MX2013009953A - Inhibidores de cinasa de mst1 y metodos de su uso. - Google Patents

Inhibidores de cinasa de mst1 y metodos de su uso.

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Jeffrey Thomas Bagdanoff
Simon David Peter Baugh
Marianne Carlsen
Kenneth Gordon Carson
John Anthony Gilleran
Wei He
Tamas Oravecz
Konstantin Salojin
Leonard Sung
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Abstract

Se revelan compuestos para la inhibición de cinasa 1 semejante a Ste20 mamífera (MST1), junto con composiciones que los comprenden y métodos de su uso en el tratamiento, manejo o prevención de enfermedades o alteraciones inflamatorias o autoinmunes.

Description

INHIBIDORES DE CINASA DE MSTl Y MÉTODOS DE SU USO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención es concerniente con compuestos útiles como inhibidores de cinasa 1 semejante a St20 mamifera (MSTl), composiciones que la comprenden y métodos de su uso.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La cinasa 1 semejante a St20 mamifera (MSTl) es un componente de la ruta de señalización "Hippo" y "ha sido implicada en la regulación del ciclo celular, apoptosis y respuesta celulares a tensión oxidante". Choi, J., et al., Píos One 4(ll) :e8011, 1 (2009) . Los ratones deficientes de MSTl según se dice muestran una acumulación de linfocitos maduros en el timo y una disminución de linfocitos en la sangre y tejidos linfoides periféricos. Dong, Y., et al., J. Immunologyl83 (6) :3865-3872, 3865 (2009) . Ver también, Katagiri, K., et al., Nat Immunol. (9) : 919-28 . (2006) ; Ling, P., et al., Cell Signal. 20 (7) : 1237-47 (2008) . MSTl es también conocida como cinasa 4 serina/treonina (STK4) y cinasa sensible a tensión 2 (KRS2) .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención es concerniente con compuestos útiles para la inhibición de MSTl. Una modalidad de la invención abarca compuestos de fórmula: y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos, en donde: A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros; B es arilo o heterociclo de 4-7 miembros; la X es N o CH ; Yi e Y2 son cada uno independientemente S , N o CH , a condición de que por lo menos uno de Yi and Y2 sea N o GH ; cada Ri es independientemente RÍA, " (RiB)nSOPRLC, - (RiB)nSOpN(RLC)2, - (RIB) nNRlcSOPRLC, - (R1B)NC(0)N ( Ric)2, o - (RIB) n RicC (0) Ríe , u opcionalmente C1-12 hidrocarbilo sustituido o heterocarbilo de 2-12-miembros, tal sustitución opcional es con uno a más RiA ; cada RiA es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo o hidroxilo; cada RiB es independientemente R1A Ci_i2hydrocarbilo opcionalmente sustituido con uno más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo o hidroxilo; cada RiC es independientemente hidrógeno u opcionalmente Ci-i2hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, tal sustitución opcional es con uno más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo o hidroxilo; R2 y R3 son tomados conjuntamente para formar un heterociclo de 5-7 miembros opcionalmente sustituido con 1 o más R3A , o: R2 es hidrógeno C1-4 alquilo; y R3 es hidrógeno o Ci-i2 hidrocarblo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12-miembros, tal sustitución opcional es con uno o más R3A; cada R3A es independientemente amino, alkoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; y p es 0 , 1 o 2.
Otra modalidad abarca una formulación que comprende un compuesto de la invención y un excipiente aceptable farmacéuticamente. Otra abarca un método para usar un compuesto de la invención para la inhibición de MSTl.
Otra modalidad abarca un método para usar un compuesto de la invención, para el tratamiento, manejo o prevención de una enfermedad o alteración inflamatoria o autoinmune.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Ciertos aspectos de la invención pueden ser entendidos de las Figuras adjuntas, descritas a continuación: La Figura 1A-1B muestra la diferencia entre ratones MSTl-/- (n = 13) y sus compañeros de carnada tipo silvestre (n-11) en un modelo de enfermedad de artritis inducida por colágeno (CIA) .
La Figura 2A-2B muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada prdeiláctica (Figura 2A) y terapéuticamente (Figura 2B) a ratones en un modelo de enfermedad de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) .
La Figura 3 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada terapéuticamente a ratas en un modelo de enfermedad de EAE.
La Figura 4A-4B muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada a ratones en un modelo de enfermedad de CIA. La Figura 4A muestra la puntuación de artritis acumulativa en el curso del experimento; la figura 4B muestra el cambio en espesor del tobillo en el curso del experimento.
La Figura 5A-5B muestra el efecto diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada a ratas en un modelo de enfermedad de CIA. La Figura 5A muestra la puntuación de artritis acumulativa en el curso del experimento; la Figura 5B muestra el cambio en el espesor del tobillo en el curso del experimento.
La Figura 6 muestra el efecto del tratamiento a corto plazo con un compuesto de la invención sobre enzimas del hígado y respuesta de citoquina en ratones sometidos a modelo de enfermedad de hepatitis inducida por concanavalina A (ConA) .
La Figura 7A-7B muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada terapéuticamente a ratas en un modelo de enfermedad de EAE. La Figura 7A muestra la puntuación clínica como función del tiempo; la Figura 7B muestra el desarrollo de la enfermedad como función de la dosis del compuesto (o vehículo) .
La Figura 8 muestra el efecto del tratamiento a corto plazo por un compuesto de la invención sobre enzimas del hígado y respuesta de citoquina en ratones sometidos a un modelo de enfermedad de hepatitis inducida por ConA.
La Figura 9A-9B muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invención cuando es administrada terapéuticamente a ratones en modelo de enfermedad de EAE. La Figura 9A muestra la puntuación clínica como función del tiempo para ratones a quienes el compuesto (y vehículo) fueron administrados subcutáneamente. La Figura 9B muestra la puntuación clínica como función del tiempo para ratones a quienes el compuesto (y vehículo) fueron administrados oralmente .
La Figura 10A-10D muestra el efecto de un compuesto de la invención en un modelo de CIA de ratón como función de la dosis y método de administración. La Figura 10A y 10B muestran el efecto del compuesto sobre puntuaciones acumulativas y cambio en el espesor del tobillo cuando el compuesto (y testigo de vehículo) fueron administrados subcutáneamente. La Figura 10C y 10D muestran los resultados obtenidos cuando el compuesto (y testigo de vehículo) fue administrado oralmente.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN.
La presente invención está basada en parte en el descubrimiento de que ratones knockout de ST1 son significativamente más resistentes a modelos de enfermedad autoinmune e inflamatoria animales que sus compañeros de carnada tipo silvestre. Este hallazgo condujo al descubrimiento de nuevos compuestos que inhiben MST1, los más preferidos de los cuales son efectivos en modelos de enfermedad en animales y exhiben propiedades toxicológicas y farmacocinéticas deseables.
DEFINICIONES A no ser que se indique de otra manera, las frases "compuesto de la invención", "compuesto de la presente revelación" y los semejantes se refieren a los compuestos revelados en la presente, en particular compuestos de fórmula I y sales del mismo.
A no ser que se indique de otra manera, el término "hidrocarbilo" significa una porción alifática o aliciclica que tiene una cadena fundamental consistente de átomos de carbono y que consiste de átomos de carbono e hidrógeno. Ejemplos de grupos hidrocarbilo incluyen aquellos que tienen 1-20, 1-12, 1-6 y 1-4 átomos de carbono (denominados como Ci_ 2ohidrocarbilo, Ci_12hidrocarbilo, Ci_6hidrocarbilo, y Ci-4hidrocarbilo, respectivamente) . Ejemplos particulares incluyen alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, bencilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilquilo, cicloalquenilalquilo, naftilo, fenilo y feniletilo.
Ejemplos de porciones alquilo incluyen porciones de cadena recta y ramificadas que tienen 1-20, 1-12, 1-6 y 1-4 y 1-3 átomos de carbono (denominados como Ci-2oalquilo, d-i2alquilo, Ci-6alquilo, Ci_4 alquilo y C1-3 alquilo, respectivamente) . Ejemplos particulares incluyen metilo, etilo, propilo isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4 , 4-dimetilpentilo, octilo, 2 , 2 , -trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo y dodecilo .
Ejemplos de porciones alquenilo, incluyen C2-20, C2-12 y C2-6 alquenilo de cadena recta y ramificada. Ejemplos particulares incluyen, vinilo, alilo, 1-butenilo, 2-butenilo, isobutenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metil-l-butenilo, 2-metilo-2-butenilo, 2, 3-dimetilo-2-butenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 1-heptenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 1-octenilo, 2-octenilo, 3-octenilo, 1-nonenilo, 2-nonenilo, 3-nonenilo, 1-decenilo, 2-decenilo y 3-decenilo.
Ejemplos de porciones alquenilo incluyen C2-20 Í C2-12 y C2-6 alquenilo de cadena recta y ramificada. Ejemplos particulares incluyen etenilo y 2-prdeinilo (proparcilo) .
Ejemplos de porciones arilo incluyen antracenilo, azulenilo, fluorenilo, indano, indenilo, naftilo, fenilo y fenantrenilo.
Ejemplo de porciones cicloalquilo incluyen C3-12, C3-7, C4. 6 and C6 cicloalquilo. Ejemplos particulares incluyen ciclopropilo ciclobutilo ciclopentilo, ciclohexilo y adamantilo .
A no ser que se indique de otra manera, el término "halo" abarca fluoro, cloro, bromo, y yodo.
A no ser que se indique de otra manera, el término "heterocarbilo" se refiere a una porción que tiene una cadena fundamental compuesta de uno o más átomos de carbono y uno o más heteroátomos . Heteroátomos particulares son, nitrógeno, oxigeno y azufre. Se puede considerar que las porciones heterocarbilo son una porción de hidrocarbilo en donde por lo menos un átomo de carbono, grupo CH, CH2, o CH3 es reemplazado con uno o más heteroátomos y el número requerido de átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Ejemplos de heterocarbilos incluyen porciones de heterocarbilo de 2-20, 2-12, 2-8, 2-6 y 2-4 miembros, en donde el intervalo numérico se refiere a la suma total de átomos de carbono, nitrógeno, oxigeno y/o azufre en la porción. Asi, el término "heterocarbilo de 2-12 miembros" se refiere a una porción heterocarbilo que tiene un total de 2-12 átomos de carbono, nitrógeno, oxigeno y/o azufre. Porciones heterocarbilo particulares incluyen heteroalquilo, heteroalquenilo y heteroalquinilo de cadena recta y ramificada, también como heterociclo y heteroarilo.
Ejemplos de porciones heteroalquilo incluyen porciones heteroalquilo de 2-8 miembros, 2-6 miembros y 2-4 miembros. Ejemplos particulares incluyen alcoxilo, acilo (por ejemplo, formilo acetilo, benzoilo) , alquilamino (por ejemplo, di- (Ci-3-alquil) amino) , arilamino, ariloximo, carbonatos, carbamidas, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilsulfañilo, arilsulfañilo, alquilsufinilo, arilsufinilo, alquilsulfañilo, arilsulfonilo, alquilsufonilamino, y arilsulfonilamino .
A no ser que se indique de otra manera, el término "heterociclo" se refiere a una porción de heterocarbilo cíclica (monociclica o policiclica) que puede ser aromática parcialmente aromática o no aromática. Los .heterociclos incluyen heteroarilos . Ejemplos incluyen Heterociclos de 4-10-miembros, 4-7-miembros, 6-miembros, y 5-miembros. Ejemplos particulares incluyen benzo [ 1, 3] dioxolilo, 2,3-dehidro-benzo [1, ] dioxinilo, cinnolinilo, furanilo, hidantoinilo, morfolinilo, oxetanilo, oxiranilo, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, tetrahidrdeuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrothideenilo, tetrahidrothiopiranilo y valerolactamilo . Debido a que el término "heterociclo" se refiere a un anillo autónomo solo no abarca porciones tales como oxazolidinona e imidazolidinona, tales porciones son consideradas hegterociclos sustituidos por por ejemplo heterociclos sustituidos con oxo.
Ejemplos de porciones heteroarilo incluyen acridinilo, benzimidazolilo, benzdeuranilo, benzoisothiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoquinazolinilo, . benzothiazolilo, benzoxazolilo, furilo, imidazolilo, indolilo, isothiazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, phthalazinilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridilo, pirimidinilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, tetrazolilo, thiazolilo, y triazinilo.
A no ser que se indique de otra manera, el término "incluye" tiene el mismo significado como "incluye pero no está limitado a" y el término "incluye" tiene el mismo significado como "incluye pero no está limitado a". Similarmente el término "tal como" tiene el mismo significado como el término "tal como, pero no limitado a".
A no ser que se indique de otra manera, los términos "manejar", "administrar" y "manejo" abarca impedir la recurrencia de la enfermedad o alteración especifica en un paciente que ya a sufrido de enfermedad o alteración y/o prolongar el tiempo que un paciente que ha sufrido de una enfermedad o alteración permanente en remisión. Los términos abarcan modular el umbral, desarrollo y/o duración de la enfermedad o alteración de cualquier manera que el paciente responde a la enfermedad o alteración.
A no ser que se indique de otra manera, el término "inhibidor de MSTl" significa un compuesto que inhibe MSTl in vitro con una IC5o de menos de 1 µ?t?, 0.5 ym o 0.25 µ?t? tal como se determina mediante el análisis descrito en la presente.
A no ser que se indique de otra manera, el término "sales aceptables farmacéuticamente" se refiere a sales preparadas a partir de ácidos y bases no tóxicos aceptables farmacéuticamente incluyendo ácidos y bases inorgánicos y ácidos y bases orgánicos. Sales de adición de base aceptables farmacéuticamente apropiadas incluyen sales metálicas elaboradas a partir de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc o sales orgánicas elaboradas a partir de licina, cloroprocaina, N, N' -dibenciletilenediamina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, etilenediamina, meglumina (N-metilglucamina) y procaina. Ácidos no tóxicos apropiados incluyen ácidos orgánicos tales como, ácido acético, alginico, antranílico, benzenosulfónico, benzoico, alcamforsulfónico, cítrico, etenesulfónico, fórmico, fumárico, furoíco, galacturónico, glucónico, glucurónico, glutámico, glicólico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleíco , málico, mandelico, metanosulfónico, mucico, nítrico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, propiónico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, sulfúrico, ácido tartárico, y ácido t-tuluensulfónico . Ácidos no tóxicos específicos incluyen ácidos clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, sulfúrico, y metansulfónico . Ejemplos de sales específicas incluyen así sales de clorhidrato y mesilato. Otras son bien conocidas en el arte. Véase como para ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990) y Remington : The Science and Practice de Pharmacy, 19th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995) .
A no ser que se indique de otra manera, el término "sustituido", cuando es usado para describir una estructura o porción química, se refiere a un derivado de aquella estructura o porción en donde uno o más de sus átomos de hidrógeno está sustituido con un átomo, porción química o grupo funcional tal como pero no limitado a alcohol, aldehido, alcoxi, alcanoiloxi, alcoxicarbonilo, alquenilo, alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, propilo t-butilo) , alquinilo, alquilcarboniloxi (-OC (O) alquilo) , amida (-C(O)NH-alquilo- o -alquilNHC (0) alquilo) , amidinilo ( -C (NH) H-alquilo o -C(NR)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria, tal como alquilamino, arilamino, arilalquilamino) , aroilo, arilo, ariloxi, azo, carbamoilo (-NHC (0) 0-alquilo- o -0C (0) NH-alquilo) , carbamilo (por ejemplo, C0NH2, CONH-alquilo, C0NH-arilo) , carbonilo, carboxilo, ácido carboxílico, anhídrido de ácido carboxílico, cloruro de ácido carboxílico, ciano, ester, epoxido, éter (por ejemplo, metoxi, etoxi), guanidino, halo, haloalquilo (por ejemplo, -CC13, -CF3, -C(CF3)3) , heteroalquilo, hemiacetal, imina (primaria y secundaria) , isocianato, isotiocianato, cetona, nitrilo, nitro, oxigeno (esto es, para proveer un grupo oxo) ,' fosfodiester, sulfuro, sulfonamido (por ejemplo, S02NH2) , sulfona, sulfonilo (incluyendo alquilsulfonilo, arilsulfonilo y arilalquilsulfonilo) , sulfóxido, tiol (por ejemplo, sulfidrilo, tioeter) y urea (-NHCONH-alquilo-) . En una modalidad particular, el término sustituido se refiere a un derivado de aquella estructura o porción, en donde uno o más de sus átomos de hidrógeno está sustituido con alcohol, alcoxi, alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, t-butilo) , amida ( -C (0) H-alquilo o -alquiloNHC (O) alquilo) , amidinilo (-C (NH) NH-alquilo o -C(NR)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria tal como alquilamino, arilamino, arilalquilamino) , arilo, carbamoilo (-NHC (O) 0-alquilo-o -0C (0) H-alquilo) , carbamilo (por ejemlo, C0NH2, también como CONH-alquilo, CONH-arilo) , halo, haloalquilo (por ejemplo, -CC13, -CF3, -C(CF3)3), heteroalquilo, imina (primaria y secundaria) , isocianato, isotiocianato, tiol (por ejemplo, sulfhidrilo, tioeter) o urea (-NHCONH-alquilo-) .
A no ser que se indique de otra manera, una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto es una cantidad suficiente para proveer un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo de una enfermedad o condición para retardar o minimizar uno o más síntomas asociados con enfermedad o condición. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto significa una cantidad de agente terapéutico, sola o en combinación con otras terapias que provee un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo de la enfermedad o condición. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" puede abarcar una cantidad que mejora la terapia global, reduce o evita síntomas o causas de una enfermedad o condición o mejora la eficacia terapéutica de otro agente terapéutico.
A no ser que se indique de otra manera, los términos "tratar", "que trata" y "tratamiento" contempla una acción que ocurre mientras que un paciente está sufriendo de la enfermedad o alteración especificada, que reduce la severidad de la enfermedad o alteración o retarda o frena el avance de la enfermedad o alteración.
A no ser que se indique de otra manera, uno o más adjetivos inmediatamente precedentes a una serie de nombres será interpretado que se indica a cada uno de los nombre, por ejemplo, la frase "alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido" tiene el mismo significado como "alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido".
Se notará que una porción química que forma parte de un compuesto más grande puede ser descrita en la presente utilizando un nombre acordado comúnmente cuando existe como una sola molécula o un nombre comúnmente acordado a su radical. Por ejemplo, los términos "piridina" y "piridilo" están de acuerdo con el mismo significado cuando son usados para describir una porción anexada a otras porciones químicas. Así, las dos frases "XOH, en donde X es piridilo" y "XOH, en donde X es piridina" están de acuerdo con el mismo significado y abarcan los compuestos piridin-2-ol , piridin-3-ol y piridin-4-ol .
También se debe notar que si la esteroquímica de una estructura o una porción de una estructura no es indicada con, por ejemplo negritas o líneas discontinuas, la estructura o la porción de la estructura será interpretada que abarca todos los esteroisómeros de la misma. Similarmente, nombres de compuestos que tienen uno o más centros quirales que no especifican la esteroquímica de aquellos centros abarcan esteroisómeros puros y mezclas de los mismos. Además, cualquier átomo mostrado en un dibujo con valencias sin satisfacer se supone que está anexado a suficientes átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Además, los enlaces químicos ilustrados con una línea continua paralela a una línea discontinua abarcan tanto un solo enlace como dobles enlaces (por ejemplo, aromático) , si las valencias lo permiten. Esta invención abarca tautómeros y solvatos (por ejemplo, hidratos) de los compuestos revelados en la presente.
Compuestos de la invención La presente invención abarca compuestos de fórmula: y sales aceptables farmacéuticamente del mismo, en donde: A es arilo o heterociclo de 4 -7 -miembros; B es arilo o heterociclo de - -miembros; X es N o CH; Yi e Y2 son cada uno independientemente S, o CH, a condición de que por lo menos uno Yi o Y2 sea N o CH; cada Rx es independientemente RlAf - ( RIB) nSOpRlc , - (RIB) nSOpN ( Ríe ) 2/ - ( RlB ) nNRicSOpRic , -(RlB)nC (0)N (Ric)2, o - (RIB) nNRic (0) Ríe, o Ci-i2 hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12-miembros, tal sustitución opcional es con uno o más de Ri¾; cada RiA es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada RiB es independientemente Ci-i2hidrocarbilo opcionalmente sustituido con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada RiC es independientemente hidrógeno o Ci_i2hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, tal sustitución opcional es con uno más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; R2 and R3 son tomadas conjuntamente para formar un heterociclo de 5-7 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de R3A, o: R2 es hidrógeno o C1-4 alquilo; y R3 es hidrógeno o C1-12 hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, tal sustitución opcional es con uno o más de R3A; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; y p es 0, 1, o 2. Los compuestos preferidos son inhibidores de MSTl.
Compuestos particulares de la invención son de fórmula: en donde D es un heterociclo de 4-7-miembros; y q es 0-2.
Compuestos particulares de la invención son de fórmula: en donde Yi and Y2 son cada uno independintemente S, N, NH, CH or CH2.
Compuestos particulares son de fórmula: en donde Yi e Y2 son cada uno independientemente S, N o CH, a condición de que cuando menos uno de Yi e Y2 sean N o CH; y k sea 0 o 1. Compuestos particulares son de tal manera que R3 no es hidrógeno cuando X es CH. Compuestos más particulares son de tal manera que R3 no es hidrógeno cuando X es CH, Yi es CH e Y2 es CH. Compuestos más particulares son de tal manera R3 no es hidrógeno cuando X es CH, Yi es CH, Y2 es CH, y R2 es hidrógeno.
Compuestos particulares son de fórmula: en donde ?? e Y2 son independientemente N o CH.
Otros compuestos de la invención de fórmula: en donde Yi y Y2 son cada uno independientemente N o CH. Otros son de la formula: en donde Yi e Y2 son cada uno independientes N o CH; y Z es N o CRi.
Compuestos particulares de la invención son de fórmula: en donde ?? y Y2 son cada uno independientemente N o CH; r es 1 o 2, y R4 es hidrógeno o alquilo.
Otros compuestos de la invención son de la formula: en donde Y2 es N o CH. Otros son de la formula en donde Yi es N o CH.
En donde sea aplicable a las fórmulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que X es N.
En donde sea aplicable a las formulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que Yi es CH.
En donde sea aplicable a las fórmulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que Y2 es CH.
En donde sea aplicable a las fórmulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que Z es N.
En donde sea aplicable a las fórmulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que Z es CRi.
En donde sea aplicable a las fórmulas reveladas en la presente, compuestos particulares de la invención son de tal manera que Ri es ( lB)nSOpRic, - (RiB)nS0pN(Ric)2, - ( IB ) n RiCSOpRiC , - (RiB)nC (0)N(Ric)2 , o - (RiB)nNRiCC (0)Rlc.
Compuestos particulares de la invención son de fórmula: Otros compuestos son de fórmula: Los compuestos de la invención pueden ser preparados mediante métodos conocidos en el arte y mediante los métodos descritos en la presente. En general, los compuestos de la invención pueden preparados como se muestra a continuación: en donde el bromuro de 2-amino heteroarilo 1 de partida es acoplado con un éster bórmico aromático apropiado bajo condiciones de acoplamiento de Suzuki estándar para proveer después del tratamiento con un reactivo de brominación electrdeilico, el bromuro de 2-amino hetero-biarilo 2. El acoplamiento de Suzuki subsecuente de 2 con otro éster aromático que muestra una funcionalidad de amida provee el producto final 3.
Métodos de Uso La presente invención abarca un método para inhibir de MST1, que comprende poner en contacto el MST1 (in vitro o in vivo) con una cantidad efectiva de un compuesto de la invención.
Otra modalidad abarca un método para suprimir la respuesta inmune en un paciente (por ejemplo, un humano), que comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de un compuesto de la invención.
