MXPA01002111A - Metodo para modular celulas t efectoras de memoria y composiciones. - Google Patents

Abstract

Se describen metodos para modular de manera selectiva Iinfocitos T efectores de memoria en un sujeto teniendo una condicion medica Los metodos utilizan agentes de union de CD.

Description

I ETODO PARA MODU LAR C LU LAS T EFECTORAS DE MEMORIA Y COMPOSICIONES CAMPO TÉCNICO DE LA I NVENCIÓN Esta invención se refiere a métodos para usar inhibidores de la interacción de CD2/LFA-3 para tratar condiciones caracterizadas por la presencia de células T activadas en mam íferos, incluyendo humanos. Tales condiciones incluyen enfermedades intestinales inflamatorias, artritis psoriática, artritis reumatoide y esclerosis múltiple.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las células que presentan antígeno (APC) expresan una alta densidad de antígeno de complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) clase I I en la superficie celular. Las moléculas MHC clase I I unen péptidos derivados de antígeno endocitosado y son reconocidas principalmente por linfocitos T auxiliares. El receptor de células T en las células T reconoce el antígeno como un fragmento de péptido unido a las moléculas de superficie celular codificadas por el MHC (Springer, "Adhesión Receptors of the Immune System" (Receptores de adhesión del sistema inmune), Nature. 346, pp. 425-27 (1990)) . Existen muchas interacciones entre las moléculas expresadas en la superficie de tales APC y la superficie de células T, además de la interacción de receptor de células T/MHC. Estas moléculas de superficie, frecuentemente referidas como moléculas de adhesión, participan en una variedad de funciones incluyendo adhesión celular, reconocimiento de antígeno, señalización co-estimulatoria en la activación de células T y estim ulación de efectores de citotoxicidad de células T ("Adhesión Molecules in Diagnosis and Treatment of I nflam matory Diseases" (Moléculas de adhesión en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades inflamatorias), The Lancet, 336, pp. 1351 -52 (1990)). Tal adhesión celular parece estar involucrada en la activación de la proliferación de células T en la generación de una respuesta inmune (Hug hes et al . , "The Endothelial Cell as a Regulator of T-cell Function" (La célula endotelial como un regulador de la función de células T), Immunol. Rev. , 1 1 7, pp. 85-102 (1 990)) . Una manera en que las células T son activadas es mediante la unión de sus receptores de células T específicos a antígeno a complejos de péptido-MHC en la superficie de células que presentan antígeno, tal como, macrófagos. La activación de células T estimula la proliferación y diferenciación de dos tipos de células T funcionales: células auxiliares, las cuales promueven la proliferación y maduración de linfocitos B productores de anticuerpos, y células asesinas, las cuales lisan células objetivo (Bierer et al. , "A Monoclonal Antibody to LFA-3, the CD2 Ligand, Specifically Immobilizes Mayor Histocompatibility Complex Proteins" (Un anticuerpo monoclonal para LFA-3, el ligando CD2, inmoviliza de manera específica las proteínas de complejo de histocompatibilidad mayor), Eur. J . Immunol. 1 9: pp. 661 -65 (1989); Springer "Adhesión Receptors of the Immune System" (Receptores de adhesión del sistema inmune), Nature, 346, pp. 425-34 (1 990)).

Existen numerosas condiciones méd icas caracterizadas por respuestas inmunes anormales y muchas de estas son caracterizadas, en particular, por activación de células T incrementada. Las células T juegan un papel mayor en la respuesta inmune al ¡nteractuar con las células que presentan antígeno y objetivo. Por ejemplo, las muerte mediada por células T de células objetivo es un proceso de múltiples pasos que involucra, inicialmente, la adhesión de células T citolíticas (las células efectoras) a células objetivo. Además, las células T auxiliares inician la respuesta inmune mediante adhesión a células que presentan antígeno. Estas interacciones de células T con células que presentan antígeno y objetivo son altamente específicas y dependen del reconocimiento de un antígeno en la superficie de un objetivo o APC por uno de los muchos receptores de antígeno específicos en la superficie de células T. La interacción de receptor-antígeno de células T y otras células también es facilitada por varias proteínas de superficie de células T, por ejemplo, el complejo de antígeno-receptor CD3 y moléculas de adhesión accesorias, tales como, CD4, LFA-1 , CD8 y CD2. También se facilita mediante moléculas de adhesión accesorias, tal como, LFA-3, ICAM-I y MHC, que se expresan en la superficie de las células que presentan antígeno u objetivo. Por ejemplo, LFA-I y su contra receptor ICAM-I o ICAM-2, así como CD2 y su contra receptor LFA-3 han sido implicados en la adhesión celular y la activación de células T. Se sabe que las interacciones de LFA-I/ICAM y CD2/LFA-3 son independientes. Una variedad de otras moléculas presentes en células T en reposo también han sido implicadas en la adhesión de células T, incluyendo E2 (MIC2), VLA-4 (CD49d), CD44 (Hermes, Pgp-1 , ECM RI I I), y H 1 9 (N4) (ver Makgoba et al. , "The CD2-LFA-3 and LFA-1 -ICAM Pathways: Relevance to T-cell Recognition" (Las trayectorias de CD2-LFA-3 y LFA-1 -ICAM : I mportancia para el reconocimiento de células T), Immunsl, Today, 1 0, pp. 417-22 (1989)) . La interacción entre CD2 y LFA-3 sigue siendo pobremente entendida con respecto a la activación de la actividad de células T. Estudios recientes han sugerido que existe una interacción específica entre CD2 (una molécula de adhesión de células T) y LFA-3 (una célula objetivo y molécula de adhesión de APC), la cual media la adhesión de células T a las células que presentan antígeno u objetivo. Esta adhesión célula-célula ha sido implicada en la iniciación de respuestas funcionales de células T (Dustin et al. , "Purified Lymphocyte Function Associated Antigen 3 Binds to CD2 and Mediates T Lymfocyte Adhesión", (El antígeno 3 asociado a función de linfocito purificado se une a CD2 y media la adhesión de linfocitos T) , J. Exp. Med. , 165, pp. 677-92 (1987); Springer et al. , "The Lymphocyte function-associated LFA-1 , CD2, and LFA-3 Molecules: Cell Adhesión Receptors of the Immune System" (Moléculas de LFA-1 , CD2 y LFA-3 asociadas a función de linfocito: receptores de adhesión celular del sistema ¡nmune), Ann. Rev. Immunol. , 5, pp. 223-52 (1987)) . LFA-3 la cual se encuentra en la superficie de una amplia variedad de células, incluyendo eritrocitos humanos, se ha vuelto el sujeto de una cantidad considerable de estudios para dilucidar adicionalmente su papel en varias interacciones de células T (ver, por ejemplo, Krensky et al. , "The Functional Significance, Distribution, and Structure of LFA-1 , LFA-2 y LFA-3: Cell Surface Antigen Associated with CTL-Target Interactions" (La importacia funcional, distribución y estructura de LFA-1 , LFA-2 y LFA-3: antígeno de superficie celular asociado con interacciones CTL-objetivo), J^. Immunol. , 131 (2) , pp. 61 1 -16 (1983); Shaw et al. , "Two Antigen-Independent Adhesión Pathways Used by Human Cytotoxic T-cell Clones" (Dos rutas de adhesión independientes de antígeno usadas por clones de células T citotóxicos humanos) , Nature, 323, pp. 262-64 (1 986)). Dos formas naturales de LFA-3 han sido identificadas. Una forma de LFA-3 ("LFA-3 transmembrana") es anclada en la membrana celular por un dominio hidrofóbico transmembrana. El cDNA que codifica esta forma de LFA-3 ha sido clonado y secuenciado (ver, por ejemplo, Wallner et al. , "Primary Structure of Lymphocyte Function-Associated Antigen-3 (LFA-3)", (Estructura primaria de antígeno 3 asociado a función de linfocito (LFA-3)), J. Exp. Med. , 166, pp. 923-32 (1987)). Otra forma de LFA-3 es anclada a la membrana celular vía un enlace covalente para glicolípido conteniendo fosfatidilinositol ("Pl"). Esta última forma ha sido designada "LFA-3 Pl-enlazado, y también se ha clonado y secuenciado el cDNA que codifica esta forma de LFA-3 (Wallner et al. , PCT Pub. WO 90/02181 ). La molécula de CD2 humana es una glicoproteína de superficie de 50 kD expresada en >95% de timocitos y virtualmente todos los linfocitos T periféridos. Los análisis bioquímicos que usan anticuerpos monoclonales específicos han sugerido que CD2 es de linaje T-específico y que existe en la superficie celular en varias formas diferencialmente glicosiladas "Howard et al. , "A Human T Lymphocyte Differentiation Marker Defined by Monoclonal Antibodies that Block E-Rosette Formation" (Marcador de diferenciación de linfocitos T humanos definido por anticuerpos monoclonales que bloquean la formación de E-rosetón) , J . Immunol. , 126, pp. 21 17-22 (1981 ) ; Brown et al. , en Leukocyte Typing l l l , ed. Me. Michael, Oxford University Press, pp. 1 10-1 2 (1987); Sayre et al. , "Molecular Cloning and Expression of T1 1 cDNAs Reveáis a Receptor-Like Structure on Human T Lymphocytes" (La clonación molecular y expresión de cDNAS de T1 1 revela una estructura similar a receptor en linfocitos T humanos", Proc. Nati. Acad, Sci. USA, 84, pp. 2941 -45 (1987)). La secuencia de un gene de CD2 humano ha sido reportada (Seed y Aruffo, "Molecular Cloning of the CD2 Antigen, the T-cell Erythrocyte Receptor, by a Rapid I mmunoselection Procedure" (Clonación molecular del antígeno CD2, el receptor de eritrocito de célula T, mediante un procedimiento de inmunoselección rápido), Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, pp. 3365-69 (1987); Sayre et al. , "Molecular Cloning and Expression of T1 1 cDNAs Reveal a Receptor-like Structure on Human T Lymphocytes" (La clonación molecular y expresión de cDNAs de T1 1 revelan una estructura similar a receptor en linfocitos T humanos), Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, pp. 2941 -45 (1987)). Los clones de cDNA CD2 predicen un péptido de señal cortado de 24 residuos de aminoácidos, un segmento extracelular de 185 residuos, un dominio transmembrana de 25 residuos y una región cítoplásmica de 1 17 residuos (Sayre et al. , supra (1987); Sewell et al. , "Molecular Cloning of the Human T-Lymphocyte Surface CD2 (T1 1 ) Ant?gen" (Clonación molecular del antígeno CD2 (T1 1 ) de superficie de linfocito T humano), Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 83, pp. 871 8-22 (1986); Seed y Aruffo, supra (1 987) ; Clayton et al. , Eur. J. I mmun . , 1 7, pp. 1 367-70 (1987)) . Los polipéptidos de CD2 solubles teniendo un dominio de unión de LFA-3 han sido reportados (PCT Pub. WO 90/081 87) . Los anticuerpos monoclonales para CD2 , por ejemplo, TS2/1 8, T1 1 t , T1 12, T1 13 y para LFA3, por ejemplo, TS2/9, también han sido reportados (ver, por ejemplo, Hughes et al. , "The Endothelial Cell as a Regulator of T-Cell Function" (La célula endotelial como un regulador de la función de células T) , Immunol. Reviews, 1 1 7, pp. 85-1 02 (1990) ; Meuer, "An Alternative Pathway of T-Cell Activation: A Functional Role for the 50 kD T1 1 Sheep Erythrocyte Receptor Protein" (Una ruta alternativa de la activación de células T: un papel funcional para la proteína de receptor de eritrocito de borrego T1 1 de 50 kD), Cell , 36, pp. 897-906 (1 984)) . La unión de los receptores de células T específicos de antígeno a complejos de péptido-MHC en la superficie de células que presentan antígeno, también está involucrada en la formación de las así llamadas células de "memoria", las cuales generalmente se forman durante la respuesta inmune de adaptación, requiriendo el contacto con antígeno y la expansión de células de memoria específicas de antígeno. La memoria de células T depende probablemente de la estimulación repetida por el antígeno. Las células T de memoria aumentan su avidez de unión por la célula que presenta antígeno a través de la expresión incrementada de CD2, LFA-3 y otras moléculas de adhesión accesorias. En realidad, un cambio fenotípico importante en la isoforma del antígeno de leucocito CD45R permite que se haga una distinción entre células T naturales que expresan CD45R y células T de memoria que reaccionan con la forma de menor peso molecular CD45RO. La comprensión de que la mayoría, si no es que todas, las células de memoria son sometidas a bombardeo repetido de antígeno , hace probable que la mayoría de las características asociadas con el subconjunto de CD45RO sean de hecho, manifestaciones de células T efectoras. Existe una literatura creciente y provocativa que describe la asociación de células T efectoras de memoria CD45RO con la presencia de varias enfermedades inflamatorias, tales como, enfermedades intestinales inflamatorias, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, (Horiuchi et al. , ¡L Japan. Soc. Coló. Proctol. , 45: 391 -393 (1992)); artritis psoríática (Véale et al. , Ann. Rheum . Dis. 53:450-454 (1994); artritis reumatoide (Muller et al. , Autoimmunity 14: 37-43 (1992); uveítis (Ohta et al. , Curr. Eye Res. , 15: 299-306 (1996), nefritis (Rodruguez-Poerez et al. , Am. J. Nephrol, 15:386-391 (1995); y esclerosis múltiple (Crucian et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. , 2:249-252 (1 995); Lehmann et al. , Clin. Immunol. Immunopathol. , 85: 202-209 (1 997), Muller et al. , Autoimmunity 14:37-43 (1992), Qin et al. , J. Clin. I mmuno , 13: 152-161 (1 993). Debido al posible papel de estos linfocitos T efectores de memoria en patogénesis, existe la necesidad de métodos mejorados para modular estas células en pacientes con estas condiciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA I NVENCIÓN La presente invención proporciona un método para prevenir o tratar condiciones caracterizadas por la infiltración de linfocitos T efectores de memoria en un órgano del mamífero. En los métodos , se administra un agente de unión de CD2 que es capaz de modular el número y/o distribución de linfocitos T efectores de memoria. Los métodos de esta invención son superiores a terapias previamente disponibles para estas condiciones por muchas razones, incluyendo el hecho de que los métodos son más selectivos, por lo tanto, menos inmunosupresivos que las terapias pre-existentes con menos toxicidad general. Los materiales que pueden usarse de acuerdo con el método de la presente invención, incluyen cualquier molécula que sea un agente de unión de CD2. Esto incluye moléculas u otras entidades químicas que modulan la interacción de CD2/LFA-3. De preferencia, el agente es seleccionado del grupo que consiste de homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2, polipéptidos LFA-3 solubles, polipéptidos CD2 solubles, agentes imitadores de CD2 o LFA-3 (tales como, pequeñas moléculas orgánicas) y derivados de los mismos. U? aspecto de la invención es un método para modular selectivamente los linfocitos T efectores de memoria en un sujeto que tiene una condición médica, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad efectiva de un agente de unión CD2. Los linfocitos T de memoria pueden infiltrarse en un órgano objetivo en el sujeto. De preferencia, los linfocitos T efectores de memoria son linfocitos T de CD45RO. El agente de unión de CD2 es seleccionado del grupo que consiste de homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2, polipéptidos LFA-3 solubles, polipéptidos CD2 solubles, agentes imitadores de CD2 y agentes imitadores de LFA-3. Otro método de la invención involucra tratar una condición en un sujeto, caracterizada por la implicación de linfocitos T efectores de memoria en la patogénesis, incluyendo el método administrar al sujeto una cantidad efectiva de un agente de unión de CD2. La condición es seleccionada del grupo que consiste de artritis psoriática, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, uveítis, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn , colitis ulcerativa y linfoma cutáneo de células T. Un método adicional de la invención es un método para modular los linfocitos T efectores de memoria en un mam ífero, en donde el mam ífero está caracterizado por tener la presencia de linfocitos T efectores de memoria infiltrados en un órgano del mamífero. El método comprende administrar al mamífero una cantidad de un agente de unión de CD2 suficiente para modular de manera selectiva los linfocitos T efectores de memoria en dicho órgano. El mam ífero sufre de una condición seleccionada del grupo que consiste de artritis psoriática, artritis reumatoíde, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, uveítis, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y linfoma cutáneo de células T. Las composiciones de la invención comprenden una población de linfocitos T efectores de memoria obtenibles de un mamífero que tiene una condición caracterizada por la presencia de linfocitos T efectores de memoria infiltrados en un órgano del mam ífero, en donde la población está en combinación con un agente de unión de CD2.

BREVE DESCRI PCIÓN DE LOS DI BUJOS La Figura 1 es una gráfica que muestra la reducción selectiva de células T efectoras de memoria en relación a células T naturales en pacientes con psoriasis que reciben tratamiento con el agente de unión de CD2, LFA3-TIP. La barra horizontal por encima del eje X representa la duración del tratamiento, el cual se detuvo en aproximadamente 80 días. Las curvas representan las cuentas medias de linfocitos de los 57 pacientes en cada grupo de tratamiento. Existen efectos temporales y de tratamiento estadísticamente significativos con respecto a las células T de memoria (CD 45 RO+), pero no con respecto a las células T naturales (CD45 RA+). Las cuentas de células T en los diversos tratamientos de agentes de unión de CD2 muestran una disminución, aproximándose a un valor relativamente constante, durante el periodo de administración de 80 días. Después de que se terminó el tratamiento, empezó a regresar la cuenta de células T efectoras de memoria.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Como se usa en la presente, "linfocito T efector", "células T efectoras", "linfocito/célula T efectores de memoria" y términos similares, se usan de manera intercambiable y significan linfocitos T que han estado expuestos a antígeno (es decir, aquéllos que no son "naturales"). De manera más específica, los términos significan linfocitos T CD45R0, que se oponen a linfocitos T CD45RA.

