BRPI0714553A2

BRPI0714553A2 - compostos derivados de camptotecina, processo para a preparaÇço dos mesmos, composiÇço farmacÊutica, bem como o uso dos referidos compostos

Info

Publication number: BRPI0714553A2
Application number: BRPI0714553-5A
Authority: BR
Inventors: Gabriele Fontana; Ezio Bombardelli; Carla Manzotti; Arturo Battaglia; Cristian Samori
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2013-03-26
Also published as: CN101495486A; AU2007278500A2; BRPI0714553B1; PT2044079E; RU2009102243A; US8217053B2; NO20090251L; PL2044079T3; AU2007278500B2; KR101412157B1; CA2658900C; AU2007278500A1; JP2009544634A; SI2044079T1; ES2561356T3; DK2044079T3; HUE027890T2; MX2009000827A; JP5313894B2; HK1135691A1

Abstract

COMPOSTOS DERIVADOS DE CAMPTOTECINA, PROCESSO PARA A PREPARAÇçO DOS MESMOS, COMPOSIÇçO FARMACÊUTICA, BEM COMO O USO DOS REFERIDOS COMPOSTOS. A presente invenção refere-se a derivados de tio-camptotecina 5-substituído tendo uma atividade antitumor, o processo para a preparação dos mesmos, o uso dos mesmos como fármacos antitumor e composições contendo os mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS DERIVADOS DE CAMPTOTECINA, PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DOS MESMOS, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, BEM COMO O USO DOS REFERIDOS COMPOSTOS".

A presente invenção refere-se a novos derivados de camptoteci-

na tendo atividade antitumor, a processos para a preparação dos mesmos como fármacos antitumor e composição farmacêutica contendo os mesmos. Antecedentes da Invenção

Camptotecina é um alcalóide extraído de Camptotheca acuminata (Nyssaceae), primeiramente descrito por Wall e Wani em 1966(J. Am. Chem. Soe. 1966. 88, 3888-3890).Camptotecina, embora favorecido com ampla atividade antitumor espectral, especialmente contra tumor de cólon e outros tumores sólidos e leucemias, não é usada em terapia devido a sua alta toxi- cidade, que é particularmente manifestada na forma de cistite hemorrágica, toxicidade gastrointestinal e mielossupressão.

Um número de análogos de camptotecina tem sido sintetizado a fim de obter compostos tendo baixa toxicidade e alta solubilidade. No presente, dois fármacos são usados em prática clínica, a saber CTP-11 e topotecan. Outros de- rivados, tais como belotecan, rubitecan, exatecan, gimatecan, pegamotecan, Iurto- tecan, caranicetina, afeletecan, homocamptotecina, diflomotecan, e muitos outros, são experimentações clínicas experimentadas. Composto CTP-11 é um pró-fár- maco altamente solúvel para 10-hidróxi-7-etilcamptotecina (comumente conheci- do como SN-38), aprovado para o tratamento de muitos tumores sólidos e asci- tes (colorretal, pele, estômago, pulmão, cérvice, ovário, Iinfoma não Hodgkin). Topotecan é um composto solúvel em solução fisiológica, ativo

contra os tumores do pulmão, estômago, fígado, ovário, mama, próstata, esôfa- go, reto, sarcomas de tecidos moles, cabeça e pescoço, glioblastoma, leu- cemias mielocíticas crônicas e agudas. Topotecan mostra, entretanto, efeitos colaterais importantes tais como neutropenia e trombocitopenia. Lurtotecan é um derivado solúvel, tendo atividade em tumores

do pescoço, ovário, mama, colorretal, e microcitoma pulmonar. Entretanto, Iurtotecan também toxicidade hemática.

Rubitecan é um pró-fármaco para o uso oral eficaz contra turno- res do pâncreas, ovário e mama.

Camptotecina é seu análogo, como o caso com todos os inibido- res de topoisomerases I, são eficazes contra tumores resistentes a fármacos convencionais, incluindo inibidores de topoisomerase II; mantêm altos níveis de topoisomerase durante o ciclo celular completo; não induzem resistência multifármaco (Pgo dou MRP) ou desentoxicando o metabolismo mediado pela enzima.

Pesquisas são agora focadas em novos inibidores da topoisome- rase I tendo menos toxicidade do que os fármacos atualmente usados. Derivados de camptotecina de anel aberto mostram alta ligação

de proteína (em particular com albumina) e baixa distribuição nos tecidos de tumor. Como conseqüência, o produto se acumula no corpo e os tumores são fracamente afetados.

Inversamente, a alta Iipofilicidade da forma de Iactona promove a adesão de derivados de camptotecina em membranas celulares, particular- mente eritrócitos, afetando a relação de distribuição tecido / plasma. Por esta razão, a pesquisa está sendo focada em duas abordagens alternativas: a) projeto de baixos produtos de ligação de proteína ainda tendo boa solubili- dade; b) projeto de produtos altamente potentes tendo efeito terapêutico mesmo em doses extremamente baixas.

Modificações nas posições 7-, 9-, 10- e 11- normalmente prova- ram ser bem-toleradas enquanto não afetam a estabilidade do complexo ter- nário de camptotecina de DNA topoisomerase I, a formação da qual é res- ponsável pela atividade antitumor compostos. Produtos com configuração 20R provaram atividade menor ou

inatividade do que os produtos com configuração 20S - que coincidem com a configuração natural.

Como uma regra, modificações na posição 5- são consideradas desfavoráveis para a formação do complexo ternário, enquanto modificações nos anéis DE piridona DeE têm sido relatas como prejudiciais à atividade do produto.

Descrição da Invenção Em um primeiro aspecto, a invenção refere-se a derivados de camptotecina da fórmula geral I:

em que:

R é F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R", -COOR', -CONR'R", -NHR'"- NR'R" em que R', R" e R"' podem ser H, alquila, arila, arilaquila, acila, alco- xicarbonila, ariloxicarbonila;

R1 é alquila, aminoalquila, hidroxialquila, nitrila, alcoximino, ari- loximino, sililalquila;

R2 é hidrogênio, hidroxila, alcóxi, aminoalquila; R3 é hidrogênio, hidroxila opcionalmente protegida, alcóxi, ami-

noalquila,

em que os grupos alquila, acila, alcóxi, aminoalquila, ou alcoxi- mino podem conter de 1 a 8, preferivelmente de 1 a 4, átomos de carbono, em uma cadeia reta ou ramificada, e os grupos arila e arilóxi podem conter de 5 a 10 átomos de carbono;

os sais farmaceuticamente aceitáveis, isômeros, enaciômeros, diastereômeros dos mesmos e misturas correspondentes.

Os compostos da invenção mostram baixa ligação de proteína e têm boa solubilidade e alta potência mesmo em doses muito baixas. A via preferida para a preparação dos compostos da invenção é

ilustrada no esquema I em que:

a) proteção dos grupos hidróxi precursores;

b) conversão do anel de piridona para anela de tiopiridona

c) remoção dos grupos protetores. No esquema I, R1 R1, R2 e R3 têm os significados descritos a- cima, e PG é um grupo de proteção hidróxi.

Precursores podem ser comercialmente disponíveis ou obtidos com descrito na literatura. Para a preparação dos produtos derivados na po- sição 5-, a abordagem descrita no esquema Il pode ser seguida, que com- preende:

a) proteção dos grupos hidróxi precursores;

b) derivação em 5 através da formação de uma carbaniona e reação com uma reagente eletrolítico;

c) transformação da carbonila 16a em tiocarbonila;

d) desproteção dos grupos hidróxi.

Em que as etapas b) e c) podem ser revertidas.

Esquema Il R2 R1

R2 R1

a)

b)

No esquema II, R, R1, R2, e R3 têm os significados descritos acima, e PG é um grupo de proteção OH.

A formação de carbaniona em 5 pode ser obtida através do pre- cursor com uma base orgânica forte, preferivelmente LiHMDS.

O carbaniona é reagido in situ com um eletrófilo, tal como uma

fonte de halogênio, um azadicarboxilato, isocianato, derivados de clorocar- bonila, tosilazida.

Conversão do anel de piridona para anel de tiopiridona pode ser obtida por reação com 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,2,3,4-ditiafosfetano-2,4- dissulfeto (comumente conhecido como reagende de Lawesson) (Cava P.M. et al., Tetrahedron 1985, 41, 5061; Cherkasov RA et al Tetrahedron 1985 41, 2567; Ghattas AAG et al, Sulfur Lett. 1982, 1, 69; Yde B et al, Tetrahedron 1984, 40. 2047) ou com um reagente equivalente. Reagente de Lawesson é preferido.

Silils e carbamatos ou uma combinação dos mesmos são prefe- ridos como grupos de proteção hidróxi.

