MX2011002337A - Anticuerpo monoclonal e inmunoanalisis que utiliza el mismo. - Google Patents

Abstract

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que sea capaz de reaccionar específicamente con IgM humana e inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en solución y un inmunoanálisis utilizando el anticuerpo monoclonal. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana que no se pueden evitar por métodos convencionales, y un inmunoanálisis en el cual se supriman las reacciones no específicas causadas por IgM humana. Al seleccionar un anticuerpo monoclonal que reacciona con IgM humana en base en la evaluación de reactividad con IgM en solución, se ha obtenido un anticuerpo monoclonal novedoso capaz de aglutinar IgM humana por sí mismo y realizar un análisis de inmunoaglutinación práctico, y se obtienen de esta manera los objetivos anteriores.

Description

ANTICUERPO MONOCLONAL E INMÜNOANALISIS QUE UTILIZA EL MISMO CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con un anticuerpo monoclonal que es capaz de reaccionar específicamente con inmunoglobulina M (Ig ) humana e inducir aglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con inmunoglobulina M humana en solución, y un fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal así como un inmunoanálisis , reactivo de análisis y equipo de análisis utilizando el anticuerpo monoclonal o un fragmento funcional. La presente invención se relaciona adicionalmente con un hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal .

Además, la presente invención se relaciona con un agente para suprimir reacciones no específicas y un inmunoanálisis que utiliza las mismas, y de manera más específica, un agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana en un inmunoanálisis utilizando al mismo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Un ejemplo de métodos de análisis utilizados ampliamente en el campo de diagnóstico es el inmunoanálisis para detección de un analito (una sustancia para la cual se realiza la prueba) que está presente en una muestra de prueba utilizando un anticuerpo generado contra el analito por adelantado. En particular, el análisis por inmunoaglutinación es un método para medir cualitativa o cuantitativamente un analito en una muestra, en base en el grado de aglutinación del inmunocomplejo similar a retícula que se forma a través de generación de puentes de los analitos por el anticuerpo. Puesto que el análisis de inmunoaglutinación es adecuado para detección óptica y puede ser automatizado con facilidad, se aplica ampliamente para probar una diversidad de artículos de prueba clínicos.

La IgM humana, producida en las etapas más tempranas de la respuesta inmunitaria, está presente en plasma en aproximadamente 50 a 200 mg/dl (500 a 2000 µg/ml) y representa un marcador de enfermedad que puede indicar potencialmente una diversidad de enfermedades tales como mieloma múltiple y enteropatía de pérdida de proteínas cuando su nivel es menor que un nivel normal, o enfermedad de colágeno y macroglobulinemia cuando su nivel es mayor que el nivel normal.

Muchos productos de diagnóstico que se han basado en el principio del análisis de inmunoaglutinación y que han intentado que la IgM humana también se han puesto en uso práctico, pero los anticuerpos utilizados en estos productos hasta ahora han sido policlonales .

Un anticuerpo policlonal es una colección de anticuerpos que tienen reactividades diversas y que se unen a epitopos múltiples en una molécula analito. Por lo tanto, el anticuerpo policlonal tiene una propiedad fuertemente aglutinante y es más adecuado para análisis de inmunoaglutinación de un analito que no tiene copias múltiples del mismo epitopo dentro de la molécula. No obstante, los anticuerpos policlonales que se unen a epitopos múltiples presentan baja especificidad. Esto en realidad se ilustra en el ejemplo de la IgM humana. Puesto que existen cinco inmunoglobulinas estructuralmente similares (que incluye inmunoglobulina G) en el cuerpo, la preparación de un anticuerpo policlonal especifico para IgM podría requerir un procedimiento para retirar fracciones de anticuerpo que dan reacción cruzada con otras inmunoglobulinas, lo cual es extremadamente problemático y laborioso .

Por otra parte, un anticuerpo monoclonal, el cual está comprendido de un anticuerpo único y tiene una alta especificidad conforme se une a un epitopo específico, se prepara fácilmente y funciona de manera consistente. Además, puesto que la modificación o alteración de los anticuerpos monoclonales por medio de manipulación genética se ha vuelto más fácil en años recientes, los anticuerpos monoclonales se han vuelto cada vez más importantes no solo para el diagnóstico sino también en el campo de - - tratamientos terapéuticos y sus áreas de aplicación se expanden aún más.

En principio, se puede utilizar un anticuerpo monoclonal en un análisis de inmunoaglutinacion por un analito que tenga copias múltiples del mismo epitopo. No obstante, se ha Creído que un anticuerpo monoclonal anti- IgM no puede inducir eficientemente aglutinación con inmunoglobulina M el cual tiene diez copias del mismo epitopo dentro de su molécula, y los anticuerpos monoclonales hasta ahora no se han utilizado en métodos de análisis de inmunoaglutinacion. Como se muestra en la figura 1, la IgM plasmática tiene una configuración en forma de estrella en la cual cinco de las estructuras unitarias en forma de Y están distribuidas con sus colas en el centro y sus cabezas en la periferia. La forma de Y es la estructura unitaria de inmunoglobulina y es bien sabido que su región de bisagra es flexible. Además, como se muestra en la imagen de microscopía electrónica del documento que no es de patente 1, la estructura unitaria con cinco formas en Y pueden asumir (b) una conformación de estrella plana con las colas de la forma en Y en el centro y las cabezas en la periferia, o (c) la conformación descrita como "en forma de cangrejo" en la cual las cabezas de la forma en Y apuntan hacia la misma dirección desde la base que fija las colas, lo cual confirma que la región que fija la cola de la forma Y también es flexible.

Puesto que la región que fija cada una de las subunidades dentro de una molécula IgM es flexible y la estructura tridimensional de la molécula cambia fácilmente como se explica en lo anterior, un anticuerpo monoclonal anti-IgM podría no formar un puente iñtermolecular por unión a dos moléculas de IgM, en vez de esto principalmente forma lo que se denomina un puente intramolecular al unir el epítopo en dos lugares sobre una molécula de IgM única, como se muestra en la figura 2. Por lo tanto, se ha considerado que un anticuerpo monoclonal anti-IgM puede no ser capaz de inducir eficientemente inmunoaglutinación con IgM y anticuerpos policlonales que se unen a epítopos múltiples se han utilizado con renuencia. Aunque ha habido ejemplos en donde se han utilizado anticuerpos monoclonales, únicamente representan casos en los cuales los anticuerpos monoclonales múltiples se utilizan en combinación con el fin de producir el efecto de un anticuerpo policlonal (por ejemplo, el documento de patente 4, ejemplo 3) de esta manera, un anticuerpo monoclonal que tenga una propiedad de aglutinar IgM humana por sí mismo no se ha conocido. Además, los procedimientos de cribado en la producción de hibridomas que producen anticuerpos monoclonales anti-IgM humana se han llevado a cabo previamente en base en las fuerzas de reactividad determinadas bajo la condición en donde la IgM humana o el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana es inmovilizado sobre una fase sólida; es decir, la reactividad entre los mismos en solución no se ha utilizado como un índice (documentos de patente 1-3) .

Los avances en las tecnologías en años recientes ha hecho posible producir anticuerpos contra diversas sustancias y de esta manera el número de usos de reactivos de diagnóstico en base en los inmunoanálisis continúa aumentando. En consecuencia, los niveles de desempeño requeridos en los reactivos se vuelven cada vez mayores que nunca y existen necesidades que surgen nuevas para evitar estrictamente reacciones no específicas.

Una reacción no específica se refiere a un fenómeno en el cual uno o varios factores contenidos en una muestra de prueba facilitan la unión que no está basada en una reacción específica o inhiben inmunoreacciones específicas las cuales pueden provocar resultados de análisis erróneos. Los factores que se sabe causan reacciones no específicas incluyen los anticuerpos heterófilos y los factores reumatoides (RF) .

Un anticuerpo heterófilo es un término colectivo para los anticuerpos humanos que muestran reactividad contra los anticuerpos derivados de animales los cuales son los componentes principales de los inmunoanálisis. un ejemplo típico de anticuerpo heterofilo es HAMA (anticuerpo humano anti-inmunoglobulina de ratón) . Un anticuerpo heterofilo puede producirse como resultado de sensibilización inducida sin conocimiento al antígeno tal como por comer, por contacto con el animal o por administración de sustancias biofarmacéuticas . No obstante, un anticuerpo no sensibililizado también posiblemente puede mostrar la propiedad de anticuerpo heterofilo y por lo tanto aún permanece mucho por comprender respecto a los orígenes de los anticuerpos heterófilos. Por otra parte, los factores reumatoides aparecen en pacientes con artritis reumatoide y su sitio de unión también se ha determinado. Por lo tanto, se entiende al factor reumatoide como un concepto separado del anticuerpo heterofilo, pero comparte la misma propiedad de presentar reactividad contra anticuerpos derivados de animales y sus identidades se conocen en humanos que son IgG o IgM, como se describe en el documento que no es de patente 2.

