MXPA01009027A

MXPA01009027A - Antagonistas de retinoide y uso de los mismos.

Info

Publication number: MXPA01009027A
Application number: MXPA01009027A
Authority: MX
Inventors: Michael Rosenberger
Original assignee: Basilea Pharmaceutica Ag
Priority date: 1999-03-08
Filing date: 1999-03-08
Publication date: 2002-08-30
Also published as: ES2221371T3; DE69917332T2; BR9917205A; JP3752423B2; CA2366186C; CN1337931A; AU3032099A; ATE266616T1; KR20010113037A; WO2000053562A1; TR200102587T2; EP1161410B1; JP2002539106A; DK1161410T3; DE69917332D1; AU762492B2; CA2366186A1; EP1161410A1

Abstract

La presente invencion se refiere a los novedosos antagonistas de retinoide de la formula I, en donde G1; el uso de los antagonistas de retinoide, sus sales farmaceuticamente aceptables o los esteres hidrolizables farmaceuticamente aceptables, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las celulas T cooperadoras (Th2), para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la osteoporosis y para el uso en el tratamiento de enfermedades preneoplasicas y neoplasicas.

Description

Antagonistas de Retinoide y uso de los mismos Descripción de la invención Los retinoides son una clase de compuestos estructuralmente relacionados a la vitamina A, que comprenden compuestos naturales y sintéticos. Se ha encontrado que los retinoides son clínicamente útiles en el tratamiento de enfermedades dermatológicas y oncológicas. Los retinoides con actividad agonista del receptor del retinoide han mostrado que son activos no solamente en sistemas modelo para el tratamiento de enfermedades dermatológicas y oncológicas, sino también en modelos para el tratamiento de enfermedades inmunes mediadas por el tipo 1 de las células cooperadoras T (Thl) . Los retinoides con actividad agonista del receptor de retinoide son activos en el tratamiento de artritis por adyuvante [Brinckerhoff et al., Science 221, 756-758 (1993)] y encefalomielitis alérgica experimental [Massacesi et al., J. Clin. Invest. 88, 1331-1337 (1991); Racke et al., J. Immunol . 154, 450-458 (1995)], los modelos animales para la artritis reumatoide y la esclerosis múltiple, respectivamente. Se considera que ambas enfermedades pertenecen a las enfermedades inmunes mediadas por Thl .

REF; 132668 Experimentalmente, los retinoides con actividad antagonista del receptor de retinoide (antagonistas de retinoides) son efectivos en contraatacar muchas propiedades de los retinoides con actividad agonista del receptor de retinoide (agonistas de retinoides) tal como la inhibición de la proliferación celular, la inducción de la diferenciación celular, la inducción de la apoptosis y la inhibición de la angiogénesis [Bollag et al., Int. J. Cáncer 70, 470-472 (1997)]. Los antagonistas de retinoide son también supresores de los efectos colaterales tóxicos de los agonistas de retinoide tales como los signos y los síntomas del síndrome de hipervitaminosis A y teratogénesis [Standeven et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. 138, 169-175 (1996); Eckhardt y Schmitt, Toxicol. Letters 70, 299-308 (1994)]. Por lo tanto, éstos pueden ser químicamente útiles en la prevención o tratamiento de los eventos adversos provocados por los agonistas de retinoide. Los antagonistas de retinoide han sido propuestos para el uso clínico en la prevención y terapia de los efectos colaterales y la toxicidad inducida por el retinoide, particularmente del denominado síndrome de hipervitaminosis A. Los antagonistas del retinoide han sido propuestos también para ser utilizados en combinación con agonistas del receptor del retinoide u otros agonistas del receptor nuclear para la prevención y tratamiento de lesiones preneoplásicas o neoplásicas, vitreo-retinopatía y desprendimiento de retina. Además, los antagonistas de retinoide han sido propuestos para el uso como agentes simples, con base en su efecto anti-proliferativo, para el tratamiento de ciertos neoplasmas insensibles a los agonistas del receptor de retinoide [WO 97/09297]. En un primer aspecto, la presente invención se refiere a los novedosos antagonistas de retinoide. De acuerdo a este aspecto particular, la presente invención se refiere a los compuestos de la fórmula I en donde el enlace discontinuo es opcional; y, cuando el enlace discontinuo está presente, R1 es alquilo inferior y R2 es hidrógeno; y, cuando el enlace discontinuo está ausente, R1 y R2 tomados conjuntamente son metileno para formar un anillo de ciclopropilo sustituido en posición cis; R3 es hidroxilo o alcoxi inferior; R4 es alquilo o alcoxi; y R5 y R6 son, independientemente, un grupo alquilo de 4 a 12 átomos de carbono o un grupo hidrocarburo mono- o policíclico de 5 a 12 átomos de carbono, los cuales están enlazados al anillo de fenilo a través de un átomo de carbono cuaternario, y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula I. Como se utiliza en la presente, el término "alquilo" significa los residuos de alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclica, en particular aquellos que contienen de 1 a 12 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, t-butilo, decilo, dodecilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y similares. El término "alquilo inferior" significa los grupos alquilo que contienen de 1 a 7, preferentemente de 1 a 4 átomos de carbono. Los grupos alquilo .inferior más preferidos son metilo y etilo. Los grupos alquilo y alcoxi denotados por R4 contienen preferentemente 1 a 8 átomos de carbono, más preferentemente 1 a 4 átomos de carbono. El grupo R4 particularmente preferido es etoxi y butoxi. Los ejemplos de grupos alquilo de 4 a 12 átomos de carbono representados por Rs o R6 son ter-butilo, 1 , 1-dimetilpropilo, 1-metil-l- etilpropilo, 1-metil-l-etilhexilo y 1, 1-dimetildecilo. De estos grupos, se prefiere ter-butilo. Los ejemplos de grupos hidrocarburo mono- o policíclicos representados por R5 o R6 son 1-adamantilo y 1-metilciclohexilo . Los compuestos de la fórmula I en donde R3 es hidroxilo forman sales con bases farmacéuticamente "t, aceptables tales como las sales de metal alcalino, por ejemplo sales de sodio y de potasio, y sales de amonio o amonio substituido tales como las sales de trimetilamonio las cuales están dentro del alcance de esta invención. En una modalidad, la invención comprende los compuestos de la fórmula la en donde R1 es alquilo inferior y R3 a R6 son como 10 en la fórmula I; y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula la. En otra modalidad más, la invención comprende los compuestos de la fórmula: 15 Ü£? en donde R3 a R6 son como en la fórmula I; y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula Ib. Los compuestos de la fórmula I en donde R1 y R2 5 tomados conjuntamente son metileno, pueden estar presentes en forma enantiomérica pura o como racematos. Mientras que la fórmula Ib describe arbitrariamente una forma enantiomérica particular, se debe entender que la invención también comprende los enantiómeros opuestos así como los 10 racematos . Particularmente preferidos son los compuestos de la fórmula la en donde R1 es metilo, R4 es etoxil o butoxi y R5 y R6 son ter-butilo. Los compuestos de la fórmula I anterior de 15 enlazan específicamente a los Receptores de Retinoide X (RXR) , pero no los activan. En consecuencia, los compuestos de esta invención pueden ser utilizados para reducir o abolir los eventos adversos inducidos en pacientes con enfermedades dermatológicas u oncológicas. 20 Las investigaciones experimentales sobre este asunto se describen en los ejemplos 1-3. En un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso de los antagonistas de retinoide que comprenden retinoides con actividad antagonista del 25 Receptor del Ácido Retinoico (RAR) , actividad antagonista del Receptor del Retinoide X (RXR) o actividad antagonista RAR-RXR mixta, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras (Th2) tales como las enfermedades alérgicas mediadas por la inmunoglobulina E (IgE) , o enfermedades mediadas por las citocinas relacionadas a Th2 , así como el uso de dichas substancias activas para el tratamiento de tales enfermedades. De acuerdo con ese aspecto de la invención, el término "antagonistas de retinoide" es utilizado para los retínoides o compuestos con actividad antagonista de RAR, RXR o RAR-RXR mixta. Éste incluye los compuestos con actividad antagonista neutra del receptor (antagonistas neutros) , actividad agonista inversa del receptor (agonistas inversos) y actividad de hormona negativa (hormonas negativas) [Klein et al., J. Biol. Chem. 271, 22692-22696 (1996)]. De este modo, el término "antagonistas de retinoide" abarca: a) antagonistas de RXR de la fórmula I dada anteriormente en la presente, particularmente aquellos de la fórmula en donde el enlace discontinuo es opcional; y, cuando el enlace discontinuo está presente, R1 es metilo y R2 es hidrógeno; y, cuando el enlace discontinuo está ausente, R1 y R2 tomados conjuntamente son metileno para formar un anillo de ciclopropilo cis-substituido; y R41 es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono; b) a-antagonistas de RAR de las fórmulas en donde R7 es alquilo de 5 a 10 átomos de carbono, R8 y R9 independientemente uno del otro son hidrógeno o flúor; tales compuestos son descritos en la patente de los Estados Unidos no. 5 391 766 y J. Med. Chem. 1997, 40, 2445; c) los a, ß-antagonistas de RAR de las fórmulas donde R10 es diamantilo, X es oxígeno o NH, R11 es fenilo o bencilo, y donde opcionalmente está presente ya sea el anillo A o el anillo B; tales compuestos son descritos en Med. Chem. Res. 1991, 1, 220; Biochem. Biophys. Res. Com. 1997, 231, 243; J. Med. Chem. 1994, 37, 1508; d) ß, ?-antagonistas de RAR de la fórmula donde R12 y R13 independientemente uno del otro son hidroxilo, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, alquilo de 1 a 5 átomos de carbono opcionalmente ramificado, o adamantilo; tales compuestos son descritos en J. Med. Chem. 1995, 3J3, 4993; e) ?-antagonistas de RAR de las fórmulas tales compuestos son descritos en Cáncer Res. 1995, 55, 4446; f) a, ß, ?-antagonistas de RAR de las fórmulas donde Y es -CH2- o azufre y Z es -CH= o nitrógeno, y R14 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; tales compuestos son descritos en J. Med. Chem. 1995. 3_8, 3163 y 4764; J. Biol . Chem. 1996, 271, 11897 y 22692; g) antagonistas de RXR de la formul en donde R15 es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono; tales compuestos son descritos en J. Med. Chem. 1996, 39, 3229; y Nature 1996, 383, 450, así como las sales farmacéuticamente aceptables y los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmulas III a XVII. En el alcance de la presente invención, el término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye cualquier sal químicamente permisible en la técnica para los antagonistas del retinoide y aplicable a pacientes humanos en una preparación farmacéuticamente aceptable. Cualquiera de tales sales convencionales, farmacéuticamente aceptables, de los antagonistas de retinoide, puede ser utilizada. Entre las sales convencionales que pueden ser utilizadas existen las sales de base incluidas, por ejemplo, las sales de metal alcalino tales como la sal de sodio o potasio, las sales de metal alcalinotérreo tales como la sal de calcio o magnesio, y las sales de amonio o alquilamonio . De acuerdo con este segundo aspecto de la invención, se ha encontrado de este modo que la administración de antagonistas de retinoide, las sales farmacéuticamente aceptables, y los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, son eficaces en el tratamiento de pacientes con enfermedades mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras (Th2) . Se ha -Sil* encontrado también que la administración de los antagonistas de retinoide es eficaz en el tratamiento de pacientes con enfermedades mediadas por citocinas relacionadas a Th2 , tales como interleucina 4 (IL-4) e IL- 5 5. Este aspecto de la invención, por lo tanto, en una modalidad se refiere al uso de los antagonistas de retinoide, a sus sales farmacéuticamente aceptables o a los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables, para la 10 fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras (Th2) . En otra modalidad, este aspecto de la invención se refiere al uso de los antagonistas de retinoide, a sus sales farmacéuticamente aceptables o a los 15 esteres farmacéuticamente aceptables de los mismos para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad mediada por las citocinas relacionadas a Th2, tales como IL-4 e IL-5. A este respecto, la invención se refiere más particularmente a un método para el tratamiento 20 de pacientes que tienen enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras (Th2), que comprende el administrar a dicho paciente un compuesto seleccionado del grupo de antagonistas de retinoide, las sales farmacéuticamente aceptables y los esteres 25 hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, siendo administrado el compuesto a una cantidad efectiva para tratar dicha enfermedad. El término "tratamiento" o "trato" incluye el tratamiento preventivo y/o terapéutico. Como se utiliza en la presente, el término "enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras" se refiere a las enfermedades que involucran inmunoglobulina E (IgE) y mastocitos, debido al desarrollo y a la activación de las células Th2 específicas de alérgeno, y abarca las enfermedades alérgicas, tales como la dermatitis atópica, otras enfermedades dermatológicas asociadas con la atopía; rinitis alérgica o fiebre del heno, asma bronquial alérgico en sus formas aguda o crónica, leve o severa, con o sin bronquitis aguda o crónica. Niveles en suero elevados, de inmunoglobulina E (IgE) y hipereosinofilia pueden estar asociados con estas enfermedades. Los antagonistas de retinoide son efectivos en todas aquellas enfermedades inmunes que están ligadas con un incremento de la actividad de las células Th2 y una secreción incrementada de las citocinas relacionadas, tales como IL-4 e IL-5. El efecto terapéutico de los antagonistas de retinoide es supuestamente debido a una disminución en la actividad de las células Th2 , una secreción disminuida de las citocinas relacionadas, tales como IL-4 e IL-5, y/o un incremento en la actividad de las células Thl debido al aumento de la producción de IL-12 por las células mielomonocíticas activadas. [S . Romagnani, Ann. Rev. Immunol . 12, 227-257 (1994); Romagnaní , ed., Thl and Th2 Cells in Health and Disease. Chem. Immunol . , Karger, Basel, 6_3, pp. 187-203 (1996); Abbas et al., Nature 3_83, 787-793 (1996)]. La eficacia de los antagonistas de retinoide de acuerdo con la presente invención, puede ser mostrada por su habilidad ya sea para suprarregular la actividad de las células Thl o inducir/estimular la producción de citocinas, Tales como IL-12, IFN?, TNF; y/o subregular la actividad de células Th2 , o inhibir la producción de citocinas, tales como IL-4 e IL-5 (ver ejemplos 4 y 5 siguientes) . Los antagonistas de retinoide son activos en el tratamiento de asma bronquial alérgico. Los signos principales de la inflamación asociada con la enfermedad asmática son la presencia de eosinófilos activados, una sensibilidad incrementada de las vías respiratorias (hiper- respuesta) , edema, hipersecreción de moco y tos. Este proceso de inflamación es mediado por la generación y activación de células del tipo Th2. La habilidad de los antagonistas de retmoide para promover la respuesta tipo Thl y con esto suprimir la respuesta tipo Th2 , se piensa que es el mecanismo subyacente a la eficacia de estos compuestos en la inflamación pulmonar alérgica/asma. Los antagonistas de retinoide están actuando sobre las células tipo Thl, en la inhibición de los signos y síntomas de la inflamación pulmonar alérgica/asma [Gavett et al., J. exp. Med. 182, 1527-1536 (1995); Kips et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 153 , 535-539 (1996). Éstos son activos en los animales retados y sensibilizados con antígeno/alergeno (por ejemplo ovoalbúmina) . Los antagonistas de retinoide, administrados ya sea sistémica o tópicamente por aerosol, son eficaces en la atenuación, inhibición o reversión de la broncoconstricción, edema de las vías respiratorias e hipersecreción de moco, inflamación de las vías respiratorias, acumulación de eosinófilos y neutrófilos en el tejido bronquio-alveolar y el lavado bronquio-alveolar, respectivamente, así como la hiper-respuesta de las vías respiratorias a los estímulos no específicos (ver Ejemplo 6 siguiente) . Para el tratamiento, el compuesto activo, por ejemplo un antagonista de retinoide, una sal farmacéuticamente aceptable o un éster hidrolizable farmacéuticamente aceptable del mismo, es administrado ya sea sistémica o tópicamente. Preferentemente, dicho compuesto es administrado como una composición que contiene el compuesto activo y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, compatible con el compuesto activo. En la preparación de tal composición, puede ser utilizado cualquier portador farmacéuticamente aceptable, convencional. Cuando el fármaco es administrado oralmente, éste es en general administrado a intervalos regulares, convenientemente en las horas de comida o una vez al día. Se ha establecido que este compuesto es efectivo en dosis que no muestran o sólo muestran efectos colaterales leves, cuando se administran oralmente o cuando se administran tópicamente. Por lo tanto, la administración oral o tópica del compuesto activo es en general preferida. Para el tratamiento de enfermedades de la piel, la boca, la nariz, la faringe, la laringe, los bronquios, etc. puede también ser ventajosamente utilizada la administración oral combinada con la tópica. En un tercer aspecto de esta invención, se ha encontrado que la administración de los antagonistas de retinoide, las sales farmacéuticamente aceptables, y los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, son eficaces en el tratamiento de pacientes con osteoporosis . La invención, por lo tanto, en ese aspecto se refiere al uso de los antagonistas de retinoide, a sus sales farmacéuticamente aceptables o a los esteres hídrolizables farmacéuticamente aceptables, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la osteoporosis .

