MX2011002602A - Combinacion de inhibidor de la proteasa ns3 de hcv con interferon y ribavirina. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a combinaciones terapéuticas que comprenden (a) Compuesto (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se describe en el presente documento, (b) un interferón alfa y (c) ribavirina. El Compuesto (1) es un inhibidor selectivo y potente de la proteasa de serina NS3 de HCV. La presente invención se refiere también a métodos para emplear tales combinaciones terapéuticas para el tratamiento de infección por HCV o para aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente.

Description

COMBINACIÓN DE INHIBIDOR DE LA PROTEASA NS3 DE HCV CON INTERFERÓN Y RIBAVIRINA Esta solicitud se acoge a los beneficios de las anteriores solicitudes provisionales de EE.UU. (U.S. Provisional Applications): 61/097,753 presentada el 17 de septiembre de 2008, 61/109,033 presentada el 28 de octubre de 2008, y 61/171 ,935 presentada el 23 de abril de 2009.

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a combinaciones terapéuticas que comprenden el Compuesto (1) tal como aquí se describe, un interferón alfa y ribavirina. La presente invención se refiere también a métodos para emplear tales combinaciones terapéuticas para el tratamiento de infección por HCV o para aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente. La presente invención proporciona también "kits" que comprenden las combinaciones terapéuticas de la presente invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La infección por virus de la hepatitis C (HCV) es un problema mundial de salud humana, y cada año se anuncian aproximadamente 150,000 nuevos casos sólo en los Estados Unidos. El HCV, que es un virus de ARN de cadena sencilla, es el agente etiológico identificado en la mayoría de los casos de hepatitis pos-transfusión y pos-trasplante no-A, no-B, y es una causa común de hepatitis esporádica aguda. Se ha estimado que más del 50% de los pacientes infectados con HCV quedan infectados crónicamente, y que el 20% de éstos desarrollan cirrosis hepática en el plazo de 20 años.

Varios tipos de interferones, en particular alfa-interferones, han sido aprobados para el tratamiento de la infección crónica por HCV, por ejemplo interferón-alfa-2a (ROFERON®-A), interferón-alfa-2b (INTRON®-A), interferón de consenso (INFERGEN®), y formas pegiladas de estos y otros interferones, tales como interferón alfa-2a pegilado (PEGASYS®) e interferón alfa-2b pegilado (PEG-INTRON®). Sin embargo, la mayoría de los pacientes no responden al tratamiento con interferón alfa, y entre quienes responden se da una elevada tasa de recaída dentro de los 6 meses posteriores al fin del tratamiento (Liang y otros, J. Med. Virol. 40:69, 1993).

Se ha demostrado en ensayos clínicos que la ribavirina, un análogo de guanosina con actividad de amplio espectro contra muchos virus de ARN y ADN, es eficaz contra la infección crónica por HCV cuando se emplea en combinación con interferones-alfa (véase, por ejemplo, Poynard y otros, Lancet 352:1426-1432, 1998; Reichard y otros, Lancet 351 :83-87, 1998), y esta terapia combinada ha sido aprobada para el tratamiento de la infección por HCV: REBETRON® (interferón alfa-2b más ribavirina, Schering-Plough); PEGASYS®RBV® (terapia combinada de interferón alfa-2a pegilado más ribavirina, Roche); véanse también Manns y otros, Lancet 358:958-965 (2001) y Fried y otros, 2002, N. Engl. J. Med. 347:975-982. Sin embargo, incluso con esta terapia combinada la tasa de respuesta virológica todavía se sitúa en 50% o menos.

Además, se producen significativos efectos secundarios asociados típicamente a tales terapias. La ribavirina presenta inconvenientes que incluyen actividad teratogénica, interferencia con el desarrollo del esperma, hemolisis, fatiga, dolor de cabeza, insomnio, náusea y/o anorexia. El interferón alfa, con o sin ribavirina, está asociado con muchos efectos secundarios. Durante el tratamiento, los pacientes deben ser cuidadosamente controlados en cuanto a la aparición de síntomas similares a los de la gripe, depresión, erupciones cutáneas, y recuentos sanguíneos anormales. Los pacientes a tratar con interferón alfa-2b más ribavirina no deben presentar complicaciones de trastorno hepático grave, y tales pacientes son sometidos a tratamiento contra la hepatitis C en estudios cuidadosamente vigilados.

Algunas terapias combinadas que contienen interferón para tratar la infección por HCV se describen también en las siguientes publicaciones de solicitud de patente de EE.UU.: US 2005/0112093; US 2005/0129659; y US 2008/0138316.

El compuesto (1) siguiente: es conocido como inhibidor selectivo y potente de la proteasa de serina NS3 de HCV, y es útil en el tratamiento de la infección por HCV. El compuesto (1) cae dentro del alcance de la serie de péptidos acíclicos de los inhibidores de HCV descritos en las patentes de EE.UU. 6.323.180, 7.514.557 y 7.585.845. El compuesto (1) está descrito específicamente como Compuesto número 1055 en la patente de EE.UU. 7.585.845, y como Compuesto número 1008 en la patente de EE.UU. 7.514.557. El Compuesto (1), y formulaciones farmacéuticas del mismo, se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos generales que se encuentran en las referencias antes citadas, todos los cuales quedan, en su totalidad, incorporados por referencia en el presente documento.

Las formas preferidas del Compuesto (1) incluyen las formas cristalinas, en particular la forma de sal sódica cristalina, que se puede preparar tal como se describe en la sección de ejemplos del presente documento.

El Compuesto (1) puede ser conocido también por la siguiente descripción alternativa de su estructura química, que es equivalente a la estructura antes descrita en donde B es — ; L° es MeO-; L1 es Br; y R2 es Aunque se ha hallado que el Compuesto (1) es en general eficaz para reducir la carga vírica y en el tratamiento de la infección por HCV, se ha observado una cierta proporción de resistencia vírica, con el resultante rebote vírico. Por ejemplo, los autores de la presente invención han observado con el Compuesto (1) administrado una vez al día a pacientes sin tratamiento anterior, como monoterapia durante 14 días, un efecto antivírico intenso y muy rápido, seguido de cierta proporción de formación de resistencia al cabo de 5-6 días.

Por tanto, siguen siendo necesarias en este campo terapias alternativas para el tratamiento y prevención de la infección por HCV.

LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para tratar la infección por HCV o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, que comprende el paso de administrar al paciente una combinación terapéutica que comprende un Compuesto (1) tal como se define en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un interferón alfa y ribavirina, tal como se define en el presente documento. Las tres sustancias activas de la combinación pueden ser administradas de manera simultánea o por separado, como parte de un régimen.

La presente invención proporciona además un kit que comprende una primera composición farmacéutica que comprende un Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; una segunda composición farmacéutica que comprende un interferón alfa; y una tercera composición farmacéutica que comprende ribavirina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 representa el cambio medio en la carga vírica de HCV en cuatro grupos de pacientes, agrupados por dosis, sin tratamiento anterior, que padecen infección crónica por HCV de genotipo 1 , tratados con sal sódica de Compuesto (1) como monoterapia durante 14 días, seguida de terapia combinada con sal sódica de Compuesto (1), interferón alfa-2a pegilado y ribavirina durante 14 días más.

La Figura 2 representa el cambio medio en la carga vírica de HCV en tres grupos de pacientes, agrupados por dosis, con experiencia de tratamiento, que padecen infección crónica por HCV de genotipo 1, tratados con sal sódica de Compuesto (1), interferón alfa-2a pegilado y ribavirina como terapia combinada durante 28 días.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones El "Compuesto (1)" es tal como se ha definido antes.

"Interferón" significa un miembro de una familia de proteínas específicas de especie, sumamente homologas, que inhiben la replicación vírica y la proliferación celular, y modulan la respuesta inmunitaria. Los interferones humanos se agrupan en tres clases por su origen celular y su antigenicidad: a-interferón (leucocitos), ß-interferón (fibroblastos) y ?-interferón (células B). Se han desarrollado formas recombinantes de cada uno de los grupos, y están disponibles comercialmente. Los subtipos dentro de cada grupo se basan en características antigénicas/estructurales. Se han identificado al menos 24 interferones alfa (agrupados en los subtipos de la A hasta la H) que tienen distintas secuencias de aminoácidos, aislando y secuenciando el ADN que codifica estos péptidos. En la presente solicitud se emplean indistintamente los términos "a -interferón", "alfa-interferón" e "interferón alfa" para describir a miembros de este grupo. En la práctica de la invención se pueden emplear alfa-¡nterferones tanto presentes en la naturaleza como recombinantes, incluyendo el interferón de consenso.

