MXPA02010962A

MXPA02010962A - Uso de derivados de acriloilo distamicina sustituida en el tratamiento de tumores asociados con elevados niveles de glutacion.

Info

Publication number: MXPA02010962A
Application number: MXPA02010962A
Authority: MX
Inventors: Maria Cristina Rosa Geroni
Original assignee: Pharmacia Italia Spa
Priority date: 2000-05-08
Filing date: 2001-04-19
Publication date: 2003-03-27
Also published as: BR0110628A; NO20025303L; TWI284643B; CZ300791B6; WO2001085144A2; EP1280527A2; KR100776184B1; CN1427719A; IL152388A; SK16002002A3; PL365831A1; HK1054193A1; PL201289B1; AU2001260227B2; WO2001085144A3; CN1258362C; ZA200208531B; HK1054193B; EA200201184A1; SK286501B6

Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos los cuales son derivados de a-halogeno acriloilo distamicina de formula (I), (ver formula) en donde R1 es un atomo de bromo o cloro; R2 es una distamicina o una estructura tipo distamicina como se describe en la especificacion; o una sal de la misma farmaceuticamente aceptable; son agentes citotoxicos particularmente efectivos en el tratamiento de tumores que sobre-expresan el sistema GSH/GSTs y los cuales responden deficientemente o aun resistentes a terapias antitumorales convencionales.

Description

USO DE DERIVADOS DE ACRILOILO DISTAMICINA SUSTITUIDA EN EL TRATAMIENTO DE TUMORES ASOCIADOS CON ELEVADOS NIVELES DE GLUTATION Descripción de la Invención La presente invención se refiere al uso de derivados de acriloilo distamicina sustituida, en particular al uso de derivados de a-bromo- y a-cloroacriloilo distamicina, en el tratamiento de tumores asociados con elevados niveles de la familia de transferasas de glutation y/o glutation-S. Más específicamente, la presente invención concierne al tratamiento de un ser humano diagnosticado con un tumor que sobre-expresa familias de tranferasas de g] utation/glutation- S, de aquí en adelante únicamente denominadas GSH/GSTs, con los derivados de acriloilo distamrcina anteriores. La GSH juega un rol de protección crucial en contra del daño celular producido por un número de insultos tóxicos. Los estudios pre-clínicos y clínicos han establecido una correlación entre la sobre expresión de GSH/GSTs y el cáncer o la proporción de respuesta de cáncer a la quimioterapia. Las alteraciones del sistema de desintoxicación basadas en GSH (que consiste de GSH y enzimas relacionadas con GSH, GSTs) REF. 143056 también se han asociado con capacidades de respuesta variantes a distintos agentes antineoplásticos. Tanto la GSH como la GST se encuentran materialmente presentes en varios tejidos humanos tales como por ejemplo, tej'idos (de tumor) patológico, células sanguíneas, plasma, suero y blastos en circulación. Véase, para una referencia general a GSH y GSTs, Cáncer Res . 54: 4313-4320 (1994); Bri t . J. Cáncer 72(2): 324-326 (1995); DDT 3 : 113-121 (1998). Las GSTs, y más prominentemente GST-p, están presentes a elevados niveles en una preponderancia de tipos de tumor. La actividad incrementada de GSH/GSTs en comparación con .tejidos normales, se ha encontrado en varios tejidos de tumores que comprenden, por ejemplo, tumores gastrointestinales (incluyendo esofágico, gástrico, de colon, hepatocelular y pancreático) , cánceres uterinos y ováricos, cáncer de cabeza y cuello, carcinomas de NSCL y pulmón así como también tumores de hígado metastásicos que se originan en el colon, estómago y vejiga [ Cáncer Res . 49:5225-5229 (1989); Clinical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology 27(4.5) :337-386 (1992) ] . Para establecer el rol de GSH/GSTS hacia la inactividad y/o resistencia de células tumorales a fármacos citotóxicos, se han seguido dos enfoques principales experimentales. El primero de ellos involucra estudios en los cuales los elevados niveles o expresión y actividad de GSH/GSTS fueron correlacionados con niveles incrementados de resistencia al fármaco. Este enfoque también incluye modulación de actividad de GSH/GSTS mediante inhibidores de GSH tales como BSO (butionina sulfoximina) , con el fin de evitar o invertir la resistencia al fármaco. El segundo enfoque, utilizado en estudios de transfección, proporcionó evidencia funcional directa de que la GSH/GSTS originaba resistencia al fármaco. Existe la evidencia de que la GSH/GSTs juega un rol principal en la resistencia a agentes alquilantes (por ejemplo, mostazas de ifosfamida, melfalan, clorambucil, ciclofosfamida, BCNU) y complejos de platino tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino [Biochen . Pharmacol 35: 3405-3409 (1986)]. Recientemente, el rol de la GSH en la resistencia a la droga se ha asociado a la regulación de la actividad de las proteínas asociadas a la resistencia del multi-fármaco (MRP) , que confiere resistencia a diferentes citotóxicos incluyendo antraciclinas (por ejemplo, doxorrubicina, idarrubicina, epirrubicina y derivados de las mismas), epidofilotoxinas (p. ej . , etopósido y tenipósido) , vinca alcaloides (por ejemplo, vinblastina y vincristina) y taxanos (por ejemplo, paclitaxel y docetaxel) [Eur. J. Cáncer 32:945-957 (1996); Seminars in Oncol . 24 (5) :580-591, (1997)]. Se ha encontrado ahora que, a diferencia de otros derivados de distamicina citotóxica conocidos, aquellos que llevan una porción de a-bromo- o a-cloroacriloilo, como se describe posteriormente de acuerdo con el objeto de la presente invención, son sorprendentemente efectivos en el tratamiento de tumores que sobre-expresan sistemaos GSH/GSTs, en consecuencia conocidos por responder deficientemente a terapias antitumorales convencionales y/o causar resistencia una vez que los agentes citotóxicos terapéuticos son administrados . La distamicina A y análogos de la misma, después denominados como distamicina y derivados del tipo distamicina, se conocen en el arte como agentes citotóxicos útiles en la terapia antitumoral. La distamicina A es una sustancia antibiótica con actividad antiviral y antiprotozoaria, que posee una estructura polipirrol [Na ture 203: 1064 (1964); J.