En consecuencia, la invención también se refiere a un método para el tratamiento de pacientes que tienen osteoporosis, que comprende el administrar a dicho paciente humano un compuesto seleccionado del grupo que consiste de antagonistas de retinoide, sales farmacéuticamente aceptables, y esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, siendo administrado dicho compuesto en una cantidad efectiva para tratar la enfermedad. El término "tratamiento" incluye el tratamiento preventivo y/o terapéutico. Con referencia a ese aspecto de la invención, el término "antagonistas de retinoide" abarca los grupos a) al g) de los compuestos como se definen al principio de la presente . Como se dice en la presente, el término "osteoporosis" incluye la osteoporosis primaria así como la secundaria, y se refiere a una enfermedad caracterizada por una baja masa ósea y un deterioro microarquitectónico del tejido óseo, que conduce a la fragilidad aumentada del hueso y a un incremento consecuente en el riesgo de fracturas de huesos . Las dos formas más comunes de osteoporosis primaria son: 1. La osteoporosis posmenopáusica en mujeres (osteoporosis tipo I) con una alta tasa o proporción de remodelación de hueso, también llamada forma de alta conversión de osteoporosis. La resorción incrementada del hueso trabecular conduce más frecuentemente a fracturas de las vértebras y de la cadera. 2. La osteoporosis senil en individuos de ambos sexos principalmente mayores de 70 años (osteoporosis tipo II) con una baja tasa de remodelación ósea llamada forma de baja conversión de osteoporosis. La resorción incrementada del hueso trabecular y cortical conduce frecuentemente a fracturas de las vértebras y del cuello femoral. La osteoporosis secundaria está relacionada a muchas condiciones tales como enfermedades (por ejemplo artritis reumatoide, osteolisis inducida por tumor con o sin hipercalcemia, desórdenes intestinales y renales) , inmovilización/falta de ejercicio, mala nutrición, desórdenes de la captación de calcio o captación de vitamina D y su metabolismo, desórdenes de metabolismo de la hormona paratiroidea, y terapia medicamentosa (por ejemplo corticosteroides, heparina) . La eficacia de los antagonistas de retinoide de acuerdo con la presente invención puede ser mostrada por su habilidad para influir en la remodelación ósea, un proceso que resulta de la resorción ósea y de la formación del hueso. La resorción ósea es principalmente lograda por los osteoclastos multinucleados dotados con organelos especializados y estructuras de la membrana plasmática especializadas para permitir la resorción de las substancias inorgánicas, así como los componentes de matriz orgánica. La formación del hueso es principalmente una función de los osteoblastos que constituyen la matriz extracelular consistente de proteoglicanos , colágeno tipo I, proteínas no de colágeno, osteonectina, osteocalcina y otros componentes. Una función adicional de los osteoblastos es la mineralización ósea, que involucra la inducción de ciertas enzimas (por ejemplo fosfatasa alcalina) , la incorporación de calcio y otros componentes dentro de la estructura inorgánica del hueso, tales como hidroxiapatita . Cuando la tasa o proporción de resorción ósea es más alta que la formación del hueso, ésta conduce a una reducción neta en la masa ósea, la cual ocurre en la osteoporosis. Los antagonistas de retinoide disminuyen la resolución ósea y/o incrementan la formación del hueso y son por lo tanto útiles en la producción y terapia de la osteoporosis . Bajo condiciones fisiológicas y patológicas son conocidos una serie de compuestos que influyen y particularmente inducen o estimulan la resorción ósea tales como hormonas, vitaminas, factores de crecimiento, citocinas, prostaglandinas, lipopolisacáridos, etc. (Se dan revisiones en el libro Principies of Bone Biology, Eds.

