精
製ＭＯＭＰ画分をさらに調製用ＳＤＳポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法により免疫学的に均一な状態にした標
品を用いた。尚、各試験のカットオフ値は正常ヒト血清
２３検体の吸光度の平均値に標準偏差を２倍したものを
加えた値とした。
るために、クラミジア・トラコマティス抗体測定のため
に対照抗原として精製クラミジア・トラコマティスＬ２
株ＥＢ（精製ＥＢ）と精製クラミジア・トラコマティス
主要外膜ペプチド（精製ＭＯＭＰ）を用い、本発明で用
いたクラミジア・トラコマティス外膜複合体抗原と感度
及び特異性を比較した。結果を表１に示す。精製ＥＢの
調製法は既述の通りである。また、精製ＭＯＭＰは、カ
ルドウェル（Ｃａｌｄｗｅｌｌ）Ｈ、Ｄらの方法（特開
昭５７−１５８７２５号公報）に従って調製した部分精
製ＭＯＭＰ画分をさらに調製用ＳＤＳポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法により免疫学的に均一な状態にした標
品を用いた。尚、各試験のカットオフ値は正常ヒト血清
２３検体の吸光度の平均値に標準偏差を２倍したものを
加えた値とした。
【００３４】図２の結果は、本発明による測定法によっ
て得られた結果が、従来のマイクロ−ＩＦ法との相関が
極めて良好であることを示している。また、表１の結果
はクラミジア・トラコマティス外膜複合体抗原を用いた
本発明の方法が対照抗原として試験した精製ＥＢや精製
ＭＯＭＰに比して、マイクロ−ＩＦ法との一致率が非常
に優れていることを示している。即ち、凝陽性（ｆａｌ
ｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）は非常に低く、特に、臨床上
問題になる凝陰性（ｆａｌｓｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ）が
なく臨床的有用性が高いことを示している。
て得られた結果が、従来のマイクロ−ＩＦ法との相関が
極めて良好であることを示している。また、表１の結果
はクラミジア・トラコマティス外膜複合体抗原を用いた
本発明の方法が対照抗原として試験した精製ＥＢや精製
ＭＯＭＰに比して、マイクロ−ＩＦ法との一致率が非常
に優れていることを示している。即ち、凝陽性（ｆａｌ
ｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）は非常に低く、特に、臨床上
問題になる凝陰性（ｆａｌｓｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ）が
なく臨床的有用性が高いことを示している。
【００３５】
【表１】
【００３６】Ｅ）クラミジア・ニューモニエ抗体及びク
ラミジア・シタシ抗体との交叉反応性の検討 クラミジア・トラコマティス抗体陽性者血清７検体、ク
ラミジア・ニューモニエ抗体陽性者血清１７検体及びク
ラミジア・シタシ抗体陽性者血清２検体を用いてＣ）に
記載の測定方法（ＥＬＩＳＡ法）に従って交叉反応性試
験を行った。対照試験法としてＭＦＡ法（ｍｉｃｒｏｐ
ｌａｔｅ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を行った。ヒト
血清は１％ＢＳＡを含む検体希釈用緩衝液でＩｇＧ抗体
測定の場合には１００倍、ＩｇＡ抗体測定の場合には２
０倍に希釈し、クラミジア・トラコマティス抗体測定用
試料液とした。測定結果を表２に示す。なお、ＥＬＩＳ
Ａ法は４１５ｎｍの吸光度で、またＭＦＡ法はクラミジ
ア・ニューモニエＴＷ株、クラミジア・シタシＭＰ株及
びクラミジア・トラコマティスＬ２株に対する血清希釈
倍数（力価）で示した。
ラミジア・シタシ抗体との交叉反応性の検討 クラミジア・トラコマティス抗体陽性者血清７検体、ク
ラミジア・ニューモニエ抗体陽性者血清１７検体及びク
ラミジア・シタシ抗体陽性者血清２検体を用いてＣ）に
記載の測定方法（ＥＬＩＳＡ法）に従って交叉反応性試
験を行った。対照試験法としてＭＦＡ法（ｍｉｃｒｏｐ
ｌａｔｅ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を行った。ヒト
血清は１％ＢＳＡを含む検体希釈用緩衝液でＩｇＧ抗体
測定の場合には１００倍、ＩｇＡ抗体測定の場合には２
０倍に希釈し、クラミジア・トラコマティス抗体測定用
試料液とした。測定結果を表２に示す。なお、ＥＬＩＳ
Ａ法は４１５ｎｍの吸光度で、またＭＦＡ法はクラミジ
ア・ニューモニエＴＷ株、クラミジア・シタシＭＰ株及
びクラミジア・トラコマティスＬ２株に対する血清希釈
倍数（力価）で示した。
【００３７】表２は、本発明の測定方法の結果が、従来
