MXPA01011977A - Derivados de 1-trifluorometil-4-hidroxi-7-piperidinil-aminometilcromano. - Google Patents

Abstract

Esta invencion se refiere a nuevos derivados de 1-trifluorometil-4-hidroxi-7-piperidinil- aminometilcromano de formula (ver formula) en la que Rl es un alquilo C1-C6; R2 es hidrogeno, alquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6 o fenilo, R3 es hidrogeno o halo, y R4 y R5 son independientemente hidrogeno, alquilo CI-C6 o haloalquilo C1-C6, sus sales farmaceuticamente aceptables, composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y el uso de dichos compuestos para tratar trastornos del sistema nervioso central, gastrointestinal y otros.

Description

DERIVADOS DE 1-TRIFLUOROMET1L-4-HIDROX1-7-PIPERIDINIL-AMINO- METILCROMANO Esta invención se refiere a nuevos derivados de 1 -trifluorometil-4-hidroxi-7-piperidinil-aminometilcromano y a sus sales farmacéuticamente aceptables, a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos y al uso de dichos compuestos como sustancias antagonistas de la sustancia P.

TÉCNICA ANTECEDENTE La sustancia P es un undecapéptido de origen natural que pertenece a la familia de péptidos de la taquicinina, llamada así esta última por su rápida acción estimuladora sobre el tejido de músculo liso. Más específicamente, la sustancia P es un neuropéptido farmacéuticamente activo que se sintetiza en mamíferos (aislado originalmente en intestino) y que posee una secuencia de aminoácidos específica como se ilustra en D.F. Veber et al., patente estadounidense 4.680.283. La amplia implicación de la sustancia P y otras taquicininas en la patofisiología de numerosas enfermedades ha sido ampliamente demostrada en la técnica. Por ejemplo, se ha mostrado recientemente que la sustancia P está implicada en la transmisión de dolor o migraña, así como en trastornos del sistema nervioso central como ansiedad y esquizofrenia, en enfermedades respiratorias e ^imii inflamatorias como asma y artritis reumatoide, respectivamente, y en trastornos gastrointestinales y enfermedades del tracto gastrointestinal, como colitis ulcerosa, síndrome del intestino irritable, enfermedad de Cohn, etc. También se ha informado de que los antagonistas de las taquicininas son útiles para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, afecciones alérgicas, regulación inmune, vasodilatación, broncoespasmos, control reflejo o neuronal de las visceras, demencia senil o del tipo Alzheimer, emesis, quemaduras de sol e infecciones por Helicobacter pylori. La solicitud de patente europea 840.732, publicada el 13 de mayo de 1998, y la solicitud de patente internacional PCT/IB97/01466, presentada el 19 de noviembre de 1997, describen una serie de compuestos sustituidos de piperidina, incluyendo compuestos de piperidina que tienen un sustituyente que comprende un resto anillo fusionado que incluye un átomo de oxígeno, como antagonistas de la sustancia P. Se desean antagonistas de la sustancia P que tengan una actividad mejorada y menores efectos secundarios.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos éter cíclicos de piperidinilaminometiltrifluorometilo con la siguiente fórmula química (I): y sus sales farmacéuticamente aceptables, en las que R1 es un alquilo C-i-Cß, R2 es hidrógeno, alquilo CrC6, haloalquilo C-i-Cß o fenilo, R3 es hidrógeno o halo, y R4 y R5 son independientemente hidrógeno, alquilo C-pCß o haloalquilo C Cß- Los compuestos de fórmula (I) contienen al menos dos centros quirales y existen por lo tanto como al menos dos pares diastereoisoméricos de isómeros ópticos, incluyendo epímeros. Esta invención incluye ambos isómeros individuales de los compuestos de fórmula (I) y mezclas de dos o más de dichos isómeros. Los compuestos de fórmula (I) de la invención tienen preferiblemente la configuración (2S, 3S) con respecto del anillo de piperidina.

Las realizaciones de la invención son compuestos de fórmula (I) en la que R1 es un alquilo Ci -C3, R2 es hidrógeno, alquilo C1-C3, haloalquilo C1-C3 o fenilo, R3 es hidrógeno o flúor, y R4 y R5 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C3 o haloalquilo C1-C3. Otras realizaciones de la invención son compuestos de fórmula (I) en la que R1 es metilo, R2 es hidrógeno, metilo, trifluorometilo o fenilo, R3 es hidrógeno y R4 y R5 son hidrógeno. Un compuesto preferido específico de fórmula (I) es la (2s, 3s) -3- (6-metox¡-1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7- il) metilamíno-2-fenilpiperidina o una sal farmacéuticamente aceptable de ésta. Los compuestos de la invención son útiles como antagonistas de la sustancia P, siendo útiles, por tanto, para el tratamiento de un trastorno o afección seleccionado entre distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postra umático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis, quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylori, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto _ ¿ u urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y 5 otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias (incluyendo demencias relacionadas con la edad y demencia senil de tipo Alzheimer) y trastornos de memoria (por ejemplo trastornos amnésicos), trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, 10 eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, neuralgia, neuropatía periférica, trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, 15 fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes, cistitis, enfermedad del intestino inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fascioliasis eosinofílica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y 20 trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sistémico eritematoso en un mamífero, especialmente un humano. Estos compuestos son especialmente útiles como agentes anti-inflamatorios o ___i___ _í__ ______i i -. ,-_.-«. ..__ . . i .. , _i- . antieméticos, o agentes de tratamiento de trastornos del sistema nervioso central. Los compuestos de la invención son particularmente útiles para el tratamiento de la emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada o anticipada como emesis o náuseas inducidas por quimioterapia, radiación, cirugía, embarazo, movimiento, trastornos vestibulares, toxinas, migrañas y variaciones de la presión intracraneal. Más específicamente, estos compuestos se utilizan en el tratamiento de la emesis inducida por agentes antineoplásicos, incluyendo aquellos utilizados en terapia de cáncer, y la emesis inducida por otros agentes farmacológicos como rolipram o morfina. Estos compuestos también son útiles para el tratamiento del dolor agudo y crónico, incluyendo dolor hiperanalgésico, dolor neuropático, dolor postoperatorio y dolor asociado a daño nervioso. La presente invención se refiere también a una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno o afección para el que se necesita actividad antagonista hacia la sustancia P, en un mamífero, que comprende una cantidad del compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de éste que es eficaz en el tratamiento de dicho trastorno o afección, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención se refiere también a un procedimiento de tratamiento de un trastorno o afección para el que se necesita una actividad antagonista hacia la sustancia P, en un mamífero, que comprende la administración a un mamífero necesitado de dicho tratamiento de una -Ai , _ - cantidad del compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable de éste, que es eficaz en el tratamiento de dicho trastorno o afección. La invención se refiere también a una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno o afección seleccionado entre distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postraumático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis, quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylorí, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias (incluyendo demencias relacionadas con la edad y demencia senil de tipo Alzheimer) y trastornos de memoria (por ejemplo trastornos amnésicos), trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de -ÉiJabs..-- hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, neuralgia, neuropatía periférica) trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes,. cistitis, enfermedad del intestino inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fascioliasis eosinofílica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sistémico eritematoso en un mamífero, especialmente un humano, que comprende una cantidad del compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable de éste, que es eficaz en el tratamiento de dicho trastorno o afección, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención se refiere también a un procedimiento de tratamiento de un trastorno o afección seleccionado entre distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postraumático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, - k ^ . osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylori, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias (incluyendo demencias relacionadas con la edad y demencia senil de tipo Alzheimer) y trastornos de memoria (por ejemplo trastornos amnésicos), trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, neuralgia, neuropatía periférica, trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes, cistitis, enfermedad del intestino inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fascioliasis eosinofílica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sistémico eritematoso en un mamífero, especialmente un humano, que comprende la administración a un mamífero necesitado de dicho tratamiento de una cantidad del compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable de éste, que es eficaz en la prevención o tratamiento de dicho trastorno o estado. El término "tratar" como se utiliza en la presente se refiere a revertir, aliviar, inhibir el progreso o prevenir el trastorno o afección al que dicho término se aplica, o uno o más síntomas de dicho trastorno o afección. El término "tratamiento" como se utiliza en la presente se refiere al acto de tratar, según se ha definido "tratar" anteriormente. El término "halo" significa F, Cl, Br e I, preferiblemente Cl o F. El término "alquilo" como se utiliza en la presente se refiere a radicales saturados de cadena lineal o ramificada incluyendo, pero no limitándose a ellos, metilo, etilo, n- propilo, isopropilo y ter-butilo. El término "haloalquilo C-i-Cß" se utiliza en la presente para indicar un alquilo C-i-Cß lineal, ramificado o cíclico sustituido con uno o más (preferiblemente de uno a siete) átomos de halógeno. Estos compuestos incluyen, pero no están limitados a ellos, trifluorometilo, difluoroetilo, trifluoroetilo, pentafluoroetilo, trifluoroisopropilo, tetrafluoroisopropilo, pentafluoroisopropilo, hexafluoroisopropilo y similares.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los compuestos éter cíclicos de piperidinilaminometiltrifluorometilo de fórmula (I) de la invención pueden prepararse como se describe en los siguientes esquemas y discusiones de reacción. A menos que se indique otra cosa, en los esquemas de reacción siguientes, R1, R2, R3, R4 y R5 son como se definen anteriormente, y Z representa hidrógeno o un grupo protector de amino. El esquema 1 ilustra un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (VI), que puede convertirse después en el correspondiente metabolito de fórmula (I) por medio de los procedimientos de biotransformación descritos a continuación. Los compuestos de fórmula (VI) pueden prepararse por alquilación reductora del compuesto (II) con el compuesto (III).