Interferones-alfa adecuados para la presente invención incluyen, pero sin quedar limitados a éstos, interferón alfa-2b recombinante tal como interferón lntron®-A y VIRAFERON®; interferón alfa-2a recombinante tal como interferón Roferon®; interferón alfa-2c recombinante tal como interferón alfa 2 Berofor®; interferón alfa-nl , una mezcla purificada de interferones alfa naturales, tal como interferón alfa-n1 Sumiferon® o Wellferon® (INS); o un interferón alfa de consenso tal como los descritos en las patentes de EE.UU. números 4,897,471 y 4,695,623; o interferón alfa-n3, una mezcla de interferones alfa naturales, tal como Alferon®. Se prefiere el empleo de interferón alfa-2a o alfa-2b. La obtención de interferón alfa 2b está descrita en la patente de EE.UU. número 4.530.901.

Se pretende que la expresión "interferón alfa" incluya además aquellos análogos "pegilados", con el significado de conjugados de interferón alfa, preferiblemente interferón alfa-2a y -2b, modificados con polietilenglicol. El conjugado poletilenglicol-interferón alfa-2b preferido es PEG12000 - interferón alfa 2b. La expresión "PEG12000-IFN alfa", tal como se emplea en el presente documento, significa conjugados tales como los preparados según los métodos de la solicitud internacional número WO 95/13090, y que contienen uniones de uretano entre los grupos amino del interferón alfa-2a o -2b y poletilenglicol con un peso molecular medio de 12000.

El PEGi2ooo-interferón alfa-2b preferido se prepara uniendo una molécula de polímero PEG al grupo épsilon amino de un resto de lisina de la molécula de IFN alfa-2b. Se conjuga una única molécula de PEG12000, a través de una unión uretano, a los grupos amino libres de una molécula de IFN alfa-2b.

Este conjugado se caracteriza por el peso molecular del PEG12000 unido. El conjugado PEG12ooo-IFN alfa-2b se formula como polvo liofilizado para inyección. El objetivo de la conjugación de IFN alfa con PEG es mejorar el suministro de la proteína, prolongando de manera significativa su semivida plasmática, y proporcionar de este modo una actividad prolongada del IFN alfa.

Son conjugados especialmente preferidos de interferón alfa que se pueden emplear en la presente invención los alfa-interferones pegilados, por ejemplo interferón alfa-2a pegilado, interferón alfa-2b pegilado, interferón de consenso pegilado o producto purificado de interferón alfa pegilado. Se describe interferón alfa-2a pegilado, por ejemplo, en la patente europea número EP 0 593 868, y se encuentra disponible comercialmente, por ejemplo, bajo la marca comercial PEGASYS® (Hoffmann-La Roche). Se describe interferón alfa-2b pegilado, por ejemplo, en la patente de EE.UU. número 5,908,621 y el documento WO 98/48840, y se encuentra disponible comercialmente, por ejemplo, bajo la marca comercial PEG-INTRON® A (Schering Plough). Se describe interferón de consenso pegilado en el documento WO 96/11953. Los ¡nterferones alfa pegilados preferidos son interferón alfa-2a pegilado e interferón alfa-2b pegilado. Se prefiere también interferón de consenso pegilado.

La expresión "interferón alfa" incluye además otros conjugados de interferón alfa que se pueden preparar copulando un interferón alfa a un polímero soluble en agua. Una lista no limitante de tales polímeros incluye otros homopolímeros de poli (óxido de alquileno) tales como poletilenglicol (PEG), polipropilenglicoles, polioles polioxietilenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloques de los mismos. Como alternativa a polímeros basados en poli (óxido de alquileno), se pueden emplear materiales efectivamente no antigénicos tales como dextrano, polivinilpirrolidonas, poliacrilamidas, poli (alcohol vinílico), polímeros a base de hidratos de carbono, y similares. Estos conjugados de interferón alfa y polímero están descritos en la patente de EE.UU. número 4,766,106, la patente de EE.UU. número 4,917,888, la solicitud de patente europea número 0 236 987, las solicitudes de patente europea números 0510 356, 0 593 868 y 0 809 996 (interferón alfa-2a pegilado) y la publicación internacional número WO 95/13090.

La expresión "interferón alfa" incluye además proteínas de fusión de un interferón alfa, por ejemplo proteínas de fusión de interferón-a-2a, interferón-a-2b, interferón de consenso o producto de interferón-a purificado, cada uno de los cuales está fusionado con otra proteína. Algunas proteínas de fusión preferidas comprenden un interferón (por ejemplo interferón-a-2b) y una albúmina tal como se describe en la patente de EE.UU. número 6,972,322 y en las publicaciones internacionales WO2005/003296 y WO2005/077042. Un interferón conjugado a una albúmina humana, preferido, es ALBUFERON®, que es una forma de interferón alfa con acción prolongada creada mediante el empleo de tecnología de fusión con albúmina. ALBUFERON® es el resultado de la fusión genética de albúmina humana e interferón alfa. También están incluidos interferones de consenso, tales como INFERGEN®.

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal de un Compuesto de la fórmula (1) que, de acuerdo con el criterio médico, es adecuada para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores, sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, en proporción con una relación beneficio/riesgo razonable, generalmente soluble o dispersable en agua o aceite, y eficaz para su uso pretendido.

La expresión incluye sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables y sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables. Se pueden hallar listas de sales adecuadas, por ejemplo, en S.M. Birge y otros, J. Pharm. Sci., 1977, 66, páginas 1-19.

La expresión "sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" significa las sales que conservan la eficacia y propiedades biológicas de las bases libres y que río son indeseables biológicamente o de otra forma, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares, y ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido adípico, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido butírico, ácido canfórico, ácido canforsulfónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido diglucónico, ácido etanosulfónico, ácido glutámico, ácido glicólico, ácido glicerofosfórico, ácido hemisulfínico, ácido hexanoico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido 2-hidroxietano-sulfónico (ácido isetiónico), ácido láctico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido mesitilenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido naftalenosulfónico, ácido nicotínico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido oxálico, ácido pamoico, ácido pectínico, ácido fenilacético, ácido 3-fenilpropiónico, ácido piválico, ácido propiónico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfanílico, ácido tartárico, ácido p-toluenosulfónico, ácido undecanoico y similares.

La expresión "sal de adición de base farmacéuticamente aceptable" significa aquellas sales que conservan la eficacia y las propiedades biológicas de los ácidos libres y que no son indeseables biológicamente o de otra forma, formadas con bases inorgánicas tales como amoníaco o hidróxido, carbonato, o bicarbonato de amonio o un catión de metal, tal como sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, hierro, cinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Se prefieren particularmente las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las sales obtenidas de bases no tóxicas, orgánicas, farmacéuticamente aceptables, incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, compuestos de amina cuaternaria, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, isopropilamina, tripropilamina, tributilamina, etanolamina, dietanolamina, 2-dimetilamino-etanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, hidrabamina, colina, betaina, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, compuestos de tetrametilamonio, compuestos de tetraetilamonio, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, dibencilamina, ?,?-dibencilfenetilamina, 1-efenamina, ?,?-dibenciletilendiamina, resinas de poliamina, y similares. Son bases orgánicas no tóxicas particularmente preferidas isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina y cafeína.

"Ribavirina" se refiere a 1-P-D-ribofuranosil-1H-1 ,2,4-triazol-3-carboxamida, disponible de ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, California, y está descrita en Merck Index, undécima edición, compuesto número 8199. Su obtención y formulación se describe en la patente de EE.UU. número 4,211 ,771. Los productos de ribavirina comercializados preferidos incluyen REBETOL® y COPEGUS®. El término incluye además derivados o análogos de la misma, tales como los descritos en las patentes de EE.UU. números 6,063,772, 6,403,564 y 6,277,830. Por ejemplo, los derivados o análogos incluyen ribavirinas modificadas tales como ésteres de 5'-amino, el enantiómero L de ribavirina de ICN Pharmaceutical (ICN 17261), derivados 2'-deoxi de ribavirina y derivados de 3-carboxamidina de ribavirina, viramidina (anteriormente conocida como ribamidina) y similares.

La expresión "combinación terapéutica", tal como se emplea en el presente documento, significa una combinación de una o más sustancias farmacológicas activas, es decir, compuestos con utilidad terapéutica. Típicamente, cada uno de tales compuestos de las combinaciones terapéuticas de la presente invención estará presente en una composición farmacéutica que comprende ese compuesto y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de una combinación terapéutica de la presente invención pueden ser administrados de manera simultánea o por separado, como parte de un régimen.

Realizaciones de la invención De acuerdo con una realización general, la presente invención proporciona un método para tratar la infección por HCV o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, que comprende el paso de administrar al paciente una combinación terapéutica que comprende un Compuesto (1) tal como se define en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un interferón alfa y ribavirina. En otra realización, la presente invención enseña el empleo de un Compuesto (1) tal como se define en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un interferón alfa, y ribavirina, para preparar un kit farmacéutico para tratar una infección por virus de la hepatitis C (HCV) o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente. Aunque se espera que esta terapia combinada sea eficaz contra todos los genotipos de HCV, se ha demostrado que es particularmente eficaz en el tratamiento de la infección por HCV de genotipo 1 , con inclusión de los subgenotipos 1a y 1b.

