MX2011004593A - Compuestos que expanden las celulas madre hematopoieticas. - Google Patents

Compuestos que expanden las celulas madre hematopoieticas.

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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos y composiciones para expandir el número de células CD34* para trasplante. La invención se refiere además a una población celular que comprende células madre hematopoiéticas (HSCs) expandidas, y a su uso en trasplante autólogo o alogénico para el tratamiento de los pacientes con enfermedades de inmunodeficiencia y autoinmunes heredadas y diversos trastornos hematopoiéticos, con el fin de reconstituir los linajes de células hematopoiéticas y las defensas del sistema inmunitario.

Description

COM P UESTOS QU E EXPAN DEN LAS CÉLU LAS MAD RE H E MATO POÍ ÉTICAS REFE RENCIA CRUZADA A SOLICITU DES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica N úmero 61 /1 09, 821 , presentada el 30 de octubre de 2008, y de la Solicitud Provisional de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica N úmero 61 /242,765, presentada el 1 5 de septiembre de 2009. Ls divulgaciones completas de estas solicitudes se incorporan a la presente como referencia en su totalidad y para todos los propósitos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Cam po de la Invención La presente invención se refiere a compuestos y composiciones para expandir el número de células CD34+ para trasplante. La invención se refiere además a una población cel ular que comprende células madre hematopoiéticas (HSCs) expandidas, y a su uso en trasplante autólogo o alogénico para el tratamiento de los pacientes con enfermedades de inmunodeficiencia y autoinmunes heredadas y diversos trastornos hematopoiéticos para reconstitui r los linajes de células hematopoiéticas y las defensas del sistema inmunitario.
Antecedentes Las células madre hematopoiéticas (HSCs) son capaces de regenerar todos los productos sangu íneos durante toda la vida de un individuo, equilibrando su auto-renovación con la diferenciación de la progenie. Las células madre hematopoiéticas tienen potencial terapéutico como un resultado de su capacidad para restablecer las células sangu íneas e inmu nitarias en los receptores de trasplantes. Adicionalmente, las células madre hematopoiéticas tienen el potencial para generar células para otros tejidos, tales como cerebro , m úsculo e h ígado . Actualmente se emplean métodos de trasplante de médula ósea humana autólogo y alogénico como terapias para leucemia, linfoma, y otras enfermedades amenazantes de la vida. Para estos procedimientos, se deben aislar un gran n úmero de células madre para asegurar que haya suficientes células madre hematopoiéticas para injertarse. El número de células madre hematopoiéticas disponibles para el tratamiento es una limitación clínica.
La presente invención se refiere a compuestos y composiciones para expandir las poblaciones de células madre hematopoiéticas y a su utilización .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVEN CIÓN En un aspecto, la presente invención p roporciona un compuesto de la fórmula I : I en donde: se selecciona a partir de N y CR3; G2, G3 y G4 se seleccionan independientemente a partir de CH y N; con la condición de que cuando menos uno de G3 y G4 es N; con la condición de que G-¡ y G2 no son ambos N; L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)o.3- (0-3 en la presente significa 0, 1, 2 ó 3), -NR5aCH(C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b-, -NR5a(CH2)2S- -NR5aCH2CH(CH3)CH2-, -N R5aCH2CH(OH)- y -NR5aCH(CH3)CH2-; en donde R5a y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tíofenílo, furanilo, 1 H-benzo-imidazolilo, isoquinolinilo, 1 H-imidazo-piridinilo, benzo-tiofenilo, pirimidinilo, 1 H-pirazolilo, piridinilo, 1 H-imidazolilo, pirrolidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1H-pirrolilo y tiazolilo; en donde dichos fenilo, tiofenilo, furanilo, 1 H-benzo-imidazolilo, isoquinolinilo, 1 H-imidazo-piridinilo, benzo-tiofenilo, pirimidinilo, 1 H-pirazolilo, piridinilo, 1 H-imidazolilo, pirrolidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1H-pirrolilo o tiazolilo de pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, hidroxilo, amino, -C(0)R8a, -S(O)0-2R8a> -C(0)OR8a y -C(0)NR8aFÍ8b; en donde R8a y R8b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; con la condición de que R y R3 no son ambos hidrógeno; R2 se selecciona a partir de -S(0)2NR6aR6b, -NR9aC(0)R9 , -NR6aC(0)NR6bR6c, fenilo, 1 H-pirrolo-piridin-3-ilo, 1H-indolilo, tiofenilo, piridinilo, 1 H-1 ,2,4-triazoIilo, 2-oxo-imidazolidinilo, 1H-pirazolilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-imidazolilo y 1 H-indazolilo; en donde R6a, R6b y 6o se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde estos fenilo, 1 H-pirrolo-piridin-3-ilo, 1 H-indolilo, tiofenilo, piridinilo, 1H-1 ,2,4-triazolilo, 2-oxo-imidazolidinilo, 1 H-pirazolilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-imidazolilo o 1 H-indazolilo de R2 están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de hidroxilo, halógeno, metilo, metoxilo, amino, -0(CH2)n NR7aR7b, -S(0)2NR7aR7b, -OS(0)2NR7aR7b y -NR7aS(0)2R7b; en donde R7a y R7b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y bifenilo; y R4 se selecciona a parti r de alquilo de 1 a 1 0 átomos de carbono, prop-1 -en-2-ilo, ciclohexilo, ciclopropilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetra-hidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, bencilo, (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo y 1 -(1 -(2-oxo-6,9, 12-trioxa-3-aza-tetradecan-1 4-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo ; en donde estos alquilo, ciclopropilo, ciclohexilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-i lo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidro-fu ran-2-ilo, bencilo, (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo , o 1 -(1 -(2-oxo-6 ,9,1 2-trioxa-3-aza-tetradecan-1 4-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo pueden estar opcional mente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno; o los derivados de N-óxido, derivados de pro-fármaco , derivados protegidos, ios isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; o las sales (de preferencia las sales farmacéuticamente aceptables) , y solvatos (por ejemplo, hidratos) de estos compuestos.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 da a conocer el patrón de difracción en polvo de rayos-X (PXRD) de la modificación en forma sólida A del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol .
Las Figuras 2 a 12 dan a conocer los patrones de difracción en polvo de rayos-X (PXRD) de las formas sólidas de las sales de 4-(2- (2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-¡l-am¡no)-etil)-fenol , respectivamente las sales de nitrato, mesilato, tosilato, clorhidrato, sulfato, besilato , esilato, bromhidrato, orotato, fumarato y napadisilato .
La Figura 1 3 da a conocer el patrón de calorimetría de exploración diferencial de la forma amorfa del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA I NVEN CIÓN Definiciones "Alquilo", como un grupo y como un elemento estructu ral de otros grupos, po r ejemplo alquilo y alcoxiio sustituidos por halógeno , puede ser de cadena recta o ramificada. Por ejemplo, alquilo incluye metilo, etilo , propi lo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo secundario, butilo terciario, etc. Alcoxiio de 1 a 4 átomos de carbono incluye metoxilo , etoxilo, y similares. Halo-alquilo sustituido incluye trifluoro-metilo, pentafluoro-etilo, y similares.
"Arilo" significa u n ensam ble de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado que contiene de seis a diez átomos de carbono del anillo. Por ejemplo, arilo puede ser fenilo o naftilo, de preferencia fenilo. "Arileno" significa u n radical divalente derivado a partir de un grupo arilo.
"Heteroarilo" es como se define para ari lo, en donde uno o más de los miembros del anillo son un heteroátomo o una fracción seleccionada a partir de -O-, -N = , -N R-, -C(O) -, -S-, -S(O) - o -S(0)2-, en donde R es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o un grupo protector de nitrógeno. Por ejemplo heteroarilo incluye piridi lo, indolilo, indazoli lo, quinoxalinilo, quinolinilo, benzo-furanilo, benzo-piranilo, benzo-tiopiranilo, benzo-[1 ,3]-dioxol , imidazolilo , benzo-imidazolilo, pirimidinilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo , tetrazolilo , pi razolilo, tienilo, etc.
"Cicloalqui lo" significa un ensamble de anillo monocíclico, bicíclico fusionado, o policíclico puenteado, saturado o parcialmente insaturado que contiene el número de átomos del anillo indicado. Por ejemplo, cicloalquilo de 3 a 1 0 átomos de carbono incluye ciclopropilo, ciclobutilo , ciclopentilo, ciclohexilo, etc. "Hetero-cicloalquilo" significa cicloalquilo, como se define en esta solicitud, en el entendido de que uno o más de los átomos de carbono del anillo indicados, son reemplazados por una fracción seleccionada a partir de -O-, -N=, -N R-, -C(O) -, -S-, -S (O) - o -S(0)2-, en donde R es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o un grupo protector de nitrógeno. Por ejemplo, hetero-cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono , como se utiliza en esta solicitud para describir los compuestos de la invención , incluye morfolino, pirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidinilona, 2-oxo-pirrolidin- 1 -ilo, 1 ,4-dioxa-8-aza-espiro-[4.5]-dec-8-ilo, etc.
" Halógeno" (o halo) de preferencia representa cloro o flúo r, pero también puede ser bromo o yodo.
"Células madre hematopoiéticas" (HSCs) , como se utiliza en la presente, se refiere a las células sanguíneas inmaduras que tienen la capacidad para auto-renovarse y para diferenciarse en más células sangu íneas maduras, las cuales comprenden granulocitos (por ejemplo, pro-mlelocitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos) , eritrocitos (por ejemplo, reticulocitos, eritrocitos) , trombocitos (por ejemplo, m egacarioblastos, megacariocitos productores de plaquetas, plaquetas), y monocitos (por ejemplo, monocitos, macrófagos) . Las células madre hematopoiéticas se describen de una manera indistinta como células madre a través de toda la memoria descriptiva. En la técnica se sabe que estas células pueden o no incluir las células CD34+. Las células CD34+ son células inmaduras que expresan el marcador de superficie cel ular CD34. Se cree que las células CD34+ incluyen una sub-población de células con las propiedades de las células madre definidas anteriormente. Es bien conocido en la materia que las células madre hematopoiéticas incluyen células madre pluripotentes , células madre multipotentes (por ejemplo, una célula madre linfoide) , y/o células madre comprometidas en linajes hematopoiéticos específicos. Las células madre comprometidas en linajes hematopoiéticos específicos pueden ser del linaje de células-T, del linaje de células-B, del linaje de cél ulas dendríticas , del linaje de células de Langerhans, y/o del linaje de células de macrófagos específicos del tejido linfoide. En adición, las células madre hematopoiéticas también se refieren a las células madre hematopoiéticas de largo plazo (LT-HSC), y a las células madre hematopoiéticas de corto plazo (ST-HSC) . Las células madre hematopoiéticas de corto plazo son más activas y más proliferativas q ue las células madre hematopoiéticas de largo plazo.
S in embargo, las células madre hematopoiéticas de largo plazo tienen una auto-renovación ili mitada (es decir, sobreviven durante toda la edad adulta) , mientras que las células madre hematopoiéticas de corto plazo tienen una auto-renovación limitada (es decir, sobreviven solamente du rante un período de tiempo li mitado) . Cualquiera de estas células madre hematopoiéticas se puede utilizar en cualquiera de los métodos descritos en la presente. Opcionalmente, las cél ulas madre hematopoiéticas de corto plazo son útiles porque son altamente proliferativas y, por consiguiente, aumentan rápidamente el número de células madre hematopoiéticas y su progenie. Las células madre hematopoiéticas se obtienen opcionalmente a partir de los productos sanguíneos. Un producto sanguíneo incl uye un producto obtenido a partir del cuerpo o de un órgano del cuerpo que contenga células de origen hematopoiético. Estas fuentes incluyen médula ósea no fraccionada, cordón umbilical , sangre periférica, h ígado, timo, li nfa y bazo. Todos los productos sanguíneos crudos o no fraccionados anteriormente mencionados se pueden enriq uecer para las células que tengan características de cél ulas madre hematopoiéticas de las maneras conocidas por los expertos en este campo.
"Tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a un método para aliviar o abati r una enfermedad y/o sus síntomas aunados.
"Expansión", en el contexto de las células, se refiere al aumento en el número de un tipo característico de célula, o tipos de células, a parti r de una población celular inicial de las células, las cuales pueden o no se r idénticas . Las células iniciales utilizadas para la expansión pueden no ser iguales a las células generadas a partir de la expansión.
"Población cel ular" se refiere a un mam ífero eucariótico, de p referencia a un ser humano, a células aisladas a partir de fuentes biológicas, por ejemplo, productos sanguíneos o tejidos y derivados a partir de más de una célula.
"Enriquecida", cuando se uti liza en el contexto de la población celular, se refiere a una población celular seleccionada basándose en la presencia de uno o más marcadores, por ejemplo, CD34+.
El término "células CD34+" se refiere las células que expresan en su superficie el marcador CD34. Las células CD34+ se pueden detectar y contar util izando, por ejemplo, citom etría de flujo y anticuerpos anti-CD34 fluorescentemente marcados .
"En riquecida en células CD34+" significa que una población cel ular se ha seleccionado basándose en la presencia del marcador C D34. De conformidad con lo anterior, el porcentaje de células CD34+ en la población celular después del método de selección, es más alto q ue el porcentaje de células CD34+ en la población cel ular inicial, antes del paso de selección, basándose en los marcadores CD34. Por ejemplo, las cél ulas CD34+ pueden representar cuando menos el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, o cuando menos ei 90 por ciento de las células en una población celular enriquecida en cél ulas CD34+.
"U nidad de sangre de cordón umbilical" se refiere a la sangre recolectada a partir de cordón umbi lical de un solo nacimiento.
Descripción de las Modalidades Preferidas La presente i nvención se refiere a métodos y composiciones para expandir las poblaciones de cél ulas madre hematopoiéticas utilizando un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo.
En una modalidad, este agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo es un compuesto de la fórm ula I .
En una modalidad, con referencia a los compuestos de la fórm ula I , están los compuestos seleccionados a partir de las fó rmulas la, Ib, le, Id y l e: en donde: L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)o-3-, -NR5aCH(C(0) OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b-, -NR5a(CH2)2S-, -N R5aCH2CH(CH3) CH2-, -NR5aCH2CH(OH)- y — R5aCH(CH3)CH2-; en donde R5a y R5b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde el lado derecho de la fracción L como se muestra está unido a R2, por ejemplo: — NR5a(CH2)0-3-R2, -NR5aCH(C(0)OCH3)CH2-R2, -NR5a(CH2)2NR5b-R2, -N R5a(CH2)2S-R2, -NR5aCH2CH(CH3)CH2-R2, -NR5aCH2CH(OH)-R2 y -NR5aCH (CH3)CH2— R2; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-1 - i I o , isoquinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, piridin-2-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo, pirrolidin-1-ilo, pirazin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1H-pirrol-2-ilo y tiazol-5-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1H-benzo-[d]-imidazol-1 -ilo, isoquinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-? -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, piridinil-2-ilo, piridin-4- Mo, 1 H-¡midazol-1 -ilo, pirrolidin-1 -ilo, pirazin-2-??, piridinil-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirrol-2-ilo o tiazol-5-¡lo de R-¡ pueden estar opcionalmsnte sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -S(O)0-2Rea y -C(0)OR8a; en donde R8a y Reb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; con la condición de que Ri y R3 no son ambos hidrógeno; R2 se selecciona a partir de — R6aC(0)NR6bR6c> fenilo, 1H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-3-ilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, H-1,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-???-2, 3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo y 1 H-indazol-3-ilo; en donde R6a, R6b y R6c se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde estos fenilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-3-ilo, 1 H-p¡rrolo-[2,3-b]-piridin-5-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1H-pirazoi-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo o 1H-indazol-3-ilo de R2 están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de hidroxilo, halógeno, metoxilo, amino, -OS(0)2NR7aR7b y -NR7aS(0)2R7 ; en donde R7a y R7b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y bifeni lo; y R4 se selecciona a partir de isopropilo, metilo , etilo, prop-1 -en-2-ilo, isobutilo, ciclohexilo, butilo terciario, (S)-butilo secundario, (R)-butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, (S)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, (R)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, nonan-2-ilo, 2-(2-oxo-p¡ rrolidin- -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-p¡ran-2-iio, fenilo, tetrahidrofuran-3-iio y bencilo; en donde estos ciclohexilo, 2-(2-oxo-pirrol idin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo o bencilo pueden estar opcional mente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independi entemente a partir de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno.
En otra modalidad, L se selecciona a parti r de -N R5a(CH2)c-3-, -N R5aCH (C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2N R5b-, -N R5a(CH2)2S-, -N R5aCH2CH(CH3)CH2-, - R5aCH(CH3)CH2- y -NR5aCH2CH(OH)-; en donde R5a y R5b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y metilo ; y Ri se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo , tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-im idazol-1 -ilo, isoquinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-pi ridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, pi ridin-2-ilo, pi ridin-4-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo, pirrolidi n- -ilo, pi razin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirroi-2-ilo y tiazol-5-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-i!o, 1 H-benzo-[d]~imidazol-1 -??, ¡soq uinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-pirid¡n-1 -¡ lo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, pi ridinil-2-ilo, piridin-4-i lo, 1 H-imidazol-1 -ilo, pirrolidin- 1 -¡lo, pirazin-2-ilo, piridinil-3-ilo , pi ridazin-4-i lo, 1 H-pirrol-2-ilo o tiazol-5-ilo de Ri pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hidroxilo , alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono , halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -S (O)0.2R8a y -C(0)OR8a; en donde R8a y R8b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ; con la condición de que Ri y R3 no son ambos hidrógeno.
En otra modalidad, cuando L es -N R5a(CH2) 0-3 , es de preferencia -N R5a(CH2) i.3 (en donde 1 -3 en la presente representa 1 , 2 ó 3) .
En otra modalidad, R2 se selecciona a partir de urea, fenilo, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piperidin-1 -ilo, pi ridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin- 1 -ilo, 1 H-pi razoi-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-di h idro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazoI-5-iIo y 1 H-imidazol-4-??; en donde estos fenilo, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piperidin-1 -ilo, pi ridin-2-ilo, pi ridin-3-ilo, pi ridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1 H-pi razol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-dihidro- 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo o 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo de R2 están opcional mente sustituidos con hidroxilo, metoxilo, metilo, halógeno, amino y amino-sulfonilo.
En otra modalidad, R3 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo y bifenilo; y R4 se selecciona a partir de isopropi lo, metilo , etilo, prop-1 -en-2-ilo, isobutilo, ciclohexilo, butilo secundario, (S)-butilo secundario, (R)-butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, (S)- 1 - hidroxi-propan-2-ilo, (R)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, nonan-2-ilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo y bencilo ; en donde estos ciclohexiio, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo , oxetan-2-ilo, benzh idrilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidro-fu ran-3-ilo o bencilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de metilo y trifluoro-metilo.
En otra modalidad , están los compuestos seleccionados a partir de: 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-benzhidr¡i-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetra-hidro-2H-pi ran-3-il)-9H-purin-6-i l-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil- 2- (tiofen-2-il)-9H-purin-6-iI-amino)-etil) -fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(4-(trifluoro-metil)-bencil)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isobutil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-metil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(4-metil-bencil)- 9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-N-(2-(tiofen-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-iI-amino)-etil)-fenol; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(4-fluoro-fenetil)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; N-(4-amino-fenetil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-isopropil-2-(pirimidin-5-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-fenil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-¡sopropiI-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-¡l-am¡no)-et¡I)-fenol; 4-(2-(2-(furan-3-il)-9-isopropiI-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(4-fluoro-fenetil)-9-fenil-9H-purin-6-amina; N-bencil-8-(bifenil-4-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(nonan-2-iI)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec- util-9H-purin-6-amina; 5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amin'o)-etil)-1 H-lndol-5-ilo; N-(2-(2-(2-(2-(4-( -(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-6-(4- idroxi-fenetil-am¡no)-9H-purin-9-il)-etiI)-1 H-1 ,2,3-triazol- -il)-etoxi)-etoxi)-etoxi)-etil)-acetamida; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-n¡cotinato de etilo; 5-(6-(4-hidrox¡-fenet¡l-amlno)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-nicotinato de etilo; 4-(2-(2-(6-fIuoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI; 4-(2-(9-isopropil-2-(4-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 5- (6- (4-hidroxi-fenet¡l-am¡ no)-9-¡soprop¡l-9H-purin-2-¡l)-nicotinonitrilo; 4-(2-(9-isopropiI-2-(pirrolidin-1 -il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(1 H-¡midazol-1 - íl)-9-¡sopropil-9H-purin-6-¡l-am¡no)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isoprop¡l-2-(pir¡dazin-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4- (2- (9-¡sopropil-2-(pirazin-2-iI)-9H-purin-6-il-am¡ no) -etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-2-il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(met¡l-sulfon¡l)-pi rid¡n-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-metil-pi r¡din-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-feno!; 4-(2-(2-(4-cIoro-p¡ridin-3-iI)-9-isopropil-9H-purin-6-il-am¡ no) -etil) -fenol; 4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-¡l)-9-¡sopropii-9H-purin-6-il-am¡ no) -etil) -fenol ; 4-(2-(9-¡sopropiI-2-( 1 - metí 1-1 H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(p¡ridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l)-2-metoxi-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-2-metoxi-fenol ; N-[2-(6-metoxi-1 H-indoi-3-il)-et¡l]-9-(propan-2-il)-2-(pi r¡d¡n-3-iI)-9H-pu r¡n-6-amina; N-[2-(5-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-¡l)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[9-(propan-2-il)-2-(pir¡din-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-imidazol idln-2-ona; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-pi ridln-2-amina; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-p¡razol-4-il)-propil]-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-{2-[(3-metil-1 H-1 12,4-tr¡azol-5-il)-sulfanil]-etil}-9-(propan-2-il)-2-(pir¡di n-3-il)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purln-6-il]-amino}-etil)-imidazolidin-2-ona; N-[2-(5-am¡no-1 H-1 ,2,4-triazol-3-il)-etil]-2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-pur¡n-6-amina; N-(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)- piridin-2-amina; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-pirazol-4-il)-propil]-9H-purin-6-arnina; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-propil]-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; (2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-u rea; 5-({[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-ii]-amino}-metil)-2,3-dihidro- 1 H-1 ,3-benzo-diazol-2-ona; N-[2-(1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-ami no)-etil)-fenil)-metan-sulfonamida; 4-(2-(2-(piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-¡l-am¡ no)-etil)-feno! ; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-propil) -fenol; 4-(2-(9-(oxetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-M-amino)-etil)-fenoI ; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-N-metil-nicotinamida; 4-(2-(9-(1 -hidroxi-propan-2-ii)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-i i-amino)-etil)-fenol; sulfamato de 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-eti!)-fenilo; 4-(2-(2-(2-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropi l-9H-pu ri n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(1 -metil-1 H-pirrol-2-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(tiazol-5-il)-9H-purin-6-iI-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(1 H-benzo-[d]-imidazol-1 -il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(2,4-dimetil-1 H-imidazol-1 -il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etií) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(2-metil-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-il-ami no)-etil)-fenol ; 5-(9-sec-butil-6-(4-hidroxi-3-metil-fenetil-amino)-9H-purin-2-il)-nicotinonitnlo; N-(2-(1 H-pirrolo-[2,3-b]-pi ridin-5-il)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 9-isopropil-N-(2-(5-metil-1 H-pirazol-3-il)-etil)-2-(pindin-3-il)-9H-purin- 6-ami na; 4-(2-(2-(5-fl uoro-pirid¡n-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(5-cloro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(trifluoro-metil)-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 5-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-9-sec-butil-9H-pu rin-2-il)-nicotinonitrilo; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-but¡l-2-(5-met¡l-piridin-3-¡l)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil) -9-sec-butil-2-(5-fluoro-piridin-3-i l)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-eti!)-9-sec-butil-2-(5-fl uoro-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-ii)-etil)-9-sec-butil-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-pi ridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1 H-indoI-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-ami no)-9-(oxetan-3-il)-9 H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; 4-(2-(6-(5-fluoro-piridin-3-il)-1 - isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidin-4-il-am¡ no)-etil)-fenol ; 4-(2-(6-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-1 -isoprop¡I-1 H-pi razolo-[3,4-d]-pirimidin-4-iI-amino)-etil)-fenol ; (R)-4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-3-metil-fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-picolinonitrilo; 3-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-isonicotinonitrilo; 4-(2-(2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-7-isopropil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pi rimidin-4-il-amino)-etil) -fenol; 3-(6-(4-hidroxi-feneti l-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-picolinonitrilo; 4-(2-(9-isopropil-2-(6-metil-piridin-3-il)-9H-puri n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(isoq uinolin-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-cloro-4-(2-(9- isopropil-2-(piridin-3-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-fenol; 3-fluoro-4-(2-(9-¡sopropil-2-(pi r¡din-3-i l)-9H-pu rin-6-¡l-amino)-etil) -fenol; N-(2-(5-cloro-1 H-¡ ndol-3-il)-eti l)-9-isoprop¡l-2-(p¡ridin-3-¡l)-9H-purin-6-amina; N-(2-(5-fl uoro-1 H-indol-3-il)-etiI)-9-¡sopropil-2-(p¡rid¡n-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi r¡din-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-et¡l)-2-metil-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol ; (S)-4-(2-(2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9-(tetrahidro-furan-3-il)-9H-purin-6-il-am¡no)-etil)-fenol; (R)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol ; 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-pirid¡n-3-il)-9H-pur¡n-9-¡l)-propan-1 -ol ; (R)-2-(6-(2-(1 H-¡ ndol-3-M)-etil-am¡no)-2-(5-fluoro-p¡ridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol ; (S)-2-(6-(2-(1 H-¡ndol-3-¡l)-etil-am¡no)-2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol ; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-ii)-9-(tetrahidrofu ran-3-il)-9H-purin-6-ami na; 4-(2-(2-(3H-imidazo-[4,5-b]-pi ridin-3-il)-9-isop rop¡l-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(1 H-imidazo-[4,5-b]-p¡ r¡din-1 -il)-9-isopropil-9H-pur¡ n-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(6-(5-fluoro-piridin-3-il)-1 -isopropil-1 H -¡midazo-[4,5-c]-pi rid¡n-4-i l-amino)-eti l)-fenol ; 4-(2-(2-(4,5-dimetil-1 H-imidazol-1 -il)-9-isoprop¡l-9H-pur¡n-6-¡l-am¡no)-etil)-fenol; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(pi rid¡n-3-¡l)-etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoro-p¡ridin-3-il)-9-isoprop¡l-9 H-purin-6-il-am ino)-1 -hidrox¡-etil)-fenol ; 2-(5-fl uoro-pi ridin-3-il)-9-isoprop¡l-N-(2-(6-metoxi-1 H-indol-3-iI)-et¡l)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-¡ndol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-p¡rid¡n-3-¡l)-9-isoprop¡l-N-(2-(5-metoxi-1 H-indol-3- il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(prop-1 -en-2-¡l)-9H-purin-6-amina; 5-(2-(2-(5-fluoro-pi rid¡n-3-il)-9-isoprop¡l-9H-pur¡n-6-il-amino)-etiI)-piridin-2-ol ; N-(2-(1 H-pirrolo-[2,3-b]-p¡ridin-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-ami na; N-(2-(6-(2-(dietil-amino)-etoxi)-1 H-indol-3-¡l)-etil)-2-(5-fIuoro-p¡ridin-3-il)-9-isoprop¡ l-9H-pu ri n-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoro-p¡ridin-3-¡l)-3-isopropil-3H-inn¡dazo-[4,5-b]-pir¡d¡n-7-¡l-amino)-etil)-fenol ; N-(2-( 1 H-indol-3-i l)-eti l)-9-sec-butil-2-(2-metil-1 H-im¡dazol-1 -¡l)-9H-purin-6-am¡na; 4-(2-(2-(2-etil-1 H-im¡dazol-1 -il)-9-¡sopropil-9H-purin-6-il-ami no)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(2-propil-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 3-(2-(2-(5-fl uoro-piridin-3-il)-9-ísopropiI-9H-pur¡n-6-ü-amino)-etil)-1 H-indol-6-ol; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(5-metil-p¡ r¡d¡n-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etiI)-9-isoprop¡l-2-(2-metil-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-pi ridin-3-i l)-9-isopropil-N-(2-(7-metil-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-pur¡n-6-am¡na; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-pi ridin-3-¡l)-9-(oxetan-3-¡I) -9H-purin-6-amina; N-(2-( 1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-metil-pir¡din-3-¡I)-9-(oxetan-3-il)-9H-pu r¡n-6-amina; N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-¡l)-et¡l)-2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-9-¡soprop¡l-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(6-metil-1 H-indol-3-il)-etil)- 9H-pu rin-6-amina; 2-(5-fluoro-pi r¡din-3-¡l)-9-isoprop¡l-N-(2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-pur¡n-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-p¡ridin-3-¡l)-9-isopropil-9H-pu r¡n-6-amina; N-(2-(7-fluoro-1 H-indol-3-il)-eíil)-2-(5-fIuoro-p¡r¡din-3-¡l)-9-¡sopropil-9H-pur¡n-6-ami na; 2-(5-fiuoro-pi ridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(4-metil-1 H-indol-3- ¡l)-etil)-9H-pur¡n-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-7-isopropil-7H-pirrolo-[2,3-d]-p¡ r¡m¡d¡n-4-il-amino)-et¡l)-fenol ; 9-¡sopropil-2-(pir¡din-3-il)-N-(2-(pirid¡n-4-il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-pirrolo-[2,3-b]-pir¡di n-5-¡I)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-pur¡n-6-amina; 4-(2-(2-(5-fl uoro-p¡ridin-3-¡l)-9-(1 -hidroxi-propan-2-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-2-metil-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-c¡clohexil-9H-purin-6-¡l-amino)-etil) -fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(tiofen-3-¡ l)-9H-purln-6-¡l-amino)-et¡l)-fenol ; y 1 -(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9H-pu rin-9-il)-etil)-plrrolidin-2-ona. Los compuestos de la fórmula I se detallan en los Ejemplos y en la Tabla I , que se encuentran más adelante.
