KR20090021217A - 조혈 줄기세포 증가 촉진제 - Google Patents

Abstract

본 발명자들은, TPO 수용체에 대한 저분자화 아고니스트 항체(VB22B sc(Fv)2)의 투여에 의해, 인간 거핵구 특이적 분화유도(혈소판 전구세포의 증가)에 더하여, 인간 제대혈 유래의 혈액 줄기세포(CD34 양성세포)의 생착, 및 멀티리니지(multi-lineage) 혈액 전구세포의 유의한 증가를 발견하였다. TPO 또는 TPO 수용체 아고니스트는, 조혈 줄기세포 이식(특히 제대혈 이식) 후에 단독 투여(G-CSF나 erythropoietin의 병용 없이)하는 것만으로 효과를 기대할 수 있는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 촉진제 또는 골수에서의 생착 촉진제로서 사용할 수 있다. 또한, 멀티리니지 조혈 전구세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 및 멀티리니지 조혈능 회복 촉진제로서 사용할 수 있다.

Description

조혈 줄기세포 증가 촉진제{Hematopoietic stem cell proliferation promoter}

본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈 줄기세포 증식 촉진제에 관한 것이다. 또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 촉진제, 및 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진제에 관한 것이다.

트롬보포이에틴(Thrombopoietin:TPO)은, 거핵구계의 조혈세포의 증식과 분화를 촉진하는 사이토카인으로, 거핵구 콜로니 자극인자(Megakaryocyte colony-stimulating factor) 또는 c-mpl의 리간드로서 알려져 있다. 사이토카인 수용체의 대부분은, 리간드의 결합에 의해 수용체끼리 2량체화되어, 시그날이 세포내로 전달된다. TPO에 있어서도, 그 특이적 리셉터인 c-mpl과 결합하여, 수용체를 2량체화함으로써, 세포내로 정보를 전달하고, 생리작용을 나타내는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1 참조).

이러한 성질을 갖는 수용체에 결합하는 항체 중에서, 아고니스트 활성을 나타내는 항체가 존재하는 것이 보고되어 있다. 예를 들면, 에리스로포이에틴(EPO) 수용체에 대한 항체가 에리스로포이에틴 기능을 대체하는 것이 보고되어 있어, 이 항체를 1가(Fab)로 하면 EPO 수용체로의 결합능을 유지한채로, 시그날 전달능을 상실하기 때문에, 2가의 결합에 의한 에리스로포이에틴 수용체의 이량체 형성이 필요할 것으로 생각되고 있다(비특허문헌 2 참조).

마찬가지로, c-mpl에 결합하는 TPO 수용체 아고니스트 활성을 갖는 항체도 보고되어 있어(비특허문헌 3~4, 특허문헌 1~3 참조), 이러한 항체를 이용한 조혈 줄기세포의 증식을 촉진시키는 시도도 행해지고 있다.

예를 들면, 인간 제대혈 세포(CD34 양성세포)를 이식한 NOD/SCID 마우스에 TPO를 1회 투여하고, 제대혈 세포의 증식을 검토한 실험예의 보고가 있다(비특허문헌 5 참조). 그러나 이 보고에 따르면, CD34 양성세포의 생착 증강은 확인되고 있지 않다.

또한, 제대혈 이식 모델 마우스에 TPO 이외의 TPO 수용체 아고니스트(PEG-rHuMGDF)를 투여한 보고도 있다(비특허문헌 6 참조). 그러나, 상기 문헌에는 혈소판 회복 촉진작용에 대한 보고가 있을 뿐으로, CD34 양성세포의 골수로의 생착에 대한 작용에 관해서는 일절 보고되어 있지 않다.

또한, NOG 마우스(NOD/SCID 마우스보다, 더욱 면역부전도가 높은 마우스임)에 인간 제대혈 세포를 이식하고, 이식 후 2-6개월 후부터 c-mpl 아고니스트를 투여한 실험이 보고되어 있다(비특허문헌 7 참조). 그러나 상기 문헌에 따르면, 골수에서의 CD34 양성세포의 증가는 확인되지 않았다.

또한, 실제로 환자 1명에 대해, 인간 제대혈 이식 후에 TPO, G-CSF 및 EPO의 3약제를 동시에 투여함으로써, 혈구 회복의 조속화가 가능하였다는 보고가 있다. 그러나, 이들 3약제는 트리리니지(tri-lineage) 조혈을 도울 목적으로 투여된 것이 기재되어 있기 때문에(p.198 우측 컬럼 중간 단락), TPO 단독에서의 CD34 양성세포의 증식이나 분화효과에 대해서 시사하는 것은 아니다(비특허문헌 8 참조).

한편, TPO 녹아웃 마우스에 TPO를 투여함으로써 이식의 효율이 올라가는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 9 참조). 상기 문헌에서는, TPO가 혈소판 이외의 세포계보에도 작용하는 것이 시사되어 있다. 그러나, CD34 양성세포의 생착 유무에 대한 보고는 없고, 또한, 인간 제대혈에 대한 언급도 없다.

이와 같이, 지금까지, TPO 수용체 아고니스트 활성을 갖는 항체를 투여함으로써 실제로 조혈 줄기세포의 증식을 활성화시키는데 성공했다는 보고는 없다.

또한, 본 발명의 선행기술문헌을 이하에 나타낸다.

특허문헌 1 : WO2002/33072

특허문헌 2 : WO2005/056604

특허문헌 3 : WO2005/107784

비특허문헌 1 : Stem Cells. 1996년, VOl 14 suppl 1, p124-132

비특허문헌 2 : Elliott S 등저, J. Biol. Chem., 1996년, Vol.271(40), p.24691-24697

비특허문헌 3 : Abe 등저, Immunol. Lett. 1998년, Vol.61, p.73-78

비특허문헌 4 : Bijia Deng 등저, Blood, 1998년, Vol. 92, p. 1981-1988

비특허문헌 5 : British Journal of Haematology 122, 837-846, 2003

비특허문헌 6 : Japanese Journal of Transfusion Medicine 46(3), 311-316, 2000

비특허문헌 7 : Blood, 2006년, Vol. 107, p. 4300-4307

비특허문헌 8 : Bone Marrow Transplantation 29, 197-204(2002)

비특허문헌 9 : The Journal of Clinical Investigation 110(3), 389-394(2002)

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명은 이러한 상황에 비추어 이루어진 것으로, 본 발명은, TPO 수용체의 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈 줄기세포 증식 촉진제를 제공하는 것을 과제로 한다. 또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 촉진제, 및 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진제를 제공하는 것을 과제로 한다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 연구를 행하였다. 본 발명자들은 TPO 수용체에 대한 저분자화 아고니스트 항체(VB22B sc(Fv)2)의 투여에 의해, 인간 거핵구 특이적 분화 유도(거핵구계 세포의 증가)에 더하여, 인간 제대혈 유래의 조혈 줄기세포(조혈계 CD34 양성세포)의 골수에서의 생착 촉진, 및 멀티리니지 혈액 전구세포의 유의한 증식이 일어나는 것을 발견하였다. 이 사실로부터 본 발명자들은, TPO 또는 TPO 수용체 아고니스트가, 조혈 줄기세포 이식(특히 제대혈 이식) 후에 단독 투여(G-CSF나 erythropoietin의 병용 없이)하는 것만으로 효과를 기대할 수 있는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 촉진제 또는 골수에서의 생착 촉진제로서 사용 가능한 것을 생각하기에 이르렀다. 또한 본 발명자들은, TPO 또는 TPO 수용체 아고니스트가, 멀티리니지 조혈 전구세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 및 멀티리니지 조혈능 회복 촉진제로서 사용 가능한 것을 생각하기에 이르렀다.

보다 구체적으로는, 본 발명은 이하의 [1]~[42]를 제공하는 것이다.

[1] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈 줄기세포 증식 촉진제,

[2] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제,

[3] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제,

[4] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈능 회복 촉진제,

[5] 조혈 줄기세포 이식에 있어서 사용되는, [1] 내지 [4] 중 어느 하나에 기재된 약제,

[6] 조혈 줄기세포 이식 후에 투여되는, [1] 내지 [5] 중 어느 하나에 기재된 약제,

[7] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식 또는 제대혈 이식으로 이루어진 군으로부터 선택되는, [5] 또는 [6]에 기재된 약제,

[8] 제대혈 이식이 인간 제대혈 이식인, [7]에 기재된 약제,

[9] 복수회 투여되는 것을 특징으로 하는, [8]에 기재된 약제,

[10] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제,

[11] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화 촉진제,

[12] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 조혈기능이 저하된 환자에 대해 행해지는 것을 특징으로 하는, [5]에 기재된 약제,

[13] 환자가, 방사선치료 또는 화학요법에 의한 치료를 받은 후의 환자인, [12]에 기재된 약제,

[14] 방사선치료 또는 화학요법을, AML(급성 골수성 백혈병), ALL(급성 림프성 백혈병), CML(만성 골수성 백혈병), 악성 림프종, 성인 T세포 백혈병, MDS(골수 이형성 증후군), AA(재생 불량성 빈혈), 기타 조혈 줄기세포 이식이 적용되는 질환의 치료를 위해 행하는 것을 특징으로 하는, [13]에 기재된 약제,

[15] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진하는 방법,

[16] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진하는 방법,

[17] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키는 방법,

[18] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈능의 회복을 촉진하는 방법,

[19] 조혈 줄기세포 이식에 있어서 행해지는, [15] 내지 [18] 중 어느 하나에 기재된 방법,

[20] 조혈 줄기세포 이식 후에 있어서 행해지는, [15] 내지 [19] 중 어느 하나에 기재된 방법,

[21] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식 또는 제대혈 이식으로부터 선택되는, [19] 또는 [20]에 기재된 방법,

[22] 제대혈 이식이 인간 제대혈 이식인, [21]에 기재된 방법,

[23] 복수회 투여되는 것을 특징으로 하는, [22]에 기재된 방법,

[24] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포를 증식시키는 방법,

[25] TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화를 촉진하는 방법,

[26] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 조혈기능이 저하된 환자에 대해 행해지는 것을 특징으로 하는, [19]에 기재된 방법,

[27] 환자가, 방사선치료 또는 화합요법에 의한 치료를 받은 후의 환자인, [26]에 기재된 방법,

[28] 방사선치료 또는 화학요법을, AML(급성 골수성 백혈병), ALL(급성 림프성 백혈병), CML(만성 골수성 백혈병), 악성 림프종, 성인 T세포 백혈병, MDS(골수 이형성 증후군), AA(재생 불량성 빈혈), 기타 조혈 줄기세포 이식이 적용되는 질환의 치료를 위해 행하는 것을 특징으로 하는, [27]에 기재된 방법,

[29] 조혈 줄기세포 증식 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[30] 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[31] 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[32] 조혈능 회복 촉진제의 제조에 있어서의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[33] 조혈 줄기세포 이식에 있어서 사용되는 조혈 줄기세포 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 또는 조혈능 회복 촉진제의 제조에 있어서의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[34] 조혈 줄기세포 이식 후에 투여되는 조혈 줄기세포 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 또는 조혈능 회복 촉진제의 제조에 있어서의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[35] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식 또는 제대혈 이식으로부터 선택되는, [33] 또는 [34]에 기재된 사용,

[36] 제대혈 이식이 인간 제대혈 이식인, [35]에 기재된 사용,

[37] 복수회 투여되는 것을 특징으로 하는, [36]에 기재된 사용,

[38] 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[39] 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용,

[40] 조혈 줄기세포 이식이, 골수 조혈기능이 저하된 환자에 대해 행해지는 것을 특징으로 하는, [33]에 기재된 사용,

[41] 환자가, 방사선치료 또는 화학요법에 의한 치료를 받은 후의 환자인, [40]에 기재된 사용,

[42] 방사선치료 또는 화학요법을, AML(급성 골수성 백혈병), ALL(급성 림프성 백혈병), CML(만성 골수성 백혈병), 악성 림프종, 성인 T세포 백혈병, MDS(골수 이형성 증후군), AA(재생 불량성 빈혈), 기타 조혈 줄기세포 이식이 적용되는 질환의 치료를 위해 행하는 것을 특징으로 하는, [41]에 기재된 사용.

도면의 간단한 설명

도 1은 각 혈구계 세포수에 대한 sc(Fv)2(hVB22 u2-wz4)의 영향을 나타내는 도면이다(mean은 -, SAS ver.5.0 wilcoxon test).

도 2는 CFU-Meg 콜로니수에 대한 sc(Fv)2(hVB22 u2-wz4)의 영향을 나타내는 도면 및 사진이다(mean은 -, SAS ver.5.0 wilcoxon test).

도 3은 각 혈구계 세포수에 대한 sc(Fv)2(hVB22 u2-wz4)의 용량 의존적인 영향을 나타내는 도면이다(평균값 막대 + SD, Jonckheere-Terpstra 검정). 도면 중, MAB(H), MAB(M), MAB(L)은, 각각 hVB22sc(Fv)2의 고투여군, 중투여군, 저투여군을 나타낸다.

[발명의 실시형태]

본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 및 조혈능 회복 촉진제(이하 본 명세서에 있어서, 이들 약제를 총칭하여 「본 발명의 약제」라 칭하는 경우 있음)를 제공한다.

본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈 줄기세포 증식 촉진제를 제공한다. 본 발명에 있어서 아고니스트란, 수용체에 작용하여 신경전달물질이나 호르몬 등과 동일한 기능을 나타내는 물질을 가리킨다. 본 발명의 아고니스트로서는, 이것에 한정되는 것은 아니지만, 저분자화합물이나 항체를 들 수 있다. 본 발명의 항체로는, 저분자화된 항체, 인간화 항체나 키메라화 항체 등의 아미노산 서열이 개변된 항체, 다른 분자(예를 들면, 폴리에틸렌글리콜 등의 고분자 등)가 결합된 수식항체, 당쇄가 개변된 항체, 등 어떠한 항체도 포함된다.

본 발명에 있어서 조혈 줄기세포란, 모든 림프계 세포 또는 골수계 세포로의 분화가 가능한 세포를 가리킨다. 본 발명에 있어서의 조혈 줄기세포는, 이러한 성질을 갖는 것이라면 특별히 한정되는 것은 아니나, 조혈계 CD34 양성세포로서 특징지을 수 있다. 조혈계 CD34 양성세포는, CD34 양성 조혈 줄기세포 및 CD34 양성 조혈 전구세포를 포함하는 헤테로 세포집단으로, 예를 들면, 다능성 줄기세포, 림프계 줄기세포, CFU-GEMM, CFU-GM, BFU-E, CFU-MEG 등이 포함된다. 여기서, CD34 양성 조혈 전구세포란, CD34를 발현하고 있는 세포로서, 림프계 세포(B세포, T세포 등) 또는 골수계 세포(호중구, 단구, 적혈구, 거핵구 등)로의 분화과정에 있지만, 각 계통으로의 분화가 방향지어져 있지 않고, 또한 형태학적으로도 분화처의 세포를 동정하는 것이 불가능한 단계에 있는 세포를 의미한다. 세포가 CD34를 발현하고 있는지의 여부는, 당업자에게 주지의 방법, 예를 들면 Journal of Hematotherapy 5, 213-226, 1996(Robert Sutherland et al. The ISHAGE guidelines for CD34 cell determination by Flow Cytometry.)에 기재된 방법에 따라 판정하는 것이 가능하다.

본 발명에 있어서 「증식의 촉진」이란, 본 발명의 약제를 투여하기 전과 비교하여, 조혈 줄기세포, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 증식이 활성화되는 것을 의미한다. 조혈 줄기세포, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 증식이 활성화되었는지의 여부의 판정은, 당업자가 통상 행하는 방법으로 행하는 것이 가능하고, 예를 들면 조혈 줄기세포, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 증식속도의 변화, 조혈 줄기세포, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 수(콜로니수)의 변화, 또는 조혈 줄기세포, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 증식에 관여하는 세포내 시그날의 변화 등을 검출함으로써 행할 수 있다.

또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제를 제공한다. 본 발명에 있어서 「조혈계 CD34 양성세포의 분화」란, 모든 림프계 세포 또는 골수계 세포로 변화하는 것이 가능했던 조혈계 CD34 양성세포가, 그러한 상태를 탈피하여, 어느 특정 세포로 변화하는 것이 결정지어지는 과정, 및, 그 결정지어진 세포로 이르는 과정을 의미한다. 여기서, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 분화처의 세포로서는, 특별히 이들에 한정되는 것은 아니지만, T세포, B세포, NK세포 등의 림프계 세포 및, 적혈구, 백혈구, 혈소판, 호중구, 단구, 호산구 등의 골수계 세포를 들 수 있다.

또한 본 발명에 있어서 「분화의 촉진」이란, 본 발명의 약제를 투여하기 전과 비교하여, 분화가 활성화되는 것을 의미한다. 조혈계 CD34 양성 조혈 줄기세포의 분화가 활성화되었는지 여부의 판정도 또한 당업자에게 공지의 방법으로 행하는 것이 가능하고, 예를 들면 세포의 증식속도의 변화, 세포수의 변화, 분화에 관여하는 세포내 시그날 강도의 변화, 분화 마커, 세포형태의 변화 등을 검출함으로써 행할 수 있다.