のＭＦＡ法の結果と極めて高い一致率であることを示し
ている。即ちクラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミ
ジア・シタシ抗体とほとんど交叉反応していないことを
示している。なお、各試験のカットオフ値はＩｇＧ抗体
測定の場合０．１５、ＩｇＡ抗体測定の場合０．２０と
し、それ以上を陽性と判定する。
のＭＦＡ法の結果と極めて高い一致率であることを示し
ている。即ちクラミジア・ニューモニエ抗体及びクラミ
ジア・シタシ抗体とほとんど交叉反応していないことを
示している。なお、各試験のカットオフ値はＩｇＧ抗体
測定の場合０．１５、ＩｇＡ抗体測定の場合０．２０と
し、それ以上を陽性と判定する。
【００３８】
【表２】
【００３９】
【発明の効果】以上から明らかなように、本発明のクラ
ミジア・トラコマティス抗体測定方法によれば、精製Ｅ
Ｂや精製ＭＯＭＰを用いる測定方法に比較して、臨床上
問題となる凝陰性がなく、凝陽性が非常に低くかつクラ
ミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・シタシ抗体
との非特異的反応のほとんどない、種特異性の高い測定
を行うことができ、臨床的有用性が高いものである。
ミジア・トラコマティス抗体測定方法によれば、精製Ｅ
Ｂや精製ＭＯＭＰを用いる測定方法に比較して、臨床上
問題となる凝陰性がなく、凝陽性が非常に低くかつクラ
ミジア・ニューモニエ抗体及びクラミジア・シタシ抗体
との非特異的反応のほとんどない、種特異性の高い測定
を行うことができ、臨床的有用性が高いものである。
【図１】クラミジア・トラコマティス外膜複合体のＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（１２．５％アク
リルアミドスラブゲルの様子）を示すパターン図であ
る。
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（１２．５％アク
リルアミドスラブゲルの様子）を示すパターン図であ
る。
【図２】クラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプ
チド混合物を抗原として用いた酵素免疫測定法（ＥＬＩ
ＳＡ）とマイクロ−ＩＦ法との相関関係を示すグラフで
ある。
チド混合物を抗原として用いた酵素免疫測定法（ＥＬＩ
ＳＡ）とマイクロ−ＩＦ法との相関関係を示すグラフで
ある。
１ …泳動開始点 ２ …泳動先端（マーカー色素ＢＰＢ） ３ …１５５Ｋダルトンペプチド ４ …１０２Ｋダルトンペプチド ５ …７９Ｋダルトンペプチド ６ …７５Ｋダルトンペプチド ７ …５９．５Ｋダルトンペプチド ８ …４９．５Ｋダルトンペプチド ９ …４２Ｋダルトンペプチド １０…３９．５Ｋダルトンペプチド １１…３１Ｋダルトンペプチド １２…１２．５Ｋダルトンペプチド
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭55−134357（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−158725（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−1559（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−2558（ＪＰ，Ａ) 特公 昭45−5559（ＪＰ，Ｂ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/569,33/53,33/535
Claims (21)
- 【請求項１】 少なくとも約７５Ｋダルトン、約５９．
５Ｋダルトン及び約３９．５Ｋダルトンの分子量をもつ
クラミジア・トラコマティス外膜複合体又はクラミジア
・トラコマティス外膜構成ポリペプチド混合物を抗原と
して用いることを特徴とする特異性の高いクラミジア・
トラコマティス抗体測定方法。 - 【請求項２】 クラミジア・ニューモニエ抗体及びクラ
ミジア・シタシ抗体との非特異的反応性が低い請求項１
記載のクラミジア・トラコマティス抗体測定方法。 - 【請求項３】 クラミジア・トラコマティス外膜複合体
が、クラミジア・トラコマティス基本小体を温和なイオ
ン性界面活性剤によって抽出した残渣成分から得られる
ものである請求項１又は２記載のクラミジア・トラコマ
ティス抗体測定方法。 - 【請求項４】 温和なイオン性界面活性剤がサルコシル
である請求項３記載のクラミジア・トラコマティス抗体
測定方法。 - 【請求項５】 クラミジア・トラコマティス外膜構成ポ