Med. Chem. 32:774-778 (1989)]. Las solicitudes de patente internacional WO 90/11277, WO 98/04524, WO 98/21202, WO 99/50265, WO 99/50266 así como también la solicitud de patente Internacional aún no publicada, co-pendiente No, PCT/EP00/11714 (presentada el 23.11.20Q0 y que reivindica la prioridad de la solicitud de patente Británica 9928703.9), todas en el nombre del solicitante mismo e incorporadas a la presente por referencia, describen derivados de acriloilo distamicina donde la porción de amidino de distamicina es opcionalmente reemplazada por grupos terminales que contienen nitrógeno, tales como por ejemplo, cianamidino, N-metilamidino, guanidino, carbamoilo, amidoxima, ciano y similares,- y/o donde la estructura de polipirrol de distamicina, o parte de ésta, es reemplazada por porciones carbocíclicas o heterociclicas variables. Por lo tanto, un primer objeto de la presente invención es el uso de un derivado de a-halógeno acriloilo distamicina de fórmula (I) O donde: Ri es un átomo de bromo o cloro; R2 es una distamicina o estructura del tipo distamicina; o una sal de las mismas farmacéuticamente aceptable; en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de tumores que sobre-expresan sistemas GSH/GSTs. De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, los compuestos anteriores de la fórmula (I) son útiles para tratar tumores que sobre-expresan el sistema GSH/GSTs y que comprenden tumores gastrointestinales, incluyendo tumores esofágicos, gástricos, de colon, hepatocelulares y pancreáticos, cánceres uterinos y ováricos, cáncer de cabeza y cuello, carcinomas de NSCL y pulmón, así como también tumores de hígado metastásicos que se originan a partir de cánceres gastrointestinales, uterinos, ováricos y de pulmón. Una modalidad adicional de la invención, es el uso de compuestos de fórmula (I) en el tratamiento de tumores que sobre-expresan sistemas GSH/GSTs como un resultado de un tratamiento de quimioterapia previo, por ejemplo un tratamiento de quimioterapia de primera línea con agentes alquilantes, derivados de platino o antraciclinas.

