RU2450008C2

RU2450008C2 - Производные камптотецина с противоопухолевой активностью

Info

Publication number: RU2450008C2
Application number: RU2009102243/04A
Authority: RU
Inventors: Габриеле ФОНТАНА (IT); Габриеле ФОНТАНА; Эцио БОМБАРДЕЛЛИ (IT); Эцио БОМБАРДЕЛЛИ; Карла МАНДЗОТТИ (IT); Карла МАНДЗОТТИ; Артуро БАТТАЛЬЯ (IT); Артуро БАТТАЛЬЯ; Кристиан САМОРИ (IT); Кристиан САМОРИ
Original assignee: Индена С.П.А.
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2012-05-10
Also published as: US20100120816A1; ES2561356T3; BRPI0714553B1; DK2044079T3; CA2658900C; EP2044079B1; RU2009102243A; JP2009544634A; ITMI20061473A1; WO2008011994A1; AU2007278500A1; CN101495486B; PL2044079T3; HK1135691A1; KR101412157B1; IL196653A; AU2007278500B2; EP2044079A1; BRPI0714553A2; AU2007278500A2

Abstract

Изобретение относится к новым 5-замещенным производным тиокамптотецина общей формулы I:

где R представляет собой водород, -N3; R1 представляет собой водород, этил, группу -СН=N-O-С(СН₃)₃; R2 представляет собой водород, -CH₂N(CH₃)₂; R3 представляет собой водород, гидроксил, группу

их фармацевтически приемлемым солям, энантиомерам, диастереомерам и соответствующим смесям, обладающим противоопухолевой активностью, способам их получения, их применению в качестве противоопухолевых лекарственных средств и фармацевтическим композициям, на основе соединений формулы I. 7 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 34 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к новым производным камптотецина, обладающим противоопухолевой активностью, способу их получения, их применению в качестве противоопухолевых лекарственных средств и фармацевтическим композициям, содержащим их.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Камптотецин представляет собой алкалоид, экстрагированный из Camptotheca acuminate (Nyssaceae), который впервые описали Wall и Wani в 1966 г. (J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890). Камптотецин, хоть он и наделен широким спектром противоопухолевой активности, особенно против опухоли толстой кишки и других солидных опухолей и лейкемий, не применяют в терапии из-за его высокой токсичности, которая, в частности, проявляется в форме геморрагического цистита, желудочно-кишечной токсичности и миелосупрессии.

Для того чтобы получить соединения, обладающие низкой токсичностью и высокой растворимостью, синтезировали ряд аналогов камптотецина. В настоящее время в клинической практике применяют два препарата, а именно CPT-11 и топотекан. Другие производные, такие как белотекан, рубитекан, эксатекан, гиматекан, пегамотекан, луртотекан, каренитецин, афелетекан, гомокамптотецин, дифломотекан и многие другие, проходят клинические испытания. Соединение CPT-11 представляет собой высокорастворимое пролекарство для 10-гидрокси-7-этилкамптотецина (общеизвестного как SN-38), одобренное для лечения многих солидных опухолей и асцитов (колоректальных, кожных, желудочных, легочных, шейки матки, яичников, не-ходжкинской лимфомы).

Топотекан является растворимым в физиологическом растворе соединением, активным против опухолей легкого, желудка, печени, яичника, молочной железы, предстательной железы, пищевода, прямой кишки, сарком мягких тканей, головы и шеи, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий. Топотекан оказывает, однако, существенные побочные действия, такие как нейтропения и тромбоцитопения.

Луртотекан представляет собой более растворимое производное, обладающее активностью в опухолях шеи, яичника, молочной железы, колоректальной и легочной микроцитомы. Однако луртотекан также обладает кровяной токсичностью.

Рубитекан представляет собой пролекарство для орального применения, эффективное против опухолей поджелудочной железы, яичника и молочной железы.

Камптотецин и его аналоги, также как и все ингибиторы топоизомеразы I, эффективны против опухолей, устойчивых к обычным лекарствам, включая ингибиторы топоизомеразы II; поддерживают высокий уровень топоизомеразы во время всего клеточного цикла; не вызывают мультилекарственную резистентность (Pgo или MRP) или нейтрализацию метаболизма, опосредованного данным ферментом.

Сейчас исследования фокусируются на новых ингибиторах топоизомеразы I, обладающих меньшей токсичностью, чем лекарства, применяемые в настоящее время.

Производные камптотецина с раскрытым кольцом демонстрируют высокое связывание с белками (в частности, с альбумином) и низкое распространение в опухолевых тканях. Вследствие этого продукт аккумулируется в организме, а воздействие на опухоли недостаточно.

Напротив, высокая липофильность лактоновой формы способствует адгезии производных камптотецина на клеточных мембранах, особенно на эритроцитах, влияя на коэффициент распределения между тканью и плазмой. По этой причине исследования фокусируются на двух альтернативных подходах: a) конструирование продуктов со слабым связыванием с белком, при этом с хорошей растворимостью; b) конструирование высокоактивных продуктов, имеющих терапевтический эффект даже в чрезвычайно низких дозах.

Модификации в положениях 7, 9, 10 и 11, как правило, оказываются вполне допустимыми, поскольку не влияют на стабильность тройного комплекса ДНК, топоизомеразы I и камптотецина, образование которого обуславливает противоопухолевую активность соединений.

Продукты с конфигурацией 20R оказываются или неактивными, или гораздо менее активными, чем продукты с конфигурацией 20S, которая совпадает с природной конфигурацией.

Как правило, модификации в положении 5 считаются неблагоприятными для образования тройного комплекса, тогда как о модификациях в пиридоновых кольцах D и E сообщают, что они губительны для активности продукта.

РАСКРЫТИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте настоящее изобретение относится к производным камптотецина общей формулы I:

где

R представляет собой F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R'', -COOR', -CONR'R'', -NHR'''-NR'R'', где R', R'' и R''' могут представлять собой H, алкил, арил, арилалкил, ацил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил;

R1 представляет собой алкил, аминоалкил, гидроксиалкил, нитрил, алкоксимино, арилоксимино, силилалкил;

R2 представляет собой водород, гидроксил, алкокси, аминоалкил;

R3 представляет собой водород, необязательно замещенный гидроксил, алкокси, аминоалкил,

где алкильные, ацильные, алкокси, аминоалкильные или алкоксимино группы могут содержать от 1 до 8, предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода, в прямой или разветвленной цепи, и арильная и арилокси группы могут содержать от 5 до 10 атомов углерода;

их фармацевтически приемлемым солям, изомерам, энантиомерам, диастереомерам и соответствующим смесям.