또한 조혈 줄기세포 이식에 있어서는, 이식된 조혈 줄기세포가 골수에 생착되는 것이 요구된다. 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제를 제공한다. 본 발명의 약제를 투여함으로써, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 골수로의 생착을 촉진하는 것이 가능해진다. 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 유무 또는 정도의 측정(조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착률의 측정)은, 예를 들면, 인간 조혈세포를 이식한 NOD/SCID 마우스 골수에 있어서의 인간 조혈계 CD34 양성세포의 절대수를 측정함으로써 행할 수 있다. 마우스 골수세포 중에서의 인간 세포는, 인간 CD34 특이적 형광표지 항체를 사용하여 검출함으로써 측정된다. 구체적으로는, 이하의 순서에 의해, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착률의 측정을 행할 수 있다. 먼저, 인간 제대혈 유래 CD34 양성세포 이식 3주 후에, NOD.CB17-Prkdc<scid>/J 마우스를 안락사시키고, 대퇴골 2개를 채취한다. 다음으로, 대퇴골의 골단(骨端)을 가위로 절제하고, 26G 바늘 시린지로 플래쉬아웃하여, 골수세포의 채취를 행한다. 2% FBS 함유 IMDM으로 세정 후, 5 mL의 적혈구 용해액을 첨가하여 5분 정치한다. 원심하고 상청을 제거 후, 2 mL의 2% FBS 함유 IMDM에 현탁하고, 70 ㎛의 멤브레인에 통과시켜, 골수세포 현탁액(2 mL/대퇴골 2개/mouse)을 조제한다. 이것을 100 μL/샘플에 분주하고, 형광표지 인간 CD34 특이적 항체와 PI(종농도 2 ㎍/mL)로 15분간 염색한다. 세정 후, FLOW-COUNT 형광입자를 50 μL 첨가하고, 세포해석장치 EPICS XL을 사용하여, 인간 CD34 양성세포 생착수를 측정한다. 측정은, 예를 들면 벡크만·콜터사제 어플리케이션 노트 5: Flow-Count를 사용한 세포 절대수의 측정에 준하여 실시하면 된다. 마찬가지로, 검출하는 항체를 바꿈으로써, 각종 혈구계 세포의 골수에서의 절대수를 계측하는 것이 가능하다. 대퇴골 2개에 포함되는 각 인간 세포 절대수는, 하기 식으로 표시된다.

또한, 상기 이외의 방법에도, 예를 들면 조혈 줄기세포 이식을 받은 인간에 있어서의 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착률을 측정하는 경우에는, 간접적으로, 말초혈에서의 혈구의 회복상태를 모니터함으로써 행하는 것이 가능하다.

또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 조혈능 회복 촉진제를 제공한다. 일반적으로, 이식 후 조혈 줄기세포가 생착되어 백혈구가 회복될 때까지, 1-3주간의 시간을 요하는 것으로 알려져 있다. 그 동안, 혈액 중의 백혈구 수는 매우 적기 때문에, 폐렴 등의 세균이나 곰팡이에 의한 감염증을 일으키기 쉽다는 문제가 있다. 또한, 일반적으로, 이식 후 조혈 줄기세포가 생착되어 혈소판이 회복될 때까지, 2-10주간의 시간을 요하는 것으로 알려져 있다. 그 동안, 혈액 중의 혈소판 수는 매우 적기 때문에, 출혈을 일으키기 쉽다는 문제가 있다. 본 발명의 조혈능 회복 촉진제를 사용함으로써, 이러한 이식 후의 줄기세포의 조혈능의 활성에 관한 과제를 해결하는 것이 가능하다. 본 발명에 있어서 「조혈능 회복 촉진」이란, 본 발명의 약제를 투여하기 전과 비교하여, 골수에 있어서의 조혈능이 활성화되는 것을 의미한다. 골수에 있어서의 조혈능이 활성화되었는지 여부는, 말초혈에서의 혈구의 회복상태를 모니터함으로써 판정하는 것이 가능하다.

또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제를 제공한다. 본 발명자들은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트에 의해 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착이 증가한 결과, 림프계, 및 골수계 중 어느 세포계보의 세포도 증가하는 것을 발견하였다(실시예 참조). 본 발명의 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제는, 이러한 지견(知見)을 토대로 하는 것이다. 본 발명에 있어서의 림프계 세포로서는, 이들에 한정되는 것은 아니나, T세포, B세포, NK세포를 들 수 있다. 또한 골수계 세포로서는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 적혈구, 백혈구, 혈소판, 호중구, 단구, 호산구 등을 들 수 있다.

본 발명자들은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트가, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 분화를 활성화시키는 것을 발견하였다. 따라서 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화 촉진제를 제공한다. 본 발명에 있어서, 조혈계 CD34 양성세포(CD34 양성 조혈 줄기세포, CD34 양성 조혈 전구세포)의 분화처의 세포로서는, T세포, B세포, NK세포 등의 림프계 세포, 적혈구, 백혈구, 혈소판, 호중구, 단구, 호산구 등의 골수계 세포를 들 수 있다.

본 발명의 약제는, 급성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수 이변형 증후군, 급성 림프구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병, 재생 불량성 빈혈, 악성 림프종, 기타 조혈 줄기세포가 적용되는 질환을 치료하기 위해 행하는 조혈 줄기세포 이식에 있어서, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진시키는데, 조혈계 CD34 양성 조혈 줄기세포의 증식 및/또는 분화를 촉진시키는데, 조혈계 CD34 양성 조혈 줄기세포의 골수로의 생착을 증가시키는데, 또는 조혈능의 회복을 촉진시키는데 유용하다.

본 발명의 조혈 줄기세포 이식에는, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식, 및 제대혈 이식이 포함된다. 일반적으로, 백혈병 등의 치료 목적으로 골수 이식을 행할 때, 골수 이식에 더하여 말초혈 줄기세포 이식, 제대혈 이식이 널리 행해지고 있다.

c-mpl은 TPO의 수용체로, 인간 c-mpl의 유전자 서열은 이미 해석되어 있다(Palacios et al, Cell, 1985년, Vol.41, p.727-734 또는, Genebank:NM_005373). 또한, 게잡이원숭이 c-mpl(염기/서열번호: 52, 아미노산/서열번호: 53), 마우스 c-mpl(GenBank#NM_010823)의 서열도 이미 공지이다. 인간 c-mpl의 아미노산 서열을 서열번호: 51에 나타낸다.

또한, 본 발명에 있어서의 c-mpl에는, 전술한 c-mpl에 있어서 아미노산이 치환, 결실, 부가된 변이 c-mpl 수용체도 포함된다. 변이 c-mpl의 구체예로서는, 예를 들면, Matthias Ballmaier et al., BLOOD, (2001), Vol.97, No.1, P139 등에 기재된 변이 c-mpl을 들 수 있다.

본 발명에 있어서는 c-mpl에 대한 아고니스트는, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진하는 작용, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진하는 작용, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키는 작용, 또는 조혈능의 회복을 촉진하는 작용을 갖는 한 한정되지 않는다. 후보화합물이 이들 작용을 갖는지 여부는 당업자에게 공지의 방법으로 확인하는 것이 가능하다.

c-mpl에 대한 아고니스트 활성이란, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진하는 활성, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진하는 활성, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키는 활성, 또는 조혈능의 회복을 촉진하는 활성이다. 아고니스트 활성의 측정은 당업자에게 공지의 방법으로 행하는 것이 가능하다. 또한, 아고니스트 활성의 측정은, 본래의 활성을 지표로 측정할 뿐 아니라, 다른 활성을 지표로 측정하는 것도 가능하다.

예를 들면, 세포증식을 지표로 아고니스트 활성을 측정하는 것이 가능하다. 보다 구체적으로는, 아고니스트 의존성 증식을 나타내는 세포에 아고니스트 활성을 측정하고자 하는 항체를 첨가하고, 배양한다. 그 다음, 헤모사이토미터를 사용하여 세포를 측정하는 것, 플로우 사이토미터에 의해 세포수를 측정하는 것, 또는 테트라졸륨염 WST-8(도진가가쿠 연구소)과 같은 생세포 수에 따라 특정 파장에 있어서 발색반응을 나타내는 시약을 첨가하여 흡광도를 측정하고, 얻어진 흡광도를 지표로 하거나 하여, 아고니스트 활성을 측정하는 것이 가능하다.

아고니스트 의존성 증식을 나타내는 세포도 당업자에게 공지의 방법으로 제작하는 것이 가능하고, 예를 들면, 수용체가 세포증식 시그날을 발하는 수용체인 경우에는, 상기 수용체를 발현하고 있는 세포를 사용하면 된다. 또한, 수용체가 세포증식 시그날을 내지 않는 수용체인 경우에는, 세포증식 시그날을 발하는 수용체의 세포내영역과, 세포증식 시그날을 내지 않는 수용체의 세포외영역으로 되는 키메라 수용체를 제작하고, 상기 키메라 수용체를 세포에서 발현시키면 된다. 세포증식 시그날을 발하는 수용체의 예로서는, 예를 들면, G-CSF 수용체, mpl, neu, GM-CSF 수용체, EPO 수용체, c-kit, FLT-3 등을 들 수 있다. 수용체를 발현시키는 세포로서는, 예를 들면, BaF3, NFS60, FDCP-1, FDCP-2, CTLL-2, DA-1, KT-3 등을 들 수 있다.

기타, 아고니스트 활성을 측정하기 위해 사용하는 검출지표로서는, 양적 및/또는 질적인 변화가 측정 가능한 한, 어떠한 것도 사용할 수 있다. 예를 들면, 무세포계(cell free assay)의 지표, 세포계(cell-based assay)의 지표, 조직계의 지표, 생체계의 지표를 사용할 수 있다. 무세포계의 지표로서는, 효소반응이나 단백질, DNA, RNA의 양적 및/또는 질적인 변화를 사용할 수 있다. 효소반응으로서는, 예를 들면, 아미노산전이반응, 당전이반응, 탈수반응, 탈수소반응, 기질절단반응 등을 사용할 수 있다. 또한, 단백질의 인산화, 탈인산화, 이량화, 다량화, 분해, 괴리 등이나, DNA, RNA의 증폭, 절단, 신장을 사용할 수 있다. 예를 들면 시그날 전달경로의 하류에 존재하는 단백질의 인산화를 검출지표로 할 수 있다. 세포계의 지표로서는, 세포의 표현형의 변화, 예를 들면, 생산물질의 양적 및/또는 질적 변화, 증식활성의 변화, 세포수의 변화, 형태의 변화, 특성의 변화 등을 사용할 수 있다. 생산물질로서는, 분비 단백질, 표면항원, 세포내 단백질, mRNA 등을 사용할 수 있다. 형태의 변화로서는, 돌기형성 및/또는 돌기 수의 변화, 편평도의 변화, 신장도/종횡비의 변화, 세포 크기의 변화, 내부 구조의 변화, 세포집단으로서의 이형성/균일성, 세포밀도의 변화 등을 사용할 수 있다. 이들 형태의 변화는 현미경 검사하에서의 관찰로 확인할 수 있다. 특성의 변화로서는, 앵커 의존성, 사이토카인 의존 응답성, 호르몬 의존성, 약제내성, 세포운동성, 세포유주활성, 박동성, 세포내 물질의 변화 등을 사용할 수 있다. 세포운동성으로서는, 세포침윤활성, 세포유주활성이 있다. 또한, 세포내 물질의 변화로서는 예를 들면, 효소활성, mRNA량, Ca²⁺나 cAMP 등의 세포내 정보 전달물질량, 세포내 단백질량 등을 사용할 수 있다. 또한, 세포막 수용체의 경우에는, 수용체의 자극에 의해 유도되는 세포의 증식활성의 변화를 지표로 할 수 있다. 조직계의 지표로서는, 사용하는 조직에 따른 기능변화를 검출지표로 할 수 있다. 생체계의 지표로서는 조직중량 변화, 혈액계의 변화, 예를 들면 혈구세포수의 변화, 단백질량이나, 효소활성, 전해질량의 변화, 또한, 순환기계의 변화, 예를 들면, 혈압, 심박수의 변화 등을 사용할 수 있다.

이들 검출지표를 측정하는 방법으로서는, 특별히 제한은 없고, 흡광, 발광, 발색, 형광, 방사활성, 형광편광도, 표면 플라즈몬 공명 시그날, 시간 분해 형광도, 질량, 흡수 스펙트럼, 광산란, 형광 공명 에너지 이동 등을 사용할 수 있다. 이들 측정방법은 당업자에게 있어서는 주지이므로, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 흡수 스펙트럼은 일반적으로 사용되는 포토미터나 플레이트리더 등, 발광은 루미노미터 등, 형광은 플루오로미터 등으로 측정할 수 있다. 질량은 질량분석계를 사용해서 측정할 수 있다. 방사활성은 방사선의 종류에 따라 감마카운터 등의 측정기기를 사용하여, 형광편광도는 BEACON(다까라주조), 표면 플라즈몬 공명 시그날은 BIACORE, 시간 분해 형광, 형광 공명 에너지 이동 등은 ARVO 등에 의해 측정할 수 있다. 또한, 플로우 사이토미터 등도 측정에 사용할 수 있다. 이들 측정방법은, 하나의 측정방법으로 2종 이상의 검출지표를 측정해도 되고, 간편하다면, 2종 이상의 측정을 동시 및/또는 연속해서 측정함으로써 더욱 다수의 검출지표를 측정하는 것도 가능하다. 예를 들면, 형광과 형광 공명 에너지 이동을 동시에 플루오로미터로 측정할 수 있다.

본 발명에 있어서의 아고니스트는, 천연의 화합물이어도 되고 인공의 화합물이어도 된다. 본 발명에 있어서의 아고니스트로서는 공지의 것을 사용할 수 있다. 또한, 상기 방법으로 아고니스트 활성을 갖는 것으로 판정된 신규 화합물을 사용하는 것도 가능하다.

본 발명의 아고니스트의 바람직한 태양의 하나로서, 저분자화 항체를 들 수 있다. 저분자화 항체는, 전장 항체(whole antibody, 예를 들면 whole IgG 등)의 일부분이 결손되어 있는 항체 단편을 포함하고, 항원으로의 결합능을 가지고 있으면 특별히 한정되지 않는다. 본 발명에 있어서의 저분자화 항체는, 전장 항체와 비교하여, 현저히 높은 활성을 갖는다. 본 발명의 항체 단편은, 전장 항체의 일부분이라면 특별히 한정되지 않으나, 중쇄 가변영역(VH) 또는/및 경쇄 가변영역(VL)을 포함하고 있는 것이 바람직하다. VH 또는 VL의 아미노산 서열은, 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입되어 있어도 된다. 또한 항원으로의 결합능을 갖는 한, VH 또는/및 VL의 일부를 결손시켜도 된다. 또한, 가변영역은 키메라화나 인간화되어 있어도 된다. 항체 단편의 구체예로서는, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 등을 들 수 있다. 또한, 저분자화 항체의 구체예로서는, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv(single chain Fv), Diabody, sc(Fv)2(single chain(Fv)2) 등을 들 수 있다.

여기서, 「Fv」단편은 최소의 항체 단편으로, 완전한 항원인식 부위와 결합 부위를 포함한다. 「Fv」단편은 하나의 VH 및 VL이 비공유결합에 의해 강하게 연결된 다이머(VH-VL 다이머)이다. 각 가변영역의 3개의 상보성 결정영역(complementarity determining region; CDR)이 상호작용하여, VH-VL 다이머의 표면에 항원결합 부위를 형성한다. 6개의 CDR이 항체에 항원결합 부위를 부여하고 있다. 그러나, 1개의 가변영역(또는, 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)이어도, 전결합 부위 보다도 친화성은 낮지만, 항원을 인식하여 결합하는 능력을 갖는다.

scFv에는, 항체의 VH 및 VL이 포함되고, 이들 영역은 단일 폴리펩티드 사슬 중에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 추가적으로 VH 및 VL 사이에 폴리펩티드 링커를 포함하고 있어, 이것에 의해 scFv는 항원결합을 위해 필요한 구조를 형성할 수 있다(scFv의 총설에 대해서는, Pluckthun『The Pharmacology of Monoclonal Antibodies』Vol.113(Rosenburg and Moore ed(Springer Verlag, New York) pp.269-315, 1994)를 참조). 본 발명에 있어서의 링커는, 그 양쪽 말단에 연결된 항체 가변영역의 발현을 저해하는 것이 아니라면 특별히 한정되지 않는다.

디아바디(Diabody)는 유전자 융합에 의해 구축된 2가(bivalent)의 항체 단편을 가리킨다(Holliger P et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448(1993), EP 404,097호, WO93/11161호 등). 디아바디는 2개의 폴리펩티드 사슬로 구성되는 다이머로서, 통상 폴리펩티드 사슬은 각각, 동일 사슬 중에서 VL 및 VH가 서로 결합할 수 없을 정도로 짧은, 예를 들면 5 잔기 정도의 링커에 의해 결합되어 있다. 동일 폴리펩티드 사슬 상에 코드되는 VL과 VH란, 그 사이의 링커가 짧기 때문에 단쇄 가변영역 프래그먼트를 형성할 수 없어 이량체를 형성하기 때문에, 디아바디는 2개의 항원결합 부위를 가지게 된다.

본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 특히 바람직한 태양으로서는, sc(Fv)2를 들 수 있다. sc(Fv)2는, 2개의 VH 및 2개의 VL을 링커 등으로 결합하여 단일 사슬로 한 저분자화 항체이다(Hudson et al, J Immunol. Methods 1999; 231: 177-189). sc(Fv)2는 전장 항체나 다른 저분자화 항체와 비교하여, 특히 높은 아고니스트 활성을 나타내는 것이 본원 출원인에 의해 발견되고 있다. sc(Fv)2는, 예를 들면, scFv를 링커로 연결함으로써 제작할 수 있다.

또한 2개의 VH 및 2개의 VL이 단일 사슬 폴리펩티드의 N 말단측을 기점으로서 VH, VL, VH, VL([VH] 링커 [VL] 링커 [VH] 링커 [VL]) 순으로 나열되어 있는 것을 특징으로 하는 항체가 바람직하다.

