JP5313894B2

JP5313894B2 - 抗腫瘍活性を持つカンプトテシン誘導体

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Publication number: JP5313894B2
Application number: JP2009521137A
Authority: JP
Inventors: フォンターナ，ガブリエレ; ボンバルデッリ，エツィオ; マンゾッティ，カルラ; バッタリア，アルトゥーロ; サモリ，クリスティアン
Original assignee: インデナ・ソチエタ・ペル・アチオニ
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2013-10-09
Anticipated expiration: 2027-07-13
Also published as: PL2044079T3; IL196653A0; CN101495486B; CA2658900C; IL196653A; HK1135691A1; MX2009000827A; ITMI20061473A1; WO2008011994A1; SI2044079T1; US20100120816A1; AU2007278500A2; EP2044079A1; KR101412157B1; CA2658900A1; ES2561356T3; KR20090033456A; BRPI0714553B8; NO20090251L; CN101495486A

Description

本発明は、抗腫瘍活性を有する新規なカンプトテシン誘導体、その製造方法、抗腫瘍薬としてのその使用及びこれらを含む薬剤組成物に関する。

発明の背景
カンプトテシンは、最初にWallとWaniにより１９６６年に報告（J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890）された、カンレンボク（Camptotheca acuminata）（ヌマミヅキ科（Nyssaceae））から抽出されるアルカロイドである。カンプトテシンは、広いスペクトルの抗腫瘍活性、特に結腸腫瘍及び他の固形腫瘍並びに白血病に対する活性を与えられているにもかかわらず、その高い毒性（これは、特に出血性膀胱炎、胃腸毒性及び骨髄抑制の形で現れる）のため治療において使用されていない。

低い毒性及び高い溶解度を有する化合物を得るために、幾つかのカンプトテシン類似体が合成されている。現在のところ、２種の薬物、即ち、ＣＰＴ−１１及びトポテカンが臨床診療において使用されている。ベロテカン（belotecan）、ルビテカン（rubitecan）、エキサテカン、ギマテカン、ペガモテカン（pegamotecan）、ルルトテカン、カレニテシン、アフェレテカン（afeletecan）、ホモカンプトテシン、ジフロモテカン（diflomotecan）のような他の誘導体、及びその他多くは、臨床試験を行っている。化合物ＣＰＴ−１１は、多数の固形腫瘍及び腹水（結腸直腸、皮膚、胃、肺、子宮頸、卵巣、非ホジキンリンパ腫）の治療に関して承認された、１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（普通はＳＮ−３８として知られている）の高溶解性プロドラッグである。

トポテカンは、肺、胃、肝臓、卵巣、胸部、前立腺、食道、直腸、軟部組織肉腫、頭頸部、膠芽腫の腫瘍、慢性及び急性骨髄性白血病に対して活性な、生理溶液に可溶性の化合物である。しかしトポテカンは、好中球減少症及び血小板減少症のような重大な副作用を示す。

ルルトテカンは、頸部、卵巣、胸部、結腸直腸の腫瘍、及び肺小赤血球腫において活性を有する、更に高溶解性の誘導体である。しかし、ルルトテカンもまた、血液毒性を有する。

ルビテカンは、膵臓、卵巣及び胸部の腫瘍に対して有効な、経口使用のためのプロドラッグである。

カンプトテシン及びその類似体は、全てのトポイソメラーゼＩ阻害薬と同様に、トポイソメラーゼII阻害薬を含む、従来の薬物に耐性の腫瘍に対して有効であり；細胞周期全体を通して高いトポイソメラーゼレベルを維持し；多剤耐性（Ｐｇｏ又はＭＲＰ）又は酵素が介在する解毒代謝を誘導しない。

今や、現在使用されている薬物よりも毒性が低い、トポイソメラーゼＩの新規な阻害薬に研究が集中している。

開環カンプトテシン誘導体は、高いタンパク質結合性（特にアルブミンと）及び腫瘍組織での低い分布を示す。結果として、この生成物は体内に蓄積して、腫瘍にはあまり影響がない。

逆に、ラクトン型の高い親油性は、細胞膜（特に赤血球）へのカンプトテシン誘導体の接着を促進して、組織／血漿分布比に影響を及ぼす。このため、２種の代替アプローチへと研究が集中している：ａ）良好な溶解度を有するがタンパク質結合性は低い生成物の設計；ｂ）極めて低い用量でも治療効果を有する非常に強力な生成物の設計。

７、９、１０及び１１位の修飾は通常、ＤＮＡ−トポイソメラーゼＩ−カンプトテシン三重複合体（これの形成が本化合物の抗腫瘍活性を担っている）の安定性に影響することなく、許容性良好であることが判明した。

