SK285819B6 - Derivát 1-trifluórmetyl-4-hydroxy-7- piperidinylaminometylchromanu, jeho použitie a farmaceutická kompozícia s jeho obsahom - Google Patents

Abstract

Opisuje sa derivát 1-trifluórmetyl-4-hydroxy-7- piperidinylaminometylchromanu všeobecného vzorca (I) a jeho farmaceuticky prijateľné soli, kde R1 znamená C1-C6 alkyl; R2 znamená vodík, C1-C6 alkyl, halogén(C1-C6 )alkyl alebo fenyl; R3 znamená vodík alebo halogén a R4 a R5 každý nezávisle znamená vodík, C1-C6 alkyl alebo halogén (C1-C6 )alkyl, jehopoužitie a farmaceutická kompozícia s jeho obsahom, ktorá je užitočná na liečenie chorôb CNS, gastrointestinálneho systému a ďalších chorôb.

Description

Vynález sa vzťahuje na nové deriváty 1 -trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylaminometylchromanu a ich farmaceutický prijateľné soli, farmaceutické kompozície obsahujúce uvedené zlúčeniny a použitie uvedených zlúčenín ako antagonistov substancie P.

Doterajší stav techniky

Substancia P je prirodzene sa vyskytujúci undekapeptid patriaci do rodiny tachykinínových peptidov, označovaných tak pre ich okamžitý stimulačný účinok na tkanivo hladkého svalu. Špecifickejšie je substancia P farmaceutický aktívny neuropeptid produkovaný cicavcami (prvotne izolovaný z čreva), ktorý má charakteristickú sekvenciu aminokyselín opísanú autormi Veber D. F. a sp., v U. S. patente 4, 680, 283. Značné zastúpenie substancie P a ďalších tachykinínov v patofyziológii veľa chorôb bolo v odbore široko preukazované. V súčasnosti bolo napríklad preukázané, že substancia P je zahrnutá v transmisii bolesti alebo v migréne a rovnako tak v chorobách centrálneho nervového systému, ako je úzkosť a schizofrénia, v respiračných a zápalových chorobách, ako je astma a reumatoidná artritída a v gastrointestinálnych poruchách a chorobách Gl traktu, ako je ulcerózna kolítída, syndróm dráždivého bedrovníka, Crohnova choroba atď. Taktiež je opísané, že antagonisty tachykinínu sú prostriedkami vhodnými na liečbu kardiovaskulárnych chorôb, alergických stavov, imunoregulácií, vazodilatácii, k liečbe bronchospazmov, k reflexnému alebo neuronálnemu riadeniu vnútorných orgánov, senilnej demencie Alzheimerova typu, emézy, popálenín slnkom a infekcií Helicobacter pylori.

V európskej patentovej prihláške 840, 732, publikovanej 13. mája 1998 a medzinárodnej patentovej prihláške PCT/IB97/01466 podanej 19. novembra 1997, sú opísané rôzne substituované piperidínové zlúčeniny zahrnujúce piperidínové zlúčeniny majúce substituent na kondenzovanej kruhovej časti zahrnujúcej atóm kyslíka, ktoré sú antagonistami substancie P.

Stále sú však žiaduce antagonisty substancie P majúce zlepšenú účinnosti a menej vedľajších účinkov.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu je derivát 1 -trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylamino-metylchromanu všeobecného vzorca (I)

a jeho farmaceutický prijateľné soli, kde

R¹ znamená C_rC₆alkyl;

R² znamená vodík, C_rC₆alkyl, halogén (€,-€<,) alkyl alebo fenyl;

R³ znamená vodík alebo halogén; a

R⁴ a R⁵ každý nezávisle znamená vodík, Ci-C₆alkyl alebo halogén (C_rC₆) alkyl.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) obsahujú najmenej dve chirálne centrá a preto môžu existovať vo forme najmenej dvoch diastereomémych párov zahrnujúcich epiméry. Vynález zahrnuje tak jednotlivé izoméry zlúčenín všeobecného vzorca (I) ako zmesi dvoch alebo viacej takých izomérov.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa vynálezu majú výhodne na piperidínovom kruhu konfiguráciu (2S, 3S).

Prevedenie podľa vynálezu zahrnujú zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R¹ znamená Ct-C3alkylovú skupinu; R² skupinu zo skupiny zahrnujúcej vodík, CpCjalkyl, halogén(CrC₃)alkyl alebo fenyl; R³ znamená vodík alebo fluór; a R⁴ a R⁵ každý nezávisle znamená skupinu zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C₃alkyl alebo halogén (Cj-C₃) alkyl.

Ďalšie prevedenie podľa vynálezu zahrnujú zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R¹ znamená metylovú skupinu; R² skupinu zo skupiny zahrnujúcej vodík, metyl, trifluórmetyl alebo fenyl; R³ znamená vodík; a R⁴ a R⁵ každý znamená vodík.

Konkrétnou výhodnou zlúčeninou všeobecného vzorca (1) je (2S, 3S)-3-(6-metoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochróman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidín alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú vhodné ako prostriedky s antagonizujúcimi účinkami proti substancii P a z toho dôvodu sú vhodné na liečenie chorôb alebo stavov zo skupiny zahrnujúcej dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, spáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritida, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu, ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptívnu poruchu správania, bipolárnu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu, a ďalšie dyskinézy; kognitivne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencií v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premenštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitívne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reynaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitída; ekzém, rinitida, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitidu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fibri

SK 285819 Β6 nózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofilná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potláčanou imunitou, ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca, najmä u človeka. Uvedené zlúčeniny sú zvlášť vhodné ako protizápalové prostriedky alebo ako antiemetiká alebo ako prostriedky na liečbu chorôb CNS.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú zvlášť vhodné na liečbu emézy, zahrnujúcu emézu akútnu, oddialenú alebo anticipovanú, ako je eméza alebo nauzea vyvolaná chemoterapiou, ožiarením, operáciou, tehotenstvom, pohybom, vestibulámymi poruchami, toxínmi, migrénou a zmenami intrakraniálneho tlaku. Najšpecifickejšie sú zlúčeniny podľa vynálezu vhodné na liečbu emézy vyvolanej antineoplastikami zahrnujúcimi prostriedky používané k liečbe rakoviny, a emézy vyvolané inými farmakologickými prostriedkami, ako je rolipram alebo morfín. Uvedené zlúčeniny sú taktiež vhodné na liečenie chronickej a akútnej bolesti zahrnujúcej hyperalgéziu, neuropatickú bolesť, postoperatívnu bolesť a bolesť spojenú s nervovým poškodením.

Vynález taktiež zahrnuje farmaceutickú kompozíciu vhodnú k liečbe choroby alebo stavu u cicavca, u ktorého je žiaduca antagonistická aktivita proti substancii P, ktorá obsahuje zlúčeninu vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v množstve účinnom na liečenie uvedenej choroby alebo stavu, a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález taktiež zahrnuje derivát všeobecného vzorca (I) na použitie na liečenie choroby alebo stavu cicavca, u ktorého jc žiaduca antagonistická aktivita proti substancii P.

Vynález taktiež zahrnuje farmaceutickú kompozíciu na liečenie choroby alebo stavu zvoleného zo skupiny zahrnujúcej dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, popáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritída, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu, ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptívnu poruchu správania, bipolámu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu, a ďalšie dyskinézy; kognitívne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencií v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premenštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitívne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reynaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitída; ekzém, rinitída, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitídu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fibrinózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofilná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potlá čanou imunitou, ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca, najmä u človeka obsahujúcej zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v množstve účinnom na liečenie uvedenej choroby alebo stavu a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa taktiež vzťahuje na derivát všeobecného vzorca (I) na použitie na liečenie choroby alebo stavu zvoleného zo skupiny zahrnujúcej dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, spáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritída, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu, ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptívnu poruchu správania, bipolámu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu a ďalšie dyskinézy; kognitívne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencií v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premeňštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitívne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reynaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitída; ekzém, rinitída, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitídu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fibrinózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofilná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potláčanou imunitou, ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca, najmä u človeka.

Výraz „liečenie“ použitý v tomto texte sa vzťahuje na reverziu, zmiernenie, inhibíciu progresie alebo prevenciu choroby alebo stavu, ku ktorému sa uvedený výraz vzťahuje, alebo jedného, alebo viacej syndrómov tejto choroby nie stavu. Výraz „liečba“ použitý v tomto texte sa vzťahuje k prevedeniu uvedeného liečenia tak, ako je „liečenie“ opísané.

Výraz „halogén“ znamená F, Cl, Br a I, výhodne Cl alebo F.

Výraz „alkyl“ použitý v tomto texte znamená nasýtené skupiny s priamym alebo s rozvetveným reťazcom, ktoré zahrnujú, ale bez obmedzenia len na ne, metyl, etyl, propyl, izopropyl a terc-butyl.

Výraz „halogén (C;-C_Ď) alkyl“ použitý v tomto texte znamená CpQalkylovú skupinu s priamym, rozvetveným alebo cyklickým reťazcom substituovanú jedným alebo viacej (výhodne jedným až siedmimi) atómami halogénu. Uvedené skupiny zahrnujú, ale bez obmedzenia len na ne, trifluórmetyl, difluórmetyl, trifluóretyl, pentafluóretyl, trifluórizopropyl, tetrafluórizopropyl, pentafluórizopropyl, hexafluórizopropyl a podobne.

Nasleduje podrobný opis vynálezu.

Uvedené piperidinylaminometyl(trifluórmetyl)cyklické étery všeobecného vzorca (I) podľa vynálezu je možné pripraviť spôsobmi opísanými v uvedených schémach a nasledujúcom opise. Pokiaľ nie je uvedené inak, v uvedených schémach a opise majú R¹, R², R³, R⁴ a R³ opísaný význam a Z znamená vodík alebo chrániacu skupinu amínovej skupiny.

Schéma 1 znázorňuje spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (VI), ktoré je možné previesť na zodpovedajúce metabolity biotransformačnými opísanými spôsobmi. Zlúčeniny všeobecného vzorca (VI) je možné pripraviť redukčnou alkyláciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II) zlúčeninou všeobecného vzorca (III).