2개의 VH와 2개의 VL의 순서는 특별히 상기 배치에 한정되지 않고, 어떠한 순서로 나열되어 있어도 된다. 예를 들면 이하와 같은 배치도 들 수 있다.

[VL] 링커 [VH] 링커 [VH] 링커 [VL]

[VH] 링커 [VL] 링커 [VL] 링커 [VH]

[VH] 링커 [VH] 링커 [VL] 링커 [VL]

[VL] 링커 [VL] 링커 [VH] 링커 [VH]

[VL] 링커 [VH] 링커 [VL] 링커 [VH]

항체의 가변영역을 결합하는 링커로서는, 유전자공학에 의해 도입 가능한 임의의 펩티드 링커, 또는 합성화합물 링커(예를 들면, Protein Engineering, 9(3), 299-305, 1996 참조)에 개시되는 링커 등을 사용할 수 있지만, 본 발명에 있어서는 펩티드 링커가 바람직하다. 펩티드 링커의 길이는 특별히 한정되지 않고, 목적에 따라서 당업자가 적절히 선택하는 것이 가능하지만, 통상 1~100 아미노산, 바람직하게는 3~50 아미노산, 더욱 바람직하게는 5~30 아미노산, 특히 바람직하게는 12~18 아미노산(예를 들면, 15 아미노산)이다.

예를 들면, 펩티드 링커의 경우:

[n은 1 이상의 정수이다] 등을 들 수 있다. 단, 펩티드 링커의 길이나 서열은 목적에 따라 당업자가 적절히 선택할 수 있다.

따라서 본 발명에 있어서 특히 바람직한 sc(Fv)2의 태양으로서는, 예를 들면, 이하의 sc(Fv)2를 들 수 있다.

[VH]펩티드 링커(15 아미노산)[VL]펩티드 링커(15 아미노산)[VH]펩티드 링커(15 아미노산)[VL]

합성화합물 링커(화학 가교제)는 펩티드의 가교에 통상 사용되고 있는 가교제, 예를 들면 N-히드록시숙신이미드(NHS), 디숙신이미딜 수베레이트(DSS), 비스(설포숙신이미딜)수베레이트(BS³), 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)(DSP), 디티오비스(설포숙신이미딜프로피오네이트)(DTSSP), 에틸렌글리콜비스(숙신이미딜숙시네이트)(EGS), 에틸렌글리콜비스(설포숙신이미딜숙시네이트)(설포-EGS), 디숙신이미딜타르타르산염(DST), 디설포숙신이미딜타르타르산염(설포-DST), 비스[2-(숙신이미도옥시카르보닐옥시)에틸]설폰(BSOCOES), 비스[2-(설포숙신이미도옥시카르보닐옥시)에틸]설폰(설포-BSOCOES) 등으로서, 이들의 가교제는 시판되고 있다.

4개의 항체 가변영역을 결합하는 경우에는 통상 3개의 링커가 필요로 되지만, 전부 동일한 링커를 사용해도 되고, 상이한 링커를 사용해도 된다. 본 발명에 있어서 바람직한 저분자화 항체는 디아바디 또는 sc(Fv)2이고, 특히 바람직하게는 sc(Fv)2이다. 이러한 저분자화 항체를 얻기 위해서는, 항체를 효소, 예를 들면, 파파인, 펩신 등으로 처리하고, 항체 단편을 생성시키거나, 또는 이들 항체 단편을 코드하는 DNA를 구축하고, 이를 발현 벡터에 도입한 후, 적당한 수주세포에서 발현시키면 된다(예를 들면, Co, M. S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976 ; Better, M. and Horwitz, A. H., Methods Enzymol. (1989) 178, 476-496 ; Pluckthun, A. and Skerra, A., Methods Enzymol. (1989) 178, 497-515 ; Lamoyi, E., Methods Enzymol. (1986) 121, 652-663 ; Rousseaux, J. et al., Methods Enzymol. (1986) 121, 663-669 ; Bird, R. E. and Walker, B. W., Trends Biotechnol. (1991) 9, 132-137 참조).

sc(Fv)2화된 항c-mpl 항체는, c-mpl에 대해 특히 높은 아고니스트 활성을 갖기 때문에, 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 또는 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진제로서 특히 유용하다.

본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 키메라 항체 또는 인간화 항체 등의 개변 항체를 들 수 있고, 특히 인간화 항체를 들 수 있다.

키메라 항체는, 상이한 동물 유래의 서열을 조합하여 제작되는 항체로서, 예를 들면, 마우스 항체의 중쇄, 경쇄의 가변영역과 인간 항체의 중쇄, 경쇄의 정상영역으로 되는 항체 등이다. 키메라 항체의 제작은 공지의 방법을 사용하여 행할 수 있고, 예를 들면, 항체 V영역을 코드하는 DNA와 인간 항체 C영역을 코드하는 DNA를 연결하고, 이것을 발현 벡터에 삽입하고 숙주에 도입하여 생산시킴으로써 얻어진다.

인간화 항체는, 재구성(reshaped) 인간 항체로도 칭해지고, 이것은 인간 이외의 포유동물, 예를 들면 마우스 항체의 상보성 결정영역(CDR; complementarity determining region)을 인간 항체의 상보성 결정영역으로 이식한 것으로, 그의 일반적인 유전자 재조합 수법도 알려져 있다(유럽특허출원 공개번호 EP 125023호 공보, WO96/02576호 공보 참조).

구체적으로는, 마우스 항체의 CDR과 인간 항체의 프레임워크영역(framework region; FR)을 연결하도록 설계한 DNA 서열을, CDR 및 FR 양쪽의 말단영역에 오버랩되는 부분을 갖도록 제작한 수개의 올리고뉴클레오티드를 프라이머로서 사용하여 PCR법에 의해 합성한다(WO98/13388호 공보에 기재된 방법을 참조).

CDR을 매개로 연결되는 인간 항체의 프레임워크영역은, 상보성 결정영역이 양호한 항원결합 부위를 형성하는 것이 선택된다. 필요에 따라, 재구성 인간 항체의 상보성 결정영역이 적절한 항원결합 부위를 형성하도록, 항체의 가변영역에 있어서의 프레임워크영역의 아미노산을 치환해도 된다(Sato, K. et al., CancerRes. (1993) 53, 851-856).

키메라 항체 및 인간형화 항체의 정상영역에는, 인간 항체의 것이 사용되고, 예를 들면 H사슬에서는, Cγ1, Cγ2, Cγ3, Cγ4를, L사슬에서는 Cκ, Cλ를 사용할 수 있다. 또한, 항체 또는 그의 생산의 안정성을 개선하기 위해, 인간 항체 정상영역을 수식해도 된다.

일반적으로, 키메라 항체는, 인간 이외의 포유동물 유래 항체의 가변영역과 인간 항체 유래의 정상영역으로 된다. 한편, 인간화 항체는 인간 이외의 포유동물 유래 항체의 상보성 결정영역과, 인간 항체 유래의 프레임워크영역 및 정상영역으로 된다.

또한, 키메라 항체나 인간화 항체를 제작한 후에, 가변영역(예를 들면, FR)이나 정상영역 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하거나 해도 된다.

키메라 항체에 있어서의 가변영역, 또는 인간화 항체에 있어서의 CDR의 유래는 특별히 한정되지 않고, 어떠한 동물 유래여도 된다. 예를 들면, 마우스 항체, 랫트 항체, 토끼 항체, 낙타 항체 등의 서열을 사용하는 것이 가능하다.

c-mpl을 인식하는 인간화 항체의 예로서는, 후술하는 (9)-(19)에 기재된 인간화 항체를 들 수 있다.

키메라 항체나 인간화 항체는 인간 체내에 있어서의 항원성이 저하되어 있기 때문에, 인간에 투여하는 경우에 특히 유용하고, 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 또는 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진제로서 특히 유용하다.

본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 가용형 c-mpl에 결합하는 항체를 들 수 있다. 여기에서 말하는 가용형 c-mpl이란, 세포막 상에 발현하고 있는 c-mpl 이외의 c-mpl을 말한다. 가용형 c-mpl의 구체적인 예로서는, 막관통영역의 일부 또는 전부가 결손되어 있는 c-mpl을 들 수 있다. 인간 c-mpl의 경우, 막관통영역은 서열번호: 51에 있어서 492번째의 아미노산~513번째의 아미노산의 부분이 상당한다.

가용형 재조합 c-mpl에 결합하는 항체는, 에피토프의 상세한 해석이나 결합에 있어서의 반응속도론적 해석에 이용할 수 있을 뿐 아니라, 인 비보 시험에 있어서의 혈중농도나 체내동태를 평가하는 것에도 유용하다.

본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 인간 c-mpl과 원숭이 c-mpl 양쪽에 대해 결합활성 또는 아고니스트 활성을 갖는 항체를 들 수 있다. 인간 c-mpl과 원숭이 c-mpl 양쪽에 대해 아고니스트 활성을 갖는 항체는, 통상, 인간에 있어서 측정하는 것이 곤란한 체내동태나 인 비보에서의 효과를, 원숭이를 사용하여 검증할 수 있는 것으로부터, 매우 유용할 것으로 생각된다. 이들 항체는, 또한, 인간 및 원숭이 이외의 동물(예를 들면, 마우스 등)의 c-mpl에 대해, 결합활성이나 아고니스트 활성을 가지고 있어도 된다.

또한 본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, TPO 아고니스트 활성(c-mpl에 대한 아고니스트 활성)이 EC50=100 nM 이하, 바람직하게는 EC50=30 nM 이하, 더욱 바람직하게는 EC50=10 nM 이하인 항체를 들 수 있다.

또한 본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 가용형 c-mpl으로의 결합활성이 KD=10^-6 M 이하, 바람직하게는 KD=10^-7 M 이하, 더욱 바람직하게는 KD=10^-8 M 이하의 항체를 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 가용형 재조합 c-mpl으로의 결합활성이 KD=10^-6 M 이하인 항체인지의 여부는, 당업자에게 공지의 수단을 사용하여 측정할 수 있다. 예를 들면, BIAcore를 사용한 표면 플라즈몬 공명을 이용하여 측정하는 것이 가능하다. 즉, 센서 칩(Sensor Chip) 상에 가용형 c-mpl-Fc 단백질을 고정시키고, 항체와 가용형 c-mpl-Fc의 상호작용을 측정값으로부터 반응속도 정수로서 산출할 수 있다. 또한, 결합활성의 평가에는, ELISA(효소결합 면역흡착 검정법), EIA(효소면역측정법), RIA(방사면역측정법) 또는 형광항체법을 사용할 수 있다. 예를 들면, 효소면역측정법을 사용하는 경우, 피험항체가 결합하는 항원을 코팅한 플레이트에, 피험항체를 포함하는 시료, 예를 들면, 피험항체 생산세포의 배양상청이나 정제항체를 첨가한다. 알칼리포스파타아제 등의 효소로 표지한 2차항체를 첨가하고, 플레이트를 인큐베이트하여, 세정한 후, p-니트로페닐인산 등의 효소기질을 첨가하여 흡광도를 측정함으로써 항원결합활성을 평가할 수 있다.

결합활성의 상한은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들면, 당업자가 기술적으로 제작 가능한 범위의 상한을 설정할 수 있다. 그러나, 기술적으로 제작 가능한 범위는, 기술의 진보에 의해 확대된다.

본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 이하의 (1)~(19) 중 어느 하나에 기재된 항체를 들 수 있다. (1)~(19) 중 어느 하나에 기재된 항체는 바람직하게는 저분자화 항체이다.

(1) 서열번호: 1, 2, 3(VB22B:VH CDR1, 2, 3)에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VH를 포함하는 항체.

(2) 서열번호: 4, 5, 6(VB22B:VL CDR1, 2, 3)에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VL을 포함하는 항체.

(3) 서열번호: 1, 2, 3(VB22B:VH CDR1, 2, 3)에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VH, 및 서열번호: 4, 5, 6(VB22B:VL CDR1, 2, 3)에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VL을 포함하는 항체.

(4) 서열번호: 8(VB22B:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH를 포함하는 항체.

(5) 서열번호: 10(VB22B:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL을 포함하는 항체.

(6) 서열번호: 8(VB22B:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 10(VB22B:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL을 포함하는 항체.

(7) 서열번호: 12(VB22B:scFv)에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체.

(8) 서열번호: 14(VB22B:sc(Fv)2)에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체.

(9) 이하의 (a)~(c) 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH를 포함하는 인간화 항체.

(a) 서열번호: 15, 16, 17, 18(hVB22B p-z:VH FR1, 2, 3, 4)

(b) 서열번호: 19, 20, 21, 22(hVB22B g-e:VH FR1, 2, 3, 4)

(c) 서열번호: 23, 24, 25, 26(hVB22B e:VH FR1, 2, 3, 4)

(d) 서열번호: 54, 55, 56, 57(hVB22B u2-wz4:VH FR1, 2, 3, 4)

(e) 서열번호: 54, 55, 58, 57(hVB22B q-wz5:VH FR1, 2, 3, 4)

(10) 이하의 (a)~(d)에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL을 포함하는 인간화 항체.

(a) 서열번호: 27, 28, 29, 30(hVB22B p-z:VL FR1, 2, 3, 4)

(b) 서열번호: 31, 32, 33, 34(hVB22B g-e 또는 hVB22B e:VL FR1, 2, 3, 4)

(c) 서열번호: 59, 60, 61, 62(hVB22B u2-wz4:VL FR1, 2, 3, 4)

(d) 서열번호: 59, 63, 64, 62(hVB22B q-wz5:VL FR1, 2, 3, 4)

(11) 이하의 (a)~(e) 중 어느 하나에 기재된 VH 및 VL을 포함하는 인간화 항체.

(a) 서열번호: 15, 16, 17, 18에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH, 및 서열번호: 27, 28, 29, 30에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL

(b) 서열번호: 19, 20, 21, 22에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH, 및 서열번호: 31, 32, 33, 34에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL

(c) 서열번호: 23, 24, 25, 26에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH, 및 서열번호: 31, 32, 33, 34에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL

(d) 서열번호: 54, 55, 56, 57에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH, 및 서열번호: 59, 60, 61, 62에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL

(e) 서열번호: 54, 55, 58, 57 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VH, 및 서열번호: 59, 63, 64, 62에 기재된 아미노산 서열로 되는, FR1, 2, 3, 4를 갖는 VL

(12) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VH를 포함하는 인간화 항체.

(13) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VL을 포함하는 인간화 항체.

(14) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VH, 및 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 아미노산 서열로 되는 CDR1, 2, 3을 갖는 VL을 포함하는 인간화 항체.

(15) 서열번호: 36(hVB22B p-z:VH), 서열번호: 38(hVB22B g-e:VH), 서열번호: 40(hVB22B e:VH), 서열번호: 65(hVB22B u2-wz4:VH), 또는 서열번호: 66(hVB22B q-wz5:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH를 포함하는 인간화 항체.

(16) 서열번호: 42(hVB22B p-z:VL), 서열번호: 44(hVB22B g-e:VL 또는 hVB22B e:VL), 서열번호: 67(hVB22B u2-wz4:VL), 또는 서열번호: 68(hVB22B q-wz5:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL을 포함하는 인간화 항체.

(17) 이하의 (a)~(e) 중 어느 하나에 기재된 VH 및 VL을 포함하는 인간화 항체.

(a) 서열번호: 36(hVB22B p-z:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 42(hVB22B p-z:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL

(b) 서열번호: 38(hVB22B g-e:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 44(hVB22B g-e:VL 또는 hVB22B e:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL

(c) 서열번호: 40(hVB22B e:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 44(hVB22B g-e:VL 또는 hVB22B e:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL

(d) 서열번호: 65(hVB22B u2-wz4:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 67(hVB22B u2-wz4:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL

(e) 서열번호: 66(hVB22B q-wz5:VH)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VH, 및 서열번호: 68(hVB22B q-wz5:VL)에 기재된 아미노산 서열로 되는 VL

서열번호: 36(hVB22B p-z:VH), 서열번호: 38(hVB22B g-e:VH), 서열번호: 40(hVB22B e:VH), 서열번호: 65(hVB22B u2-wz4:VH), 또는 서열번호: 66(hVB22B q-wz5:VH)에 기재된 아미노산 서열에 있어서,

아미노산 부위: 31~35가 CDR1,

아미노산 부위: 50~66이 CDR2,

아미노산 부위: 99~107이 CDR3,

아미노산 부위: 1~30이 FR1,

아미노산 부위: 36~49가 FR2,

아미노산 부위: 67~98이 FR3,

아미노산 부위: 108~118이 FR4에 상당한다.

또한, 서열번호: 42(hVB22B p-z:VL) 또는 서열번호: 44(hVB22B g-e:VL 또는 hVB22B e:VL), 서열번호: 67(hVB22B u2-wz4:VL), 또는 서열번호: 68(hVB22B q-wz5:VH)에 기재된 아미노산 서열에 있어서,

아미노산 부위: 24~39가 CDR1,

아미노산 부위: 55~61이 CDR2,

아미노산 부위: 94~102가 CDR3,

아미노산 부위: 1~23이 FR1,

아미노산 부위: 40~54가 FR2,

아미노산 부위: 62~93이 FR3,

아미노산 부위: 103~112가 FR4에 상당한다.