Como se usa en la presente, "CD2" significa un polipéptido CD2 que se une a un polipéptido LFA-3 que ocurre de manera natural, y q ue se codifica mediante (a) una secuencia de DNA de CD2 de mam ífero que ocurre de manera natural (por ejemplo, SEQ I D NO:5) ; (b) una secuencia de DNA que degenera a una secuencia de DNA de CD2 que ocurre de manera natural; o (c) una secuencia de DNA que hibrida a una de las secuencias de DNA anteriores bajo condiciones equivalentes a aproximadamente 20°C hasta 27°C debajo de Tm y cloruro de sodio 1 M. Como se usa en la presente, "LFA-3" significa un polipéptido LFA-3 que se une a un polipéptido CD2 que ocurre de manera natural, y el cual es codificado mediante una secuencia de DNA de LFA-3 de mam ífero que ocurre de manera natural (por ejemplo, SEQ I D NO: 1 o SEQ I D NO:3); (b) una secuencia de DNA que degenera a una secuencia de DNA de LFA-3 que ocurre de manera natural; o (c) una secuencia de DNA que hibrida a una de las secuencias de DNA anteriores bajo condiciones de hibridación estándares, como se definió antes. Como se usa en la presente, un "agente de unión de CD2" es una molécula, o compuestos, u otra entidad química que modula la interacción de CD2/LFA-3, y/o modula la señalización de CD2. El término incluye homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2, polipéptidos LFA-3 solubles, polipéptidos CD2 solubles, agentes imitadores de CD2 o LFA-3 y derivados de los mismos. El término "modula" significa que el agente de unión de CD2 altera (de preferencia disminuye), la intensidad de la señalización de CD2 y/o interfiere con la capacidad de CD" para unirse a LFA3, aunque aumentos en tal intensidad y/o capacidad para unirse no son excluidos de la definición . Los agentes de u nión de CD2 también "modulan" linfocitos T efectores de memoria (es decir, CD45RO) y en este contexto, el término "modula" significa que los agentes de unión alterarán el número y/o distribución de linfocitos T efectores de memoria en un sujeto que recibe el o los agentes de unión de CD2. En métodos preferidos, el o los agentes de unión modularán "de manera selectiva" tales linfocitos T efectores de memoria, significando que los linfocitos T efectores de memoria son modulados como se compara con linfocitos T naturales (por ejemplo, linfocitos T CD45RA). Como se usa en la presente, un "polipéptido LFA-3 soluble" o un "polipéptído CD2 soluble" es un polipéptido LFA-3 o CD2 incapaz de anclarse por sí mismo en una membrana. Tales polipéptidos solubles incluyen, por ejemplo, polipéptidos CD2 y LFA-3 que carecen de una porción suficiente de su dominio de extensión de membrana para anclar el polipéptido o son modificados de manera que el dominio de extensión de membrana no es funcional. Como se usa en la presente, los polipéptidos LFA-3 solubles incluyen LFA-3 Pl-enlazado de longitud completa o truncado (por ejemplo, con supresiones internas). Como se usa en la presente, un "homólogo de anticuerpo" es una proteína que comprende uno o más polipéptidos seleccionados de cadenas ligeras de inmunoglobulina, cadenas pesadas de inmunoglobulina y fragmentos de unión de antígeno de las mismas, que son capaces de unirse a uno o más antígenos. Los polipéptidos componentes de un homólogo de anticuerpo compuesto de más de un polipéptido pueden ser opcionalmente unidos a disulfuro o reticulado covalentemente de otra manera. De acuerdo con esto, los homólogos de anticuerpo incluyen inmunoglobulinas intactas de tipos IgA, IgG, IgE, Ig D, IgM (así como subtipos de los mismos) , en donde las cadenas ligeras de la inmunoglobulina pueden ser de tipos kappa o lambda. Los homólogos de anticuerpo también incluyen porciones de inmunoglobulinas intactas que retienen especificidad de unión a antígeno, por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2, fragmentos F(v) , monómeros o dímeros de cadena pesada, monómeros o dímeros de cadena ligera, dímeros que consisten de una cadena pesada y una ligera, y similares. Como se usa en la presente, un "homólogo de anticuerpo recombinante humanizado" es un homólogo de anticuerpo, producido mediante tecnología de DNA recombinante, en el cual algunos o todos los aminoácidos de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humana, que no se requieran para la unión de antígeno, han sido substituidas por los am inoácidos correspondientes de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina de mamífero no humano. Como se usa en la presente, un "homólogo de anticuerpo recombinante quimérico" es un homólogo de anticuerpo, producido por tecnolog ía de DNA recombinante, en el cual todas o partes de las regiones de constantes y de gozne de una cadena ligera, cadena pesada de inmunoglobulina, o ambas, han sido substituidas por las regiones correspondientes de otra cadena ligera o cadena pesada de inmunoglobulina. Los métodos de la invención pueden practicarse en cualquier mamífero, de preferencia en humanos.

"Aminoácido" es una unidad monomérica de u n péptido, polipéptido o proteína. Existen veinte aminoácidos encontrados en péptidos, polipéptidos y proteínas que ocurren de manera natural, siendo todos L-isómeros. El término también incluye análogos de ios aminoácidos y D-isómeros de los aminoácidos de proteína y sus análogos. "Proteína" es cualquier polímero que consiste esencialmente de cualquiera de los 20 aminoácidos. Aunque "polipéptido" es frecuentemente usado en referencia a polipéptidos relativamente grandes, y "péptido" frecuentemente es usado en referencia a pequeños polipéptidos, el uso de estos términos en la técnica se traslapa y varía. El término "proteína", como se usa en la presente, se refiere a péptidos , proteínas y polipéptidos, a menos que se note de otra manera. "Fusión" se refiere a un enlace co-lineal de dos o más proteínas o fragmentos de las mismas, vía sus esqueletos de péptido individuales a través de ia expresión genética de una molécula de polinucleótido que codifica esas proteínas o a través de métodos de síntesis de proteínas. Se prefiere que las proteínas o fragmentos de las mismas sean de diferentes fuentes. De esta manera, las proteínas de fusión preferidas incluyen un agente de unión de CD2, que es una proteína o fragmento enlazado covalentemente a una segunda porción, que es ya sea un agente de unión de CD2 diferente o que no es un agente de unión de CD2 en absoluto. De manera específica, una "proteína de agente de unión de CD2/fusión de IG" es una proteína que comprende un agente de unión de CD2 de la invención, o fragmento del mismo, enlazada a un extremo N de una cadena de inmunoglobulina, en donde una porción del extremo N de la inmunoglobulina es reemplazada con el agente de unión de CD2. "Mutante" es cualquier cambio en el material genético de un organismo, en particular, cualquier cambio (es decir, supresión, substitución, adición o alteración) en una secuencia de polinucleótido de tipo natural o cualq uier cambio en una proteína de tipo natural. "Condiciones de hibridación estándares" son condiciones de sal y temperatura substancialmente equivalentes a 0.5 X SSC hasta aproximadamente 5 X SSC y 65°C tanto para hibridación y lavado. El término "condiciones de hibridación estándares", como se usa en la presente, es por lo tanto una definición operacional y abarca un rango de condiciones de hibridación. Las condiciones de severidad mayor pueden incluir, por ejemplo, hibridar con amortiguador de pantalla de placa (0.2% de polivinilpirrolidona, 0.2% de Ficoll 400; 0.2% de albúmina de suero bovino, Tris-HCl 50 mM (pH 7.5); NaCI 1 M; 0.1 % de pirofosfato de sodio; 1 % de SDS); 10% de sulfato de dextrano y 100 µg/ml de DNA de esperma de salmón, desnaturalizado y sonicado a 65°C durante 12-20 horas, y lavado con NaCI 75 mM/citrato de sodio 7.5 mM (0.5 x SSC)/1 % de SDS a 65°C. Las condiciones de severidad menor pueden incluir, por ejemplo, hibridar con amortiguador de pantalla de placa, 10% de sulfato de dextrano y 1 10 µg/ml de DNA de esperma de salmón desnaturalizado y sonicado a 55°C durante 12-20 horas, y lavado con NaCI 300 mM/citrato de sodio 30 mM (2.0 x SSC)/1 % de SDS a 55°C. Ver además, Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos actuales en biología molecular), John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, Secciones 6.3. 1 .-6.3.6, (1989).

"Secuencia de control de expresión" es una secuencia de polinucleótidos que controla y reg ula la expresión de genes, cuando se enlaza operativamente a esos genes. "Enlazada operativamente" es una secuencia de polinucleótido (DNA, RNA) que se enlaza de manera operativa a una secuencia de control de expresión, cuando la secuencia de control de expresión controla y regula la transcripción y traslación de esa secuencia de polinucleótido. El término "enlazado operativamente" incluye tener una señal de inicio apropiada (por ejemplo, ATG) en frente de la secuencia de polinucleótido a ser expresada y mantener el marco de lectura correcto para permitir la expresión de la secuencia de polinucleótidos bajo el control de la secuencia de control de expresión y producción del polipéptido deseado codificado por la secuencia de polinucleótidos. "Vector de expresión" es un polinucléotido, tai como un plásmido de DNA o fago (entre otros ejemplos comunes), que permite la expresión de al menos un gene cuando el vector de expresión es introducido en una célula huésped. El vector puede ser, o no, capaz de replicar en una célula. "Aislado" (usado de manera intercambiable con "substancialmente puro"), cuando se aplica a un ácido nucleico, es decir, secuencias de polinucleótido, que codifica polipéptidos, significa un polinucleótido de RNA o DNA, porción de polinucleótido genómico, polinucleótido sintético o cDNA el cual, en virtud de su origen o manipulación: (i) no está asociado con todo el polinucleótido con el cual está asociado por naturaleza (por ejemplo, está presente en una célula huésped como un vector de expresión, o una porción del mismo); o (ii) está enlazado a un ácido nucleico u otra porción química diferente a aquélla a la cual está enlazada por naturaleza; o (iii) no ocurre en la naturaleza. Por "aislado" se quiere decir además, una secuencia de polinucleótido que es: (i) amplificada in vitro mediante, por ejemplo, reacción en cadena de polimerasa (PCR) ; (ii) sintetizada químicamente; (iii) producida recombinantemente mediante clonación; o (iv) purificada, como mediante corte y separación en gel. De esta manera, "ácido nucleico substancialmente puro" es un ácido nucleico que no está inmediatamente contiguo con una o ambas de las secuencias de codificación con las cuales está normalmente contiguo en el genoma que ocurre de manera natural del organismo a partir del cual se deriva el ácido nucleico. "Aislado" (usado de manera intercambiable con "substancialmente puro"), cuando se aplica a polipéptidos, significa un polipéptido o una porción del mismo la cual, en virtud de su origen o manipulación: (i) está presente en una célula huésped como el producto de expresión de una porción de un vector de expresión; o (ii) está enlazado a una proteína u otra porción química diferente de aquélla a la cual está enlazado en la naturaleza; o (¡ii) no ocurre en la naturaleza. Por "aislada", se quiere decir además, una proteína que es: (i) sintetizada químicamente; o (¡i) expresada en una célula huésped y purificada lejos de proteínas asociadas. El término significa, generalmente, un polipéptido que ha sido separado de otras proteínas y ácidos nucleicos con los cuales ocurre de manera natural. De preferencia, el polipéptido también es separado de substancias, tales como, anticuerpos o matrices de gel (poliacrilamida), los cuales se usan para purificarlo.

"Promotor heterólogo", como se usa en la presente, es un promotor el cual no está asociado naturalmente con un gene o un ácido nucleico purificado. "Homólogo", como se usa en la presente, es sinónimo con el término "identidad" y se refiere a la similitud de secuencia entre dos polipéptidos, moléculas o entre dos ácidos nucleicos. Cuando una posición en ambas de las dos secuencias comparadas, es ocupada por la misma base o subunidad de monómero de aminoácido (por ejemplo, si una posición en cada una de las dos moléculas de DNA es ocupada por adenina, o una posición en cada uno de los dos polipéptidos es ocupada por una lisina), entonces las moléculas respectivas son homologas en esa posición. El porcentaje de homolog ía entre dos secuencias es una función del número de posiciones de igualación u homologas compartidas por las dos secuencias divididas por el número de posiciones comparadas x 100. Por ejemplo, si 6 de 10 de las posiciones en dos secuencias están igualadas o son homologas, entonces las dos secuencias son 60% homologas. A manera de ejemplo, las secuencias de DNA CTGACT y CAGGTT comparten 50% de homología (3 de las 6 posiciones totales son igualadas). En general, se hace una comparación cuando las dos secuencias son alineadas para dar homolog ía máxima. Tal alineación puede ser proporcionada usando, por ejemplo, el método de Needleman et al. , J. Mol Biol. 48: 443-454 (1 970), implementado convenientemente mediante programas de computadora, tal como, el programa Aiign (DNAstar, Inc.). Las secuencias homologas comparten residuos de aminoácidos idénticos o similares, donde los residuos similares son substituciones conservadoras por, o "mutaciones de punto permitido" de, residuos de aminoácidos correspondientes en una secuencia de referencia alineada. A este respecto, una "substitución conservadora" de un residuo en una secuencia de referencia son aquéllas substituciones que son física o funcionalmente similares a los residuos de referencias correspondientes, por ejemplo, que tienen un tamaño, forma, carga eléctrica, propiedades químicas similares, incluyendo la capacidad para formar enlaces covalentes o hidrógeno o similares. Las substituciones conservadores particularmente preferidas son aquéllas que cumplen los criterios definidos para una "mutación de punto aceptado" en Dayhoff et al. , 5: Atlas of Protein Sequence and Structure (Atlas de secuencia y estructura de proteínas), 5: Sup. 3, capítulo 22: 354-352, Nat. Biomed. Res. Foundation, Washington, D.C. (1978). "Homología" e "identidad" se refieren cada una a similitud de secuencia entre dos secuencias de polipéptidos, siendo identidad una comparación más estricta. La homología y la identidad pueden ser determinadas cada una al comparar una posición en cada secuencia, la cual puede ser alineada para fines de comparación. Cuando una posición en la secuencia comparada es ocupada por el mismo residuo de aminoácidos, entonces los polipéptidos pueden ser referidos como idénticos en esa posición; cuando el sitio equivalente es ocupado por el mismo aminoácido (por ejemplo, idéntico) o un aminoácido similar (por ejemplo, similar en naturaleza estérica y/o electrónica) , entonces las moléculas pueden ser referidas como homologas en esa posición. Un porcentaje de homología o identidad entre secuencias es una función del número de posiciones igualadas u homologas compartidas por las secuencias. Una secuencia "no relacionada" o "no homologa" comparte menos de 40 porciento de identidad, aunq ue preferiblemente menos de 25 porciento de identidad, con una secuencia de AR de la presente invención. Pueden usarse varios algoritmos de alineación y/o programas, incluyendo FASTA, BLAST o ENTREZ. FASTA y BLAST están disponibles como una parte del paquete de análisis de secuencias GCG (University of Wisconsin, Madison, Wis.), y puede usarse con, por ejemplo, ajustes de omisión. ENTREZ está disponible a través del National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda, Md. En una modalidad, el porcentaje de identidad de dos secuencias puede ser determinado por el programa GCG con un peso de abertura de 1 , por ejemplo, cada abertura de aminoácido es pesada como si fuera una desigualación de nucleótido o aminoácido simple entre dos secuencias. Los términos "péptido(s)", "proteína(s)" y "polipéptido(s)" son usados de manera intercambiable en la presente. Los términos "secuencia de polinucleótido" y "secuencia de nucleótidos" también son usados de manera intercambiable en la presente. Una molécula de la invención está en una "cantidad efectiva", si es esa cantidad la que produce un resultado o ejerce una influencia sobre la condición particular siendo tratada. Un "polímero" es una mayor molécula construida de muchas unidades estructurales más pequeñas llamadas "monómeros", enlazadas juntas en cualquier patrón concebible. Cuando solo se usa una especie de monómero para construir una molécula más grande, el producto es llamado un "homopolímero", usado de manera intercambiable con "polímero". Si las cadenas están compuestas de más de un monómero diferente, el material es llamado genéricamente un "heteropolímero". La porción de pol ímero a la cual está unida un agente de unión de CD2 o fragmento o variante, es preferiblemente un polímero de polialquilenglicol, pero puede usarse cualquier esqueleto de polímero, muy preferiblemente aquéllos que son solubles en agua, no tóxicos y no inmunogénicos. La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique de otra manera, técnicas convencionales de biología celular, cultivo celular, biolog ía molecular, microbiolog ía, DNA recombinante, química de proteína e inmunolog ía, las cuales están dentro de la habilidad del área. Tales técnicas son descritas en la literatura. Ver, por ejemplo, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Clonación molecular: un manual de laboratorio, 2a edición. (Sambrook, Fritsch y Maniatis, eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1 989; DNA Cloning , (Clonación de DNA), volúmenes I y I I (D.N. Glover, ed), 1985; Oligonucleotide Synthesis, (Síntesis de oligonucleótidos), (M.J . Gait, ed.), 1 984; patente estadounidense no. 4,683, 195 (Mullis et ai.); Nucleic Acid Hybridization (Hibridación de ácidos nucleicos), (B. D. Hames y S.J. Higgins, eds.), 1984; Transcription and Translation (Transcripción y traslación) B.D. Hames y S.J. Higgins, eds.), 1984; Culture of Animal Cells (Cultivo de células animales), (R. l. Freshney, ed), Alan R. Liss, I nc. , 1 987; Immobilized Cells and Enzymes (Enzimas y células inmovilizadas), volúmenes 154 y 155 (Wu et al. , eds). Academic Press, Nueva York; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Vectores de transferencia de genes para células de mam ífero (J . H . Miller y M . P. Calos , eds .) , 1 987, Cold Spring Harbor Laboratory; Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Métodos inmunoquímicos en biolog ía celular y molecular) , (Mayer y Walker, eds.), Academic Press, Londres, 1 987; Handbook of Experiment Immunology (Manual de inmunolog ía de experimentos) , volúmenes l-IV (D. M. Weir y C. C. Balckwell, eds.) , 1 986; Manipulating the Mouse Embryo (Manipulación de embriones de ratón), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1 986. Aunque no se desea ligar mediante teoría, los solicitantes creen que los agentes de unión de CD2 usados de acuerdo con los métodos de esta ¡nvención, son profilácticos y terapéuticos para el tratamiento de las condiciones antes mencionadas, debido a que ya sea modulan la interacción de LFA3/CD2 y/o modulan la señalización de CD2, resultando en, entre otras cosas, una ¡nhibición de la proliferación y activación de células T y, de manera más particular, una modulación en el número y/o distribución de linfocitos T efectores de memoria. Los solicitantes creen que los efectos adversos de condiciones del tipo discutido en la presente se deben a tal proliferación y activación de células T. Los solicitantes creen que los métodos de la presente invención son superiores a terapias previamente disponibles para estas condiciones por una variedad de razones, incluyendo, inhibición de interacciones específicas de antígeno para todos los antígenos presentes, inhibición de activación de células T, sin inmunosupresión general y, posiblemente, inducción de tolerancia. En particular, los solicitantes creen que el uso de los métodos de esta invención resultarán en enfocado más específico de terapia para células T realmente en la etapa de iniciación de la lesión, sin ningún efecto sobre mecanismos efectores mediados por macrófagos o leucocitos polimorfonucleares. De acuerdo con esto, el paciente será menos susceptible a infecciones que con esteroides u otros inmunsupresores generales. De esta manera, los métodos para inhibir la activación de células T, como se proporciona en la presente, son profilácticos y terapéuticos para tales condiciones de la piel.