Más específicamente, el tratamiento de quimioterapia previo puede comprender agentes alquilantes, por ejemplo mostazas de ifosfamida, melfalán, clorambucil, ciclofosfamida, y BCNU; complejos de platino, por ejemplo, cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; antraciclinas, por ejemplo doxorrubicina, idarrubicina, epirrubicina y derivados de estos, epidofilotoxinas, por ejemplo etopósido y tenípósido; vinca alcaloides, por ejemplo vinblastina y vincristina; taxanos, por ejemplo paclitaxel y docetaxel. La presente invención incluye dentro de su alcance, el uso de todos los isómeros posibles cubiertos por los compuestos de fórmula (I), considerados separadamente o en mezcla, así como también los metabolitos y los bio-precursores farmacéuticamente aceptables (de otra forma conocidos como pro-fármacos) de los compuestos de fórmula (I). Dentro de los compuestos de fórmuJ a (I), a menos que se especifique lo contrario, con el término distamicina o estructura del tipo distamicina R2, se propone cualquier porción estructuralmente, íntimamente relacionada con la distamicina propiamente dicha, por ejemplo reemplazando la porción de amidino final de distamicina y/o su estructura de polipirrol, o parte de ésta.

Una modalidad preferida de la invención, proporciona el uso de los compuestos de fórmula (I), como se indicó anteriormente, en donde Ri tiene los significados informados anteriormente y R2 es un grupo de fórmula (II) posterior: m es un número entero de 0 a 2; n es un número entero de 2 ¡a 5; r es 0 ó 1; X e Y son, los mismos o diferentes e independientemente para cada anillo heterocíclico, un átomo de nitrógeno o un grupo CH; G es fenileno, un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos, con desde 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre N, 0 o S, o es un grupo de fórmula (III) posterior: (lli) donde Q es un átomo de nitrógeno o un grupo CH y W es un átomo de oxígeno o azufre o es un grupo NR3 donde R es hidrógeno o alquilo de C?-C4; B se selecciona del grupo que consiste de —CN -NR5R6 CONR5R6 —NHCONR 5.R,x,6 donde R4 es ciano, amino, hidroxi o alcoxi de C?-C ; R5, Re y R-j, los mismos o diferentes, son hidrógeno o alquilo de C?~C . En la presente descripción, a menos que se especifique lo contrario, con el término grupo alcoxi o alquilo de C?~C4, se propone un grupo recto o ramificado seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi o terc-butoxi. Una modalidad más preferida de la invención, proporciona el uso de los compuestos de fórmula (I. anteriores, donde Ri es bromo o cloro; R2 es el grupo anterior de fórmula (II) donde r es 0, m es 0 ó 1, n es 4 y B tiene los significados expuestos anteriormente. Se prefiere aun más, el uso de los compuestos de fórmula (I) donde Ri es bromo o cloro; R2 es el grupo anterior de fórmula (II) donde r es 0, m es 0 ó 1, n es 4, X e Y son ambos grupos CH y B se selecciona de: CN . —CONR5Re NHCONR5R6 donde en R4 es ciano o hidroxi y R5, R y R7, los mismos o diferentes, son hidrógeno o alquilo de C?~C4. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) son aquellas con ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, acético, propiónico, succínico, malónico, cítrico, tartárico, metansulfónico, p-toluensulfónico y similares. Ejemplos de compuestos preferidos de fórmula (I) en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de tumores que sobre-expresan el sistema GSH/GSTs, opcionalmente en la forma de sales farmacéuticamente aceptables, preferentemente con ácido clorhídrico, son: 1. Clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (5- {[ (2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil }-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-?irrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; 2. Clorhidrato de N- (5- {[ (5-{ [ (5-{ [ (2-{ [amino (imino) metil] amino}propil) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; 3. Clorhidrato de N- (5- { [ (5-{ [ (5-{ [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; 4. Clorhidrato de N- (5-{ [ (5- { [ (5-{ [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil }-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-imidazol-2-carboxamida; 5. Clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (5- { [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil} -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil }-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -3- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirazol-5-carboxamida; 6. N- (5- { [ (5- { [ (5- { [ (3-amino-3-oxopropil) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3-il) -3- [ (2-bromoacriloil) amino] -1-metil-lH-pirazol-5-carboxamida; 7. Clorhidrato de N- (5- { [ (5- { [ (5-{ [ (2-{ [amino (imino)metil] amino} etil) amino] carbonil }-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-cloroacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-ca boxamida; 8. Clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (3-{ [amino (imino) metil] amino} propil) amino] carbonil) -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -1-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; 9. Clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; y 10. N-{5-[({5-[({5-[({3-[ (aminocarbonil) amino] propil } amino) carbonil] -l-metil-lH-pirrol-3-il}amino) carbonil] -1-metil-lH- pirrol-3-il} amino) carbonil] -l-metil-lH-pirrol-3-il}-4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamia . Los compuestos anteriores de fórmula (I), ya sea específicamente identificados como tales o mediante la fórmula general, se conocen o preparan fácilmente de acuerdo con métodos conocidos según lo expuesto, por ejemplo, en las solicitudes de patente internacional anteriormente mencionadas WO 90/11277, WO 98/04524, WO 98/212027 WO 99/50265 y WO 99/50266 así como también en la solicitud de patente Internacional co-pendiente No. PCT/EP00/11714.