Os compostos da invenção froam testados em um ensaio de ci- totoxidade em um espectro amplo de céluklas tumorais. No exemplo, os da- dos de citotoxicidade na linhagem celular NCL-H460 (câncer NSCL) referem- se a dois compostos da fórmula (I) que são reportados, usando-se campto- tecina e os fármacos Topotecan e SN-38 como referências:

Nome Fórmula NCI-460 IC50 (μ/mL) Contagem de célula Camptotecina fYYV/ x^vvK MW =MS. M ^J \ C20H18N2O4 0,115 + 0,0174 Topotecan ΜΟ^-^-ίγ'^^ Γ) MW s 421 HO 4—tP C23M23NSOS ^J £ 0,63 ± 0,44 SN38 r HO - ρ MW =392 42 C22H20N205 0 0,0865 ± 0,0049 IDN 6070 tiocamptotecina CCCH VO MW * SW V-·-)—/ C20H18N2O3S £ 0,3 ±0,07 IDN 6092 Ψ MW »405.44 HO 4—{ C20H15N503S —' o 0,3 ±0,07 IDN 6093 ψ MW « 405 44 HO-Γ—A C20H15NS03S —' o 0,72 ±0,2 Nome Fórmula NCI-460 IC50 (μ/mL) Contagem de célula IDN 6156 TÍO-SN38 Λ N Λ^Γ-γ Λ O no-f-4 MW —J Λ C2JH23MKUS 0,0095 ± 0,0007 IDN 6180 Tio-totopotecan t .Nx s -χ o MW «Ϊ.52 —/ 'n GWH2JNOCWS u 0,115(0,021 IDN 6181 10-hidróxi- tiocamptotecina I JL L ρ MW S 380,43 HO/ " C20HieN204S -f O 0,035(0,011

Os testes de citoxicidade mostraram que derivados sulfurados

de camptotecina estão em média 10 vezes mais potentes do que análogos não-sulfurados.

Os compostos mais ativos foram avaliados em um ensaio de

clivagem de DNA medindo a concentração ativa e a persistência de dano (vide a seção "exemplos"). Os derivados da fórmula (i) surpreendentemente mostram persistência maior em bloquear replicação de DNA do que os pa- drões de referência (particularmente topotecan e camptotecina), enquanto mantêm um efeito de atividade de citotoxicidade.

Além do mais, derivados sulfurados provaram mais atividades do que análogos não-sulfurados também neste caso, assim como eles induzi- ram danos de DNA em concentrações inferiores com persistência mais longa na hora.

O composto tio-SN38 (IDN6156) foi transformado em tio-CPT11

(tio-irinotecan) de acordo com procedimentos para a conversão de SN38 para CPT1 l(irinotecan) relatado na literatura. O composto resultantes tio- irinotecan foi comparado in vivo com análogos não-sulfurados próximos em uso clínico (CPT11)em um modelo de tumor de pulmão altamente sensível às referências-padrão.

Os dados relatados na tabela seguinte mostram que o composto sulfurado tio-CPT11 é mais potente do que um não-análogo não-sulfurado CPT11, enquanto mantém o mesmo nível de eficácia e índice terapêutico.

Fármaco® Dose (mg/kg/inj.) TWI% b LCKc (0.5 g) Maxd BWL% Tox/Tote CPT 11 50 91 1.8 15 0/5 Tio-CPT11 10 94 2.3 9 0/5

Em um aspecto adicional, a invenção refere-se a composições farmacêuticas contendo um composto de fórmula (I) juntamente com veícu- los farmaceuticamente eficazes e excipientes. As formas farmacêuticas ade- quadas para administração oral ou parenteral dos compostos (I) podem ser sólidas, preferivelmente cápsulas, comprimidos e grânulos, ou líquidos, pre- ferivelmente injetáveis ou soluções por infusão.

Os compostos formulados adequadamente da invenção podem ser usados para o tratamento de tumores sólidos e leucemias, em particular tumores do pulmão, ovário, mama, estômago, fígado, próstata, sarcoma de tecido macio, cabeça e pescoço, esôfago, pâncreas, colo, reto, glioblastoma, leucemias mielocíticas crônicas e agudas. Exemplos

Exemplo I - 20-QTES-camptotecina

Camptotecina (0,1 OOg 0,287 mmol) é suspensa em dimetilfor- mamida anidrido (3 ml), sob atmosfera inerte, e a suspensão resultante é adicionada com imidazol(0,980 g, 1,44 mmol). A mistura é agitada por 10' minutos, subseqüentemente cloreto de trietilsilil (TES-CI) (0,193 mL, 1,15 mmol) é desprendido do mesmo, seguido por adição de 4-dimetilamino piri- dina (DMAP) (0,040 g, 0,287 mmol). Após 46 h, a mistura de reação é eva- porada a vácuo, (controle TLC do desaparecimento completo do reagente, eluente CH2CL2 / MeOH = 30/1). O sólido é subseqüentemente redissolvido em CH2CI2, e lavado com H2O e NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (2x10 ml). As fases orgânicas são combinadas e secas sobre NaSO4, filtradas e concentradas a vácuo, desse modo obtendo o produto desejado (0,133 g, 0,287 mmol) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.37 (s, 1H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.92 (d, 1H,J = 8.0 Hz, Ar), 7.82 (t, 1H,J = 8.0 Hz, Ar), 7.65 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.57 (s, 1H, H-14), 5.67 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.29 (s, 2H, H-5), 5.25 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 2.00-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03- 0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.7, 157.6, 152.5, 151.5, 149.0. 145.9, 130.9, 130.4, 130.0. 128.4, 128.1, 128.0. 127.9, 118.9, 94.4, 75.3, 66.0. 50.0. 33.2, 7.9, 7.2, 6.4. Exemplo Il - 20otes-Tio-camptotecina

Camptotecina 20-OTES (0,664 g, 1,44 mmol) é dissolvida em xileno anidrido (20 ml_) com agitação sob atmosfera inerte. Subseqüente- mente reagente de Lawesson (LR), (0,523 g, 1,29 mmol) é adicionado e a reação é aquecida a 90°C. A mistura de reação é reagida por 18 h a 90°C, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano / AcOEt = 1/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromato- grafia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 4/1 em seguida 7/2), desse modo obtendo o produto desejado (0,578 g, 1,21 mmol, 84%) como um sólido a- marelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.46 (s, 1H, Ar, H-7) 8.29 (d, 1H, J

= 8.4 Hz, Ar), 8.03 (s, 1H, H-14), 7.97 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.86 (t, 1H, J = 21.8 Hz, Ar), 7.69 (t, 1H, J= 8.4 Hz, Ar), 6.15 (d, 1H, J= 16.9 Hz, H-17), 5.62 (d, 1H, J = 21.0 Hz1 H-5), 5.57 (d, 1H, J= 21.0 Hz, H-5), 5.34 (d, IH1J= 16.9 Hz, H-17), 1.94 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H-19), 1.90 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H-19), 1.05-0.91 (m, 12 H), 0.82-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.3, 171.5, 151.9, 149.1, 148.3, 147.2, 130.8, 130.6, 130.6, 130.1, 128.3, 128.2, 128.2, 128.0. 104.5, 75.0. 68.8, 56.3, 33.5, 7.7, 7.2, 6.4. Exemplo Ill - Preparação de Tio-camptotecina (IDN 6070)

20-OTES Tio-camptotecina (0,150 g, 0,314 mmol) é dissolvida em THF anidrido (10mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüente- mente Et3N*3HF (0,140 mL, 0,816 mmol) é desprendido do mesmo. A mistu- ra de reação é reagida por 48 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano /AcOEt = 1/1. O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (Si02, Hexano/AcOET = 2/1 em seguida 1/1), desse modo obtendo o produ- to desejado (0,112 g, 0,307 mmol, 98%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.46 (s, 1H, Ar, H-7), 8.27 (d, 1H, J

= 8.4 Hz, Ar), 8.13 (s, 1H, H-14), 7.97 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.86 (t, 1H, J = 21.8 Hz, Ar), 7.70 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 6.25 (d, 1H, J = 16.9 Hz1 H-17), 5.62 (d, 1H, J = 21.0 Hz1 H-5), 5.58 (d, 1H, J= 21.0 Hz1 H-5), 5.37 (d, 1H, J= 16.9 Hz, H-17), 3.80 (s, 1H, OH), 1.90 (q, 2H, H-19), 1.03 (t, 3 H, J= 7.2 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.5, 172.6, 151.8, 149.1, 148.7, 145.5, 130.9, 130.8, 130.5, 129.9, 128.3 (2 C), 128.2, 128.0. 104.3, 72.3, 69.2, 56.3, 32.0. 7.8.

Exemplo IV - 20-OTES SN-38

SN-38 (0,100 g, 0,255 mmol) é suspenso em dimetilformamida anidrido (5 mL), sob atmosfera inerte e a suspensão resultante é adicionada com imidazol (0,087 g, 1,28 mmol). A mistura é agitada por 10' minutos, subseqüentemente cloreto de trietila (TES-CI), (0,171 mL, 1,02 mmol) é des- prendido do mesmo, seguido por adição de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,031 g, 0,255 mmol). Após 52 h, a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC (CH2CI2/MeOH = 10/1) o desaparecimento completo do reagente. O sólido é subseqüentemente redissolvido em CH2Cb e lavado com h H2O e NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (2X10 mL). As fases orgânicas são combinadas e secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo, desse modo obtendo o produto desejado (0,121 g, 0,240 mmol, 94%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9.26 (br s, 1 Η,ΟΗ), 8.14 (d, 1H, J = 9.2 Hz1 Ar, H-12), 7.58 (s, 1H, H-14), 7.49 (dd, 1H, J1 = 9.2 Hz J2 = 2.2 Hz, H-11), 7.46 (d, 1H, J = 2.2 Hz, H-9), 5.70 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 5.28 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.23 (s, 2H, H-5), 3.05 (q, 2H, J = 7.5 Hz), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 1.32 (t, 3 H, J = 7.5 Hz, Me), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.1, 157.9, 156.6, 152.1, 149.0. 146.7, 144.6, 143.6, 131.9, 128.7, 126.9, 122.8, 117.9, 105.5, 98.5, 75.4, 65.9, 49.5, 32.9, 23.2, 13.5, 7.8, 7.2, 6.4. Exemplo V - IO-OTBDMS-2O-OTES SN-38