Otra modalidad abarca un método de tratamiento, manejo o prevención de una enfermedad o alteración autoinmune o inflamatoria, que comprende administrar al paciente en necesidad del mismo una cantidad terapéutica o prdeilácticamente efectiva de un compuesto de la invención. Ejemplos de enfermedades y alteraciones incluyen aclorhidra autoinmune, enfermedad de Addison, espondilitis anquilosante, síndrome anti-fosfolipido, asma (por ejemplo, asma bronquial) , dermatitis atópica, gastritis atrópica autoinmune, enfermedad de Behcet, enfermedad de Celiac, enfermedad de Crohn, Síndrome de Cushing, dermatomiositis, Síndrome de Goodpasture, enfermedad de inj erto-vs-huesped, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, hepatitis (por ejemplo, inflamatoria y alcohol-inducida) , atropia adrenal idiopática, trombocitopenia idiopatica, síndrome de Kawasaki, Síndrome de Lambert-Eatonk, lupus eritomatoso, esclerosis múltiple, miastenia gravis, penfigoide, pénfigo vulgaris, anemia perniciosa, polinosis, poliartritis nodosa, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, soriasis, artritis soriática, Raynauds, Síndrome de Reiter, policondritis de recaída, artritis reumatoide, Síndrome de Schmidt, escleroderma, Síndrome de Sjogren, detalmia simpatética, Artritis de Takayasu, artritis temporal, tirotoxicosis , rechazo de transplante (por ejemplo de órgano, célula o médula ósea) , diabetes tipo 1, colitis ulcerativa, uveitis, y granulomatosis de Wegener.
La cantidad, ruta de administración y horario de dosificación de un compuesto dependerá de factores tales como la indicación específica a ser tratada, impedida o manejada y la edad, sexo y condición del paciente. Los papeles desempeñados por tales factores son bien conocidos por el arte y pueden ser acomodados mediante experimentación de rutina. En una modalidad particular, un compuesto de la invención es administrado a un paciente humano en una cantidad de alrededor de 1-50, 1-25 o 2.5-15 o 5-10 mpk.
Los compuestos de la invención pueden ser administrados en combinación con otros fármacos o medicinas inmunosupresoras o anti-inflamatorios . Las medicinas o fármacos pueden ser administrados al mismo tiempo o a tiempos diferentes .
Ejemplos de agentes inmunosupresores incluyen aminopterina, azatioprina, ciclosporina A, D-penicilamina, sales de oro, hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato, minociclina, rapamcina, sulfasalazina, tacrolimus (FK506) , y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos. Un agente inmunosupresor particular es metotrexato.
Ejemplos adicionales incluyen anticuerpos anti-TNF, tales como adalimumab, certolizumab, pegol, etanercept e infliximab. Otros incluyen bloqueadores de interleukina-1, tales como anaquirina. Otros incluyen anticuerpos de célula anti-B (CD20) , tales como rituximab. Otros incluyen bloqueadores de activación de célula T tal como abatacept.
Ejemplos adicionales incluyen inhibidores de inosina mondeosfato deshidrogenase, tales como mdeetil micdeenolato (CellCept®) y ácido micdeenólico ( yfortic®) .
Ejemplos de fármacos anti-inflamatorios incluyen glucocorticoides y NSAID.
Ejemplos de glucocorticoides incluyen, aldosterona, beclometasona, betametasona, cortisona, desoxicorticosterona, dexametasona, fludrocortisona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos.
Ejemplos de NSAID incluyen salicilatos (por ejemplo, aspirina, amoxiprina, benorilato, colina salicilato de magnesio, diflunisal, faislamina, salicilato de metilo, salicilato de magnesio, salicilato de salicilo y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos), ácidos arilalcanoicos (por ejemplo, dicldeenaco, acecldeenaco, acemetacina, bromfenaco, etodolac, indometacina, nabumetona, sulindac, tolmetin, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , ácido arilpropiónicos (por ejemplo, ibuprdeeno, carprdeeno, fenbufeno fenoprdeeno, flurbiprdeeno, ketoprdeeno, ketorolac, loxoprdeen, naproxen, oxaprozin, ácido tiaprdeénico, suprdeeno y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , ácidos arilantranilicos (por ejemplo, ácido mecldeenámico, ácido mefenámico, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , derivados de pirazolidina (por ejemplo, azapropazona , metamizol, oxifenbutazona, fenilbutazona, sulfinprazona, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , oxicams (por ejemplo, lornoxicam, meloxicam, piroxicam, tenoxicam, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , inhibidores de COX-2 (por ejemplo, celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rdeecoxib, valdecoxib, y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos) , y sulfonanilidas (por ejemplo, nimesulida y sales aceptables farmacéuticamente de la misma) .
Composiciones farmacéuticas La presente invención abarca composiciones farmacéuticas que comprende uno o más compuestos de la invención. Ciertas composiciones farmacéuticas son formas de dosificación unitarias individuales apropiadas para administración oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal) , parenteral (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, inyección de bolo, intramuscular, o intraarterial) , o administración transdérmica a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación incluyen pero no están limitadas a: tabletas; capletas; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina elástica blanda, ; sacos; trociscos; pastillas; dispersiones; supositorios; pomadas; cataplasmas (cataplasmas); pastas; polvos; apositos; cremas; yesos; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo, atomizaciones nasales o inhaladores) ; geles; formas de dosificación liquidas apropiadas para administración oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones liquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua o emulsiones líquidas agua en aceite) , soluciones y elíxires; formas de dosificación líquida apropiadas para administración parenteral a un paciente y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que pueden ser reconstituidos para proveer formas de dosificación líquida apropiadas para administración parenteral a un paciente.
La formulación se debe adaptar al modo de administración. Por ejemplo, la administración oral de un compuesto susceptible a degradación en el estómago puede ser obtenida utilizando un recubrimiento entérico. Similarmente, una formulación puede contener ingredientes que facilitan la administración del (los) ingrediente (s) activo (s) al sitio de acción. Por ejemplo, los compuestos pueden ser administrados en formulaciones liposomales con el fin de protegerlos de enzimas degradantes, facilitar el transporte en el sistema circulatorio y efectuar su administración a través de membranas celulares.
Similarmente, los compuestos escasamente solubles pueden ser incorporados a formas de dosificación líquidas (y formas de dosificación apropiadas para reconstitución) con la ayuda de agentes solubilizantes, emulsificantes y surfactantes tales como, pero no limitados a ciclodextrinas (por ejemplo, oí-ciclodextrina, ß-ciclodextrina, Captisol®, y Encapsin™ (veáse como por ejemplo, Davis and Brewster, Nat . Rev. Drug Pise .3 : 1023-1034 (2004)), Labrasol®, Labrafil®, Labrafac®, cremafor, y solventes no acuosos, tales como, pero no limitados a, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilen glicol, dimetil formamida, sulfóxido dimetilo (DMSO) , aceites biocompatibles (por ejemplo, aceite de semilla de algodón, nuez molida, maíz, germen, de oliva, de ricino y de sésamo) , glicerol, alcohol tetrahidrdeurfurilico, polietilen glicol, ésteres de ácido graso de sorbitan, y mezclas de los mismos (por ejemplo, DMSO: aceite de maíz) .
La composición, configuración y tipo de una forma de dosificación variarán comúnmente dependiendo del uso. Por ejemplo, una forma de dosificación usada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener cantidades más grandes de uno o más de los ingredientes activos que comprenden que una forma de dosificación usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. Similarmente, una forma de dosificación parenteral puede contener cantidades más pequeñas de uno o más de los ingredientes activos que comprenden que una forma de dosificación oral usada para tratar la misma enfermedad. Como tomar en cuenta tales diferencias será evidente para aquellos experimentados en el arte. Véase como por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990) .
Formas de dosificación oral .
Las composiciones farmacéu icas de la invención apropiadas para administración oral pueden ser presentadas como formas de dosificación discretas, tales pero no limitadas a, tabletas (por ejemplo, tabletas masticables) , capletas, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes con saborizante) . Tales formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos y pueden ser preparadas mediante métodos de farmacia bien conocidos para aquellos experimentados en el arte. Véase en general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990) .
Las formas de dosificación oral típicas son preparadas al combinar el (los) ingrediente (s) activo (s) en mezcla íntima con por lo menos un excipiente de acuerdo con técnicas de composición farmacéutica convencionales. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para administración .
Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas. Si se desea, las tabletas pueden ser recubiertas mediante técnicas acuosas o no acuosas estándar. Tales formas de dosificación pueden ser preparadas mediante métodos convencionales de farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación son preparadas al mezclar uniforme e íntimamente los ingredientes activos con portadores líquidos, portadores sólidos finamente divididos o ambos y luego formar el producto a la presentación deseada si es necesario. Desintegrantes pueden ser incorporados en formas de dosificación sólida para facilitar la disolución rápida. Lubricantes también pueden ser incorporados para facilitar la manufactura de las formas de dosificación (por ejemplo, tabletas) .
Formas de dosificación parenteral Las formas de dosificación parenteral pueden ser administradas a pacientes mediante varias rutas incluyendo subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección de bolo) , intramuscular e intraarterial . Debido a su administración, comúnmente evaden las defensas naturales del paciente contra contaminantes, las formas de dosificación parenteral son específicamente estériles o aptas de ser utilizadas antes de administración a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen soluciones preparadas para inyección, productos secos preparados para ser disueltos o suspendidos en un vehículo aceptable farmacéuticamente para inyección, suspensiones preparadas para inyección y emulsiones .
Vehículos apropiados que pueden ser usados para proveer formas de dosificación parenteral de la invención son bien conocidos para aquellos experimentados en el arte. Ejemplos incluyen: aguas para inyección USP; vehículos acuosos tale4s como inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de Dextrosa, inyección de Dextrosa y cloruro de sodio, e inyección de Ringer lactada; vehículos miscibles en agua tales como alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol y vehículos no acuosos tales como aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo.
EJEMPLOS Modelo de enfermedad de Encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) Ratones knockout y compuestos comprobados en el modelo de enfermedad de EAE que se llevó a cabo en general como se describe a continuación.
Modelo de ratón . Aquí se implemento una adaptación de método de Bettelli, et al., J. Immunol . 161:3299 (1998). Compañeros de carnada C57Bl/6-Albino/129SvEv de 8 a 12 semanas de edad fueron inmunizados subcutáneamente con un total de 300 \iq de péptido MOGp35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK) emulsificado en adyuvante de Freund completo (CFA) que contiene 250 µg de H37 Ra de Mycobacterium tuberculosis desactivado térmicamente (Laboratorios Difco) . El antígeno fue dividido igualmente a través de dos sitios de inyección en los flancos abdominales. E inmediatamente enseguida de la inyección del antígeno emulsificado (día 0), cada ratón recibió una inyección intravenosa de 500 ng de toxina de Pertussis (List Biological Laboratories) . Los pesos de los animales fueron registrados antes del inicio del experimento y monitoreados en todo el experimento, 2-3 veces por semana. La severidad de la enfermedad fue puntuada en una escala como sigue: 0 = asintomático, ningún signo detectable de enfermedad; 1 = ligera debilidad en la cola/cola flexible y/o cuartos traseros caídos; 2 = parálisis total definida de la cola; 3 = anadeo suave/paso distorsionado y parálisis total de la cola y/o reflejo de enderezamiento deteriorado suave; 4 = anadeo pesado con control deteriorado-debilidad de los cuartos traseros y/o reflejo de enderezamiento deteriorado; 5 = parálisis de uno de los cuartos traseros posiblemente con debilidad de extremidad anterior moderada; 6 = parálisis de ambos cuartos traseros y/o debilidad de extremidades anteriores moderada a severa; 7 = cuadriplej ia/parálisis de todas las extremidades-posterior y anterior; 8 = moribundo/muerte. Cuando la severidad de EAE tuvo una puntuación de "2" o mayor una fuente de agua adicional que consiste de Napa Néctar™, y alimento pre-humedecido fueron colocados en el piso de la jaula. Se dio a los animales con inicio severo de la enfermedad una terapia de fluidos subcutánea que consiste de un Ice de solución salina normal un mínimo de una vez al día. Los animales que muestran puntuaciones de 7-8 sin signos de recuperación por más de 2 días fueron sacrificados.
Modelo de rata . Se produjo el EAE en ratas de acuerdo con Mannie, M. D., et al., Proc Nati. Acad. Sci. U.S. .82:5515-5519 (1985) . Un péptido sintético que consiste de una secuencia análoga a la determinante encefalitogénico de longitud mínima reportado de la molécula de proteína básica de mielina bovina (MBP) molécula (MBP68-82: YGSLPQKAQRPQDEN) . Ratas de Lewis (150-200 gramos, hembras; Laboratorios Charles River, Wilmington, MA) fueron inyectadas subcutáneamente en ambos lados de la raíz de cola dorsal con 0.1 mi. de una emulsión que contiene lOOpg de péptido MBP encefalitogénico en adyuvante de Freud completo que contiene 200 g de H37Rv de tuberculosis Mycobacterium, sepa Jamaiquina. Los animales inmunizados fueron monitoreados diariamente en cuanto al inicio y avance de la enfermedad, iniciando una semana después de la inmunización. La severidad de la enfermedad fue puntuada como se describe anteriormente. Los animales que muestran puntuaciones de 7-8 sin signos de recuperación por más de 2 días fueron sacrificados.
Modelo de enfermedad de artritis inducida por colágeno (CIA) Ratones knockout y compuestos fueron probados en un modelo de enfermedad de CIA, que fue en general llevado a cabo como se describe posteriormente en la presente.
Modelo de ratón. Ratones DBA/1 de 8 a 16 semanas de edad fueron inmunizados intradérmicamente (i.d.) en varios sitios a la base de la cola con 100 ug de colágeno tipo II de pollo (CII; Sigma Chemical Co.) en adyuvante de Freund completo (CFA; Difco, Detroit, MI) que contiene 2.5 mg/ml de M. tuberculosis, seguido por una inyección i.d. de refuerzo repetida de CII (100 g emulsificado en CFA) dadas 3 semanas después de la inmunización primaria. Los ratones fueron monitoreados diariamente en cuanto a signos de artritis y las puntuaciones de severidad de enfermedad fueron determinados por una puntuación visual de 0 a 4 de acuerdo con la siguiente escala: 0 = sin eritema ni hinchamiento; 1 = eritema e hinchamiento moderado de la pata media o articulación del tobillo; 2 = eritema e hinchamiento moderado que se extiende desde el tobillo a la pata media; 3 = eritema e hinchamiento moderado que se extiende desde el tobillo a las articulaciones metatarsales; 4 = eritema e hinchamiento severo del tobillo, pata y dígitos. Puntuaciones de severidad de enfermedad total fueron registradas como una suma de puntuaciones visuales para cuatro extremidades. Además de la puntuación visual, el espesor de la pata fue medido con un calibrador de micrometro.
Modelo de rata. Se produjo el CIA en ratas de acuerdo con Rosloniec, E. F. , et al., Curr Protoc ImmunolChapter 15:Unit 15, pp. 11-25. Aquí, ratas de Lewis (150-200 g, hembras; Laboratorios Charles River, Wilmington, MA) fueron inyectadas intradérmicamente en la base de la cola con un total de 300 µ? de una emulsión 1:1 de colágeno tipo II bovino (CII; 150 ug total; Sigma-Aldrich) u adyuvante de Freund incompleto (IFA; 150 µ? total; Sigma-Aldrich), seguido por una inyección de refuerzo repetida de la misma emulsión siete días después de la inmunización primaria. Las ratas fueron monitoreadas en cuanto a signos de artritis mediante puntuación clínica (observación visual) de cada pata de la rata, utilizando la escala de clasificación descrita anteriormente. La extensión de hinchamiento fue calculada al restar los valores de referencia de la primera medición de los valores de mediciones subsecuentes.
Modelo de enfermedad de hepatitis inducida por Concanavalina A (ConA) Este modelo se llevó a cabo en general como sigue.
Ratones C57Bl/6-Albino/129SvEv fueron inyectados intravenosamente (i/v) vía la vena de la cola lateral con una sola dosis submortal de Concanavalina A de Canavalia ensiformis (Jack bean, Tipo IV-S, polvo lideilizado, procesado asépticamente; Sigma) administrado a 10-16 mg/kg de peso corporal de ratón en un volumen total de 0.1-0.3 mi. de PBS libre de pirógeno. Las inyecciones de la vena de la cola de ratones restringidas en un recipiente de contención de ratón de plexiglás fueron efectuados sin anestesia, utilizando una jeringa de 1 mi con una aguja calibre 27. A seis y 24 horas post-inyección . Muestras de sangre fueron recolectadas mediante sangrado retro-orbital. Los animales fueron sacrificados y los sueros de las muestras de sangre fueron analizados en cuanto a la presencia de IL-12, TNF-a, MCP-1, IFN-?, IL-10, e IL-6 utilizando un kit de arreglo de férulas citométricas (CBA) de inflamación de ratón (BD Biosciences, Mountain View, CA) , de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los datos fueron adquiridos con un citómetro de flujo FACSCalibur y analizados con los elementos de programación BD CBA (BD Biosciences) . Los marcadores bioquímicos de falla del hígado fueron determinados al medir enzimas de daños al hígado de suero, aspartatos, aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT), utilizando un analizador de químicos clínico estándar. Los hígados de ratones ConA-tratados fueron seccionados y teñidos con H&E para evaluar el grado de hidracíon inmune moderada por célula T.
Ratones knockout MST1 Ratones knockout MST1 (-/-) y sus compañeros de carnada tipo silvestre (C57Bl/6-Albino /129SvEv) fueron criados y evaluados en modelos de enfermedad de EAE, CIA hepatitis inducida con ConA.
En el modelo de EAE, ratones MST1 (-/-) de 8 a 12 semanas de edad y compañeros de carnada (C57Bl/6-Albino /129SvEv) tipo silvestre (+/+) fueron probados. En los ratones tipo silvestre, EAE comenzó tan pronto como el día 8 post-inmunización, con un inicio medio al día 11.4 ± 0.78 y 12.3 ± 0.9 (experimento #1 y experimento #2, respectivamente) . El inicio de la enfermedad fue retardado significativamente en los animales deficientes de ST1 (día 16.6 ± 1.41 en el experimento #1 y dia 15.1 ± 1.1 en el experimento #2; p = 0.005 y 0.06, respectivamente). En la fase de post-inmunización aguda de EAE (días 7-22), hubo una disminución de 4 a 6 veces en la puntuación de enfermedad acumulativa media en ratones MST1 -/- en comparación con sus compañeros de carnada tipo silvestre. Durante esta fase de la enfermedad la puntuación clínica media fue significativamente más baja en los ratones MSTl -/- que en los animales +/+. Además la puntuación de EAE máxima media observada en los animales MST1 +/+ en el día 17 post-inmunización fue significativamente más alta que la puntuación de EAE máxima media en el grupo de MSTl -/-. Así, la deficiencia homociga del gen ST1 retardó significativamente el inicio de EAE en ratones y alivió la severidad de EAE en la fase postinmunización aguda. Conjuntamente, estos resultados demuestran que los ratones MSTl -/- desarrollan EAE menos severo con puntuaciones de enfermedad significativamente más bajos y son menos susceptibles a la enfermedad cuando se comparan con sus compañeros de carnada tipo silvestre.
En el modelo de CIA, ratones MSTl-deficientes de 8 a 16 semanas de edad y ratones testigo (C57Bl/6-Albino /129SvEv) tipo silvestre fueron probados. Como se muestra en la Figura 1, los ratones deficientes de MSTl mostraron una incidencia notablemente disminuida de artritis cuando se comparan con sus compañeros de carnada tipo silvestre (* indica p < 0.03). El hinchamiento de la articulación y signos clínicos de inflamación en el tobillo y articulaciones de la muñeca fueron evidentes en los testigos tipo silvestre del día 21 después de la inmunización inicial, mientras que los primeros signos de artritis tal como son medidos mediante puntuaciones de severidad de artritis de > 2 en los ratones deficientes de MST1 desarrollados solamente en el día 42. Las puntuaciones de artritis acumulativa media en el grupo testigo tipo silvestre permanecieron más altas de 3.5 en todo el experimento. La severidad de artritis fue significativamente disminuida en los ratones deficientes de MST1 con una puntuación de artritis acumulativamente la máxima de 1.8 y una media máxima ? de espesor de tobillo de 70 \i alcanzada al día 49, mientras que la artritis en el grupo testigo comenzó tan temprano como en el día 25 post-inmunización, con una puntuación de artritis acumulativa media de 3.5 al día 28, una puntuación de artritis acumulativa media máxima de 3.2 en el día 46 y una media máxima ? de espesor de tobillo de 485 µ?? alcanzada al día 32. Esta disminución significativa en la severidad de la artritis en los ratones ST1-/-persistió hasta el día 53 después de la primera inmunización. En el modelo de hepatitis Con-A, ratones -/- y tipo Silvestre (C57Bl/6-Albino /129SvEv) fueron probados. El análisis de la producción de citoquina inducida por Con A reveló que los niveles en el suero de IL-12, TNF-a y MCP-1 fueron disminuidos significativamente en ratones MST1-/- en comparación con sus compañeros de carnada tipo silvestre. Similarmente, la liberación de enzimas de nanos al hígado (ALT y AST) en ratones MST-1 -/- fue más baja en ratones deficientes de MST-1 que en ratones tipo silvestre en dos experimentos independientes.
Método General de Síntesis A y Síntesis de 4- (6-amino-5- (1-oxo-1 ,2 , 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl)piridin-3-yl) -N-ciclopropilbencensulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método general A, representado continuación: en donde: a es ácido 1-oxo-l, 2, 3, -tetrahidroisoquinolin-6-ilborónico, PdCl2dppf-DCM, Cs2C03, DMF, 100 °C; b es H2 Pd-C, MeOH : DMF (1:2); c es Br2, MeOH; y d es ácido 4-(N-ciclopropilsulfamoil fenilborónico) , Pd(PPh3)4, aq. a2C03, n- BuOH, 100°C.
En particular, una pasta a temperatura ambiente de 3-bromo-2-nitropiridina (6.4 g. 31.57 mmol), ácido 1-oxo-1, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-ylborónico (6.63 g, 34.73 mmol), PdCl2dppf-DCM (1.031g, 1.26 mmol) y Cs2C03 (15.43 g, 47.35 mmol) en DMF fue sonificada por 20 minutos mientras que se evacúa iterativamente la mezcla de reacción y se vuelve a llenar con N2 anhidro para efectuar la desgasificación. Luego la pasta desgasificada fue calentada a 100°C y la reacción fue monitoreada mediante LC/MS. En la consumación, la reacción fue filtrada y luego concentrada bajo vacio. El material crudo resultante fue redisuelto en MeOH tratado en gel de sílice (15 g) luego concentrado bajo vacío a sequedad, luego sometido a destilación azeotrópica con tolueno para remover el metanol en trazas. El polvo fue convertido en pasta DCM, luego evaporado instantáneamente sobre un tapón alto de sílice, eluyendo con 4-10% MeOH: DCM. Las fracciones puras fueron combinadas y concentradas. El sólido café resultante fue convertido en pasta en DCM (15 mL) , luego filtrado para separar las impurezas coloreadas para proveer 6- ( 2-nitropiridino-3-yl ) -3, -dihidroisoquinolin-l (2H) una como un sólido bronceado (7.4 g, rendimiento del 87%) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 8.63 (d, J=4.5 Hz, 1 H) , 8.23 (d, J=7.8 Hz, 1 H) , 8.04 (s. amplio, 1 H) , 7.86 - 7.98 (m, 2 H) , 7.38 (s, 1 H) , 7.35 (d, J=9.0 Hz, 1 H) , 3.37 - 3.44 (m, 2 H) , 2.95 (t, J=6.3 Hz, 2 H) ; 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) ? ppm 163.78, 156.77, 148.11, 142.04, 139.99, 137.26, 129.76, 128.46, 128.33, 127.63, 127.02, 126.19, 27.52; MS (EI) m/z: 270 [M+H]+; HRMS calculada para C14Hi2 303 [M+H] +270.0879 , encontrado: 270.0870.
