NO341812B1

NO341812B1 - Camptotecinderivater med antitumoraktivitet

Info

Publication number: NO341812B1
Application number: NO20090251A
Authority: NO
Inventors: Gabriele Fontana; Ezio Bombardelli; Carla Manzotti; Arturo Battaglia; Cristian Samori
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2009-01-16
Publication date: 2018-01-29
Also published as: US20100120816A1; ES2561356T3; BRPI0714553B1; DK2044079T3; CA2658900C; EP2044079B1; RU2009102243A; JP2009544634A; ITMI20061473A1; WO2008011994A1; AU2007278500A1; CN101495486B; PL2044079T3; HK1135691A1; KR101412157B1; IL196653A; AU2007278500B2; EP2044079A1; BRPI0714553A2; AU2007278500A2

Abstract

Nye camptotecinderivater som har antitumoraktivitet, prosessen for fremstilling derav, anvendelsen derav som antitumorlegemiddel og farmasøytiske sammensetninger inneholdende dem.

Description

341812

1

Den foreliggende oppfinnelsen angår nye camptotecinderivater av formel I som angitt i krav 1 og som har antitumoraktivitet, fremgangsmåter for fremstilling derav, anvendelse derav for fremstilling av medikamenter som et antitumorlegemiddel og farmasøytiske sammensetninger inneholdende dem.

5 BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN

Camptotecin er et alkaloid ekstrahert fra from Camptotheca acuminata (Nyssaceae), først beskrevet av Wall og Wani i 1966 (J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890). Camptotecin, skjønt utrustet med et bredt spekter av antitumoraktivitet, særlig mot kolontumor og andre faste tumorer og leukemier, anvendes ikke i be-10 handlingen grunnet dens høye toksisitet, som er særlig manifestert i formen av hemorragiske cyster, gastrointestinal toksisitet og myelosuppresjon.

Et antall av camptotecinanaloger har blitt syntetisert for å oppnå forbindelser som har lav toksisitet og høy oppløselighet. For tiden er to legemidler anvendt i den kliniske praksisen, nemlig CPT-11 og topotecan. Andre derivater, slik som belotecan, 15 rubitecan, eksatecan, gimatecan, pegamotecan, lurtotecan, karenitecin, afeletecan, homocamptotecin, diflomotecan, og mange andre, gjennomgår kliniske eksperimentering. Forbindelse CPT-11 er et høyoppløselig prodrug for 10-hydroksy-7-etylcamptotecin (alminnelig kjent som SN-38), som er godkjent for behandlingen av mange faste tumorer og ascites (kolorektal, hud, mage, lunge, livmorhals, egg-20 stokk, ikke-Hodgkin lymfoma).

Topotecan er en forbindelse løselig i fysiologisk løsning, aktiv mot svulster i lunge, mage, lever, eggstokk, bryst, prostata, spiserør, rektum, mykvevssarkom, hode og hals, glioblastoma, kroniske og akutte myelocyttiske leukemier. Topotecan viser imidlertid viktige bivirkninger slik som nøytropeni og trombocytopeni.

25 Lurtotecan er et mer løselig derivat, som har aktivitet i tumorer i hals, eggstokk, bryst, kolorektal, og pulmonær mikrocytomi. Uansett har Lurtotecan også hematisk toksisitet.

Rubitecan er et prodrug for oral bruk som er effektivt mot tumorer i bukspyttkjertel, eggstokk og bryst.

30 Camptotecin og dens analoger, hvilket er tilfellet med alle topoisomerase I inhibitorer, er effektive mot tumorer som er resistente for konvensjonelle legemidler, in

341812

2

kludert topoisomerase II inhibitorer; opprettholder høye topoisomerasenivåer under hele cellesyklusen; induserer ikke multi-legemiddelresistens (Pgo eller MRP) eller detoksifiserende metabolisme mediert av enzymet. Forbindelser med anti-tumoraktivitet er også kjent fra US patent 5972955 A.

5 Forskning fokuseres nå på nye inhibitorer av topoisomerase I som har lavere toksisitet enn de for tiden anvendte legemidler.

Åpen-ring camptotecinderivater viser høy proteinbinding (særlig med albumin) og lav distribusjon i tumorvevene. Som en konsekvens akkumulerer produktet i kroppen og tumorer blir lite påvirket.

10 Motsatt fremmer den høye lipofilisiteten av laktonformen adhesjonen av camptotecinderivater til cellemembraner, særlig erytrocytter, som påvirker vev/plasma distribusjonshastigheten. Av denne grunn fokuserer forskning på to alternative tilnærminger: a) utforming av lav-proteinbindende produkter som fremdeles har god oppløselighet; b) utforming av høypotente produkter som har en terapeutisk effekt 15 selv ved ekstremt lave doser.

Modifikasjoner ved 7-, 9-, 10- og 11-posisjonene viste vanligvis god toleranse mens de ikke påvirket stabiliteten av DNA-topoisomerase I-camptotecin ternærkompleks, hvorav dannelsen er ansvarlig for antitumoraktiviteten av forbindelsene.

Produkter med 20R-konfigurasjon ble vist enten inaktive eller svært lite aktive i 20 forhold til produktene med 20S-konfigurasjon som stemmer overens med den naturlige konfigurasjonen.

Som en regel betraktes modifikasjoner ved 5-posisjonen ufordelaktige til dannelsen av ternærkomplekset, ettersom modifikasjoner ved pyridonringer D og E er rapportert å gi den skadelige aktiviteten av produktet.

25 BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN

I et første aspekt angår oppfinnelsen camptotecinderivater av generell formel I:

341812

3

R2 R1 R

R3 S

N

N O

OHO

(I)

hvori:

R er F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R'', -COOR', -CONR'R'', -NHR'''-NR'R'' hvor R', R'' og R''' kan være H, alkyl, aryl, arylalkyl, acyl, alkoksykarbonyl, aryloksykarbonyl;

5 R1 er alkyl, aminoalkyl, hydroksyalkyl, nitril, alkoksymino, aryloksymino, silylalkyl;

R2 er hydrogen, hydroksyl, alkoksy, aminoalkyl;

R3 er hydrogen, eventuelt beskyttet hydroksyl, alkoksy, aminoalkyl,

hvori alkyl-, acyl-, alkoksy-, aminoalkyl- eller alkoksyminogruppene kan inneholde 1 til 8, fortrinnsvis 1 til 4, karbonatomer, i en rett eller forgrenet kjede, og aryl- og 10 aryloksygruppene kan inneholde 5 til 10 karbonatomer;

de farmasøytisk akseptable saltene, isomerene, enantiomerene, diastereomerene, derav og korresponderende blandinger.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen viser lav proteinbinding og har god oppløselighet og høy styrke selv ved lave doser.

15 Den foretrukne syntetiske ruten for fremstilling av forbindelsene av oppfinnelsen er illustrert i skjema 1 hvori:

a) viser beskyttelse av grunnsubstanshydroksygruppene;

b) viser omdannelse av pyridonringen til tiopyridonring;

341812

4

c) viser fjerning av de beskyttende gruppene.

Skjema I

R2 R1 R R2 R1 R

R3 O R3 O

N N

a)b)

N N

O O

HOOO O PG

R2 R1 R R2 R1 R

R3 S R3 S

N N

N c)

N O O

O O H O O PG

I skjema I har R, R1, R2 og R3 betydningene beskrevet ovenfor, og PG er en 5 hydroksybeskyttende gruppe.

Grunnsubstanser kan være kommersielt tilgjengelige eller oppnås som beskrevet i litteraturen. For fremstilling av produktene derivatisert ved 5-posisjonen, kan tilnærmingen beskrevet i skjema II følges hvilken omfatter:

a) beskyttelse av grunnsubstanshydroksygruppene;

10 b) derivatisering ved 5 gjennom dannelse av et karbanion og reaksjon med en elektrofilt reagensmiddel;

c) omdannelse av 16a-karbonylgruppen til tiokarbonyl;

d) avbeskyttelse av hydroksygruppene;

341812

5

hvor trinn b) og c) kan reverseres.

Skjema II

R2 R1 R2 R1

R3 O R3 O

N N

a)b)

N N

O O

HOOO O PG

R2 R1

R

R3 R2 R1

O R

R3

N c) Sd)

N N

N

O

O O O PG O O PG

R2 R1

R

R3 S

N N O

H O O

I skjema II har R, R1, R2 og R3 betydningene beskrevet ovenfor, og PG er en OH-5 beskyttende gruppe.

Dannelsen av karbanion ved 5 kan oppnås ved å behandle grunnsubstansen med en sterk organisk base, fortrinnsvis LiHMDS.

Karbanionet reageres in situ med en elektrofil, slik som en kilde av halogen, et azadikarboksylat, isocyanat, klorkarbonylderivat, tosylazid.