Farmacología _ __ Los compuestos de fórmula (I) , de acuerdo con la presente invención, son altamente efectivos en el tratamiento de tumores asociados con elevados niveles de GSH/GSTs y encuentran aplicación en el tratamiento de varios tumores que obtienen respuesta escasa o no son susceptibles a agentes quimioterapéuticos convencionales . El rol de la GSH en la actividad citotóxica de los compuestos de fórmula (I) ha sido investigado mediante la prueba de los compuestos en una sub-línea celular de tumor quimio-resistente, presentando niveles de GSH/GSTs superiores que aquellos de la línea celular parental. El modelo utilizado es una leucemia murina (L1210/L-PAM) resistente a melfalán (L-PAM) , que presenta una cantidad aumentada de tres partes de GSH (25.8 nmol/106 células) con respecto a la línea celular normal L1210 (7.7 nmol/106) (Tabla I). Los compuestos de fórmula (I) probados son: Clorhidrato de N- (5-{ [ (5- {[ (5-{ [ (2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -1-metil-lH-pirrol-2-carboxamida - código interno PNU ,166196; y Clorhidrato de N-(5-{ [ (5-{ [ (5-{ [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil}-1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida - código interno PNU 151807. El derivado de distamicina 3- [l-metil-4- [l-metil-4- [l-metil-4- [l-metil-4- [N, N-bis (2-cloroetil) amino] bencen-carboxamido]pirrol-2-carboxamido] pirrol-2-carboxamido] pirrol-2-carboxamido]propionamidina, mejor conocido como talimustina, y L-PAM se probaron como controles en las mismas condiciones experimentales .

Los datos, expuestos en la Tabla I, indican claramente que la citotoxicidad de los compuestos de fórmula (I) se incrementó en células L1210/L-PAM por tres partes con respecto a las células L1210 (PNU 166196 = IC50 0.49 y 1.62 ng/ml, respectivamente; PNU 151807 = IC50 0.26 y 0.86 ng/ml, respectivamente) . La citotoxicidad de talimustina fue comparable en las dos líneas celulares; a la inversa, la citotoxicidad de L-PAM fue inferior en células L1210/L-PAM que en células L1210.

Tabla I a) Células incubadas con el compuesto por 48 h. La inhibición de Crecimiento se determinó contando las células sobrevivientes . Evidencia adicional de la relevancia de los niveles de GSH para la citotoxicidad de los compuestos de fórmula (I), se ha obtenido determinando la influencia del tratamiento previo con BSO {L-S,R butionina sulfoximina) en la susceptibilidad de células ováricas humanas A2780 a su efecto citotóxico y apoptótico. La BSO es un inhibidor potente y especifico de ?-gluta ilcísteina sintetasa, la etapa limitante de proporción en biosíntesis de GSH. La depleción de GSH intracelular mediante BSO aumenta significativamente la citotoxicidad de muchos fármacos antitumorales, principalmente agentes alquilantes tales como melfalán y clorambucil y compuestos de platino tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino [ Chemico-Biological Interactions 111:239-254 (1998)]. Como se muestra en la Tabla II, la citotoxicidad (porcentaje de inhibición de crecimiento) y el efecto apoptótico (porcentaje de células con morfología apoptótica) de PNU 166196, como un compuesto representativo de fórmula (I) , disminuyeron significativamente en células A2780 pre-tratadas con BSO, respecto de las no tratadas con BSO.