２０Ｒ立体配置を持つ生成物は、不活性であるか、又は２０Ｓ立体配置（これは天然の立体配置と一致する）を持つ生成物よりも非常に活性が低いかのいずれかであることが判明した。

概して、５位の修飾は、三重複合体の形成に不利であると考えられるが、一方ピリドン環Ｄ及びＥの修飾は、生成物の活性に有害であると報告されている。

発明の開示
第１の態様において、本発明は、一般式（Ｉ）：

［式中、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＮＨＲ'''、−ＮＲ’Ｒ”（ここで、Ｒ’、Ｒ”及びＲ'''は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルであってよい）であり；
Ｒ１は、アルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトリル、アルコキシイミノ、アリールオキシイミノ、シリルアルキルであり；
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノアルキルであり；
Ｒ３は、水素、場合により保護されているヒドロキシル、アルコキシ、アミノアルキルであり、そしてここで、
アルキル、アシル、アルコキシ、アミノアルキル又はアルコキシイミノ基は、１〜８個、好ましくは１〜４個の炭素原子を直鎖又は分岐鎖中に含むことができ、そしてアリール及びアリールオキシ基は、５〜１０個の炭素原子を含むことができる］で示されるカンプトテシン誘導体、薬剤学的に許容しうるその塩、異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー及び対応する混合物に関する。

本発明の化合物は、低いタンパク質結合性を示し、そして良好な溶解度と、非常に低い用量であっても高い効力とを有する。

本発明の化合物の製造のための好ましい合成経路は、スキームＩ［スキーム中：
ａ）前駆体ヒドロキシ基の保護；
ｂ）ピリドン環のチオピリドン環への変換；
ｃ）保護基の脱離］に示される。

スキームＩにおいて、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上述の意味を有し、そしてＰＧは、ヒドロキシ保護基である。

前駆体は、市販されているか、又は文献に記載されているように得られる。５位で誘導体化された生成物の製造には、スキームII［これは、以下を含む：
ａ）前駆体ヒドロキシ基の保護；
ｂ）カルボアニオンの形成と求電子試薬との反応による、５位での誘導体化；
ｃ）１６ａカルボニルのチオカルボニルへの変換；
ｄ）ヒドロキシ基の脱保護（そしてここで、
工程ｂ）及びｃ）は、逆転させることができる）］に記載されるアプローチに従うことができる。

スキームIIにおいて、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上述の意味を有し、そしてＰＧは、ＯＨ保護基である。

５位のカルボアニオンの形成は、前駆体を強有機塩基、好ましくはＬｉＨＭＤＳで処理して得ることができる。

カルボアニオンは、その場で求電子体（ハロゲンの発生源、アザジカルボキシラート、イソシアナート、クロロカルボニル誘導体、トシルアジドなど）と反応させる。

ピリドン環のチオピリドン環への変換は、２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，２，３，４−ジチアホスフェタン−２，４−ジスルフィド（一般にはローソン（Lawesson's）試薬として知られている）（Cava P.M.ら, Tetrahedron 1985, 41, 5061；Cherkasov RAら, Tetrahedron 1985, 41, 2567；Ghattas AAGら, Sulfur Lett. 1982, 1, 69；Yde Bら, Tetrahedron 1984, 40, 2047）との、又は同等の試薬との反応により得ることができる。ローソン試薬が好ましい。

シリル及びカルバマート又はこれらの組合せが、ヒドロキシ保護基として好ましい。

本発明の化合物は、広範なスペクトルの腫瘍細胞への細胞毒性アッセイで試験した。一例として、式（Ｉ）の２化合物に関するＮＣＩ−Ｈ４６０細胞株（ＮＳＣＬ癌）への細胞毒性データは、カンプトテシン及び薬物のトポテカン及びＳＮ−３８を対照として用いて報告される：

細胞毒性試験により、カンプトテシンのスルホ化誘導体が、非スルホ化類似体よりも平均で１０倍強力であることが示された。

最も活性な化合物は、活性濃度及び損傷の持続を測定するＤＮＡ切断アッセイで評価した（「実施例」の項を参照のこと）。式（Ｉ）の誘導体は、驚くべきことに、有効な細胞毒性活性を維持しながら、対照標準物質（特にトポテカン及びカンプトテシン）よりもＤＮＡ複製のブロックにおいて長い持続を示す。

更には、スルホ化誘導体は、ＤＮＡ損傷を低濃度で長い持続時間誘導したため、このケースでも非スルホ化類似体よりも活性が高いことが判明した。

化合物チオ−ＳＮ３８（ＩＤＮ６１５６）は、ＳＮ３８のＣＰＴ１１（イリノテカン）への変換の手順により、チオ−ＣＰＴ１１（チオ−イリノテカン）に変換した。生じた化合物チオ−イリノテカンは、対照標準物質には非常に感受性の高い肺腫瘍モデルで、臨床使用中の近縁の非スルホ化類似体（ＣＰＴ１１）とインビボで比較した。