Agentes de unión de CD2 Los agentes de unión de CD2 útiles en los métodos de la invención tienen su propiedad saliente, la capacidad para modular la señalización de CD2 y modular, y preferiblemente inhibir, la interacción de CD2/LFA-3. Un agente de unión de CD2 dado puede tener la capacidad para realizar ambas funciones. Tales agentes incluyen homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2, polipéptidos LFA-3 solubles, polipéptidos CD2 solubles, agentes imitadores de LFA-3 y CD2 y derivados de los mismos. Los agentes de unión de CD2 preferidos son polipéptidos CD2 y LFA-3 solubles, homólogos de anticuerpo anti-CD2 y agentes imitadores de LFA-3 y CD2. La utilidad en los métodos de esta invención de polipéptidos CD2 solubles específicos, polipéptidos LFA-3 solubles, homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2 o agentes imitadores de CD2 y LFA-3 puede ser determinada, por ejemplo, al ensayar su capacidad para modular la interacción de LFA-3/CD2. Esta capacidad puede ser ensayada, por ejemplo, usando un ensayo de unión de célula simple que permita la evalución visual (bajo aumento) de la capacidad del agente de unión de CD2 putativo para inhibir la interacción entre LFA-3 y CD2 en células que soportan estas moléculas. Las células Jurkat se prefieren como el substrato CD2+ y glóbulos rojos de borrego o células JY humanas se prefieren como el substrato LFA-3+. Las características de unión de polipéptidos solubles, homólogos de anticuerpo y agentes imitadores útiles en esta ¡nvención, pueden ensayarse en varias formas conocidas, tales como, al radiomarcar el homólogo de anticuerpo, polipéptido o agente (por ejemplo, 35S o 1251) y entonces contactar el polipéptido marcado, agente im itador u homólogo de anticuerpo con CD2+ de células LFA-3+, según sea apropiado. Las características de unión también pueden ser ensayadas usando un anticuerpo secundario enzimáticamente marcado apropiado. Los ensayos de competencia de roseteado, tales como aquéllos descritos por Seed et al. (Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, pp. 3365-69 (1 987)) también pueden ser usados. A. Homólogos de anticuerpo anti-LFA-3 y anti-CD2 Muchos tipos de homólogos de anticuerpo anti-LFA-3 o anti-CD2 son útiles en los métodos de esta invención. Estos incluyen anticuerpos monoclonales, anticuerpos recombinantes, anticuerpos recombinantes quiméricos, anticuerpos recombinantes humanizados, así como porciones • de unión de antígeno de lo anterior. Entre los homólogos de anticuerpo anti-LFA-3, es preferible usar anticuerpos anti-LFA-3 monoclonales. Es más preferible usar un anticuerpo anti-LFA-3 monoclonal producido mediante un hibridoma seleccionado dei grupo de hibridomas teniendo acceso nos. ATCC HB 1 0693 (1 E6), ATCC H B 1 0694 (HC-1 B1 1 ), ATCC HB 1 0695 (7a6) y ATCC HB 10696 (8B8), o el anticuerpo monoclonal conocido como TS2/9 (Sánchez-Madrid et al. , "Three Distinct Antigens Associated with Human T-Lymphocyte-Mediated Cytolysís: LFA-1 , LFA-2 and LFA-3" (Tres antígenos distintos asociados con citólisis mediada por linfocitos T humanos: LFA-1 , LFA-2 y LFA-3), Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 79, pp. 7489-93 (1 982)) . Muy preferiblemente, el anticuerpo anti-LFA-3 monoclonal es producido mediante un hibridoma seleccionado del grupo de hibridomas teniendo acceso nos. ATCC HB 10695 (7A6) y ATCC H B 10693 (IE6). Entre los homólogos de anticuerpo anti-CD2, es preferible usar anticuerpos anti-CD2 monoclonales, tales como, los anticuerpos monoclonales anti-CD2 conocidos como los anticuerpos de epitope T1 1 , incluyendo TS2/18 (Sánchez-Madrid et al. , "Three Distinct Antigens Associates with Human T-Lymphocyte-Mediated Cytolysis: LFA-1 , LFA-2 and LFA-3", (Tres antígenos distintos asociados con citólisis mediada por linfocitos T humanos: LFA-1 , LFA-2 y LFA-3), Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 79, pp. 7489-93 (1982)) . La tecnología para producir anticuerpos monoclonales es bien conocida. Brevemente, una línea de células inmortales (normalmente células de mieloma) se fusiona a linfocitos (normalmente esplenocitos), de un mamífero inmunizado con una preparación que comprende un antígeno dado, y los sobrenadantes de cultivo de las células de hibridoma resultantes son clasificadas por anticuerpos contra el antígeno. Ver, de manera general, Kohler et al. , Nature, "Continuous Cultures of Fused Cells Secreting Antibody of Predefined Specificity" (Cultivos continuos de células fusionadas que secretan anticuerpo de especificidad predefinida), 256, pp. 495-97 (1975) . Los inmunógenos útiles para el propósito de esta invención incluyen células que soportan CD2 o LFA-3, así como preparaciones libres de células conteniendo LFA-3, CD2 o fragmentos de unión de contra receptor de los mismos (por ejemplo, fragmentos de CD2 que se unan a LFA-3 o fragmentos de LFA-3 que se unen a CD2) . La inmunización puede lograrse usando procedimientos estándares. La dosis de unidad y régimen de inmunización dependen de la especie de mamífero inmunizado, su estado inmune, el peso corporal del mamífero, etc. Normalmente, los mam íferos inmunizados se sangran y el suero de cada muestra de sangre es ensayado para anticuerpos particulares usando ensayos de clasificación apropiados. Por ejemplo, los anticuerpos anti-LFA-3 o anti-CD2 útiles pueden ser identificados al probar la capacidad del suero inmune para bloquear emplazamiento de células Jurkat, lo cual resulta de la presencia de LFA-3 y CD2 en las superficies respectivas de estas células. Los linfocitos usados en la producción de células de hibridoma normalmente se aislan de mamífero inmunizado, cuyos sueros ya han probado ser positivos para la presencia de los anticuerpos deseados usando tales ensayos de clasificación. Normalmente, la línea de células inmortales (por ejemplo, una línea de células de mieloma) se deriva de la misma especie de mamífero que los linfocitos. Las líneas de células inmortales preferidas son líneas de células de mieloma de ratón que son sensibles a medio de cultivo conteniendo hipoxantina, aminopterina y timidina ("medio HAT"). Normalmente, las células de mieloma de ratón sensibles a HAT se fusionan a esplenocitos de ratón usando polietilenglicol ("PEG") 3350. Las células de hibpdoma resultantes de la fusión son seleccionadas entonces usando medio HAT, el cual mata células de mieloma no fusionadas y fusionadas de manera improductiva (los esplenocitos no fusionados mueren después de varios días debido a que no son transformados) . Los hibridomas que producen un anticuero deseado son detectados al clasificar los sobrenadantes de cultivo de hibridoma, por ejemplo, por la capacidad para unirse a su contra receptor respectivo, o por su capacidad para bloquear la adhesión de células Jurkat a glóbulos rojos de borrego. La subclonación de ios cultivos de hibridoma mediante dilución limitante se realiza normalmente para asegurar la monoclonalidad. Para producir anticuerpos monoclonales anti-LFA-3 o anti-CD2, las células de hibridoma que prueban ser positivas en tales ensayos de clasificación se cultivan en un medio de nutrientes bajo condiciones y durante un tiempo suficiente, para permitir que las células de hibridoma secreten los anticuerpos monoclonales en el medio de cultivo. Las técnicas de cultivo de tejido y medios de cultivo adecuados para células de hibridoma son bien conocidos. El sobrenadante de cultivo de hibridoma acondicionado puede ser recolectado y los anticuerpos deseados pueden ser purificados además opcionalmente mediante métodos bien conocidos. De manera alternativa, el anticuerpo deseado puede ser producido al inyectar las células de hibridoma en la cavidad peritoneal de un ratón iniciado con pristane. Las células de hibridoma proliferan en la cavidad peritoneal, secretando el anticuerpo, el cual se acumula como fluido de ascitis . El anticuerpo puede ser recolectado al retirar el fluido de ascitis de la cavidad peritoneal con una jeringa . Los homólogos de anticuerpo anti-CD2 y anti-LFA-3 útiles en la presente invención tam bién pueden ser anticuerpos recombinantes producidos por células huésped transformadas con DNA que codifica cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina de un anticuerpo deseado, los anticuerpos recombinantes pueden ser producidos mediante técnicas de ingeniería genética bien conocidas. Ver, por ejemplo, la patente estadounidense no. 4, 816,397, la cual es incorporada en la presente por referencia. Por ejemplo, los anticuerpos recombinantes pueden ser producidos al clonar cDNA o DNA genóm ico que codifica las cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina del anticuerpo deseado a partir de una célula de hibridoma que produce un homólogo de anticuerpo útil en esta invención. El cDNA o DNA genómico que codifica esos polipéptidos es insertado entonces en vectores de expresión, de manera que ambos genes son enlazados operativamente a sus propias secuencias de control de expresión de transcripción y traslación. El vector de expresión y secuencias de control de expresión son elegidos para ser compatibles con la células huésped de expresión usada. Normalmente, ambos genes son insertados en el mismo vector de expresión. Las células huésped procarióticas o eucarióticas pueden ser usadas. La expresión en células huésped eucarióticas es preferida debido a que tales células son más calificadas que células procarióticas para asemejarse y secretar un anticuerpo ¡nmunológicamente activo y doblado apropiadamente. Sin embargo, cualquier anticuerpo producido que esté inactivo debido a un doblado inapropiado, puede ser renaturaliza ble de acuerdo con métodos bien conocidos (Kim y Baldwin , "Specific Intermediates in the Folding Reactions of Small Proteins and the Mechanism of Protein Folding" (I ntermediarios específicos en las reacciones de doblado de pequeñas proteínas y el mecanismo de doblado de proteínas) , Ann . Rev. Biochem . , 51 , pp. 459-89 ( 1 982)) . Es posible q ue las células huésped producirán porciones de anticuerpos intactos, tales como, dímeros de cadenas ligeras o dímeros de cadenas pesadas, los cuales también son homólogos de anticuerpo de acuerdo con la presente ¡nvención. Se entenderá que las variaciones en el procedimiento anterior son útiles en la presente invención. Por ejemplo , puede desearse transformar una célula huésped con DNA que codifique ya sea la cadena ligera o la cadena pesada (pero no ambas) de un homólogo de anticuerpo. También puede usarse la tecnolog ía de DNA recombina nte para remover algo o todo el DNA que codifica cualq uiera o ambas de las cadenas ligera y pesada , que no es necesario para la unión de contra receptor de CD2 o LFA-3. Las moléculas expresadas a partir de tales moléculas de D NA tru ncadas son útiles en los métodos de esta invención . Además, pueden producirse anticuerpos bifuncionales en los cuales una cadena ligera y una pesada son homólogos de anticuerpo anti-CD2 o anti-LFA-3, y la otra cadena pesada y ligera son específicas para un antígeno diferente a CD2 o LFA-3, u otro epitope de CD2 o LFA-3. Los homólogos de anticuerpo anti-LFA-3 o anti-CD2 , quiméricos, recombinantes, pueden producirse al transformar una célula huésped con un vector de expresión adecuado que comprende DNA codificando las cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina deseadas, en las cuales todo o algo del DNA que cod ifica las regiones constante y de gozne de la cadena pesada y/o ligera, han sido substituidas con DNA de la región correspondiente de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina de una especie diferente. Cuando el anticuerpo recombinante original no es humano y el agente de unión de CD2 va a ser administrado a un humano, se prefiere la substitución de secuencias humanas correspondientes. Un anticuerpo recombinante quimérico ejemplar tiene regiones variables de ratón y regiones constantes y de gozne humanas. Ver, de manera general, la patente estadounidense no. 4,816,397 y Morrison et al. , "Chimeric Human Antibody Molecules: Mouse Antigen-Binding Domains With Human Constant Región Domains" (Moléculas de anticuerpo humano quiméricas: dominios de unión de antígeno de ratón con dominios de región constante humanos), Proc. Nati . Acad. Sci. USA 8 1 , pp. 6851 -55 (1984). Los anticuerpos anti-LFA-3 o anti-CD2 recombinantes humanizados pueden ser producidos al transformar una célula huésped con un vector de expresión adecuado que comprende DNA que codifica las cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina no humanas deseadas, en las cuales todo o algo del DNA que codifica aminoácidos no involucrado en la unión de antígeno, han sido substituidas con DNA de la región correspondiente de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humana deseada. Ver, de manera general, Jones et al., "Replacing the Complementarity-Determining Regions in a Human Antibody with those from a Mouse" (Reemplazamiento de las regiones que determinan la complementaridad en un anticuerpo humano con aquéllas de un ratón), Nature. 321 , pp. 522-25 (1986).

Los homólogos de anticuerpo anti-CD2 y anti-LFA-3 que no son anticuerpos intactos también son útiles en esta invención . Tales homólogos pueden ser derivados de cualquiera de los homólogos de anticuerpo descritos antes. Por ejemplo, los fragmentos de unión a antígeno, así como polipéptidos monoméricos, diméricos o triméricos de longitud completa, derivados de los anticuerpos descritos antes, son útiles por sí mismos. Los homólogos de anticuerpo útiles de este tipo incluyen fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2, fragmentos F(v), monómeros o dímeros de cadena pesada, monómeros o dímeros de cadena ligera, dímeros que consisten de una cadena pesada y una ligera, y similares. Las cadenas pesadas anti-LFA-3 son fragmentos de anticuerpo anti-LFA-3 preferidos. Los fragmentos de anticuerpo también pueden ser producidos mediante métodos qu ímicos, por ejemplo, al cortar un anticuerpo intacto con una proteasa, tal como, pepsina o papaína, y tratar opcionalmente el producto cortado con un agente reductor. De manera alternativa, los fragmentos útiles pueden ser producidos al usar células huésped transformadas con genes de cadena pesada y/o ligera truncados. Los monómeros de cadena pesada y ligera pueden ser producidos al tratar un anticuerpo intacto con un agente reductor, tal como, ditiotreitol, seguido por purificación para separar las cadenas. Los monómeros de cadena pesada y ligera también pueden ser producidos mediante células huésped transformadas con DNA que codifica ya sea la cadena pesada o la cadena ligera deseada, pero no ambas. Ver, por ejemplo, Ward et al. , "Binding Activities of a Repertoire of Single Immunoglobulin Variable Domains 3 Secreted from Escherichia coli" (Actividades de unión de un repertorio de dominios variables de inmunoglobulina simples secretados a partir de Escherichia coli), Nature, 341 , pp. 544-46 (1989); Sastry et al. , "Cloning of the I mmunological Repertoire in Escherichia coli for Generation of Monoclonal Catalytic Antibodies: Construction of a Heavy Chain Variable Region-Specific cDNA Library" (Clonación del repertorio inmunológico en Escherichia coli para generación de anticuerpos catalíticos monoclonales: construcción de una genoteca de cDNA específico de región, variable, de cadena pesada) , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 86, pp. 572832 (1 989).

B. Polipéptidos CD2 y LFA-3 solubles Los polipéptídos LFA-3 solubles o polipéptidos CD2 solubles que modulan la interacción de LFA-3 y CD2 son útiles en los métodos de la presente invención. Se prefieren los polipéptidos LFA-3 solubles. Los polipéptidos LFA-3 solubles pueden ser derivados de la forma de transmembrana de LFA-3, particularmente el dominio extracelular (por ejemplo, AA 1 -AA 187 de SEQ I D NO:2). Tales polipéptidos son descritos en la patente estadounidense no. 4, 956,281 y la patente estadounidense no. 5,547,853 (las cuales comparten un cesionario común con la presente solicitud), las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Los polipéptidos LFA-3 solubles preferidos incluyen polipéptidos que consisten de AA 1 -AA 92 de SEQ I D NO:2, AA 1 -AA 80 de SEQ I D NO:2, AA 50-AA 65 de SEQ ID NO:2 y AA 20-AA 80 de SEQ ID NO:2. Un vector que comprende una secuencia de DNA (SEQ I D NO: 1 ) que codifica los aminoácidos de SEQ I D NO .2 , ha sido depositado con la American Type Cultrure Coilection, Rockville, Maryland bajo el acceso no. 75107. Las proteínas más preferidas de este tipo son proteínas de fusión que confienen los aminoácidos 92 amino terminales de LFA-3 maduro, los 10 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana conteniendo los dos residuos de cisteína que se piensa que participan en ei enlace disulfuro intercadenas, y las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de lgG 1 humana (por ejemplo, SEQ I D NO:8). La proteína de fusión es referida en la presente como "LFA3TIP". Un plásmido, pSAB 1 52, codificando una LFA3TI P ejemplar ha sido depositado con la American Type Culture Colection, Rockville, Maryland, bajo el acceso número ATCC 68720. La secuencia de DNA de la inserción pSAB 152 es SEQ I D NO:7. Esta proteína recombinante ha sido diseñada para modular respuestas inmunes a través de la interacción con el receptor CD2. La porción LFA-3 de la fusión se une al receptor CD2 en los linfocitos T. La porción IgG-i se une a los receptores FcgammaRI (macrófago) y FcgammaRI I I (células NK y neutrófilos). Se ha mostrado que la interacción de LFA3TIP con CD2 inhibe respuestas de linfocitos T humanos in vitro. Ver patente estadounidense 5,728,677 y 5,547,853. Una manera de producir LFA3TIP para usarse en los métodos de esta invención se describe en la patente estadounidense 5, 547,853. En general, el medio de cultivo acondicionado de células COS7 o CHO transfectadas con pSAB 1 52 se concentra usando un sistema de cartucho espiral AMICON SI Y3 0 (AMICON, Danvers, Massachusetts) y se somete a cromatografía de Proteína A-Sepharose 4B (Sigma, St. Louis, J5 Missouri). Las proteínas unidas son levigadas y sometidas a cromatografía de filtración en gel Superose-12 (Pharmacia/LKB, Piscataway, Nueva Jersey). Las fracciones de Superose- 1 2 conteniendo LFA3TI P con la menor cantidad de proteínas contaminantes, como se determina en geles SDS-PAGE y mediante análisis Western blot, (ver, por ejemplo, Towbin et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 74, pp. 4350-54 (1 979); Antibodies: A Laboratorv Manual (Anticuerpos: un manual de laboratorio), pp. 474-510 (Cold Spring Harbor Laboratory (1 998)) , son depositadas y concentradas en un YM30 Centricon (AMICON). LFA3TI P se detecta en Western blots usando un anticuerpo policlonal anti-LFA-3 de conejo, seguido por IgG anti-conejo de cabra marcada de manera detectable. La LFA3TIP purificada de células COS7 o CHO es un dímero de dos proteínas de fusión LFA-3-lg monoméricas, conectadas por enlaces disulfuro. Otra proteína de fusión preferida consiste de los primero y segundo dominios extracelulares de LFA-3 fusionados a las regiones CH2 y CH3 de gozne de lgG 1 humana, aquí referida como LLFA3-lg. Los polipéptidos LFA-3 solubles también pueden ser derivados de la forma Pl-enlazada de LFA-3, tal como aquéllas descritas en la solicitud de patente de PCT serial no. WO 90/0218 1 . Un vector que comprende una secuencia de DNA que codifica LFA-3 Pl-enlazado (es decir, SEQ ID NO:3), es depositado con la American Type Culture Collection, Rockville, Maryland bajo acceso no. 68788. Se entenderá que la forma Pl-enlazada de LFA-3 y la forma transmembrana de LFA-3 tienen secuencias de aminoácidos idénticas a través del dominio extracelular completo.