Соединения настоящего изобретения демонстрируют слабое связывание с белком и обладают хорошей растворимостью и высокой активностью даже в очень низких дозах.

Предпочтительный синтетический способ получения соединения настоящего изобретения показан на схеме I, где:

a) - защита гидроксигрупп предшественника;

b) - превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо;

c) - удаление защитных групп.

Схема I

На схеме I R, R1, R2 и R3 имеют значения, описанные выше, и PG представляет собой гидрокси-защитную группу.

Предшественники могут быть коммерчески доступными или получены, как описано в литературе. Для получения продуктов, модифицированных в 5 положении, можно применять способ, описанный на схеме II, который включает:

a) - защиту гидроксигрупп предшественника;

b) - модификацию в 5 положении посредством образования карбаниона и реакции с электрофильным реагентом;

c) - трансформацию карбонила 16a в тиокарбонил;

d) - снятие защиты с гидроксигрупп;

в котором стадии b) и c) могут быть проведены в обратном порядке.

Схема II

На схеме II R, R1, R2 и R3 имеют значения, описанные выше, и PG представляет собой OH-защитную группу.

Образование карбаниона в 5 положении можно получить, обрабатывая предшественик сильным органическим основанием, предпочтительно LiHMDS.

Карбанион реагирует in situ с электрофилом, таким как источник галогена, азадикарбоксилат, изоцианат, хлоркарбонильное производное, тозилазид.

Превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо можно получить при помощи реакции с 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,2,3,4-дитиафосфетан-2,4-дисульфидом (обычно известным как реагент Лаусона) (Cava P.M. et al., Tetrahedron 1985, 41, 5061; Cherkasov RA et al., Tetrahedron 1985 41, 2567; Ghattas AAG et al., Sulfur Lett. 1982, 1, 69; Yde B et al., Tetrahedron 1984, 40. 2047) или с эквивалентным реагентом. Предпочтительным является реагент Лаусона.

В качестве гидрокси-защитных групп предпочтительны силилы и карбаматы или их комбинации.

Соединения по настоящему изобретению были подвергнуты анализу на цитотоксичность на широком спектре опухолевых клеток. В качестве примера приведены данные по цитотоксичности на клеточной линии NCI-H460 (рак NSCL), касающиеся двух соединений формулы (I), с использованием камптотецина и препаратов Топотекан и SN-38 в качестве контроля:

Название	Формула	NCI-H460 IC50 (мкг/мл) Количество клеток
Камптотецин		0,115±0,0174
Топотекан		0,63±0,44
SN38		0,0865±0,0049
IDN 6070 (тиокамптотецин)		0,05±0,021
IDN 6092		0,3±0,07
IDN 6093		0,72±0,2
IDN 6156 Тио-SN38		0,0095±0,0007
IDN 6180 Тиотопотекан		0,115±0,021
IDN 6181 10-гидрокситиокамптотецин		0,035±0,011

Анализ цитотоксичности показал, что серосодержащие производные камптотецина в среднем в 10 раз более активны, чем несеросодержащие аналоги.

Наиболее активные соединения были определены в анализе расщепления ДНК путем измерения активной концентрации и стойкости повреждения (см. раздел 'Примеры'). Производные формулы (I) неожиданно продемонстрировали более высокую стойкость блокирования репликации ДНК, чем используемые в качестве контроля стандарты (в частности топотекан и камптотецин), при этом сохраняя эффективную цитотоксическую активность.

Более того, серосодержащие производные оказались более активными, чем несеросодержащие аналоги также и в данном случае, поскольку они индуцировали повреждение ДНК в более низких концентрациях, и оно сохранялось дольше.

Соединение тио-SN38 (IDN6156) трансформировали в тио-CPT11 (тиоиринотекан) в соответствии со способом превращения SN38 в CPT11 (иринотекан), описанным в литературе. Полученное в результате соединение тиоиринотекан сравнили in vivo с близким несеросодержащим аналогом в клиническом применении (CPT11) на модели опухоли легкого, высокочувствительной к стандартному контролю.

Данные, приведенные в следующей таблице, показывают, что серосодержащее соединение тио-CPT11 активнее, чем несеросодержащий аналог CPT11, поскольку сохраняет тот же уровень эффективности при лучших переносимости и терапевтическом индексе.

Препарат^а	Доза (мг/кг на инъекцию)	TWI%^b	LCK^c (0,5 г)	Max^d BWL%	Tox/Tot^e
CPT11	50	91	1,8	15	0/5
тио-CPT11	10	94	2,3	9	0/5

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами. Фармацевтические формы, подходящие для орального или парентерального введения соединений (I) могут быть твердыми, предпочтительно капсулы, таблетки и гранулы, или жидкими, предпочтительно инъецируемые или инфузионные растворы.

Подходящим образом составленные в композицию соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения солидных опухолей и лейкемий, в частности опухолей легкого, яичника, молочной железы, желудка, печени, предстательной железы, сарком мягких тканей, головы и шеи, пищевода, поджелудочной железы, толстой кишки, прямой кишки, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий.

ПРИМЕРЫ

Пример I - 20-OTES-камптотецин

Камптотецин (0,100 г, 0,287 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (3 мл) в инертной атмосфере, и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,980 г, 1,44 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,193 мл, 1,15 ммоль) добавляют туда по каплям, после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,040 г, 0,287 ммоль). Через 46 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, (по ТСХ контролируют полное исчезновение реагента, элюент CH₂Cl₂/MeOH = 30/1). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,133 г, 0,287 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,37 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,92 (д, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,82 (т, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,65 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,57 (с, 1H, H-14), 5,67 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,29 (с, 2H, H-5), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,93 (м, 12H), 0,80-0,71 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,6, 152,5, 151,5, 149,0, 145,9, 130,9, 130,4, 130,0, 128,4, 128,1, 128,0, 127,9, 118,9, 94,4, 75,3, 66,0, 50,0, 33,2, 7,9, 7,2, 6,4.