下記の表に報告されるデータは、スルホ化化合物チオ−ＣＰＴ１１が、良好な許容度と治療指数と共に同じ有効性レベルを保持しながら、非スルホ化類似体ＣＰＴ１１よりも強力であることを示している。

更に別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物を薬剤学的に許容しうる担体及び賦形剤と一緒に含む薬剤組成物に関する。化合物（Ｉ）の経口又は非経口投与に適した剤形は、固体、好ましくはカプセル剤、錠剤及び顆粒剤であっても、又は液体、好ましくは注射液若しくは輸液であってもよい。

本発明の適切に処方された化合物は、固形腫瘍及び白血病、特に肺、卵巣、胸部、胃、肝臓、前立腺、軟部組織肉腫、頭頸部、食道、膵臓、結腸、直腸、膠芽腫の腫瘍、慢性及び急性骨髄性白血病の治療に使用することができる。

実施例

２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン
カンプトテシン（０．１００ｇ、０．２８７mmol）を、不活性雰囲気下で無水ジメチルホルムアミド（３mL）に懸濁し、生じた懸濁液に、イミダゾール（０．９８０ｇ、１．４４mmol）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、次に塩化トリエチルシリル（ＴＥＳ−Ｃｌ）（０．１９３mL、１．１５mmol）をここに滴下し、続いて４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０４０ｇ、０．２８７mmol）を加えた。４６時間後、真空下でこの反応混合物から溶媒を留去した（試薬の完全な消失はＴＬＣで確認、溶離液：ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝３０／１）。この固体を次にＣＨ_２Ｃｌ_２に再溶解して、Ｈ_２Ｏ及び飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１０mL）で抽出した。有機相を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮することにより、所望の生成物（０．１３３ｇ、０．２８７mmol）を淡黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳ−チオ−カンプトテシン
カンプトテシン２０−ＯＴＥＳ（０．６６４ｇ、１．４４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水キシレン（２０mL）に溶解した。次に、ローソン試薬（ＬＲ）（０．５２３ｇ、１．２９mmol）を加え、この反応液を９０℃まで加熱した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（へキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）、反応混合物を９０℃で１８時間反応させた。真空下で溶媒を留去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４／１続いて７／２）により精製することによって、所望の生成物（０．５７８ｇ、１．２１mmol、８４％）を強い黄色の固体として得た。

チオ−カンプトテシン（ＩＤＮ６０７０）の調製
２０−ＯＴＥＳチオ−カンプトテシン（０．１５０ｇ、０．３１４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（１０mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．１４０mL、０．８１６mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）、この反応混合物を室温で４８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１続いて１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．１１２ｇ、０．３０７mmol、９８％）を強い黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳＳＮ−３８
ＳＮ−３８（０．１００ｇ、０．２５５mmol）を、不活性雰囲気下で無水ジメチルホルムアミド（５mL）に懸濁して、生じた懸濁液にイミダゾール（０．０８７ｇ、１．２８mmol）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、次に塩化トリエチルシリル（ＴＥＳ−Ｃｌ）（０．１７１mL、１．０２mmol）をここに滴下し、次に４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０３１ｇ、０．２５５mmol）を加えた。ＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝１０／１）により試薬の完全な消失をモニターしながら、５２時間後、真空下で反応混合物から溶媒を留去した。次にこの固体をＣＨ_２Ｃｌ_２に再溶解して、Ｈ_２Ｏ及び飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１０mL）で抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮することにより、所望の生成物（０．１２１ｇ、０．２４０mmol、９４％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ−２０−ＯＴＥＳＳＮ−３８
２０−ＯＴＥＳＳＮ−３８（０．１２１ｇ、０．２４０mmol）をＣＨ_２Ｃｌ_２／ＴＨＦ＝１：１（８mL）無水混合物に不活性雰囲気下で溶解した。イミダゾール（０．０８１ｇ、１．２０mmol）をここに加え、次に１０分後に塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ）（０．１４４mg、０．９５７mmol）、次いで４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０２９ｇ、０．２４０mmol）を加えた。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により試薬の消失をモニターしながら、１８時間後、真空下で反応混合物から溶媒を留去した。次にこの固体をＣＨ_２Ｃｌ_２に再溶解して、Ｈ_２Ｏ及び飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１０mL）で抽出して、有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．１２７ｇ、０．２０５mmol、８５％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳチオＳＮ−３８
ＳＮ−３８１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳ（０．１２７ｇ、０．２０５mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水キシレン（６mL）に溶解した。次に、ローソン試薬（ＬＲ）（０．０７５ｇ、０．１８４mmol）を加え、この反応液を９０℃まで加熱した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）により試薬の消失をモニターしながら、反応混合物を９０℃で２３時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝５／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０４２ｇ、０．０６６mmol、３２％）を強い黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳチオＳＮ−３８
１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳチオＳＮ−３８（０．０４２ｇ、０．０６６mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０１３mL、０．０８０mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）、この反応混合物を室温で３時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１続いて１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０３４ｇ、０．０６５mmol、９９％）を強い黄色の固体として得た。