Schéma 1

Zlúčeninu všeobecného vzorca (VI), v ktorej z znamená vodík alebo skupinu chrániacu amínovú skupinu a Q znamená R⁴ alebo R⁵, ktoré majú uvedený význam, je možné pripraviť redukčnou alkyláciou aminozlúčeniny všeobecného vzorca (II) so zlúčeninou všeobecného vzorca (III) známymi spôsobmi, ako sú spôsoby opísané v medzinárodnej patentovej publikácii č. WO 97/03066. Reakciu je možno previesť v prítomnosti vhodného redukčného prostriedku v rozpúšťadle pre reakciu inertnom. Vhodné redukčné prostriedky zahrnujú napríklad hydridy boru, ako je triacetoxyhydrogenboritan sodný (NaB(OAc)₃H), tetrahydroboritan sodný (NaBH₄) a kyántrihydrogenboritan sodný (NaBH₃CN), borány, hydrid lítno-hlinitý (LiAlH₂) a trialkylsilány. Vhodné rozpúšťadlá zahrnujú poláme rozpúšťadlá, ako je metanol, etanol, dichlórmetán, tetrahydrofurán (THF), dioxán a etyl-acetát. Reakciu je možno previesť pri teplote od -78 °C do teploty spätného toku použitého rozpúšťadla, výhodne od 0 do 25 °C, pri čase reakcie 5 minút až 48 hodín, výhodne 0, 5 až 12 hodín. Zlúčeniny všeobecného vzorca (VI), kde Q má iný význam ako vodík, sa výhodne pripraví reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II) so zlúčeninou všeobecného vzorca (III), kde W znamená vhodnú acylovú skupinu. Táto reakcia sa prevedie v prítomnosti redukčného prostriedku, ako je NaBH₃CN a Lewisova kyselina, ako je chlorid ciničitý (TiCl₄) v rozpúšťadle pre reakciu inertnom, ako je dichlórmetán (Tetrahedron Letter, Vol. 31, str. 5547, 1990). Keď Z znamená skupinu chrániacu amínovú skupinu, uvedenú chrániacu skupinu amínovej skupiny je možné po redukčnej alkylácii sňať spôsobmi známymi v odbore (pozri napr. Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene a sp., John Wiley & Sons, Inc., 1991) a získať tak zlúčeninu všeobecného vzorca (VI). Konkrétne, keď Z terc-butoxykarbonylovú skupinu (skracuje sa na „Boe“), Boe je možno odstrániť reakciou v prítomnosti kyseliny, ako je HCl v rozpúšťadle pre reakciu inertnom, ako je metanol v inertnej atmosfére (napr. v atmosfére dusíka).

Východiskovú zlúčeninu všeobecného vzorca (II) možno pripraviť zavedením chrániacej skupiny na dusík (2S, 3S)-3-amino-2-fenylpiperidínovej zlúčeniny, ktorú je mož né pripraviť spôsobmi známymi v odbore opísanými napríklad v medzinárodnej patentovej publikácii č. WO 92/17449. Zavedenie chrániacej skupiny na dusík piperidínového kruhu zlúčenín všeobecného vzorca (II) je možné previesť spôsobmi známymi v odbore, ako sú napríklad spôsoby opísané v medzinárodnej patentovej publikácii č. WO 97/03066. Vhodná chrániaca skupina je napríklad Boe (terc-butoxykarbonyl), benzyloxykarbonyl (Cbz) alebo trifluóracetyl. Zavedenie chrániacej skupiny Boe je možné previesť napríklad spracovaním (2S,3S)-3-amino-2-fenyl-piperidínovej zlúčeniny s (t-BuOCO)₂O v prítomnosti bázy, ako je hydroxid sodný, hydrogenuhličitan sodný alebo trietylamín.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (III) je možné pripraviť formyláciou alebo acyláciou zlúčenín všeobecného vzorca (IV) spôsobom znázorneným v schéme 2.

Schéma 2

Je možné použiť známe spôsoby formylácie a acylácie. Priamu formyláciu je možné napríklad previesť uvedením zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) s vhodným formylačným prostriedkom v prítomnosti vhodného katalyzátora. Vhodné systémy obsahujúce formylačný prostriedok/katalyzátor zahrnujú dichlórmetyl(metyl)éter/chlorid titaničitý (CH₂CHOCH₃/TiCl₄), kyselinu trifluóroctovú (CF₃CO₂H)/hexa-metyléntetramín (modifikované podmienky podľa Duffa) a oxychlorid fosforečný (POC1₃)/DMF (podmienky podľa Vilsmciera). Špecifickejšie, formyláciu zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) pomocou CH₂CHOCH₃/TiCL₄ je možno previesť v rozpúšťadle pre reakciu inertnom v atmosfére dusíka. Vhodné rozpúšťadlá zahrnujú dichlórmetán a 1,2-dichlóretán pri teplote od asi -120 °C do izbovej teploty pri čase reakcie od asi 1 minúty do 10 hodín, výhodne pri -78 °C po 5 minút až 4 hodiny. Duffovu reakciu je možno taktiež aplikovať na formyláciu za podmienok reakcie opísaných v medzinárodnej patentovej publikácii WO 94/24081.

Vhodnú nepriamu formyláciu je možné taktiež previesť spôsobom, ktorý zahrnuje i) halogenáciu zlúčeniny všeobecného vzorca (IV), ii) substitúciu atómu halogénu kyánovou skupinou a potom iii) podrobenie získanej kyánovej skupiny substituovanej zlúčeniny redukcii. Uvedenú halogenáciu (i) je možné previesť známymi spôsobmi, ako sú spôsoby opísané autormi G. A. Olah a sp., (J. Org. Chem., Vol. 58, str. 3194-, 1983). Uvedenú substitúciu (ii) atómu halogénu kyánovou skupinou je možné previesť známymi spôsobmi, ako sú spôsoby opísané autormi D. M. Tschaem a sp., (Synth. Commun., Vol. 24, str. 887-, 1994) alebo K. Takagi a sp., (Bull. Chem. Soc. Jpn., Vol. 64, str. 1118-, 1991). Uvedenú redukciu (iii) vhodnú na uvedený účel možno previesť v prítomnosti diizopropylalumíniumhydridu (DIBAL-H) v dichlórmetáne alebo pomocou Raneyova niklu v kyseline mravčej.

Acyláciu je možné previesť všeobecne známym Fridcl-Craftsovým acylačným spôsobom opísaným napríklad v Advanced Organic Chemistry, Jerry March, John Wiley & Sons, 4. vydanie, 1992, str. 539 a práce tam citované. Špecifickejšie, zlúčeninu všeobecného vzorca (IV) je možné podrobiť reakcii s acylačným prostriedkom v prítomnosti kyslého katalyzátora a získať tak zlúčeninu všeobecného vzorca (III). Vhodné acylačné prostriedky zahrnujú acylchlorid, acylfluorid a anhydridy, výhodne acylchlorid. Vhodné kyslé katalyzátory zahrnujú kyselinu sírovú a Lewisovu kyselinu, ako je chlorid hlinitý, výhodne sa použije chlorid hlinitý. Uvedená reakcia sa zvyčajne prevedie pri teplote od asi -10 °C do izbovej teploty pri čase reakcie asi 5 minút až 2 hodiny, výhodne sa prevedie pri 0 “C po asi 1 hodinu.

Cyklický éter všeobecného vzorca (IV) je možno pripraviť zo zlúčenín všeobecných vzorcov (Va) alebo (Vb) známymi spôsobmi, ako sú spôsoby opísané v práci autorov W. E. Parham a sp., (J. Org. Chem., Vol. 39, str. 2048, 1974) alebo spôsobmi znázornenými v schéme 3.

Schéma 3 pôsob A:

Podľa spôsobu A v schéme 3 je možné zlúčeninu všeobecného vzorca (IV) pripraviť zo zlúčeniny všeobecného vzorca (Va), kde Y¹ znamená Br, I alebo Cl (výhodne Br) a Y² znamená vodík alebo chrániacu skupinu hydroxylovej skupiny (vhodne tetrahydropyranyl skrátene označovaný ako „THP“). Zlúčeninu všeobecného vzorca (Va) je možné metalovať spracovaním s organokovovou zlúčeninou. Reakčnú zmes je potom možné následne spracovať s karbonylovou zlúčeninou vzorca CF₃C(=O)R² a získať tak diol (Vc). Ak je to žiaduce, je možné skupinu Y² chrániacu hydroxylovú skupinu diolu (Vc) sňať. Potom je možné diol (Vc) podrobiť cyklizácii a získať tak derivát cyklického éteru (IV).

Metaláciu zlúčeniny všeobecného vzorca (Va) je možné previesť pomocou organokovových zlúčenín, ako je butyllítium, sek-butyllítium alebo terc-butyllítium. Uvedenú metaláciu a následnú reakciu s CF₃C(=O)R² je možno previesť reakciou v inertnom rozpúšťadle, ako je THF, éter a hexán, v inertnej atmosfére, napríklad v atmosfére dusíka, pri teplote od asi -150 °C do izbovej teploty, pri čase reakcie asi 15 minút až 12 hodín, výhodne sa prevedie pri -120 °C až -30 °C po 10 minút až 6 hodín. Chránenie hydroxylovej skupiny a sňatie chrániacej skupiny Y² možno previesť za vhodných podmienok závislých od zvolenej chrániacej skupiny spôsobmi známymi v odbore (pozri napr. Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene a sp., John Wiley & Sons, Inc.).

Cyklizáciu diolu (Vc) je možno previesť známymi spôsobmi v prítomnosti kyseliny, opísanými napríklad v práci autorov W. E. Parham a sp., (Synthesis, str. 116-, 1976) alebo D. Seebach a sp., (Chem. Ber., Vol. 116, str. 8354-, 1994). Vhodné kyseliny sú napríklad HC1, H₂SO₄ alebo kyselina p-toluénsulfónová, alebo trifluóroctová (skrátene uvádzaná ako TFA). Reakciu je možno previesť pri teplote od asi izbovej teploty do asi 200 °C po asi 10 minút až 12 hodín, výhodne pri asi 60 °C do 150 °C po asi 30 minút až 6 hodín.

Alternatívne je možné cyklizáciu previesť spôsobmi známymi ako reakcie podľa Mitsunobu alebo spôsobmi opísanými autormi J. R. Falck a sp. (J. Am. Chem. Soc., Vol. 116, str. 8354-, 1994). Napríklad reakciu podľa Mitsunobu je možno previesť pomocou trifenylfosfín/dietylazodikarboxylátu vo vhodnom rozpúšťadle ako je dichlórmetán v atmosfére dusíka pri asi 0 °C a čase reakcie asi 5 minút až 6 hodín.