Пример II - 20-OTES-тиокамптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,664 г, 1,44 ммоль), растворяют в безводном ксилоле (20 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,523 г, 1,29 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=4/1, затем 7/2) с получением таким образом искомого продукта (0,578 г, 1,21 ммоль, 84%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,46 (с, 1H, Ar, H-7) 8,29 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,03 (с, 1H, H-14), 7,97 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=21,8 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 6,15 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 5,62 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,57 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,34 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 1,94 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-19), 1,90 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-19), 1,05-0,91 (м, 12Н), 0,82-0,71 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,3, 171,5, 151,9, 149,1, 148,3, 147,2, 130,8, 130,6, 130,6, 130,1, 128,3, 128,2, 128,2, 128,0, 104,5, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5, 7,7, 7,2, 6,4.

Пример III - получение тиокамптотецина (IDN 6070)

20-OTES тиокамптотецин (0,150 г, 0,314 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (10 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,140 мл, 0,816 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 48 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,112 г, 0,307 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,46 (с, 1H, Ar, H-7), 8,27 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,13 (с, 1H, H-14), 7,97 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=21,8 Гц, Ar), 7,70 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 6,25 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 5,62 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,58 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,37 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 3,80 (с, 1H, OH), 1,90 (кв, 2H, H-19), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 172,6, 151,8, 149,1, 148,7, 145,5, 130,9, 130,8, 130,5, 129,9, 128,3 (2 C), 128,2, 128,0, 104,3, 72,3, 69,2, 56,3, 32,0, 7,8.

Пример IV - 20-OTES SN-38

SN-38 (0,100 г, 0,255 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл), в инертной атмосфере, и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,087 г, 1,28 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,171 мл, 1,02 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,031 г, 0,255 ммоль). Через 52 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (CH₂Cl₂/MeOH=10/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,121 г, 0,240 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,26 (уш. с, 1H, OH), 8,14 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,58 (с, 1H, H-14), 7,49 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,2 Гц, H-11), 7,46 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 5,70 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,28 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,23 (с, 2H, H-5), 3,05 (кв, 2H, J=7,5 Гц), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 1,32 (т, 3Н, J=7,5 Гц, Me), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,77-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 149,0, 146,7, 144,6, 143,6, 131,9, 128,7, 126,9, 122,8, 117,9, 105,5, 98,5, 75,4, 65,9, 49,5, 32,9, 23,2, 13,5, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример V - 10-OTBDMS-20-OTES SN-38

20-OTES SN-38 (0,121 г, 0,240 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ = 1:1 (8 мл) в инертной атмосфере. Добавляют туда имидазол (0,081 г, 1,20 ммоль) после чего, через 10 минут, добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl), (0,144 мг, 0,957 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,029 г, 0,240 ммоль). Через 18 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл), и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,127 г, 0,205 ммоль, 85%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,49 (с, 1H, H-14), 7,40 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 7,38 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,5 Гц, H-11), 5,67 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,23 (с, 2H, H-5), 3,11 (кв, 2H, J=7,6 Гц), 1,99-1,82 (м, 2H, H-19), 1,38 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me), 1,04 (с, 9H), 1,00-0,92 (м, 12H), 0,78-0,69 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,9, 157,7, 155,1, 151,5, 150,1, 146,8, 145,6, 143,5, 132,2, 128,2, 126,9, 125,9, 118,0, 110,5, 97,7, 75,4, 66,0, 49,3, 33,2, 25,6, 23,1, 18,3, 13,7, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример VI - 10-OTBDMS 20-OTES тио-SN-38

SN-38 10-OTBDMS 20-OTES (0,127 г, 0,205 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,075 г, 0,184 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 23 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=5/1) с получением таким образом искомого продукта (0,042 г, 0,066 ммоль, 32%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,17 (д, 1H, J=8,9 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,43 (д, 1H, J=2,6 Гц, H-9), 7,41 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,6 Гц, H-11), 6,16 (д, 1H, J=17,1 Гц, H-17), 5,56 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,50 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 3,18 (кв, 2H, J=7,6 Гц), 1,91 (кв, 2H, J=7,4 Гц, H-19), 1,41 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me), 1,05 (с, 9H), 1,03-0,92 (м, 12H), 0,81-0,72 (м, 6H), 0,31 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 171,5, 155,4, 149,4, 149,3, 147,4, 145,7, 143,6, 132,4, 129,9, 128,5, 126,5, 126,2, 110,5, 104,1, 75,0, 68,8, 55,8, 33,5, 25,7, 23,2, 18,4, 13,9, 7,8, 7,2, 6,5, -4,3.

Пример VII - 20-OTES тио-SN-38

10-OTBDMS 20-OTES тио-SN-38 (0,042 г, 0,066 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,013 мл, 0,080 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 3 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt=2/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,034 г, 0,065 ммоль, 99%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,19 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,44 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,6 Гц, H-11), 7,43 (д, 1H, J=2,6 Гц, H-9), 6,16 (д, 1H, J=17,1 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,55 (д, 1H, J=19,7 Гц, H-5), 5,49 (д, 1H, J=19,7 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 3,16 (кв, 2H, J=7,8 Гц), 1,91 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,39 (т, 3Н, J=7,9 Гц, Me), 1,03-0,92 (м, 12H), 0,81-0,72 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,0, 171,7, 155,6, 149,1, 149,0, 147,3, 145,2, 143,7, 132,5, 130,0, 128,7, 126,7, 122,4, 105,5, 104,2, 75,1, 68,9, 55,8, 33,5, 23,1, 13,7, 7,7, 7,2, 6,4.

Пример VIII - ТиоSN-38 (IDN 6156)

20-OTES ТиоSN-38 (0,034 г, 0,065 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,025 мл, 0,150 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 40 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,026 г, 0,064 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (ТГФ-d₈, 400 МГц) δ 9,23 (уш. с, 1H, OH), 8,06 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,88 (с, 1H, H-14), 7,41 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 7,38 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 6,08 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,67 (уш. с, 1H, OH), 5,50 (с, 2H, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,22 (кв, 2H, J=7,8 Гц), 1,90 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,42 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me), 0,97 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (ТГФ-d₈, 100 МГц) δ 173,0, 172,1, 157,5, 149,6, 149,2, 146,1, 145,0, 142,6, 132,3, 130,1, 128,9, 127,6, 122,3, 104,9, 102,3, 72,3, 68,5, 55,8, 31,7, 22,7, 13,1, 7,3.