Una solución de 6- (2-nitropiridin-3-yl ) -3, 4-dihiodroisoquinolin-1 (2H) -uno (7.4 g, 27.50 mmol) en metanol (100 mi) y DMF (200 mi) fue desgasificada al evacuar iterativamente el matraz de reacción y vuelto a llenar con nitrógeno anhidro (5 X) . A la soluciones desgasificada se agregó 10% Pd sobre carbono (tipo Degussa, 50% en peso de agua, 1.5 g) . La reacción fue cargada con hidrógeno (~1 atm) al evacuar iterativamente el recipiente de reacción y volviendo a llenar con hidrógeno (3 X) . La reacción fue mantenida a temperatura ambiente con agitación vigorosa y monitoreada LC/ S. En la consumación, la reacción fue desgasificada y purgada con nitrógeno como antes, luego calentada a 70 °C y filtrada mientras que está caliente sobre una almohadilla de celita. La almohadilla fue enjuagada con DMF(100 mi) que fue calentada a 120°C. Los orgánicos combinados fueron concentrados bajo vacio y sometidos a azeotrópica con tolueno (2 X 150 mi) para separar la DMF residual .
El sólido obtenido fue tratado con metanol (200 mi) y luego calentado y sonificado para proveer una pasta lechosa.
La pasta fue enfriada a 0°C y tratada con bromo (1.48 mL. 28.88 mmol) mediante adición cuidadosa. La reacción fue monitoreada mediante LC/ S y después de la consumación (15 min) fue concentrada bajo vacio. El material resultante fue almacenado bajo alto vacio de la noche a la mañana para separar el bromo en trazas para proveer 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-yl) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -uno como un sólido café (11.16 g, rendimiento del 100%), que fue usado sin purificación adicional. RMN ltt (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.31 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.03 (s. amplio, 1 H) , 8.00 (d, J=2.0 Hz, 1 H) , 7.95 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 7.45 (s, 1 H) , 7.44 (s, 2 H), 3.38 - 3.45 (m, 2 H) , 2.96 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) d ppm 163.89, 151.88, 144.15, 140.08, 137.31, 136.47, 130.22, 128.00, 127.79, 127.10, 126.28, 104.76, 48.52, 27.70; MS (El) m/z: 318, 320 [M+H]+; HRMS calculado para C14Hi2BrN30 [M+H] +318.0242 , found 318.0234.
Una pasta de bromuro de arilo del bromhidrato de 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-il ) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -uno hidrobromida (6.50 g, 16.25 mmol), ácido 4-(N-ciclopropilsulfamoil) fenilborónico (6.57 g, 17.88 mmol), Pd(PPh3) 4 (565 mg, 0.49 mmol) y 2.0 M aq Na2C03 (4.3 g, 48.75 mmol) en n-BuOH (180 mL) fue desgasificada al hacer burbujear una corriente de nitrógeno anhidro por 10 minutos. La mezcla de reacción fue luego calentada a 100°C por 3 horas. En la consumación, la reacción caliente fue diluida con DMF (300 mL) y calentada a 125°C antes de filtrar la pasta caliente sobre una almohadilla de celite humedecida con DMF caliente. Los orgánicos fueron enfriados a temperatura ambiente, luego tratados con gel de sílice (40 g) y el solvente fue separado bajo vacío. El polvo seco fue convertido en pasta en DCM y cargado encima de un tapón alto de gel de sílice suspendida en DCM y el sistema fue eluído con MeOH al 10-20%. Las fracciones que contienen producto fueron concentradas y el sólido resultante fue suspendido en DMF caliente, luego filtrado. La torta fue enjuagada con MeOH, luego secada bajo vacío para proveer 4- (6-amino-5- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl) piridin-3-il ) -N-ciclopropil-ben-censulfonamida como una polvo blanco (5.3 g, rendimiento del 75%. RMN ?? (400 MHz , DMS0-d6) d ppm 8.62 (d, J=2.0 Hz, 1 H) , 8.34 (d, J=2.0 Hz, 1 H) , 8.13 (s. amplio, 2 H) , 8.07 (s. amplio, 1 H) , 8.04 (d, J=8.6 Hz, 2 H) , 7.99 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 7.88 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.57 (s, 1 H) , 7.56 (s, 2 H) , 3.43 (t, J=5.7 Hz, 2 H) , 2.99 (t, J=6.3 Hz, 2 H) , 2.12 (tt, J=6.8, 3.5 Hz, 1 H) , 0.44 - 0.53 (m, 2 H) , 0.36 - 0.44 (m, 2 H) ; MS (El) m/z: 435 [M+H]+.
Método General de Síntesis B y Síntesis de 5- (6-amino-5- (1-oxo-1 ,2 , 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl)piridin-3-yl) -N-etiltiofen-2-sulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método general B, representado a continuación: en donde: a es 1 N NaHC03:DCM (1:1); b es MeLi, t-BuLi, B(0i-Pr)3, THF, -78 °C a temperatura ambiente; y c es 5-bromo-N-etiltiofen-2-sulfonamida, PdCl2 (PPh3) 2, MeCN, 2.0 M aq. Na2C03, µ-onda a 140°C por 6 min.
Una solución del bromhidrato de 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-yl) -3, -dihidroisoquinolin-l (2H) -uno (2.00 g, 5.0 mmol), obtenido como se describe en el Ejemplo 5.2, fue enfriado a 0°C en DCM (50 mi) y fue tratado lentamente con solución de NaHC03 acuosa 1 N (25 mL) . La solución enfriada fue agitada vigorosamente por 5 minutos y luego las capas fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre MgS04 filtrada y concentrada luego secada completamente bajo vacio. El sólido canela resultante (1.54 g, 5.0 mmol) fue disuelto en THF (500 mL) , enfriado a -78°C y tratado con una solución de MeLi 1.6M en Et20 (10.3 mL, 16.5 mL) . La reacción fue mangtenida por 15 minutos, antes de la adición gota a gota de t-BuLi 1.7 M (8.8 mL, 14.96 mmol) por 10 minutos. La solución enfriada fue agitada vigorosamente por 45 minutos adicionales antes de la adición de triisopropilborato (5.2 mL, 22.5 mmol) . Se permite que la reacción se caliente a temperatura ambiente por 30 minutos antes del apagado con sat . aq. NH4C1 (1 mL) seguido por agua (5 mL) . El precipitado resultante fue filtrado y lavado con agua fría, luego secado de la noche a la mañana bajo vacio para proveer el ácido ( 6-amino-5- ( 1-oxo-1,2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl) piridin-3-yl) ácido borónico (1.10 g, rendimiento del 78%).RMN XH (400 MHz , D SO-d6) d ppm 8.35 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 7.97 (s. amplio, 1 H) , 7.92 (d, J=7.8 Hz, 1 H) , 7.76 (t, J=5.6 Hz, 1 H) , 7.67 (d, J=2.5 Hz, 1 H) , 7.50 (d, J=3.8 Hz, 1 H) , 7.43 - 7.47 (m, 2 H) , 6.21 (s, 2 H), 2.96 (t, J=6.4 Hz, 2 H) , 2.85 - 2.92 (m, 2 H) ; MS (El) m/z: 284 [M+H]+.
Una mezcla del ácido ( 6-amino-5- ( 1-oxo-l, 2 , 3, -tetrahidroisoquinolin-6-yl) piridin-3-yl) borónico (291 mg, 1.02 mmol), 5-bromo-N-etiltiofen-2-sulfonamide (278 mg, 1.02 mmol), y PdCl2 (PPh3) 2 (35 mg, 0.05 mmol) en r¡-BuOH (3 mL) fue tratada con solución de aq. a2C03 acuosa 2.0 M (1 mL) luego calentado por microondas a 140°C por 6 min. La reacción fue luego filtrada y purificada mediante HPLC para proveer la 5-(6-amino-5- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl ) piridin-3-yl ) -N-etiltiofen-2-sulfonamida como un sólido blanco después de la purificación por HPLC preparativa. RMN XH (300 MHz, MeOH) d ppm 8.31 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.07 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.72 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 7.54 (dd, J=3.8, 2.1 Hz, 1 H) , 7.52 (d, J=1.7 Hz, 1 H) , 7.48 (s, 1 H) , 7.34 (d, J=3.8 Hz, 1 H), 3.57 (dd, J=13.4, 6.5 Hz, 1 H) , 2.93 - 3.15 (m, 2 H) , 1.85 - 2.03 (m, 3 H) , 1.13 (dd, J=14.5, 7.2 Hz, 3 H) ; MS (El) m/z: 429 [M+H]+.
Método General de Síntesis C y Síntesis de of 6- (2-amino-5- (4- (etilsulfonil) fenil)piridin-3-yl) -3 , 4-dihidroisoquinolin- 1 (2H) -ona El compuesto del titulo fue preparado mediante el método general C, representado a continuación: en donde; a es ácido 4- (etilsulfonil) fenilbóronico, Pd(PPh3)4, 2.0 aq Na2C03, n-BuOH, reflux; b es DCM, NBS; y c es ácido 1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-ilborinico, PdCl2 (PPh3) 2, Na2C02, MeCN, H20.
En particular, una pasta aguada de 2-amino-5-bromopridina (1.24 g, 4.67 mmol) , ácido 4- (etilsulfonil) fenilborónico (1.10 g, 5.14 mmol), y Pd(PPh3)4 (0.16 g, 0.13 mmol) en n-BuOH (20 mL) fue tratada con Na2C03 acuosa 2.0 M. (4.5 mL) . La reacción fue barboteada con N2 anhidro bajo sonificación por 10 minutos por la desgasificación y luego sometida a reflujo por 16 horas a 100°C. En la consumación la reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada a sequedad. El residuo fue repartido entre EtOAc (50 mL) y agua (30 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc (2 x 50 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (20 mL) , secados sobre Na2S04 y concentrados. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (30-100% de EtOAc : exano eluyente) para proveer 5- 4- (etillsulfonil ) fenil ) piridin-2-amina como un sólido blanco (0.57 g, rendimiento del 47%). RMN *H (300 Hz, MeOH) d ppm 8.27 - 8.31 (m, 1 H) , 7.91 - 7.98 (m, 2 H) , 7.79 - 7.89 (m, 3 H), 6.71 (dd, J=8.7, 0.7 Hz, 1 H) , 3.30 - 3.35 (m, 2 H) , 3.24 (q, J=7.4 Hz, 2 H) , 1.25 (t, J=7.4 Hz, 3 H) ; MS (El) m/z: 263 [M+H]+.
Una solución a temperatura ambiente de 5- (4-(etilsulfonil) fenil) piridin-2-amina (0.56g, 2.14 mmol) en DCM (15 mL) fue tratada con NBS (0.42g, 2.35 mmol) y la reacción fue mantenida por 1.5 horas. En la consumación, la mezcla fue lavada con solución Na2S204 solución acuosa saturada (10 mL) , seguida por NaHC03 acuosa saturada (10 mL) y salmuera (5 mL) . La capa orgánica fue secada sobre a2S04, luego filtrada y concentrada a 3-bromo-5- (4- (etilsulfonil) fenil) piridin-2-amina (560 mg, rendimiento del 77%) como un sólido anaranjado. R N XH (300 Hz, D SO-d6) d ppm 8.37 - 8.49 (m, 1 H) , 8.15 - 8.25 (m, 1 H) , 7.90 - 7.96 (m, 2 H) , 7.85 - 7.90 (m, 2 H), 6.60 (br. s, 2 H) , 3.34 (q, J=7.4 Hz, 2 H) , 1.11 (t, J=7.4 Hz, 3 H) ; S (El) m/z: 343, 341 [ +H]+.
Una mezcla de la 3-bromo-5- ( 4- (etilsulfonil ) fenil ) pyridin-2-amina (100 mg, 0.29 mmol) , ácido 1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-ilborónico (75 mg, 0.29 mmol), PdCl2(PPh3)2 (7.0 mg, 0.01 mmol) y Na2C03 en MeCN:H20 3:1 fue calentada por microondas a 154 °C por 3 minutos. En la consumación, la mezcla de reacción fue filtrada, luego HPLC preparatoria para proveer 6- (2-amino-5- (4 - (etilsulfonil) fenil) piridin-3-yl ) -3, 4-dihidroisoquinolin-l(2H)-una como un sólido amarillo pálido (48 mg, rendimiento del 41%) después de purificación por HPLC preparatoria de fase inversa. RMN XH (400 MHz, MeOD) d ppm 8.37 (d, J=2.5 Hz, 1 H) , 8.06 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.94 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.89 (d, J=8.5 Hz, 2 H), 7.81 (d, J=2.5 Hz, 1 H) , 7.53 (d, J=l .8 Hz, 1 H), 7.49 (s, 1 H) , 3.56 (t, J=6.7 Hz, 2 H) , 3.19 - 3.27 (m, 2 H), 3.07 (q, J=6.5 Hz, 2 H) , 1.25 (t, J=7.3 Hz, 3 H) ; MS (El) m/z: 408 [M+H]+.
Síntesis de 4- (6-amino-5- (1-oxo-l , 2 , 3 , 4-tetrahidro- isoquinolin-6-yl) piridin-3-yl) -?,?-dietolbencensulfonamida Se aplicó el método general al ácido 4-dietilsulfamoil) femiilborónico, proporcionando 4- (6-amino-5- (1-oxo-l, 2, 3, 4- tetrahidroisoquinolin-6-yl) piridin-3-yl ) -N, N- dietilbencensulfonamida después de purificación por HPLC preparatoria. RMN 1H (400 MHz , MeOD) d ppm 8.33 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.06 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.85 (m, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.76 - 7.82 (m, 3 H), 7.53 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1 H) , 7.48 (s, 1 H) , 4.10 (q, J=7.1 Hz, 4 H) , 3.56 (t, J=6.7 Hz, 2 H) , 3.26 (q, J=7.0 Hz, 6 H) , 3.07 (t, J=6.7 Hz, 2 H) ; MS (El) m/z: 451 [M+H]+.
Síntesis de 4- (6-amino-5- (l-hidroxiisoquinolin-6-yl)piridin- Se aplicó el método general C al ácido 4-(N-etilsulfamoil) fenilborónico y 6- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) isoquinolin-l-ol para proveer la 4- (6-amina-5- (l-hidroxiisoquinolin-6-yl) piridin-3-yl ) -N-etil-bencensulfonamida.RMN lR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 11.31 (d, J=5.3 Hz, 1 H) , 8.47 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.30 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 8.12 (s, 1 H) , 7.96 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.80 - 7.86 (m, 3 H), 7.64 (dd, J=8.3, 1.5 Hz, 1 H) , 7.58 (dd, J=11.3, 5.5 Hz, 1 H) , 7.23 (dd, J=12.8, 6.8 Hz, 1 H) , 6.60 (d, ^=7.0 Hz, 1 H) , 2.75 - 2.84 (m, 2 H) , 0.98 (t, J=7.3 Hz, 3 H) ; MS (El) m/z: 421 [M+H]+.
Síntesis de 4- (2-amino-5- (4- (N-ciclopropilsulfamoil) -fenil) iridin-3-yl) benzamida Se aplicó en método general B a la 4-bromo-N-ciclopropilbencensulfonamida (41 mg, 0.15 mmol) , ácido 6-amino-5- (4-carbamoillfenil) piridin-3-ilborónico (53 mg, 0.15 mmol), para dar la 4- (2-amino-5- (4- (N-ciclopropil-sulfamoil) fenil) piridin-3-yl) benzamida como un sólido blanco (29 mg, rendimiento del 41%) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.42 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.03 (s. amplio, 1 H) , 7.98 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.90 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.87 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 7.80 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.76 (d, J=1.5 Hz, 1 H) , 7.61 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.37 (s. amplio, 1 H) , 6.06 (s. amplio, 2 H) , 2.06 - 2.13 (m, 1 H) , 0.42 - 0.50 (m, 2 H) , 0.35 - 0.42 (m, 2 H) ; MS (EI) m/z: 409 [M+H]\ Síntesis de 4- (6-amino-5- (1-oxo-l ,2 , 3 , -tetrahidroiso-quinolin-6-yl) piridin-3-yl) -N-etilbencensulfonamida Se aplicó en método general B a la 4- ( 6-amino-5-bromopiridin-3-yl) -N-etilbencensulfonamida (50 mg, 0.141 mmol) y el ácido 4- (N-etilsulfamoil) fenilborónico (64 mg, 0.336 mmol) para proveer la 4- ( 6-amino-5- ( 1-oxo-l, 2 , 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl) piridin-3-yl ) -N-etilbencensulfo-namida como un sólido blanco (28 mg, rendimiento del 47%) después de la purificación mediante HPLC preparatoria de fase inversa R N XH (400 Hz, METHANOL-d4) d ppm 8.35 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.08 (d, J=7.8 Hz, 1 H) , 7.90 (d, J=S .5 Hz, 2 H) , 7.79 - 7.84 (m, 3 H) , 7.48 - 7.58 (m, 2 H) , 3.57 (t, J=6.8 Hz, 2 H) , 3.08 (t, J=6.8 Hz, 2 H) , 2.93 (q, J=7.8 Hz, 2 H) , 1.08 (t, J=7.3 Hz, 3 H) ; MS (EI) m/z: 423 [M+H]+.
Síntesis de 2 ' -amino-5 '- (4- (N-ciclopropilsulfamoil) fenil) -2,3' -bipiridin-5-carboxamida Se aplicó el método general B a la 4- (6-amino-5-bromopridin-3-yl) -N-ciclopropilbencensulfonamida (112 mg, 0.304 mmol) y ácido 5-carbamoilpiridin-2-ilborónico (75 mg, 0.453 mmol) para proveer la 21 -amino-5 ' - ( 4- (N-ciclopropilsulfamoil ) fenil) -[2,3' -bipiridine] -5-carboxamida como un sólido blanco (35 mg, rendimiento del 28%) después de purificación mediante HPLC . preparatoria de fase inversa. R N XH (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9.07 - 9.16 (m, 1 H) , 8.53 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.47 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.32 (dd, J=14.1, 10.8 Hz, 2 H) , 8.21 (s. amplio, 1 H) , 8.01 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.91 (d, J=2.5 Hz, 1 H) , 7.85 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.79 (s. amplio, 2 H) , 7.61 (s. amplio, 1 H) , 2.06 - 2.18 (m, 1 H), 0.34 - 0.55 (m, 4 H) ; MS (El) m/z: 410 [M+H]+.
Síntesis de la 6- (2-amino-5- (1 , l-dióxido-2 , 3-dihidro-benzo [d] isotiazol-5-il) piridin-3-il) -3 , 4-dihidroisoquinolin-1 (2H) -ona El compuesto del titulo fue preparado de acuerdo método mostrado a continuación. en donde: a es AIBN, NBS, Ph e, 15 h; b es 2C03 12 h; c es Pd(PPh3)4, Na2C03, ácido (6-amino-5- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin-3-il) borónico .
A una solución de 4-bromo-2-metilbencensulfonamida (496 mg, 2.0 mmol) en tolueno (10 mL) a temperatura ambiente se agregó AIBN (383 mg, 2.20 mmol) y N-bromosuccinimida (389 mg, 2.20 mmol). La mezcla fue calentada a 90°C por 2 horas. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente. Se agregó agua (20 mL) y las capas fueron separadas. La capa acuosa fue extraída con EtOAc (3 X 20 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (20 mL) , secados sobre Na2S04, y concentrados bajo presión producida para proveer un sólido amarillo pálido (170 mg, rendimiento de 26%) que fue tomado en DMF (5 mL) y tratado con K2C03 (196 mg, 2.0 mmol) . La reacción fue agitada a temperatura ambiente de la noche a la mañana. Después de filtración y concentración, el residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (4-10% de MeOH/DCM como eluyente) para proveer el 1, 1-dióxido de 5-bromo-2 , 3-dihidrobenzo [d] isotiazol como un sólido blanco (108 mg, rendimiento de 85%) .
Se aplicó el método general B al 5-bromo-2,3-dihidrobenzo [d] isotiazol 1, 1-dióxido (108 mg, 0.44 mmol) y (140 mg, 0.48 mmol) para proveer la 6- (2-amino-5- (1, 1-dióxido-2, 3-dihidrobenzo [d] isotiazol-5-yl ) piridin-3-yl) -3, 4-dihidro-isoquinolin-1 (2H) -una después de purificación mediante HPLC preparatoria de fase inversa. RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 8.35 (br. s, 1 H) , 8.05 - 8.14 (m, 2 H) , 7.86 (s, 2 H) , 7.82 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H) , 7.53 (s, 1 H) , 4.52 (s, 2 H) , 3.57 (t, J=6.8 Hz, 2 H) , 3.09 (t, J=6.5 Hz, 2 H) ; MS(EI) m/ z = 407.5 [M+H]+ Método general D y síntesis de 6 ' -amino-N-ciclopropil-N-metil-5 ' - (1-oxo-l , 2 , 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) -[2,3'-bipiridin] -5-sulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método general D, representado a continuación: en donde a es Sn(Me)4 and Pd(PPh3)4 dioxano, 90 °C; y b es Pd(PPh3)4, -amino-5-bromopiridin-3-yl ) -3, 4-dihidroiso quinolin-1 (2H) -una, dioxan, 90°C.
La 6-cloro-N-etil-N-metilpiridin-3-sulfonamida (2.34 g, 10.0 mmol), tetrametil estaño (1.08 g, 10.00 mmol) y Pd(PPh3)4 (572 mg, 0.50 mmol) fueron mezclado en dioxano (5 mL) . Después de la desgasificación la mezcla fue calentada a 90°C. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El residuo fue luego eobrado instantáneamente sobre alúmina (20-100% cloroformo/hexano como eluyente) para proveer la N-etil-N-metil-6-(trimetolstannil) piridina-3-sulfonamida (1.46 g, rendimiento del 40%) .
Una mezcla de N-etil-N-metil-6- (trimetilstannil ) piridin-3-sulfonamida (225 mg, 0.6 mmol) y 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -una (190 mg, 0.6 mmol) y Pd(PPh3)4 (34 mg, 0.03 mmol) en dioxano (3 mL) fue desgasificada y calentada a 90°C. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice para proveer la 61 -amino-N-etil-N-metil-51 - (1-oxo-l, 2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) - [2, 31 -bipiri-din] -5-sulfonamida como un sólido amarillo (134 mg, rendimiento del 50%). R N *H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.88 (dd, J=17.9, 2.1 Hz, 2 H) , 8.17 - 8.22 (m, 1 H) , 8.10 - 8.16 (m, 2 H), 7.94 (d, J=7.8 Hz, 2 H) , 7.43 - 7.51 (m, 2 H) , 3.41 (s, 2 H) , 3.30 (s, 3 H) , 2.97 (t, J=6.4 Hz, 2 Síntesis de 6- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2 , 3 , -tet.rahidroiso-quinolin-6-il)pirazin-2-il) -N-etil-N, 4-dimetilpiridin-3-sulfonamida Se aplicó el método general D a N-etil-N, 4-dimetil-6-(trimetilstannil) piridin-3-sulfonamida (233 mg, 0.6 mmol) y 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -una (190 mg, 0.6 mmol) para dar la 6- ( 5-amino-6- ( 1-oxo-1,2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-yl) pirazin-2-il ) -N-etil-N, 4-dimetilpiridin-3-sulfonamida como un sólido amarillo (41 mg, rendimiento del 33%) después de purificación mediante HPLC de fase inversa . preparatoria . N R XH (400 MHz, DMSO-c¿6 ) d ppm 8.96 (s, 1 H) , 8.84 (s, 1 H) , 8.14 (s, 1 H) , 7.93 - 8.04 (m, 2 H) , 7.73 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.70 (s, 1 H) , 3.39 - 3.47 (m, 2 H) , 3.23 (q, J=7.3 Hz, 2 H) , 3.01 (t, J=6.5 Hz, 2 H) , 2.81 (s, 3 H) , 2.61 (s, 3 H) , 1.09 (t, J=7.2 Hz, 3 H) ; MS (El) m/ z = 453 [M+l]+.
