MX2009000903A - Derivados de camptotecina con actividad antitumoral. - Google Patents

Abstract

Derivados novedosos de camptotecina que tienen actividad antitumoral, los procedimientos para la preparación de los mismos, el uso de los mismos como fármacos antitumorales y composiciones farmacéuticas que los contienen.

Description

DERIVADOS DE CAMPTOTECINA CON ACTIVIDAD ANTITUMORAL La presente invención se refiere a derivados novedosos de camptotecina que tienen actividad antitumoral, los procedimientos para la preparación de los mismos, el uso de los mismos como fármacos antitumorales y composiciones farmacéuticas que los contienen.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La camptotecina es un alcaloide extraído a partir de Camptotheca acuminata (Nyssaceae), inicialmente descrito por Wall y Wani en 1966 (J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890). Aunque la camptotecina está dotada con un amplio espectro de actividad antitumoral, especialmente en contra del tumor de colon y otros tumores sólidos y leucemias, no se utiliza en la terapia debido a su alta toxicidad, la cual se manifiesta particularmente en la forma de cistitis hemorrágica, toxicidad gastrointestinal y mielosupresión. Se han sintetizado numerosos análogos de la camptotecina con el objeto de obtener compuestos que tienen una baja toxicidad y una alta solubilidad. Actualmente, se utilizan dos fármacos en la práctica clínica, a saber CPT-1 1 y topotecano. Otros derivados, tales como belotecano, rubitecano, exatecano, gimatecano, pegamotecano, lurtotecano, karenitecina, afeletecano, homocamptotecina, diflomotecano, y muchos otros, actualmente se encuentran bajo experimentación clínica. El compuesto CPT-1 1 es un profármaco altamente soluble para 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (comúnmente conocida como SN-38), aprobada para el tratamiento de muchos tumores sólidos y ascitos (colorectal, piel, estómago, pulmón, cérvix, ovario, linfoma no de Hodgkin). El topotecano es un compuesto soluble en solución fisiológica, activo en contra de los tumores del pulmón, estómago, hígado, ovario, mama, próstata, esófago, recto, sarcomas de los tejidos blandos, cabeza y cuello, glioblastoma, leucemias mielocíticas crónicas y agudas. Sin embargo, el topotecano muestra efectos laterales importantes tales como neutropenia y trombocitopenia. El lurtotecano es un derivado más soluble, que tiene actividad en tumores del cuello, ovario, mama, colo-rectal, y microcitoma pulmonar. Sin embargo, el lurtotecano también tiene actividad hemática. El rubitecano es un profármaco para el uso oral efectivo en contra de tumores del páncreas, ovario y mama. La camptotecina y sus análogos, como es el caso con todos los inhibidores de la topoisomerasa I, son efectivos en contra de tumores resistentes a los fármacos convencionales, incluyendo inhibidores de la topoisomerasa II; manteniendo altos niveles de la topoisomerasa durante todo el ciclo celular; no inducen resistencia a múltiples fármacos (Pgo o MRP) o metabolismo detoxificante mediado por la enzima.