チオＳＮ−３８（ＩＤＮ６１５６）
２０−ＯＴＥＳチオＳＮ−３８（０．０３４ｇ、０．０６５mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０２５mL、０．１５０mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）、この反応混合物を室温で４０時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）により精製することによって、所望の生成物（０．０２６ｇ、０．０６４mmol、９８％）を強い黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳトポテカン
トポテカン（０．１００ｇ、０．２３８mmol）を、不活性雰囲気下で無水ジメチルホルムアミド（５mL）に懸濁して、生じた懸濁液にイミダゾール（０．０８１ｇ、１．１９mmol）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、次に塩化トリエチルシリル（ＴＥＳ−Ｃｌ）（０．１６０mL、０．９５２mmol）をここに滴下し、続いて４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０２９ｇ、０．２３８mmol）を加えた。ＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝１０／１）により試薬の完全な消失をモニターしながら、５２時間後、真空下でこの反応混合物から溶媒を留去した。次にこの固体をＣＨＣｌ_３及びＨ_２Ｏと飽和ＮＨ_４Ｃｌに再溶解し、水相をＣＨＣｌ_３（２×１５mL）で抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮することにより、所望の生成物（０．１２０ｇ、０．２２４mmol、９４％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳトポテカン
２０−ＯＴＥＳトポテカン（０．１２０ｇ、０．２２４mmol）を、不活性雰囲気下でＣＨ_２Ｃｌ_２／ＴＨＦ＝１：１無水混合物（８mL）に溶解した。イミダゾール（０．０７６ｇ、１．１２mmol）を加え、続いて１０分後、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ）（０．１３５mg、０．８９６mmol）、次に４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０２７ｇ、０．２２４mmol）を加えた。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により試薬の消失をモニターしながら、２１時間後、真空下でこの反応混合物から溶媒を留去した。次にこの固体をＣＨＣｌ_３及びＨ_２Ｏと飽和ＮＨ_４Ｃｌに再溶解し、水相をＣＨＣｌ_３（２×１５mL）で抽出した。有機相を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．１１６ｇ、０．１７９mmol、８０％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳチオ−トポテカン
１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳトポテカン（０．１１６ｇ、０．１７９mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水キシレン（６mL）に溶解した。次にローソン試薬（ＬＲ）（０．０６５ｇ、０．１６１mmol）を加えて、この反応液を９０℃まで加熱した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）により試薬の消失をモニターしながら、この反応混合物を９０℃で２３時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝５／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０４７ｇ、０．０７２mmol、４０％）を強い黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳチオ−トポテカン
１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳチオ−トポテカン（０．０４７ｇ、０．０７２mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０１４mL、０．０８６mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）、この反応混合物を室温で４時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１続いて１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０３９ｇ、０．０７１mmol、９９％）を強い黄色の固体として得た。

チオ−トポテカン（ＩＤＮ６１８０）
チオ−トポテカン１０−ＯＨ２０−ＯＴＥＳ（０．０３９ｇ、０．０７１mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０２６mL、０．１６３mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／２）、この反応混合物を室温で４０時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）により精製することによって、所望の生成物（０．０３０ｇ、０．０６９mmol、９８％）を強い黄色の固体として得た。

２０−ＯＴＥＳ１０−ヒドロキシカンプトテシンの調製
１０−ヒドロキシカンプトテシン（０．１００ｇ、０．２７５mmol）を不活性雰囲気下で無水ジメチルホルムアミド（５mL）に懸濁して、生じた懸濁液にイミダゾール（０．２２５ｇ、３．３１mmol）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、次に塩化トリエチルシリル（ＴＥＳ−Ｃｌ）（０．４６０mL、２．７５mmol）をここに滴下し、続いて４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０６８ｇ、０．５５０mmol）を加えた。ＴＬＣにより試薬の完全な消失をモニターしながら（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝２０／１）、２４時間後、真空下でこの反応混合物から溶媒を留去した。次にこの固体をＣＨ_２Ｃｌ_２に再溶解して、Ｈ_２Ｏ及び飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１０mL）で抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮することにより、所望の生成物（０．１２４ｇ、０．２５９mmol、９４％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ−２０−ＯＴＥＳカンプトテシン
１０−ヒドロキシ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン（０．１０５ｇ、０．２１９mmol）を、不活性雰囲気下でＣＨ_２Ｃｌ_２／ＴＨＦ＝１：１無水混合物（４mL）に溶解した。イミダゾール（０．０９７ｇ、１．４２mmol）を加え、続いて１０分後に塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ）（０．１６４mg、１．１０mmol）を、次いで４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０４０ｇ、０．３２９mmol）を加えた。ＴＬＣにより試薬の完全な消失をモニターしながら（シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）、１８時間後、真空下で反応混合物から溶媒を留去した。この固体を次にＣＨ_２Ｃｌ_２に再溶解して、Ｈ_２Ｏ及び飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１０mL）で抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。この残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）により精製することによって、所望の生成物（０．１１７ｇ、０．１９７mmol、９０％）を淡黄色の固体として得た。