Respecto a las medidas contra reacciones no específicas causadas por anticuerpos heterófilos, el reactivo de bloqueo heterofílico HBR que comprende anticuerpo monoclonal anti-IgM humana descrito en los documentos que no son de patente 3 y 4 previamente se ha vuelto disponible comercialmente y se ha utilizado en una diversidad de pruebas clínicas que utilizan los principios de los inmunoanálisis .

Otras medidas concebidas previamente para suprimir reacciones no especificas incluyen la del documento de patente 5 el cual involucra una adición de un anticuerpo policlonal contra anticuerpos naturales y de IgM humana, los cuales se preparan en las mismas especies animales que los anticuerpos usados en el análisis y el del documento de patente 6, el cual involucra una adición de un anticuerpo contra el sitio de unión del factor reumatoide, el cual se deriva de cualquiera de los diversos animales. No obstante, el uso de anticuerpo policlonal requiere una gran cantidad dé antigeno por un periodo de tiempo prolongado para inmunizar al animal. Además, el primero únicamente puede suprimir reacciones no especificas causadas por los anticuerpos naturales y el último tiene solo un efecto limitado de supresión de reacciones no especificas debido a que el sitio de unión del factor reumatoide reconocido en la presente tiene una naturaleza variable en primer lugar, de hecho, conforme se incrementan los números de pruebas y artículos de prueba que utilizan inmunoanálisis, se vuelve cada vez más evidente que las medidas convencionales para suprimir reacciones no específicas no funcionan eficazmente para algunas muestras.

DOCUMENTOS DE LA TECNICA ANTERIOR DOCUMENTOS DE PATENTE Documento de patente 1: Publicación de solicitud de patente JP S60-42400 Documento de patente 2: Publicación de solicitud de patente JP S63-58260 Documento de patente 3: Publicación de solicitud de patente JP H06-504424 Documento de patente 4: Publicación de solicitud de patente JP S60-237363 Documento de patente 5: Patente JP 4065600 Documento de patente 6: Publicación de solicitud de patente JP H07-012818 DOCUMENTOS QUE NO SON DE PATENTE Documento que no es de patente 1: Roitt, Essential Immunology, tercera edición en el idioma original, figura 2.16.

Documento que no es de patente 2: Rinsho Kagaku, volumen 3, suplemento 175a-l - 175a-10 (1994) Documento que no es de patente 3: Material de publicidad para un reactivo de bloqueo heterofilico HBR (Nagase & Co. Ltd., 1993) Documento que no es de patente 4: CLIN. CHEM. 45/7, 942 - 956 (1999) .

DESCRIPCION DE LA INVENCION PROBLEMAS A SER RESUELTOS POR LA INVENCIÓN Un objetivo de la presente invención es proporcionar un anticuerpo monoclonal anti-Ig humana que reacciona específicamente con Ig humana y que es capaz de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo en solución con IgM humana, fragmentos funcionales del anticuerpo monoclonal, e inmunoanálisis, reactivos de análisis y equipos de análisis utilizando el anticuerpo monoclonal o fragmentos, y además, un hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal.

Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar una agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana, e inmunoanálisis utilizando al agente.

MEDIO PARA RESOLVER EL PROBLEMA Los presentes inventores han llevado a cabo una investigación extensa para obtener los objetivos anteriores y mediante el uso de la reactividad en solución como un índice de evaluación en el cribado para anticuerpos monoclonales que reaccionen con IgM humana, los inventores han podido encontrar un anticuerpo monoclonal novedoso que es capaz, por sí mismo (es decir, al ser un anticuerpo monoclonal único) de proporcionar formación de puentes entre moléculas de IgM humanas para provocar aglutinación, y/o para realizar un análisis de inmunoaglutinación práctico. Esto ha llevado a la elaboración de la presente invención. El anticuerpo monoclonal obtenido de esta manera no necesariamente presenta una reactividad elevada en el procedimiento de evaluación convencional en el cual el antigeno se inmoviliza sobre una fase sólida.

Los presentes inventores también han realizado el hallazgo sorprendente de que reacciones no especificas, incluso aquellas que no pueden ser bloqueadas por las medidas convencionales, se pueden suprimir fuertemente por el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana, el cual es capaz de aglutinar IgM humana por si mismo. Por lo tanto, otra objetivo de la presente invención es proporcionar un agente para suprimir reacciones no especificas que comprenden al anticuerpo monoclonal anti-IgM humana capaz de aglutinar IgM humana por si mismo.

Un objetivo adicional de la presente invención se relaciona con inmunoanálisis, reactivos de análisis y equipos de análisis caracterizados porque la supresión de las reacciones no especificas y la precisión de mediciones en los inmunoanálisis que se basan en reacciones antigeno-anticuerpo se obtienen por la adición del anticuerpo monoclonal anti-IgM humana capaz de aglutinar IgM humana por si mismo.

Específicamente, la presente invención comprende lo siguiente. (1) Un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que reacciona específicamente con IgM humana y que es capaz de formar un agregado inmune en base en una reacción antigeno- anticuerpo con IgM humana en solución. (2) El anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de acuerdo con el inciso (1) anterior obtenido por un método de producción de anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que comprende las siguientes etapas: Etapa 1) una etapa de obtener hibridomas que producen anticuerpos anti-IgM humana mediante el uso de IgM humana como un antigeno.

Etapa 2) Una etapa de colocar en contacto los anticuerpos producidos por los hibridomas obtenidos en la etapa 1 con IgM humana en solución y seleccionar un hibridoma que produzca un anticuerpo capaz de formar un agregado inmune en base en una reacción antigeno-anticuerpo con IgM humana en la solución.

Etapa 3) Una etapa de obtención del anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado en la etapa 2. (3) Un anticuerpo que se selecciona de los incisos (a) o (b) siguientes: (a) Un anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FERM BP-11134. (b) El anticuerpo de acuerdo con el inciso (1) que muestra una reactividad cruzada con el anticuerpo de acuerdo con el inciso (a) anterior. (4) Un fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de acuerdo con cualquiera de los incisos (1) a (3) anterior. (5) Un análisis de inmunoaglutinación para determinar la cantidad de IgM humana en una muestra, que comprende el uso de un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de los incisos (1) a (3) antériores y/o un fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal de acuerdo con el inciso (4) anterior. (6) Un reactivo de análisis de inmunoaglutinación y un equipo de análisis de inmunoaglutinación para determinar la cantidad de IgM humana en una muestra, que comprende el anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de los incisos (1) a (3) anteriores y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal de acuerdo con el inciso (4) anterior . (7) Un hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal de acuerdo con los incisos (1) o (2) anteriores. (8) El hibridoma FERM BP-11134. (9) Un método para producir anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que comprende las siguientes etapas : Etapa 1) Una etapa de obtención de hibridomas que producen anticuerpos anti-IgM humana mediante la utilización de IgM humana como un antigeno.

Etapa 2) Una etapa poner en contacto los anticuerpos producidos por los hibridomas obtenidos en la etapa 1 con IgM humana en solución y seleccionar un hibridoma que produzca un anticuerpo capaz de formar un agregado inmune en base en una reacción antigeno-anticuerpo con IgM humana en la solución.

Etapa 3) Una etapa de obtener el anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado de la Etapa 2. (10) Un agente para suprimir reacciones no especificas causadas por IgM humana, que comprende el anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de los incisos (1) a (3) anteriores y/o el fragmento funcional derivado de anticuerpo monoclonal de acuerdo con el inciso (4) anterior. (11) Un inmunoanálisis para determinar la cantidad de un analito en una muestra en base en una reacción de antigeno-anticuerpo entre el analito y un anticuerpo de análisis o un antigeno de análisis, en donde las reacciones no especificas causadas por IgM humana que no incluyen a la reacción antigeno-anticuerpo se suprime por una adición de un agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana, el agente comprende al anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de los incisos (1) a (3) anteriores y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal de acuerdo con el inciso (4) anterior. (12) El inmunoanálisis de acuerdo con el inciso (11) anterior, en donde el anticuerpo de análisis o el antigeno de análisis está soportado sobre un portador insoluble . (13) El inmunoanálisis de acuerdo con el inciso (12) anterior, en donde el portador insoluble comprende látex, metal coloidal o sílice. (14) Un reactivo de inmunoanálisis y un equipo de inmunoanálisis, que comprende: un agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana el cual comprende el anticuerpo monoclonal de acuerdo con los incisos (1) a (3) anteriores y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal de acuerdo con el inciso (4) anterior; y un anticuerpo de análisis o un antígeno de análisis para determinar la cantidad de un analito en una muestra. (15) El reactivo de inmunoanálisis y el equipo de inmunoanálisis de acuerdo con el inciso (14) anterior, en donde el anticuerpo de análisis o el antígeno de análisis está soportado sobre un portador insoluble. (16) El reactivo de inmunoanálisis y el equipo de inmunoanálisis de acuerdo con el inciso (15) anterior, en donde el portador insoluble comprende látex, metal coloidal y sílice.

- - EFECTOS DE LA INVENCION El anticuerpo monoclonal de la presente invención ha hecho posible proporcionar un método para detectar específicamente IgM humana, así como un reactivo y equipo de alta calidad y barato para analizar inmunoaglutinación de IgM humana.