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Los siguientes compuestos conocidos como inductores/estimuladores de la resorción ósea fueron examinados: hormona paratidoidea (PTH), péptido relacionado a la hormona paratidoidea (PTHrP) , calcitriol (1,25- dihidroxivitamina D3) , ácido todo-trans-retinoico (RA todo- trans) , ácido 9-cis-retinoico (RA 9-cis) , prostaglandina E 2 (PGE 2) , factor alfa de necrosis tumoral (TNFa) , e interlucina la (IL-la) ; Vaes G, Cellular biology and biological mechanism of bone resorption, Clinical Orthopaedics and related Research, 1988, 231, 239-271. Houghs S. et al., Effects of hipervitaminosis A on the bone and mineral metabolism of the rat, Endocrinology 1988, 122, 2933-2939. Tullberg-Reinert H. et al., Different inhibitory actions of cyclosporin A and ciclosporin A- acétate on lipopolysaccharide- , interleukin 1-, 1,25- dihidroxyvitamin D3-, and parathyroid hormone-sti ulated calcium and Iysosomal enzyme reléase from mouse calvaría in vitro. Agents and Actions 1991, 32, 321-332. 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Los experimentos son descritos más adelante en el Ejemplo 7. En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere al uso de los antagonistas de retinoide que comprenden retinoides con actividad selectiva de antagonista del receptor del ácido retinoico (RAR) , actividad antagonista del receptor del retinoide X (RXR) , o actividad mixta antagonista de RAR-RXR, para el uso en el tratamiento de enfermedades preneoplásicas y neoplásicas tales como lesiones precancerosas de la piel y las membranas mucosas, o tumores sólidos de la piel, membranas mucosas, cabeza y cuello, pulmón, estómago, colon, mama, ovario, cervix y próstata; y en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tales enfermedades (ver Ejemplo 8 más adelante) . Para el tratamiento de las enfermedades anteriormente mencionadas, el compuesto activo, por ejemplo, un antagonista de retinoide, una sal farmacéuticamente aceptable o un éster hidrolizable farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra ya sea sistémicamente o tópicamente. Preferentemente, el compuesto es administrado como una composición que contiene el compuesto activo y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, compatible con el compuesto activo. En la preparación de tal composición, cualquier portador convencional farmacéuticamente aceptable puede ser utilizado. Cuando el fármaco es administrado oralmente, éste es administrado en general a intervalos regulares, convenientemente a las horas de la comida o una vez al día. Se ha establecido que este compuesto es efectivo en dosis que no muestran o sólo muestran efectos colaterales leves cuando se administra oralmente o cuando se administra tópicamente. Por lo tanto, la administración oral o tópica del compuesto activo es en general preferida. Para el tratamiento de enfermedades de la piel, la boca, la nariz, la faringe, la laringe, los bronquios, etc., puede también ser utilizada ventajosamente la administración oral combinada con la administración tópica. En el tratamiento de las enfermedades anteriormente mencionadas, los antagonistas de retinoide, cuando se administran oralmente no inducen o sólo inducen ligeramente los eventos adversos que pertenecen al síndrome tóxico de la hipervitaminosis A, tales como las manifestaciones mucocutáneas, musculoesqueléticas, neurológicas y elevación de las transaminasas, triglicéridos y colesterol. Además, éstos no son o sólo son menos teratogénicos en contraste a los retinoides agonistas de los receptores, clínicamente útiles en el tratamiento de enfermedades dermatológicas y oncológicas, tales como el ácido todo-trans-retinoico (tretinoína) , ácido 13-cis-retinoico (isotretinoína) , etretinato y acitretina. En el tratamiento de las enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras, los antagonistas de retinoide, las sales farmacéuticamente aceptables o los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden ser utilizados solos o en combinación con otras medidas, por ejemplo, en combinación con otras substancias farmacéuticamente activas tales como los corticosteroides tópicos o sistémicos, los agentes antihistamínicos y broncodilatadores. Si se utilizan en combinación con otras substancias, los antagonistas de retinoide y otras sustancias peden ser administrados separadamente o incorporados en cantidades efectivas en una composición farmacéutica. En el tratamiento de la osteoporosis, los antagonistas de retinoide, las sales farmacéuticamente aceptables o los esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden ser utilizados solos o en combinación con otras medidas, por ejemplo en combinación con otras sustancias farmacéuticamente activas tales como calcio, derivados de vitamina D, estrógenos, anabólicos, calcitonina o bifosfonatos . Si se utilizan en combinación con otras sustancias, los antagonistas de retinoide y las otras sustancias pueden ser administrados separadamente o incorporados en cantidades efectivas en una composición farmacéutica . De acuerdo con esta invención, los antagonistas de retinode pueden también ser administrados en la forma de sus esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables.

Cualquier éster hidrolizable farmacéuticamente aceptable puede ser utilizado en las composiciones y métodos de esta invención. Entre los esteres preferidos están: los esteres aromáticos tales como los esteres bencílicos en los cuales la porción bencilo está no sustituida o sustituida con alquilo inferior, halo, nitro, tio, o tio sustituido; o esteres de alquilo inferior, por ejemplo, éster de etilo, t-butilo, ciclopentilo, ciciohexilo o cicioheptilo; o éster de 9-fluorenilmetilo. Los antagonistas de retinoide anteriormente mencionados, las sales y esteres de los mismos son útiles especialmente en los modos orales o tópicos farmacéuticamente aceptables. Estas composiciones farmacéuticas contienen el compuesto activo en asociación con un material portador, farmacéuticamente aceptable, compatible. Cualquier material portador convencional puede ser utilizado. El material portador puede ser un material portador inerte orgánico o inorgánico, adecuado para la administración oral. Los cortadores adecuados incluyen agua, gelatina, goma arábica, lactosa, almidón, estearato de magnesio, talco, aceites vegetales, polialquilen- glicoles, jalea de petróleo y similares. Además, las preparaciones farmacéuticamente activas pueden contener otros agentes farmacéuticamente activos. Además, los aditivos tales como agentes saborizantes, conservadores, estabilizadores, agentes emulsificantes, amortiguadores y similares pueden ser agregados de acuerdo con las prácticas aceptadas de la composición farmacéutica. Las preparaciones farmacéuticas pueden estar 5 constituidas en cualquier forma convencional, incluyendo entre otras: (a) una forma sólida para la administración oral tales como tabletas, cápsulas (por ejemplo, cápsulas de gelatina suave o dura), pildoras, sacos, polvos, granulos y similares; (b) preparaciones para las 10 administraciones tópicas tales como soluciones, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, polvos micronizados, rocíos, aerosoles y similares. Las preparaciones farmacéuticas pueden ser esterilizadas y/o pueden contener adyuvantes tales como conservadores, 15 estabilizadores, agentes humectantes, emulsificantes, sales para variar la presión osmótica y/o amortiguadores. Para la administración tópica a la piel o a la membrana mucosa, el derivado anteriormente mencionado es preferentemente preparado como ungüentos, tinturas, cremas, 0 geles, soluciones, lociones, rocíos; aerosoles y polvo seco para inhalación, suspensiones, champúes, jabones para el pelo, perfumes y similares. De hecho, cualquier composición convencional puede ser utilizada en esta invención. Entre los métodos preferidos de aplicación, la 5 composición que contiene los agentes de esta invención está en la forma de un ungüento, gel, crema, loción, rocío; aerosol o polvo seco para inhalación. La preparación farmacéutica para la administración tópica a la piel puede ser preparada mediante la mezcla del ingrediente activo anteriormente mencionado con portadores no tóxicos, terapéuticamente inertes, sólidos o líquidos, rutinariamente utilizados en tal preparación. Estas preparaciones contienen en general de 0.01 a 5.0 % en peso, preferentemente 0.1 a 1.0 % en peso, del ingrediente activo, con base en el peso total de la composición. En la preparación de las preparaciones tópicas descritas anteriormente, los aditivos tales como los conservadores, espesantes, perfumes y similares convencionales en la técnica de la composición farmacéutica de la preparación tópica, pueden ser utilizados. Además, los antioxidantes o mezclas convencionales de antioxidantes convencionales pueden ser incorporados dentro de las preparaciones tópicas que contienen el agente activo anteriormente mencionado. Entre los antioxidantes convencionales que pueden ser utilizados en estas preparaciones se incluyen N-metil-a-tocoferolamina, tocoferoles, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, etoxiquina y similares. Las formulaciones farmacéuticas con base en crema que contienen el ingrediente activo, utilizado de acuerdo con esta invención, están compuestas de emulsiones acuosas que contienen un alcohol de ácido graso, hidrocarburo de petróleo semisólido, etilenglicol y un agente emulsificante . Las formulaciones de ungüento que contienen el agente activo de acuerdo con esta invención comprenden mezclas de un hidrocarburo de petróleo semisólido con una dispersión de solvente del material activo. Las composiciones en crema que contienen el ingrediente activo para el uso en esta invención, comprenden preferentemente emulsiones formadas a partir de una fase acuosa de un humectante, un estabilizador de la viscosidad y agua, una fase aceitosa de un alcohol de ácido graso, un hidrocarburo de petróleo semisólido y un agente emulsificante, y una fase que contiene el agente activo disperso en una solución estabilizadora-amortiguadora acuosa. Los estabilizadores pueden ser agregados a la preparación tópica. Cualquier estabilizador convencional puede ser utilizado de acuerdo con esta invención. En la fase aceitosa, los componentes de alcohol de ácido graso funcionan como un estabilizador. Estos componentes de alcohol de ácido graso funcionan como un estabilizador. Estos componentes de alcohol de ácido graso son derivados de la reducción de un ácido graso saturado de cadena larga que contiene al menos 14 átomos de carbono. También, los perfumes y lociones convencionales utilizadas en general en la preparación tópica para el cabello pueden ser utilizados de acuerdo con esta invención. Además, si se desea, los agentes emulsificantes convencionales pueden ser utilizados en las preparaciones tópicas de esta invención. Para el tratamiento tópico de la rinitis alérgica y el asma bronquial alérgico, se utilizan aerosoles nasales y para inhalación. Las formulaciones para tales aerosoles se describen en Drugs and Pharmaceutical Sciences, Marcel Dekker, New York, 1996, Vol. 72, pp . 547-574. Además, el compuesto activo puede ser administrado por medio de inhalación de polvo seco. Tales formulaciones y dispositivos son descritos en Pharmaceutical Technology, Junio 1997, pp. 117-125. Una forma de dosis oral preferida comprende tabletas, pildoras, sacos, o cápsulas de gelatina suave o dura, metilcelulosa o de otro material adecuado en el tracto digestivo. Cada tableta, pildora, saco o cápsula puede contener preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 200 mg, más preferentemente de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg, del ingrediente activo. Las dosis orales contempladas de acuerdo con la presente invención variarán de acuerdo con las necesidades del paciente individual, como es determinado por el médico que prescribe. En general, no obstante, una dosis diaria de 0.05 a 20 mg, por kg de peso corporal, preferentemente de 0.1 a 7 mg, y más preferentemente de aproximadamente 0.3 mg a aproximadamente 1.5 mg por kg de peso corporal del paciente, es utilizada. Esta dosis puede ser administrada de acuerdo a cualquier esquema de dosificación determinado por el médico, de acuerdo con los requerimientos del paciente. La dosificación para el tratamiento depende típicamente de la ruta de administración, de la edad, del peso y de la condición de la enfermedad del individuo..Las formas de dosificación adecuadas son conocidas en la técnica o pueden ser fácilmente obtenidas de una manera conocida per se. Las formulaciones de lociones, geles, cremas, rocíos; aerosoles y polvo seco para inhalación, cápsulas de gelatina suave o dura, tabletas y sacos que son particularmente adecuados en el alcance de la presente invención o que pueden ser fácilmente ajustados de acuerdo con las técnicas anteriores, son conocidas en la técnica. La actividad farmacológica de los antagonistas de retinoide como se describen anteriormente puede ser demostrada en diversos modelos de prueba como se muestra en seguida en los Ejemplos 1-8. En los Ejemplos 1-8 se utilizaron los siguientes compuestos: Compuesto A: ácido (2E, 4E, 6Z) -7- [3 , 5-di-ter-butil-2- etoxifenil] -3-metil-2, 4 , 6-octatrienoico .

-V , ", 'i. - < • i "•»j" Compuesto B: ácido (2E,4E, 6Z) -7- [3, 5-di-ter-butil-2 • butiloxifenil] -3 -metil-2, 4, 6-octatrienoico. Compuesto C: ácido todo-trans-retinoico. Compuesto D; ácido 13-cis-retinoico. Compuesto E: ácido 9-cis-retinoico. Compuesto F: ácido 4- (5, 6, 7, 8-tetrah?dro-5, 5,8,8- tetrametil-2-naftalen-carboxamido) benzoico Compuesto G: ácido (2E,4E) -3 -metil-5- [ (1S,2S) -2- [(5,5,8, 8-tetrametil-5, 6,7, 8-tetrahidro- 10 naftalen-2-il) -ciclopropil] -penta-2, 4- dienoico Compuesto H: 1' , 1' -dióxido del ácido p- [ (E) -2- [3 ' , 4' - dihidro-4' ,4' -dimetil-7' - (heptiloxi) -2'H-l- benzotiopiran-6 ' -il] propenil] benzoico . 15 Compuesto I ácido 4- (7, 7, 10, 10-tetrametil-l-piridin-3- ilmetil-4,5, 7,8,9, 10-hexahidro-lH-nafto [2,3- g] indol-3-il)benzoico Ejemplo 1 Efecto de los retinoides con actividad antagonista de RXR sobre la pérdida de peso inducida por el ácido todo-trans-retinoico en ratones.