１０−ＯＴＢＤＭＳ−２０−ＯＴＥＳチオ−カンプトテシン
１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳカンプトテシン（０．３５０ｇ、０．５８９mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水キシレン（１０mL）に溶解した。次にローソン試薬（ＬＲ）（０．５９０ｇ、１．４７mmol）を加えて、この反応液を９０℃まで加熱した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）、この反応混合物を９５℃で１８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４／１）により精製することによって、所望の生成物（０．３２３ｇ、０．５３０mmol、９０％）を強い黄色の固体として得た。

１０−ヒドロキシ−チオ−カンプトテシン（ＩＤＮ６１８１）の調製
チオ−カンプトテシン１０−ＯＴＢＤＭＳ２０−ＯＴＥＳ（０．３２０ｇ、０．５２４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（８mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．６７０mL、４．１９mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝２５／１）、この反応混合物を室温で２０時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝２５／１続いて２０／１）により精製することによって、所望の生成物（０．１８９ｇ、０．４９８mmol、９５％）を強い黄色の固体として得た。

チオ−トポテカン塩酸塩（ＩＤＮ６１８０）
１０−ヒドロキシ−チオ−カンプトテシン（０．１５０ｇ、０．４２１mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（３．５mL）とｎ−プロパノール（１．８mL）との混合物に溶解した。次に、ビス（ジメチルアミノ）メタン（０．０９２ｇ、０．９０５mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝２５／１）、この反応混合物を室温で４時間反応させた。約５時間後、ｎ−プロパノール１ml中の濃ＨＣｌ０．１２５ｇの混合物を加え、この混合物を更に１６時間反応させた。生成物を濾過して、ＣＨ_２Ｃｌ_２及びＥｔ_２Ｏで反復洗浄することにより、所望の生成物（０．１６８ｇ、０．３７０mmol、８８％）を赤橙色の固体として得た。

５−Ｆ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン
カンプトテシン２０−ＯＴＥＳ（０．１００ｇ、０．２１６mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次に−７８℃の温度まで冷却し、ＴＨＦ中の１．０ＭＬｉＨＭＤＳ溶液（０．２６０mL、０．２６０mmol）をここに滴下した。２０分後、無水ＴＨＦ（２mL）中のＮＦＳＩ（０．０８９ｇ、０．２８１mmol）を加えた。−７８℃で２時間後、温度が２５℃まで上昇するのを待ち、試薬の消失をＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／２）によりモニターした。２種のジアステレオマーの形成を観測した。室温で３時間後、飽和ＮＨ_４Ｃｌの添加により反応をクエンチした。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出して、有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１続いて２／１そして最後に１／１）により精製することによって、２種の異性体の混合物（０．１０１ｇ、０．２１０mmol、９７％）（１：１異性体比）を淡黄色の固体として得た。この２種の異性体は、更なるクロマトグラフィーにより分離した。溶出の順に：

５−Ｆ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第１ジアステレオマーの調製
５−Ｆ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの第１のジアステレオマー（０．０２５ｇ、０．０５２mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（５mL）に溶解した。次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０６０mL、０．３６８mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／２）、この反応混合物を室温で２８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）に付すことにより、所望の生成物（０．０１９ｇ、０．０５１mmol、９８％）を淡黄色の固体として得た。

５−Ｆ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第２ジアステレオマーの調製
５−Ｆ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの第２のジアステレオマー（０．０２５ｇ、０．０５２mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（５mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０６０mL、０．３６８mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／２）、この反応混合物を室温で２８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）に付すことにより、所望の生成物（０．０１８ｇ、０．０５０mmol、９７％）を淡黄色の固体として得た。