Tabla II .a) Células incubadas con el compuesto por 48 h. La inhibición de crecimiento se determinó contando las células sobrevivientes y la apoptosis se evaluó mediante i examinación morfológica, (b) Células expuestas a BSO por 24 h antes y durante el tratamiento con PNU 166196. El PNU 166196 mostró una citotoxicidad disminuida en células A2780 pre-tratadas con BSO respecto de células no tratadas (38 y 77.5% de inhibición de crecimiento a 3000 ng/ml, respectivamente) . La potencia disminuida de PNU 166196 en células tumorales pre-tratadas con BSO también se confirmó probando el porcentaje de células con morfología apoptótica +/- BSO (11.5 y 74.5% a 3000 ng/ml, respectivamente). Los resultados anteriores respaldan la evidencia de que la actividad in vitro de derivados de a-bromo- y a-cloro-acriloilo distamicina de fórmula (I) se afectan grandemente por la presencia de altos niveles de GSH y, por consiguiente, estos compuestos son particularmente útiles en el tratamiento de tumores que sobre-expresan GSH/GSTs. Los compuestos de la invención pueden administrarse mediante las rutas usuales, por ejemplo, parenteralmente, por ejemplo, mediante inyección intravenosa o infusión, intramuscularmente, subcutáneamente, tópicamente u oralmente.

La dosis depende de la edad, el peso y las condiciones del paciente y de la ruta de administración. Por ejemplo, una dosis adecuada para la administración a humanos adultos puede variar desde aproximadamente 0.05 y a aproximadamente 100 mg pro dosis desde 1 y 4 veces al día. Las composiciones farmacéuticas pueden contener una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I), como la sustancia activa, en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y usualmente se preparan siguiendo métodos convencionales. Por ejemplo, las soluciones para la inyección intravenosa o infusión pueden contener agua estéril como un vehículo o, preferentemente, pueden estar en la forma de soluciones salinas isotónicas acuosas, estériles. Las suspensiones soluciones para las inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. En la forma para la aplicación tópica, por ejemplo, cremas, lociones o pastas para el uso en tratamiento dermatológico, el ingrediente activo se puede mezclar con excipientes oleaginosos o emulsionantes convencionales. Las formas orales sólidas, por ejemplo, comprimidos y cápsulas, pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz y almidón de papa; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, estearats de calcio o magnesio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetil-celulosa, polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo, un almidón, ácido algínico, alginatos, glicolato de almidón de sodio; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes, por ejemplo, lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. Dichas preparaciones farmacéuticas se pueden fabricar de una manera conocida, por ejemplo mediante procesos de mezclado, granulado, tableteado, recubrimiento con azúcar, o recubrimiento con película. Además, de acuerdo con la presente invención, se proporciona un método de tratamiento de tumores que sobre- expresan el sistema GSH/GSTs, en un paciente con necesidad de este, que comprende administrar al paciente una composición de la invención. Los siguientes ejemplos se proponen con esta para ilustrar mejor la presente invención, sin plantear ninguna limitación.

Ejemplo 1 Actividad citotóxica de los compuestos de fórmula (I) contra tumores asociados con altos niveles de GSH Los compuestos clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (5-{ [ (2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida (PNU 166196) y clorhidrato de N- (5-{ [ (5-{ [ (5- { [ (3-amino-3-iminopropíl) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metíl-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida (PNU 151807), respectivamente preparados como se describe en la WO 98/04254 y la WO 90/11277, se disolvieron en agua estéril y se utilizaron Inmediatamente para los experimentos.

La actividad citotóxica se determinó en la línea celular de leucemia linfocítica murina L1210 y en la sub-línea celular L1210/L-PAM resistente a L-PAM. Las células crecieron in vitro como cultivos de suspensión estabilizada. Las células L1210 se mantuvieron en un medio RPMI 1640 que contiene ß-mercaptoetanol (10 µM) . Las células L1210/L-PAM se mantuvieron en un medio RPMI 1640 que contiene ß-mercaptoetanol (50 µM) . Todos los medios de cultivo (Bio hittaker, UK) se suple entaron con Suero de Ternero Fetal al 10% (Biological Industries, Israel) y L-glutamina 2mM (Biowhittaker, UK) . La actividad citotóxica se determinó en contra de las .células exponencialmente crecientes. Las células L1210 y L1210/L-PAM se inocularon en placas de 24 cavidades a una concentración de 50,000 células/ml e inmediatamente se trataron por 48 h con el fármaco. La inhibición del crecimiento celular se evaluó contando las células sobrevivientes con un Contador Coulter. La actividad anti-proliferante de fármacos se calculó a partir de curvas de respuesta a las dosis y se expresó como IC50 (concentración que inhibe 50% del crecimiento celular en cultivos tratados en comparación con controles no tratados) .