リペプチド混合物が、温和なイオン性界面活性剤によっ
て抽出した残渣成分を、該イオン性界面活性剤よりも強
力な他のイオン性界面活性剤により可溶化して得られる
ものである請求項１記載のクラミジア・トラコマティス
抗体測定方法。 - 【請求項６】 クラミジア・トラコマティス外膜構成ポ
リペプチド混合物が、温和なイオン性界面活性剤によっ
て抽出した残渣成分を、核酸分解酵素で処理し、次いで
該イオン性界面活性剤よりも強力な他のイオン性界面活
性剤により可溶化して得られるものである請求項１記載
のクラミジア・トラコマティス抗体測定方法。 - 【請求項７】 強力な他のイオン性界面活性剤がドデシ
ル硫酸ナトリウムである請求項５または６記載のクラミ
ジア・トラコマティス抗体測定方法。 - 【請求項８】 クラミジア・トラコマティス外膜複合体
又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチド
混合物が、約１５５Ｋダルトン、約１０２Ｋダルトン、
約７９Ｋダルトン、約７５Ｋダルトン、約５９．５Ｋダ
ルトン、約４９．５Ｋダルトン、約４２Ｋダルトン、約
３９．５Ｋダルトン、約３１Ｋダルトン及び１２．５Ｋ
ダルトンの分子量をもつポリペプチドからなる群から選
択される少なくとも２種以上のクラミジア・トラコマテ
ィス外膜構成ポリペプチドを含有することを特徴とする
請求項１〜７のいずれかに記載のクラミジア・トラコマ
ティス抗体測定方法。 - 【請求項９】 （ａ）請求項１記載の少なくとも約７５
Ｋダルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５Ｋダ
ルトンの分子量をもつクラミジア・トラコマティス外膜
複合体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペ
プチド混合物を固相担体に固定化し、 （ｂ）固定されたクラミジア・トラコマティス外膜複合
体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチ
ド混合物を有する該固相担体をクラミジア・トラコマテ
ィスに対する抗体を含有している疑いのある検体試料と
接触させ、 （ｃ）未反応の該検体試料成分を除去し、 （ｄ）生成したクラミジア・トラコマティス外膜構成ポ
リペプチド抗原とクラミジア・トラコマティス抗体から
なる抗原抗体複合体を該検体試料に由来する抗体に対す
る標識抗体と接触させ、 （ｅ）未反応の該標識抗体を除去し、 （ｆ）結合した該標識抗体上の標識物質量を測定するこ
とによって検体試料中のクラミジア・トラコマティス抗
体の存在又は量を測定する各段階を含むことを特徴とす
る特異性の高いクラミジア・トラコマティス抗体測定方
法。 - 【請求項１０】 クラミジア・トラコマティス外膜複合
体がクラミジア・トラコマティス基本小体を温和なイオ
ン性界面活性剤によって抽出した残渣成分から得られる
ものである請求項９記載のクラミジア・トラコマティス
抗体測定方法。 - 【請求項１１】 検体試料がヒト涙、ヒト子宮頚管内膜
分泌物、ヒト精液及びヒト血清のいずれかである請求項
９又は１０記載のクラミジア・トラコマティス抗体測定
方法。 - 【請求項１２】 標識抗体が抗ヒトＩｇＧ、ＩｇＡまた
はＩｇＭ抗体である請求項９〜１１のいずれか１項に記
載のクラミジア・トラコマティス抗体測定方法。 - 【請求項１３】 標識抗体が酵素標識抗体である請求項
９〜１２のいずれか１項に記載のクラミジア・トラコマ
ティス抗体測定方法。 - 【請求項１４】 酵素標識抗体がアルカリフォスファタ
ーゼまたは西洋ワサビパーオキシダーゼ標識抗体である
請求項１３記載のクラミジア・トラコマティス抗体測定
方法。 - 【請求項１５】 請求項１記載の少なくとも約７５Ｋダ
ルトン、約５９．５Ｋダルトン及び約３９．５Ｋダルト
ンの分子量をもつクラミジア・トラコマティス外膜複合
体又はクラミジア・トラコマティス外膜構成ポリペプチ
ド混合物を固相担体に固定化した固定化抗原を含有して
なる特異性の高いクラミジア・トラコマティス感染症診
断用製剤。 - 【請求項１６】 クラミジア・ニューモニエ抗体及びク
ラミジア・シタシ抗体との非特異的反応の低い請求項１
５記載のクラミジア・トラコマティス感染症診断用製
剤。 - 【請求項１７】 固相担体がプラスチック材料、繊維材
料及び無機材料から選択されるものである請求項１５又
は１６に記載のクラミジア・トラコマティス感染症診断
用製剤。 - 【請求項１８】 固相担体がポリスチレンビーズ又はポ
リスチレンマイクロタイタープレートである請求項１７
記載のクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤。 - 【請求項１９】 請求項１５記載の固定化抗原と、標識