５−Ｎ_３−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの調製
カンプトテシン２０−ＯＴＥＳ（０．１００ｇ、０．２１６mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次に−７８℃の温度まで冷却し、ＴＨＦ中の１．０ＭＬｉＨＭＤＳ溶液（０．２６０mL、０．２６０mmol）をここに滴下した。２０分後、無水ＴＨＦ（２mL）中のトシルアジド（ＴｓＮ_３）（０．０５５ｇ、０．２８１mmol）を加えた。−７８℃で２時間後、温度が２５℃まで上昇するのを待ち、試薬の消失をＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）によりモニターした。２種のジアステレオマーの形成を観測した。室温で２時間３０分後、飽和ＮＨ_４Ｃｌの添加により反応をクエンチした。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出して、有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。２種のジアステレオマーよりなる残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１続いて２／１そして最後に１／１）により精製することによって、２種の異性体の混合物（異性体の比１：１）（０．１０６ｇ、０．２１０mmol、９７％）を淡黄色の固体として得た。この２種の異性体は、更なるクロマトグラフィーにより分離した。溶出の順に：

５−Ｎ_３−２０−ＯＨ−カンプトテシン第１ジアステレオマーの調製
５−Ｎ_３−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンのジアステレオマー１（０．０７０ｇ、０．１３９mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．１７０mL、１．０１６mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）、この反応混合物を室温で２６時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０５３ｇ、０．１３６mmol、９８％）を淡黄色の固体として得た。

５−Ｎ_３−カンプトテシン第２ジアステレオマーの調製
５−Ｎ_３−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンのジアステレオマー２（０．０５５ｇ、０．１０９mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．１３５mL、０．８２０mmol）をここに滴下した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により出発試薬の消失をモニターしながら、この反応混合物を室温で２６時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０４２ｇ、０．１０７mmol、９８％）を淡黄色の固体として得た。

５−ＮＨ_２−カンプトテシンの調製
５−Ｎ_３−２０−ＯＨ−カンプトテシンのジアステレオマー２（０．０５０ｇ、０．１２９mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（１．５mL）と無水ＭｅＯＨ（６mL）との混合物に溶解し、次にＰｄ／Ｃ（１４mg ≒１０％）を加え、真空／Ｈ_２（Ｈ_２バルーン圧）で２サイクルを実施した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）により試薬の消失をモニターしながら、この反応混合物を室温で３時間反応させ、次にセライト（Celite）で濾過して、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２×１５mL）で洗浄した。真空下で溶媒を留去した。粗反応物の^１ＨＮＭＲ分光法によって、Ｃ５位の２種のエピマーの１：１混合物として所望の生成物の存在が明らかになった。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝３５／１続いて２５／１）により、２種のジアステレオマーの混合物（０．０４６ｇ、０．１２６mmol、９８％）が回収できた。

５−ジ−ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン
カンプトテシン２０−ＯＴＥＳ（０．１００ｇ、０．２１６mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次に−７８℃の温度まで冷却して、ＴＨＦ中の１．０ＭＬｉＨＭＤＳ溶液（０．２８１mL、０．２８１mmol）をここに滴下した。２０分後、無水ＴＨＦ（２mL）中のアゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（ＤＴＢＡＣ）（０．０７５ｇ、０．３２４mmol）を加えた。−７８℃で４時間後、試薬の消失をＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１）によりモニターした。２種のジアステレオマーの形成を観測した。飽和ＮＨ_４Ｃｌの添加により反応をクエンチした。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出して、有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１）により精製することによって、２種の異性体の混合物（０．１４５ｇ、０．２１０mmol、９７％）を得た。この２種の異性体は、更なるクロマトグラフィーにより分離した。溶出の順に：

５−ジ−ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第１ジアステレオマーの調製
５−ジ−ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン（０．０５０ｇ、０．０７２mmol）の第１のジアステレオマーを、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０８８mL、０．５４２mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／２）、この反応混合物を室温で３５時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／２）により精製することによって、所望の化合物（０．０４１ｇ、０．０７１mmol、９８％）を淡黄色の固体として得た。

この生成物は、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ペンタン＝１／５０からの結晶化により更に精製した。

５−ジ−ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第２ジアステレオマーの調製
５−ジ−ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシン（０．０５０ｇ、０．０７２mmol）の第２のジアステレオマーを、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（４．５mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．０８８mL、０．５４２mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／２）、この反応混合物を室温で３５時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／２）により精製することによって、所望の化合物（０．０４０ｇ、０．０６９mmol、９６％）を淡黄色の固体として得た。