341812

6

Omdannelse av pyridonringen til tiopyridonring kan oppnås ved reaksjon med 2,4-bis(4-metoksyfenyl)-1,2,3,4-ditiafosfetan-2,4-disulfid (vanligvis kjent som Lawesson’s reagensmiddel) (Cava P.M. et al, Tetrahedron 1985, 41, 5061; Cherkasov R.A. et al Tetrahedron 1985 41, 2567; Ghattas A.A.G. et al, Sulfur Lett. 1982, 1, 5 69; Yde B. et al, Tetrahedron 1984, 40. 2047) eller en ekvivalent reagensmiddel.

Lawesson’s reagensmiddel er foretrukket.

Silyler og karbamater eller en kombinasjon derav er foretrukket som hydroksybeskyttende grupper.

Forbindelsene av oppfinnelsen ble testet i en cytotoksisitetsundersøkelse på et 10 bredt spektrum av tumorceller. Eksempelvis rapporteres cytotoksistetsdata på NCl-H460 cellelinjen (NSCL kreft) omfattende to forbindelser av formel (I) ved å anvende camptotecin og legemidlene Topotecan og SN-38 som referanser:

NCI-H460

Navn Formel IC50 (μg/ml)

Celletelling

O

N

O

Camptotecin 0,115 ± 0,0174

MW =348.36 H OO

C20H16N2O4

N

H O O

N

Topotecan N

O 0,63 ± 0,44

MW = 421 H O

C23H23N3O5 O

341812

7

H O O

N

N 0,0865 ± SN38 O

MW =392.42 H O 0,0049

C22H20N2O5 O

S

N

IDN 6070 N

O MW = 364 0,05 ± 0,021

C20H16N2O3S

tioCamptotecin H OO

N3

S

N

IDN 6092 O 0,3 ± 0,07

MW = 405.44 H O

C20H15N5O3S O

(fortsetter)

N3

S

N

IDN 6093 O 0,72 ± 0,2

MW = 405.44 H O

C20H15N5O3S O

H O S

IDN 6156 N

N 0,0095 ± O MW =408.48 H O 0,0007 Tio-SN38 C22H20N2O4S O

341812

8

N

H O S

IDN 6180 N

N

O 0,115 ± 0,021

H O

Tio-topotecan MW: 437,52

C23H23N3O4S O

H O S

IDN 6181 N

N

O 0,035 ± 0,011 10-hydroksy- MW = 380,43 H O

C20H16N2O4S O

tioCamptotecin

Cytotoksistetstester vist at camptotecinsulforerte derivater er på gjennomsnittlig 10 ganger mer kraftige enn ikke-sulforerte analoger.

De mest aktive forbindelsene ble evaluert i en DNA-spaltningsundersøkelse som 5 måler den aktive konsentrasjonen og skadeutholdenheten (se delen ”Eksempler”).

Derivatene av formel (I) viser overraskende høyere utholdenhet i å blokkere DNA-replikasjon enn referansestandardene (særlig topotecan og camptotecin), mens det opprettholder en effektiv cytotoksisk aktivitet.

Videre viste sulforerte derivater seg mer aktive enn ikke-sulforerte analoger også i 10 dette tilfellet, ettersom de induserte DNA-skade ved lavere konsentrasjoner og med lengre utholdenhet på tid.

Forbindelse tio-SN38 (IDN6156) ble omdannet til tio-CPT11 (tio-Irinotecan) i henhold til fremgangsmåter for omdanningen av SN38 til CPT11 (Irinotecan) rapportert i litteraturen. Den resulterende forbindelsen tio-Irinotecan ble sammenlignet in vivo 15 med nærliggende ikke-sulforerte analoge i klinisk bruk (CPT11) på en lungetumormodell svært sensitiv for standardreferansene.

Data rapportert i den følgende tabellen viser at den sulforerte forbindelsen tio-CPT-11 er mer kraftig enn ikke ikke-sulforert analog CPT11, mens den holder den samme effektivitetsnivået med bedre tolererbarhet og terapeutisk indeks.

341812

9

Legemiddela Dose TWI% b LCKc Maxd Tox/Tote

(mg/kg/inj.) (0,5 g) BWL%

CPT 11 50 91 1,8 15 0/5

Tio-CPT11 10 94 2,3 9 0/5

I et ytterligere aspekt angår oppfinnelsen farmasøytiske sammensetninger inneholdende en forbindelse av formel (I) sammen med farmasøytisk akseptable bærere og eksipienter. De farmasøytiske formene egnet for oral eller parenteral admini-5 strasjon av forbindelsene (I) kan være faste, foretrukket kapsler, tabletter og granuler eller flytende, foretrukket injiserbare eller infusjonsoppløsninger.

De egnede formulerte forbindelsene av oppfinnelsen kan anvendes for behandlingen av faste tumorer og leukemier, særlig tumorer i lungen, eggstokken, bryst, mage, lever, prostata, mykt vevssarkom, hode og hals, spiserør, bukspyttkjertel, tykk-10 tarm, rektum, glioblastom, kroniske og akutte myelocyttiske leukemier.

EKSEMPLER

EKSEMPEL I - 20-OTES-Camptotecin

Camptotecin (0,100 g, 0,287 mmol) suspenderes i vannfri dimetylformamid (3 ml), under inert atmosfære og den resulterende suspensjonen tilsettes med imidazol 15 (0,980 g, 1,44 mmol). Blandingen røres i 10 minutter, deretter dryppes trietylsilylklorid (TES-Cl) (0,193 ml, 1,15 mmol) deri etterfulgt av tilsetting av 4-dimetylaminopyridin (DMAP) (0,040 g 0,287 mmol). Etter 46 timer ble blandingen fordampet under vakuum, (TLC-kontroll av den fullstendige forsvinningen av reagensmiddelet, eluent CH2Cl2/MeOH = 30/1). Faststoffet gjenoppløses i CH2Cl2og 20 vaskes med H2O og mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(2 X 10 ml). De organiske fasene kombineres og tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum, og det ønskede produktet oppnås derved (0,133 g, 0,287 mmol) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 25 7,92 (d, 1H, J = 8,0 Hz, Ar), 7,82 (t, 1H, J = 8,0 Hz, Ar), 7,65 (t, 1H, J = 8,4 Hz,

341812

10

Ar), 7,57 (s, 1H, H-14), 5,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,29 (s, 2H, H-5), 5,25 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,7, 157,6, 152,5, 151,5, 149,0,

145,9, 130,9, 130,4, 130,0, 128,4, 128,1, 128,0, 127,9, 118,9, 94,4, 75,3, 66,0,

5 50,0, 33,2, 7,9, 7,2, 6,4.

EKSEMPEL II - 20-OTES-Tio-Camptotecin

Camptotecin 20-OTES (0,664 g, 1,44 mmol), ble løst i vannfritt xylen (20 ml) med omrøring under inert atmosfære. Deretter tilsettes Lawesson’s reagensmiddel (LR), (0,523 g, 1,29 mmol) og reaksjonen varmes opp til 90 °C. Reaksjonsblandingen 10 reageres i 18 timer ved 90 �C, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 1/1) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 4/1 deretter 7/2), og derved oppnås det ønskede produktet (0,578 g, 1,21 mmol, 84 %) som et intenst gult faststoff.

15 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,46 (s, 1H, Ar, H-7) 8,29 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,03 (s, 1H, H-14), 7,97 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 21,8 Hz, Ar), 7,69 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 6,15 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 5,62 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,57 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,34 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 1,94 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,90 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,05-0,91 (m, 12 H), 0,82-0,71 20 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,3, 171,5, 151,9, 149,1, 148,3, 147,2,

130,8, 130,6, 130,6, 130,1, 128,3, 128,2, 128,2, 128,0, 104,5, 75,0, 68,8, 56,3,

33,5, 7,7, 7,2, 6,4.

EKSEMPEL III – Fremstilling av Tio-Camptotecin (IDN 6070)

20-OTES Tio-Camptotecin (0,150 g, 0,314 mmol) løses i vannfri THF (10 ml) med 25 røring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,140 ml, 0,816 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 48 timer ved romtemperatur, forsvinning av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 1/1) overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 2/1 deretter 1/1), og derved oppnås det ønskede produktet (0,112 g, 0,307 mmol, 30 98 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,46 (s, 1H, Ar, H-7), 8,27 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,13 (s, 1H, H-14), 7,97 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 21,8 Hz, Ar), 7,70

341812

11

(t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 6,25 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 5,62 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,58 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,37 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 3,80 (s, 1H, OH), 1,90 (q, 2H, H-19), 1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ

173,5, 172,6, 151,8, 149,1, 148,7, 145,5, 130,9, 130,8, 130,5, 129,9, 128,3 (2 C),

5 128,2, 128,0, 104,3, 72,3, 69,2, 56,3, 32,0, 7,8.