Actualmente la investigación se ha enfocado en inhibidores novedosos de la topoisomerasa I que tienen una menor toxicidad que los fármacos actualmente utilizados. Los derivados de camptotecina de anillo abierto muestran una alta unión a la proteína (en particular con albúmina) y una baja distribución en los tejidos tumorales. Como una consecuencia, el producto se acumula en el cuerpo y los tumores casi no son afectados. En cambio, la alta lipofilicidad de la forma lactona promueve la adhesión de los derivados de la camptotecina a las membranas celulares, particularmente eritrocitos, que afectan la relación de distribución en el tejido/plasma. Por esta razón, la investigación se ha enfocado hacia dos métodos alternativos: a) el diseño de productos con baja unión a las proteínas que aún así tienen una buena solubilidad; b) el diseño de productos altamente potentes que tienen efecto terapéutico incluso a dosis extremadamente bajas. Las modificaciones en las posiciones 7, 9, 10 y 1 1 usualmente han probado ser bien toleradas, a la vez que no afectan la estabilidad del complejo ternario de ADN-Topoisomerasa l-camptotecina, la formación del cual es responsable para la actividad antitumoral de los compuestos. Los productos con una configuración 20R han probado ser ya sea inactivos o muy poco activos en comparación con los productos con una configuración 20S - lo cual coincide con la configuración natural. Como una regla, las modificaciones en la posición 5 son consideradas desfavorables para la formación del complejo ternario, mientras que las modificaciones en los anillos D y E de la piridona se han reportado como deletéreas para la actividad del producto.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION En un primer aspecto, la invención se refiere a derivados de camptotecina de la fórmula general I: en donde: R es alquilo, aminoalquilo, hidroxialquilo, nitrilo, alcoximino, ariloximino, sililalquilo; R1 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, aminoalquilo; R2 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, aminoalquilo, opcionalmente hidroxilo protegido; en donde los grupos alquilo, alcoxi, aminoalquilo o alcoximino pueden contener de 1 a 8, preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono, en una cadena recta o ramificada, mientras que el grupo ariloximino puede contener de 5 a 10 átomos de carbono; las sales, isómeros, enantiómeros, diaestereómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos y mezclas correspondientes. Los compuestos de la invención muestran una baja unión a la proteína y tienen una buena solubilidad y una alta potencia incluso a dosis muy bajas. La ruta sintética preferida para la preparación de los compuestos de la invención se ilustra en el siguiente esquema e incluye sustancialmente los siguientes pasos: a) protección de los grupos hidroxi precursores; b) derivatización en 5- con ?,?-hidrazina diprotegida; c) conversión opcional del anillo piridona hacia el anillo tiopiridona; remoción de los grupos protectores con ciclización concomitante; e) aromatización opcional del anillo pirazol; En el esquema, R, R1 y R2 tienen los significados anteriormente descritos, y PG es un grupo hidroxi-protector. Los hidroxilos están preferiblemente protegidos por medio de los grupos acilo fácilmente escindibles, preferiblemente los grupos tricloroacetato y Troc, o sililo, preferiblemente trietilsililo.

La derivatización en 5- con hidrazina protegida se puede obtener mediante el tratamiento del precursor con una base orgánica fuerte, tal como LiHMDS, y haciendo reaccionar el carbanión resultante con un aza dicarboxilato, tales como di-t-butoxi aza dicarboxilato o dibenciloxi aza dicarboxilato. La conversión del anillo piridona hacia el anillo tiopiridona se puede obtener mediante la reacción con 2,4-bis(4-metox¡fenil)-1 ,2,3,4-ditiafosfetan-2,4-disulfuro (comúnmente conocido como reactivo de Lawesson) (Cava P.M. et al., Tetrahedron 1985, 41 , 5061 ; Cherkasov RA et al Tetrahedron 1985 41 , 2567; Ghattas AAG et al, Sulfur Lett. 1982, 1 , 69; Yde B et al, Tetrahedron 1984, 40. 2047) o con un reactivo equivalente. Se prefiere el reactivo de Lawesson. El propósito de la conversión opcional hacia tiopiridona es promover el cierre del anillo una vez que la hidrazina se ha desprotegido. Sin embargo, se ha observado que dicha reacción de cierre es espontánea e inmediata incluso sin activación de la piridina carbonilo por ejemplo como tiocarbonilo. Cuando los grupos hidroxi-protectores son sililos y aquéllos en el nitrógeno son carbamatos, éstos usualmente son removidos con ácido trifluoroacético. En un procedimiento alternativo, se pueden revertir los pasos b) y c). Los compuestos de la invención fueron evaluados en un ensayo de citotoxicidad en un amplio espectro de células tumorales. A manera de ejemplo, se reportaron los datos de citotoxicidad en la línea celular NCI-H460 (cáncer NSCL) con respecto a dos compuestos de la fórmula (I), utilizando camptotecina y los fármacos topotecano y SN-38 como referencias: Los compuestos más activos fueron evaluados en un ensayo para escisión de ADN que mide la concentración activa y la persistencia del daño (véase la sección de "Ejemplos"). Los derivados de la fórmula (I) sorprendentemente muestran una mayor persistencia en el bloqueo de la replicación del ADN que los estándares de referencia (particularmente topotecano y camptotecina), a la vez que mantienen una actividad citotóxica efectiva. En un aspecto adicional, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de fórmula (I) junto con vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables. Las formas farmacéuticas adecuadas para la administración oral o parenteral de los compuestos (I) pueden ser sólidas, preferiblemente cápsulas, tabletas y granulos, o líquidas, preferiblemente soluciones inyectables o infusiones. Los compuestos adecuadamente formulados de la invención se pueden utilizar para el tratamiento de tumores sólidos y leucemias, en particular tumores del pulmón, ovario, mama, estómago, hígado, próstata, sarcomas de tejidos blandos, cabeza y cuello, esófago, páncreas, colon, recto, glioblastoma, leucemias mielocíticas crónicas y agudas.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 20-OTES-camptotecina La camptotecina (0.100 g, 0.287 mmoles), se suspendió en dimetilformamida anhidra (3 mL), bajo atmósfera inerte, y la suspensión resultante se añadió con imidazol (0.980 g, 1.44 mmoles). La mezcla se agitó por 10 minutos, subsecuentemente se añadió gota a gota cloruro de trietilsililo (TES-CI) (0.193 mL, 1 ,15 mmoles) a la misma, seguido por la adición de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0.040 g 0.287 mmoles). Después de 46 horas, la mezcla de reacción se evaporó bajo vacío, (TLC control de la desaparición completa del reactivo, eluyente CH2CI2/MeOH = 30/1 ). El solido se redisolvió subsecuentemente en CH2CI2 y se lavó con H2O y NH4CI saturado. La fase acuosa se extrajo con CH2CI2 (2 X 10 mL). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo vacío, obteniendo así el producto deseado (0.133 g, 0.287 mmoles) como un sólido de color amarillo claro. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.37 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.92 (d, 1 H, J = 8.0 Hz, Ar), 7.82 (t, 1 H, J = 8.0 Hz, Ar), 7.65 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.57 (s, 1 H, H-14), 5.67 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.29 (s, 2 H, H-5), 5.25 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 2.00-1.84 (m, 2 H, H-19), 1.03-0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 171 .7, 157.6, 152.5, 151.5, 149.0. 145.9, 130.9, 130.4, 130.0. 128.4, 128.1 , 128.0. 127.9, 1 18.9, 94.4, 75.3, 66.0. 50.0. 33.2, 7.9, 7.2, 6.4.