En otra modalidad, están los compuestos de la fórmula la: en donde: L se selecciona a partir de -N R5a(CH2) o-3- -N R5aCH (C(0) OCH3)CH2-, -N R5a(CH2)2N R5b-, -NR5a(CH2)2S-, -N R5aCH2CH(CH3) C H2-, -N R5aCH(CH3) C H 2-, -(CH2)3-, -CH2OCH2-, -CH2N R5aCH2-, -N R5aC(0)CH2- y -N R5aY-; en donde R5a y R5b se seleccionan independientemente a parti r de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; e Y es un anillo de heteroarilo de 5 miembros que contiene hasta 3 heteroátomos seleccionados a partir de O, N y S; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-2-ilo, furan-3-ilo , benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan-3-ilo, pirimidin-4-ilo, pirim¡din-5-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, piridin-2-ilo, piridazin-3-ilo, plridin-4-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo, pirrolidin- -ilo, pirazin- 2- ilo, piridin-3-ilo, 1 H-pirazol- 1 -ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-indol-2-ilo, tiazol-4-ilo, 1 H-indol-3-i lo, 1 H-pirrol-2-ilo y tiazol-5-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-2-ilo, furan-3-i lo, benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan- 3- ilo, pirimidin-4-ilo, pi ri midin-5-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 1 H-pirazol-3-iio, piridin íl-2-ílo, piridazin-3-ilo , piridin-4-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo , pirrolidin-1 -ilo, pi razin-2-?? , pi ridi ni ?-3-ilo , 1 H-pirazol-1 -ilo, piridazin- 4- ilo, 1 H-indol-2-ilo, tiazol-4-¡Io, 1 H-indol-3-ilo, 1 H-pirrol-2-ilo o tiazol-5-ilo de pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a parti r de ciano, hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, hidroxilo , amino, -C(0) R8a, — S(O)0-2 Rsa , -C(0)OR8a y -C(0) N R8aR8b; en donde R8a y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ; con la condición de que R-, y R3 no son ambos hidrógeno; R2 se selecciona a partir de -S (0)2N R6aR6b, -N R9aC(0) R9b, -N R6aC(0)N R6bR6c, feniio, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-i lo, benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan-3-ilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-2-ilo, furan-3-i lo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-i!o, piperidin-1 -ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo , 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin- 1 -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 3-oxo-piperazin-1 -ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 ,2,3,4-tetra-hidro-naftalen-2-ilo, indolin-5-ilo, 2-oxo-indolin-5-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 H-indazol-5-ilo y 1 H-imidazol-4-ilo; en donde R6a, R6 y R6c se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde estos feniio , 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan-3-ilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo o furan-2-ilo, furan-3-ilo , piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-¡lo , piperidin-1 -ilo, piridin-2-ilo , pi ridin-3-iIo, piridin-4-ilo, I H- ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin- -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 3-oxo-piperazin-1 -ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 ,2,3,4-tetrahidro-naftalen-2-i lo, indolin-5-i lo, 2-oxo-indoiin-5-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 H-indazol-5-ilo o 1 H-imidazol-4-ilo de R2 están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de hidroxiio, halógeno, metilo, metoxi lo, amino, -S(0)2N R7aR7b , -OS(0)2N R7aR7b y -N R7aS(0) 2R7b ; en donde R7a y R7b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ; o u n solo radical seleccionado a partir de 5-((3aS ,4S ,6aR)-2-oxo-hexahidro- 1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanoiloxilo, 2-(2-(5-((3aS ,4S ,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-i l)-pentanamido)-etoxi)-etoxi lo y 2-(4-(4-hex-5-inamido-benzoii)-fenil-amino)-2-oxo-etoxilo; R3 se selecciona a parti r de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y bifenilo; y R4 se selecciona a partir de isopropilo, ¡sobutilo, butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, ciclopropilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, piperidin-4-ilo , piperidin-3-ilo, piperidin-2-ilo, tetrahidro-2H-pi ran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrofuran-2-ilo, bencilo, (4-pentil-feniI)-(fenil)-metilo y 1 -(1 - (2-oxo-6,9, 12-trioxa-3-aza-tetradecan-1 4-¡l)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo; en donde estos ciclopropilo, oxetan-3-ilo , oxetan-2-ilo, benzhidrilo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetrahidro-2H-pi ran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrofuran-2-i!o, bencilo, (4-pentil-fenil)-(fenil) -metilo, o 1 -( 1 -(2-oxo-6, 9, 12-trioxa-3-aza-tetradecan- 14-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo pueden estar opcional mente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a parti r de alqui lo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno; o los derivados de N-óxido , derivados de pro-fármaco, derivados protegidos, los isómeros i ndividuales y mezclas de isómeros de los mismos; o las sales farmacéuticamente aceptables y solvatos (por ejemplo, hidratos) de estos compuestos.
En una modalidad adicional, con referencia a los compuestos de la fórmula la, L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)o-3~1 -NR5aCH(C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b- -N RSa(CH2)2S-, -NR5aCH2CH(CH3)CH2-, -N R5aCH(CH3)CH2-, ~(CH2)3-, -CH2OCH2-, -CH2NR5aCH2-, -NR5aC(0)CH2- y - R5aY— ; en donde R5a y R5b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y metilo; Y se selecciona a partir de isoxazol y 1 ,3,4-oxadiazol.
En otra modalidad, cuando L es -NR5a(CH2)o.3, es de preferencia -NR5a(CH2)1.3 (en donde 1-3 en la presente significa 1, 2 ó 3).
En otra modalidad, R-, se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofen-3-i!o, tiofen-2-ilo, furan-3-ilo, furan-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, piridin-4-ilo, piridin-2-ilo, pirrolidin-1 -iio, 1 H-pirazol-4-ilo, pirazin-2-ilo, piridazin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1H-pirazol-1-ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-imidazol- -ilo, tiazo!-4-ilo, 1H-pirrol-2-ilo, tiazol-5-ilo, y piridin-3-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-3-ilo, tiofen-2-ilo, furan-3-ilo, furan-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, piridin-4-ilo, piridin-2-ilo, pirrolidin-1 -ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, pirazin-2-ilo, piridazin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirazol- -ilo, 1H-pirazol-3-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo, tiazol-4-ilo, 1 H-pirrol-2-ilo, tiazol-5-ilo o piridin-3-ilo de Ri están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, metilo, metil-sulfonilo, metoxilo, halógeno, hidroxilo, carboxilo, etoxi- carbonilo, metil-amino-carbonilo y amino; con la condición de que R-¡ y R3 no son ambos hidrógeno.
En otra modalidad, R2 se selecciona a partir de amino-sulfonilo, metil-carbonil-amino, metil-sulfonii-amino, amino-sulfonil-oxilo, urea, fenilo, 1 H-indoI-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan-3-ilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-i!o, furan-2-ilo, furan-3-ilo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-ilo, piperidin-1 -ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 3-oxo-piperazin-1 -ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1,2,3, 4-tetrahidro-naftalen-2-ilo, indolin-5-ilo, 2-oxo-indolin-5-ilo, 1H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 H-indazol-5-ilo y 1 H-imidazol-4-ilo; en donde estos fenilo, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, benzo-[b]-tiofen-2-ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, benzo-furan-2-ilo, benzo-furan-3-ilo, tiofen-2-ilo, tíofen-3-ilo, furan-2-i!o, furan-3-iIo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-ilo, piperidin-1 -ilo, piridin-2-iio, piridin-3-ilo, piridin-4-??, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 - ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 3-oxo-piperazin-1 -ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 ,2,3,4-tetra-hidro-naftalen-2-ilo, indolin-5-iio, 2-oxo-indolin-5-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1H-indazol-5-iio y 1 H-imidazol-4-iio de R2 están opcionalmente sustituidos con hidroxilo, metoxilo, metilo, halógeno, amino, amino-suifonilo, 5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanoiloxilo, 2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahidro- 1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanamido)-etoxi)-etoxilo y 2-(4-(4-hex-5-i namido-benzoil)-fenil-amino)-2-oxo-etoxilo.
En otra modalidad, R3 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo, y bifenilo; y R4 se selecciona a partir de isopropilo, isobutilo, butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, ciclopropilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetrahidro-2H-piran-4-iio, fenilo, tetrahidrofuran-3-llo, tetrahidrofu ran-2-ilo, bencilo , (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo y 1 - (1 -(2-oxo-6,9, 12-trloxa-3-aza-tetra-decan-1 4-il)-1 H-1 ,2, 3-triazol-4-il)-etilo; en donde estos ciclopropilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidri lo, piperidin-4-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-2-i lo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetrahidro-2H-pi ran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofu ran-3-ilo, tetrahidro-fu ran-2-ilo, bencilo, (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo, o 1 -(1 -(2-oxo-6 ,9, 1 2-trioxa-3-aza-tetradecan-1 4-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo pueden estar opcional mente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de metilo y trifluoro-metllo.
En otra modalidad , están los compuestos seleccionados a partir de: 4-(2-(2-(benzo-fb]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-ii-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetra-hidro-2H-piran-3-i l)-9H-pu rin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(4-(trifluoro-metil)-bencil)-9H-purin-6-iI-amino)-etil)- fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isobutil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-metil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI; 4-(2-(2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9-(4-metil-bencil)-9H-pur¡n-6-¡l-amino)-etil)-fenol; N-(2-(1 H-lndol-3-il)-et¡I)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-¡l)-9-isopropil-N-(2-(tiofen-3-¡l)-etil)-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-¡sopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(4-fIuoro-fenetil)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; N(4-amino-fenetil)-2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-¡soprop¡l-2-(pirimidin-5-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI; 4-(2-(9-isopropil-2-(pir¡d¡n-3-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-fenil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(furan-3-U)-9-isopropil-9H-purln-6-¡l-amino)-etil) -fenol; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(4-fluoro-fenetil)-9-fenil-9H-purin-6-am¡na; N-bencil-8-(bifenil-4-il)-9-¡soprop¡l-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(nonan-2-¡l)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-((4-pentil-fenil)-(fenil)-met¡I)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; N-(2-(1H-indol-3-¡l)-etil)-2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9-sec-but¡l-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-sec-butil-9H-pur¡n-6-¡l-amino)-etil)-fenol; 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-ll)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1 H-lndol-5-ol; 5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazoI-4-¡l)-pentanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1 H-indol-5-ilo; N-(2-(2-(3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-¡I-am¡no)-etil)-1 H- indol-5-iloxi)-etoxi)-etil)-5-((3aS ,4S ,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-im¡dazol-4-il)-pentanam¡da; N-(4-(4-(2-(3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropii-9H-purin-6-il-am¡no)-etil)-1 H-indol-5-iloxi)-acetamido)-benzoiI)-fenil)-hex-5-inamida; N-(2-(2-(2-(2-(4-( 1 -(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9H-purin-9-il)-etil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-etoxi)-etox¡)-etoxi)-etil)-acetamida; 4-(2-(9-iso-prop¡I-2-(piridin-4-¡l)-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-et¡l)-fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenet¡l-am¡no)-9-isoprop¡l-9H-pu rin-2-M)-nicot¡nato de etilo; 5-(6-(4-h¡droxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-nicotinato de etilo; 4-(2-(2-(6-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(4-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etii)-f enol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(2-nnetoxi-piridin-3-il)-9H-purin-6-i l-amino)-etil)-fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi rrolid¡n-1 -il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l) -fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-( 1 H-pirazol- -il)-9H-purln-6-il-ami no)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(1 H-imidazol-1 -il)-9-¡sopropil-9H-pur¡n-6-¡l-ami no) -etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(pir¡dazin-3-il)-9H-pu rin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi ridazin-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(pirazin-2-il)-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-2-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(metil-sulfonil) -pir¡din-3-il)-9 H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-metil-pi ridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(2-cloro-piridin-3-il)-6-¡sopropi l-2,6-di hidroimidazo-[4,5-c]-pirazol-3-il-annino)-etil)-fenol ; 4-(2- (2-(4-cloro-piridin-3-¡l)-9-isopropll-9H-purin-6-il-amino) -etil) -fenol ; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(4-metox¡-pi rid¡n-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(5-fluoro-pir¡din-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(t¡azol-4-i l)-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-¡l-am¡no)-et¡l)-fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-( 1 H-pirazol-3-il)-9H-purin-6-il-am¡no)-etil) -fenol ; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(1 H-pi razol-4-il)-9H-pur¡n-6-¡l-am¡ no)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(tiofen-2-il)-9H-purin-6~¡l-amino)-etil)-fenol; ácido 4-(6-(4-hidroxi-fenetil-ami no)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-tiofen-2-carboxílico; 4-(2-(2-(furan-2-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(4-metil-t¡ofen-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-2-metoxi-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-2-metoxi-fenol; N-[2-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-[2-(5-metil-1 H-¡ndol-3-il)-etil]-9-(propan-2-¡l)-2-(pirídin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-[2-(piperidin-4-il)-etll]-9-(propan-2-il)-2-(pirid¡n-3-¡l)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-piperidin-4-ol ; (2S)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-{[9-(propan-2-¡l)-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-propanoato de metilo; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(pi r¡din-3-il)-9H-purin-6-i[]-amino}-etil)-bencen-1 -sulfonamida; 2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]-amino}etan- 1 -sulfonamida; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-bencen-1 ,2-diol ; N-[2-(1 H-imidazol-4-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-imidazolidin-2-ona; N-[2- (5-amino-1 H-1 ,2,4-triazol-3-¡ l)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(p¡ridin-3-¡l)-9H-pur¡n-6-amina; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-¡l]-am¡no}-etil)-pi r¡din-2-am¡na; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-pirazol-4-il)-propil]-2-(piridin-3-i l)-9H-pur¡n-6-amina; N-[2-({[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-i l]-amino}-metil)-prop¡l]-acetamida; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(pir¡din-3-il)-9H-purin-6-¡l]-amino}-etil)-piperazin-2-ona; N-{2-[(3-met¡l-1 H-1 ,2,4-triazol-5-il)-sulfanil]-eti!}-9-(propan-2-il)-2-(pirid¡n-3-iI)-9H-purin-6-amina; N-[3-(3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-propil]-9-(propan-2-iI)-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-amina; (2-{[9-(propan-2-¡l)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-urea; 5-({[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-iI)-9H-purin-6-il]-amino}-metil)-2,3-dihidro-1 H-1 ,3-benzo-diazol-2-ona; 2-( -benzo-t¡ofen-3-il)-N-[2-(1 H-imidazol-4-il)-etil]-9-(propan-2-¡l) -9H-pur¡n-6-amina; 1 - (2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-¡l)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-imidazolidin-2-ona; N-[2-(5-am¡no-1 H-1 ,2,4-triazol-3-ii)-etil]-2-(1 -benzo-t¡ofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-¡l)-9-(propan-2-il)-9H-pu rin-6-¡l]-am¡no}-etil)-p¡ridin-2-amina; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-pirazol-4-il)-prop¡l]-9H-pur¡n-6-amina; N-[2-({[2-( 1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-¡l)-9H-purin-6-il]-amino}-metil)-propil]-acetamida; 4-(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-¡l]-amino}-eti l)-piperazin-2-ona; 2-(1 -benzo-tiofen-3-iI)-N-{2-[(3-metiI-1 H-1 ,2,4-triazol-5-il)-sulfanil]-etil}-9-(propan-2-il)-9H-pu rin-6-ami na; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-propil]-9-(propan-2-iI)-9H-purin-6-am¡na; (2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-¡l)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]-amino}-et¡l)- urea; 5-({[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purm-6-il]-amino}-metil)-2,3-dih¡dro-1 H- ,3-benzo-diazol-2-ona; N-[2-(1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-iI)-2-(pi ridin-3-i l)-9H-pur¡n-6-amina; N-(4-(2-(9-¡soprop¡l-2-(piridin-3-il)-9H-pur¡n-6-il-ami no)-eti l)-fenil)-metan-sulfonamida; 4-(2-(2-(pir¡din-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-ami no) -etil) -fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-ami no)-propil) -fenol ; 4-(2-(9-(oxetan-3-i l)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-et¡l) -fenol ; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isoprop¡l-9H-purin-2-iI)-N-metil-n¡cotin amida; 6-(9-isopropil-2-(piridin-3-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-5, 6,7, 8-tetrahidro-naftalen-2-ol ; N-(2-(1 H-indazol-3-M)-eti l)-9-isoprop¡ l-2-(piridin-3-i l)-9H-pur¡n-6-am¡na; 4-(2-((9-¡so-propil-2-(p¡ridin-3-iI)-9H-pur¡n-6-¡ l)-(metil)-amino)-et¡l)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-8-metil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-am¡no)-etil)-fenol ; 1 -(2-(9-isoprop¡l-'2-(piridin-3-i l)-9H-purin-6-l l-amino)-etil)-1 H-benzo-[d]-imldazol-2(3H)-ona; 4-(3-(9-isopropil-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-¡l)-propll) -fenol ; 4-((((9-¡sopropil-2-(piridin-3-il)-9H-pur¡n-6-H)-metil)-(metil)-amino)-metil)-fenol ; 4-(((9-¡sopropll-2-(p¡ridin-3-il)-9H-purin-6-il)-metil-amino)-metiI)-fenol; 4-(((9-¡sopropil-2-(piridin-3-i l)-9H-purin-6-i l)-metoxl)-metil) -fenol ; N-(2-(indolin-5-il)-etil)-9-isopropil-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-( 1 -metil-p¡peridi n-4-il)-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-i l-amino) -etil) -fenol; 4-(2-(9-(piperidin-4-il)-2-(pi ridin-3-ll)-9H-purin-6-¡ I-amino)-etil)-fenol; N-(2-(1 H-indazol-5-il)-etil)-9-isopropiI-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-benzo-[d]-imidazoI-5-il)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) indolin-2-ona; 4- (2-(9-ciclopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-(1 -hidroxi-propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; sulfamato de 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenilo; 2-(4-hidroxi-fenii)-N-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)-acetamida; 4-(5-(9-isopropil-2-(pi ridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino) isoxazol-3-il) -fenol; 4-(5-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)- ,3,4-oxadiazol-2-il)-fenol; 4-(2-(2-(2-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-M-amino)-etiI)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(1 -met¡l-1 H-pirrol-2-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol ; y 4-(2-(9-isopropi l-2-(tiazol-5-il)-9H-purln-6-il-amino)-etil)-feno[.
En otra modalidad, está un compuesto de la fórmula 1 f: en donde: R2 se selecciona a parti r de 1 H-indol-3-ilo, y fenilo opcionalmente sustituido con hidroxilo; y R4 se selecciona a partir de isopropilo, butilo secundario , benzhidrilo, nonan-2-ilo , oxetan-3-ilo y tetrahidrofuran-3-ilo.
En una modalidad adicional , están los compuestos seleccionados a partir de: 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil- 9H-pu rin-6-¡l-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-benzh¡dril-2-(benzo-[b]-tiofen-3-i[)-9H-purin-6-¡!-amino)-et¡l)-fenol; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-amina; 4- (2- (2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(nonan-2-¡l)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol ; N-(2-(1 H-indol-3-ii)-et¡l)-2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-i l)-9-sec-butil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡I)-9-(oxetan-3-il)-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-etil)-fenol ; (S)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-M)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol ; y (R)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l)-fenol .
En otra modalidad, está un compuesto de la fórmula 1 g : en donde : R2 se sel ecciona a partir de: 1 H-pi rrolo-[2,3-b]-piridin-3-ilo; 1 H-indol-3-ilo opcional mente sustituido con 1 a 2 radicales seleccionados independientemente a partir de halógeno , metilo y metoxi lo; y fenilo opcional mente sustituido con 1 a 2 radicales seleccionados independientemente a partir de metilo, halógeno e hidroxilo; R4 se selecciona a partir de isopropilo, butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, prop-1 -en-2-ilo , benzhidrilo, nonan-2-ilo, oxetan-3-ilo y tetrahidrofuran-3-ilo; y Ra, Rb y Re se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno, ciano, metilo, halógeno , -S02CH3 y trifluoro-metilo.
En una modalidad adicional, están los compuestos seleccionados a parti r de: 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-iI)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(6-fluoro-piridin-3-il) -9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(4-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol ; 5-(6-(4-hidroxi-feneti l-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-ii)-nicotinonitrilo; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(metil-sulfonil)-piridin-3-il)-9 H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(4-cloro-piridin-3-i l)-9-isopropil-9H-purin-6-i l-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 9-isopropil-N-(2-(6-metoxi-1 H-indol-3-¡l)-etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 9-isopropil-N-(2-(5-metil- 1 H-indol-3-il)-etil)-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-ami na; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ami na; 4-(2-(9-(oxetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-pu rin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-(1 -hidroxi-propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etii)-fenol; 4-(2-(2-(2-fluoro-piridín-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 5-(9-sec-butil-6-(4- idroxi-3-metil-feneti l-amino)-9H-pur¡n-2-il)-nicotinonitrilo; 4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(5-cloro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(trifluoro-metil)-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)- fenol ; 5-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amlno)-9-sec-butil-9H-purin-2-il)-nicotlnonltrilo; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-amlna; ( R)-N-(2-(1 H-lndol-3-II)-etil)-9-sec-butil-2-(5-fluoro-pirldln-3-¡l)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-9H-purin-6-am¡ na; N-(2-(1 H-indol-3-il)-et¡l)-9-sec-buti l-2-(5-fl uoro-piridin-3-¡l)-9H-pur¡n-6-amina; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-¡ l)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-pi ridin-3-il)-9H-purin-6-ami na; (S)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-pir¡din-3-il)-9H-purin-6-amlna; 5-(6-(4-hidroxi-fenetll-amino)-9-(oxetan-3-ll)-9H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; 4-(2-(6-(5-fluoro-p¡ridin-3-il)- -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pir¡m ¡di n-4-il-amino)-etil) -fenol; 3-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-¡sopropil-9H-pu rin-2-il)-isonicot¡nonitrilo; 4-(2-(2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-7-isopropi l-7H-pi rrolo-[2,3-d]-pirimid¡n-4-¡l-am¡no)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(6-metll-piridin-3-il)-9H-purin-6-il-am¡no)-et¡l) -fenol; 2-cloro-4-(2-(9-isoprop¡l-2-(pir¡d¡n-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol ; 3-fl uoro-4-(2-(9-isoprop¡l-2-(pir¡d¡n-3-¡l)-9H-pur¡n-6-ll-amino)-etil)-fenol; N-(2-(5-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-am¡na; N-(2-(5-cloro-1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-pur'in-6-am ina; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(p¡ridin-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-2-metil-fenol; 2-(6-(2-(1 H-¡ndol-3-il)-eíil-amino)-2-(5-fluoro-p¡ridin-3-¡l)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol; (R)-2-(6-(2-(1 H-lndol-3-il)-etil-aml no)-2-(5-fluoro-pir¡din-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol; (S)-2-(6-(2-(1 H-indol-3-¡l)-etll-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9 H-purin-9-¡l)-propan-1 -ol; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-¡l)-9-(tetrahidrofu ran-3-il)-9H-purl n-6-am¡na; 4-(2-(6-(5-fIuoro-piridin-3-¡l)- 1 -isoprop¡l-1 H-imidazo-[4,5-c]-p¡ridin-4-il-amino)-eti l)-fenol ; N -(2-( 1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-pir¡din-3-il)-9-isopropil-9H-pu r¡ n-6-amina; 2-(5-fl uoro-piridin-3-¡l)-9-isopropil-N-(2-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-pur¡n-6-am¡na; 2-(5-fluoro-piridín-3-il)-9-isopropi l-N-(2-(5-metox¡-1 H-indol-3-il)-etii)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-¡ndol-3-il)-etil)-2-(5-fl uoro-piridin-3-il)-9-(prop-1 -en-2-il)-9H-pu rin-6-amina; N-(2-(1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-¡l)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoro-piridin-3-iI)-3-isopropiI-3H-imidazo-[4,5-b]-pir¡din-7-il-amino)-etil)-fenol ; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-¡sopropil-2-(5-met¡I-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-pir¡din-3-il)-9-isoprop¡l-N-(2-(7-met¡l-1 H-indol-3-¡l)-etil)-9H-purin-6-amina; N -(2-( 1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-p¡ ridin-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-puri n-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-et¡l)-2-(5-metil-p¡r¡din-3-i!)-9-(oxetan-3-¡l)-9H-purin-6-am¡na; N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-pirid¡n-3-¡l)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-ami na; 2-(5-fluoro-p¡rid¡n-3-il)-9-isopropil-N-(2-(2-met¡l-1 H-indol-3-¡l)-et¡I)-9H-puri n-6-amina; 2-(5-fluoro-pi ridin-3-¡l)-9-¡sop ropi l-N-(2-(6-meti!-1 H-indol-3-i))-et¡I)-9H-pur¡n-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1 H-indol-3-¡l)-etil)-2-(5-fIuoro-pi rid¡n-3-il)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-am¡na; 2- (5-fluoro-pi ridin-3-i l)-9-isopropil-N-(2-(4-metil-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(7-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-pur¡ n-6-amina; y 4-(2-(2-(5-fl uoro-pi ridin- 3- il)-9-(1 -h¡drox¡-propan-2-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-2-metil-fenoi .
En otra modalidad, está u n método para la utilización de un compuesto de la fórmula I para esti mular la expansión de las células madre mediante el aumento del número de divisiones; comprendiendo este método poner en contacto las células madre con un compuesto de la fórm ula I .
En otra modalidad, está un método en donde la expansión de las células madre es in vivo, in vitro, o ex vivo.
En otra modalidad, está un método en donde las células madre son células madre hematopoiéticas humanas.
En otra modalidad, está una población celular con cél ulas madre hematopoiéticas expandidas, como las que se obtienen o que se pueden obtener mediante el método de la invención .
En una modalidad adicional , está una composición que comprende una población celular con células madre hematopoiéticas expandidas derivadas a partir de uno o dos unidades de sangre de cordón umbilical , de preferencia una unidad de sangre de cordón umbilical, en donde esta composición contiene una cantidad total de células de cuando menos 1 05 células, 1 07 células, 1 08 células o 1 09 cél ulas, y en donde entre el 20 y el 1 00 por ciento de las cél ulas totales son células CD34+, por ejem plo entre el 40 y el 80 por ciento de las células totales son CD34+.
En otra modalidad, está un método para el tratamiento de una enfermedad o trastorno para el cual la terapia con células madre daría co mo resultado la prevención , el tratamiento o la erradicación de este trastorno.
Se anticipa que a medida que progresa el uso de células madre, se irán expandiendo las enfermedades que se puedan tratar mediante trasplante de cél ulas madre . Una lista no limitante de los Ejemplos sigue más adelante.