５−ジベンジルオキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの調製
カンプトテシン２０−ＯＴＥＳ（０．１００ｇ、０．２１６mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次に−７８℃の温度まで冷却して、ＴＨＦ中の１．０ＭＬｉＨＭＤＳ溶液（０．２８１mL、０．２８１mmol）をここに滴下した。２０分後、無水ＴＨＦ（２mL）中のアゾジカルボン酸ジベンジル（０．０９７ｇ、０．３２４mmol）を加えた。−７８℃で３時間後、温度が２５℃まで上昇するのを待ち、試薬の消失をＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１）によりモニターした。２種のジアステレオマーの形成を観測した。室温で９０分後、飽和ＮＨ_４Ｃｌの添加により反応をクエンチした。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出して、有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過して真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４／１続いて７／２）により精製することによって、淡黄色の固体を得た（０．１６１ｇ、０．２１２mmol、９８％）。この２種の異性体は、更なるクロマトグラフィーにより分離した。溶出の順に：

５−ジベンジルオキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第１ジアステレオマーの調製
５−ジベンジルオキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの第１ジアステレオマー（０．１４０ｇ、０．１８４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．２２５mL、１．３８０mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／３）、この反応混合物を室温で５２時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１続いて２／３）により精製することによって、生成物（０．１１３ｇ、０．１７５mmol、９５％）を淡黄色の固体として得た。この生成物は、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ペンタン＝１／５０からの結晶化により更に精製した。

５−ジベンジルオキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＨ−カンプトテシン第２ジアステレオマーの調製
５−ジベンジルオキシカルボニルヒドラジノ−２０−ＯＴＥＳ−カンプトテシンの第２ジアステレオマー（０．１４０ｇ、０．１８４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（６mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．１５０mL、０．９２１mmol）をここに滴下した。ＴＬＣにより試薬の消失をモニターしながら（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／２）、この反応混合物を室温で５５時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の化合物（０．１１３ｇ、０．１７５mmol、９５％）を淡黄色の固体として得た。この生成物は、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ペンタン＝１／５０からの結晶化により更に精製した。

２０−ＯＴＥＳ−ギマテカンの調製
ギマテカン（０．０４０ｇ、０．０８９mmol）を、不活性雰囲気下で無水ジメチルホルムアミド（４mL）に溶解して、イミダゾール（０．０３０ｇ、０．４４５mmol）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、次に塩化トリエチルシリル（ＴＥＳ−Ｃｌ）（０．０６０mL、０．３５８mmol）をここに滴下し、続いて４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０１１ｇ、０．０８９mmol）を滴下した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により試薬の完全な消失をモニターしながら、７５時間後、真空下でこの反応混合物から溶媒を留去した。この固体を次にＣＨ_２Ｃｌ_２及びＨ_２Ｏと飽和ＮＨ_４Ｃｌに再溶解し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１０mL）で抽出した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０４８ｇ、０．０８５mmol、９５％）を黄色の固体として得た。（混合物Ｅ／Ｚ＝７０１３０）。

２０−ＯＴＥＳ−チオ−ギマテカンの調製
ギマテカン２０−ＯＴＥＳ（０．０８０ｇ、０．１４３mmol）を、撹拌及び不活性雰囲気下で無水キシレン（６mL）に溶解した。次にローソン試薬（ＬＲ）（０．０８７ｇ、０．２１４mmol）を加えて、この反応液を９０℃まで加熱した。ＴＬＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３／１）により試薬の消失をモニターしながら、この反応混合物を９０℃で１８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０６０ｇ、０．１０２mmol、７１％）を強い黄色の固体として得た。

チオ−ギマテカンの調製
チオ−ギマテカン２０−ＯＴＥＳ（０．０６０ｇ、０．１０４mmol）を、不活性雰囲気下で撹拌しながら無水ＴＨＦ（８mL）に溶解し、次にＥｔ_３Ｎ・３ＨＦ（０．１２７mL、０．７８０mmol）をここに滴下した。ＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝２５／１）により試薬の消失をモニターしながら、この反応混合物を室温で１８時間反応させた。真空下で溶媒を留去して、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２／１）により精製することによって、所望の生成物（０．０４８ｇ、０．１０２mmol、９５％）を強い黄色の固体として得た。

細胞増殖阻害アッセイ
ヒト大細胞肺癌由来のＨ４６０細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。細胞感受性は、薬物曝露の１又は７２時間後に細胞増殖阻害アッセイにより決定した。対数増殖期の細胞を収集して、６ウェルプレートに二重反復で接種した。接種の２４時間後、細胞を薬物に曝露して、薬物への曝露の７２時間後にＩＣ_５０の決定のためコールター（Coulter）カウンターで計数した。ＩＣ_５０は、非処理対照群の増殖と比較して５０％細胞増殖を阻害する濃度として定義される。