EJEMPLO II Preparación de 5-di-t-butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina La camptotecina 20-OTES (0.100 g, 0.216 mmoles) se disolvió en THF anhidro (6 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, luego se enfrió a una temperatura de -78°C y se añadió gota a gota una solución 1 .0 M de LiHMDS en THF (0.281 mL, 0.281 mmoles) a la misma. Después de 20', se añadió di-ter-butilazo dicarboxilato (DTBAC) (0.075 g, 0.324 mmoles) en THF anhidro (2 mL). Después de 4 horas a -78°C, la desaparición del reactivo se monitoreó mediante TLC (Hexano/AcOEt = 3/1 ). Se observó la formación de los dos diastereómeros. La reacción se detuvo mediante la adición de NH4CI saturado. La fase acuosa se extrajo con CH2CI2 (3 x 15 mL) y las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Si02, Hexano/AcOEt = 3/1 ), obteniendo así una mezcla de los dos isómeros (0.145 g, 0.210 mmoles, 97%). Los dos isómeros se separaron mediante cromatografía adicional. En el orden de la elución: 1er diaestereómero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.80 (br s, 1 H, Ar), 8.23 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 8.01 (br d, 1 H, Ar), 7.90-7.71 (m, 2 H, Ar), 7.70-7.45 (m, 2 H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1 H, H-5), 5.61 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.23 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.03-1 .81 (m, 2 H, H-19), 1 .79-1 .08 (br s, 18 H), 1.06-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). 3C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 171.7, 157.8, 155.5, 155.5, 152.0. 152.0. 151.2, 149.4, 145.0. 132.1 , 130.6, 130.0. 128.7, 128.4, 127.9, 1 19.9, 98.2, 82.7, 81.5, 79.7, 75.2, 65.7, 33.2, 28.3, 27.6, 7.7, 7.2, 6.4. 2o diaestereómero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.79 (br s, 1 H, Ar), 8.23 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 8.01 (br d, 1 H, Ar), 7.85-7.76 (m, 2 H, Ar), 7.65 (br t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.52 (s, 1 H, H-14), 6.54 (br s, 1 H, H-5), 5.61 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.03-1.82 (m, 2 H, H-19), 1 .76-1.08 (br s, 18 H), 1.04-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 171 .5, 157.9, 155.5, 155.5, 152.3, 152.0. 151.2, 149.4, 145.1 , 132.1 , 130.6, 130.0. 128.7, 128.4, 127.9, 1 19.9, 98.2, 82.9, 81.5, 79.6, 75.2, 65.8, 33.3, 28.3, 27.4, 7.8, 7.2, 6.4.