Además, puesto que el método de cribado de la presente invención para determinar anticuerpo monoclonal evalúa el grado de aglutinación en solución como un índice para seleccionar el anticuerpo, el método es eficaz y capaz de seleccionar un anticuerpo monoclonal de interés con una alta precisión.

Además, puesto que el agente de la presente invención para suprimir reacciones no específicas no forma un complejo 1:1 con una IgM que representa formación de puentes intramoleculares, el agente puede neutralizar la interferencia de IgM eficientemente. De esta manera, el inmunoanálisis, el reactivo de inmunoanálisis y el equipo de inmunoanálisis utilizando el agente de la presente invención puede suprimir no sólo los tipos habituales de reacciones no especificadas causadas por IgM humana sino también aquellas que pueden no evitarse por medidas convencionales. Por lo tanto, la presente invención permite mediciones más precisas para una amplia gama de artículos de prueba y muestras de prueba en comparación con métodos de medición convencionales y se puede utilizar adecuadamente para el inmunoanálisis el cual se utiliza en un número cada vez mayor de pruebas clínicas.

DESCRIPCION BREVE DE LAS FIGURAS La figura 1 es un modelo estructural de una IgM humana.

La figura 2 muestra los modos de unión de la IgM y un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana convencional.

La figura 3 muestra los resultados de pruebas de medición de inmunoaglutinación utilizando el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención (Ejemplo 1) .

La figura 4 muestra los efectos del agente de la presente invención para suprimir reacciones no especificas y los agentes de control para bloquear reacciones no específicas sobre el análisis de un espécimen normal con el reactivo de látex para pruebas de PSA.

La figura 5 muestra los efectos de bloqueo del agente de la presente invención y los agentes de control para el bloqueo de reacciones no específicas sobre el análisis de un espécimen de reacción no específico con el reactivo de látex para la prueba de PSA.

La figura 6 muestra los efectos de bloqueo del agente de la presente invención y los agentes de control para el bloqueo de reacciones no específicas sobre la medición de un espécimen de reacción no especifico con el reactivo para prueba de insulina.

MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCION Anticuerpo monoclonal anti-IgM humana El anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención no se une por limitaciones particulares en la medida en que tiene la propiedad de reaccionar específicamente con IgM humana, formando un puente intermolecular entre moléculas de IgM humanas en solución y al ser capaz de realizar un análisis de inmunoaglutinacion como un anticuerpo monoclonal único. Como se utiliza en la presente, la frase "reaccionar específicamente con IgM humana" significa que el anticuerpo monoclonal se somete a una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana pero no con otras inmunoglobulinas humanas. Brevemente no se ha llevado a cabo una búsqueda de un anticuerpo monoclonal contra IgM desde el punto de vista de si puede provocar inmunoaglutinacion y por lo tanto el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención puede aglutinar IgM humana en sí mismo es novedoso.

Además, los anticuerpos monoclonales anti-IgM convencionales no proporcionan formación de puentes entre dos moléculas de inmunoglobulina y únicamente son capaces de formar un puente intramolecular dentro de una molécula de inmunoglobulina única. No obstante, el anticuerpo monoclonal de la presente invención que, en si mismo puede aglutinar IgM humana, puede formar un puente intermolecular entre moléculas de IgM humanas y por lo tanto es capaz de suprimir fuertemente reacciones no especificas causadas por IgM humana y, como se describe en lo siguiente, puede ser utilizado adecuadamente como un agente para supresión de reacciones no especificas.

Los ejemplos específicos de los anticuerpos monoclonales anti-IgM humana de la presente invención incluyen el anticuerpo monoclonal producido por hibridoma FERM BP-11134. Además, los anticuerpos que muestran una reactividad cruzada con el anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FERM BP-11134 también están comprendidos en el alcance del anticuerpo de la presente invención. Los anticuerpos que muestran una reactividad cruzada con el anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FERM BP-11134 incluyen aquellos que pueden reconocer específicamente la secuencia de aminoácidos del mismo epítopo (determinante antigénico) que el anticuerpo monoclonal .

Fragmento funcional En la presente invención, cualquier fragmento funcional que comprende una región Fab derivada del anticuerpo monoclonal se puede utilizar, si la región Fab se obtiene por una digestión enzimática del anticuerpo monoclonal, por manipulación genética o por otros medios. Así, en el fragmento funcional de la presente invención, el término "funcional" significa específicamente que el fragmento tiene capacidad de unirse a IgM humana.

Muestra de prueba La muestra de prueba para el análisis de inmunoaglutinación para IgM humana utilizando el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana o el fragmento funcional del mismo, de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier muestra biológica, tal como un fluido corporal, por ejemplo sangre, suero, plasma y orina.

Método de análisis El análisis de inmunoaglutinación para IgM humana de acuerdo con la presente invención no se une por limitación particular alguna en la medida en que realice pruebas para IgM humana al mezclar de alguna manera el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención y la muestra de prueba y por lo tanto, induciendo inmunoaglutinación. Con el fin de facilitar adicionalmente la inmunoaglutinación, también se puede utilizar otro anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que reconozca un epítopo diferente a aquel del anticuerpo monoclonal, y no existe limitación particular respecto a la propiedad de este anticuerpo monoclonal adicional.

Reactivo de análisis de inmunoaglutinación y equipos de análisis El reactivo y el equipo para los análisis de inmunoaglutinación para IgM humana que utilizan anticuerpo monoclonal anti-IgM humana o el fragmento funcional del mismo de la presente invención puede contener un componente para amortiguar la fuerza iónica, la fuerza' osmótica o similar de la muestra, o un componente para incrementar la aglutinación inmunológica . Los ejemplos del componente para amortiguar la fuerza iónica, la fuerza osmótica o similares de la muestra incluyen ácido acético, ácido cítrico, ácido fosfórico, Tris, glicina, ácido bórico, ácido carbónico y amortiguador de Good, así como sal de sodio, sal de potasio y sal de calcio. Los ejemplos del componente para incrementar la aglutinación inmunológica incluyen polietilenglicol, polivinilpirrolidona y polímero de fosfolipido .

El reactivo y el equipo para los análisis de inmunoaglutinación para IgM humana que utilizan el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana o el fragmento funcional del mismo de la presente invención son compatibles con mediciones ópticas, realizadas sobre un espectrofotómetro, un analizador automático de la corporación Hitachi que utiliza el principio de espectrofotometría , un analizador automático general como la serie TBA de Toshiba corporation, la serie BM de la JEOL Corporation y la serie AU de la Olympus Corporation y la CP2000 de la Sekisui Medical Corporation, un dispositivo para analizar el intervalo de longitud de onda del infrarrojo cercano (por ejemplo LPIA de Mitsubishi Kagaku Iatron corporation) , un dispositivo para medir la intensidad de luz dispersada (por ejemplo, el sistema BN de Dade Behring corporation) o similar.

No existe limitación particular respecto a las tecnologías utilizadas para la preparación del anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención, pero generalmente involucra la producción de hibridomas. En el procedimiento de evaluación para seleccionar el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención, los anticuerpos son cribados en base en los grados de aglutinación de IgM humana que pueden inducir en solución. En consecuencia, el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana obtenido de esta manera tendrá la propiedad de reaccionar específicamente con IgM humana y aglutinar IgM humana por sí mismos.

Cualquier alteración o modificación estructural puede permitirse al anticuerpo monoclonal anti-IgM humana preparado de la presente invención en la medida en que la alteración o modificación no perjudique en gran medida las características del anticuerpo monoclonal con respecto a la reactividad con IgM humana.

Hibridoma El hibridoma utilizado para producir el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención puede ser cualquier hibridoma que sea capaz de producir un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que pueda reaccionar específicamente con IgM humana e inducir inmunoaglutinación con IgM humana en base en una reacción antígeno-anticuerpo en solución y el hibridoma se puede seleccionar en base a que el anticuerpo monoclonal producido por el mismo es altamente capaz de inducir inmunoaglutinación con IgM humana en solución. De esta manera, el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención se puede producir vía las siguientes etapas 1) a 3) .

Etapa 1) Una etapa de establecimiento de hibridomas se producen anticuerpos anti-IgM humana mediante la utilización de IgM humana como un antígeno.

Etapa 2) Una etapa de poner en contacto los anticuerpos producidos por los hibridomas obtenidos en la etapa 1 con IgM humana en solución y seleccionar un hibridoma que produzca un anticuerpo capaz de formar un agregado inmune en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en la solución.

Etapa 3) Una etapa de obtención del anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado en la etapa 2.

Los ejemplos de los hibridomas seleccionados en la etapa 2 incluyen FERM BP-11134.

El cribado de los hibridomas en el procedimiento de producción anterior se pueden llevar a cabo, de manera más especifica, al permitir que los anticuerpos purificados reaccionen con IgM humana en solución y seleccionar los hibridomas en base en las diferencias de los anticuerpos correspondientes en su capacidad para inducir inmunoaglutinación en solución. Para seleccionar un hibridoma que produce el anticuerpo de la presente invención más eficientemente, se puede realizar preselección de los hibridomas que producen anticuerpos anti-IgM humana, antes del procedimiento de selección mencionado antes mediante la utilización, por ejemplo, de sobrenadantes de cultivo de los hibridomas en vez de los anticuerpos purificados sobre IgM humana en una fase sólida, como en la prueba de ELISA, etc.