Los compuestos de prueba fueron solubilizados/suspendidos en aceite de cacahuate y aplicados intraperitonealmente en ratones hembra (25/30 g) 10 por 5 días 1 semana durante 2 semanas. Los resultados se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1 15 Ejemplo 2 Efecto supresor sobre la irritación de la piel provocada por el ácido todo-trans-retinoico en ratas sin pelo.

Los animales fueron tratados epicutáneamente (0.025 ml/2 cm2) una vez al día, 5 días a la semana (Lunes a Viernes) por 4 semanas consecutivas, con la solución 10 mixta de los compuestos de prueba en acetona/etanol (1/1) . Los animales fueron observados diariamente, Lunes a Viernes, para los signos de eritema y edema sobre cada sitio de prueba individual, comenzando aproximadamente a las 24 horas después del inicio del estudio. 15 La intensidad de todas las reacciones de la piel inducidas fue registrada en hojas de datos en bruto de acuerdo a la siguiente escala de graduación: 0 = Sin reacciones de la piel 1 = Ligeras reacciones de la piel (eritema 20 ligero a definir) 2 = Reacción bien definida (eritema bien definido a marcado) 3 = reacción moderada de la piel (eritema moderado a marcado con edema definido) -^á . feaB¿iag&.í 4 = Reacción severa de la piel (eritema severo a fuerte y edema marcado) Las calificaciones de irritación a la piel, acumulativas, medias, calculadas después de cada aplicación del tratamiento son presentadas en las Figuras 1 y 2.

Ejemplo 3 Efecto supresor sobre la actividad teratogénica in vitro de diversos retinoides Los primordios de las extremidades delanteras y posteriores de embriones de rata en el día 13 fueron disociados en solución salina balanceada libre de calcio-magnesio, que contenía 0.1% de tripsina y 0.1% de EDTA a 37°C. La densidad celular fue ajustada a 2 x 107 células de primordios de la extremidad/ml en medio CMRL que contenía 10% de suero-N. Cultivos celulares de alta densidad fueron establecidos mediante el surtido de 20 µl de la suspensión celular como una gota discreta en el centro de cada pozo de una placa de 24 pozos. Las células se dejaron acoplar por 1 a 2 horas a 37°C antes de que los cultivos fueran inundados con el medio de cultivo apropiado. Las sustancias de prueba fueron disueltas entonces en sulfóxido de dimetilo y agregadas al mismo ^ii^ iái. tiempo en el día 1 de cultivo. Una cantidad equivalente del solvente (0.4%) fue agregada a los cultivos control. Después de 7 días en cultivo, el grado de diferenciación de las células mesenquimales en condrocitos, produciendo cartílago, fue determinado mediante la tinción de los proteoglicanos con azul alcian. El colorante enlazado fue extraído con clorhidrato de guanidina 4 M y la absorbancia a 600 nm fue determinada espectrofotométricamente. La Figura 3 muestra la interacción de diversas concentraciones del compuesto A con una concentración constante del ácido todo-trans-retinoico (Compuesto C) . C fue mantenido durante el experimento a una concentración constante de 1x10 mol/l Las concentraciones del Compuesto A se incrementaron de lxlO"9 mol/l hasta 2xl0'6 mol/l. La diferenciación de las células mesenquimales se incrementó desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 30% con concentraciones cada vez mayores del Compuesto A. La Figura 4 muestra la interacción de diversas concentraciones del compuesto A (lxlO"2 mol/l a 2xl0"6 mol/l) con el Compuesto D el cual fue mantenido durante la incubación a la concentración constante de lxlO"6 mol/l. La diferenciación de las células mesenquimales se incrementó desde aproximadamente 30% hasta aproximadamente 70% con concentraciones cada vez mayores del Compuesto A.

La Figura 5 muestra la interacción de diversas concentraciones del compuesto A (lxlO"9 mol/l hasta 2xl0"6 mol/l) con el Compuesto E el cual fue mantenido durante la incubación a la concentración constante de 5xl0"7 mol/l. La 5 diferenciación de las células mesenquimales se incrementó desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 80% con concentraciones cada vez mayores del Compuesto A. La Figura 6 muestra la interacción de diversas concentraciones del compuesto A (lxlO"9 mol/l hasta 2xl0"6 10 mol/l) con el Compuesto F el cual fue mantenido durante la incubación a la concentración constante de lxlO"8 mol/l. La diferenciación de las células mesenquimales se incrementó desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 75% con concentraciones cada vez mayores del Compuesto A. 15 La Figura 7 muestra la interacción de diversas concentraciones del compuesto A (lxlO"9 mol/l hasta 2xl0"6 mol/l) con el Compuesto G el cual fue mantenido durante la incubación a la concentración constante de lxlO"6 mol/l. La diferenciación de las células mesenquimales se incrementó 20 desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 110% con concentraciones cada vez mayores del Compuesto A. f'-^U * &&.--... - *?t.)a. ¿ /.$ib¡6*, l Ejemplo 4 Ensayo in vitro para la inducción de producción de IL-12 por antagonistas de retinoide.

Las células THP-1 fueron obtenidas de la colección norteamericana de cultivos de especies (American Tissue Culture Collection) y cultivadas en medio completo. Para evaluar la producción de IL-12, las células THP-1, 1.25 x 106 células/ml, fueron estimuladas con la cepa S . Aureus Cowan (SAC) (1/1000) e interferon-? recombinante humano (huIFN-? (1000 U/ml) [Ma et al., J. Exp. Med. 183, 147-157 (1996) ] . Alternativamente, 0.5 x 106 células mononucleares de sangre periféricamente humana (PBMC) (1 ml de cultivo en placas de 48 pozos) fueron aprestadas con huIFN-? (1000 U/ml) por 16 horas a 37°C, y luego estimuladas con SAC (1/1000) . Los sobrenadantes fueron recolectados después de 48 horas y congelados a -20°C hasta que se evaluaron [Panina-Bordignon et al., Clin. Invest. 100, 1513-1519 (1997) ] . La producción de IL-12 fue medida por el ensayo inmunosorbente ligado a enzima, específico (ELISA) , utilizando el anticuerpo 20C2 (heterodímero p40-p35 de IL- 12 de rata anti-humano), a 2.5 µg/ml en amortiguador de recubrimiento, y el anticuerpo 4D6 conjugado a peroxidasa (de rata anti-IL-12 humana) a 250 ng/ml en amortiguador de ensayo como se describe [Zhang et al., J. Clin. Invest. 93 , 1733-1739 (1994)]. El estándar (IL-12 humana recombinante, 800 pg/ml hasta 6 pg/ml) y las muestras (100 µl) diluidas en amortiguador de ensayo fueron agregadas a los pozos por duplicado. La absorbancia fue leída a 450-650 nm. Las concentraciones desconocidas de IL-12 de las muestras fueron leídas a partir de la curva estándar correspondiente y multiplicadas por el factor de dilución correspondiente. La producción de IL-12 máxima varió entre 200 y 400 pg/ml. Los antagonistas de retinoide liofilizados fueron diluidos en DMSO bajo luz amarilla, sobre hielo a una concentración de 2 mM. Se prepararon diluciones en serie (1 µM-1 pM) en medio RPMI completo. Se agregaron 10 µl de cada dilución a 1 ml de cultivo. Los resultados de los experimentos indican que los antagonistas de retinoide probados influyen la producción de IL-12. En particular, los antagonistas de retinoide probados estimulan la producción de IL-12 por monocitos humanos activados, ver Tablas 2 y 3.

Tabla 2 Los antagonistas de retinoide mejoran específicamente la producción de IL-12 por monocitos activados. nM; IL-12 (pg/ml) IL-10 (pg/ml) TNF-a (pg/ml) Medio 0 <10 <10 SAC+IFN-? 120 1040 1840 Antagonista de RAR a 1000 251 1343 1912 Compuesto H 100 102 1050 1600 10 n.d. 1060 1392 Medio 0 <10 <10 SAC+IFN-? 126 1040 2000 Antagonista de RAR a,ß,? 1000 321 1116 2884 Compuesto I 100 205 983 2752 10 173 971 2592 Medio 0 <10 <10 SAC+IFN-? 120 1040 1840 antagonista de RXR 1000 298 1700 1560 Compuesto B 100 161 1521 1812 10 106 1020 1484 Tabla 3 Los antagonistas de retinoide mejoran la producción de IL-12 por PBMC y las células THP-1 que han sido cebadas con IFN? y estimuladas con SAC. * fueron agregados antagonistas de retinoide (1 µg) al tiempo 0 junto con IFN? o después de 16 horas junto con SAC.

Ejemplo 5 Ensayo in vitro para la inhibición de la diferenciación de células T humanas, vírgenes en células T cooperadoras 2 (Th.2) por antagonistas de retinoide.

Las células T intactas o vírgenes provenientes de sangre de médula fueron aisladas y tratadas como se describe [Panina-Bordignon et al., J. Clin. Invest. 100. 1513-1519 (1997)]. En resumen, las células mononucleares derivadas de sangre de médula fueron incubadas con anticuerpos monoclonales anti-CD45RA y antiCD4. Después de una incubación de 20 minutos, las células fueron lavadas e incubadas con esferas magnéticas recubiertas con Ig-de cabra anti-ratón. Las células positivas fueron separadas y sembradas a 1 x 106 células/ml en una placa de 24 pozos, junto con las células adherentes autólogas, PHA, e IL-4 en presencia o ausencia del Compuesto H o el Compuesto B a l mM por 50 días. Las células fueron luego lavadas y colocadas nuevamente en cultivo en presencia de IL-2 (100 U/ml) . Después de 10 días, las células fueron recolectadas y reestimuladas con PMA (50 ng/ml) y ionomicina (1 µg/ml) por 4 horas. Se agregó Brefeldina A (10 µg/ml) por las últimas 2 horas. Luego las células fueron fijadas con paraformaldehído al 4% y permeabilizadas con saponina. Las células fijadas fueron teñidas con los anticuerpos monoclonales FITC-anti-IFN? y PE-anti-IL-4 , y sujetas a análisis citofluorimétricos . Los resultados del experimento indican que los antagonistas de retinoide probados reducen la diferenciación de las células T intactas en células Th2 que secretan IL-4. (Tabla 4).

Tabla 4 Supresión de la expresión de IL-4 en células Th2 por los antagonistas de retinoide Ejemplo 6 Modelo murino de inflamación de las vías respiratorias inducida por alérgeno e hiper-respuestas Ratones C57BL/6 (8-9 semanas de edad) son activamente sensibilizados a la ovoalbúmina (OA) en el día 0 y en día 14 por una inyección intraperitoneal de 10 µg de OA + 1 mg de Al(OH)3 (suspensión en gel) en 0.2 ml de solución salina estéril. En el día 21, los ratones son retados con 0.5% de OA en aerosol por 18 minutos. El aerosol es generado por un nebulizador ultrasónico De Vilbiss Ultra-Neb 90, la salida del cual está conectada a una cámara pequeña de plexiglass que contiene los animales. Los ratones son dosificados con el Compuesto B antagonista de RXR (10 y 30 mg/kg intraperitonealmente) diariamente por tres días, 48 horas, 24 horas, e inmediatamente antes del reto con OA. Los animales son utilizados en el día 21.