Síntesis de 6 ' -amino-N-etil-N-metil-5 ' - (6-oxo-5 , 6-dihidro-4H- tieno [2 , 3-c]pirrol-2-il) -[2,3' -bipiridin] -5-sulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método en donde: a es AIBN, NBS, CC14; b es NH3, eOH, DMF; c es K2C03, MeOH : EtOH (1:1); d es Br2, HOAc, agua e es tert-butil (3- (4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) piridin-2- il) carbamato, Pd(PPh3)4, 2.0 M aq. Na2C03, n-BuOH (5 mL) y f es NBS, DMF.
A una solución de 3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (10.0 g, 64.0 mmol) en CC14 (100 mL) se agregó AIBN (180 mg, 1.1 mmol)y N-bromosuccinimida (11.4 g, 64.0 ramol) . La mezcla de reacción fue sometida a reflujo por 10 minutos y luego se agregó una porción de adicional AIBN (460 mg, 2.8 mmol) . Esta reacción fue calentada de la noche a la mañana a 90°C bajo un condensador de reflujo. En la consumación, la reacción fue filtrada sobre un tapón corto de gel de sílice (DCM al 100% como eluyente) . El filtrado fue concentrado y purificado mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 2% /hexano como eluyente) para proveer el 3- (bromometil ) tiofen-2-carboxilato de metilo (9.5 g, rendimiento del 63%) como un sólido blanco. RMN XH (400 Hz, METHANOL-d4) d ppm 7.66 (d, J=5.0 Hz, 1 H) , 7.23 (d, J=5.0 Hz, 1 H) , 4.95 (s, 2 H) , 3.89 (s, 3 H) ; MS (El) miz = 236.1 [M+l]\ A una solución del 3- (bromometil) tiofen-2-carboxilato (9.3 g, 39.6 mmol) en DMF (150 mL) se agregó NH37.0 N en MeOH (150 mL) . Después de agitarse a temperatura ambiente por una hora la reacción fue concentrada y purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (5%-10% MeOH/DCM) para proveer el 3- (aminometil) tiofeN-2-carboxilato de metilo (4.86 g, rendimiento del 72%) como una sólido blanco. RMN XH (400 MHz, METHANOL-d4) d ppm 7.83 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 7.28 (d, J=5.0 Hz, 1 H) , 4.45 (s, 2 H) , 3.94 (s, 3 H) ; MS (El) miz = 172.2 [M+l]+.
Una mezcla de 3- (aminometil) tiofen-2-carboxilato de metilo (4.5 g, 26.3 mmol) y K2C03 (3.64 g, 26.3 mmol) en MeOH:EtOH 1:1 (600 mL) fue calentada de la noche a la mañana bajo reflujo. La reacción fue concentrada y purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50-100% de EtOAc/hexano) para producir 4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6(5H)-una (2.2 g, rendimiento del 60%) como un sólido blanco. RMN XH (400 MHz, METHANOL-d4 ) d ppm 7.87 (d, J=4.8 Hz, 1 H) , 7.17 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 4.39 (s, 2 H) ; MS (El) miz = 140.2 [M+l]+.
Una solución de 4H-tieno [2 , 3-c] pirrol-6 ( 5H) -una (1.0 g, 7.2 mmol) en ácido acético (9 mL) y agua (7 mL) fue enfriada a 0°C. Se agregó Bromo (407 µL, 7.92 mmol) y la reacción fue mantenida a 0°C por 1.5 horas. Em La consumación se agregó agua (30 mL) y la mezcla fue extraída con EtOAc (2 x 50 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con a2SO3(30 mL) acuoso al 6% NaHCC acuoso saturado (30 mL) y salmuera (30 mL) , luego secado sobre Na2S04, filtrado, concentrado. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (5% MeOH/DCM) para producir 2-bromo-4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6 (5H) -una (1.3 g, rendimiento del 83%) como um sólido blanco. MRN XH (400 MHz, METHANOL-d4) d ppm 7.28 (s, 1 H) , 4.39 (s, 3 H) ; MS (El) miz = 140.2 [M+l]+.
Una solución de (3- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) piridin-2-il ) carbamato tert-butilo (736 mg, 2.3 mmol), 2-bromo-4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6 (5H) -una (500 mg, 2.3 mmol) y Pd(PPh3)4 (40 mg, 0.035 mmol) en n-BuOH (5 mL) y 2.0 M Na2C03(4.6 mL) fue desgasificada y La mezcla de reacción resultante fue sometida a reflujo a 110°C por 2 horas. Después de La consumación la reacción fue enfriada a temperatura ambiente, filtrada y lavada con MeOH (10 mL) y aguar (2 X 10 mL) . El sólido fue secado bajo alto vacio produciendo 2- (2-aminopiridin-3-il) -4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6(5H)-una (383 mg, rendimiento del 72%) como un sólido café claro. R N XH (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.40 (br. s., 1 H) , 8.00 (dd, J=5.0, 1.8 Hz, 1 H) , 7.52 (dd, J=7.3, 1.8 Hz, 1 H) , 7.36 (s, 1 H), 6.66 (dd, J=7.4, 4.9 Hz, 1 H) , 5.99 (s, 2 H) , 4.32 (s, 2 H) ; MS (El) m/z= 232.3 [M+l]+.
A una solución de 2- (2-aminopiridin-3-il) -4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6 ( 5H) -una (350 mg, 1.52 mmol) en DMF (5 mL) se agregó NBS (297 mg, 1.67 mmol). Em la consumación La reacción fue concentrada y el residuo fue tomado em MeOH/DCM al 20% (10 mL) luego filtrada y concentrada. Después de secado bajo alto vacio, la 2- (2-aminopiridino-3-il ) -4H-tieno [2 , 3-c] pirrol-6 ( 5H) -una (313 mg, rendimiento del 66%) fue aislada como un sólido café. R;M 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.44 (br. s., 1 H), 8.08 (d, J=2.5 Hz, 1 H) , 7.67 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 7.39 (s, 1 H), 6.27 (br. s., 2 H) , 4.32 (s, 2 H) ; MS (El) m/z= 311.2 [M+l]+.
El método general D fue aplicado a N-etil-N-metil-6-(trimetilstannil) piridin-3-sulfonamida (218 mg, 0.6 mmol) y 2- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -4H-tieno [2, 3-c] pirrol-6 (5H) -una (186 mg, 0.6 mmol) para dar la 6 ' -amino-N-etil-N-metil-5 ' - (6-OXO-5, 6-dihidro-4H-tieno [2, 3-c] pirrol-2-il ) - [2,3'-bipiridin] -5-sulfonamidas como un sólido amarillo (94 mg, rendimiento del 38%) después de purificación mediante HPLC de fase inversa. RMN XH (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.91 (d, J=1.5 Hz, 1 H), 8.87 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.44 (s, 1 H) , 8.26 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.10 - 8.20 (m, 2 H) , 7.43 (s, 1 H) , 6.65 (s, 2 H), 4.35 (s, 2 H) , 3.30 (s, 4 H) , 3.09 (dd, ,7=14.3, 7.0 Hz, 2 H) , 2.72 (s, 3 H) , 1.06 (t, J=l .0 Hz, 3 H) ; MS (EI)m/z = 430 [M+l]+.
Síntesis de 1- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il) fenil) ciclopentan-carbonitrilo Se aplicó el método general A al 1- ( - ( , , 5 , 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) fenil ) ciclopentanecarbonitrilo (149 mg, 0.5 mmol) y 6- (3-amino-6-bromopirazin-2-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (180 mg, 0.5 mmol) para dar 1- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3, 4- tetrahidroisoquinolin-6-il) pira-zin-2-il) fenil) ciclopentanecarbonitrilo como un sólido amarillo (89 mg, 0.22 mmol, rendimiento 44%) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparatoria. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 8.60 (s, 1 H) , 8.02 (d, J=8.3 Hz, 3 H) , 7.96 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.72 - 7.78 (m, 1 H) , 7.70 (s, 1 H) , 7.57 (m, J=8.5 Hz, 3 H) , 3.38 - 3.45 (m, 2 H) , 2.99 (t, J=6.4 Hz, 2 H), 2.37 - 2.46 (m, 2 H) , 2.03'- 2.16 (m, 2 H) , 1.84 - 1.94 (m, 4 H) ; MS (El) m/ z = 410.5 [M+l]+.
Síntesis de 6 ' -amino-N- (ciclopropilmetil) -N-metil-5 ' - (1-oxo- 1,2,3, -tetrahidroisoquinolin-6-il) -[2,3' -bipiridin] -5-sulfo-namida Se aplicó el método general D a la N- (ciclopropilmetil) -N-metil-6- (trimetilstannilo) piridin-3-sulfonamida (233 mg, 0.6 mmol) y 6- ( 2-amino-5-bromopiridin-3-il ) -3 , 4-dihidro-isoquinolin-1 (2H) -ona (190 mg, 0.6 mmol) para dar 6'-amino-N-(ciclopropilmetil) -N-metil-5 ' - (1-oxo-l, 2,3, 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il) - [2, 31 -bipiridin] -5-sulfonamida como un sólido amarillo (127 mg, 0.27 mmol, rendimiento 46%) después de purificación mediante HPLC de fase inversa. RMN H (400 MHz, D SO-d6) d ppm 8.87 (d, J=1.5 Hz, 1 H) , 8.84 (d, J=2.3 Hz, 1 H), 8.05 - 8.19 (m, 3 H) , 7.90 - 7.98 (m, 2 H) , 7.43 - 7.50 (m, 2 H), 6.34 (s, 2 H) , 3.38 - 3.45 (m, 2 H) , 2.97 (t, J =1.0 Hz, 2 H) , 2.91 (d, J=6.8 Hz, 2 H) , 2.80 (s, 3 H) , 0.85 -0.96 (m, 1 H) , 0.43 - 0.51 (m, 2 H) , 0.16 - 0.21 (m, 2 H) ; S {El) m/z = 464.5 [M+l]+.
Síntesis de 61 -amino-N-etil-N, 4-dimetil-5 ' - (1-oxo-l , 2 , 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) -[2,3' -bipiridin] -5-sulfonamida Se aplicó el método general D a la N-etil-N, 4-dimetil-6-(trimetilstannilo) piridin-3-sulfonamida (226 mg, 0.6 mmol) y 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (190 mg, 0.6 mmol) para dar 61 -amino-N-etil-N, 4-dimetil-5 ' - (1-oxo-l , 2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il ) - [2 , 31 -bipiridin] -5-sulfonamidacomo un sólido amarillo (41 mg, rendimiento 33%) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa1. NMR 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.84 - 8.88 (m, 2 H) , 8.56 (s, 1 H) , 8.23 (s, 1 H) , 8.06 (s. amplio, 1 H) , 8.00 (d, J=l .8 Hz, 1 H) , 7.49 - 7.56 (m, 2 H) , 3.38 - 3.48 (m, 2 H) , 3.23 (q, J=l .0 Hz, 2 H) , 3.00 (t, J =6.3 Hz, 2 H), 2.81 (s, 3 H) , 2.61 (s, 3 H) , 1.09 (t, J=l .0 Hz, 3 H) ; MS (EI) m/z= 452.5 [M+l] +.
Método general E y Síntesis de (S) -4- (6-amino-5- (3-metil-5- oxo-2 ,3,4, 5-tetrahidro-lH-benzo [e] - [1 , 4] diazepin-8-il)piri- din-3-il) -N-ciclopropilbencensulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método general E, representado a continuación: en donde: a es (S) -propan-1, 2-diamina, DMF, calentamiento por microondas; b es NaOH, MeOH, 70°C, 2 h; c es HATU, DMF; d es Pd(dba)3, (Bpin)2, 90°C.
Una pasta aguada de 4-bromo-2-fluorobenzoato de metilo (4.66 mg, 20.0 mmol) ( S ) -propan-1 , 2-diamine (2.22 g, 30 mmol) y K2C03 (2.94 g, 3.0 mmol) fue calentada por microondas a 140°C por 15 minutos. Después de · filtración y concentración, el residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre sílice (2-10% MeOH/DCM eluyente) para proveer 2-((2-aminopropil) amino) -4-bromobenzoato de (S) -metilo (2.66 g, 9.20 mmol) como un sólido aceitoso. Este material fue disuelvo en metanol (160 mi) y tratado con NaOH (13.5 g, 200.0 mmol), luego calentado a 70°C de la noche a la mañana. En la consumación, la reacción fue neutralizada a pH ~7 con HC1 aq. conc, y el sólido fue filtrado y lavado con MeOH. El filtrado combinado fue concentrado para proveer ácido (S)-2- ( (2-aminopropil) amino) -4-bromobenzoico como un sólido blanco. Este sólido fue usado sin purificación adicional (2.5 g, 46 % rendimiento, 2 etapas) .
A una solución del ácido (S) -2- ( (2-aminopropil) amino) -4-bromobenzoico (544 mg, 2.0 mmol) crudo y Et3N (731 mg, 7.24 mmol) en DMF se agregó HATU (829 mg, 2.18 mmol). Después de 30 minutos, la mezcla de reacción fue concentrada y purificada mediante After 30 min, the reaction mixture was concentrated y purified by cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-10% MeOH/DCM eluyente) para proveer (S) -8-bromo-3-metil-3, 4-dihidro-lH-benzo [e] [ 1, 4 ] diazepin-5 (2H) -ona como un sólido aceitoso blanco (464 mg, 91% rendimiento) . Este material fue disuelto en dioxano (20 mL) , luego tratado con Pd2(dba)3 (83 mg, 0.09 mmol), PCy3 (121 mg, 0.43 mmol), pinacol éster de boro (595 mg, 2.35 mmol) y KOAc (532 mg, 5.43 mmol), luego calentado a 90°C por 2 h. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente, luego filtrada y concentrada. El material crudo fue sometido a evaporación instantánea sobre gel de sílice (2-10% MeOH/DCM eluyente) para proveer (S) -3-metil-8- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -3, -dihidro-lH-benzo [e] [1,4] diazepin-5(2H)-ona (527 mg, 96% rendimiento) como un sólido amarillo. Se aplicó el método general C a (S ) -3-metil-8- ( 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -3, -dihidro-lH-benzo [e] - [1, 4 ] diazepin-5 (2H) -ona (303 mg, 0.7 mmol) y 4- ( 6-amino-5-bromopiridin-3-il ) -N-ciclopropilbencensulfonamida para dar (S ) -4- ( 6-amino-5- ( 3-metil-5-oxo-2 ,3,4, 5-tetrahidro-lH-benzo-[e] [1,4] diazepin-8-il) piridin-3-il) -N-ciclopropilbencensulfo-namida como un sólido amarillo (180 mg, 33% rendimiento) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa. S(EI) m/z = 464.6 [M+l]+.
Síntesis de 6 ' -amino-N-et.il-N-metil-5 ' - (7-oxo-4 ,5,6,7-tetrahidrotieno [2 , 3-c] iridin-2-il) -[2,3' -bipiridin] -5-sulfo-namida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es P205, MsOH; b es H2NOH-HCl, NaOAc, MeOH, luego PPA, 130°C; c es Br2, HOAc; d es (3- (4 , 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il) piridin-2-il) carbamato de ter-butilo, Pd(PPh3)4, aq. Na2C03, n-BuOH, 100°C; y e es NBS, DMF.
A una suspensión de P205 (25.4 g, 179.0 mmol) en ácido metansulfónico (100 mL) se agregó ácido 3-(tiofen-3-il) propanoico acid (5.0 g, 32.0 mmol) y la reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 h. En la consumación, la reacción fue concentrada y el residuo purificado mediante cromatografía instantánea (20-30% EtOAc/hexano eluyente) para dar 4H-ciclopenta [b] tiofen-6 (5H) -ona (1.34 g, 30% rendimiento) como un sólido café. RMN 1H (300 MHz, MeOH) d ppm 8.14 (d, J= .8 Hz, 1 H) , 7.17 (d, J=4.8 Hz, 1 H) , 2.94 -3.15 (m, 4 H); MS (El) m/ z = 139.2 [M+l]+.
Urna solución de 4H-ciclopenta [b] tiofen-6 ( 5H) -ona (1.34 g, 9.7 mmol) , hidroxilamine HC1 (1.45 g, 20.8 mmol) y NaOAc (7.3 g, 89.0 mmol) en eOH (150 mL) fue agitada de la noche a la mañana a temperatura ambiente. Luego la reacción fue concentrada bajo presión reducida, tomada en EtOAc (100 mL) y filtrada sobre un tapón de gel de sílice, eluyendo con EtOAc. El filtrado fue concentrado, tomado en ácido polifosfórico (100 g) y calentado por 2 h a 130°C. Después de la consumación, la reacción fue apagada al vertirla sobre agua helada (100 mi) . La mezcla de acuosa fue extraída con DCM (2 x 100 mL) y los extractos combinados fueron lavados con NaOH 0.1 M (100 mL) , secados sobre Na2S04, luego filtrados y concentrados. Se aisló la 5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7(4H)-ona (837 mg, 55% rendimiento) como un sólido blando después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20-30% EtOAc/hexano eluyente) . RMN 1H (300 MHz, MeOH) d ppm 7.69 (d, J=5.0 Hz, 1 H) , 7.06 (d, J=5.0 Hz, 1 H) , 3.57 (t, J=7.1 Hz, 2 H) , 2.94 (t, J=7.1 Hz, 2 H) ; MS (El) miz = 154.2 [M+l]+.
A una solución a 0°C de 5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7(4H)-ona (820 mg, 5.36 mmol) en HOAc (7 mL) y agua (5 mL) se agregó bromo (303 µL, 5.9 mmol) y la reacción fue agitada 1.5 h. La reacción fue diluida en agua (30 mi) y la mezcla acuosa fue extraída con EtOAc (2 x 50 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con Na2SO3(40 mL) aq., al 5%, NaHCO3(40 mL) aq. , saturada y salmuera (40 mL) . La fase orgánica fue secada sobre Na2S04, luego filtrada y concentrada. Después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50-100% EtOAc/hexano eluyente) , 2-bromo-5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7 (4H) -ona (906 mg, 73% rendimiento) fue aislado como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 7.10 (s, 1 H) , 3.55 (t, J=7.0 Hz, 2 H) , 2.88 (t, J=7.0 Hz, 2 H) ; MS (El) miz = 233.1 [M+l]+.
Una solución de (3- (4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) piridin-2-il ) carbamato de ter-butilo (416 mg, 1.3 mmol), 2-bromo-5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7 (4H) -ona (300 mg, 1.3 mmol) y Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.02 mmol) en n-BuOH (3 mL) y 2M Na2CC>3 (3 mL) fue desgasificada bajo burbujeo de nitrógeno y la reacción fue calentada 2 h a 100 °C. Después de la consumación, la reacción fue filtada y concentrada bajo presión reducida, luego repartida entre DCM (10 mL) y agua (10 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con DCM (3 x 10 mL) . Los orgánicos combinados fueron secados sobre Na2S04 y concentrados. El concentrado fue suspendido en EtOAc, sonificado y filtrado para proveer 2- (2-aminopiridin-3-il ) -5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7 (4H) -ona (281 mg, 88% rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (300 Hz , MeOH) d ppm 7.99 (dd, J=5.0, 1.3 Hz, 1 H) , 7 62 (dd, J=7.5, 1.4 Hz, 1 H) , 7.25 (s, 1 H) , 6.76 (dd, J=7.5, 5.1 Hz, 1 H) , 3.61 (t, J=7.0 Hz, 2 H) , 2.97 (t, J=7.1 Hz, 2 H) ; MS (El) m/z= 246.3 [M+l] + .
A una solución de 2- (2-aminopiridin-3-il) -5, 6-dihidrotieno [2, 3-c] piridin-7 (4H) -ona (250 mg, 1.02 mmol) en DMF (3 mi) se agregó NBS (199 mg, 1.12 mmol) . La reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 h, luego concentrada y tomada en DCM (10 mL) . La solución orgánica fue lavada con Na2S203 (aq) (sat) , luego secada sobre Na2S04 y concentrada para dar 2- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -5, 6-dihidrotieno [2,3-c] piridin-7 ( 4H) -ona (320 mg, 97% rendimiento) como un sólido anaranjado. RMN 1H (400 MHz, D SO-d6) d ppm 8.06 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 7.73 (s. amplio, 1 H) , 7.66 (d, J=1.8 Hz, 1 H) , 7.29 (s, 1 H), 6.23 (s. amplio, 2 H) , 3.40 - 3.50 (m, 2 H) , 2.83 (t, J=6.9 Hz, 2 H) ; MS (El) m/z= 325.2 [M+l]+.
La etapa final del Método general D fue aplicada a N-etil-N-metil-6- ( trimetilstannilo) piridin-3-sulfonamida (233 mg, 0.6 mmol) y 2- (2-amino-5-bromopiridin-3-il) -5, 6-dihidrotieno [2 , 3-c] piridin-7 ( 4H) -ona (194 mg, 0.6 mmol) para dar 6 ' -amino-N-etil-N-metil-51 - (7-oxo-4 ,5,6, 7-tetrahidrotie-no [2, 3-c] piridin-2-il) - [2, 31 -bipiridin] -5-sulfonamida como un sólido amarillo (140 mg, 0.31 mmol, 53% rendimiento) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.91 (d, J=2.0 Hz, 1 H) , 8.85 (d, J=2.3 Hz, 1 H), 8.26 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.10 - 8.19 (m, 2 H) , 7.73 (singulete amplio, 1 H) , 7.33 (s, 1 H) , 6.62 (s, 2 H) , 3.44 - 3.50 (m, 2 H) , 3.09 (s, 2 H) , 2.86 (t, J=1.0 Hz, 1 H) , 2.72 (s, 3 H) , 1.01 - 1.09 (m, 3 H) ; MS (El) m/ z = 444.5 [M+l]+.
Método general F y Síntesis de 4- (4- (5-amino-6- (5-oxo-2,3, 4 , 5-tetrahidro-lH-benzo [e] [1 , 4] diazepin-8-il)pirazin-2-il) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo El compuesto del titulo fue preparado mediante el Método general F, representado a continuación: en donde: a es NaH, C1CH2CH20CH2CH2C1 , DMSO, 15 h; b es Pd(dppf)Cl2, (BPin)2, KOAc, 90°C, 2 h; c es Pd(PPh3)4, Na2C03, 2-aminopirizina, 90°C, 2 h; d es NBS, DMF, rt, 2 h.
A una suspensión agitada de 2-(4-cloro-fenil) acetonitrilo (3.06 g, 20.3 mmol) a 0°C en DMSO (200 mL) se agregó NaH (1.79 g, 60% en aceite mineral, 44.6 mmol) . La reacción fue agitada a 0°C por 15 min luego a temperatura ambiente por 30 min, dando como resultado una solución morado oscuro. A esta solución se agregó l-cloro-2- (2-cloroetoxi) etano (3.18 g, 22.33 mmol) gota a gota. La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente de la noche a la mañana antes de dilución con 50 mL de agua y neutralización a pH ~ 7.0 con HCl(aq) 1.0 M. La reacción fue extraída con Et20 (3 x 200 mL) y los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (200 mL) , secados sobre Na2S04 y concentrados. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (10-30% EtOAc/hexano eluyente) para proveer 4- (4-chlorofenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo como un sólido cristalino amarillo (4.01 g, 89% rendimiento) (Nota: Este compuesto no se ioniza bien en LC/MS. No tiene una absorción de UV intensa a 220 nM. El Rf de cromatografía de capa delgada es de 0.6 en EA al 30%/hexano).