El anticuerpo obtenido mediante el procedimiento de selección descrito antes tendrá la propiedad de reaccionar específicamente con IgM humana y ser capaz, por sí mismo, de formar un puente intermolecular entre moléculas de IgM humanas en solución y por lo tanto formar un agregado inmune.

Aplicaciones El anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención se puede aplicar para cualquier propósito que haga uso de su propiedad de reacción específicamente con IgM humana y aglutinar IgM por sí mismo. Los ejemplos preferibles incluyen un uso en el análisis de inmunoaglutinación para IgM mencionados antes así como un uso como un agente para suprimir' reacciones biespecíficas causadas por IgM humana. El anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención se puede utilizar adecuadamente como un agente para suprimir reacciones no específicas causadas por IgM humana, debido a que no provoca formación de puentes intramolecular 1:1 con una molécula de IgM humana y por lo tanto puede neutralizar eficientemente IgM humana. No está claro el mecanismo por el cual el anticuerpo de la presente invención es capaz de suprimir incluso aquellas reacciones no específicas causadas por IgM que no pudieron haber sido suprimidas por los agentes convencionales para inhibir reacciones no específicas, pero se considera que su capacidad para aglutinar IgM humana en solución es altamente relevante para el mecanismo. Por ejemplo, es posible que el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que pueda aglutinar IgM humana en solución reconozca un epítopo que existe universalmente entre las moléculas de IgM humanas, sin importar si son del tipo de anticuerpo heterófilo, de factor reumatoide (RF) u otro.

De esta manera, las reacciones no especificas causadas por IgM humana, en el contexto de la presente invención, se refieren a todas las reacciones no especificas causadas por IgM humana que incluyen aquellas cuyos mecanismos de acción han sido conocido tales como la IgM humana en forma de un anticuerpo heterofilo o un factor reumatoide (RF) que reacciona con un anticuerpo derivado de animal, asi como aquellos cuyo mecanismo de acción permanece poco claro. De este modo, los agentes de la presente invención para suprimir reacciones no especificas están destinados para todas las reacciones no especificas en las cuales un factor causal es IgM humana.

El uso de un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención es un agente para suprimir reacciones no especificas puede ser eficaz en solución asi como en fase sólida. Un uso del agente de la presente invención para suprimir reacciones no especificas en solución puede ser, por ejemplo, un caso en donde el agente se agrega a una solución de muestra y se permite que reaccione con IgM humana en la solución para provocar aglutinación de la IgM humana. Un uso del agente en fase sólida puede ser, por ejemplo, un caso en donde una solución que contiene el agente se agrega a una almohadilla de muestra para inmunocromatografia y se seca e inmoviliza sobre la misma por adelantado y la IgM humana contenida en una solución de muestra la cual se aplica y pasa a través de la almohadilla de muestra quedará atrapada por el agente que ha sido inmovilizado.

El agente de la presente invención para suprimir reacciones no especificas se puede utilizar en un inmunoanálisis para determinar la cantidad de un analito en una muestra en base en una reacción antigeno-anticuerpo entre el analito y un anticuerpo de análisis o un antigeno de análisis y mediante su uso, las reacciones no especificas causadas por IgM humana, las cuales no incluyen la reacción de antigeno-anticuerpo, se pueden suprimir eficazmente y de esta manera se obtienen mediciones inmunológicas precisas.

La muestra de prueba para el inmunoanálisis, el reactivo de análisis y el equipo de análisis de la presente invención, los cuales están caracterizados por la adición de anticuerpo monoclonal anti-IgM humana capaz en si mismo de aglutinar IgM humana para suprimir reacciones no especificas y para obtener mediciones precisas, puede ser cualquiera de las diversas muestras biológicas humanas en las cuales posiblemente pudieran ocurrir reacciones no especificas causadas por IgM humana. Los ejemplos de la muestra de prueba incluyen fluidos corporales tales como sangre, suero, plasma y orina. Además, el analito puede ser cualquier molécula en la medida en que se pueda someter a - - una reacción antigeno-anticuerpo y los ejemplos del analito incluyen CRP (proteina C reactiva), Lp (a), MMP3 (metaloproteinasa de matriz 3) , colágeno tipo IV, PSA (antigeno especifico de próstata) , BNP (péptido natriurético de cerebro) , insulina, microalbúmina, cistatina C, anticuerpo antifosfolipidico, anticuerpo anti- Treponema pallidum, FDP (producto de degradación fibrina/fibrinógeno) , dimero D, SF (fibrina soluble), TAT (complejo trombina-antitrombina III), factor XIII y pepsinógenos I y II asi como aptenos tales como los siguientes medicamentos: fenitoina, fenobarbital , carbamazepina, valproato y teofilina. No obstante, este principio de la invención no permite que la IgM humana sea incluida en estos ejemplos del analito.

El anticuerpo monoclonal anti-Ig humana de la presente invención capaz en si mismo de aglutinar IgM humana, utilizado como un agente para suprimir reacciones no especificas causadas por IgM, se puede agregar a una solución o a una fase sólida. No hay limitación particular respecto a la concentración a la cual se agrega el agente en la medida en que produzca de manera suficiente el efecto de suprimir reacciones no especificas y no interfiera con la reacción principal del inmunoanálisis , pero el agente preferiblemente se utiliza en un intervalo de concentración de 0.01 a 10 mg/ml, y de manera más preferible en un intervalo de concentración de 0.05 a 1 rag/ml. En el análisis actual, las reacciones no especificas se pueden suprimir más eficientemente si el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención se pone en contacto con la muestra de prueba antes de la etapa de poner en contacto el anticuerpo de análisis o el antigeno de análisis con la muestra de prueba. También se pueden utilizar en combinación otras medidas para suprimir reacciones no especificas u otros componentes inhibidores.

En el inmunoanálisis, el reactivo de análisis y el equipo de análisis de la presente invención en la cual el componente que es el instrumento en la medición inmunológica (anticuerpo de análisis o antigeno de análisis) está soportado sobre un portador insoluble, el portador insoluble puede ser de cualquier material en la medida en que sea un material insoluble capaz como un componente en un reactivo de prueba médico; los ejemplos específicos incluyen partículas de látex, metal coloidal, sílice y carbono, y es especialmente preferiblemente la partícula de látex. El material y el tamaño del portador insoluble se puede seleccionar según sea apropiado de acuerdo con el tipo del analito y el principio de detección del inmunoanálisis, el reactivo de análisis y el equipo de análisis de la presente invención. En el caso de las partículas de látex anteriores, una partícula portadora que comprende un copolimero elaborado por polimerización de un monómero que tiene un grupo fenilo y un monómero que tiene un grupo fenilo y una sal de ácido sulfónico es preferible, y su tamaño de partícula promedio, medido por microscopía electrónica de transmisión es de 0.01 a 1.5 µ?t?, preferiblemente de 0.03 a 0.8 pm y de manera más preferible de 0.05 a 0.5 µp?.

El inmunoanálisis de la presente invención caracterizado por la supresión del efecto de factores que no son específicos sobre el anticuerpo que se une específicamente a la molécula de analito par obtener mediciones precisas, se puede utilizar cualquier principio de detección, tal como detección enzimática, detección fluorescente, detección quimioluminiscente, detección basada en turbidez y similares. Además, las manipulaciones y las evaluaciones se pueden realizar manual o mecánicamente. De esta manera, el reactivo de inmunoanálisis y el equipo de análisis de la presente invención se pueden utilizar en cualquiera de los siguientes: ELISA, EIA, método quimioluminoscente, inmunocromatografía, métodos de inmunoaglutinacion, método de inmunoaglutinacion mejorado por látex y similar. En particular, el método de inmunoaglutinacion y el método de inmunoaglutinacion mejorado por látex se pueden llevar a cabo en los mismos equipos que los utilizados con un reactivo de análisis de inmunoaglutinación y un equipo de análisis para IgM humana descrito antes.

Además, el reactivo de inmunoanálisis de la presente invención y el equipo de análisis utilizando el reactivo para suprimir reacciones no especificas causadas por IgM humana pueden contener, ' además del componente principal, un componente para amortiguar la fuerza iónica, la fuerza osmótica o similar de la muestra, o un componente para incrementar la inmunoaglutinación el cual puede ser los mismos componentes a los descritos en lo anterior para el reactivo de análisis de inmunoaglutinación y el equipo de análisis para IgM humana.

EJEMPLOS A continuación parte de la presente invención se explicará detalladamente al proporcionar ejemplos del método de producción del anticuerpo monoclonal anti-IgM humana capaz de inducir inmunoaglutinación de IgM humana por si mismo, el análisis de inmunoaglutinación utilizando el anticuerpo monoclonal y el inmunoanálisis utilizando el anticuerpo monoclonal como un agente para suprimir reacciones no especificas. No obstante, la presente invención no se limita a estos ejemplos.