De acuerdo con esto, los polipéptidos LFA-3 Pl-en lazados preferidos son ios mismos para la forma transmembrana de LFA-3. Los polipéptidos CD2 solubles pueden ser derivados de CD2 de longitud completa, particularmente el dominio extracelular (por ejemplo, AA 1 -AA 185 de SEQ ID NO:6). Tales polipéptidos pueden comprender todo o parte del dominio extracelular de CD2. Los polipéptidos CD2 solubles ejemplares se describen en PCT WO 90/081 87, la cual se incorpora en la presente por referencia. La producción de los polipéptidos solubles útiles en esta invención pueden lograrse mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los polipéptidos pueden ser derivados de moléculas LFA-3 o CD2 transmembrana intactas o una molécula de LFA-3 Pl-enlazada intacta mediante proteólisis usando endopeptidasas específicas en combinación con las exopeptidasas, degradación de Edman o ambas. La molécula de LFA-3 intacta o la molécula de CD2 intacta, a su vez, pueden ser purificadas a partir de su fuente natural usando métodos convencionales. De manera alternativa, el LFA-3 o CD2 intactos pueden ser producidos mediante técnicas de DNA recombinantes conocidas usando cDNAs (ver, por ejemplo, patente estadounidense no. 4,956,281 para Wallner et al. ; Aruffo y Seed, Proc. Nati. Acad. Sci. , 84, pp. 2941 -45 (1987); Sayre et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, pp. 2941 -45 (1987)). De preferencia, los polipéptidos solubles útiles en la presente invención se producen directamente, eliminando así la necesidad de una molécula de LFA-3 entera o una molécula de CD2 entera como un material de inicio. Esto puede lograrse mediante técnicas de síntesis química convencionales o mediante técnicas de DNA recombinante bien conocidas, en donde solo esas secuencias de DNA, que codifican los péptidos deseados, se expresan en huéspedes transformados. Por ejemplo, un gene que codifica el polipéptido LFA-3 soluble o polipéptido CD2 soluble deseado, puede sintetizarse mediante medios químicos usando un sintetizador de oligonucleótidos. Tales oligonucleótidos son diseñados con base en la secuencia de aminoácidos del polipéptido LFA-3 soluble o polipéptido CD2 soluble deseado. Las secuencias de DNA específicas que codifican el péptido deseado, también pueden derivarse de la secuencia de DNA de longitud completa mediante aislamiento de fragmentos de endonucleasa de restricción específica o mediante síntesis de PCR de ia región especificada. Pueden ampliarse métodos estándares para sintetizar un gene que codifica un polipéptido LFA-3 soluble o un polipéptido CD2 soluble que es útil en esta invención. Por ejemplo, la secuencia de aminoácidos completa puede usarse para construir un gene retro-trasladado. Un oligómero de DNA conteniendo una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido LFA-3 soluble o un polipéptido CD2 soluble útil en esta invención, puede sintetizarse en un paso simple. De manera alternativa, varios oligonucleótidos más pequeños que codifican porciones del polipéptido deseado pueden sintetizarse y entonces ligarse. De preferencia, un polipéptido LFA-3 soluble o un polipéptido CD2 soluble útil en esta invención, será sintetizado como varios oligonucleótidos separados, los cuales son enlazados juntos subsecuentemente. Los oligonucleótidos individuales normalmente contienen proyecciones 5' o 3' para montaje complementario. Una vez montados, los genes preferidos serán caracterizados por secuencias que son reconocidas mediante endonucleasas de restricción (incluyendo sitios de restricción únicos para montaje directo en un vector de clonación o expresión) , considerando los codones preferidos el sistema de expresión huésped a ser usado, y una secuencia la cual, cuando se transcribe, produce un mRNA estable, trasladado eficientemente. El montaje apropiado puede ser confirmado mediante secuenciación de nucleótidos, mapeo de restricción y expresión de un polipéptido biológicamene activo en un huésped adecuado. Se apreciará por aquéllos expertos en la técnica que, debido a la degeneración del código genético, las moléculas de DNA que comprenden muchas otras secuencias de nucleótidos, también serán capaces de codificar los polipéptidos LFA-3 y CD2 solubles codificados por las secuencias de DNA específicas descritas antes. Estas secuencias degeneradas también codifican polipéptidos que son útiles en esta invención. Las secuencias de DNA pueden ser expresadas en huéspedes unicelulares. Como es bien sabido en la técnica, con el fin de obtener altos niveles de expresión de un gene transfectado en un huésped, el gene debe ser enlazado operativamente a secuencias de control de expresión de transcripción y traslación, que sean funcionales en el huésped de expresión elegido. De preferencia, las secuencias de control de expresión, y ei gene de interés, estarán contenidos en un vector de expresión que comprenda además, un marcador de selección bacteriana y origen de replicación. Si el huésped de expresión es una célula eucariótica, el vector de expresión debería comprender además un marcador de expresión adicional útil en el huésped de expresión. Las secuencias de DNA que codifican los polipéptidos solubles deseados pueden o no codificar una secuencia de señal. Si el huésped de expresión es procariótico, generalmente se prefiere que la secuencia de DNA no codifique una secuencia de señal. Si el huésped de expresión es eucariótico, generalmente se prefiere que una secuencia de señal se codifique. Una metionina amino terminal puede estar presente o no en el producto expresado. Si la metionina terminal no es cortada por el huésped de expresión , puede, si se desea, ser removida quím icamente mediante técnicas estándares. Puede emplearse una amplia variedad de combinaciones de huésped/vector de expresión . Los vectores de expresión útiles para huéspedes de expresión incluyen , por ejemplo, vectores que comprenden secuencias de control de expresión de SV40, virus de papiloma bovino, adenovirus y citomegalovirus. Los vectores de expresión útiles para huéspedes bacterianos incluyen plásmidos bacterianos conocidos, tales como, plásmidos de E. coli, incluyendo coi E1 , PCRI, pBR322, pMB9 y sus derivados, plásmidos de rango de huésped más amplio, tales como, RP4, DNAs de fagos, por ejemplo, los numerosos derivados de fago lambda, por ejemplo, NM989, y otros fagos de DNA, tales como M 13 y fagos de DNA de filamento simple, filamentosos, vectores de expresión útiles para células de levadura incluyen el plásmido de 2µ y derivados de los mismos. Los vectores útiles para células de insectos incluyen pVL 941 . Además, cualquiera de una amplia variedad de secuencias de control de expresión puede ser usada en estos vectores. Tales secuencias de control de expresión útiles incluyen las secuencias de control de expresión asociadas con genes estructurales de los vectores de expresión anteriores. Ejemplos de secuencias de control de expresión útiles incl uyen, por ejemplo, los promotores tempranos y tardíos de SV40 o adenovirus, el sistema lac, el sistema trp, el sistema TAC o TRC, las regiones de operador y promotor mayores de fago lambda, las regiones de control de la proteína de recubrimiento fd, ei promotor para 3-fosfoglicerato cinasa y otras enzimas giícol íticas, los promotores de ácido fosfatasa, por ejemplo, Pho5, los promotores del sistema de emparejamiento de levadura a y otras secuencias conocidas para controlar la expresión de genes de células procarióticas o eucarióticas o sus virus, y varias combinaciones de los mismos. Es útil una amplia variedad de células huésped unicelulares. Estos huéspedes pueden incluir huéspedes eucarióticos y procarióticos bien conocidos, tales como, cepas de E. coli. Pseudomonas. Bacillus. Streptomyces, hongos, levaduras, células de insectos, tales como, Spodoptera frugiperda (SF9), células animales, tales como, células CHO y de ratón, células de mono verde africano, tales como COS 1 , COS 7, BSC 1 , BSC 40 y BMT 10, y células humanas, así como células de plantas en cultivo de tejido. Para expresión de células animales, preferimos células C140 y células COS 7. Se debería entender, por supuesto, que no todos los vectores y secuencias de control de expresión funcionarán igualmente bien para expresar las secuencias de DNA descritas en la presente. Ni funcionarán igualmente bien todos los huéspedes con el mismo sistema de expresión . Sin em bargo, alguien de habilidad en la técn ica puede hacer una selección entre estos vectores, secuencias de control de expresión y huéspedes sin la experimentación indebida . Por ejemplo, para seleccionar un vector, eí huésped debe ser considerado debido a q ue el vector debe replicar en el. El número de copias del vector, la capacidad para controlar ese número de copias y la expresión de cualquier otra proteína codificada por el vector, tal como marcadores de antibióticos, también debería considerarse. Para seleccionar una secuencia de control de expresión , también se debería considerar una variedad de factores. Estos incluyen, por ejemplo, la fuerza relativa de la secuencia, su controlabilidad y su compatibilidad con las secuencias de DNA discutidas en ia presente, particularmente con respecto a estructuras secundarias potenciales. Los huéspedes unicelulares deberían ser seleccionados por consideración de su compatiblidad con el vector elegido, la toxicidad del producto codificado por las secuencias de DNA, sus características de secreción, su capacidad para doblar los polipéptidos solubles de manera correcta, su fermentación o requerimientos de cultivos, y la facilidad de purificación de los productos codificados por las secuencias de DNA. Dentro de estos parámetros, alguien experto en la técnica puede seleccionar varias combinaciones de huésped/secuencia de control de expresión/vector que expresarán las secuencias de DNA deseadas en la fermentación o en cultivo animal a gran ' escala, por ejemplo, con células CHO o células COS 7. Los polipéptidos LFA-3 y CD2 solubles pueden ser aislados del cultivo celular o fermentación y purificarse usando cualquiera de una variedad de métodos convencionales Alguien de habilidad en la técnica puede seleccionar las técnicas de aislam iento y purificación más apropiadas. Aunque las técnicas de DNA recombinante son el método preferido para producir polipéptidos CD2 solubles o polipéptidos LFA-3 solubles útiles, teniendo una secuencia de más de 20 aminoácidos, preferiblemente se producen polipéptidos CD2 o LFA-3 más cortos ten iendo menos de aproximadamente 20 aminoácidos, mediante técnicas de s íntesis química convencionales. Los polipéptidos producidos sintéticamente útiles en esta invención pueden ser producidos ventajosamente en rendimientos extremadamente altos y pueden ser purificados fácilmente. De preferencia, tales polipéptidos CD2 solbules o polipéptidos LFA-3 solubles, son sintetizados mediante síntesis de polipéptidos de fase en solución o fase sólida y, opcionalmente, son digeridos con carboxipeptidasa (para remover aminoácidos C-terminales) o son degradados mediante la degradación de Edman manual (para remover los aminoácidos N-terminales). El doblado apropiado de los polipéptidos puede lograrse bajo condiciones oxidativas, las cuales favorecen la formación de puentes disulfuro como se describe por Kent, "Chemical Synthesis of Polypeptides and Proteins" (S íntesis química de polipéptidos y proteínas), Ann. Rev. Biochem . , 57, pp. 95789 (1988). Los polipéptidos producidos en esta manera pueden ser purificados entonces mediante técnicas de separación ampliamente conocidas en la técnica, utilizando de preferencia HPLC de fase inversa. El uso de síntesis de fase en solución permite ventajosamente la adición directa de ciertos aminoácidos derivados a la cadena de polipéptido creciente, tal como, el 0-sulfato éster de tirosina. Esto obvia la necesidad de un paso de derivación subsecuente para modificar cualquier residuo de los polipéptidos útiles en esta invención .

C. Agentes imitadores de LFA-3 y CD2 También son útiles en los métodos de esta invención los agentes imitadores de LFA-3 y CD2. Estos agentes que pueden ser péptidos, compuestos semi-peptídicos o compuestos no peptídicos, son agentes de unión de CD2 que modulan la señalización de CD2 y/o la interacción de CD2/LFA-3. Los agentes imitadores de CD2 y LFA-3 más preferidos inhibirán la interacción de CD2/LFA-3 al menos tan bien como el anticuerpo monoclonal ant?'LFA-3 7A6 o el anticuerpo monoclonai anti-CD2 TS2/1 8 (descritos supra). Tales agentes imitadores pueden ser producidos al sintetizar una pluralidad de péptidos (por ejemplo, 520 aminoácidos de longitud), compuestos semi-peptídicos o compuestos orgánicos, no peptídicos, y entonces clasificar esos compuestos por su capacidad para inhibir la interacción de CD2/LFA-3. Ver, de manera general, la patente estadounidense no. 4,833,092, Scott y Smith, "Searching for Peptide Ligands with an Epitope Library" (Búsqueda de iigandos de péptido con una genoteca de epitopes), Science, 249, pp. 386-90 (1990), y Devlin et al. , "Random Peptide Libraries: A Source of Specific Protein Binding Molecules" (Genotecas de péptidos aleatorias: una fuente de moléculas de unión de proteína específica), Science, 249, pp. 40407 (1 990), las cuales se incorporan en la presente por referencia.

D. Agentes de unión de CD2 derivados También son útiles en los métodos de esta invención los agentes de unión de CD2 derivados, tales como moduladores de la interacción de CD2/LFA-3 en la cual, por ejemplo, cualq uiera de los homólogos de anticuerpo, polipéptidos de CD2 y LFA-3 solubles, o agentes imitadores de CD2 y LFA-3 descritos en la presente son enlazados funcionalmente (mediante acoplamiento qu ímico, fusión genética o de otra manera) a uno o más miembros seleccionados de manera independiente del grupo que consiste de homólogos de anticuerpo anti-LFA-3 y anti-CD2, polipéptidos LFA-3 y CD2 solubles, agentes imitadores de CD2 y LFA-3, agentes citotóxicos y agentes farmacéuticos. Un tipo de agente de unión de CD2 derivado es producido al reticular dos o más agentes de unión de CD2 (del mismo tipo o de diferentes tipos). Los reticuladores adecuados incluyen aquéllos que son heterobifuncionales, teniendo dos grupos reactivos distintos separados por un espaciador apropiado (por ejemplo, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida) u homobifuncionales (por ejemplo, suberato de disuccinimidílo). Tales enlazadores están disponibles de Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois. Otra posibilidad para reticular toma ventaja de la secuencia de señal de enlace Pl en LFA-3 Pl-enlazado, o fragmentos de los mismos. De manera específica, el DNA que codifica la secuencia de señal de enlace Pl (por ejemplo, AA162-AA212 de SEQ ID NO:4) se liga corriente abajo del DNA que codifica un polipéptido deseado, de preferencia un polipéptido LFA-3 soluble. Si este constructo se expresa en una célula eucariótica apropiada, la célula reconocerá la secuencia de señal de enlace Pl y enlazará covalentemente Pl al polipéptido. La propiedad hidrofóbica del Pl puede ser explotada para formar agregados micelares de los polipéptidos . También son útiles los agentes de unión de CD2 enlazados a uno o más agentes citotóxicos o farmacéuticos. Los agentes farmacéuticos útiles incluyen péptidos, polipéptidos y proteínas biológicamente activos, tales como homólogos de anticuerpo específicos para un polipéptido humano diferente a CD2 o LFA-3, o porciones de los mismos. Agentes farmacéuticos y agentes citotóxicos útiles también incluyen ciclosporína A, prednisona, FK506, metotrexato, esteroides, retinoides, ¡nterferón y mostaza de nitrógeno. Los agentes de unión de CD2 preferidos derivados con un agente farmacéutico incluyen polipéptidos producidos de manera recombinante, en los cuales un polipéptido LFA-3 soluble, un polipéptido CD2 soluble, o un agente imitador de CD2 de peptidilo o LFA-3 de peptidílo se fusiona a toda o parte de una región de gozne de cadena pesada de inmunoglobulina, y toda o parte de una región constante de cadena pesada. Los polipéptidos preferidos para preparar tales proteínas de fusión son polipéptidos LFA-3 solubles. Las proteínas de fusión más preferidas que contienen AA 1 -AA 92 de LFA-3 (por ejemplo, SEQ I D NO:2) fusionadas a una porción de una región de gozne de IgG I humana (incluyendo los diez aminoácidos C-terminales de la región de gozne conteniendo dos residuos de cisteína que se piensa que participan en el enlace de disulfuro intercadena) y las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de IgGI . Se espera que tales proteínas de fusión exhiben vidas medias de suero prolongadas y permitan la dimerización de agente de unión de CD2.

Otros agentes de unión de CD2 derivados que también se espera que exhiban vidas medias de suero prolongadas son agentes de unión de CD2 enlazados, muy preferiblemente, a uno o más polímeros que comprenden un polímero de polialquilenglicol . Se esperaría que el polímero reaccione de manera selectiva con grupos amino libres u otros grupos reactivos en un agente de unión de CD2 y en teoría , el o los pol ímeros se hacen reaccionar de manera que la unión podría ocurrir en cualquier grupo amino disponible, tal como, grupos alfa amino o los grupos epsílon-amíno de usinas, o grupos -SH de cisteínas. Los grupos carboxílicos libres, grupos carbonilo, hidroxilo, guanidilo adecuadamente activados, porciones de carbohidrato oxidados y grupos mercapto del agente de unión de CD2 (si están disponibles) también pueden ser usados como sitios de unión . En particular, si el agente de unión de CD2 es una proteína, la modificación química de cualquier cisteína (por ejemplo, una cisteína interna o N-terminal) para proteger el tiol, con conjugación concomitante con una porción de polialquílen glicol (es decir, polietilenglicol o PEG), puede realizarse en numerosas maneras por alguien experto en la técnica. Ver la patente estadounidense 4, 1 79,337. La porción de sulfhidrilo, con el ion tiolato como la especie activa, es el grupo funcional más reactivo en una proteína. Existen muchos reactivos que reaccionan más rápido con el tiol que cualquier otro grupo. Ver Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking (Química de conjugación y reticulación de proteínas) (S.S. Wong , CRC Press, Boca Ratón , FL, 1 991 ).

Otros ejemplos de métodos que proporcionan enlace entre un polialquilenglicol y una cisteína serían reacciones con otros compuestos de alfa-haloacetilo, organomercúricos, reactivos de disulfuro y otras maleimidas N-substituidas. Numerosos derivados de estas especies activas están comercialmente disponibles (por ejemplo, yodoacetato de etilo (Aldrich, Milwaukee Wl), disulfuro de fenilo (Aldrich) y N-pirenemaleimida (Molecular Probes, Eugene OR)) o podrían ser sintetizados fácilmente (por ejemplo, N-alquilyodoacetamidas, N-alquilmaleimidas y organomercúricos). Aunque no existe una estrategia química simple para enfocar un polímero de polialquilenglicol, tal como PEG a un agente de unión de CD2, es honesto diseñar genéticamente un sitio que pueda ser usado para enfocar la porción de polímero, tal como usando mutagénesis de sitio dirigido. Por ejemplo, la incorporación de Cys en un sitio que está en o cerca del extremo C de un agente de unión de CD2 proteico permite la modificación específica usando un polialquilenglicol (por ejemplo, PEG) activado con maleimida, vinilsulfona o haloacetato. Las reacciones pueden tener lugar mediante cualquier método adecuado usado para hacer reaccionar materiales biológicamente activos con polímeros inertes. De manera general, el proceso involucra preparar un polímero activado (que pueda tener al menos un grupo hidroxilo terminal) y posteriormente, hacer reaccionar la proteína con el polímero activado para producir la proteína soluble adecuada para la formulación. La reacción de modificación anterior puede ser realizada mediante varios métodos, los cuales pueden involucrar uno o más pasos. En la práctica de la presente invención, los residuos de polialq uilenglicol de polialquilenglicoles de alquilo de C 1 -C4, de preferencia polietilenglicol (PEG) , o residuos de poli(oxi)alquilenglicol de tales glicoles, son incorporados ventajosamente en ios sistemas de pol ímeros de interés. De esta manera, el pol ímero al cual se une la proteína puede ser un homopolímero de polietilenglicol (PEG) o es un poliol polioxietilado, siempre que en todos los casos el polímero sea soluble en agua a temperatura ambiente. Ejemplos no limitantes de tales pol ímeros incluyen homopolímeros de óxido de polialquileno, tales como, PEG o polipropilenglicoles, glicoles polioxietilenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloque de los mismos, siempre que se mantenga la solubilidad en agua del copolímero de bloque. Ejemplos de políoles polioxietilados incluyen, por ejemplo, glicerol polioxietilado, sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada o sim ilares. El esqueleto de glicerol de glicerol polioxietilado es el mismo esqueleto que ocurre de manera natural en, por ejemplo, animales y humanos en mono-, di- y triglicéridos. Por lo tanto, esta ramificación no sería vista necesariamente como un agente extraño en el cuerpo. Como una alternativa para óxidos de polialquileno, pueden usarse dextrano, poliviníl pirrolidonas, poliacrilamidas, alcoholes polivinílicos, polímeros basados en carbohidratos y similares. Más aún, pueden usarse los heteropolímeros (es decir, polímeros que consisten de más de una especie de monómero tal como un copolímero) como se describen en la patente estadounidense 5,359,030 (por ejemplo proteínas conjugadas a polímeros comprendiendo una porción de polialquilenglicol y uno o más ácidos grasos) . Aquéllos de habilidad ordinaria en la técnica reconocerán que la lista anterior es meramente ilustrativa y que se contemplan todos los materiales poliméricos teniendo las cualidades descritas en la presente. Más aún , en otro aspecto de la invención , uno puede utilizar un agente de unión de CD2 derivado unido covalentemente al componente de pol ímero, en el cual la naturaleza de la conjugación involucra enlaces químicos covalentes cortables. Esto permite el control en términos del curso del tiempo sobre el cual el pol ímero puede ser cortado del agente de unión de CD2. Este enlace covalente puede ser cortado mediante reacción química o enzimática. El producto de agente de unión de CD2-polímero retiene una cantidad aceptable de actividad. Concurrentemente, las porciones de polietilenglicol están presentes en el polímero de conjugación para dotar el conjugado de agente de unión de CD2-polímero con una solubilidad acuosa alta y capacidad de circulación en sangre prolongada. Como resultado de estas características mejoradas, la invención contempla entrega parenteral, oral o en aerosol de ambas especies de agente de unión de CD2-polímero activas y, siguiendo el corte hidrolítico, la biodisponibilidad del agente de unión de CD2 per se, en aplicaciones in VÍVO .