EJEMPLO III Preparación del 1er diaestereómero 5-di-f-butoxicarbonilh¡drazino-20-OH- camptotecina El primer diaestereómero 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0.050 g, 0.072 mmoles) se disolvió inicialmente en THF anhidro (4 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente se añadió gota a gota Et3N»3HF (0.088 mL, 0.542 mmoles) a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 35 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El solvente se evaporó bajo vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (S¡O2, Hexano/AcOEt = 3/2), obteniendo así el compuesto deseado (0.041 g, 0.071 mmoles, 98%) como un sólido de color amarillo claro. El producto se purificó adicionalmente mediante cristalización a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.77 (br s, 1 H, Ar), 8.16 (br d, 1 H, J = 8.0 Hz, Ar), 7.97 (br s, 1 H, Ar), 7.86-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.51 (br s, 1 H, H-5), 5.66 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H- 7), 5.24 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.86 (br s, 1 H, OH), 2.00-1 .80 (m, 2 H, H-19), 1 .79-1 .13 (br s, 18 H), 1 .03 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 173.7, 157.9, 155.5, 155.5, 152.1 , 151.3, 150.7, 149.6, 145.7, 132.3, 130.7, 129.9, 128.7, 127.9, 127.6, 120.0. 97.9, 82.8, 81.6, 79.7, 72.7, 66.1 , 31.8, 28.3, 27.7, 7.7.

EJEMPLO IV Preparación del 2° diaestereómero 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-OH- camptotecina El 2o diaestereómero 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0.050 g, 0.072 mmoles) se disolvió en THF anhidro (4,5 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente Et3N«3HF (0.088 mL, 0.542 mmoles) se agitó gota a gota a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 35 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El solvente se evaporó bajo vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Si02, Hexano/AcOEt = 3/2), obteniendo así el compuesto deseado (0.040 g, 0.069 mmoles, 96%) como un sólido de color amarillo claro. El producto se purificó adicionalmente mediante cristalización a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.79 (br s, 1 H, Ar), 8.22 (br d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.99 (br s, H, Ar), 7.88-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.53 (br s, 1 H, H-5), 5.65 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.26 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.80 (br s, 1 H, OH), 2.00-1.80 (m, 2 H, H-19), 1 .79-1.13 (br s, 18 H), 1 .03 (t, 3 H, J = 7.2 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 173.6, 157.9, 155.4, 155.4, 152.1 , 151.3, 150.8, 149.5, 145.6, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7, 127.9, 127.8, 1 19.8, 98.0. 83.0. 81.5, 79.7, 72.7, 66.3, 31.8, 28.3, 27.7, 7.8.