EJEMPLO DE PRUEBA 1 PRODUCCION DE ANTICUERPO MONOCLONAL ANTI-IgM HUMANA DE LA PRESENTE INVENCION (1) Establecimiento de hibridomas que producen anticuerpos monoclonales anti-IgM humana Se utilizan en una inmunización única 100 µg de IgM humana purificada (fabricada por CHEMICON corporation) . En la primera inmunización, se inyectan en la cavidad abdominal de cada uno de ratones BALB/c 200 µ? de una emulsión preparada al mezclar volúmenes iguales de IgM humana y adyuvante completo de Freund. Para una inmunización adicional se utilizan 200 µ? de una emulsión preparada de manera similar pero mediante la utilización de adyuvante incompleto de Freund y se repite la inmunización tres veces a intervalos de 2 semanas cada una. Los títulos de anticuerpo de la sangre recolectada de las venas de la retina de los ratones se mide por ELISA y los ratones que muestran un título antes se seleccionan para fusión celular. Dos semanas después de la cuarta inmunización se inyectan en la cavidad abdominal de los ratones 100 µg de IgM humana disuelta en 200 µ? de solución salina y se extirpa el bazo 3 días después. El bazo se rompe con medio RPMI1640 y las células del bazo después se recolectan por centrifugación a 1,500 rpm. Estas células se lavan por lo menos tres veces en medio RPMI1640 que está libre de suero bovino fetal y después se suspenden en 2 mi de medio RPMI1640 que contiene suero bovino fetal 15% para producir una suspensión de células de bazo. Después de que las células de bazo y las células de mieloma SP2/0-AG14 se mezclan en una proporción de 6 a 1, se induce fusión celular en presencia de polietilenglicol 50% y de esta manera se obtienen los hibridomas (células fusionadas) . Posterior a una centrifugación a 1,500 rpm se recolecta el sedimento y se suspende en la solución GKN (2 g de glucosa, 0.4 g de cloruro de potasio, 8 g de cloruro de sodio, 1.41 g de fosfato ácido disódico y 0.78 g de fosfato diácido de sodio dihidratado que se disuelven en agua purificada hasta constituir 1 1 de solución GKN) , se lava por centrifugación y se recolecta el sedimento. Las células sedimentadas se resuspenden en 30 mi de medio RPMI1640 que contiene suero bovino fetal 15% y 100 µ? de esta suspensión y 200 µ? de medio HAT que contiene las células de timo de ratones BALB/c (que representan las células alimentadoras ) a 2.5 x 106 células/ml se suministran a cada pozo de tres microplacas de 96 pozos. Los hibridomas se cultivan a 37 °C en un incubador con dióxido de carbono 5%.

Se verifica la presencia de anticuerpos anti-IgM humana en los sobrenadantes de cultivo por prueba de ELISA con IgM humana en fase sólida. Diez dias después de la fusión celular, se confirma el crecimiento de hibridomas en cada pozo. De manera detallada, se suministran en cada pozo de microplacas de 96 pozos 100 µ? de solución amortiguadora de fosfato 10 mM (pH 7.2; a continuación abreviado como PBS) que contiene cloruro de sodio 150 mM y 10 µg/ml de Ig humana y se deja a 4°C durante la noche. Después de que estas microplacas de 96 pozos se lavan tres veces con 300 µ? de PBS que contiene Tween 20 0.05% y albúmina sérica bovina 1%, los sobrenadantes de cultivo se agregan a 50 µ?/???? y las placas se dejan a temperatura' ambiente durante 1 hora. Posteriormente las placas se lavan tres veces con PBS que contiene Tween 20 0.05% (a continuación abreviado como PBS-T) , anticuerpo de chivo anti-IgG de ratón marcado con peroxisasas (SouthernBiotech corporation) se agregan a 50 µ?/???? y las placas se dejan reposar a temperatura ambiente durante 1 hora. Posteriormente las placas se lavan tres veces con PBS-T, solución amortiguadora de ácido cítrico (pH 5.0) que contiene orto-fenilendiamina 0.2% y peróxido de hidrógeno 0.02% se agrega a la misma a 50 yl/pozo, las placas se dejan reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos y se agregan ácido sulfúrico 4.5N a 50 µ?/???? para detener la reacción. La absorbancia en cada pozo a la longitud de onda de 492 nm se mide y los pozos que muestran diferencias con respecto al blanco se seleccionan como pozos que se consideran positivos .

Las células se vuelven monoclonales por dilución limitante. Es decir, los hibridomas de pozos positivos mencionados antes se diluyen a 10 células/ml y se colocan 0.1 mi de cada una de estas diluciones en un pozo de placas de 96 pozos en las cuales se utilizan células de timo de ratones BALB/c como células alimentadoras que se han suministrado a 106 células/pozo. Se utiliza el medio HAT para el primer cultivo y se utiliza RPMI1640 que contiene suero bovino fetal 15% para los cultivos subsecuentes. Cada cultivo continúa durante 10 días a 37 °C en un incubador con dióxido de carbono 5%. Las pruebas de ELISA para seleccionar pozos positivos y dilución limitante para establecer la monoclonalidad se repiten cada una tres veces y se obtienen de esta manera 26 lineas de hibridomas (A a Z) que producen anticuerpos monoclonales anti-IgM humana. (2) Producción de los anticuerpos monoclonales Se transfieren aproximadamente 105 células de cada linea de hibridoma a la cavidad abdominal de ratón que han sido pretratados con pristano y los ascitis generados en los mismos se recoletan. Los fluidos asciticos recolectados se centrifugan para separar materiales insolubles y se mezclan con un volumen igual de una solución saturada de sulfato de amonio. Las mezclas se agitan durante la noche y posterior a la centrifugación se recolectan los precipitados. Los precipitados recolectados se disuelven en solución amortiguadora Tris 20 mM (pH 8.0) y se dializan en la misma solución amortiguadora. Los materiales dializados se adsorben por separado en columnas DEAE-Sepharose que han sido equilibradas con la misma solución amortiguadora y los anticuerpos monoclonales anti- IgM humana se obtienen por elusión con un gradiente de concentración 0 a 300 mM de cloruro de sodio en la misma solución amortiguadora. Los anticuerpos monoclonales anti- IgM humana producidos por los hibridomas A a Z se indican como los anticuerpos a a z, respectivamente, y se someten a las pruebas descritas en lo siguiente.

EJEMPLOS DE EVALUACION (1) Ejemplo de Evaluación 1: Evaluación de reactividad en fase sólida (método de evaluación convencional ) Se suministran 50 µ? de PBS que contiene IgM humana a 1 pg/ml en una microplaca de 96 pozos y se deja reposar a temperatura ambiente durante 1 hora y de esta manera la IgM humana se inmoviliza sobre la microplaca. La microplaca después se somete a bloqueo con 200 µ? de PBS que contiene BSA 3% (albúmina sérica bovina) y posterior a la adición de 50 µ? de PBS que contiene el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana a 1 yg/ml al pozo se deja a temperatura ambiente durante 1 hora. La microplaca después de lava tres veces con PBS-T, anticuerpo anti-ratón marcado con peroxidasa y se agrega a 50 µ?/???? y la microplaca se deja a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de tres lavados con PBS-T, se agregan a cada pozo 50 µ? de ácido - - 2,2' -azino-bis ( 3-etilbenztiazolin-6-sulfónico (ABTS) (fabricado por la KLP corporation) y la microplaca se deja reposar a temperatura ambiente durante 20 minutos. La reacción se detiene al agregar 50 µ? de solución SDS 1% a cada pozo. Se mide la absorbancia a una longitud de onda de 405 nm y, de acuerdo con la absorbancia se clasifican las fuerzas de reactividad de los anticuerpos monoclonales anti-Ig humana (tabla 1) . (2) Ejemplo de Evaluación 2: Evaluación de reactividad en solución (método de evaluación de acuerdo con la presente invención) Se agregan 750 µ? de cada uno de las soluciones de anticuerpo monoclonal anti-IgM humana (es decir, solución amortiguadora Tris-ácido clorhídrico 100 mM, pH 8.0 que contiene 400 µg ml de anticuerpo monoclonal anti-IgM humana purificado, polietilenglicol 6000 3%, citrato trisódico 5 mM y cloruro de calcio (anhídrido) 2.5 mM a 150 µ? de PBS que contiene IgM humana a 200 µg/ml y la mezcla se agita. Diez minutos después se mide la absorbancia mediante la utilización de dos longitudes de onda (la longitud de onda principal de 340 nm y la longitud de onda secundaria de 800 nm) en el espectrómetro Hitachi U-3310 (absorbancia 2). En un control se agregan 750 µ? de cada una de las soluciones de anticuerpo monoclonal anti-IgM humana a 150 µ? de PBS que no contiene IgM humana, la - - mezcla se agita y se mide la absorbancia bajo las condiciones idénticas (absorbancia 1) . El cambio en la absorbancia que acompaña la inmunoaglutinación especifica de IgM humana se calcula al restar la absorbancia 1 de la absorbancia 2 (tabla 1) .