20-OTES SN-38 (0,121 g, 0,240 mmol) é dissolvido em um mis- tura anididrida de CH2CI2/THF = 1:1 (8 mL) sob atmosfera inerte. Imidazol (0.081 g, 1.20 mmol) é adicionado à mesma seguido de, após 10' minutos, cloreto de terc-butildimetilsilil (TBDMS-CI), (0,144 mg, 0,957 mmol), então por 4-dimetilamino piridina (DMAP), (0,029 g 0,240 mmol). Após 18 h, a mis- tura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC TLC (Hexa- no/AcOEt = 1/1) o desaparecimento do reagente. O sólido é subseqüente- mente redissolvido em CH2CI2 e lavado com H2O e NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (2X10 mL) e as fases orgânicas são combi- nadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), desse modo obtendo o produto desejado (0.127 g, 0.205 mmol, 85%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.14 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.49 (s, 1 Η, H-14), 7.40 (d, 1H, J = 2.2 Hz, H-9), 7.38 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz J2 = 2.5 Hz, H-11), 5.67 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.25 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.23 (s, 2H, H-5), 3.11 (q, 2H, J = 7.6 Hz), 1.99-1.82 (m, 2H, H-19), 1.38 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me), 1.04 (s, 9 H), 1.00-0.92 (m, 12 H), 0.78-0.69 (m, 6 H), 0.30 (s, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.9, 157.7, 155.1, 151.5, 150.1, 146.8, 145.6, 143.5, 132.2, 128.2, 126.9, 125.9, 118.0. 110.5, 97.7, 75.4, 66.0. 49.3, 33.2, 25.6, 23.1, 18.3, 13.7, 7.9, 7.2, 6.4, -4.3. Exemplo Vl - 10-OTBDMS 20-OTES TioSN-38

SN-38 10-OTBDMS 20-OTES (0,127 g, 0,205 mmol) é dissolvido em xileno anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte. Subseqüente- mente reagente de Lawesson (LR), (0,075 g, 0,184 mmol) é adicionado e a reação é aquecida a 90°C. A mistura de reação é reagida por 23 h a 90°C, monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1) o desaparecimento do reagente. O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 5/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,042 g, 0,066 mmol, 32%) como um sólido amarelo intenso. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.17 (d, 1Η, J = 8.9 Hz1 Ar, Η-12), 7.96 (s, 1 Η, Η-14), 7.43 (d, 1Η, J = 2.6 Hz1 Η-9), 7.41 (dd, 1Η, Ji = 8.8 Hz J2 = 2.6 Hz1 Η-11), 6.16 (d, 1Η, J = 17.1 Hz, Η-17), 5.56 (d, 1Η, J = 20.0 Hz1 Η-5), 5.50 (d, 1Η, J = 20.0 Hz1 Η-5), 5.33 (d, 1Η, J = 16.5 Hz1 Η-17), 3.18 (q, 2Η, J= 7.6 Hz), 1.91 (q, 2Η, J = 7.4 Hz, Η-19), 1.41 (t, 3 Η, J= 7.6 Hz1 Me), 1.05 (s, 9 Η), 1.03-0.92 (m, 12 Η), 0.81-0.72 (m, 6 Η), 0.31 (s, 6 Η). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.1, 171.5, 155.4, 149.4, 149.3, 147.4, 145.7, 143.6, 132.4, 129.9, 128.5, 126.5, 126.2, 110.5, 104.1, 75.0. 68.8, 55.8, 33.5, 25.7, 23.2, 18.4, 13.9, 7.8, 7.2, 6.5, -4.3. Exemplo Vll - 20-QTES TioSN-38

10-OTBDMS 20OTES TioSN-38 (0,042 g, 0,066 mmol) é dissol- vido em THF anidrido (4 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüen- temente Et3N*3HF (0.013 mL, 0.080 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 3 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 2/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (S1O2, Hexano/AcOEt = 2/1 em seguida 1/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,034 g, 0,065 mmol, 99%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.19 (d, 1H, J = 9.2 Hz, Ar, H-12), 7.96 (s, 1H, H-14), 7.44 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz J2 = 2.6 Hz, H-11), 7.43 (d, 1H, J= 2.6 Hz, H-9), 6.16 (d, 1H, J= 17.1 Hz, H-17), 6.02 (br s, 1H, OH), 5.55 (d, 1H, J = 19.7 Hz, H-5), 5.49 (d, 1H, J = 19.7 Hz, H-5), 5.33 (d, 1H, J = 16.9 Hz, H-17), 3.16 (q, 2H, J= 7.8 Hz), 1.91 (q, 2H, J = 7.6 Hz, H-19), 1.39 (t, 3 H, J= 7.9 Hz1 Me), 1.03-0.92 (m, 12 H), 0.81-0.72 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.0. 171.7, 155.6, 149.1, 149.0. 147.3, 145.2, 143.7, 132.5, 130.0. 128.7, 126.7, 122.4, 105.5, 104.2, 75.1, 68.9, 55.8, 33.5, 23.1, 13.7, 7.7, 7.2, 6.4.

Exemplo Vlll - TioSN-38 (IDN 6156)

20-OTES TioSN-38 (0.034 g, 0.065 mmol) é dissolvido em THF anidrido (4 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0.025 mL, 0.150 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 40 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 1/1). O solvente é evapora- do a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, He- xano/AcOEt = 1/3), desse modo obtendo o produto desejado (0,026 g, 0,064 mmol, 98%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (THF-d8, 400 MHz) δ 9.23 (br s, 1 Η, OH), 8.06 (d, 1H, J

= 9.2 Hz1 Ar, H-12), 7.88 (s, 1H, H-14), 7.41 (d, 1H, J = 2.8 Hz, H-9), 7.38 (dd, 1H, J1 = 9.2 HzJ2 = 2.8 Hz, H-11), 6.08 (d, 1H, J= 17.2 Hz, H-17), 5.67 (br s, 1H, OH), 5.50 (s, 2H, H-5), 5.33 (d, 1H, J= 16.8 Hz, H-17), 3.22 (q, 2H, J= 7.8 Hz), 1.90 (q, 2H, J= 7.6 Hz, H-19), 1.42 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me), 0.97 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). 13c NMR (THF-dg, 100 MHz) δ 173.0. 172.1, 157.5, 149.6, 149.2, 146.1, 145.0. 142.6, 132.3, 130.1, 128.9, 127.6, 122.3, 104.9, 102.3, 72.3, 68.5, 55.8, 31.7, 22.7, 13.1, 7.3. Exemplo IX - 20-QTES Topotecan

Topotecan (0.100 g, 0.238 mmol) é suspenso em dimetilforma- mida anidrido (5 ml_), sob atmosfera inerte e a suspensão resultante é adi- cionada com imidazol (0,081 g, 1,19 mmol). A mistura é agitada por 10' mi- nutos, subseqüentemente cloreto de trietil silila (TES-CI), (0,160 ml_, 0,952 mmol) é desprendido do mesmo, seguido pela adição de 4- dimetilaminopiridina, (DMAP), (0,029 g 0,238 mmol). Após 52 h, a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC (CH2CI2/MeOH = 10/1) o completo desaparecimento do reagente. O sólido é subseqüentemente re- dissolvido em CHCI3 e H2O e NH4CI saturado, a fase aquosa é extraída com CHCI3 (2X15 ml_). As fases orgânicas são combinadas e secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo, desse modo obtendo o produto desejado (0,120 g, 0,224 mmol, 94%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9.65 (br s, 1H), 8.26 (s, 1H, Ar, H- 7), 8.14 (d, 1H, J= 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.80 (d, 1H, J= 8.8 Hz, Ar, H-11), 7.58 (s, 1H, H-14), 5.67 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.25 (d, 1H, J = 16.5 Hz1 H-17), 5.20 (s, 2H, H-5), 4.71 (s, 2 H), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.1, 157.9, 156.6, 152.1, 150.8, 146.8, 144.3, 134.3, 131.2 129.9, 127.9, 123.0. 118.9, 110.1, 98.5, 75.4,65.9, 51.1, 50.0. 43.1, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4. Exemplo X -10-OTBDMS 20-QTES Topotecan

2Ü-OTES Topotecan (0.120 g, 0,224 mmmol) é dissolvido em uma mistura de CH2CI2/THF = 1:1 anidrido (8 ml_) sob atmosfera inerte. Imi- dazol (0,076 g, 1,12 mmol) é adicionado seguido, após 10' minutos, de clore- to de terc-butildimetilsilila (TBDMS-CI), (0,135 mg, 0,896 mmol), então por 4- dimetilamino piridina (DMAP), (0,027 g 0,224 mmol). Após 21 h, a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1) o desaparecimento do reagente. O sólido é subseqüentemente redissolvido em CHCI3 e H2O e NH4CI saturado, a fase aquosa é extraída com CHCI3 (2 X 15 mL). As fases orgânicas são combinadas e secas sobre Na2SO4, filtra- das e concentradas a vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia ins- tantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), desse modo obtendo o produto dese- jado (0,116 g, 0,179 mmol, 80%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H, Ar, H-7), 8.14 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.81 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-11), 7.59 (s, 1H, H-14), 5.64 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.22 (d, 1H, J = 16.5 Hz1 H-17), 5.19 (s, 2H, H-5), 4.71 (s, 2 H), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 1.04 (s, 9 H), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H), 0.30 (s, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.7, 157.7, 155.1, 151.5, 150.0. 146.8, 144.3, 134.3, 131.2 129.9, 127.9, 123.0. 118.9, 110.1, 98.5, 75.4, 65.9, 51.1, 50.0. 43.9, 32.9, 25.6, 18.3, 7.8, 7.2, 6.4, -4.3.