Todos los experimentos se realizaron dos veces. Los resultados se exhiben en la tabla I anexa y en los comentarios de la misma.

Ejemplo 2 Citotoxicidad y efecto apoptotico de PNU 166196 en células A2780 pre-tratadas con BSO El compuesto PNU 166196 (ver ejemplo I anterior) se disolvió en agua estéril e inmediatamente se utilizó para los experimentos. El BSO se disolvió en agua estéril y se filtró con ün filtro 0,2 µ. La actividad citotóxica se determinó en una línea celular de carcinoma ovárico humano A2780. Las células crecieron in vitro como cultivos de monocapa en un medio RPMI 1640 (Biowhittaker, UK) suplementado con Suero _de Ternero Fetal al 10% (Biological Industries, Israel) y L-glutamina 2mM (Biowhittaker, UK) . La actividad citotóxica se determinó en contra de las células exponencialmente crecientes. Las células A2780 se inocularon en placas de 6 cavidades a una concentración de 100,000 células/ml para 2 ml y se incubaron durante 24 h con el BSO inhibidor de GSH exponiéndose finalmente a diferentes concentraciones de PNU 166196 (las células no tratadas se incubaron con el medio solamente) . Después de 24 h de tratamiento con el fármaco, la inhibición del crecimiento de célula se evaluó en las células de monocapa mientras que las células flotantes se utilizaron para la evaluación de morfología. Se evaluó la apoptosis mediante microscopia fluorescente. Al final del tratamiento, las células flotantes se recogieron, se lavaron en PBS, se fijaron en 70% de etanol enfriado con hielo y se almacenaron a -20 °C hasta el análisis (5 días máximo) . Las células luego se centrifugaron y las pelotillas se mancharon con 50 pg/ml de yoduro de propidio, Nonidet P40 al 0.001% y 60 U/ml de Rnase y se almacenaron en la oscuridad durante 30 minutos a 37 °C. Se centrifugaron las células y se re-suspendieron las pelotillas en PBS 50 µM. Al menos 600 células elegidas al azar de 2 frotis independientemente preparados, se examinaron para cambios de morfología nuclear (condensación de cromatina y fragmentación de ADN) utilizando un microscopio de fluorescencia [ver In t . J. Cáncer 65:491-497 (1996)]. Todos los experimentos se realizaron dos veces. Los resultados se exhiben por la tabla II adjunta y los comentarios de la misma.

Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Uso de un derivado de a-halógeno acriloilo distamicina de fórmula (I) en donde Ri es un átomo de bromo o cloro; y R2 es una distamicina o una estructura del tipo distamicina; o una sal de las mismas farmacéuticamente aceptable; en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores que sobre-expresan el sistema GSH/GSTs.

2. Uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el tumor que sobre-expresa el sistema GSH/GSTs se selecciona de tumores gastrointestinales, incluyendo tumor esofágico, gástrico, de colon, hepatocelular y pancreático, cánceres uterinos y ováricos, cáncer de cabeza y cuello, carcinomas de NSCL y pulmón, y tumores de hígado metastásicos originados de cánceres gastrointestinales, uterinos, ováricos y pulmonares.

3. Uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la sobre expresión del sistema GSH/GSTs es el resultado de un tratamiento previo de quimioterapia de primera línea, con un agente citotóxico.

4. Uso de conformidad con la reivindicación 3, en donde el agente citotóxico se selecciona de agentes alquilantes, incluyendo mostazas de ifo^famida, melfalán, clorambucil, ciclofosfamida, y BCNU; complejos de platino, incluyendo cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; antraciclinas, incluyendo doxorrubicina, idarrubicina, epirrubicina y derivados de las mismas, epidofilotoxinas, incluyendo etopósído y tenipósido; vinca alcaloides, incluyendo vinblastina y vincristina; y taxanos, incluyendo paclitaxel y docetaxel.