ESQUEMA 1 (»> O?) . l?. _.. t~. *-¿ X . s.* ¿_í¿¡_ Se puede sintetizar un compuesto de fórmula (VI) en el que Z es hidrógeno o un grupo protector de amino y Q es R4 o R5 como se definen anteriormente, mediante alquilación reductora de un compuesto amino de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (III) según procedimientos conocidos, como los descritos en la publicación internacional de patente No. WO 97/03066. La reacción puede llevarse a cabo en presencia de un reactivo reductor adecuado en un disolvente inerte a la reacción. Los reactivos reductores adecuados son, por ejemplo, borohidruros como triacetoxiborohidruro de sodio (NaB(OAc)3H), borohidruro de sodio (NaBH4) y cianoborohidruro de sodio (NaBI-bCN), boranos, hidruro de litio y aluminio (LiA?H2) y trialquilsilanos Los disolventes adecuados incluyen disolventes polares como metanol, etanol, cloruro de metileno, tetrahidrofurano (THF), dioxano y acetato de etilo. La reacción puede llevarse a cabo a una temperatura de aproximadamente -78°C a la temperatura de reflujo del disolvente, preferiblemente de 0 a 25°C durante de 5 minutos a 48 horas, preferiblemente de 0.5 a 12 horas. Preferiblemente, pueden obtenerse compuestos (VI), en los que Q es distinto de hidrógeno, mediante la reacción del compuesto (II) con el compuesto (III), en el que W es un grupo acilo apropiado. Esta reacción puede llevarse a cabo en presencia de un agente reductor como el NaBH3CN y un ácido de Lewis como el cloruro de titanio (IV) (TiCí4) en un disolvente inerte a la reacción como diclorometano (Tetrahedron Letter vol. 31 , pág. 5547, 1990). Cuando Z es un grupo protector de amino, el grupo protector de amino puede eliminarse después de la alquilación i. a.-?A._.-s 1 ,- i.l l A..aí reductora utilizando procedimientos conocidos para un experto en la técnica (véase, por ejemplo Protectíve Groups in Organic Syhthesis, T.W. Greene, et al., John Wíley.& Sons, Inc. 1991 ) para obtener el compuesto de fórmula (VI). Específicamente, cuando Z es terc-butilcarbonllo (abreviado como "Boc"), puede eliminarse el grupo Boc en presencia de un ácido como HCl en un disolvente inerte a la reacción como metanol en atmósfera inerte (por ejemplo en atmósfera de nitrógeno). Puede prepararse un material de partida de fórmula (II) mediante protección del nitrógeno de un compuesto de (2S,3S)-3-amino-2-fenilpiperidina, que puede prepararse mediante procedimientos conocidos, como los descritos, por ejemplo en la publicación de patente internacional n° W 92/17449. La protección del nitrógeno del anillo de piperidina de los compuestos de fórmula (II) puede llevarse a cabo según procedimientos conocidos, como los descritos en, por ejemplo, la publicación de patente internacional n° WO 97/03066. Grupos protectores adecuados son por ejemplo Boc (terc-butoxicarbonilo), benciloxícarbonilo (Cbz) o trifluoroacetilo. Por ejemplo, la protección de nitrógeno por Boc puede llevarse a cabo por tratamiento del compuesto (2S,3S)-3-amino-2-fenilpiperidina con (terc-BuOCO)2O en presencia de una base como hidróxido de sodio, bicarbonato de sodio o trietilamina. Los compuestos de fórmula (III) pueden prepararse mediante formilación o acilación de compuestos de fórmula (IV) como se ilustra en el esquema 2. í^^^&^Lgj^ ESQUEMA 2 Pueden utilizarse procedimientos conocidos de formilación o acilación. Por ejemplo, puede conseguirse la formilación directa mediante la puesta en contacto del compuesto (IV) con un agente de formilación adecuado en presencia de un catalizador adecuado. Los sistemas agente de formilación/catalizador incluyen éter diclorometilmetílico/cloruro de titanio (IV) (CH2-CHOCH3/TÍCI4), ácido trifluoroacético (CF3COOH) /hexametilentetraamina (condiciones de Duff modificadas) y tricloruro de fosforilo (POC yDMF (condiciones de Vilsmeier) . Más específicamente, la formilación del compuesto (IV) con CH2CHOCH3/TÍCI4 puede llevarse a cabo en un disolvente inerte a la reacción en atmósfera de nitrógeno. Los disolventes adecuados incluyen diclorometano y 1 ,2-dicloroetano a una temperatura desde alrededor de -120°C a temperatura ambiente durante alrededor de 1 minuto a 10 horas, preferiblemente a -78°C durante un periodo de 5 minutos a 4 horas. La reacción de Duff puede aplicarse también a la _ L formilación según las condiciones de reacción descritas en la publicación internacional de patente WO 94/24081. También, un procedimiento indirecto adecuado de formilación comprende (i) la halogenación del compuesto (IV), (ji) la sustitución del átomo de halógeno por un grupo ciano, y después (¡ii) el sometimiento del compuesto resultante sustituido con ciano a reducción, (i) La halogenación puede llevarse a cabo según procedimientos conocidos según informa G.A. Olah et al., (J. Org. Chem., vol. 58, pág. 3194-, 1983). (¡i) La sustitución del átomo de halógeno por un grupo ciano puede conseguirse según procedimientos conocidos como los descritos por D.M. Tschaem et al., (Synth. Commuri., vol. 24, pág. 887- 1994) o por K. Takagi et al., (Bull. Chem. Soc. Jpn., vol 64, pág. 1118, 1991). (üi) La reducción, como se utiliza en la presente, puede conseguirse en presencia de hidruro de aluminio y diisopropilo (DIBAL-H) en diclorometano o níquel Raney en ácido fórmico. La acilación puede conseguirse mediante la bien conocida acilación de Friedel-Crafts descrita por ejemplo en Advanced Organic Chemistry por Jerry March, John Wiley & Sons, cuarta edición, 1992, pág, 539, y en las referencias de éste. Más específicamente, el compuesto (IV) puede hacerse reaccionar con un agente de acilación en presencia de un catalizador ácido para dar el compuesto (III) Los agentes acilantes adecuados -incluyen cloruro de acilo, fluoruro de acilo y anhídridos, preferiblemente cloruro de acilo. Los catalizadores ácidos adecuados incluyen ácido sulfúrico y ácidos de Lewis como cloruro de aluminio, preferiblemente cloruro de , » J, ?.?.t___?_jt_._, _. _?a __fi¿»_-~ ~ . . ,..^^_^.__... aluminio. Esta reacción puede llevarse a cabo típicamente a una temperatura desde alrededor de -10°C a temperatura ambiente, durante alrededor de 5 minutos a 2 horas, preferiblemente a alrededor de 0°C durante alrededor de 1 hora. Puede prepararse un éter cíclico de fórmula (IV) a partir de un compuesto de fórmulas (Va) o (Vb) según procedimientos conocidos como los descritos por W.E. Parham et al. (J. Org. Chem., vol 39, pág. 2048, 1974) o los procedimientos ilustrados en el esquema 3.