EJEMPLO V Preparación de 5-dibenzilox¡carbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina La camptotecina 20-OTES (0.100 g, 0.216 mmoles) se disolvió en THF anhidro (6 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, luego se enfrió a una temperatura de -78°C y se añadió gota a gota una solución 1.0 M de LiHMDS en THF (0.281 mL, 0.281 mmoles) a la misma. Después de 20", se añadió dibencil azodicarboxilato (0.097 g, 0.324 mmoles) en THF anhidro (2 mL). Después de 3 horas a -78°C, la temperatura se dejó elevar hasta 25°C y se monitoreó la desaparición del reactivo mediante TLC (Hexano/AcOEt = 3/1 ). Se observó la formación de los dos diaestereómeros. Después de 90 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de NH CI saturado. La fase acuosa se extrajo con CH2CI2 (3 x 15 mL) y las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, Hexano/AcOEt = 4/1 luego 7/2), obteniendo así un sólido de color amarillo claro (0.161 g, 0.212 mmoles, 98%). Los dos isómeros se separaron mediante cromatografía adicional. En el orden de la elución: 1er diaestereómero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.70 (br s, 1 H, Ar), 8.39 (br s 1 H, Ar), 8.22 (br d, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br d, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.83 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.64-7.00 (m, 1 1 H, Ar + H-14), 6.49 (br s, 1 H, H-5), 5.57 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H- 17), 5.47-4.44 (m, 5 H), 1.98-1 .82 (m, 2 H, H-19), 1 .02-0.89 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 171.6, 158.0. 156.3, 156.3, 153.0. 152.2, 151 .0. 149.6, 144.8, 135.3, 132.1 , 130.6, 130.0. 128.6-127.8 (1 1 C), 1 19.9, 98.4, 79.5, 75.2, 68.4, 67.9, 65.6, 33.0. 7.9, 7.2, 6.4. 2° diaestereómero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.85 (br s, 1 H, Ar), 8.58 (br s 1 H, Ar), 8.20 (br s, 1 H, Ar), 7.93 (br s, Ar), 7.81 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.63 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.56-6.90 (m, 1 1 H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1 H, H-5), 5.55 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.44-4.71 (m, 5 H), 1 .98-1 .80 (m, 2 H, H-19), 1 .05-0.90 (m, 12 H), 0.81-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 171.5, 157.9, 156.4, 156.4, 152.9, 152.4, 150.9, 149.4, 144.8, 135.3, 132.1 , 130.6, 129.9, 128.6-127.8 (1 1 C), 1 19.9, 98.5, 79.3, 75.2, 68.4, 67.8, 65.6, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4.

EJEMPLO VI Preparación del 1er diaestereómero 5-dibenciloxicarbon¡lhidrazino-20- OH-camptotecina El 1 er diaestereómero 5-Dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0.140 g, 0.184 mmoles) se disolvió en THF anhidro (6 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente se añadió gota a gota Et3N*3HF (0.225 mL, 1.380 mmoles) a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 52 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/3). El solvente se evaporó bajo vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1 luego 2/3), obteniendo así (0.1 13 g, 0.175 mmoles, 95%) del compuesto deseado como un sólido de color amarillo claro. El producto se purificó adicionalmente mediante cristalización a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.67 (br s, 1 H, Ar), 8.39 (br s 1 H, Ar), 8.12 (br d, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br s, 1 H, Ar), 7.74 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65-6.66 (m, 12 H, Ar + H-14), 6.48 (br s, 1 H, H-5), 5.55 (d, 1 H, J = 16.0 Hz, H- 7), 5.42-4.44 (m, 5 H), 3.86 (br s, 1 H, OH), 1 .92-1 .72 (m, 2 H, H- 19), 0.95 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 173.5, 158.0. 156.2, 156.0. 153.0. 150.9, 150.9, 149.5, 145.3, 135.4, 132.2, 130.7, 129.8, 128.7-127.8 (1 1 C), 1 19.9, 98.2, 79.6, 72.7, 68.5, 68.0. 65.9, 31.6, 7.8.

EJEMPLO VII Preparación del 2° diaestereómero 5-d¡benciloxicarbonilhidrazino-20-OH- camptotecina El 2o diaestereómero 5-Dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0.140 g, 0.184 mmoles) se disolvió en THF anhidro (6 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente se añadió gota a gota Et3N»3HF (0.150 ml_, 0.921 mmoles) a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 55 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El solvente se evaporó bajo vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (S1O2, Hexano/AcOEt = 1/1 ), obteniendo así el compuesto deseado (0.1 13 g, 0.175 mmoles, 95%) como un sólido de color amarillo claro. El producto se purificó adicionalmente mediante cristalización a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3> 400 MHz) d 8.71 (br s, 1 H, Ar), 8.34 (br s 1 H, Ar), 8.18 (br s, 1 H, Ar), 7.94 (br s, 1 H, Ar), 7.79 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.70-6.70 (m, 12 H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1 H, H-5), 5.53 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.44-4.48 (m, 5 H), 3.87 (br s, 1 H, OH), 1 .90-1.70 (m, 2 H, H-19), 0.99 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 173.4, 158.0. 156.3, 156.1 , 153.0. 151.0. 150.9, 149.6, 145.3, 135.5, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7-127.8 (1 1 C), 1 19.8, 98.4, 79.5, 72.7, 68.5, 67.8, 66.0. 31.6, 7.7.