En otra modalidad, está el uso de un compuesto de la fórmula I como se define en la Breve Descripción de la I nvención , o una sal del mismo, en la preparación de una composición para el tratamiento de una enfermedad de inmunodeficiencia heredada, una enfermedad autoi nmune y/o un trastorno hematopoiético.
En una modalidad adicional, la administración es un trasplante autólogo, y el trastorno hematopoiético se selecciona a parti r de mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, leucemia mieloide aguda, neuroblastoma, tumores de cél ulas germinales, trastornos autoinmunes y amiloidosis.
En una modalidad adicional , los trastornos autoinmu nes se seleccionan a parti r de lupus eritematoso sistémico (S LE) , y esclerosis sistém ica.
En una modalidad adicional, la administración es un trasplante alogénico, y el trastorno hematopoiético se selecciona a partir de leucemia mieloide aguda, l eucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocítica crónica, trastornos mieloproliferativos, s índromes mielodisplásicos, mieloma múltiple, li nfoma no de Hodgkin , enfermedad de Hodgkin, anemia anaplásica, aplasia de glóbulos rojos puros, hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia de Fanconi, talasemia mayor, anemia d repanocítica, inmunodeficiencia combinada grave (SCID) , síndrome de Wiskott-Aldrich , linfohistiocitosis hemofagocítica (H LH) , y errores innatos del metabolismo.
En una modalidad adicional , los errores innatos del metabolismo se seleccionan a partir de mucopolisacaridosis, enfermedad de Gaucher, leucodistrofias metacromáticas y adrenoleucodistrofias.
En otra modalidad, está un método para el tratamiento de una enferm edad de i nmunodeficiencia heredada, una enfermedad autoi nmune y/o un trastorno hematopoiético, el cual comprende admi nistrar a un paciente que necesite dicho tratamiento, células madre hematopoiéticas expandidas mediante un compuesto como se describe en la Breve Descripción de la Invención .
En una modalidad adicional, la administración es un trasplante autólogo , y el trastorno hematopoiético se selecciona a partir de mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, leucemia mieloide aguda, neuroblastoma, tumores de células germinales, trastornos autoinmunes y amiloidosis.
En una modalidad adicional, los trastornos autoinmunes se seleccionan a parti r de lupus eritematoso sistémico (SLE) , y esclerosis sistémica.
En una modalidad adicional, la administración es un trasplante alogénico, y el trastorno hematopoiético se selecciona a partir de leucemia mieloide aguda, leucemia llnfoblástica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocítica crónica, trastornos mieloproliferativos , síndromes mielodisplásicos , mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, anemia anaplásica, aplasia de glóbulos rojos puros, hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia de Fanconi, talasemia mayor, anemia drepanocítica, inm unodeficiencia combinada grave (SCID) , síndrome de Wiskott-Aldrich, linfohistiocitosis hemofagocítica (HLH) , y errores innatos del metabolismo.
En una modalidad adicional , los errores innatos del metabolismo se seleccionan a partir de mucopolisacaridosis, enfermedad de Gaucher, leucodistrofias metacromáticas y adrenoleucodistrofias .
Uti lidad Las células madre hematopoiéticas son células primitivas capaces de regenerar todas las células de la sangre. Durante el desarrollo, la hematopoiesis se translocaliza desde el hígado fetal hasta la médula ósea, la cual entonces sigue siendo el sitio de la hematopoiesis du rante toda la edad adulta. Una vez que se ha establecido la hematopoiesis en la médula ósea, las células madre hematopoiéticas no se distribuyen aleatoriamente a través de toda la cavidad ósea. En lugar de esto , se encuentran en cercana proximidad a las superficies endostiales. A medida que aumenta la distancia a partir de la superficie ósea, aumenta más el n úmero de células madre madu ras. Finalmente, a medida que se ap roxima el eje central longitudinal del hueso, se presenta la diferenciación terminal de las células maduras.
La expansión del número de células madre, ya sea a partir de una fuente adulta, de sangre de cordón umbilical, fetal , o embrionaria, tendría un enorme impacto sobre el trasplante y otras terapias para las enfermedades y trastornos de hematología y oncología, el m enor del cual sería una mayor seguridad y costos reducidos . Como se describe en los métodos en la presente, La cantidad de células madre hematopoiéticas se aumenta ex vivo. Es importante un método para aumentar la cantidad de células madre, debido a que en la actualidad, aproximadamente el 25 por ciento de los trasplantes de donadores autólogos está prohibido por la escasez de suficientes células madre. En adición, menos del 25 por ciento de los pacientes que necesitan un trasplante alogénico pueden encontrar un donador histocompatible. Actualmente existen bancos de sangre de cordón umbilical y cubren la amplia combinación racial de la población en general , pero estos bancos están restringidos actual mente a su uso en niños debido a las cantidades inadecuadas de células madre en las mu estras para los receptores adultos . Un método para aumentar la cantidad de cél ulas madre permitirá que la sangre de cordón sea útil para los pacientes adultos, expandiendo de esta manera el uso del trasplante alogénico. Los compuestos de la invención también se pueden utilizar para expandir las cantidades de células progenitoras, las cuales son clínicamente útiles, por ejemplo, para agilizar el injerto y disminu ir la duración de la neutropenia.
De conformidad con lo anterior, se proporciona un método para aumentar el nú mero de células madre hematopoiéticas. Como se utiliza en la presente, un au mento en las células madre hematopoiétícas significa que el sujeto tiene cuando menos un aumento del 1 0 por ciento , u n aumento del 20 por ciento, un aumento del 30 por ciento, o mayor, de las células madre hematopoiétícas . Las células madre hematopoiétícas pueden consisti r en un subconjunto de células CD34+, y el aumento de las células madre hematopoiétícas se puede medir indirectamente contando el número de células CD34+ en una población celular y, opcionalmente, evaluando las propiedades de diferenciación de las células CD34+ mediante el anál isis de las u nidades formadoras de colonias (CFU) , como se describe en la parte experimental más adelante: Un aumento del número de células CD34+ en cultivo de cuando menos el 1 0 por ciento, de preferencia un aumento del 20 por ciento, ó u n aumento del 30 por ciento o mayor, comparándose con un control sin expansión, indica la expansión de las células madre hematopoiétícas. La población expandida de cél ulas madre hematopoiétícas se cosecha, por ejemplo, a partir de una muestra de médula ósea de un sujeto, o a partir de un cultivo. La cosecha de las células madre hematopoiétícas se define como el desalojamiento o la separación de las células. Esto se lleva a cabo empleando un número de m étodos, tales como métodos enzimáticos, no enzimáticos, centrífugos, eléctricos, o basados en el tamaño, o de preferencia, mediante la inundación de las células utilizando medios de cultivo (por ejemplo, los medios en donde se incuben las células) o una solución reguladora. Las - células opcionalmente se recolectan , se separan , y se expanden adicional mente, generando poblaciones todavía mayores de cél ulas madre hematopoiéticas y una progenie diferenciada.
Un método para la elaboración de una población expandida de células madre hematopoiéticas comprende poner en contacto un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión de AH R y/o un efector corriente abajo de AHR , por ejemplo , un compuesto de la invención , con una población celular de partida (es decir, una población de cél ulas no expandidas) , la cual comprende u na mezcla de células madre hematopoiéticas y opcionalmente células que soportan a las células madre hematopoiéticas. El paso de admi nistración ocurre ex vivo, in vivo y/o in vitro. Como se describe en la presente, la población expandida de cél ulas madre hematopoiéticas se administra opcionalmente a un sujeto. Para la expansión ex vivo, este agente para la expansión de las células madre hematopoiéticas, por ejemplo, un compuesto de la invención , se puede formular en sulfoxido de dimetilo, o en algún otro vehículo adecuado , "se lava" de las células , y las células se pueden transferi r, por ejem plo, a un regulador de infusión . Por consiguiente, se proporcionan métodos para suministrar una población expandida de células madre hematopoiéticas' a un sujeto, los cuales comprenden administrar al sujeto la población expandida de células madre hematopoiéticas descritas en la presente o elaboradas mediante los métodos descritos en la presente. La población expandida de cél ulas madre hematopoiéticas se utiliza opcionalmente para hacer células sanguíneas. Las células sangu íneas se administran opcionalmente a un sujeto que las necesite . Opcionalmente, el sujeto es el mismo sujeto a partir del cual se haya derivado la población no expandida de células madre hematopoiéticas o la mezcla de células madre hematopoieticas y células que soportan a las células madre hematopoiéticas.
Como se utiliza en la presente, el término célula que soporta a las células madre hematopoiéticas se refiere a las células que se encuentran natural mente en la vecindad de una o más células madre hematopoiéticas, de tal manera q ue los factores liberados por las células que soportan a las cél ulas madre hematopoiéticas llegan a las células madre hematopoiéticas , por ejemplo, mediante difusión . Las células que soportan a las células madre hematopoiéticas incluyen , pero no se limitan a, células estromales linforreticulares. Las células estromales linforreticulares, como se utilizan en la presente, incluyen , pero no se limitan a, todos los tipos de células presentes en un tejido li nfoide que no son linfocitos o precursores o p rogenitores de de linfocitos. Por consiguiente, las células estromales linforreticulares i ncl uyen osteoblastos, células epiteliales, células endoteliales, células mesoteliales, células dend ríticas, esplenocitos y macrófagos. Las cél ulas estromales li nforreticulares también incluyen las células que ordinariamente no funcionarían como células estromales linforreticulares, tales como los fibroblastos , los cuales se hayan alterado genéticamente para secretar o expresar sobre su superficie celular los factores necesarios para el mantenimiento, el crecimiento, o la diferenciación de las células mad re hematopoiéticas, incluyendo su progenie . Las células estromales linforreticuiares opcionalmente se derivan a parti r de la desagregación de un pedazo de tejido li nfoide. Estas células son capaces de soportar, in vitro o in vivo, el mantenimiento, el creci miento, o la diferenciación de las células madre hematopoiéticas , incluyendo su progenie. Mediante tejido linfoide, se pretende inclui r médula ósea, sangre periférica (incluyendo sangre periférica movilizada) , sangre de cordón u mbilical, sangre placentaria, hígado fetal , células embrionarias (i ncluyendo cél ulas embrionarias madre) , células derivadas de aorta-gónadas-mesonefros, y tejido blando linfoide. El tejido blando linfoide, como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, tejidos tales como timo, bazo, hígado , nodos linfáticos, piel , am ígdalas , adenoides y placas de Peyer, y combinaciones de los mismos.
Las células estro males l inforreticuiares proporcionan el micro-medio ambiente de soporte en el tejido linfoide intacto para el mantenimiento, el crecimiento , o la diferenciación de cél ulas madre hematopoiéticas , incluyendo su progenie. El micro-medio ambiente incluye los factores solubles y de superficie celular expresados por los diferentes tipos de células que comprenden el estroma li nforreticular. En térmi nos generales , el soporte que proporcionan las células estromales linforreticuiares se caracteriza como dependiente del contacto as í como no dependiente del contacto.
Las células estromales linforreticuiares, por ejemplo , son autólogas (propias) o no autólogas (no propias, por ejemplo, heterólogas , alogénicas, singénicas , o xenogénicas) con respecto a las células madre hematopoiéticas. Autólogas, como se utiliza en la p resente, se refiere a las células a partir del mismo sujeto. Alogénicas, como se utiliza en la p resente, se refiere a las células de la misma especie que difieren genéticamente. Singén icas, como se utiliza en la presente, se refiere a las células de un sujeto diferente que son genéticamente idénticas a la célula en la comparación . Xenogénicas, como se utiliza en la presente, se refiere a las cél ulas de una especie diferente. Las células estromales N nforreticulares se obtienen , por ejemplo, a partir del tejido linfoide de u n sujeto humano o no humano en cualquier tiempo después de que se ha desarrollado el órgano/tejido hasta una etapa (es decir, la etapa de maduración) en la que pueda soportar el mantenimiento, el crecimiento, o la diferenciación de las células madre hematopoiéticas. El tejido linfoide a partir del cual se derivan las células estromales linforreticulares usualmente determina el emprendimiento de las células madre hematopoiéticas de compromiso con el linaje, dando como resultado la especificidad de linaje de la progenie diferenciada.
El co-cultivo de células madre hematopoiéticas (y la progenie de las mismas) con células estromales linforreticulares, usualmente ocu rre bajo condiciones conocidas en la materia (por ejemplo, temperatura, contenido de C02 y de 02, medio nutritivo, duración , etc.) . El tiempo suficiente para aumentar el número de células es un tiempo que puede ser fácilmente determinado por una persona experta en la materia, y varía dependiendo del número original de células sembradas. Las cantidades de células madre hematopoiéticas y de células estromales linforreticulares inicialmente introducidas (y subsiguientemente sembradas) varía de acuerdo con las necesidades del experimento. Las cantidades ideales son fácilmente determinadas por una persona experta en este campo de acuerdo con las necesidades Como se utiliza a través de toda esta memoria descriptiva, un sujeto significa un individuo . Por consiguiente, los sujetos incluyen, por ejem plo, animales domésticos, tales como gatos y perros, animales de granja (por ejemplo, ganado, caballos, cerdos, ovejas, y cabras), animales de laboratorio (por ejemplo, ratones, conejos, ratas, y cobayos) , mamíferos, mamíferos no humanos , primates , p rimates no hu manos ,, roedores, aves, reptiles, anfibios, peces, y cualquier otro animal . El sujeto es opcionalmente un mamífero , tal como un primate o un ser humano .
Métodos para expand i r las cél ulas madre hematopoiéticas La invención , por consiguiente, se refiere a un método para expandir las células madre hematopoiéticas, el cual comprende (a) proporcionar una población celular de partida que comprenda cél ulas madre hematopoiéticas, y (b) cultivar esta población celular de partida ex vivo en la presencia de un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo, bajo condiciones adecuadas para expandir las células madre hematopoiéticas.
El receptor de hidrocarburo de arilo (dioxina) (AH R) es un factor de transcripción activado por ligando citosolico que se sabe que media un gran número de efectos tóxicos y carcinogénicos en los animales y posiblemente en los seres humanos (Safe S 2001 Toxicol Lett 120: 1 -7) . Como una consecuencia de la activación del receptor de hidrocarburo de arilo mediante sus ligandos , muchos genes de destoxificación son inducidos transcripcionalmente, incluyendo aquéllos que codifican las enzimas metabolizantes xenobióticas en fase I, tales como los citocromos P450 CYP1 A1 , CYP 1 A2, CYP1 B1 y CYP2S 1 , y las enzimas en fase I I de UDP-glucuronosil-transferasa UGT1 A6, oxido-reductasa-1 de quinona dependiente de NAD(P) H (NQ01 ) , la deshidrogenasa de aldeh ido ALDH3A1 , y varias S-transferasas de glutationa.
En una modalidad, un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo se selecciona de entre el grupo que consiste en : (i) un compuesto orgánico ; (i i) una molécula de ARN de interferencia pequeño (siARN) capaz de sub-regular la expresión del receptor de hidrocarbu ro de arilo; y (iii) un oligonucleótido anti-sentido capaz de sub-regular la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo.
En una modalidad específica, este método para expandi r las células madre hematopoiéticas comprende: (a) proporcionar una población celular de partida que comprenda células madre hematopoiéticas, y (b) cultivar esta población celular de partida ex vivo en la presencia de un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo, bajo condiciones adecuadas para expandi r las células madre hematopoiéticas , en donde este agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo no es alfa-naftoflavona ó 3'-metoxi-4'-nitroflavona.
Los compuestos orgánicos que inhiben la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo (también referidos en la presente como antagonistas del receptor de hidrocarburo de arilo) se han descrito en la materia, por ejemplo, (2-metil-4-o-tolil-azo-fenil)-amida del ácido 2-metil-2H-pi razol-3-carboxílico (CH2231 91 ) , alfa-naftoflavona, resveratrol (N utr. Metab. Cardiovasc. Dis. , Abril de 2003 ; 1 3(2) : 1 04-1 3), 3'-metoxi-4'-nitroflavona (Biochem . Pharmacol. , 1 5 de Mayo de 2007; 73(10) : 1 622-34, Publicación electrónica: 30 de Enero de 2007) , y 6-met¡l-1 ,3,8-tricloro-dibenzo-furano (Cáncer Res . , 1 5 de Abril de 2004; 64(8) : 2889-97) . Un inhibidor de la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo se refiere a un com puesto que disminuye la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo hasta cuando menos el 1 0 por ciento, el 20 por ciento, el 30 por ciento, el 50 por ciento, el 60 po r ciento, el 70 po r ciento, el 80 por ciento , o hasta cuando menos el 90 por ciento, la actividad de transcripción del receptor de hidrocarburo de arilo como se observa bajo condiciones activadas. U n ensayo para medi r la actividad inhibidora del receptor de hidrocarburo de arilo es, por ejemplo, el ensayo de gen reportero de luciferasa dependiente del receptor de hidrocarburo de arilo i nducido por dioxina como se describe en los Ejemplos. En una modalidad, un inhibidor de la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo es un compuesto que tiene una EC50 de menos de 1 0 µ?, de preferencia menos de 5 µ? como se mide en el ensayo de gen reportero de luciferasa dependiente del receptor de hidrocarburo de arilo inducido por dioxina.
El receptor de hidrocarburo de arilo es un factor de transcripción que regula la transcripción de diversos genes en el ser humano. En una modalidad, un efector corriente abajo de la senda dei receptor de hidrocarburo de arilo es un gen que es directamente regulado al nivel de la transcripción por el receptor de hid rocarburo de arilo. Los ejemplos de estos genes se seleccionan a parti r de Cyp1 B1 , Cyp1 A1 , y AH RR. El receptor de hidrocarbu ro de arilo también funciona en sendas fuera de su papel bien caracterizado en la inducción de enzimas xenobióticas . Se ha demostrado q ue los ligandos xenobióticos del receptor de hidrocarburo de ari lo regulan la beta-catenina, STAT5, STAT1 , H ES-1 , c-Myc, C/EBP, PU .1 , ß-catenina, p21 , P27, pRb, transferasa de desoxinucleotidilo, CXCR4, y su ligando de quimiocina CXCL1 2 (SDF- 1 ) .
En una modalidad específica, un agente capaz de sub-regular la actividad y/o exp resión del receptor de hidrocarburo de arilo es un compuesto como se define en la Breve Descripción de la I nvención.
En otra modalidad , un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo es un oligonucleótido anti-sentido o una molécula de ARN de interferencia pequeño (siARN), capaz de sub-regular la expresión de proteína del receptor de hidrocarburo de arilo o la expresión de proteína de uno o más efectores corriente abajo del receptor de hidrocarbu ro de arilo.
El diseño de los oligonucleotidos anti-sentido que se pueden utilizar para inhibi r de un modo eficiente la expresión de proteína del receptor de hidrocarbu ro de arilo , se debe efectuar de una manera tal que estos oligonucleotidos se enlacen específicamente al ARN m designado dentro de las células de una forma que inhiba su traducción. La secuencia adecuada para utilizarse en el diseño y en la síntesis de los oligonucleotidos anti-sentido que se enlacen específicamente al AR N m del receptor de hidrocarburo de arilo, al ADN genómico, y/o a su promotor, o a otras secuencias de control , está disponible en la secuencia publicada del receptor de hidrocarburo de arilo, en particular el receptor de hidrocarburo de ari lo humano. En adición, también están disponibles los algoritmos para identificar las secuencias con la más alta afinidad de enlace predicha por su ARN m objetivo, basándose en el ciclo termodinámico que cuenta para la energética de las alteraciones estructurales tanto en el ARNm objetivo como en los oligonucleótldos.
La síntesis de moléculas de ARNi adecuadas para utilizarse con la presente invención se puede efectuar como sigue: Primero, se explora la secuencia de ARNm del receptor de hidrocarburo de arilo (o uno o más de sus efectores corriente abajo) corriente abajo del codón de inicio AUG para las secuencias de dinucleótidos-AA. La presentación de cada AA y los 1 9 adyacentes a 3' se registran como un sitio objetivo potencial del siARN . Entonces, los sitios objetivo potenciales se comparan con una base de datos genómicos apropiada (por ejemplo, de ser humano, de ratón, de rata, etc.) , utilizando cualquier software de alineación de secuencias. Se filtra el sitio objetivo supuesto que exhiba una homología significativa con otras secuencias de codificación. Entonces, las secuencias preferidas son aquéllas que incl uyan un bajo contenido de G/C, en particular las secuencias con un contenido de G/C menor del 55 por ciento. Luego se seleccionan varios sitios objetivo a lo largo de la longitud del gen objetivo. Los métodos o algoritmos para identificar el sitio objetivo supuesto del siARN se describen, por ej emplo en (Tilesi y colaboradores, Cu rr. Opin. Mol . Ther. 1 1 : 1 56 , 2009) . Los ejemplos de las moléculas de siARN que son capaces de sub-regular la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo son: AHR S, 5' GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTT CAA GAG AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GCT TTT TTG G 3' ; AH R 1 1 1 AS , 5' CGC GCC AAA AAA GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTC TCT TGA AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GC 3'; AH R 242S, 5' GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATT CAA GAG ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CCT TTT TTG G 3' ; AH R 242AS , 5' CGC GCC AAA AAA GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATC TCT TGA ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CC 3' .
La población celular de partida que comprenda las células madre hematopoiéticas será seleccionada por la persona experta en la materia dependiendo del uso previsto. En la técnica se han descrito diferentes fuentes de cél ulas que com prenden células madre hematopoiéticas, incluyendo médula ósea, sangre periférica, sangre neonatal de cordón umbilical, de placenta, o de otras fuentes, tales como h ígado, en particular hígado fetal .
La población celular se puede someter primero a los pasos de enriquecimiento o purificación , incluyendo la selección negativa y/o positiva de las células, basándose en marcadores celulares específicos, con el objeto de proporcionar la población celular de partida . Los métodos para aislar esta población celular de partida basándose en marcadores celulares específicos pueden utilizar la tecnología de selección de células activada por fluorescencia (FACS) , también denominada como citometría de flujo, o un sustrato sólido o insoluble que se enlaza a los anticuerpos o ligandos que interactúan con los marcadores de superficie celular específicos. Por ejemplo, las células se pueden poner en contacto con un sustrato sólido (por ejemplo, una columna de gránulos, hojuelas, partículas magnéticas) que contenga los anticuerpos , y se remueven cualesquiera células no enlazadas. Cuando se utiliza un sustrato sólido q ue comprende gránulos magnéticos o paramagnéticos, se pueden aislar fácilmente las cél ulas enlazadas a los gránulos mediante un separador magnético.
En una modalidad , esta población celular de partida está enriquecida en un fenotipo de marcador celular deseable (por ejemplo, C D34+, CD1 33+, CD90+) , o se basa en el eflujo de tintes, tales como rodamina, Hoechst, o en la actividad de deshidrogenasa de aldeh ido. En una modalidad específica, esta población celular de partida está enriquecida en células CD34+. Los métodos para enriquecer la población de células sanguíneas en células CD34+ incluyen los kits comercializados por Miltenyi Biotec (kit de aislamiento di recto de CD34+, Miltenyi Biotec, Bergisch, Gladbach , Alemania) o por Baxter (lsolex 3000).
La cantidad de sangre de cordón a parti r de un solo nacimiento con frecuencia es inadecuada para tratar a un adulto o a un niño más grande. Una ventaja de los métodos de expansión que utilizan los compuestos de la invención, o un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo, es que hacen posible la producción de una cantidad suficiente de células madre hematopoiéticas a partir de solamente una unidad de sangre de cordón umbilical.
De conformidad con lo anterior, en una modalidad, la población celular de partida se deriva a partir de células de sangre neonatal de cordón umbilical, las cuales se han enriquecido en cél ulas CD34+. En una modalidad relacionada, esta población celular de partida se deriva a parti r de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical .
En otra modalidad , la población cel ular de partida se deriva a partir de células de sang re periférica humana movilizada, las cuales se han enriquecido en células CD34+. En una modalidad relacionada, esta población cel ular de partida se deriva a partir de células de sangre periférica humana movil izada aisladas a parti r de solamente un paciente.
Esta población celular de partida puede contener de preferencia cuando menos el 50 por ciento de células CD34+, en algunas modalidades, más del 90 por ciento de células CD34+, y puede comprender entre 1 05 y 1 O9 cél ulas nucleadas.
La población celular de partida se puede utilizar directam ente para la expansión, o se puede congelar y almacenar para utilizarse en una fecha posterior.
Las condiciones para cultivar la población celular de partida para la expansión de células mad re hematopoiéticas variará dependiendo, entre otras cosas, de la población celular de partida, del número final de células deseado, y de la proporción final deseada de células madre hematopoiéticas.
En una modalidad específica, en particular, utilizando una población celular de partida a partir de células de sangre de cordón umbilical enriquecidas en células CD34+, las condiciones de cultivo comprenden el uso de otras citoquinas y factores de crecimiento, conocido generalmente en la materia para la expansión de células madre hematopoiéticas. Estas citoquinas y factores de crecimiento incluyen , sin li mitación, I L-1 , I L-3, I L-6, I L-1 1 , G-CSF, G M-CSF, SCF, FIT3-L, trombopoieti na (TPO) , eritropoietina, y los análogos de los mismos. Como se utiliza en la presente, "análogos" incluyen cualesquiera variantes estructurales de las citoquinas y de los factores de crecimiento que tengan la misma actividad biológica que las formas que se presentan natural mente, incluyendo, sin li mitación , las variantes co n una actividad biológica au mentada o dismi nuida, al compararse con las formas que se presentan naturalmente, o los agonistas de los receptores de citoquina, tales como un anticuerpo agonista contra el receptor de TPO (por ejemplo, VB22B sc(Fv)2 como se detalla en la Publicación de Patente Número WO 2007/1 45227, y similares) . Las combinaciones de citoquina y factor de crecimiento se seleccionan de tal manera que se expandan las células madre hematopoiéticas y las células progenitoras, mientras que se limite la producción de células terminalmente diferenciadas. En una modalidad específica, se seleccionan una o más citoquinas y factores de crecimiento a parti r del grupo que consiste en SCF, Flt3-L y TPO . En una modalidad específica, cuando menos se utiliza TPO en un medio sin suero, bajo condiciones adecuadas para la expansión de las células madre hematopoiéticas . En una modalidad relacionada, se utiliza una mezcla de I L6, SCF, Flt3-L y TPO en el método para expandir las células madre hematopoiéticas en combinación con el compuesto de la invención o un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo.
La IL6 o interleuc¡na-6 humana, también conocida como factor estimulante de céluIas-B 2, ya se ha descrito (Kishimoto, Ann. Review of Imm. 23: 1 2005), y está comercialmente disponible. El SCF o factor de células madre humano, también conocido como ligando c-kit, factor de crecimiento de mastocitos o factor de Steel ya se ha descrito (Smith, MA y colaboradores, ACTA Haematologica, 105, 3: 143, 2001), y está comercialmente disponible. Flt3-L o Ligando de Flt-3, también referido como FL es un factor que se enlaza al receptor de flt3. Ya se ha descrito (Hannum C, Nature 368 (6472): 643-8), y está comercialmente disponible. TPO o trombopoietina, también conocida como factor de crecimiento de megacariocitos (MGDF) o ligando c-Mpi, ya se ha descrito (Kaushansky K (2006). N. Engl. J. Med. 354 (19): 2034-45), y está comercialmente disponible.
La expansión de células madre hematopoléticas se puede llevar a cabo en un medio basal, el cual es complementado con las mezclas de citoquinas y factores de crecimiento descritas anteriormente. Un medio basal típicamente comprende aminoácidos, fuentes de carbono, vitaminas, proteínas de suero (por ejemplo, albúmina), sales inorgánicas, cationes divaientes, reguladores, y cualquier otro elemento adecuado para utilizarse en la expansión de las células madre hematopoiéticas. Los ejemplos de este medio basal apropiados para un método para expandir las células madre hematopoiéticas incluyen, sin limitación, StemSpan® SFEM - Medio de Expansión Sin Suero (StemCell Technologies, Vancouver, Canadá) , StemSpan® H3000 - Medio Definido (StemCell Technologies, Vancouver, Canadá) , CellG ro® SCG M (CellGenix, Freiburg, Alemania) , Stem Pro®-34 SFM ( I nvitrogen) .