La población de pacientes que ha de ser tratada con la terapia combinada de la presente invención se puede clasificar adicionalmente en pacientes "sin tratamiento anterior", es decir pacientes que no han recibido ningún tratamiento anterior contra la infección por HCV, y pacientes "con experiencia de tratamiento", es decir aquellos pacientes que han recibido tratamiento previo contra HCV. Cualquiera de estas clases de pacientes puede ser tratada con la terapia combinada de la presente invención. Una clase particular de pacientes que se tratan con preferencia son aquellos pacientes con experiencia de tratamiento que han recibido anteriormente terapia con interferón más ribavirina, pero que no han respondido a dicha terapia (denominados "sin respuesta"). Estos pacientes sin respuesta incluyen tres grupos distintos de pacientes: (1) aquellos que han experimentado una reducción máxima < 1x logio en los niveles de ARN de HCV durante el tratamiento con interferón más ribavirina ("con respuesta nula"), (2) aquellos que han experimentado una reducción máxima > 1x logio en los niveles de ARN de HCV durante el tratamiento con interferón más ribavirina, pero que nunca han conseguido niveles de ARN de HCV por debajo del nivel de detección ("con respuesta parcial"), y (3) aquellos que han conseguido una respuesta virológica con y durante la terapia con interferón más ribavirina, pero que han sufrido un rebote de carga vírica, bien sea durante el tratamiento (por una causa distinta de falta de cumplimiento por parte del paciente) o una vez completado el tratamiento ("con recaída"). Tal como se detallará más adelante, se han obtenido resultados particularmente sorprendentes con el tratamiento de ciertos pacientes "sin respuesta" por medio del empleo del régimen de terapia combinada de la presente invención.

Según una realización alternativa, la presente invención proporciona un método para reducir niveles de ARN de HCV en un paciente que lo necesite, que comprende el paso de administrar a dicho paciente una combinación terapéutica de acuerdo con la presente invención. Preferiblemente, el método de la presente invención reduce los niveles de ARN de HCV en un paciente a un nivel inferior al detectable. En el presente documento, las expresiones "inferior al nivel detectable" y "por debajo del límite de detección" se utilizan indistintamente y tienen el mismo significado: ser menos que el nivel detectable de ARN de HCV. Tal como se emplea en la presente invención, un nivel detectable de ARN de HCV significa al menos 50 unidades internacionales (abreviadas Ul) por mi de suero de un paciente, determinado mediante el método de PCR de transcriptasa inversa multi-ciclo, cuantitativo, de acuerdo con la norma de la Organización Mundial de la Salud (siglas inglesas WHO) (Saladanha J, Lelie N y Heath A, Establishment of the first international standard for nucleic acid amplification technology (NAT) assays for HCV RNA. WHO Collaborative Study Group. Vox Sang 76:149-158, 1999). Estos métodos son bien conocidos en la técnica. En una realización preferida, el método de la presente invención reduce los niveles de ARN de HCV en un paciente a menos de 25 Ul por mi de suero, e incluso más preferiblemente a menos de 10 Ul por mi de suero.

La duración usual del tratamiento para la terapia estándar de interferón más ribavirina es al menos 48 semanas para la infección por HCV de genotipo 1, y al menos 24 semanas para HCV de genotipos 2 y 3. Sin embargo, con la adición de Compuesto (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la terapia combinada triple de la presente invención, puede ser posible tener una duración mucho más corta del tratamiento. Con la terapia combinada triple de la presente invención, las duraciones de tratamiento contempladas incluyen al menos 4 semanas, preferiblemente al menos 12 semanas, por ejemplo de aproximadamente 12 semanas a aproximadamente 24 semanas, aunque son posibles también tratamientos de hasta 48 semanas y más. Así, realizaciones adicionales incluyen el tratamiento durante al menos 24 semanas y durante al menos 48 semanas. Se espera que el período de tiempo para diferentes genotipos de HCV, por ejemplo genotipos 2, 3 ó 4 de HCV sea similar. También está contemplado un régimen inicial de tratamiento con la terapia combinada triple de la presente invención, seguida por una continuación sólo con la terapia combinada doble de interferón más ribavirina. Así, los escenarios posibles para la terapia combinada triple inicial y la posterior terapia combinada doble incluyen, por ejemplo: (1) 4 semanas de la terapia combinada triple, seguidas por 20 a 44 semanas sólo con la terapia de interferón más ribavirina; (2) 12 semanas de la terapia combinada triple, seguidas por 12 a 36 semanas sólo con la terapia de interferón más ribavirina; y (3) 24 semanas de la terapia combinada triple, seguidas por 12 a 24 semanas sólo con la terapia de interferón más ribavirina.

El primer componente de la combinación terapéutica, en concreto el Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está comprendido en una composición. Dicha composición comprende Compuesto (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas típicas que se pueden emplear para el Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, son las descritas en la publicación de solicitud de patente de EE.UU. 7.585.845.

En general, el Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser administrado a una dosis de al menos 40 mg/día (en dosis únicas o divididas). Realizaciones adicionales para cantidades e intervalos de dosificación pueden incluir (en dosis únicas o divididas): (a) al menos 48 mg/día (b) al menos 100 mg/día (c) al menos 120 mg/día (d) al menos 200 mg/día (e) al menos 240 mg/día (f) al menos 360 mg/día (g) al menos 480 mg/día (h) desde aproximadamente 40 mg/día hasta aproximadamente 480 mg/día (i) desde aproximadamente 48 mg/día hasta aproximadamente 240 mg/día (j) desde aproximadamente 100 mg/día hasta aproximadamente 300 mg/día (k) desde aproximadamente 120 mg/día hasta aproximadamente 300 mg/día (I) desde aproximadamente 120 mg/día hasta aproximadamente 240 mg/día (m) desde aproximadamente 240 mg/día hasta aproximadamente 480 mg/día (n) aproximadamente 48 mg/día (o) aproximadamente 120 mg/día (p) aproximadamente 240 mg/día (q) aproximadamente 360 mg/día (r) aproximadamente 480 mg/día Aunque el Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser administrado en dosis diarias únicas o divididas, se prefiere la administración de la dosis diaria una vez al día. No obstante, como comprenderá el experto en la técnica, pueden ser necesarias dosis menores o mayores que las antes citadas. Los regímenes específicos de dosis y tratamiento para cualquier paciente en particular dependerán de una variedad de factores, entre ellos la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, el índice de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la infección, la disposición del paciente a la infección y el criterio del médico que lo esté tratando. En general, el compuesto se administra más convenientemente con un nivel de concentración tal que en general produzca resultados antivíricamente eficaces sin causar ningún efecto colateral perjudicial o deletéreo.

El segundo componente de la combinación terapéutica, en concreto el interferón-alfa, está comprendido en una composición farmacéutica. Típicamente, tales composiciones son formulaciones inyectables que comprenden interferón-alfa y un adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, y son bien conocidas en la técnica, ya que incluyen diversas formulaciones de interferón-alfa comercializadas. Véanse, por ejemplo, los diversos productos de interferón-alfa comercializados y diversas patentes y otra bibliografía referida a interferón-alfa citada más arriba.

Los tipos de interferón-alfa que se pueden utilizar en la combinación son los que se han bosquejado más arriba, en la sección de definiciones. En una realización preferida, el interferón alfa es un interferón alfa pegilado. En una realización adicional, el interferón alfa es un interferón alfa-2a pegilado o interferón alfa-2b pegilado. En una realización particularmente preferida, el interferón alfa es PEGASYS® o PEG-INTRON®.

Cuando se emplean productos de interferón alfa conocidos y comercializados, tales productos pueden ser administrados a los niveles de dosificación indicados en su etiqueta para la terapia combinada con interferón más ribavirina para el tratamiento de la infección por HCV. Naturalmente, con la terapia combinada triple de la presente invención puede que sea posible emplear una dosificación más baja de interferón alfa, por ejemplo, significativamente más baja de la que se emplea en la actual terapia estándar con interferón más ribavirina, y al mismo tiempo se obtenga la misma o mejor eficacia que con la terapia estándar actual, y menos efectos secundarios asociados usualmente con dicha terapia.

En una realización, el interferón alfa se puede administrar por vía parenteral de una a tres veces por semana, preferiblemente una o dos veces por semana. Con respecto a los interferones alfa pegilados, éstos son administrados típicamente una vez por semana, y la dosis semanal total abarca, por ejemplo, de aproximadamente 0.5 pg /kg/semana a aproximadamente 2 pg /kg/semana en el caso del interferón alfa-2b pegilado, y con respecto al interferón alfa-2a pegilado la dosificación es independiente del peso corporal del paciente, y se sitúa típicamente en aproximadamente 90 a 200 pg/semana, con mayor preferencia de aproximadamente 160 a aproximadamente 200 pg/semana. En combinación con ribavirina, una dosificación estándar de interferón alfa-2b pegilado es aproximadamente 1.5 pg/kg/semana y una dosificación estándar de interferón alfa-2a pegilado es aproximadamente 180 pg/semana, junto con aproximadamente 600-1200 mg/día, en particular 800-1200 mg/día de ribavirina oral.