ESQUEMA 3 En la ruta A del esquema 3 puede sintetizarse un compuesto de fórmula (IV) a partir de un compuesto de fórmula (Va) en el que Y1 es Br, I o Cl (preferiblemente Br) e Y2 es hidrógeno o un grupo protector de hidroxilo (de ¿ . . X -y*".».- , -? ¿J_ forma adecuada tetrahidropiranilo, abreviado como "THP") . El compuesto de fórmula (Va) puede metalarse mediante tratamiento con un compuesto organometálico. La mezcla de reacción puede tratarse a continuación con un compuesto carbonilo representado por CF3C(=O)R2 dando el diol (Ve). Si se requiere, el grupo protector de hidroxilo y2 del diol (Ve) puede eliminarse. Después, el diol (Ve) puede someterse a ciclación para dar el compuesto éter cíclico (IV). La metalación del compuesto (Va) puede llevarse a cabo en presencia de compuestos organometálicos tales como n-butil-litio, sec-butil-litio o terc-butil-litio. La metalación y posterior reacción con CF3C(=O)R2 pueden llevarse a cabo en un disolvente inerte a la reacción como THF, éter y hexano en atmósfera inerte, por ejemplo, en atmósfera de nitrógeno, a una temperatura desde alrededor de -150°C a temperatura ambiente durante un periodo de 15 minutos a 12 horas, preferiblemente desde -120°C a -30°C durante de 10 minutos a 6 horas. La protección y desprotección de hidroxilos con el grupo protector Y2 puede conseguirse en condiciones adecuadas dependiendo del grupo protector elegido según los procedimientos conocidos (véase, por ejemplo, Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene, et al., John Wiley & Sons, Inc.). La ciclación del diol (Ve) puede llevarse a cabo en presencia de un ácido según los procedimientos conocidos descritos por, por ejemplo, W.E. Parham et al. (Synthesis, pág. 116, 1976) o D. Seebach et al. (Chein.Ber., vol. 116, pág. 8354-, 1994). Los ácidos adecuados son, por ejemplo, HCl, H2S04, o ácido para-toluenosulfónico, ácido trifluoroacético (abreviado como TFA). La reacción puede llevarse a cabo a una temperatura desde alrededor de temperatura ambiente a alrededor de 200°C durante un período de 10 minutos a 12 horas, preferiblemente de 60°C a 150°C durante de 30 minutos a 6 horas. Como alternativa, puede llevarse a cabo la ciclación según los procedimientos conocidos como reacción de Mitsunobu o los procedimientos descritos por J.R. Falck et al (J. Am. Chein. Soc, vol. 116, pág. 8354-, 1994). Por ejemplo, la reacción de Mitsunobu puede llevarse a cabo en presencia de trifeniltosfina/azodicarboxilato de dietilo en un disolvente adecuado como diclorometano en atmósfera de nitrógeno a una temperatura alrededor de 0°C durante un periodo desde alrededor de 5 minutos a 6 horas. En la ruta B del esquema 3 puede sintetizarse un compuesto éter cíclico de fórmula (IV) sometiendo a un compuesto de fórmula (Vb), en el que Y3 es un grupo saliente, a una ciclación de una etapa con CF3C(=O)R2 en presencia de una base adecuada (véase, por ejemplo. J. Org. Chein., vol. 41 , pág. 1184-, 1976). Los grupos salientes adecuados incluyen Cl, Br, tosilato, mesilato y triflato. Las bases adecuadas incluyen alquil-litio, como n-BuL¡, sec-BuLi o terc-BuLi. Por ejemplo, la reacción puede llevarse a cabo tratando primero un compuesto de fórmula (Vb) con n-BuLi en un disolvente inerte a la reacción adecuado como ThF/hexano, en atmósfera de nitrógeno a una temperatura desde alrededor de -120°C a 0°C durante un periodo de alrededor de 5 minutos a 12 horas, preferiblemente de -100°C a -60°C L?.. .-á__ durante de 10 minutos a 6 horas. Posteriormente, puede añadirse a la mezcla de reacción el compuesto carbonilo CF3C(O)R2 Y puede elevarse la temperatura a una temperatura desde alrededor de -50°C a temperatura ambiente. Por otro lado, por ejemplo, los materiales de partida de fórmulas (Va) y (Vb), en las que R1 es metilo, pueden prepararse por bromación en la Posición para de un compuesto anisol conocido o comercialmente disponible según procedimientos conocidos (por ejemplo, J. Org. Chem., vol. 58, pág. 7507- 1993, y J. Org. Chem., vol. 46, pág. 118-, 1981 ). Como alternativa, se encuentran otros procedimientos de preparación de compuestos de fórmula VI en la solicitud de patente estadounidense en tramitación junto con la presente n° de serie 60/160226, presentada el 18 de octubre de 1999, incorporada a la presente como referencia en su totalidad. A menos que se indique de otra manera, la presión de cada una de las reacciones anteriores no es crítica. Generalmente, las reacciones se llevarán a cabo a una presión desde alrededor de una a alrededor de tres atmósferas, preferiblemente a presión ambiente (alrededor de una atmósfera). Los compuestos de fórmula (VI) y los intermedios mostrados en los esquemas de reacción anteriores pueden aislarse y purificarse mediante procedimientos convencionales, como recristalización o separación cromatográfica.

Como se indica anteriormente, los compuestos de fórmula (1 ) pueden prepararse mediante biotransformación del preparado por biotransformación de los compuestos (VI), de los que son metabolitos. Puede conseguirse la biotransformación por los expertos en la técnica mediante la puesta en contacto de la sustancia a transformar, Y otros reactivos necesarios, con las enzimas derivadas de una serie de organismos vivos en condiciones adecuadas para que suceda una interacción química Posteriormente, los productos de la reacción se separan y se purifican los de interés para elucidar su estructura química y física y sus propiedades biológicas. Las enzimas pueden estar presentes como reactivos purificados, estar en extractos brutos o usados, o estar como células intactas y pueden estar en disolución, estar en suspensión (por ejemplo, células intactas), estar covalentemente unidas a una superficie de soporte, o estar integradas en una matriz permeable (por ejemplo, agarosa o perlas de algínato) . El sustrato y otros reactivos necesarios (por ejemplo, agua, aire) se suministran según requiera la química. Generalmente, la reacción se lleva a cabo en presencia de una o más fases líquidas, acuosas y/o orgánicas, para estimular la transferencia de masa de los reactivos y productos. La reacción puede llevarse a cabo de forma aséptica o no aséptica. Las condiciones de monitorización del progreso de la reacción y el aislamiento de los productos de la reacción variará según las propiedades físicas del sistema de reacción y de la química de los reactivos y productos. 