Exemplo Xl -10-OTBDMS 20-QTES Tio-Topotecan

10-OTBDMS 20-OTES Topotecan (0,116 g, 0,179 mmmol) é dissolvido em xileno anidrido (6 mL) com agitação, sob atmosfera inerte. Subseqüentemente reagente de Lawesson (LR), (0.065 g, 0.161 mmol) é adicionado e a reação é aquecida a 90°C. A mistura de reação é reagida por 23 h a 90°C, monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1) o desaparecimento do reagente. O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 5/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,047 g, 0,072 mmol, 40%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.35 (s, 1H, Ar, H-7), 8.17 (d, 1H, J = 8.8 Hz1 Ar, Η-12), 7.96 (s, 1Η, Η-14), 7.85 (d, 1Η, J = 8.8 Hz1 Ar, Η-11), 6.16 (d, 1Η, J = 16.5 Hz, Η-17), 5.52 (d, 1 Η, J= 21.0 Hz1 Η-5), 5.48 (d, 1Η, J = 21.0 Hz, Η-5), 5.33 (d, 1Η, J = 16.5 Hz1 Η-17), 4.73 (s, 2 Η), 2.81 (s, 6Η, 2 Me), 1.92 (q, 2Η, J= 7.6 Hz1 Η-19), 1.04 (s, 9 Η), 0.98-0.88 (m, 12 Η), 0.77- 0.68 (m, 6 Η), 0.30 (s, 6 Η). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.5, 171.5, 155.1, 149.9, 149.4, 147.2, 144.3, 134.3, 132.1 129.9, 127.9, 126.5, 123.0. 110.1, 104.2, 75.4, 67.9, 55.1, 50.0. 43.9, 32.9, 25.6, 18.3, 7.8, 7.2, 6.4, -4.3. Exemplo Xll - 20-QTES Tio-Topotecan

10-OTBDMS 2O-OTES Tio-Topotecan (0.047 g, 0.072 mmol) é dissolvido em THF anidrido (4 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, sub- seqüentemente Et3N*3HF (0.014 ml_, 0.086 mmol) é desprendido do mes- mo. A mistura de reação é reagida por 4 h em temperatura ambiente, moni- torando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 2/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia ins- tantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 2/1 em seguida 1/1), desse modo obtendo o produto desejado (0.039 g, 0.071 mmol, 99%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.36 (s, 1H, Ar, H-7), 8.17 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.96 (s, 1H, H-14), 7.85 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-11), 6.16 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 6.02 (br s, 1H, OH), 5.52 (d, 1H, J = 21.0 Hz, H-5), 5.48 (d, 1H, J = 21.0 Hz1 H-5), 5.33 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 4.73 (s, 2 H), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.92 (q, 2H, J= 7.2 Hz, H-19), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.5, 171.5, 155.1, 149.9, 149.4, 147.2, 144.3, 134.3, 132.1 129.9, 127.9, 126.5, 123.0. 110.1, 104.2, 75.4, 67.9, 55.1, 50.0. 43.9, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4. Exemplo Xlll- Tio-Topotecan (IDN 6180)

Tio-Topotecan IO-OH 20-OTES (0,039 g, 0,071 mmol) é dissol- vido em THF anidrido (4 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüen- temente Et3N*3HF (0,026 mL, 0,163 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 40 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 1/2). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/3), desse modo obtendo o produto desejado (0,030 g, 0,069 mmol, 98%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.36 (s, 1H, Ar, H-7), 8.17 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.96 (s, 1H, H-14), 7.85 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, H-11), 6.16 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 6.02 (br s, 1H, OH), 5.52 (d, 1H, J = 21.0 Hz, H-5), 5.48 (d, 1H, J = 21.0 Hz1 H-5), 5.33 (d, 1H, J = 16.5 Hz, H-17), 4.73 (s, 2 H), 3.84 (br s, 1H, OH), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.92 (q, 2H, J = 7.6, Hz H-19),

1.03 (t, 3 H,J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.5, 171.5, 155.1, 149.9, 149.4, 147.2, 144.3, 134.3, 132.1 129.9, 127.9, 126.5, 123.0.

110.1, 104.2, 72.4, 67.9, 55.1, 50.0. 43.9, 32.9, 7.8.

Exemplo XIV - Preparação de 20-QTES 10-hidroxicamptotecina

10-hidroxicamptotecina (0,100 g, 0,275 mmol) é suspensa em dimetilformamida anidrido (5 ml_), sob atmosfera inerte e a suspensão resul- tante é adicionada com imidazol (0,225 g, 3,31 mmols). A mistura é agitada

por 10' minutos, subseqüentemente cloreto de trietilsilil (TES-CI), (0,460 mL, 2,75 mmols) é desprendido do mesmo, seguido pela adição de 4- dimetilamino piridina (DMAP) (0,068 g, 0,550 mmol). Após 24 h a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC o completo desapareci- mento do reagente (CH2CI2/MeOH = 20/1). O sólido é subseqüentemente

redissolvido em CH2CI2 e lavado com H2O e NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (2 X 10 mL). As fases orgânicas são combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo, desse modo obtendo o produto desejado (0,124 g, 0,259 mmol, 94%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3 + 5% CD3OD, 400 MHz) δ 8.10 (s, 1H, Ar, H-7),

8.05 (d, 1H,J= 9.2 Hz, Ar), 7.50 (s, 1H, H-14), 7.39 (dd, 1H, J1 = 9.2 Hz J2 =

2.4 Hz, H-11), 7.11 (d, 1H, J= 2.2 Hz, H-9), 5.60 (d, 1H, J= 16.4 Hz1 H-17), 5.21 (d, 1H, J= 16.4 Hz, H-17), 5.15 (s, 2H, H-5), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.76-0.68 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3 + 5% CD3OD, 100

MHz) δ 172.2, 157.8, 156.7, 151.8, 149.2, 146.1, 144.1, 130.9, 129.8, 129.0, 128.6, 123.2, 117.8, 108.8, 98.1, 75.4, 65.8, 50.0. 32.9, 7.7, 7.1, 6.3. Exemplo XV - 10-OTBDMS-2Q-OTES Camptotecina 10-hidróxi-20-OTES-Camptotecina (0,105 g, 0,219 mmol) é dis- solvido em uma mistura de CH2CI2/THF = 1:1 anidrido (4 mL) e sob atmosfe- ra inerte. Imidazol (0,097 g, 1,42 mmol) é adicionado seguido, após 10' mi- nutos, de cloreto de terc-butildimetilsilil (TBDMS-CI), (0,164 mg, 1,10 mmol), então por 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,040 g, 0,329 mmol). Após 18 h, a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC o completo desaparecimento do reagente (Ciclohexano/AcOEt = 1/3). O sólido é subse- qüentemente redissolvido em CH2CI2 e lavado com H2O e NH4CI saturado, a fase aquosa é extraída com CH2CI2 (2 X 10 mL). As fases orgânicas são combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resí- duo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Ciclohexano/AcOEt = 1/3), desse modo obtendo o produto desejado (0,117 g, 0,197 mmol, 90%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.22 (s, 1H, Ar, H-7), 8.13 (d, 1H, J = 9.2 Hz, Ar, H-12), 7.51 (s, 1H, H-14), 7.39 (dd, 1H, J1 = 9.2 Hz J2 = 2.8 Hz, H-11), 7.22 (d, 1H, J = 2.8 Hz, H-9), 5.66 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 5.25 (s, 2H, H-5), 5.24 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 1.99-1.82 (m, 2H, H-19), 1.03 (s, 9 H), 1.00-0.92 (m, 12 H), 0.78-0.69 (m, 6 H), 0.29 (s, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.0. 157.7, 155.1, 151.5, 150.6, 146.1, 145.1, 131.4, 129.4, 129.3, 128.7, 126.7, 118.3, 114.5, 97.7, 75.3, 66.0. 49.9, 33.1, 25.6, 18.3, 7.9, 7.2, 6.4, -4.3.

Exemplo XVI - 10-OTBDMS-2Q-OTES Tio-Camototedna

10-OTBDMS 20-OTES Camptotecina (0.350 g, 0.589 mmol) é dissolvido em xileno anidrido (10 mL) com agitação sob atmosfera inerte. Subseqüentemente reagente de Lawesson (LR), (0,590 g, 1,47 mmol) e adi- cionado e a reação é aquecida a 90°C. A mistura de reação é reagida por 18 h a 95°C, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Ciclohexa- no/AcOEt = 1/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Ciclohexano/AcOEt = 4/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,323 g, 0,530 mmol, 90%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.28 (s, 1H, Ar, H-7), 8.16 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar, Η-12), 7.97 (s, 1Η, Η-14), 7.40 (dd, 1Η, Ji = 9.2 Hz J2 = 2.8 Hz1 Η-11), 7.26 (d, 1Η, J = 2.8 Hz1 Η-9), 6.15 (d, 1Η, J= 16.8 Hz1 Η-17), 5.58 (d, 1Η,J = 20.0 Hz1 Η-5), 5.53 (d, 1Η, J = 20.0 Hz1 Η-5), 5.33 (d, 1Η, J = 16.8 Hz1 Η-17), 1.91 (q, 2Η, J= 7.4 Hz, Η-19), 1.04 (s, 9 Η), 1.02-0.92 (m, 12 Η), 0.82-0.72 (m, 6 Η), 0.30 (s, 6 Η). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.1, 171.5, 155.5, 149.8, 148.6, 147.3, 145.3, 131.5, 130.1, 129.8, 129.1, 128.3, 127.0. 114.5, 104.0. 75.0. 68.8, 56.3, 33.5, 25.6, 18.3, 7.8, 7.2, 6.4, -4.3. Exemplo XVII - Preparação de 10-hidróxi-Tio-Camptotecina (IDN 6181)

Tio-camptotecina 10-OTBDMS 20-OTES (0,320 g, 0,524 mmol) é dissolvida em THF anidrido (8 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,670 ml_, 4,19 mmols) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 20 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (CH2CI2/MeOH = 25/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromato- grafia instantânea (SiO2, CH2CI2/MeOH = 25/1 em seguida 20/1), desse mo- do obtendo o produto desejado (0,189 g, 0,498 mmol, 95%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (THF-de, 400 MHz) δ 9.20 (br s, 1H, OH), 8.37 (s, 1H, Ar, H-7), 8.05 (d, 1H, J= 9.2 Hz, Ar, H-12), 7.89 (s, 1H, H-14), 7.39 (dd, 1H, J1 = 9.2 HzJ2 = 2.8 Hz, H-11), 7.22 (d, 1H, J= 2.8 Hz, H-9), 6.07 (d, 1H, J = 17.2 Hz, H-17), 5.70 (br s, 1H, OH), 5.47 (s, 2H, H-5), 5.33 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 1.89 (q, 2H, J = 7.6 Hz, H-19), 0.97 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (THF-de, 100 MHz) δ 173.0. 172.1, 157.4, 149.7, 149.0. 146.1, 144.5, 131.3, 130.5, 130.2, 129.7, 128.6, 123.0. 108.9, 102.3, 72.3, 68.5, 56.5, 31.7, 7.3.