본 발명에 있어서, hVB22B p-z VH 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B p-z VH: FR1/서열번호: 15

hVB22B p-z VH: CDR1/서열번호: 1

hVB22B p-z VH: FR2/서열번호: 16

hVB22B p-z VH: CDR2/서열번호: 2

hVB22B p-z VH: FR3/서열번호: 17

hVB22B p-z VH: CDR3/서열번호: 3

hVB22B p-z VH: FR4/서열번호: 18

본 발명에 있어서, hVB22B p-z VL 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B p-z VL: FR1/서열번호: 27

hVB22B p-z VL: CDR1/서열번호: 4

hVB22B p-z VL: FR2/서열번호: 28

hVB22B p-z VL: CDR2/서열번호: 5

hVB22B p-z VL: FR3/서열번호: 29

hVB22B p-z VL: CDR3/서열번호: 6

hVB22B p-z VL: FR4/서열번호: 30

본 발명에 있어서, hVB22B g-e VH 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B g-e VH: FR1/서열번호: 19

hVB22B g-e VH: CDR1/서열번호: 1

hVB22B g-e VH: FR2/서열번호: 20

hVB22B g-e VH: CDR2/서열번호: 2

hVB22B g-e VH: FR3/서열번호: 21

hVB22B g-e VH: CDR3/서열번호: 3

hVB22B g-e VH: FR4/서열번호: 22

본 발명에 있어서, hVB22B g-e VL 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B g-e VL: FR1/서열번호: 31

hVB22B g-e VL: CDR1/서열번호: 4

hVB22B g-e VL: FR2/서열번호: 32

hVB22B g-e VL: CDR2/서열번호: 5

hVB22B g-e VL: FR3/서열번호: 33

hVB22B g-e VL: CDR3/서열번호: 6

hVB22B g-e VL: FR4/서열번호: 34

본 발명에 있어서, hVB22B e VH 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B e VH: FR1/서열번호: 23

hVB22B e VH: CDR1/서열번호: 1

hVB22B e VH: FR2/서열번호: 24

hVB22B e VH: CDR2/서열번호: 2

hVB22B e VH: FR3/서열번호: 25

hVB22B e VH: CDR3/서열번호: 3

hVB22B e VH: FR4/서열번호: 26

본 발명에 있어서, hVB22B e VL 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B e VL: FR1/서열번호: 31

hVB22B e VL: CDR1/서열번호: 4

hVB22B e VL: FR2/서열번호: 32

hVB22B e VL: CDR2/서열번호: 5

hVB22B e VL: FR3/서열번호: 33

hVB22B e VL: CDR3/서열번호: 6

hVB22B e VL: FR4/서열번호: 34

본 발명에 있어서, hVB22B u2-wz4 VH 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B u2-wz4 VH: FR1/서열번호: 54

hVB22B u2-wz4 VH: CDR1/서열번호: 1

hVB22B u2-wz4 VH: FR2/서열번호: 55

hVB22B u2-wz4 VH: CDR2/서열번호: 2

hVB22B u2-wz4 VH: FR3/서열번호: 56

hVB22B u2-wz4 VH: CDR3/서열번호: 3

hVB22B u2-wz4 VH: FR4/서열번호: 57

본 발명에 있어서, hVB22B u2-wz4 VL 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B u2-wz4 VL: FR1/서열번호: 59

hVB22B u2-wz4 VL: CDR1/서열번호: 4

hVB22B u2-wz4 VL: FR2/서열번호: 60

hVB22B u2-wz4 VL: CDR2/서열번호: 5

hVB22B u2-wz4 VL: FR3/서열번호: 61

hVB22B u2-wz4 VL: CDR3/서열번호: 6

hVB22B u2-wz4 VL: FR4/서열번호: 62

본 발명에 있어서, hVB22B q-wz5 VH 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B q-wz5 VH: FR1/서열번호: 54

hVB22B q-wz5 VH: CDR1/서열번호: 1

hVB22B q-wz5 VH: FR2/서열번호: 55

hVB22B q-wz5 VH: CDR2/서열번호: 2

hVB22B q-wz5 VH: FR3/서열번호: 56

hVB22B q-wz5 VH: CDR3/서열번호: 3

hVB22B q-wz5 VH: FR4/서열번호: 57

본 발명에 있어서, hVB22B q-wz5 VL 서열에 있어서의 CDR 및 FR과 서열번호의 대응은 이하와 같다.

hVB22B q-wz5 VL: FR1/서열번호: 59

hVB22B q-wz5 VL: CDR1/서열번호: 4

hVB22B q-wz5 VL: FR2/서열번호: 63

hVB22B q-wz5 VL: CDR2/서열번호: 5

hVB22B q-wz5 VL: FR3/서열번호: 64

hVB22B q-wz5 VL: CDR3/서열번호: 6

hVB22B q-wz5 VL: FR4/서열번호: 62

또한, VB22B VH의 염기서열을 서열번호: 7, VB22B VL의 염기서열을 서열번호: 9, VB22B scFv의 염기서열을 서열번호: 11, VB22B sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 13, hVB22B p-z VH의 염기서열을 서열번호: 35, hVB22B g-e VH의 염기서열을 서열번호: 37, hVB22B e VH의 염기서열을 서열번호: 39, hVB22B u2-wz4 VH의 염기서열을 서열번호:69 및 hVB22B q-wz5 VH의 염기서열을 서열번호: 71, hVB22B p-z VL의 염기서열을 서열번호: 41, hVB22B g-e VL, hVB22B e VL의 염기서열을 서열번호: 43, hVB22B u2-wz4 VL의 염기서열을 서열번호: 70 및 hVB22B q-wz5 VL의 염기서열을 서열번호: 72, hVB22B p-z sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 45, hVB22B g-e sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 47, hVB22B e sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 49, hVB22B u2-wz4 sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 75 및 hVB22B q-wz5 sc(Fv)2의 염기서열을 서열번호: 76에 기재한다.

(18) 서열번호 46(hVB22B p-z:sc(Fv)2), 서열번호: 48(hVB22B g-e:sc(Fv)2), 서열번호: 50(hVB22B e:sc(Fv)2), 서열번호: 73(hVB22B u2-wz4:sc(Fv)2) 또는 서열번호: 74(hVB22B q-wz5:sc(Fv)2) 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 인간화 항체.

(19) 상기 (1)~(18) 중 어느 하나에 기재의 아미노산 서열에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입되고, 또한 상기 항체와 동등한 활성을 갖는 항체. 여기서, 상기 항체와 동등한 활성을 갖는다는 것은, 조혈 줄기세포의 증식 촉진작용, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진작용, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가작용, 및 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진작용에 있어서, 동등한 활성을 갖는 것을 의미한다.

상기 (1)~(19) 중 어느 하나에 기재된 항체는 c-mpl에 대한 아고니스트 활성이 매우 높기 때문에, 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 또는 조혈 줄기세포 이식에 있어서의 조혈능 회복 촉진제로서 특히 유용하다.

어느 한 폴리펩티드와 기능적으로 동등한 폴리펩티드를 조제하기 위한, 당업자에게 잘 알려진 방법으로서는, 폴리펩티드에 변이를 도입하는 방법이 알려져 있다. 예를 들면, 당업자라면, 부위 특이적 변이 유발법(Hashimoto-Gotoh, T. et al. (1995) Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, and Smith, M.(1983) Methods Enzymol. 100, 468-500, Kramer, W. et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456, Kramer W, and Fritz HJ(1987) Methods. Enzymol. 154, 350-367, Kunkel,TA(1985) Proc Natl Acad Sci USA. 82, 488-492, Kunkel(1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766) 등을 사용하여, 본 발명의 항체에 적절히 변이를 도입함으로써, 상기 항체와 기능적으로 동등한 항체를 조제할 수 있다. 또한, 아미노산의 변이는 자연계에 있어서도 발생할 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 항체의 아미노산 서열에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 변이된 아미노산 서열을 갖고, 상기 항체와 기능적으로 동등한 항체도 또한 본 발명의 항체에 포함된다. 이러한 변이체에 있어서의, 변이되는 아미노산 수는, 통상, 50 아미노산 이내이고, 바람직하게는 30 아미노산 이내이며, 더욱 바람직하게는 10 아미노산 이내(예를 들면, 5 아미노산 이내)인 것으로 생각된다.

변이되는 아미노산 잔기에 있어서는, 아미노산 측쇄의 성질이 보존되어 있는 별도의 아미노산으로 변이되는 것이 바람직하다. 예를 들면 아미노산 측쇄의 성질로서는, 소수성 아미노산(A, I, L, M, F, P, W, Y, V), 친수성 아미노산(R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), 지방족 측쇄를 갖는 아미노산(G, A, V, L, I, P), 수산기 함유 측쇄를 갖는 아미노산(S, T, Y), 황원자 함유 측쇄를 갖는 아미노산(C, M), 카르복실산 및 아미드 함유 측쇄를 갖는 아미노산(D, N, E, Q), 염기 함유 측쇄를 갖는 아미노산(R, K, H), 방향족 함유 측쇄를 갖는 아미노산(H, F, Y, W)을 들 수 있다(괄호안은 모두 아미노산의 일문자 표기를 나타낸다).

어느 한 아미노산 서열에 대한 1 또는 복수개의 아미노산 잔기의 결실, 부가 및/또는 다른 아미노산에 의한 치환에 의해 수식된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드가 그 생물학적 활성을 유지하는 것은 이미 알려져 있다(Mark, D. F. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 81, 5662-5666, Zoller, M. J. & Smith, M. Nucleic Acids Research (1982) 10, 6487-6500, Wang, A. et al., Science 224, 1431-1433, Dalbadie-McFarland, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1982) 79, 6409-6413).

본 발명의 항체의 아미노산 서열에 복수개의 아미노산 잔기가 부가된 항체에는, 이들 항체를 포함하는 융합 단백질이 포함된다. 융합 단백질은, 이들 항체와 다른 펩티드 또는 단백질이 융합된 것으로, 본 발명에 포함된다. 융합 단백질을 제작하는 방법은, 본 발명의 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드와 다른 펩티드 또는 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 프레임이 일치하도록 연결하여 이를 발현 벡터에 도입하여, 숙주에서 발현시키면 되기에, 당업자에게 공지의 수법을 사용할 수 있다. 본 발명의 항체와의 융합에 제공되는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드로서는, 예를 들면, FLAG(Hopp, T. P. et al., BioTechnology(1988) 6, 1204-1210), 6개의 His(히스티딘)잔기로 되는 6×His, 10×His, 인플루엔자 응집소(HA), 인간 c-myc의 단편, VSV-GP의 단편, p18HIV의 단편, T7-tag, HSV-tag, E-tag, SV40T 항원의 단편, lck tag, α-tubulin의 단편, B-tag, Protein C의 단편 등의 공지의 펩티드를 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체와의 융합에 제공되는 다른 폴리펩티드로서는, 예를 들면, GST(글루타티온-S-트랜스퍼라아제), HA(인플루엔자 응집소), 면역글로불린 정상영역, β-갈락토시다아제, MBP(말토오스 결합 단백질) 등을 들 수 있다. 시판되고 있는 이들 펩티드 또는 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를, 본 발명의 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드와 융합시키고, 이것에 의해 조제된 융합 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써, 융합 폴리펩티드를 조제할 수 있다.

본 발명의 항체는, 후술하는 그것을 생산하는 세포나 숙주 또는 정제방법에 의해, 아미노산 서열, 분자량, 등전점 또는 당쇄의 유무나 형태 등이 상이할 수 있다. 그러나, 얻어진 항체가 본 발명의 항체와 동등한 기능을 가지고 있는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 예를 들면, 본 발명의 항체를 원핵세포, 예를 들면 대장균에서 발현시킨 경우, 본래의 항체의 아미노산 서열의 N 말단에 메티오닌 잔기가 부가된다. 본 발명의 항체는 이러한 항체도 포함한다.

또한, 본 발명의 약제에 포함되는 c-mpl을 인식하는 항체의 바람직한 태양으로서는, 상기 (1)~(19)의 항체가 인식하는 에피토프를 인식하는 항체를 들 수 있다.

항체가 인식하는 에피토프를 인식하는 항체는 당업자에게 공지의 방법으로 얻는 것이 가능하다. 예를 들면, 전술한 항체가 인식하는 에피토프를 통상의 방법으로 결정하고, 이 에피토프에 포함되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 면역원으로 하여 항체를 제작하는 방법이나, 통상의 방법으로 제작된 항체의 에피토프를 결정하고, 전술한 항체와 에피토프가 동일한 항체를 선택하는 방법 등으로 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서는, 서열번호: 73에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체가 인식하는 에피토프를 인식하는 항체가 특히 바람직하다. 서열번호: 73에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체는, 인간 c-mpl의 26번째의 Glu에서 274번째의 Leu까지의 영역, 바람직하게는 189번째의 Ala에서 245번째의 Gly의 영역, 더욱 바람직하게는 213번째의 Gln에서 231번째의 Ala까지의 영역을 인식하고 있는 것으로 예상된다. 따라서, 인간 c-mpl의 26번째~274번째, 또는 189번째~245번째, 또는 213번째~231번째의 영역을 인식하는 항체도 본 발명에 포함된다.

인간 c-mpl의 아미노산 서열(서열번호: 51)의 26번째~274번째, 또는 189번째~245번째, 또는 213번째~231번째의 영역을 인식하는 항체는, 당업자에게 공지의 방법으로 얻는 것이 가능하여, 예를 들면, 인간 c-mpl의 아미노산 서열(서열번호: 51)의 26번째~274번째, 또는 189번째~245번째, 또는 213번째~231번째의 펩티드를 면역원으로 하여 항체를 제작하는 방법이나, 통상의 방법으로 제작한 항체가 인식하는 에피토프를 결정하여, 본 발명의 항체와 동일한 에피토프를 인식하는 항체를 선택하는 방법 등으로 얻는 것이 가능하다.

c-mpl에 결합하는 항체는 당업자에게 공지의 방법으로 제작할 수 있다. 예를 들면, 단일클론항체 생산 하이브리도마는, 기본적으로는 공지기술을 사용하고, 이하와 같이 하여 제작할 수 있다. 즉, c-mpl 단백질 또는 c-mpl 발현세포를 감작항원으로서 사용하고, 이를 통상의 면역방법에 따라 면역하여, 얻어지는 면역세포를 통상의 세포융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시켜, 통상의 스크리닝법에 의해 단일클론항체 생산 세포를 스크리닝함으로써 제작할 수 있다.

구체적으로는, 단일클론항체를 제작하기 위해서는 다음과 같이 하면 된다. 먼저, 항체 취득의 감작항원으로서 사용되는 c-mpl 단백질을, Genebank:NM_005373에 개시된 c-mpl 유전자/아미노산 서열을 발현시킴으로써 얻는다. 즉, c-mpl을 코드하는 유전자 서열을 공지의 발현 벡터계에 삽입하여 적당한 숙주세포를 형질전환시킨 후, 그 숙주세포 중 또는 배양상청 중에서 목적의 인간 c-mpl 단백질을 공지의 방법으로 정제한다.

다음으로, 이 정제 c-mpl 단백질을 감작항원으로서 사용한다. 또는, c-mpl의 부분 펩티드를 감작항원으로서 사용하는 것도 가능하다. 이때, 부분 펩티드는 인간 c-mpl의 아미노산 서열로부터 화학합성에 의해 얻는 것도 가능하다.

본 발명의 항c-mpl 항체가 인식하는 c-mpl 분자 상의 에피토프는 특정의 것으로 한정되지 않고, c-mpl 분자 상에 존재하는 에피토프라면 어느 에피토프를 인식해도 된다. 따라서, 본 발명의 항c-mpl 항체를 제작하기 위한 항원은, c-mpl 분자 상에 존재하는 에피토프를 포함하는 단편이라면, 어떠한 단편도 사용하는 것이 가능하다.

감작항원으로 면역되는 포유동물로서는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 세포융합에 사용하는 친세포와의 적합성을 고려하여 선택하는 것이 바람직하고, 일반적으로는 설치류의 동물, 예를 들면, 마우스, 랫트, 햄스터, 또는 토끼, 원숭이 등이 사용된다.

감작항원의 동물으로의 면역은, 공지의 방법에 따라 행해진다. 예를 들면, 일반적 방법으로서, 감작항원을 포유동물의 복강내 또는 피하에 주사함으로써 행해진다. 구체적으로는, 감작항원을 PBS(Phosphate-Buffered Saline)나 생리식염수 등으로 적당량으로 희석, 현탁한 것에 목적하는 바에 따라 통상의 애쥬번트, 예를 들면 프로인트 완전 애쥬번트를 적량 혼합하고, 유화한 후, 포유동물에 4-21일마다 수회 투여한다. 또한, 감작항원 면역시에 적당한 담체를 사용하는 것도 가능하다.

이와 같이 포유동물을 면역하고, 혈청 중에 목적하는 항체 레벨이 상승되는지를 확인한 후에, 포유동물로부터 면역세포를 채취하여, 세포융합에 제공되는데, 바람직한 면역세포로서는 특히 비장세포를 들 수 있다.

상기 면역세포와 융합되는 다른 친세포로서, 포유동물의 골수종 세포를 사용한다. 이 골수종 세포는, 공지의 각종 세포주, 예를 들면, P3(P3x63Ag8.653) (J. Immnol.(1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U.1(Current Topics in Microbiology and Immunology(1978) 81, 1-7), NS-1(Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976)6, 511-519), MPC-11(Margulies. D. H. et al., Cell(1976)8, 405-415), SP2/0(Shulman, M. et al., Nature(1978)276, 269-270), FO(deSt. Groth, S. F. et al., J. Immunol. Methods(1980)35, 1-21 ), S194(Trowbridge, I. S. J. Exp. Med.(1978)148, 313-323), R210(Galfre, G. et al., Nature(1979)277, 131-133) 등이 적합하게 사용된다.

상기 면역세포와 골수종 세포의 세포융합은, 기본적으로는 공지의 방법, 예를 들면 쾰러와 밀스테인 등의 방법(Kohler, G. and Milstein, C., Methods Enzymol.(1981)73, 3-46) 등에 준하여 행할 수 있다.