5. Uso de conformidad con la reivindicación 1, donde en el derivado de a-halógeno acriloilo distamicina de fórmula (I), R2 es un grupo de fórmula (II) : en donde m es un número entero de 0 a 2; n es un número entero de 2 a 5; r es 0 ó 1; X e Y son, los mismos o diferentes e independientemente para cada anillo heterocíclico, un átomo de nitrógeno o un grupo CH; G es fenileno, un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos con desde 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S, o es un grupo de fórmula (III) posterior: en donde Q es un átomo de nitrógeno o un grupo CH y W es un átomo de oxigeno o azufre o es un grupo NR3 donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?~C4; B se selecciona del grupo que consiste de — CN "NRsR6 ~ CONR5R6 — NHCONR5R6 en donde R4 es ciano, amino, hidroxi o alcoxi de C?-C ; R5, Rß y R? , los mismos o diferentes, son hidrógeno o alquilo de C1-C4.

6. Uso de conformidad con la reivindicación 5, donde en el derivado de a-halógeno acriloilo distamicina de fórmula (I), Ri es bromo o cloro; y R2 es un grupo de fórmula (II) donde r es 0, m es 0 ó 1, n es 4 y B es de conformidad con la reivindicación 5.

7. Uso de conformidad con la reivindicación 6, donde en el derivado de a-halógeno acriloilo distamicina de fórmula (I) , Ri es bromo o cloro; R2 es un grupo de fórmula (II) de conformidad con la reivindicación 5, y donde r es 0, m es 0 ó 1, n es 4, X e Y son ambos grupos CH y B se selecciona de: —CN CONR5R6 NHCONR5R6 donde R4 es cíano o hidroxi y R5, R6 y R7, los mismos o diferentes, son hidrógeno o alquilo de C-C4.

8. Uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el derivado de a-halogeno acriloilo distamicina de fórmula (I), opcionalmente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, se selecciona de: i. N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil} -1-meti1-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil- lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; ii. N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{ [amino (imino) metil] amino}propil) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3- il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2- carboxamida; iii. N-(5-{[(5-{[(5-{[ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } - 1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-Sil) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2- bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamida; iv. N- (5-{ [ (5-{ [ (5- { [ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil }-l- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3- il) amino] carbonil } -l-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2- bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-imidazol-2-carboxamida; v. N-(5-{[(5-{[(5-{[ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil }-l- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3- il) amino] carbonil} -l-metil-lH-pirrol-3-il) -3- [ (2- 3 bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pírazol-5-carboxamida; vi. N-(5-{[(5-{[(5-{[ (3-amino-3-oxopropil) amino] carbonil } -1- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3- il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3-il) -3- [ (2- bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirazol-5-carboxamida; vii. N- (5-{ [ (5-{ [ (5-{ [ (2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -1-metil-lH-pirrol-3- il) -4- [ (2-cloroacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2- carboxamida; viii. N-(5-{[(5-{[(3-{ [amino (ímino) metil] amino}propil) amino] carbonil) -1-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil- lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -1-metil-lH- pirrol-2-carboxamida; ix. N- (5- {[ (5- {[ (3-amino-3-iminopropil) amino] carbonil } -1- metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3- il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lII-pirrol-2- carboxamida; y x. N- { 5- [ ( { 5- [ ( { 5- [ ( { 3- [ (aminocarbonil) amino] propil } amino) carbonil] -l-metil-lH-pirrol-3-il } amino) carbonil] -1-metil- lH-pirrol-3-il}amino) carbonil] -l-metil-lH-pirrol-3-il } -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -l-metil-lH-pirrol-2-carboxamia .

9. Uso de conformidad con la reivindicación 8, en donde el derivado de a-halogeno acriloilo distamicina de fórmula (I) es clorhidrato de N- (5-{ [ (5- { [ (5-{ [ (2-{ [amino (imino) metil] amino} etil) amino] carbonil}-l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil} -l-metil-lH-pirrol-3-il) amino] carbonil } -1-metil-lH-pirrol-3-il) -4- [ (2-bromoacriloil) amino] -1-metil-lH-pirrol-2-carboxamida .

10. Método para el tratamiento de tumores que sobre-expresan el sistema GSH/GSTs, caracterizado porque comprende la administración de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 a un paciente en necesidad del mismo.

11. Método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el tumor que sobre-expresa el sistema GSH/GSTs, comprende tumores gastrointestinales, incluyendo tumor esofágico, gástrico, de colon, hepatocelular y pancreático, cánceres uterino y ovárico, cáncer de cabeza y cuello, carcinomas de NSCL y pulmón y tumores de hígado metastásicos originados de los cánceres gastrointestinales, uterinos, ováricos y pulmonares.