Composiciones farmacéuticas y métodos de acuerdo con esta invención Esta invención proporciona un método preferido para prevenir o tratar una condición en un mam ífero caracterizada por: la infiltración en uno o más órganos del mamífero de linfocitos T efectores de memoria; y/o la asociación con tal condición mediante tales linfocitos T. El método incluye administrar al mam ífero uno o más agentes de un ión de CD2, tales como inhibidores de la interacción de CD2/LFA-3, o forma(s) derivada(s) de los mismos, que son capaces de modular selectivamente los linfocitos T efectores de memoria según se compara con linfocitos T naturales. De preferencia, se administra una cantidad efectiva del agente de unión de CD2 o forma derivada del mismo. Por "cantidad efectiva" se quiere decir una cantidad capaz de disminuir el esparcimiento o severidad de las condiciones descritas en ia presente. Será evidente para aquéllos de habilidad en la técnica, que la cantidad efectiva de agente de unión de CD2 dependerá, inter alia, del programa de administración, la dosis de unidad administrada, si el agente de unión de CD2 es administrado en combinación con otros agentes terapéuticos, el estdo ¡nmune y salud del paciente, la actividad terapéutica del agente de unión de CD2 particular administrado y la vida media del suero. El agente de unión de CD2, o composición farmacéutica, puede estar en una variedad de formas. Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación sólidas, semi-sólidas y líquidas, tales como, tabletas, pildoras, polvos, soluciones líquidas, dispersiones o suspensiones, liposomas, supositorios, infusibles inyectables y preparaciones tópicas. La forma preferida depende del modo de administración pretendido y la aplicación terapéutica. Las formas preferidas son soluciones inyectables o infusibles. El agente de unión de CD2 o composición farmacéutica puede ser administrado de manera intravenosa, intramuscular, subcutánea, intra- articular, intratecal, periostática, intratumoral, intralesional, perilesional mediante infusión , oral, tópica o mediante inhalación . De preferencia, se administra de manera subcutánea, intramuscular o intravenosa . Muy preferiblemente, se administra subcutáneamente. Los agentes de unión de CD2 pueden administrarse de manera oral , bucal, parenteral, rectal, vaginal, mediante atomización por inhalación ¡ntranasal , mediante inhalación intrapulmonar o en otras maneras. En particular, los agentes de acuerdo con la ¡nvención pueden formularse para inhalación con atomización o polvo, para inyección (por ejemplo, inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa, intra-articular o intracisternal) , para infusión o para administración oral, y pueden presentarse en forma de dosis de unidad en ampolletas o tabletas o en frascos de múltiples dosis u otros recipientes con un conservado adicionado. Las composiciones pueden tomar tales formas como suspensiones, soluciones o emulsiones o geles en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como, agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. De manera alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo y/o liofilizada para administración directa o para constitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua estéril, libre de pirógeno, solución salina normal o 5% de dextros.a) antes de usarse. De preferencia, la dosis de unidad es administrada aproximadamente una a tres veces por semana o una a tres veces por día. De manera más preferible, se administra aproximadamente una a tres veces por día durante entre aproximadamente 3 y 7 días, o aproximadamente una a tres veces por día durante entre aproximadamente 3 y 7 días en una base mensual. Sin embargo, se reconocerá q ue pueden emplearse dosificaciones mayores o menores u otros programas de adm inistración. De preferencia, el agente de unión de CD2 es administrado a una dosis entre" aproximadamente 0.001 y aproximadamente 50 mg de agente de unión de CD2 por kg de peso corporal, más preferiblemente, entre aproximadamente 0.01 y aproximdamente 1 0 mg de agente de unión de CD2 por kg de peso corporal, muy preferiblemente entre aproximadamente 0. 1 y aproximadamente 4 mg de agente de unión de CD2 por kg de peso corporal. Por ejemplo, para administrar un agente de unión de CD2 de la invención (el polipéptido LFA-3 soluble LFA3TIP) a un paciente, se empaca un agente de unión de CD2 particularmente preferido como una solución congelada en frascos conteniendo 10 mg/ml de proteína de fusión LFA-3/lgG1 recombinante y materiales excipientes (cloruro de sodio, fosfato de potasio monobásico y fosfato de sodio dibásico) . Los frascos son descongelados en el refrigerador o a temperatura ambiente y se diluyen con 0.9% de cloruro de sodio a un volumen final de 5 mi para una adminitración de bolo IV. LFA3TI P es construida como se describe en Miller et al. (1 993) J Exp. Med. 1 78:21 1 , incorporada aqu í por referencia, y se purifica del medio de cultivo de líneas de células CHO (ovario de hámster chino) transfectantes mediante absorción a Proteína A Sepharose 4B (Pharmacia) y se leviga con glicina 50 mM, NaCI 250 mM (pH 3.0). Las fracciones conteniendo proteína son depositadas y sometidas a filtración en gel en Superose-6® (Pharmacia) en solución salina amortiguada con fosfato (PBS). Las fracciones pico son depositadas y analizadas por pureza en 10% de SDS-PAGe reductor y no reductor. En un protocolo ejemplar, el paciente recibe un bolo IV cada semana a una dosificación que varia , preferiblemente más de 0.025 mg/kg y puede ser hasta entre 0.075 mg/kg, a 0.1 50 mg/kg. La dosificación de este agente de unión de CD2 se basa en la l ínea de base del peso corporal del sujeto. Otros regímenes de dosificación pueden incluir una inyección intramuscular (IM) a una dosificación de no más de 0.005 mg/kg, con dosificaciones preferidas que varían hacia 0.025 mg/kg , siendo seleccionadas las dosificaciones muy preferidas de 0.05, 0.075, 0.125 y 0.165 mg/kg . Las dosis de unidad deberían ser administradas hasta que se observe un efecto. El efecto puede ser medido mediante una variedad de métodos. En el caso de MS , el efecto terapéutico puede medirse mediante métodos de resonancia magnética estándares, en el caso de I BS, ensayando el grado de dolor abdominal, sanación de fístulas, frecuencia de evacuaciones y similares, en el caso de artritis posriática, mediante cambios en hinchazón de articulaciones y rango en movimiento. Las personas que tienen habilidad ordinaria en las artes médicas, serán capaces fácilmente de medir el efecto clínico en cualquiera de las indicaciones descritas en la presente mediante referencia a procedimientos médicos bien conocidos. El o los agentes de unión de CD2 o formas derivadas de los mismos son administradas, de preferencia, en una composición incluyendo un portador farmacéuticamente aceptable. Por "portador farmacéuticamente aceptable" se quiere decir que no provoca una reacción alérgica u otro efecto desfavorable en pacientes a q uienes se administra . Los portadores farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, por ejemplo, uno o más de agua, solución salina, solución salina amortiguada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. Los portadores farmacéuticamente aceptables pueden comprender además cantidades menores de substancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsificantes, conservadores o amortiguadores, los cuales intensifican la vida de anaquel o efectividad del agente de unión de CD2. La composición farmacéutica o agente de unión de CD2 puede administrarse en conjunción con otros agentes terapéuticos o profilácticos. Estos incluyen, por ejemplo, ciclosporina A, esteroides, retinoides, mostaza de nitrógeno, interferón, metotrexato, antibióticos y antihistaminas. Estos agentes pueden ser administrados en forma de dosificación simple con el agente de unión de CD2 (es decir, como parte de la misma composición farmacéutica), una forma de dosificación múltiples en donde los dos componentes son administrados por separado pero secuencialmente. De manera alternativa, el agente de unión de CD2 y el otro agente activo pueden estar en la forma de una molécula conjugada simple. La conjugación de los dos componentes pueden lograrse mediante técnicas reticulantes estándares bien conocidas en el área. Una molécula simple también puede tomar la forma de una proteína de fusión recombinante. Además, los agentes de unión de CD2, o composiciones farmacéuticas, útiles en la presente invención pueden usarse en combinación con otras terapias, tales como, quimioterapia. Tales terapias de combinación pueden utilizar ventajosamente menores dosificaciones de los agentes terapéuticos.

Terapia de genes La invención se basa además en terapia de genes basada en la entrega de los agentes de unión de CD2 como productos de expresión de una secuencia de ácido nucleico dentro de un huésped mamífero. La entrega sistémica ex vivo preferida de los productos de genes acarrea el uso de un vector viral o no viral recombinante seguido por transfección in vitro de poblaciones de células de mamífero específicas, recuperación y purificación de las células transfectadas y administración al paciente. La terapia de genes in vivo acarrea el mismo uso de vector y transfección sin remover células o tejido del paciente. Las poblaciones de células específicas utilizadas como objetivos para la transfección por el vector recombinante que contiene una secuencia de ácido nucleico de interés puede incluir, pero no está limitada a, (1 ) poblaciones de células de médula ósea conteniendo células progenitoras hematopoyéticas; (2) poblaciones de leucocitos de sangre periférica, de preferencia poblaciones de CD34 + leucocitos de sangre, las cuales están enriquecidas por células hematopoyéticas y pueden ser utilizadas para repoblar las células hematopoyéticas transfectadas sobre la introducción en el paciente sin ablación; (3) poblaciones de linfocitos de sangre periférica; (4) células de mioblastos, las cuales pueden ser transplantadas nuevamente al huésped subsecuente a transfección in vitro de la secuencia de ácido nucleico de interés; y (5) entrega del vector vi ral o no viral recombinante conteniendo la secuencia de ácido nucleico de interés , o la secuencia de ácido nucleico por s í misma, mediante inyección intramuscular. Por ejemplo, el uso ex vivo de médula ósea conteniendo células progenitoras hematopoyéticas conteniendo un vector capaz de codificar sobre la expresión , un agente de unión de CD2 está bien dentro del nivel de habilidad en la técnica. Brevemente, las células de médula ósea son removidas, infectadas con el virus recom binante y reintroducidas nuevamente en el h uésped mam ífero. De esta manera , un gene o fragmento de gene es distribuido sistém icamente dentro del huésped mam ífero, la expresión de esta secuencia de DNA que resulta en entrega sistémica del producto de gene dentro del huésped mam ífero. La sangre periférica es una fuente de células de mam ífero para inyección por vectores mediados por virus. De manera más específica, los leucocitos de sangre, especialmente la población CD34 +, la cual contiene las células base hematopoyéticas circulantes, pueden usarse como células objetivo para infección viral , seguido por repoblación de la médula huésped de mamífero sin ablación (Karlsson , et al. , 1993, Bone Marrow Transplant. 1 1 (sup. 1 ): 124-127) . De manera adicional, los linfocitos también pueden ser utilizados como células objetivo para promover la entrega sistém ica de la secuencia de ácido nucleico de interés. Los linfocitos pueden ser removidos de la sangre periférica del huésped, cultivados mediante técnicas conocidas y usados como la población de células objetivo para infección por vectores virales conteniendo la secuencia de ácido nucleico de interés. Los linfocitos infectados pueden ser inyectados entonces en el huésped mam ífero (por ejemplo, ver Anderson, et al. , 1 990, Human Gene Therapy 1 : 331 -361 ) . Una población de células objetivo adicionales son los m ioblastos. El flujo de sangre en la masa relativamente grande de músculo esquelético hace a este tejido un depósito para la secuencia de ácido nucleico de interés. Por lo tanto, la infección in vitro y reintroducción de células de mioblastos en el huésped mamífero, proporciona un objetivo local dentro del huésped que resulta en la entrega sístémica del producto de CD2. El cultivo, infección y ret?ntroducción de mioblastos en el huésped puede lograrse mediante técnicas conocidas (por ejemplo, ver Dai, et al. , 1992, Proc. Nati. Acad. Scj\ USA 89: 10892-1 0895) . Para este fin, la inyección directa in vivo en células o tejido es un método adicional para la entrega local de la molécula de vector que codifica un agente de unión de CD2. La inyección directa resulta, por último, sobre la expresión del producto de gene, en la entrega sistémica de un producto terapéutico dentro del huésped mam ífero (Wolff, et al. , 1 990, Science 247: 1465-1468; Raz, et al. , 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:4523-4527). La inyección directa de DNA desnudo, de preferencia un vector no viral tal como DNA de plásmido, se utiliza en este modo de entrega localizada. Cualquier secuencia de promotor y/o intensificador eucariotico disponible para el técnico experto, que sea conocida por sobre-regular la expresión del ácido nucleico de interés, puede usarse en construciones de vectores de plásmidos, incluyendo pero no limitando a secuencia de promotor de citomegalovirus (CMV), promotor de virus Rous Sarcoma (RSV) , promotor de virus de leucemia de murino (M LV) , promotor de beta-actína, así como cualquier promotor eucariótico específico de célula que fuera conocido por ser activo en la célula enfocada por transducción. Más aún , puede usarse cualquiera de los métodos conocidos en la técnica para la inserción de secuencias d epolinucleótidos en un vector. Ver, por ejemplo, Sambrook et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Clonación molecular: un manual de laboratorio, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989) y Ausubel et al. , Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos actuales en biolog ía molecular), J. Wiley & Sons, NY (1 992) . Los vectores convencionales consisten de señales de control de transcripción/traslación apropiadas enlazadas operativamente a la secuencia de polinucleótidos para un interferón particular. Los promotores/intensificadores también pueden ser usados para cntrolar la expresión de ínterferones. (Ver Sección l l l). Los vectores de expresión compatibles con células huésped de mamífero para usarse en terapia de genes de células incluyen, por ejemplo, plásmidos; vectores retrovirales de ave, murino y humano; vectores de adenovirus; vectores virales de herpes; parvovirus; y virus de erupciones pustulosas no replicativos. En particular, pueden generarse virus recombinantes de replicación defectuosa en líneas de células empacadas que producen solo virus de repiicación defectuosa. Ver Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos actuales en biolog ía molecular), Secciones 9.10-9.14 (Ausubel et al. , eds.), Greene Publishing Associates, 1989.

Los vectores virales específicos para usarse en sistemas de transferencia de genes son ahora bien establecidos. Ver, por ejemplo: Madzak et al . , J . Gen . Virol. , 73: 1 533-36 (1992) (papovavirus SV40) ; Berkner et al . , Curr. Top. Microbiol. I mmunol . , 1 58: . 39-61 (1 992) (adenovirus); Moss et al. , Curr. Top. Microbiol. Immunol . 1 58: 25-38 (1 992) (virus vaccinia) ; Muzyczka, Curr. Top. Microbiol. Immunol . , 1 58: 97-123 (1992) (virus adeno-asociado) ; Margulskee, Curr. Top. Microbiol. Immunol.. 158: 67-93 (1 992) (virus de herpes simplex (HSV) y virus de Epstein-Barr (HBV)); Miller, Curr. Top. Microbiol. Immunol. , 158: 1 -24 (1992) (retrovirus); Brandypadhyay et al. , Mol. Cell. Biol. , 4: 749-754 (1984) (retrovirus); Miller et al . , Nature, 357: 455-450 (1 992) (retrovirus); Anderson, Science. 356: 808-813 (1992) (retrovirus). Los vectores preferidos son virus de DNA que incluyen adenovirus (preferiblemente vectores basados en Ad-2 o Ad-5), virus de herpes (preferiblemente vectores basados en virus de herpes simplex) y parvov?rus (preferiblemente vectores basados en parvovirus "defectuosos" o no autónomos, más preferiblemente vectores basados en virus adeno-asociados, muy preferiblemente vectores basados en AAV-2) . Ver, por ejemplo, Ali et al. , Gene Therapy 1 : 367-384, 1994; patente estadounidense 4,797,368 y 5,399,346 y discutida más adelante. Los vectores de adenovirus son capaces de proporcionar niveles extremadamente altos de entrega de transgenes virtualmente a todos los tipos de células, sin importar el estado mitótico. Altos títulos (101 1 unidades formadoras de placas/ml) de virus recombinante pueden generarse fácilmente en células 293 (una línea de células de riñon embriónico humano de complementación, transformadas con adenovirus: ATCC CRL1573) y se crio-almacenaron durante periodos prolongados sin pérdidas apreciables. La eficiencia de este sistema para entregar un transgene terapéutico in vivo que complementa un desequilibrio genético ha sido demostrada en modelos animales de varios desórdenes. Ver, Y. Watanabe, Atherosclerosis, 36: 261-268 (1986); K. Tanzawa et al., FEBS Letters. 118(1): 81-84 (1980); J.L. Golasten et al., New Engl. J. Med., 309 (11983): 288-296 (1983); S. Ishibashi et al., J. Clin. Invest., 92: 883-893 (1993); y S. ishibashi et al., J. Clin. Invest., 93: 1889-1893 (1994). En realidad, el adenovirus defectuoso de replicacíón recombinante codificando un cDNA para el regulador de transmembrana de fibrosis cística (CFTR) ha sido aprobado para usarse en varios ensayos clínicos de CF humano. Ver, por ejemplo, J. Wilson, Nature. 365: 691-692 (Oct. 21, 1993). Soporte adicional de la seguirdad de adenovirus recombinantes para terapia de genes es la experiencia extensa de vacunas de adenovirus vivos en poblaciones humanas. Los virus adeno-asociados (AAV) también han sido empleados como vectores para terapia de genes somáticos. AAV es un virus de DNA de filamento simple (ss) con una organización genómica simple (4.7 kb) que lo hace un substrato ideal para ingeniería genética. Dos marcos de lectura abiertos codifican una serie de polipéptidos rep y cap. Los polipéptidos rep (rep78, rep68, rep62 y rep40) se involucran en replicación, rescate e integración del genoma AAV. Las proteínas de de tapa (VP1, VP2 y VP3) forman la cápside de virión. Flanqueando los marcos de lectura abiertos rep y cap en los extremos 5' y 3' son repeticiones terminales invertidos de 145 bp (ITRs), las primeras 1 25 bp de las cuales son capaces de formar estructuras dúplex con forma de Y o T. De importancia para el desarrollo de vectores AAV, los dom i nios rep y cap enteros pueden cortarse y reemplazarse con un transgene terapéutico o reportador. Ver, B.J. Cárter, en Handbook of Parvoviruses (Manual de parvovirus), ed . , P. Tijsser, CRC Press , pp. 1 55-168 (1 990)) . Se ha mostrado que las ITRs representan la secuencia mínima requerida para replicación , rescate, empacado e integración del genoma AAV. Se mostró que la expresión de genes de alto nivel de AAV en ratones persistió durante al menos 1 .5 años. Ver Xiao, Li Y Samulskí (1996) Journal of Viroloqy 70, 8089-81 08. Debido a que no había evidencia de toxicidad viral o una respuesta inmune de huésped celular, estas limitaciones de terapia de gene viral han sido superadas. Fisher et al. (Nature Medicine (1_997) 3, 306-312) reportaron la expresión de genes estables en ratones siguiendo la inyección en músculos de AAV. Nuevamente, el virus fue seguro. No se detectó respuesta inmune celular o humoral contra el virus o el producto de gene extraño. Modelos animales: La presencia de modelos animales adecuados de las diversas indicaciones (tales como, el modelo EAE bien conocido para esclerosis múltiple) permite probar los agentes de unión de CD2 y los métodos descritos. Se describen varios modelos animales en los Ejemplos.

Depósitos Las células de hibridoma de murino y anticuerpos anti-LFA-3 útiles en la presente invención son ejemplificados por cultivos depositados bajo el Tratado de Budapest con American Type Culture Collection , Rockville, Maryland, USA, el 5 de marzo de 1 991 , e identificados como: Designación ATCC Acceso número 1 E6 HB 10693 HC-1 B1 1 HB 10694 7A6 HB 10695 8B8 HB 10696 Un bacteriófago que porta un plásmido que codifica LFA-3 transmembrana se depositó bajo el Tratado de Budapest con In Vitro International, I nc. , Linthicum, Maryland, USA. , el 28 de mayo de 1 987 bajo acceso no. IVI-1 01 33. Este depósito se transfirió el 20 de junio de 1991 a American Type Culture Collection (10801 University BIvd. , Manassa, Virginia 201 10-2209, Estados Unidos) y se identificó como: Designación ATCC Acceso no. ?HT16[?gt10/LFA-3] 75107 E. coli transformada con un plásmido codificando LFA-3 Pl-enlazado se depositó bajo el tratado de Budapest con In Vitro International, Inc. , el 22 de julio de 1988 bajo el acceso no. IVI-10 1 80. Este depósito se transfirió a American Type Culture Collectíon (dirección actual 1080 University BIvd. , Manassa, Virginia, USA) el 20 de junio de 1 991 y se identificó como: Designación ATCC Acceso no. p24 68788 Secuencias Lo siguiente es un resumen de las secuencias expuestas en ei Listado de Secuencias: SEQ I D NO: 1 secuencia de DNA de LFA-3 transmembrana SEQ ID NO: 2 secuencia de aminoácidos de LFA-3 transmembrana SEQ ID NO: 3 secuencia de DNA de LFA-3 Pl-enlazado SEQ I D NO: 4 secuencia de aminoácidos de LFA-3 Pl-enlazado SEQ I D NO: 5 secuencia de DNA de CD2 SEQ I D NO: 6 secuencia de aminoácidos de CD2 SEQ ID NO: 7 secuencia de DNA de LFA3TI P SEQ I D NO: 8 secuencia de aminoácidos de LFA3TI P Con el fin de que esta invención se entienda mejor, se exponen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos son para fines de ilustración solamente, y no pretenden ser interpretados como limitantes del alcance de la invención en ninguna manera.