Пример IX - 20-OTES топотекан

Топотекан (0,100 г, 0,238 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл) в инертной атмосфере и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,081 г, 1,19 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,160 мл, 0,952 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,029 г, 0,238 ммоль). Через 52 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (CH₂Cl₂/MeOH=10/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CHCl₃ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CHCl₃ (2×15 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,120 г, 0,224 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,65 (уш. с, 1H), 8,26 (с, 1H, Ar, H-7), 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,80 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 7,58 (с, 1H, H-14), 5,67 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,20 (с, 2H, H-5), 4,71 (с, 2Н), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,77-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 150,8, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,1, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример X - 10-OTBDMS 20-OTES топотекан

20-OTES топотекан (0,120 г, 0,224 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ=1:1 (8 мл) в инертной атмосфере. Добавляют имидазол (0,076 г, 112 ммоль), после чего, через 10 минут, трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl) (0,135 мг, 0,896 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,027 г, 0,224 ммоль). Через 21 час реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CHCl₃ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CHCl₃ (2×15 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,116 г, 0,179 ммоль, 80%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,26 (с, 1H, Ar, H-7), 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,81 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 7,59 (с, 1H, H-14), 5,64 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,19 (с, 2H, H-5), 4,71 (с, 2H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 1,04 (с, 9H), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,7, 155,1, 151,5, 150,0, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2, 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XI - 10-OTBDMS 20-OTES тиотопотекан

10-OTBDMS 20-OTES топотекан (0,116 г, 0,179 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,065 г, 0,161 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 23 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=5/1) с получением таким образом искомого продукта (0,047 г, 0,072 ммоль, 40%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,35 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,04 (с, 9H), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XII - 20-OTES тиотопотекан

10-OTBDMS 20-OTES тиотопотекан (0,047 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,014 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 4 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt=2/1). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,039 г, 0,071 ммоль, 99%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,36 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2 H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,2 Гц, H-19), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XIII - Тиотопотекан (IDN 6180)

Тиотопотекан 10-OH 20-OTES (0,039 г, 0,071 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,026 мл, 0,163 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 40 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,030 г, 0,069 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,36 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2 H), 3,84 (уш. с, 1H, OH), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,6 Гц H-19), 1,03 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 72,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8.

Пример XIV - Получение 20-OTES 10-гидроксикамптотецина

10-Гидроксикамптотецин (0,100 г, 0,275 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл) в инертной атмосфере и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,225 г, 3,31 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,460 мл, 275 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,068 г, 0,550 ммоль). Через 24 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ полное исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=20/1). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,124 г, 0,259 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 400 МГц) δ 8,10 (с, 1H, Ar, H-7), 8,05 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar), 7,50 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,4 Гц, H-11), 7,11 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 5,60 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,21 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,15 (с, 2H, H-5), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,76-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 100 МГц) δ 172,2, 157,8, 156,7, 151,8, 149,2, 146,1, 144,1, 130,9, 129,8, 129,0, 128,6, 123,2, 117,8, 108,8, 98,1, 75,4, 65,8, 50,0, 32,9, 7,7, 7,1, 6,3.

Пример XV - 10-OTBDMS-20-OTES камптотецин

10-Гидрокси-20-OTES-камптотецин (0,105 г, 0,219 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ=1:1 (4 мл) и в инертной атмосфере. Добавляют имидазол (0,097 г, 1,42 ммоль), после чего, через 10 минут, добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl) (0,164 мг, 1,10 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,040 г, 0,329 ммоль). Через 18 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ полное исчезновение реагента (циклогексан/AcOEt = 1/3). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, циклогексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,117 г, 0,197 ммоль, 90%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,22 (с, 1H, Ar, H-7), 8,13 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,51 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,22 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 5,66 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (с, 2H, H-5), 5,24 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 1,99-1,82 (м, 2H, H-19), 1,03 (с, 9H), 1,00-0,92 (м, 12Н), 0,78-0,69 (м, 6Н), 0,29 (с, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,0, 157,7, 155,1, 151,5, 150,6, 146,1, 145,1, 131,4, 129,4, 129,3, 128,7, 126,7, 118,3, 114,5, 97,7, 75,3, 66,0, 49,9, 33,1, 25,6, 18,3, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XVI - 10-OTBDMS-20-OTES тиокамптотецин

10-OTBDMS 20-OTES камптотецин (0,350 г, 0,589 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (10 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR), (0,590 г, 147 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 95°C, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (циклогексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, циклогексан/AcOEt=4/1) с получением таким образом искомого продукта (0,323 г, 0,530 ммоль, 90%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,28 (с, 1H, Ar, H-7), 8,16 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,97 (с, 1H, H-14), 7,40 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,26 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 6,15 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,58 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,53 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 1,91 (кв, 2H, J=7,4 Гц, H-19), 1,04 (с, 9Н), 1,02-0,92 (м, 12Н), 0,82-0,72 (м, 6Н), 0,30 (с, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 171,5, 155,5, 149,8, 148,6, 147,3, 145,3, 131,5, 130,1, 129,8, 129,1, 128,3, 127,0, 114,5, 104,0, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XVII - Получение 10-гидрокситиокамптотецина (IDN 6181)

Тиокамптотецин 10-OTBDMS 20-OTES (0,320 г, 0,524 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,670 мл, 4,19 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 20 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=25/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, CH₂Cl₂/MeОH=25/1, затем 20/1) с получением таким образом искомого продукта (0,189 г, 0,498 ммоль, 95%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (ТГФ-d₈, 400 МГц) δ 9,20 (уш. с, 1H, OH), 8,37 (с, 1H, Ar, H-7), 8,05 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,89 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,22 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 6,07 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,70 (уш. с, 1H, OH), 5,47 (с, 2H, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 1,89 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 0,97 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (ТГФ-d₈, 100 МГц) δ 173,0, 172,1, 157,4, 149,7, 149,0, 146,1, 144,5, 131,3, 130,5, 130,2, 129,7, 128,6, 123,0, 108,9, 102,3, 72,3, 68,5, 56,5, 31,7, 7,3.