Una solución de 4- ( 4-clorofenil ) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (889 mg, 4.0 mmol), Pd(dba)2 (138 mg, 0.24 mmol), PCy3 (268 mg, 0.96 mmol), pinacol éster de diboro (1.21 g, 4.8 mmol) y KOAc (1.18 g, 12.0 mmol) en 16 mL de dioxano calentada por microondas a 150°C por 15 min. La mezcla resultante fue filtrada, luego concentrada y purificada mediante cromatografía instantánea sobre sílice (2-5% MeOH/DCM eluyente) para proveer 4- (4- (4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo como un sólido cristalino amarillo (1.01 g, 81% rendimiento) .
Una solución de 4- (4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxa-borolan-2-il) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1.53 g, 4.86 mmol), Pd(PPh3)4 (271 mg, 0.24 mmol) , 2.0 M aq. Na2C03 (4.9 mL) y 5-bromopirazin-2-amina (846 mg, 4.86 mmol) fueron combinados en n-BuOH (20 mL) . La suspensión fue desgasificada por 10 minutos bajo una corriente burbujeante de nitrógeno anhidro, luego calentada a 90°C por 2 h. La mezcla resultante fue filtrada, concentrada y purificada mediante cromatografía instantánea sobre sílice (1-5% MeOH/DCM eluyente) para proveer 4- (4- ( 5-aminopirazin-2-il ) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1.08 g, 79% rendimiento) .
A una solución de 4- (4- (5-aminopirazin-2-il) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1.08 m, 3.84 mmol) en DMF (30 mL) se agregó N-bromosuccinimida (747 mg, 4.22 mmol) en una porción. La reacción fue luego agitada a temperatura ambiente por 1 h. En la consumación, la mezcla fue vertida sobre hielo (50 mL) y agitada por 20 min. Después de filtración y lavado con agua y secado bajo vacío, se obtuvo 4- (4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo como un sólido café oscuro (1.37 g, 100% rendimiento) .
Se aplicó el Método general C a4- ( 4- ( 5-amino-6-bromo-pirazin-2-il ) fenil) tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (215 mg, 0.6 mmol) y 8- (4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2- il) -3, -dihidro-lH-benzo [e] [1, ] diazepin-5 (2H) -ona (173 mg, 0.6 mmol) para proveer 4- ( 4- ( 5-amino-6- ( 5-oxo-2 , 3, 4 , 5-tetrahidro-lH-benzo [e] [1,4] diazepin-8-il ) pirazin-2-il) fenil) -tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo como un sólido amarillo (87 mg, 33% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 8.47 (s, 1 H) , 8.14 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 8.01 (d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.58 (d, <J=8.3 Hz, 2 H) , 7.21 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 7.04 (s, 1 H), 6.40 (s. amplio, 1 H) , 4.93 (s. amplio, 2 H) , 4.57 (s. amplio, 1 H) , 4.12 (d, J=8.8 Hz, 2 H) , 3.94 (t, J=11.7 Hz, 2 H), 3.50 - 3.73 (m, 4 H) , 2.02 - 2.26 (m, 4 H) ; » MS (El) m/z= 441.5 [M+l]+.
Síntesis de 2 ' -amino-5 ' - (4- (N-ciclopropilsulfamoil) fenil) - [2,3' -bipiridin] -5-carboxamida Una mezcla de 2-amino-5-bromopiridina (3.58 g, 20.7 mmol ) , N-ciclopropil-4- (4,4,5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaboro-lan-2-il) -bencenesulfonamida (5.00 g, 20.7 mmol), carbonato de sodio (3.29 g, 31.05 mmol) y PdCl2(PPh3) 2 (0.436 g, 0.62 mmol) en 3:1 acetonitrilo : agua fue calentada por microondas a 80°C por 20 minutos y luego a 100°C por 15 minutos. La reacción fue luego calentada en un baño de aceite a 80 °C por 16 h. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente y filtrada. El sólido fue lavado con METANOL (10 mL) y los filtrados combinados fueron concentrados. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (0-5% eOH/DCM) para dar 4- ( 6-aminopiridin-3-il) -N-ciclopropilbencenesulfonamida (2.08 g, 35% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4 ) d ppm 8.27 (d, J=2.01 Hz, 1 H) , 7.88 - 7.95 (m, 2 H) , 7.85 (d, J=2.51 Hz, 1 H) , 7.81 - 7.84 (m, 1 H) , 7.71 - 7.79 (m, 2 H) , 6.45 - 6.88 (m, 1 H) , 1.89 - 2.41 (m, 1 H), 0.13 - 0.82 (m, 4 H) ; MS (El) m/z: 290 [M+H] + . HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90% : NH4OAc (aq) 10 mM, gradient de 2 minutos) tR = 1.34 minutos, área integrada del 88%.
A una solución de 4- ( 6-amino-piridin-3-il ) -N-ciclo-propilbencensulfonamida (1.04 g, 3.59 mmol) en DCM (12 mL) se agregó de porción en porción N-bromosuccinimida (0.64 g, 3.59 mmol) . La reacción fue agitada por 1 h, luego fue filtrada. El filtrado fue lavado con Na2S204 (aq) (sat) (20 mL) , sat. aq., aHC03 (10 mL) , luego secada sobre Na2S04 y concentrada para dar 4- ( 6-amino-5-bromo-piridin-3-il ) -N-ciclopropil-bencen-sulfonamida (1.07 g, 81% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 8.30 (d, J=2.01 Hz, 1 H) , 8.12 (d, J=2.01 Hz, 1 H), 7.92 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 7.76 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 2.19 (tt, J=6.71, 3.58 Hz, 1 H) , 0.17 - 0.83 (m, 4 H) . MS (El) m/z: 368, 370 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90% : NH4OAc (aq) 10 Mm, gradiente de 2 minutos) tR = 1.68 min, área integrada del 90%.
Una mezcla de 4- (6-amino-5-bromo-piridin-3-il) -N-ciclopropil-bencensulfonamida (100 mg, 0.27 mmol), pinacol éster de diboro (103 mg, 0.41 mmol), acetato de potasio (40 mg, 0.41 mmol), Pd2(dba)3 (8 mg, 0.008 mmol) y PCy3 (5 mg, 0.016 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL) fue calentada a 80°C para proveer 4- [ 6-amino-5- (4,4,5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaboro-lan-2-il) -piridin-3-il] -N-cloropropil-bencensulfonamida (112 mg, 100% rendimiento) después de HPLC preparatoria. Este material fue combinado con 6-cloro nicotinamida (42 mg, 0.27 mmol), Na2C03 (43 mg, 0.41 mmol) y PdCl2(PPh3)4 (6 mg, 0.008 mmol) en acetonitrilo : agua 3:1 (2 mL) . La mezcla de reacción fue calentada por microondas a 150°C por 6 min. En la consumación, la mezcla de reacción fue concentrada y purificada mediante HPLC de fase inversa preparatoria para dar 2 ' -amino-51 - (4- (N-ciclopropilsulfamoil) fenil) - [2, 31 -bi-piridin] -5-carboxamida (7 mg, 6% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 9.11 (d, J=1.25 Hz, 1 H) , 8.53 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.47 (d, J=2.26 Hz, 1 H) , 8.26 - 8.39 (m, 2 H) , 8.21 (s. amplio, 1 H) , 8.00 (d, J=8.53 Hz, 3 H) , 7.91 (d, J=2.51 Hz, 1 H) , 7.76 - 7.87 (m, 4 H) , 7.62 (s. amplio, 1 H) , 2.12 (dd, J=6.53, 3.51 Hz, 1 H) , 0.46 - 0.54 (m, 2 H) , 0.37 -0.45 (m, 2 H) . MS (El) m/z: 410 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, eCN al 10-90% : NH4OAc (aq) 10 mM, gradient de 2 minutos) tR = 1.39 min, área integrada del 96%.
Síntesis de 6' -amino-N-ciclopropil-N-metil-5 ' - (1-???-1,2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-e-il) -[3,3' -bipiridin] -6-sulfonamida Se aplico el Método general C a 6 ' -amino-51 -bromo-N-ciclopropil- [3, 3 ' -bipiridin] -6-sulfonamida (650mg, 1.76mmol) y 61 -amino-5 ' -bromo-N-ciclopropil- [3,3' -bipiridin] -6-sulfo-namida (410mg, 2. llmmol) para proveer 6 ' -amino-N-ciclopropil-N-metil-5 ' - (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) -[3,3'-bipiridin] -6-sulfonamida (130 mg, 16% rendimiento) después de purificación mediante HPLC preparativa. RMN 1H (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 9.11 (d, J=1.8 Hz, 1 H) , 8.51 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 8.39 (dd, J=8.2, 2.1 Hz, 1 H) , 7.93 (s, 3 H) , 7.86 (d, J=2.3 Hz, 1 H) , 7.46 - 7.56 (m, 2 H) , 6.19 (s, 2 H) , 3.36 -3.46 (m, 2 H), 2.96 (t, J=6.4 Hz, 2 H) , 2.88 (s, 3 H) , 2.23 -2.31 (m, 1 H), 0.72 - 0.79 (m, 2 H) , 0.62 - 0.69 (m, 2 H) ;MS (El) m/z = 450.5 [M+l]+.
Síntesis de N- (4- (6-amino-5- (1-oxo-l ,2 , 3 , 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il) piridin-3-il) fenil) etansulfonamida Se aplicó el Método general B al bromhidrato de 6- (2-amino-5-bromo-piridin-3-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (150 mg, 0.38 mmol) y ácido 4- (etilsulfonamida) feniloborónico (96 mg, 0.42 mmol) para dar N- ( 4- ( 6-amino-5- (1-oxo-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin-3-il ) fenil) etansulfonamida (58 mg, 35% rendimiento) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa. RMN 1H (400 MHz, DMS0-d6) d ppm 9.79 (s, 1 H) , 8.28 (d, J=2.51 Hz, 1 H) , 7.92 (d, J=8.03 Hz, 2 H), 7.58 - 7.69 (m, 3 H) , 7.44 - 7.53 (m, 2 H) , 7.26 (d, J=8.78 Hz, 2 H) , 5.96 (s. amplio, 2 H) , 3.41 (td, J=6.53, 2.51 Hz, 2 H), 3.16 (s, 2 H) , 3.09 (q, J=7.28 Hz, 2 H) , 2.96 (t, J=6.40 Hz, 2 H) , 1.20 (t, J=7.28 Hz, 3 H) ; MS (El) m/z: 422 [M+H] + . HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, MeOH al 10-90%:Formiato de amonio (aq) 10 mM, gradiente de 2 minutos) tR = 1.94 min, área integrada del 97%.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2 , 3 , -tetrahidroisoquino-lin-6-il)pirazin-2-il) -N-metil-N- ( (1R,2R) -2-metilciclopro-pil) bencensulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es 2- (dietoxifosforil) acetato de etilo, n-BuLi, MeTHF, 150°C, luego NaOH(aq), 100°C; b es TEA, EtC02Cl, acetona, luego NaN3; (aq) c es PhMe, 100°C, luego alcohol bencílico, CuCl, DMF; d es H2-Pd/C, DCM, luego TEA cloruro de p-bromobencensulfonilo; e es CS2CO3, Mel, DMF.
A una solución de 2- (dietoxifosforil ) acetato de etilo (16.90 mL, 84.37 mmol) en metiltetrahidrofurano (150 mL) se agregó r¡-BuLi (33.0 mL, 82.5 mmol, 2.5 M en hexano) . La reacción fue mantenida a 0°C por 30 minutos antes de la adición de (S) -2-metiloxirano . Luego la mezcla de reacción fue transferida a un reactor de acero revestido de Teflon, sellada y calentada a 150°C por 18 h. El reactor fue enfriado a temperatura ambiente, luego tratado con agua : NaOH (aq) al 30% (2:1) y sometido a reflujo a 100°C por 5 h. La mezcla bifásica fue otra vez enfriada a temperatura ambiente y transferida a un embudo de separación. Las capas fueron separadas y la fase acuosa fue acidificada con HCl(aq) (conc.) (100 mL) y extraída con acetato de isopropilo (3 X 200 mL) mientras que se mantiene la fase acuosa a pH ~ 3. Los orgánicos combinados fueron lavados con HCl al 10% (2 X 100 mL) , filtrados sobre celite y concentrados para proveer el ácido (IR, 2R) -2-metilciclopropancarboxílico (7.9 g, 92% rendimiento) , que fue usado directamente en la siguiente reacción. RMN 1H (400 MHz , CLOROFORMO-d) d ppm 1.40 - 1.52 (m, 1 H), 1.30 - 1.39 (m, 1 H) , 1.20 - 1.28 (m, 1 H) , 1.13 (d, J=6.0 Hz, 3 H) , 0.76 (ddd, J=7.8, 6.5, 4.0 Hz, 1 H) .
A una solución del ácido ( IR, 2R) -2-metil-ciclopropancarboxílico (2.0 g, 20.0 mmol) en acetona anhidra (100 mL) se agregó trietilamina (2.87 mL, 20.6 mmol) y cloroformiato de etilo (1.96 mL, 20.6 mL) . El baño frío fue retirado y se permite que la reacción se caliente a temperatura ambiente por 30 minutos antes de la adición de azida de sodio (1.36 g, 21.00 mmol) en agua (20 mL) . La reacción fue mantenida a temperatura ambiente por 1 h, luego diluida con DCM (300 mL) y agua (200 mL) . Las capas fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con agua (2 x 100 mL) y salmuera (100 mL) luego secada sobre MgS04 y concentrada para proveer azida de ( IR, 2R) -2-metilciclopropancarbonilo (1.8 g, 72% rendimiento) que fue usado directamente en la siguiente reacción. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 1.47 - 1.58 (m, 1 H), 1.35 - 1.42 (m, 1 H) , 1.28 - 1.34 (m, 1 H) , 1.14 (d, J=6.0 Hz, 3 H) , 0.79 - 0.87 (m, 1 H) .
Una solución de azida de (IR, 2R) -2-metilciclo-propancarbonilo (1.80 g, 14.4 mmol) en toluene (100 mL) fue calentada a 90 °C por 1 h. Después que termina el desprendimiento de gas, la solución fue canulada a un matraz que contiene una suspensión de alcohol bencílico (4.5 mL, 43.2 mmol) y cloruro de cobre (I) (750 mg, 7.5 mmol) en DMF (100 mL) . La reacción fue mantenida a temperatura ambiente por 1 h, luego diluida con con Et20 (200 mL) , luego lavada con salmuera, secada sobre MgS04 y concentrada. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20-30% EtOAc/hexano eluyente) para proveer ( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) -carbamato de bencilo (1.68 g, 57% rendimiento). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.27 -7.46 (m, 5 H), 5.11 (s. amplio, 2 H) , 4.80 - 4.99 (m, 1 H) , 2.28 (d, J=3.0 Hz, 1 H) , 1.07 (d, J=5.5 Hz, 3 H) , 0.82 - 0.97 (m, 1 H) , 0.67 (ddd, J=9.0, 5.3, 3.8 Hz, 1 H) , 0.51 (q, J=5.9 Hz, 1 H) .
Una solución de ( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) carbamato de bencilo (1.68 g, 8.2 mmol) en DCM (55 mL) fue cargada con Pd/C al 10% en peso, luego desgasificada y cargada con hidrógeno (50 PSI) . La reacción estaba completa después de 30 minutos y asi fue filtrada sobre celita, enjuagando con DCM (15 mL) . El licor fue enfriado a 0°C y tratada con trietilamina (3.43 mL, 24.6 mmol) y cloruro de 4-bromobencene-l-sulfonilo (2.20 g, 8.61 mmol). El baño frío fue retirado y la reacción fue agitada por 1 h. En la consumación, la reacción fue lavada con HCl(aq) 0.5 M (2 X 20 mL) y salmuera (20 mL) , secada sobre MgS04 y concentrada para proveer 4-bromo-N- ( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) bencensulfo-namida (2.06 g, 87% rendimiento). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.74 - 7.80 (m, 1 H) , 7.66 - 7.72 (m, 1 H), 4.90 (s. amplio, 1 H) , 1.94 (dt, J=3.5, 1.8 Hz, 1 H) , 1.41 (t, J-=7.3 Hz, 1 H) , 0.89 - 1.01 (m, 3 H) , 0.70 - 0.81 (m, 1 H) , 0.35 - 0.45 (m, 1 H) .
Se aplicó el procedimiento apropiado especificado en el Método general F a la conversión de 4-bromo-N- ( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) bencensulfonamida (2.06 g, 7.1 mmol) a N-( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) -4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il ) bencensulfonamida (1.38 g, 58% rendimiento) que fue obtenida después de cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20-40% EtOAc/hexano eluyente) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.96 (s, 2 H) , 7.85 - 7.92 (m, 2 H) , 4.75 - 4.80 (m, 1 H) , 1.88 - 1.93 (m, 1 H) , 1.38 (s, 12 H) , 1.27 (s, 1 H), 0.95 (d, J=l .3 Hz, 3 H) , 0.70 - 0.79 (m, 1 H) , 0.33 - 0.40 (m, 1 H) .
Se aplicó el procedimiento apropiado especificado en el Método general F a la conversión de N- ( ( IR, 2R) -2-metilciclopropil) -4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) bencensulfonamida (676 mg, 1.69 mmol) a clorhidrato de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) pirazin-2-il) -N- ( (IR, 2R) -2-metilciclopropil) bencensulfonamida después de tratamiento con HCl(aq) (350 mg, 45% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 8.34 (d, J=6.5 Hz, 2 H) , 8.11 -8.16 (m, 1 H), 7.97 - 8.03 (m, 2 H) , 7.89 - 7.96 (m, 2 H) , 7.57 - 7.61 (m, 1 H) , 7.54 - 7.56 (m, 1 H) , 3.55 - 3.61 (m, 2 H) , 3.07 - 3.14 (m, 2 H) , 1.84 - 1.89 (m, 1 H) , 0.92 - 0.97 (m, 3 H), 0.80 - 0.89 (m, 1 H) , 0.64 - 0.70 (m, 1 H) , 0.31 -0.38 (m, 1 H) ; MS (El) m/ z = 450.5 [M+l]+.
A una suspensión a temperatura ambiente de clorhidrato de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) -pirazin-2-il ) -N- ( ( IR, 2R) -2-metilciclopropil ) bencensulfonamida (110 mg, 0.227 mmol) y carbonato de cesio (222 mg, 0.681 mmol) se agregó yoduro de metilo (16.0 µ?, 0.251 mmol) . En la consumación, la reacción fue filtrada y concentrada, luego sometida a vaporización instantánea sobre gel de sílice (5-10% MeOH/DCM eluyente) para proveer 4- ( 5-amino-6- ( 1-oxo-1,2,3, -tetrahidroisoquinolin-6-il ) pirazin-2-il ) -N-metil-N-(( IR, 2R) -2-metilciclopropil) -bencensulfonamida (90 mg, 86% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 8.55 (s, 1 H), 8.25 (d, J=7.8 Hz, 1 H) , 8.16 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.92 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.83 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1 H) , 7.70 (s, 1 H) , 5.95 (singulete amplio, 1 H) , 5.14 (singulete amplio, 2 H) , 3.66 (dt, J=7.0, 2.3 Hz, 2 H) , 3.14 (t, J=l .0 Hz, 2 H) , 2.76 (s, 3 H), 1.48 - 1.53 (m, 1 H) , 1.27 - 1.35 (m, 1 H) , 1.06 (d, J=6.3 Hz, 3 H) , 0.96 - 1.02 (m, 1 H) , 0.47 (dd, J=12.3, 6.0 Hz, 1 H) ; MS (El) m/ z = 464.5 [M+l]+.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2 , 3 , 4-tetrahidroisoquino-lin-6-il)pirazin-2-il) -N-etil-N, 2-dimetilbencensulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es N-metiletilamina, CH2CI2, 20°C, 2 h ; b es PdCl2 (dppf) -CH2CI2, (BPin)2, 85°C, 2 h.
A una solución de cloruro de 4-bromo-2-metilbencensulfonilo (1.00 g, 3.71 mmol) en CH2C12 (10 mL) se agregó N-etildiisopropilamina (0.71 mL, 4.31 mmol) y N-metiletilamina (0.96 mL, 11.13 mmol). El baño frío fue retirado y la reacción fue agitada por 2 h. En la consumación, la reacción fue concentrada y el material crudo fue disuelto en en CH2CI2 (20 mL) . La mezcla fue lavada con HC1 acuoso 0.5 N (3 x 10 mL) , NaHC03 (aq) (sat) (2 X 10 mL) , agua (10 mL) y NaCl acuosa saturada (5 mL) , secada (Na2S04) y concentrada para dar 4-bromo-N-etil-2 , N-dimetil-bencen-sulfonamida (0.91 g, 3.11 mmol, 85% rendimiento) . Este material fue disuelto directamente en 1,4-dioxano (10 mL) y tratado con pinacol éster de bisboro (0.87 g, 3.43 mmol), PdCl2 (dppf ) -DCM (69 mg, 0.093 mmol) y KOAc (0.92 g, 9.34 mmol) . La reacción fue calentada a 85°C por 2 h. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El material crudo fue tratado con CH2C12 (30 mL) y agua (10 mL) . La capa orgánica fue lavada con agua (2 x 10 mL) y salmuera (5 mL) , secados sobre Na2S04 y concentrada. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (5-20% EtOAc:hexano eluyente) para dar N-etil-2 , N-dimetil-4-(4,4,5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il ) -bencensulfo-namida (0.64 g, 60% rendimiento). RMN 1H (300 MHz, MeOH) d ppm 7.80 - 7.88 (m, 1 H) , 7.68 - 7.77 (m, 2 H) , 3.26 (q, J=7.12 Hz, 2 H) , 2.83 (s, 3 H) , 2.61 (s, 3 H) , 1.37 (s, 12 H) , 1.17 (t, J=7.15 Hz, 3 H) . MS (El) m/z: 340 [M+H] + . HPLC (Sunfire C18 4.6 rara x 50 rara, 10-90% MeCN:10 mM aq NH4OAc, gradiente de 2 minutos) tR = 2.48 min, área integrada del 91%.
Una solución de N-etil-2, N-dimetil-4- (4 , 4, 5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il ) -bencensulfonamida (140 mg, 0.42 mmol) , 6- (3-amino-6-bromopirazin-2-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-1 (2H) -ona (150 mg, 0.38 mmol) Pd(PPh3) (13.2 mg, 0.011 mmol) y 2.0 M aq. Na2C03 (0.38 mL) en n-butanol (2 mL) fue calentada por microondas a 150°C por 10 min para proveer 4- (5-amino-6- (l-oxo-1,2, 3, 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il) pirazin-2-il) -N-etil-N, 2-dimetilbencensul-fonamida (49 mg, 29% rendimiento) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.69 (s, 1 H) , 8.04 (s, 1 H) , 7.93 - 8.02 (m, 3 H) , 7.82 (d, .7=8.28 Hz, 1 H) , 7.67 - 7.77 (m, 2 H) , 6.62 (s, 2 H), 3.43 (td, J=6.40, 2.51 Hz, 2 H) , 3.18 (q, J=6.94 Hz, 3 H) , 3.00 (t, J=6.53 Hz, 2 H) , 2.76 (s, 3 H) , 2.59 (s, 3 H) , 1.08 (t, J=7.15 Hz, 3 H) . MS (El) m/z: 452 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, 10-90% MeCN:10 m aq NH4OAc, gradiente de 4 minutos) tR = 2.14 min, 100% área integrada.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2,3, 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il)pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfo-namida Se aplicó el Método general C a 4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il ) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (383 mg, 1.00 mmol) y 6- (4 , 4 , 5,.5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (300 mg, 1.1 mmol) para proveer 4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (382 mg, .85% rendimiento) después de purificación mediante HPLC. R N 1H (400 MHz, DMS0-d6) d ppm 8.73 (s, 1 H), 8.26 (d, J= .5 Hz, 2 H) , 8.03 (s. amplio, 1 H) , 7.97 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.84 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.74 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.70 (s, 1 H) , 3.42 (t, J=5.3 Hz, 2 H) , 2.99 (t, J=6.4 Hz, 2 H) , 2.67 (s, 3 H) , 1.77 - 1.86 (m, 1 H) , 0.61 - 0.81 (m, 4 H) ; MS (El) m/z = 450.5 [M+l]+.