보다 구체적으로는, 상기 세포융합은, 예를 들면 세포융합 촉진제의 존재하에 통상의 영양배양액 중에서 실시된다. 융합 촉진제로서는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜(PEG), 센다이 바이러스(HVJ) 등이 사용되고, 추가적으로 목적하는 바에 따라 융합효율을 높이기 위해 디메틸설폭시드 등의 보조제를 첨가해서 사용하는 것도 가능하다.

면역세포와 골수종 세포의 사용비율은 임의로 설정할 수 있다. 예를 들면, 골수종 세포에 대해 면역세포를 1-10배로 하는 것이 바람직하다. 상기 세포융합에 사용하는 배양액으로서는, 예를 들면, 상기 골수종 세포주의 증식에 적합한 RPMI1640 배양액, MEM 배양액, 기타, 이 종의 세포배양에 사용되는 통상의 배양액이 사용 가능하며, 또한, 소 태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액을 병용하는 것도 가능하다.

세포융합은, 상기 면역세포와 골수종 세포의 소정량을 상기 배양액 중에서 잘 혼합하고, 사전에 37℃ 정도로 가온한 PEG 용액(예를 들면 평균 분자량 1000-6000 정도)을 통상 30-60%(w/v)의 농도로 첨가하여, 혼합함으로써 목적으로 하는 융합세포(하이브리도마)를 형성한다. 계속해서, 적당한 배양액을 축차 첨가하고, 원심하여 상청을 제거하는 조작을 반복함으로써 하이브리도마의 생육에 바람직하지 않은 세포융합제 등을 제거한다.

이와 같이 하여 얻어진 하이브리도마는, 통상의 선택배양액, 예를 들면 HAT 배양액(하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함하는 배양액)으로 배양함으로써 선택된다. 상기 HAT 배양액으로의 배양은, 목적으로 하는 하이브리도마 이외의 세포(비융합세포)가 사멸되기에 충분한 시간(통상, 수일~수주간) 계속한다. 이어서, 통상의 한계희석법을 실시하여, 목적으로 하는 항체를 생산하는 하이브리도마의 스크리닝 및 단일 클로닝을 행한다.

또한, 인간 이외의 동물에 항원을 면역하고 상기 하이브리도마를 얻는 것 외에, 인간 림프구를 인 비트로에서 c-mpl에 감작하고, 감작 림프구를 인간 유래의 영구분열능을 갖는 골수종 세포와 융합시켜, c-mpl로의 결합활성을 갖는 목적하는 인간 항체를 얻는 것도 가능하다(일본국 특허공고 평1-59878호 공보 참조). 또한, 인간 항체 유전자의 모든 레퍼토리를 갖는 트랜스제닉 동물에 항원이 되는 c-mpl을 투여하여 항MPL 항체 생산 세포를 취득하고, 이것을 불사화(不死化)시킨 세포로부터 c-mpl에 대한 인간 항체를 취득해도 된다(국제특허출원 공개번호 WO94/25585호 공보, WO93/12227호 공보, WO92/03918호 공보, WO94/02602호 공보 참조).

이와 같이 하여 제작되는 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마는, 통상의 배양액 중에서 계대배양하는 것이 가능하고, 또한, 액체질소 중에서 장기 보존하는 것이 가능하다.

당해 하이브리도마로부터 단일클론항체를 취득하기 위해서는, 당해 하이브리도마를 통상의 방법에 따라 배양하고, 그 배양 상청으로서 얻는 방법, 또는 하이브리도마를 이것과 적합성이 있는 포유동물에 투여하여 증식시키고, 그의 복수로서 얻는 방법 등이 채용된다. 전자의 방법은 고순도의 항체를 얻기에 적합한 한편, 후자의 방법은 항체의 대량생산에 적합하다.

항체 유전자를 하이브리도마로부터 클로닝하고, 적당한 벡터에 삽입하여, 이것을 숙주에 도입하고, 유전자 재조합기술을 사용하여 생산시킨 재조합형 항체를 제작하는 것도 가능하다(예를 들면, Vandamme, A. M. et al., Eur. J. Biochem.(1990)192, 767-775, 1990 참조).

구체적으로는, 항c-mpl 항체를 생산하는 하이브리도마로부터, 항c-mpl 항체의 가변(V)영역을 코드하는 mRNA를 단리한다. mRNA의 단리는, 공지의 방법, 예를 들면, 구아니딘 초원심법(Chirgwin, J. M. et al., Biochemistry(1979)18, 5294-5299), AGPC법(Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem.(1987)162, 156-159) 등으로 행하여 전 RNA를 조제하고, mRNA Purification Kit(Pharmacia제) 등을 사용하여 목적의 mRNA를 조제한다. 또한, QuickPrep mRNA Purification Kit(Pharmacia제)를 사용함으로써 mRNA를 직접 조제하는 것도 가능하다.

얻어진 mRNA로부터 역전사효소를 사용하여 항체 V영역의 cDNA를 합성한다. cDNA의 합성은, AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit(생화학공업사제) 등을 사용해서 생한다. 또한, cDNA의 합성 및 증폭을 행하는데는, 5'-Ampli FINDERRACE Kit(Clontech제) 및 PCR을 사용한 5'-RACE법(Frohman, M. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1988)85, 8998-9002, Belyavsky, A. et al., Nucleic Acids Res.(1989)17, 2919-2932) 등을 사용할 수 있다.

얻어진 PCR 산물로부터 목적으로 하는 DNA 단편을 정제하고, 벡터 DNA와 연결한다. 또한, 이로부터 재조합 벡터를 제작하고, 대장균 등에 도입하여 콜로니를 선택해서 목적하는 재조합 벡터를 조제한다. 그리고, 목적으로 하는 DNA의 염기서열을 공지의 방법, 예를 들면, 디데옥시뉴클레오티드 체인 터미네이션법 등으로 확인한다.

목적으로 하는 항c-mpl 항체의 V영역을 코드하는 DNA를 얻은 후, 이것을, 목적하는 항체 정상영역(C영역)을 코드하는 DNA를 함유하는 발현 벡터로 삽입한다.

본 발명에서 사용되는 항c-mpl 항체를 제조하는데는, 통상, 항체 유전자를 발현 제어영역, 예를 들면, 인핸서, 프로모터의 제어하에서 발현하도록 발현 벡터에 삽입한다. 다음으로, 이 발현 벡터에 의해, 숙주세포를 형질전환하고, 항체를 발현시킨다.

항체 유전자의 발현은, H사슬 또는 L사슬을 코드하는 폴리뉴클레오티드를 따로따로 발현 벡터에 삽입하여 숙주세포를 동시에 형질전환시켜도 되고, 또는 H사슬 및 L사슬을 코드하는 폴리뉴클레오티드를 단일 발현 벡터에 삽입하여 숙주세포를 형질전환시켜도 된다(WO94/11523호 공보 참조).

벡터로서는, 예를 들면, 대장균을 숙주로 하는 경우에는, 벡터를 대장균(예를 들면, JM109, DH5α, HB101, XL1Blue) 등에서 대량으로 증폭시켜 대량 조제하기 위해, 대장균에서 증폭되기 위한 「ori」를 가지고, 또한 형질전환된 대장균의 선발유전자(예를 들면, 어떠한 약제(암피실린이나 테트라사이클린, 카나마이신, 클로람페니콜)에 의해 판별할 수 있는 약제내성 유전자)를 가지면 특별히 제한은 없다. 벡터의 예로서는, M13계 벡터, pUC계 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script 등을 들 수 있다. 또한, cDNA의 서브클로닝, 절단을 목적으로 한 경우, 상기 벡터 외에, 예를 들면, pGEM-T, pDIRECT, pT7 등을 들 수 있다.

발현 벡터로서는, 예를 들면, 대장균에서의 발현을 목적으로 한 경우는, 벡터가 대장균에서 증폭되는 상기 특징을 갖는 것 외에, 숙주를 JM109, DH5α, HB101, XL1-Blue 등의 대장균으로 한 경우에 있어서는, 대장균에서 효율적으로 발현할 수 있는 프로모터, 예를 들면, lacZ 프로모터(Ward 등, Nature (1989) 341, 544-546; FASEB J.(1992) 6, 2422-2427), araB 프로모터(Better 등, Science (1988) 240, 1041-1043), 또는 T7 프로모터 등을 가지고 있는 것이 불가결하다. 이러한 벡터로서는, 상기 벡터 외에 pGEX-5X-1(파마시아사제), 「QIAexpress system)」(퀴아겐사제), pEGFP, 또는 pET(이 경우, 숙주는 T7 RNA 폴리머라아제를 발현하고 있는 BL21이 바람직하다) 등을 들 수 있다.

또한, 벡터에는, 폴리펩티드 분비를 위한 시그날 서열이 포함되어 있어도 된다. 단백질 분비를 위한 시그날 서열로서는, 대장균의 페리플라즘으로 생산시키는 경우, pelB 시그날 서열(Lei, S. P. et al J. Bacteriol. (1987) 169, 4379)을 사용하면 된다. 숙주세포로의 벡터의 도입은, 예를 들면 염화칼슘법, 전기천공법(electroporation method)을 사용해서 행할 수 있다.

대장균 이외에도, 예를 들면, 포유동물 유래의 발현 벡터(예를 들면 pcDNA3(인비트로겐사제)나, pEGF-BOS(Nucleic Acids Res.1990, 18(17), 5322), pEF, pCDM8), 곤충세포 유래의 발현 벡터(예를 들면 「Bac-to-BAC baculovirus expression system」(기브코 BRL사제), pBacPAK8), 식물 유래의 발현 벡터(예를 들면 pMH1, pMH2), 동물 바이러스 유래의 발현 벡터(예를 들면 pHSV, pMV, pAdexLcw), 레트로바이러스 유래의 발현 벡터(예를 들면 pZIPneo), 효모 유래의 발현 벡터(예를 들면 「Pichia Expression Kit」(인비트로겐사제), pNV11, SP-Q01), 고초균 유래의 발현 벡터(예를 들면 pPL608, pKTH50)를 들 수 있다.

CHO 세포, COS 세포, NIH3T3 세포 등의 동물세포에서의 발현을 목적으로 한 경우에는, 세포 내에서 발현시키기 위해 필요한 프로모터, 예를 들면 SV40 프로모터(Mulligan등, Nature(1979) 277, 108), MMTV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터(Mizushima등, Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322), CMV 프로모터 등을 가지고 있는 것이 불가결하고, 세포로의 형질전환을 선발하기 위한 유전자(예를 들면, 약제(네오마이신, G418 등)에 의해 판별 가능한 약제내성 유전자)를 가지면 더욱 바람직하다. 이러한 특성을 갖는 벡터로서는, 예를 들면, pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, pOP13 등을 들 수 있다.

또한, 유전자를 안정적으로 발현시키고, 또한, 세포 내에서의 유전자의 복제 수의 증폭을 목적으로 하는 경우에는, 핵산 합성경로를 결손한 CHO 세포에 그것을 상보하는 DHFR 유전자를 갖는 벡터(예를 들면, pCHOI 등)를 도입하고, 메토트렉세이트(MTX)에 의해 증폭시키는 방법을 들 수 있으며, 또한, 유전자의 일과성 발현을 목적으로 하는 경우에는, SV40 T 항원을 발현하는 유전자를 염색체 상에 갖는 COS 세포를 사용하여 SV40의 복제 기점을 갖는 벡터(pcD 등)로 형질전환하는 방법을 들 수 있다. 복제 개시점으로서는, 또한, 폴리오마바이러스, 아데노바이러스, 소유두종 바이러스(BPV) 등 유래의 것을 사용하는 것도 가능하다. 또한, 숙주세포계에서 유전자 복제 수 증폭을 위해, 발현 벡터는 선택 마커로서, 아미노글리코시드트랜스퍼라아제(APH) 유전자, 티미딘 키나아제(TK) 유전자, 대장균 크산틴 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라아제(Ecogpt) 유전자, 디히드로엽산 환원효소(dhfr) 유전자 등을 포함할 수 있다.

벡터가 도입되는 숙주세포로서는 특별히 제한은 없고, 예를 들면, 대장균이나 각종 동물세포 등을 사용하는 것이 가능하다. 숙주세포는, 예를 들면, 본 발명의 항체의 제조나 발현을 위한 생산계로서 사용할 수 있다. 폴리펩티드 제조를 위한 생산계는, 인 비트로 및 인 비보의 생산계가 있다. 인 비트로의 생산계로서는, 진핵세포를 사용하는 생산계나 원핵세포를 사용하는 생산계를 들 수 있다.

진핵세포를 사용하는 경우, 예를 들면, 동물세포, 식물세포, 진균세포를 숙주에 사용할 수 있다. 동물세포로서는, 포유류세포, 예를 들면 CHO(J. Exp. Med. (1995) 108, 945), COS, 3T3, 골수종, BHK(baby hamster kidney), HeLa, Vero, 양서류세포, 예를 들면 아프리카발톱개구리 난모세포(Valle, et al., Nature (1981) 291, 358-340), 또는 곤충세포, 예를 들면, Sf9, Sf21, Tn5가 알려져 있다. 본 발명에 있어서는 CHO-DG44, CHO-DXB11, COS7 세포, BHK 세포가 적합하게 사용된다. 동물세포에 있어서, 대량발현을 목적으로 하는 경우에는 특히 CHO 세포가 바람직하다. 숙주세포로의 벡터의 도입은, 예를 들면, 인산칼슘법, DEAE 덱스트란법, 양이온성 리포솜 DOTAP(베링거만하임사제)를 사용한 방법, 전기천공법, 리포펙션법 등의 방법으로 행하는 것이 가능하다.

식물세포로서는, 예를 들면 니코티아나·타바쿰(Nicotiana tabacum) 유래의 세포가 단백질 생산계로서 알려져 있어, 이것을 칼루스배양하면 된다. 진균세포로서는 효모, 예를 들면 사카로미세스(Saccharomyces)속, 예를 들면 사카로미세스·세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스·폼베(Saccharomyces pombe), 사상균, 예를 들면 아스페르길루스(Aspergillus)속, 예를 들면 아스페르길루스·니거(Aspergillus niger)가 알려져 있다.

원핵세포를 사용하는 경우, 세균세포를 사용하는 생산계가 있다. 세균세포로서는 대장균(E. coli), 예를 들면, JM109, DH5α, HB101 등을 들 수 있고, 기타, 고초균이 알려져 있다.

본 방법에 있어서는, 이어서 상기 숙주세포를 배양한다. 목적으로 하는 폴리뉴클레오티드에 의해 형질전환된 세포를 인 비트로에서 배양함으로써, 항체가 얻어진다. 배양은 공지의 방법에 따라서 행할 수 있다. 예를 들면 동물세포의 배양액으로서, 예를 들면 DMEM, MEM, RPMI1640, IMDM을 사용할 수 있다. 이때, FBS, 소 태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액을 병용하는 것도 가능하고, 무혈청 배양해도 된다. 배양시의 pH는 약 6~8인 것이 바람직하다. 배양은 통상 약 30~40℃에서 약 15~200시간 행하고, 필요에 따라 배지의 교환, 통기, 교반을 추가한다.

한편, 인 비보에서 폴리펩티드를 생산시키는 계로서는, 예를 들면 동물을 사용하는 생산계나 식물을 사용하는 생산계를 들 수 있다. 이들의 동물 또는 식물에 목적으로 하는 폴리뉴클레오티드를 도입하고, 동물 또는 식물의 체내에서 폴리펩티드를 생산시켜서, 회수한다. 본 발명에 있어서의 「숙주」란 이들의 동물, 식물을 포함한다.

동물을 사용하는 경우, 포유류동물, 곤충을 사용하는 생산계가 있다. 포유류동물로서는 염소, 돼지, 양, 마우스, 소 등을 사용할 수 있다(Vicki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993). 또한, 포유류동물을 사용하는 경우, 트랜스제닉 동물을 사용할 수 있다.

예를 들면, 목적으로 하는 폴리뉴클레오티드를 염소 β 카제인과 같은 유즙 중에 고유하게 생산되는 폴리펩티드를 코드하는 유전자와의 융합 유전자로서 조제한다. 이어서, 이 융합유전자를 포함하는 DNA 단편을 염소의 배(胚)로 주입하고, 이 배를 암염소로 이식한다. 배를 수용한 염소로부터 태어나는 트랜스제닉 염소 또는 그 자손이 생산하는 유즙으로부터, 목적의 항체를 얻을 수 있다. 트랜스제닉 염소로부터 생산되는 항체를 포함하는 유즙량을 증가시키기 위해, 적절히 호르몬을 트랜스제닉 염소에 사용해도 된다(Ebert, K.M. et al., Bio/Technology(1994) 12, 699-702).

또한, 곤충으로서는, 예를 들면 누에를 사용할 수 있다. 누에를 사용하는 경우, 목적의 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 삽입한 바큘로바이러스를 누에에 감염시킴으로써, 이 누에의 체액으로부터 목적의 항체를 얻을 수 있다(Susumu, M. et al., Nature (1985) 315, 592-594).

또한, 식물을 사용하는 경우, 예를 들면 담배를 사용할 수 있다. 담배를 사용하는 경우, 목적으로 하는 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 식물발현용 벡터, 예를 들면 pMON 530에 삽입하고, 이 벡터를 아그로박테리움·투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)와 같은 박테리아에 도입한다. 이 박테리아를 담배, 예를 들면 니코티아나·타바쿰(Nicotiana tabacum)에 감염시키고, 본 담배의 잎으로부터 목적하는 항체를 얻을 수 있다(Julian K.-C. Ma et al., Eur. J. Immunol.(1994) 24, 131-138).