Acumulación de Células Inflamatorias en las Vías Respiratorias : En el día 24, tres días después del reto con el aerosol de OA, los animales son anestesiados con uretano (2.4 g/kg) y traqueotomizados con un catéter de calibre 23. Los pulmones son lavados con alícuotas (2 x 1 ml) de solución salina balanceada de Hank, estéril, sin Ca++ y Mg++. El fluido de lavado es recuperado después de 30 segundos por aspiración suave y combinado para cada animal . Las muestras son luego centrifugadas a 2000 rpm por 15 minutos a 5°C. Las células sanguíneas rojas (eritrocitos) son lisadas del concentrado resultante con 0.5 ml de agua destilada y las células remanentes en el botón concentrado son reconstituidas con 5 ml de HBSS. Las muestras son centrifugadas una segunda vez a 2000 rpm por 15 minutos a 5°C. El botón concentrado resultante es suspendido de 1 ml de HBSS. El número de células totales es determinado a partir de una alícuota de la suspensión celular utilizando un hemocitómetro. Para las preparaciones citológicas, las células son fijadas sobre porta-objetos citocentrifugados teñidos con una tinción de Wright modificada. Las cuentas diferenciales sobre al menos 300 células son realizadas utilizando los criterios morfológicos estándares para clasificar células. Los resultados de los experimentos indican que los antagonistas de retinoide probados inhiben la acumulación inducida por alérgeno de las células inflamatorias de las vías respiratorias (Tabla 5) .

Tabla 5 Supresión de la acumulación de células inflamatorias en las vías respiratorias por antagonistas de retinoide en un modelo de ratón de inflamación de las vías respiratorias inducida por alérgeno Hiper-respuesta de las vías respiratorias En el día 24, tres días después del reto con aerosol de OA, los animales son anestesiados con pentobarbital sódico (100 mg/kg, i.p.) y traqueotomizados (PE-190) . Una vena yugular es canulada con una tubería silástica para la administración intravenosa del fármaco. Los animales son colocados en un pletismógrafo de cuerpo entero con un neumotacógrafo integral y mecánicamente ventilado (Vf = 150/min., Vt = 0.3 ml ; Modelo 683, Harvard Apparatus, S. Natic, MA) inmediatamente después del tratamiento con bromuro de pancuronio (0.1 mg/kg, i.v.). El volumen mareal (aumento o variación fisiológica de algunos constituyentes de los líquidos corporales) es obtenido a partir de una integración de la señal de flujo respiratorio utilizando un transductor de presión diferencial (Validyne DP 103-08, Northridge, CA) . La presión transpulmonar es medida con un transductor de presión diferencial (Validyne DP 4-30, Northridge, CA) como la diferencia entre la presión intratraqueal y la presión intrapleural (obtenida a partir de una cánula insertada dentro del espacio intercostal) . Los cambios en la resistencia pulmonar (cm H20/ml/s) para incrementar las dosis de metacolina (30, 100, 300, 1000 µg/kg, i.v.) son calculados a partir de la presión transpulmonar, el volumen mareal, y las mediciones de flujo respiratorio utilizando un Sistema de Procesamiento de Señales de Instrumento Modular (Malvern, PA) . Los resultados de los experimentos indican que los antagonistas de retinoide pueden prevenir o revertir la inflamación alérgica de las vías respiratorias e inhibir la broncoconstricción inducida por antígeno, típica para las enfermedades alérgicas de las vías respiratorias, tales como el asma bronquial alérgica. 10 Ejemplo 7 Ejemplos para el Efecto de los Antagonistas de Retinoide sobre la Resorción Ósea 15 Ensayo de Resorción Ósea Son conocidos una serie de agentes para inducir o estimular la resorción ósea. En este ensayo fueron probados los antagonistas de retinoide para su capacidad de inhibir o contraatacar la actividad de absorción ósea de 20 los inductores de resorción ósea.

Materiales y Métodos. La resorción ósea fue determinada mediante la cuantificación de liberación de calcio a partir del 25 calvario de ratón neonatal (huesos del cráneo) en un >-- <.- f 49 sistema de cultivo de tejidos, en medio sobrenadante. Los calvarios fueron preparados a partir de ratones de 4 días de edad (peso corporal de 4-4.5 g) de ratones albinos Swiss con cópula de tiempo controlado. Las partes calvariales 5 frontal y parietal fueron disectadas bajo un estéreo- microscopio y divididas a la mitad a lo largo de la sutura media. Los calvarios medios de todos los animales fueron aleatoriamente distribuidos a cajas de cultivo de 6 pozos (NUNC), que contenían rejillas de acero inoxidable para 10 soportar los huesos en la interfaz del gas y medio. El tejido es incubado en medio BGJ (Bioconcept, Suiza) de acuerdo a una formulación específica suplementada con 1 mg/ml de BSA (albúmina sérica bovina, SIGMA) . Los calvarios fueron cultivadas a 37°C en atmósfera 15 humidificada de 5% de C02 y 95% de aire. Después de 24 horas de preincubación, éstas fueron transferidas a nuevas cajas que contenían 1.7 ml de medio fresco y las sustancias de prueba. Los inductores de la resorción ósea y los antagonistas de retinoide fueron probados ya sea como 20 agentes simples o en combinación. Los cultivos fueron luego corridos por 72 horas. Las concentraciones de calcio en los sobrenadantes de cultivo fueron medidas inmediatamente después de cada periodo de incubación. El calcio libre, 25 estable, fue determinado en muestras de 25 µl con un método espectrofotométrico utilizando un equipo que contiene azul de metiltimol (Biomérieux) , (E.M. Gindler y J.D. King, Am. J. Clin. Pathol. 1972, 58, 376-382). La respuesta resortiva fue expresada como µg de calcio liberado por medio calvario durante 3 días de tratamiento. Las pruebas adicionales fueron realizadas para examinar el calcio remanente en los calvarios. El calcio fue extraído con 5% de ácido tricloroacético (TCA) y determinado en muestras de 50 µl después de la neutralización con hidróxido de sodio. Además, la viabilidad del tejido óseo fue determinada para extruir la citotoxicidad. Ésta fue cuantificada por la prueba colorimétrica de tetrazolio MTT (T. Mosmann, J. Immunol . Methods 1983, 65, 55-63). En estas pruebas, fueron utilizados los antagonistas de retionoide H y B. Se utilizaron los siguientes agentes inductores/estimuladores de la resorción ósea: Calcitrol (1, 25-dihidroxivitamina D3) , Ácido todo-trans-retinoico (RA todo-trans) , y Ácido 9-cis-retinoico (9-cis RA) , fueron sintetizados por Roche laboratories, Basilea, Prostaglandina E2 (PGE2) , cultivos en célula probado (Sigma Chem. Co . ) , Factor a de necrosis tumoral (TNFa) , recombinante murina, e Interleucina-la (IL-la) , recombinante murina (Calbiochem. ) . La resorción ósea inducida por varios agentes fue determinada mediante la medición de la cantidad de calcio liberada a partir de los medios calvarios hacia el medio sobrenadante. La liberación del calcio es indicada en µg por medio calvario en 1.7 ml de medio. La liberación del calcio a partir de los calvarios hacia el medio así como la captación del calcio desde el medio hacia los calvarios, puede ser medida también. La eficacia de los antagonistas de retinoide para inhibir la actividad de los inductores de la resorción ósea es expresada como el % de inhibición. Se calcula a partir de la diferencia entre la cantidad de calcio liberado por los inductores de la resorción ósea solos, y la cantidad de calcio liberado por su combinación con antagonistas de retinoide. Los antagonistas de retinoide solos no inducen la liberación del calcio ni la captación. La velocidad de resorción basal en los controles con vehículo fue de 5 o menos de 5%.