Exemplo XVIII- Cloridrato de Tio-topotecan (IDN 6180)

10-Hidróxi-Tio-Camptotecina (0,150 g, 0,421 mmol) é dissolvido em uma mistura de CH2CI2 anidrido (3.5 ml_) e n-propanol (1.8 ml_) com agi- tação sob atmosfera inerte. Subseqüentemente, bis(dimetilamino)metano (0,092 g, 0,905 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é rea- gida por 4 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desapareci- mento do reagente (CH2CI2/MeOH = 25/1). Após cerca de 5 h, uma mistura de 0,125 g de HCI concentrado em 1 ml de n-propanol é adicionada e a mis- tura é reagida por outras 16 h. O produto é filtrado e repetidamente lavado com CH2CI2 e Et2O, desse modo obtendo o produto desejado (0,168 g, 0,370 mmol, 88%) como um sólido vermelho-laranja.

1H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11.51 (br s, 1H, OH), 9.78 (br s, 1H, OH), 9.06 (s, 1H, Ar, H-7), 8.21 (d, 1H,J = 8.8 Hz, Ar), 7.76 (s, 1 Η, H-14), 7.72 (d, 1H, J = 8.8 Hz1 Ar), 5.91 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.50 (d, 1H, J= 16.4 Hz, H-17), 5.49 (s, 2H, H-5), 4.73 (s, 1H, CH2NMe2), 4.72 (s, 1H, CH2NMe2), 2.83 (s, 3 H, Me), 2.82 (s, 3 H, Me), 1.87 (q, 2H, J= 7.6 Hz, H-19), 0.85 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ 172.7, 172.1, 158.8, 149.6, 148.8, 147.0. 144.2, 133.7, 130.6, 130.6, 129.9, 127.5, 123.2, 109.1, 103.6, 72.8, 68.6, 57.4, 51.1, 43.1, 31.2, 8.3. Exemplo XIX - 5-F-20-QTES-Camptotecina

Camptotecina 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) é dissolvida em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte, em seguida resfria- da para uma temperatura de -78°C e uma solução de LiHMDS a 1,0 M em THF (0,260 mL, 0,260 mmol) é desprendida da mesma. Após 20', NFSI (0,089 g, 0,281 mmol) em THF anidrido (2 mL) é adidionado. Após 2 h a - 78°C, temperatura é deixada subir 25°C e o desaparecimento do reagente é monitorado por TLC (Hexano/AcOEt = 1/2). Formação de dois diastereisô- meros é observada. Após 3 h em temperatura ambiente, a reação é resfriada bruscamente pela adição de NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (3 χ 15 mL) e as fases orgânicas são combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo é purificado por croma- tografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/1, em seguida 2/1 e finalmente 1/1), desse modo obtendo uma mistura dos dois isômeros (0,101 g, 0,210 mmol, 97%,) (1:1 razão isomérica) como um sólido amarelo pálido. Os dois isômeros são separados por cromatografia adicional. A fim de precipitação: 1o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.87 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1H,J = 8.4 Hz, Ar), 7.47 (d, 1H, 1Jhf = 61.2 Hz, H-5), 7.45 (s, 1H1 H- 14), 5.62 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.02- 1.84 (m, 2Η, Η-19), 1.03-0.93 (m, 12 Η), 0.80-0.71 (m, 6 Η). 13C NMR (CD- Cl3, 100 ΜΗζ)δ 171.4, 157.5, 152.3, 151.1, 150.2 (d,J = 1.5 Hz), 150.3 (d, J = 1.5 Hz), 143.6 (d, J= 5.3 Hz), 133.7, 131.7, 130.2, 128.9, 128.4, 127.9 (d, J= 15.0 Hz), 126.3 (d, J= 15.0 Hz), 121.8, 98.9, 93.8 (d, 1Jcf = 213.2 Hz, C- 5), 75.1, 65.7, 33.1, 7.8, 7.2, 6.4.

2o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.51 (s, 1H, Ar, H-7), 8.25 (d, IH1J= 8.4 Hz1 Ar), 7.96 (d, 1H, J = 8.4 Hz1 Ar), 7.87 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.51 (d, 1H, 1Jhf = 60.8 Hz, H-5), 7.42 (s, 1H, H-14), 5.62 (d, 1H, J= 17.2 Hz, H-17), 5.20 (d, 1H, J= 17.2 Hz, H-17), 2.02-1.82 (m, 2H, H-19), 1.04-0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.2, 157.8, 152.5, 151.2, 150.3, 143.7, 133.7 (d, J = 2.4 Hz), 131.7, 130.2, 128.9, 128.3, 127.9 (d, J = 2.3 Hz), 126.3 (d, J = 16.7 Hz), 121.8 (d, J = 1.5 Hz), 99.0. 93.8 (d, 1Jcf = 214.8 Hz, C-5), 75.0, 65.8, 33.3, 7.9, 7.1, 6.4. Exemplo XX - Preparação de 5-F-20-QH-camptotecina 1° diastereômero

O primeiro diastereômero de 5-F-20-OTES-camptotecina (0,025 g, 0,052 mmol) é dissolvido em THF anidrido (5 ml_) com agitação sob at- mosfera inerte. Subseqüentemente Et3N«3HF (0,060 ml_, 0,368 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 28 h em tempe- ratura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (He- xano/AcOEt = 1/2). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é cromato- grafado (SiC>2, Hexano/AcOEt =1/1), desse modo obtendo o produto deseja- do (0,019 g, 0,051 mmol, 98%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.87 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.59 (s, 1H, H-14), 7.46 (d, 1H, 1Jhf = 61.2 Hz, H-5), 5.69 (d, 1H, J = 16.8 Hz1 H-17), 5.26 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 3.87 (br s, 1H, OH), 2.01-1.81 (m, 2H, H-19), 1.05 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.5, 157.6, 151.1, 151.0. 150.2, 144.1, 133.9, 131.9, 130.0. 129.0. 128.5, 127.8, 126.4, 121.7, 98.8, 93.8 (d, 1Jcf = 214.0 Hz, C-5), 72.5, 66.0, 31.5, 7.8.

Exemplo XXI - Preparação de 5-F-20-QH-camptotecina 2° diastereômero O segundo diastereômero de 5-F-20-OTES-camptotecina (0,025 g, 0,052 mmol) é dissolvido em THF anidrido (5 mL) com agitação sob at- mosfera inerte, subseqüentemente Et3N»3HF (0,060 mL, 0,368 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 28 h em tempe- ratura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (He- xano/AcOEt = 1/2). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é cromato- grafado (SiO2, Hexano/AcOEt =1/1), desse modo obtendo o produto deseja- do (0,018 g, 0,050 mmol, 97%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1H, J =8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.88 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.56 (s, 1H, H-14), 7.51 (d, 1H, 1Jhf = 60.4 Hz, H-5), 5.69 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.25 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.87 (br s, 1H, OH), 1.98-1.78 (m, 2H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3l 100 MHz) δ 173.3, 157.7, 151.2, 151.2, 150.2, 144.2, 133.8, 131.9, 130.0, 129.0, 128.5, 127.8, 126.4, 121.6, 98.9, 93.7 (d, 1Jcf = 214.0 Hz, C-5), 72.5, 66.1, 31.6, 7.8.

Exemplo XXII - Preparação de 5-N3-20-QTES-camptotecina

Camptotecina 20-OTES (0,100 g, 0.216 mmol) é dissolvida em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte, em seguida resfria- da para uma temperatura de -78°C e uma solução de LiHMDS a 1,0 M em THF (0,260 mL, 0,260 mmol) é desprendida da mesma. Após 20 min, tosil azida (TsN3) (0,055 g, 0,281 mmol) em THF anidrido (2 mL) é adicionada. Após 2 h a -78°C, temperatura é deixada subir para 25°C e o desapareci- mento do reagente é monitorado por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1). Formação de dois diastereisômeros é observada. Após 2h 30 min em temperatura am- biente, a reação é resfriada bruscamente pela adição de NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (3x15 mL) e As fases orgânicas são combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resí- duo, consistindo em dois diastereoisômeros, é purificado por cromatografia (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/1, em seguida 2/1 e finalmente 1/1), desse modo obtendo (0,106 g, 0,210 mmol, 97%) de uma mistura dos dois isômeros (ra- zão dos isômeros 1:1) como um sólido amarelo pálido. Os dois isômeros são separados por cromatografia adicional. A fim de precipitação:

1o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1H, Ar, H-7), 8.25 (d, IH1J= 8.4 Hz1 Ar), 7.95 (d, 1H,J = 8.4 Hz1 Ar), 7.86 (t, 1H,J = 8.4 Hz1 Ar), 7.68 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.49 (s, 1H, H-14), 6.97 (s, 1H, H-5), 5.65 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.26 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.01-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.94 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.6, 158.3, 152.2, 150.8, 150.0. 144.0. 132.9, 131.4, 130.1, 128.6, 128.3, 128.2, 128.1, 120.8, 98.7, 75.4, 75.2, 65.7, 33.1, 7.9, 7.2, 6.4.