Пример XVIII - Гидрохлорид тиотопотекана (IDN 6180)

10-Гидрокситиокамптотецин (0,150 г, 0,421 ммоль) растворяют в смеси безводного CH₂Cl₂ (3,5 мл) и н-пропанола (1,8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют туда по каплям бис(диметиламино)метан (0,092 г, 0,905 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 4 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=25/1). Через приблизительно 5 часов добавляют смесь 0,125 г концентрированной HCl в 1 мл н-пропанола, и смесь реагирует в течение еще 16 часов. Продукт фильтруют и многократно промывают CH₂Cl₂ и Et₂O с получением таким образом искомого продукта (0,168 г, 0,370 ммоль, 88%) в виде красно-оранжевого твердого вещества.

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 11,51 (уш. с, 1H, OH), 9,78 (уш. с, 1H, OH), 9,06 (с, 1H, Ar, H-7), 8,21 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar), 7,76 (с, 1H, H-14), 7,72 (д, 1H, J 8,8 Гц, Ar), 5,91 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,50 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,49 (с, 2H, H-5), 4,73 (с, 1H, CH₂NMe₂), 4,72 (с, 1H, CH₂NMe₂), 2,83 (с, 3Н, Me), 2,82 (с, 3Н, Me), 1,87 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 0,85 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (DMSO-d₆, 100 МГц) δ 172,7, 172,1, 158,8, 149,6, 148,8, 147,0, 144,2, 133,7, 130,6, 130,6, 129,9, 127,5, 123,2, 109,1, 103,6, 72,8, 68,6, 57,4, 51,1, 43,1, 31,2, 8,3.

Пример XIX - 5-F-20-OTES-камптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,260 мл, 0,260 ммоль). Через 20 минут добавляют NFSI (0,089 г, 0,281 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 2 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/2). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 3 часов при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=3/1, затем 2/1 и в конце 1/1), получая таким образом смесь двух изомеров (0,101 г, 0,210 ммоль, 97%) (отношение изомеров 1:1) в виде светло-желтого твердого вещества. Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,47 (д, 1H, ¹J_HF=61,2 Гц, H-5), 7,45 (с, 1H, H-14), 5,62 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,02-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,93 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,4, 157,5, 152,3, 151,1, 150,2 (д, J=1,5 Гц), 150,3 (д, J=1,5 Гц), 143,6 (д, J=5,3 Гц), 133,7, 131,7, 130,2, 128,9, 128,4, 127,9 (д, J=15,0 Гц), 126,3 (д, J=15,0 Гц), 121,8, 98,9, 93,8 (д, ¹J_CF=213,2 Гц, C-5), 75,1, 65,7, 33,1, 7,8, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,51 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,51 (д, 1H, ¹J_HF=60,8 Гц, H-5), 7,42 (с, 1H, H-14), 5,62 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,20 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 2,02-1,82 (м, 2H, H-19), 1,04-0,93 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,2, 157,8, 152,5, 151,2, 150,3, 143,7, 133,7 (д, J=2,4 Гц), 131,7, 130,2, 128,9, 128,3, 127,9 (д, J=2,3 Гц), 126,3 (д, J=16,7 Гц), 121,8 (д, J=1,5 Гц), 99,0. 93,8 (д, ¹J_CF=214,8 Гц, C-5), 75,0, 65,8, 33,3, 7,9, 7,1, 6,4.

Пример XX - Получение первого диастереомера 5-F-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-F-20-OTES-камптотецина (0,025 г, 0,052 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (5 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,060 мл, 0,368 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 28 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток хроматографируют (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,019 г, 0,051 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,59 (с, 1H, H-14), 7,46 (д, 1H, ¹J_HF=61,2 Гц, H-5), 5,69 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 2,01-1,81 (м, 2H, H-19), 1,05 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 157,6, 151,1, 151,0, 150,2, 144,1, 133,9, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4, 121,7, 98,8, 93,8 (д, ¹J_CF=214,0 Гц, C-5), 72,5, 66,0, 31,5, 7,8.

Пример XXI - Получение второго диастереомера 5-F-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-F-20-OTES-камптотецина (0,025 г, 0,052 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (5 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,060 мл, 0,368 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 28 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток хроматографируют (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,018 г, 0,050 ммоль, 97%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,88 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,56 (с, 1H, H-14), 7,51 (д, 1H, ¹J_HF=60,4 Гц, H-5), 5,69 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,98-1,78 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,3, 157,7, 151,2, 151,2, 150,2, 144,2, 133,8, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4, 121,6, 98,9, 93,7 (д, ¹J_CF=214,0 Гц, C-5), 72,5, 66,1, 31,6, 7,8.

Пример XXII - получение 5-N3-20-OTES-камптотецина

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,260 мл, 0,260 ммоль). Через 20 минут добавляют тозилазид (TsN₃) (0,055 г, 0,281 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 2 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 2 часов 30 минут при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток, содержащий два дастереомера, очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=3/1, затем 2/1 и в конце 1/1), получая таким образом (0,106 г, 0,210 ммоль, 97%) смеси двух изомеров (отношение изомеров 1:1) в виде светло-желтого твердого вещества. Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,49 (с, 1H, H-14), 6,97 (с, 1H, H-5), 5,65 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,01-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,94 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,6, 158,3, 152,2, 150,8, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,4, 75,2, 65,7, 33,1, 7,9, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,46 (с, 1H, H-14), 6,99 (с, 1H, H-5), 5,66 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,02-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,94 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,4, 158,4, 152,3, 150,9, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,3, 75,1, 65,8, 33,3, 7,9, 7,2, 6,4.

Пример XXIII - Получение первого диастереомера 5-N3-20-OH-камптотецина

Диастереомер 1 5-N3-20-OTES-камптотецина (0,070 г, 0,139 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,170 мл, 1016 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 26 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,053 г, 0,136 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,44 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,93 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,85 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,67 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,63 (с, 1H, H-14), 6,97 (с, 1H, H-5), 5,70 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,29 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,99 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,6, 158,3, 150,8, 150,7, 149,8, 144,4, 133,1, 131,5, 129,9, 128,6, 128,3, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,4, 72,7, 66,0, 31,5, 7,8.