Podľa spôsobu B v schéme 3 je možno derivát cyklického éteru všeobecného vzorca (IV) pripraviť spracovaním zlúčeniny všeobecného vzorca (Vb), kde Y³ znamená odštiepiteľnú skupinu v jednostupňovej cyklizácii s CF3C(=O)R² v prítomnosti vhodnej bázy (pozri napr. J. Org. Chem., Vol. 41, str. 1184-, 1976). Vhodné odštiepiteľné skupiny zahrnujú Cl, Br, tosylát, mesylát a triflát. Vhodné bázy zahrnujú alkyllítiové zlúčeniny, ako je n-BuLi, sek-Buli alebo terc-Buli. Reakciu je možno napríklad previesť tak, že najprv sa zlúčenina všeobecného vzorca (Vb) spracuje s n-BuLi vo vhodnom rozpúšťadle pre reakciu inertnom, ako je THF/hexán v atmosfére dusíka pri asi -120 °C až 0 °C a počas asi 5 minút až asi 12 hodín, výhodne pri -100 °C až 60 °C počas asi 10 minút až asi 6 hodín. Potom sa k reakčnej zmesi pridá karbonylová zlúčenina CF3C(=O)R² a teplota sa potom zvýši na asi -50 °C až na izbovú teplotu.

Inakšie, východiskové zložky všeobecných vzorcov (Va) a (Vb), kde R¹ znamená metylovú skupinu, je možno pripraviť napríklad bromáciou známych, obchodne dostupných anizolových zlúčenín do polohy para, ktorá sa prevedie známymi spôsobmi (pozri napr. J. Org. Chem., Vol. 58, str. 7507-, 1993, a J. Org. Chem., Vol. 46, str. 118-, 1981).

Alternatívne, ďalšie spôsoby prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (VI) sú uvedené v súčasne prejednávanej prihláške U. S. čj. 60/160226, podanej 18. októbra 1999, ktorá je celkom včlenená do tohto textu odkazom.

Pokiaľ nie je uvedené inak, tlak nie je v uvedených reakciách kritickým parametrom. Všeobecne sa uvedené reakcie prevedú pri tlaku asi 1 až troch atmosfér (101, 325 kPa až 303, 975 kPa), výhodne pri tlaku miestnosti (asi 1 atm, t.j. 101,325 kPa).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (VI) a medziprodukty uvedené v uvedených reakčných schémach sa izolujú a prečisťujú zvyčajnými spôsobmi, ako je rekryštalizácia alebo separácia chromatografickými spôsobmi.

Ako je uvedené, zlúčeniny všeobecného vzorca (I) je možno pripraviť biotransformáciou zlúčenín všeobecného vzorca (VI), ktorých sú metabolitmi.

Biotransformáciu je možno previesť, ako bude zrejmé pracovníkom v odbore, uvedením zlúčeniny určenej k transformácii a ďalších potrebných zložiek reakcie do styku s enzýmami odvodenými od rôznych živočíšnych zložiek za podmienok vhodných na chemickú interakciu. Následne sa produkty reakcie separujú a vhodné produkty sa čistia a následne hodnotia z hľadiska ich chemickej štruktúry a fyzikálnych a biologických vlastností. Uvedené enzýmy môžu byť vo forme čistých reagencií, vo forme surových extraktov alebo lyzátov, alebo vo forme intaktných buniek, a môžu byť v roztoku, v suspenzii (napr. intaktné bunky), môžu byť kovalentne naviazané na nosný povrch, alebo môžu byť včlenené do permeabilnej matrice (napr. do agarózového alebo alginátového lôžka). Substrát a ďalšie potrebné reaktanty (napr. voda, vzduch) sa privádzajú tak, ako je potrebné na chemickú reakciu. Obecne sa reakcia preve die v prítomnosti jednej alebo viacej tekutých fáz, vodnej a/alebo organickej, prispievajúcej k hmotnostnému prenosu reaktantov a produktov. Reakciu je možno previesť za aseptických podmienok alebo bez týchto podmienok. Podmienky na sledovanie priebehu reakcie a spôsoby izolácie produktov reakcie sa budú líšiť v závislosti od fyzikálnych a chemických vlastností vstupných zložiek a produktov reakcie.

Nasledujúci postup predstavuje spôsob aeróbnej biotransformácie v laboratórnom meradle, ktorý môžu pracovnici v odbore použiť na prípravu požadovaných zlúčenín. Do jednej alebo viacej kultivačných nádobiek (napríklad fermentačných skúmaviek alebo baniek) sa vnesie živná pôda (napr. IOWA Médium: dextróza, kvasnicový extrakt, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, sójová múčka, voda, neutrálna hodnota pH) a prevedie sa sterilizácia parou. Potom sa každá nádobka aseptický inokuluje inokulátom kultivovaným na agare, suspenziou premytých buniek alebo spór, alebo tekutým nutričným médiom obsahujúcom biotransformačný mikroorganizmus. Potom sa banky upevnia na trepačku určenú k fcrmentácii (pracujúcou napr. rýchlosťou 100 - 300 ot/min.) pri vhodnej teplote (napr. 20 - 40 °C) na dostatočne dlhý čas k podporeniu rastu mikroorganizmov na dostatočnú veľkosť populácie (napr. na 1 - 3 dni).

Materská zlúčenina určená k transformácii (t. j. substrát) sa rozpustí vo vode alebo vo vhodnom s vodou miešateľnom rozpúšťadle (ako je napr. dimetylsulfoxid, dimetylformamid, etylalkohol, metylalkohol). Získaný roztok sa potom pridá do každej z nádobiek na biotransformáciu v množstve dostatočnom na dosiahnutie požadovanej koncentrácie substrátu (napr. 100 - 200 pg/ml). Potom sa banky upevnia do trepačky a pretrepávajú až do dosiahnutia konverzie substrátu mikrobiálnym metabolizmom na produkt (produkty) (napr. 1-10 dní). Obsahy baniek sa potom spracujú mechanickým spôsobom (napr. filtráciou alebo odstredením) k oddeleniu nerozpustených tuhých zložiek od vodnej fázy. Separované tuhé podiely sa extrahujú vhodným rozpúšťadlom miešateľným s vodou (napr. metanolom).

Získaný extrakt po extrakcii tuhých podielov a vodná fáza z nádobiek sa spojí, zahustí sa vhodnými spôsobmi, napríklad extrakcii na tuhej fáze a sušením za zníženého tlaku. Suchý surový produkt sa rozpustí v rozpúšťadle kompatibilnom s čistiacim procesom (napr. acetonitril, metanol, voda alebo mobilná fáza pre HPLC). Izolácia a prečistenie produktu (produktov) biotransformácie sa prevedie extrakciou na tuhej fáze (SPE) a následne vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou na reverznej fáze (HPLC). Počas chromatografickej separácie sa produkt (produkty) biotransformácie detegujú pomocou UV-absorbancie a spektrálnych kriviek zisťovaných detektorom s diódovým poľom. Zhromaždí sa frakcia HPLC obsahujúca požadovaný produkt (produkty), a produkt (produkty) sa extrahujú z mobilnej fázy vhodnými spôsobmi, napr. SPE a následným vysušením vo vákuu. Získaný eluát zo SPE extrakcie sa sfiltruje k odstráneniu tuhých častíc a zahustí sa za zníženého tlaku až k zisku vysušeného produktu (produktov) biotransformácie. Chemická štruktúra izolovaného produktu (produktov) sa určí z výsledkov hmotnostnej spektrometrie a 'H-NMR spektrometrie.

Pretože piperidinylaminometyl(trifluórmetyl)cyklické étery podľa vynálezu majú najmenej dve asymetrické centrá, môžu tvoriť rôzne stereoizoméme formy alebo konfigurácie (napr. diastcrcoizoméry zahrnujúce epiméry). Uvedené zlúčeniny môžu existovať v separovaných (+) a (-) opticky aktívnych formách rovnako tak ako v ich zmesiach.

Všetky také formy vynález zahrnuje. Všetky optické izoméry a stereoizoméry zlúčenín vzorca (I) a ich zmesi je nutné pokladať za súčasť vynálezu. Pokiaľ ide o zlúčeniny vzorca (I), (VI) a (II), vynález zahrnuje použitie racemátu, jednej alebo viacej enantiomémych foriem jednej alebo viacej diastereomémych foriem, alebo ich zmesí. Zlúčeniny vzorcov (I), (VI) a (II) môžu taktiež existovať ako tautoméry. Vynález sa vzťahuje na všetky také tautoméry a ich zmesi. Vynález sa taktiež vzťahuje na použitie všetkých takýchto tautomérov a ich zmesí. Jednotlivé izoméry možno získať s použitím známych spôsobov, ako je optické štiepenie, frakčná kryštalizácia, chromatografía alebo HPLC diastereomémej zmesi medziproduktu, alebo zlúčeniny vzorca (I), alebo jej vhodné soli. Jednotlivé stereoizoméry je taktiež možno pripraviť z vhodných opticky aktívnych východiskových zložiek alebo medziproduktov s použitím ktoréhokoľvek zo všeobecných opísaných spôsobov prípravy. Okrem toho, spôsoby prípravy obohatených diastereomémych zmesí alebo špecifických enantiomémych foriem sú opísané v súčasne prejednávanej U. S. patentovej prihláške čj. 60/160226, podanej 18. októbra 1999, ktorá je celkom včlenená do tohto textu odkazom.