2o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.95 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.86 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.46 (s, 1H, H-14), 6.99 (s, 1H, H-5), 5.66 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.02-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.94 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.4, 158.4, 152.3, 150.9, 150.0, 144.0, 132.9, 131.4, 130.1, 128.6, 128.3, 128.2, 128.1, 120.8, 98.7, 75.3, 75.1, 65.8, 33.3, 7.9, 7.2, 6.4.

Exemplo XXIII - Preparação de 5-N3-20-QH-camptotecina 1° diastereômero

O diastereômero 1 de 5-N3-20-OTES-camptotecina (0,070 g, 0,139 mmol) é dissolvido em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfe- ra inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,170 mL, 1,016 mmol) é despren- dido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 26 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexa- no/AcOEt =1/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (S1O2, Hexano/AcOEt = 1/1), desse modo ob- tendo o produto desejado (0,053 g, 0,136 mmol, 98%) como um sólido ama- relo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.44 (s, 1H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.93 (d, 1H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.85 (t, 1H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.67 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.63 (s, 1H, H-14), 6.97 (s, 1H, H-5), 5.70 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.29 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 3.99 (br s, 1H, OH), 2.00-1.84 (m, 2H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.6, 158.3, 150.8, 150.7, 149.8, 144.4, 133.1, 131.5, 129.9, 128.6, 128.3, 128.3, 128.1, 120.6, 98.6, 75.4, 72.7, 66.0, 31.5, 7.8. Exemplo XXIV - Preparação de 5-N3-camptotecina 2° diastereômero

O diastereômero 2 de 5-N3-20-OTES-camptotecina (0,055 g, 0,109 mmol) é dissolvido em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfe- ra inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,135 mL, 0,820 mmol) é despren- dido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 26 h em temperatura ambiente, monitorando o desaparecimento do reagente de partida por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purifi- cado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), desse mo- do obtendo o produto desejado (0.042 g, 0.107 mmol, 98%) como um sólido amarelo pálido.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1H, Ar, H-7), 8.23 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.95 (d, 1H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.85 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.60 (s, 1H, H-14), 7.00 (s, 1H, H-5), 5.74 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.28 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 3.86 (br s, 1H, OH), 1.98-1.82 (m, 2H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.4, 158.4, 150.9, 150.7, 149.8, 144.5, 133.0, 131.5, 129.9, 128.6, 128.4, 128.3, 128.1, 120.6, 98.6, 75.3, 72.6, 66.1, 31.6, 7.8. Exemplo XXV - Preparação de 5-NH?-camptotecina

O diastereômero 2 de 5-N3-20-OH-camptotecina (0,050 g, 0,129 mmol) é dissolvido em uma mistura de THF anidrido (1.5 mL) e MeOH ani- drido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente é adi- cionado com Pd/C (14 mg ~ 10%) e dois ciclos in vácuo /H2 (H2 pressão por balão) são realizados. A mistura de reação é reagida por 3 h em temperatura ambiente monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/3) o desaparecimento do

reagente, em seguida filtrada através de Celite e lavada com CH2CI2 (2x15

1

mL). O solvente é evaporado a vácuo. Espectroscopia de H NMR do bruto da reação descreve a presença de produto desejado como uma mistura 1:1 de dois epímeros na posição C5. Cromatografia instantânea (SiO2, CH2CI2/MeOH = 35/1 em seguida 25/1) permite a recuperação da mistura dos dois diastereômeros (0,046 g, 0,126 mmol, 98%).

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.48 (s, 1H, Ar1 H-7), 8.22-8.17 (m, 1H, Ar), 7.95-7.90 (m, 1H, Ar), 7.85-7.78 (m, 1H, Ar), 7.68-7.60 (m, 1H, Ar), 7.58 (s, 0.5 Η, Η-14), 7.54 (s, 0.5 Η, Η-14) 6.50 (s, 0.5 Η, Η-5), 6.47 (s, 0.5 Η, Η-5), 5.74-5.64 (m, 1Η, Η-17), 5.28-5.22 (m, 1Η, Η-17), 4.00-2.40 (br s, 3 Η, OH + NH2), 1.98-1.82 (m, 2Η, Η-19), 1.07-1.01 (m, 3 Η, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.8 (2 C), 158.5 (2 C), 151.2 (2 C), 150.4 (2 C), 149.7 (2 C), 144.5 (2 C), 132.7 (2 C), 131.0 (2 C), 129.8 (2 C), 128.5 (2 C), 128.3 (2 C), 128.0 (2 C), 127.8 (2 C), 120.2 (2 C), 113.8 (2 C), 97.7 (2 C), 72.7 (2 C), 66.3, 66.0,31.5(2 C), 7.8, 7.8.

Exemplo XXVI - 5-di-t-Butoxicarbonilhidrazino-20-QTES-camDtotecina

Camptotecina 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) é dissolvida em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte, em seguida resfria- da para uma temperatura de -78°C e uma solução de LiHMDS a 1,0 M em THF (0,281 mL, 0,281 mmol) é desprendida da mesma. Após 20', dicarboxi- Iato de di-terc-butilazo (DTBAC) (0,075 g, 0,324 mmol) em THF anidrido (2 mL) é adicionado. Após 4 h em -78°C, o desaparecimento do reagente é monitorado por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1). Formação de dois diastereisô- meros é observada. A reação é resfriada bruscamente pela adição de NH4CI saturado. A fase aquosa é extraída com CH2CI2 (3 χ 15 mL) e as fases orgâ- nicas são combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vá- cuo. O resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexa- no/AcOEt = 3/1), desse modo obtendo uma mistura dos dois isômeros (0.145 g, 0.210 mmol, 97%). Os dois isômeros são separados por cromato- grafia adicional. A fim de precipitação:

1o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.80 (br s, 1H, Ar), 8.23 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 8.01 (br d, 1H, Ar), 7.90-7.71 (m, 2H, Ar), 7.70-7.45 (m, 2H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1H, H-5), 5.61 (d, 1H,J = 16.8 Hz, H-17), 5.23 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.03-1.81 (m, 2H, H-19), 1.79-1.08 (br s, 18 H), 1.06-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.7, 157.8, 155.5, 155.5, 152.0, 152.0, 151.2, 149.4, 145.0, 132.1, 130.6, 130.0, 128.7, 128.4, 127.9, 119.9, 98.2, 82.7, 81.5, 79.7, 75.2, 65.7, 33.2, 28.3, 27.6, 7.7, 7.2, 6.4.

2o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.79 (br s,1 H, Ar), 8.23 (d, 1H, J = 8.4 Hz1 Ar), 8.01 (br d, 1H, Ar), 7.85-7.76 (m, 2H, Ar), 7.65 (br t, 1H, J = 8.4 Hz1 Ar), 7.52 (s, 1H, H-14), 6.54 (br s, 1H, H-5), 5.61 (d, 1H, J= 16.8 Hz1 H-17), 5.22 (d, IHtJ= 16.8 Hz1 H-17), 2.03-1.82 (m, 2H, H-19), 1.76-1.08 (br s, 18 H), 1.04-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.5, 157.9, 155.5, 155.5, 152.3, 152.0. 151.2,

149.4, 145.1, 132.1, 130.6, 130.0, 128.7, 128.4, 127.9, 119.9, 98.2, 82.9, 81.5, 79.6, 75.2, 65.8, 33.3, 28.3, 27.4, 7.8, 7.2, 6.4.

Exemplo XXVII - Preparação de 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-QH- camptotecina 1° diastereômero

5-di-í-Butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,050 g, 0,072 mmol) primeiro diastereômero é dissolvido em THF anidrido (4 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,088 ml_, 0,542 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 35 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 3/2). O solvente é evaporado a vácuo e o re- síduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/2), desse modo obtendo o composto desejado (0.041 g, 0.071 mmol, 98%) como um sólido amarelo pálido.

O produto é adicionalmente purificado por cristalização a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.77 (br s, 1H, Ar), 8.16 (br d, 1H, J

= 8.0 Hz, Ar), 7.97 (br s, 1H, Ar), 7.86-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.51 (br s, 1H, H-5),

5.66 (d, 1H, J = 16.4 Hz1 H-17), 5.24 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.86 (br s, 1H, OH), 2.00-1.80 (m, 2H, H-19), 1.79-1.13 (br s, 18 H), 1.03 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3l 100 MHz) δ 173.7, 157.9, 155.5, 155.5, 152.1,

151.3, 150.7, 149.6, 145.7, 132.3, 130.7, 129.9, 128.7, 127.9, 127.6, 120.0, 97.9, 82.8, 81.6, 79.7, 72.7, 66.1, 31.8, 28.3, 27.7, 7.7. Exemplo XXVIII - Preparação de 5-di-f-butoxicarbonilhidrazino-20-QH- camptotecina 2° diastereômero

5-di-f-Butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,050 g, 0,072 mmol) 2o diastereômero é dissolvido em THF anidrido (4,5 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,088 mL, 0,542 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 35 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 3/2). O solvente é evaporado a vácuo e o resí- duo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/2), desse modo obtendo o composto desejado (0,040 g, 0,069 mmol, 96%) co- mo um sólido amarelo pálido.