EJEMPLO VIII Preparación de la sal de 4,5-dihidro-triazol[5,4-cl16a-deoxocamptotecina TFA 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0.225 g, 0.324 mmoles, mezcla diaestereomérica 1 :1 ) se disolvió en 1 ,2-dicloroetano anhidro (DCE) (8 ml_) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (TFA) (0.895 ml_, 1 1 .67 mmoles) a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 20 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/3), luego se sometió reflujo por 4 horas. El solvente se evaporó bajo vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Si02, CH2CI2/MeOH = 30/1 ), obteniendo así el compuesto deseado (0.084 g, 0.178 mmoles, 55%) como la sal de trifluoroacetato. La mezcla 1 :1 de los dos diaestereómeros se purificó adicionalmente mediante cromatografía instantánea (Si02, Tolueno/AcOEt = 1/1 ). 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 10.61 (br s, 0.5 H, N5-NH=C16a), 10.39 (br s, 0.5 H, N5-NH=C16a), 8.67 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.22-8.15 (m, 1 H, Ar), 7.96-7.92 (m, 1 H, Ar), 7.88-7.78 (m, 1 H, Ar), 7.69-7.60 (m, 2 H, Ar), 6.38-6.36 (m, 1 H, Ar, H-5), 5.72-5.62 (m, 1 H, Ar, H-17), 5.32-5.20 (m, 2 H, Ar, H-17 + N5H), 4.08-3.86 (br s, 1 H, OH), 1.96-1.74 (m, 2 H, H-19), 1 .05-0.98 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 173.8 (0.5 C), 173.4 (0.5 C), 159.1 , 159.0. 156.7 (q CF3COOH), 156.5 (q CF3COOH) 151 .5, 151 .3, 150.7, 150.5, 150.1 , 149.9, 144.8, 144.7, 134.0. 133.8, 131 .6, 131.5, 129.9, 129.8, 128.7, 128.7, 128.4, 128.4, 128.2, 128.2, 127.1 , 126.9, 120.5, 120.3, 99.1 (2 C), 78.9, 78.6, 72.7, 72.7, 66.0 (2 C), 31.7 (2 C), 7.7, 7.7.

EJEMPLO IX Preparación de triazol[5,4-c116a-deoxocamptotecina La sal de 4,5-dihidro-tr¡azol[5,4-c]16a-deoxocamptotec¡na TFA (0.020 g, 0.042 mmoles) se disolvió en CH2CI2 anhidro (4 mL) con agitación bajo atmósfera inerte, subsecuentemente se añadió 2,3-dicloro-5,6-diciano-p-benzoquinona (DDQ) (0.025 mg, 0.1 10 mmoles) a la misma. La mezcla de reacción se hizo reaccionar por 31 horas a temperatura ambiente, monitoreando mediante TLC la desaparición del reactivo (CH2CI2/MeOH = 30/1 ). La reacción se detuvo mediante la adición de H2O. La fase acuosa se extrajo con CH2CI2 (3 x 15 mL) y las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, CH2CI2/MeOH = 45/1 ), obteniendo así un sólido de color amarillo (0.014 g, 0.039 mmoles, 94%). H NMR (CDCI3, 400 MHz) d 8.89 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.20 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 8.00 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.88 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.79 (s, 1 H, Ar H-14), 7.69 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 5.70 (d, 1 H, J = 17.2 Hz, H-17), 5.28 (d, 1 H, J = 17.2 Hz, H-17), 3.83 (br s, 1 H, OH), 2.00-1 .74 (m, 2 H, H-19), 1 .08 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 172.6, 157.4, 152.5, 150.8, 148.9, 143.7, 134.9, 132.5, 132.4, 130.0. 129.5, 128.7, 127.5, 122.6, 121.4, 101 .2, 72.4, 66.0. 31.6, 7.7.

EJEMPLO X Ensayo de inhibición deí crecimiento celular Las células H460 a partir de tumor pulmonar de célula grande de humano se cultivaron en medio RPMI-1640 que contenía 10% de suero de ternera fetal. La sensibilidad celular se determinó mediante el ensayo de inhibición del crecimiento celular después de 1 ó 72 horas de exposición al fármaco. Las células en crecimiento logarítmico se recolectaron y se sembraron por duplicado en placas de 6 pozos. Veinticuatro horas después de la siembra, las células se expusieron a los fármacos y se contaron con un contador Coulter 72 horas después de la exposición a los fármacos para la determinación de las IC50s. La IC50 se definió como la concentración inhibidora del 50% del crecimiento celular en comparación con el crecimiento de los controles no tratados.