Pretože piperidinylaminometyl(trifluórmetyl)cyklické étery podľa vynálezu sú bázické zlúčeniny, môžu tvoriť široké spektrum rôznych solí s rôznymi anorganickými a organickými kyselinami. Hoci uvedené soli musia byť pri podaní živočíchom farmaceutický prijateľné, často býva v praxi žiaduce najprv izolovať uvedenú bázickú zlúčeninu podľa vynálezu z reakčnej zmesi vo forme farmaceutický neprijateľnej soli a potom ju jednoduchým spôsobom previesť na voľnú bázu spracovaním alkalickým prostriedkom, načo je možné voľnú bázu previesť na farmaceutický prijateľnú soľ, adičnú soľ s kyselinou. Adičné soli bázických zlúčenín podľa vynálezu s kyselinami je možné ľahko pripraviť spracovaním uvedenej bázickej zlúčeniny s v podstate ekvivalentným množstvom zvolenej minerálnej alebo organickej kyseliny vo vodnom rozpúšťadle alebo vo vhodnom organickom rozpúšťadle, ako je metanol alebo etanol. Po opatrnom odparení rozpúšťadla sa tak ľahko získa požadovaná soľ. Kyseliny vhodné na prípravu farmaceutický prijateľných adičných solí uvedených bázických zlúčenín s kyselinami zahrnujú kyseliny tvoriace netoxické adičné soli, t. j. soli obsahujúce farmaceutický prijateľné anióny ako je hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, dusičnan, síran alebo hydrogensíran, fosforečnan alebo hydrogenfosforečnan, acetát, laktát, citrát alebo hydrogen citrát, tartrát alebo hydrogentartrát, sukcinát, maleát, fumarát, glukonát, sacharát, benzoát, metánsulfonát, etánsulfonát, benzénsulfonát, p-toluénsulfonát a pamoát (t. j. l,ľ-metylén-bis(2-hydroxy-3-naftoát).

Uvedené deriváty I -trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylaminometylchrómanu podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli majú významnú väzobnú aktivitu na receptor substancie P a sú preto vhodnými prostriedkami v liečbe rôznych klinických stavov charakterizovaných prebytkom aktivity substancie P. Uvedené stavy zahrnujú dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, spáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritida, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu, ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vy

SK 285819 Β6 volávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptívnu poruchu správania, bipolámu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu a ďalšie dyskinézy; kognitívne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencií v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premenštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitívne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reyrtaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitida; ekzém, rinitída, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitídu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fibrinózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofílná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potláčanou imunitou, ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca, najmä u človeka. Na liečbu emézy je výhodné zlúčeniny podľa vynálezu používať v kombinácii s antagonistom receptora 5HT₃, ako je ondazetrón, granizetrón alebo tropizetrón.

Uvedené deriváty l-trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylaminometylchrómanu podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli je možné podávať cicavcom buď orálne, parenterálne (napr. intravenózne, intramuskuláme alebo subkutánne) alebo topickými spôsobmi podávania. Všeobecne je najvhodnejšie uvedené zlúčeniny podávať ľuďom v dávkach v rozmedzí od asi 0,3 mg do 750 mg denne, aj keď sa samozrejme budú vyskytovať odchýlky v závislosti od hmotnosti a stavu liečeného pacienta a od konkrétneho zvoleného spôsobu podania. Jednako len najvhodnejšia denná dávka je v rozmedzí od asi 0, 06 do asi 6 mg na kg telesnej hmotnosti.

Jednako len ešte ďalšie odchýlky sa môžu vyskytovať v závislosti od druhu živočícha, ktorý má byť liečený a od individuálnej odozvy na uvedené liečivo, taktiež ako od druhu liečivého prípravku a intervalu, v ktorom sa liečivo podáva. V niektorých prípadoch budú primeranejšie dávky pod spodnou hranicou uvedeného rozmedzia, zatiaľ čo v ďalších prípadoch môže byť použitie dávky ešte vyššie, aby nedošlo k prípadným nežiaducim vedľajším účinkom s tou výhradou, že uvedené vyššie dávky sa najprv rozdelia do niekoľkých menších dávok podávaných v priebehu dňa.

Uvedené deriváty 1 -trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylaminometylchrómanu podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli je možné podávať samotné alebo v spojení s farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo riedidlami ktorýmkoľvek z uvedených spôsobov podávania, kde uvedené podanie je možné previesť v jednej alebo vo viacej dávkach. Špecifickejšie, nové terapeutické prostriedky podľa vynálezu je možné podávať v širokej palete liekových foriem, t. j. je možné spojiť s rôznymi farmaceutický prijateľnými inertnými nosičmi do formy tabliet, toboliek, pastiliek, piluliek, tuhých cukríkov, práškov, sprejov, krémov, balzamov, čapíkov, želé, gélov, pást, omývadiel, masti, vodných suspenzií, injekčných roztokov, tinktúr, sirupov a podobne. Uvedené nosiče zahrnujú pevné riedidlá alebo plnivá, sterilné vodné médiá a rôzne netoxické organické rozpúšťadlá atď. Orálne farmaceutické kompozície môžu obsahovať sladidlá a/alebo aromatizujúce prostriedky. Všeobecne sú terapeuticky účinné zlúčeniny podľa vynálezu obsiahnuté v uvedených liekových formách v rozmedzí od asi 5,0 % do asi 70 % hmotnostných.

Na orálne podanie možno použiť tablety obsahujúce rôzne prísady, ako je mikrokryštalická celulóza, citran sodný, uhličitan draselný, hydrogenfosforečnan vápenatý a glycín spoločne s prostriedkami podporujúcimi rozpadávanie, ako je škrob (výhodne kukuričný škrob, zemiakový škrob alebo tapiokový škrob), kyselina algínová a niektoré komplexné kremičitany, spoločne so spojivami na granuláciu, ako je polyvinylpyrrolidón, sacharóza, želatína a arabská guma. Navyše sa na účely tabletovania často používajú klzné prostriedky, ako je magnézium-stearát, nátrium-laurylsulfát a mastenec. Tuhé kompozície podobného typu je možné taktiež použiť ako náplne do želatínových toboliek; výhodné prostriedky v tejto súvislosti taktiež zahrnujú laktózu alebo mliečny cukor a taktiež polyetylénglykoly s vysokou molekulovou hmotnosťou. Ak je potrebné pripraviť vodné suspenzie a/alebo tinktúry na orálne podanie, je možné účinnú zložku spojiť s rôznymi sladidlami alebo aromatizujúcimi prostriedkami, farebnými prostriedkami alebo farbivami a ak je to žiaduce, taktiež s emulgačnými a/alebo suspendačnými prostriedkami, spoločne s riedidlami, ako je voda, etanol, propylénglykol, glycerín a zmesové, ako sú kombinácie uvedených.

Na parenterálne podanie je možné použiť roztoky zlúčeniny podľa vynálezu v sezamovom alebo v podzemnicovom oleji alebo vo vodnom propylénglykole. Vodné roztoky by mali byť, ak je to potrebne, vhodne pufrované (výhodne pH > 8) a riedidlo by malo byť najprv izotonizované. Uvedené vodné roztoky sú vhodné na intravenózne injekčné podanie. Uvedené olejové roztoky sú vhodné na intraartikuláme, intramuskuláme a subkutánne injekčné podanie. Príprava všetkých uvedených roztokov za sterilných podmienok sa ľahko prevedie štandardnými spôsobmi farmaceutickej technológie známymi pracovníkom v odbore.

Okrem toho je taktiež možné zlúčeniny podľa vynálezu pri liečbe napríklad zápalových stavov kože podávať topicky, kde liečivo sa pripraví spôsobmi štandardnej farmaceutickej praxe vo forme krémov, želé, gélov, pást, masti a podobne.

Aktivitu zlúčenín podľa vynálezu, ako antagonistov substancie P, je možné stanoviť ich schopnosťou inhibovať väzbu substancie P na receptorových miestach substancie P v CHO-bunkách, ktoré exprimujú NK1 receptor alebo v IM-9 bunkách s použitím rádioaktívne označených činidiel. Antagonistickú aktivitu piperidinylaminometyl (trifluórmetyl)cyklických éterov podľa vynálezu možno hodnotiť štandardným spôsobom opísaným autormi D. G. Payan a sp. (J. Immunology, Vol. 133, str. 3260, 1984). Tento spôsob v zásade zahrnuje stanovenie koncentrácie jednotlivej zlúčeniny, ktorá je potrebná na zníženie množstva rádioaktívne označenej substancie P (SP) v jej receptorových miestach v uvedených hovädzích tkanivách alebo v IM-9 bunkách o 50 %, čo poskytuje charakteristické hodnoty IC₅₀ pre každú z hodnotených zlúčenín. Špecifickejšie inhibicia [³H]SP väzby na ľudské IM-9 bunky hodnotenými zlúčeninami sa stanoví v pufri na stanovenie (50 mmol/1 Tris-HC1 (pH 7,4), 1 mmol/1 MnCl₂, 0,02 % hovädzí sérový albumín, bacitracín (40 pg/ml), leupeptín (4 pg/ml), chymostatín (2 pg/ml) a fosforamidón (30 pg/ml)). Reakcia sa začne prídavkom buniek do pufra na stanovenie obsahujúceho 0,56 nmol/1 [³H]SP a rôzne koncentrácie zlúčenín (celkový objem 0,5 ml) zmes sa inkubuje 120 min. pri 4 °C. Inkubácia sa ukončí filtráciou cez filtre GF/B (vopred impregnované 2 hodiny v 0,1 % polyetylénimínu). Nešpeci7 fická väzba je definovaná zvyškovou rádioaktivitou v prítomnosti 1 mmol/1 SP. Filtre sa potom vnesú do skúmaviek a stanoví sa rádioaktivita na počítači častíc s tekutým scintilátorom.

Alternatívne, protizápalová účinnosť zlúčenín podľa vynálezu v periférnych oblastiach cicavca sa preukazuje v teste kapsaicínom indukovanej extravazácie plazmy spôsobom opísaným autormi A. Nagahisa a sp. (European Journal of Pharmacology, Vol. 217, str. 191 - 195, 1992). V tomto teste sa protizápalová účinnosť stanoví percentuálnou inhibíciou extravazácie plazmového proteínu do uretry pentobarbitalom anestézovaných (25 mg/kg i. p.) samcov morčiat Hartley (s hmotnosťou 300 - 350 g). Extravazácia plazmy sa indukuje intraperitoneálnou injekciou kapsaicínu (30 mmol/1 v 0,1 BSA, ktorý obsahuje pufor, 10 ml/zviera) pokusným zvieratám, ktoré boli cez noc ponechané bez potravy. Zlúčeniny podľa vynálezu sa rozpustia v zmesi 0,1 % metylcelulóza-voda a podajú sa zvieratám orálne 1 hodinu pred provokačnou injekciou. 5 minút pred provokačnou injekciou sa zvieratám podá intravenózne Evansova modrá (30 mg/kg). 10 minút po injekcii kapsaicínu sa zvieratá usmrtia a vyberie sa tak pravá ako ľavá uretra. Obsah farbiva v tkanive sa stanoví po extrakcii do formamidu cez noc zmeraním absorbancie pri 600 nm.