En una modalidad, el compuesto de la invención o ei agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de ari lo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hid rocarburo de arilo , se administra durante el método de expansión de esta población celular de partida en una concentración apropiada para la expansión de las células madre hematopoiéticas. En una modalidad específica, el compuesto mencionado o el agente modulador del receptor de hidrocarburo de ariio se administra en una concentración comprendida entre 1 pM y 1 00 µ?, por ejemplo entre 1 0 pM y 10 µ?, o entre 1 00 pM y 1 µ? .
En una modalidad específica en donde la población celular de partida consiste esencialmente en células enriquecidas en CD34+ a partir de u na o dos unidades de sangre de cordón umbilical, las células se cultivan bajo condiciones para la expansión de las células madre hematopoiéticas de aproximadamente 3 días a aproximadamente 90 días , por ejemplo entre 7 y 21 d ías, y/o hasta obtener la expansión de las veces indicadas y las poblaciones celulares características. En una modalidad específica, las cél ulas se cultivan bajo condiciones para la expansión de las células madre hematopoiéticas durante no más de 21 días, 1 4 días o 7 días.
En una modalidad , la población cel ular de partida se cultiva durante un tiempo suficiente para alcanzar un número absoluto de cél ulas CD34+ de cuando menos 1 05, 1 06, 1 O7, 1 08 ó 1 09 células. En otra modalidad, esta población celular de partida se cultiva du rante un tiempo suficiente para una expansión de 1 0 a 50,000 veces de células CD34+, por ejemplo una expansión de entre 00 y 1 0 ,000 veces.
La población celular obtenida después de llevar a cabo el método de expansión se puede utilizar sin mayor purificación o se pueden someter a pasos adicionales de purificación o de selección .
La población cel ular se puede lavar entonces para remover el compuesto de la invención o cualquier otro agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo y/o cualesquiera otros componentes del cultivo cel ular, y se vuelve a suspender en un medio de suspensión de células apropiado para utilizarse en un corto plazo, o en un medio de almacenamiento de largo plazo, por ejemplo un medio adecuado para la crioconservación .
Población cel ular con células madre hematopoiéticas expandidas, tales como se obtienen mediante el método de expansión , y composiciones terapéuticas La i nvención proporciona además una población celular con células madre hematopoiéticas expandidas, que se pueden obtener o se obtienen mediante el método de expansión descrito anteriormente. En una modalidad específica, esta población celular se vuelve a suspender en un medio farmacéuticamente aceptable adecuado para su administración a un huésped mam ífero, proporcionando de esta manera una composición terapéutica.
El compuesto como se define en la Breve Descripción de la Invención o un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión dei receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo hace posible la expansión de las células madre hematopoiéticas, por ejemplo a partir de solamente una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , para proporcionar una población celular cuantitativamente y cualitativamente apropiada para un injerto eficiente de corto y largo plazo en un paciente humano que lo necesite. En particular, la invención se refiere a una composición que comprende una población celular con células madre hematopoiéticas expandidas derivadas a partir de no más de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , en donde esta composición terapéutica contiene una cantidad total de células de cuando menos 1 05, 1 06, 1 07, 1 08 ó 109 células, siendo entre el 20 y el 1 00 por ciento, por ejemplo entre el 40 y el 80 por ciento de las células totales, cél ulas CD34+. En una modalidad relacionada, esta composición contiene entre el 0.1 y el 40 por ciento, por ejemplo entre el 0.1 y el 1 0 por ciento de las cél ulas totales que son CD34+ Thy1 +; y del 20 al 80 por ciento de células que son CD34+ CD45RA+. En algunas modalidades específicas, esta composición contiene entre el 1 0 y el 95 por ciento de células que son CD38+, y entre el 5 y el 70 por ciento de células que son CD 133+.
Uso de Com posiciones Terapéuticas La invención proporciona además la población celular con células madre hematopoiéticas expandidas o su composición para utilizarse en trasplante alogénico o autólogo de células madre en un sujeto mam ífero.
El sujeto referido en la presente es, por ejemplo, un donador de médula ósea o un individuo con , o en riesgo de tener, niveles agotados o limitados de células sanguíneas. Opcionalmente, el sujeto es un donador de médula ósea antes de cosechar la médula ósea, o un donador de médula ósea después de cosechar la médula ósea. El sujeto es opcional mente un receptor de un trasplante de médula ósea. Los métodos descritos en la presente son particularmente útiles en los sujetos que tengan una reserva l imitada de médula ósea, tales como los sujetos ancianos o los sujetos previamente expuestos a un tratamiento inmunoconsumidor o a un tratamiento de mieloablación , tal como quimioterapia, por ejemplo , para el tratam iento de leucemia o linfomas. El sujeto tiene opcionalmente un nivel reducido de células sangu íneas o está en riesgo de desarrollar un nivel reducido de células sanguíneas, comparándose con un nivel de células sangu íneas de control . Como se utiliza en la presente , el término "nivel de células sanguíneas de control" se refiere a un nivel promedio de células sangu íneas en un sujeto antes de, o en una ausencia sustancial de, un evento que cambie los niveles de células sanguíneas en el sujeto. U n evento que cambia los niveles de cél ulas sanguíneas en un sujeto incluye, por ejemplo, anemia, trauma, quimioterapia, trasplante de médula ósea y terapia de radiación . Por ejemplo, el sujeto tiene anemia o pérdida de sangre , por ejemplo , debido a un trauma.
La población de células madre hematopoiéticas expandidas o la composición que comprende a la población celular con células madre hematopoiéticas expandidas, se administra al sujeto, por ejemplo, antes de, al mismo tiempo que, o después de quimioterapia, terapia de radiación , o un trasplante de médula ósea. El sujeto opcionalmente tiene una médula ósea agotada en relación , por ejemplo, con un síndrome congénito, genético, o adquirido, caracterizado por pérdida de médula ósea o médula ósea agotada. Por consiguiente, el sujeto es opcionalmente un sujeto q ue necesita hematopoiesis . Opcionalmente, el sujeto es un donador de médula ósea o es un sujeto con, o en riesgo de, médula ósea agotada.
La manipulación de las células madre hematopoiéticas es útil como un tratamiento de complemento para la quimioterapia o la terapia de radiación. Por ejemplo, las células madre hematopoiéticas se localizan en la sangre periférica, y entonces se aislan a partir de un sujeto que se vaya a someter a quimioterapia, y después de la terapia, se devuelven las células. Por consiguiente, el sujeto es un sujeto que se someta, o que se espere que se vaya a someter, a un tratamiento de agotamiento de las células inmunitarias , tal como quimioterapia, terapia de radiación , o que si rva como un donador para un trasplante de médula ósea. La médula ósea es uno de los tejidos más prol ífico's del cuerpo y, por consiguiente, con frecuencia es el órgano que es inicialmente dañado por los fármacos de la quimioterapia y por la radiación . El resultado es que se destruye rápidamente la producción de células sanguíneas el tratamiento de quimioterapia o radiación, y se debe termi nar la quimioterapia o la radiación para permitir que el sistema hematopoiético rellene los suministros de cél ulas sanguíneas antes de que un paciente se pueda volver a tratar con q uimioterapia. Por consiguiente, como se describe en la presente, se admi nistran opcionalmente las cél ulas madre hematopoiéticas o las células sangu íneas hechas mediante los métodos descritos en la presente, a los sujetos que necesiten células sangu íneas adicionales.
Se proporcionan células madre hematopoiéticas expandidas mediante un compuesto de la invención o un agente capaz de sub-regular la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de ari lo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo o las composiciones con célu las madre hematopoiéticas expandidas como se describen anteriormente, en combinación con un producto terapéutico capaz de potenciar la proliferación de células madre hematopoiéticas in vivo, in vitro, o ex vivo (por ejemplo, una molécula pequeña, u n anticuerpo, o similares) , y opcionalmente cuando menos un excipiente o veh ículo farmacéuticamente aceptable. Un producto terapéutico capaz de potenciar la prol iferación de células madre hematopoiéticas significa: un anticuerpo agonista contra el receptor de TPO (por ejemplo, VB22B sc(Fv)2 como se detalla en la Publicación de Patente Número WO 2007/145227, y similares); una citoquina, tal como SCF, IL-6, ligando de Flt-3, TPO, o un mimético de TPO (por ejemplo, tal como se describe en las Publicaciones Internacionales Números WO/2007/022269; WO/2007/009120; WO/2004/054515 WO/2003/103686 WO/2002/085343; WO/2002/0494 3 WO/200 /089457 WO/2001/039773; WO/2001/034585 WO/2001/02 180 WO/2001/021180; WO/2001/017349 WO/2000/066112 WO/2000/035446; WO/2000/028987 WO/2008/028645 y similares); factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF); factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF); una prostaglandina o un agonista de los receptores de prostaglandina (por ejemplo, un agonista del receptor-1 de prostaglandina E2 (EP-I), un agonista del receptor-2 de prostaglandina E2 (EP-2), un agonista del receptor-3 de prostaglandina E2 (EP-3), y los agonistas del receptor-4 de prostaglandina E2 (EP-4), como se detallan en la Publicación de Patente Número WO/2008/073748); tetraetilen-pentamina (TEPA); ligandos-Notch (Delta-1); y/o un agonista de WNT. En adición, el cultivo de las células madre con células madre mesenquimales (MSCs) previene la enfermedad del injerto contra el huésped (GVHD), y puede ayudar a la expansión de las células madre. Las células madre mesenquimales y las células madre se pueden trasplantar como un cultivo entero.
Farmacéuticamente aceptable significa un material que no es biológicamente o de otra manera indeseable, es decir, el material se puede admi nistrar a un sujeto o a una célula, sin causar efectos biológicos indeseables, o sin interactuar de una manera perjudicial con los otros componentes de la composición farmacéutica en donde esté contenido. El veh ículo o excipiente se selecciona de tal manera que mi nimice la degradación del ingrediente activo, y qu e minimice los efectos secundarios adversos en el sujeto o en la célula.
Las composiciones se formulan de cualquier manera convencional para utilizarse en los métodos descritos en la presente. La administración se hace por medio de cualquier vía conocida como efectiva por un experto ordinario. Por ejemplo , las composiciones se administran oral mente, parenteralmente (por ejemplo, intravenosamente) , mediante inyección intramuscular, mediante inyección intraperitoneal , transdérmicamente, mediante administración extracorpórea, intranasal o tópica.
El método de administración preferido es la infusión intravenosa. El número de células transfundidas tomará en consideración factores tales como ei sexo, la edad, el peso, el tipo de enfermedad o trastorno , la etapa del trastorno, el porcentaje de cél ulas deseadas en la población celular, y la cantidad de células necesarias para producir un beneficio terapéutico. En una modalidad particular, la composición se administra mediante infusión intravenosa, y comprende cuando menos 1 04 células/kilogramo , de 1 05 a 5.107 células/kilogramo o más si es necesario. En una modalidad específica, las células infundidas se derivan todas de cél ulas de sangre de cordón expandidas a partir de un solo nacimiento.
Un vehículo farmacéuticamente aceptable para la infusión de una composición que comprenda células en un paciente típicamente comprende suero regulado con albúmina de suero humano al 5 por ciento, o un medio basal no complementado, o un medio como es conocido en la materia.
Para su administración oral, las composiciones toman la forma, por ej emplo, de tabletas o cápsulas preparadas por medios convencio nales, con excipientes farmacéuticamente aceptables , tales como agentes de enlace (por ejemplo, almidón de maíz previamente gelatinizado , polivinil-pi rrolidona, o hidroxi-propil-metil-celulosa) ; rellenos (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, o fosfato ácido, de calcio) ; lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, o síl ice) ; desintegrantes (por ejemplo, almidón de papa, o glicolato de almidón de sodio) ; o agentes humectantes (po r ejemplo, lauril-sulfato de sodio) . Las tabletas se recubren mediante los métodos bien conocidos en la materia. Las preparaciones liquidas para su administración oral toman la forma, por ejemplo, de soluciones, jarabes, o suspensiones, o se pueden presentar como un producto seco para reconstituirse con agua u otro veh ículo adecuado antes de usarse. Estas preparaciones líquidas se preparan por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables, tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol , derivados de celulosa, o grasas comestibles hidrogenadas) ; agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o acacia); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ásteres oleosos, alcohol etílico, o aceites vegetales fraccionados) ; y conservadores (por ejemplo, p-hidroxi-benzoatos de meti lo o de propilo, o ácido sórbico) . La p reparaciones opcionaimente contienen sales reguladoras , agentes saborizantes , colorantes, y edulcorantes, como sea apropiado .
Las composiciones se formulan para su administración parenteral mediante inyección, por ejemplo , mediante inyección de bolo o i nfusión continua. Las formulaciones para inyección se presentan en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampolletas o en recipientes de mú ltiples dosis, con o sin un conservador agregado. Las composiciones toman formas tales como suspensiones, soluciones, o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pu eden contener agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes, y/o dispersantes. De una manera alternativa, el ingrediente activo está en una forma de polvo para su reconstitución con un veh ículo adecuado, por ejemplo, agua estéri l sin pirógeno, antes de usarse. En general, los vehículos adecuados para las soluciones parenterales son agua, un aceite adecuado , suero, dextrosa acuosa (glucosa) y soluciones de azúcar relacionadas, y glicoles, tales como propilenglicol o polietilenglicoles. Las soluciones para su administración parenteral contienen , por ejemplo, una sal del ingrediente activo soluble en agua, agentes estabilizantes adecuados y, si es necesario , sustancias reguladoras del pH . Los agentes antioxidantes, tales como bisulfato de sodio, sulfito de sodio , o ácido ascórbico, ya sea solos o combinados, son agentes estabil izantes adecuados. También se utilizan opcionalmente ácido cítrico y sus sales, y ácido etilen-diamina-tetra-acético de sodio (EDTA). En adición, las soluciones parenterales contienen opcionalmente conservadores , tales como cloru ro de benzalconio, metil- o propil-parabeno, y cloro-butanol. Los veh ículos farmacéuticos adecuados se describen en Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21 a Edición, David B . Troy, Editor, Lippicott Williams & Wiiki ns (2005) , el cual se incorpora como referencia en su totalidad cuando menos con respecto al material relacionado con los vehículos y composiciones farmacéuticas.
Las composiciones se form ulan opcionalmente como una preparación de depósito. Estas formulaciones de larga acción se administran opcionalmente mediante implante. Por consiguiente, por ejemplo, las composiciones se formulan con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio de iones, o como derivados escasamente sol ubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble. Las composiciones se aplican a, o se empotran con , implantes concurrentes con, o después de, el implante quirúrgico.
Adicionalmente, se emplean métodos farmacéuticos para controlar la duración de acción. Éstos incluyen preparaciones de control de liberación y macromoléculas apropiadas, por ejemplo, polímeros, poliésteres, poliaminoácidos, polivinilo, pi rrolidona, etileno-acetato de vini lo, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa, o sulfato de protamina. La concentración de macromoléculas, así como los métodos de incorporación, se ajustan con el objeto de controlar la liberación. Opcionalmente, el agente se incorpora en partículas de materiales poliméricos, tales como poliésteres, poli-aminoácidos, hidrogeles, poli-(ácido láctico) , o copolímeros de etileno-acetato de vinilo. En adición a incorporarse, estos agentes opcionalmente se utilizan para atrapar al compuesto en microcápsulas.
Una composición para utilizarse en los métodos descritos en la presente se form ula opcionalmente como una formulación de liberación sostenida y/o en tiempo. Estas formulaciones de liberación sostenida y/o en tiempo se hacen por medios de liberación sostenida o mediante dispositivos de sum inistro, los cuales son bien conocidos por aquéllos que tengan una experiencia ordinaria en este campo. Las composiciones se utilizan para proporcionar una li beración lenta o sostenida de uno o más de los ingredientes activos, utilizando, por ejemplo , hidroxi-propil-metil-celulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeabl es, sistemas osmóticos , recubrimientos de múltiples capas , micropartículas, liposomas , microesferas, o una combinación de los mismos, para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Se seleccionan las formulaciones de liberación sostenida adecuadas para utilizarse con las composiciones descritas en la presente. Por consiguiente, se utilizan las formas individuales de dosificación unitaria adecuadas para su administración oral, tales como , pero no limitándose a, tabletas , cápsulas, gelcaps, caplets, y polvos que se adapten para s u l iberación sostenida.
Las com posiciones opcionalmente se suministran mediante un sistema de liberación controlada. Por ejemplo , la composición se administra utilizando una infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, liposomas , u otros modos de administración . Se coloca un sistema de liberación controlada en proximidad al objetivo.
Opcionalmente, es deseable administrar la composición localmente, es deci r, al área q ue necesite tratamiento. Por ejemplo, la composición se administra mediante inyección en la médula ósea de un h ueso largo, por ejemplo. La administración local se logra, por ejemplo, mediante infusión local durante la ci rugía, aplicación tópica (por ejemplo, en conj unto con un parche para heridas después de la cirugía) , inyección , catéter, supositorio, o implante. Un implante es de un material poroso, no poroso, o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas sialásticas, o fibras.
Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se admi nistran por cualquier medio convencional disponible para utilizarse en conj unto con productos farmacéuticos, ya sea como los ingredientes terapéuticos activos individuales o bien en una combinación de los ingredientes terapéuticos activos. Éstos se administran opcionalmente solos, pero en términos generales se administran con u n vehículo farmacéutico seleccionado con base en la vía de administración seleccionada y en la práctica farmacéutica convencional .
Los compuestos descritos en la presente se proporcionan en una forma farmacéuticamente aceptable, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables y sus derivados. El término "forma farmacéuticamente aceptable" se refiere a las composiciones que incluyen a los compuestos descritos en la presente, q ue son en general seguras, relativamente no tóxicas, y no son biológicamente ni de otra manera indeseables . Estas composiciones incluyen opcionalmente veh ículos farmacéuticamente aceptables o estabilizantes que no sean tóxicos para la cél ula o el sujeto que se esté exponiendo a los mismos en las dosificaciones y concentraciones empleadas. Los ejemplos de los vehículos fisiológicamente aceptables incluyen reguladores, tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incl uyendo ácido ascórbico; pol ipéptidos de bajo peso molecular (menores de aproximadamente 10 residuos) ; proteínas, tales como albúmina de suero , gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tales como polivinil-pirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, árginina, o lisina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos , incluyendo glucosa, mañosa, o dextri nas ; agentes quelantes, tales como EDTA; alcoholes de azúcar, tales como manitol o sorbitol ; contra-iones formadores de sales, tales como sodio ; y/o tensoactivos no iónicos, tales como TWEENMR (Uniqema, Reino Unido) , polietilenglicol (PEG) , y P LURON ICSMR (BAS F, Alemania) .
El término "sales de ácidos farmacéuticamente aceptables y sus derivados" , se refiere a las sales y a los derivados de los compuestos de la fórmula I descritos en la presente, q ue retienen la efectividad biológica y las propiedades descritas , y que no son biológicamente ni de otra manera indeseables. Las sales farmacéuticamente aceptables se forman, por ejemplo, con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhíd rico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares , y con ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico , ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico , ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico , ácido metan-sulfónico, ácido etan-sulfónico, ácido p-toluen-sulfónico, ácido salicílico, y similares.
La estabilidad qu ímica de una composición que comprenda un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o éster del mismo, se mejora mediante los métodos conocidos por los expertos en este campo . Por ejemplo , se agrega un éster de ácido alcanoico de un sorbitol polietoxilado (un polisorbato) a una composición que contenga un compuesto de la fórmula I en una cantidad efectiva para mejorar la estabilidad química del compuesto.
Los datos obtenidos a partir de los ensayos de cultivo celular y de los estudios con animales , se uti lizan opcionalm ente en la formulación de un intervalo de dosificación para emplearse en seres humanos . La dosificación de estos compuestos está de preferencia dentro de u n intervalo de concentraciones circulantes que incluyan poca o ninguna toxicidad . La dosificación varía dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada, y de la vía de administración utilizada. Para cualquier compuesto utilizado en los métodos proporcionados, la dosis terapéuticamente efectiva se estima inicialmente a parti r de los ensayos de cultivo celular.
En la presente tam bién se proporciona un paquete o kit, el cual comprende uno o más recipientes llenados con uno o más de los ingredientes descritos en la presente. Estos kits opcionalmente comprenden soluciones y reguladores como sean necesarios o deseados. El kit opcionalmente incluye una población expandida de las células madre hecha mediante los métodos descritos anteriormente, o puede contener recipientes o composiciones para elaborar una población expandida de células madre hematopoiéticas. En particular, la invención p roporciona un kit para expandir ex vivo células madre hematopoiéticas, el cual comprende un compuesto como se define en la Breve Descripción de la I nvención, e instrucciones para el uso de este compuesto en un método para la expansión de las células madre hematopoiéticas y, opcionalm ente, una o más citoquinas o factores de crecimiento, o un medio para cultivo celular, en particular un medio para el cultivo de células madre hematopoiéticas, como se describe anteriormente. El kit puede com prender además anticuerpos para monitorear la producción de cél ulas, tales como anticuerpos anti-CD34, anti-CD133, anti-CD38, anti-CD45RA, y/o anti-Thyl . En una modalidad específica, este kit incluye además una o más citoquinas o factores de crecim iento seleccionados a partir del grupo que consiste en I L6, FLT3-L, SCF, y TPO. Con estos paquetes o kits se asocian opcionalmente i nstrucciones para su uso .
También se proporciona un kit para suministrar una cantidad efectiva de un compuesto de la invención para aumentar las células madre hematopoiéticas en un sujeto, el cual comprende una o más dosis del compuesto para utilizarse durante un período de tiempo, en donde el número total de dosis del compuesto de la invención en el kit es igual a la cantidad efectiva suficiente para au mentar las células madre hematopoiéticas en un sujeto. El período de tiempo es de aproximadamente uno a varios días o semanas o meses. Por consiguiente, el período de tiempo es desde cuando menos aproximadamente 5, 6, 7, 8, 1 0, 12 , 1 4, 20 , 21 , 30 ó 60 días o más , o cualquier número de d ías entre 1 y 90.
Procesos para la Elaboración de los Com puestos de la invención La presente invención también incluye procesos para la preparación de los compuestos de la invención . En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger a los grupos funcionales reactivos, por ejemplo a los grupos hidroxilo, amino, imino, tio, o carboxilo , en donde se deseen éstos en el producto final , para evitar su participación indeseada en las reacciones. Se pueden utilizar los g rupos protectores convencionales de acuerdo con la práctica estándar, por ejemplo, véase T.W. Greene y P. G . M . Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1 991 .
Los siguientes esquemas de reacción 1 a 5 detallan la preparación de los compuestos de la invención . Un experto en la materia apreciará que, en seguida de la introducción mediante los métodos detallados más adelante, se puede elaborar adicionalmente de manera opcional cualquiera de los grupos R2, R3, R4, y mediante las transformaciones conocidas, para llegar a los compuestos finales deseados de la fórmula I .
Los compuestos de la fórmula I se pueden preparar de acuerdo con el siguiente Esquema de Reacción 1 : Esquema de Reacción 1 (4) (2) en donde G 1 , G2, G3, G4, Rf , R2 y R4 son como se definen para la fórmula I en la Breve Descripción de la I nvención , y L de la fórmula I se define en el esquema de reacción como -N H-l_i - , el cual es equivalente a, por ejemplo, -N R5a(CH2)o-3- en donde R5a es hidrógeno y -(CH2)0.3- es L-, .
Los compuestos de la fórmula I se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto de la fórm ula 2 con un compuesto de la fórmula 3 en la presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd2(dba)3, o similares) en la presencia de un ligando apropiado (por ejemplo, cloruro de 1 ,3-bis-(2,4,6-tri metil-fenil)-imidazolio) , una base adecuada (por ejemplo , Cs2C03, o simi lares) , y un solvente apropiado (por ejemplo, 1 ,4-dioxano) , a una temperatura de aproximadamente 80°C a 1 00°C, durante 2 a aproximadamente 48 horas . Los compuestos de la fórmula 2 se puede preparar a su vez mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 4 con un ligero exceso de un el compuesto de amina de la fórmula 5, en un solvente apropiado (por ejemplo, ¡sopropanol) , a una temperatura desde aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 80°C. Los compuestos de la fórmula 4 se puede preparar mediante la alquilación de un compuesto de la fórm ula 6 con un agente alquilante adecuado 7, en donde X-¡ es cloro, bromo, yodo, o un éster de sulfonato, en la presencia de una base adecuada (por ejemplo, hidruro de sodio o carbonato de potasio) , en un solvente adecuado (por ejemplo, ? , ?'-dimetil-formamida) , a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 80°C. De una manera alternativa, la reacción se puede llevar a cabo bajo condiciones de Mitsunobu utilizando un alcohol adecuado R4-OH , en la presencia de una fosfina adecuada (por ejemplo, trlfenil-fosfina) , y azodicarboxllato (por ejemplo, azodicarboxilato de dietilo) , en un solvente i nerte, tal como tetrahidrofurano o tolueno, a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente la temperatu ra ambiente.
Los compuestos de la fórmula la, en donde Gi es CR3 y en donde todos los demás grupos G son N, también se pueden preparar procediendo como en el siguiente Esquema de Reacción 2: Esquema de Reacción 2 (9) (8) (1a) en donde R, , R2, R3 y R4 son como se definen para la fórmula l en la Breve Descripción de la I nvención, y L de la fórmula I se define en el esquema de reacción como— H- L1 - , el cual es equivalente a, por ejemplo, -N R5a(CH2)o.3- en donde R5a es hidrógeno y -(CH2)o-3-es Los compuestos de la fórmula l se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 8 con un compuesto de amina de la fórm ula 5 en un solvente apropiado (por ejemplo, isopropanol), a una temperatura desde aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 100°C. Los compuestos de la fórmula 8 se pueden preparar a su vez mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 9 con un compuesto de la fórmula 3, en la presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(Ph3P)4, Pd2(dba)3, o similares), opcionalmente en la presencia de un ligando apropiado (por ejemplo, cloruro de ,3-bis-(2,4,6-trimetil-fenil)-imidazolio), una base adecuada (por ejemplo, Cs2C03, o similares), y un solvente apropiado (por ejemplo, 1 ,4-dioxano), a una temperatura de aproximadamente 80°C a 100°C, durante 2 a aproximadamente 48 horas. Los compuestos de la fórmula 9 se puede preparar a su vez mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 10 con una mezcla de di-yodo-metano, yoduro de cobre(l), y un nitrito de alquilo (por ejemplo, nitrito de ¡soamilo), opcionalmente en la presencia de un solvente inerte, a una temperatura de aproximadamente 50°C a 100°C. Los compuestos de la fórmula 10 se pueden preparar mediante la alquilacion de un compuesto de la fórmula 11 con un agente alquilante adecuado 7, en donde es cloro, bromo, yodo, o un éster de sulfonato, en la presencia de una base adecuada (por ejemplo, hidruro de sodio o carbonato de potasio), en un solvente adecuado (por ejemplo, ?,?'-dimetil-formamida), a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 80°C. De una manera alternativa, la reacción se puede llevar a cabo bajo condiciones de Mitsunobu, utilizando un alcohol adecuado R -OH, en la presencia de una fosfina adecuada (por ejemplo, trlfenil-fosfina), y azodicarboxilato (por- ejemplo, azodicarboxilato de dietilo), en un solvente inerte, tal como tetrahidrofurano o tolueno, a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente la temperatura ambiente.
Los compuestos de la fórmula II, los cuales son un subconjunto de los compuestos de la fórmula I, en donde es heterociclilo N-enlazado o heteroarilo N-enlazado, se pueden preparar como se detalla en el siguiente Esquema de Reacción 3: Esquema de Reacción 3 (2) (II) Gi, G2, G3, G4, RL R2 y R4 son como se definen para la fórmula ? en la Breve Descripción de la Invención, y L de la fórmula I se define en el esquema de reacción como -NH-Li-, el cual es equivalente a, por ejemplo, -NR5A(CH2)o-3-. en donde R5A es hidrógeno y -(CH2)0-3- es L-,. Los compuestos de la fórmula II se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 2 con un compuesto de la fórmula 20, en la presencia de un exceso de amina cíclica o de un heterociclo que lleve N H (por ejemplo, pirazol sustituido, imidazol sustituido, y similares) , a una temperatu ra de aproximadamente 50°C a aproximadamente 250°C, durante aproximadamente 1 a aproximadamente 24 horas, opcionalmente en la presencia de una base, tal como hidruro de sodio o DBU .