Пример XXIV - Получение второго диастереомера 5-N3-камптотецина

Диастереомер 2 5-N3-20-OTES-камптотецина (0,055 г, 0,109 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,135 мл, 0,820 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 26 часов при комнатной температуре, контролируя исчезновение исходного реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,042 г, 0,107 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,85 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,60 (с, 1H, H-14), 7,00 (с, 1H, H-5), 5,74 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,28 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,4, 158,4, 150,9, 150,7, 149,8, 144,5, 133,0, 131,5, 129,9, 128,6, 128,4, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,3, 72,6, 66,1, 31,6, 7,8.

Пример XXV - Получение 5-NH₂-камптотецина

Диастереомер 2 5-N3-20-OH-камптотецина (0,050 г, 0,129 ммоль) растворяют в смеси безводного ТГФ (1,5 мл) и безводного MeOH (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют Pd/C (14 мг ~10%) и проводят два цикла в вакууме/H₂ (балонное давление H₂). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 3 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/3) исчезновение реагента, затем фильтруют через целит и промывают с помощью CH₂Cl₂ (2×15 мл). Растворитель выпаривают в вакууме. ¹H ЯМР спектроскопия реакционного материала показала наличие искомого продукта в виде смеси 1:1 двух эпимеров по положению C5. Флеш-хроматография (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH = 35/1, затем 25/1) позволяет разделить смесь двух диастереомеров (0,046 г, 0,126 ммоль, 98%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,48 (с, 1H, Ar, H-7), 8,22-8,17 (м, 1H, Ar), 7,95-7,90 (м, 1H, Ar), 7,85-7,78 (м, 1H, Ar), 7,68-7,60 (м, 1H, Ar), 7,58 (с, 0,5H, H-14), 7,54 (с, 0,5H, H-14) 6,50 (с, 0,5H, H-5), 6,47 (с, 0,5H, H-5), 5,74-5,64 (м, 1H, H-17), 5,28-5,22 (м, 1H, H-17), 4,00-2,40 (уш. с, 3Н, OH+NH₂), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,07-1,01 (м, 3Н, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,8 (2 C), 158,5 (2 C), 151,2 (2 C), 150,4 (2 C), 149,7 (2 C), 144,5 (2 C), 132,7 (2 C), 131,0 (2 C), 129,8 (2 C), 128,5 (2 C), 128,3 (2 C), 128,0 (2 C), 127,8 (2 C), 120,2 (2 C), 113,8 (2 C), 97,7 (2 C), 72,7 (2 C), 66,3, 66,0, 31,5 (2 C), 7,8, 7,8.

Пример XXVI - 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,281 мл, 0,281 ммоль). Через 20 минут добавляют ди-трет-бутилазодикарбоксилат (DTBAC) (0,075 г, 0,324 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 4 часов при -78°C контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. Реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/1) с получением таким образом смеси двух изомеров (0,145 г, 0,210 ммоль, 97%). Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,80 (уш. с, 1H, Ar), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,01 (уш. д, 1H, Ar), 7,90-7,71 (м, 2H, Ar), 7,70-7,45 (м, 2H, Ar+H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,61 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,23 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,03-1,81 (м, 2H, H-19), 1,79-1,08 (уш. с, 18H), 1,06-0,92 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,8, 155,5, 155,5, 152,0, 152,0, 151,2, 149,4, 145,0, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7, 128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,7, 81,5, 79,7, 75,2, 65,7, 33,2, 28,3, 27,6, 7,7, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,79 (уш. с, 1H, Ar), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,01 (уш. д, 1H, Ar), 7,85-7,76 (м, 2H, Ar), 7,65 (уш. т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,52 (с, 1H, H-14), 6,54 (уш. с, 1H, H-5), 5,61 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,03-1,82 (м, 2H, H-19), 1,76-1,08 (уш. с, 18H), 1,04-0,92 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,5, 157,9, 155,5, 155,5, 152,3, 152,0, 151,2, 149,4, 145,1, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7, 128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,9, 81,5, 79,6, 75,2, 65,8, 33,3, 28,3, 27,4, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XXVII - Получение первого диастереомера 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,050 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,088 мл, 0,542 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 35 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/2), с получением таким образом искомого соединения (0,041 г, 0,071 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Затем продукт очищают путем кристаллизации из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,77 (уш. с, 1H, Ar), 8,16 (уш. д, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,97 (уш. с, 1H, Ar), 7,86-7,50 (м, 4 H, Ar), 6,51 (уш. с, 1H, H-5), 5,66 (д, 1H, J =16,4 Гц, H-17), 5,24 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,80 (м, 2H, H-19), 1,79-1,13 (уш. с, 18 H), 1,03 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,7, 157,9, 155,5, 155,5, 152,1, 151,3, 150,7, 149,6, 145,7, 132,3, 130,7, 129,9, 128,7, 127,9, 127,6, 120,0, 97,9, 82,8, 81,6, 79,7, 72,7, 66,1, 31,8, 28,3, 27,7, 7,7.

Пример XXVIII - получение второго диастереомера 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,050 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (45 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,088 мл, 0,542 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 35 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/2) c получением таким образом искомого соединения (0,040 г, 0,069 ммоль, 96%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,79 (уш. с, 1H, Ar), 8,22 (уш. д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,99 (уш. с, 1H, Ar), 7,88-7,50 (м, 4H, Ar), 6,53 (уш. с, 1H, H-5), 5,65 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,80 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,80 (м, 2H, H-19), 1,79-1,13 (уш. с, 18H), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,6, 157,9, 155,4, 155,4, 152,1, 151,3, 150,8, 149,5, 145,6, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,9, 127,8, 119,8, 98,0, 83,0, 81,5, 79,7, 72,7, 66,3, 31,8, 28,3, 27,7, 7,8.