Zlúčenina pripravená podľa príkladu 3 podľa vynálezu mala 98 % inhibíciu pri podanej dávke 0,03 mg/kg, zatiaľ čo štruktúrne najbližšia zlúčenina opísaná v príklade 18 WO 97/08114 mala pri rovnakej dávke 72 % inhibíciu.

Nežiaduci vplyv na väzobnú aktivitu Ca²⁺ kanála sa stanoví štúdiou väzby verapamilu na membránu srdcového tkaniva krysy. Špecifickejšie sa štúdia väzby verapamilu prevedie spôsobom opísaným autormi Reynolds a sp. (J. Pharmacol. Exp. Ther., Vol. 237, str. 731, 1986). Stručne, inkubácia sa začne prídavkom tkaniva do skúmaviek obsahujúcich 0,25 nmol/1 [³H]dczmetoxy-verapamilu a rôzne koncentrácie hodnotenej zlúčeniny (celkový objem 1 ml). Nešpecifická väzba sa definuje ako väzba rádioligandu v prítomnosti 3-10 pmol/l metoxyverapamilu.

Aktivita zlúčenín podľa vynálezu proti chorobám CNS sa stanoví v teste zášklbov vyvolaných [Sar⁹, Met(O-)¹¹] substanciou P na pieskomiloch v modifikovanom spôsobe opísanom N. M. J. Rupniakom (European Journal of Pharmacology, Vol. 265, str. 179 -183, 1994) a L. J. Bristowom (European Journal of Pharmacology, Vol. 253, str. 245 -

- 252, 1994). Špecifickejšie, najprv sa pieskomilom subkutánne podá zlúčenina podľa vynálezu. Potom sa zvieratá uvedú do miernej anestézie éterom a odokryje sa povrch lebky. V treťom kroku sa zvieratám podá [Sar⁹, Met (O₂)’'] substancia P (5 μΐ) priamym podaním do laterálnych komôr ihlou s veľkosťou 25 zavedenej 3,5 mm pod lambdu. Potom sa zvieratá jednotlivo umiestnia do kadičiek objemu 1 1 a sledujú sa opakované zášklby ich zadných labiek.

Antiemetickú účinnosť zlúčenín podľa vynálezu je možné demonštrovať v teste, kde eméza sa indukuje cisplatinou na fretkách. Fretkám (samce, telesná hmotnosť 1,3 -

- 1,6 kg) sa 30 minút pred injekčným podaním cisplatiny podá subkutánne zlúčenina podľa vynálezu. Potom sa fretkám intraperitoneálne podá cisplatina a videokamerou sa 4 hodiny sledujú ich emetické príhody (t. j. dávenie, vracame, nútenie k vracaniu). Sledujú sa počty uvedených príhod.

Vplyv metabolizmu na zlúčeniny podľa vynálezu možno hodnotiť in vitro stanovením, ktoré zahrnuje a) uvedenie vzorky hodnotenej zlúčeniny do styku s reagenčnou kompozíciou pripravenou prídavkom špecifického izozýmu, cytochrómu P-450 (napr. CYP2D6) k pečeňovému mikrozomálnemu ochudobnenému metabolizéru (skrátene PM) (t. j. k pečeňovým mikrozómom človeka, ktorému chýba uvede ný špecifický izozým, cytochróm P-450) v nosiči a b) analýzu substrátu hmotnostným spektrometrom spojeným s HPLC (vysokoúčinná kvapalinová chromatografia). Podrobnejšie, substrát (1 umol/l) sa inkubuje s PM ľudskými pečeňovými mikrozómami (vyrába Keystone Skin Bank) doplnenými rekombinantnými CYP2D6-exprimujúcimi mikrozómami (0-0,1 mg/ml) alebo mikrozómami s kontrolným vektorom, v prítomnosti 1,3 mmol/1 NADP (nikotínamidadenindinukleotidfosfát), 0,9 mmol/1 NADH (redukovaný nikotínamidadeníndmukleotid), 3,3 mmol/1 MgCl₂ a 8 jednotiek/ml G-6-PDH (glukóza-6-fosfátdehydrogenáza) v celkovom objeme 1,2 ml 100 mmol/1 fosforečnanovcho tlmivého roztoku (fosforečnan draselný). Hodnota pH uvedeného roztoku je 7,4 a teplota inkubácie je 37 °C. Po stanovených časoch inkubácie (0, 5, 10, 30 a 60 minút) sa z reakčných zmesi odoberie po 100 μΐ, ktoré sa zmieša s 1 ml acetonitrilu (ACN), ktorý obsahuje 5 ng/ml (2S,3S)-3-(2-metoxybenzylamino)-2-difenylmetyl-1 -azabicyklo-[2.2.2]oktánu ako interného štandardu (pripraví sa spôsobom opísaným vo WO 90/05729). Protein sa potom vyzráža odstredením (1800 x g, 10 minút) a získaný supematant sa uchová. Koncentrácia substrátov a produktov obsiahnutých v roztokoch sa stanoví analýzou hmotnostným spektrometrom Sciex ΑΡΙ-ΙΠ spojeným s HPLC systémom Hewlett-Packard HP1090. Vynesie sa závislosť koncentrácii zvyšných substrátov v každom z roztokov (%-ostávajúce) od času. Z každej závislosti sa vypočíta T_1/2. Vypočítajú sa pomery hodnôt T_1/2 hodnotenej zlúčeniny (t. j. T,_/2 pomer = (T_ií2 kontrolný vektor-mikrozómy) / (T|_/2 PM ľudské pečeňové mikrozómy doplnené CYP2D6-exprimujúcimi mikrozómami)).

Príklady uskutočnenia vynálezu

Vynález je ďalej znázornený uvedenými príkladmi. Uvedené príklady je však treba chápať tak, že vynález nie je špecifickými podrobnosťami v nich uvedenými nijako obmedzený. Teploty topenia (t. t.) sú stanovené na mikrobodotávku Buchi a sú nekorigované. Infračervené absorpčné spektrá (IR) boli zmerané na infračervenom spektrometri Shimadzu (IR-470). Spektrá *H nukleárnej magnetickej rezonancie (NMR) boli zmerané v CDClj na NMR spektrometri JEOL (JNM-GX270, 270 MHz pre ’H), pokiaľ nie je uvedené inak a polohy píkov sú vyjadrené v dieloch na milión dielov (ppm) vzhľadom na referenčný tetrametylsilán. Tvary píkov sú označené nasledovne: s, singlet; d, dublet; t, triplet; m, multiplet.

Príklad 1

Príprava (2S, 3S)-3-(6-metoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochróman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidín-dihydrochloridu

i) 2-(2-Bróm-5-metoxyfenyl)etanol

K miešanej zmesi 3-metoxyfenetylalkoholu (1,18 g,

7,8 mmol) a pyridínu (0,75 ml, 9,3 mmol) v suchom dichlórmetáne (10 ml) sa pridá po kvapkách pri 0 °C v atmosfére dusíka bróm (0,47 ml, 18,0 mmol). Oranžový roztok sa mieša 4 hodiny pri izbovej teplote. Potom sa reakcia preruší prídavkom 10 % vodného roztoku hydrogensiričitanu sodného a reakčná zmes sa extrahuje dichlórmetánom. Organické extrakty sa premyjú soľným roztokom, vysušia sa síranom horečnatým a zahustením sa získajú surové produkty, ktorých prečistením chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hexánu a etyl-acetátu (10 : 1,8 : : 1,5 : 1) ako mobilnej fázy v gradientovej elúcii sa získa vo forme bezfarebného oleja titulná zlúčenina (1,5 g, 83,2 %). ’H-NMR (CDC1₃): 7,43 (d, J=8,8 Hz, IH), 6,83 (d, J=3,3 Hz, IH), 6,67 (dd, J=8,8, 3,3 Hz, IH), 3,91 - 3,81 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,99 (t, J=6,6 Hz, 2H).

ii) 2-(2-(2-Bróm-5-metoxyfenyl)etoxy)tetrahydropyrán

K miešanej zmesi 2-(2-bróm-5-metoxyfenyl)etanolu (1,5 g, 6,5 mmol) a dihydropyránu (13,0 mmol) v suchom dichlórmetáne (30 ml) sa pridá v atmosfére dusíka pri 0 °C kyselina gáforsulfónová (0,3 mmol) a ponechá sa 1 hodinu. Potom sa reakcia preruší prídavkom nasýteného vodného roztoku hydrogensiričitanu sodného a reakčná zmes sa extrahuje dichlórmetánom. Organické extrakty sa premyjú soľným roztokom, vysuší sa síranom horečnatým a zahustením sa získa surový produkt, ktorého prečistením chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hexánu a etyl-acetátu (20 : 1) ako mobilná fáza sa získa titulná zlúčenina (2,05 g, kvantitatívny výťažok). ’H-NMR (CDClj): 7,40 (d, J=8,8 Hz, IH), 6,86 (d, J-2,9 Hz, IH), 6,65 (dd, J=8,8, 2,9 Hz, IH), 4,63 - 4,60 (m, IH), 3,99 - 3,90 (m, IH), 3,82 - 3,74 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 3,68 - 3,59 (m, IH), 3,50 - 3,45 (m, IH), 3,02 (t, J=7,0 Hz, 2H), 1,83 - 1,52 (m, 6H).

iii) 1,1,1 -Trifluór-2-(4-metoxy-2-(2-tetrahydropyrán-2-yloxy)etyl)fenyl)propán-2-ol

K miešanému roztoku 2-(2-(2-bróm-5-metoxyfenyl)etoxy)-tetrahydropyránu (1,0 g, 3,17 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (20 ml) sa pridá po kvapkách v atmosfére dusíka pri -78 °C butyllítium (2,5 ml, 4,12 mmol). Reakčná zmes sa potom mieša 1 h pri -40 °C. K reakčnej zmesi sa potom pridá po kvapkách v atmosfére dusíka pri -78 °C suspenzia bezvodného chloridu céritého (884 mg, 3,58 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (15 m) a reakčná zmes sa mieša 1 h. K reakčnej zmesi sa potom pridá trifluóracetón (0,5 ml, 5,59 mmol) a získaná zmes sa mieša 1 h pri -78 °C. Potom sa reakcia preruší prídavkom nasýteného roztoku chloridu amónneho a reakčná zmes sa extrahuje dichlórmetánom. Spojené organické extrakty sa vysušia síranom horečnatým a zahustením sa získajú surové produkty, ktorých prečistením chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hexánu a etyl-acetátu (20 : 1,15 : 1,12 : : 1,10 : 1) ako mobilná fáza v gradientovej elúcii sa získa titulná zlúčenina (555 mg, 50,3 %). ’H-NMR (CDClj): 7,35 - 7,31 (m, IH), 6,78 - 6,74 (m, 2H), 5,70 a 5,62 (každý s, celkom IH), 4,63 a 4,48 (každý m, celkom IH), 4,18 -4,11 a 3,99 - 3,92 (každým, celkom IH), 3,80 (s, 3H), 3,77 - 3,43 (m, 3H), 3,33 - 2,90 (m, 2H), 1,80 a 1,78 (každý s, celkom 3H), 1,75 - 1,26 (m, 6H).

iv) 6-Metoxy-1 -metyl-l-trifluórmetylizochróman

Zmes 1,1,1 -trifluór-2-(4-metoxy-2-(2-tetrahydropyrán-2-yloxy)etyl)fenyl)propán-2-olu (470 mg, 1,35 mmol) a koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (4 ml) sa mieša 3 h pri 120 °C. Po ochladení sa reakčná zmes zriedi vodou a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Organické extrakty sa vysušia síranom horečnatým a zahustením sa vo forme hnedého oleja získa titulná zlúčenina (460 mg). Produkt sa ďalej použije bez ďalšieho čistenia.

v) 6-Metoxy-1 -metyl-1 -trifluórrnetylizochróman-7-karbaldehyd

K miešanému roztoku 6-metoxy-l -metyl-l-trifluórmetylizochrómanu (480 mg) v suchom dichlórmetáne (5 ml) sa pri -78 °C v atmosfére dusíka pridá chlorid titaničitý. Za 15 minút sa k žltému roztoku pridá pri rovnakej teplote roztok dichlórmetyl(metyl)éteru v suchom dichlórmetáne. Re akčná zmes sa mieša jednu hodinu pri -78 °C, potom sa vleje do ľadovej vody a mieša sa 30 minút pri izbovej teplote. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Extrakty sa premyjú soľným roztokom, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia sa na surový produkt. Prečistením surového produktu chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (10 : 1,8 : 1,6 : 1) ako mobilná fáza v gradientovej elúcii sa získa titulná zlúčenina (179 mg, 48,3 % vzhľadom na l,l,l-trifluór-2-(4-metoxy-2-(2-tetrahydropyrán-2-yloxy)etyl)-fenyl)propán-2-olu). ’H-NMR (CDClj): 10,41 (s, IH), 7,82 (s, IH), 6,78 (s, IH), 4,19 -

- 4,11 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,94 - 3,87 (m, IH), 2,91 (t, J=4,4 Hz, 2H), 1,67 (s, 3H).

vi) 1 -Terc-butoxykarbonyl-(2S,3S)-3-(6-metoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochroman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidín

K miešanému roztoku l-terc-butoxykarbonyl-(2S,3S)-3-amino-2-fenylpiperidínu (0,67 mmol), ktorý sa pripraví spôsobom opísaným vo WO 97/03066 a 6-metoxy-1-metyl-l-trifluórmetylizochróman-7-karbaldehydu (184 mg, 0,67 mmol) v suchom dichlórmetáne (3 ml) sa pridá po častiach pri izbovej teplote v atmosfére dusíka molámy prebytok triacetoxyhydrogenboritanu sodného. Reakčná zmes sa mieša päť hodín pri izbovej teplote. Potom sa zmes zalkalizuje prídavkom nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, extrahuje sa dichlórmetánom, vysuší sa síranom sodným a zahusti sa na surový produkt. Prečistením surového produktu chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (50 : 1,25 : 1,20 : 1) ako mobilná fáza v gradientovej elúcii sa získa titulná zlúčenina (330 mg, 91,8 %). ’H-NMR (CDClj): 7,59 - 7,55 (m, 2H), 7,34 - 7,17 (m, 4H), 6,56 (s, IH), 5,44 (m, IH), 4,16 - 4,08 (m, IH), 3,99 - 3,84 (m, 2H), 3,80 (m, 2H), 3,72 a 3,71 (každý s, celkom 3H), 3,06 - 2,98 (m, 2H), 2,83 -

- 2,81 (m, 2H), 1,85 - 1,61 (m, 4H), 1,63 a 1,61 (každý s, celkom 3H), 1,50 - 1,40 (m, IH), 1,39 (s, 9H).

vii) (2S, 3S)-3-(6-Metoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochróman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidín-dihydrochlorid

K miešanému roztoku l-terc-butoxykarbonyl-(2S,3S)-3-(6-metoxy-l-metyl-l-trifluormetylizochróman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidinu (325 mg, 0,61 mmol) v etylacetáte (5 ml) sa po kvapkách pridá v atmosfére dusíka metanolický roztok HCI a ponechá sa 8 hodín. Potom sa rozpúšťadlo odstráni a rekryštalizáciou z etanolu sa získa titulná zlúčenina (88 mg, 28,4 %). T. t. 193 - 201 °C. ’H-NMR (hlavný izomér, voľný amín, CDClj): 7,33 - 7,20 (m, 5H), 6,95 (s, IH), 6,43 (s, IH), 4,13 - 4,09 (m, IH), 3,92 - 3,84 (m, 2H), 3,62 (d, J=13,9 Hz, IH), 3,51 (s, 3H), 3,33 (d, J=13,9 Hz, IH), 3,31 - 3,24 (m, IH), 2,84 - 2,74 (m, 4H), 2,12 - 2,07 (m, IH), 1,94 - 1,82 (m, IH), 1,67 - 1,62 (m, IH), 1,59 (s, 3H), 1,43 - 1,38 (m, IH).

Pomer diastereomémych epimérov v polohe 1-izochrómanového kruhu bol stanovený ’H-NMR ako 5 : 1 (ÍR : 1S). Uvedené izoméry sú (2S, 3S)-3-[(lR)-6-metoxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochroman-7-yl]metylamino-2-fenylpiperidín a (2S, 3S)-3-[(lS)-6-metoxy-l-metyl-1-trifluórmetylizochroman-7-yl]metylamino-2-fenylpiperidin. Rozpustnejší izomér bol získaný z materského roztoku. Pomer diastereomémych epimérov v polohe 1- izochrómanového kruhu bol stanovený ’H-NMR ako 1 : 3 (ÍR : 1S). Absolútna stereochémia titulných zlúčenín bola stanovená rôntgenovou kryštalografiou (3R) izoméru po ďalšom prečistení rekryštalizáciou. ’H-NMR (hlavný izomér, voľný amín, CDClj): 7,33 - 7,20 (m, 5H), 6,99 (s, IH), 6,40 (s, IH), 4,13 - 4,09 (m, IH), 3,92 - 3,84 (m, 2H), 3,62 (d,

SK 285819 Β6

J=13,9Hz, IH), 3,45 (s, 3H), 3,33 (d, J=13,9Hz, IH), 3,31 -

- 3,24 (m, IH), 2,84 - 2,74 (m, 4H), 2,12 - 2,07 (m, IH), 1,94 - 1,82 (m, IH), 1,67 - 1,62 (m, IH), 1,59 (s, 3H), 1,43

- 1,38 (m, IH).

Príklad 2 (2S, 3 S)-3-[( 1 R)-6-Metoxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochróman-7-yl]metylamino-2-fenylpiperidín-dihydrochlorid

i) 6-Hydroxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochróman

K miešanému roztoku 6-metoxy-l-metyl- 1-trifluórmetyl-izochrómanu (71 g, 0,29 mol) v kyseline octovej (600 ml) sa pridá vodný 48 % HBr (300 ml) a zmes sa mieša 13 h pri 130 °C. Po odstránení kyseliny octovej vo vákuu sa reakčná zmes spracuje vodným NaOH (8 mol/1) k získaniu hodnoty pH reakčnej zmesi 5 - 6. Získaný roztok sa extrahuje etyl-acetátom (2 x 400 ml) a spojené organické extrakty sa premyjú soľným roztokom (100 ml), vysuší sa MgSO₄ a zahustí sa vo vákuu. Rýchlou chromatografiou (silikagél, 15 x 20 cm, 17 % etyl-acetát/hexán) sa vo forme bezfarebného oleja získa 6-hydroxy-l-metyl- 1-trifluórmetylizochróman (67 g, 100 %). ’H-NMR (CDClj): 7,22 (d, >9,1 Hz, IH), 6,73 (dd, J=9,l, 2,6 Hz, IH), 6,63 (d, J=2,6 Hz, IH), 5,00 (s, IH), 4,17 - 4,07 (m, IH), 3,90 (dt, J=11,

5,8 Hz, IH), 2,84 - 2,78 (m, 2H), 1,64 (s, 3H).

ii) 6-Acetoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochróman

K miešanému roztoku 6-hydroxy-l-metyl-1-trifluórmetylizochrómanu (79 g, 0,34 mol) a trietylamínu (120 ml, 0,88 mol) v THF (680 ml) sa pridá pri 0 °C acetylchlorid (31 ml, 0,44 mol) a zmes sa mieša 1 h pri izbovej teplote. Potom sa reakcia preruší prídavkom vodnej HCI 1 mol/1 (400 ml) a reakčná zmes sa extrahuje etylacetátom (500 ml). Extrakty sa premyjú vodným nasýteným NaHCOj (100 ml) a soľným roztokom (100 ml), vysuší sa MgSO₄ a zahusti sa vo vákuu. Prečistením zvyšku rýchlou chromatografiou (silikagél, 15 x 20 cm, 6 % etylacetát/hexán) sa vo forme bezfarebného oleja získa 6-acetoxy-1 -metyl-1-trifluórmetylizochróman (83 g, 89 %). ’H-NMR (CDClj): 7,36 (d, J=7,2 Hz, IH), 6,98 (dd, J=7,2, 2,5 Hz, IH), 6,91 (d, J=2,5 Hz, IH), 4,18 - 4,08 (m, IH), 3,92 (dt, J=11,5,4 Hz, IH), 2,86 (t, J=5,4 Hz, 2H), 2,30 (s, IH), 1,66 (s, 3H).

iii) (lR)-6-Acetoxy-l-metyl-1-trifluórmetylizochróman a (1 S)-6-hydroxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochróman

Zmes racemického 6-acetoxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochrómanu (38,4 g, 0,140 mol), 10 % sek-butanolu v hexáne (1,3 1) a lipázy PS (35 g) sa intenzívne mieša 23 hodín pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa potom sfiltruje, filtrát sa zahustí za zníženého tlaku na zmesový zvyšok. Prečistením chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (15 : 1,5 : 1,2 : 1) ako mobilná fáza z gradientovej elúcie sa získa najprv (lR)-6-acetoxy-l-metyl-1-trifluórmetylizochróman vo forme bezfarebného oleja (17,3 g, 45 %, 94 % ee). ’H-NMR spektrum tejto zlúčeniny je zhodné so spektrom racemátu. Z druhej frakcie sa získa (1 S)-6-hydroxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochróman vo forme kryštálov (16,9 g, 52,83 % ee). ’H-NMR spektrum tejto zlúčeniny je zhodné so spektrom racemátu.

iv) (1 R)-6-Hydroxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochróman

K miešanej zmesi (1 R)-6-acetoxy-l-metyl- 1-trifluórmetylizochrómanu (35,5 g, 0,129 mol), metanolu (860 ml) a vody (340) sa pri 0 °C pridá uhličitan draselný (35,7 g, 0,258 mol) a zmes sa mieša 1 hodinu pri izbovej teplote. Získaná zmes sa okyslí kyselinou chlorovodíkovou 2 mol/I (pH 3) a odparením vo vákuu sa odstráni metanol. Zvyšok sa extrahuje etyl-acetátom. Organická vrstva sa premyje vodou a soľným roztokom a vysuší sa síranom horečnatým. Po filtrácii sa filtrát zahusti za zníženého tlaku a vo forme bezfarebného oleja sa tak získa titulná zlúčenina (28,0 g, 93 %). Produkt sa potom použije bez ďalšieho čistenia. ’H-NMR spektrum titulnej zlúčeniny je zhodné so spektrom racemátu.

v) (1 R)-6-Metoxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochróman

K miešanej zmesi hydridu sodného (3,47 g, 0,145 mol) v DMF (50 ml) sa pridá pri 0 °C roztok (lR)-6-hydroxy-l-metyl-l-trifluórmetylizochrómanu (28,0 g, 0,121 mol) v DMF (370 ml) a zmes sa potom mieša 1 hodinu pri izbovej teplote. Potom sa reakcia preruší zaliatím vodou a reakčná zmes sa zriedi nasýteným vodným chloridom amónnym. Potom sa reakčná zmes extrahuje zmesou etyl-acetát/toluén (4 : 1). Organická frakcia sa premyje vodou a soľným roztokom a vysuší sa síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a prečistením zvyšku chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím hexánu a etyl-acetátu (40 : 1) ako mobilná fáza sa vo forme bezfarebného oleja získa titulná zlúčenina (29,1 g, 98 %). ’H-NMR spektrum tohto produktu je zhodné so spektrom racemickej zlúčeniny.

(vi) (2S, 3S)-3-[(lR)-6-Metoxy-l-metyl- 1-trifluórmetylizochroman-7-yl]metylamino-2-fenylpiperidíndihydrochlorid

Uvedený (lR)-6-metoxy-l-metyl-l-trifluórmetyl-izochróman sa ďalej prevedie na titulnú zlúčeninu spôsobom opísaným v príklade 3 poskytujúcom jednu diastereomému formu. Optická otáčavosť: [a]²⁷ _D=+75,44 (c=0,424, MeOH).

Príklad 3 (Mikrobiologická biotransformácia)

6-Metoxy-1 -metyl-7-[(2-fenylpiperidín-3-ylamino)metyl]-1 -trifluórmetylizochroman-4-ol

Do každej z osemnástich Delongových baniek s Mortonovým uzáverom sa vnesie dvadsaťpäť ml IOVA Média (20 g bezvodnej dextrózy; 5 g extraktu z kvasníc; 5 g hydrogenfosforečnanu draselného; 5 g chloridu sodného; 5 g sójovej múčky; 1 1 destilovanej vody; hodnota pH sa upraví na 7,2 1 N kyselinou sírovou) a získaná zmes sa sterilizuje parou 30 minút pri 121 °C a pretlaku 15 psig (103,4 kPa). Obsah dvoch baniek (inokulačný stupeň) sa aseptický inokuluje 0,25 ml axenickej kultúry mycélia Streptomyces punipalus (NRRL 3529). Inokulované banky sa vertikálne upevnia na rotačnú trepačku (výkyv 2 palca (t. j. 5,08 cm) a trepú sa 2 dni pri 29 °C a 210 ot/min. Potom sa do ostávajúcich pätnástich baniek aseptický prevedie 2,5 ml inokulačného média z inokulačného stupňa (biotransformačný stupeň). Inokulované biotransformačné banky sa vertikálne upevnia na rotačnú trepačku (výkyv 2 palce (t. j. 5,08 cm) a trepú sa 1 deň pri 29 °C a 210 ot/min. Potom sa v destilovanej vode rozpustí (6-metoxy-1 -metyl-l-trifluór-metylizochroman-7-ylmetyl)-(2-fenylpiperidín-3-yl)amin-dihydrochlorid (t. j. substrát) (6,5 mg/ml). Do každej z uvedených 15 baniek určených na biotransformáciu sa potom aseptický pridá 0,75 ml takto získaného roztoku, čím sa získa počiatočná koncentrácia substrátu 173 pg/ml (celkom 73,1 mg v celkom 15 bankách). Banky s pridanou zlúčeninou sa vertikálne upevnia na rotačnú trepačku a trepú sa 4 dni pri 29 °C a 210 ot/min. Vývoj tvorby biotransformovaného produktu sa sleduje HPLC na reverznej fáze s použitím vzoriek objemu 1 ml. Po 4-dennom období biotransformácie sa do každej banky pridá 25 ml metanolu a premieša sa s obsahom banky (t. j. kultivačnou pô10 dou). Získaná zmes pôda/metanol z uvedených 15 baniek sa potom spojí. Banky sa potom postupne dva razy premyjú, jeden raz s použitím 50 ml metanolu a potom s použitím 25 ml metanolu. Premievacie podiely sa pridajú k skoršie získanému podielu a získa sa tak celkový objem asi 775 ml. Získaný spojený podiel pôdy/metanolu sa potom odstredí (odstredivka RC5B, 6000 ot/min., 8 min.) k odstráneniu tuhých zložiek. Supematant (A) sa uchová k ďalšiemu použitiu. Tuhé podiely sa resuspendujú v 100 ml metanolu, premieša sa a odstredí sa rovnakým spôsobom, ako je opísané. Tento supematant (B) sa spojí so skoršie získaným supernatantom (A) a spojené supematanty sa sfiltrujú s použitím vákua cez filter zo sklených vlákien (Whatman GF/B). Potom sa filtrát spracuje destiláciou za zníženého tlaku pri 45 °C k odstráneniu metanolu. Zvyšok objemu asi 300 ml sa vnesie pomocou pretlaku dusíka (asi 30 psig, t. j. asi

206,8 kPa) na vopred pripravenú kolónu obsahujúcu Cl 8-živicu (Biotage KP-C-18-WP, 20-40 μΜ) určenú k extrakcii na tuhej fáze (SPE)(kolóna sa pred vnesením zlúčeniny spracuje premytím najskôr 1250 ml metanolu a potom 2250 ml destilovanej vody). Po vnesení vzorky sa kolóna premyje 2050 ml destilovanej vody k odstráneniu nenaviazaných zložiek. Potom sa kolóna s nanesenou vzorkou premyje 975 ml 50 % roztoku metanolu (1 : 1 MeOH/H₂O) k odstráneniu nežiaducich zložiek. Zlúčenina určená k izolácii sa eluuje 975 ml metanolu. Eluát sa podrobí destilácii za zníženého tlaku pri 45 °C k odstráneniu metanolu. Po odstránení metanolu sa zvyšok rozpustí v 20 % roztoku metanolu vo vode a vnesie sa pomocou vákua na kolónu obsahujúcu C18 živicu(Waters Sep-Pak 6cc (1 g) Cl 8) určenú pre SPE (kolóna sa pred vnesením zlúčeniny spracuje premytím najskôr 15 ml metanolu a potom 15 ml destilovanej vody). Kolóna pre SPE s nanesenou vzorkou sa potom premyje k odstráneniu nenaviazaných zlúčenín pomocou 20 ml 20 % roztoku metanolu vo vode. Zlúčeniny naviazané na živicu sa potom eluujú 10 ml objemami roztokov metanolu vo vode so zvyšujúcou sa koncentráciou rozpúšťadla (50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 %). Takmer všetka požadovaná zlúčenina sa eluuje zo SPE kolóny v eluátoch získaných pomocou 60 - 70 % metanolu (stopovo v eluáte s obsahom metanolu 55 %). Eluáty obsahujúce titulnú zlúčeninu sa spoja, sušia sa do sucha pri 45 °C v prúde dusíka. Počas sušenia sa pridáva bezvodný etanol potrebný na odstránenie vody. Hmotnosť vysušeného surového produktu je 59 mg. Vysušený produkt sa rozpustí v 75 % metanolu vo vode a spracuje sa vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou na reverznej fáze (HPLC spôsob 1) k izolácii titulnej zlúčeniny.

HPLC spôsob 1
kolóna	Luna 5 u C18(2), 21, 2x250 mm
mobilná fáza	lineárna gradientová elúcia v priebehu 2 - 30 min.: (20 - 80) % acetonitril: (80 - 20) % vodný pufor (95 % 20 mmol/1 amónium-acetát, pH 6,8 bez úpravy/5 % MeOH).
prietok:	9 ml/min.
detektor:	UV absorbancia pri 281 nm; detektor s diódovým poľom pre rozmedzie 200 - 400 nm (štrbina 4,8 nm)
čas analýzy	30 min.

SPE kolónu (Waters 6cc C18; vopred spracovanú, ako je uvedené), kolóna sa premyje destilovanou vodou k odstráneniu soli a eluuje sa 10 ml metanolu. Eluát sa zahusti do sucha v prúde plynného N₂. Vysušený zvyšok sa rozpustí v roztoku 50 % metanol/voda a spracuje sa vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou na reverznú fázu (HPLC spôsob 2) k izolácii titulnej zlúčeniny.