TABLA 1 anticuerpo Subtipo Evaluación convencional Evaluación de acuerdo con la presente invención Absorbancia Clasificación Absorbancia Absorbancia Cambio en (Abs) de Reactividad 1 (mAbs) 2 (mAbs) absorbancia a G 0.070 23 4.1 5.3 1.2 b G 0.069 24 3.6 4.8 1.2 c G 0.103 18 4.3 4.7 0.4 d G 0.064 25 4.0 4.8 0.8 e G 0.416 15 5.3 7.5 2.2 f G 0.315 17 6.0 12.1 6.1 g G 0.619 8 4.6 8.3 3.7 h G 0.509 13 3.5 11.5 8.0 i G 0.545 12 5.0 10 5.0 j G 0.710 4 4.4 8.7 4.3 k G 1.464 1 5.6 10.3 4.7 1 G 0.619 8 3.9 7.6 3.7 m G 0.084 20 3.9 4.5 0.6 n G 0.087 19 3.9 5.3 1.4 o G 0.318 16 18.3 20.6 2.3 P G 0.080 21 4.7 5.6 0.9 q G 0.070 23 4.0 4.3 0.3 r G 0.781 3 4.6 10.9 6.3 s G 0.603 10 4.9 8.3 3.4 t G 0.685 6 5.1 161.8 156.7 u G 0.627 7 2.9 6.5 3.6 V G 0.078 22 5.4 5.7 0.3 w G 0.694 5 5.2 8.7 3.5 X G 0.448 14 6.7 11.4 4.7 y G 0.567 11 5.0 13.8 8.8 z G .1.161 2 14.1 16.7 2.6 (3) Resultados de las Evaluaciones A partir del cambio en la absorbancia se encuentra que el anticuerpo T es un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que reacciona específicamente con IgM humana y que es capaz de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en solución. Se hace notar que en el método de evaluación convencional (es decir, evaluación en una condición en fase sólida) , las fuerzas de reactividad de los anticuerpos k y z son prominentes y aunque la reactividad del anticuerpo y fue clasificada en sexto lugar, es menos de la mitad de la reactividad del anticuerpo k y por lo tanto es poco probable que el anticuerpo t de la presente invención hubiera sido seleccionado. Al mismo tiempo, se puede observar que la capacidad para formar un agregado inmune en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en solución no necesariamente coincide con una reactividad fuerte y por lo tanto un anticuerpo monoclonal que tiene la propiedad de la presente invención seria extremadamente difícil de identificar en base únicamente en la evaluación convencional de reactividad en una condición en fase sólida. El hibridoma T que produce el anticuerpo t ha sido depositado bajo el número de depósito de FERM BP-11134.

EJEMPLO 1 VERIFICACION DE INMUNOAGLUTINACION POR AL ANTICUERPO MONOCLONAL ANTI-IgM HUMANA Y SU UTILIDAD POTENCIAL COMO UN AGENTE PARA SUPRIMIR REACCIONES NO ESPECIFICAS (1) Preparación de soluciones de IgM humana Una solución que contiene IgM humana (fabricada por CHEMICON corporation) a 200 pg/ml se diluye de manera seriada en PBS para preparar soluciones de IgM humana de 100, 50 y 25 µg/ml. (2) Preparación de una solución del anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana Una solución amortiguadora de Tris-ácido clorhídrico 100 mM (pH 8.0) que contiene polietilenglicol 6000 3%, citrato trisódico 5 mM y cloruro de calcio 2.5 mM (anhídrido) (a continuación denominado como la solución de dilución de anticuerpo) se utiliza para diluir el anticuerpo monoclonal t de anti-inmunoglobulina M humana de la presente invención hasta una concentración final de 400 pg/ml, para preparar una solución del anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana. Como un control se prepara una solución del reactivo HBR bloqueador heterofilico al diluir el reactivo bloqueador heterofilico HBR (fabricado por SCANTIBODIES LABORATORY, INC. e importado por Nagase & Co, Ltd. ) el cual comprende un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana utilizado como un bloqueador de reacciones no especificas, en vez del anticuerpo monoclonal t anti-inmunoglobulina M humana, en la solución diluyente de anticuerpo a una concentración final de 400 µg/ml. (3) Método de análisis Se realiza el análisis de inmunoaglutinación mediante la utilización de un analizador automático Hitachi tipo 7170. Específicamente, 150 µ? de la solución del anticuerpo monoclonal t anti-inmunoglobulina M humana preparado en el inciso (2) o 150 µ? de la solución del reactivo bloqueador heterofilico HBR se agregan a 30 µ? de la solución de IgM humana a cada concentración preparada en (1) la mezcla se agita y se calienta a 37°C y el cambio en la absorbancia a la longitud de onda principal de 340 nm y la longitud de onda secundaria de 800 nm durante 10 minutos se mide como una medida de la fuerza de reacción (mAbs) . Los resultados se muestran en la figura 3. (4) Resultados El anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana de la presente invención (número de referencia interno 73224) muestra un incremento dependiente de la concentración de fuerza de reacción a una concentración de IgM humana de 25 µq/ml y superior y su capacidad para llevar a cabo un análisis de inmunoaglutinación práctico para IgM humana en si mismo se confirma de esta manera. Por otra parte, el reactivo bloqueador heterofilico HBR utilizado como control no muestra incremento alguno en la fuerza de reacción y se confirma su incapacidad de aglutinar IgM humana. Esto sugiere la posibilidad de que el anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de la presente invención pueda ser capaz de suprimir las reacciones no especificas causadas por IgM humana que pudiera no ser suprimidas por reactivos convencionales para bloqueo de reacciones no especificas al tener una propiedad claramente diferente de otros anticuerpos monoclonales anti-IgM humana que se han utilizado en los reactivos convencionales para bloqueo de reacciones no especificas.

A continuación se verificaron los efectos de la presente invención de supresión de reacciones no especificas en varias pruebas que involucran reacciones inmunológicas (Ejemplos 2 a 4).

EJEMPLO 2 VERIFICACION DE UN EFECTO DE SUPRESION DE REACCIONES NO ESPECIFICAS [1] (CON EL REACTIVO DE LATEX PARA LA PRUEBA DE PSA) El efecto de la presente invención sobre las - - reacciones no especificas observadas con el reactivo de látex para la prueba de PSA, el cual utiliza un anticuerpo monoclonal anti-PSA se verifica al medir la fuerza de reacción en un dispositivo analizador automático general. PSA es una glucoproteina que tiene un peso molecular de aproximadamente 34,000 y se produce específicamente en células epiteliales en la glándula de próstata y se utiliza en el cribado (examen médico) de cáncer de próstata, uno de los tumores malignos típicos en hombres de edad avanzada. (1) Reactivos (1-1) Primer reactivo (i) Reactivo básico Solución amortiguadora HEPES 30 mM (pH 7.0) que contiene KC1 0.5 M y BSA 0.1% (albúmina sérica bovina) (ii) El reactivo de la presente invención La solución del anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana que es capaz de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con inmunoglobulina M humana en si mismo se agrega al reactivo básico anterior para generar la concentración final del anticuerpo para que sea de 25, 50 o 100 pg/ml. (iii) Reactivo control El reactivo bloqueador heterofílico HBR disponible comercialmente o un anticuerpo policlonal de chivo anti-IgM humana (fabricado por la MBC Corporation) se agrega al reactivo básico anterior para constituir la concentración final para que sea de 25, 50 o 100 pg/ml. (1-2) Segundo reactivo PSA Nanopia (marca registrada) , solución 2 de reactivo de látex PSA (Sekisui Medical corporation) (2) Dispositivo de medición Analizador automático Hitachi tipo 7170: Condiciones de parámetro (i) Los volúmenes de la muestra, el primer reactivo y el segundo reactivo: 4 µ?, 100 µ? y 100 µ?. (ii) Método de análisis: método de finalización de 2 puntos (puntos de detección 19-34) (iii) Longitudes de onda de medición: longitud de onda principal 570 nm/longitud de onda secundaria 800 nm (3) Muestras de prueba (i) Espécimen normal Se utiliza suero de una mujer. La sangre de la mujer contiene poco PSA, en caso de que haya y por lo tanto con frecuencia se utiliza como un control negativo. (ii) Espécimen de reacción no especifico Se utiliza el suero de una mujer que muestra una fuerza de reacción de alto nivel anormal. PSA es un antigeno especifico masculino y no debe encontrarse en suero femenino. Por lo tanto, un suero de mujer que muestra una fuerza de reacción de nivel elevado anormal se considera que es inducido de una reacción no especifica en la cual la aglutinación > de látex inducida está no relacionada con el contenido de PSA. Específicamente, el suero de una mujer que muestre un nivel elevado de absorbáncia se identificó por cribado de sueros disponibles comercialmente (suero de sangre completa libre de anticoagulante, de una mujer normal, TENNESSEE BLOOD SERVICES, INC.) con el uso combinado del reactivo básico y el segundo reactivo mencionado antes, y este suero se identifica y se utiliza en lo siguiente. (4) Método de análisis El espécimen normal y el espécimen de reacción no específico se analizan en el analizador automático Hitachi tipo 7170, en donde el primer reactivo es el reactivo básico, el reactivo de la presente invención o el reactivo control y el segundo reactivo es la solución 2 del reactivo látex de PSA, PSA Nanopia (marca registrada) y se examina la fuerza de reacción. (5) Resultados de análisis En el análisis del espécimen normal que se muestra en la figura 4, ya sea con el reactivo de la presente invención o con el reactivo control, una concentración aumentada del anticuerpo anti-IgM humana agregado o el reactivo bloqueador heterofílico HBR no resultan en un cambio en la fuerza de reacción, lo que demuestra que PSA está ausente en el espécimen y que además del anticuerpo anti-IgM humana o HBR absolutamente no hay efecto alguno sobre la reacción de análisis. Por otra parte, en el análisis del espécimen de reacción no especifico mostrado en la figura 5, se observa una absorbancia anormal de no menos de 150 mAbs con el reactivo básico que tiene un reactivo adicional cero. El anticuerpo policlonal de chivo anti-IgM humana, un reactivo control, no muestra un efecto de supresión significativo a las concentraciones agregadas de hasta 100 yg/ml y la adición de un reactivo bloqueador heterofílico HBR disponible comercialmente, el cual comprende un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana, incluso aumenta la fuerza de reacción, aunque ligeramente, en vez de suprimirla.