De acuerdo con realizaciones adicionales, el interferón alfa-2b pegilado puede ser administrado a dosificaciones de: (a) de aproximadamente 0.5 pg/kg/semana a aproximadamente 2 pg/kg/semana; (b) de aproximadamente 1 pg/kg/semana a aproximadamente 2 pg/kg/semana; (c) de aproximadamente 1.5 pg/kg/semana a aproximadamente 2 pg/kg/semana; (d) aproximadamente 1.5 pg/semana De acuerdo con realizaciones adicionales, el interferón alfa-2a pegilado puede ser administrado a dosificaciones de: (a) de aproximadamente 90 a aproximadamente 200 pg/semana; (b) de aproximadamente 160 a aproximadamente 200 pg/semana; (b) aproximadamente 180 pg/semana El tercer componente de la combinación terapéutica, en concreto la ribavirina, está comprendido en una composición farmacéutica. Típicamente, tales composiciones comprenden ribavirina y un adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable y son bien conocidas en la técnica, ya que incluyen diversas formulaciones de ribavirina comercializadas. Están descritas formulaciones que comprenden ribavirina, por ejemplo, en la patente de EE.UU. 4,211 ,771.

Los tipos de ribavirina que se pueden utilizar en la combinación son los que se han bosquejado más arriba, en la sección de definiciones. En una realización preferida, la ribavirina es REBETOL® o COPEGUS®, y puede ser administrada a los niveles de dosificación indicados en la etiqueta para la indicación de terapia combinada con interferón más ribavirina para el tratamiento de infección por HCV. Naturalmente, con la terapia combinada triple de la presente invención puede que sea posible emplear una dosificación más baja de ribavirina, por ejemplo, más baja de la que se emplea en la actual terapia estándar con interferón más ribavirina, y al mismo tiempo se obtenga la misma o mejor eficacia que con la terapia estándar actual, y menos efectos secundarios asociados usualmente con dicha terapia.

De acuerdo con diversas realizaciones, la ribavirina se puede administrar a dosificaciones de (en dosis únicas o divididas): (a) entre 400 mg/día hasta aproximadamente 1200 mg/día, (b) entre aproximadamente 800 mg/día hasta aproximadamente 1200 mg/día, (c) entre aproximadamente 000 mg/día hasta aproximadamente 200 mg/día, (d) aproximadamente 1000 mg/día (e) aproximadamente 1200 mg/día (f) entre aproximadamente 300 mg/día hasta aproximadamente 800 mg/día, (g) entre aproximadamente 300 mg/día hasta aproximadamente 700 mg/día, (h) entre 500 mg/día hasta aproximadamente 700 mg/día, (i) entre 400 mg/día hasta aproximadamente 600 mg/día, (j) aproximadamente 400 mg/día (k) aproximadamente 600 mg/día (I) aproximadamente 800 mg/día De acuerdo con una realización, la composición de ribavirina comprende ribavirina en una formulación adecuada para ser administrada una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, cinco veces al día, o seis veces al día. Por ejemplo, si una combinación terapéutica comprende una dosis de aproximadamente 1000 mg/día de ribavirina, y se desea la administración cinco veces al día, la combinación terapéutica comprenderá ribavirina en una formulación, por ejemplo un comprimido, que contenga, por ejemplo, aproximadamente 200 mg de ribavirina.

Con respecto a la terapia combinada triple de la presente invención con Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo más interferón alfa más ribavirina, la presente invención contempla e incluye todas las combinaciones de las diversas realizaciones y sub-realizaciones preferidas tal como se han expuesto más arriba.

Por ejemplo, en una realización la presente invención contempla un método para tratar infección por virus de la hepatitis C (HCV) o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, que comprende el paso de administrar al paciente una combinación terapéutica que comprende: (a) Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a una dosis entre aproximadamente 48 mg al día y aproximadamente 480 mg al día; (b) interferón alfa-2a pegilado, a una dosis de aproximadamente 160 a aproximadamente 200 µg/semana o interferón alfa-2b pegilado, a una dosis de aproximadamente 0.5 pg/kg/semana hasta aproximadamente 2 pg/kg/semana; y (c) ribavirina a una dosis entre aproximadamente 400 mg/día hasta aproximadamente 1200 mg/día.

En otra realización, la presente invención contempla un método para tratar infección por virus de hepatitis C (HCV) o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, que comprende el paso de administrar al paciente una combinación terapéutica que comprende: (a) Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a una dosis entre aproximadamente 48 mg al día y aproximadamente 480 mg al día, (b) interferón alfa-2a pegilado, a una dosis de aproximadamente 180 pg/semana, y (c) ribavirina a una dosis de entre aproximadamente 1000 mg/día hasta aproximadamente 1200 mg/día.

En otra realización, la presente invención contempla un método para tratar infección por virus de hepatitis C (HCV) o aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, que comprende el paso de administrar al paciente una combinación terapéutica que comprende: (a) Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a una dosis entre aproximadamente 48 mg al día y aproximadamente 480 mg al día, (b) interferón alfa-2b pegilado, a una dosis de aproximadamente 1 ,5 pg/kg/semana, y (c) ribavirina a una dosis de aproximadamente 800 mg/día.

Realizaciones adicionales incluyen cualquiera de las realizaciones antes mencionadas, en las cuales: (a) la infección por HCV es del genotipo 1 y el paciente es un paciente sin tratamiento anterior, o (b) la infección por HCV es del genotipo 1 y el paciente es un paciente con experiencia de tratamiento que no responde a una terapia combinada de interferón más ribavirina.

Realizaciones adicionales incluyen cualquiera de las realizaciones antes mencionadas, en donde el Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es administrado una vez al día, el interferón alfa es administrado una vez a la semana, y la ribavirina es administrada dos veces al día.

De acuerdo con otra realización, el régimen terapéutico de la presente invención comprende administrar a un paciente durante al menos aproximadamente 4 semanas, más preferiblemente al menos aproximadamente 12 semanas o bien al menos aproximadamente 24 semanas: (i) una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo una vez al día, (ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de interferón alfa una vez a la semana; y (iii) una cantidad terapéuticamente eficaz de ribavirina dos veces al día.

De acuerdo con otra realización, la presente invención proporciona kits para uso en el tratamiento de infección por HCV en un paciente. Los kits de la presente invención pueden comprender cualquiera de las combinaciones terapéuticas de la presente invención. Los kits comprenden además instrucciones para utilizar las combinaciones terapéuticas. Los kits pueden estar hechos a la medida de las necesidades de clases o tipos de pacientes u otros factores clínicamente relevantes tales como edad, peso corporal, enfermedades o estados concomitantes, gravedad y estadio de la infección por HCV, presencia o ausencia de respuesta a tratamientos anteriores, propensión a efectos secundarios, etc.

De acuerdo con otra realización, la presente invención proporciona un kit que comprende: (a) una primera composición farmacéutica que comprende un Compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (b) una segunda composición farmacéutica que comprende interferón alfa, (c) una tercera composición farmacéutica que comprende ribavirina, y (d) instrucciones para utilizar las composiciones anteriores.

Adicionalmente, se han observado resultados sorprendentes en la supresión de resistencia vírica a HCV durante el tratamiento con terapia combinada contemplado por la presente invención. La administración de Compuesto (1) (sal sódica) como monoterapia produjo un rápido rebote de carga vírica en los primeros 14 días de tratamiento en la mayoría de los pacientes de todos los grupos de dosis de pacientes sin tratamiento anterior en los cuales se habían observado disminuciones en la carga vírica. Por el contrario, entre los 19 pacientes con experiencia de tratamiento que habían recibido Compuesto (1) (sal sódica) una vez al día (abreviado qd) en dosis de 48 mg (n=6), 120 mg (n=7), o 240 mg (n=6) en una combinación con interferón alfa 2a pegilado y ribavirina (PegIFN/RBV) durante 28 días, sólo se observó rebote vírico durante los 28 días de tratamiento en 2/6 pacientes en el grupo de dosis de 48 mg, y en 1/7 pacientes en el grupo de dosis de 120 mg. Es digno de mención que no se observó rebote durante los primeros 28 días en el grupo de pacientes con experiencia de tratamiento que había recibido tratamiento con Compuesto (1) (sal sódica) en dosis de 240 mg qd en combinación con PegIFN/RBV.

De acuerdo con esto, en una realización adicional se presenta una emergencia limitada o nula de resistencia vírica durante la terapia combinada de la presente invención. En una realización más específica, se presenta una emergencia limitada o nula de variantes de HCV que codifican sustituciones de aminoácidos de proteasa NS3 de HCV en uno o más de R155 y/o D168 y/o A156 durante la terapia combinada de la presente invención.