EKSEMPEL IV - 20-OTES SN-38

SN-38 (0,100 g, 0,255 mmol) suspenderes i vannfri dimetylformamid (5 ml), under inert atmosfære og den resulterende oppløsningen tilsettes med imidazol (0,087 g, 1,28 mmol). Blandingen røres i 10 minutter, deretter dryppes trietylsilylklorid (TES-10 Cl), (0,171 ml, 1,02 mmol) deri, fulgt av tilsetting av 4-dimetylaminopyridin (DMAP) (0,031 g, 0,255 mmol). Etter 52 timer ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, ble den fullstendige forsvinningen av reagensmiddelet overvåket ved TLC (CH2Cl2/MeOH = 10/1). Faststoffet gjenoppløses deretter iCH2Cl2og vaskes med H2O og mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(2 X 10 ml).

15 De organiske fasene kombineres og tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum, og det ønskede produktet oppnås derved (0,121 g, 0,240 mmol, 94 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,26 (br s, 1H,OH), 8,14 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,58 (s, 1H, H-14), 7,49 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,2 Hz, H-11), 7,46 (d, 1H, J = 20 2,2 Hz, H-9), 5,70 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,28 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,23 (s, 2H, H-5), 3,05 (q, 2H, J = 7,5 Hz), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 1,32 (t, 3 H, J = 7,5 Hz, Me), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 149,0, 146,7, 144,6, 143,6, 131,9, 128,7,

126,9, 122,8, 117,9, 105,5, 98,5, 75,4, 65,9, 49,5, 32,9, 23,2, 13,5, 7,8, 7,2, 6,4.

25 EKSEMPEL V - 10-OTBDMS-20-OTES SN-38

20-OTES SN-38 (0,121 g, 0,240 mmol) oppløses i en CH2Cl2/THF = 1:1 (8 ml) vannfri blanding under inert atmosfære. Imidazol (0,081 g, 1.20 mmol) tilsettes dertil etterfulgt etter 10' minutter, av tert-butyldimetylsilylklorid (TBDMS-Cl), (0,144 mg, 0,957 mmol), deretter av 4-dimetylaminopyridin (DMAP), (0,029 g 30 0,240 mmol). Etter 18 h, ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, ble forsvinningen av reagensmiddelet overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 1/1). Faststoffet gjenoppløses deretter i CH2Cl2og vaskes med H2O og mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(2 X 10 ml) og de organiske fasene kombi

341812

12

neres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum . Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,127 g, 0,205 mmol, 85 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,49 (s, 1H, H-14), 5 7,40 (d, 1H, J = 2,2 Hz, H-9), 7,38 (dd, 1H, J1= 8,8 Hz J2= 2,5 Hz, H-11), 5,67 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,23 (s, 2H, H-5), 3,11 (q, 2H, J = 7,6 Hz), 1,99-1,82 (m, 2H, H-19), 1,38 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 1,04 (s, 9 H), 1,00-0,92 (m, 12 H), 0,78-0,69 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,9, 157,7, 155,1, 151,5, 150,1, 146,8, 145,6, 143,5, 132,2, 10 128,2, 126,9, 125,9, 118,0, 110,5, 97,7, 75,4, 66,0, 49,3, 33,2, 25,6, 23,1, 18,3, 13,7, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

EKSEMPEL VI - 10-OTBDMS 20-OTES ThioSN-38

SN-38 10-OTBDMS 20-OTES (0,127 g, 0,205 mmol) oppløses i vannfri xylen (6 ml) med omrøring under inert atmosfære. Deretter tilsettes Lawesson’s reagensmiddel 15 (LR), (0,075 g, 0,184 mmol) og reaksjonen oppvarmes til 90 °C. Reaksjonsblandingen reageres i 23 timer ved 90 °C, og forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 2/1). Løsemidlet fordampes av under vakuum og renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 5/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,042 g, 0,066 mmol, 32 %) som et intenst gult faststoff.

20 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,17 (d, 1H, J = 8,9 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,43 (d, 1H, J = 2,6 Hz, H-9), 7,41 (dd, 1H, J1= 8,8 Hz J2= 2,6 Hz, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 17,1 Hz, H-17), 5,56 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,50 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 3,18 (q, 2H, J = 7,6 Hz), 1,91 (q, 2H, J = 7,4 Hz, H-19), 1,41 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 1,05 (s, 9 H), 1,03-0,92 (m, 12 H), 25 0,81-0,72 (m, 6 H), 0,31 (s, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,1, 171,5,

155,4, 149,4, 149,3, 147,4, 145,7, 143,6, 132,4, 129,9, 128,5, 126,5, 126,2,

110,5, 104,1, 75,0, 68,8, 55,8, 33,5, 25,7, 23,2, 18,4, 13,9, 7,8, 7,2, 6,5, -4,3.

EKSEMPEL VII - 20-OTES ThioSN-38

10-OTBDMS 20-OTES ThioSN-38 (0,042 g, 0,066 mmol) oppløses i vannfri THF (4 30 ml) med omrøring under inert atmosfære, påfølgende dryppes Et3N●3HF (0,013 ml, 0,080 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reagerte i 3 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 2/1) ble overvåket ved TLC.

341812

13

Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 2/1 deretter 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,034 g, 0,065 mmol, 99 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,19 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 5 7,44 (dd, 1H, J1= 8,8 Hz J2= 2,6 Hz, H-11), 7,43 (d, 1H, J = 2,6 Hz, H-9), 6,16 (d, 1H, J = 17,1 Hz, H-17), 6,02 (br s, 1H, OH), 5,55 (d, 1H, J = 19,7 Hz, H-5), 5,49 (d, 1H, J = 19,7 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 3,16 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 1,91 (q, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,39 (t, 3 H, J = 7,9 Hz, Me), 1,03-0,92 (m, 12 H), 0,81-0,72 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,0, 171,7, 155,6, 10 149,1, 149,0, 147,3, 145,2, 143,7, 132,5, 130,0, 128,7, 126,7, 122,4, 105,5, 104,2, 75,1, 68,9, 55,8, 33,5, 23,1, 13,7, 7,7, 7,2, 6,4.

EKSEMPEL VIII - ThioSN-38 (IDN 6156)

20-OTES ThioSN-38 (0,034 g, 0,065 mmol) oppløses i vannfri THF (4 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,025 ml, 0,150 mmol) 15 deri. Reaksjonsblandingen reageres i 40 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddel (Heksan/AcOEt = 1/1) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/3), og det ønskede produktet oppnås derved (0,026 g, 0,064 mmol, 98 %) som et intenst gult faststoff.

20 1H NMR (THF-d8, 400 MHz) δ 9,23 (br s, 1H, OH), 8,06 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,88 (s, 1H, H-14), 7,41 (d, 1H, J = 2,8 Hz, H-9), 7,38 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,8 Hz, H-11), 6,08 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,67 (br s, 1H, OH), 5,50 (s, 2H, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,22 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 1,90 (q, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,42 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 0,97 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C 25 NMR (THF-d8, 100 MHz) δ 173,0, 172,1, 157,5, 149,6, 149,2, 146,1, 145,0, 142,6,

132,3, 130,1, 128,9, 127,6, 122,3, 104,9, 102,3, 72,3, 68,5, 55,8, 31,7, 22,7,

13,1, 7,3.

EKSEMPEL IX - 20-OTES Topotecan

Topotecan (0,100 g, 0,238 mmol) løses i vannfri dimetylformamid (5 ml), under 30 inert atmosfære and den resulterende suspensjonen tilsettes med imidazol (0,081 g, 1,19 mmol). Blandingen røres i 10' minutter, deretter dryppes trietylsilylklorid (TES-Cl), (0,160 ml, 0,952 mmol) deri, etterfulgt av tilsetting av 4-dimetylamino

341812

14

pyridin, (DMAP), (0,029 g 0,238 mmol). Etter 52 timer ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, og den fullstendige forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket ved TLC (CH2Cl2/MeOH = 10/1). Faststoffet blir deretter gjenoppløst i CHCl3og H2O og mettet NH4Cl, Den vandige fasen ekstraheres med CHCl3(2 X 15 5 ml). De organiske fasene kombineres og tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum, og det ønskede produktet oppnås derved (0,120 g, 0,224 mmol, 94 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,65 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H, Ar, H-7), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,80 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 7,58 (s, 1H, H-14), 5,67 (d, 10 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,20 (s, 2H, H-5), 4,71 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 150,8, 146,8,