Resultados. Los resultados de los experimentos (tablas 6 a 11) demuestran que los antagonistas de retinoide H y B contraatacan la resorción ósea inducida por seis diferentes agentes. Se considera que éstos últimos contribuyen a la resorción ósea responsable de la osteoporosis y las ,.^-.^^!.^^^-^^ AAÍ.. A á¡^tí ^MdUÉ¿ á^í^^t. iMB* *^ad fracturas óseas en mamíferos y en seres humanos. Como se puede observar a partir de las tablas 6 a 11, los seis agentes de resorción ósea indujeron una liberación del calcio dependiente de la dosis a partir del hueso calvario hacia el medio sobrenadante. Los antagonistas de retinoide fueron capaces de inhibir la liberación de calcio inducida por estos seis diferentes agentes de resorción ósea. á^r*? Tabla 6 Calcitpol como agente inductor Tabla 7: Ácido todo-trans-retinoico como agente inductor Ul f Tabla 8: Ácido 9-cis-retinoico como agente inductor t_n Ui Tabla 9: Prostaglandina E2 (PGE2) como agente inductor u? , -=*• Tabla 10: Factor de Necrosis Tumoral a (TNF-a) como agente inductor Ul Tabla 11: Interleucina la (IL-la) como agente inductor Ul oo stsí i 4 * 59 Ejemplo 8 Eficacia de la aplicación tópica del Compuesto B en el tratamiento de lesiones precancerosas de la piel (queratosis actínicas múltiples) En una prueba clínica, una crema que contiene 1% del Compuesto B fue aplicada sobre las lesiones dos veces al día sin vendaje oclusor. Los resultados se dan en la Tabla 10 12. Como se puede observar a partir de la Tabla 12, el Compuesto B, cuando se administra tópicamente es efectivo en la terapia de las lesiones precancerosas de la piel y es, - en contraste a otros retinoides - bien tolerado sin inducir ninguna irritación de las lesiones y la piel circunvecina. 15 Tabla 12 -* ?- " 60 * particularmente irritación de las lesiones y la piel circunvecina De acuerdo con la presente invención , los compuestos de la fórmula I pueden ser preparados mediante la 5 reacción de un compuesto de la fórmula XVIII XVIII con un compuesto de la fórmula XIX XIX 10 & en donde A es formilo y B es di- (alcoxi inferior) fosfonilo; R es alcoxi inferior; y R1, R2 y R4 a R6 son como se definen anteriormente; para producir un compuesto de la fórmula I en donde R3 es 5 alcoxi inferior y, si se desea, se hidroliza el grupo alcoxi inferior R3 en el compuesto así obtenido de la fórmula I. La reacción del compuesto XVII con el compuesto XIX puede ser llevada a cabo de acuerdo a los métodos que son conocidos per se por la reacción de Horner (Wadsworth- 10 Emmons) . La reacción puede ser llevada a cabo en presencia de una base y, preferentemente, en presencia de un solvente orgánico inerte, por ejemplo, en presencia de hidruro de sodio en benceno, tolueno, dimetilformamida, tetrahidrofurano, dioxano, o 1, 2-dimetoxialcano, o también 15 un alcoholato de sodio en un alcanol, por ejemplo metilato de sodio en metanol, en un intervalo de temperatura que cae entre 0o y el punto de ebullición de la mezcla de la reacción. Otro ejemplo más para una base que puede ser utilizada en esa reacción es la bis (trimetilsilil) amida de 20 litio en un solvente inerte como tetrahidrofurano en un intervalo de temperatura entre -78°C y 0°C. Un éster de ácido carboxílico obtenido de este modo de la fórmula I puede ser hidrolizado de una manera conocida per se, por ejemplo, mediante tratamiento con álcalis, especialmente 25 mediante tratamiento con solución acuosa-alcohólica de hidróxido de sodio o de potasio en un intervalo de temperatura que se encuentra entre la temperatura ambiente y el punto de ebullición de la mezcla de reacción. El ácido carboxílico obtenido de este modo de la fórmula I puede ser aislado de una manera bien conocida per se tal cual o como una sal, por ejemplo, como una sal de metal alcalino, especialmente como la sal de sodio o de potasio. Los compuestos de la fórmula XVIII son compuestos novedosos y son también un objetivo de la presente invención. Los compuestos de la fórmula XVIII pueden ser preparados como se describe en los esquemas de reacción 1 y 2 siguientes: Esquema de Reacción 1 Esquema de Reacción 2 R5 (12) Los compuestos de la fórmula XVIII en donde la unión discontinua está presente, R1 es alquilo inferior y R2 es hidrógeno, pueden ser obtenidos de acuerdo al Esquema de Reacción 1. En el Esquema de Reacción 1, el compuesto (1) es convertido al compuesto (2) mediante la reacción con un nucleófilo organometálico como un halogenuro de alquil-litio o alquil-magnesio. El compuesto (2) puede ser oxidado para formar el compuesto (3) mediante tratamiento con agentes oxidantes tales como dióxido de manganeso. El compuesto (3) puede ser convertido al compuesto (4) en una olefinación de Peterson [Synthesis, 384 (1984) D.J. Ager, J. Org. Chem. 33, 780 (1968) D.J. Peterson] mediante reacción con acetato de etil-trimetilsililo. El grupo éster carboxílico en el compuesto (4) puede ser reducido a un grupo hidroximetilo mediante tratamiento con un hidruro metálico tal como hidruro de diisobutilaluminio para dar el compuesto (5) , el cual puede ser oxidado mediante tratamiento con agentes oxidantes tales como dióxido de manganeso para dar un compuesto de la fórmula XVIII en donde R1 es alquilo inferior y R2 es hidrógeno. Los compuestos de la fórmula XVIII en donde el enlace discontinuo está ausente y R1 y R2 tomados conjuntamente son metileno pueden ser obtenidos como se describe en el Esquema de Reacción 2. De acuerdo al Esquema de Reacción 2, el compuesto (6) se hace reaccionar con trimetilsililacetileno en presencia de tetrakis (trifenilfosfina) paladio (0) y Cul para producir el compuesto (7) el cual, después de la eliminación del grupo trimetilsililo mediante tratamiento con fluoruro de tetrabutilamonio y formilación del compuesto (8) así obtenido, con dimetilformamida en presencia de una base tal como el butil-litio produce el compuesto (9) . El grupo formilo en el compuesto (9) puede ser reducido al grupo hidroximetilo mediante tratamiento con un hidruro metálico tal como borohidruro de sodio en etanol para dar el compuesto (10) . La reducción del triple enlace en el compuesto 10) , por ejemplo, por medio de un catalizador de Lindlar, proporciona el compuesto (11) el cual es convertido al compuesto (12) por una reacción modificada de Simmons- Smith [Tetrahedron 24, 53 (1968)]. Furuka a, N. Kawabata, J. Nishimura, J. Org. Chem. 42, 3031 (1977) N. Kawabata y colaboradores] . Esta ciclopropanación puede también ser llevada a cabo de una manera enantioselectiva de acuerdo al método de Fujisawa y colaboradores (Chem. Letters, 61 (1992) utilizando (R,R) o (S, S) -dietiltartrato como auxiliar quiral. El compuesto (12) puede ser oxidado utilizando los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo mediante clorocromato de piridinio, o por una oxidación de Swern o Dess-Martin para producir un compuesto de la fórmula XVIII donde A es formilo, el enlace discontinuo está ausente y R1 y R2 tomados conjuntamente son metileno. Todas estas reacciones pueden ser llevadas a cabo de una manera conocida per se. La invención es ilustrada además por los Ejemplos siguientes : Ejemplo 9 4.0 g de 3 , 5-di-ter-butil-2-hidroxibenzaldehído (CAS # 37942-07-7) se disolvió en dimetilformamida (DMF) . Éste se trató con 0.89 g de hidruro de sodio (50% en suspensión de aceite) y se agitó a 25°C hasta que el hidrógeno ya no se desprendió más. A éste se agregaron 2.01 ml de n-bromobutano y la mezcla se calentó a 85°C por 14 horas. Ésta se enfrió y se vació en agua. La capa acuosa se extrajo con éter. La capa etérea se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio, y el solvente se eliminó. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía en columna de florsil (15% de éter/hexano) para dar 5.4 g de 3,5-di-ter-butil-2-butiloxibenzaldehído; RMN XH (CDC13) d 10.31 (s, 1H, aldehido), 7.70 (dd, 4H, aromáticos), 3.94 (t, 2H, -OCH2-) . 3.5 g de 3 , 5-di-ter-butil-2-butiloxibenzaldehído se disolvieron en 30 ml de éter etílico y se enfriaron con agitación a 0°C. Se agregaron 11.4 ml de metil-litio (1.55 M en éter) por medio de una jeringa. Éste se agitó por 10 minutos, y se vació en cloruro de amonio 1 M y se agitó. La capa de éter se separó, se secó sobre sulfato de sodio, y el solvente se eliminó para dar 3.7 g de un aceite el cual se purificó mediante cromatografía (gel de sílice - 5% de éter/hexano) para dar 3.3 g de 1- (3 , 5-di-ter-butil-2- butiloxifenil) etanol; RMN 1H (CDC13) d 7.34 (dd, 4H, aromáticos), 5.25 (m, 1H, -CH3CH-), 3.85 (t, 2H, -OCH2-). 2.77 g (9 mmol) de 1- (3 , 5-di-ter-butil-2- butiloxifenil) etanol se disolvió en 120 ml de tolueno que había sido tratado con 14 g de óxido de manganeso (IV) . Éste se agitó perfectamente a 75°C por 5 horas. Éste se enfrió luego y se filtró a través de celite. El solvente se eliminó para dar 2.27 g de 1- (3 , 5-di-ter-butil-2- butiloxifenil) etanona. RMN XH (CDC13) d 7.38 (dd, 4H, aromáticos), 2.62 (s, 3H, CH3C-), 3.72 (t, 2H, -OCH2-). 1.43 g de diisopropilamina en 20 ml de tetrahidrofurano (THF) se trataron con 8.4 ml de n-butil- litio (1.6 M en hexano) a -20°C. Éste se enfrió a -78°C y se trató con 2.26 g de trimetilsililacetato de etilo. Éste se dejó calentar hasta 0°C y se vació en agua y se extrajo en hexano. El extracto se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se eliminó para dar un aceite. La purificación y separación de los isómeros fue lograda mediante cromatografía sobre gel de sílice (15% de éter/hexano) para dar 3.5 del éster etílico del ácido (Z) -3- (3, 5-di-ter-butil-2-butiloxifenil) -butenoico. RMN XH (CDC13) d 7.05 (dd, 4H, aromáticos), 5.90 (s, 1H, 2-H), 3.96 (q, 2H, -OCH2CH3) , 3.70 (t, 2H, -OCH2-), 2.21 (s, 3H) . 0.9 g del éster etílico del ácido (E) -3- (3, 5-di - ter-butil-2-butiloxifenil) -butenoico se disolvieron en 20 ml de éter anhidro. Éste se enfrió a -78 °C y se trató con 6.0 ml de hidruro de diisobutilaluminio (1.0 M en hexano) . La temperatura se dejó elevar hasta 0°C y luego se trató con sal de Rochelle acuosa al 20%. Éste se agitó a 25°C por 1 hora. La fracción orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, y el solvente se eliminó para dar 0.78 g del (Z) -3- (3 , 5-di-ter-butil-2- butiloxifenil)buten-l-ol. RMN XH (CDC13) d 7.08 (dd, 4H, aromáticos), 5.90 (t, 1H, CH-OH) , 3.80 (t, 2H, -OCH2-), 2.49 (t, 1H, -OH) , 2.21 (s, 3H) . 0.66 g del (Z) -3 - (3 , 5-di-ter-butil-2- butiloxifenil) -buten-1-ol se disolvió en 100 ml de éter y se enfrió a 15 °C. 6.6 g de óxido de manganeso (IV) suspendido en 50 ml de éter se agregaron a la solución anterior. Ésta se agitó a temperatura ambiente por 3 horas. La mezcla se filtró a través de celite y el solvente se eliminó. Esto dio 0.64 g de (Z) -3- (3 , 5-d?-ter-butil-2-butiloxifenil) - buten-1-al. RMN XH (CDC13) d 9.45 (d, 1H, aldehido), 7.08 (dd, 4H, aromáticos), 5.90 (t, 1H, CH-OH) , 3.80 (t, 2H, -OCHs-), 2.49 (t, 1H, -OH), 2.21 (s, 3H) . 635 mg de trietil-3-metil-4-fosfonocrotonato (CAS # 41891-54-7) se disolvió en 5 ml de tretrahidrofurano, se enfrió a -78°C y se trató con 2.2 ml (2.2 mmol) (1.0 M en THF) de bis (trimetilsilil) amida de litio. Mientras estaba a -78°C, se agregaron lentamente 600 mg de (Z) -3- (3 , 5-di-ter- butil-2-butiloxifenil) -buten-1-al en 5 ml de THF. Ésta se agitó a -78°C por 0.5 horas y se vació en cloruro de amonio acuoso diluido. El producto se extrajo en hexano y la porción orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, y el solvente se eliminó para dar un aceite crudo. La purificación y separación del isómero fue lograda mediante cromatografía sobre gel de sílice (3% de éter/hexano) para dar 540 mg de éster etílico del ácido (2E,4E,6Z) -7- (3, 5 -di -ter-butil -2 -butiloxifenil) -3, 7-dimetil- 2,4, 6-heptatrienoico . RMN XH (CDC13) d 7.12 (dd, 4H, aromáticos), 6.62 (dd, 1H, H-5) , 6.20 (d, 1H, H-4), 6.18 (d, 1H, H-6), 4.15 (q, 3H, -OCH2 CH3) , 3.7 (dt, 2H, -OCH2-), 2.22 (s, 3H) , 2.15 (s, 3H) . 520 mg de éster etílico del ácido (2E, 4E, 6Z) -7- (3, 5-di-ter-but?l-2-butiloxifenil) -3, 7-dimetil -2 , 4 , 6- heptatrienoico se suspendieron en 5 ml de etanol y se trataron con 5 ml de hidróxido de sodio 6 N y se calentó a reflujo por 1.5 horas. Ésta se enfrió y se acidificó a pH 3 con ácido clorhídrico difluido. El sólido que precipitó se extrajo en cloroformo. La porción orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, y el solvente se eliminó. Esto dio un sólido que se cristalizó a partir de cloruro de metileno/hexano para dar el ácido (2E, 4E, 6Z) -7- [3, 5 -di-ter-butil -2 -butiloxifenil] -3 -metil - 2 , 4 , 6- octatrienoico. RMN H (CDC13) d 7.08 (dd, 4H, aromáticos), 6.65 (dd, 1H, H-5) , 6.22 (d, 1H, H-4), 6.18 (d, 1H, H-6) , 3.7 (dt, 2H, -OCH2-), 2.24 (s, 3H) , 2.15 (s, 3H) , P.f. 148- 151°C. En analogía al procedimiento anterior, se prepararon los siguientes compuestos: Ácido (2E,4E,6Z) -7- (3 , 5 -di -ter-butil -2- etoxifenil) -3-metil-2, 4, 6-octatrienoico, p.f. 208-211°C (a partir de THF/hexano) . Ácido (2E,4E,6Z) -7- (3 , 5-di-ter-butil-2 - etoxifenil) -3-metil-2, 4, 6-octatrienoico, p.f. 165-167°C (a partir de THF/hexano) . Ácido (2E,4E,6Z) -7- (3 , 5-di -ter-butil -2- hexiloxifenil) -3-metil-2, 4, 6-octatrienoico, p.f. 156-160°C (a partir de éter/hexano) . Ácido (2E,4E,6Z) -7- (3 , 5-di-ter-butil-2- octiloxifenil) -3-metil-2, 4, 6-octatrienoico, p.f. 137-139°C (a partir de hexano) .