Пример XXIX - Получение 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,281 мл, 0,281 ммоль). Через 20 минут добавляют дибензилазодикарбоксилат (0,097 г, 0,324 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 3 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 90 минут при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 4/1, затем 7/2) с получением таким образом светло-желтого твердого вещества (0,161 г, 0,212 ммоль, 98%). Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,70 (уш. с, 1H, Ar), 8,39 (уш. с. 1H, Ar), 8,22 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,95 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,83 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,65 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,64-7,00 (м, 11H, Ar+H-14), 6,49 (уш. с, 1H, H-5), 5,57 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,47-4,44 (м, 5H), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,02-0,89 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,6, 158,0, 156,3, 156,3, 153,0, 152,2, 151,0, 149,6, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6, 130,0, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,4, 79,5, 75,2, 68,4, 67,9, 65,6, 33,0, 7,9, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,85 (уш. с, 1H, Ar), 8,58 (уш. с. 1H, Ar), 8,20 (уш. с, 1H, Ar), 7,93 (уш. с, Ar), 7,81 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,63 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,56-6,90 (м, 11H, Ar + H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,55 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,44-4,71 (м, 5H), 1,98-1,80 (м, 2H, H-19), 1,05-0,90 (м, 12Н), 0,81-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,5, 157,9, 156,4, 156,4, 152,9, 152,4, 150,9, 149,4, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6, 129,9, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,5, 79,3, 75,2, 68,4, 67,8, 65,6, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XXX - Получение первого диастереомера 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,140 г, 0,184 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,225 мл, 1380 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 52 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/3). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1, затем 2/3) с получением таким образом (0,113 г, 0,175 ммоль, 95%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем продукт очищают кристаллизацией из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,67 (уш. с, 1H, Ar), 8,39 (уш. с. 1H, Ar), 8,12 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,95 (уш. с, 1H, Ar), 7,74 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,65-6,66 (м, 12H, Ar+H-14), 6,48 (уш. с, 1H, H-5), 5,55 (д, 1H, J=16,0 Гц, H-17), 5,42-4,44 (м, 5H), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 1,92-1,72 (м, 2H, H-19), 0,95 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 158,0, 156,2, 156,0, 153,0, 150,9, 150,9, 149,5, 145,3, 135,4, 132,2, 130,7, 129,8, 128,7-127,8 (11 C), 119,9, 98,2, 79,6, 72,7, 68,5, 68,0, 65,9, 31,6, 7,8.

Пример XXXI - Получение второго диастереомера 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,140 г, 0,184 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,150 мл, 0,921 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 55 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток очищают флеш-хроматографией (SiО₂, гексан/AcOEt = 1/1), получая таким образом искомое соединение (0,113 г, 0,175 ммоль, 95%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем продукт очищают путем кристаллизации из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,71 (уш. с, 1H, Ar), 8,34 (уш. с. 1H, Ar), 8,18 (уш. с, 1H, Ar), 7,94 (уш. с, 1H, Ar), 7,79 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,70-6,70 (м, 12H, Ar+H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,53 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,44-4,48 (м, 5H), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,90-1,70 (м, 2H, H-19), 0,99 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,4, 158,0, 156,3, 156,1, 153,0, 151,0, 150,9, 149,6, 145,3, 135,5, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,8 (11 C), 119,8, 98,4, 79,5, 72,7, 68,5, 67,8, 66,0, 31,6, 7,7.

Пример XXXII - Получение 20-OTES-гиматекана

Гиматекан (0,040 г, 0,089 ммоль) растворяют в безводном диметилформамиде (4 мл) в инертной атмосфере и добавляют имидазол (0,030 г, 0,445 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,060 мл, 0,358 ммоль), после чего добавляют 4- диметиламинопиридин (DMAP) (0,011 г, 0,089 ммоль). Через 75 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×10 мл). Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,048 г, 0,085 ммоль, 95%) в виде желтого твердого вещества (смесь E/Z=70130).

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,02 (с, 1H, CH=N E) 8,29 (д, 1H, J=8,42 Гц, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,00 (с, 1H, CH=N Z), 7,99 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9Z), 7,83 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E + H-11Z), 7,68 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E + H-10Z), 7,57 (с, 1H, H-14E + H-14Z, 5,67 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E + H-17Z), 5,43 (с, 2H, H-5E), 5,26 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17Z), 5,20 (с, 2H, H-5Z), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19E + H-19Z), 1,50 (с, 9Н, o^tBuE), 1,35 (S, 9Н, O^tBUZ), 1,02-0,94 (м, 12H, E+Z), 0,80-0,70 (м, 6H, E+Z). ¹³ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,9 (E+Z, C-21), 157,5 (E+Z, C-16a), 152,5 (E), 152,3 (Z), 151,3 (E+Z), 149,7 (E), 149,0 (Z), 145,7 (E+Z), 142,2 (CH=N E), 139,4 (CH=N Z), 132,9 (E), 132,1 (Z), 130,9 (E, CH, Ar), 130,6 (Z, CH, Ar), 130,3 (Z, CH; Ar), 130,1 (E, CH, Ar), 128,1 (E+Z, CH, Ar), 125,6 (Z), 125,4 (E), 124,7 (Z, CH, Ar), 122,8 (E, CH, Ar), 119,1 (Z), 118,9 (E), 98,3 (Z, C-14), 98,1 (E, C-14), 81,4 (E, OC(CH₃)₃), 81,2 (Z, OC(CH₃)₃), 75,3 (E+ Z, C-20), 66,0 (E+ Z, C-17), 52,7 (E, C-5), 51,2 (Z, C-5), 33,3 (E, C-19), 33,2 (Z, C-19), 27,6 (OC(CH₃)₃ E), 27,5 (OC(CH₃)₃ Z), 7,9 (E+Z C-18), 7,2 (E+Z), 6,4 (E+Z).

Пример XXXIII - Получение 20-OTES-тиогиматекана

Гиматекан 20-OTES (0,080 г, 0,143 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании и инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,087 г, 0,214 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 4/1) с получением таким образом искомого продукта (0,060 г, 0,102 ммоль, 71%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,06 (с, 1H, CH=M E) 8,33 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar, H-12E), 8,27 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,02 (с, 1H, H-14E), 7,87 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E), 7,73 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E), 7,57 (с, 1H, H-14E + H-14Z), 6,18 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17E), 5,73 (с, 2H, H-5E), 5,35 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17E), 1,93 (кв, 2H, J=7,2 Гц, H-19E), 1,55 (с, 9Н, O^tBUE), 1,06-0,92 (м, 12H, E), 0,82-0,72 (м, 6H, E). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,4, 171,5, 151,8, 149,8, 148,0, 146,9, 141,9, 132,3, 131,0, 130,7, 130,3, 128,4, 125,6, 125,1, 122,9, 104,3, 81,8, 75,0, 68,9, 59,2, 33,6, 27,6, 7,8, 7,2, 6,5.