144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4, 65,9, 51,1,

50,0, 43,1, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

15 EKSEMPEL X - 10-OTBDMS 20-OTES Topotecan

20-OTES Topotecan (0,120 g, 0,224 mmmol) oppløses i en CH2Cl2/THF = 1:1 vannfri blanding (8 ml) under inert atmosfære. Imidazol (0,076 g, 1,12 mmol) tilsettes etterfulgt av, etter 10’ minutter, tert-butyldimetylsilylklorid (TBDMS-Cl), (0,135 mg, 0,896 mmol), deretter av 4-dimetylaminopyridin (DMAP), (0,027 g 0,224 20 mmol). Etter 21 timer ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, og forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 1/1). Faststoffet gjenoppløses deretter i CHCl3og H2O og mettet NH4Cl, den vandige fasen ekstraheres med CHCl3(2 X 15 ml). De organiske fasene kombineres og tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum. Residuet renses ved flash-25 kromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,116 g, 0,179 mmol, 80 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H, Ar, H-7), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,81 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 7,59 (s, 1H, H-14), 5,64 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,19 (s, 2H, H-5), 4,71 (s, 2 H), 2,81 30 (s, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 1,04 (s, 9 H), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,7, 157,7, 155,1,

151,5, 150,0, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5,

75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

341812

15

EKSEMPEL XI - 10-OTBDMS 20-OTES Thio-Topotecan

10-OTBDMS 20-OTES Topotecan (0,116 g, 0,179 mmol) oppløses i vannfri xylen (6 ml) med omrøring, under inert atmosfære. Deretter tilsettes Lawesson’s reagensmiddel (LR), (0,065 g, 0,161 mmol) og reaksjonen varmes opp til 90°C. Reak-5 sjonsblandingen reageres i 23 timer ved 90°C, og forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 2/1). Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 5/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,047 g, 0,072 mmol, 40 %) som et intenst gult faststoff.

10 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,52 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,92 (q, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,04 (s, 9 H), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H), 13C 15 NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3,

132,1 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9,

32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

EKSEMPEL XII - 20-OTES Thio-Topotecan

10-OTBDMS 20-OTES Thio-Topotecan (0,047 g, 0,072 mmol) oppløses i vannfri THF 20 (4 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,014 ml, 0,086 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 4 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 2/1) overvåkes av TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 2/1 deretter 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,039 25 g, 0,071 mmol, 99 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 6,02 (br s, 1H, OH), 5,52 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 30 1,92 (q, 2H, J = 7,2 Hz, H-19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1

129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8,

7,2, 6,4.

341812

16

EKSEMPEL XIII - Thio-Topotecan (IDN 6180)

Thio-Topotecan 10-OH 20-OTES (0,039 g, 0,071 mmol) oppløses i vannfri THF (4 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,026 ml, 0,163 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 4 timer i 40 timer ved rom-5 temperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 1/2) blir overvåket ved TLC.. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/3), og det ønskede produktet oppnås derved (0,030 g, 0,069 mmol, 98 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-10 12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 6,02 (br s, 1H, OH), 5,52 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 3,84 (br s, 1H, OH), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,92 (q, 2H, J = 7,6, Hz H-19), 1,03 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 15 134,3, 132,1 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 72,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8.

EKSEMPEL XIV – Fremstilling av 20-OTES 10-hydroksyCamptotecin

10-HydroksyCamptotecin (0,100 g, 0,275 mmol) suspenderes i vannfri dimetylformamid (5 ml), under inert atmosfære og den resulterende suspensjonen tilsettes 20 med imidazol (0,225 g, 3,31 mmol). Blandingen røres i 10 minutter, og deretter dryppes trietylsilylklorid (TES-Cl), (0,460 ml, 2,75 mmol) deri, fulgt av tilsetting av 4-dimetylaminopyridin (DMAP) (0,068 g, 0,550 mmol). Etter 24 timer ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, og den fullstendige forsvinningen av reagensmiddelet (CH2Cl2/MeOH = 20/1) ble overvåket ved TLC. Faststoffet blir der-25 etter gjenoppløst i CH2Cl2og vasket med H2O og mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(2 X 10 ml). De organiske fasene vaskes og tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum, og det ønskede produktet oppnås derved (0,124 g, 0,259 mmol, 94 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3+ 5% CD3OD, 400 MHz) δ 8,10 (s, 1H, Ar, H-7), 8,05 (d, 1H, J = 30 9,2 Hz, Ar), 7,50 (s, 1H, H-14), 7,39 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,4 Hz, H-11), 7,11 (d, 1H, J = 2,2 Hz, H-9), 5,60 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,21 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,15 (s, 2H, H-5), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,76-0,68 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3+ 5 % CD3OD, 100 MHz) δ 172,2, 157,8, 156,7, 151,8,

341812

17

149,2, 146,1, 144,1, 130,9, 129,8, 129,0, 128,6, 123,2, 117,8, 108,8, 98,1, 75,4,

65,8, 50,0, 32,9, 7,7, 7,1, 6,3.

EKSEMPEL XV - 10-OTBDMS-20-OTES Camptotecin

10-Hydroksy-20-OTES-Camptotecin (0,105 g, 0.219 mmol) oppløses i en

5 CH2Cl2/THF = 1:1 vannfri blanding (4 ml) og under inert atmosfære. Imidazol (0,097 g, 1,42 mmol) tilsettes etterfulgt av, etter 10’ minutter, tert-butyldimetylsilylklorid (TBDMS-Cl), (0,164 mg, 1,10 mmol), deretter av 4-dimetylaminopyridin (DMAP) (0,040 g, 0,329 mmol). Etter 18 timer, ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum og den fullstendige forsviningen av reagensmiddelet (Cicloheksan/ 10 AcOEt = 1/3) ble overvåket ved TLC. Faststoffet blir deretter gjenoppløst i CH2Cl2og vaskes med H2O og mettet NH4Cl, den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(2 X 10 ml). De organiske fasene kombineres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum. Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Cicloheksan/ AcOEt = 1/3), og det ønskede produktet oppnås derved (0,117 g, 0,197 mmol, 90 15 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,22 (s, 1H, Ar, H-7), 8,13 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,51 (s, 1H, H-14), 7,39 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,8 Hz, H-11), 7,22 (d, 1H, J = 2,8 Hz, H-9), 5,66 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (s, 2H, H-5), 5,24 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 1,99-1,82 (m, 2H, H-19), 1,03 (s, 9 H), 1,00-0,92 (m, 12 H), 20 0,78-0,69 (m, 6 H), 0,29 (s, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,0, 157,7,

155,1, 151,5, 150,6, 146,1, 145,1, 131,4, 129,4, 129,3, 128,7, 126,7, 118,3,

114,5, 97,7, 75,3, 66,0, 49,9, 33,1, 25,6, 18,3, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

EKSEMPEL XVI - 10-OTBDMS-20-OTES Thio-Camptotecin

10-OTBDMS 20-OTES Camptotecin (0,350 g, 0,589 mmol) oppløses i vannfri xylen 25 (10 ml) med omrøring under inert atmosfære. Deretter tilsettes Lawesson’s reagensmiddel (LR), (0,590 g, 1,47 mmol) og reaksjonen varmes opp til 90°C. Reaksjonsblandingen reageres i 18 timer ved 95°C, og forsvinningen av reagensmiddelet (Cicloheksan/AcOEt = 1/1) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Cicloheksan/AcOEt 30 = 4/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,323 g, 0,530 mmol, 90 %) som et intenst gult faststoff.

341812

18

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,28 (s, 1H, Ar, H-7), 8,16 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,97 (s, 1H, H-14), 7,40 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,8 Hz, H-11), 7,26 (d, 1H, J = 2,8 Hz, H-9), 6,15 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,58 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,53 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 1,91 (q, 2H, J = 5 7,4 Hz, H-19), 1,04 (s, 9 H), 1,02-0,92 (m, 12 H), 0,82-0,72 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,1, 171,5, 155,5, 149,8, 148,6, 147,3, 145,3,

131,5, 130,1, 129,8, 129,1, 128,3, 127,0, 114,5, 104,0, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5,

25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

EKSEMPEL XVII – Fremstilling av 10-hydroksy-Thio-Camptotecin (IDN 10 6181)

Thio-Camptotecin 10-OTBDMS 20-OTES (0,320 g, 0,524 mmol) oppløses i vannfri THF (8 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,670 ml, 4,19 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 20 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddel (CH2Cl2/MeOH = 25/1) overvåkes ved 15 TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, CH2Cl2/MeOH = 25/1 deretter 20/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,189 g, 0,498 mmol, 95 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (THF-d8, 400 MHz) δ 9,20 (br s, 1H, OH), 8,37 (s, 1H, Ar, H-7), 8,05 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,89 (s, 1H, H-14), 7,39 (dd, 1H, J1= 9,2 Hz J2= 2,8 20 Hz, H-11), 7,22 (d, 1H, J = 2,8 Hz, H-9), 6,07 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,70 (br s, 1H, OH), 5,47 (s, 2H, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 1,89 (q, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 0,97 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (THF-d8, 100 MHz) δ 173,0,

172,1, 157,4, 149,7, 149,0, 146,1, 144,5, 131,3, 130,5, 130,2, 129,7, 128,6,

123,0, 108,9, 102,3, 72,3, 68,5, 56,5, 31,7, 7,3.