Los compuestos de la fórmula 1 0, en donde es CR3, y en donde todos los demás grupos G son N , también se pueden preparar procediendo como en el siguiente Esquema de Reacción 4: Esquema de Reacción 4 en donde R3 y R4 son como se definen para la fórmula I en la Breve Descripción de la Invención . Los compuestos de la fórmula 1 0 se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos descritos en J . ed. Chem , 1 972, 456, y J . Med. Chem ., 1 992, 41 80. un compuesto de orto-éster de la fórmula 21 se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula 22, opcionalmente en la presencia de un ácido tal como ácido acético , a una temperatura desde aproximadam ente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 1 50°C, du rante aproximadamente 1 a aproximadamente 24 horas. Un compuesto de la fórmula 22 se pueden preparar a su vez mediante la reacción de un compuesto de la fórmula 23 con un compuesto de amina primaria de la fórmula 24, opcionalmente en la presencia de un ácido tal como pTSA, o de una base tal como trietil-amina o DBU, a una temperatura de aproximadamente 50°C a aproximadamente 200°C.
Los compuestos de la fórmula IV se puede preparar como se detalla en el siguiente Esquema de Reacción 5: Esquema de Reacción 5 en donde G,, G2, G3, G4, y R2 son como se definen para la fórmula I en la Breve Descripción de la Invención, y L de la fórmula I se define en el esquema de reacción como -NH-L.!-, el cual es equivalente a, por ejemplo, -NR5a(CH2)o-3-> en donde R5a es hidrógeno y -(CH2)o-3- es L-¡. R2o y R21 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono. Un compuesto de la fórmula IV, en donde R2i es hidrógeno, se puede preparar a partir de un compuesto de la fórmula III, mediante el tratamiento con un agente reductor adecuado, tal como hidruro de litio y aluminio o hidruro de di-isobutil-aluminio, en u n solvente adecuado tal como tetrahidrofu rano o tolueno, a una temperatura de aproximadamente -78°C a aproximadamente 50°C. La reacción toma de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1 6 horas para completarse. Un compuesto de la fórmula IV, en donde R21 es alquilo inferior, se puede preparar mediante el tratamiento de un compuesto de la fórmula I I I con un alquil-litio o reactivo de G rignard, en un solvente adecuado tal como éter o tetrahidrofurano, a una temperatura de aproximadamente -78°C a aproximadamente 50°C. La reacción toma de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1 6 horas para completarse.
Los ejemplos detallados de la s íntesis de un compuesto de la fórmula I se pueden encontrar en los Ejemplos que se encuentran más adelante.
Procesos Adicionales para la Elaboración de los Com puestos de la Invención Un compuesto de la invención se puede preparar como una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable mediante la reacción de la forma de base libre del compuesto con un ácido inorgánico u orgánico farmacéuticamente aceptable. De una manera alternativa, se puede preparar una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención mediante la reacción de la forma del ácido libre del compuesto con una base inorgánica u orgánica farmacéuticamente aceptable. De u na manera alternativa, las formas de sal de los compuestos de la invención se pueden preparar utilizando sales de los materiales de partida o intermediarios .
Por ejemplo, las formas de sal del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropiI-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Ejemplo 1 que se encuentra más adelante) se sintetizaron como sigue: Sal de mesi lato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1 .40 milimoles) se disuelve en 1 2 mililitros de acetona a 50°C . Se agrega por goteo ácido metan-sulfónico (0.1 37 gramos; 1 .40 milimoles) . La cristalización tiene lugar rápidamente. La suspensión blanca se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos con enfriamiento, a temperatura ambiente. La pasta acuosa se agita durante 18 horas a temperatu ra ambiente, y se filtra. El sólido se lava con acetona (6 mililitros) en tres porciones, y se seca primero durante aproximadam ente 3 horas a 50°C / aproxi madamente 1 0 mbar, y luego durante aproximadamente 1 6 horas a 80°C / aproximadamente 1 0 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproxi madamente 233°C con una entalpia de fusión de 98 J/g . El material producido exhibió una pérdida al secarse del 0.2 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante íermogravi metría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.4 por ci ento.
En otra modalidad, la invención proporciona un sal de mesilato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sal de mesilato del compuesto del Ejemplo 1, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 6.4, 6.7, 18.3, 18.6, 26.9; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 6.4, 6.7, 10.3, 12.9, 16.4, 18.3, 25.8, 26.5, 26.9.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de mesilato del compuesto del Ejemplo 1 que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 3 de la presente.
Sal de tosilato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 12 mililitros de acetona a 50°C. Se agrega por goteo una solución de mono-hidrato de ácido para-toluen-sulfónico (0.271 gramos; 1.40 milimoles) en acetona (1.2 mililitros). La solución se siembra a 50°C y la cristalización tiene lugar rápidamente. La suspensión se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, y se agita durante aproximadamente 18 horas. Después de la filtración, el sólido se lava con acetona (6 mililitros) en tres porciones, y se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 233°C con una entalpia de fusión de 88 J/g. El material producido exhibió una pérdida al secarse del 0.2 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.4 por ciento.
En otra modal idad, la invención proporciona una sal de tosilato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sal de tosilato del compuesto del Ejemplo 1 , la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) :6.2, 13.3, 1 6.7, 19.5, 25.4; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X: 6.2, 7.6, 1 2.4, 1 3.3 , 1 5.1 , 1 6.7, 1 7.7, 1 9.5, 20.2, 24.6, 24.9 , 25.4, 25.6.
En una modalidad todavía adicional , la invención proporciona la sal de tosilato del compuesto del Ejemplo 1 , que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figu ra 4 de la presente.
Sal de su lfato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-puri n-6-il-am ino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1 .40 milimoles) se disuelve en 1 0 mililitros de acetona y 1 mililitro de agua a aproximadamente 55°C. Se agrega por goteo una solución de ácido sulfúrico (0.280 gramos ; 2.79 milimoles) en 1 mililitro de acetona. La cristalización tiene lugar rápidamente. La suspensión se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos con enfriamiento, a temperatura ambiente, se agita durante aproximadamente 1 8 horas y se filtra. La torta del filtro se lava con 6 milil itros de acetona en tres porciones, y se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 224°C con una entalpia de fusión de 91 J/g. El material producido exhibió una pérdida al secarse debajo del 0.05 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.2 por ciento.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de sulfato del compuesto del Ejemplo 1. En una modalidad adicional, la invención proporciona la sal de sulfato del compuesto del Ejemplo 1, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 6.5, 6.8, 10.7, 13.5, 26.4, 27.6; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 6.5, 6.8, 10.7, 13.1, 13.5, 18.6, 18.8, 20.8, 26.4, 27.1, 27.6.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de sulfato del compuesto del Ejemplo 1, que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 6 de la presente.
Sal de esilato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 12 mililitros de acetona a 50°C. Se agrega por goteo ácido etan-sulfónico (0.155 gramos; 1.40 milimoles). La cristalización tiene lugar rápidamente. La suspensión blanca resultante se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatu ra ambiente. La suspensión se agita du rante aproximadamente 1 8 horas a temperatura ambiente, y se filtra. El sólido se lava con 6 mililitros de acetona en tres porciones, y se seca primero du rante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 1 0 mbar, y luego du rante aproximadamente 1 6 horas a 80°C / aproximadamente 1 0 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 231 °C con una entalpia de fusión de 76 J/g . El material producido exhibió una pérdida al secarse del 0.6 por ciento . La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.05 por ciento.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de esilato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sai de esilato del compuesto del Ejemplo 1 , la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 6.3, 9.9, 1 8.4, 25.3, 26.1 ; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.3, 9.9, 1 7.1 , 1 7.9, 1 8.4, 1 9.0, 22.0, 25.3, 26.1 , 27.1 .
En una modalidad todavía adicional , la invención proporciona la sal de esilato del compuesto del Ejemplo 1 , que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 8 de la presente.
Sal de bromhidrato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropiI-9H-purin-6-il-ami no) -etil) -fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 6 mililitros de dimetil-formamida a 65°C. Se agrega por goteo ácido bromhídrico al 48 por ciento (0.235 gramos; 1.40 milimoles). La solución se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente. Se agrega la siembra a 55°C, y la cristalización tiene lugar lentamente. La suspensión se agita durante aproximadamente 18 horas a temperatura ambiente, y se filtra. El sólido se lava con 4 mililitros de N,N-dimetil-formamida/agua, 1:1, y 6 mililitros de agua. La sal se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 285°C con una entalpia de fusión de 119 J/g. El material producido exhibió una pérdida al secarse del 1.0 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. No se observó absorción de agua.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de bromhidrato del compuesto del Ejemplo 1. En una modalidad adicional, la invención proporciona la sal de bromhidrato del compuesto del Ejemplo 1, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.0, 25.9, 26.8, 27.9; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.0, 11.4, 13.3, 21.4, 23.4, 25.9, 26.4, 26.8, 27.9.
En una modalidad todavía adicional, ia invención proporciona la sal de bromhidrato del compuesto del Ejemplo 1, que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 9 de la presente.
Sal de orotato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles), y el ácido orótico (0.222 gramos; 1.40 milimoles) se disuelven en 7.8 mililitros de NMP (1 -metil-2-pirrolidona) a 85°C. La solución se enfría a 60°C, y se agregan por goteo 6 mililitros de agua durante aproximadamente 5 minutos. La suspensión blanca resultante se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, y se agita durante 18 horas. Después de ia filtración, la torta del filtro se lava con 4 mililitros de NMP/agua, 1:1, en dos porciones, y 6 mililitros de agua en tres porciones. El sólido se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 240°C con una entalpia de fusión de 130 J/g. El material producido exhibió una pérdida al secarse debajo del 0.05 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 1.7 por ciento.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de orotato del compuesto del Ejemplo 1. En una modalidad adicional, la invención proporciona la sal de orotato del compuesto del Ejemplo 1, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.1, 16.3, 19.2, 23.5, 25.6, 26.9; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.1, 14.4, 16.3, 18.6, 19.2, 21.7, 23.0, 23.5, 25.6, 26.9, 28.7.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de orotato dei compuesto del Ejemplo 1, que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 10 de la presente.
Sal de hemi-f umarato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropiI-9H-purin-6-iI-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 18 mililitros de metanol a 65°C. Se agregan ácido fumárico (0.164 gramos; 1.40 milimoles), y 6 mililitros de metanol. La solución se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan algunos cristales de siembra a 60°C, y la cristalización tiene lugar lentamente. La suspensión se agita durante 18 horas a temperatura ambiente, y se filtra. El sólido se lava con 6 mililitros de metanol en tres porciones, y se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 232°C con una entalpia de fusión de 83 J/g. El material producido exhibió una pérdida al secarse debajo del 0.05 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.3 por ciento.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de hemi-fumarato del compuesto del Ejemplo 1. En una modalidad adicional, la invención proporciona la sal de hemi-fumarato del compuesto del Ejemplo 1, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.2, 8.7, 14.4, 15.8, 17.4, 19.0, 23.7; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 7.2, 8.7, 10.8, 14.4, 15.8, 17.4, 17.8, 19.0, 20.1, 23.7, 27.5.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de hemi-fumarato del compuesto del Ejemplo 1, que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 11 de la presente.
Sal de besilato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 12 mililitros de acetona a 50°C. Se agrega por goteo una solución del ácido bencen-sulfónico (0.225 gramos; 2.79 milimoles) en 1.2 mililitros de acetona. Se agregan cristales de siembra a 48°C, y la cristalización tiene lugar lentamente. La suspensión se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente. La pasta acuosa se agita durante aproximadamente 1 8 horas a temperatura ambiente, y se filtra. La sal se lava con 6 mililitros de acetona en tres porciones, y se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 1 0 mbar, y luego du rante aproximadamente 1 6 horas a 80°C / aproxi madamente 1 0 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 219°C con una entalpia de fusión de 92 J/g . El material producido exhibió una pérdida al secarse del 0.3 por ciento . La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó u na absorción de agua de aproximadamente el 0.05 por ciento.
En otra modalidad, la invención proporciona una sal de besilato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sal de besilato del compuesto del Ejemplo 1 , la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.2, 7.7, 17.7, 25.5; y la cual , en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.2, 7.7, 1 5.2, 1 6.7, 1 7.1 , 1 7.7, 1 9.8, 20.2, 24.9, 25.2, 25.5.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de besilato del compuesto del Ejemplo 1 , que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figu ra 7 de la presente.
Sal de napadisilato : La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.60 gramos ; 1 .40 milimoies) , y 0.259 gramos de ácido 1 ,5-naftalen-disulfónico (0.70 milimoies) se disuelven en 9 mililitros de dimetil-formamida a 87°C. La sol ución transparente se deja enfriar durante aproximadamente 30 mi nutos a temperatura ambiente. Se agrega la siembra a 65°C, y la cristalización tiene lugar lentamente. La suspensión se agita durante aproximadamente 1 8 horas a temperatura ambiente, y se filtra. El sólido se lava con 4 mililitros de ? , ?-dimetil-formam ida/agua, 1 : 1 , en dos porciones , y 6 mililitros de agua en tres porciones. La sal se seca primero du rante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproxi madamente 1 0 mbar, y luego durante aproximadamente 1 6 horas a 80°C / aproximadamente 1 0 mbar. El material tiene un punto de fusión a aproximadamente 304°C con una entalpia de fusión de 83 J/g. Se observa un fenómeno endotérmico amplio a 1 07°C que se podría atribuir a la pérdida de agua. El material prod ucido exhibió una pérdida al secarse del 6.1 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua menor del 0.05 por ciento.
En otra modalidad, la i nvención p roporciona una sal de napadisilato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sal de napadisilato del compuesto del Ejemplo 1 , la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.4, 9.6, 1 3.1 , 1 5.7, 16.1 , 26.0; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 9.6, 13.1, 15.7, 16.1, 16.4, 20.4, 20.9, 23.7, 26.0, 26.9.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona la sal de napadisilato del compuesto del Ejemplo 1, que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 12 de la presente.
Sal de clorhidrato: La base libre del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-ami no) -etil) -fenol (0.60 gramos; 1.40 milimoles) se disuelve en 12 mililitros de acetona a 55°C. Se agrega por goteo ácido clorhídrico al 37 por ciento (0.138 gramos; 1.40 milimoles). La cristalización tiene lugar rápidamente. La suspensión blanca se deja enfriar durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, y se agita durante 18 horas. Después de la filtración, el sólido se lava con 6 mililitros de acetona en tres porciones, y se seca primero durante aproximadamente 3 horas a 50°C / aproximadamente 10 mbar, y luego durante aproximadamente 16 horas a 80°C / aproximadamente 10 mbar. El material exhibe un evento exotérmico a aproximadamente 162°C con una entalpia de -13.8 J/g. Este fenómeno se podría atribuir a una transformación sólida hasta una modificación más estable. Entonces se ve un evento endotérmico a aproximadamente 259°C con una entalpia de 99.7 J/g. El material producido exhibió una pérdida ai secarse del 0.6 por ciento. La absorción de agua se estimó mediante termogravimetría después de exponerse a la humedad relativa (humedad relativa del 80 por ciento) durante 24 horas. Se observó una absorción de agua del 0.3 por ciento.
En otra modalidad, la invención p roporciona una sal de clorhidrato del compuesto del Ejemplo 1 . En una modalidad adicional , la invención proporciona la sal de clorhidrato del compuesto del Ejemplo 1 , la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.1 , 7.0, 1 9.8, 26.1 ; y la cual, en una modalidad adicional , comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °) : 6.1 , 7.0, 1 8.1 , 1 9.8, 24.7, 26.1 , 27.0, 27.7.
En una modalidad todavía adicional , la invención proporciona la sal de clorhidrato del compuesto del Ejemplo 1 , que tiene el patrón de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figu ra 5 de la presente.
Las formas del ácido libre o de base libre de los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de la forma de sal de adición de base o de sal de adición de ácido correspondiente, respectivamente . Por ejemplo un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de ácido se puede convertir hasta la base libre correspondiente mediante el tratamiento con una base adecuada (por ejemplo, solución de hidróxido de amonio, hidróxido de sodio, y similares) . U n compuesto de la invención en una forma de sal de adición de base se puede convertir hasta el ácido libre correspondiente mediante el tratamiento con un ácido adecuado (po r ejemplo, ácido clorhídrico, etc.) . La sal de nitrato del compuesto del Ejemplo 1 se puede hacer empleando ios métodos conocidos por la persona experta. El patrón de difracción en polvo de rayos-X se da a conocer en La Figura 2 de la presente.
Los compuestos de la invención en una forma no oxidada, se pueden preparar a partir de los N-óxidos de los compuestos de la invención , mediante el tratamiento con un agente reductor (por ejemplo, azufre, dióxido de azufre, trifenil-fosfina, borohidruro de litio, borohidruro de sodio, tricloruro de fósforo, tribromuro, o similares) , en un solvente orgánico i nerte adecuado (por ejemplo, acetonitrilo, etanol, dioxano acuoso, o similares) de 0°C a 80°C.
Los derivados de pro-fármaco de los compuestos de la invención se pueden preparar mediante los métodos conocidos por aquéllos de una experiencia ordinaria en la materia (por ejemplo, para mayores detalles, véase Saulnier y colaboradores (1 994) , Bioorganic and Medicinal Chemístry Letters, Volumen 4, página 1 985) . Por ejemplo, los pro-fármacos apropiados se p ueden preparar mediante la reacción de un compuesto no derivado de la invención con un agente carbamilante adecuado (por ejemplo, 1 , -aciloxi-alquil-carbano-cloridato, carbonato de para-nitro-fenilo, o similares) .
Los derivados protegidos de los compuestos de la invención se pueden hacer por medios conocidos por aquéllos de u na experiencia ordinaria en este campo. Se puede encontrar una descripción detal lada de las técnicas aplicables a la creación de los grupos protectores y su remoción en T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3a Edición, John Wiley and Sons, I nc. , 1 999.
Los compuestos de la presente invención convenientemente se pueden preparar o formar durante el proceso de la invención, como solvatos (por ejem plo, hidratos) . Los hidratos de los compuestos de la presente i nvención convenientemente se pueden preparar mediante recristalización a partir de una mezcla de solventes acuosos/orgánicos, utilizando solventes orgánicos, tales como dioxina, tetrahidrofurano o metanol .
Los compuestos de la invención se pueden preparar como sus estereoisómeros individuales mediante la reacción de una mezcla racémica del compuesto con un agente de resolución ópticamente activo para formar un par de compuestos diaestereoisoméricos, se separan los diaestereómeros, y se recuperan los enantiómeros ópticamente puros. Aunque la resolución de los enantiómeros se puede llevar a cabo utilizando derivados diaestereoméricos covalentes de los compuestos de la invención, se prefieren los complejos disociables (por ejemplo, sales diaestereoméricas cristalinas) . Los diaestereómeros tienen distintas propiedades físicas (por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición , solubilidades, reactividad, etc.) , y se pueden separar fácilmente aprovechando estas diferencias. Los diaestereómeros se pueden separar mediante cromatografía, o de preferencia, mediante técnicas de separación/resolución, basándose en las diferencias en la solubilidad. Entonces se recupera el enantiómero ópticamente puro , junto con el agente de resolución, por cualquier medio práctico que no dé como resultado la racemización. Se puede encontrar una descripción más detallada de las técnicas aplicables a la resolución de estereoisomeros de los compuestos a parti r de su mezcla racémica en Jean Jacques, Andre Collet, Sam uel H . Wilen , "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc. , 1 981 . Los compuestos de la invención también se pueden preparar como sus estereoisomeros individuales empleando técnicas de cromatografía quiral , en particular, mediante el uso de cromatografía H PLC o SFC uti lizando una fase estacionaria quiral.
Los espectros de difracción en polvo de rayos-X abarcados en la presente se obtuvieron utilizando el instrumento Bruker D8 Vario en geometría de transmisión , irradiación de CuKa (30 kV, 40 mA) , rango de exploración de 2o a 40° (valor 2 Teta) , tiempo de pasos de 90.3 s . La calorimetría de exploración diferencial (DSC) del material amorfo del Ejemplo 1 se llevó a cabo uti lizando el instrumento Perkin Elmer DSC7 a una velocidad de calentamiento de 40°C/minuto.
En resumen , los compuestos de la fórmula I se pueden elaborar mediante un proceso que involucra: (a) aquéllos de los esquemas de reacción 1 a 5; y (b) opcionalmente converti r un compuesto de la invención en una sal farmacéuticamente aceptable; (c) opcionalmente convertir una forma de sal de un compuesto de la invención hasta una forma no de sal ; (d) opcionalmente convertir una forma no oxidada de un compuesto de la invención hasta un N-óxido farmacéuticamente aceptable; (e) opcionalmente convertir una forma de N-óxido de un compuesto de la invención hasta su forma no oxidada; (f) opcionalmente resolver un isómero individual de un compuesto de la invención a parti r de una mezcla de isómeros; (g) opcionalmente convertir un compuesto no derivado de la invención hasta u n derivado de pro-fármaco farmacéuticamente aceptable; y (h) opcionalmente convertir un derivado de pro-fármaco de un compuesto de la invención hasta su forma no derivada.
Hasta donde no se describa particularmente la producción de los materiales de partida, los compuestos son conocidos o se pueden preparar de una manera análoga a los métodos conocidos en la técnica, o como se da a conocer en los Ejemplos posteriormente en la presente.
Un expe rto en la materia apreciará que las transformaciones anteriores son solamente representativas de los métodos para la preparación de los compuestos de la presente i nvención, y que se pueden emplear similarmente otros métodos bien conocidos.
EJEMPLOS La presente invención además se ejemplifica, pero no se limita, mediante los siguientes ejemplos que ilustran la preparación de los compuestos de la fórm ula I (Ejemplos) de acuerdo con la invención.
Ejemplo 1 4-(2-(2-(benzo-rb1-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino) etiD-fenol Síntesis de 2,6-dicIoro-9-isopropil-9H-purina (b): A la 2,6-dicloro-9H-purina (a) (6.0 milimoles) disuelta en N,N-dimetil-formamlda anhidra (5.0 mililitros) se le agregó lentamente hidruro de sodio (7.8 milimoles) con agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó 2-yodo-propano, y la mezcla se agitó durante 16 horas. La mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con hexano/EtOAc (20:1 a 3:1), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.15 (s, 1H), 4.91 (m, 1H), 1.63 (d, 6H).
Síntesis de 4-(2-(2-cloro-9-isopro il-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (c): La 2,6-dicloro-9-isopropil-9H-purina (1.1 milimoles) se mezcló con tiramina (1.16 milimoles) disuelta en i-PrOH (6 mililitros), y la mezcla se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con hexano/EtOAc (de 5:1 a 1:2), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 9.21 (br, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.10 (d, 2H), 6.73 (d, 2H), 4.87 (m, 1H), 4.03 (t, 2H), 3.01 (t, 2H), 1.68 (d, 6H); HRMS (El) calculado para Cl6H18CINsO (M + H+) 332.1273, encontrado 332.1278.
Síntesis de 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-iso ropíI-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (d): Un matraz Schlenk secado en flama se cargó con 4-(2-(2-cloro-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (0.62 milimoles), ácido tianaften-3-borónico (0.94 milimoles), pd2(dba)3 (0.062 milimoles), Cs2C03 (1.25 milimoles), y cloruro de 1 ,3-b¡s-(2,4,6-trimetil-fenil)-imidazolio (0.125 milimoles). El matraz se evacuó y se volvió a llenar con N2, y se agregó 1,4-dioxano anhidro (2 mililitros). El matraz se selló y la mezcla de reacción se agitó a 80°C durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó directamente mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con hexano/EtOAc (de 20:1 a 1:4), para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillento.
De una manera alternativa, la síntesis del Ejemplo 1 se puede llevar a cabo como sigue: Síntesis de 2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-6-cloro-9-isopropil-9H-purina (b): Un matraz de fondo redondo se cargó con 6-cloro-2-yodo-9-¡sopropil-9H-purina (preparada en el Ejemplo 15c, 3.31 gramos, 0.0103 moles), ácido benzo-[b]-tlofen-3-il-borónico (2.74 gramos, 0.0154 moles), y tetraquis-(trifenil-fosfina)-paladio(0) (1.19 gramos, 0.0103 moles). A esta mezcla se le agregaron tolueno (80 mililitros), etanol (25 mililitros), y una solución acuosa de carbonato de sodio (2M, 21 mililitros). El matraz se selló, y la mezcla de reacción se agitó a 90°C durante 1 hora. Se agregó agua a la mezcla enfriada, la cual se extrajo con acetato de etilo. Las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con el 20 al 50 por ciento de EtOAc en hexano, para proporcionar el compuesto del título como un sólido, el cual se recristalizó a partir de 1:1 de metanol/agua. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d = 9.15 (d, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.17 (d, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.53 (t, 1H), 5.06 (m, 1H), 1.71 (d, 6H); MS m/z 329.0 (M + 1).
Síntesis de 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-iso ropil-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-fenoI (c): La 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-6-cloro-9-isopropil-9H-purina (2.2 gramos, 0.0067 moles) se suspendió en 2-propanol anhidro (70 mililitros) en un tubo de presión. Se agregó tiramina (1.01 gramos, 0.0074 moles). El tubo se selló y se calentó a 85°C durante 16 horas. Se agregó tiramina adicional (0.50 gramos, 0.0037 moles), y la mezcla se calentó a 85°C durante 48 horas. La reacción se concentró. Al residuo se le agregó una solución acuosa de bicarbonato de sodio, la cual se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con el 50 al 85 por ciento de EtOAc en hexano, para proporcionar un sólido. El sólido se trituró con metanol, para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
De una manera alternativa, la síntesis del Ejemplo 1 se puede llevar a cabo como sigue: Síntesis de 2,6-dicloro-9-isopropil-9/--purina (b): A la 2,6-dicloro-9 -/-purina (a) (998 gramos, 5.28 moles) disuelta en ?,?-dimetil-formamida anhidra (5.0 L), se le agregó hidruro de sodio (dispersión al 60 por ciento, 254 gramos, 6.35 moles) con agitación a 10°C durante 1 hora. Se agregó 2-yodo-propano (1,595 gramos), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Se agregó agua (5.0 litros), y el sólido resultante precipitado se recolectó y se lavó con agua (500 mililitros), y heptano (2.5 litros, 2 veces). El sólido crudo se cristalizó a partir de acetato de isopropilo (2.1 litros), para proporcionar el compuesto del título como un sólido.
Síntesis de 4-(2-(2-cloro-9-isopropil-9 --purin-6-il-amino)-etiI)-fenol (c): La 2,6-dicloro-9-isopropil-9H-purina (500 gramos) se agregó en porciones a una mezcla agitada de tiramina (593 gramos), trietil- amina (262 gramos) , e i-PrOH (5.0 litros) a 50°C. La mezcla se agitó a esa temperatura durante 4 horas, y entonces la mezcla de reacción se concentró. El residuo se absorbió en acetato de isopropilo (6.0 litros) , y se lavó con una solución de ácido cítrico al 20 por ciento (2.0 litros) , y agua (2.0 litros). La capa orgánica se concentró a sequedad, entonces se abso rbió en etanol (2.0 litros) , y nuevamente se concentró a seq uedad . El sólido crudo se cristalizó a partir de etanol (3.2 litros) , para proporcionar el compuesto del título como un sólido .
Síntesis de 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropi l-9H-purin-6-il-amino)-eti l)-fenol (d): Una mezcla de 4-(2-(2-cloro-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (950 gramos) , ácido tianaften-3-borónico (561 gramos) , dicloro-bis-(trifenil-fosfina)-paladio(l I) (1 0.1 gramos) , carbonato de potasio (791 gramos) , agua (3.25 litros) , y D MA (3.25 litros) , se agitó bajo u na atmósfera de nitrógeno durante 1 0 minutos. La mezcla agitada entonces se calentó a 70°C durante 1 4 horas. Se agregaron acetato de etilo (6.5 litros) y agua (3.25 litros) , y la mezcla se filtró a través de Celite ( 1 25 gramos) a 50°C, enjuagando con acetato de etilo ( 1 .0 litros) . Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo a 50°C con acetato de etilo adicional (7.5 litros) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2.5 litros , 3 veces) , entonces se destilaron para remover aproximadamente 2.5 litros de solvente. Se agregaron tetrahidrofurano (2.5 litros) y gel de tio-sílice enlazado con sílice (200 gramos) . La mezcla se agitó a 70°C durante 16 horas, entonces se filtró, lavando el cojín con acetato de etilo (1.0 litros). Los filtrados combinados se concentraron a presión atmosférica hasta un volumen de aproximadamente 5 litros, y entonces la mezcla se dejó enfriar. El sólido resultante se recolectó y se lavó con acetato de etilo (1.0 litros, 2 veces), para proporcionar el compuesto del título.