Realizaciones adicionales incluyen cualquiera de las realizaciones antes mencionadas, en las cuales: (a) la infección por HCV es del genotipo 1a y el paciente es un paciente sin tratamiento anterior; o bien (b) la infección por HCV es del genotipo 1a y el paciente es un paciente con experiencia de tratamiento que no responde a una terapia combinada de interferón más ribavirina. y en donde se presenta una emergencia limitada o nula de variantes que codifican sustituciones en el aminoácido R155 de la proteasa NS3 durante la terapia combinada de la presente invención.

Realizaciones adicionales incluyen cualquiera de las realizaciones antes mencionadas, en las cuales: (a) la infección por HCV es del genotipo 1b y el paciente es un paciente sin tratamiento anterior; o bien (b) la infección por HCV es del genotipo 1b y el paciente es un paciente con experiencia de tratamiento que no responde a una terapia combinada de interferón más ribavirina. y en donde se presenta una emergencia limitada o nula de las variantes que codifican sustituciones en el aminoácido D168 de la proteasa NS3 durante la terapia combinada de la presente invención.

Ejemplos I. Métodos para preparar Compuesto (1) Se pueden encontrar métodos para preparar Compuesto (1) amorfo en las patentes de EE.UU. 6.323.180, 7.514.557 y 7.585.845, que quedan incorporadas en el presente documento por referencia. Los siguientes Ejemplos 1 a 5 proporcionan métodos para preparar formas adicionales de Compuesto (1) que se pueden emplear en la presente invención.

Ejemplo 1 - Preparación de forma cristalina tipo A de Compuesto (1) Se cargó Compuesto (1) amorfo (lote 7, 13,80 g) en un matraz de 1000 mi con tres bocas. Se añadió al matraz etanol absoluto (248,9 g). Con agitación, se calentó el contenido del matraz a un ritmo de 60 °C/hora hasta llegar a ~ 74 °C (el sólido no se disuelve a 74 °C).

A continuación se añadió a la suspensión resultante agua (257.4 g) de manera lineal a lo largo de 4 horas, con agitación y manteniendo la temperatura a 74 °C. Cuando se hubo terminado la adición de agua, se redujo linealmente la temperatura hasta la temperatura ambiente a un ritmo de 8 °C/hora, y después se mantuvo a temperatura ambiente durante 6 horas, con agitación.

Se separó por filtración el sólido resultante, y se lavó con 50 mi de mezcla EtOH/agua 1/1 (peso/peso). Se secó el sólido húmedo durante 30 minutos en el embudo, succionando N2 a través de la torta (el análisis XRPD de esta muestra indica que el difractogama es similar al del solvato de EtOH). A continuación se secaron los sólidos a 65-70 °C bajo vacío (P = 635 mm Hg) y una pequeña corriente de nitrógeno durante 1.5 horas. Mediante XPRD se confirmó que el sólido resultante (12.6 g, rendimiento corregido 95.5 %) era Compuesto (1) de tipo A.

Ejemplo 2 - Preparación de la sal sódica de Compuesto (1) - Método 1 Se añadieron a un vial 2.1 g de sal sódica amorfa de Compuesto (1) y 8.90 g de acetona, y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se separaron por filtración las aguas madres de la suspensión, y los sólidos resultantes se secaron durante 20 minutos con flujo de nitrógeno. Se obtuvieron 1.51 g de sal sódica cristalina de Compuesto (1) en forma de un sólido.

Ejemplo 3 - Preparación de la sal sódica de Compuesto (1) - Método 2 Se añadieron a un reactor de 250 mi 15.6 g de Compuesto (1) tipo A, 175 mi de acetona y 3,6 mi de agua, y se calentó a 53 °C para disolver el sólido. Se añadieron al reactor 900 ul de NaOH 10.0 N, y se sembró la disolución con tipo A. Se agitó a 53 °C durante 10 minutos la disolución' sembrada. Se añadió una segunda porción de 900 ul de NaOH 10.0 N, y se agitó el kit a 53 °C durante 30 minutos, en el transcurso de los cuales se formó una suspensión. Se enfrió la suspensión hasta 19 °C a un ritmo de enfriamiento de 15 °C por hora, y se mantuvo durante una noche a 19 °C. Se filtró la suspensión finalmente resultante, y el sólido húmedo se lavó con 15 mi de acetona. Se secó el sólido durante 1 hora a 52 °C en vacío, con una corriente de nitrógeno, y después se expuso el sólido al aire del laboratorio durante una hora.

Se obtuvieron 2.1 g de sal sódica de Compuesto (1) como sólido cristalino.

Ejemplo 4 - Preparación de la sal sódica de Compuesto (1) - Método 3 Se cargaron en un reactor 25.4 kg de Compuesto (1) amorfo, 228 L de THF y 11.1 kg de NaOH (aq) al 10% en peso. Se mezclaron los componentes a 25 °C para disolver todo el sólido. Se filtró la disolución resultante, y se lavaron el reactor y el filtro con 23 L de THF. Se eliminaron 180 L de disolvente por medio de destilación atmosférica a 65 °C. Se añadieron 195 L de MIBK y se eliminaron 166 L de disolvente mediante destilación a vacío a - 44 °C. Se añadieron de nuevo al reactor 161 L de MIBK y 0,41 kg de agua, y se calentó su contenido a 70 °C. Se añadieron 255 g de siembra de sal sódica de Compuesto (1) a 70 °C, y se agregaron 1.42 L dé agua en el transcurso de 1.5 horas. Después de añadido el agua, se mantuvo la suspensión a 70 °C durante 45 minutos, y después se enfrió hasta 45 °C en el transcurso de 1 hora. Se filtró la suspensión resultante, y se lavó con 64 L de MIBK que contenía ~0.8% en peso de agua. Se secó 55 °C la torta húmeda para proporcionar ~ 25 Kg de sal sódica cristalina de Compuesto (1).

Ejemplo 5 - Preparación de la sal sódica de Compuesto (1) - Método 4 Se añadieron a un reactor 2.00 g de Compuesto (1) amorfo, 9.96 g de THF y 0.11 g de agua, y se agitó a temperatura ambiente para disolver el sólido. Se añadieron gota a gota 0.820 mi de NaOEt al 21% en peso en etanol, mientras se agitaba la disolución, para obtener la disolución A. Se añadieron a un segundo reactor 15.9 g de n-BuAc y 160 ul de agua, y se calentaron a 65 °C (disolución B). Se añadieron 2.56 g de disolución A a la disolución B, a 65 °C, y se sembró la mezcla resultante con 40 mg de siembra de sal sódica de Compuesto (1). Se dejó envejecer la mezcla sembrada a 65 °C durante 45 minutos. Se añadieron 2.56 g de disolución B a la disolución A y se envejeció durante 45 minutos, en cuatro intervalos separados. Después de la última adición y envejecimiento, se enfrió la suspensión a 50 °C en el transcurso de 1 hora, y se filtró. Se lavó la torta húmeda con 6 mi de n-BuAc que contenía 0.5% en peso de agua. El sólido final se secó a 50 °C en vacío con una pequeña corriente de nitrógeno. Se obtuvo sal sódica de Compuesto (1) como un sólido cristalino.

II. Resultados clínicos Para los ensayos clínicos que se describen a continuación, el producto farmacéutico administrado fue una solución oral de sal sódica de Compuesto (1). Se proporcionó la sal sódica de Compuesto (1) a los lugares del ensayo clínico en forma de un polvo, para preparar una solución oral usando un disolvente asimismo suministrado. El disolvente fue utilizado también como placebo.

Ejemplo 6 - Estudio clínico con pacientes sin tratamiento anterior Seguridad y actividad antivírica de sal sódica de Compuesto (1), un nuevo inhibidor de proteasa NS3 de HCV, en pacientes sin tratamiento anterior con infección crónica de hepatitis C de genotipo-1, como monoterapia y en combinación con Peginterferón alfa 2a (P) y ribavirina (R) Antecedentes: La sal sódica de Compuesto (1) es un inhibidor de proteasa NS3 de HCV (CE50 3-6 nM).

Un estudio múltiple de dosis crecientes evaluó la seguridad y la actividad antivírica en pacientes sin tratamiento anterior con infección por HCV de genotipo-1 , como monoterapia durante 14 días seguida de terapia combinada triple con P+R durante 14 días más.