EJEMPLO 1 : Modulación de linfocitos T efectores de memoria Este ejemplo ilustra que un agente de unión particular de CD2, LFA3TIP (SEQ I D NO: 8), modulará selectivamente los linfocitos T efectores de memoria en sujetos mamíferos con psoriasis.

Materiales y métodos Realizamos un ensayo de investigación controlado por placebo, de cuatro ramas, de diseño paralelo, con doble ciego, aleatorio, de fase II , de LFA3TI P en pacientes con psoriasis de placa crónica. El principal objetivo de estudio fue determinar la relación de respuesta clín ica a dosificaciones que varían de 0.025 a 0.15 mg/kg de peso corporal. En 22 sitios en Estados Unidos, se enrolaron 229 sujetos de 18 a 70 años de edad. Los criterios de entrada incluyeron psoriasis de placa de al menos un año de duración , con más de 1 0% de área de superficie involucrada y no controlada por agentes tópicos. La duración promedio de enfermedad fue 16 años (rango de 1 -62 años). La fototerapia y terapia sistémica se descontinuó un mes antes del inicio del estudio. LFA3TIP se empacó como una solución congelada en frascos conteniendo 10 mg/ml de proteína de fusión por frasco y materiales excipientes (cloruro de sodio, fosfato de potasio monobásico y fosfato de sodio dibásico). Los frascos se almacenaron a -70°C y se descongelaron en el refrigerador o a temperatura ambiente y se diluyeron con 0.9% de cloruro de sodio a un volumen final de 5 ml para administración de bolo IV. El agente de unión de CD2 se administró una vez a la semana mediante bolo i.v. durante 12 semanas; los sujetos se siguieron durante unas 12 semanas adicionales después de la última dosis. La severidad de la enfermedad fue valorada usando una Valoración Física Global y el Índice de Actividad y Severidad de Psoriasis (PAS I) con los. puntos finales de eficacia primarios valorados a 2 semanas sig uiendo la última dosis del medicamento en estudio. Se extrajo sang re periférica de pacientes y los linfocitos se separaron usando centrifugación de gradiente ficoll-hypaq ue. Las células (aproximadamente 3 x 105) fueron ensayadas mediante citometría de flujo (FACSTAR PLUS, Becton Dickinson , San José, CA). Se monitorearon diez mil casos.

Resultados Observamos diferencias estad ísticamente significativas entre LFA3TI P y placebo en una variedad de puntos finales, incluyendo la reducción en el registro de PAS I en las dos dosificaciones de LFA3TI P más altas. Las velocidades de respuesta clínica aumentaron con mayor concentración de LFA3TIP (datos no presentados) . Más aún, el tratamiento con este agente de unión de CD2 se asoció con una reducción en linfocitos T CD4+ y CD8+ periféricos y a células asesinas naturales. Observamos una reducción selectiva de células T efectoras de memoria CD45 RO+ sobre células CD4+ y CD8+ naturales CD45RA+. De manera específica, el análisis citométrico de flujo reveló una mayor reducción en las celias T de alta densidad con fenotipos efectores de memoria (CD4-CD45RO y CD8-CD45RO) que en células T de CD2 de baja densidad con fenotipos naturales (CD4-CD45RA y CD8-CD45RA) . La Figura 1 es una gráfica que muestra la reducción selectiva de células T efectoras de memoria en relación a células T naturales en pacientes con psoriasis que reciben tratamiento con LFA3TIP. La barra horizontal antes del eje X representa la duración del tratamiento crónico, el cual se paró a aproximadamente 80 días . Las curvas representan las cuentas de subconjuntos de linfocitos absolutos de los 57 pacientes en cada grupo de tratamiento. Existen reducciones relacionadas con las dosis estad ísticamente significativas en células T efectoras de memoria (CD 45 RO+) . No se observaron cambios en células T naturales periféricas (CD45 RA+) sin importar el régimen de tratamiento. Las cuentas de células T en los diversos tratamientos de agentes de unión de CD2 muestran una disminución, aproximándose a algún valor relativamente constante, durante el periodo de administración crónica de 80 d ías. Después de que se terminó el tratamiento, la cuenta de células T efectoras de memoria empieza a incrementarse nuevamente. LFA3TI P fue bien tolerado sin reportarse casos adversos serios relacionados con el medicamento. Se observó una reducción transiente, suave, dependiente de la dosis, de niveles de pro-infusión en el número absoluto de iinfocitos periféricos en todos los sujetos que recibieron LFA3TI P. Esta reducción se notó en linfocitos totales, CD2, CD4 y CD8, pero no en linfocitos CD19.

EJEMPLO I I : Tratamiento de artritis reumatoide Los pacientes humanos teniendo artritis reumatoide (RA) se seleccionan para tratamiento usando un agente de unión de CD2, tal como, LFA3-TI P. Este material se preparó y empacó como se describe en el Ejemplo 1 y se administra a pacientes en dosis de aproximadamente 7.5 a 10 mg semanalmente durante un periodo de 1 2-24 semanas. Para determinar la dosis y programa óptimo, se realizó un estudio de diseño paralelo usando los diferentes reg ímenes antes referidos. La sangre periférica es extraída de pacientes y se separaron los linfocitos a partir de centrifugación de gradiente de ficoll-hypaque. Se ensayaron células (aproximadamente 3 x 1 05) mediante citometría de flujo (FACSTAR PLUS, Becton Dickinson, San José, CA) , como antes. Los pacientes se monitorearon usando varios indicios, incluyendo registros de suavidad e hinchazón de articulaciones, que se incluyen como parte de los estudios "ACR 20" estandarizados. Ver Felson , D.T. et al. , "American College of Rheumatology Core Set of Disease Activity Measurements for Rheumatoid Arthritis Clinical Triáis" (Colegio Americano de Reumatología, Conjunto de núcleo de mediciones de actividad de enfermedad para ensayos clínicos de artritis reumatoide), Arth. Rheum . 26: 729-740 (1993) .

EJEMPLO lll: Tratamiento de enfermedad intestinal inflamatoria (IBP) , enfermedad de Crohn y Colitis) La enfermedad intestinal inflamatoria es un término genérico que se refiere a un grupo de desórdenes inflamatorios crónicos de etiología desconocida que involucra el tracto gastrointestinal. La colitis ulcerativa (UC) y enfermedad de Crohn, las dos principales formas de enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) idiopática en humanos, son desórdenes ampliamente esparcidos y pobremente entendidos (Kirsner, J. B. , et al. , eds. Inflammatory Bowel Disease (Enfermedad intestinal inflamatoria) , 3a ed. , Lea y Febiger, Filadelfia (1988); Goldner, F.H. , et al . , Idiopathic Inflammatory Bowel Disease (Enfermedad intestinal inflamatoria idiopática, en Stein J. H. , ed. I nternal Medicine (Medicina Interna), Little Brown & Co, Boston , pp. 369-380 (1990); Cello , J . P. , et al. , Ulcerative Colitis (Colitis ulcerativa), en Sleisenger, M. H . et al . , eds. , Gastrointestinal Disease: Pathophysiology Diagnosis Management (Enfermedad gastrointestinal: manejo de diagnóstico de patofisiolog ía), W. B. Saunders Co. , Filadelfia, p. 1435 (1 989)). Aunque la causa de enfermedad intestinal inflamatoria es desconocida, posibles factores etiológicos incluyen factores infecciosos, inmunológicos, familiares o psicológicos. Las manifestaciones extraintestinales secundarias, tales como, artritis y pericolangitis frecuentemente ocurren durante la enfermedad intestingal inflamatoria crónica. La terapia de medicamento de enfermedad intestinal inflamatoria incluye la administración de medicamentos anti-inflamatorios, sulfasalazina (se piensa que el compuesto activo es 5-aminosalicilato, muy probablemente al inhibir la síntesis de prostaglandina) y glucocorticoides. La Enfermedad de Crohn o lleitis Regional, es el término aplicado a una condición en ia cual existe una inflamación de un área del intestino delgado. Esta se acompaña usualmente por dolor abdom inal de cólicos, irregularidad de los intestinos, pérdida de peso y fiebre ligera. El canal intestinal angostado puede obstruirse, necesitando una operación inmediata. La causa de la enfermedad es desconocida. La lesión primaria es hiperplasia del tejido linfático en la submucosa del intestino y en las glándulas linfáticas. La enfermedad de Crohn es una condición crónica del tracto gastrointestinal e infecta muy comúnmente el íleo, colon o una combinación de ambos. Se distingue la colitis ulcerativa mediante un diagnóstico diferencial.

La patolog ía de col itis ulcerativa usualmente se refiere a una enfermedad de muscosa más superficial en contraste con la enfermedad de Crohn con su complicación profunda , frecuentemente transmucosa y fisuras (Riddel, R. H . , ed . , Pathology of Drug-induced and Toxic Diseases (Patolog ía de enfermedades tóxicas e inducidas por medicamentos), Churchill Livingstone, Nueva York (1982); Morrison , B .C. , et al. , eds. , Gastrointestinal Pathology, 2a ed. , Londres ( 1 979); Fenolgio-Preiser, C. M. , et al . , eds. Gastrointestinal Pathoiogy: An Atlas and Text, (Patolog ía gastrointestinal: un atlas y texto), Raven Press, Nueva York (1989); Goldman, H. , et al. , Hum . Pathol. 1 3:981 -1 012 (1 982)) . La colitis ulcerativa normalmente involucra el recto y se extiende proximalmente sin intervenir en áreas no involucradas "salteadas", las cuales usualmente son los sellos de la enfermedad de Crohn . Los modelos animales disponibles para I BD pueden dividirse en modelos animales que ocurren de manera natural e inducidos experimentalmente. Desafortunadamente, solo unos cuantos modelos de inflamación intestinal espontáneos y los que ocurren rara vez debido a un defecto genético están disponibles y la mayoría de estos no son idiopáticos, pero son inducidos por bacterias u otros agentes infecciosos (por ejemplo, hiperplasia, absesos de cripta, úlceras en ratones con Bacillus psyliformnis y hámster con "bacterias con forma de bastón") (Strober, W. , Dig. Dis. Sci. 33 Sup.: 3S-10S (1988)). Las formas raras de colitis ulcerativa espontánea y enterocolitis granulomatosa también ocurren en ratas y caballos, respectivamente. Además, se usan titís y tamarines de cabeza de algodón como modelo espontáneo de colitis ulcerativa y adenocarcinomas colónicos (Clapp, N.K.. et al., eds., Dig. Dis. Sci. 33 Supl.: 1S-158S (1988)). Los modelos animales experimentalmente inducidos de colitis ulcerativa normalmente son producidos mediante exposión a substancias dietéticas tóxicas, agentes farmacológicos u otros químicos ambientales, o mediante la administración de materiales derivados de pacientes, o mediante la manipulación del sistema inmune del animal (Strober, W., Dig. Dis. Sci. 33 Sup.: 3S-10S (1988); Beekan, W.L., Experimental inflammatory bowel disease, en: Kirsner, J.B., et al., eds., Inflammatory Bowel Disease (Enfermedad intestinal inflamatoria), Lea y Febiger, Filadelfia, pp. 37-49 (1988); Onderdonk, A.B., Dig. Dis. Sci. 33 Supl.40S-44S (1988)). Uno puede examinar la eficacia terapéutica potencial y mecanismos de acción de un agente de unión de CD2 en el tratamiento de la enfermedad de Crohn usando un modelo de tamarin de cabeza de algodón. Ver, por ejemplo, J. Madara et al., "Characterization of Spontaneous Colitis in Cotton-Top Tamarin {Saguinus oedipus) and its Response to Sulfasalazine" (Caracterización de colitis espontánea en tamarin de cabeza de algodón {Saguinus oedipus) y su respuesta a sulfasalazina), Gastroenteroiogy, 88, pp. 13-19 (1985). Una solución madre en solución salina estéril de agente de unión de CD2 (por ejemplo, LFA3TIP) y un control de placebo (solución salina solamente), se preparan para la administración a diez tamarines de cabeza de algodón (CTTs) exhibiendo síntomas de colitis espontánea (es decir, diarrea, etc.; ver, Madara et al., supra). Cinco CTTs reciben agente de unión de CD2 y cinco reciben placebo, mediante inyección intravenosa. Los CTTs que reciben agente de unión de CD2 se inyectan con 1 mg de agente por día (es decir, aproximadamente 2 mg/kg/día, con base en peso de medio kilogramo aproximado de un CTT) durante ocho d ías (en los d ías 0, 1 , 2, 3, 4, 5, 6 y 7 del ensayo). Las muestras de tejido de colon obtenidas de los animales se someten biopsias cada otro día (en los días 0, 2, 4, 6, 8 y 10 del ensayo) . Los datos de las biopsías se usan para determinar un índice de inflamación aguda para cada animal , dando un análisis semi-cuantitativo del curso de la colitis, (ver, Madara et al supra) . La sangre periférica es extraída y se separaron linfocitos a partir de centrifugación de gradiente de ficoll-hypaque. Las células (aproximadamente 3 x 105) se ensayaron mediante citometría de flujo (FACSTAR PLUS, Becton Dickinson, San José, CA), como antes. Se espera que los resultados muestren una reducción selectiva de células T efectoras de memoria y muestren que el tratamiento con agente de unión de CD2 resulta en una disminución significativa (p < 0.01 ) en índice de inflamación aguda. En humanos, los pacientes teniendo IBD se seleccionan para tratamiento usando un agente de unión de CD2, tal como, LFA3-TIP. Este material se prepara y empaca como se describe en el Ejemplo 1 y se administra a pacientes en dosis de aproximadamente 7.5 a 10 mg semanalmente durante un periodo de 12-24 semanas. Para determinar la dosis y programa óptimos, se realiza un estudio de diseño paralelo usando los regímenes diferentes antes referidos. La sangre periférica es extraída de pacientes y se separan los linfocitos a partir de centrifugación de gradiente de fícoll-hypaque. Las células (aproximadamente 3 x 105) se ensayaron mediante citometría de flujo (FACSTAR PLUS, Becton Dickinson, San José, CA) , como antes. Los pacientes son monitoreados usando varios indicios, incluyendo el Crohn's Disease Activity Index (índice de Actividad de la Enfermedad de Crohn) (Kjeldsen, J. y Schaffalitzky de Muckadell , O. B . , Scand. J. Gastroenterol. 28: 1 -9 (1993)) .

EJEMPLO IV: Tratamiento de uveítis La uveítis es una enfermedad del ojo, la cual puede estar ubicada en todo el ojo incluyendo las cámaras posterior y anterior del ojo, así como el cuerpo vitreo. La uveítis, la inflamación de la úvea, es responsable de aproximadamente 10% del deterioro visual en Estados Unidos. La panuveítis se refiere a la inflamación de manera general a coriorretinitis y uveítis anterior se refiere a iridociclítis. Los productos inflamatorios, esto es, células, fibrina, proteína en exceso, de estas inflamaciones se encuentran comúnmente en los espacios fluidos del ojo incluyendo la cámara anterior, cámara posterior y espacio vitreo, así como el tejido involucrado en la respuesta inflamatoria. La uveítis puede ocurrir siguiendo la lesión quirúrgica o traumática al ojo, como un componente de un desorden autoinmune, tal como, artritis reumatoide, enfermedad de Behcet, espondilitis anquilosante, sarcoidosis, como un desorden ocular mediado inmune aislado, es decir, pars planitis, iridociclitis, etc. , no asociado con etiologías conocidas, y siguiendo ciertas enfermedades sistémicas las cuales provocan que se depositen complejos de anticuerpo-antígeno en los tejidos uveales. Estos desórdenes juntos representan uveítis no infecciosas.

Tratamiento en mamíferos Se usan tres monos cinomólogos . Los animales son anestesiados usando cetam ina (30 mg/kg) para todos los procedimientos . Los dispositivos conteniendo 6mg de LFA3-TI P son implantados en el ojo derecho y dispositivos de control , consistiendo de pol ímero solo, son implantados en el ojo izquierdo como se describe. El mono tiene una pars plana bien desarrollada de manera que no es necesaria la criopexia. Todos los dispositivos son implantados 3 mm atrás del limbo en el cuadrante temporal inferior. Los animales fueron anestesiados en a la 1 semana, a las 2 semanas, a las 4 semanas, a los 2 meses, a los 4 meses y a los 6 meses, y experimentan examinación con oftalmoscopía indirecta y electro-retinografía. La electro-retinografía se realiza como se describe, excepto que los promedios de 5 respuestas son adquiridos con un promediador clínico Nicolet CA-1 000 (Madison, Wis.) y un flash CKA Ganzfeld (Gaithersburg, Md.). A los 6 meses, se analiza una muestra de sangre mediante HPLC por ciclosporina (límite de detección = 25 ng/ml). después de 6 meses, los animales son sacrificados con una sobredosis de pentobarbital y entonces se hace una perfusión inmediatamente vía el ventrículo izquierdo con 1 0% de formalina amortiguada. Los ojos son colocados en fijador y entonces son embutidos subsecuentemente en parafina, se seccionan y examinan en una manera enmascarada por la evidencia de toxicidad. Se extrajo sangre periférica y se separaron los linfocitos a partir de centrifugación de gradiente de fícoll-hypaque. Se ensayaron células (aproximadamente 3 x 105) mediante citometría de flujo (FACSTAR PLUS, Becton Dickinson, San José, CA).

Farmacocinética Se usaron veinticuatro animales (Grupo 1 ) . El agente de unión de CD2 se mezcla en soluciones madre de 50:50 etanok agua a una concentración de 1 ug/20 ul y 1 0 ug/20 ul. El agente de unión de CD2 - tritiado (1 uCi/20 ml) también se adicionó a la solución madre. Los animales fueron anestesiados con cetamina (60 mg) y xilazina (20 mg) y las pupilas se dilataron con una gota de hidrocloruro de fenilefrina (2.5%) y tropicamida (1 %) . Una inyección intravítrea de agente de unión de CD2 es administrada entonces a través de músculo recto superior, aproximadamente 5 mm atrás del limbo usando una aguja de calibre 30. Doce animales reciben una dosis de 1 ug en 20 ul y 12 animales reciben una dosis de 10 ug en 20 ul) . La inyección es administrada en la cavidad vitrea media y se tiene cuidado para evitar el cristalino del ojo. Para el grupo de 1 ug, se sacrifican 3 animales a 0.5, 3, 6 y 24 horas. Para el grupo de 10 ug , se sacrifican 3 animales a 0.5, 6, 24 y 48 horas. Los ojos son enucleados y entonces se congelan inmediatamente a -70°C. Los tejidos se preparan para ensayo como se describe antes. La vida media intravítrea y volumen de distribución se determinan de análisis de regresión de una gráfica de concentración 1 n versus tiempo.