3¿L¿ - á-^. ^B^ yrt= El siguiente es un ejemplo de un procedimiento a escala de laboratorio para llevar a cabo una biotransformación aeróbica que puede realizarse por los expertos en la técnica para producir compuestos de interés. Se añade medio nutriente (por ejemplo, medio IOWA: dextrosa, extracto de levadura, fosfato ácido dipotásico, cloruro de sodio, harina de soya, agua, ajustado a pH neutro) a uno o más recipientes de cultivo (por ejemplo, tubos o matraces de fermentación) que se esterilizan entonces con vapor. Cada recipiente se inocula asépticamente con crecimiento de un cultivo de agar, una suspensión de células lavadas o esporas, o caldo de un cultivo de medio nutriente líquido del microorganismo de biotransformación. Los recipientes se montan en un agitador diseñado para la fermentación y se agitan (por ejemplo, operación rotatoria a 100-300 rpm) a una temperatura apropiada (por ejemplo, 20-40°C) el tiempo suficiente como para estimular el crecimiento del microorganismo a un tamaño de población adecuado (por ejemplo, 1-3 días). El compuesto precirsor a transformar (es decir, el sustrato) se disuelve en agua o un disolvente miscible en agua adecuado (por ejemplo, dimetiisulfóxido, dimetilformamida, alcohol etílico, alcohol metílico). A cada recipiente de biotransformación, se añade la disolución resultante asépticamente para conseguir la concentración deseada de sustrato (por ejemplo, 100-200 mcg/ml) Los recipientes dosificados se montan en el agitador y se agitan como antes hasta que el sustrato se ha convertido en producto, o productos, mediante metabolismo microbiano (por ejemplo, 1-10 días). Los contenidos del recipiente de biotransformación se tratan Li , mecánicamente (por ejemplo por filtración o centrifugación) para separar los Sólidos sin disolver de la fase acuosa. Los Sólidos separados se extraen con un disolvente orgánico miscible en agua adecuado (por ejemplo metanol). Se recuperan el extracto de disolvente de los sólidos y el contenido en fase acuosa de los recipientes, se combinan y se concentran utilizando procedimientos adecuados, por ejemplo extracción en fase sólida y secado a presión reducida. El producto en bruto secado se redisuelve en un disolvente que es compatible con el procedimiento de purificación (por ejemplo, acetonitrilo, metanol, agua, o fase móvil de HPLC). El aislamiento y purificación del producto, o productos, de biotransformación se consigue mediante extracción en fase sólida (SPE) seguido de cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (HPLC) . El producto, o productos, de biotransformación se monitorizan durante la separación cromatográfica mediante absorbancia UV y perfil espectral de disposición de fotodiodos. Las fracciones de la fase móvil de HPLC que contienen el producto, o productos, de interés se retienen y se extraen el producto, o productos de la fase móvil utilizando procedimientos adecuados, por ejemplo, secado al vacío seguido de SPE. El elucto del disolvente de la extracción de SPE se recupera, se filtra para eliminar los sólidos y se concentra a presión reducida para producir el producto, o productos, de biotransformación. La estructura química del producto, o productos, aislados se determina a partir de los datos obtenidos de espectroscopia de masas y de la RMN-1H. _.U__ Puesto que los compuestos éter cíclicos de piperidinaminometiltrifluorometilo de esta invención poseen al menos dos centros asimétricos, son capaces de existir en diversas formas estereoisómeras o configuraciones (por ejemplo, diastereoisómeros, incluyendo epímeros) Por ello, los compuestos pueden existir en formas ópticamente activas separadas (+) y (-), así como en mezclas de éstas. La presente invención incluye todas estas formas dentro su alcance. Todos los isómeros ópticos y estereoisómeros de los compuestos de fórmula (I) y mezclas de éstos se consideran dentro del alcance de la invención. Con respecto a los compuestos de fórmula (I), (VI) y (II), la invención incluye el uso de racematos, una o más formas enantiomérícas, una o más formas diastereoisoméricas, o mezclas de éstas. Los compuestos de fórmula (I), (VI) y (II) pueden existir también como tautómeros. Esta invención se refiere al uso de todos esos tautómeros y mezclas de éstos. Pueden obtenerse los isómeros individuales mediante procedimientos conocidos, como resolución óptica, cristalización fraccionada, cromatografía, HPLC de una mezcla diastereoisomérica de un intermedio, o de un compuesto dé fórmula (1 ) o de una sal adecuada de éste. También pueden sintetizarse los estereoisómeros individuales a partir de los materiales de partida ópticamente activos o de intermedios utilizando cualquiera de los procesos generales descritos en la presente. Además, se encuentran procedimientos de preparación de mezclas diastereoisoméricas enriquecidas o formas enantioméricas específicas en la solicitud de patente estadounidense en tramitación junto con la presente n° de serie 60/160226, presentada el 18 de octubre de 1999, incorporada a la presente como referencia en su totalidad. Dado que los compuestos éter cíclicos de piperidinilaminometiltrifluorometilo de esta invención son compuestos básicos, son todos ellos capaces de formar una amplia variedad de sales diferentes con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos Aunque dichas sales deben ser farmacéuticamente aceptables para su administración a animales, a menudo es deseable en la práctica aislar inicialmente el compuesto básico de esta invención a partir de la mezcla de reacción como una sal farmacéuticamente inaceptable y después convertirla simplemente en la base libre mediante tratamiento con un reactivo alcalino y después convertir la base libre en una sal de adición de ácidos farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácidos de los compuestos básicos de esta invención se preparan fácilmente por tratamiento del compuesto básico con una cantidad sustancialmente equivalente del ácido mineral orgánico elegido en un disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado, como metanol o etanol. La sal sólida deseada se obtiene fácilmente por evaporación cuidadosa del disolvente. Los ácidos que se utilizaron para preparar las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos antes mencionados de esta invención son aquellos que forman sales de adición de ácidos no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacéuticamente aceptables, como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato o bisulfato, fosfato o fosfato ácido, acetato, lactato, citrato o citrato ácido, tartrato o bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, para-toluenosulfonato y pamoato (es decir, sales de 1 ,1P-metilen-bis- (2-hidroxi-3-naftoato)). Los derivados de 1-tr¡fluorometil-4-hidroxi-7-piperidinilaminometilcromano de la presente invención y sus sales farmacéuticamente aceptables exhiben una significativa actividad de unión al receptor de P y por lo tanto son valiosos en el tratamiento de una amplia variedad de afecciones clínicas que se caracterizan por la presencia de un exceso de actividad de la citada sustancia P. Dichas afecciones incluyen distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postraumático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis, quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylori, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de -. .biaí.

Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias (incluyendo demencias relacionadas con la edad y demencia senil de tipo Alzheímer) y trastornos de 5 memoria (por ejemplo trastornos amnésicos), trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, 10 neuralgia, neuropatía periférica, trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes, cistitis, enfermedad del intestino 15 inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fascioliasis eosinofílica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sístémico eritematoso en un mamífero, especialmente humanos. Para el tratamiento de la emesis estos compuestos 20 pueden utilizarse preferiblemente en combinación con un antagonista del receptor de 5HT3 como ondansetrón, granisetrón o tropisetrón. Los derivados de 1-trifluorometil-4-h¡droxi-7- piperidinilaminometilcromano de esta invención, y sus sales _____________i _____ farmacéuticamente aceptables, pueden administrarse por vía oral, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular o subcutánea) o tópica a mamíferos. En general, estos compuestos se administran de la forma más deseada a humanos en intervalos de dosis desde alrededor de 0.3 mg hasta 750 mg al día, aunque necesariamente habrá variaciones dependiendo del peso y de la afección del sujeto tratado y de la vía particular de administración elegida. Sin embargo, se emplea de la forma más deseada un nivel de dosificación que está en el intervalo desde alrededor de 0.06 mg a alrededor de 6 mg por kg de peso corporal al día. Sin embargo, todavía puede haber variaciones dependiendo de la especie animal que se trate y de su respuesta individual al citado medicamento, así como del tipo de formulación farmacéutica elegido y del periodo e intervalo de tiempo en que se lleve a cabo dicha administración. En algunos casos, pueden ser más adecuados niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo citado anteriormente, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis mayores sin producir ningún efecto secundario perjudicial, siempre que dichos niveles de dosificación mayores se dividan primero en varias pequeñas dosis para su administración a lo largo del día. Los derivados de 1-trifluorometil-4-hidrox¡-7-piperidinilaminometilcromano de esta invención, y sus sales farmacéuticamente aceptables, pueden administrarse en solitario o en combinación con vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables por cualquiera de las vías anteriores previamente mencionadas, y dicha ,...k? ._• administración puede llevarse a cabo en una o en múltiples dosis. Más particularmente, los nuevos agentes terapéuticos de la invención pueden administrarse en una amplia variedad de diferentes formas de dosificación, es decir, puede combinarse con diversos vehículos inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, pastillas, trociscos, caramelos duros, polvos, pulverizadores, cremas, pomadas, supositorios, gelatinas, geles, pastas, lociones, ungüentos, suspensiones acuosas, disoluciones inyectables, elixires, jarabes y similares. Dichos vehículos incluyen diluyentes sólidos o cargas, medios acuosos estériles y diversos disolventes orgánicos no tóxicos, etc. Además, las composiciones farmacéuticas orales pueden edulcorarse y/o aromatizarse adecuadamente. En general, los compuestos terapéuticamente eficaces de esta invención están presentes en dichas formas de dosificación a niveles de concentración que oscilan entre alrededor de un 5.0% a alrededor de un 7.0% en peso. Para la administración oral pueden emplearse comprimidos que contienen diversos excipientes como celulosa microcristalina, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dicálcico y glicina, junto con diversos disgregantes como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto con ligantes de granulación como polivinilpirrolidona, sucrosa, gelatina y goma arábiga. Adicionalmente, agentes lubricantes como estearato de magnesio, laurilsulfato de sodio y talco son a menudo muy útiles con fines de compresión. También pueden utilizarse composiciones sólidas de tipo similar . -.-....,, .! - i „,. ,-. . , . «at~» . _>-. «- . __ ., . -.. como cargas en cápsulas de gelatina, los materiales preferidos a este respecto incluyen también lactosa o azúcar de leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, el ingrediente activo puede combinarse con diversos agentes edulcorantes o aromatizantes, materias colorantes o tintes y, sí se desea, emulsionante y/o agentes de suspensión, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones de éstos. Para la administración parenteral pueden emplearse disoluciones de un compuesto de la presente invención en aceite de sésamo o de cacahuete o en propilenglicol acuoso. Las disoluciones acuosas deben tamponarse adecuadamente (preferiblemente a pH>8) si es necesario, y hacer primeramente isotónico el diluyente líquido. Estas disoluciones acuosas son adecuadas con fines de inyección intravenosa. Las disoluciones oleosas son adecuadas con fines de inyección intra-articular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas disoluciones en condiciones estériles se consigue fácilmente mediante técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas para los expertos en la técnica. Además, también es posible administrar los compuestos de la presente invención tópicamente para tratar, por ejemplo, afecciones inflamatorias de la piel, y esto puede hacerse preferiblemente por medio de cremas, gelatinas, geles, pastas, ungüentos y similares, según la práctica farmacéutica convencional. - i# ? j .. . * La actividad de los compuestos de la presente invención como antagonistas de la sustancia P puede determinarse por su capacidad de inhibir la unión de la sustancia P a sus sitios receptores en células CHO que expresan el receptor NKI o células IM-9 empleando reactivos radiactivos. La actividad antagonista de la sustancia P de los compuestos éter cíclicos de piperidinilaminometiltrifluorometilo descritos en la presente puede evaluarse utilizando el procedimiento de ensayo convencional descrito por D.G. Payan et al., (J. Immunology, vol. 133, pág. 3260, 1984) Este procedimiento implica esencialmente la determinación de la concentración del compuesto individual requerida para reducir al 50% la cantidad de reactivos de sustancia P marcada con radioisótopos (SP) en sus sitios receptores en los citados tejidos de vaca aislados o en células IM-9, permitiendo así valores de IC50 característicos para cada compuesto ensayado. Más específicamente, la inhibición de la unión de SP[3H] a células IM-9 humanas por los compuestos, se determina en tampón de ensayo (Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), MnCI2 1 mM, de albúmina bovina al 0,02%, bacitracina (40 µg/ml) leupeptina (4 µg/ml), quimostatina (2 µg/ml) y fosforamídón (30 µg/ml). La reacción se inicia por la adición de células al tampón de ensayo que contiene SP[3H] 0.56 nM y diversas concentraciones de compuestos (volumen total 0.5 ml) e incubación durante 120 minutos a 4°C. La incubación se termina por filtración con filtros GF/B (empapados previamente con polietilenimina al 0.1% durante 2 horas) . La unión no específica se define como la radiactividad restante en presencia de SP 1 mmM. Los filtros se colocan en tubos y se recuentan utilizando un contador de centelleo de líquido. Como alternativa, la actividad anti-inflamatoria de los compuestos de la invención en la periferia de un sujeto mamífero, se 5 demuestra mediante un ensayo de extravasación de plasma inducido por capsaicina, utilizando el procedimiento descrito por A. Nagahisa et al., (European Journal oí Pharmacology, vol. 217, pág. 191-195, 1992). En este ensayo, la actividad anti-inflamatoria se determina como el porcentaje de inhibición de la extravasación de proteína de plasma en el uréter de conejillos 10 de indias Hartley macho (peso 300-350 g) anestesiados con pentobarbital (25 mg/kg intraperitoneal). La extravasación de plasma se induce por inyección intraperitoneal de capsaicina (30 mM en tampón que contiene BSA al 0.1 %, 10 ml/animal) en los animales, que se hicieron ayunar durante una 15 noche. Los compuestos de la invención se disuelven en metilcelulosa al 0.1 %- agua y se administran oralmente 1 hora antes de la inyección de capsaicina. Se administró tinte azul Evans (30 mg/kg) intravenosamente durante 5 minutos antes del ensayo. Los animales se sacrificaron 10 minutos después de la inyección de capsaicina y se extrajeron ambos uréteres derecho e 20 izquierdo. El contenido en tinte en los tejidos se cuantificó por absorbancia a 600 nm después de una extracción con formamida durante la noche. El compuesto preparado en el ejemplo 3 de esta invención mostró una inhibición del 98% a una concentración de 0.03 mg/kg, mientras que el compuesto estructuralmente más cercano del ejemplo 18 de WO 97/08114 mostró un 72% a la misma dosificación. Los efectos adversos de la afinidad de unión al canal de Ca2+ se determinan por el estudio de la unión de verapamil en una preparación de membrana cardiaca de rata. Más específicamente, la unión de verapamil se lleva a cabo como se describió previamente en Reynolds et al., (J. Phannal. Exp. Ther. Vol. 237, pág. 731 , 1986). Resumiendo, se iniciaron las incubaciones mediante la adición de tejido a tubos que contenían desmetoxiverapamil [3H] 0.25 nM y diversas concentraciones de compuestos (volumen total 1 ml). La unión no específica se define como la unión de ligando radiactivo restante en presencia de metoxiverapamil 3-10 µM. La actividad de los compuestos de esta invención contra trastornos del sistema nervioso central se determinó en un ensayo de golpeo inducido por sustancia P [Sar9, Met(02)11] en jerbos utilizando una modificación del procedimiento de N.M.J. Rupniak (European Journal of Pharmacology, vol. 265, pág. 179-183, 1994) y L.J. Bristow (European Journal of Pharmacology, vol. 253, pág. 245-252, 1994). Más específicamente, en primer lugar se administra subcutáneamente un compuesto de esta invención a un jerbo. En segundo lugar se anestesian ligeramente los jerbos con éter y se expone la superficie del cráneo. En tercer lugar se administra sustancia P [Sar9, Met(02)11] (5 µl) directamente en los ventrículos laterales por medio de una aguja de calibre 25 insertada 3.5 mm por debajo de lambda. Después, los jerbos se colocan individualmente en recipientes de 1 litro y se monitoriza el golpeo repetitivo de la pata posterior. La actividad antiemética de los compuestos de esta invención puede demostrarse en ensayos de emesis inducidos por cisplatino en 5 hurones. Se administra subcutáneamente un compuesto de esta invención a hurones (macho, peso corporal= 1.3-1.6 kg) 30 minutos antes de las inyecciones de cisplatino. El cisplatino se inyecta intraperitonealmente a los hurones y se graban sus episodios eméticos (es decir arcadas, vómitos y náuseas) con una cámara de vídeo durante 4 horas. Se cuenta la frecuencia 10 de los episodios. La susceptibilidad al metabolismo de los compuestos de esta invención puede evaluarse mediante un ensayo in vitro que comprende (a) poner en contacto un compuesto muestra con una composición de reactivo preparada por adición de una isozima de citocromo P-450 específica (por 15 ejemplo, CYP2D6) a microsomas de hígado de un metabolizador lento (abreviado como PM) (es decir, microsomas de hígado humano que carecen de la citada isozima específica de citocromo P-450) en un material vehículo, y (b) analizar el sustrato mediante un espectrómetro de masas unido a un dispositivo de HPLC (cromatografía líquida de alta resolución). Más 20 específicamente, se incuba el sustrato (1 µM) con microsoma de hígado humano PM (fabricado por Keystone Skin Bank) complementado con un microsoma recombinante que expresa CYP2D6 (0-0.1 mg/ml) o microsomas vectores de control en presencia de NADP (dinucleótido nicotinamida adenina —f»— jj-*-*ttrrir - -'-- fosfato) 1.3 mM, NADH (dinucleótido nicotinamida adenina reducido) 0.9 mM, MgCI2 3.3 mM y 8 unidades/ml de G-6-PDH (glucosa-6- fosfato deshidrogenasa), respectivamente en un volumen total de 1.2 ml de tampón fosfato de potasio 100 mM. El pH de la disolución es 7.4, y la temperatura de incubación 37°C. A tiempos de incubación específicos (0, 5, 10, 30 y 60 minutos) se extrajo una alícuota de 100µl de la mezcla de reacción y se mezcló con 1 ml de acetonitrilo (ACN) que contenía 5 ng/ml de (2S, 3S) -3- (2-metoxibencilamino)-2-difenilmetil-1 -azabiciclo[2.2.2]octano como estándar interno (preparado según los procedimientos descritos en WO 90/05729). La proteína se precipita a continuación por centrifugación (1.800 g durante 10 minutos) y se toma el sobrenadante resultante. Se analiza la concentración de sustratos y productos en las disoluciones muestra con un espectrómetro de masas Sciex API-lll unido a un sistema HPLC HP1O9O de Hewlett-Packard. Se representan las concentraciones de los sustratos restantes en cada disolución muestra (% restante) frente a los tiempos de incubación deseados. Se obtienen los T 2 en cada gráfica. Se calculan las relaciones de valores T1 2 de los compuestos ensayados (es decir, relación T? 2= (T1/2 de microsoma vectores de control)/(T?/2 de microsoma de hígado humano PM complementado con microsoma que expresa CYP2D6)).