抗体として抗ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＭ抗体とを組
み合わせてなる特異性の高いクラミジア・トラコマティ
ス感染症診断用製剤。 - 【請求項２０】 標識抗体が酵素標識抗体である請求項
１５〜１９のいずれか１項に記載のクラミジア・トラコ
マティス感染症診断用製剤。 - 【請求項２１】 酵素標識抗体がアルカリフォスファタ
ーゼまたは西洋ワサビパーオキシダーゼ標識抗体である
請求項２０記載のクラミジア・トラコマティス感染症診
断用製剤。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11801290 | 1990-05-08 | ||
| JP3-8376 | 1991-01-28 | ||
| JP2-118012 | 1991-01-28 | ||
| JP837691 | 1991-01-28 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19883795A Division JPH0854396A (ja) | 1995-08-03 | 1995-08-03 | クラミジア・トラコマティス抗体測定方法及びクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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ID=26342888
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP0456524B1 (ja) |
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| US6838552B1 (en) * | 1997-08-14 | 2005-01-04 | Vanderbilt University | Diagnosis and management of infection caused by Chlamydia |
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| US6432916B1 (en) | 1998-12-08 | 2002-08-13 | Corixa Corporation | Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection |
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| US20060228350A1 (en) * | 2003-08-18 | 2006-10-12 | Medimmune, Inc. | Framework-shuffling of antibodies |
| AU2006227377B2 (en) | 2005-03-18 | 2013-01-31 | Medimmune, Llc | Framework-shuffling of antibodies |
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|---|---|---|---|---|
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| US4497899A (en) * | 1982-04-12 | 1985-02-05 | Abbott Laboratories | Immunoassay for Chlamydia trachomatis antigens |
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-
1993
- 1993-05-17 US US08/062,699 patent/US5318892A/en not_active Expired - Lifetime
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| JPH04297871A (ja) | 1992-10-21 |
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| EP0456524A1 (en) | 1991-11-13 |
| DE69121290T2 (de) | 1997-01-02 |
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