HPLC spôsob 2
kolóna	Luna 5 u C18(2), 21, 2x250 mm
mobilná fáza	lineárna gradientová elúcia v priebehu 2 - 30 min.: (5 - 75) % acetonitril: (95 - 25) % vodný pufor (20 mmol/1 kyseliny octovej v destilovanej vode s úpravou pH IN H2SO4 na pH 4,0).
prietok:	9 ml/min.
detektor:	UV absorbancia pri 281 nm; detektor s diódovým poľom pre rozmedzie 200 - 400 nm (štrbina 4,8 nm)
Čas analýzy	30 min.

Titulná zlúčenina má retenčný čas asi 21,8. Frakcie získaných mobilných fáz v metóde HPLC obsahujúce titulnú zlúčeninu sa zhromaždia v nádobke obsahujúcej 20 ml tlmivého roztoku octanu amónneho (HPLC, spôsob 1, vodná mobilná fáza). Zhromaždené HPLC frakcie obsahujúce titulnú zlúčeninu sa zbavia vo vákuu pri 45 °C rozpúšťadla (acetonitril) a nanesú sa na čerstvo pripravenú SPE kolónu (Waters 6cc Cl 8; vopred spracovanú, ako je uvedené), kolóna sa premyje 20 ml destilovanej vody k odstráneniu soli a potom sa eluuje 10 ml metanolu. Metanolový eluát sa zahusti do sucha v prúde plynného dusíka pri 45 °C. Vysušený zvyšok sa rozpustí v bezvodnom etanole a suší sa za zníženého tlaku. Celkom sa získa 19,3 mg titulnej zlúčeniny. Molámy výťažok celkového procesu je 29,7 %.

V HPLC spôsobu 3 má titulná zlúčenina retenčný čas 13,9 mm. Materská zlúčenina má v uvedenom spôsobe retenčný čas 17,5 min.

HPLC spôsob 3
kolóna	symetrická C18, 3, 9x150 mm
mobilná fáza	lineárna gradientová elúcia v priebehu 2 - 30 min.: (15 - 90) % acetonitril: (85 - 10) % vodný pufor (20 mmol/1 kyseliny octovej v destilovanej vode s úpravou pH IN H2SO4 na pH 4,0).
prietok:	1 ml/min.
detektor:	UV absorbancia pri 281 nm; detektor s diódovým poľom pre rozmedzie 200 - 400 nm (štrbina 4,8 nm)
čas analýzy	30 min.

Maximá UV absorpcie sú pri 205 nm, 229 nm (iba zdržanie) a 280 nm. MS (APCI⁺): 451,3 (M+H).

Titulná zlúčenina má retenčný čas asi 17,3. Frakcie získané mobilnou fázou v metóde HPLC obsahujúce titulnú zlúčeninu sa zhromaždia, zbavia sa vo vákuu pri 45 °C rozpúšťadla (acetonitril) a nanesú sa na čerstvo pripravenú

Príklad 4 (Mikrozomálna biotransformácia) 6-Metoxy-l-metyl-7-[(2-fenylpiperidín-3-ylamino)metyl]-1 -tri fl uórmetylizochróman-4-ol

Alternatívne k syntéze prevedenej mikrobiologickou transformáciou (príklad 3) je možné použiť spôsob s reakčnou zmesou obsahujúcou rekombinantné bunkové mikrozómy. Reakčná zmes obsahuje nasledujúce zložky:

700 μί 100 mmol/1 fosforečnanového pufra (K⁴) (pH 7,4),

200 μί roztok kofaktora, μΐ roztok materskej zlúčeniny rozpustený v destilovanej vode 15 mmol/1, μΐ bakulovírusom infektované hmyzie bunkové mikrozómy koexprimujúce ľudský P450 (CYP2D6) a ľudskú cytochróm P450-NADPH-reduktázu, fosforečnanový (fosforečnan draselný) 100 mmol/1 pufor: 8,1 ml 100 mmol/1 K₂HPO₄ v destilovanej vode, 1,9 ml 100 mmol/1 KH₂PO₄ v destilovanej vode, roztok kofaktora mgNADP⁺ (napr. Sigma N-0505), mgkyselina izocitrónová (napr. Sigma 1-1252),

198 ml izocitrónová kyselina-dehydrogenáza (napr. Sigma 1-2002),

802 ml 125 mmol/1 MgCl₂ v destilovanej vode.

Reakčné zložky sa vnesú do sklenej skúmavky 16 x x 125 mm vybavenej Mortonovým uzáverom z nehrdzavejúcej ocele. Skúmavka sa inkubuje v rotačnej trepačke (výkyv 1 palec, t. j. 2,54 cm) pri 240 ot/min. a teplote 37 °C. Vývoj reakcie sa sleduje v čase 0, 5 a 24 hodín po iniciácii, analýzou HPLC na reverznej fáze (spôsob 3, opísaný v príklade 3). K zastaveniu reakcie a k príprave vzorky na analýzu sa 250 ml vzorky pridá k 250 ml metanolu, obe zložky sa premiešajú, ochladia sa 15 minút v ľade a odstredia sa (Eppendorfova mikroodstredivka, 14 000 ot/min., 5 min.) k odstráneniu vyzrážaných proteínov. Reakcia je ukončená 5 hodín po iniciácii. Bolo vypočítané, že dôjde k 9,9 % molámej konverzii. Hodnotenie produktu metódou HPLC a APCI⁺ sú rovnaké ako v prípade hodnotenia produktu podľa príkladu 3.

Claims (8)

1. L Derivát l-trifluórmetyl-4-hydroxy-7-piperidinylaminometylchromanu všeobecného vzorca (I) a jeho farmaceutický prijateľné soli, kde R¹ znamená Ci-C6alkyl; R² znamená vodík, C|-C6alkyl, halogén (C,-C₆) alkyl alebo fenyl; R³ znamená vodík alebo halogén; a R⁴ a R⁵ každý nezávisle znamená vodík, C_rC₆alkyl alebo halogén (C,-C₆) alkyl.
2. 2. Derivát podľa nároku 1, kde R¹ znamená CrC3alkyl; R² znamená vodík, Ci-C3alkyl, halogén (C_rC₃) alkyl alebo fenyl; R³ znamená vodík alebo fluór; a R⁴ a R⁵ každý nezávisle znamená vodík, C_rC₃alkyl alebo halogén (C_rC₃) alkyl.
3. 3. Derivát podľa nároku 2, kde R¹ znamená metyl; R² znamená vodík, metyl, trifluórmetyl alebo fenyl; R³ znamená vodík; a R⁴ a R⁵ každý znamená vodík.
4. 4. Derivát podľa nároku 1, ktorým je (2S,3S)-3-(6-metoxy-4-hydroxy-1 -metyl-1 -trifluórmetylizochroman-7-yl)metylamino-2-fenylpiperidín alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
5. 5. Farmaceutická kompozícia na liečenie choroby alebo stavu cicavca, kde je potrebná antagonistická aktivita proti substancii P, vyznačujúca sa tým, že obsahuje derivát podľa nároku 1 alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ a farmaceutický prijateľný nosič.
6. 6. Farmaceutická kompozícia na liečenie choroby alebo stavu zvoleného zo skupiny zahŕňajúcej dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, spáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritída, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu, ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptivnu poruchu správania, bipolámu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu, a ďalšie dyskinézy; kognitívne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencii v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premenštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitívne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reynaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitída; ekzém, rinitida, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitídu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fíbrinózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofilná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potláčanou imunitou, ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje účinné množstvo zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľné soli na liečenie uvedenej choroby alebo stavu a farmaceutický prijateľný nosič.
7. 7. Derivát všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 na použitie na liečenie choroby alebo stavu cicavca, kde je potrebná antagonistická aktivita proti substancii P.
8. 8. Derivát všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 na použitie na liečenie choroby alebo stavu zvoleného zo skupiny zahŕňajúcej dystýmiu, hlbokú depresiu, detskú depresiu, generalizovanú úzkosť, obsesívnu-kompulzívnu chorobu, panickú poruchu, fóbie, ako je sociálna fóbia alebo agorafóbia; posttraumatickú stresovú poruchu, hraničnú poruchu osobnosti, akútnu bolesť, chronickú bolesť, migrénu, angiogenézu, spáleniny slnkom, močovú inkontinenciu, zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, osteoartritída, psoriáza, astma a alergické choroby; eméza zahrnujúca emézu akútnu, oddialenú a anticipovanú, kde prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu zahrnuje chemoterapiu,

   SK 285819 Β6 ožiarenie, operáciu, pohyb, migrénu alebo akýkoľvek ďalší prostriedok alebo stav vyvolávajúci emézu; choroby vyvolané Helicobacter pylori, kardiovaskulárne choroby, očné ochorenia, zápal urinámeho traktu, psychózy, schizofréniu, poruchu správania, disruptívnu poruchu správania, bipolárnu chorobu, poruchy hybnosti, ako je Tourettov syndróm, akinézny-rigidný syndróm, poruchy hybnosti v súvise s Parkinsonovou chorobou, tardívnu dyskinézu, a ďalšie dyskinézy; kognitívne poruchy, ako sú demencie (vrátane demencií v súvise s vekom a senilné demencie Alzheimerovho typu) a poruchy pamäti (napr. amnézie), poruchy prijímania potravy, ako je anorexia nervóza a bulímia nervóza, hyperaktivitný deficit pozornosti, chronický únavový syndróm, predčasnú ejakuláciu, premenštruačný syndróm, premenštruačnú dysforickú poruchu, závislosti a návyky od chemických látok, somatické poruchy spojené so stresom, neuralgiu, periférnu neuropatiu, gastroezofageálny reflux, reflexnú sympatickú dystrofiu, ako je syndróm plece/ruka; hypersenzitivne choroby, ako je senzitivita na škumpu jedovatú; fibromyalgiu, angínu, Reynaudovu chorobu, reumatické choroby, ako je fibrozitída; ekzém, rinitída, alergia, postherpetickú neuralgiu, cystitídu, zápalovú črevnú chorobu, syndróm dráždivého bedrovníka, kolitídu, fibrinózne a kolagenózne choroby, ako je sklerodermia a eozinofilná fasciolóza; poruchy prietoku krvi na podklade vazodilatácie, a choroby v súvise so zvýšenou alebo s potláčanou imunitou ako je systémový lupus erytematodes, u cicavca.