25 EKSEMPEL XVIII - Thio-topotecan hydroklorid (IDN 6180)

10-hydroksy-tio-Camptotecin (0,150 g, 0,421 mmol) oppløses i en blanding av vannfri CH2Cl2(3,5 ml) og n-propanol (1,8 ml) med omrøring under inert atmosfære. Deretter dryppes bis(dimetylamino)metan (0,092 g, 0,905 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres ved 4 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av rea-30 gensmiddelet (CH2Cl2/MeOH = 25/1) overvåkes ved TLC. Etter omtrent 5 timer tilsettes en blanding av 0,125 g av konsentrert HCl i 1 ml av n-propanol og blandingen reageres for enda 16 timer. Produktet filtreres og vaskes gjentatte ganger

341812

19

med CH2Cl2og Et2O, og det ønskede produktet oppnås derved (0,168 g, 0,370 mmol, 88 %) som et rød-oransje faststoff.

1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,51 (br s, 1H, OH), 9,78 (br s, 1H, OH), 9,06 (s, 1H, Ar, H-7), 8,21 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar), 7,76 (s, 1H, H-14), 7,72 (d, 1H, J = 8,8 5 Hz, Ar), 5,91 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,50 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,49 (s, 2H, H-5), 4,73 (s, 1H, CH2NMe2), 4,72 (s, 1H, CH2NMe2), 2,83 (s, 3 H, Me), 2,82 (s, 3 H, Me), 1,87 (q, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 0,85 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ 172,7, 172,1, 158,8, 149,6, 148,8, 147,0, 144,2, 133,7,

130,6, 130,6, 129,9, 127,5, 123,2, 109,1, 103,6, 72,8, 68,6, 57,4, 51,1, 43,1,

10 31,2, 8,3.

EKSEMPEL XIX - 5-F-20-OTES-Camptotecin

Camptotecin 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, avkjøles deretter til en temperatur på -78°C og en 1,0 M LiHMDS løsning i THF (0,260 ml, 0,260 mmol) dryppes deri. Etter 20' tilsettes 15 NFSI (0,089 g, 0,281 mmol) i vannfri THF (2 ml).. Etter 2 timer ved -78°C, blir temperaturen satt til å stige til 25°C og forsvinningen av reagensmiddelet blir overvåket ved TLC. (Heksan/AcOEt = 1/2). Dannelsen av de to diastereomerene observeres. Etter 3 timer ved romtemperatur stanset reaksjonen ved tilsetting av mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(3 x 15 ml) og de organiske fa-20 sene kombineres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum. Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 3/1, deretter 2/1 og til slutt 1/1), og oppnår derved en blanding av de to isomerene (0,101 g, 0,210 mmol, 97 %,) (1:1 isomerforhold) som et blekt gult faststoff. De to isomerene separeres ved ytterligere kromatografi. For elusjon:

25 1. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,52 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,47 (d, 1H, 1JHF= 61,2 Hz, H-5), 7,45 (s, 1H, H-14), 5,62 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,02-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,4, 157,5, 30 152,3, 151,1, 150,2 (d, J = 1,5 Hz), 150,3 (d, J = 1,5 Hz), 143,6 (d, J = 5,3 Hz), 133,7, 131,7, 130,2, 128,9, 128,4, 127,9 (d, J = 15,0 Hz), 126,3 (d, J = 15,0 Hz), 121,8, 98,9, 93,8 (d, 1JCF= 213,2 Hz, C-5), 75,1, 65,7, 33,1, 7,8, 7,2, 6,4.

341812

20

2. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,51 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,51 (d, 1H, 1JHF= 60,8 Hz, H-5), 7,42 (s, 1H, H-14), 5,62 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,20 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 2,02-1,82 (m, 2H, H-19), 1,04-5 0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,2, 157,8, 152,5, 151,2, 150,3, 143,7, 133,7 (d, J = 2,4 Hz), 131,7, 130,2, 128,9, 128,3, 127,9 (d, J = 2,3 Hz), 126,3 (d, J = 16,7 Hz), 121,8 (d, J = 1,5 Hz), 99,0, 93,8 (d, 1JCF= 214,8 Hz, C-5), 75,0, 65,8, 33,3, 7,9, 7,1, 6,4.

EKSEMPEL XX – Fremstilling av 5-F-20-OH-Camptotecin 1. diastereomer

10 Den første diastereomeren av 5-F-20-OTES-Camptotecin (0,025 g, 0,052 mmol) oppløses i vannfri THF (5 ml) med omrøring under inert atmosfære. Deretter dryppes Et3N●3HF (0,060 ml, 0,368 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 28 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 1/2) ble overvåket av TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet 15 kromatograferes (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,019 g, 0,051 mmol, 98 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,52 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,59 (s, 1H, H-14), 7,46 (d, 1H, 1JHF= 61,2 Hz, H-5), 5,69 (d, 1H, J = 16,8 Hz, 20 H-17), 5,26 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,87 (br s, 1H, OH), 2,01-1,81 (m, 2H, H-19), 1,05 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,5, 157,6,

151,1, 151,0, 150,2, 144,1, 133,9, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4,

121,7, 98,8, 93,8 (d, 1JCF= 214,0 Hz, C-5), 72,5, 66,0, 31,5, 7,8.

EKSEMPEL XXI – Fremstilling av 5-F-20-OH-Camptotecin 2. diastereomer

25 Den andre diastereomeren av 5-F-20-OTES-Camptotecin (0,025 g, 0,052 mmol) oppløses i vannfri THF (5 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,060 ml, 0,368 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 28 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 1/2) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet 30 kromatograferes (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,018 g, 0,050 mmol, 97 %) som et blekt gult faststoff.

341812

21

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,52 (s, 1H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,88 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,56 (s, 1H, H-14), 7,51 (d, 1H, 1JHF= 60,4 Hz, H-5), 5,69 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,25 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,87 (br s, 1H, OH), 1,98-1,78 (m, 2H, H-5 19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,3, 157,7,

151,2, 151,2, 150,2, 144,2, 133,8, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4,

121,6, 98,9, 93,7 (d, 1JCF= 214,0 Hz, C-5), 72,5, 66,1, 31,6, 7,8.

EKSEMPEL XXII – Fremstilling av 5-N3-20-OTES-Camptotecin

Camptotecin 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med 10 omrøring under inert atmosfære, avkjøles deretter til en temperatur på -78°C og en 1,0 M LiHMDS løsning i THF (0,260 ml, 0,260 mmol) dryppes deri. Etter 20 min tilsettes tosylazid (TsN3) (0,055 g, 0,281 mmol) i vannfri THF (2 ml). Etter 2 timer ved -78°C, tillates temperaturen å stige til 25°C og forsvinningen av reagensmiddelet overvåkes av TLC (Heksan/AcOEt = 2/1). Dannelse av de to diastereomerene 15 observeres. Etter 2 timer og 30 min ved romtemperatur stanses reaksjonen ve tilsetting av mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(3 x 15 ml) og de organiske fasene kombineres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum. Residuet som består av de to diastereomerene, renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 3/1, deretter 2/1 og til slutt 1/1), og oppnår der-20 ved (0,106 g, 0,210 mmol, 97 %) av en blanding av de to isomerer (forhold av isomerer 1:1) som et blekt gult faststoff. De to isomerene separeres ved ytterligere kromatografi. For elusjon:

1. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,45 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1H, J 25 = 8,4 Hz, Ar), 7,49 (s, 1H, H-14), 6,97 (s, 1H, H-5), 5,65 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,26 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,01-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,94 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,6, 158,3, 152,2, 150,8,

150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,4,

75,2, 65,7, 33,1, 7,9, 7,2, 6,4.

30 2. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,45 (s, 1H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,46 (s, 1H, H-14), 6,99 (s, 1H, H-5), 5,66 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,02-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,94 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,4, 158,4, 152,3, 150,9,

341812

22

150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,3,

75,1, 65,8, 33,3, 7,9, 7,2, 6,4.

EKSEMPEL XXIII – Fremstilling av 5-N3-20-OH-Camptotecin 1. diastereomer

5 Diastereomer 1 av 5-N3-20-OTES-Camptotecin (0,070 g, 0,139 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,170 ml, 1,016 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 26 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensen (Heksan/AcOEt =1/1) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved 10 flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,053 g, 0,136 mmol, 98 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,93 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,85 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,67 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,63 (s, 1H, H-14), 6,97 (s, 1H, H-5), 5,70 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,29 15 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,99 (br s, 1H, OH), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,6, 158,3, 150,8, 150,7,

149,8, 144,4, 133,1, 131,5, 129,9, 128,6, 128,3, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,4,

72,7, 66,0, 31,5, 7,8.