Síntesis de 2- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l , 2 , 3 , 4-£ß¾:G?????3:??3?-quinolin-6-il)pirazin-2-il) fenil) ^-metilpropannitrilo Se aplicó el Método general B al ácido 4- (2-cianopropan-2-il) feniloborónico (79 mg, 0.42 mmol) y 6- (3-amino-6-bromopirazin-2-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (150 mg, 0.38 mmol) en .n-butanol (2 mL) para dar 2- { 4- [ 5-amino-6- ( 1- oxo- 1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolin-6-il) -pirazin-2-yl] -fenilo}-2metil-propionitrilo (119 mg, 82% rendimiento) después de purificación mediante cromatografía sobre sílice (2-5% MeOH/DCM eluyente) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.59 (s, 1 H), 8.02 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 7.96 (d, J=8.03 Hz, 2 H) , 7.75 (dd, J=8.03, 1.25 Hz, 1 H) , 7.70 (s, 1 H) , 7.58 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 6.45 (s, 2 H) , 3.43 (td, J=6.40, 2.51 Hz, 2 H), 2.99 (t, J=6.40 Hz, 2 H) , 1.71 (s, 6 H) . MS (El) m/z: 384 [M+H] + . HPLC (Shim-Pack VP ODS 4.6 mm x 50 mm, 10-90% 95%MeOH, 5% agua con TFA al 0.1%, gradiente de 4 minutos) tR = 3.22 min, área integrada del 99%.
Método general G y Síntesis de 4- (5-amino-6- (l-oxo-2 , 3 , 4 , 5-tetrahidro-lH-benzo [c] azepin-7-il)pirazin-2-il) -N-etil-N-metilbencensulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el Método general G, representado a continuación: en donde: a es NaH, (TfO)2NPh, THF; y b es pinacol éster de diboro, Pd(dppf)Cl2, KOAc, dioxano, 90 °C.
A una solución a temperatura ambiente de 7-hidroxi-2, 3, 4, 5-tetrahidro-lH-benzo [c] azepin-l-ona (2.3g, 12.9mmol) en THF (100 mL) se agregó (671 mg, 16.7 mmol) , seguido por 1, 1, 1-trifluoro-N-fenilo-N- ( (trifluorometil) sulfonil) -metan-sulfonamida (5.98 g, 16.77 mmol). La reacción fue agitada a temperatura ambiente por 2 h, luego apagada con NH4C1 acuoso saturado y extraída con EtOAc (3 X 50 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera, secados sobre a2S04 y concentrados. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20% EtOAc/hexano eluyente) para proveer trifluorometansulfonato de l-oxo-2, 3, 4, 5-tetrahidro-lH-benzo [c] azepin-7-ilo (12.9 mmol, 77% rendimiento) MS (El) m/ z =310 [M+l]+.
Una suspensión acuosa desgasificada de trifluorometansulfonato de l-oxo-2, 3, 4 , 5-tetrahidro-lH-benzo [c] azepin-7-ilo (4.0 g, 12.9 mmol) pinacol éster de diboro (9.9 g, 39.0 mmol), KOAc (1.9 g, 19.5 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (963mg, 1.3 mmol) en dioxano (8 mL) fue calentada a 90°C por 1.5 h. En la consumación, la reacción fue filtrada y concentrada, luego purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (30% EtOAc/hexanos eluyente) para proveer. 7- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il) -2, 3, 4 , 5-tetrahidro-lH-benzo [c] azepin-l-ona (1.5 g, 41% rendimiento). S (El) miz =288 [M+l]+.
Se aplicó el Método general C a 7- (4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -2, 3, 4, 5-tetrahidro-lH-benzo [c] aze-pin-l-ona(95 mg, 0.33 mmol) y 4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il) -N-etil-N-metilbencensulfonamida (108 mg, 0.29 mmol) para proveer 4- (5-amino-6- (l-oxo-2, 3, 4, 5-tetrahidro-lH-benzo [c] -azepin-7-il) pirazin-2-il ) -N-etil-N-metilbencensulfonamida (33 mg, 22% rendimiento) después de purificación mediante HPLC preparatoria. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.70 (s, 1 H) , 8.22 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 8.12 (t, J=5.8 Hz, 1 H) , 7.80 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.71 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1 H) , 7.62 - 7.66 (m, 2 H) , 6.66 (singulete amplio, 2 H) , 2.93 - 3.09 (m, 4 H) , 2.83 (t, J=1.0 Hz, 2 H) , 2.67 (s, 3 H) , 1.94 (dd, J=12.3, 6.0 Hz, 2 H), 1.03 (t, J=7.2 Hz, 3 H) ; MS (El) miz = 452.5 [M+l]+.
Síntesis de 6- (3-amino-6- (4- (l-ciclopropiletoxi) fenil) -pirazin-2-il) -3 , -dihidroisoquinolin-l (2H) -ona El compuesto del titulo fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es NaH, 1-ciclopropiletanol, DMF, 100°C; b es Pd(dppf)Cl2, (BPin)2, KOAc, 90°C, 2 horas.
A una suspensión de NaH (460 mg, 11.4 mmol, dispersión al 60% en peso en aceite mineral) en DMF (14 mL) se agregó 1-ciclopropiletanol (0.79 mL, 7.41 mmol) gota a gota. El baño fri fue retirado por 30 minutos antes de la adición de 1-bromo-4-fluorobenceno (1.00 g, 5.7 mmol) . La mezcla de reacción resultante fue calentada a 100°C por 3 h. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El aceite resultante fue diluido con agua (30 mL) y extraído a EtOAc (3 x 30 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (20 mL) , luego secados sobre MgS04 y concentrados para proveer l-bromo-4- ( 1-ciclopropiletoxi) benceno (1.30 g, 95% rendimiento) . El aceite resultante fue usado directamente sin purificación adicional.
Una suspensión de l-bromo-4- ( 1-ciclopropiletoxi) benceno (1.30 g, 5.39 mmol), 4 , 4 , 4 ' , 4 ' , 5 , 5 , 5 ' , 5 ' -octametil-2 , 2 ' -bi (1, 3, 2-dioxaborolano) (1.77 g, 7.01 mmol), PdCl2dppf-DCM (197 mg, 0.27 mmol), KOAc (1.06 g, 10.78 mmol) en DMF (12 mL) fue calentada a 100°C por 2 h. En la consumación, la reacción fue concentrada, luego purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20-40% EtOAc/hexano eluyente) para proveer 2- (4- (1-ciclopropiletoxi) fenil) -4, , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolano (1.38 g, 88% rendimiento) .
Se aplicó el método general A a 2-(4-(l-ciclopropiletoxi) fenil ) -4,4,5, 5-tetrametil-l , 3,2-dioxaborolano (639 mg, ,2.00 mmol), proporcionando 6-(3-amino-6- (4- (1-ciclopropiletoxi) fenil) pirazin-2-il) -3,4-dihidroisoquinolin-1 (2H) -ona (321 mg, 40% rendimiento) después de purificación mediante HPLC de fase inversa preparativa. ^ 1H (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 8.50 (s, 1 H) , 8.00 (s. amplio, 1 H) , 7.95 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.88 (d, J=8.8 Hz, 2 H) , 7.72 - 7.77 (m, 1 H) , 7.70 (s, 1 H) , 6.97 (d, J=8.8 Hz, 2 H) , 6.30 (s, 2 H) , 3.94 - 4.04 (m, 1 H) , 3.42 (td, J=6.4, 2.5 Hz, 2 H) , 2.99 (t, J=6.5 Hz, 2 H) , 1.29 (d, J=6.0 Hz, 3 H) , 1.09 (dt, J=8.0, 4.9 Hz, 1 H) , 0.43 - 0.53 (m, 2 H) , 0.25 - 0.39 (m, 2 H) ; MS (El) m/ z = 401.5 [M+l]+.
Síntesis de 6- (2-amino-5- (4- (2- (dimetilamino)propan-2-il) fenil) piridin-3-il) -3 , 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: A una solución de 2- (4-bromofenil) propan-2-amina (500 mg, 2.34 mmol) en DCM (30 mL) se agregó formaldehído acuso al 37% (525 µ?,, 7.0 mmol), Na2S04 (100 mg) y STAB (2.98 g, 14.0 mmol) . Después de agitación 2 horas a temperatura ambiente, la reacción fue repartida entre NaHC03 (aq) (sat) (20 mL) y DCM (20 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con DCM (2 x 30 mL) . Los orgánicos combinados fueron secados sobre Na2S04, filtrados y concentrados para proveer 2- ( 4-bromofenil ) -N, N-dimetilpropan-2-amina (464 mg, 82% rendimiento) como un aceite amarillo. RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) ? ppm 7.45 (d, J=6.0 Hz, 4 H) , 2.16 (s, 6 H) , 1.40 (s, 6 H) ; MS (El) m/z = 243.2 [M+l]+.
Se aplico el Método general G a 2- ( 4-bromofenil ) -N, N-dimetilpropan-2-amina (450 mg, 1.86 mmol), para proveer N,N-dimetil-2- (4- ( 4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l , 3, 2-dioxaborolan-2-il) -fenil) propan-2-amina (300 mg, 56 % rendimiento) después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50-100% EtOAc/hexanos ) . MS (El) m/ z = 290.2 [M+l]+.
Se aplicó el Método general C a N, N-dimetil-2- ( 4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3 , 2-dioxaborolan-2-il ) fenil ) propan-2-amina (109 mg, 0.38 mmol) y bromhidrato de 6- (2-amino-5-bromopiridin-3-il ) -3 , 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (125 mg, 0.31 mmol) para proveer 6- (2-amino-5- ( 4- (2- (dimetil-amino) propan-2-il) fenil) piridin-3-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (14 mg, 11% rendimiento) como un sólido blanco después de purificación mediante cromatografía instantánea. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.32 (s, 1 H) , 7.81 - 8.11 (m, 2 H) , 7.37 - 7.79 (m, 7 H) , 5.87 (s, 2 H) , 3.41 (m, 2H) , 2.85 - 3.10 (m, 2 H) , 2.11 (s, 6 H) , 1.30 (s, 6 H) ; MS (El) m/z = 401.5 [M+l]+.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo-[f] [1 , ] oxazepin-8-il)pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metil-bencensulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: Una solución de 7-bromocroman-4-ona (340 mg, 1.5 mmol) y ácido metansulfónico (3 mL, 23.0 mmol) en DCM fue enfriada a 0°C y tratada con NaN3 (146 mg, 2.25 mmol) de porción en porción, mientras que se mantiene la temperatura interna a menos de 5°C. La reacción fue luego agitada a 0°C por 4 h. En la consumación, la reacción fue neutralizada lentamente con NaOH(aq) 8 N, luego diluida con DCM (20 mL) y agua (20 mL) . Las capas fueron separadas y los orgánicos fueron secados sobre MgSCj, filtrados y evaporados para proveer 8-bromo-3, -dihidrobenzo [f] [1, 4 ] oxazepin-5 (2H) -ona (370 mg, 100% rendimiento) .MS (El) m/z=242.1 [M+l]+.
Se aplicaron sucesivamente los métodos generales G y C a 8-bromo-3, 4-dihidrobenzo [f] [1, 4] oxazepin-5 (2H) -ona (370 mg, 1.5 mmol) para proveer 4- ( 5-amino-6-bromopirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (241 mg, 41% rendimiento, 2 etapas) después de purificación de la mezcla de reacción cruda sobre gel de sílice (2-10% MeOH/DCM eluyente) . RMN 1H (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.72 (s, 1 H) , 8.43 (dd, J=10.3, 4.8 Hz, 1 H) , 8.26 (d, J=8.8 Hz, 2 H) , 7.90 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.85 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 7.54 (dd, J=8.0, 1.8 Hz, 1 H) , 7.41 (d, J=1.5 Hz, 1 H) , 4.31 - 4.40 (m, 2 H) , 3.56 (s, 3 H), 3.33 - 3.43 (m, 1 H) , 2.47 - 2.52 (m, 2 H) , 0.65 - 0.79 (m, 4 H) ; MS (El) m/ z =466.5 [M+l]+.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (l-oxo-3-hidro-4 , 4-dideutero-isoqui-nolin-6-il)pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-Trideuterometil-bencensulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es LiAlD4, A1C13, MeOH; b es Cr03, HOAc, H20 ; c es NaN3, eS03H, DCM ; d es BBr3, DCM; e es PhNTf2, NaH, THF; y f es Pd(dppf)Cl2, (Bpin)2, KOAc, dioxano.
A1C13(4.9 g, 36.7 mmol) y LiAlD4(770 mg, 18.4 mmol) fueron suspendidos en Et20 anhidro (50 mL) y enfriados a 0°C.
Se agregó lentamente 6-metoxi-2, 3-dihidro-lH-inden-l-ona (744 mg, 4.59 mmol) a la suspensión agitada. La reacción fue retirada del baño frío y agitada de la noche a la mañana mientras que se calienta gradualmente a temperatura ambiente.
En la consumación, la reacción fue enfriada secuencialmente mediante adición de agua (5.6 mL) , 15% aq. KOH (5.6 mL) y agua (16.8 mL) . Se agregó Na2S04 y la mezcla fue filtrada.
Los orgánicos fueron concentrados, luego purificados mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (30% EtOAc/hexanos eluyente) para proveer 5-metoxi-3, 3-dideutero-2-hidro-lH-indeno como un aceite claro (500mg, 73% rendimiento. RMN 1H (400 MHz , CLOROFORMO-d) d ppm 7.38 (dd, J=9.00 Hz, 1 H), 7.18 - 7.22 (m, 2 H) , 3.85 (s, 3 H) , 3.06 -3.11 (m, 2 H), 2.71 - 2.75 (m, 2 H) . 5-metoxi-3, 3-dideutero-2-hidro-lH-indeno (500 mg, 3.33 mmol) fue disuelto en ácido acético (10 mL) y una solución de Cr03(1.33 g, 13.32 mmol) en ácido acético acuoso al 50% (10 mL) fue agregado lentamente added. La reacción fue agitada a 50°C por 0.5 h, luego enfriada a 0°C y qapagada con isopropanol (3 mL) . La mezcla de reacción fue repartida entre NaOH(aq) 0.25 N (50 mL) y EtOAc (50 mL) . Las capas fueron separadas y los orgánicos fueron lavados con salmuera, secados sobre MgS04 y concentrados para proveer 5-metoxi-3, 3-dideutero-2-dihidro-inden-l-ona (545 mg, 100% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.70 (S. amplio, 1 H) , 6.91 (s. amplio, 2 H) , 3.89 (s. amplio, 3 H) , 2.67 (s. amplio, 2 H) ;MS (El) miz =165.4 [M+l]+.
Se agregó ácido metansulfónico (1.0 mL, 15.4 mmol) a una solución de 5-metoxi-3 , 3-dideutero-2-dihidro-inden-l-ona (600 mg, 3.65 mmol) en DCM (40 mL) y la solución enfriada a 0°C. Se agregó lentamente azida de sodio (356 mg, 5.48 mmol) de porción en porción a la solución agitada. Después de 6 h a 0°C, la reacción fue apagada con NaOH(aq) 8 N (20 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con DCM (3 X 20 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (30 mL) , secados sobre Na2S04 y concentrados para proveer 6-metoxi-4 , 4-dideutero-3-hidroisoquinolin-l (2H) -ona (500 mg, 76% rendimiento). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.99 (d, J=8.78 Hz, 1 H) , 6.88 (dd, J=8.78, 2.51 Hz, 1 H) , 6.74 (d, J=2.51 Hz, 1 H) , 3.88 (s, 3 H) , 3.60 (s, 2 H) ; MS (El) m/z =180.4 [M+l]+.
A una solución a -78°C de 6-metoxi- , 4-dideutero-3-hidroisoquinolin-1 (2H) -ona (2.9 g, 16.2 mmol) en DCM (150 mL) se agregó una solución preparada recientemente de BBr3 1.0 M en DCM (32.4 mL, 32.4 mmol) . Se permite que la reacción se caliente gradualmente a temperatura ambiente de la noche a la mañana. En la consumación, la reacción fue enfriada a 0°C y apagada cuidadosamente con (10 mL) luego concentrada y purified mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (10% MeOH/DCM eluyente) para proveer 6-hidroxi-4 , -dideutero-3-hidroisoquinolin-l (2H) -ona como un sólido anaranjado brillante (2.33g, 86% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 7.66 (d, J=8.53 Hz, 1 H) , 7.60 (s. amplio, 1 H) , 6.68 (dd, 7=8.53, 2.51 Hz, 1 H),6.61 (d, J=2.26 Hz, 1 H) ; MS (El) m/z=166. [M+l]+.
Una solución a temperature ambiente de 6-hidroxi-4 , 4-dideutero-3-hidroisoquinolin-l (2H) -ona (2.75 g, 16.2 mmol) en THF (150 mL) fue tratada con NaH (1.62 g de una dispersión al 60% en peso en aceite mineral, 40.5 mmol) . La reacción fue agitada por 0.5 h, luego tratada con PhNTf2 (17.36 g, 48.6 mmol) y la reacción fue mantenida a temperatura ambiente por 2 h. En la consumación, la reacción fue enfriada con apagada con NH4Cl(aq) (sat) (50 mL) , luego diluida con agua (50 mL) y extraída con EtOAc (3 X 100 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (100 mL) , luego secados sobre Na2S04 y concentrados. El material crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-10% MeOH/DCM eluyente para proveer trifluorometansulfonato de 1-oxo-3-hidro-4 , 4-dideutero-isoquinolin-6-ilo (3.31g, 69% rendimiento) como un sólido ligeiramente rojo. RMN 1H (400 MHz, DMS0-d6) d ppm 8.14 (s. amplio, 1 H) , 7.99 (d, J=8.53 Hz, 1 H), 7.52 (d, J=2.51 Hz, 1 H) , 7.45 (dd, J=8.66, 2.64 Hz, 1 H), 3.38 (d, .7=2.76 Hz, 2 H) ; MS (El) ffl/z=298.2 [M+l] +.
Una suspensión de trifluorometansulfonato de l-oxo-3-hidro-4 , 4-dideutero-isoquinolin-6-ilo (3.30 g, 11.1 mmol) pinacol éster de diboro (8.45 g, 33.3 mmol), KOAc(1.63g, 16.7mmol) y Pd(dppf)Cl2 (814 mg, 1.1 mmol) en dioxano (50 mL) fue desgasificada y luego calentada a 90°C por 1.5 h. En la consumación, la reacción fue filtrada y concentrada, luego purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (30% EtOAc/hexanos eluyente) para proveer 6- (4, ,5,5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -3-hidro- , -dideutero- isoquinolin-1 (2H) -ona (2.2g, 72% rendimiento). RMN 1H (400 MHz , D SO-d6) d ppm7.99 (singulete amplio, 1 H) , 7.80 (dd, J=1.00 Hz, 1 H) , 7.61 (dd, J=7.78, 5.77 Hz, 2 H) , 7.59 (dd, J=14.00 Hz, 2 H) , 3.34 (d, J=2.26 Hz, 2 H) , 1.29 (s, 12 H) ; MS (EI) m/z= 276.4 [M+l] + . Se aplico el método C a 6- (4,4,5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -3-hidro-4 , 4-dideutero-isoquinolin-1 (2H) -ona (1.14g, 4.15mmol) y 3,5-dibromopirazin-2-amina ( 1. Og, 3.95 mmol) . En la consumación, la mezcla de reacción cruda fue filtrada, luego purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (5-10% MeOH/DCM eluyente) para proveer 4- (5-amino-6- ( l-oxo-3-hidro-4 , 4 -dideutero-isoquinolin-6-il ) pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-Trideuterometilbencensulfonamida (435 mg, 23% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.72 (s, 1 H) , 8.26 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 8.02 (s. amplio, 1 H) , 7.97 (d, J=8.03 Hz, 1 H) , 7.84 (d, J=8.53 Hz, 2 H) , 7.74 (dd, J=8.03, 1.76 Hz, 1 H) , 7.70 (d, J=1.51 Hz, 1 H) , 3.41 (d, J=2.51 Hz, 2 H) , 1.78 - 1.86 (m, 1 H) , 0.72 - 0.79 (m, 2 H) , 0.64 - 0.72 (m, 2 H) ; MS (El) miz = 455.1 [M+1]+.
Síntesis de 4- (6-amino-5- (4 , 4-dimetil-l-oxo-l , 2 , 3 , 4-tetra-hidroisoquinolin-6-il) piridin-3-il) -N-ciclopropilbencen-sulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es TiCl4, ZnMe2, DCM ; b es Cr03, HOAc; c es NaN3, MsOH, DCM; d es (Bpin)2, Pd(dppf)Cl2, KOAc, dioxano.
Una solución 1.0 M de TiCl4 en DCM (50 mL, 49.8 mmol) fue agregada a un recipiente de reacción que contiene DCM (40 mL) enfriada a -40°C. Luego, una solución 2.0 M de dimetil zinc en toluene (35.5 mi, 71.1 mmol) fue agregada lentamente y la solución fue agitada por 20 minutos a -40°C. A esta mezcla se agregó una solución de 6-bromo-2 , 3-dihidro-lH-inden-l-ona (5.0 g, 23.7 mmol) en DCM (40 mi) y se permite que la reacción se caliente lentamente a temperatura ambiente de la noche a la mañana. En la consumación, la reacción fue enfriada a 0°C y apagada con MeOH (10 mL) , luego diluida con agua (50 mL) y DCM (50 mL) . Las capas fueron separadas y La capa orgánica fue lavada con salmuera (50 mL) , secadas sobre Na2S04 filtradas y concentradas. 6-bromo-l , l-dimetil-2 , 3-dihidro-lH-indeno (4.14 g, 78% rendimiento) fue aislado como un aceite claro después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (hexano eluyente) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.22 - 7.33 (m, 2 H), 7.07 (d, J=8.5 Hz, 1 H) , 2.86 (t, J=7.3 Hz, 2 H) , 1.95 (t, J=7.3 Hz, 2 H) , 1.28 (s, 6 H) ; MS (EI)JB/Z = 226.2 [M+l]+.
A una solución de 6-bromo-l, l-dimetil-2, 3-dihidro-lH-indeno (3.6 g, 16 mmol) en ácido acético (50 mL) se agregó una solución de Cr03 (9.6 g, 96.0 mmol) en ácido acético acuoso al 50% (50 mL) . Esta solución fue calentada por 3 h a 60 °C. En la consumación, la mezcla de reacción fue apagada mediante la adición de isopropanol (20 mL) . La reacción apagada fue repartida entre EtOAc (200 mL) y a NaOH acuoso 0.25 M (100 mL) . Las capas fueron separadas y los orgánicos fueron extraídos con EtOAc (2 x 100 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera, secados sobre Na2S04, filtrados y concentrados. Después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50% EtOAc/hexanos eluyente), 5-bromo-3 , 3-dimetil-2 , 3-dihidro-lH-inden-l-ona (2.91 g, 76% rendimiento) fue aislado como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.65 (s, 1 H) , 7.47 - 7.58 (m, 2 H) , 2.58 (s, 2 H) , 1.42 (s, 6 H) ; MS (EI)m/z = 240.1 [M+l]+.