Ejemplo 10 Una solución de 13 g de 2-bromo-4 , 6-di-ter-butil- fenol en 100 ml de dimetilformamida (DMF) se agregó gota a 5 gota una suspensión de 2.2 g de hidruro de sodio (50% en aceite mineral) en 100 ml de DMF a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que el hidrógeno ya no se desprendió (aprox. 1 hora) , se enfrió nuevamente a 0°C y se trató con una solución de 22 g de 10 yoduro de etilo en 50 ml de DMF. Después de agitar por aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació sobre agua con hielo, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó para dar 13.5 g de l-bromo-2-etoxi-3 , 5- 15 di-ter-butil-benceno como cristales blancos, p.f. 55-56°C. 10.1 g de l-bromo-2-etoxi-3, 5-di-ter-butil-benceno se disolvieron en 50 ml de piperidina. Después de la adición de 490 mg de tetrakis (trifenilfosfina) paladio (0), 96 mg de yoduro de cobre (I) y 140 mg de trifenilfosfina, la 20 mezcla de reacción se calentó a 90°C bajo atmósfera de argón y se trató lentamente con 6.3 g de (trimetilsilil) acetileno (aprox. 2 horas) . La reacción se mantuvo por 10 minutos adicionales a 90°C antes de que se repitiera este procedimiento utilizando la misma cantidad de reactivos. La 25 mezcla de reacción se calentó por otra hora a 90°C, luego se vació sobre agua con hielo, se acidificó con 80 ml de ácido clorhídrico concentrado, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía (gel de sílice, hexano/2.5% de acetato de etilo) para dar 8.3 g del (3 , 5-di-ter-butil-2-etoxi-feniletinil) -trimetilsilaño como un aceite ligeramente amarillo. 8.3 g de este aceite se disolvieron en 120 ml de tetrahidrofurano (THF) y se trataron con 6.03 g de fluoruro de tetrabutilamonio. Después de 1 hora de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació sobre agua con hielo, se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. La purificación del aceite café resultante mediante cromatografía (gel de sílice, hexano) dio 4.2 g de 1 , 5-di-ter-but?l-2-etoxi-3- etil-benceno como aceite incoloro del cual cristalizó en el refrigerador, p.f. 46-47°C. Una pequeña muestra fue sublimada al alto vacío y fundida a 48-49°C. 4.1 g de este compuesto se disolvieron en 45 ml de THF y se trataron con 11 ml de n-BuLi (1.6 molar en hexano) a -78°C. Después de 1 hora a -78°C, la mezcla de reacción se trató con 12 ml de DMF, se calentó hasta la temperatura ambiente, se agitó por 6 horas, se vació sobre agua con hielo, se acidificó con ácido clorhídrico concentrado, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó --"-^¡ r < , 74 sobre sulfato de sodio y se evaporó para dar 5 g de un aceite café que se purificó mediante cromatografía (gel de sílice, hexano/2% de éter) . Las fracciones puras combinadas produjeron 2.4 g de un aceite ligeramente anaranjado, el 5 cual cristalizó en el refrigerador, p.f. 55-57°C. 2.4 g de (3, 5-di-ter-butil-2-etoxi-fenil) -propinal se disolvieron en 25 ml de etanol y se trataron con 90 mg de borohidruro de sodio durante 1.5 horas a 0°C. La mezcla de reacción se acidificó con 6 ml de ácido clorhídrico 2 N, se 10 vació sobre agua con hielo, se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El aceite anaranjado resultante se purificó mediante cromatografía (gel de sílice, hexano: acetato de etilo = 9.1) y se recristalizó a partir de pentano para dar 2.2 g de 3- 15 (3, 5-di-ter-butil-2-etoxi-fenil) -propil-2-in-l-ol como cristales blancos, p.f.82-84°C. 2 g de este compuesto fueron disueltos en 350 ml de etanol, tratados con 100 mg de catalizador de Lindlar e hidrogenados a presión normal por 7.5 horas. Después de 3, 20 5 y 6 horas, se agregaron 100 mg de cada catalizador de Lindlar fresco. El catalizador fue filtrado y la solución de reacción se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía a presión media (gel de sílice, hexano:éter = 8:2) y dio, después de la cristalización a partir de hexano, 1.3 g de (Z) -3- (3, 5-di-ter-butil-2-etoxi- fenil) -prop-2-en-l-ol, p.f. 93-94°C. 1.3 g de este compuesto se disolvieron en 50 ml de cloruro de metileno y se trataron con 13.7 ml de dietilzinc (1 M en hexano) a -5°C. Después de 15 minutos de agitación a 0°C, la mezcla de reacción se enfrió a -20°C, se trató gota a gota con 7.4 g de yoduro de metileno, se agitó por 1 hora a 0°C y 1.5 horas a temperatura ambiente y se volvió a enfriar a 0°C. Se agregaron gota a gota lentamente 50 ml de cloruro de amonio acuoso, saturado, dentro de la suspensión blanca. La mezcla de reacción clara fue vaciada sobre solución de cloruro de amonio saturada/hielo, se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El residuo semicristalino se sometió a cromatografía (gel de sílice, hexano: acetato de etilo = 9:1) y dio después de la recristalización a partir de hexano, 1.3 g de (1RS,2SR) - [2- (3,5-di-ter-butil-2-etoxi-fenil) - ciclopropil] -metanol como cristales blancos, p.f. 102-103°C. 1.02 g de cloruro de oxalilo se disolvieron en 37 ml de cloruro de metileno y se trataron con 0.86 ml de sulfóxido de dimetilo a -60°C. Después de un calentamiento previo a -35°C, la mezcla de reacción se volvió a enfriar hasta -60°C y se trató con una solución de 1.2 g de (1RS, 2SR) - [2- (3, 5 -di-ter-butil-2 -etoxi-fenil) -ciclopropil] - metanol en 20 ml de cloruro de metileno. Después de 15 minutos de agitación a -50°C, se agregaron gota a gota 1.7 ml de trietilamina. La mezcla de reacción se agitó por 2 horas a temperatura ambiente, se vació sobre agua con hielo, se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó sobre sulfato 5 de sodio y se evaporó. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (gel de sílice, hexano: acetato de etilo = 9:1) y se recristalizó a partir de hexano para dar 1.01 g de (1RS, 2RS) -2- (3 , 5-di-ter-butil-2- etoxi-fenil) -ciclopropencarbaldehído como cristales blancos, 10 p.f. 96-97°C. 908 mg de 3-metil-4-fosfonocrotonato de trietilo se disolvieron en 25 ml de THF y se trataron con 3.4 ml de bis (trimetilsilil) amida de litio (1.0 molar en THF) a -78°C. Después de 0.5 horas, se agregó lentamente una solución de 15 800 mg del aldehido anteriormente descrito en 25 ml de THF. El baño de enfriamiento se retiró y la temperatura se dejó elevar hasta 0°C. Después de 1.5 horas a 0°C, la mezcla de reacción se vació sobre cloruro de amonio acuoso saturado, se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó sobre sulfato 20 de sodio y se evaporó. El producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (gel de sílice .-acetato de etilo = 9:1) y cromatografía de presión media (gel de sílice, hexano/2% de acetato de etilo) para dar después de la recristalización a partir de hexano/acetato de etilo 650 25 mg de éster etílico del ácido (2E, 4E) - (1RS, 2RS) -5- [2- (3 , 5- di-ter-butil-2-etoxi-fenil) -ciclopropil] -3-metil-penta-2, 4- dienoico como cristales blancos, p.f. 129-130°C y 370 mg del éster etílico del ácido (2Z, 4E) - (1RS, 2RS) -5- [2- (3 , 5-di-ter- butil-2-etoxi-fenil) -ciclopropil] -3 -metil-penta-2 , 4- dienoico, p.f. 123-126°C. 600 mg del éster (2E,4E) se disolvieron en 20 ml de etanol y se trataron con una solución de 840 mg de hidróxido de potasio en 4 ml de cada uno de etanol y agua. Después de la adición de 10 ml de THF, la solución clara se calentó a 45-50°C por 7 horas, se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vació en hielo/ácido clorhídrico 1 N, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El material crudo se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 440 mg del ácido (2E, 4E) - (1RS, 2RS) -5- [2- (3 , 5-di-ter-butil-2-etoxi- fenil) -ciclopropil] -3-metil-penta-2 , 4-dienoico como cristales blancos, p.f. 200-202°C. De acuerdo al mismo procedimiento, se hidrolizaron 370 mg del éster (2Z,4E) para dar 270 mg del ácido (2Z, 4E) - (1RS, 2RS) -5- [2- (3 , 5-di-ter- butil-2-etoxi-fenil) -ciclopropil] -3-metil-penta-2 , 4- dienoico, p.f. 169-174°C. ^ ? 78 Ejemplo 11 En analogía al Ejemplo 2, el ácido (2E,4E)- (1RS,2RS) -5- [2- (3, 5-di-ter-butil-2-butoxi-fenil) - ciclopropil] -3-metil-penta-2 , 4-dienoico, p.f. 175-178°C (hexano/acetato de etilo) se sintetizó utilizando l-bromo-2- butoxi-3, 5-di-ter-butil-benceno como el material inicial. Los siguientes Ejemplos describen las formulaciones farmacéuticas de acuerdo a la invención: 10 Ejemplo 12 a) Masa de relleno para cápsulas de gelatina suave Compuesto activo 5.0-200.0 g Aceite* 1-3 partes Mezcla de cera** 1-5 partes Volumen de relleno 1-6 mínimo * aceites vegetales naturales, por ejemplo aceite de soya, aceite de cacahuate, y glicéridos artificiales. 15 ** composición de ceras naturales y artificiales o grasas parcialmente hidrogenadas. b) Cápsulas de Gelatina Suave de 20 mg Ingredientes Mg/cápsula Compuesto activo 20.000 di -a-tocoferol 0.028 Aceite de Ricino Hidrogenado 4.200 Triglicérido Caprílico/Cáprico/Esteárico 56.000 (Triglicérido Sintético) Triglicérido, Cadena Media 199.772 Total 280.000 mg EJEMPLO 13 Cápsulas de gelatina dura que contienen 20 mg de sustancia activa: Composición: Una cápsula contiene: Compuesto activo 20.0 mg Gelatina Bloom 30 70.0 mg Maltodextrina MD 05 108.0 mg dl-a-tocoferol 2.0 mg Ascorbato de Sodio 10.0 mg Celulosa Microcristalina 48.0. mg Estearato de magnesio 2.0 mg (contenido en peso de la cápsula] 260.0 mg Procedimiento : La sustancia activa se muele en húmedo en una solución de gelatina, maltodextrina, dl-a-tocoferol y ascorbato de sodio. La suspensión molida en húmedo se seca por rocío. El polvo secado por rocío se mezcla con la celulosa microcristalina y con el estearato de magnesio. Cada 200 mg de está mezcla son llenados dentro de una cápsula de gelatina dura de tamaño y color adecuados, de tamaño y color adecuados Ejemplo 14 Tableta que contiene 20 mg de sustancia activa: Núcleo de la tableta: Compuesto activo 20.0 mg Lactosa Anhidra 130.5 mg Celulosa Microcristalina 80.0 mg dl-a-tocoferol 2.0 mg Ascorbato de sodio 10.0 mg Polivinilpirrolidona K30 5.0 mg Estearato de magnesio 2.5 mg (peso del núcleo) 250.0 mg Recubrimiento de película: Hidroxipropilmetilcelulosa 3.5. mg Polietilenglicol 6000 0.8 mg Talco 1.3 mg Óxido de hierro, Amarillo 0.8 mg Dióxido de Titanio 0.8 mg Peso de la película 7.4 mg Procedimiento : El compuesto se mezcla con la lactosa anhidra y con la celulosa microcristalina. La mezcla se granula en agua con una solución/dispersión de polivinilpirrolidona, dl-a-Tocoferol y ascorbato de sodio. El material granular se mezcla con estearato de magnesio y después de esto se prensa como núcleos con peso de 250 mg. Los núcleos son recubiertos con película con una solución/suspensión de las composiciones anteriormente mencionadas.