EJEMPLOS La presente invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos. Sin embargo, debe comprenderse que la invención no está limitada a los detalles específicos de estos ejemplos. Los puntos de fusión (pf) se tomaron con un aparato de puntos de fusión Buchi micro y no se corrigieron. Los espectros de absorción infrarroja (IR) se midieron mediante un espectrómetro infrarrojo Shimadzu (IR-470) . Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se midieron en CDCI3 mediante un espectrómetro JEOL RMN (JNM-Gx270, 270 MHz para 1H) a menos que se indique otra cosa y las posiciones de los picos se expresan como partes por millón (ppm) en campos más bajos del tetrametilsilano. Los tipos de pico se indican como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete.

ELEMPL0 1 Preparación de diclorhidrato de (25.35) -3- (6-metoxi-1-metil- trifluorometilisocroman-7-il) metilamino-2-fenilnipiperidina (i) 2- (2-Bromo-5-metoxifenil)etanol Se añadió bromo (0.47 ml, 18.0 mmol) a una mezcla agitada de alcohol 3-metoxifenetílico (1.18 g, 7.8 mmol) y piridina (0.75 ml, 9.3 mmol) en diclorometano seco (10 ml); gota a gota en atmósfera de nitrógeno a 0°C. La disolución naranja se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas (h) La mezcla de reacción se inactivo por adición de disolución acuosa de bisulfito de sodio al 10% y se extrajo con diclorometano Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron dando productos en brutos, que se purificaron por cromatografía en columna de gel de sílice eluida con gradiente de hexano y acetato de etilo (10:1 , 8:1 , 5:1 ) dando el compuesto del titulo en forma de un aceite incoloro (1.5 g, 83.2%). RMN-1H (CDCI3): 7.43 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 6.83 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 6.67 (dd, J=8.8, 3.3 Hz, IH), 3.91-3.81 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.99 (t, J=6.6 Hz, 2H). (ii) 2- (2- (2-Bromo-5-metoxifehil)etox¡)tetrahidropi¡rano Se añadió ácido canforsulfónico (0.3 mmol) a una mezcla agitada de 2-(2-bromo-5-metixofenil)etanol (1.5 g, 6.5 mmol) y dihidropirano (13.0 mmol) en diclorometano seco (30 ml); en atmósfera de nitrógeno a 0°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivo con una disolución saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron dando un producto bruto. Este se purificó por cromatografía en columna con gel de sílice eluida con un disolvente mixto hexano-acetato de etilo (20:1 ) dando el compuesto del título (2.05 g, cuantitativo). RMN-1H (CDCI3): 7.40 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 6.86 (d, J=2.9 Hz, 1 H), 6.65 (dd, J=8.8, 2.9 Hz, 1 H), 4.63-4.60 (m, 1 H), 3.99-3.90 (m, 1 H), 3.82-3.74 ~jss _ x (m, 1 H), 3.78 (s, 3H), 3.68-3.59 (m, 1 H), 3.50-3.45 (m, 1 H), 3.02 (t, J=7.0 Hz, 2H), 1.83-1.52 (m, 6H). (iii) 1.1.1-Trifluoro-2-(4-metoxi-2-(2- tetrahidropiran2-iloxi)et¡l)fen¡l) propan-2-ol Se añadió n-butil-litio (2.5 ml, 4,12 mmol) a una disolución agitada de 2-(2-(2-bromo-5-metoxifenil)etoxi)tetrahidrop¡rano (1.0 g, 3.17 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 ml) ; gota a gota en atmósfera de nitrógeno a -78°C. La mezcla de reacción se agitó a -40°C durante 1 hora. Se añadió a la muestra de reacción una suspensión de cloruro de cerio anhidro (884 mg, 3,58 mmol) en tetrahidrofurano seco (15 ml) gota a gota a -78°C y se agitó durante 1 hora. Se añadió a la mezcla de reacción trifluoracetona (0.5 ml, 5.59 mmol) y la mezcla resultante se agitó a -78°C durante 1 hora. Esto se inactivo con una disolución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron dando productos brutos, que se purificaron por cromatografía en columna de gel de sílice eluida con gradiente de hexano y acetato de etilo (20:1 , 5:1 , 12:1 , 10:1) dando el compuesto del título (555 mg, 50.3%). RMN-1H (CDCI3): 7.35-7.31 (m, 1 H), 6.78-6.74 (m, 2H), 5.70 y 5.62 (cada uno s, total 1 H), 4.63 y 4.48 (cada uno m, total 1 H), 4.18-4.11 y 3.99-3.92 (cada uno m, total 1 H), 3.80 (s, 3H), 3.77-3.43 (m, 3H), 3.33-2.90 (m, 2H), 1.80 y 1.78 (cada uno s, total 3H), 1.75-1.26 (m, 6H). . . _i . (iv) 6-Metox¡-1 -metil-l-trifluorometilisocromano Se agitó una mezcla de 1 ,1 ,1-trifluoro-2-(4-metox¡-2-(2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etil)fenil)-propan-2-ol (470 mg, 1.35 mmol) y ácido clorhídrico concentrado (4 ml) a 120°C durante 3 horas. Después de enfriar se diluyó la mezcla de reacción con agua y se extrajo la capa acuosa con diclorometano. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron dando el compuesto del título en forma de un aceite marrón (460 mg). Este se utilizó sin purificación adicional. (v) 6-Metox¡-1 -metil -1 -trif 1 uorometilisocroman-7-carbaldehído Se añadió cloruro de titanio (IV) a una disolución agitada de 6-metoxi-1 -metil-1 -trífluorometilisocromano (460 mg) en diclorometano seco (5 ml) en atmósfera de nitrógeno a -78°C. Después de 15 minutos se añadió a la disolución amarilla una disolución de éter diclorometilmetílico en diclorometano seco a la misma temperatura. La mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 1 hora, se vertió sobre agua helada y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron dando el producto bruto. Este se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluida con gradiente de hexano y acetato de etilo (10:1 , 8:1 , 6:1 ) dando el compuesto del titulo (179 mg, 48.3% de 1 ,1 ,1-trifluoro-2-(4-metoxi-2-(2-tetrahidropiran-2-ilox¡)etil)fenil)propan-2-ol). ________ _ ________ RMN-1H (CDCI3): 10.41 (s, 1 H), 7.82 (s, 1 H), 6,78 (s, 1 H), 4.19-4.11 (m, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.94-3.87 (m, 1 H), 2.91 (t, J=4.4 Hz, 2H), 1.67 (s, 3H). (vi)l-terc-butoxicarbonil- (2S.3S) -3- (6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7-il)metilam¡no-2-fenilpiperidina Se añadió un exceso molar de triacetoxiborohidruro de sodio a una disolución agitada de 1-terc-butoxicarbonil-(2S,3S)-3-amino-2-fenilpiperidina (0.67 mmol), que se preparó mediante un procedimiento descrito en WO 9703066, y 6-metoxi- 1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7-carbaldehído (184 mg, 0.67 mmol) en diclorometano seco (3 ml); en porciones en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 5 horas. Después se alcalinizó la mezcla por medio de la adición de una disolución saturada de bicarbonato de sodio, se extrajo con diclorometano, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró dando el producto bruto. Este se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluida con gradiente de diclorometano y metanol (50:1 , 25:1 , 20:1) dando el compuesto del título (330 mg, 91.8%). RMN-1H (CDCI3): 7.59-7.55 (m, 2H), 7.34-7.17 (m, 4H), 6.56 (s, 1 H), 5.44 (m, 1 H), 4.16-4.08 (m, 1 H), 3.99-3.84 (m, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.72 y 3.71 (cada uno s, total 3H), 3.06-2.98 (m, 2H), 2.83-2.81 (m, 2H), 1.85-1.61 (m, 4H), 1.63 y 1.61 (cada uno s, total 3H), 1.50-1.40 (m, 1 H), 1.39 (s, 9H). u,* -* . « .. -» ,<*. . . i ¿nab * . * *<*- (vii) Diclorhidrato de (25,35)-3-(6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7-il)metilamino-2-fenilpiperidina Se añadió una disolución metanólica de HCl a una disolución agitada de 1-terc-butoxicarbonil- (2S,3S)-3-(6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7-il) metilamino-2 -fenilpiperidina (325 mg, 0.61 mmol) en acetato de etilo (5 ml); gota a gota en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 8 horas. Se eliminó el disolvente y se recristalizó en etanol dando el compuesto del título (88 mg, 28.4%), p.f.: 193-201 °C. RMN-1H (isómero mayoritario, amina libre, CDCI3): 7.33-7.20 (m, 5H), 6.95 (s, 1 H), 6.43 (s, 1 H) 4.13-4.09 (m, 1 H), 3.92-3.84 (m, 2H), 3.62 (d, J=13.9 Hz, 1 H), 3.51 (s, 3H), 3.33 (d, J=13.9 Hz, 1 H), 3.31-3.24 (m, 1 H), 2.84-2.74 (m. 4H), 2.12-2.07 (m, 1H), 1.94-1.82 (m, 1 H), 1.67-1.62 (m, 1 H), 1.59 (s, 3H), 1.43-1.38 (m, 1 H). La relación diastereoisomérica de epímeros en la posición 1 del anillo de ¡socromano se determinó mediante RMN-1H como 5:1 (1 R:1 S). Estos isómeros son (25,35)-3-[(1 R)-6-metox¡-l-metíl-1-trifluorometilisocroman-7-¡l]metilamino-2- fenilpiperidina y (25,35)-3-[(1S)-6-metoxi-1-metil-l-trifluorometilisocroman-7-il]metilamino-2-fenilpiperidina. El epímero más soluble se recuperó de las aguas madres. La relación diastereoisomérica de epímeros en la posición 1 del anillo de isocromano se determinó mediante RMN-1H como 1 :3 (1 R-1S). La estereoquímica absoluta de los compuestos del título se determinó mediante cristalografía de rayos X del isómero (3R) después de purificación adicional mediante recristalización. RMN-1H (isómero mayoritario, amina libre, CDCI3) : 7.33-7.20 (m, 5H), 6.99 (s, 1 H), 6.40 (s, 1 H), 4.13-4.09 (m, 1 H), 3.92-3.84 (m, 2H), 3.62 (d, J=13.9 Hz, 1 H), 3.45 (s, 3H), 3.33 (d, J=13.9 Hz, 1 H), 3.31-3.24 (m, 1 H), 2.84-2.74 (m, 4H), 2.12-2.07 (m, 1H), 1.94-1.82 (m, 1 H), 1.67-1.62 (m, 1 H), 1.59 (s, 3H), 1.43-1.38 (m, 1 H).

EJEMPLO 2 Diclorhidrato de (25.35)-3-.(1 R)-6-metoxi-1 -metil-1 - trifluorometilisocromano-7-in -metilamino-2-fenilpiperidina (i) 6-Hidroxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano Se añadió HBr acuoso al 48% (300 ml) a una disolución agitada de 6-metoxi-1-metil-l-trifluorometilisocromano (71 g, 0.29 mol) en ácido acético (600 ml) y la mezcla se agitó a 130°C durante 13 horas. Después de eliminar el ácido acético al vacío, la mezcla de reacción se trató con NaOH acuoso (8 M) hasta que el pH llegó a 5-6. La disolución resultante se extrajo con acetato de etilo (400 ml x 2) y los extractos combinados de acetato de etilo se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre MgSO4, y se concentraron al vacío. La cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 15 x 20 cm, acetato de etilo (17%)/hexano) proporcionó el 6-hidroxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano (67 g, 100%) en forma de un aceite incoloro.