La 5-bromo-3, 3-dimetil-2 , 3-dihidro-lH-inden-l-ona (1.6 g, 6.7 mmol) fue disuelta en DCM (12 mL) y enfriada a 0°C. Luego se agregó MeS03H (1.83 mi, 28.1 mmol), seguido por la adición de porción e porción de NaN3 (653 mg, 10.1 mmol) durante ~10 minutos, mientras que se mantiene la temperatura de reacción interna a menos de 5°C. Se permite que la reacción se caliente a temperatura ambiente y fue agitada 3 h bajo nitrógeno. En la consumación, la reacción fue enfriada a 0°C y apagada con NaOH(aq) 8 M. Después de agitación por 30 minutos at temperatura ambiente, la reacción apagada fue repartida entre DCM (50 mL) y agua (50 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con DCM (2 X 30 mL) .· Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (50 mL) , secados sobre Na2S04, filtrados y concentrados. 6-bromo-4,4-dimetil-3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (711 mg, 40% rendimiento) fue aislada como un sólido blanco después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (eluyendo con 50-100% EtOAc/hexano) . RMN 1H (400 MHz, DMS0-d6) d ppm 8.02 (s. amplio, 1 H) , 7.77 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 7.46 - 7.64 (m, 2 H) , 3.16 (d, J=3.0 Hz, 2 H) , 1.27 (s, 6 H) ; MS (El) miz = 255.1 [M+l]+.
Urna solución de 6-bromo-4, -dimetil-3, 4-dihidroisoquinolin-1 (2H) -ona (500mg, 1.97 mmol), pinacol éster de diboro (752 mg, 2.96 mmol) , KOAc (773 mg, 7.88 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (43mg, 0.06 mmol) en dioxano (7 mLl) fue calentada por 2 horas a 100°C bajo reflujo. En la consumación, la reacción fue enfriada a temperatura ambiente, filtrada y concentrada, luego purificada mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice, (2-5% DCM/MeOH eluyente) . La fracciones que contienen produto fueron concentradas, tomadas en hexanos, sonificadas y filtradas proveer4, -dimetil-6- (4,4,5, 5-tetrametil-l , 3, 2-dioxaborolan-2-il) -3, 4-dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (511 mg, 86% rendimiento) como un sólido blanco. 1H (300 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 8.09 (d, J=l .6 Hz, 1 H) , 7.71 - 7.87 (m, 2 H) , 3.33 (d, J=3.1 Hz, 2 H) , 1.39 (m, J=8.0 Hz, 18 H) ; MS (El) m/z = 302.2 [M+l]+.
Se aplico el método general C a bromhidrato de 4- (6-amino-5-bromopiridin-3-il ) -N-ciclopropilbencensulfonamida (92 mg, 0.25 mmol) y 4, 4-dimetil-6- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il) -3, -dihidroisoquinolin-l (2H) -ona (75 mg, 0.25 mmol) para dar 4- (6-amino-5- (4, -dimetil-l-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin-3-il) -N-ciclopropilbencen-sulfonamida (43 mg, 37 % rendimiento) como un sólido blanco después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-5% MeOH/DCM eluyente) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.61 (s, 1 H) , 8.06 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.96 - 8.02 (m, 2 H) , 7.80 (d, J=l .5 Hz, 1 H) , 7.75 (dd, J=7.5, 1.5 Hz, 1 H) , 7.62 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 6.00 (s, 2 H) , 3.20 (d, J=2.0 Hz, 2 H) , 2.06 - 2.18 (m, 1 H) , 1.33 (s, 6 H) , 0.33 - 0.55 (m, 4 H) ; MS (El) m/ z = 463.6 [M+l]+.
Síntesis de 1- (4- (5-amino-6- (1 ' -oxo-2 ' , 3 ' -dihidro-1 ' H-spiro-[ciclopropan-1 , 4 ' -iso uinolin] -6 ' -il) pirazin-2-il) fenil) -ciclopropancarbonitrilo El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es Me3SBr, n-BuLi, THF, 0°C; b es Et2Zn, TFA, CH2I2, DCM, 0°C; c es KMn04, 1.5 M aq. gS04, acetona; d es H0NH2-HC1, NaOAc, THF, luego MsOH, TEA, THF; y e es BF3- eOH, DCM, luego TiCl4.
Una solución 2.5 M de n-BuLi en hexanos (23.6 mL, 59 mmol) fue agregada gota a gota a una suspensión a 0°C de bromuro de metiltrifenilofosfonio (16.8 g, 47.0 mmol) en THF (200 mL) . Después de 1 h, una solución de 6-bromo-2,3- dihidro-lH-inden-l-ona (10.0 g, 47.0 mmol) en THF (50 mL) fue agregada a la solución resultante y el baño frío de reacción fue retirado. Después de la consumación, la reacción fue apagada con agua (40 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc (2 x 40 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (50 mL) , secados sobre Na2S04, filtrados y concentrados para proveer 6-bromo-l-metilene-2 , 3-dihidro-lH-indeno (6.06 g, 62% rendimiento) como un aceite claro después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (hexano eluyente) . RMN 1H (400 Hz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.61 (d, J=1.5 Hz, 1 H) , 7.32 (dd, J-=8.0, 1.8 Hz, 1 H) , 7.13 (d, J=8.0 Hz, 1 H) , 5.45 (t, J=2.5 Hz, 1 H) , 5.08 (t, J=2.1 Hz, 1 H) , 2.88 - 2.98 (m, 2 H) , 2.78 - 2.86 (m, 2 H) ; S (El) miz = 210.1 [M+l]+.
Una solución en tolueno 1.1 M de dietil zinc. (104.0 mL, 114.8 mmol) fue agregada a un recipient de reacción que contiene DCM (100 mL) y enfriada a 0°C. Se agregó TFA (8.9 mi, 114.8 mmol) a la solución resultante y la reacción fue agitada a 0°C por 15 min. A la solución enfriada se agregó CH2I2 (9.26 mL, 114.8 mmol) y la reacción fue agitada por 15 minutos adicionales a 0°C. Luego, una solución de 6-bromo-l-metilene-2, 3-dihidro-lH-indeno (6.0g, 28.7 mmol) en DCM (90 mL) fue agregada y la reacción fue mantenida a 0°C por otros 15 min, luego se permite que se caliente gradualmente a temperatura ambiente. Después de la consumación, la reacción fue enfriada con NH4Cl(aq) (sat) ( 100 mL) y diluida con DCM ( 200 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue lavada con DCM (2 X 100 mL) . Los orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (100 mL) , secados sobre Na2S04 , luego filtrados y concentrados. Se obtuvo 6 ' -bromo-21 , 3 ' -dihidro-spiro [ciclopropan-1 , 1 ' -indeno (5.9g, 93% rendimiento) después de purificación mediante cromatografía instantánea (hexanos eluyente) como un aceite claro. 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.22 (dd, J=7.9, 1.9 Hz, 1 H) , 7. 05 (d, J=7.8 Hz, 1 H) , 6.78 (d, J=1.8 Hz, 1 H) , 2. 99 (t, J=l .5 Hz, 2 H) , 2.06 - 2.20 (t, 2 H) , 0.83 - 1.03 (m, 4 H) ; MS (El) m/ z = 224.1 [M+l]+.
A una solución de 6 ' -bromo-2 ' , 31 -dihidro-spiro [ciclopropan-1, 1 ' -indeno] (5.7 g, 25.6 mmol) en acetona (78 mL) y 1.5 M aq. MgS04 (29 mL) se agrega KMn04 (4.46 g, 28.2 mmol) . La reacción fue agitada de la noche a la mañana a temperatura ambiente. Después de la consumación, la reacción fue filtrada sobre celite y concentrada. El residuo fue repartido entre agua (100 mL) y EtOAc (200 mL) y las capas fueron separadas. La fase orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre Na2S04 , luego filtrada y concentrada. Se aisló 6 ' -bromospiro [ciclopropan-1, 1 ' -inden] -3 ' (2 ' H) -ona (2.11g, 39% rendimiento) como un sólido blanco después de cromatografía instantánea sobre gel de sílice (5% EtOAc/hexano eluyente) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.59 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 7.45 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1 H) , 7.14 (d, J=1.3 Hz, 1 H) , 2.76 (s, 2 H) , 1.15 - 1.34 (m, 4 H) ; S (EI) m/z = 238.1 [M+l]+.
Una solución de 6 ' -bromospiro [ciclopropan-1 , 1 ' -inden] -3' (2'H)-ona (2.1 g, 8.86 mmol) , hidroxilamina HC1 (1.23g, 17.7 mmol) y NaOAc (4.32g, 53.1 mmol) en MeOH (160 mL) fue agitada de la noche a la mañana a temperatura ambiente. La reacción fue concentrada, suspendida em agua (40 mL) , luego sonificada y filtrada. El precipitado fue secado bajo alto vacio para dar (E) -6 ' -bromospiro [ciclopropan-1, 1 ' -inden] -3' (2'H)-ona oxima (2.23 g, 100% rendimiento) como un sólido blanco. MS (El) m/z = 253.1[M+1]+.
A una solución a 0°C de (E) -61 -bromospiro [ciclopropan-1, 1' -inden] -3' (2'H)-ona oxima (500 mg, 1.98 mmol) en THF (5 mL) se agregó trietilamina (332 µL, 2.38 mmol) seguida por adición lenta de MsCl (170 µL, 2.18 mmol) . La reacción fue agitada 10 minutos a 0°C luego concentrada. El residuo fue titulado de METANOL (5 mL) para proveer (?)-6'-bromospiro [ciclopropan-1, 1 ' -inden] -3 ' (2'H)-ona O-metilsul-fonil oxima (653 mg, 100% rendimiento) como un sólido blanco después de secado bajo alto vacio. RMN 1H (300 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.64 (d, J=S .4 Hz, 1 H) , 7.42 (dd, J=8.3, 1.6 Hz, 1 H) , 6.98 (d, J=l .5 Hz, 1 H) , 3.26 (s, 3 H) , 3.15 (s, 2 H) , 1.06 - 1.42 (m, 4 H) ; MS (El) m/z = 331.2 [M+l]+.
Una solución de (E) -6 ' -bromospiro [ciclopropan-1 , 11 - inden] -3 ' (2 ' H) -ona-O-metilsulfonil oxima (653 mg, 1.98 mmol) en DCM (10 mL) fue enfriada a 0°C. Se agregó BF3'MeOH (362 µL, 4.36 mmol) a la solución enfriada, seguido por adición lenta de TiCl4 (304 µ?·, 2.77 mmol) y la reacción fue mantenida a 0°C por 4 h. En la consumación, la reacción fue apagada con agua (10 mL) . Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue lavada con DCM (2 X 10 mL) . Los orgánicos combinados fueron secados sobre Na2S04, filtrados y concentrados. Se aisló 6 ' -bromo-21 , 3 ' -dihidro-1 ' H-spiro [ciclopropan-1, 4 ' -iso-quinolin] -1 ' -ona (228 mg, 0.90 mmol, 46% rendimiento) como un sólido blanco después de purificación mediante cromatografía instantánea (50-100% EtOAc/hexano eluyente) . RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.98 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 7.46 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) , 7.01 (d, J=1.8 Hz, 1 H) , 5.94 (s. amplio, 1 H) , 3.37 (d, J=2.8 Hz, 3 H) , 0.94 - 1.20 (m, 4 H) ; MS (El) m/z = 253.1 [M+l]+.
Se aplicó el Método general G a 6 ' -bromo-2 ' , 3 ' -dihidro-1 ' H-spiro [ciclopropan-1, 4 ' -isoquinolin] -1 ' -ona (228 mg, 0.90 mmol) para proveer después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50-100% EtOAc/hexanos) , 6' - (4, , 5, 5-tetrametil-l , 3, 2-dioxab rolan-2-il) -2 ' , 3 ' -dihidro-1 ' H-spiro [ciclopropan-1, 4 ' -isoquinolin] -11 -ona (199 mg, 74% rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (300 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 8.12 (d, J=l .6 Hz, 1 H) , 7.77 (dd, J=7.6, 1.0 Hz, 1 H) , 7.30 (s, 1 H) , 3.37 (d, J=2.3 Hz, 2 H) , 1.36 (s, 12 H) , 0.94 - 1.22 (m, 4 H) ; MS (El) m/ z = 300.2 [ +l]+.
Se aplicó el Método general C a 1- (4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il) fenil) ciclopropancarbonitrilo (95 mg, 0.30 mmol) y 6' - (4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -2' , 3' -dihidro-1' H-spiro] [ciclopropan-1 , ' -isoquinolin] 1' -ona (100 mg, 0.33 mmol) para proveer 1- (4- (5-amino-6- (1 ' -oxo-2 ' , 3 ' -dihidro-1 ' H-spiro [ciclopropan-1, 4 ' -isoquinolin] -6 ' -il) pirazin-2-il) fenil) ciclopropancarbonitrilo (44 mg, 36% rendimiento) después de cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-5% MeOH/DCM eluyente) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.76 - 1.07 (m, 4 H) 1.08 - 1.35 (m, 4 H) 1.44 - 1.63 (m, 2 H) 1.65 - 1.86 (m, 2 H) 6.37 (s, 1 H) 7.10 - 7.51 (m, 3 H) 7.68 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 7.83 - 8.28 (m, 4 H) 8.57 (s, 1 H) . MS (El) m/z: 408 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, 10-90% MeCN:10 mM aq NH4OAc, gradiente de 2 minutos) tR = 1.69 min, 100% área integrada.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (3 ' -oxospiro [ciclopropan-1 , 1 ' -isoindolin] -6 ' -il) pirazin-2-il) -N-ciclopropilbencensulfo-namida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es Ti(0iPr) , EtMgBr, Et20 y b es (Bpin)2, Pd(dba)3, P(Cy)3, dioxano.
A una solución de 4-cloro-2-cianobenzoato de metilo (2.0 g, 10.2 mmol) in Et20 (40 mL) se agregó Ti(0iPr)4 (3.43 mi, 11.7 mmol). Después de enfriamiento a 0°C, se agregó lentamente una solución 3.0 M de EtMgBr en Et20 (6.8 mi, 20.4 mmol) . La reacción fue calentada a temperatura ambiente y agitada por 3 h. Después de la consumación, la reacción fue apagada con 1.0 M HC1 (20 mL) luego filtrada sobre celite. Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue lavada con EtOAc (2 X 20 mL) . Los orgánicos combinados fueron secados sobre Na2S04, luego filtrados y concentrados. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-5% MeOH/DCM eluyente) para proveer 6'-clorospiro [ciclopropan-1, 11 -isoindolin] -3 ' -ona (400 mg, 21% rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) d ppm 8.75 (s. amplio, 1 H) , 7.66 (d, J=8.5 Hz, 1 H) , 7.40 - 7.54 (m, 2 H) , 1.47 (dt, «7=11.2, 2.8 Hz, 4 H) ; MS m/zC10H8ClNO [M+l]+ = 194.6.
Urna solución de 6 ' -clorospiro [ciclopropan-1, 11 -isoindolin] -3 ' -ona (380 mg, 1.96 mmol) , bis (pinacolato) de diboro (808 mg, 3.18 mmol), KOAc (677 mg, 6.9 mmol), P(Cy)3 (137 mg, 0.49 mmol) y Pd(dba)3 (180 mg, 0.20 mmol) en dioxano (8 mi) fue calentada de la noche a la mañana a 100°C bajo un condensador de reflujo. En la consumación, se permite que la reacción se enfrie a temperatura ambiente, es diluida en DCM (40 mL) , sonificada y filtrada. El filtrado fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50/100% EtOAc/hexano eluyente) . Las fracciones que contienen producto fueron tomadas en hexanos, luego sonificadas y filtradas para proveer 6' - (4, , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) spiro [ciclopropan-1, 11 -isoindolin] -3 ' -ona (520 mg, 93% rendimiento) como un sólido amarillo. ^ 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 7.70 - 7.91 (m, 2 H) , 7.56 (s, 1 H) , 1.46 - 1.68 (m, 4 H) , 1.15 - 1.43 (m, 12 H) ; MS (El) miz = 286.1 [M+l]+.
Se aplico el Método general B a 4- ( 5-amino-6-bromo-pirazin-2-il) -N-ciclopropil-bencensulfonamida (140 mg, 0.38 mmol) y 6' - (4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il) spiro [ciclopropan-1-1' -isoindolin] 3' -ona (120 mg, 0.42 mmol) para proveer 4- ( 5-amino-6- ( 31 -oxospiro [ciclopropan- 1,1' -isoindolin] -6 ' -il) pirazin-2-il ) -N-ciclopropilbencen-sulfonamida (58 mg, 34% rendimiento) después de purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2-5% eOH/DCM eluyente). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 0.29 -0.58 (m, 4 H) 1.36 - 1.68 (m, 4 H) 2.13 (d, J=2.51 Hz, 1 H) 6.62 (s, 1 H) 7.62 (s, 1 H) 7.74 - 7.96 (m, 5 H) 8.21 (d, J=8.53 Hz, 2 H) 8.70 (s, 1 H) 8.75 (s, 1 H) 8.96 - 9.32 (m, 1 H) . MS (El) m/z: 448 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4.6 mm x 50 mm, 10-90% MeCN:10 mM aq NH4OAc, gradiente de 2 minutos) tR = 1.47 min, 97% área integrada.
Síntesis de 5- (3-amino-6- (4- (N-ciclopropil-N-metilsul-famoil) fenil)pirazin-2-il) -N-metilindolin-l-carboxamida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es metilisocianato, DIEA, THF. una solución de 5-bromoindolina (1.0 g, 5.05 mmol) DIEA (1.9 mL, 11.11 mmol) en THF (40 mL) se agregó metilisocianato (346 mg, 6.06 mmol) . La reacción fue mantenida a temperatura ambiente por 4 h. El precipitado resultante fue filtrado y secado bajo vacío para proveer 5-bromo-N-metilindoline-l-carboxamida (935 mg, 72% rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 7.75 (d, J=8.78 Hz, 1 H) , 7.17 - 7.31 (m, 2 H) , 6.60 (d, J=4.27 Hz, 1 H) , 3.85 (t, J=8.78 Hz, 2 H) , 3.10 (t, J=8.66 Hz, 2 H) , 2.65 (d, J=4.27 Hz, 3 H) ; MS (El) m/ z= 255.1[ +1]+.
Se aplico el Método general G a 5-bromo-N-metilindoline- 1-carboxamida (935 mg, 3.67 mmol) para proveer N-metil-5- (4,4,5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) indolin-1-carboxamida como una espuma blanca (1.10g, 100% rendimiento) después de purificación mediante cromatografía instantánea (5% MeOH/DCM) . RMN 1H (400 Hz , CLOROFORMO-d) d ppm 1.34 (s, 12 H) 3.10 - 3.22 (m, 2 H) 3.90 (s, 2 H) 4.54 - 4.66 (m, 1 H) 7.60 (singulete amplio, 1 H) 7.66 (br. d, J=1.00 Hz, 1 H) 7.85 (br. d, J=1.00 Hz, 1 H) 7.84 - 7.91 (m, 1 H) ; MS (El) m/z = 301.0 [M-l]~.
Se aplico el Método C a N-metil-5- (4, 4, 5, 5-tetrametil- 1, 3, 2-dioxaborolan-2-il) indoline-l-carboxamida (85mg, 0.28 mmol) y 4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (100 mg, 0.26 mmol) . La capa orgánica fue decantada, luego titulada con Et20 para proveer 5- (3-amino-6- (4- (N-ciclopropil-N-metilsulfamoil ) fenil ) pirazin-2- il) -N-metilindoline-l-carboxamida como un sólido amarillo (35 mg, 28% rendimiento). RMN 1H (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.58 -8.66 (m, 1 H), 8.20 - 8.31 (m, 1 H) , 7.92 - 7.99 (m, 1 H) , 7.79 - 7.88 (m, 2 H) , 7.47 - 7.64 (m, 2 H) , 6.61 - 6.71 (m, 1 H) , 6.60 - 6.65 (m, 1 H) , 6.58 - 6.71 (m, 2 H) , 6.42 - 6.49 (m, 2 H), 3.88 - 3.98 (m, 2 H) , 3.13 - 3.25 (m, 2 H) , 2.68 (s, 3 H), 2.08 (s, 3 H), 1.79 - 1.88 (m, 1 H) , 0.62 - 0.81(m, 4 H) ; S (El) m/z= 479.1[M+1]+.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (8-oxo-5 ,6,7, 8-tetrahidro-2 , 7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il) -N-ciclopropilbencensulfonamida El compuesto del título fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es Boc20, TEA, DCM; b es NaI04, RuCl3, DCM, agua MeCN; c es HCI, dioxano; y d es Me6Sn2, Pd(PPh3)4, dioxano 110°C. 7? una solución de clorhidrato de 6-cloro-l, 2, 3, tetrahidro-2 , 7-naftiridina (5.0 g, 24.4 mmol) y dicarbonato de diterbutilo (8.0 g, 36.6 mmol) en DCM (100 mL) a temperatura ambiente se agregó trietilamina (10.2 mL, 73.2 mmol) . Después de la consumación, la reacción fue diluida en DCM (100 mL) , lavada con NaHC03, (aq) (sat) , secada sobre a2S04, filtrada y concentrada. Este residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20% EtOAc/hexano eluyente) para proveer 6-cloro-3, 4-dihidro-2 , 7-naftiridin-2 ( 1H) -carboxilato de ter-butilo (4.0 g, 51% rendimiento) como un aceite claro. ™ 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 8.17 (s, 1 H) , 7.30 (s, 1 H),4.60 (s, 2 H) , 3.66 (t, J=5.9 Hz, 2 H) , 2.88 (t, J=5.8 Hz, 2 H) , 1.43 - 1.61 (m, 9 H) ; MS (El) miz = 269.7 [M+l]+.
A una solución de NaI04 (9.56g, 44.7 mmol) y RuCl3 (927mg, 4.47 mmol) en agua (50 mL) , DCM (50 mL) y MeCN (2 mL) se agregó una solución de 6-cloro-3, 4-dihidro-2, 7-naftiridin-2 (1H) -carboxilato de ter-butilo (4.0g, 14.9 mmol) en DCM (25 mL) . Esta reacción fue agitada a temperatura ambiente por 2 h. En la consumación, la reacción fue apagada con isopropanol (10 mL) , filtrada sobre celite y la retorta de filtro fue lavada con DCM (20 mL) . El filtrado fue repartido en un embudo de separación y las capas fueron separadas. La capa orgánica fue extraída com DCM (2 X 20 mL) y los orgánicos combinados fueron secados sobre Na2S04, luego filtrados y concentrados. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20- 50% EtOAc/hexano eluyente) para dar 6-cloro-l-oxo-3, 4-dihidro-2 , 7-naftiridin-2 ( 1H) -carboxilato de ter-butilo (3.0 g, 71% rendimiento) como un sólido cristalino amarillo. RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 8.92 (s, 1 H) , 7.47 (s, 1 H) , 4.03 (t, J=6.3 Hz, 2 H) , 3.09 (t, J=6.1 Hz, 2 H) , 1.54 - 1.62 (m, 9 H) ; MS (El) m/z = 283.7 [M+l]+.
A una solución de 6-cloro-l-oxo-3 , -dihidro-2, 7-naftiridin-2 (1H) -carboxilato de ter-butilo (3.0g, 10.6 mmol) en DCM (20 mL) se agregó una solución de HC1 4 N en dioxano (10 mL) . Después de agitación por 20 minutos a temperatura ambiente, la reacción fue diluida con DCM (50 mL, luego sonificada y filtrada para dar clorhidrato de 6-cloro-3,4-dihidro-2, 7-naftiridin-l (2H) -ona (2.22 g, 93% rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.70 (s, 1 H), 8.23 (s. amplio, 1 H) , 7.57 (s, <J=0.6 Hz, 1 H) , 3.40 (t, J=6.6, 2.8 Hz, 2 H) , 2.96 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; MS (El) m/z = 183.6 [M+l]+.
Urna solución de clorhidrato de 6-cloro-3, 4-dihidro-2 , 7-naftiridin-1 (2H) -ona (800 mg, 3.7 mmol), hexametilditin (1.83 g, 5.6 mmol) y Pd(PPh3)4 (214 mg, 0.19 mmol) en dioxano (40 mL) fue desgasificada bajo burbujeo de nitrógeno, luego calentada a 110°C por 4h. En la consumación, la reacción fue concentrada y purificada mediante cromatografía instantánea sobre alúmina neutra (100% EtOAc eluyente, luego 5% MeOH/DCM eluyente) . Esto produjo 6- (trimetilstannilo) -3, -dihidro-2, 7-naftiridin-1 (2H) -ona (1.22 g, 100% rendimiento) como un aceite café que fue usado sin purificación adicional. MS (El) miz [M+l]+= 312.