Ejemplo 15 Saco que contiene la sustancia activa Compuesto activo 200.0 mg Lactosa, en polvo fino 990.0 mg Celulosa microcristalina 1250.0 mg Carboximetilcelulosa de sodio 14.0 mg dl-a-Tocoferol 5.0 mg Ascorbato de sodio 20.0 mg Polivinilpirrolidona K30 10.0 mg Estearato de magnesio 10.0 mg Ejemplo 16 Loción (solución) preferido Compuesto activo 0.1-2.0 g Propilenglicol 5.00-20.00 g 10.00 g Cocoato de PEG-glicerilo* 0.00-20.00 g 10.00 g dl-a-tocoferol 0.001-0.50 g 0.02 g Palmitato de Ascorbilo 0.01-0.20 g 0.10 g Galato de Propilo 0.001-0.02 g 0.002 g Ácido Cítrico, anhidro** 0.00-20 g 0.01 g Isopropano1* ** 40.00-90.00 g 50.00 g Agua, agregar hasta 100.00 g 100.00 g rest . ml *u otros ténsidos **u otros agentes formadores de complejos, por ejemplo EDTA ***u otros alcoholes, por ejemplo etanol Ejemplo 17 Gel preferido Compuesto activo 0.1-2.0 g Propilenglicol 5.00-20.00 g 10.00 g r -~> •F* Cocoato de PEG-gliceplo* 0.00-20.00 g 10.00 g dl-a-tocoferol 0.001-0.50 g 0.02 g Palmitato de Ascorbilo 0.01-0.20 g 0.10 g Galato de Propilo 0.001-0.02 g 0.002 g Ácido Cítrico, anhidro** 0.00-0.20 g 0.01 g Isopropanol*** 40.00-90.00 g 50.00 g HPMC**** 0.50-5.00 g 3.00 g Conservador* * * * * css css Agua, agregar hasta 100.00 g 100 00 g rest. ml * u otros ténsidos ** u otros agentes formadores de complejos, por ejemplo EDTA *** u otros alcoholes, por ejemplo etanol **** Hidroxipropilmetilcelulosa u otros polímetros, por ejemplo, carbómero neutralizado, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio. ***** Conservadores, por ejemplo esteres de Parabeno (de metilo, etilo, propilo, butilo). Ácido sórbico. Ácido benzoico Ejemplo 18 Crema Preferido Compuesto activo 0.1-2.0 g '-' •* 84 í 5 Glicerol 0.00-10.00 g 5.00 g Na2-EDTA 0.001-0.50 g 0.03 g Glicéridos* 5.00-20.00 g 10.00 g Alcohol cetílico 0.50-5.00 g 1.00 g Alcohol estearílico 0.50-5.00 g 1.00 g Monoestearato de glicerol 1.00-8.00 g 4.00 g Ceteareh** 0.50-5.00 g 2.00 g dl-a-tocoferol 0.001-0.50 g 0.02 g Conservador** * Css Css Agua, agregar hasta 100.00 g 100.00 g * por ejemplo, Caprílico/Cáprico/Triglicérido, Caprílico/Cáprico/Linoleico. Triglicéridos, glicéridos naturales, así como por ejemplo propilenglicol, Dicaprilato/Dicaprato y ceras, tales como tales como Estearilo, Estearato, Oleato de Oleilo, Miristato de isopropilo. ** Ceteareth 5-30, u otros emulsificantes tales como Polisorbase 20-80, esteres de Sorbitán de ácidos grasos, 10 esteres de ácido graso de PEG. *** conservadores, por ejemplo esteres de Parabeno (de metilo, etilo, propilo, butilo) . Ácido Sórbico, Ácido benzoico 1 «£*?* -£ '- -• 85 >' -^ ^^ Ejemplo 19 Aerosol para inhalación, inhalador en dosis medida Compuesto Activo 0.5% (0.1-2.0%) Triolato de sorbitán 5% dl-a-tocoferol 0.4% Propelente (mezcla de triclorofluorometano y 94.1% Diclorodifluorometano) EJEMPLO 20 Inhalador de polvo seco Compuesto Activo (molido por 0.5 mg (0.1 mg-2.0 mg) chorro, secado por rocío) Monohidrato de Lactosa 25 mg 10 Se hace constar que con relación a está fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Los compuestos de la fórmula I : caracterizados porque el enlace discontinuo es opcional; y, cuando el enlace discontinuo está presente, R1 es alquilo inferior y R2 es hidrógeno; y, cuando el enlace discontinuo está ausente, R1 y R2 tomados conjuntamente son metileno para formar un anillo de ciclopropilo sustituido en posición cis; R3 es hidroxilo o alcoxi inferior; R4 es alquilo o alcoxi; y R5 y R6 son, independientemente, un grupo alquilo de 4 a 12 átomos de carbono o un grupo hidrocarburo mono- o policíclico de 5 a 12 átomos de carbono, los cuales están enlazados al anillo de fenilo a través de un átomo de carbono cuaternario, y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula I.

2. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1 de la fórmula caracterizados porque R1 es alquilo inferior y R3 a R6 son como se definen de conformidad con la reivindicación 1; y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula la.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque es ácido (2E,4E,6Z)- 7-[3, 5 -di - ter-butil -2 -etoxifen?l]-3 -metil -2, 4, 6- octatrienoico .

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque es ácido (2E,4E,6Z)- 7 -[3, 5 -di -ter-butil -2 -butiloxifenil]-3 -metil -2, 4, 6- octatrienoico .

5. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizados porque son éster etílico del ácido (2E, 4E, 6Z) -7-[3 , 5-di-ter-butil-2-butiloxifenil]-3- metil-2 , 4 , 6-octatrienoico, Ácido (2E,4E,6Z) -7-[3, 5 -di -ter-butil -2 - metoxifenil]-3 -metil-2 , 4, 6-octatrienoico, Ácido (2E,4E,6Z) -7 -[3 , 5 -di -ter-butil -2- hexiloxifenil]-3-metil-2, 4, 6-octatrienoico, Ácido (2E,4E,6Z) -7-[3 , 5-di-ter-butil-2- octiloxifenil]-3 -metil -2, 4, 6-octatrienoico.

6. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1, de la fórmula caracterizados porque R a R son como se definen de conformidad con la reivindicación 1; y las sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos carboxílicos de la fórmula Ib.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque es éster etílico del ácido (2E, 4E) - (1RS, 2RS) -5-[2- (3 , 5 -di -ter-butil -2 -etoxi- fenil) -ciclopropil] -3 -metilpenta- 2 , 4-dienoico, Ácido (2E,4E) - (1RS,2RS) -5-[2- (3 , 5-di-ter-butil-2- etoxi-fenil) -ciclopropil]-3-metilpenta-2 , 4-dienoico, Ácido (2E,4E) - (1RS,2RS) -5-[2- (3 , 5-di-ter-butil-2- butoxi-fenil) -ciclopropil]-3 -metilpenta-2, 4-dienoico.

8. Los compuestos de la fórmula caracterizados porque A es formilo; y R1, R2 y R4 a R6 son como se definen de conformidad con la reivindicación 1.

9. Las preparaciones farmacéuticas, caracterizadas porque contienen un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 o las sales farmacéuticamente aceptables de un ácido carboxílico de la fórmula I y los materiales portadores farmacéuticos usuales.

10. El uso de un antagonista de retinoide para la reducción o abolición de los eventos adversos en pacientes que reciben tratamiento con agonista de retinoide.

11. El uso de conformidad con la reivindicación 10, en donde el tratamiento con el agonista de retinoide es para el acné, psoriasis o enfermedades premalignas o malignas.

12. El uso de un antagonista de retinoide para el tratamiento de enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T-cooperadoras (Th2) , tales como las enfermedades alérgicas mediadas por inmunoglobulinas E (IgE) o para el tratamiento de enfermedades mediadas por citocinas relacionadas a Th2 tales como IL-4 e IL-5.

13. El uso de conformidad con la reivindicación 12, en donde la enfermedad es dermatitis atópica, rinitis alérgica o asma bronquial alérgico.

14. El uso de un antagonista de retinoide para el tratamiento de la osteoporosis.

15. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde la osteoporosis es la osteoporosis posmenopáusica, u osteoporosis senil en ambos sexos, o todas las formas de osteoporosis secundaria.

16. El uso de un antagonista de retinoide para el tratamiento de enfermedades preneoplásicas o neoplásicas.

17. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde la enfermedad preneoplásica es lesiones precancerosas de la piel y de las membranas mucosas, y la enfermedad neoplásica es tumores sólidos de la piel, de las membranas mucosas, de la cabeza y del cuello, del pulmón, estómago, colon, mama, ovario, cervix y próstata.

18. El uso de los compuestos de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1, o las sales farmacéuticamente aceptables de un ácido carboxílico de la fórmula I en la fabricación de un medicamento para reducir o abolir los eventos adversos en pacientes que reciben tratamiento con agonista de retinoide.

19. El uso de conformidad con la reivindicación 18, en donde el tratamiento con agonista de retinoide es para el acné, psoriasis o enfermedades premalignas o malignas .

20. El uso de un antagonista de retinoide en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades inmunes mediadas por el tipo 2 de las células T cooperadoras (Th2) , tales como las enfermedades alérgicas mediadas por inmunoglobulina E (IgE) o para el tratamiento de enfermedades mediadas por citocinas relacionadas a Th2 tales como IL-4 e IL-5.

21. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde la enfermedad es dermatitis atópica, rinitis alérgica o asma bronquial alérgico.

22. El uso de un antagonista de retinoide en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la osteoporosis .

23. El uso de conformidad con la reivindicación 22, en donde la osteoporosis es osteoporosis posmenopáusica, osteoporosis senil de ambos sexos, u osteoporosis secundaria.

24. El uso de un antagonista de retinoide en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades preneoplásicas o neoplásicas.

25. El uso de conformidad con la reivindicación 5 24, en donde la enfermedad preneoplásica es lesiones precancerosas de la piel y las membranas mucosas, y la enfermedad neoplásica es tumores sólidos de la piel, las membranas mucosas, cabeza y cuello, pulmón, estómago, colon mama, ovario, cervix y próstata. 10

26. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicación 10-25, en donde el antagonista de ácido retinoico es un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1.

27. El uso de conformidad con la reivindicación 15 26, en donde el compuesto de la fórmula I es un compuesto de la fórmula le.

28. El uso de conformidad con la reivindicación 27, en donde el compuesto de la fórmula le es el ácido (2E,4E) - (1RS,2RS) -5-[2- (3 , 5-di-ter-butil-2 -butoxi-fenil ) - 20 ciclopropil]-3 -metilpenta-2 , 4-dienoico .

29. Los novedosos compuestos, composiciones y usos, como se describen anteriormente en la presente.