EJEMPLO XI Ensayo de ruptura del ADN dependiente de la Topoisomerasa-I Las rupturas del ADN se determinaron utilizando una banda de ADN SV40 digerido con BamHI-EcoRI de 751 pb purificada en gel (Beretta GL, Binaschi M, Zagni AND, Capuani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusión to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Cáncer Res 1999; 59: 3689-97). Los fragmentos de ADN solamente se marcaron en el extremo hacia 3'. La reacción de ruptura del ADN (20,000 cpm/muestra) se llevó a cabo en 20 mi de Tris-HCL 10 mM (pH 7.6), KCI 150 mM, MgCI2 5 mM, 15 pg/mL de BSA, tiotreitol 0.1 mM, y la enzima recombinante de humano (top1 de longitud total) por 30 minutos a 37°C. Las reacciones se bloquearon utilizando 0.5% de SDS y 0.3 mg/mL de protetnasa K por 45 minutos a 42°C. La persistencia en el daño al ADN se evaluó a diferentes tiempos añadiendo NaCI 0.6M después de 30 minutos de incubación con 10 µ? del fármaco. Después de la precipitación, el ADN se resuspendió en regulador de pH para desnaturalización (80% de formamida, NaOH 10 mM, EDTA 0.01 M y 1 mg/mL de colorante) antes de la siembra en un gel desnaturalizante (7% de poliacrilamida en regulador de pH TBE). Todos los niveles de ruptura del ADN fueron medidos por medio de un Phospholmager modelo 425 (Molecular Dynamics) (Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti B, et al. Novel 7-oxyiminomethyl camptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001 ; 44: 3264-74).

Persistencia del daño al ADN (%) Compuestos Tiempo (min) 0 1 5 10 Topotecano 100 65 20 10 Camptotecina 100 58 23 20 SN38 100 60 33 28 IDN 6132 100 45 32 20

Claims (8)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Compuestos de fórmula general (I):

(I) en donde: R es alquilo, aminoalquilo, hidroxialquilo, nitrilo, alcoximino, ariloximino, sililalquilo; R1 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, aminoalquilo; R2 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, aminoalquilo, opcionalmente hidroxilo protegido; en donde los grupos alquilo, alcoxi, aminoalquilo o alcoximino pueden contener de 1 a 8, preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono, en una cadena recta o ramificada, mientras que el grupo ariloximino puede contener de 5 a 10 átomos de carbono; las sales, isómeros, enantiómeros, diaestereómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos y mezclas correspondientes. 2.- El compuesto de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona a partir del grupo que consiste de: a) 4,5-dihidro-triazol[5,4-c]16a-deoxocamptotecina, b) triazol[5,4-c]16a-deoxocamptotecina.

3.- Un procedimiento para la preparación de los compuestos de fórmula (I), dicho procedimiento comprende sustancialmente los pasos (a)-(e) mostrados en el siguiente esquema: en donde: a) protección de los grupos hidroxi precursores; b) derivatizacion en 5- con ?,?-hidrazina diprotegida; c) conversión opcional del anillo piridona hacia el anillo tiopiridona; d) remoción de los grupos protectores con ciclización concomitante; e) aromatización opcional del anillo pirazol; y en donde R, R1 y R2 tienen los significados anteriormente definidos, mientras que PG es un grupo protector hidroxi.

4. - El procedimiento para la preparación de los compuestos de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque se revierte el orden de los pasos (b) y (c).

5. - Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula (I) junto con vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables.

6.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque se encuentra en una forma adecuada a la administración oral o parenteral.

7. - El uso de un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1-2 o de una composición como se reclama en las reivindicaciones 5-6 para la preparación de un fármaco para el tratamiento de tumores.

8. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho fármaco se utiliza para el tratamiento de tumores sólidos y leucemias, en particular tumores del pulmón, ovario, mama, estómago, hígado, próstata, sarcomas de tejidos blandos, esófago, páncreas, cabeza y cuello, glioblastoma, leucemias mielocíticas crónicas y agudas.