EKSEMPEL XXIV – Fremstilling av 5-N3-Camptotecin 2. diastereomer

20 Diastereomer 2 av 5-N3-20-OTES-Camptotecin (0,055 g, 0,109 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,135 ml, 0,820 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 26 timer ved romtemperatur og forsvinningen av utgangsreagensmiddelet ble overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 1/1). Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet 25 renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,042 g, 0,107 mmol, 98 %) som et blekt gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,45 (s, 1H, Ar, H-7), 8,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,85 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,60 (s, 1H, H-14), 7,00 (s, 1H, H-5), 5,74 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,28 30 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,86 (br s, 1H, OH), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,4, 158,4, 150,9, 150,7,

341812

23

149,8, 144,5, 133,0, 131,5, 129,9, 128,6, 128,4, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,3,

72,6, 66,1, 31,6, 7,8.

EKSEMPEL XXV – Fremstilling av 5-NH2-Camptotecin

Diastereomer 2 av 5-N3-20-OH-Camptotecin (0,050 g, 0,129 mmol) oppløses i en 5 blanding av vannfri THF (1,5 ml) og vannfri MeOH (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter tilsatt med Pd/C (14 mg ~ 10%) og to sykler in vacuo/H2(H2ballongtrykk) utføres. Reaksjonsblandingen reageres i 3 timer ved romtemperatur og forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket ved TLC (Heksan/AcOEt = 1/3) deretter filtrert gjennom celitt og vasket med CH2Cl2(2 x 15 ml). Løsemidlet for-10 dampes av under vakuum. 1H NMR spektroskopi av reaksjonens råstoff avslører nærværet av det ønskede produktet som en 1:1 blanding av to epimerforbindelser ved C5-posisjonen. Flashkromatografi (SiO2, CH2Cl2/MeOH = 35/1 deretter 25/1) tillater gjenvinning av blandingen av de to diastereomerene (0,046 g, 0,126 mmol, 98 %).

15 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,48 (s, 1H, Ar, H-7), 8,22-8,17 (m, 1H, Ar), 7,95-7,90 (m, 1H, Ar), 7,85-7,78 (m, 1H, Ar), 7,68-7,60 (m, 1H, Ar), 7,58 (s, 0,5 H, H-14), 7,54 (s, 0,5 H, H-14) 6,50 (s, 0,5 H, H-5), 6,47 (s, 0,5 H, H-5), 5,74-5,64 (m, 1H, H-17), 5,28-5,22 (m, 1H, H-17), 4,00-2,40 (br s, 3 H, OH NH2), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,07-1,01 (m, 3 H, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,8 (2 C), 158,5 20 (2 C), 151,2 (2 C), 150,4 (2 C), 149,7 (2 C), 144,5 (2 C), 132,7 (2 C), 131,0 (2 C),

129,8 (2 C), 128,5 (2 C), 128,3 (2 C), 128,0 (2 C), 127,8 (2 C), 120,2 (2 C), 113,8

(2 C), 97,7 (2 C), 72,7 (2 C), 66,3, 66,0, 31,5 (2 C), 7,8, 7,8.

EKSEMPEL XXVI - 5-di-t-Butoksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin

Camptotecin 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med 25 omrøring under inert atmosfære, avkjøles deretter til en temperatur på -78°C og en 1,0 M LiHMDS løsning i THF (0,281 ml, 0,281 mmol) dryppes deri. Etter 20’ tilsettes, di-tert-butylazo dikarboksylat (DTBAC) (0,075 g, 0,324 mmol) i vannfri THF (2 ml). Etter 4 timer ved -78°C, overvåkes forsvinningen av reagensmiddelet med TLC (Heksan/AcOEt = 3/1). Dannelse av de to diastereomerene observeres. Reaksjonen 30 stanses ved tilsetting av mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(3 x 15 ml) og de organiske fasene kombineres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres under vakuum. Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/

341812

24

AcOEt = 3/1), og oppnår derved en blanding av de to isomerene (0,145 g, 0,210 mmol, 97 %). De to isomerene separeres ved ytterligere kromatografi. For elusjon:

1. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,80 (br s, 1H, Ar), 8,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,01 (br d, 1H, Ar), 7,90-7,71 (m, 2H, Ar), 7,70-7,45 (m, 2H, Ar H-5 14), 6,52 (br s, 1H, H-5), 5,61 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,23 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,03-1,81 (m, 2H, H-19), 1,79-1,08 (br s, 18 H), 1,06-0,92 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,7, 157,8, 155,5, 155,5,

152,0, 152,0, 151,2, 149,4, 145,0, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7, 128,4, 127,9,

119,9, 98,2, 82,7, 81,5, 79,7, 75,2, 65,7, 33,2, 28,3, 27,6, 7,7, 7,2, 6,4.

10 2. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,79 (br s,1 H, Ar), 8,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,01 (br d, 1H, Ar), 7,85-7,76 (m, 2H, Ar), 7,65 (br t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,52 (s, 1H, H-14), 6,54 (br s, 1H, H-5), 5,61 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,03-1,82 (m, 2H, H-19), 1,76-1,08 (br s, 18 H), 1,04-0,92 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,5, 157,9, 15 155,5, 155,5, 152,3, 152,0, 151,2, 149,4, 145,1, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7,

128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,9, 81,5, 79,6, 75,2, 65,8, 33,3, 28,3, 27,4, 7,8, 7,2,

6,4.

EKSEMPEL XXVII – Fremstilling av 5-di-t-butoksykarbonylhydrazino-20-OH-Camptotecin 1. diastereomer

20 5-di-t-Butoksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin (0,050 g, 0,072 mmol) første diastereomer oppløses i vannfri THF (4 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,088 ml, 0,542 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 35 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddel (Heksan/AcOEt = 3/2) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under va-25 kuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 3/2), og oppnår derved den ønskede forbindelsen (0,041 g, 0,071 mmol, 98 %) som et blekt gult faststoff.

Produktet renses ytterligere ved krystallisering fra CH2Cl2/Pentan = 1/50.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,77 (br s, 1H, Ar), 8,16 (br d, 1H, J = 8,0 Hz, Ar), 30 7,97 (br s, 1H, Ar), 7,86-7,50 (m, 4 H, Ar), 6,51 (br s, 1H, H-5), 5,66 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,24 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,86 (br s, 1H, OH), 2,00-1,80 (m, 2H, H-19), 1,79-1,13 (br s, 18 H), 1,03 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR

341812

25

(CDCl3, 100 MHz) δ 173,7, 157,9, 155,5, 155,5, 152,1, 151,3, 150,7, 149,6, 145,7,

132,3, 130,7, 129,9, 128,7, 127,9, 127,6, 120,0, 97,9, 82,8, 81,6, 79,7, 72,7,

66,1, 31,8, 28,3, 27,7, 7,7.

EKSEMPEL XXVIII- Fremstilling av 5-di-t-butoksykarbonylhydrazino-20-5 OH-Camptotecin 2. diastereomer

5-di-t-Butoksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin (0,050 g, 0,072 mmol) 2. diastereomer oppløses i vannfri THF (4,5 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,088 ml, 0,542 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 35 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Hek-10 san/AcOEt = 3/2) overvåkes av TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 3/2), og oppnår derved den ønskede forbindelsen (0,040 g, 0,069 mmol, 96 %) som et blekt gult faststoff.

Produktet renses ytterligere ved krystallisering fra CH2Cl2/Pentan = 1/50.

15 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,79 (br s, 1H, Ar), 8,22 (br d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,99 (br s, 1H, Ar), 7,88-7,50 (m, 4 H, Ar), 6,53 (br s, 1H, H-5), 5,65 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,26 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,80 (br s, 1H, OH), 2,00-1,80 (m, 2H, H-19), 1,79-1,13 (br s, 18 H), 1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,6, 157,9, 155,4, 155,4, 152,1, 151,3, 150,8, 149,5, 145,6, 20 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,9, 127,8, 119,8, 98,0, 83,0, 81,5, 79,7, 72,7, 66,3, 31,8, 28,3, 27,7, 7,8.