Métodos: 34 pacientes (de Francia, Alemania, España, EE.UU.) con una puntuación Metavir de fibrosis de 0-3 y que no habían recibido anteriormente terapia con ningún interferón ni con R fueron agrupados al azar (2 placebo : 6 ó 7 sustancia activa) en 4 grupos de dosis una vez al día (qd) de sal sódica de Compuesto (1): 20 mg (n=8), 48 mg (n=9), 120 mg (n=9), o 240 mg (n=8). Se administró sal sódica de Compuesto (1) como monoterapia durante 14 días. A los pacientes con disminución de carga vírica (siglas inglesas VL) <1 Iog10 en el Día 10 se les dejó de administrar sal sódica de Compuesto (1) después del Día 14. Los pacientes con una disminución de VL >1 Iog10 en el Día 10 continuaron con sal sódica de Compuesto (1) el Día 15 y se les añadió P (180 g/semana) + R (basado en el peso) para recibir la terapia combinada triple hasta el Día 28. El punto final primario era una reducción de VL=2 Iog10 en cualquier momento hasta el Día 14. Los niveles plasmáticos de ARN de HCV se midieron con el ensayo COBAS® TaqMan® de Roche (LLOQ 25 UI/mL). Después del Día 28, a discreción del investigador, los pacientes podían continuar recibiendo el tratamiento de cuidado estándar, es decir P + R.

Resultados: 33 pacientes eran de raza blanca, 1 de raza asiática, 27 hombres, edad media = 48.9±11.1 años, peso corporal medio 79.1 ±17.5 kg, y la media (y el intervalo) de VL de línea de base eran 6.8 (4.7-7.7) Iog10. No había diferencias demográficas significativas entre los grupos de dosis. La sal sódica de Compuesto (1) fue bien tolerada. Ningún paciente abandonó el tratamiento durante la monoterapia a causa de efectos adversos (EA). Los EA observados eran los típicos de P+R. Un EA grave, astenia, se produjo en la cohorte de dosis 20 mg 6 días después de iniciar P+R. En todos los pacientes se observó una rápida disminución de VL, produciéndose la disminución máxima típicamente 2-4 días después de comenzar a recibir sal sódica de Compuesto (1). Con la excepción de 1 paciente en la cohorte de 20 mg, todos los pacientes que recibían sal sódica de Compuesto (1) lograron una disminución > 2 Iog10 de VL durante el período con monoterapia. La media (y el intervalo) de las reducciones máximas de VL durante la monoterapia de 14 días para los grupos de 20 mg, 48 mg, 120 mg, y 240 mg fue 3.0 (1.5-3.9), 3.6 (3.1-3.8), 3.7 (3.3-4.1), y 4.2 (3.6-4.8) Iog10 Ul/ml, respectivamente. No se observó cambio significativo en la VL con placebo. En la mayoría de los pacientes de todos los grupos de dosis se observó el rebote de VL durante el tratamiento en los primeros 14 días de monoterapia.

Conclusión: La sal sódica de Compuesto (1) como monoterapia durante 14 días seguida de combinación con P+R durante 14 días más fue bien tolerada, e indujo una intensa y rápida respuesta antivírica en pacientes sin tratamiento anterior.

La Figura 1 representa el cambio medio en la carga vírica de HCV en los cuatro grupos de pacientes, agrupados por dosis, de este estudio, es decir, pacientes sin tratamiento anterior, que padecen infección crónica por HCV de genotipo 1 , tratados con sal sódica de Compuesto (1) como monoterapia durante 14 días, seguida de terapia combinada con sal sódica de Compuesto (1), interferón alfa-2a pegilado y ribavirina durante 14 días más. En la Figura, el cambio en la carga vírica se da en unidades Iog10 Ul/ml, y los cuatro grupos de pacientes en cuanto a dosis se designan de la manera siguiente: "20 naív av" = cambio medio en carga vírica en el grupo de dosis de 20 mg "48 naiv av" = cambio medio en carga vírica en el grupo de dosis de 48 mg "120 naiv av" = cambio medio en carga vírica en el grupo de dosis de 120 mg "240 naiv av" = cambio medio en carga vírica en el grupo de dosis de 240 mg Emergencia de variantes durante la terapia a pacientes sin tratamiento anterior La determinación de la secuencia de proteasa NS3/4A de la población, en la línea de base y en el rebote durante el tratamiento, reveló la selección de variantes que confieren resistencia in vitro a la sal sódica de Compuesto (1). Se observaron cambios notables en los restos clave dentro del dominio de proteasa NS3 con respecto a la referencia del subtipo (sub-genotipo 1a: AF009606 o sub-genotipo1b: AJ238799) durante la terapia, en diversos grupos de dosis. Véanse los detalles en la Tablas 1 a 4 a continuación. En todas las tablas, Gt representa el sub-genotipo de HCV, y Día 1 representa la secuencia de línea de base y las sustituciones de aminoácidos indicadas son polimorfismos de NS3 naturales en restos clave. Los cambios adicionales, que pueden codificar la resistencia al .fármaco, o estar asociados a la misma, se señalan a distintos días durante el tratamiento.

Tabla 1 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes sin tratamiento anterior en el grupo de dosis de 20 mg ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del límite de detección de la amplificación PCR ND: no determinado * Codifica el polimorfismo de línea de base V/I170T.

Tabla 2 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes sin tratamiento anterior en el grupo de dosis de 48 mg. ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del límite de detección para la determinación de la secuencia ND: no determinado Tabla 3 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes sin tratamiento anterior en el grupo de dosis de 120 mg 120N7 1a ninguna R155K BLD BLD 120N8 1b ninguna D168V D168V BLD 120N9 1b Q86P Q86P, Q86P, Q86P, R155K A156[T, A], D168[D,I, A, D168[D, V] V] ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del límite de detección para la determinación de la secuencia ND: no determinado Tabla 4 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes sin tratamiento anterior en el grupo de dosis de 240 mg ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del límite de detección de la amplificación PCR y de la determinación de la secuencia ND: no determinado Ejemplo 7 - Estudio clínico en pacientes con tratamiento anterior Seguridad y actividad antivírica de sal sódica de Compuesto (1), un nuevo inhibidor de proteasa NS3 de HCV, en pacientes con tratamiento anterior con P+R, que padecen infección crónica de hepatitis C de genotipo-1 , en terapia combinada con Peginterferón alfa 2a (P) y ribavirina (R) durante 28 días.

Antecedentes: La sal sódica de Compuesto (1) es un inhibidor de proteasa NS3 de HCV (CE5o 3-6 nM). Un estudio múltiple de dosis creciente evaluó la seguridad y actividad antivírica en pacientes que habían recibido tratamiento anterior con P+R, que padecían infección crónica de hepatitis C de genotipo-1 , durante 28 días como terapia combinada con P + R.

Métodos: 19 pacientes (de Francia, Alemania, España, EE.UU.) con una puntuación Metavir de fibrosis de 0-3, que habían tenido previamente un fracaso virológico con terapia combinada P+R, fueron designados para recibir sal sódica de Compuesto (1 ) una vez al día (qd) en dosis de 48 mg (n=6), 120 mg (n=7), o 240 mg (n=6) en combinación con P (180 pg/semana) + R (basada en el peso) durante 28 días. Se vigiló a todos los pacientes en cuanto a seguridad y tolerancia de los fármacos en estudio. El punto final primario era una reducción >2 Iog10 en la carga vírica (VL) de HCV con respecto a la línea de base, en cualquier momento hasta el Día 28. Los niveles plasmáticos de ARN de HCV se midieron con el ensayo COBAS® TaqMan® de Roche (LLOQ 25 UI/mL). Los pacientes con tratamiento anterior de este estudio incluían pacientes con respuesta nula a P+R y pacientes con respuesta parcial. Después del Día 28, a discreción del investigador, los pacientes podían continuar recibiendo el tratamiento de cuidado estándar, es decir P + R.

Resultados: 19 pacientes eran de raza blanca, 1 1 hombres, edad media 48±9 años, peso corporal medio 81 ±15 kg, y la media (y el intervalo) de VL de línea de base eran 6.9 (5.9-7.4) Iog10. No había diferencias demográficas significativas entre los grupos de dosis. La sal sódica de Compuesto (1 ) fue bien tolerada y no se observaron entre los pacientes de este estudio efectos adversos (EA) importantes ni graves. Los EA eran típicos de P + R. Un paciente abandonó el tratamiento a causa de un EA (ansiedad). En todos los pacientes se observó una rápida disminución de VL relacionada con la dosis. Todos los pacientes tratados con sal sódica de Compuesto (1) + P+R lograron una disminución de VL > 2 Iog10 con la terapia combinada triple. La media (y el intervalo) de las reducciones máximas de VL durante la terapia combinada de 28 días para las cohortes de dosis de 48 mg, 120 mg y 240 mg fue 4.8 (3.4-5.9), 5.2 (3.9-6.0), y 5.3 (4.8-6.1) Iog10 Ul/ml, respectivamente. Se observó un rebote virológico durante el tratamiento durante los primeros 28 días de administración de sal sódica de Compuesto (1) + P + R en 2/6 pacientes en el grupo de dosis de 48 mg y en 1/7 pacientes en el grupo de dosis de 120 mg. En estos pacientes, la determinación de la secuencia de proteasa NS3/4A de la población, en la línea de base y en el rebote vírico durante el tratamiento, reveló la selección de variantes en el dominio de proteasa NS3 de los cuales se ha demostrado que confieren resistencia in vitro a la sal sódica de Compuesto (1). Un paciente en el grupo de dosis de 120 mg no presentó rebote virológico, pero llegó a una meseta de VL de ~500 copias UI/mL en el Día 28, y codificaba un mutante R155K; esta muestra de carga vírica estaba por debajo del límite inferior de detección de los ensayos de resistencia fenotípica utilizados por los autores de la presente invención.