El compuesto del Ejemplo 1 se puede recristalizar utilizando una mezcla de tolueno/etanoi y se lava a temperatura ambiente con una solución acuosa de NaHC03.
En otra modalidad, la invención proporciona un compuesto del Ejemplo 1 en la forma de la modificación de cristal A, en donde la modificación A comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 12.1, 16.9, 18.9, 21.3; y la cual, en una modalidad adicional, comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 12.1, 15.9, 16.9, 17.3, 18.9, 21.3, 22.1, 23.6, 24.4, 27.3.
En una modalidad todavía adicional, la invención proporciona el compuesto del Ejemplo 1 como la modificación en forma sólida A, la cual comprende los siguientes picos de difracción en polvo de rayos-X (Ángulo 2-Teta °): 9.0, 12.1, 13.0, 13.1, 13.6, 14.4, 14.7, 15.1, 15.9, 16.9, 17.3, 17.7, 18.0, 18.9, 19.0, 20.1, 21.3, 22.1, 22.3, 22.6, 22.8, 23.4, 23.6, 24.4, 25.3, 26.3, 26.5, 27.3, 27.8, 28.2, 29.5, 29.7, 30.4, 30.7, 31.0, 31.4, 32.2, 32.8, 33.3, 34.3, 35.5, 36.4, 37.5, 38.4, 39.0, 39.4.
El patrón de difracción en polvo de rayos-X del compuesto del Ejemplo 1 , modificación A, se muestra en la Figura 1 de la presente. El material amorfo del compuesto del Ejemplo 1 se produjo in situ en un crisol de DSC (calo ri metría de exploración diferencial) , mediante el calentamiento del com puesto hasta la fusión y el templado/ enfriamiento. Después del ciclo de enfriamiento, se pudo observar la transición de cristal , pero , después del ciclo de recalentamiento, se caracteriza mucho más a aproximadamente 70-75°C . El patrón de calorimetría de exploración diferencial se muestra en la Figura 1 3 de la presente.
Ejem plo 15 4-(2-(Piridi n-3-il)-9-isopropil-9H-puri n-6-il-am i no)-etil)-fenol Síntesis de 2-amino-6-cloro-9-isopropii-9H-purina (b): Se agregó hidruro de sodio (1 .5 gramos de dispersión al 60 por ciento en aceite mineral, 38 milimoles) en porciones, durante 1 0 minutos, a una suspensión agitada de 2-amino-6-cloro-9 - -purina (5.34 gramos, 31 .5 milimoles) en ? ,?-dimetii-formamida anhidra (50 mililitros) a temperatu ra ambiente. Después de 45 minutos, la mezcla se enfrió en un baño de hielo, y entonces se agregó 2-yodo-propano. El baño de enfriamiento se removió, y la mezcla agitada se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 6 horas. La mezcla se enfrió en hielo, y entonces se le agregó agua. La mezcla se concentró, y el residuo se trató con acetato de etilo caliente. La mezcla enfriada se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice , eluyendo con el 0 al 50 por ciento de EtOAc en hexano, para proporcionar el compuesto del título como un sólido. 1 H RMN (400 M Hz, C DCI3) d 7.83(s, 1 H) , 5.17(s, 2H) , 4.71 -4.66(m , 1 H) , 1 .57(d, 6H) . MS m/z 21 2.1 (M + 1 ) .
Síntesis de 6-cloro-2-yodo-9-isopropi l-9 -/-puri na (c): La 6-cloro-9-isopropil-9H-purin-2-am ina (2.68 gramos, 12.7 milimoles) se disolvió en tetrahidrofurano (64 mililitros) a temperatu ra ambiente. Se agregaron yodo (1 .61 gramos, 6.25 milimoles) , CH2I2 (1 0.6 mililitros) , y Cu l (1 .27 gramos, 6.66 milimoles) . La mezcla se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se agregó nitrito de isopentilo (5.33 mililitros). La mezcla de reacción se puso a refl ujo durante 45 minutos, y entonces se enfrió a temperatura ambiente. Se agregó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y la mezcla se extrajo con EtOAc tres veces. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con MgS04 y se concentró. El residuo se pu rificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con el 0 al 30 por ciento de acetato de etilo en hexano, para proporcionar el compuesto del título como un sólido. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 8.09(s, 1H), 4.95-4.88(m, 1H), 1.65(d, 6H). MS m/z 323.0 (M + 1). Síntesis de 6-cloro-2-(piridin-3-il)-9-isopropil-9-/-purina (d): Un matraz de fondo redondo se cargó con 6-cloro-2-yodo-9-isopropil-9H-purina (1.2 gramos, 3.7 milimoles), éster cíclico de 1,3-propanodiol del ácido piridin-3-borónico (0.91 gramos, 5.6 milimoles), y tetraquis-(trifenil-fosfina)-paladio(0) (430 miligramos, 0.37 milimoles). A esta mezcla se le agregaron tolueno (60 mililitros), etanol (6 mililitros), y una solución acuosa de carbonato de sodio (2M, 15 mililitros). El matraz se selló, y la mezcla de reacción se agitó a 80°C durante 4 horas. Se agregó agua a la mezcla enfriada, la cual se extrajo con acetato de etilo (50 mililitros, 3 veces). Las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con el 30 al 70 por ciento de EtOAc en hexano, para proporcionar el compuesto del título como un sólido. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 9.60(d, 1H), 8.90-8.87(m, 1H), 8.68(s, 1H), 8.67(d, 1H), 7.63-7.60(m, 1H), 5.12-5.05(m, 1H), 1.74(d, 6H). MS m/z 274.1 (M + 1).
Síntesis de 4-(2-(piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI (e): La 6-cloro-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purina (300 miligramos, 1.1 milimoles) se suspendió en 2-propanol anhidro (40 mililitros) en un tubo de presión. Se agregó tiramina (300 miligramos, 2.2 milimoles). El tubo se seiló y se calentó a 85°C durante 16 horas. La reacción se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con el 0 al 70 por ciento de EtOAc en hexano, para proporcionar el compuesto del título como un sólido.
Ejemplo 123 4-(2-(9-¡sopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-¡l)-9H-purin-6-il-amino)- Un tubo de reacción de microondas se cargó con 4-(2-(2-cloro-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (30 miligramos, 0.091 milimoles), 2-metil-1 H-imidazol (59 miligramos, 0.73 milimoles), y 0.5 mililitros de NMP. El tubo sellado se calentó bajo irradiación con microondas a 240°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna C18, eluyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 128 4-(2-f2-(5-cloro-p¡ridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-am ino)-eti l)- fenol Síntesis de 4-(2-(2-yodo-9-isopropil-9H-purin-6-i l-amino)-eti l)-fenol (b): Una mezcla de 6-cloro-2-yodo-9-isopropil-9H-purina (a) (1 .0 g ramos, 3.1 milimoles) , tiramina (0.64 gramos , 4.65 milimoles) , trietil-amina (0.63 gramos, 6.2 milimoles) , y 2-propanoi (30 mililitros) , se calentó a 85°C durante 2 horas. La m ezcla de reacción se concentró, y se agregó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mililitros, 3 veces) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron . El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de s ílice (eluyente del 25 al 75 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS m/z 424.1 (M + 1 ) .
Síntesis de 4-(2-(2-(5-cloro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-¡I-amino)-etil)-fenol (c): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15d, el 4-(2-(2-yodo-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (b) se hizo reaccionar con ácido 5-cloro-piridin-3-il-borónico. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna C18, eluyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 134 4-(2-(6-(5-f luoro-piridin-3-il)-1-isopropil-1 H-pirazolo-r3,4-d1- pírimídin-4-íl-amino)-etií)-fenol Síntesis de 4-(2-(6-cIoro-1 -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidin-4-iI-amino)-etiI)-fenol (b): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 128b, la 4,6-dicIoro-1 -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidina (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 3,399,196) (a) (0.184 gramos, 0.795 milimoles) se hizo reaccionar con tiramina. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 25 al 75 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS m/z 332.1 (M + 1).
Síntesis de 4-(2-(6-(5-fluoro-piridin-3-il)-1 -isopropil-1 H-pirazoIo-[3,4-d]-pirimidin-4-il-amino)-etiI)-fenol (c): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15d, el 4-(2-(6-cloro-1 -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidin-4-il-amino)-etil)-fenoI (b) se hizo reaccionar con ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico. El residuo crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna C 8, eluyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 141 4-(2-(2-(5-f luoro-piridin-3-il)-7-isopropil-7H-pirrolo-r2,3-dT- pirimidin-4-il-amino)-etil)-fenol Síntesis de 2,4-dicloro-7-isopropil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidina (b): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15b, la 2,4-dicloro-7H- p¡rrolo-[2,3-d]-pirim¡dina (0.5 gramos, 2.67 mi limoles) se hizo reaccionar con 2-yodo-propano. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 1 5 al 25 por ciento de acetato de etilo en hexano) , para proporcionar el compuesto del título como u n sól ido. MS m/z 230.2 ( + 1 ) .
Síntesis de 4-(2-(2-cIoro-7-isopropiI-7H-p¡rrolo-[2,3-d]-pirim idin-4-i l-amin o)-et¡l)-fenol (c): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 28b , la 2,4-dicloro-7-isopropil-7H-pirrolo-[2,3-d]-piri midina (b) (0.278 gramos, 1 .21 milimoles) se hizo reaccionar con ti ramina. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 25 al 75 por ciento de acetato de etilo en hexano) , para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS m/z 331 .1 (M + 1 ) .
Síntesis de 4-(2-(2-(5-f l uoro-piridi n-3-il)-7-isopropil-7H-pirroIo-[2,3-d]-pirim idin-4-il-amino)-etil)-fenol (d): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 5d, el 4-(2-(2-cloro-7-isopropiI-7H-pi rrolo-[2,3-d]-pirimidi n-4-il-amino)-etil)-fenol (20 miligramos, 0.06 milimoles) se hizo reaccionar con ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico. El residuo crudo se purificó mediante H PLC de fase inversa (colum na C 8, el uyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento) , para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 153 (R)-4-(2-(2-(benzo-rb1-tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H- purin-6-il-amino)-etil)-fenol Síntesis de (R)-2,6-d icloro-9-(tetrahidrof uran-3-iI)-9H-puri na (b) : Una solución de 5 ,7- 2,6-dicloro-9H-purina (400 miligramos , 2.12 milimoles), (S)-tetrahidrofuran-3-ol (88 miligramos, 2.5 milimoles) , y trifenil-fosfi na (1 .0 gramos, 3.8 milimoles) en tetrahidrofurano anhidro (30 mililitros) se trató a -78°C con azodicarboxilato de di-isopropilo (856 miligramos, 4.23 milimoles) . La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, y se agitó durante 1 6 horas. Se agregó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron , se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron . El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 1 0 al 80 por ciento de acetato de etilo en hexano) , para proporcionar un sólido blanco, el cual consistió en el compuesto del título contaminado con fosfoxido de trifenilo . MS m/z 258.0 (M + 1 ) .
Síntesis de (R)-4-(2-(2-cIoro-9-(tetrahidrof uran-3-il)-9H-puri n-6-il-amino)-eti l)-fenol (c) : Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 128b, la (R)-2,6-dicIoro-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purina (b) se hizo reaccionar con tiramina. La mezcla de reacción cruda se purificó mediante HPLC de preparación en fase inversa. MS m/z 360.1 (M + 1).
Síntesis de (R)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-9-(tetrahidrof uran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI: Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15d, el (R)-4-(2-(2-cloro-9-(tetrahidrofuran-3-ii)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (c) se hizo reaccionar con ácido benzo-[b]-tiofen-3-il-borónico (22.3 miligramos, 0.125 milimoles). El residuo crudo se purificó mediante HPLC de preparación en fase inversa, para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 157 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H- purin-9-il)-pro an-1-ol Síntesis de 2-(2,6-dicloro-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (b): Una mezcla de 2,6-dicloro-9H-purina (5.0 gramos, 26.5 mllimoles), 2-bromo-propanoato de metilo (5.3 gramos, 31.7 milimoles), y carbonato de potasio (11.0 gramos, 79.4 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida anhidra (100 mililitros), se calentó a 100°C durante 15 horas. Se agregó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y la reacción se extrajo con acetato de etilo (150 mililitros, 3 veces). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 10 al 80 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco. MS m/z 275.0 (M + 1).
Síntesis de 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-cloro-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (c): Una mezcla de 2-(2,6-dicloro-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (b) (600 miligramos, 2.2 milimoles), triptamina (420 miligramos, 2.6 milimoles), y 2-propanol (30 mililitros), se calentó a 85°C en un tubo sellado durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 10 al 80 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco. MS m/z 360.1 (M + 1). Síntesis de 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-f luoro-piridin- 3-i I)-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (d): Un tubo de presión de 1 50 mililitros se cargó con 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-cloro-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (c) (300 mil igramos, 0.75 milimoles), ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico (1 59 miligramos, 1 .1 milimoles) , tetraquis-(trifenil-fosfina)-paladio(0) (87 miligramos, 0.075 m ili moles) , KaP04 (638 miligramos, 3.0 milimoles) , y dioxano anhidro (1 5 mililitros) . El tubo de presión se salpicó con nitrógeno y se selló; entonces la mezcla de reacción se calentó a 1 30°C du rante 6 horas con agitación . Se agregó agua a la mezcla enfriada, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mililitros, 3 veces) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eiuyente del 1 0 al 80 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título contaminado con una pequeña cantidad de óxido de trifenil-fosfina. S m/z 460.1 (M + 1 ) .
Síntesis de 2-(6-(2-(1 H-i ndoI-3-il)-eti l-ami no)-2-(5-fIuoro-piridi n-3-i I)-9H-purin-9-iI)-propan-1 -oí : Se agregó hidruro de litio y alu minio (230 miligramos , 6.1 milimoles) en porciones a una solución a 0°C de 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fIuoro-piridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propanoato de metilo (282 miligramos, 0.61 milimoles) en tetrahidrofurano anhidro (1 5 mililitros) . La mezcla de reacción agitada se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas , y entonces se le agregó agua cuidadosamente. La mezcla se extrajo con EtOAc (50 mililitros, 3 veces). Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (del 0 al 5 por ciento de solvente B en dicloro-metano; solvente B = amoníaco 2M en metanol), para proporcionar el producto del título parcialmente purificado. Éste se purificó adicionalmente mediante cromatografía de capa delgada de preparación (5 por ciento de solvente B en dicloro-metano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
Ejemplos 157R y 157S (R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H- purin-9-il)-propan-1 -ol y rS)-2-f6-(2-nH-indol-3-in-etil-amino)-2-(5-fluoro-p!ridin-3-¡n-9H- purin-9-il)-propan-1-ol (R/S)-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3- il)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol se separó en los enantiómeros individuales util izando HPLC de preparación quiral sobre una columna quiral Lux-Cellulose-2 (Phenomenex) de 21 x 250 mil ímetros. Se preparó una solución de 3 miligramos/mililitro del racemato en metanol , y se cargó sobre la columna con 0.5 mililitros de solución por inyección . La columna se eluyó con 85/7.5/7.5 de hexano/etanol/metanol a una velocidad de flujo de 20 mililitros/ minuto durante 25 minutos. Los picos 1 y 2 se eluyeron a los 20 minutos y a los 22.5 minutos, respectivamente. La cromatografía analítica se llevó a cabo sobre una columna quiral Lux-Cellulose-2 (Phenomenex) de 4.6 x 1 00 milímetros, eluyendo con 90/5/5 de hexano/etanol/metanol a 1 mililitro/minuto durante 20 min utos. Los picos 1 y 2 se eluyeron a los 1 7.45 y a los 1 8.1 4 minutos, respectivamente .
Ejem plo 157R (R)-2-(6-(2-(1 H-indol-3-in-etil-amino)-2-(5-fluoro-pirid¡n-3-¡l)-9H- purin-9-¡0-propan-1 -ol F Síntesis de (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-(1 -(benciloxi)propan-2-il)-2-(5-fIuoro-piridin-3-iI)-9H-purin-6-amina (b): Siguiendo, en sucesión, los procedimientos del Ejemplo 153b (utilizando 2,6-dicloro-9H-purina y (S)- -(benciioxi)-propan-2-ol como reactivos), del Ejemplo 153c (utilizando triptamina como reactivo), y del Ejemplo 153d (utilizando ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico como reactivo), se obtuvo el compuesto del título.
Síntesis de (R)-2-(6-(2-(1 H-indoI-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1-oI (c): Una solución de (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-(1 -(benciloxi)-propan-2-il)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina (b) (0.15 gramos, 0.29 milimoles) en dicloro-metano (10 mililitros) se trató con BCI3 (1M, 2.9 mililitros, 2.9 milimoles) en dicloro-metano (10 mililitros) a -78°C durante 2 horas, se agregó una solución acuosa de hidróxido de sodio 1N, y la mezcla se extrajo con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente de metanol al 5 por ciento en dicloro-metano), para proporcionar el compuesto del título. MS m/z 432.2 (M + 1).
Ejemplo 157S (S)-2-(6-(2-nH-¡ndol-3-in-etil-amino)-2-í5-fluoro-piridin-3-¡l)-9H- purin-9-i0-propan-1-ol Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 157R, pero empleando el (R)-1 -(benciloxi)-propan-2-ol en lugar del (S)-1 -(benciloxi)-propan-2-ol, el compuesto del título se preparó. MS m/z 432.2 (M + 1).
Ejemplo 161 4-(2-(6-(5-f luoro-piridin-3-il)-1 -isopropil-1 H-imidazo-r4,5-c1- piridin-4-il-amino)-etil)-fenol Síntesis de 4,6-dicloro-1-isoprop¡l-1 H-imidazo-[4,5-c]-pirid¡na (b): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15b, la 4,6-dicloro-1 H-¡midazo-[4,5-c]-p¡rid¡na (J. Het. Chem. 1965, 196-201) (0.19 gramos, 1.0 milimoles) se hizo reaccionar con 2-yodo-propano. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 25 al 35 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS m/z 230.2 (M + 1).
Síntesis de 4-(2-(6-cloro-1 -isopropil-1 H-imidazo-[4,5-c]-piridin-4-il-amino)-etil)-fenol (c): Una mezcla de 4, 6-dicloro-1 -isopropil-1 H-imidazo-[4,5-c]-piridina (b) (40 miligramos, 0.17 milimoles), tiramina (120 miligramos, 0.86 milimoles), y 2-butanol (2 mililitros) se calentó bajo irradiación con microondas a 140°C durante 8 horas. La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna C18, eluyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo. MS m/z 331.1 (M + 1).
Síntesis de 4-(2-(6-(5-fIuoro-piridin-3-¡I)-1-ísopropíI-1 H-imidazo-[4,5-c]-piridin-4-il-amino)-etil)-fenol (d): Un frasco de reacción para microondas de 5 mililitros se cargó con el 4-(2-(6-cIoro-1-isopropil-1 H-¡midazo-[4,5-c]-piridin-4-il-amino)-etil)-fenol (c) (17 miligramos, 0.051 milimoles), ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico (72 miligramos, 0.51 milimoles), y tetraquis-(trifenil-fosfina)-paladio(O) (36 miligramos, 0.031 milimoles). A esta mezcla se le agregaron tolueno (1 mililitro), etanol (0.5 mililitros), y una solución acuosa de carbonato de sodio (2M, 0.5 mililitros). El frasco se selló, y la mezcla de reacción se agitó a 140°C bajo irradiación con microondas durante 2 horas. Se agregó agua a la mezcla enfriada, la cual se extrajo con acetato de etilo (5 mililitros, 3 veces). Las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. Eí residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna CiS, eluyendo con ACN-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Ejemplo 177 4-(2-(5-(5-fluoro-piridin-3-il)-3-isopropil-3H-imidazo-r4,5-bl- piridin-7-il-amino)-et¡n-fenol Síntesis de 5,7-dicloro-3-isopropil-3H-imidazo-[4,5-b]-piridina (b): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15b, la 5,7-dicloro-3H-im¡dazo-[4,5-b]-piridina (J. Med. Chem., 2007, 50, 828-834) (0.118 gramos, 0.624 milimoles) se hizo reaccionar con 2-yodo-propano. La mezcla del producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 25 al 35 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar una mezcla del compuesto del título (mayor) , y un producto isomérico como un sólido. MS m/z 230.2 (M + 1 ) .
Síntesis de 4-(2-(5-cloro-3-isopropi l-3H-imidazo-[4,5-b]-piridin-7-il-am ino)-etil)-fenol (c): La mezcla del producto que contenía 5,7-dicloro-3-isopropil- 3H-imidazo-[4,5-b]-pi ridina (b) (40 miligramos, 0.17 milimoles) , tirami na (120 miligramos, 0.87 milimoles) , y 2-propanol (2 mililitros) , se calentó en un frasco sellado a 1 40°C durante 72 horas. La mezcla se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía de capa delgada de preparación (eluyente de 1 :2 de hexanos/aceíato de etilo), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo . MS m/z 33 .1 (M + 1 ) .
Síntesis de 4-(2-(5-(5-f Iuoro-piridin-3-iI)-3-isopropil-3H-i midazo-[4,5-b]-piridin-7-i l-ami no)-etil)-fenol (d) : Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 61 d, el 4-(2-(5-cloro- 3-isopropil-3H-imidazo-[4,5-b]-p¡ridin-7-il-amino)-etil) -fenol (c) ( 5 miligramos, 0.047 mili moles) se hizo reaccionar con ácido 5-fluoro-piridin-3-il-borónico. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía de capa delgada de preparación (eluyente de 1 :1 de hexanos/acetato de etilo) , para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Repitiendo los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores, utilizando los materiales de partida apropiados, se obtienen los siguientes compuestos de la fórmula I , como se identifican en la Tabla 1 .
Tabla 1 EC50 Ej- Datos Físicos Estructura (%CD34^ o. 1H RMN y/o MS µ 42 MS m/z 376.2 (M + 1) 0.64 43 MS m/z 376.2 (M + 1) 2.4 44 MS m/z 375.2 (M + 1) 1.7 45 MS m/z 389.2 (M + 1) 0.063 N ' EC50 Ej. Datos Físicos Estructura o. 1H N y/o MS µ 62 MS m/z 412.1 (M + 1) 0.72 70 MS m/z 367.2 (M + 1) 2.7 72 MS m/z 375.2 (M + 1) 6.3 73 MS m/z 363.2 (M + 1) 8.2 EC50 Ej- Datos Físicos Estructura No. 1H RMN y/o MS µ 113 MS m/z 391.2 (M + 1) 0.54 114 MS m/z 454.1 (M + 1) 1.1 118 MS m/z 393.2 (M + 1) 0.45 119 MS m/z 377.2 (M + 1) 1.4 EC50 Ej. Datos Físicos Estructura (%CD34*) No. 1H RMN y/o MS µ? 120 MS m/z 381.2 (M + 1) 1.4 121 NH MS m/z 414.2 (M + 1) 0.086 122 MS m/z 414.2 (M + 1) 0.42 EC50 Ej. Datos Físicos Estructura (%CD34*) No. 1H RMN y/o MS µ? 1H RMN (400 MHz, DMSO): d = 9.21(br, 1H), 8.57 (t, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.70 (d, NH 1H), 7.04 (d, 2H), 6.66 123 0.066 (d, 2H), 4.84-4.72 (m, 1H), 3.67 (q, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.83 (t, 2H), 1.56 (d, 6H); MS m/z 378.2 (M + ) 124 MS m/z 428.2 (M + 1) 0.003 150 Ej. Datos Físicos Estructura (%CD34*) o. 1H RMN y/o MS µ? 4.60 (m, 1H), 3.92-3.84 (m, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.08-1.90 (m, 2H), 1.58 (d, 3H), 0.77 (t, 3H); MS m/z 430.2 (M + 1) 2 MS m/z 426.2 (M + 1) 0.003 32S MS m/z 426.2 (M + 1) 0.003 ECS0 Ej. Datos Físicos Estructura (%CD34 No. 1H RMN y/o MS µ 146 MS m/z 409.1 (M + 1) 0.24 147 MS m/z 393.2 (M + 1) 0.092 148 MS m/z 432.2 (M + 1) 0.75 149 MS m/z 416.2 (M + 1) 0.52 Ej. Datos Físicos Estructura {°/<CD3#) No. 1H RMN y/o MS µ? 150 NH MS m/z 389.2 (M + 1) 0.057 151 MS m/z 444.1 (M + 1) 0.17 152 MS m/z 458.2 (M + 1) 0.35 EC50 Ej. Datos Físicos Estructura (%CD34*) No. 1H RMN y/o MS µ? 1H), 3.19 (t, 2H), 1.68 (d, 3H); MS m/z 432.2 (M + 1) 157R MS m/z 432.2 (M + 1). 0.008 157S MS m/z 432.2 (M + 1) 0.003 158 MS m/z 444.2 (M + 1) 0.012 ECS0 Ej- Datos Físicos Estructura No. 1H RMN y/o MS µ? 159 MS m/z 415.2 (M + 1) 0.59 160 MS m/z 415.2 (M + 1) 1.9 1H RMN (400 MHz, DMSO): d = 9.11 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.09 (d, 2H), 161 0.17 6.69 (d, 2H), 4.88-4.76 (m, 1H), 3.88-3.78 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 1.56 (d, 6H); MS m/z 392.2 (M + 1) Ej- Datos Físicos Estructura No. 1H RMN y/o MS µ? 162 MS m/z 392.2 (M + 1) 0.14 166 MS m/z 378.1 (M + 1) 7.5 167 MS m/z 409.2 (M + 1) 0.29 F 169 MS m/z 446.2 (M + 1) 0.044 EC50 Ej- Datos Físicos Estructura (%CD3 ?) No. H RMN y/o MS µ? H RMN (400 Hz, DMSO): d = 10.83 (s, 1H), 8.67 (t, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.20 (s, 178 1H), 7.06 (t, 1H), 6.96 (t, 0.003 1H), 4.60-4.48 (m, 1H), 3.86-3.76 (m, 2H), 3.06 (t, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.05-1.85 (m, 2H), 1.56 (d, 3H), 0.76 (t, 3H); MS m/z 4 5.2 (M + 1) 180 MS /z 392.2 (M + 1) 0.13 Et Ej. Datos Físicos Estructura o. 1H RMN y/o MS µ? 3.85 (m, 2H), 3.09 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.58 (d, 6H); MS m/z 412.2 (M + 1) 84 MS m/z 401.2 (M + 1) 0.008 85 MS m/z 430.2 (M + 1) 0.024 86 MS m/z 430.2 (M + 1) 0.007 También se pueden preparar compuestos de sonda de afinidad relacionados con los compuestos de la invención, como se describen en los siguientes ejemplos.
Ejemplo 21 0 6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahid ro-1 H-tieno-r3.4-d"l-im ídazol-4- ¡l)-pentanam ido)-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-rb1-tiofen-3-il)-9- ¡sopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1 H-i ndol-5-ilo Síntesis de 6-ami no-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)- 9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-1 H-indol-5-ilo (e): A una solución de 6-(terbutoxi-carbonil-amino)-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1H-indol-5-ilo (a) (80 miligramos, 0.117 milimoles) en dicloro-metano (20 mililitros), se le agregó ácido trifluoro-acético (5 mililitros). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se concentró. Se agregó una solución acuosa de carbonato de sodio, y la mezcla se extrajo con dicloro-metano. Las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron, para proporcionar el producto como un aceite. MS m/z 582.2 (M + 1). Síntesis de 6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanamido)-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1 H-indoI-5-ilo: A una solución de (+)-biotina (35 miligramos, 0.14 milimoles), y Et3N (36 miligramos, 0.35 milimoles) en N,N-dimetil-formam¡da (1 mililitro), se le agregó HATU (90 miligramos, 0.24 milimoles). La mezcla se agitó durante 10 minutos, y entonces se agregó a una solución de (6-amino-hexanpato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-1 H-indol-5-ilo (b) (68 miligramos, 0.12 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (1 mililitro). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, y entonces se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa (columna Ci8, eluyendo con MeOH-H20 y ácido trifluoro-acético al 0.05 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo. El Ejemplo 210 mostró un valor de EC50 en el ensayo de porcentaje de CD34+ de 2.1 µ?.