이것에 의해 얻어진 항체는, 숙주세포내 또는 세포외(배지 등)로부터 단리하여, 실질적으로 순수하고 균일한 항체로서 정제할 수 있다. 항체의 분리, 정제는 통상의 폴리펩티드의 정제에서 사용되고 있는 분리, 정제방법을 사용하면 되고, 조금도 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 크로마토그래피 칼럼, 필터, 한외여과, 염석, 용매침전, 용매추출, 증류, 면역침강, SDS-폴리아크릴아미드겔 전기영동, 등전점 전기영동법, 투석, 재결정 등을 적절히 선택, 조합하면 폴리펩티드를 분리, 정제할 수 있다.

크로마토그래피로서는, 예를 들면 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography), 이온교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔여과, 역상 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피 등을 들 수 있다(Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996). 이들 크로마토그래피는 액상 크로마토그래피, 예를 들면 HPLC, FPLC 등의 액상 크로마토그래피를 사용하여 행할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에 사용하는 칼럼으로서는, 프로테인 A 칼럼, 프로테인 G 칼럼을 들 수 있다. 예를 들면, 프로테인 A를 사용한 칼럼으로서 Hyper D, POROS, Sepharose F.F.(Pharmacia) 등을 들 수 있다.

또한, 항체의 정제 전 또는 정제 후에 적당한 단백질 수식효소를 작용시킴으로써, 임의로 수식을 가하는 것과, 부분적으로 펩티드를 제거하는 것도 가능하다. 단백질 수식효소로서는 예를 들면 트립신, 키모트립신, 리실 엔도펩티다아제, 프로테인 키나아제, 글루코시다아제 등이 사용된다.

또한, 본 발명의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트는, 저분자화합물이어도 된다. 본 발명의 저분자화합물은, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진하는 작용, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진하는 작용, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키는 작용, 또는 조혈능의 회복을 촉진하는 작용을 갖는 한 어떠한 것이어도 상관없지만, 바람직한 태양으로서, 이하의 화학식으로 나타내어지는 화합물, {5-[(2-{1-[5-(3,4-디클로로페닐)-4-히드록시-3-티에닐]에틸리덴}히드라지노)카르보닐-2-티오펜카르복실산을 들 수 있다(Blood First Edition Paper, prepublished online on February 16, 2006; DOI10.1182/blood-2005-11-4433).

또한 본 발명의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트로서, Amgen AMG-531 (recombinant megakaryopoiesis stimulating protein), SB297115/Eltrombopag(Gsk’s oral TPO-R agonistic compound), peg-TPOmp, YM477, NIP004를 예로 드는 것도 가능하다. Amgen AMG-531은 Fc domain과 Peptide receptor binding domain을 갖는 분자량 60,000D의 단백질로, 하기 표 1에 기재된 성질을 갖는다(Clinical Pharmacology & Therapeutics. 76(6), 628, 2004, Blood, volume 104, abstract #511, 2004).

또한, SB297115/Eltrombopag는, 이하의 화학식으로 나타내어지는 화합물로, 하기 표 2에 기재된 성질을 갖는다(Blood. Volume 104, abstract #2909. 2004).

peg-TPOmp는, Phage display combinatorial peptide library로부터 발견된 PEG화 펩티드로, 이하의 화학식으로 특징지을 수 있다. 또한, 하기 표 4에 기재된 성질을 갖는다(Blood Volume 106, number 11 abstract #1249, 2005).

또한, 본 발명의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트로서, YM477을 예로 드는 것도 가능하다. YM477에 관해서는, Blood volume 106, number 11 abstract #2298, 2005에, 그 상세가 개시되어 있다.

c-mpl을 인식하는 항체는, 당업자에게 공지의 방법으로 제제화하는 것이 가능하다. 예를 들면, 물 또는 그 이외의 약학적으로 허용 가능한 액체와의 무균성 용액, 또는 현탁액제의 주사제의 형태로 비경구적으로 사용할 수 있다. 예를 들면, 약리학상 허용되는 담체 또는 매체, 구체적으로는, 멸균수나 생리식염수, 식물유, 유화제, 현탁제, 계면활성제, 안정제, 향미제, 부형제, 비히클, 방부제, 결합제 등과 적절히 조합하여, 일반적으로 인정된 제약 실시에 요구되는 단위용량 형태로 혼화함으로써 제제화하는 것을 생각할 수 있다. 이들 제제에 있어서의 유효성분량은 지시된 범위의 적당한 용량이 얻어지도록 하는 것이다.

주사를 위한 무균 조성물은 주사용 증류수와 같은 비히클을 사용하여 통상의 제제 실시에 따라 처방할 수 있다.

주사용 수용액으로서는, 예를 들면 생리식염수, 포도당이나 기타 보조약을 포함하는 등장액, 예를 들면 D-소르비톨, D-만노오스, D-만니톨, 염화나트륨을 들 수 있고, 적당한 용해보조제, 예를 들면 알코올, 구체적으로는 에탄올, 폴리알코올, 예를 들면 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 비이온성 계면활성제, 예를 들면 폴리소르베이트 80(TM), HCO-50과 병용해도 된다.

유성액으로서는 참기름, 대두유를 들 수 있고, 용해보조제로서 안식향산벤질, 벤질알코올과 병용해도 된다. 또한, 완충제, 예를 들면 인산염완충액, 초산나트륨완충액, 무통화제, 예를 들면, 염화프로카인, 안정제, 예를 들면 벤질알코올, 페놀, 산화방지제와 배합해도 된다. 조제된 주사액은 통상, 적당한 앰플에 충전시킨다.

투여는 바람직하게는 비경구투여이고, 구체적으로는 주사제형, 경비투여제형, 경폐투여제형, 경피투여형 등을 들 수 있다. 주사제형의 예로서는, 예를 들면, 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다.

또한, 환자의 연령, 증상에 따라 적절히 투여방법을 선택할 수 있다. 항체 또는 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 의약 조성물의 투여량으로서는, 예를 들면, 1회당 체중 1 ㎏당 0.0001 ㎎~1000 ㎎의 범위에서 선택하는 것이 가능하다. 또는, 예를 들면, 환자당 0.001~100000 ㎎/body의 범위에서 투여량을 선택할 수 있으나, 이들 수치에 반드시 제한되는 것은 아니다. 투여량, 투여방법은, 환자의 체중이나 연령, 증상 등에 따라 변동되나, 당업자라면 적절히 선택하는 것이 가능하다.

또한 본 발명의 약제의 투여시기는 한정되지 않고, 예를 들면 조혈 줄기세포의 증식을 촉진시키고자 할 때, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진시키고자 할 때, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키고자 할 때, 또는 조혈능을 회복시키고자 할 때에 투여할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제는 골수 조혈기능이 저하된 환자에 대해 행해지는 조혈 줄기세포 이식시에 투여할 수 있다. 본 발명의 약제는, 단제 투여에 의해, 조혈 줄기세포 뿐 아니라, 골수계 세포 및/또는 림프구계 세포의 골수에 있어서의 생착증강을, 용량 의존적 경향으로 나타낸다.

본 발명의 약제는, 이식 직후부터의 일정 기간 사이에 어느 정도의 고농도의 양을 투여함으로써, 조혈 줄기세포의 골수 정착 촉진효과를 얻을 수 있다(실시예 3을 참조). 본 발명의 약제가 투여되는 이식 직후부터의 일정 기간 및 투여량은, 당업자라면, 본 발명의 약제의 투여를 필요로 하는 환자의 증상, 연령 등을 고려하여, 적절히 설계할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제가 투여되는 일정 기간(투여 시기)으로서는, 이것에 한정되는 것은 아니나, 이식일 또는 그 익일부터 3일간 이상, 바람직하게는 7일간~28일간 또는 그 이상을 들 수 있다. 또한 투여량은, 골수 이식환자의 내재혈 중 TPO 농도의 10배 이상, 바람직하게는 5배 이상, 보다 바람직하게는 2배 이상의 양을 투여하는 것이 가능하나, 이들에 한정되지 않고, 이식 후 일정 기간 이상, 혈중의 약제농도를 유지하기 위해 필요한 양을 투여하는 것이 가능하다.

또한 본 발명의 약제가 1회의 조혈 줄기세포 이식에 있어서 투여되는 횟수는 제한되지 않고, 조혈 줄기세포 이식시, 및 조혈 줄기세포 이식 후의 각각에 있어서, 임의의 횟수 투여하는 것이 가능하다. 본 발명의 약제의 투여시기, 투여량, 및 투여횟수는, 조혈 줄기세포 이식을 받은 환자의 증상에 따라 적절히 판단하는 것이 가능하나, 예를 들면 전술한 투여시기, 투여량을 드는 것이 가능하다.

본 발명의 약제는, 조혈 줄기세포 이식에 사용된다. 또한 본 발명의 약제는, 조혈 줄기세포 이식 후에 사용된다. 본 발명에 있어서의 조혈 줄기세포 이식에는, 이것에 한정되는 것은 아니지만, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식, 제대혈 이식이 포함된다. 본 발명의 약제가 사용되는 조혈 줄기세포 이식의 특히 바람직한 태양으로서는, 인간 제대혈 이식을 들 수 있다.

본 발명의 약제의 투여부위는, 특별히 한정되는 것은 아니나, 피하주사, 정맥주사, 경구투여 등을 들 수 있다. 본 발명에 있어서는, 점적에 의한 정맥투여가 특히 바람직하다. 또한 본 발명의 약제는, 조혈 줄기세포와 함께 투여하는 것도 가능하다. 조혈 줄기세포와 함께 투여하는 경우, 본 발명의 약제와 조혈 줄기세포를 동시에 동일 부위에 투여해도 되고, 상이한 시기에 각각의 부위에 투여해도 된다. 동일 부위에 투여하는 경우, 예를 들면 정맥으로부터 투여하는 것이 가능하다. 또한 투여시기는, 본 발명의 약제를 단독으로 투여하는 경우와 동일한 시기를 선택하는 것이 가능하다.

한편, 본 발명의 약제와 조혈 줄기세포를 상이한 시기에 투여하는 경우, 이들 중 어느 쪽을 먼저 투여해도 상관없다. 또한, 이들 2개의 투여 간격도 제한되지 않는다.

본 발명의 약제를 조혈 줄기세포와 함께 투여하는 경우, 조혈 줄기세포는, 자기에 유래하는 것(자가이식)이어도, 타인으로부터 제공된 것(타가이식)이어도 된다. 조혈 줄기세포의 취득은, 당업자에게 주지의 방법에 따라 행하는 것이 가능하고, 예를 들면, 이하의 문헌에 기재된 방법으로 취득할 수 있다.

본 발명에 있어서는, 조혈 줄기세포 이식을 행하는 질환은 조금도 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는 AML(급성 골수성 백혈병), ALL(급성 림프성 백혈병), CML(만성 골수성 백혈병), MDS(골수 이형성 증후군) 또는 AA(재생 불량성 빈혈) 악성 림프종, 성인 T세포 백혈병을 들 수 있다.

본 발명은, 본 발명자들이 조혈 줄기세포와 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트와의 접촉에 의해, 분화처 세포인 림프계 세포의 수 및/또는 골수계 세포의 수가 증가하는 것을 발견한 것을 토대로 한다. 따라서 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 약제로서, 상기 아고니스트와 조혈 줄기세포의 접촉에 의해, 조혈 줄기세포의 분화처 세포인 림프계 세포의 수 및/또는 골수계 세포의 수를 증가시키기 위한 약제에 관한 것이다. 또한 본 발명은, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는 약제로서, 점적에 의해 정맥으로부터 조혈 줄기세포와 함께 투여함으로써, 조혈 줄기세포의 분화처 세포인 림프계 세포의 수 및/또는 골수계 세포의 수를 증가시키기 위한 약제에 관한 것이다. 아고니스트, 조혈 줄기세포, 림프계 세포, 골수계 세포, 투여시기, 투여량 등에 관한 설명은, 전술한 바와 같다.

또한 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은, 참조로써 본 명세서에 포함된다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명하나 본 발명은 이들 실시예에 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1] 인간 조혈계 재구축 마우스 골수 중 인간 혈구세포 생착수에 대한 TPO 수용체 아고니스트의 영향

인간 제대혈 유래 조혈 줄기세포의 이식 후의 초기단계에 있어서, 인간 조혈계 재구축 마우스 골수 중 인간 혈구세포 생착수에 대한 서열번호: 73에 기재된 아미노산 서열로 되는 sc(Fv)2 항체(hVB22 u2-wz4:sc(Fv)2)의 영향을 검토하는 것을 목적으로, 이하의 방법에 따라 실험을 실시하였다. 또한, 서열번호: 73에 기재된 아미노산 서열로 되는 sc(Fv)2 항체는, WO2005/056604에 기재된 방법으로 조제하는 것이 가능하다.

방법

마우스는 순화(馴化)된 NOD.CB17-Prkdc<scid>/J, 6w, ♂를 사용하였다. 마우스에, 3.0 Gy의 X선을 전신 조사한 후, 항아시알로 GM1 항체를, 조사 당일부터 10일에 1회 i.p. 투여하였다. 조사 익일에, 인간 제대혈 유래 CD34 양성세포를 마우스 한마리당 5×10⁴개 꼬리정맥으로부터 이식하였다. 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 투여는, 이식 익일부터 연속해서 10일간 행하고, 그 후에는 5일 투여 2일 휴식으로 투여를 행하였다. 투여량은 아침 0.25 ㎎/5 mL/㎏, 저녁 2 ㎎/5 mL/㎏으로 하고, 간격 8시간, s.c., 1일 2회 통기(通期) 3주간 투여하였다(n=10). 비히클로서, 0.02% Tween 80을 포함하는 20 mmoL/L 구연산완충액을, 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체와 동일하게 투여하였다. 이식 후 3주째에 골수를 채취하고, EPIX XL에 의한 FACS 해석을 실시하였다. 인간 세포의 절대수는 flow count(Beckman)를 사용해서 측정하였다.

결과, 고찰

마우스 좌우 대퇴골에 존재하는 인간 세포수를 해석하였다. 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체 투여군에 있어서, 당초 목적으로 한 인간 CD34 양성세포수 뿐 아니라, CD45 양성세포수, CD41 양성세포수, CD19 양성세포수, CD33 양성세포수가 비히클군과 비교하여 통계 유의하게 증가하였다(도 1). 이들 결과는, c-mpl 아고니스트인 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 투여가, 인간 거핵구 특이적 분화유도에 더하여, 조혈계 CD34 양성세포의 생착수의 증가와 그에 따른 각 혈구계 세포수의 증가에 기여한 것으로 생각된다.

[실시예 2] 인간 조혈계 재구축 마우스 골수 중 인간 CFU-Meg 콜로니수에 대한 TPO 수용체 아고니스트의 영향

인간 제대혈 유래 조혈 줄기세포 이식 후, 인간 CFU-Meg 콜로니수에 대한 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 영향을 검토하는 것을 목적으로, 이하의 실험을 실시하였다.

방법

마우스는 순화된 NOD.CB17-Prkdc<scid>/J, 6w, ♂를 사용하였다. 3.0 Gy의 X선을 전신 조사 후, 항아시알로 GM1 항체를 조사 당일부터 10일에 1회, i.p. 투여하였다. 조사 익일에 인간 제대혈 유래 CD34 양성세포를 5×10⁴/mouse, 꼬리정맥으로부터 이식하였다. 이식 익일부터 연속 투여로 10일간, 그 후에는 5일 투여 2일 휴식으로 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체를, 아침 0.25 ㎎/5 mL/㎏, 간격 8시간, 저녁 2 ㎎/5 mL/㎏, s.c., 1일 2회 통기 3주간 투여하였다(n=10). 비히클로서, 0.02% Tween 80을 포함하는 20 mmoL/L 구연산완충액을, 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체와 동일하게 투여하였다. 이식 후 3주째에 골수세포를 채취하고, Mega Cult-C(StemCell Technologies)를 사용해서, 각 마우스 대퇴골 하나에 포함되는 골 수세포를 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체와 함께 13일간 배양하였다. 인간 CFU-Meg 콜로니수는 광학현미경하에서 CD41 양성의 50 cells/colony 이상의 것을 계수하였다.

결과, 고찰

서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체 투여군의 골수에는, 비히클 투여군과 비교하여, 통계 유의하게 보다 많은 CFU-Meg 콜로니가 존재하는 것이 명확해졌다(도 2).

[실시예 3] 인간 조혈계 재구축 마우스 골수 중 인간 혈구세포 생착수에 대한 TPO 수용체 아고니스트의 용량 의존적인 효과

인간 제대혈 유래 조혈 줄기세포 이식 후, 인간 조혈계 재구축 마우스 골수 중 인간 혈구세포 생착수에 대한 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 용량 의존적인 효과를 검토하는 것을 목적으로, 이하의 실험을 실시하였다.

방법

마우스는 순화된 NOD.CB17-Prkdc<scid>/J, 6w, ♂를 사용하였다. 3.0 Gy의 X선을 전신 조사 후, 항아시알로 GM1 항체를 조사 당일 및 8일 후에, i.p. 투여하였다. 조사 익일에 인간 제대혈 유래 CD34 양성세포를 5×10⁴/mouse, 꼬리정맥으로부터 이식하였다. 이식 익일부터 연속 투여로 10일간, 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체를, 이하의 3가지 용량으로 투여하였다(s.c., 각군 n=9).

·고용량 투여군(아침 0.25 ㎎/㎏, 간격 8시간, 저녁 2 ㎎/㎏/day)

·중용량 투여군(아침 0.05 ㎎/㎏, 간격 8시간, 저녁 0.2 ㎎/㎏/day)

·저용량 투여군(아침 0.01 ㎎/㎏, 간격 8시간, 저녁 0.02 ㎎/㎏/day)

고용량, 중용량, 저용량 투여 각 군에 있어서, 투여기간 중의 말초혈 중에서의 약제 최소농도가, 각각 50 ng/㎖, 10 ng/㎖, 2 ng/㎖가 되도록 설정하였다.