No se observó rebote durante el tratamiento Bl 201335 durante 28 días en la cohorte de dosis de 240 mg qd: 5/6 pacientes tenían VL < 25 UI/mL en el Día 28. El sexto paciente presentaba en el Día 28 una disminución de VL de 4.7 Iog10 desde la línea base, y la VL era < 25 UI/mL en la siguiente visita, en el Día 42.

Conclusión: La sal sódica de Compuesto (1), administrada una vez al día en terapia combinada con P + R durante 28 días fue bien tolerada, e indujo una intensa y rápida respuesta antivírica en pacientes con tratamiento anterior.

La Figura 2 representa el cambio medio en la carga vírica de HCV en tres grupos de pacientes, agrupados por dosis, para este estudio, es decir pacientes que ya habían recibido tratamiento, con infección crónica por HCV de genotipo 1 , tratados con sal sódica de Compuesto (1), interferón alfa-2a pegilado y ribavirina como terapia combinada durante 28 días. En la Figura, el cambio en la carga vírica está expresado en unidades Iog10 Ul/ml, y los cuatro grupos de pacientes en cuanto a la dosis se designan de la manera siguiente: "48 NR av" = cambio medio de carga vírica en el grupo de dosis de 48 mg "120 NR av" = cambio medio de carga vírica en el grupo de dosis de 120 mg "240 NR av" = cambio medio de carga vírica en el grupo de dosis de 240 mg En la tabla siguiente se muestran algunos parámetros relacionados con la respuesta virológica (reducción de la carga vírica) en los pacientes de este estudio ("D" = día, y "QD" = una vez al día; "N" = número de pacientes; "por debajo del límite de cuantificación" significa menos de 25 Ul por mi de suero). 1220.2 Respuesta Virológica en pacientes con experiencia de tratamiento Emergencia de variantes durante la terapia a pacientes con tratamiento.anterior Existen cambios notables en los restos clave dentro del dominio de proteasa NS3 con respecto a la referencia del subtipo (sub-genotipo 1a: AF009606 o sub-genotipo1b: AJ238799) durante la terapia, en diversos grupos de dosis. Véanse los detalles en la Tablas 1 a 4 a continuación. En todas las tablas, Gt representa el sub-genotipo de HCV y Día 1 representa la secuencia de línea de base, siendo las sustituciones de aminoácidos indicadas polimorfismos naturales de NS3 en restos clave. Los cambios adicionales, que pueden codificar la resistencia al fármaco, o estar asociados a la misma, se señalan a distintos días durante el tratamiento.

Tabla 5 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes con tratamiento anterior, en el grupo de dosis de 48 mg. • r e Día de T •atamiento paciente Gt •y-;V í» ·'¦" 1 14y -„> ".,,., 28 168 ' . : 48TE1 1a Q80K Q80K Q80K, R155K Q80K, R155K 48TE2 1a Q80L BLD BLD BLD 48TE4 1a Q80R BLD BLD BLD 48TE3 1b ninguna D168V D168V R155R/K/Q 48TE5 1b Q86P BLD BLD BLD 48TE6 1 b Q86P BLD BLD Q86P, R155K ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del limite de detección de la amplificación PCR y de la determinación de la secuencia Tabla 6 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes con tratamiento anterior, en el grupo de dosis de 120 mg. ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del limite de detección de la amplificación PCR y de la determinación de la secuencia * meseta de VL a < 1000 Ul/ml en estos puntos temporales.

Tabla 7 Variantes predominantes (con respecto a la referencia del subtipo) en restos clave de las secuencias de aminoácidos basadas en la población, de los pacientes con tratamiento anterior, en el grupo de dosis de 240 mg.

Día de Tratamiento Paciente Gt 240TE1 1a ninguna BLD 240TE2 1a ninguna BLD 240TE3 1a ninguna BLD 240TE4 1 b ninguna BLD 240TE5 1 b Q86P BLD 240TE6 1a ninguna BLD ninguna: no se observaron sustituciones en las posiciones seleccionadas BLD: por debajo del límite de detección de la amplificación PCR y de la determinación de la secuencia Evaluación global Estos resultados demuestran un intenso y muy rápido efecto antivírico en pacientes sin tratamiento anterior tratados con sal sódica de Compuesto (1) una vez al día como monoterapia durante 14 días, que es seguida por formación de resistencia antivírica y aumento de la carga vírica después de 5-6 días de monoterapia. Sin embargo, al iniciarse la terapia combinada triple de la presente invención en el Día 14 (sal sódica de Compuesto (1) con interferón alfa 2a pegilado y ribavirina), la carga vírica disminuyó progresivamente, lo que demuestra la eficacia antivírica de la terapia combinada triple de la presente invención en pacientes sin tratamiento anterior. Véase la Figura 1.

Cuando se administró sal sódica de Compuesto (1) una vez al día a pacientes con experiencia de tratamiento (pacientes con respuesta nula y con respuesta parcial a interferón más ribavirina) en combinación con interferón alfa 2a pegilado y ribavirina durante 28 días, los resultados demuestran la misma respuesta antivírica intensa y muy rápida, pero con formación reducida de resistencia. Véase la Figura 2. Se habría esperado en estos pacientes con experiencia de tratamiento y respuesta nula que se hubiera producido una resistencia vírica similar después del Día 5, ya que estos pacientes habían sido seleccionados por no responder a la terapia de interferón pegilado más ribavirina.

Sin embargo, se produjo una supresión vírica continua.

En esencia, se ha demostrado que la terapia combinada triple de la presente invención puede reducir eficazmente la carga vírica de pacientes con infección crónica por virus de hepatitis C de genotipo 1, tanto sin tratamiento anterior como con experiencia de tratamiento, y, en algunos pacientes al menos, mantenerla a un nivel no detectable, que se define como inferior a 50 Unidades Internacionales por mi de suero de un paciente, determinado mediante el método de PCR de transcriptasa inversa multi-ciclo, cuantitativo, de acuerdo con la norma de la Organización Mundial de la Salud (WHO). En realizaciones preferidas, la terapia combinada triple de la presente invención puede reducir eficazmente la carga vírica en pacientes infectados con HCV de genotipo 1 a un nivel inferior a 10 Unidades Internacionales por mi de suero.

Los resultados realmente sorprendentes incluyen: (1) ausencia de formación de resistencia temprana (por ejemplo, variantes que codifican sustituciones de aminoácidos de NS3 en R155 y/o D168) en pacientes con experiencia de tratamiento que son tratados con sal sódica de Compuesto (1) en combinación con interferón alfa 2a pegilado y ribavirina a las dosis habituales (Figura 2) en comparación con el efecto de la misma dosis de sólo sal sódica de Compuesto (1) en pacientes sin tratamiento anterior, en quienes se produjo resistencia vírica (véase la Figura 1 , primeros 14 días). Se hubiera esperado que en pacientes con experiencia de tratamiento se produjese una resistencia vírica similar después del Día 5 incluso con la adición de interferón alfa 2a pegilado y ribavirina, ya que estos pacientes habían sido seleccionados por el hecho de no responder a una anterior terapia combinada con interferón pegilado más ribavirina; y (2) el hecho de que una dosis de sólo 120 mg QD (una vez al día) en combinación con interferón pegilado y ribavirina indujese una depleción vírica por debajo del nivel de cuantificación (definido como menos de 25 Ul por mi de suero) en más de 50% de los pacientes con experiencia de tratamiento que anteriormente no habían respondido a la terapia con interferón pegilado más ribavirina (véase la tabla).

Ejemplo 8 - Métodos para identificar variantes de NS3 de HCV EXTRACCIÓN DE ARN VÍRICO Y AMPLIFICACIÓN POR PCR Se aisló ARN vírico de plasma de pacientes infectados con HCV, y primeramente se sintetizó un fragmento de ADN de 2.4 kpares de bases que contenía la región NS3-NS4A completa, empleando el sistema de RT-PCR en un solo paso SUPERSCRIPT™ III (Invitrogen) y dos cebadores específicos del gen que abarcaban las posiciones 3276 en NS2 y 5650 en NS4B. Tras purificar el primer producto de PCR, se generaron después dos productos de PCR distintos, de segundo paso, semianidados, de 2.3 y 0.7 kpares de bases, respectivamente (que abarcaban respectivamente todo NS3/NS4A o sólo el dominio de proteasa de NS3) empleando la polimerasa de ADN KOD Hot Start (Novagen). El límite de detección del método de amplificación RT-PCR restringió el análisis a muestras de pacientes con VL por encima de 1000 Ul/ml.