EKSEMPEL XXIX – Fremstilling av 5-dibenzyloksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin

Camptotecin 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med 25 omrøring under inert atmosfære, og avkjøles deretter til en temperatur på -78°C og en 1,0 M LiHMDS løsning i THF (0,281 ml, 0,281 mmol) dryppes deri. Etter 20’ tilsettes dibenzyl azodikarboksylat (0,097 g, 0,324 mmol) i vannfri THF (2 ml). Etter 3 timer ved -78°C, tillates temperaturen å stige til 25°C og forsvinningen av reagensmiddelet overvåkes ved TLC (Heksan/AcOEt = 3/1). Dannelsen av de to diaste-30 reomerene observeres. Etter 90 min ved romtemperatur stanses reaksjonen ved tilsetting av mettet NH4Cl. Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(3 x 15 ml) og de organiske fasene kombineres, tørkes over Na2SO4, filtreres og konsentreres

341812

26

under vakuum. Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 4/1 deretter 7/2), og derved oppnås et blekt gult faststoff (0,161 g, 0,212 mmol, 98 %). De to isomerene separeres ved ytterligere kromatografi. For elusjon:

1. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,70 (br s, 1H, Ar), 8,39 (br s 1 H, 5 Ar), 8,22 (br d, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,95 (br d, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,83 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,65 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,64-7,00 (m, 11 H, Ar H-14), 6,49 (br s, 1H, H-5), 5,57 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,47-4,44 (m, 5 H), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,02-0,89 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,6, 158,0, 156,3, 156,3, 153,0, 152,2, 151,0, 149,6, 144,8, 135,3, 10 132,1, 130,6, 130,0, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,4, 79,5, 75,2, 68,4, 67,9, 65,6, 33,0, 7,9, 7,2, 6,4.

2. diastereomer: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,85 (br s, 1H, Ar), 8,58 (br s 1 H, Ar), 8,20 (br s, 1H, Ar), 7,93 (br s, Ar), 7,81 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,63 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,56-6,90 (m, 11 H, Ar H-14), 6,52 (br s, 1H, H-5), 5,55 (d, 15 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,44-4,71 (m, 5 H), 1,98-1,80 (m, 2H, H-19), 1,05-0,90 (m, 12 H), 0,81-0,70 (m, 6 H), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,5, 157,9, 156,4,

156,4, 152,9, 152,4, 150,9, 149,4, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6, 129,9, 128,6-127,8

(11 C), 119,9, 98,5, 79,3, 75,2, 68,4, 67,8, 65,6, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

EKSEMPEL XXX – Fremstilling av 5-dibenzyloksykarbonylhydrazino-20-OH-20 Camptotecin 1. diastereomer

5-Dibenzyloksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin 1. diastereomer (0,140 g, 0,184 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,225 ml, 1,380 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 52 timer ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Hek-25 san/AcOEt = 1/3) ble overvåket ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1 deretter 2/3), og derved oppnås (0,113 g, 0,175 mmol, 95 %) som et blekt gult faststoff. Produktet renses ytterligere ved krystallisering fra CH2Cl2/Pentan = 1/50.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,67 (br s, 1H, Ar), 8,39 (br s 1 H, Ar), 8,12 (br d, 1H, 30 J = 7,6 Hz, Ar), 7,95 (br s, 1H, Ar), 7,74 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,65-6,66 (m, 12H, Ar H-14), 6,48 (br s, 1H, H-5), 5,55 (d, 1H, J = 16,0 Hz, H-17), 5,42-4,44 (m, 5 H), 3,86 (br s, 1H, OH), 1,92-1,72 (m, 2H, H-19), 0,95 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,5, 158,0, 156,2, 156,0, 153,0, 150,9, 150,9,

341812

27

149,5, 145,3, 135,4, 132,2, 130,7, 129,8, 128,7-127,8 (11 C), 119,9, 98,2, 79,6,

72,7, 68,5, 68,0, 65,9, 31,6, 7,8.

EKSEMPEL XXXI – Fremstilling av 5-dibenzyloksykarbonylhydrazino-20-OH-Camptotecin 2. diastereomer

5 5-Dibenzyloksykarbonylhydrazino-20-OTES-Camptotecin 2.diastereomer (0,140 g, 0,184 mmol) oppløses i vannfri THF (6 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,150 ml, 0,921 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 55 h ved romtemperatur, og forsvinningen av reagensmiddelet (Heksan/AcOEt = 3/2) overvåkes ved TLC. Løsemidlet fordampes av under vakuum og 10 residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), derved oppnås den ønskede forbindelsen (0,113 g, 0,175 mmol, 95 %) som et blekt gult faststoff. Produktet renses ytterligere ved krystallisering fra CH2Cl2/Pentan = 1/50.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8,71 (br s, 1H, Ar), 8,34 (br s 1 H, Ar), 8,18 (br s, 1H, Ar), 7,94 (br s, 1H, Ar), 7,79 (br t, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,70-6,70 (m, 12H, Ar H-15 14), 6,52 (br s, 1H, H-5), 5,53 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,44-4,48 (m, 5 H), 3,87 (br s, 1H, OH), 1,90-1,70 (m, 2H, H-19), 0,99 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,4, 158,0, 156,3, 156,1, 153,0, 151,0, 150,9, 149,6,

145,3, 135,5, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,8 (11 C), 119,8, 98,4, 79,5, 72,7,

68,5, 67,8, 66,0, 31,6, 7,7.

20 EKSEMPEL XXXII – Fremstilling av 20-OTES-Gimatecan

Gimatecan (0,040 g, 0,089 mmol) oppløses i vannfri dimetylformamid (4 ml), under inert atmosfære, og tilsettes med imidazol (0,030 g, 0,445 mmol). Blandingen røres i 10' minutter, deretter tilsettes trietylsilylklorid (TES-CI) (0,060 ml, 0,358 mmol deri, etterfulgt av 4-dimetylaminopyridin (DMAP) (0,01 1 g 0,089 mmol). 25 Etter 75 timer ble reaksjonsblandingen fordampet under vakuum, den fullstendige forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket av TLC (Heksan/AcOEt = 1/1). Faststoffet gjenoppløses deretter i CH2Cl2og H2O e mettet NH4Cl, Den vandige fasen ekstraheres med CH2Cl2(3 X 10 ml). Residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 1/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,048 g, 30 0,085 mmol, 95 %) som et gult faststoff. (blanding E/Z = 70130).

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,02 (s, 1H, CH=N E) 8,29 (d, 1H, J = 8,42 Hz, Ar, H-12E H-12Z), 8,23 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-9E), 8,00 (s, 1H, CH=N Z), 7,99 (d, 1H, J

341812

28

= 7,6 Hz, H-9Z), 7,83 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-11E H-11Z), 7,68 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-1OE H-10Z), 7,57 (s, 1H, H-14E H-14Z, 5,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17E H-17Z), 5,43 (s, 2H, H-5E), 5,26 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17E), 5,25 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17Z), 5,20 (s, 2H, H-5Z), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19E+ H-19Z), 1,50 (s, 9 5 H, otBuE), 1,35 (s, 9 H, OtBUZ), 1,02-0,94 (m, 12H, E Z), 0,80-0,70 (m, 6H, E Z), 13NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 171,9 (E Z, C-21), 157,5 (E Z, C-16a), 152,5

(E), 152,3 (Z), 151,3 (E Z), 149,7 (E), 149,0 (Z), 145,7 (E Z), 142,2 (CH=N

E), 139,4 (CH=N Z), 132,9 (E), 132,1 (Z), 130,9 (E, CH, Ar), 130,6 (Z, CH, Ar), 130,3 (Z, CH; Ar), 130,1 (E, CH, Ar), 128,1 (E Z, CH, Ar), 125,6 (Z), 125,4 (E), 10 124,7 (Z, CH, Ar), 122,8 (E, CH, Ar), 119,1 (Z), 118,9 (E), 98,3 (Z, C-14), 98,1 (E, C- l4), 81,4 (E, OC(CH3)3), 81,2 (Z, OC(CH3)3), 75,3 (E Z, C-20), 66,0 (E Z, C-

17), 52,7 (E, C-5), 51,2 (Z, C-5), 33,3 (E, C-19), 33,2 (Z, C- 19), 27,6 (OC(CH3)3

E), 27,5 (OC(CH3)3Z), 7,9 (E+Z C-18), 7,2 (E+Z), 6,4 (E+Z).

EKSEMPEL XXXIII - Preparation of of 20-OTES-Thio-Gimatecan

15 Gimatecan 20-OTES (0,080 g, 0,143 mmol) oppløses i vannfri xylen (6 ml) under røring og inert atmosfære. Deretter tilsettes Lawesson's reagensmiddel (LR), (0,087 g, 0,214 mmol) og reaksjonen oppvarmes til 90°C. Reaksjonsblandingen reageres i 18 timer 90°C, og forsvinningen av reagensmiddelet ble overvåket av TLC (Heksan/AcOEt = 3/1) Løsemidlet fordampes under vakuum og residuet renses 20 ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 4/1), og det ønskede produktet oppnås derved (0,060 g, 0,102 mmol, 71 %) som et intenst gult faststoff.

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,06 (s, l H, CH=N E) 8,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar, H-12E), 8,27 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-9E), 8,02 (s,l H, H-14 E), 7,87 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-11E), 7,73 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-10E), 7,57 (s, 1H, H-14E H-14Z), 6,18 (d, 1H, 25 J = 17,2 Hz, H-17E), 5,73 (s, 2H, H-5E), 5,35 (d, 1 H, J = 17,2 Hz, H-17E), 1,93 (q, 2H, J = 7,2 Hz, H-19E), 1,55 (s, 9 H, OtBUE), 1,06-0,92 (m, 12H, E), 0,82-0,72 (m, 6H, E), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172,4, 171,5, 151,8, 149,8, 148,0, 146,9,

141,9, 132,3, 131,0, 130,7, 130,3, 128,4, 125,6, 125,1, 122,9, 104,3, 81,8, 75,0,

68,9, 59,2, 33,6, 27,6, 7,8, 7,2, 6,5.