비히클로서 0.02% Tween 80을 포함하는 20 mmoL/L sodium citrate/150 mM NaCl 완충액(pH 6.5)을, 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체와 동일하게 투여하였다. 이식 후 2주째에 골수세포를 채취하고, FACS 해석을 실시하였다. 인간 세포의 절대수는 flow count(Beckman)를 사용해서 측정하였다.

결과, 고찰

마우스 좌우 대퇴골에 존재하는 인간 세포수를 해석하였다. CD34 양성세포수 뿐 아니라, CD45 양성세포수, CD41 양성세포수, CD19 양성세포수, CD33 양성세포수, CD38 양성세포수의 증가가, 용량 의존적 경향으로 확인되었다(도 3). 이것은, 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 투여가, 보다 직접적으로 약효에 관여하고 있을 가능성을 시사한다. 또한, 투여 용량으로 약효를 조절할 수 있을 가능성을 시사한다.

마우스의 내재 TPO 농도는 약 1 ng/㎖ 정도(문헌값, 및 in house 실측값)로, X선 조사에 의해 5-10배 정도 상승한다(마우스 in house data. 인간 임상은 마찬가지로 정상값 80 pg/㎖ 정도에서 1-3 ng/㎖ 정도까지 올라가는 것이 알려져 있다). 본 실시예에 있어서, 내재 TPO 이상의 농도의 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체를 투여함으로써, 용량 의존적으로 약효가 상승되는 것이 확인되었다.

또한 본 실시예에 있어서는, 방법 항목에 나타내어져 있는 바와 같이, 혈중의 서열번호: 73에 기재된 sc(Fv)2 항체의 농도의 바닥값이 유지되도록, 투여계획이 설계되어 있다.

본 발명에 의해, 새로운 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 및 조혈능 회복 촉진제가 제공되었다. 본 발명의 약제는, 그 활성성분으로서 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 함유한다.

본 발명의 새로운 조혈 줄기세포의 증식 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제, 및 조혈능 회복 촉진제는, 조혈 줄기세포 이식(특히 제대혈 이식) 후에 단독 투여(G-CSF나 erythropoietin의 병용 없이)하는 것만으로 효과를 기대할 수 있는 것을, 그 특징으로 한다.

본 발명에 있어서 제공되는 상기 약제는, 예를 들면 급성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수 이변형 증후군, 급성 림프구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병, 재생 불량성 빈혈, 악성 림프종 등, 조혈 줄기세포 이식이 적용되는 질환을 치료하기 위해 조혈 줄기세포 이식(골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식, 제대혈 이식)을 행할 때, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진시키는데, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진시키는데, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 촉진시키는데, 또는 조혈능의 회복을 촉진하는데 유용하다.

특히 제대혈 이식에 있어서는, 이식 후의 혈소판의 회복 지연이 문제가 되고 있다. 이식시의 골수에 있어서의 조혈 줄기세포의 생착 촉진은, c-mpl 아고니스트의 본래의 작용인 거핵구 분화 증식작용과 협조하여 혈소판의 회복 촉진을 초래하기 때문에, 본 발명의 약제는 유용하다.

또한, 종래의 조혈 줄기세포 이식에 있어서는 G-CSF가 사용되고 있는데, G-CSF는 작용이 호중구계로 특화되어 있다고 하는 문제가 있다. 이에 대해 TPO는, 거핵구 뿐 아니라 줄기세포에 작용함으로써, 보다 다양한 세포계열을 회복시키는 것이 가능할 것으로 생각된다. 또한 TPO는 현재 인가되어 있는 G-CSF나 EPO와의 시너지 효과도 충분히 기대된다. 본 발명의 약제는, 이러한 관점에서도 유용하다.