Ejemplo 211 6-(terbutoxi-carbonil-amino)-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-|"bl- tiofen-3-in-9-isoprop¡l-9H-purin-6-il-am¡no)-etil)-1 H-indol-5-ilo Síntesis de 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-6-cloro-9-ísopropil-9H-purina (b): Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 15d, la 6-cloro-2-yodo-9-isopropll-9H-purlna (3.31 gramos, 0.0103 moles) se hizo reaccionar con ácido benzo-[b]-tiofen-3-il-borónico. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (del 20 al 50 por ciento de acetato de etilo en hexano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS m/z 329.0 (M + 1). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d = 9.15 (d, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.17 (d, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.53 (t, 1H), 5.06 (m, 1H), 1.71 (d, 6H).
Síntesis de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-¡l)-9-isopropil-9H-puri n~6-il-am ino)-etil)-1 H-indoI-5-ol (c) : Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 5e, la 2-(benzo-[b]-tlofen-3-il)-6-cloro-9-isopropil-9H-purma (b) (80 miligramos, 0.243 milimoles) se hizo reaccionar con serotonina. La mezcla de reacción se concentró, y entonces se agregó una solución acuosa de bicarbonato de sodio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fracciones orgánicas se combinaron , se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron . El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 0 al 5 por ciento de metanol en dicloro-metano) , para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo. MS m/z 469.2 (M + 1 ) .
Síntesis de 6-(terbutoxi-carbonil-amino)-hexanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropii-9H-purin-6-i l-amino)-eti I)-1 H-indol-5-ilo (d): A una solución de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropii-9H-purin-6-il-ami no)-et¡l)-1 H-indoI-5-ol (55.5 miligramos , 0.1 1 9 milimoles) , y ácido 6-(terbutoxi-carboníl-amino)-hexanoico (30 miligramos, 0.1 13 milimoles) en N ,N-d¡metil-formamida (3 mililitros) , se le agregó Et3N (24 miligramos, 0.237 milimoles) , y HATU (90 miligramos, 0.237 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 6 horas, y entonces se concentró. Se agregó agua, y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo. Las fracciones orgánicas se combinaron , se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron . El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente del 0 al 5 por ciento de metanol en dicloro-metano), para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
Repitiendo los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores, utilizando los materiales de partida apropiados, se obtienen las siguientes sondas de afinidad, como se identifican en la Tabla 2: Tabla 2 Ejemplo Datos Físicos Estructura Número 1H R N y/o MS 1H), 8.06 (d, 1H), 7.94 (bs, 1H), 7.77 (t, 1H), 7.39-7.48 (m, 2H), 7.28-7.34 (m, 3H), 6.79 (dd, 1H), 6.42 (bs, 1H), 4.85- 4.93 (m, 1H), 4.24- 4.28 (m, 1 H), 4.07- 4.10 (m, 1 H), 3.88- 3.92 (m, 2H), 3.01- 3.11 (m, 5H), 2.77 (dd, 1H), 2.53-2.57 (m, 1H), 2.00 (t, 2H), 1.63 (d, 6H), 1.23- 1.60 (m, 12H); MS m/z 808.3 ( + 1) MS m/z 682.2 (M + 211 1)- H Ensayos Los siguientes ensayos se utilizan para evaluar la actividad de los compuestos de la invención con el objeto de facilitar la expansión de las células madre hematopoiéticas (HSC) .
Las células madre hematopoiéticas humanas CD34+ adultas primarias (células madre hematopoiéticas) se cultivan y se rastrean para identificar los compuestos de la invención que faciliten la expansión de las cél ulas madre hematopoiéticas. Las células se analizan para determinar la presencia del fenotipo deseado (la expresión de CD34). Los compuestos de la invención promueven la expansión de las células madre hematopoiéticas de una manera dependiente de la dosis .
Medio de cultivo: El medio StemSpan SFEM es un medio sin suero (StemCelí Technologies, Vancouver, BC) complementado con las siguientes citoquinas recombinantes humanas: trombopoietina, interleucina-6, ligando de Flt-3, y el factor de cél ulas madre (todos de R&D Systems, Minneapolis, MN) , cada u no en una concentración fi nal de 50 nanogramos/mililitro, con veh ículo (sulfóxido de di metilo) o con un compuesto de la invención.
Cultivo de células humanas: La sangre periférica humana fresca de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) pasada por leucoforesis, movilizada a partir de donadores normales , las células CD34+ a partir de médula ósea adulta, y las células de sangre de cordón humano CD34+ crioconservadas se adquieren en AlICells (Berkeley, CA) . Las células CD34+ humanas se enriquecen a partir de la sangre periférica de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) pasada por leucoforesis, movilizada utilizando clasificación celular magnética (MACS, Direct CD34 Progenitor Cell Isolation Kit, iltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemania) , y se crioconservan. La pureza de las células CD34+, verificada mediante citometría de fl ujo, es mayor del 90 por ciento. Después de la congelación, la viabilidad celular probada mediante exclusión con azul de tripano, es mayor del 70 por ciento. Las cél ulas descongeladas se centrifugan y se vuelven a suspender con el medio StemSpan antes de ponerse en al ícuotas para el cultivo inmediato. Las células se aplican a 1 04 células/mililitro en una placa de 384 pozos (Greiner Bio-ona, onroe, Carolina del Norte) con 50 microlitros del medio por pozo durante 7 días. Cada 7 días, las células se transfieren a placas de pozos más grandes, y se agrega medio fresco para mantener la densidad celular entre 1 O4 y 5 x 1 05 células/mililitro . Las células se cultivaron a 37°C en C02 al 5 por ciento. Para el trasplante, las células se cultivaron en matraces de 75 cm2 antes de trasplantar las células en ratones. En una concentración de 1 micromolar, el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo í) , el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-iÍ-amino)-etil)-fenol (Compuesto 2, Tabla 1 ) , y la N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina (Compuesto 9 , Tabla 1 ) , cada u no da lugar a un aumento mayor de 1 0 veces en el número de cél ulas CD34+CD45RA" derivadas a parti r de 1 ,000 células madre hematopoiéticas CD34+ de m PB después de 21 días, comparándose con el veh ículo. Los compuestos de la invención se ensayaron en un formato de respuesta a la dosis (de i nM a 1 0µ?) , para determinar la concentración efectiva que p rodujera el efecto deseado en el 50 por ciento de las células (EC50) . Los compuestos de la invención aumentaron el número total y/o el porcentaje de células CD34+ con una EC50 de menos de 1 0µ?. Los resultados se muestran en la Tabla 1 y en los Ejemplos anteriores.
Unidades formadoras de colonias en el ensayo de cultivo (CFU-C): Las células mononucleares a 1 ,000 por mililitro para el cultivo de sangre de cordón de 5 semanas y para el cultivo de m PB de 3 semanas, y a 100 células por mililitro para el cultivo de CB de 3 semanas y para el cultivo de mPB de 1 semana, se agregaron al medio de metil-celulosa sin suero MethoCult SF H4436 que contenía metil-cel ulosa en M DM de Iscove, albúmina de suero bovino, 2-mercapto-etanol , L-glutamina, transferrina humana (saturada de hierro) , insulina humana recombinante, y citoquinas hu manas recombinantes: factor de células madre, GM-CSF, IL-3, I L-6, G-CSF, y eritropoietina (StemCell Technologies) . El MethoCult se complementa con las siguientes citoquinas recombinantes humanas: trombopoieti na y ligando de Flt-3 (R&D Systems) , cada uno en una concentración final de 50 nanogramos/mililitro. Después de la agitación , la mezcla se divide en tres platos de 35 milímetros . Los platos se incuban durante 1 4 días a 37°C en una atmósfera humidificada de C02 al 5 por ciento en aire. Al final del período de incubación , se cuentan las colonias mieloides y eritroides bajo un microscopio invertido a una amplificación 40X. El contenido de CFU-C del cultivo de expansión se calcula como sigue: n úmero colonias marcadas por tres platos x número total de células mononucleares / número de células introducidas. Hasta una semana, las células mononucleares totales se determi nan multiplicando el número de células por mililitro x el volumen del cultivo. A parti r de la semana 1 en adelante, también se toma en cuenta el número de pasadas. Los cultivos tratados con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-am¡no)-etil)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) en una concentración de 1 micromolar, generaron un aumento mayor de 1 0 veces en el nú mero de cél ulas formadoras de colonias después de 21 d ías de cultivo de cél ulas mPB CD34+, comparándose con el vehículo. Utilizando 1 x 1 03 células CB CD34+ tratadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) en una concentración de 1 micromolar, tomadas a partir del cultivo de la semana 5, se mostró un aumento >1 0 veces en las unidades formadoras de colonias , comparándose con el control. Las células tratadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-ami no) -etil) -fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) generaron más colonias mixtas asociadas con un aumento de >1 0 veces en las colonias de eritrocitos, un aumento de >1 0 veces en las colonias de granulocitos/macrófagos, y un aumento de > 0 veces en las colonias de macrófagos. Las células tratadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) también dan lugar a colonias mixtas de granulocitos / eritrocitos / monocitos / macrófagos, las cuales no se observan en las colonias derivadas a partir de los cultivos no tratados .
Ensayos de células formadoras de áreas de guijarros (CAFC): Las células estromales FBMD-1 se mantienen en matraces de 25 cm2 y se tripsinizan después de una confl uencia de 1 /3. A medida que esta línea no transformada envejece, y por consiguiente, pierde gradualmente su potencial para soportar el crecimiento de las células formadoras de áreas de guijarros (CAFC) en las etapas posteriores , se utilizan todos los alimentadores debajo del pasaje 20. Para soportar el crecimiento de las células formadoras de áreas de guijarros (CAFC) en las placas de 96 pozos, se siembran 1 x 1 03 células estromales por pozo. Los cultivos se mantienen en un medio de Iscove complementado con suero fetal de becerro al 1 0 por ciento (FCS) , suero de caballo al 2.5 por ciento (HS) , L-glutamina al 1 por ciento, penicilina-estreptomicina al 1 por ciento, e hidrocortisona 1 x 1 0"5 M a 37°C, en una atmósfera h umidificada de C02 al 5 por ciento en ai re. Después de que las capas estromales alcanzan la confluencia, se inoculan con células madre hematopoiéticas CD34+ que se han cultivado durante 5 días con vehículo o con un compuesto de la invención. Las células mononucleares se agregan a 8 diluciones de 1 :3 en serie (empezando a 25,000 cél ulas/pozo), con 1 0 pozos para cada dosis de células. Las diluciones con los pozos con cuando menos un clon hematopoiético en fase oscura (área de guijarros) de cuando menos cinco células detrás de la capa estromal , se determinan en la semana 4. En una concentración de prueba de 1 micromolar, el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil- 9H-purin-6-il-amino)-et¡l)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) , estimula un aumento mayo r de 2 veces en el número de células formadoras de áreas de guijarros derivadas a partir de células madre hematopoiéticas m PB C D34+ después de 5 días de cultivo, comparándose con los cultivos de control que se tratan con sulfóxido de di metilo solamente.
Análisis de antígeno superficial : Las células se lavan con el medio de teñido (solución de sal balanceada de Hanks que contiene suero bovino fetal (al 2 por ciento) y EDTA (2 mM)) , y se tiñen (a 4°C durante 30 minutos) con los anticuerpos conjugados primarios indicados. Las células se lavan en el regulador anteriormente descrito, y se analizan utilizando un citómetro de flujo BD LS R I I (Becton Dickinson , San José, CA) . Las células se pasan a una velocidad de hasta 1 ,000 células/segundo, utilizando haces de láser de argón de 488 nanometros y de HeNe de 633 nanometros como la fuente de luz para la excitación. La emisión de 1 04 células se mide utilizando amplificación logarítmica, y se analiza utilizando el software FlowJo (TreeStar I nc. Ashland, O R) . Las células teñidas con los anticuerpos de control de isotipo conj ugados primarios se utilizan para determ inar la fluorescencia del fondo .
Determi nación de subconjuntos de células CD34+: Los porcentajes de los subconjuntos de células CD34+ se determinan a partir de al ícuotas del cultivo celular. Las células se tiñeron con APC anti-Thy1 .1 , PerCP anti-CD34, PECy7 anti-CD45RA, FITC anti-CD38, y PE anti-CD1 33 para la determi nación de las células CD34+Thy1 + , CD34+CD45RA", CD34+CD38', CD1 33+CD38" y CD34+CD133+. Los anticuerpos para C D34, CD38 , Thy1 .1 y CD45RA se adqui rieron en Becton Dickinson, y ios anticuerpos para CD1 33 se adquirieron en Miltenyi Biotec. Los resultados del análisis FACS de estos subconj untos se dan como un porcentaje de la población total . El número absoluto de cada población de células en el cultivo se calcula a partir del número total de células multiplicado por el porcentaje de cada población. Empezando con las células CB CD34+, después de cinco semanas, el número total de cél ulas en los cultivos aumenta en p romedio más de 2 veces en las células tratadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) 1 micromolar, comparándose con los cultivos de control. De manera más importante , >50 por ciento de las células cultivadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) fueron CD34+, comparándose con <1 0 por ciento de las células cultivadas con vehículo, dando como resultado una expansión mayor de 1 0 veces de las células CD34+, comparándose con el control , y una expansión mayor de 1 0,000 veces, co mparándose con las células introducidas. En adición, la p resencia del 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-iI-amino)-eti l)-fenol 1 micromolar (Compuesto 1 , Tabla 1 ; Ejemplo 1 ) aumentó tanto el porcentaje como los números totales de las sub-poblaciones de CD34+: C D34+CD45RAJ, CD34+CD38", CD 133+CD38-, y CD34+CD1 33+, dando como resultado una expansión neta de más de 30 veces para cada subconjunto.
Trasplante de células CD34+ humanas en ratones NOD.CB17-Prkdcscid (NOD/SCID): Para evaluar la capacidad de repoblación in vivo de las células CD34* y su progenie cultivada, las células CD34+ no cultivadas, o las progenies de las células CD34+ cultivadas después de 4 días (mPB) o de 21 días (CB) con vehículo o con un compuesto de prueba, se inyectaron intravenosamente por medio de la vía retro-orbital en ratones NOD/SCID (para los experimentos de células madre hematopoiéticas mPB) o NOD/SCIDgc-/- (para los experimentos de células madre hematopoiéticas CB) de 8 a 10 semanas de edad, sub-letalmente irradiados (3.0 Gy). Con el objeto de monitorear el injerto, se extrajo sangre semanalmente por la vía retro-orbital, y se trató con solución de lisis de eritrocitos (Qiagen, Valencia, CA), para remover los glóbulos rojos sanguíneos, se lavó con el medio de teñido, y se analizó mediante citometría de flujo. El injerto se midió mediante la detección de las células CD45+ anti-humano en la sangre. Los ratones se sacrifican a las 10 semanas después del trasplante; las BM se recolectan a partir de ambos fémures y tibias. Las células BM se lavan en el medio de teñido, y se tiñen con los anticuerpos antihumano. En seguida de la incubación, la suspensión se trata con solución de lisis de eritrocitos (Qiagen, Valencia, CA) para remover los glóbulos rojos sanguíneos, se lava con el medio de teñido, y se analiza mediante citometría de flujo, como se describe anteriormente. Las células madre hematopoiéticas derivadas tanto de mPB como de CB, cultivadas con el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol (Compuesto 1, Tabla 1; Ejemplo 1) en una concentración de 1 micromolar, dan lugar a un aumento estadísticamente significativo en el porcentaje de células humanas 10 semanas después del injerto.
Identificación de Objetivo Con el fin de identificar el mecanismo mediante el cual un compuesto de la invención expande las células madre hematopoiéticas en un estado no diferenciado, se hace una perfilación de transcripción de todo el genoma de las células CD34+ derivadas de mPB tratadas durante 24 horas con el Ejemplo 1, y con un análogo menos activo (aproximadamente 20 veces) del Ejemplo 1 (2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(3-(3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-propil)-9-isopropil-9H-purin-6-amina). De los >50,000 conjuntos de sonda analizados, solamente se sobre-regularon 5 genes más de 3 veces después del tratamiento con el Ejemplo 1, y la mayoría también fueron inducidos hasta algún grado mediante el análogo inactivo. En adición, 5 genes se sub-regularon por >70 por ciento después del tratamiento con 1 µ? del Ejemplo 1. Todos fueron sub-regulados de una forma dependiente de la dosis, y ninguno fue significativamente afectado por el análogo inactivo. Los dos genes que fueron los más altamente reprimidos mediante el tratamiento con el Ejemplo 1 (citocromo P450 1B1 [CYP1B1] y el represor del receptor de hidrocarburo de arilo [AHRR]) son regulados transcripcionalmente por el receptor de hidrocarburo de arilo (AHR). Por consiguiente, los compuestos de la invención podrían estar actuando como un antagonista de la señalización del receptor de hidrocarburo de arilo.
Además, se determinó la capacidad del Ejemplo 1 para bloquear la expresión del ARNm de CYP 1 B 1 mediada por la 2,3,7, 8-tetracloro-dibenzo-p-dioxina (TCDD, dioxina) mediante qPCR en las células CD34+ derivadas de m PB. El tratamiento con la 2,3,7,8-tetracloro-dibenzo-p-dioxina (3 nM) causó un aumento de 4.5 veces en el nivel de ARNm de CYP 1 B1 , comparándose co n el control de veh ículo (tolueno al 0.01 por ciento) . Este aumento fue inhibido por el Ejemplo 1 de una manera dependiente de la dosis, indicando que los compuestos de la invención pueden antagonizar la señalización del receptor de hidrocarburo de arilo . Con el objeto de determinar los efectos del Ejemplo 1 sobre la transcripción del receptor de hidrocarburo de arilo, se probó la capacidad del Ejemplo 1 para inhibir un ensayo de gen reportero de l uciferasa dependiente del receptor de hidrocarburo de arilo inducido por dioxina. La inclusión del Ejemplo 1 (1 µ?) abolió completamente la transcripción dependiente del receptor de hidrocarburo de arilo inducido por dioxina cuando se utilizó sobre células que expresaban el receptor de hidrocarburo de arilo humano . La titulación del Ejemplo 1 reveló una ECS0 de 1 27 n M, demostrando que el Ejemplo 1 es un potente antagonista del receptor de hidrocarburo de arilo. Es interesante q ue el Ejemplo 1 solamente inhibió de una forma débil la transcripción inducida por dioxina en las células de murino, y no tuvo actividad alguna sobre las células de rata, sugiriendo que el Ejemplo 1 inhibe de una manera preferenci al el receptor de hidrocarburo de ari lo humano. Esto se correlaciona con una falta de actividad del Ejemplo 1 sobre las células madre hematopoiéticas de murino, y puede explicar la selectividad de la especie del Ejemplo 1 . Finalmente, el Ejemplo 1 solamente tuvo una actividad agonista débil sobre las células de mu rino o de rata, y fracasó para inducir la transcripción dependiente del receptor de hidrocarburo de arilo en las células humanas .
Para explorar adicional mente el papel de la señalización del receptor de hidrocarburo de arilo en las células madre hematopoiéticas, se probaron otros dos antagonistas del receptor de hidrocarburo de arilo (alfa-naftoflavona y CH-2231 91 ) . Ambos compuestos conducen a aumentos dependientes de la dosis en el número de células CD34+ cuando se cultivan con células CD34+ derivadas de mPB durante 7 días: La inclusión de CH2231 91 1 µ proporcionó una expansión de 2.2 veces de las células CD34+; la a-naftoflavona 0.75 µ ? proporcionó una expansión de 1 .9 veces de las células CD34+, mientras que el Ejemplo 1 0.75 µ? proporcionó una expansión de 3.4 veces de las células CD34+ totales. Para mostrar un papel directo para el receptor de hidrocarburo de arilo en la expansión de las células madre hematopoiéticas inducida pór el Ejemplo 1 , las células mad re hematopoiéticas CD34+ derivadas de CB humanas se trataron con partículas lentivirales que contenían un receptor de hidrocarburo de arilo dirigido hacia el shARN , que co-expresaba la G FP o el virus de control. Cuarenta y ocho horas en seguida de la transducción , las cél ulas CD34+GFP+ se purificaron mediante selección de cél ulas, y se determinaron los niveles del receptor de hidrocarburo de arilo mediante qPCR. Ambos shARNs dirigidos al receptor de hidrocarburo de arilo condujeron a disminuciones en la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo en seguida de la transducción (81 por ciento con sh1 1 1 y 51 por ciento con sh242) . Estas disminuciones no se vieron en las cél ulas que carecían de G FP ni en las células transducidas con el virus de control. Las células CD34+ derivadas de . CB con una expresión reducida del receptor de hidrocarburo de arilo exhibieron un fenotipo similar a las células tratadas con el Ejemplo 1 con una expresión sostenida de CD34+. Estos datos muestran que la inhibición de la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo mediante un compuesto de la invención es suficiente para promover la expansión ex-vivo de las células madre hematopoiéticas.
Método para expandir las células madre hematopoiéticas a partir de sangre neonatal de cordón umbilical humano El medio de cultivo utilizado es StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat. #09650) complementado con las siguientes citoquinas humanas recombinantes: TPO, IL6, ligando de Flt3, y SCF, cada uno en una concentración final de 50 nanogramos/ mililitro. El medio de cultivo se prepara fresco el día de su uso.
Dil ución del compuesto en el medio: Se utiliza un concentrado de 1 0,000x de un compuesto de ia invención para las diluciones . La adición del compuesto al medio de cultivo ocurre en dos pasos. El primer paso es una dilución de 1:100 (10 microlitros de concentrado 10,000x en 990 microlitros del medio de cultivo completo (que contiene citoquinas) en un tubo Eppendorf de 1.5 mililitros [USA Scientific, Cat #1615-5500]) para generar una solución 100x del compuesto en el medio de cultivo. El segundo paso es una dilución de 1:100 en el medio de cultivo, que se utilizará para iniciar el cultivo celular. El volumen del cultivo es variable dependiendo del número de células CD34+ de sangre de cordón (CB) introducidas. Por ejemplo, se siembran 1x106 células CD34+ de sangre de cordón en 20 mililitros del medio (5x104 células/mililitro). En este caso, se agregan 200 microlitros de la solución del Ejemplo 1 100x a los 20 mililitros del medio, en un tubo cónico de 50 mililitros (Becton Dickinson, Cat #352098) para alcanzar la concentración final (véase la Tabla 3).
Inicio de cultivo celular: Se utilizan células CD34+ de sangre de cordón humano purificadas para los experimentos de expansión ex vivo. Después de la descongelación, la viabilidad celular, probada mediante exclusión de azul de tripano, es mayor del 50 por ciento. Las células descongeladas se diluyen 5 veces con el medio de cultivo (sin citoquinas ni compuestos de la invención, tal como el Ejemplo 1), y se centrifugan a 300 g a 25°C durante 8 minutos. Después de aspirar el sobrenadante, el gránulo se vuelve a suspender con el volumen apropiado de medio de cultivo (5 x 104 células/mililitro, Tabla 3) antes de inyectarse (aguja calibre 22, Air-Tite Products; jeringa de 20 mililitros, BD cat # 309661) en bolsas de AFC (Tabla 5) para su cultivo inmediato. Las células se cultivan a 37°C en C02 al 5 por ciento.
Adición del medio al cultivo cel ular: Para volúmenes del medio de hasta 80 mililitros, se emplea el procedimiento anterior (dilución del compuesto en el medio) . Para volúmenes del medio mayores de 80 mililitros, la primera dilución a 1 :1 00 se lleva a cabo en tubos cónicos de 1 0 mililitros (Corning, Cat #430052, Tabla 4) . El segundo paso es una dilución a 1 :1 00 en el medio de cultivo, en recipientes estériles (BD Falcon , Cat #35401 5) , la cual se agrega a la bolsa de AFC (aguja calibre 22, Air-Tite Products; jeringa de 60 mililitros, BD cat # 309653) .
Tabla 3 Di luciones del Ejemplo 1 para la expansión de las células CD34+ de partida derivadas de sangre de cordón Número de Volumen Volumen Volumen del Volumen del células CD34+ inicial del del Ejemplo 1 Ejemplo 1 derivadas de medio de Ejemplo 1 10,000x 100x para sangre de cultivo 100? (µ1_) necesario preparar (mL) cordón (x 106) (mL) necesario (ML) 0.25 5 50 1 1 0 0.50 1 0 100 1 1 0 Número de Volumen Volumen Volumen del Volumen del células CD34+ inicial del del Ejemplo 1 Ejemplo 1 derivadas de medio de Ejemplo 1 10,000x 10Ox para sangre de cultivo 100X(ML) necesario preparar (mL) cordón (x 106) (mL) necesario (ML) 0.75 15 150 1 10 1.00 20 200 1 10 1.25 25 250 1 10 1.50 30 300 1 10 1.75 35 350 1 10 2.00 40 400 1 10 2.50 50 500 1 10 3.00 60 600 1 10 4.00 80 800 1 10 Tabla 4 Diluciones del Ejemplo 1 en el medio de adición para la expansión de la células CD34+ derivadas de sangre de cordón Volumen Volumen del Volumen del Volumen del del medio Ejemplo 1 Ejemplo 1 Ejemplo 1 a agregar 100x (pL) 1 OOx para 10,000x (mL) necesario preparar (mL) necesario ( L) 10.00 100 10 20.00 200 10 30.00 300 10 40.00 400 10 50.00 500 10 60.00 600 10 70.00 700 10 80.00 800 10 100.00 1,000 5 50 120.00 1 ,200 5 50 160.00 1,600 5 50 Volumen Volumen del Volumen del Volumen del del medio Ejemplo 1 Ejemplo 1 Ejemplo 1 a agregar 100x (µ?) 100x para 10,000x (mL) necesario preparar (mL) necesario (µ?_) 250.00 2,500 5 50 500.00 5,000 10 100 750.00 7,500 10 100 1 ,000.00 10,000 10 100 Tabla 5 Restricciones de volumen para las bolsas de American Fluoroseal Corporation Número de Volumen para una Volumen máximo de catálogo de expansión óptima la bolsa bolsa de AFC (mL) (mL) 1PF-0007 7 7 2PF-0032 32 32 2PF-0072 71 130 2PF-0118 118 245 Número de Volumen para una Volumen máximo de catálogo de expansión óptima la bolsa bolsa de AFC (mL) (mL) 2PF-0197 179 580 2PF-0225 225 665 2PF-0270 270 960 2PF-750C 750 Se puede emplear el mismo protocolo empezando a partir de células de sangre periférica movilizada de un paciente para trasplante de injerto autólogo.
También se puede preparar una composición que comprenda una población de las células con células madre hematopoiéticas expandidas apropiadas para administración intravenosa como una infusión. Para preparar las células para infusión, las células cultivadas se granulan mediante centrifugación durante 10 minutos a 300 g, y se vuelven a suspender en el regulador de infusión, el cual consiste en albúmina de suero humano al 5 por ciento (Baxter) en una concentración de entre 106 y 1 O8 células/mililitro.
Se entiende que los Ejemplos y las modalidades descritas en la presente son para propósitos ilustrativos solamente, y que se sugerirán diferentes modificaciones o cambios a la luz de las mismas para las personas expertas en la técnica, y que se deben incluir dentro del espíritu y alcance de esta solicitud, y en el alcance de las reivi ndicaciones adjuntas . Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en la presente se incorporan a la presente por referencia para todos los propósitos.