30 EKSEMPEL XXXIV – Fremstilling av Thio-Gimatecan

Thio-Gimatecan 20-OTES (0,060 g, 0,104 mmol) oppløses i vannfri THF (8 ml) med omrøring under inert atmosfære, deretter dryppes Et3N●3HF (0,127 ml, 0,780 mmol) deri. Reaksjonsblandingen reageres i 18 timer ved romtemperatur og for

341812

29

svinningen av reagensmiddelet ble overvåket av TLC (CH2CL2/MeOH = 25/1) Løsemidlet fordampes under vakuum og residuet renses ved flashkromatografi (SiO2, Heksan/AcOEt = 211), og det ønskede produktet oppnås derved (0,048 g, 0,102 mmol, 95 %) som et intenst gult faststoff.

5 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,02 (s, 1H, CH=N E) 8,28 (d, 1H, J = 8,42 Hz, Ar, H-12E H-12Z), 8,23 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-9E), 8,09 (brs, 1H, H-14E H-14Z), 8,08 (s,1 H, CH=NZ), 8,04 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-9Z), 7,85 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-11E H-11Z), 7,70 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-1OE H-1OZ), 6,26 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17E), 6,24 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17Z), 5,67 (s, 2H, H-5E), 5,51 (s, 2H, H-5Z), 10 5,37 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17E H-17Z), 3,87 (br s, 1H, OH), 1,89 (q, 2H, H-19E H-19Z), 1,55 (s, 9H, 0tBuZ), 1,42 (s, 9H, OtBu Z), 1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, H-18 Z), 1,02 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, H-18 E), 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173,5, 172,5,

151,7, 149,7, 148,4, 145,2, 141,9 (CH=N E), 139,0 (CH=N Z), 132,3, 130,8,

130,6, 130,5, 128,5, 125,5, 125,0, 122,9, 104,0, 81,8, 72,3, 69,3, 59,2, 32,1,

15 27,6, 7,7.

EKSEMPEL XXXV - Cellevekstinhiberingsundersøkelse

H460 celler fra menneskelig stor-celle lungetumor ble dyrket i RPMI-1640 medium inneholdende 10 % føtalt kalveserum. Cellesensitivitet ble bestemt ved cellevekstinhiberingsassay etter å ha vært utsatt for legemiddel i1 eller 72 timer. Cellene i 20 logaritmisk vekst ble oppsamlet og sådd i 6-brønnsplater. Tjuefire timer etter såing ble cellene utsatt for legemidlet og telt med en Coulter-teller IC50s. IC50er definert som den konsentrasjonen som inhiberes ved 50 % cellevekst sammenlignet med ubehandlede kontrolldyrkninger.

EKSEMPEL XXXVI - Topoisomerase-I – avhengig DNA-rupturundersøkelse

25 DNA-rupturer ble bestemt ved å anvende en751-bp BamHI-EcoRI DNA SV40 renset gel (Beretta G.L., Binaschi M., Zagni A.N.D., Capuani L., Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous siteselective DNA-binding protein domain. Cancer Res. 1999; 59:3689-97). DNA-fragmenter ble kun merket ved 3’. DNA-rupturreaksjonen (20,000 cpm/prøve) ble 30 utført i 20 ml 10 mM Tris-HCL (pH 7,6), 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 15 μg/ml BSA, 0,1 mM tiotreitol, og det menneskelige rekombinante enzymet (full lengde top1) i 30 min ved 37°C. Reaksjonene ble blokkert ved å anvende 0,5 % SDS og 0,3 mg/ml K proteinase i 45 min. ved 42°C. DNA-skademotstand ble testet ved ulike

341812

30

tidspunkter ved å tilsette 0,6 M NaCl etter 30 min. inkubasjon med 10 μM av legemidlet. Etter presipitering ble DNA resuspendert i denatureringsbuffer (80% formamid, 10 mM NaOH, 0,01 M EDTA og 1 mg/ml farge) før såing i denatureringsgel (7% polyakrylamid i TBE buffer). Alle DNA rupturnivåer ble målt ved hjelp av-5 PhosphoImager model 425 (Molecular Dynamics) (Dallavalle S., Ferrari A., Biasotti B., et al Novel 7-oksyiminometyl Camptotecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J. Med. Chem 2001; 44:3264-74).

Motstand mot DNA-skade (%)

Forbindelser Tid (min)

0 1 5 10

Topotecan 100 65 20 10

Camptotecin 100 58 23 20

SN38 100 60 33 28

IDN 6070 100 33 10 10

IDN 6181 100 88 50 22

IDN 6156 100 100 80 60

IDN 6092 100 35 18 15

10

Claims

341812 31 P a t e n t k r a v

1. Forbindelser av generell formel I:

R2 R1 R

R3 S

N

O

OHO

(I)

hvori:

5 R er F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -COOR', -CONR'R'', -NHR''', -NR'R'' hvor R', R'' og R''' kan være H, alkyl, aryl, arylalkyl, acyl, alkoksykarbonyl, aryloksykarbonyl;

R1 er alkyl, aminoalkyl, hydroksyalkyl, nitril, alkoksymino, aryloksymino, silylalkyl;

R2 er hydrogen, hydroksyl, alkoksy, aminoalkyl;

10 R3 er hydrogen, eventuelt beskyttet hydroksyl, alkoksy, aminoalkyl,

hvori alkylgruppene, acyl, alkoksy, aminoalkyl eller alkoksymino kan inneholde 1 til 8, fortrinnsvis 1 til 4 karbonatomer i en rett eller forgrenet kjede, og gruppene aryl og aryloksy kan inneholde 5 til 10 karbonatomer;

de farmasøytisk akseptable saltene, isomerene, enantiomerene, diastereomerene 15 derav og korresponderende blandinger.

2. Forbindelse av formel (I) som krevd i krav 1, som er valgt fra gruppen bestående av:

a) tio-Camptotecin;

b) tio-homoCamptotecin;

20 c) tioSN38;

d) tio-topotecan;

e) tioirinotecan;

f) tiogimatecan.

341812

32

3. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsene av formel (I) ifølge krav 1 eller 2, i all vesentlighet omfattende trinnene vist i skjema I, hvori:

a) beskyttelse av hydroksygrunnsubstansgrupper;

b) omdanning av pyridonringen til tiopyridonring;

5 c) fjerningen av de beskyttende gruppene;

Skjema I

R2 R1 R R2 R1 R

R3 O R3 O

N N

a)b) N N O O

HOOO O PG

R2 R1 R R2 R1 R

R3 S R3 S

N N

N c)

N O O

O O H O O PG

hvori R, R1, R2 og R3 har betydningene beskrevet ovenfor og PG er en OH-beskyttende gruppe.

10

4. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsene av formel (I) ifølge krav 1 eller 2, i all vesentlighet omfattende trinnene vist i skjema II, hvori:

a) beskyttelse av grunnsubstanshydroksygruppene;

b) derivatisering ved 5 gjennom dannelse av et karbanion og reaksjon med et elektrofilt reagensmiddel;

15 c) omdannelse av 16a karbonylet til tiokarbonyl;

d) avbeskyttelse av hydroksygruppene;

hvorved trinn b) og c) kan reverseres:

R2 R1 R2 R1

R3 O R3 O

N N

a)b)

N N

O O

HOOO O PG

R2 R1

R

R3 R2 R1

O R

R3

N c) Sd)

N N

N O O O O PG O O PG

R2 R1

R

R3 S

N N O

H O O

Skjema II

hvori R, R1, R2 og R3 har betydningene beskrevet ovenfor og PG er en OH-5 beskyttende gruppe.

5. Farmasøytisk sammensetning inneholdende en forbindelse av formel (I) ifølge krav 1 eller 2 sammen med farmasøytisk akseptable bærere og eksipienter.

6. Farmasøytisk sammensetning som krevd i krav 5, som i en form er egnet for oral eller parenteral administrasjon.

34

7. Anvendelse av en forbindelse som krevd i krav 1-2 eller av en sammensetning som krevd i krav 5-6 for fremstillingen av et legemiddel for behandling av tumorer.

8. Anvendelse som krevd i krav 7, hvori nevnte legemiddel anvendes for be-5 handlingen av faste tumorer og leukemier, særlig tumorer i lunge, bryst, mage, lever, prostata, mykt vev-sarkomer, spiserør, bukspyttkjertel, hode og hals, glioblastoma, kroniske og akutte myelocyttiske leukemier.