ANÁLISIS DE SECUENCIA Después se usó el producto de ADN de 2.3 kpares de bases para determinar la secuencia, basada en la población, de toda la región NS3-NS4A 2055 nt empleando BIG DYE® Terminator V3.1 (Applied Biosystems) y un analizador genético ABI PRISM® 3130XL Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Se obtuvieron secuencias a partir de 10 cebadores, para conseguir al menos 90% de cobertura de cadena doble para la región NS3-NS4A. Las secuencias nucleotídicas resultantes fueron analizadas con SEQSCAPE® v2.5 (Applied Biosystems).

El fragmento de ADN de 0.7 kpares de bases se empleó para generar secuencias basadas en clones (equipo de clonación ZEROBLUNT® TOPO® Cloning Kit, Invitrogen) de la región de proteasa de 543 nt NS3 que cubre los primeros 181 aminoácidos de NS3; se tomaron 96 clones de cada muestra, y se determinó su secuencia utilizando cebadores universales con el sistema secuenciador por PCR cíclica ABI PRISM® BIG DYE™ Terminator. Se realizaron dos secuencias de un solo paso para cada clon, dando como resultado una cobertura de 90-100% de doble cadena de la región 543 nt analizada con MUTATION SURVEYOR™ v3.0 (Softgenetics LLC). Para cada muestra de paciente, no se incluyeron en el análisis posterior los clones con baja calidad de secuencia o que contenían deleciones, inserciones o codones de parada, de manera tal que el número de clones analizados variaba de 74 a 89 (con una mediana y promedio de 80 clones).

Se compararon las secuencias resultantes con secuencias de referencia de acuerdo con sus subtipos respectivos, que se habían determinado previamente durante la fase de barrido de prueba con el ensayo para determinación del genotipo TRUEGENE™ HCV 5'NC. AF009606 sirvió como referencia para el subtipo 1a y AJ238799 para el subtipo 1b. Se prestó particular atención a mutaciones que producían sustituciones de aminoácido en 15 posiciones del dominio de proteasa de NS3. De todas estas posiciones se había descrito con anterioridad que potencialmente confería resistencia a esta clase de compuestos. Las posiciones son: 36, 41 , 54, 71 , 80, 86, 89, 109, 111 , 155, 156, 168, 170, 176 y 178 (Referencias: [1.] Tong X, Bogen S, Chase R, Girijavallabhan V, Guo Z, Njoroge FG, Prongay A, Saksena A, Skelton A, Xia E, Ralston R. Characterization of resistance mutations against HCV ketoamide protease inhibitors. Antiviral Res. 2008 March 77(3): 177-185. [2.] Lagacé L, Marquis M, Bousquet C, Do F, Gingras R, Lamarre D, Lamarre L, Maurice R, Pause A, Pellerin C, Spickler C, Thieault D, y Kukolj G. BILN 2061 y posteriores: Pre-clinical evaluation of HCV subgenomic replicón resistance to a NS3 protease inhibitor, en Framing the Knowledge of Therapeutics for Viral Hepatitis, compilado por RF Schinazi y ER Schiff, páginas 263-278, IHL Press, 2006 [3.]Koev G, Kati W. The emerging field of drug resistance. Expert Opinión Invest Drugs 17(3), 303-319, 2008 (P08-03895) ENSAYOS DE SENSIBILIDAD AL FÁRMACO Se modificó un vector lanzadera de replicón de HCV bicistrónico (plT2) que comprendía un gen informador de luciferasa y una región Con-1 NS3 /NS5B adaptada, a fin de crear dos sitios de restricción únicos (Mlu I y Spe I) en los codones 11 y 225 de NS3, que permitiesen la inserción de amplicones compatibles con NS3 aislados de muestras de plasma de pacientes infectados con HCV. Se empleó el producto de PCR de primer paso sintetizado a partir del ARN purificado a partir del plasma de paciente (utilizado también para generar fragmentos destinados a la determinación de la secuencia basada en la población y basada en clones) para amplificar un fragmento de 0.65 k pares de bases con pares cebadores que contenían respectivamente los sitios de restricción únicos Mlu\ y Spel para inserción en el vector lanzadera. Se ligaron los amplicones en el vector lanzadera plT2, y se empleó el ADN de plásmido reconstituido para generar transcriptos de ARN de replicón subgenómico de HCV (equipo T7 RIBOMAX™, Promega). Mediante electroporación se transfectó temporalmente el ARN transcrito in vitro, a células Huh-7.5 que después fueron sembradas en placas de 96 pocilios durante 24 horas, y tratadas con una serie de concentraciones de sal sódica de Compuesto (1) (o IFN-a) durante un período de 72 horas. Al término de la incubación, se midió la actividad de luciferasa con el sustrato BRIGHT-GLO™, ya que la luminiscencia cuantificada (en cps) en cada pocilio de la placa de cultivo reflejaba la cantidad de replicación de ARN de HCV. El nivel de inhibición (% de inhibición) en cada pocilio que contenía inhibidor se calculó con la siguiente ecuación: % de inhibición = 100- [100 x CPS (inhibidor) / CPS (testigo)] La concentración que producía 50 % de inhibición de la replicación de ARN de HCV (CE50) se determinó mediante el procedimiento de rutina de regresión no lineal NLIN de SAS. Se comparó el CE50 de la NS3 mutante con la CE5o de línea de base, y se utilizó para generar valores de cambio en múltiplos. En muestras correspondientes a rebote durante el tratamiento, las mutaciones con resistencia al genotipo 1a predominantes codificaban una sustitución en R155K, y se detectaron otras variantes menores mediante el análisis de secuencia clonal en esta posición. Las variantes R155K conferían reducciones en la sensibilidad a Bl 201335 con un abanico de valores de CE50 de 1.8 - 6.5 µ?.

Los virus de genotipo 1b codificaban principalmente cambios en D168, siendo valina la sustitución predominante, y se detectaron otras variantes menores mediante un análisis de secuencia sensible. Los valores de CE50 para las variantes D168 abarcaban 3.6 - 15 µ?. Este perfil puede ser atribuible, en parte, a una distinta barrera mutacional a la resistencia en el codón R155 del genotipo 1a (una única transición de nucleótido cambia el codón a lisina) frente al genotipo 1b (que requiere dos sustituciones de nucleótido para codificar un cambio a lisina.

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1.- El uso de una combinación de: (a) un compuesto de la fórmula (1) siguiente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (b) interferón alfa; y (c) ribavirina, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una infección viral de la hepatitis C (HCV) o para aliviar uno o más síntomas de la misma.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende (a) una primera formulación farmacéutica que comprende un compuesto con la fórmula (1) siguiente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (b) una segunda formulación farmacéutica que comprende interferón alfa; y (c) una tercera composición farmacéutica que comprende ribavirina.

3. - El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en donde los componentes (a), (b) y (c) están presentes en el medicamento en una cantidad terapéuticamente eficaz.

4. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la infección por HCV es del genotipo 1.

5. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el medicamento es para el tratamiento de una infección viral de la hepatitis C (HCV) o para aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente que nunca se ha sometido a tratamiento.

6. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el medicamento es para el tratamiento de una infección viral de la hepatitis C (HCV) o para aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente que no responde a una terapia combinada con ribavirina y un interferón alfa.

7. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el medicamento es para el tratamiento de una infección viral de la hepatitis C (HCV) o para aliviar uno o más síntomas de la misma en un paciente, en que los niveles de ARN de HCV en el paciente se reducen hasta menos del nivel detectable como resultado del tratamiento.

8. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde dicho medicamento se administra durante al menos 4 semanas.

9. - El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la cantidad administrada de compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es de al menos 40 mg al día.

10. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la cantidad administrada de ribavirina se seleccionada de 400 mg/día, 600 mg/día, 800 mg/dia, 1000 mg/día o 1200 mg/día.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde se administra interferón alfa una vez a la semana.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde dicho interferón alfa es un interferón alfa pegilado.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el interferón alfa pegilado es interferón alfa-2a pegilado administrado a una dosis de aproximadamente 90 hasta aproximadamente 200 pg/semana o es interferón alfa-2b pegilado administrado a una dosis de aproximadamente 0.5 pg/kg/semana hasta aproximadamente 2 pg/kg/semana.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el tratamiento es para una infección por HCV del genotipo 1 en un paciente que no responde a una terapia combinada utilizando ribavirina y un interferón, se administra el compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad entre aproximadamente 48 mg al día y aproximadamente 240 mg al día, y en donde el interferón alfa es interferón alfa-2a pegilado o interferón alfa-2b pegilado.

15. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el compuesto (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra una vez al día; la ribavirina se administra dos veces al día; y el interferón alfa se administra una vez a la semana.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde existe emergencia limitada o nula de variantes de HCV que codifican sustituciones de aminoácidos de la proteasa NS3 de HCV en uno o más de: R155, D168 o A156.

17. Un kit que comprende: (a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto con la fórmula (1) siguiente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (b) una segunda composición farmacéutica que comprende interferón alfa; y (c) una tercera composición farmacéutica que comprende ribavirina.