Claims (48)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de la fórmula I: I en donde: Gi se selecciona a partir de N y CR3; G2, G3 y G4 se seleccionan independientemente a partir de CH y N; con la condición de que cuando menos uno de G3 y G4 es N; con la condición de que G-i y G2 no son ambos N; L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)0-3-, -NR5aCH (C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b-, -NR5a(CH2)2S- — R5aCH2 CH(CH3)CH2-, -NR5aCH2CH(OH)- y -NR5aCH(CH3)CH2-; en donde Rea y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R-? se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofenilo, furanilo, 1 H-benzo-imidazoiilo, isoquinolinilo, 1 H-imidazo-piridinilo, benzo-tiofenilo, pirimidinilo, 1 H-pirazolilo, piridinilo, 1 H-imidazol¡lo, pirrolidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1 H-pirrolilo y tiazolilo; en donde estos fenilo, tiofenilo, furanilo, 1 H-benzo-imidazolilo, isoquinolinilo, 1 H-imidazo-piridinilo, benzo-tiofenilo, pirimidinilo, 1 H-pirazolilo, piridinilo, 1 H-imidazolilo, pirrolidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1H- pirrolilo o tiazolüo de F¡ 1 pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, hidroxilo, amino, -C(0) R8a, — S(0)o-2 Rea. -C(0)OR8a y — C(0) N R8a R8b ; en donde R8a y sb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; con la condición de que R-, y R3 no son ambos hidrógeno; R2 se selecciona a partir de -S(0)2N R6aReb, -N R9aC (0) R9b, -N R6aC(0) N R6b R6c> fenilo , 1 H-pirrolo-piridin-3-ilo, 1 H-indolilo, tiofenilo, piridinilo, 1 H-1 ,2,4-triazolilo, 2-oxo-imidazolidinilo, 1 H-pirazolilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-imidazolilo y 1 H-indazolilo; en donde R6a, R6b y 6c se seleccionan independientemente a parti r de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde estos fenilo , 1 H-pirrolo-piridin-3-ilo, 1 H-indolilo, tiofenilo, piridinilo, 1 H-1 ,2,4-triazolilo , 2-oxo-imidazolidi nilo, 1 H-pirazolilo , 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-imidazolilo o 1 H-indazoiilo de R2 están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a parti r de hidroxilo, halógeno, metilo, metoxilo, amino, -0(CH2)nN R7aR7b, -S(0)2N R7aR7b, -OS(0)2N R7aR7b y -N R7aS(0)2R7b; en donde R7a y R7b se seleccionan independi entemente a parti r de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y bifenilo; y R4 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 1 0 átomos de carbono , prop- 1 -en-2-ilo, ciclohexilo, ciclopropilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-pi ran-3-ilo, tetrahidro-2H-pi ran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, bencilo , (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo y 1 - (1 -(2-oxo-6,9 , 12-trioxa-3-aza-tetra-decan-1 4-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)-etilo; en donde estos alquilo, ciclopropilo, ciclohexilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-eti!o, oxetan-3-ilo, oxetan-2-i!o, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, tetrahidro-2H-piran-3-ilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrofuran-2-ilo, bencilo, (4-pentil-fenil)-(fenil)-metilo, o 1 -(1 -(2-oxo-6,9, 1 2-trioxa-3-aza-tetradecan-14-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-iI)-etilo pueden estar opcional mente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a parti r de hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno; o una sal del mismo.
2. El compuesto de la reivindicación 1 , seleccionado a partir de las fórmulas la, Ib, le, Id y le: en donde: L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)0-3-, -NR5aCH (C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b-, —N R5a(CH2)2S— , — R5aCH2 CH(CH3)CH2-, -NR5aCH2CH(OH)- y -N R5aCH(CH3)CH2-; en donde Rea y sb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-1-ilo, isoquinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, 1 H-pirazoI-4-ilo, piridin-2-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-imidazol-1-ilo, pirrolidin-1 -ilo, pirazin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirrol-2-iIo y tiazol-5-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-1 -ilo, isoquinolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, piridinil-2-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-imidazol- -ilo, pirrolidin-1 -ilo, pirazin- 2-¡ lo, plridinil-3-ilo, piridazin-4-¡lo, 1 H-pirrol-2-ilo o tiazol-5-ilo de R^ pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hidroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -S(O)0-2FÍ8a y -C(0)OR8a; en donde R8a y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; con la condición de que R^ y R3 no son ambos hidrógeno; R2 se selecciona a partir de -NR6aC(0)NR6bR6c, fenilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-3-ilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo y 1H-indazol-3-ilo; en donde R6a, R6b y e, se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde estos fenilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-3-ilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-pirid¡n-5-iIo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1-iIo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo o 1 H-indazol-3-ilo de R2 están opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de hidroxilo, halógeno, metoxilo, amino, -OS(0)2NR7aR7b y -NR7aS(0)2R7b; en donde R7a y R7b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y bifenilo; y R4 se selecciona a partir de isopropilo, metilo, etilo, prop-1 -en-2-ilo, isobutilo, ciclohexilo, butilo secu ndario, (S)-butilo secundario, (R)-butilo secundario, 1 -hidroxi-propan-2-ilo, (S)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, (R)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, nonan-2-ilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-iio, benzhidrilo, tetrahidro-2H-pi ran-2-iIo, fenilo, tetrahid rofuran-3-ilo y bencilo ; en donde estos ciclohexilo, 2-(2-oxo-pi rrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzh idrilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilo, fenilo, tetrahidro-furan-3-ilo o bencilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno.
3. Los compuestos de la reivi ndicación 2, en donde L se selecciona a parti r de -NR5a(CH2)o.3-, -N R5aCH (C(0)OCH3)CH2-, -N R5a(CH2)2N R5b-, -NR5a(CH2)2S-, -N R5aCH2CH (CH3)CH2- -N R5a CH (CH3) CH2- y -N R5aCH2CH (OH)-; en donde R5a y R5b se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y metilo; y se selecciona a partir de hidrógeno, fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-1 -ilo, isoqui nolin-4-ilo, 1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pi rimidin-5-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, pi ridin-2-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-ímidazol- -ilo, pirrolidin-1 -ilo, pi razin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirrol-2- ¡lo y tiazol-5-ilo; en donde estos fenilo, tiofen-2-ilo, tiofen-3-ilo, furan-3-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-1 -ilo, isoquinolin-4-ilo, 1H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 -ilo, benzo-[b]-tiofen-3-ilo, pirimidin-5-ilo, piridinil-2-ilo, piridln-4-ilo, 1 H-imidazol-1 -ilo, pirrolidin-1 -ilo, pirazin-2-ilo, piridinil-3-ilo, piridazin-4-ilo, 1 H-pirrol-2-ilo o tiazol-5-ilo de Ri pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a partir de ciano, hídroxilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -S(O)0-2Rsa y -C(0)OR8a; en donde R8a y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; con la condición de que R y R3 no son ambos hidrógeno.
4. Los compuestos de la reivindicación 3, en donde L se selecciona a partir de -NR5a(CH2)i-3-, -NR5aCH(C(0)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NRSb- -NR5a(CH2)2S-, -NR5aCH2CH(CH3)CH2-, -NR5a CH(CH3)CH2- y -NR5aCH2CH(OH)-; en donde R5a y Rsb se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y metilo.
5. El compuesto de la reivindicación 4, en donde R2 se selecciona a partir de urea, fenilo, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piperidin-1 -ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazoi-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin-1 -ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo, 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo y 1 H-imidazol-4-ilo; en donde estos fenilo, 1 H-indol-2-ilo, 1 H-indol-3-ilo, tiofen-3-ilo, piperidin-1 -??, piridin-2-ilo , piridin-3-ilo, pi ridin-4-ilo, 1 1-1-1 ,2,4-triazol-3-iIo, 1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, 2-oxo-imidazolidin- 1 -ilo, 1 H-pirazol-3-??, 1 H-p¡ razol-4-¡lo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo-[d]-im¡dazol-5-ilo o 1 H-benzo-[d]-imidazol-5-ilo de R2 están opcionalmente sustituidos con hidroxilo, metoxilo , metilo, halógeno, amino y amino-sulfonilo.
6. El compuesto de la reivindicación 5, en donde R3 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo y bifenilo; y R4 se selecciona a parti r de isopropilo, metilo, etilo, prop-1 -en-2-ilo, isobutilo, ciclohexilo , butilo secu ndario, (S)-butilo secundario, (R)-butilo secundario, -hidroxi-propan-2-ilo, (S)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, (R)-1 -hidroxi-propan-2-ilo, nonan-2-ilo, 2-(2-oxo-pi rrolidin-1 -i I) -etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo y bencilo; en donde estos ciclohexilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo, oxetan-3-ilo, oxetan-2-ilo, benzhidrilo, tetrahidro-2H-pi ran-4-ilo, fenilo, tetrahidrofuran-3-ilo o bencilo pueden estar opcíonal mente sustitu idos con 1 a 3 radicales seleccionados independientemente a parti r de metilo y trifluoro-metilo.
7. El compuesto de la reivindicación 6 , seleccionado a partir de: 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-¡l-amino)-etii)-fenol ; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo-[b]-t¡ofen-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetra-hidro-2H-piran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-eti l) -fenol; 4-(2-(9-isop ropil- 2- (tiofen-2-il)-9H-punn-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(4-(trifluoro-metil)-bencil)-9H-pur¡n-6-¡l-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isobutil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-M)-9-metil-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(4-metil-bencil)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(b8nzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropi l-9H-pu rin-6-amina; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-N-(2-(tiofen-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-pu rin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-(benzo-[b]-†iofen-3-iI)-N -(4-fluoro-fenetil)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; N-(4-ami no-fenetil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-i l)-9-isopropil-9H-pu rin-6-amina; 4-(2-(9-isopropil-2-(pi rimidin-5-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol ; 4-(2-(9-isopropil-2-feniI-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(tiofen-3-iI)-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-et¡I)-fenol ; 4-(2-(2-(furan-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol ; 2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-N-(4-fluoro-fenetil)-9-fenil-9H-purin-6-amina; N-bencil-8-(bifeni l-4-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen- 3- il)-9-(nonan-2-il)-9H-pu rin-6-il-amino)-etil)-fenol; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-sec-butil-9H-purin-6-amina; 5- ((3aS ,4S ,6aR)-2-oxo-hexahidro-1 H-tieno-[3,4-d]-imidazol-4-il)-pentanoato de 3-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-isopropil-9H-purln-6-il-amino)-etil)-1 H-indol-5-ilo; N-(2-(2-(2-(2-(4-(1 -(2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-6-(4-hidroxi-fenetll-amino)-9H-pu ri n-9-ll)-etil)-1 H-1 ,2,3-triazol- -il)-etoxi)-etoxi)-etoxi)-etll)-acetamida; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-4- il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l) -fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetiI-amino)-9-isoprop¡l-9H-purin-2-il)-nícotínato de etilo; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isoprop¡l-9H-pur¡n-2-il)-nicotinato de etilo; 4-(2-(2-(6-fluoro-piridin-3-¡l)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenoI; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(4-metil-piridin-3-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etiI)-fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-n¡cotinon¡trilo; 4-(2-(9-isopropiI-2-(pirrolidin-1 -il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-fenol; 4- (2-(2-(1 H-imidazol-1 -il)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-¡l-am¡no)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridaz¡n-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l)-fenol; 4- (2- (9-¡sopropil-2-(piraz¡n-2-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-¡so-p ro p¡ I -2 - (pi rid i n -2-¡ I ) -9 H -p u ri n -6- i l-am i n o) -etil) -fenol; 4-(2-(9-iso-prop¡l-2-(5-(metil-sulfon¡l)-p¡ridin-3-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-¡soprop¡l-2-(5-metil-pir¡din-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-et¡I)-fenol; 4-(2-(2-(4-cloro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-¡l-a mi no) -etil) -fenol; 4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-9 H-purin-6-il-amino) -etil) -fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-2-metoxi-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il ) -9H-purin-6-i l-am i no)-et¡l)-2-metox¡ -fenol; N-[2-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-[2-(5-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-iI)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-imidazolidin-2-ona; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-piridin-2-amina; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-pirazol-4-il)-propil]-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-{2-[(3-metil- 1H-1 ,2,4-triazol-5-il)-sulfanil]-etil}-9-(propan-2-il)-2-(p¡ridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1 -(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-¡l)-9H-purin-6-il]-amino}-etil)-imidazolidin-2-ona; N-[2-(5-amino-1 H-1 ,2,4-triazol-3-il)-et¡l]-2-(1 -benzo-t¡ofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-{[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9~(propan-2-il)-9H-purln-6-¡!]-amino}-etil)-plridin-2-amina; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1 H-pirazol-4-¡l)-propil]-9H-purin-6-amina; 2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1 H-pirazo!-4-il)-propil]-9-(propan-2-il)-9H-pur¡n-6-amina; (2-{[2-(1-benzo-t¡ofen-3-¡l)-9-(propan-2-il)-9H-pur¡n-6-ii]-am¡no}-eti))-urea; 5-({[2-(1 -benzo-tiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-pur¡n-6-il]-amino}-metil)-2,3-dihidro-1 H-1 ,3-benzo-diazol-2-ona; N-[2-(1 H-indol-3-¡l)-etil]-9-(propan-2-il)-2-(pir¡din-3-¡l)-9H-purin-6-amina; N-(4-(2-(9-¡soprop¡l-2-(pirid¡n-3-¡l)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fen¡l)-metan-sulfonamida; 4-(2-(2-(piridin-3-¡I)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(p¡rid¡n-3-il)-9H-pur¡n-6-¡l-ami no) -propil) -fenol; 4-(2-(9-(oxetan-3-il)-2-(pirid¡n-3-¡I)-9H-purin-6-il-amino)-et¡l) -fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-¡l)-N-metil-n¡cotinam¡da; 4-(2-(9-(1 -hidroxi-propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-¡l-amino)-etil)-fenol; sulfamaío de 4-(2-(9-¡sopropll-2-(p¡r¡din-3-il)-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-et¡l)-feniio; 4-(2-(2-(2-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-am'ino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(1 - metí 1-1 H- irrol-2-il)-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-¡sopropil-2-(tiazol-5-il)-9H-purln-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(1 H-benzo-[d]-imidazol-1 -il)-9-¡sopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(2,4-dlmetil-1 H-imidazol- -il)-9-isopropil-9H-purin-6-il- amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(2-metil-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-fenol; 5-(9-sec-butil-6-(4-hidroxi-3-metil-fenetil-amino)-9H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; N-(2-(1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-il)-etiI)-9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 9-isopropil-N-(2-(5-metil-1 H-pirazoi-3-il)-etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(5-cloro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-¡I-am¡no)-etiI)-fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(5-(trifluoro-metiI)-piridin-3-ii)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 5-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-9-sec-butil-9H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butiI-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-fluoro-piridin-3-ii)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-piridin-3-ii)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(5-metil-piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-2-il)-nicotinonitrilo; 4-(2-(6-(5-fluoro-piridin-3-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidin-4-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(6-(benzo-[b]-tiofen-3-il)- -isopropil-1 H-pirazolo-[3,4-d]-pirimidin-4-il-amino)-etil)-fenol; (R)-4-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopropiI-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etii)-3-metil-fenol; 5-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2-il)-picolinonitrilo; 3-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isopropil-9H-purin-2- il)-ison¡cotinonitrilo; 4-(2-(2-(5-fluoro-pirid¡n-3-il)-7-isopropil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il-am ¡no) -etil) -fenol; 3-(6-(4-hidroxi-fenetil-amino)-9-isoprop¡l-9H-pur¡n-2-il)-picolinon¡tr¡lo; 4-(2-(9-isopropil-2-(6-met¡l-píridin-3-il) -9 H-pur¡n-6-¡l-amino) -etil) -fenol; 4-(2-(9-isopropil-2-(¡soquinol¡n-4-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-cloro-4-(2-(9-isopropil-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purln-6-ll-am¡no)-et¡l)-fenol; 3-fluoro-4-(2-(9-¡sopropil-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-il-ami no) -etil) -fenol; N-(2-(5-cloro-1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropll-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(5-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(pirid¡n-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-isopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-2-metil-fenol; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; (S)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; (R)-4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1-ol; (R)-2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1-ol; (S)-2-(6-(2-(1 H-indol-3-il)-etil-amino)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9H-purin-9-il)-propan-1 -ol; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(tetrahidro-furan-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(3H-imidazo-[4,5-b]-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(1 H-imidazo-[4,5-b]-piridin-1 - il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil) -fenol; 4-(2-(6-(5-fluoro-piridin-3-il)-1 -isopropil-1 H-imidazo-[4,5-c]-piridin-4-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(2-(4,5-dimetil-1 H-imidazol-1 -il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2- (piridin-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fl uoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-1 -hidroxi-etil)-fenol; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(5-metoxi-1 H-indol-3-il)-etil)-9 H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(prop-1 -en-2-il)-9H-purin-6-amina; 5-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-piridin-2-ol; N-(2-(1 H-pirro!o-[2,3-b]-piridin-3-i))-eti!)-2-(5-fl uoro-piridin-3-ii)-9-iso-propi!-9H-pu rin-6-amina; N-(2-(6-(2-(dietil-amino)-etoxi)-1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopro'pil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoro-piridin-3-il)-3-isopropil-3H-imidazo-[4,5-b]-pi ridin-7-il-amino)-etil)-fenol; N-(2-(1 H-indoI-3-il)-etil)-9-sec-butil-2-(2-metil-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(2-etil-1 H-imidazol-1 -il)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-il-am¡no)-etil) -fenol ; 4-(2-(9-isopropiI-2-(2-propiI-1 H-imidazol-1 -il)-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 3-(2-(2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-eti))-1 H-indol-6-ol; N -(2-( 1 H-indol-3-il)-etil)-9-isopropil-2-(5-meti]-pi ridin-3-il)-9H-pu rin-6-ami na; N-(2-(1 H-indol-3-il)-eti l)-9-isopropil-2-(2-metiI-1 H-imidazol-1 -i l)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-pi ridin-3-il)-9-isopropil-N-(2-(7-metil-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1 H-indol-3~il)-etil)-2-(5-metil-piridin-3-il)-9-(oxetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(6-fluoro- 1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-isopropil-N-(2- (6-met¡l-1 H-indol-3-il)-et¡l)-9H-pur¡n-6-amina; 2-(5-fluoro-piridin~3-il)-9-¡sopropil-N-(2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1 H-¡ndol-3-¡l)-et¡l)-2-(5-fluoro-p¡ridin-3-¡l)-9-isopropil-9H-pur¡n-6-am¡ na; N-(2-(7-fluoro-1 H-indol-3-il)-etil)-2-(5-fluoro-p¡ridin-3-¡l)-9-isoprop¡l-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoro-piridin-3-il)-9-¡soprop¡l-N-(2-(4-metil-1 H-indol-3-¡l)-etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-7-isopropil-7H-pi rrolo-[2,3-d]-pi r¡m¡din-4-il-amino)-et¡l)-fenol ; 9-isopropil-2-(pi ridin-3-¡l)-N-(2-(piridin-4-¡l)-etil)-9H-pur¡n-6-amina; N-(2-( 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-¡l)-et¡l)-9-isopropil-2-(pir¡din-3-il)-9H-purin-6-am¡na; 4-(2-(2-(5-fluoro-pir¡din-3-il)-9-(1 -hidroxi-propan-2-il)-9H-purin-6-¡ l-am¡no)-et¡l)-2-met¡l-fenol ; 4- (2- (2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)-9-ciclohexil-9H-purin-6-il-amino)-etil)-fenol; 4-(2-(9-isopro~pil-2-(tiofen-3-il)-9H-pu rin-6-il-am¡no)-et¡i)-fenol; y 1 -(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-iI)-6-(4-hidroxi-fenetil-ami no)-9H-purin-9-¡l)-etil)-pirrolidin-2-ona; o una sal de los mismos.
8. Un método para aumentar el número de células madre y progenltoras; comprendiendo este método poner en contacto las células madre con un agente capaz de antagonizar la actividad y/o la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo.
9. El método de la reivindicación 8 , en donde este agente capaz de antagonizar la actividad y/o la expresión del receptor de hidrocarburo de ari lo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo, se selecciona a parti r de: (i) un compuesto orgánico, (ii) una molécula de ARN de interferencia pequeño que inhibe la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo, y (iii) un oligonucleótido anti-sentido que inhibe la expresión del receptor de hidrocarburo de ari lo.
1 0. El método de la reivindicación 8, en donde este agente capaz de antagonizar la actividad y/o expresión del receptor de hidrocarburo de arilo es un compuesto de la reivindicación 1 .
1 1 . El método de la reivindicación 8 , en donde el método se lleva a cabo in vivo, in vitro o ex vivo.
1 2. El método de la reivindicación 1 1 , en donde las células madre son humanas.
1 3. El método de la reivindicación 1 2, en donde las células madre se derivan a partir de médula ósea.
1 4. El método de la reivindicación 1 2, en donde las células madre se derivan a partir de sangre de cordón umbilical.
1 5. Los métodos de la reivindicación 1 3 ó 14, en donde las células madre son células madre hematopoiéticas.
1 6. U n método para expandir las células madre hematopoiéticas, el cual comprende: (a) proporcionar una población cel ular de partida que comprenda células madre hematopoiéticas, y (b) cultivar esta población celular de partida ex vivo en la presencia de un agente capaz de antagonizar la actividad y/o la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo, bajo condiciones adecuadas para expandir las células madre hematopoiéticas.
1 7. El método de la reivindicación 1 6, en donde este agente capaz de sub-regular la actividad del receptor de hidrocarbu ro de arilo se selecciona a partir de: (i) un compuesto orgánico, (ii) una molécula de ARN de interferencia pequeño que inhibe la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo, y (iii) un oligonucleótido anti-sentido que inhibe la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo.
1 8. El método de la reivindicación 17, en donde el compuesto orgánico mencionado es el 4-(2-(2-(benzo-[b]-tiofen-3-il)- 9-isopropil-9H-purin-6-il-amino)-etiI)-fenol.
1 9. El método de la reivindicación 1 6, en donde un efector corriente abajo de la senda del receptor de hidrocarburo de arilo se selecciona a partir de Cyp1 B 1 , Cyp1 A1 , Beta-catenina, AHRR, STAT5 y STAT1 .
20. El método de la reivindicación 1 6, en donde el agente capaz de sub-regular la actividad del receptor de hidrocarburo de arilo mencionado es un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
21 . El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde la población celul ar de partida mencionada está enriquecida en células CD34+.
22. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde la población cel ular de partida mencionada se deriva a parti r de cél ulas de sangre de cordón umbilical.
23. El método de la reivindicación 1 6 ó 18, en donde la población celular de partida mencionada se deriva a partir de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , de preferencia una unidad de sangre de cordón umbi lical .
24. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde la población celular de partida mencionada se deriva a partir de cél ulas de sangre periférica movi lizada.
25. El método de la reivindicación 24, en donde las células de sangre periférica movilizada se obtienen a partir de un solo sujeto mam ífero.
26. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde esta población celular de partida esencialmente consiste en las células CD34+ purificadas a parti r de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , de preferencia una unidad de sangre de cordón umbilical .
27. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde esta población celular de partida esencialmente consiste en las células CD34+ purificadas a parti r de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , utilizando columnas de cromatografía de afinidad o perlas magnéticas, que comprenden fragmentos de anticuerpos de enlace de antígeno CD34.
28. El método de la reivindicación 16 ó 1 8, en donde las condiciones para la expansión de las cél ulas mad re hematopoiéticas mencionadas incluyen cultivar esta población celular de partida en la presencia de una cantidad suficiente de I L6, Flt3-L, TPO y SCF, y un compuesto de la reivindicación 1 .
29. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde el compuesto mencionado de la reivindicación 1 se administra en el medio de cultivo celular en u na concentración de entre 1 pM y 1 0 µ?, por ejemplo de entre 1 0 pM y 1 00 µ? .
30. El método de la reivindicación 1 6 ó 1 8, en donde la población celular de partida mencionada consiste esencialmente en las células CD34+ purificadas a partir de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical, de preferencia una unidad de sangre de cordón umbilical, y esta población celular de partida se cultiva en la presencia de un compuesto de la reivindicación 1 du rante aproximadamente 3 días a aproximadamente 90 d ías, de preferencia entre 7 y 35 días.
31 . El método de la reivindicación 16 ó 1 8, en donde la población celular de partida mencionada se cultiva en la presencia de un compuesto de la reivindicación 1 , durante un tiempo suficiente para una expansión de las células CD34+ de 10 a 50,000 veces.
32. U n kit para expandir las células madre hematopoiéticas, el cual com prende un compuesto de la reivindicación 1 , e instrucciones para uti lizarse en un método de la reivindicación 1 6 y, opcionalmente, uno o más de los siguientes: citoquinas, factores de crecimiento, y medio de cultivo celular.
33. El kit de acuerdo con la reivindicación 32, en donde la una o más citoq uinas o factores de crecimiento se seleccionan a partir del grupo que consiste en IL6, Flt3-L, SCF y TPO.
34. U na población celular con células mad re hematopoiéticas expandidas , las cuales se pueden obtener, o como se obtienen, mediante el método de la reivindicación 1 6 ó 1 8.
35. U na composición que comprende la población celular de la reivindicación 34 re-suspendida en un medio farmacéuticamente aceptable adecuado para su administración a u n huésped mamífero.
36. U na composición que comprende una población celular con células madre hematopoiéticas expandidas derivadas a partir de una o dos unidades de sangre de cordón umbilical , de preferencia una unidad de sangre de cordón umbilical, en donde esta composición contiene una cantidad total de cél ulas de cuando menos 1 05 células, 1 07 células , 1 08 células o 1 09 células , y en donde entre el 20 y el 100 por ciento de las células totales son cél ulas CD34+.
37. La composición de la reivindicación 36, en donde esta composición contiene entre el 0.1 por ciento y el 40 por ciento de las células totales que expresan marcadores de CD34 y Thy1 ; del 20 al 80 por ciento de las células totales que expresan marcadores de CD34 y CD45RA; del 1 0 al 95 por ciento de células que son CD38+; y del 5 al 70 por ciento de células que son CD1 33+.
38. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 35 a 37, para utilizarse en el trasplante hematopoiético alogénico de células madre en un sujeto mam ífero.
39. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 35 a 37, para el tratamiento de un paciente que sufra de una hematopoiesis deteriorada.
40. La composición de la reivindicación 39, en donde el paciente sufre de una enfermedad de inmunodeficiencia heredada, un trastorno autoinmune, o un trastorno hematopoiético.
41 . La composición de la reivindicación 40 , en donde el trastorno hematopoiético mencionado se selecciona a partir de leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocítica crónica, trastornos mieloproliferativos, s índromes mielodisplásicos, mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, anemia anaplásica, aplasia de glóbulos rojos pu ros, hemoglobinuria paroxística nocturna, anem ia de Fanconi , talasemia mayor, anemia drepanocítica, inmunodeficiencia combi nada grave, síndrome de Wiskott-Aldrich , li nfohistiocitosis hemofagocítica, y errores innatos del m etabolismo.
42. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 35 a 37, en donde esta composición es apropiada para infusión intravenosa, y esta composición comprende cuando menos 1 04 células / kilogramo transfu ndidas en el paciente, de preferencia entre 1 05 cél ulas / kilogramo y 1 09 células / kilogramo .
43. U n método para el tratamiento de u na enfermedad de inmunodeficiencia heredada, una enfermedad autoinmune, y/o un trastorno hematopoiético , el cual comprende administrar a un paciente que necesite dicho tratamiento , células madre hematopoiéticas expandidas po r un agente capaz de sub-regular la actividad y/o la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo y/o un efector corriente abajo de la senda del receptor de hid rocarburo de arilo.
44. El método de la reivindicación 43, en donde el agente capaz de sub-regular la actividad y/o la expresión del receptor de hidrocarburo de arilo mencionado es un compuesto de la reivindicación 1 .
45. El método de la reivindicación 43, en donde la administración es un trasplante autólogo, y el trastorno hematopoiético se selecciona a partir de mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, leucemia mieloide aguda, neuroblastoma, tumores de células germinales, trastornos autoi nmunes, y amiloidosis.
46. El método de la reivindicación 45, en donde los trastornos autoi nmunes se seleccionan a parti r de lupus eritematoso sistémico y esclerosis sistémica.
47. El método de la reivindicación 46, en donde la administración es un trasplante alogénico, y el trastorno hematopoiético se selecciona a partir de leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia li nfocítica crónica, trastornos mieloproliferativos, síndromes mielodisplásicos, mieloma m últiple, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, anemia anaplásica, aplasia de glóbulos rojos puros , hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia de Fanconi , talasemia mayor, anemia drepanocítica, inmunodeficiencia combinada grave, síndrome de Wiskott-Aldrich, linfohistiocitosis hemofagocítica, y errores innatos del metabolismo.
48. El método de la reivindicación 47, en donde los errores innatos del metabolismo se seleccionan a partir de mucopolisacaridosís, enfermedad de Gaucher, leucodistrofias metacromáíicas, y adrenoleucodistrofias.
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