O produto é adicionalmente purificado por cristalização a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.79 (br s, 1H, Ar), 8.22 (br d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.99 (br s, 1H, Ar), 7.88-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.53 (br s, 1H, H-5), 5.65 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.26 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.80 (br s, 1 Η, OH), 2.00-1.80 (m, 2H, H-19), 1.79-1.13 (br s, 18 H), 1.03 (t, 3 H, J = 7.2 Hz1 Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.6, 157.9, 155.4, 155.4, 152.1, 151.3, 150.8, 149.5, 145.6, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7, 127.9, 127.8, 119.8, 98.0, 83.0, 81.5, 79.7, 72.7, 66.3, 31.8, 28.3, 27.7, 7.8. Exemplo XXIX - Preparação de 5-dibenziloxicarbonilidrazino-20-QTES- camptotecina

Camptotecina 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) é dissolvida em THF anidrido (6 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, em seguida resfria- da uma temperatura de -78°C e uma solução de 1.0 M LiHMDS em THF (0,281 mL, 0,281 mmol) é desprendida da mesma. Após 20', dibenzyl azodi- carboxylate (0.097 g, 0.324 mmol) em THF anidrido (2 mL) is added. Após 3 h em -78°C, temperatura é deixada subir para 25°C e o desaparecimento do reagente é monitorado por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1). Formação de dois diastereisômeros é observada. Após 90 min em temperatura ambiente, a reação é resfriada bruscamente pela adição de NH4CI saturado. A fase a- quosa é extraída com CH2CI2 (3x15 mL) e as fases orgânicas são combi- nadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 4/1 then 7/2), desse modo obtendo um sólido amarelo pálido (0.161 g, 0.212 mmol, 98%). Os dois isômeros são separados por cromatografia adicional. A fim de precipitação:

1o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.70 (br s, 1H, Ar), 8.39 (br s 1 Η, Ar), 8.22 (br d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.83 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.64- 7.00 (m, 11 H, Ar + H-14), 6.49 (br s, 1H, H-5), 5.57 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H- 17), 5.47-4.44 (m, 5 H), 1.98-1.82 (m, 2H, H-19), 1.02-0.89 (m, 12 H), 0.80- 0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.6, 158.0. 156.3, 156.3, 153.0, 152.2, 151.0, 149.6, 144.8, 135.3, 132.1, 130.6, 130.0, 128.6-127.8 (11 C), 119.9, 98.4, 79.5, 75.2, 68.4, 67.9, 65.6, 33.0. 7.9, 7.2, 6.4.

2o diastereômero: 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.85 (br s, 1H, Ar), 8.58 (br s 1 H, Ar), 8.20 (br s, 1H, Ar), 7.93 (br s, Ar), 7.81 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.63 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.56-6.90 (m, 11 H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1H, H-5), 5.55 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.44-4.71 (m, 5 H), 1.98-1.80 (m, 2H, H-19), 1.05-0.90 (m, 12 H), 0.81-0.70 (m, 6 H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.5, 157.9, 156.4, 156.4, 152.9, 152.4, 150.9, 149.4, 144.8, 135.3, 132.1, 130.6, 129.9, 128.6-127.8 (11 C), 119.9, 98.5, 79.3, 75.2, 68.4, 67.8, 65.6, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4.

Exemplo XXX - Preparação de 5-dibenziloxicarbonilhidrazino-20-QH- camptotecina 1° diastereômero

5-Dibenziloxicarbonilidrazino-20-OTES-camptotecina 1o diaste- reômero (0.140 g, 0.184 mmol) é dissolvido em THF anidrido (6 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0.225 mL, 1,380 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 52 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (Hexano/AcOEt = 1/3). O solvente é evaporado a vácuo e o resí- duo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt =1/1 então 2/3), desse modo obtendo (0.113 g, 0.175 mmol, 95%) como um sóli- do amarelo pálido. O produto é adicionalmente purificado por cristalização a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.67 (br s, 1H, Ar), 8.39 (br s 1 H, Ar), 8.12 (br d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br s, 1H, Ar), 7.74 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65-6.66 (m, 12H, Ar + H-14), 6.48 (br s, 1H, H-5), 5.55 (d, 1H, J = 16.0 Hz1 H-17), 5.42-4.44 (m, 5 H), 3.86 (br s, 1H, OH), 1.92-1.72 (m, 2H, H- 19), 0.95 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.5, 158.0, 156.2, 156.0, 153.0, 150.9, 150.9, 149.5, 145.3, 135.4, 132.2, 130.7, 129.8, 128.7-127.8 (11 C), 119.9, 98.2, 79.6, 72.7, 68.5, 68.0, 65.9, 31.6, 7.8. Exemplo XXXI - Preparação de 5-dibenziloxicarbonilhidrazino-20-QH- camptotecina 2° diastereômero 5-Dibenziloxicarbonilidrazino-20-OTES-camptotecina 2o diastereômero (0.140 g, 0.184 mmol) é dissolvido em THF anidrido (6 ml_) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0.150 ml_, 0.921 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 55 h em tempe- ratura ambiente, monitorando por TLC o desaparecimento do reagente (He- xano/AcOEt = 3/2). O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), desse modo ob- tendo o composto desejado (0.113 g, 0.175 mmol, 95%) como um sólido amarelo pálido. O produto é adicionalmente purificado por cristalização a partir de CH2CI2/Pentano = 1/50. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8.71 (br s, 1H, Ar), 8.34 (br s 1 H,

Ar), 8.18 (br s, 1H, Ar), 7.94 (br s, 1H, Ar), 7.79 (br t, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.70-6.70 (m, 12H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1H, H-5), 5.53 (d, 1H, J = 16.4 Hz1 H-17), 5.44-4.48 (m, 5 H), 3.87 (br s, 1H, OH), 1.90-1.70 (m, 2H, H-19), 0.99 (t, 3 H,J = 7.6 Hz, Me). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.4, 158.0, 156.3, 156.1, 153.0. 151.0. 150.9, 149.6, 145.3, 135.5, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7, 127.8 (11 C), 119.8, 98.4, 79.5, 72.7, 68.5, 67.8, 66.0. 31.6, 7.7. Exemplo XXXII - Preparação de 20-QTES-Gimatecan

Gimatecan (0,040 g, 0,089 mmol) é dissolvido em dimetil forma- mida anidrido (4 ml_), sob atmosfera inerte , e adicionado com imidazol (0,030 g, 0,445 mmol). A mistura é agitada por 10' minutos, subseqüente- mente cloreto de trietil silila (TES-CI) (0,060 mL, 0,358 mmol) é desprendido do mesmo, seguido por 4-dimetilaminopiridina (DMAP) (0,01 1 g 0,089 mmol). Após 75 h, a mistura de reação é evaporada a vácuo, monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1) o completo desaparecimento do reagente. O sólido é subseqüentemente redissolvido em CH2CI2 e H2O e NH4CI saturado, a fase aquosa é extraída com CH2CI2 (3X10 mL). O resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt =1/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,048 g, 0,085 mmol, 95%) como um sólido amarelo, (mixture E/Z = 70130).

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9.02 (s, 1H, CH=N E) 8.29 (d, 1H, J = 8.42 Hz1 Ar, H-12E + H-12Z), 8.23 (d, 1H, J = 7.6 Hz1 H-9E), 8.00 (s, 1H, CH=N Z), 7.99 (d, 1H, J = 7.6 Hz1 H-9Z), 7.83 (t, 1H, J = 7.4 Hz1 H-11E + H- 11Z), 7.68 (t, 1H, J = 7.4 Hz1 H-10E + H-10Z), 7.57 (s, 1H, H-14E+ H-14Z, 5.67 (d, 1H, J = 16.4 Hz1 H-17E + H-17Z), 5.43 (s, 2H, H-5E), 5.26 (d, 1H, J = 16.4 Hz1 H-17E), 5.25 (d, 1H, J= 16.4 Hz1 H-17Z), 5.20 (s, 2H, H-5Z), 2.00- 1.84 (m, 2H, H-19E+ H-19Z), 1.50 (s, 9 H, OtBuE), 1.35 (s, 9 H, OtBUZ), 1.02- 0.94 (m, 12H, E + Z), 0.80-0.70 (m, 6H, E + Z). 13NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 171.9 (Ε + Ζ, C-21), 157.5 (Ε + Ζ, C-16a), 152.5 (Ε), 152.3 (Ζ), 151.3 (Ε + Ζ), 149.7 (Ε), 149.0 (Ζ), 145.7 (Ε + Ζ), 142.2 (CH=N Ε), 139.4 (CH=N Ζ), 132.9 (Ε), 132.1 (Ζ), 130.9 (Ε, CH, Ar), 130.6 (Ζ, CH, Ar), 130.3 (Ζ, CH; Ar), 130.1 (Ε, CH, Ar), 128.1 (Ε + Ζ, CH1 Ar), 125.6 (Ζ), 125.4 (Ε), 124.7 (Ζ, CH, Ar), 122.8 (Ε, CH, Ar), 119.1 (Ζ), 118.9 (Ε), 98.3 (Ζ, C-14), 98.1 (Ε, C- 14), 81.4 (Ε, OC(CH3)3), 81.2 (Ζ, OC(CH3)3), 75.3 (Ε + Ζ, C-20), 66.0 (Ε + Ζ, C- 17), 52.7 (Ε, C-5), 51.2 (Ζ, C-5), 33.3 (Ε, C-19), 33.2 (Ζ, C- 19), 27.6 (OC(CH3)3 Ε), 27.5 (OC(CH3)3 Ζ), 7.9 (Ε+Ζ C-18), 7.2 (Ε+Ζ), 6.4 (Ε+Ζ). Exemplo XXXIII - Preparação de 20-QTES-Tio-Gimatecan Gimatecan 20-OTES (0,080 g, 0,143 mmol) é dissolvido em xile-

no anidrido (6 ml_) sob agitação e atmosfera inerte. Subseqüentemente, Re- agente de Lawesson (LR), (0,087 g, 0,214 mmol) é adicionado, e a reação é aquecida a 90°C. A mistura de reação é reagida por 18 h 90°C, monitorando por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1) o desaparecimento do reagente. O solvente é evaporado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 4/1), desse modo obtendo o produto desejado (0,060 g, 0,102 mmol, 71%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9.06 (s, I H1 CH=N E) 8.33 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar, H-12E), 8.27 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H-9E), 8.02 (s,l Η, H-14 E), 7.87 (t, 1H, J = 7.4 Hz, H-11E), 7.73 (t, 1H, J = 7.4 Hz, H-10E), 7.57 (s, 1H, H-14E + H-14Z), 6.18 (d, 1H, J = 17.2 Hz, H-17E), 5.73 (s, 2H, H-5E), 5.35 (d. 1 H, J = 17.2 Hz, H-17E), 1.93 (q, 2H, J = 7.2 Hz, H-19E), 1.55 (s, 9 H, OtBUΕ), 1.06-0.92 (m, 12Η, Ε), 0.82-0.72 (m, 6Η, Ε). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 172.4, 171.5, 151.8, 149.8, 148.0, 146.9, 141.9, 132.3, 131.0, 130.7, 130.3, 128.4, 125.6, 125.1, 122.9, 104.3, 81.8, 75.0, 68.9, 59.2, 33.6, 27.6, 7.8, 7.2, 6.5.

Exemplo XXXIV - Preparação de Tio-Gimatecan

Tio-Gimatecan 20OTES (0,060 g, 0,104 mmol) é dissolvido em THF anidrido (8 mL) com agitação sob atmosfera inerte, subseqüentemente Et3N*3HF (0,127 mL, 0,780 mmol) é desprendido do mesmo. A mistura de reação é reagida por 18 h em temperatura ambiente, monitorando por TLC (CH2CL2/MeOH = 25/1) o desaparecimento do reagente. O solvente é eva- porado a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, Hexano/AcOEt = 211), desse modo obtendo o produto desejado (0.048 g, 0.102 mmol, 95%) como um sólido amarelo intenso.

1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9.02 (s, 1H, CH=N E) 8.28 (d, 1H, J = 8.42 Hz, Ar, H-12E + H-12Z), 8.23 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H-9E), 8.09 (brs, 1H, H-14E + H-14Z), 8.08 (s,1 H, CH=NZ), 8.04 (d, 1H, J= 7.6 Hz1 H-9Z), 7.85 (t, 1H, J = 7.4 Hz, H-11E + H-11Z), 7.70 (t, 1H, J = 7.4 Hz, H-IOE + H-10Z), 6.26 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17E), 6.24 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17Z), 5.67 (s, 2H, H-5E), 5.51 (s, 2H, H-5Z), 5.37 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17E + H-17Z), 3.87 (br s, 1H, OH), 1.89 (q, 2H, H-19E + H-19Z), 1.55 (s, 9H, OtBuZ), 1.42 (s, 9H, OtBu Z), 1.03 (t, 3 H,J = 7.2 Hz, H-18 Z), 1.02 (t, 3 H, J = 7.2 Hz, H- 18 E). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) δ 173.5, 172.5, 151.7, 149.7, 148.4, 145.2, 141.9 (CH=N Ε), 139.0 (CH=N Ζ), 132.3, 130.8, 130.6, 130.5, 128.5, 125.5, 125.0, 122.9, 104.0, 81.8, 72.3, 69.3, 59.2, 32.1, 27.6, 7.7. Exemplo XXXV - Ensaio de inibicão de crescimento de célula

Células H460 de tumor de pulmão de célula grande de humano foicultivada em meio RPMI-1640 contendo 10% de soro de bezerro fetal. A sensibilidade da célula foi determinada pelo ensaio de inibição de crescimen- to de célula após 1 ou 72 h de exposição ao fármaco. As células em cresci- mento logarítmico foram coletadas e semeadas em duplicidade em placas de 6 cavidades. Vinte e quatro horas após semeadura, as células foram ex- postas aos fármacos e contadas com um contador Coulter 72 horas após exposição aos fármacos para a determinação de IC50S. IC50 é definido como a inibição de concentração por crescimento de célula de 50% comparada com crescimento de controles não tratados.

Exemplo XXXVI - Topoisomerase-I - Ensaio de ruptura dependente de DNA Rupturas de DNA foram determinadas usando um gel purificado

de DNA SV40 751-bp BamHI-EcoRI (Beretta GL1 Binaschi M, Zagni E, Ca- puani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Câncer Res 1999; 59:3689-97). Fragmentos de DNAforam apenas rotulados em 3'. A reação de ruptura de DNA (20,000 cpm/amostra) foi realizada em ml de 10 mM Tris-HCL (pH 7,6), 150 mM KCI, 5 mM MgCI2, 15 pg/mL BSA1 0,1 mM Tiotreitol, e a enzima recombinante humana (topo 1 de com- primento completo) por 30 min em 37°C. As reações foram bloqueadas u- sando 0,5% SDS e 0,3 mg/mL K de proteinase por 45 min. a 42°C. Persis- tência de dano de DNA foi testada em diferentes vezes adicionando NaCI a 0,6 M após 30 min. Incubação com 10 μΜ do fármaco. Após precipitação, DNA foi ressuspenso em tampão de desnaturação 80% formamida, NaOH a mM, EDTA a 0,01 M e 1 mg/mL corante) antes de semear em gel de desnaturação (7% poliacrilamida em tampão TBE). Todos os níveis de ruptu- re de DNA foram medidos por meio de um modelo Phospholmager 425 (Mo- lecular Dynamics) (Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti B, et al. Novel 7- oxyiminomethyl camptotecina derivatives with potent in vitro e in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001; 44:3264-74).

Persistência de danos de DNA (%)

Compostos Tempo (min) 0 1 5 10 Topotecan 100 65 20 10 Camptotecina 100 58 23 20 SN38 100 60 33 28 IDN 6070 100 33 10 10 IDN 6181 100 88 50 22 IDN 6156 100 100 80 60 IDN 6092 100 35 18 15

Claims

1. Compostos, caracterizados pelo fato de que apresentam a fórmula geral I: <formula>formula see original document page 33</formula> na qual R é F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -COOR', -CONR'R", -NHR'", -NR'R" em que R', R" e R'" podem ser H, alquila, arila, arilaquila, acila, alcoxicarbo- nila, ariloxicarbonila; R1 é alquila, aminoalquila, hidroxialquila, nitrila, alcoximino, ari- loximino, sililalquila; R2 é hidrogênio, hidroxila, alcóxi, aminoalquila; R3 é hidrogênio, hidroxila opcionalmente protegida, alcóxi, ami- noalquila, em que os grupos alquila, acila, alcóxi, aminoalquila, ou alcoxi- mino podem conter de 1 a 8 átomos de carbono, em uma cadeia linear ou ramificada, e os grupos arila e arilóxi podem conter de 5 a 10 átomos de carbono; os sais farmaceuticamente aceitáveis, enaciômeros, diastereô- meros dos mesmos e misturas correspondentes.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os grupos alquila, acila, alcóxi, aminoalquila, ou alcoximino contém de 1 a 4 átomos de carbono.

3. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em: a) tio-camptotecina; b) tio-homocamptotecina; c) tioSN38; d) tio-topotecan; e) tioirinotecan; f) tiogimatecan.

4. Processo para a preparação de compostos de fórmula (I), ca- racterizado pelo fato de que compreende as etapas mostradas no esquema I; em que: a) proteção de grupos precursores hidróxi; b) conversão do anel de piridona em anel de tiopiridona; c) remoção dos grupos de proteção Esquema I na qual R1 R1, R2 e R3 têm os significados descritos acima, e PG é um grupo de proteção OH-.

5. Processo para a preparação de compostos de fórmula (I), ca- racterizado pelo fato de que compreende as etapas mostradas no esquema II; em que: a) proteção dos grupos hidróxi precursores; b) derivação em 5 através da formação de uma carbaniona e reação com um reagente eletrolítico; c) transformação da carbonila 16a em tiocarbonila; d) desproteção dos grupos hidróxi; em que as etapas b) e c) podem ser revertidas e; Esquema Il <formula>formula see original document page 35</formula> na qual R1 R1, R2, e R3 têm os significados descritos acima, e PG é um grupo de proteção OH-.

6. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto da fórmula (I) junto com veículos farmaceutica- mente aceitáveis e excipientes.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que está na forma adequada para administração oral ou parenteral.

8. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou de uma composição, como definida na reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um fármaco para o tratamento de tumores.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o dito fármaco é usado para o tratamento de tumores sólidos e Ieu- cemias.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que os tumores sólidos e Ieucemias são selecionados de tumores do pulmão, ovário, mama, estômago, fígado, próstata, sarcomas de tecidos mo- les, esôfago, pâncreas, cabeça e pescoço, glioblastoma, Ieucemias mielocí- ticas crônicas e agudas.