RMN-1H (CDCI3): 7.22 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 6.73 (dd, J=9.1 , 2.6 Hz, 1 H), 6.63 (d, J=2.6 Hz, 1 H), 5.00 (s, 1 H), 4.17-4.07 (m, 1H), 3.90 (dt, J=11 , 5.8Hz, 1 H), 2.84-2.78 (m, 2H), 1.64 (s, 3H). (ii) 6-Acetoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano Se añadió cloruro de acetilo (31 ml, 0.44 mol) a una disolución agitada de 6-hidroxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano (79 g, 0.34 mol) y trietilamina (120 ml, 0.88 mol) en THF (680 ml) a 0°C, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se inactivo por adición de HCl 1 N (400 ml) y se extrajo con acetato de etilo (500 ml). Los extractos se lavaron con NaHC03 acuoso saturado (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 15 x 20 cm, acetato de etilo (6%)/hexano) proporcionando 6-acetoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano (83 g, 89%) en forma de un aceite incoloro. RMN-1H (CDCI3) : 7.36 (d, J=7,2 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J= 7.2, 2.5 Hz, 1 H), 6.91 (d, J= 2.5 Hz, 1 H), 4.18-4,08(m, 1 H), 3.92 (dt, J=11 , 5.4 Hz, 1 H), 2.86 (t, J=5.4 Hz, 2H), 2.30 (s, 1 H), 1.66 (s, 3H). (iíi) (1 R) 6-acetoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano v (1S)-6-hidroxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano Se agitó vigorosamente una mezcla del compuesto racémico 6-acetoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano (38.4 g, 0.140 mol), disolución de j .¿ afcita&A sec-butanol al 10% en hexano (1.3 I) y lipasa PS (35 g) a temperatura ambiente durante 23 horas. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida dando una mezcla. Esta se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluida con gradiente de hexano y acetato de etilo (15:1 , 5:1 , 2:1) dando primero (1 R)-6-acetoxi-1 -metil-1 - trifluorometilisocromano en forma de un aceite incoloro (17.3 g, 45%, 94%ee). El espectro de RMN-1H del compuesto era idéntico que el del racemato. La segunda fracción dio (1 S)-6-hidroxi-l-metil-i- trifluorometilisocromano en forma de cristales (16,9 g, 52%, 83%ee). El espectro de RMN-1H de este material era idéntico que el del racemato. (iv) (1 R,-6-hidroxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano Se añadió carbonato de potasio (35.7 g, 0.258 mol) a una mezcla agitada de (IR) -6-acetoxi-1-metil-trífluorometilisocromano (35.5 g, 0.129 mol), metanol (860 ml) y agua (340 ml) a 0°C, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla resultante se acidificó con ácido clorhídrico 2N (pH 3) y se evaporó al vacío para eliminar el metanol. El residuo se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración se concentró el filtrado a presión reducida para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (28.0 g, 93%). Este se utilizó sin purificación adicional. El espectro de RMN-1H de este compuesto era idéntico que el del racemato. fc&l=l¡Ji. , . . __ . . _ t . '-.mL_ as _ -_.» . ^ -. „ _ j S_____????____ _ (v) (1 R) -6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano Se añadió una disolución de (1 R)-6-hidroxi-1-metii-1-trifluorometilisocromano (28.0 g, 0.121 mol) en DMF (370 ml) a una disolución agitada de hidruro sódico (3.47 g, 0.145 mol) en DMF (50 ml) a 0°C, después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivo con agua y se diluyó con cloruro de amonio acuoso saturado. Este se extrajo con acetato de etilo-tolueno (4:1 ). La fracción orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio.

Se eliminó el disolvente al vacío, se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluída con hexano y acetato de etilo (40:1 ) dando el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (29.1 g, 98%). El espectro de RMN-1H de este material era idéntico que el del racemato. (vi) Diclorhidrato de (2S.35)-3-.(1 R)-6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometílisocroman-7-¡l1 metilamino-2-fenilpiperidina El (1 R)-6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocromano anterior se convirtió después en el compuesto del título siguiendo el procedimiento de preparación del ejemplo 3 para proporcionar el compuesto del título en una sola forma diastereoisómera. Rotación óptica: [a]27D=+75.44° (c=0.424, MeOH). - i .

EJEMPLO 3 (BIOTRANSFORMACIÓN MICROBIANA) 6-Metoxi-1 -metil -7- . (2-fenil-p¡peridin-3-ilarr?ino)metip-1 -trifluorometil -isocroman-4 -ol Se añadieron 25 ml de medio IOWA (20 g de dextrosa anhidra, 5 g de extracto de levadura, 5 g de fosfato ácido dipotásico, 5 g de cloruro de sodio, 5 g de harina de soya, 1 I de agua destilada, ajustado a pH 7.2 con ácido sulfúrico 1 N) a cada uno de los 18 matraces Delong de 125 ml con cierres Morton, y las combinaciones resultantes se esterilizan con vapor durante 30 minutos a 220.4 at y 121°C. Dos matraces (etapa de inoculación) se inocularon asépticamente con 0,25 ml de una reserva axénica almacenada criogénicamente (-80°C) de micelio de Streptomyces punipalus (NRRL 3529). Los matraces inoculados se montaron verticalmente en un agitador rotatorio (tiro 5.08 cm) y se agitaron a 210 rpm y 29°C durante 2 días. Después, se transfirieron asépticamente 2.5 ml del caldo de la etapa de inoculación a los 15 matraces restantes (etapa de biotransformación) . Los matraces de biotransformación inoculados se montaron verticalmente en un agitador rotatorio (tiro 5.08 cm) y se agitaron a 210 rpm y 29°C durante 1 día. La sal diclorhidrato de (6-metoxi-1 -metil-1 -trifluorometilisocroman-7-ilmetil)-(2-fenil-piperidin-3-il)amino (es decir, sustrato) se disolvió en agua destilada (6.5 mg/ml). A cada uno de los 15 matraces de biotransformación se añadieron asépticamente 0.75 ml de la disolución resultante para dar una concentración de sustrato inicial de 173 mcg/ml (73.1 mg en total en los 15 matraces) Los matraces dosificados se volvieron a montar verticalmente en el agitador rotatorio y se agitaron a 210 rpm y 29°C durante 4 días más. El progreso de la formación del producto de biotransformación se monitorízó mediante análisis de HPLC en fase reversa de muestras de 1 ml diarias. Al final del periodo de biotrasnformación de 4 días, se añadieron 25 ml de metanol a cada matraz y se mezcló con los contenidos (es decir, el caldo) . La mezcla caldo/metanol resultante de los 15 matraces se reunió. Los matraces se enjuagaron entonces secuencialmente dos veces, una vez con 50 ml de metanol y otra vez con 25 ml de metanol. Los enjuages se reunieron con el extracto anterior dando un volumen total de alrededor de 775 ml. El conjunto caldo/metanol se centrifugó (centrífuga RC5B, 6000 rpm, 8 minutos) para eliminar los sólidos. Se retuvo el sobrenadante (A) - Los sólidos se resuspendieron en 100 ml de metanol, se mezclaron y se centrifugaron como antes. El sobrenadante (B) se combinó con el sobrenadante anteriormente retenido (A) y se filtró al vacío a través de un filtro de fibra de vidrio (Whatman GF/B). A continuación, el filtrado se sometió a destilación a presión reducida a 45°C para eliminar el metanol. Los aproximadamente 300 ml resultantes de disolución acuosa restante se aplicaron con presión de gas nitrógeno (440.9 at) a un cartucho de resma C18 preparada (Biotage KP-C18-WP, 20-40 µM) con fines de extracción en fase sólida (SPE). [El cartucho se preparó para la carga del compuesto lavándolo primero con 1250 ml de metanol y después lavándolos con 2250 ml de agua destilada]. Después de la carga, la columna se lavó con 2050 ml de agua destilada para eliminar el material no retenido. La columna j-taL cargada se lavó con 975 ml de una disolución de metanol al 50% (1 :1 MeOH/H20) para eliminar el material indeseado. El compuesto de interés se eluyó con 975 ml de metanol. El eluido se sometió a destilación a presión reducida a 45°C para eliminar el metanol. El material restante después de la eliminación del metanol se disolvió en una disolución al 20% en agua y se cargó al vacío en un cartucho de resma C18 (Waters Sep-Pack 6 ce (Ig) C18) para SPE. [El cartucho se preparó para la carga lavándola primero con 15 ml de metanol y después con 15 ml de agua destilada]. El cartucho de SPE cargado se purgó de compuestos no retenidos con 20 ml de una disolución de metanol al 20% en agua. Los compuestos unidos a la resma se eluyeron con volúmenes de 10 ml de disoluciones de metanol en agua de fuerza creciente de disolvente (50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100%). Casi todo el compuesto de interés eluyó del cartucho de SPE en los eluidos de metanol al 60-70% (pequeñas cantidades en el eluido del 55%). Los eluyentes que contenían el compuesto del título se reunieron y se llevaron a sequedad a 45°C mediante una corriente de gas nitrógeno. Durante el secado, se, añadió el etanol anhidro necesario para eliminar el agua. El producto bruto seco pesó 59 mg. Se disolvió en metanol al 75% en agua y se sometió a cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (procedimiento HPLC 1 ) para aislar el compuesto del título. -t? *A.-_. __.í_-? .