Cuando el reactivo de la presente invención que comprende el anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana se agrega, a 25 yg/ml se reconoce una reducción significativa de la absorbancia anormal y, a 50 pg/ml la reacción no especifica se suprime casi por completo. De esta manera se confirma que el método de análisis de acuerdo con la presente invención muestra un efecto fuerte de supresión de reacciones no especificas causadas por IgM humana que pudieran no ser bloqueadas por anticuerpos monoclonales anti-IgM humana convencionales o anticuerpos policlonales anti-IgM humana que hayan sido usados con el propósito de bloquear reacciones no especificas.

EJEMPLO 3 VERIFICACION DE UN EFECTO DE SUPRESION DE REACCIONES NO ESPECIFICAS [2] (CON EL REACTIVO DE LATEX PARA LA PRUEBA DE CRP) Se verificó el efecto de la presente invención sobre reacciones no especificas observadas con el reactivo de látex para la prueba de CRP, el cual utiliza un anticuerpo monoclonal anti-CRP, al realizar mediciones en un dispositivo analizador automático general. CRP es bien conocido como un marcador de inflamación inespecifico . (1) Reactivo (1-1) Primer reactivo (i) Reactivo básico Solución amortiguadora de Tris-ácido clorhídrico 20 mM (pH 8.5) que contiene cloruro de sodio 500 mM. (ii) El reactivo de la presente invención La solución del anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana es capaz de producir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana por sí mismo se agrega al reactivo básico para producir la concentración final del anticuerpo para que sea de 50 pg/ml. (iii) Reactivo control - - La IgG de ratón normal que tiene un efecto de supresión sobre las reacciones no especificas pasivas del reactivo bloqueador heterofilico HBR disponible comercialmente se agrega al reactivo básico para producir la concentración final para que sea de 50 µg/ml. (1-2) Segundo reactivo Látex CRP, Type SS Pureauto (marca registrada) S, solución 2 de reactivo de látex (Sekisui Medical Corporation) (1-3) Calibrador Calibrador de látex CRP tipo SS Pureauto (marca registrada) S, (Sekisui Medical Corporation) (2) Dispositivo de medición Analizador automático Hitachi tipo 7170: Condiciones de parámetro (i) Los volúmenes de la muestra, el primer reactivo y el segundo reactivo: 3 µ?, 150 µ? y 50 µ?, respectivamente . (ii) Método de análisis: método de finalización de 2 puntos (puntos de detección 19-34) (iii) Longitudes de onda de medición: longitud de onda principal 570 nm/longitud de onda secundaria 800 nm (iv) Calibración: spline (3) Muestras de prueba Espécimen de reacción no especifico 1: un espécimen de alta absorbancia anormal encontrado entre sueros normales Espécimen de reacción no especifica 2: un espécimen de alta absorbancia anormal encontrado entre sueros normales (4) Método de análisis Los especímenes de reacción no específicos se analizaron en el dispositivo analizador automático Hitachi tipo 7170, con el primer reactivo que es el reactivo básico, el reactivo de la presente invención o el reactivo control y el segundo reactivo es Type SS Pureauto (marca registrada) S, látex CRP, solución de reactivo de látex 2 y los valores de medición se registraron. (5) Resultados de análisis Como se muestra en la Tabla 2, los valores de medición para los especímenes de reacción no específicos 1 y 2 obtenidos con el reactivo básico fueron 5 a 10 veces mayores que los valores de medición normales (es decir, valores de referencia verificados mediante la utilización de un reactivo de látex a partir de otro fabricante el cual comprende anticuerpo policlonal de conejo. Nombre del producto: CRP-Látex (II) "Seiken" X2, Denka Seiken corporation) . Con el reactivo de control que comprende la IgG de ratón normal a 50 pg/ml, se observa una mejora del valor de medición para el espécimen de reacción no especifico 1, pero no para el espécimen de reacción no especifico 2. Por lo tanto, se entendió que la muestra de reacción no especifica 1 fue denominada espécimen HA A que comprende anticuerpos heterófilos. Con el reactivo de control que comprende el agente bloqueador heterofilico HBR a 50 g/ml se observó la mejora tanto en los especímenes de reacción no específicos 1 y 2, con los valores de medición reducidos a un valor tan bajo como los valores de medición normales. El reactivo de la presente invención que comprende el anticuerpo monoclonal t anti-IgM humana también mejora los valores de medición para ambos especímenes de reacción no específicos 1 y 2, y este efecto es mayor que el 'mostrado por el reactivo de bloqueo heterofilico HBR. De esta manera, se ha confirmado que el método de análisis de la presente invención puede suprimir las reacciones no específicas ordinarias que pueden ser inhibidas fuertemente por el reactivo de bloqueo heterofilico HBR, con eficacia igual o mayor que el reactivo de bloqueo heterofilico HBR.

TABLA 2 Valor de Reactivo Reactivo de control Reactivo de medición normal básico la presente (Valor de IgG de ratón HBR invención referencia) normal Espécimen de 1.4 15.0 1.5 1.8 1.3 reacción no específico 1 Espécimen de 1.3 6.6 6.0 1.3 1.3 reacción no específico 2 unidad (mg/dl) EJEMPLO 4 Verificación de un efecto de supresión de reacciones no especificas [3] (con el reactivo de látex para probar insulina) El efecto de la presente invención de supresión de reacciones no especificas también se verificó con un reactivo de látex para probar insulina. (1) Producción de anticuerpos monoclonales de ratón, anti-insulina Se produjeron dos clases de anticuerpos monoclonales de ratón anti-insulina que tienen sitios de reconocimiento de antigeno diferentes mediante un método común de preparación de anticuerpos monoclonales con insulina humana (30-AI51, fabricada por the Fitzgerald corporation) utilizada como inmunógeno. Se asignaron los números de referencia internos 66221 y 66412 a estos anticuerpos (a continuación denominados como el anticuerpo 66221 y el anticuerpo 66412, respectivamente) . (2) Producción de partículas de látex Se colocan 1,100 g de agua destilada, 200 g de - - estireno, 0.2 g de estirensulfonato de sodio y una solución en la cual 1.5 g de persulfato de potasio se disuelve en 50 g de agua destilada, en un frasco de reacción de vidrio (volumen: 2 1) equipado con un dispositivo agitador, un enfriador para reflujo, un detector de temperatura, un tubo de entrada de nitrógeno y una chaqueta. El aire dentro del frasco se sustituye con nitrógeno gaseoso y se lleva a cabo la polimerización durante 48 horas con agitación continua a 70°C. Después de que finaliza la polimerización, la solución anterior se somete a filtración con un papel filtro y las partículas de látex son extraídas. Las imágenes de las partículas de látex obtenidas se toman con una ampliación de 10,000 veces mediante la utilización de un dispositivo de microscopía electrónica de transmisión ("tipo JEM-1010", fabricado por JEOL Corporation), y se lleva a cabo un análisis de imagen sobre por lo menos 100 partículas para determinar el promedio de tamaño de partícula. El promedio de tamaño de partícula obtenido es de 0.3 ym. (3) Preparación de soluciones de las partículas de látex adsorbidas con anticuerpo monoclonal antiinsulina . 1) Preparación de una solución de partículas de látex adsorbidas con anticuerpo 66221.

A una solución 1.0% de las partículas de látex que tienen un promedio de tamaño de partícula de 0.3 µ?? (solución amortiguadora Tris 5 mM, pH 8.5), se agrega un volumen igual de una solución que contiene anticuerpo 66221 a 0.60 mg/ml (solución amortiguadora Tris 5 mM, pH 8.5) y la mezcla se agita durante 2 horas a 4°C. Subsecuentemente, se agrega un volumen igual de solución amortiguadora Tris 5 mM (pH 8.5) que contiene BSA 0.5% y la mezcla se agita durante 1 hora a 4°C. La mezcla después se centrifuga para separar el sobrenadante y el precipitado se vuelve a suspender en solución amortiguadora Tris 5 mM (pH 8.5) para obtener una solución de las partículas de látex adsorbidas con el anticuerpo 66221. 2) Preparación de una solución de las partículas de látex adsorbidas con anticuerpo 66412.