SEQUENCE LISTING <110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> Hematopoietic stem cell expansion and engraftment enhancer <130> C1-A0611Y1P <150> JP 2006-165279 <151> 2006-06-14 <150> JP 2006-350553 <151> 2006-12-26 <160> 84 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asn Ser Trp Met Asn 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg 1 5 10 15 Val <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 7 <211> 411 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(411) <400> 7 atg gaa tgg cct ttg atc ttt ctc ttc ctc ctg tca gga act gca ggt 48 Met Glu Trp Pro Leu Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 gtc cac tcc cag gtt cag ctg cag cag tct gga cct gag ctg gtg aag 96 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 cct ggg gcc tca gtg aag att tcc tgc aag gct tct ggc tat gca ttc 144 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe 35 40 45 act aac tcc tgg atg aac tgg gtg aag cag agg cct gga aag ggt ctt 192 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg att gga cgg att tat cct gga gat gga gaa act atc tac aat 240 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 ggg aaa ttc agg gtc aag gcc aca ctg act gca gac aaa tcc tcc agc 288 Gly Lys Phe Arg Val Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 aca gcc tac atg gat atc agc agc ctg aca tct gag gac tct gcg gtc 336 Thr Ala Tyr Met Asp Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 tac ttc tgt gca aga ggc tat gat gat tac tcg ttt gct tac tgg ggc 384 Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 caa ggg act ctg gtc act gtc tct gca 411 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 130 135 <210> 8 <211> 137 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Met Glu Trp Pro Leu Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Asp Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 130 135 <210> 9 <211> 396 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(396) <400> 9 atg agg tgc cta gct gag ttc ctg ggg ctg ctt gtg ttc tgg att cct 48 Met Arg Cys Leu Ala Glu Phe Leu Gly Leu Leu Val Phe Trp Ile Pro 1 5 10 15 gga gcc att ggg gat att gtg atg act cag gct gca ccc tct ata cct 96 Gly Ala Ile Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro 20 25 30 gtc act cct gga gag tca gta tcc atc tcc tgt agg tct agt aag agt 144 Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 ctc ctg cat agt aat ggc aac act tac ttg tat tgg ttc ctg cag agg 192 Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg 50 55 60 cca ggc cag tct cct caa ctc ctg ata tat cgg atg tcc aac ctt gcc 240 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala 65 70 75 80 tca gga gtc cca gat agg ttc agt ggc agt ggg tca gga act gct ttc 288 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe 85 90 95 aca ctg aga atc agt aga gtg gag gct gag gat gtg ggt gtt tat tac 336 Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 tgt atg caa cat ata gaa tat cct ttt acg ttc gga tcg ggg acc aag 384 Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 115 120 125 ctg gaa ata aaa 396 Leu Glu Ile Lys 130 <210> 10 <211> 132 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Met Arg Cys Leu Ala Glu Phe Leu Gly Leu Leu Val Phe Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ile Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro 20 25 30 Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe 85 90 95 Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys 130 <210> 11 <211> 762 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 11 atggaatggc ctttgatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactcccag 60 gttcagctgc agcagtctgg acctgagctg gtgaagcctg gggcctcagt gaagatttcc 120 tgcaaggctt ctggctatgc attcactaac tcctggatga actgggtgaa gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcaaggc cacactgact gcagacaaat cctccagcac agcctacatg 300 gatatcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctact tctgtgcaag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc aggtggtggt 420 ggttcggata ttgtgatgac tcaggctgca ccctctatac ctgtcactcc tggagagtca 480 gtatccatct cctgtaggtc tagtaagagt ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg 540 tattggttcc tgcagaggcc aggccagtct cctcaactcc tgatatatcg gatgtccaac 600 cttgcctcag gagtcccaga taggttcagt ggcagtgggt caggaactgc tttcacactg 660 agaatcagta gagtggaggc tgaggatgtg ggtgtttatt actgtatgca acatatagaa 720 tatcctttta cgttcggatc ggggaccaag ctggaaataa aa 762 <210> 12 <211> 254 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Met Glu Trp Pro Leu Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Asp Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile 130 135 140 Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser 145 150 155 160 Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly 165 170 175 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln 180 185 190 Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg 195 200 205 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg 210 215 220 Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu 225 230 235 240 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 245 250 <210> 13 <211> 1572 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 13 atggaatggc ctttgatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactcccag 60 gttcagctgc agcagtctgg acctgagctg gtgaagcctg gggcctcagt gaagatttcc 120 tgcaaggctt ctggctatgc attcactaac tcctggatga actgggtgaa gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcaaggc cacactgact gcagacaaat cctccagcac agcctacatg 300 gatatcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctact tctgtgcaag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc aggtggtggt 420 ggttcgggtg gtggtggttc gggtggtggc ggatcggata ttgtgatgac tcaggctgca 480 ccctctatac ctgtcactcc tggagagtca gtatccatct cctgtaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc tgcagaggcc aggccagtct 600 cctcaactcc tgatatatcg gatgtccaac cttgcctcag gagtcccaga taggttcagt 660 ggcagtgggt caggaactgc tttcacactg agaatcagta gagtggaggc tgaggatgtg 720 ggtgtttatt actgtatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggatc ggggaccaag 780 ctggaaataa aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gttcagctgc agcagtctgg acctgagctg gtgaagcctg gggcctcagt gaagatttcc 900 tgcaaggctt ctggctatgc attcactaac tcctggatga actgggtgaa gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcaaggc cacactgact gcagacaaat cctccagcac agcctacatg 1080 gatatcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctact tctgtgcaag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc aggtggtggt 1200 ggttcgggtg gtggtggttc gggtggtggc ggatcggata ttgtgatgac tcaggctgca 1260 ccctctatac ctgtcactcc tggagagtca gtatccatct cctgtaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc tgcagaggcc aggccagtct 1380 cctcaactcc tgatatatcg gatgtccaac cttgcctcag gagtcccaga taggttcagt 1440 ggcagtgggt caggaactgc tttcacactg agaatcagta gagtggaggc tgaggatgtg 1500 ggtgtttatt actgtatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggatc ggggaccaag 1560 ctggaaataa aa 1572 <210> 14 <211> 524 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Met Glu Trp Pro Leu Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Asp Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala 145 150 155 160 Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp 340 345 350 Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu 355 360 365 Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 16 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 17 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 20 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 21 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 23 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 24 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 25 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 27 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 30 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 31 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 33 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 35 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 35 caggtgcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactcctgga tgaactgggt gaggcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg gatgggacgg atttatcctg gagatggaga aactatctac 180 aatgggaaat tcagggtcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctat 300 gatgattact cgtttgctta ctggggccag ggaaccacgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 36 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 37 caggtgcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactcctgga tgaactgggt gaggcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg ggttggacgg atttatcctg gagatggaga aactatctac 180 aatgggaaat tcagggtcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctat 300 gatgattact cgtttgctta ctggggccag ggaaccacgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 38 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 39 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 39 caggtgcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactcctgga tgaactggat caggcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaga aactatctac 180 aatgggaaat tcagggtcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctat 300 gatgattact cgtttgctta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 40 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 41 gatattgtga tgactcagtc tgcactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttccagcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagcttttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaacatat agaatatcct 300 tttacgttcg gccaagggac caaactggaa atcaaa 336 <210> 42 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 43 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 gatattgtga tgactcagtc tgcactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagcttttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaacatat agaatatcct 300 tttacgttcg gccaagggac caaactggaa atcaaa 336 <210> 44 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 45 <211> 1572 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 atggactgga cctggaggtt cctctttgtg gtggcagcag ctacaggtgt ccagtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat gggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 420 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 480 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc agcagaagcc agggcagtct 600 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 660 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 720 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 780 ctggaaatca aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 900 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtggat gggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 1080 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 1200 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 1260 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc agcagaagcc agggcagtct 1380 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 1440 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 1500 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 1560 ctggaaatca aa 1572 <210> 46 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp 340 345 350 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 355 360 365 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 47 <211> 1572 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 atggactgga cctggaggtt cctctttgtg gtggcagcag ctacaggtgt ccagtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtgggt tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 420 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 480 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggtacc tgcagaagcc agggcagtct 600 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 660 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 720 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 780 ctggaaatca aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 900 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtgggt tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 1080 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 1200 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 1260 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggtacc tgcagaagcc agggcagtct 1380 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 1440 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 1500 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 1560 ctggaaatca aa 1572 <210> 48 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp 340 345 350 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 355 360 365 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 49 <211> 1572 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 49 atggactgga cctggaggtt cctctttgtg gtggcagcag ctacaggtgt ccagtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actggatcag gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accctggtca ccgtctcttc aggtggtggt 420 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 480 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggtacc tgcagaagcc agggcagtct 600 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 660 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 720 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 780 ctggaaatca aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 900 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actggatcag gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 1080 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accctggtca ccgtctcttc aggtggtggt 1200 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctgca 1260 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggtacc tgcagaagcc agggcagtct 1380 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 1440 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 1500 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 1560 ctggaaatca aa 1572 <210> 50 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ala 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Ile Arg Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp 340 345 350 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 355 360 365 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ser Ala Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 51 <211> 635 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Met Pro Ser Trp Ala Leu Phe Met Val Thr Ser Cys Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Pro Gln Asn Leu Ala Gln Val Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Leu Ala 20 25 30 Ser Asp Ser Glu Pro Leu Lys Cys Phe Ser Arg Thr Phe Glu Asp Leu 35 40 45 Thr Cys Phe Trp Asp Glu Glu Glu Ala Ala Pro Ser Gly Thr Tyr Gln 50 55 60 Leu Leu Tyr Ala Tyr Pro Arg Glu Lys Pro Arg Ala Cys Pro Leu Ser 65 70 75 80 Ser Gln Ser Met Pro His Phe Gly Thr Arg Tyr Val Cys Gln Phe Pro 85 90 95 Asp Gln Glu Glu Val Arg Leu Phe Phe Pro Leu His Leu Trp Val Lys 100 105 110 Asn Val Phe Leu Asn Gln Thr Arg Thr Gln Arg Val Leu Phe Val Asp 115 120 125 Ser Val Gly Leu Pro Ala Pro Pro Ser Ile Ile Lys Ala Met Gly Gly 130 135 140 Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gln Ile Ser Trp Glu Glu Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 Ile Ser Asp Phe Leu Arg Tyr Glu Leu Arg Tyr Gly Pro Arg Asp Pro 165 170 175 Lys Asn Ser Thr Gly Pro Thr Val Ile Gln Leu Ile Ala Thr Glu Thr 180 185 190 Cys Cys Pro Ala Leu Gln Arg Pro His Ser Ala Ser Ala Leu Asp Gln 195 200 205 Ser Pro Cys Ala Gln Pro Thr Met Pro Trp Gln Asp Gly Pro Lys Gln 210 215 220 Thr Ser Pro Ser Arg Glu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Glu Gly Gly Ser 225 230 235 240 Cys Leu Ile Ser Gly Leu Gln Pro Gly Asn Ser Tyr Trp Leu Gln Leu 245 250 255 Arg Ser Glu Pro Asp Gly Ile Ser Leu Gly Gly Ser Trp Gly Ser Trp 260 265 270 Ser Leu Pro Val Thr Val Asp Leu Pro Gly Asp Ala Val Ala Leu Gly 275 280 285 Leu Gln Cys Phe Thr Leu Asp Leu Lys Asn Val Thr Cys Gln Trp Gln 290 295 300 Gln Gln Asp His Ala Ser Ser Gln Gly Phe Phe Tyr His Ser Arg Ala 305 310 315 320 Arg Cys Cys Pro Arg Asp Arg Tyr Pro Ile Trp Glu Asn Cys Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Lys Thr Asn Pro Gly Leu Gln Thr Pro Gln Phe Ser Arg Cys 340 345 350 His Phe Lys Ser Arg Asn Asp Ser Ile Ile His Ile Leu Val Glu Val 355 360 365 Thr Thr Ala Pro Gly Thr Val His Ser Tyr Leu Gly Ser Pro Phe Trp 370 375 380 Ile His Gln Ala Val Arg Leu Pro Thr Pro Asn Leu His Trp Arg Glu 385 390 395 400 Ile Ser Ser Gly His Leu Glu Leu Glu Trp Gln His Pro Ser Ser Trp 405 410 415 Ala Ala Gln Glu Thr Cys Tyr Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Glu Gly His 420 425 430 Gln Asp Trp Lys Val Leu Glu Pro Pro Leu Gly Ala Arg Gly Gly Thr 435 440 445 Leu Glu Leu Arg Pro Arg Ser Arg Tyr Arg Leu Gln Leu Arg Ala Arg 450 455 460 Leu Asn Gly Pro Thr Tyr Gln Gly Pro Trp Ser Ser Trp Ser Asp Pro 465 470 475 480 Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser Leu Val Thr 485 490 495 Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu 500 505 510 Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu 515 520 525 Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg 530 535 540 Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys 545 550 555 560 Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu 565 570 575 Arg Thr Pro Leu Pro Leu Cys Ser Ser Gln Ala Gln Met Asp Tyr Arg 580 585 590 Arg Leu Gln Pro Ser Cys Leu Gly Thr Met Pro Leu Ser Val Cys Pro 595 600 605 Pro Met Ala Glu Ser Gly Ser Cys Cys Thr Thr His Ile Ala Asn His 610 615 620 Ser Tyr Leu Pro Leu Ser Tyr Trp Gln Gln Pro 625 630 635 <210> 52 <211> 1924 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <220> <221> CDS <222> (11)..(1918) <400> 52 gaattccacc atg ccc tcc tgg gcc ctc ttc atg gtc acc tcc tgc ctc 49 Met Pro Ser Trp Ala Leu Phe Met Val Thr Ser Cys Leu 1 5 10 ctc ctg gcc cct caa aac ctg gcc caa gtc agc agc caa gat gtc tcc 97 Leu Leu Ala Pro Gln Asn Leu Ala Gln Val Ser Ser Gln Asp Val Ser 15 20 25 ttg ctg gcc tcg gac tca gag ccc ctg aag tgt ttc tcc cga aca ttt 145 Leu Leu Ala Ser Asp Ser Glu Pro Leu Lys Cys Phe Ser Arg Thr Phe 30 35 40 45 gag gac ctc act tgc ttc tgg gat gag gaa gag gca gca ccc agt ggg 193 Glu Asp Leu Thr Cys Phe Trp Asp Glu Glu Glu Ala Ala Pro Ser Gly 50 55 60 aca tac cag ctg ctg tat gcc tac ccg ggg gag aag ccc cgt gcc tgc 241 Thr Tyr Gln Leu Leu Tyr Ala Tyr Pro Gly Glu Lys Pro Arg Ala Cys 65 70 75 ccc ctg agt tct cag agc gtg ccc cgc ttt gga acc cga tac gtg tgc 289 Pro Leu Ser Ser Gln Ser Val Pro Arg Phe Gly Thr Arg Tyr Val Cys 80 85 90 cag ttt cca gcc cag gaa gaa gtg cgt ctc ttc tct ccg ctg cac ctc 337 Gln Phe Pro Ala Gln Glu Glu Val Arg Leu Phe Ser Pro Leu His Leu 95 100 105 tgg gtg aag aat gtg ttc cta aac cag act cag att cag cga gtc ctc 385 Trp Val Lys Asn Val Phe Leu Asn Gln Thr Gln Ile Gln Arg Val Leu 110 115 120 125 ttt gtg gac agt gta ggc ctg ccg gct ccc ccc agt atc atc aag gcc 433 Phe Val Asp Ser Val Gly Leu Pro Ala Pro Pro Ser Ile Ile Lys Ala 130 135 140 atg ggt ggg agc cag cca ggg gaa ctt cag atc agc tgg gag gcc cca 481 Met Gly Gly Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gln Ile Ser Trp Glu Ala Pro 145 150 155 gct cca gaa atc agt gat ttc ctg agg tac gaa ctc cgc tat ggc ccc 529 Ala Pro Glu Ile Ser Asp Phe Leu Arg Tyr Glu Leu Arg Tyr Gly Pro 160 165 170 aaa gat ctc aag aac tcc act ggt ccc acg gtc ata cag ttg atc gcc 577 Lys Asp Leu Lys Asn Ser Thr Gly Pro Thr Val Ile Gln Leu Ile Ala 175 180 185 aca gaa acc tgc tgc cct gct ctg cag agg cca cac tca gcc tct gct 625 Thr Glu Thr Cys Cys Pro Ala Leu Gln Arg Pro His Ser Ala Ser Ala 190 195 200 205 ctg gac cag tct cca tgt gct cag ccc aca atg ccc tgg caa gat gga 673 Leu Asp Gln Ser Pro Cys Ala Gln Pro Thr Met Pro Trp Gln Asp Gly 210 215 220 cca aag cag acc tcc cca act aga gaa gct tca gct ctg aca gca gtg 721 Pro Lys Gln Thr Ser Pro Thr Arg Glu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Val 225 230 235 ggt gga agc tgc ctc atc tca gga ctc cag cct ggc aac tcc tac tgg 769 Gly Gly Ser Cys Leu Ile Ser Gly Leu Gln Pro Gly Asn Ser Tyr Trp 240 245 250 ctg cag ctg cgc agc gaa cct gat ggg atc tcc ctc ggt ggc tcc tgg 817 Leu Gln Leu Arg Ser Glu Pro Asp Gly Ile Ser Leu Gly Gly Ser Trp 255 260 265 gga tcc tgg tcc ctc cct gtg act gtg gac ctg cct gga gat gca gtg 865 Gly Ser Trp Ser Leu Pro Val Thr Val Asp Leu Pro Gly Asp Ala Val 270 275 280 285 gca att gga ctg caa tgc ttt acc ttg gac ctg aag aat gtt acc tgt 913 Ala Ile Gly Leu Gln Cys Phe Thr Leu Asp Leu Lys Asn Val Thr Cys 290 295 300 caa tgg cag caa gag gac cat gct agt tcc caa ggt ttc ttc tac cac 961 Gln Trp Gln Gln Glu Asp His Ala Ser Ser Gln Gly Phe Phe Tyr His 305 310 315 agc agg gca cgg tgc tgc ccc aga gac agg tac ccc atc tgg gag gac 1009 Ser Arg Ala Arg Cys Cys Pro Arg Asp Arg Tyr Pro Ile Trp Glu Asp 320 325 330 tgt gaa gag gaa gag aaa aca aat cca gga tta cag acc cca cag ttc 1057 Cys Glu Glu Glu Glu Lys Thr Asn Pro Gly Leu Gln Thr Pro Gln Phe 335 340 345 tct cgc tgc cac ttc aag tca cga aat gac agc gtt att cac atc ctt 1105 Ser Arg Cys His Phe Lys Ser Arg Asn Asp Ser Val Ile His Ile Leu 350 355 360 365 gtg gag gtg acc aca gcc ctg ggt gct gtt cac agt tac ctg ggc tcc 1153 Val Glu Val Thr Thr Ala Leu Gly Ala Val His Ser Tyr Leu Gly Ser 370 375 380 cct ttc tgg atc cac cag gct gtg cgc ctc ccc acc cca aac ttg cac 1201 Pro Phe Trp Ile His Gln Ala Val Arg Leu Pro Thr Pro Asn Leu His 385 390 395 tgg agg gag atc tcc agc ggg cat ctg gaa ttg gag tgg cag cac cca 1249 Trp Arg Glu Ile Ser Ser Gly His Leu Glu Leu Glu Trp Gln His Pro 400 405 410 tca tcc tgg gca gcc caa gag acc tgc tat caa ctc cga tac aca gga 1297 Ser Ser Trp Ala Ala Gln Glu Thr Cys Tyr Gln Leu Arg Tyr Thr Gly 415 420 425 gaa ggc cat cag gac tgg aag gtg ctg gag ccg cct ctc ggg gcc cga 1345 Glu Gly His Gln Asp Trp Lys Val Leu Glu Pro Pro Leu Gly Ala Arg 430 435 440 445 gga ggg acc ctg gag ctg cgc ccg cga tct cgc tac cgt tta cag ctg 1393 Gly Gly Thr Leu Glu Leu Arg Pro Arg Ser Arg Tyr Arg Leu Gln Leu 450 455 460 cgc gcc agg ctc aat ggc ccc acc tac caa ggt ccc tgg agc tcg tgg 1441 Arg Ala Arg Leu Asn Gly Pro Thr Tyr Gln Gly Pro Trp Ser Ser Trp 465 470 475 tcg gac cca gct agg gtg gag acc gcc acc gag acc gcc tgg att tcc 1489 Ser Asp Pro Ala Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser 480 485 490 ttg gtg acc gct ctg ctg cta gtg ctg ggc ctc agc gcc gtc ctg ggc 1537 Leu Val Thr Ala Leu Leu Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly 495 500 505 ctg ctg ctg ctg agg tgg cag ttt cct gca cac tac agg aga ctg agg 1585 Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg 510 515 520 525 cat gcc ctg tgg ccc tca ctt cca gat ctg cac cga gtc cta ggc cag 1633 His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln 530 535 540 tac ctt agg gac act gca gcc ctg agt ccg ccc aag gcc aca gtc tca 1681 Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser 545 550 555 gat acc tgt gaa gaa gtg gaa ccc agc ctc ctt gaa atc ctc ccc aag 1729 Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys 560 565 570 tcc tca gag agg act cct ttg ccc ctg tgt tcc tcc cag tcc cag atg 1777 Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Cys Ser Ser Gln Ser Gln Met 575 580 585 gac tac cga aga ttg cag cct tct tgc ctg ggg acc atg ccc ctg tct 1825 Asp Tyr Arg Arg Leu Gln Pro Ser Cys Leu Gly Thr Met Pro Leu Ser 590 595 600 605 gtg tgc cca ccc atg gct gag tca ggg tcc tgc tgt acc acc cac att 1873 Val Cys Pro Pro Met Ala Glu Ser Gly Ser Cys Cys Thr Thr His Ile 610 615 620 gcc aac cat tcc tac cta cca cta agc tat tgg cag cag cct tga 1918 Ala Asn His Ser Tyr Leu Pro Leu Ser Tyr Trp Gln Gln Pro 625 630 635 gtcgac 1924 <210> 53 <211> 635 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 53 Met Pro Ser Trp Ala Leu Phe Met Val Thr Ser Cys Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Pro Gln Asn Leu Ala Gln Val Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Leu Ala 20 25 30 Ser Asp Ser Glu Pro Leu Lys Cys Phe Ser Arg Thr Phe Glu Asp Leu 35 40 45 Thr Cys Phe Trp Asp Glu Glu Glu Ala Ala Pro Ser Gly Thr Tyr Gln 50 55 60 Leu Leu Tyr Ala Tyr Pro Gly Glu Lys Pro Arg Ala Cys Pro Leu Ser 65 70 75 80 Ser Gln Ser Val Pro Arg Phe Gly Thr Arg Tyr Val Cys Gln Phe Pro 85 90 95 Ala Gln Glu Glu Val Arg Leu Phe Ser Pro Leu His Leu Trp Val Lys 100 105 110 Asn Val Phe Leu Asn Gln Thr Gln Ile Gln Arg Val Leu Phe Val Asp 115 120 125 Ser Val Gly Leu Pro Ala Pro Pro Ser Ile Ile Lys Ala Met Gly Gly 130 135 140 Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gln Ile Ser Trp Glu Ala Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 Ile Ser Asp Phe Leu Arg Tyr Glu Leu Arg Tyr Gly Pro Lys Asp Leu 165 170 175 Lys Asn Ser Thr Gly Pro Thr Val Ile Gln Leu Ile Ala Thr Glu Thr 180 185 190 Cys Cys Pro Ala Leu Gln Arg Pro His Ser Ala Ser Ala Leu Asp Gln 195 200 205 Ser Pro Cys Ala Gln Pro Thr Met Pro Trp Gln Asp Gly Pro Lys Gln 210 215 220 Thr Ser Pro Thr Arg Glu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Val Gly Gly Ser 225 230 235 240 Cys Leu Ile Ser Gly Leu Gln Pro Gly Asn Ser Tyr Trp Leu Gln Leu 245 250 255 Arg Ser Glu Pro Asp Gly Ile Ser Leu Gly Gly Ser Trp Gly Ser Trp 260 265 270 Ser Leu Pro Val Thr Val Asp Leu Pro Gly Asp Ala Val Ala Ile Gly 275 280 285 Leu Gln Cys Phe Thr Leu Asp Leu Lys Asn Val Thr Cys Gln Trp Gln 290 295 300 Gln Glu Asp His Ala Ser Ser Gln Gly Phe Phe Tyr His Ser Arg Ala 305 310 315 320 Arg Cys Cys Pro Arg Asp Arg Tyr Pro Ile Trp Glu Asp Cys Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Lys Thr Asn Pro Gly Leu Gln Thr Pro Gln Phe Ser Arg Cys 340 345 350 His Phe Lys Ser Arg Asn Asp Ser Val Ile His Ile Leu Val Glu Val 355 360 365 Thr Thr Ala Leu Gly Ala Val His Ser Tyr Leu Gly Ser Pro Phe Trp 370 375 380 Ile His Gln Ala Val Arg Leu Pro Thr Pro Asn Leu His Trp Arg Glu 385 390 395 400 Ile Ser Ser Gly His Leu Glu Leu Glu Trp Gln His Pro Ser Ser Trp 405 410 415 Ala Ala Gln Glu Thr Cys Tyr Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Glu Gly His 420 425 430 Gln Asp Trp Lys Val Leu Glu Pro Pro Leu Gly Ala Arg Gly Gly Thr 435 440 445 Leu Glu Leu Arg Pro Arg Ser Arg Tyr Arg Leu Gln Leu Arg Ala Arg 450 455 460 Leu Asn Gly Pro Thr Tyr Gln Gly Pro Trp Ser Ser Trp Ser Asp Pro 465 470 475 480 Ala Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser Leu Val Thr 485 490 495 Ala Leu Leu Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu 500 505 510 Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu 515 520 525 Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg 530 535 540 Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys 545 550 555 560 Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu 565 570 575 Arg Thr Pro Leu Pro Leu Cys Ser Ser Gln Ser Gln Met Asp Tyr Arg 580 585 590 Arg Leu Gln Pro Ser Cys Leu Gly Thr Met Pro Leu Ser Val Cys Pro 595 600 605 Pro Met Ala Glu Ser Gly Ser Cys Cys Thr Thr His Ile Ala Asn His 610 615 620 Ser Tyr Leu Pro Leu Ser Tyr Trp Gln Gln Pro 625 630 635 <210> 54 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 55 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 56 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 58 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 59 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 61 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 62 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 64 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 65 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 66 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 67 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 68 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 69 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 69 caggtgcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactcctgga tgaactgggt gaggcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaga aactatctac 180 aatgggaaat tcagggtcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atgcaactga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctat 300 gatgattact cgtttgctta ctggggccag ggaaccacgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 70 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 70 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaacatat agaatatcct 300 tttacgttcg gccaagggac caaactggaa atcaaa 336 <210> 71 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 71 caggtgcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactcctgga tgaactgggt gaggcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaga aactatctac 180 aatgggaaat tcagggtcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctat 300 gatgattact cgtttgctta ctggggccag ggaaccacgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 72 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 72 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttccagcaga agccagggca ggctccacgg ctcctgatct atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagcttttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaacatat agaatatcct 300 tttacgttcg gccaagggac caaactggaa atcaaa 336 <210> 73 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp 340 345 350 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 355 360 365 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 74 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp 180 185 190 Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Met 195 200 205 Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 225 230 235 240 Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 245 250 255 Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 260 265 270 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro 275 280 285 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 290 295 300 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro 305 310 315 320 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu 325 330 335 Thr Ile Tyr Asn Gly Lys Phe Arg Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp 340 345 350 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 355 360 365 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Asp Asp Tyr Ser Phe 370 375 380 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 385 390 395 400 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met 405 410 415 Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser 420 425 430 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr 435 440 445 Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 450 455 460 Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 465 470 475 480 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 485 490 495 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Ile Glu Tyr Pro 500 505 510 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 515 520 <210> 75 <211> 1572 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 75 atggactgga cctggaggtt cctctttgtg gtggcagcag ctacaggtgt ccagtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 caactgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 420 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctcca 480 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc tgcagaagcc agggcagtct 600 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 660 ggcagtggat caggcacaga ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 720 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 780 ctggaaatca aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 900 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 1080 caactgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 1200 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctcca 1260 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc tgcagaagcc agggcagtct 1380 ccacagctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 1440 ggcagtggat caggcacaga ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 1500 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 1560 ctggaaatca aa 1572 <210> 76 <211> 1572 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 76 atggactgga cctggaggtt cctctttgtg gtggcagcag ctacaggtgt ccagtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 180 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 240 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 360 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 420 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctcca 480 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 540 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc agcagaagcc agggcaggct 600 ccacggctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 660 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 720 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 780 ctggaaatca aaggaggtgg tggatcgggt ggtggtggtt cgggaggcgg tggatcgcag 840 gtgcagctgg tgcagtctgg acctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 900 tgcaaggctt ctggatacac cttcaccaac tcctggatga actgggtgag gcagaggcct 960 ggaaagggtc ttgagtggat tggacggatt tatcctggag atggagaaac tatctacaat 1020 gggaaattca gggtcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 1080 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggctatgat 1140 gattactcgt ttgcttactg gggccaggga accacggtca ccgtctcttc aggtggtggt 1200 ggatccggag gtggtggatc gggtggtgga ggatcggata ttgtgatgac tcagtctcca 1260 ctctccctgc ccgtcacccc tggagagccg gcctccatct cctgcaggtc tagtaagagt 1320 ctcctgcata gtaatggcaa cacttacttg tattggttcc agcagaagcc agggcaggct 1380 ccacggctcc tgatctatcg gatgtccaac cttgcctcag gggtccctga caggttcagt 1440 ggcagtggat caggcacagc ttttacactg aaaatcagca gagtggaggc tgaggatgtt 1500 ggggtttatt actgcatgca acatatagaa tatcctttta cgttcggcca agggaccaaa 1560 ctggaaatca aa 1572 <210> 77 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 77 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 78 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 78 Ser Gly Gly Gly 1 <210> 79 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 79 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 80 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 80 Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 81 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 81 Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 82 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 82 Ser Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 83 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 84 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized linker sequence <400> 84 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5

Claims (23)

1. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈 줄기세포 증식 촉진제.
2. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제.
3. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제.
4. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 조혈능 회복 촉진제.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,

   조혈 줄기세포 이식에 있어서 사용되는 약제.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

   조혈 줄기세포 이식 후에 투여되는 약제.
7. 제5항 또는 제6항에 있어서,

   조혈 줄기세포 이식이, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식 또는 제대혈 이식으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제.
8. 제7항에 있어서,

   제대혈 이식이 인간 제대혈 이식인 약제.
9. 제8항에 있어서,

   복수회 투여되는 것을 특징으로 하는 약제.
10. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제.
11. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 유효성분으로서 함유하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화 촉진제.
12. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈 줄기세포의 증식을 촉진하는 방법.
13. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하 는, 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화를 촉진하는 방법.
14. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착을 증가시키는 방법.
15. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 조혈능의 회복을 촉진하는 방법.
16. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포를 증식시키는 방법.
17. TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트를 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화를 촉진하는 방법.
18. 조혈 줄기세포 증식 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.
19. 조혈계 CD34 양성세포의 증식 및/또는 분화 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.
20. 조혈계 CD34 양성세포의 골수로의 생착 증가제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.
21. 조혈능 회복 촉진제의 제조에 있어서의 TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.
22. 림프계 세포 및/또는 골수계 세포의 증식 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.
23. 림프계 세포 및/또는 골수계 세포로의 분화 촉진제의 제조에 있어서의, TPO 수용체(c-mpl)에 대한 아고니스트의 사용.

Images