El compuesto del título tenía un tiempo de retención de aproximadamente 17.3. Las fracciones de fase móvil de HPLC eluidas que contenían el compuesto del título se recogieron, el disolvente de las mismas (acetonitrilo) se eliminó a vacío a 45°C y se cargaron en un cartucho SPE nuevo (Waters 6cc C18, preparación como se describe previamente), que se lavó con agua destilada para eliminar la sal y que se eluyó con 10 ml de metanol. Este eluido se concentró hasta sequedad bajo corriente de N2 gaseoso. El material seco se disolvió en un disolución al 50% de metanol/agua y se sometió a cromatografía líquida de alta resolución en tase reversa (Procedimiento HPLC 2) para aislar el compuesto del título.

El compuesto del título tenía un tiempo de retención de aproximadamente 21.8 minutos. Las fracciones de fase móvil de HPLC eiuidas que contenían el compuesto del titulo se recogieron en un recipiente que contenía 20 ml de tampón acetato de amonio (fase móvil acuosa del procedimiento HPLC 1 ). Se eliminó el disolvente (acetonitrilo) del conjunto de fracciones de HPLC recogidas que contenían el compuesto del título a vacío a 45°C, cargándose dicho conjunto de fracciones en un cartucho SPE nuevo (Waters 6cc C18, preparación como se describe previamente), que se lavó con 20 ml de agua destilada para eliminar sales y que se eluyó con 10 ml de metanol. Se eliminó el disolvente del eluido de metanol mediante una corriente de gas nitrógeno a 45°C. El material seco se disolvió en etanol anhidro y se llevó a sequedad a presión reducida. Se obtuvo un total de 19.3 mg del compuesto del título. El rendimiento molar total del proceso fue del 29.7%.

El compuesto del título tenía un tiempo de retención de 13.9 minutos en el procedimiento HPLC 3. El compuesto precursor tenía un tiempo de retención de 17.5 minutos en este procedimiento.

Tenía los máximos de absorbaricia de luz ultravioleta a 205 nm, 229 nm (sólo un hombro) y 280 nm. MS(APCI+): 451.3 (M+H).

EJEMPLO 4 (BIOTRANSFORMACION MICROSOMAL) 6-Metoxi-1 -metil-7-r(2-fenil-piperidin-3-ilamino)metin-1 • trifluorometilisocroman-4-ol Una alternativa a la síntesis por biotransformación microbiana (ejemplo 3) puede conseguirse utilizando una mezcla de reacción microsomal de células recombinantes. La reacción contiene los siguientes componentes: 700 µl tampón fosfato de potasio (pH 7.4) 100 mM 200 µl disolución de cofactor 20 µl compuesto precursor 15 mM disuelto en agua destilada 80 µl microsomas de células de insecto infectadas con baculovirus que coexpresan el P-450 humano (CYP2D6) y citrocromo humano P450- NaDPH reductasa.

Tampón fosfato de potasio 100 mM 8.1 ml K2HPO4 100 mM en agua destilada 1.9 ml KH2P04 100 mM en agua destilada Disolución de cofactor 4 mg NADP+ (por ejemplo Sigma N-0505) 75 mg ácido isocítrico (por ejemplo Sigma 1-1252) 198 ml isocitrico deshidrogenasa (por ejemplo Sigma I-2002) 802 ml MgCI2 125 mM en agua destilada Los componentes de la reacción se añadieron a un tubo 10 de ensayo de vidrio de 16 x 125 mm con un cierre Morton de acero inoxidable. El tubo se incubó en un agitador rotatorio (tiro 2.54 cm) a 240 rpm y 37°C. Se monitorizó el progreso de la reacción 0, 5, y 24 horas después de la iniciación mediante análisis utilizando HPLC de fase reversa (procedimiento 3, descrito en el ejemplo 3) . Para parar la reacción y preparar la muestra para el análisis se añadió una muestra de 250 ml a 250 ml de metanol, se mezcló, se enfrió en hielo durante 15 minutos y se centrifugó (microcentrífuga Eppendorf, 14.000 rpm, 5 minutos) para eliminar las proteínas precipitadas. La reacción . t ___.&_____**__ . - _Li. se completó en 5 horas después de la iniciación. La conversión molar se calculó en un 9,9%. Las características HPLC y APCI+ (Espectrometría de masas por ionización química a presión atmosférica) del producto eran las mismas que las del compuesto del título del ejemplo 3. £ ? *é i s s . ski

Claims (8)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES Un compuesto de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, en las que R1 es un alquilo C-?-C6, R2 es hidrógeno, alquilo C-i-Cß, halo alquilo Ci-Cß o fenilo, R3 es hidrógeno o 15 halo, y R4 y R5 son independientemente hidrógeno, alquilo C-i-Cß o haloalquilo
2. 2.- Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que R1 es un alquilo C1-C3, R2 es hidrógeno, alquilo C1-C3, haloalquilo C1-C3 o fenilo, R3 es hidrógeno o flúor, y R4 y R5 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C3 20 o haloalquilo C C3. 3.- Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es metilo, R2 es hidrógeno, metilo, trifluorometilo o fenilo, R3 es hidrógeno y R4 y
3. R5 son hidrógeno.
4. 4.- Un compuesto según la reivindicación 1 que es (2S,3S)-3-(6-metoxi-4-hidroxi-1-metilo-1-trifluoromet¡lisocroman-7-il)metilamino-2-fenilpiperidina o una sal farmacéuticamente aceptable de ésta.
5. 5. Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno o afección para el que se necesita actividad antagonista hacia la sustancia P, en un mamífero, que comprende una cantidad del compuesto de la reivindicación 1 , o de una sal farmacéuticamente aceptable de éste, que es eficaz en el tratamiento de dicho trastorno o afección, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
6. 6. Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno o afección seleccionado entre distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postraumático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis, quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylori, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias y trastornos de memoria, trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, neuralgia, neuropatía periférica, trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes, cistitis, enfermedad del intestino inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fascioliasis eosinofilica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sistémico eritematoso en un mamífero, que comprende una cantidad del compuesto de la reivindicación 1 , o de una sal farmacéuticamente aceptable de éste, que es eficaz en el tratamiento de dicho trastorno o afección, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. 7.- El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la elaboración de un medicamento para tratar un trastorno o afección para el que se necesita una actividad antagonista hacia la sustancia P, en un mamífero.
8. 8.- El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la elaboración de un medicamento para tratar un trastorno o afección seleccionado entre distimia, trastorno depresivo grave, depresión pediátrica, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de pánico, fobias como fobia social y agorafobia, trastorno del estrés postraumático, trastorno de personalidad límite, dolor agudo, dolor crónico, migraña, angiogénesis, quemaduras de sol, incontinencia urinaria, trastornos inflamatorios como artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma y trastornos alérgicos, emesis, incluyendo emesis aguda, retrasada, y anticipada, en la que el agente o estado emético es quimioterapia, radiación, cirugía, movimiento, migraña o cualquier otro agente o estado emético, trastornos causados por Helicobacter pylorí, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, inflamación del tracto urinario, psicosis, esquizofrenia, trastornos de conducta, trastornos de comportamiento disruptivo, trastorno dipolar, trastornos del movimiento como el síndrome de Tourette, síndrome de rigidez acinética, trastornos del movimiento asociados con la enfermedad de Parkinson, disquinesia tardía y otras disquinesias, trastornos cognitivos tales como demencias y trastornos de memoria, trastornos alimentarios como anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, trastorno de hiperactividad con déficit de atención, síndrome de la fatiga crónica, eyaculación precoz, síndrome premenstrual, trastorno disfórico premenstrual, dependencias y adiciones a sustancias químicas, trastornos somáticos relacionados con el estrés, neuralgia, neuropatía periférica, trastorno de reflujo gastroesofágico, distrofia simpática refleja como síndrome del hombro/mano, trastornos de hipersensibilidad como a la hiedra venenosa, fibromialgia, angina, enfermedad de Reynaud, enfermedades reumáticas como fibrositis, eczema, rinitis, alergias, neuralgia post-herpes, cistitis, enfermedad del intestino inflamado, síndrome del intestino irritable, colitis, trastornos fibrosos y del colágeno como escleroderma y fasciolasis eosinofílica, trastornos del flujo sanguíneo debidos a vasodilatación, y trastornos relacionados con el aumento o supresión inmune como lupus sistémico eritematoso en un mamífero.