トポイソメラーゼ−Ｉ依存性ＤＮＡ破断アッセイ
ＤＮＡ破断は、７５１塩基対ＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＩＤＮＡＳＶ４０精製ゲルを用いて測定した（Beretta GL, Binaschi M, Zagni AND, Capuani L, Capranico G. 異種部位選択的ＤＮＡ結合タンパク質ドメインへの酵素融合によるＤＮＡ部位へのＩＢ型トポイソメラーゼの係留。 Cancer Res 1999; 59:3689-97）。ＤＮＡ断片は、３’だけ標識した。ＤＮＡ破断反応（２０，０００cpm/試料）は、２０mlの１０mMトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、１５０mM ＫＣｌ、５mM ＭｇＣｌ_２、１５μg/mL ＢＳＡ、０．１mMチオトレイトール、及びヒト組換え酵素（完全長ｔｏｐ１）中で３７℃で３０分間行った。この反応は、０．５％ＳＤＳ及び０．３mg/mL Ｋプロテイナーゼを用いて４２℃で４５分間ブロックした。ＤＮＡ損傷の持続は、１０μMの薬物との３０分間のインキュベーション後に０．６ＭＮａＣｌを加えて、様々な時点で試験した。沈降後、ＤＮＡを変性緩衝液（８０％ホルムアミド、１０mM ＮａＯＨ、０．０１ＭＥＤＴＡ及び１mg/mL染料）に再懸濁し、次に変性ゲル（ＴＢＥ緩衝液中の７％ポリアクリルアミド）に接種した。全てのＤＮＡ破断レベルは、ホスホイメージャー（Phosphoimager）モデル４２５（モレキュラー・ダイナミクス（Molecular Dynamics）を用いて測定した（Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti Bら強力なインビトロ及びインビボ抗腫瘍活性を持つ新規な７−オキシイミノメチルカンプトテシン誘導体。 J. Med. Chem. 2001; 44:3264-74）。

Claims

一般式（Ｉ）：

［式中、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＮＨＲ'''、−ＮＲ’Ｒ”（ここで、Ｒ’、Ｒ”及びＲ'''は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルであってよい）であり；
Ｒ１は、アルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトリル、アルコキシイミノ、アリールオキシイミノ、シリルアルキルであり；
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノアルキルであり；
Ｒ３は、水素、場合により保護されているヒドロキシル、アルコキシ、アミノアルキルであり、そしてここで、
アルキル基、アシル、アルコキシ、アミノアルキル又はアルコキシイミノは、１〜８個の炭素原子を直鎖又は分岐鎖中に含むことができ、そしてアリール及びアリールオキシ基は、５〜１０個の炭素原子を含むことができる］で示される化合物、薬剤学的に許容しうるその塩、異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー又はそれらの混合物。
アルキル、アシル、アルコキシ、アミノアルキル又はアルコキシイミノが、１〜４個の炭素原子を含む、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
下記：
ａ）チオ−カンプトテシン；
ｂ）チオ−ホモカンプトテシン；
ｃ）チオＳＮ３８；
ｄ）チオ−トポテカン；
ｅ）チオイリノテカン；
ｆ）チオギマテカン
よりなる群から選択される化合物。
式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、スキームＩ［スキーム中：
ａ）前駆体ヒドロキシ基の保護；
ｂ）ピリドン環のチオピリドン環への変換；
ｃ）保護基の脱離］：

［ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上記と同義であり、そしてＰＧは、ＯＨ保護基である］に示される工程を含む方法。
式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、スキームII［スキーム中：
ａ）前駆体ヒドロキシ基の保護；
ｂ）カルボアニオンの形成と求電子試薬との反応による、５位での誘導体化；
ｃ）１６ａカルボニルのチオカルボニルへの変換；
ｄ）ヒドロキシ基の脱保護（そしてここで、
工程ｂ）及びｃ）は、逆転させることができる）］：

［ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上記と同義であり、そしてＰＧは、ＯＨ保護基である］に示される工程を含む方法。
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を薬剤学的に許容しうる担体及び賦形剤と一緒に含む、薬剤組成物。
経口又は非経口投与に適した剤形である、請求項６記載の薬剤組成物。
腫瘍の処置用の薬物の製造のための、請求項１〜３記載の化合物の使用。
該薬物が、固形腫瘍及び白血病の処置に使用される、請求項８記載の使用。
固形腫瘍及び白血病が、肺、卵巣、胸部、胃、肝臓、前立腺、軟部組織肉腫、食道、膵臓、頭頸部、膠芽腫の腫瘍、慢性及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項９記載の使用。
腫瘍の処置用の薬物の製造のための、請求項６〜７記載の組成物の使用。
該薬物が、固形腫瘍及び白血病の処置に使用される、請求項１１記載の使用。
固形腫瘍及び白血病が、肺、卵巣、胸部、胃、肝臓、前立腺、軟部組織肉腫、食道、膵
臓、頭頸部、膠芽腫の腫瘍、慢性及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項１２記載の使用。