Una solución de 4- (5-amino-6-bromopirazin-2-il) -N-ciclopropilbencensulfonamida (150 mg, 0.41 mmol), 6- (trimetilstannil) -3, 4-dihidro-2, 7-naftiridin-1 (2H) -ona (150 mg, 0.48 mmol) y Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.02 mmol) en dioxano (2 mL) fue calentada por microondas por 20 minutos a 150°C. En la consumación, la mezcla de reacción fue purificada mediante HPLC de fase inversa preparativa para proveer 4- ( 5-amino-6-(8-oxo-5, 6,7, 8-tetrahidro-2 , 7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropilbencensulfonamida (8 mg, 5% rendimiento) como un sólido anaranjado después de liofilización . RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 9.02 (s, 1 H) , 8.87 (s, 1 H) , 8.59 (s, 1 H) , 8.35 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 8.17 (s. amplio, 1 H) , 7.84 - 7.99 (m, 3 H) , 3.51 (t, 2 H) , (t, J=6.3 Hz, 2 H) , 0.29 - 0.57 (m, 4 H) ; MS (El) m/z = 437.5 [M+l]+.
Síntesis de 4- (5-amino-6- (4-bromo-l-hidroxiisoquinolin-6-il)pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida El compuesto del titulo fue preparado mediante el método mostrado a continuación: en donde: a es DMF: DMF-DMA (10:1), NBS.
A una suspensión a temperatura ambiente de clorhidrato de 4- ( 5-amino-6- ( l-hidroxiisoquinolin-6-il ) pirazin-2-il ) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (1.00 g, 2.07 mmoL, preparada mediante el método general C) en DMF (10 mL) se agregó 1, 1-dimetoxi-N, N-dimetilmethanamine' (1 mL) . En el transcurso de minutos, la suspensión fue descargada a una solución. Luego se agregó N-bromosuccinimida (386 mg, 2.17 mmol) en una porción. Después de 1 h la reacción fue concentrada y sometida a evaporación instantánea sobre gel de sílice (4-8% MeOH/DCM eluyente) para proveer hidroclorhidrato 4- ( 5-amino-6- ( 4-bromo-l-hidroxiisoquinolin-6-il ) pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensulfonamida (480 mg, 43% rendimiento) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) d ppm 11.59 - 11.67 (singulete amplio, 1 H) , 8.77 (s, 1 H) , 8.36 (d, J=8.3 Hz, 1 H) , 8.24 - 8.30 (m, 2 H) , 8.17 (d, J=l .5 Hz, 1 H) , 7.99 (dd, =8.3, 1.5 Hz, 1 H) , 7.86 (d, J=8.5 Hz, 2 H) , 7.62 (d, J"=6.0 Hz, 1 H) , 6.76 (singulete amplio, 2 H) , 2.69 (s, 3 H) , 1.80 -1.90 (m, 1 H), 0.76 (s, 2 H) , 0.65 - 0.73 (m, 2 H) ; MS (El) m/z = 527.4 [M+l]+.
Compuestos adicionales Se prepararon numerosos compuestos adicionales, algunos de los cuales son enlistados en la tabla 1. La tabla 1 también provee resultados de pruebas in vitro, que fueron obtenidos usando el análisis descrito en el ejemplo 6.42, en donde " indica que no se obtuvo una medición;* = IC50 < 0.15 µ?; ** = IC50 <0.05 µ?; y *** = IC50 <0.01 µ .
Tabla 1 4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) pirazin-2-il)- * * * N-etilbencensulfonamida 4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-il) pirazin-2- * * ~k ~k il) benzonitrilo 4- ( 6-amino-5- (1-oxo-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin- 3-iD- * * * * * N-ciclobutyl-N- (2,2,2-trifluoroetil) encensulfonamida 4- ( 6-amino-5- (1-oxo-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin- 3-iD- * -*¦ * •k ~k N-ciclobutylbencensulfonamida 2- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) pirazin-2- * * * * * il) fenil) -2-metilpropannitrilo 4- ( 6-amino-5- (1-oxo-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin- 3-il)- * * * * ** 2-cloro-N-ciclopropilbencensulfonamida 4- (6-amino-5- (1-oxo-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il) piridin- 3-il)- * * * •k ie N-ciclopropil-2-fluorobencensulfonamida Medición in vi ro de Inhibición de MST1 Se efectuaron análisis en proxiplacas negras de 384 cavidades de bajo volumen (Perkin Elmer, PE-Blk-Proxi-6008269) . Ocho compuestos fueron diluidos primero en placas LDV (Echo) usando un dispositivo "Multiprobe", a una concentración de partida del compuesto de 1 mM en DMSO al 100%. Utilizando el dispositivo ECHO, 75 ni de compuesto fueron proyectados a las proxiplacas de 384 cavidades. La concentración de partida del compuesto en cada placa de análisis es de 7.5 uM, seguida por diluciones 3 veces, para dar curvas de concentración de diez puntos por cuadruplicado. Se agregó una solución 3x de la enzima MST1 en solución reguladora de cinasa (Invitrogen, PR4940C) a las cavidades que contienen compuesto o testigos de DMSO, seguido por una etapa de pre-incubación de 10 minutos. Las reacciones fueron iniciadas al agregar 5 L de una mezcla de ATP y Z'-Lyte S/T Pep 7 (Invitrogen, PV3180) y procedieron a temperatura ambiente por 1 hora. La concentración final de reactivos clave en las reacciones de cinasa fueron 1 µ? sustrato, 1 nM enzima y ya sea 50 µ? ATP o 1 mM ATP. Al final de la reacción de cinasa, se agregaron 10 ul de solución reveladora (Invitrogen, católogo # PR4876B; solución de revelado A diluida 150,000X solución reveladora B) a cada cavidad y se incubaron a temperatura ambiente por 1 hora. Todas las cavidades fueron leídas en un dispositivo Tecan a excitación de 400nm y emisión de 460nm/530nm. Se usaron testigos de enzima más y menos para calcular el por ciento de inhibición y se generaron curvas de IC50 usando Excel.
Análisis a base de células También se usó un análisis a base de células que monitorea la autofosforilación de MSTI intracelular para caracterizar los compuestos de la invención. En este análisis, células HEK293F fueron transfectadas con un plásmido que codifica por una MSTI humana de plena longitud. Las células fueron cultivadas en medios celulares (DMEM, 10% FBS, IX GPS) a 80-90% de confluencia en placas de cultivo de tejido de 24 cavidades. En el día 1, ~2?10?7 células fueron tripsinizadas y resuspendidas en 20 mi de medio cellular menos el GPS. Un mi de esta suspensión celular fue transferido a una copa de muestra Vi-cell y las células fueron contadas en un dispositivo Beckman Coulter Vi-Cell XR. Las células fueron luego diluidas a 3?10?5/ por mL en DMEM +10% FBS, suficiente para 12 mi para una placa de 24 cavidades. Cada cavidad de una placa de 24 cavidades recibió 500 µ? de esta suspensión celular para una concentración final de 1.5?10?5 células por cavidad. Luego las células fueron incubadas de la noche a la mañana a 37 °C y 5% C02.
En el día dos, cada cavidad fue transfectada con 0.5 µg de ADN y 1.5 µ? Lipofectamine 2000 (Invitrogen; cat.# 11668- 019) . La mezcla de ADN consiste de 5 ng MST1 T183E, 50 ng MEKK1, 445ng pcDNA3.1 y 50ul OPTI-MEM. The Lipofectamine 2000 consiste de de 1.5 µ? de Lipofectamine 2000 y 50ul OPTI-MEM. La mezcla de ADN fue pipeteada primero a tubos de 15 mi e incubada a temperatura ambiente por 5 minutos, seguida por la adición de la mezcla de Lipofectamine e incubación a temperatura ambiente por 20 minutos. 100 µ? de mezcla de transfección de AND fueron agregados a cavidades en cada cavidad de una placa de 24 cavidades, seguido por incubación de la noche a la mañana a 37 °C y 5% CO2.
En el día 3, los compuestos fueron diluidos serialmente con DMSO al 100% y un mi fueron transferidos a cavidades de una placa de 96 cavidades de 1 mi de profundidad. Luego las placas fueron transferidas a una campana de TC y se agregó 1 mi de DMEM + FBS al 0.5% a cada cavidad gue contiene 1 µ? de compuesto, (concentración final de 0.1% DMSO) . Enseguida, la mezcla de medios/transfección fue aspirada de cada cavidad de la placa de 24 cavidades que contienen las células, seguido por adición de 300 µ? de cada dilución del compuesto (diluciones de compuesto restantes mantenidas a 4°C para uso posterior) . Luego las placas fueron incubadas a 37 °C y C02 al 5% por 4 horas. Luego un µ? de ácido okádaico 225 µ? en DMSO al 100% fue pipeteado a una nueva placa de 96 cavidades de 1 mi de profundidad, seguida por la adición de una dilución del compuesto de 300 µ? (almacenada a 4°C en la etapa previa) para dar una concentración final de ácido okádaico de 0.75 µ?. Luego, la mezcla de medios/compuesto fue aspirada de la placa que contiene células y luego vuelta a colocar sobre la mezcla de medios/compuesto/ácido okádaico. Las células fueron incubadas a 37 °C y C02 al 5% por 2 horas más. Las células fueron desprendidas mediante simple pipeteado y las suspensiones celulares de cada cavidad fueron transferidas a tubos nuevos de 1.5 mi. Los tubos que contienen medios fueron centrifugados a 1000 x g durante 5 minutos para aglomerar las células y los sobrenadantes fueron retirados cuidadosamente y descartados. Las pelotillas celulares fueron usualmente congeladas a -80°C hasta la siguiente etapa.
En el día 4, las células fueron sometidas a lisis y preparadas para análisis de Western Blot como sigue. Las pelotillas celulares fueron desheladas sobre hielo. La solución reguladora del pH de lisis consistía de los siguientes componentes: Tris, pH 7.5, NaCl 150mM, Na2EDTA 1 rrúM, EGTA 1 mM, Tritón al 1%, pirofosfato de sodio 2.5 mM, ß-glicerofosfato 1 mM, Na3V04 1 mM, 1 ug/ml leupeptina, EDTA 10 mM, coctel inhibidor de proteasa & fosfatasa Halt (Thermo Scientific; cat . #1861284 ) . 100 µL de solución reguladora del pH de lisis recién elaborada fueron agregados por muestra, seguidos por incubación sobre hielo por 15 minutos, vórtice por 10-15 segundos y centrifugación a 12, 000 x g por 30 segundos. El sobrenadante fue retirado cuidadosamente y mezclado con solución reguladora de muestra LDS 4 X de Invitrogen (cat.# NP0008; con DTT 50m DTT agregado nuevo) . La muestras fueron desnaturalizadas a 70 °C por 10 minutos en una máquina de PCR y se cargaron 10 µ? por carril en geles de 26 cavidades 2 x Criterion (Biorad; cat . # 345-0034) . Después de SDS-PAGE, las muestras fueron transferidas del gel a la membrane de PVDF, bloqueadas por una hora en TBST + leche al 5% y lavadas 3X por 5 - 10 minutos con TBST. Una membrana fue sondeada con anti-MSTl de conejo (1:3000; illipore, cat . # 07-061) diluido en TBST + leche al 5% y otra membrane fue sondeada con anti-fosfo-MSTl de conejo (T183; Cell Signaling, cat.# 3681) (1:2000) diluido en TBST + 5% BSA, seguido por incubación de la noche a la mañana a 4°C.
En el dia 5, los Western Blots fueron lavados 3X por 5-10 minutos con TBST, sondeados con HRP anti-conejo (1:3000; Biorad, cat.# 170-6515) diluido en TBST + leche al 5% por 1 hora a temperatura ambiente y lavados 3X por 10 minutos con TBST. Las inmunoabsorciones fueron reveladas con el rectivo ECL (GE Healthcare; cat.# RPN2132) en un sistema de representación de imagen de Biorad Versadoc (Modelo 5000) y el análisis volumétrico llevado a cabo en cada banda para obtener valores de densidad.
Farmacología de 4- (6-amino-5- (1-oxo-l ,2 , 3 , 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il) piridin-3-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensul- fonamida El compuesto 4- ( 6-amino-5- ( 1-oxo-l , 2 , 3 , 4-tetrahidro-isoquinolin-6-il) piridin-3-il) -N-ciclopropil-N-metilbencen-sulfonamida fue probado en el modelo de enfermedad EAE descrito anteriormente. En un primer estudio, se midió el efecto profiláctico del compuesto: ratones fueron en general dosificados PO, bid, por 22 días, partiendo el día (-1) antes de imnumización de péptido MOG (en el grupo de 100 mpk, el compuesto fue dosificado BID en los días -1 - 9 y QD en los días 10-21) . Cuatro grupos de ratones (n = 0 10 por grupo) fueron probados: testigo de vehículo: 10 mg/kg, 30 mg/kg y 100 mg/kg de compuesto. Los resultados son mostrados en la figura 2A, en donde * indica p < 0.05 versus testigo.
Un segundo estudio examinó el efecto terapéutico del compuesto. Aquí, los ratones fueron en general dosificados PO, BID, por 14 días, iniciando el día 9 después de inmunización de péptido MOG (en el grupo de 100 mpk, el compuesto fue dosificado BID en los días 9-13 y QD en los días 14-23). Los resultados son mostrados en la figura 2B, en donde * indica p < 0.05 versus testigo.
El compuesto fue también estudiado en un modelo de EAE de rata. Aquí, cuatro grupos de ratas (n = 10 por grupo) fueron administrados con testigo de vehículo, dosis de 10 mg/kg, 25 mg/kg o 50 mg/kg, PO, BID. La dosificación inició el día 9 después de inmunización. Como se muestra en la figura 3, el compuesto exhibía otra vez una reducción dependiente de dosis en severidad de puntuación clínica (* indica p < 0.05 versus testigo).
La figura 4 muestra resultados obtenidos de un studio del compuesto en un modelo de enfermedad de CIA. En esta prueba, los ratones fueron dosificados PO, bid, por 21 días, iniciando el día 20 después de la inmunización. Se usaron cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo) : testigo de vehículo, 10 mg/kg, 30 mg/kg y 100 mg/kg. Se observó un claro beneficio contra el testigo (* indica p < 0.05 versus testigo) .
El compuesto fue estudiado adicionalmente en un modelo de enfermedad de CIA de rata, usando cuatro grupos de ratas (n = 10 por grupo) : testigo de vehículo, 10 mg/kg, 25 mg/kg y 50 mg/kg. Las ratas fueron dosificadas PO, BID (grupos de 10 y 25 mg/kg) o QD (50 mg/kg grupo) iniciando el día 11 después de la inmunización. Como se muestra en la figura 5, el compuesto mostró otra vez un efecto terapéutico. La figura 5A muestra la puntuación de artritis acumulativa como función del tiempo y dosis; la figura 5B muestra el cambio en espesor de tobillo como función del tiempo y dosis (* indica p < 0.05 versus testigo) . Aquí, el espesor de tobillo fue medido por volumen (desplazamiento de agua) .
La figura 6 muestra el efecto del compuesto sobre la respuesta de enzima del hígado y citoquina en un modelo de hepatitis inducido por Con-A. se usaron cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo) : testigo de vehículo, 10 mg/kg, 30 mg/kg y 100 mg/kg. Los ratones fueron dosificados 16 h y 1 h antes y 8 h después del ataque con Con-A. Se observó un claro efecto en TNF-OÍ, IL-6, MCP-1, IFN-?, ALT y AST (* indica p < 0.05 versus testigo; ** indica p < 0.1 versus testigo).
Farmacología de 1- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l , 2 , 3 , -tetrahidro-isoquinolin-6-il) pirazin-2-il) fenil) ciclopropancarbonitrilo El compuesto 1- (4- (5-amino-6- (1-oxo-l, 2, 3, 4-tetrahidro-isoquinolin-6-il) pirazin-2-il ) fenil) ciclopropancarbonitrilo fue estudiado en un modelo de EAE de rata. Aquí, cinco grupos de ratas (n = 10 por grupo) fueron administrados con testigo de vehículo, dosis de 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, o 10 mg/kg, PO, QD, partiendo el día 10 después de inmunización. Como se muestra en la figura 7A, el compuesto exhibió una reducción dependiente de la dosis en puntuación de severidad clínica (* indica p < 0.05 versus testigo) . El efecto también es observado en la figura 7B, que muestra el desarrollo de la enfermedad como función del grupo de prueba.
La figura 8 muestra el efecto del compuesto sobre la enzima del hígado y respuesta de citoquina en un modelo de hepatitis inducida por Con-A. Se usaron cinco grupos de ratones (n = 10 por grupo) : testigo de vehículo, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg y 30 mg/.kg. Los ratones fueron dosificados PO 16 h y 1 h antes y 8 h después del ataque con Con-A. Se observó un claro efecto en TNF-a, IL-6, MCP-1, IFN-?, ALT y AST (* indica p < 0.05 versus testigo).
Farmacología de 4- (5-amino-6- (1-oxo-l ,2 , 3 , 4-tetrahidroiso-quinolin-6-il) irazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensul-fonamida El compuesto 4- ( 5-amino-6- ( 1-oxo-l , 2 , 3 , -tetrahidroiso-quinolin-6-il) pirazin-2-il) -N-ciclopropil-N-metilbencensul-fonamida fue estudiado en un modelo de EAE de ratón. Aquí, cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo) fueron administrados con testigo de vehículo, dosis de 3 mg/kg, 10 mg/kg, o 30 mg/kg BID por 12 días, partiendo del día 9 después de inmunización de péptido de MOG. La figura 9A muestra el efecto de dosificación subcutánea: se observó una clara dependencia de la dosis en la puntuación clínica (* indica p < 0.05 versus testigo). La figura 9B muestra el efecto de dosificación oral (PO) .
El efecto del compuesto en un modelo de CIA de ratón también fue observado como función de la dosis y método de administración. Las figuras 10A y 10B muestran el efecto del compuesto en las puntuaciones acumulativas y cambio en espesor de tobillo cuando son administrado subcutáneamente (* indica p < 0.05 versus testigo) a tres grupos de ratones (n = 10 por grupo) . Los grupos fueron administrados con testigo de vehículo, dosis de 10 mg/kg, o 30 mg/kg BID por tres esmanas partiendo del día 20 después de administración de colágeno. Las figuras 10C y 10D muestran resultados obtenidos cuando el compuesto fue administrado oralmente (* indica p < 0.05 versus testigo) a cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo) . Los grupos fueron administrados con testigo de vehículo, dosis 10 mg/kg, 30 mg/kg, o 50 mg/kg BID por tres semanas partiendo el día 20 después de inmunización de colágeno.
Todas las referencias (por ejemplo, patentes y solicitudes de patente publicadas) citadas anteriormente son incorporadas en la presente por referencia.

Claims (26)

REIVINDICACIONES
1 . Un compuesto de formula: o una sal acceptable farmacéuticamente del mismo, caracterizado porque A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros; X es N o CH; Yi y Y2 son cada uno independientemente S, N o CH, a condición de que por lo menos uno de Yi e Y2 sea N o CH; cada Ri es independientemente RiA - (RiB)nSOpRic, - (RIB) nSOpN (Rlc) 2, - ( RIB) nNRiCSOpRlc, -(RiB)nC( 0)N (Ric)2/ o - (RIB) nNRicC (O) Ríe o C1-12 hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2 - 12 miembros, tal sustitución opcional es con uno o más de RIA; cada RÍA es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo, cada RIB es independientemente Cx-12 hidrocarbilo opcionalmente sustituido con uno o más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo, cada Ríe es independientemente hidrógeno o C1-12 hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2 - 12 miembros, tal sustitución opcional es con uno o más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo, R2 y R3 son tomados conjuntamente para formar un heterociclo de 5-7 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de R3A o R2 es hidrógeno o Ci_ alquilo; y R3 es hidrógeno o C1-12 hidrocarbilo opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, tal sustitución opcional es con uno o más de R3A; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo, k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; y p es 0-2; a condición de que cuando R3 no sea hidrógeno cuando X es CH, ?? es CH, Y2 es CH y R2 es hidrógeno.
2. El compuesto de la reivindicación 1, caracterizado porque R2 no es hidrógeno.
3. El compuesto de la reivindicación 1, caracterizado porque es de fórmula: en donde Yi y Y2 son cada uno independientemente N o CH . 4. El compuesto de la reivindicación 3, caracterizado porque es de fórmula: en donde :
D es un heterociclo de 4-7 miembros y q es 0-2.
5. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque es de fórmula: en donde Z es N o CRi-
6. El compuesto de la reivindicación porque es de fórmula: en donde Yi y Y2 son cada uno independientemente N o CH.
7. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque es de fórmula:
El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque es de fórmula:
9. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque es de fórmula: en donde: R4 es hidrógeno o alquilo y r es 1 o 2.
10. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque es de fórmula:
11. El compuesto de la reivindicación 1, caracterizado rque es de fórmula: en donde: Y2 es N o CH; y Z es N o CRi.
12. El compuesto de la reivindicación caracterizado porque es de fórmula: en donde: Yi es N o CH; y Z es N o CRi.
13. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque X es N.
1 . El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y 12, caracterizado porque Yi es CH.
15. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque Y2 es CH.
16. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 5-12, caracterizado porque Z es N.
17. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 5-12, caracterizado porque Z es CRi.
18. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque Ri es - (RiB)nSOpRic, - (RIB) nSOpN (RLC) 2, ~ (RIB) nNRiCSOpRlc, - (R1B) nC (O) N ( Ric , o -(RiB)nNRicC(0)RiC.
19. El compuesto de la reivindicación 18, caracterizado porque n = 0.
20. El compuesto de la reivindicación 18, caracterizado porque p = 2.
21. El compuesto de la reivindicación 20, caracterizado porque es de fórmula:
22. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-21 y un excipiente o diluyente aceptable farmacéuticamente.
23. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-21 o la formulación de la reivindicación 22, caracterizado porque se usa en la inhibición de MST1.
24. El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-21 o la formulación de la reivindicación 22 para el tratamiento, manejo o prevención de una enfermedad o alteración inflamatoria o autoinmune.
25. El uso de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad o alteración autoinmune es aclorhidra autoinmune, enfermedad de Addison, espondilitis anquilosante, síndrome anti-fosfolípido, gastritis atrófica autoinmune, asma (por ejemplo, asma bronquial) , dermatitis atópica, gastritis atrófica autoinmune, enfermedad de Behcet, enfermedad celíaca, enfermedad de Crohn, síndrome de Cushing, dermatomiositis , síndrome de Goodpasture, enfermedad de injerto versus huésped, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, hepatitis (por ejemplo, inflamatoria e inducida por alcohol), atrofia adrenal idiopática, trombocitopenia idopática, síndrome de Kawasaki, síndrome de Lambert-Eaton, lupus eritematoso, esclerosis múltiple, miastenia gravis, penfigoide, pénfigo vulgaris, anemia perniciosa, polinosis, poliarteritis nodosa, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, psoriasis, artritis psoriática, síndrome de Raynauds, síndrome de Reiter, policondritis de recaída, artritis reumatoide, síndrome de Schmidt, escleroderma, síndrome de Sjogren, oftalmía simpatética, tirotoxicosis, arteritis de Takayasu, arteritis temporal, tirotoxicosis , rechazo de trasplante (por ejemplo, de órgano, célula o médula ósea) , diabetes tipo 1, colitis ulcerativa, uveítis y granulomatosis de Wegener.
26. El uso de la reivindicación 25, caracterizado porque la enfermedad o alteración autoinmune es enfermedad de Crohn, enfermedad de injerto versus huésped, psoriasis, artritis reumatoide o colitis ulcerativa.
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