Tratamiento Se usan once animales. El agente de unión contenido en un dispositivo de liberación sostenida se inserta en el ojo derecho. Un dispositivo que consiste de polímeros solamente se inserta en el ojo izquierdo. Antes de la inserción del dispositivo, se realizó una examinación consistente de oftalmoscopía y electro-retinografía (ERG). Los electro-retinogramas escotópícos y fotópicos (ERG's) se registran en ambos ojos usando electrodos de lentes de contacto (ERG-Jet) con un promediador de señales clínicas de dos canales (Cadwell 5200, Kennewick, Wash .) y una unidad de flash de Ganzfeid (Cadwell VPA-10, Kennewick, Wash.) . Los ERGs adaptados a la obscuridad , realizados al menos antes de 30 minutos de la adaptación a la obscuridad, se provocaron a 0.33 Hz y se promedian 20 presentaciones de estímulos. Los ERGs adaptados a la luz se realizaron a 2.8 Hz después de al menos de 5 minutos de adaptación a la luz y tam bién se promedian 20 estímulos. Las ondas resultantes se evaluaron por amplitud y latencia . Para minimizar el efecto de la variación individual y diaria (13-15) , las respuestas de ERG son evaluadas usando una proporción de la amplitud del experimental (derecho) a la amplitud del control (izquierdo). Cuando las amplitudes de los ojos experimental y de control son iguales, la proporción es igual a 1 . Una dism inución en la proporción refleja una disminución relativa en la amplitud del ojo experimental. Las examinaciones se repiten en los días 1 , 7, 14 y entonces cada dos semanas durante los siguientes 6 meses. Se sacrifican tres animales a 6 semanas y se sacrifican dos animales a 16 semanas. Para valorar la toxicidad reversible, ei dispositivo es removido de 3 animales a las 16 semanas. Estos animales fueron examinados semanalmente durante dos meses y entonces fueron sacrificados. Los dos animales restantes se sacrificaron a 26 semanas. Siguiendo el sacrificio, los animales se sometieron a perfusión con fijador (ya sea 1 0% de formalina amortiguada o 6% de giutaraldeh ído amortiguado con fosfato) vía el ventrículo izquierdo. Los ojos son enucleados y colocados en fijador. Entonces se embuten los expecímenes de 3 mm por 6 mm del polo posterior, ya sea en parafina o plástico, y se seccionan . Una sección de cada espécimen es examinada en una manera enmascarada por evidencia de toxicidad .

EJEMPLO V. Tratamiento de artritis psoriática Este ejemplo proporciona un protocolo para probar los efectos clínicos y respuesta de tejido de un agente de unión de CD2 en pacientes con artritis psoriática . La artritis psoriática ocurre en 5-8% de los pacientes con psoriasis y es una enfermedad reumática crónica común que puede resultar en daño considerable de articulación si se deja sin tratar. Estudios cl ínicos recientes se han enfocado en la identificación de factores de pronóstico pobre. El tratamiento agresivo temprano es indicado en pacientes con inflamación de articulaciones significativa y ciertos antígenos de HLA. La psoriasis y artritis psoriática se consideran enfermedades medidas por células T normales. La evidencia inmunopatogénica continua señalando hacia una enfermedad mediada por HLA clase i con quizás un papel importante para células T CD8+.

DISEÑO DE ESTUDIO Este es un estudio piloto de fase I I de un agente de unión de CD2 ejemplar en pacientes con artritis psoriática.

El estudio consistirá de un periodo de tratam iento de 3 meses con inyecciones semanales de un agente de unión de CD2. Los efectos en lesiones psoriáticas de la piel y en artritis se medirán mediante métodos clínicos y de laboratorio de rutina en el inicio, durante y después del periodo de tratam iento. Precediendo directamente, después de 4 semanas y siguiendo el periodo de tratamiento, se tomaron biopsias sinoviales para investigaciones inmunohistológicas usando métodos estandarizados. Precedientes, después de 4 y 12 semanas y al final de un periodo de posttratamiento de 3 meses, se tomarán biopsias de piel para investigaciones inmunohistológicas usando métodos estandarizados.

POBLACIÓN DE ESTUDIO Número de sujetos Los pacientes con artritis posriática son clasificados con el fin de seleccionar pacientes para el estudio si se cumplen todos los criterios de inclusión siguientes: 1 ) Pacientes hombres y mujeres entre 18 y 70 años, incl uso. 2) Las pacientes mujeres no deben ser de potencial para tener bebés (quirúrgicamente estériles o al menos un año post-menopáusícas) o tener una prueba de embarazo negativa en la visita de clasificación y mantener un método de control de natalidad efectivo al menos un mes antes de la administración del medicamento de estudio, durante el estudio y en un periodo de 6 meses después de la dosificación. 3) Los pacientes deben cumplir los criterios paa diagnóstico de artritis psoriática definitiva. 4) Los pacientes debener tener artritis clínicamente evidente de al menos una articulación de rodilla y otras 3 articulaciones, rigidez matutina de al menos 30 minutos y una velocidad de sedimentación de eritrocitos (ESR) de al menos 28 mm . 5) Los pacientes deben tener un diagnóstico de psoriasis tipo placa mayor a 12 meses antes de la primera dosis del medicamento de estudio. 6) Los pacientes deben tener un PAS I de 1 2 o mayor. 7) Los pacientes deben haber descontinuado toda medicación inmunomoduladora, tal como, metotrexato, ciclosporina y corticosteroides y todos los demás compuestos usados para tratar la psoriasis y/o artritis psoriática, excepto medicamentos anti-inflamatorios no esferoidales (NSAI Ds), al menos cuatro semanas antes de la visita de clasificación. 8) Los pacientes deben tener una cuenta de linfocitos CD4+ absoluta en o mayor que el límite inferior de la normal dentro de los 14 días antes de la primera dosis.

Programa de tratamiento El agente de unión de CD2 será adm inistrado como un bolo intravenoso de 7.5 mg de dosis fija, proporcionada una vez a la semana durante un total de doce dosis.

Modificación del programa de tratamiento Con el fin de que un sujeto reciba la siguiente dosis del medicamento de estudio, debe ocurrir lo siguiente: El número absoluto de linfocitos periféricos obtenidos para cada sujeto en el sitio dentro de 24 horas de adm inistración, debe ser mayor que 67% del límite inferior de OR normal mayor que 50% de la medida de línea de base del sujeto. - Los linfocitos CD4+ abslutos obtenidos antes de la dosis previa deben ser mayores que 300 céfulas/mm3.

Si cualquiera de los criterios anteriores no se cumple, la dosis del sujeto será detenida y el sujeto regresará la siguiente semana para repetir la evaluación. Si cualquier sujeto experimenta una reducción sostenida en el número absoluto de linfocitos periféricos o linfocitos CD4+ absolutos durante más de 28 días, el medicamento de estudio será descontinuado permanentemente.

Descontinuación de medicamento de estudio y sujetos. Las siguientes secciones describen los criterios para descontinuar el medicamento de estudio y los criterios para retiro del estudio.

PROGRAMA DE EVENTOS Pruebas y evaluaciones Todas las muestras de sangre para hematolog ía y análisis de subconjunto de linfocitos serán recolectadas al mismo tiempo del día, con el fin de prevenir una variación diurnia del artefacto.

Las siguientes pruebas y evaluaciones van a ser conducidas en los momentos indicados antes a cada dosis de medicamento de estudio, a menos que se especifique de otra manera: Una examinación física completa a ser realizada en las visitas 5, 9 y 13. - Medición de signos vitales a ser realizada en las visitas 1 a 1 3 y visitas 15 a 17. Registro de peso corporal a ser realizado en las visitas 1 a 1 3 y visitas 15 a 17. - Urinálisis a ser realizado en las visitas 5, 9, 13 y 17. Hematología a ser realizada en las visitas 1 a 1 7. La primera prueba de laboratorio a ser realizada dentro de 48 horas antes de la primera dosis del medicamento de estudio. Todas las demás pruebas a ser realizadas dentro de 24 horas antes de cada dosis. - Análisis de subconjunto de linfocitos a ser realizado en las visitas 1 a 17. - Prueba de embarazo (orina) para mujeres a ser realizada en las visitas 5, 13 y 17. Medición cuantitativa de inmunoglobulínas IgG, IgA e IgM a ser realizada en la visita 1 3. - PASI a ser realizada en las visitas 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 y 13 a 1 7. Evaluación de uñas a ser realizada en las visitas 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 y 13 a 17. - Medición de slL-2R y sCD27 en las visitas 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 y 13 a 1 7.

La biopsia de punzada de piel de lesión no objetivo, involucrada , de un área no expuesta a la luz solar a ser realizada en las visitas 1 , 5, 1 3 con una biopsia opcional en la visita 1 7. - Un conjunto de núcleo de ACR a ser evaluado en las visitas 1 , 5, 9, 1 3 y 17. Los criterios de mejora de ACR a ser evaluados en las visitas 5 , 9, 13 y 1 7. Biopsia artroscópica de rodilla de sinovio a ser realizada en las visitas -1 , 5 y 13.

VALORACION ES DE EFICACIA Valoraciones de eficacia clínica Artritis Todas las valoraciones de eficacia en la artritis van a ser realizdas por el mismo investigador/reumatólogo para cada sujeto: Mediciones de mejora y conjunto de núcleo de ACR.

Lesiones de la piel Todas Jas valoraciones de eficacia en las lesiones de piel van a ser realizadas por el mismo investigador/dermatólogo para cada sujeto: - Registro de PASI Evaluación de uñas Valoraciones de eficacia de laboratorio - Biopsia sinovial artroscópica Estudios inmunohistológicos de sinovio Marcadores de actividad de enfermedad de suero para psoriasis Biopsia de piel Estudios inmunohistológicos de la piel VALORACIONES DE SEGU RI DAD Valoraciones de seguridad clínica Examinación física. Signos vitales (temperatura , ritmo cardiaco, velocidad de respiración y presión sanguínea supina) . Peso corporal. Monitoreo para infección. - Monitoreo para casos adversos.

Valoraciones de seguridad de laboratorio Hematología: cuenta sangu ínea completa con cuenta diferencial y de plaquetas a realizarse dentro de 24 horas de la dosificación y monitoreada por el investigador en cada sitio. Perfil de qu ímica sang uínea: sodio, potasio, cloruro, bicarbonato, nitrógeno de urea en sangre, creatinina, calcio, fosfato, albúmina, proteína total, fosfatasa alcalina , bilirrubina total, ALAT, ASAT y gamma glutamil transaminasa. Urinálisis.

Valoraciones de seguridad específica de producto/ensayo Cuantificación de subconjunto de linfocitos periféricos usando citometría de flujo con marcadores de subconj untos bien definidos para linfoci.tos T (CD4, CD8) .

DECLARACIÓN ESTADÍSTI CA Y PLAN ANALÍTI CO Consideraciones de tamaño de m uestra Un estudio piloto con 1 0 sujetos es considerado apropiado para la evaluación de seguridad y eficacia. La experiencia pasada con agentes de unión de CD2, tales como, proteína de fusión LFA-3/lgGi ha demostrado efectos consistentes en linfocitos totales, y subconjuntos CD4 y CD8.

Descripción de puntos finales Los principales puntos finales de eficacia clínica para artritis y psoriasis se basan en el fin del tratamiento después de 1 2 semanas. Puntos finales subrogados para eficacia clínica se basan en 4 semanas y 8 semanas de tratamiento. El principal punto final de seguridad se basa en el final de un periodo de observación post-tratam iento de 3 meses. Los puntos finales subrogados para cambios inmunohistológicos en la piel y sinovio se basan en dos puntos en el tiemp: después de 4 semanas y después de 1 2 semanas de tratamiento.

Métodos estadísticos a ser usados en el análisis de objetivos El método general de análisis será establecer diferencias de parámetros clínicos y de laboratorio entre la linea de base y el final de la terapia. Esto se hará usando, por ejemplo, un análisis de una vía de varianza o covarianza , o reg resión log ística. Las respuestas pueden necesitar ser transformadas antes del análisis. Se usarán técnicas no paramétricas cuando se apropiado.

Análisis de eficacia clínica La proporción de sujetos que dem uestran 20% de mejora en las mediciones de conjunto de núcleo de ACR será determinada. Se determinará la proporción de sujetos con al menos una disminución al 50% de l ínea de base en su registro de PASl . Otras mediciones de eficacia incluyen el registro de PAS I mínimo, el registro de eritema total, el registro de induración total, el registro de descamación total y registro de uñas.

Análisis de eficacia de laboratorio Los estudios inmunohistológicos de sinovio y piel y niveles de suero de marcadores de actividad psoriática proporcionarán datos que serán comparados con los valores de l ínea de base.

Aunque hemos descrito una variedad de modalidades de esta invención, es evidente que nuestras modalidades básicas pueden ser alteradas para proporcionar otras modalidades que utilicen los procesos de esta invención. Por lo tanto, se apreciará que el alcance de esta invención incluye todas las modalidades alternativas y variaciones que se definen en la especificación anterior y mediante las reivindicaciones anexas para la misma; y la invención no será limitada por las modalidades específicas que han sido presentadas en la presente a manera de ejemplo.

LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: Magilavy, Daniel (i¡) TITULO DE LA INVENCIÓN: Método para modular células T efectoras de memoria y composiciones (iii) NUMERO DE SECUENCIAS:8 (iv) DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA: (A) DESTINARIO: BIOGEN, INC. (B) CALLE: 14 Cambridge Center (C) CIUDAD: Cambridge (D) ESTADO: Massachusetts (E) PAÍS: EU (F) CÓDIGO POSTAL: 02142 (v) FORMA LEGIBLE DE COMPUTADORA: (A) TIPO DE MEDIO: Disco flexible (B) COMPUTADORA: Compatible con PC IBM (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) PAQUETERÍA: Patente en liberación (vi) DATOS DE SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 31-agosto-1999 (vii) DATOS DE SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 34,199 (C) NUMERO DE REFERENCIA/CASO: A005PCT (viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE: (A) NOMBRE: Kaplan, Warren (B) NUMERO DE REGISTRO: 34,199 (C) NUMERO DE REFERENCIA/CASO: A005PCT (ix) INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIONES: (A) TELEFONO: (617)679-3598 (B) TELEFAX: (617)679-2838 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 753 pares de bases (B) TIPO: Acido nucleico (C) FI LAMENTO: Sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: cDNA (ix) CARACTERÍSTI CA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN : 1 ..750 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_sig (B) UBI CACIÓN : 1 ..84 (ix) CARACTERÍSTI CA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_mat (B) UBICACIÓN : 85..750 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN : 1 ..750 (D) OTRA I NFORMACIÓN: /nota= " LFA-3 transmembrana humano" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN: 646 (D) OTRA I NFORMACIÓN: /nota= "Dominio de transmembrana" (xi) DESCRI PCI ÓN DE SECUENCIA: SEQ I D NO: 1 : ATG GTT GCT GGG AGC GAC GCG GGG CGG GCC CTG GGG GTC CTC AGC GTG 48 Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 GTC TGC CTG CTG CAC TGC TTT GGT TTC ATC AGC TGT TTT TCC CAÁ CAÁ 96 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe lie Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 ATA TAT GGT GTT GTG TAT GGG AAT GTA ACT TTC CAT GTA CCA AGC AAT 144 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 10 15 20 GTG CCT TTA AAA GAG GTC CTA TGG AAA AAA CAÁ AAG GAT AAA GTT GCA 192 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 GAA CTG GAA AAT TCT GAA TTC AGA GCT TTC TCA TCT TTT AAA AAT AGG 240 Glu Leu Glu Asn Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 GTT TAT TTA GAC ACT GTG TCA GGT AGC CTC ACT ATC TAC AAC TTA ACÁ 288 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr 55 60 65 TCA TCA GAT GAA GAT GAG TAT GAA ATG GAA TCG CCA AAT ATT ACT GAT 336 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 ACC ATG AAG TTC TTT CTT TAT GTG CTT GAG TCT CTT CCA TCT CCC ACÁ 384 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Leu Glu Ser Leu Pro Ser Pro Thr 85 90 95 100 CTA ACT TGT GCA TTG ACT AAT GGA AGC ATT GAA GTC CAÁ TGC ATG ATA 432 Leu Thr Cys Ala Leu Thr Asn Gly Ser He Glu Val Gln Cys Met He 105 110 115 CCA GAG CAT TAC AAC AGC CAT CGA GGA CTT ATA ATG TAC TCA TGG GAT 480 Pro Glu His Tyr Asn Ser His Arg Gly Leu He Met Tyr Ser Trp Asp 120 125 130 TGT CCT ATG GAG CAÁ TGT AAA CGT AAC TCA ACC AGT ATA TAT TTT AAG 528 Cys Pro Met Glu Gln Cys Lys Arg Asn Ser Thr Ser He Tyr Phe Lys 135 140 145 ATG GAA AAT GAT CTT CCA CAÁ AAA ATA CAG TGT ACT CTT AGC AAT CCA 576 Met Glu Asn Asp Leu Pro Gln Lys He Gln Cys Thr Leu Ser Asn Pro 150 155 160 TTA TTT AAT ACÁ ACÁ TCA TCA ATC ATT TTG ACÁ ACC TGT ATC CCA AGC 624 Leu Phe Asn Thr Thr Ser Ser He He Leu Thr Thr Cys He Pro Ser 165 170 175 180 AGC GGT CAT TCA AGA CAC AGA TAT GCA CTT ATA CCC ATA CCA TTA GCA 672 Ser Gly His Ser Arg His Arg Tyr Ala Leu He Pro He Pro Leu Ala 185 190 195 GTA ATT ACÁ ACÁ TGT ATT GTG CTG TAT ATG AAT GGT ATT CTG AAA TGT 720 Val He Thr Thr Cys He Val Leu Tyr Met Asn Gly He Leu Lys Cys 200' 205 210 GAC AGA AAA CCA GAC AGA ACC AAC TCC AAT TGA 753 Asp Arg Lys Pro Asp Arg Thr Asn Ser Asn 215 220 (2) I NFORMACIÓN PARA SEQ I D NO: 2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECU ENCIA: (A) LONGITUD: 250 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECU ENCIA: SEQ I D NO:2: Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe He Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 10 15 20 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 Glu Leu Glu Asn Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr 55 60 65 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Leu Glu Ser Leu Pro Ser Pro Thr 85 90 95 100 Leu Thr Cys Ala Leu Thr Asn Gly Ser He Glu Val Gln Cys Met He 105 110 115 Pro Glu His Tyr Asn Ser His Arg Gly Leu He Met Tyr Ser Trp Asp 120 125 130 Cys Pro Met Glu Gln Cys Lys Arg Asn Ser Thr Ser He Tyr Phe Lys 135 140 145 Met Glu Asn Asp Leu Pro Gln Lys He Gln Cys Thr Leu Ser Asn Pro 150 155 160 Leu Phe ^sn Thr Thr Ser Ser He He Leu Thr Thr Cys He Pro Ser 165 _ 170 175 180 Ser Gly His Ser Arg His Arg Tyr Ala Leu He Pro He Pro Leu Ala 185 190 195 Val He Thr Thr Cys He Val Leu Tyr Met Asn Gly He Leu Lys Cvs 200 205 210 Asp Arg Lys Pro Asp Arg Thr Asn Ser Asn 215 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ I D NO:3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 723 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FI LAMENTO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: cDNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN: 1 ..720 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_sig (B) UBICACIÓN: 1 ..84 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_mat (B) UBICACIÓN: 85..720 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN: 1 ..720 (D) OTRA INFORMAC I ÓN : /nota= "LFA-3 Pl-enlazado h umano" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_m isc (B) UBICACIÓN: 568..720 (C) OTRA I NFORMACIÓN : /nota= "Secuencia de señal para enlace Pl" (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:3: ATG GTT GCT GGG AGC GAC GCG GGG CGG GCC CTG GGG GTC CTC AGC GTG 48 Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 GTC TGC CTG CTG CAC TGC TTT GGT TTC ATC AGC TGT TTT TCC CAÁ CAÁ 96 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe He Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 ATA TAT GGT GTT GTG TAT GGG AAT GTA ACT TTC CAT GTA CCA AGC AAT 144 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 10 . 15 20 GTG CCT TTA AAA GAG GTC CTA TGG AAA AAA CAÁ AAG GAT AAA GTT GCA 192 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 GAA CTG GAA AAT TCT GAA TTC AGA GCT TTC TCA TCT TTT AAA AAT AGG 2 0 Glu Leu Glu Asn" Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 GTT TAT TTA GAC ACT GTG TCA GGT AGC CTC ACT ATC TAC AAC TTA ACÁ 288 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr 55 60 65 TCA TCA GAT GAA GAT GAG TAT GAA ATG GAA TCG CCA AAT ATT ACT GAT 336 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 ACC ATG AAG TTC TTT CTT TAT GTG CTT GAG TCT CTT CCA TCT CCC ACÁ 384 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Leu Glu Ser Leu Pro Ser Pro Thr 85- 90 95 100 CTA ACT TGT GCA TTG ACT AAT GGA AGC ATT GAA GTC CAÁ TGC ATG ATA 432 Leu Thr Cys Ala Leu Thr Asn Gly Ser He Glu Val Gln Cys Met He 105 110 115 CCA GAG CAT TAC AAC AGC CAT CGA GGA CTT ATA ATG TAC TCA TGG GAT 80 Pro Glu His Tyr Asn Ser His Arg Gly Leu He Met Tyr Ser Trp Asp 120 125 130 TGT CCT ATG GAG CAÁ TGT AAA CGT AAC TCA ACC AGT ATA TAT TTT AAG 528 Cys Pro Met Glu Gln Cys Lys Arg Asn Ser Thr Ser He Tyr Phe Lys 135 140 145 ATG GAA AAT GAT CTT CCA CAÁ AAA ATA CAG TGT ACT CTT AGC AAT CCA 576 Met Glu Asn Asp Leu Pro Gln Lys He Gln Cys Thr Leu Ser Asn Pro 150 155 160 TTA TTT AAT ACÁ ACÁ TCA TCA ATC ATT TTG ACÁ ACC TGT ATC CCA AGC 624 Leu Phe Asn Thr Thr Ser Ser He He Leu Thr Thr Cys He Pro Ser 165 170 175 180 AGC GGT CAT TCA AGA CAC AGA TAT GCA CTT ATA CCC ATA CCA TTA GCA 672 Ser Gly HÍs Ser Arg His Arg Tyr Ala Leu He Pro He Pro Leu Ala 185 190 195 GTA ATT ACÁ ACÁ TGT ATT GTG CTG TAT ATG AAT GGT ATG TAT GCT TTT 720 Val He Thr Thr Cys He Val Leu Tyr Met Asn Gly Met Tyr Ala Phe 200 205 210 TAA 723 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:4 : (i) CARACTERÍSTICAS D E LA S ECU ENCIA: (A) LONGITU D: 240 am inoácidos (B) TI PO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRI PCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:4: Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe He Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 ' 10 15 20 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 Glu Leu Glu Asn Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr 55 60 65 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Leu Glu Ser Leu Pro Ser Pro Thr 85 90 95 100 Leu Thr Cys Ala Leu Thr Asn Gly Ser He Glu Val Gln Cys Met He -105 110 115 Pro Glu His Tyr Asn Ser His Arg Gly Leu He Met Tyr Ser Trp Asp 120 125 130 Cys Pro Met Glu Gln Cys Lys Arg Asn Ser Thr Ser He Tyr Phe Lys 135 140 145 Met Glu Asn Asp Leu Pro Gln Lys He Gln Cys Thr Leu Ser Asn Pro 150 155 . 160 Leu Phe Asn Thr Thr Ser Ser He He Leu Thr Thr Cys He Pro Ser 165 170 175 180 Ser Gly His Ser Arg His Arg Tyr Ala Leu He Pro He Pro Leu Ala 185 190 195 Val He Thr Thr Cys He Val Leu Tyr Met Asn Gly Met Tyr Ala Phe 200 205 210 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1056 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: cDNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN: 1..1053 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_sig (B) UBICACIÓN: 1..72 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_mat (B) UBICACIÓN: 73..1053 (?x) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN:*!..1053 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota= "CD2 humano" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN: 628..702 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota= "dominio de transmembrana' (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:5: ATG AGC TTT CCA TGT AAA TTT GTA GCC AGC TTC CTT CTG. ATT TTC AAT 48 Met Ser Phe Pro Cys Lys Phe Val Ala Ser Phe Leu Leu He Phe Asn -24 -20 -15 _?o GTT TCT TCC AAA GGT GCA GTC TCC AAA GAG ATT ACG AAT GCC TTG GAA 96 Val Ser Ser Lys Gly Ala Val Ser Lys Glu He Thr Asn Ala Leu Glu "5 1 5 ACC TGG GGT GCC TTG GGT CAG GAC ATC AAC TTG GAC ATT CCT AGT TTT 144 Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp He Asn Leu Asp He Pro Ser Phe 10 15 20 CAÁ ATG AGT GAT GAT ATT GAC GAT ATA AAA TGG GAA AAA ACT TCA GAC 192 Gln Met Ser Asp Asp He Asp Asp He Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp 25 30 35 40 AAG AAA AAG ATT GCA CAÁ TTC AGA AAA GAG AAA GAG ACT TTC AAG GAA 240 Lys Lys Lys He Ala Gln Phe Arg Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu 45 50 55 AAA GAT ACÁ TAT AAG CTA TTT AAA AAT GGA ACT CTG AAA ATT AAG CAT 288 Lys Asp Thr Tyr Lys Leu Phe Lys Asn Gly Thr Leu Lys He Lys His 60 65 70 CTG AAG ACC GAT GAT CAG GAT ATC TAC AAG GTA TCA ATA TAT GAT ACÁ 336 Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp He Tyr Lys Val Ser He Tyr Asp Thr 75 80 85 AAA GGA AAA AAT GTG TTG GAA AAA ATA TTT GAT TTG AAG ATT CAÁ GAG 384 Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys He Phe Asp Leu Lys He Gln Glu 90 95 100 AGG GTC TCA AAA CCA AAG ATC TCC TGG ACT TGT ATC AAC ACÁ ACC CTG 432 Arg Val Ser Lys Pro Lys He Ser Trp Thr Cys He Asn Thr Thr Leu 105 110 115 120 ACC TGT GAG GTA ATG AAT GGA ACT GAC CCC GAA TTA AAC CTG TAT CAÁ 480 Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln 125 130 135 GAT GGG AAA CAT CTA AAA CTT TCT CAG AGG GTC ATC ACÁ CAC AAG TGG 528 Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val He Thr His Lys Trp 140 145 150 ACC ACC AGC CTG AGT GCA AAA TTC AAG TGC ACÁ GCA GGG AAC AAA GTC 576 Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val 155 160 165 AGC AAG GAA TCC AGT GTC GAG CCT GTC AGC TGT CCA GAG AAA GGT CTG 624 Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Pro Val Ser Cys Pro Glu Lys Gly Leu 170 175 180 GAC ATC TAT CTC ATC ATT GGC ATA TGT GGA GGA GGC AGC CTC TTG ATG 672 Asp He Tyr Leu He He Gly He Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met 185 190 195 200 GTC TTT GTG GCA CTG CTC GTT TTC TAT ATC ACC AAA AGG AAA AAA CAG 720 Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe Tyr He Thr Lys Arg Lys Lys Gln 205 210 215 AGG AGT CGG AGA AAT GAT GAG GAG CTG GAG ACÁ AGA GCC CAC AGA GTA 768 Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val 220 225 230 GCT ACT GAA GAA AGG GGC CGG AAG CCC CAC CAÁ ATT CCA GCT TCA ACC 816 Ala Thr G.lu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln He Pro Ala Ser Thr 235 240 245 CCT CAG AAT CCA GCA ACT TCC CAÁ CAT CCT CCT CCA CCA CCT GGT CAT 864 Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His 250 255 260 CGT TCC CAG GCA CCT AGT CAT CGT CCC CCG CCT CCT GGA CAC CGT GTT 912 Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val 265 270 275 280 CAG CAC CAG CCT CAG AAG AGG CCT CCT GCT CCG TCG GGC ACÁ CAÁ GTT 960 Gln His Gln Pro Gln Lys Arg. Pro Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val 285 290 295 CAC CAG CAG AAA GGC CCG CCC CTC CCC AGA CCT CGA GTT CAG CCA AAA 1008 His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys 300 305 310 CCT CCC CAT GGG GCA GCA GAA AAC TCA TTG TCC CCT TCC TCT AAT 1053 Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn 315 320 325 TAA 1056 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:6: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 351 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: linear (¡i) TI PO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRI PCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6: Met Ser Phe Pro Cys Lys Phe Val Ala Ser Phe Leu Leu He Phe Asn -24 -20 -15 -10 Val Ser Ser Lys Gly Ala Val Ser Lys Glu He Thr Asn Ala Leu Glu -5 1 5 Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp He Asn Leu Asp He Pro Ser Phe 10 15 20 ) Gln Met Ser Asp Asp He Asp Asp He Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp 25 30 35 ' 40 Lys Lys Lys He Ala Gln Phe Arg Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu 45 50 55 Lys Asp Thr Tyr Lys Leu Phe Lys Asn Gly Thr Leu Lye He Lys His 50 65 70 Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp He Tyr Lys Val Ser He Tyr Asp Thr 75 80 85 Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys He Phe Asp Leu Lys He Gln Glu 90 95 100 Arg Val Ser Lys Pro Lys He Ser Trp Thr Cys He Asn Thr Thr Leu 105 110 115 120 Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln 125 130 135 Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val He Thr His Lys Trp 140 145 150 Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val 155 160 165 Ser Lys Glu Ser Ser Val G?u Pro Val Ser Cye Pro Glu Lys Gly Leu 170 175 180 Asp He Tyr Leu He He Gly He Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met 185 190 195 200 Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe Tyr He Thr Lys Arg Lys Lys Gln 205 210 215 Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val 220 225 230 Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln He Pro Ala Ser' Thr 235 240 245 Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His 250 255 260 Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val 265 270 275 280 Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val 285 290 295 His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys 300 305 310 Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn 315 320 325 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:7: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1050 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: cDNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN: 1 .. 1041 (?x) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_sig (B) UBICACIÓN: 1 ..84 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: péptido_mat (B) UBICACIÓN: 85..1041 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN: 85..1041 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota- "LFA3TIP" (¡x) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: característica_misc (B) UBICACIÓN: 360..361 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota- "punto de fusión LFA3/lgG" (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ I D NO:7: ATG GTT GCT GGG AGC GAC GCG GGG CGG GCC CTG GGG GTC CTC AGC GTG 48 Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 GTC TGC CTG CTG CAC TGC TTT GGT TTC ATC AGC TGT TTT TCC CAÁ CAÁ 96 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe He Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 ATA TAT GGT GTT GTG TAT GGG AAT GTA ACT TTC CAT GTA CCA AGC AAT 144 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 10 15 20 GTG CCT TTA AAA GAG GTC CTA TGG AAA AAA CAÁ AAG GAT AAA GTT GCA 192 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 GAA CTG GAA AAT TCT GAA TTC AGA GCT TTC TCA TCT TTT AAA AAT AGG 240 Glu Leu Glu Asn Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 GTT TAT TTA GAC ACT GTG TCA GGT AGC CTC ACT ATC TAC AAC TTA ACÁ 288 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr 55 60 65 TCA TCA GAT GAA GAT GAG TAT GAA ATG GAA TCG CCA AAT ATT ACT GAT 336 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 ACC ATG AAG TTC TTT CTT TAT GTC GAC AAA ACT CAC ACÁ TGC CCA CCG 384 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 85 90 95 100 TGC CCA GCA CCT GAA CTC CTG GGG GGA CCG TCA GTC TTC CTC TTC CCC 432 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 105 110 115 CCA AAA CCC AAG GAC ACC CTC ATG ATC TCC CGG ACC CCT GAG GTC ACÁ 480 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 120 125 130 TGC GTG GTG GTG GAC GTG AGC CAC GAA GAC CCT GAG GTC AAG TTC AAC 528 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 135 140 145 TGG TAC GTG GAC GGC GTG GAG GTG CAT AAT GCC AAG ACÁ AAG CCG CGG 576 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 150 155 160 GAG GAG CAG TAC AAC AGC ACG TAC CGG GTG GTC AGC GTC CTC ACC GTC 62 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 165 170 175 180 CTG CAC CAG GAC TGG CTG AAT GGC AAG GAG TAC AAG TGC AAG GTC TCC 672 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser • 185 190 ' 195 AAC AAA GCC CTC CCA GCC CCC ATC GAG AAA ACC ATC TCC AAA GCC AAA 720 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys 200 205 210 GGG CAG CCC CGA GAA CCA CAG GTG TAC ACC CTG CCC CCA TCC CGG GAT 68 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 215 220 225 GAG CTG ACC AAG AAC CAG GTC AGC CTG ACC TGC CTG GTC AAA GGC TTC 816 Glu Leu Thr Lys Aen Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 230 235 240 TAT CCC AGC GAC ATC GCC GTG GAG TGG GAG AGC AAT GGG CAG CCG GAG 864 Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 245 250 255 260 AAC AAC TAC AAG ACC ACG CCT CCC GTG CTG GAC TCC GAC GGC CC TC 912 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 265 270 275 TTC CTC TAC AGC AAG CTC ACC GTG GAC AAG AGC AGG TGG CAG CAG GGG 960 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp .Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 280 285 290 AAC GTC TTC TCA TGC CC GTG ATG CAT GAG GCT CTG CAC AAC CAC TAC 1008 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 295 300 305 ACG CAG AAG AGC CTC TCC CTG TCT CCG GGT AAA TGAGTGCGG 1050 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 310 315 (2) I NFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:8 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECU ENCIA: (A) LONGITU D: 347 aminoácidos (B) TI PO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ I D NO:8 : Met Val Ala Gly Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Gly Val Leu Ser Val -28 -25 -20 -15 Val Cys Leu Leu His Cys Phe Gly Phe He Ser Cys Phe Ser Gln Gln -10 -5 1 He Tyr Gly Val Val Tyr Gly Asn Val Thr Phe His Val Pro Ser Asn 5 10 15 20 Val Pro Leu Lys Glu Val Leu Trp Lys Lys Gln Lys Asp Lys Val Ala 25 30 35 Glu Leu Glu Asn Ser Glu Phe Arg Ala Phe Ser Ser Phe Lys Asn Arg 40 45 50 Val Tyr Leu Asp Thr Val Ser Gly Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Thr • 55 60 65 Ser Ser Asp Glu Asp Glu Tyr Glu Met Glu Ser Pro Asn He Thr Asp 70 75 80 Thr Met Lys Phe Phe Leu Tyr Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 85 90 95 100 Cye Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 105 110 115 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 120 125 130 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 135 140 145 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 150 155 160 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 165 170 175 180 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 185 190 195 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys 200 205 210 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 215 220 225 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 230 235 240 Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 245 250 25S 260 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 265 270 275 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 280 285 290 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 295 300 305 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 310 315

Claims (1)

1. REIVI NDICACIONES 1 . El uso de una composición que comprende una cantidad efectiva de un agente de unión de CD2 a una dosificación, q ue varía desde aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 50 mg de agente de unión por kg de peso corporal, para modular de manera selectiva linfocitos T efectores de memoria en un sujeto q ue tiene una condición médica, la condición es seleccionada del grupo que consiste de artritis psoriática, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, uveítis , enfermedad intestinal inflamatoria , enfermedad de Crohn , colitis ulcerativa y linfoma cutáneo de células T. 2. El método de la reivindicación 1 , en donde los linfocitos T efectores de memoria son linfocitos positivos CD45 RO. 3. El método de la reivindicación 1 , en donde el agente de unión de CD2 es seleccionado del grupo que consiste de homólogos de anticuerpo anti- LFA-3, homólogos de anticuerpo anti-CD2, polipéptidos LFA-3 solubles, polipéptídos CD2 solubles, agentes imitadores de CD2 y agentes imitadores de LFA-3. 4. El método de la reivindicación 3, en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO:2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO:2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ ID NO: 2. 5. El método de la reivindicación 3, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión q ue comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 10 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana. 6. El método de la reivindicación 5, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de u n dominio constante de cadena pesada de IgGI humana. 7. El uso de una composición que comprende un polipéptido LFA-3 soluble teniendo una secuencia de aminoácidos que es seleccionada del grupo que consiste de: (a) am inoácido 1 a am inoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2, variando dicha composición en una dosificación de 0.001 hasta aproximadamente 50 mg de polipéptido por kg de peso corporal, para modular linfocítos T efectores de memoria en un mam ífero que tiene una condición médica seleccionada del grupo que consiste de artritis psoriática, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, uveítis, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y linfoma cutáneo de células T. 8. El método de la reivindicación 7, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 10 aminoácidos C-term inales de una región de gozne de lgG1 humana. 9. El método de la reivindicación 8, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de IgG I humana. 1 0. El uso de de una com posición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad efectiva para tratar esclerosis múltiple en un mam ífero. 1 1 . El método de la reivindicación 10, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocitos T efectores de memoria en el mamífero. 12. El método de la reivindicación 1 1 , en donde el agente de unión de CD2 es un polípéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 13. El método de la reivindicación 12, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 10 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana. 14. El método de la reivindicación 1 3, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de lgG 1 humana. 15. El uso de una composición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad suficiente para tratar uveítis en un mam ífero. 16. El método de la reivindicación 1 5, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocitos T efectores de memoria en el mamífero. 17. El método de la reivindicación 16, en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 18. El método de la reivindicación 17, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 1 0 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana. 19. El método de la reivindicación 18, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de igG1 humana. 20. El uso de una composición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad suficiente para tratar enfermedad intestinal inflamatoria en un mamífero. 21 . El método de la reivindicación 20, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocitos T efectores de memoria en el mam ífero. 22. El método de la reivindicación 21 , en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2; (c) aminoácido 50 a am inoácido 65 de SEQ I D NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 23. El método de la reivindicación 22, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 10 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana . 24. El método de la reivindicación 23, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de lgG 1 humana. 25. El uso de una composición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad suficiente para tratar enfermedad de Crohn en un mamífero. 26. El método de la reivindicación 25, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocitos T efectores de memoria en el mamífero. 27. El método de la reivindicación 26, en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ ID NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 28. El método de la reivindicación 27, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 1 0 aminoácidos C-term inales de una región de gozne de lgG 1 humana. 29. El método de la reivindicación 28, en donde la prote ína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de IgG 1 humana. 30. El uso de una composición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad suficiente para tratar colitis ulcerativa en un mamífero. 31 . El método de la reivindicación 30, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocítos T efectores de memoria en el mam ífero. 32. El método de la reivindicación 31 , en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 33. El método de la reivindicación 32, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino termínales de LFA-3 maduro y ios 10 aminoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG 1 humana. 34. El método de la reivindicación 33, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de lgG 1 humana. 35. El uso de una composición que comprende un agente de unión de CD2 en una cantidad suficiente para tratar linfoma cutáneo de células T en un mam ífero. 36. El método de la reivindicación 35, en donde el agente de unión de CD2 está en una cantidad suficiente para modular selectivamente linfocitos T efectores de memoria en el mam ífero. 37. El método de la reivindicación 36, en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de SEQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ I D NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 38. El método de la reivindicación 37, en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 10 am inoácidos C-terminales de una región de gozne de lgG1 humana . 39. El método de la reivindicación 38, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones CH2 y CH3 de un dominio constante de cadena pesada de lgG 1 humana. 40. Una población de linfocitos T efectores de memoria obtenibles a partir de un mamífero que tiene una condición caracterizada por la presencia de linfocitos T efectores de memoria infiltrantes en un órgano del mamífero, en donde la población de células T está en combinación con un agente de unión de CD2. s 41 . El método de la reivindicación 40, en donde el agente de unión de CD2 es un polipéptido LFA-3 soluble, que comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) aminoácido 1 a aminoácido 92 de S EQ I D NO: 2; (b) aminoácido 1 a aminoácido 80 de SEQ ID NO:2; (c) aminoácido 50 a aminoácido 65 de SEQ ID NO: 2; y (d) aminoácido 20 a aminoácido 80 de SEQ I D NO:2. 42. El método de la reivindicación 41 , en donde el polipéptido LFA3 soluble es una proteína de fusión que comprende los 92 aminoácidos amino terminales de LFA-3 maduro y los 1 0 am inoácidos C-terminales de 10 una región de gozne de lgG 1 humana. 43. El método de la reivindicación 42, en donde la proteína de fusión LFA3 soluble comprende además las regiones C H2 y CH3 de un dom inio constante de cadena pesada de lgG 1 humana. 44. La población de células de ia reivindicación 40, en donde las células 15 son obtenibles de un mam ífero que tiene una condición seleccionada del grupo que consiste de artritis psoriática, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, dermatitis atópica, uveítis, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y linfoma cutáneo de células T.