Una solución de las partículas de látex adsorbidas con anticuerpo 66412 se producen utilizando el mismo procedimiento descrito en el inciso 1) anterior con el anticuerpo 66412. (4) Reactivos 1) Preparación del primer reactivo (i) Reactivo básico Solución amortiguadora Tris 5 mM (pH 8.5) que contiene cloruro de sodio 500 mM y BSA 0.2%. (ii) El reactivo de la presente invención Este reactivo se produce al agregar una solución - - del anticuerpo monoclonal t al reactivo básico para producir la concentración final del anticuerpo que es de (iii) Reactivo control Este reactivo se produce al agregar reactivo bloquéador heterofilico HBR disponible comercialmente, en vez del anticuerpo monoclonal t de la presente invención a la concentración de anticuerpo final de 50 µg/ml. 2) Preparación del segundo reactivo Se mezclaron volúmenes iguales de la solución de partículas de látex adsorbidas con el anticuerpo 66221 y la solución de partículas de látex adsorbidas con anticuerpo 66412, y la mezcla se diluye con solución amortiguadora Tris 5 mM (pH 8.5) de manera que la absorbancia a la longitud de onda de 600 nm es de 5.0 Abs . La mezcla resultante representa el segundo reactivo. (5) Muestras Se utilizaron como muestras especímenes de suero recolectadas de pruebas de tolerancia a la glucosa. (6) Métodos de análisis (i) Mediciones con el reactivo de la presente invención y con el reactivo control Las concentraciones de insulina y la muestra se midieron mediante la utilización del dispositivo analizador automático Hitachi tipo 7170 y combinaciones del primero y - - segundo reactivos. Específicamente, 150 µ? del primer reactivo se agregaron a 10 µ? de la muestra, la mezcla se calienta a 37°C durante 5 minutos y posterior a la adición subsecuente de 50 µ? del segundo reactivo, la mezcla se agita. Los cambios en la absorbancia que acompañan la presentación de aglutinación sé miden durante un periodo de 5 minutos a la longitud de onda principal de 570 nm y a la longitud de onda secundaria de 800 nm y se comparan con una curva estándar que se ha obtenido con sustancias estándar de concentraciones conocidas, para calcular las concentraciones de insulina. (ii) Mediciones con los reactivos estándar Las concentraciones de insulina en la muestra se miden utilizando LUMIPULSE (marca registrada) Insulina-N (fabricada por Fujirebio corporation) de acuerdo con el manual anexo y las recomendaciones del fabricante. La figura 6 muestra las correlaciones entre este conjunto de valores de medición de insulina y aquellos obtenidos en lo anterior con el reactivo de la presente invención o el reactivo control. (7) Resultados de análisis y discusión En la figura 6 se muestran las correlaciones, algunas muestras no muestran una correlación y se reconocen en la prueba con el reactivo control (HBR) . Por otra parte, la carencia de correlación se suprime en el presente - - ejemplo en el cual se ha utilizado el reactivo de la presente invención, en donde son evidentes las excelentes correlaciones con la insulina-N LUMIPULSE (marca registrada) . De esta manera se ha confirmado que, también en la prueba de insulina, el reactivo de la presente invención suprime reacciones no especificas que no pueden ser suprimidas por el reactivo bloqueador heterofilico HBR disponible comercialmente .

APLI(HABILIDAD INDUSTRIAL Puesto que el anticuerpo monoclonal de la presente invención se selecciona en base en la potencia para inducir reacciones de aglutinación en solución, reacciona eficientemente con IgM humana, lo que permite un análisis de inmunoaglutinación más preciso y consistente para IgM humana.

El anticuerpo monoclonal de la presente invención también proporciona un reactivo de análisis de alta calidad y barato y un equipo de análisis para análisis de inmunoaglutinación para IgM humana.

El agente de la presente invención para suprimir reacciones no especificas, asi como el inmunoanálisis, reactivo de inmunoanálisis del equipo de inmunoanálisis utilizando al agente pueden suprimir reacciones no especificas habituales causadas por HAMA o similares. Además, también puede suprimir incluso aquellas reacciones no especificas que no se pueden evitar por las medidas conocidas, sin importar el tipo de articulo de prueba, con la condición de que estas reacciones no especificas sean causadas posiblemente por IgM humana, y por lo tanto permite mediciones más precisas que en los análisis convencionales .

REFERENCIA AL MICROORGANISMO DEPOSITADO A. Nombre y dirección de la institución depositaria a la cual se deposita material biológico: Depositario de organismos de patente internacional, El instituto Nacional para Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada Chuo 6, Higashi 1-1-1, Tsukuba-City, Ibaraki, 305-8566 JAPON B. Fecha en la cual se depositó el material biológico a la institución depositaria anterior: 19 de septiembre del 2008 (la fecha del depósito original ) 9 de junio del 2009 (la fecha en la cual el depósito original se cambió a un depósito de acuerdo con el Tratado de Budapest) C. Número de depósito asignado al depósito por la institución depositaria anterior: FERM BP-11134

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que reacciona específicamente con IgM humana y es capaz por sí mismo de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en solución.

2. El anticuerpo monoclonal anti-IgM humana como se describe en la reivindicación 1, obtenido por un método de producción de un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana que comprende las siguientes etapas: Etapa 1) Una etapa de establecimiento de hibridomas que producen anticuerpos anti-IgM humana, mediante la utilización de IgM humana como un antígeno Etapa 2) Una etapa de poner en contacto los anticuerpos producidos por los hibridomas obtenidos en la etapa 1 en contacto con IgM en solución y seleccionar un hibridoma que produzca un anticuerpo capaz de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antígeno-anticuerpo con IgM humana en la solución; y Etapa 3) Una etapa de obtención del anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado en la Etapa 2.

3. Un anticuerpo que se selecciona de (a) o (b) a continuación: (a) Un anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FERM BP-11134; (b) El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 que reconoce el mismo epítopo que el anticuerpo de acuerdo con el inciso (a) anterior.

4. Un fragmento funcional derivado de un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Un análisis de inmunoaglutinación para determinar cantidad de IgM humana en una muestra, que comprende un uso del anticuerpo monoclonal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal como se describe en la reivindicación 4.

6. Un reactivo de análisis de inmunoaglutinación y un equipo de análisis de inmunoaglutinación para determinar la cantidad de IgM humana en una muestra, que comprende el anticuerpo monoclonal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal como se describe en la reivindicación 4.

7. Un hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal como se describe en la reivindicación 1 ó 2.

8. El hibridoma FER BP-11134.

9. Un método para producir un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana, que comprende las siguientes etapas: Etapa 1) Una etapa de establecimiento de hibridomas que producen anticuerpos anti-IgM humana, mediante la utilización de IgM humana como un antigeno; Etapa 2) Una etapa de poner en contacto los anticuerpos producidos por los hibridomas obtenidos en la etapa 1 en contacto con IgM en solución y seleccionar un hibridoma que produzca un anticuerpo capaz de inducir inmunoaglutinación en base en una reacción antigeno-anticuerpo con IgM humana en la solución; y Etapa 3) Una etapa de obtención del anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado en la Etapa 2.

10. Un agente para suprimir reacciones no especificas causadas por IgM humana, que comprende el anticuerpo monoclonal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal como se describe en la reivindicación 4.

11. Un inmunoanálisis para determinar la cantidad de un analito de una muestra en base en una reacción antigeno-anticuerpo entre el analito y un anticuerpo de análisis o un antigeno de análisis, en donde las reacciones no especificas causadas por IgM humana que no incluyen a la reacción antigeno-anticuerpo se suprimen por una adición de un agente para suprimir reacciones no especificas causadas por IgM humana, el agente comprende el reivindicación 4.

12. El inmunoanálisis como se describe en la reivindicación 11, en donde el anticuerpo de análisis o el antigeno de análisis está soportado sobre un portador insoluble .

13. El inmunoanálisis como se describe en la reivindicación 12, en donde el portador insoluble comprende látex, metal' coloidal o sílice.

14. Un reactivo de inmunoanálisis y un equipo de inmunoanálisis que comprende: un agente para suprimir reacciones biespecíficas causadas por IgM humana el cual comprende al anticuerpo monoclonal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y/o el fragmento funcional derivado del anticuerpo monoclonal como se describe en la reivindicación 4; y un anticuerpo de análisis o un antígeno de análisis para determinar la cantidad de un analito en la muestra.

15. El reactivo de inmunoanálisis y el equipo de inmunoanálisis como se describe en la reivindicación 14, en donde el anticuerpo de análisis o el antígeno de análisis está soportado sobre un portador insoluble.

16. El reactivo de inmunoanálisis y el equipo de inmunoanálisis como se describe en la reivindicación 15, en donde el portador insoluble comprende látex, metal coloidal o sílice.