Пример XXXIV - получение тиогиматекана

Тиогиматекан 20-OTES (0,060 г, 0,104 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,127 мл, 0,780 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ (CH₂CL₂/MeOH = 25/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 211) с получением таким образом искомого продукта (0,048 г, 0,102 ммоль, 95%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,02 (с, 1H, CH=ME) 8,28 (д, 1H, J=8,42 Гц, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,09 (уш. с, 1H, H-14E + H-14Z), 8,08 (с, 1H, CH=NZ), 8,04 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9Z), 7,85 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E + H-11Z), 7,70 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E + H-10Z), 6,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17E), 6,24 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17Z), 5,67 (с, 2H, H-5E), 5,51 (с, 2H, H-5Z), 5,37 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E+ H-17Z), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,89 (кв, 2H, H-19E + H-19Z), 1,55 (с, 9H, O^tBuZ), 1,42 (с, 9H, O^tBuZ), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, H-18 Z), 1,02 (т, 3Н, J=7,2 Гц, H-18 E). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 172,5, 151,7, 149,7, 148,4, 145,2, 141,9 (CH=NE), 139,0 (CH=NZ), 132,3, 130,8, 130,6, 130,5, 128,5, 125,5, 125,0, 122,9, 104,0, 81,8, 72,3, 69,3, 59,2, 32,1, 27,6, 7,7.

Пример XXXV - Анализ ингибирования роста клеток

H460 клетки из человеческой крупноклеточной опухоли легкого культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Чувствительность клеток определяли при помощи анализа ингибирования роста клеток после 1 или 72 часов воздействия препарата. Клетки в логарифмической фазе роста собрали и засевали в двух параллелях в 6-луночном планшете. Через двадцать четыре часа после посева клетки подвергали воздействию препаратов и подсчитывали с помощью счетчика Культера через 72 часа после воздействия препаратов для определения IC₅₀. IC₅₀ определяют как концентрацию, ингибирующую рост клеток на 50% по сравнению с ростом в необработанном контроле.

Пример XXXVI - Анализ топоизомераза-I-зависимого разрыва ДНК

Разрывы ДНК определяли при помощи очищенного геля 751-bp BamHI-EcoRI ДНК SV40 (Beretta GL, Binaschi M, Zagni AND, Capuani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Cancer Res 1999; 59:3689-97). Фрагменты ДНК помечали только по 3'. Реакцию разрыва ДНК (20000 имп./мин/образец) проводили в 20 мл смеси 10 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 150 мМ KCl, 5 мМ MgCb, 15 мкг/мл БСА, 0,1 мМ тиотреитола и человеческого рекомбинантного фермента (top1 полной длины) в течение 30 минут при 37°C. Реакцию блокировали при помощи 0,5% ДСН и 0,3 мг/мл протеиназы K в течение 45 минут при 42°C. Стойкость повреждения ДНК определяли в различные моменты, добавляя 0,6 M NaCl, после 30 минут инкубации с 10 мкМ препарата. После осаждения ДНК ресуспендировали в денатурирующем буфере (80% формамид, 10 мМ NaOH, 0,01 M ЭДТА и 1 мг/мл красителя) перед посевом в денатурирующем геле (7% полиакриламид в TBE буфере). Все показатели разрыва ДНК измеряли с помощью Phospholmager model 425 (Molecular Dynamics) (Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti B, et al., Novel 7-oxyiminomethyl camptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001; 44:3264-74).

Стойкость повреждения ДНК (%)

Соединение	Время (мин)
	0	1	5	10
Топотекан	100	65	20	10
Камптотецин	100	58	23	20
SN-38	100	60	33	28
IDN 6070	100	33	10	10
IDN 6181	100	88	50	22
IDN 6156	100	100	80	60
IDN 6092	100	35	18	15

Claims

1. Соединения общей формулы I:

где R представляет собой водород, -N3;
R1 представляет собой водород, этил, группу -CH=N-O-C(CH₃)₃;
R2 представляет собой водород, -СН₂N(СН₃)₂;
R3 представляет собой водород, гидроксилгруппу

их фармацевтически приемлемые соли, энантиомеры, диастереомеры и соответствующие смеси.

2. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
а) тиокамптотецина;
c) тиоSN38;
d) тиотопотекана;
e) тиоиринотекана;
f) тиогиматекана.

3. Способ получения соединений формулы (I), включающий стадии, показанные на схеме I, где:
a) защита гидроксигрупп предшественника;
b) превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо;
c) удаление защитных групп;

где R, R1, R2 имеют значения указанные в п.1, R3 представляет собой водород или гидроксил, необязательно защищенный группой -Si(СН₃)₂С(СН₃)₃ и PG представляет собой ОН-защитную группу, которая представляет собой -Si(CH₃)₃.

4. Способ получения соединений формулы (I), включающий стадии, показанные на схеме II, где:
a) защита гидроксигрупп предшественника;
b) модификация в 5 положении посредством образования карбаниона и реакции с электрофильным реагентом;
c) трансформация карбонила 16а в тиокарбонил;
d) снятие защиты с гидроксигрупп;
в котором стадии b) и c) могут проводиться в обратном порядке:
Схема II

где R, R1, R2 и R3 имеют значения, указанные в п.3.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение формулы (I) вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение по п.2 вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами.

7. Фармацевтическая композиция по пп.5 и 6 в форме, подходящей для орального или парентерального введения.

8. Применение соединения по пп.1 и 2 или композиции по пп.5-7 для получения лекарственного препарата для лечения опухолей.

9. Применение по п.8, где указанный препарат применяют для лечения солидных опухолей и лейкемий.

10. Применение по п.9, где солидные опухоли и лейкемии выбирают из опухолей легкого, яичников, молочной железы, желудка, печени, предстательной железы, сарком мягких тканей, пищевода, поджелудочной железы, головы и шеи, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий.