MX2008008831A - Metodos para tratar dolor e inflamacion en tejidos neuronales usando antagonistas il-31. - Google Patents

Abstract

Se describe el uso de antagonistas para IL-31 que se usan para tratar la inflamación y dolor al inhibir, prevenir, reducir, minimizar, limitar o minimizar la estimulación en tejidos neuronales. Tales antagonistas incluyen anticuerpos y fragmentos, derivados, o variantes de los mismos. Los síntomas tales como dolor, picazón, sensibilización, hormigueo asociado con neuropatías se alivian.

Description

METODOS PARA TRATAR DOLOR E INFLAMACION EN TEJIDOS NEURONALES USANDO ANTAGONISTAS IL-31 DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El proceso inflamatorio activa el sistema nervioso causando dolor inflamatorio y una interrupción en la función motora. La estimulación de los nervios sensoriales produce vasodilatación y extravasión de plasma, lo que lleva a inflamación y estimulación neurogénica que provoca irritación sensorial, hipersensibilidad y dolor. La inflamación neurogénica es causada por la activación de terminales nociceptivas y termo-sensibles en tejidos y puede ser causada por afecciones naturales, tales como enfermedades autoinmunes, incluyendo alergia, por infección viral, asi como por lesión. La inflamación neurogénica de estas afecciones puede afectar el sistema somatosensorial, el cual consiste de varios receptores sensoriales responsables de sensaciones tales como presión, tacto, temperatura, dolor, comezón, cosquillas, hormigueo, y entumecimiento. Los nervios activados puede perpetuar la inflamación crónica al inducir la secreción de citoquinas, activar monocitos y quimiotaxis.

Las proteínas activas en la inflamación neurogénica pueden servir como objetivos para enfoques terapéuticos para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades. Un ejemplo de un fármaco usado para tratar dolor es REF..194231 Neurontina (gabapentina) , la cual se usa para tratar neuropatía periférica diabética como neuralgia post- erpática. Así, hay una necesidad de medicamento adicional para tratar dolor neuropático. Se proporcionan las siguientes definiciones para facilitar el entendimiento de las invenciones descritas en la presente . El término "anticuerpo" o "péptidos de anticuerpo" se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento enlazado al mismo que compite con el anticuerpo intacto para enlace específico e incluye anticuerpos quiméricos, humanizados, completamente humanos, y biespecífieos . En ciertas modalidades, los fragmentos enlazados se producen por técnicas de ADN recombinante . En modalidades adicionales, los fragmentos enlazados se producen por desdoblamiento enzimático o químico de anticuerpos intactos. Los fragmentos enlazados incluyen, pero no se limitan a, Fab, Fab' , F (ab' ) . sub.2 , Fv, y anticuerpos de cadena sencilla. El término "anticuerpo aislado" se refiere a un anticuerpo que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural . Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interfieren con los usos de diagnóstico o terapéuticos para del anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteínicos y no proteínicos . En modalidades, el anticuerpo se purifica (1) a más del 95% por peso del anticuerpo como se determina por el método Lowry, e incluyendo más de 99% por peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de terminal N o secuencia de aminoácido interno al usar un secuenciador de taza giratoria, o (3) a la homogeneidad por SDS-PAGE bajo afecciones reducidas o no reducidas usando azul Coomassie o, preferiblemente, teñido de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del ambiente natural de los anticuerpos no se presentaría. Ordinariamente, sin embargo, el anticuerpo aislado se prepara por al menos una etapa de purificación . Un anticuerpo de "variante" anti-IL-31, se refiere en la presente a una molécula que difiere en la secuencia de aminoácido de una secuencia de aminoácido del anticuerpo anti-IL-31 "precursor" en virtud de adición, eliminación y/o substitución de uno o más residuos de aminoácidos en la secuencia del anticuerpo precursor. En una modalidad, la variante comprende una o más substituciones de aminoácido en una o más regiones hipervariables del anticuerpo precursor. Por ejemplo, la variante puede comprender al menos uno, por ejemplo desde alrededor de uno hasta alrededor de diez, y desde alrededor de dos hasta alrededor de cinco, substituciones en una o más regiones hipervariables del anticuerpo precursor. Ordinariamente, la variante tiene una secuencia de aminoácido que tiene al menos 75% de identidad de secuencia de aminoácido con las secuencias de dominio variables de cadena ligera o pesada del anticuerpo precursor, más preferiblemente al menos 80%, más preferiblemente al menos 85%, más preferiblemente al menos 90%, y más preferiblemente al menos 95%. La identidad u homología con respecto a esta secuencia se define en la presente como el porcentaje de residuos de aminoácido en la secuencia candidato que son idénticos con los residuos del anticuerpo precursor, después de alinear las secuencias e introducir espacios, si es necesario, para lograr el porcentaje máximo de identidad de secuencia. Ninguno de la terminal N, terminal C, o extensiones internas, eliminaciones, o inserciones en la secuencia del anticuerpo deberán construirse como que afecten la identidad u homología de secuencia. La variante mantiene la capacidad para enlazar IL-31 humano y preferiblemente tiene propiedades que son superiores a aquellas del anticuerpo precursor. Por ejemplo, la variante puede tener una afinidad de enlace más fuerte, capacidad aumentada para inhibir la estimulación inducida por IL-31 de células inmunes. Para analizar tales propiedades, deberá compararse una forma Fab de la variante a una forma Fab del anticuerpo precursor o una forma de longitud completa de la variante a una forma de longitud completa del anticuerpo precursor, por ejemplo, ya que se ha encontrado que el formato del anticuerpo anti-IL-31 impacta su actividad en los ensayos de actividad biológica descritos en la presente. El anticuerpo variante de interés particular en la presente es un que muestra al menos alrededor de 10 veces, preferiblemente al menos alrededor de 20 veces, y más preferiblemente al menos alrededor de 50 veces, aumento en la actividad biológica cuando se compara al anticuerpo precursor. El término "anticuerpo precursor" como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo que se codifica por una secuencia de aminoácido usada para la preparación de la variante. Preferiblemente, el anticuerpo precursor tiene una región de estructura humana y, si se presenta, tiene regiones constantes de anticuerpo humano. Por ejemplo, el anticuerpo precursor puede ser un anticuerpo humanizado o humano. El término "agonista" se refiere a cualquier compuesto incluyendo una proteína, polipéptido, péptido, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, molécula grande, o molécula pequeña (menos de 10 kD) , que incrementa la actividad, activación o función de otra molécula. Los agonistas IL-31 provocan, por ejemplo: estimulación de células NK, subconjuntos de células T y subconjuntos de células B y células dendríticas. El término "antagonista" se refiere a cualquier compuesto incluyendo una proteína, polipéptido, péptido, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, molécula grande, o molécula pequeña (menos de 10 kD) , que disminuye la actividad, activación o función de otra molécula. Los antagonistas IL-31 causan: función inmune disminuida de células NK, subconjuntos de célula T y subconjuntos de célula B y células dendriticas ; enlazar IL-31 de tal manera que la interacción de la proteína IL-31 se bloquea, inhibe, reduce, antagoniza o neutraliza. Un "anticuerpo bivalente" diferente a un anticuerpo "multiespecífico" o "multifuncional" , en ciertas modalidades, se entiende que comprende sitios de enlace que tienen especificidad antigénica idéntica. Un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" es un anticuerpo híbrido que tiene dos pares de cadena ligera/pesada diferentes y dos sitios de enlace diferentes. Los anticuerpos biespecífieos pueden producirse por una variedad- de métodos incluyendo, pero no limitado a, fusión de hibridomas o ligaduras de fragmentos Fab' . Ver, por ejemplo, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp . Immunol . 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J . Immunol . 148 : 1547-1553 (1992). El término "anticuerpo quimérico" o "anticuerpos quiméricos" se refiere a anticuerpo cuyos genes de cadena ligera o pesada se han construido, típicamente por ingeniería genética, de genes de región constante y variable de inmunoglobulina pertenecientes a especies diferentes. Por ejemplo, los segmentos variables de los genes de un anticuerpo monoclonal de ratón pueden unirse a segmentos constantes humanos, tales como gamma 1 y gamma 3. Un anticuerpo quimérico terapéutico típico es así una proteína híbrida compuesta de la variable o dominio enlazado al antígeno de un anticuerpo de ratón y el dominio constante de un anticuerpo humano, aunque pueden usarse otras especies de mamíferos . El término "epítopo" incluye cualquier determinante de proteína capaz del enlace específico a una inmunoglobulina o receptor de célula T. Las determinantes epitopicas usualmente consisten de agrupaciones de superficie químicamente activas de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y usualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Más específicamente, el término "epítopo IL-31" como se usa en la presente se refiere a una porción de un polipéptido IL-31 que tiene actividad antigénica o inmunogénica en un animal, preferiblemente en un mamífero, y más preferiblemente en un ratón o un humano. Un epítopo que tiene actividad inmunogénica es una porción de un polipéptido IL-31 que produce una respuesta de anticuerpo en un animal. Un epítopo que tiene actividad antigénica es una porción de un polipéptido IL-31 al cual un anticuerpo se enlaza inmunoespecíficamente como se determina por cualquier método bien conocido en la técnica, por ejemplo, por inmunoensayos .

Los epítopos antigénicos no necesitan necesariamente ser inmunogénicos . El término "epítopo etiquetado" cuando se usa en la presente se refiere al anticuerpo anti-IL-31 fusionado a una "etiqueta de epítopo" . El polipéptido de etiqueta de epítopo tiene residuos suficientes para proporcionar un epítopo contra el cual se puede hacer un anticuerpo, aún es suficientemente corto de tal manera que no interfiere con la actividad del anticuerpo IL-31. La etiqueta de epítopo preferiblemente es suficientemente única de manera que el anticuerpo no está substancialmente en una reacción cruzada con otros epítopos. Las polipéptidos de etiqueta adecuados generalmente tienen al menos 6 residuos de aminoácidos y usualmente entre alrededor de 8-50 residuos de aminoácido (preferiblemente entre alrededor de 9-30 residuos) . Los ejemplos incluyen el polipéptido de etiqueta HA flu y su anticuerpo 12CA5 (Field et al. Mol. Cell. Biol . 8:2159-2165 (1988)); la etiqueta c-myc y los anticuerpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 y 9E10 de esta (Evan et al., Mol. Cell. Biol. 5{12) :3610-3616(1985)); y la etiqueta de glicoproteína D del virus de Herpes Simple (gD) y su anticuerpo (Paborsky et al., Protein Engineering 3 ( 6 ): 547-553 ( 1990 )) . En ciertas modalidades, el epítopo etiquetado es un "epítopo enlazado al receptor de salvamento". Como se usa en la presente, el término "epítopo enlazado al receptor de salvamento" se refiere a un epítopo de la región Fe de una molécula IgG (por ejemplo, IgGi, IgG2, IgG3, o IgG4) que es responsable de incrementar la vida media del suero in vivo de la molécula IgG. El término "fragmento" como se usa en la presente se refiere a un péptido o polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de al menos 5 residuos contiguos de aminoácido, al menos 10 residuos contiguos de aminoácido, al menos 15 residuos contiguos de aminoácido, al menos 20 residuos contiguos de aminoácido, al menos 25 residuos contiguos de aminoácido, al menos 40 residuos contiguos de aminoácido, al menos 50 residuos contiguos de aminoácido, al menos 60 residuos contiguos de aminoácido, al menos 70 residuos contiguos de aminoácido, al menos 80 residuos contiguos de aminoácido, al menos 90 residuos contiguos de aminoácido, al menos 100 residuos contiguos de aminoácido, al menos 125 residuos contiguos de aminoácido, al menos 150 residuos contiguos de aminoácido de la secuencia de aminoácidos de un polipéptido IL-31 o un anticuerpo que enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido IL-31. Como se usa en la presente, el término "inmunoglobulina" se refiere a una proteína que consiste de uno o más polipéptidos substancialmente codificados por genes de inmunoglobulina. Una forma de inmunoglobulina constituye la unidad estructural básica de un anticuerpo. Esta forma es un tetrámero y consiste de dos pares idénticos de las cadenas de inmunoglobulina, cada par tienen una cadena pesada y una ligera. En cada par, las regiones variables de cadena pesada y ligera son responsables en conjunto para enlazarse a un antígeno, y las regiones constantes son responsables para las funciones efectoras del anticuerpo. Las "cadenas ligeras" de inmunoglobulina de longitud completa se codifican por un gen de región variable en la terminal NH2 y un gen de región constante kappa o lambda en la terminal COOH. Las "cadenas pesadas" de inmunoglobulina de longitud completa, se codifican similarmente por un gen de región variable y uno de los otros genes de región constante antes mencionados (alrededor de 330 aminoácidos). Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta, o epsilon, y define el isotipo del anticuerpo como igG (incluyendo igGl, IgG4), IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Dentro de las cadenas pesadas y ligeras, las regiones variables y constantes se unen por una región "J" de alrededor de 12 o más aminoácidos, con la cadena pesada también incluyendo una región "D" de alrededor de 10 o más aminoácidos. (Ver generalmente, Fundamental Immunology (Paul, W. , ed. , 2nd ed. Raven Press, N. Y., 1989), Ch. 7 (incorporado para referencia en su totalidad) . Una región variable de cadena pesada o ligera de inmunoglobulina consiste de una región "de estructura" interrumpida por tres regiones hipervariables . Así, el término "región hipervariable" se refiere a los residuos de aminoácidos de un anticuerpo los cuales son responsables para enlazar al antígeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácidos de una "Región Determinada Complementaria" o "CDR" (Ver, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) y Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol . 196: 901-917) (de los cuales ambos se incorporan en la presente para referencia) . La "Región Estructural" o residuos "FR" son aquellos residuos de dominio variable diferentes a los residuos de región hipervariable como se definen en la presente. Las secuencias de las regiones estructurales de cadenas pesada o ligera diferentes son conservadas relativamente dentro de una especie. Así, una "región de estructura humana" es una región de estructura que es substancialmente idéntica (alrededor de 85% o más, usualmente 90-95% o más) a la región de estructura de una inmunoglobulina humana que se presenta naturalmente. La región de estructura de un anticuerpo, que es las regiones de estructura combinadas de los constituyentes de cadenas pesadas o ligeras, sirven para posicionar y alinear los CDRs . Los CDRs son responsables principalmente de enlazar a un epítopo de un antígeno. En consecuencia, el término inmunoglobulina "humanizada" se refiere a una i munoglobulina que comprende una región de estructura humana y uno o más CDRs de una inmunoglobulina no humana (usualmente un ratón o rata) . La inmunoglobulina no humana que proporciona los CDRs se llama el "donante" y la inmunoglobulina humana que proporciona la estructura se llama el "aceptante" . Las regiones constantes no se necesitan presentar, pero si están, deben ser substancialmente idénticas a regiones constantes de inmunoglobulina humana, es decir, al menos alrededor de 85-90%, preferiblemente alrededor de 95% o más idénticas. Por lo tanto, todas las partes de una inmunoglobulina humanizada, excepto posiblemente los CDRs, son substancialmente idénticas a las partes correspondientes de secuencias de inmunoglobulina humana naturales. Un "anticuerpo humanizado" es un anticuerpo que comprende una inmunoglobulina de cadena ligera humanizada y una de cadena pesada humanizada. Por ejemplo, un anticuerpo humanizado podría no abarcar un anticuerpo quimérico típico como se define anteriormente, por ejemplo, debido a que la región variable entera de un anticuerpo quimérico no es humana . Como se usa en la presente, el término "anticuerpo humano" incluye un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana e incluye anticuerpos aislados de colecciones de inmunoglobulina humana o de animales transgénicos para una o más inmunoglobulina humana y que no expresan inmunoglobulinas endógenas, como se describe, por ejemplo, por Kucherlapati et al. en Patente EUA No. 5,939,598. El término "anticuerpos genéticamente alterados" significa anticuerpos en donde la secuencia de aminoácidos ha sido variada de un anticuerpo nativo. Debido a la importancia de las técnicas de ADN recombinante en la generación de anticuerpos, una necesidad no se confina a las secuencias de aminoácidos encontradas en anticuerpos naturales; los anticuerpos pueden ser rediseñados para obtener características deseadas. Las variaciones posibles son muchas y está en el rango del cambio de solo uno o algunos aminoácidos al rediseño completo de, por ejemplo, la región variable o constante. Los cambios en la región constante, en general, se harán con objeto de mejorar o alterar características, tales como fijación del complemento, interacción con membranas y otras funciones efectoras. Los cambios en la región variable se harán con objeto de mejorar las características del antígeno enlazando. Además de los anticuerpos, las inmunoglobulinas pueden existir en una variedad de otras formas incluyendo, por ejemplo, cadena sencilla o Fv, Fab, y (Fab')2, así como diacuerpos, anticuerpos lineales, anticuerpos multivalentes o multiespecífieos híbridos (como se describe anteriormente y en detalle en: Lanzavecchia et al., Eur . J. Immunol . 17, 105 (1987)) y en cadenas simples (por ejemplo, Huston et al., Proc. Nati. Acad. Sci . U. S .A.. 85 5879-5883 (1988) y Bird et al., Science. 242:423-426 (1988), las cuales se incorporan en la presente para referencia) . (Ver, generalmente, Hood et al., "Immunology" , Benjamín, N.Y., 2a ed. (1984), y Hunkapiller and Hood, Nature . 323 : 15-16 (1986) , las cuales se incorporan en la presente para referencia) . Como se usa en la presente, los términos "Fv de cadena sencilla, " "anticuerpos de cadena sencilla, " "Fv" o "scFv" se refieren a fragmentos de anticuerpo que comprenden las regiones variables de tanto las cadenas ligeras como las pesadas, pero carecen de las regiones constantes, pero dentro de una cadena de polipéptido sencilla. Generalmente, un anticuerpo de cadena sencilla comprende un ligador de polipéptido entre los dominios VH y VL que permite formar la estructura deseada que podría permitir enlazar al antígeno. Los anticuerpos de cadena sencilla se describen en detalle por Pluckthun in The Pharmacology of onoclonal Antibodies, vol . 113, Rosenburg and Moore eds . Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); también ver Publicación de Solicitud de Patente E.U.A. No. WO 88/01649 y Patentes E.U.A. Nos. 4,946,778 y 5,260,203, las descripciones de las cuales se incorporan para referencia para cualquier propósito. En modalidades específicas, los anticuerpos de cadena sencilla también pueden ser bi-específieos y/o humanizados.

Un "fragmento Fab" está comprendido de una cadena ligera y el CHi y regiones variables de una cadena pesada. La cadena pesada de una molécula Fab no puede formar un enlace de disulfuro con otra molécula de cadena pesada. Un "fragmento Fab'" contiene una cadena ligera y una cadena pesada que contiene la mayoría de la región constante, entre los dominios CHi y CH2, de tal manera que un enlace de disulfuro intercadena puede formarse entre dos cadenas pesadas para formar una molécula F(ab')2. Un "fragmento F(ab')2" contiene dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas que contienen una porción de la región constante entre los dominios CHi y CH2, de tal manera que un enlace de disulfuro de intercadena se forma entre dos cadenas pesadas . El término "diacuerpos" se refiere a fragmentos de anticuerpos pequeños con dos sitios de enlace de antígeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena de polipéptido (VH-VL) . Al usar un ligador que es muy corto para permitir pares entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a formar pares con los dominios complementarios de otra cadena y crean dos sitios de enlace al antígeno. Los diacuerpos se describen más completamente en, por ejemplo, EP 404,097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Sci . USA 90: 6444-6448 (1993) . El término "anticuerpo lineal" se refiere a los anticuerpos descritos en Zapata et al. Protein Eng. 8(10) : 1057- 1062 (1995) . Brevemente, estos anticuerpos comprenden un par de segmentos Fd en tándem (VH-CHT.-VH-CHI) que forman un par de regiones enlazadas al antígeno. Los anticuerpos lineales pueden ser biespecí fieos o monoespecí fieos . El término "fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional" como se usa en la presente se refiere a un fragmento de polipéptido que contiene al menos los dominios variables de las cadenas de inmunoglobulina pesadas o ligeras. Un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional de la invención es capaz de enlazarse a un ligando, prevenir el enlace del ligando a sus receptores, interrumpir la respuesta biológica que resulta del enlace del ligando al receptor, o cualquier combinación de los mismos. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que se deriva de un clon sencillo, incluyendo cualquier clon eucariótico, procariótico , o fago, y no el método por el cual se producen. La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de las subunidades del receptor heterodimérico al cual enlazan IL-31, por ejemplo IL-3lRa y OSMRb, se expresan en células neuronales tales como células de ganglio de raíz posterior. Así la presente invención abarca el uso de antagonistas al IL-31 en inhibir dolor e inflamación y los síntomas de la enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, prurito, y dolor neurogénico y sensibilización. La presente invención abarca también el uso de agonistas IL-31 para mejorar la sensibilización a través de estimulación de las células de ganglio de raíz posterior.

El IL-31 es el nombre HUGO para una citoquina que se ha descrito previamente como Zcytol7rlig en una solicitud de patente EUA publicada (Ver solicitud de patente EUA publicada número 20030224487, Solicitud de patente EUA número de serie 10/352,554, presentada en Enero 21, 2003, Patente EUA ahora emitida Número 7,064,186; Sprecher, Cindy et al., 2003, incorporada en la presente para referencia) . El receptor heterodimérico para IL-31, comprende un heterodiméro formado entre el receptor IL-3lRa y receptor OncostatinM beta (OSMRb) . El lL-3lRa es el nombre HUGO para una proteína llamada zcytorl7 en la Solicitud de Patente EUA publicada en co-propiedad número 20030215838, Solicitud de patente EUA número de serie 10/351,157, presentada en Enero 21, 2003, incorporada en la presente para referencia. Las secuencias de polinucleótido y polipéptido para IL-31 humano se muestran en las SEQ ID NOs : 1 y 2, respectivamente. Las secuencias de polinucleótidos y polipéptidos para IL-31 murino se muestran en las SEQ ID NOs: 3 y 4, respectivamente. Como se usa en la presente el término, IL-31 significará zcytorl71ig como se usa en la Solicitud de Patente EUA número 20030224487, como se muestra anteriormente. El IL-3lRa se ha descrito previamente en la Solicitud de patente EUA en co-propiedad número de serie 09/892,949 presentada en Junio 26, 2001, la cual es incorporada en la presente para referencia. La secuencia de aminoácidos para el OSMR, y receptores IL-31RA indica que los receptores codificados pertenecen a la subfamilia del receptor de citoquina Clase I que incluyen, pero no se limitan a, los receptores para IL-2, IL-4, IL-7, Lif, IL-12, IL-15, EPO, TPO, GM-CSF y G-CSF (para una revisión ver, Cosman, "The Hematopoietin Receptor Superfamily" in Cytokine 5(2): 95-106, 1993). El receptor zcytorl7 se describe completamente en la Solicitud de Patente PCT en co-propiedad No. USO 1/20484 (publicación OMPI No. WO 02/00721; incorporada en la presente para referencia). La presente invención incluye el uso de anti-IL-31, incluyendo antagonistas, anticuerpos, proteínas enlazadas, variantes y fragmentos, que tienen actividad anti-IL-31. La invención incluye administrar al sujeto la molécula anti-IL-31 y contempla usos terapéuticos tanto humano como veterinario. Los sujetos veterinarios ilustrativos incluyen sujetos mamíferos, tales como animales de granja y animales domésticos . El polinucleótido nativo y secuencias de polipéptidos para la forma "larga" de IL-31RA se muestran en las SEQ ID NOs : 5 y 6, respectivamente. El polinucleotido y secuencias de polipéptidos nativos para la forma "corta" de IL-31RA se muestran en las SEQ ID NOs : 7 y 8, respectivamente. Las formas truncadas adicionales del polipéptido IL-31RA aparecen para ser expresadas naturalmente. Ambas formas codifican receptores IL-31RA solubles. Las secuencias de polinucleotido y polipéptido IL-31RA solubles "largas" se muestran en las SEQ ID NOs : 9 y 10, respectivamente. Las secuencias de polinucleotido y polipéptido IL-31RA solubles "cortas" se muestran en las SEQ ID NOs: 11 y 12, respectivamente. Las secuencias de polinucleotido y polipéptido nativas para IL-3 IRA de ratón se muestran en las SEQ ID NOs: 13 y 14, respectivamente. Las secuencias de polinucleotido y polipéptido nativas para OSMRbeta humano se muestran en las SEQ ID NOs: 15 y 16, respectivamente. Ver Solicitudes PCT WO 02/00721 y WO 04/003140, ambas de las cuales se incorporan para referencia. Los antagonistas IL-31 incluyen moléculas anti-IL31 tales como anticuerpos que enlazan IL-31, incluyendo, variantes, fragmentos o derivados del mismo y que inhiben, limitan, reducen, minimizan, previenen, o neutralizan el efecto que IL-31 tienen en el enlace de su receptor consanguíneo . El análisis de expresión in situ revela que IL-31RA y OSMRbeta se expresa en células de la medula espinal y de ganglio de raíz posterior en humanos. Ver Ejemplo 1. Por lo tanto, las moléculas IL-31, sus agonistas, o antagonistas tienen un papel en el mantenimiento de neuronas e inflamación y estimulación neurogénica. Esto indica que los agonistas IL-31, antagonistas pueden usarse para tratar una variedad de enfermedades neurodegenerativas tales como esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, mal de Parkinson, neuropatías periféricas, y enfermedades desmielinantes incluyendo esclerosis múltiple. La especificidad del tejido de IL-31RA y OSMRb sugiere que IL-31 puede ser un factor de crecimiento y/o mantenimiento en la médula espinal y cerebro la pueden usarse para tratar lesiones en la médula espinal, cerebro o del sistema nervioso periférico. Los métodos para medir la capacidad de IL-31 para estimular dolor son conocidos por alguien de experiencia en la técnica. Por ejemplo, las células de ganglio de raíz posterior pueden aislarse y cultivarse. Ver Voilley, N. et al., J. Neurosci.. 27 (20) : 8026-8033. 2001. Por ejemplo, las células de ganglio de raíz posterior se preparan de ratas macho adultas Wistar (5-7 semanas) y recién nacidas por disociación de colagenasa al 0.1% y colocación en placas en platos P35 recubiertos de colágeno en DMEM más suero de ternera fetal al 5%. Métodos similares de aislado de células de ganglio de raíz posterior se describen por Steinhoff, M. et al. (Ver Steinhoff, M. et al., Nature Medicine. 6(2): 151-157. 2000). Brevemente, las células de ganglio de raíz posterior se desmenuzan en Medio Eagle modificado de Dulbecco frío (DMEM) y se incuban en DMEM que contiene .05mg/ml de tripsina, 1 mg/ml de colágeno, y .01 mg/ml de ADNsa I durante 45-60 minutos a 37 grados C. El SBTI se agrega para neutralizar la tripsina y la suspensión se centrífuga a alrededor de 1,000 g durante 1 min. Las neuronas en el peletizado se suspenden en DMEM que contiene suero de bovino fetal all0%, 5 ng/ml del factor de crecimiento del nervio, glutamina 2mM, 1 mg/ml de penicilina/estreptomicina y ADNsa I, y se coloca en placas en cubreobjetos de vidrio recubiertos con Matrigel . Las neuronas se cultivan durante 3-5 días después del uso. La expresión de IL-31RA en las membranas de plasma se verifican por inmunofluorescencia usando un anticuerpo. Para medir el efecto de IL-31 en la estimulación del ganglio de raíz posterior, la concentración de ión de calcio intracelular se mide en las neuronas cultivadas como se describe por Steinhoff et al., supra . Las neuronas se incubaron en solución salina balanceada de Hank, HEPES 20 mM, pH 7.4 que contiene Fura-2/?? 5uM (Molecular Probes, Eugene, Oregon) durante 1 h a 37°C. Los cubreobjetos se lavaron, se montaron en una cámara (volumen 1 mi ) en un microcopio Zeiss 100 TV inveted y se observaron usando un objetivo Zeiss x40 Fluar. La fluorescencia se mide a 340 nm y 380 nm para permitir la determinación del calcio. Las células se exponen a IL-31 con y sin otros agentes de sensibilización, y se mide la inhibición en presencia de antagonistas IL-31. Para medir la capacidad de un antagonista IL-31 en el efecto de enlazar IL-31 a su receptor consanguíneo heterodimérico en el ganglio de raíz posterior, o células neurales en general, en dolor, varios mediadores del dolor pueden medirse, tales como por ejemplo, pero no se limita a, prostaglandinas , sustancia P, CGRP, galanina, Neuropéptido Y, histamina, bradiquinina , canabinoides y mediadores de la trayectoria del ácido araquinoide. Además de los métodos in vitro de arriba para medir la capacidad del antagonista al efecto inducido por dolor IL-31 de IL-31 en células neuronales, diversos modelos in vivo son también útiles. Ver, por ejemplo, Honore, P. et al., Neuroscience, 98 ( 3 ): 585-598 , 2000. Este artículo describe diversos modelos para dolor inflamatorio, dolor neuropático y dolor de cáncer. Por ejemplo, un modelo mide el efecto de un antagonista al IL-31, tal como una inyección subcutánea de IL-31, con y sin la molécula antagonista, en la superficie de la planta de la pata trasera de un ratón. El ratón se le aplica la eutanasia 3 días después de que se mide el edema periférico por inyección. El efecto de la molécula del antagonista IL-31 para inhibir, limitar, minimizar, reducir, prevenir o neutralizar el edema se mide. Los modelos in vivo adicionales son ligaduras de los nervios espinales, transacción del nervio ciático, cáncer del hueso inducido por sarcoma, análisis de comportamiento, y efectos de la morfina.

Otro modelo de ratón del dolor es alodinia mecánica. Ver por ejemplo, Sweitzer, S. M. et al., J. Neuroimm. , 125:82-93. 2002. Brevemente, las ratas o ratones se probaron para alodinia mecánica con 2 y/o 12 g filamentos von Frey. Primero los animales se aclimataron para el procedimiento y se tomaron las líneas base. El IL-31 se administra en diversas cantidades. La alodinia se caracteriza como un retiro intenso de la pata hasta un estímulo normalmente no nocivo en respuesta a la administración IL-31. La comparación se hace con y sin la administración de la molécula del antagonista IL-31. Un neuropéptido proinflamatorio , la sustancia P (SP) , se hace en el ganglio dorsal y luego se transporta a la periferia por nervios nociceptivos A y C (15). El SP puede inducir la comezón por liberar histamina de los gránulos de mastocitos. En la piel, el SP puede también causar eritema, edema e inflamación neurógenica, liberando histamina, IL-1, prostaglandinas , y enzimas lisosomales pero se degrada rápidamente en el dermis (16). La administración oral previa de las antihistaminas inhibe el prurito causado por SP. La capsaicina obtenida del chile picante aplicada localmente agota el SP del nervio cutáneo, y de esta manera disminuye el prurito. Como las subunidades del receptor para IL-31 se expresan en las células del ganglio de raíz posterior, la administración de las moléculas antagonistas de IL-31 puede disminuir la estimulación de estas células y puede disminuir la sustancia P que puede inducirse por la administración de IL-31. El enlace del IL-31 a su receptor, esto es, IL-3 IRA y OSMR beta, en las células del ganglio de raíz posterior puede estimular el sistema somatosensorial , el cual consiste de diversos receptores sensoriales que responden a sensaciones tales como presión, tacto, temperatura, dolor, comezón, cosquillas, hormigueo, y entumecimiento. El enlace de IL-31 a su receptor consanguíneo puede resultar en la inflamación y estimulación neurogénica, que puede llevar a la liberación de factores adicionales que inducen el estímulo neurogénico. Un grupo de factores que median el dolor son las prostanglandinas , que también contribuyen a la inflamación local. De esta manera, un antagonista IL-31 puede tener beneficios en el dolor inflamatorio agudo comúnmente tratado con NSAIDs, tal como mialgia, dolor de cabeza, dolores de articulaciones de lesiones agudas o dolor crónico tal como aquel causado por osteoartritis . Tal estímulo neurogénico puede resultar de la inflamación causada por, por ejemplo, reacciones autoinmunes, tales como alergia, infección viral, tal como varicela, y lesión, tal como quemadura o trauma. Así, los antagonistas que interfieren con la transducción de señal inducida por el enlace del ligando IL-31 a su receptor consanguíneo puede ser útil para reducir, limitar, prevenir, o minimizar la inflamación neurogénica y la estimulación del sistema somatosensorial . Como tal, los antagonistas de la transducción de señal inducida por IL-31 en las células de ganglio de raíz posterior pueden usarse para tratar dolor, comezón, hormigueo, asociado con enfermedades autoinmunes, infección viral, y trauma. Sin embargo, ya que la inflamación neurogénica puede resultar en una hipersensibilidad del nervio después del traumatismo inicial, los antagonistas del IL-31 pueden ser efectivos en el tratamiento de los síntomas. Por ejemplo, algunos pacientes con herpes zoster experimentan los síntomas sensoriales de dolor y/o comezón mucho después de que la infección viral se ha limpiado o minimizado. La neuralgia que acompaña el herpes zoster agudo, y la neuralgia postherpética son posiblemente debido a la inflamación del ganglio de raíz posterior y glanglios trigeminales , donde los antígenos virales atraen a las células T y otras células inflamatorias. El dolor de larga duración puede resultar de la inflamación persistente del dermatoma después de una respuesta antiviral robusta. Consecuentemente, el nivel o etapa de la infección viral no puede ser representativa de la percepción sensorial del sujeto. De esta manera, el efecto benéfico de la transducción de señal inducida por IL-31 antagonizada puede extenderse más allá del estado inmediato de la infección viral o trauma. La neuropatía y deficiencia sensorial involucra el dolor y pérdida de la sensibilidad, y puede relacionarse a enfermedad tales como atópia, diabetes, esclerosis múltiple, e hipertensión, por ejemplo. Como la IL-31RA y OSBRbeta son proteínas que se expresan en la médula espinal y células de ganglio de raíz posterior, los antagonistas del IL-31 pueden ser útiles para tratar dolor y deficiencias sensoriales. Por ejemplo, los antagonistas IL-31 pueden adminsitrarse tópicamente, subcutáneamente, centralmente, o sistémicamente, para tratar periferneuropatía diabética, neuropatía periférica postherpática, así como dolor, en general, incluyendo dolor como un síntoma en pacientes con quemaduras.

Las lesiones por quemaduras causan dolor intenso y prolongado que se intensifica cuando se cambian los vendajes de las curaciones. Los cambios de vendajes frecuentes son necesarios para prevenir la infección y ayudar a la curación. La cantidad de dolor experimentado por los pacientes durante el cuidado de las heridas se mantiene como un problema mundial para las victimas de quemaduras así como un número de otras poblaciones de pacientes. Cuando los pacientes están en reposo del dolor asociado con quemadura pueden tratarse con opioides, los cuales tienen algunos efectos indeseados. Sin embargo, durante el cuidado de las heridas tales como cambios diarios del vendaje, limpiado de heridas, remoción de grapas, etc., los opiodes no son suficientes, con una mayoría de los pacientes con quemaduras que reportan dolor severo hasta insoportable durante el cuidado de heridas. Ya que ambos miembros del heterodímero para el IL-31, esto es, IL-31RA y OSMRbeta se expresan en las células de ganglio de raíz posterior, un antagonista para IL-31, tal como un anticuerpo neutralizante es útil para prevenir, minimizar, limitar y/o tratar dolor, incluyendo el dolor asociado con quemaduras o neuropatía. Los modelos in vivo que imitan la quemadura son bien conocidos por alguien de experiencia en el arte. El dolor persistente puede provocar hiperplasia de tal manera que menos del estímulo original puede causar incremento en el dolor, también llamado alodinia. Ya que ambas subunidades IL-31RA y OSMR beta se expresan en las células de ganglio de raíz posterior, un antagonista para el IL-31 que induce la transducción de señal en células neuronales que portan estas subunidades pueden ayudar a mitigar los síntomas de la alodinia. Los polipéptidos de la presente invención, tales como IL-31, así como agonistas, fragmentos, variantes y/o quimeras de los mismos, pueden también usarse para incrementar la sensibilidad en los mamíferos. Por ejemplo, los polipéptidos IL-31 de la presente invención, incluyendo agonistas, pueden usarse para incrementar la sensibilización (dolor, calor, o mecánica) cuando se administran localmente o tópicamente, sistémicamente, o centralmente y se mide en cualesquiera de los modelos o experimentos conocidos por alguien de experiencia en el arte y/o descritos en la presente. También, los polipéptidos de la presente invención pueden administrarse para aumentar la sensibilidad de las células espinales y neuronales con objeto de mejorar la función de las neuronas que sobreviven a neurotransmisores y por lo tanto pueden ser efectivas en mal de Parkinson o enfermedad Alzheimer, así como parálisis. Similarmente , donde un paciente tiene un incremento en la sensibilización al dolor, los antagonistas para el IL-31 pueden usarse para disminuir la sensación del dolor en un paciente con neuropatía. Por ejemplo, un paciente con neuropatía diabética y neuropatía postherpática, tiene dolor crónico, aumentado, el antagonista al IL-31 puede ser útil para limitar, prevenir o disminuir el dolor. Como el receptor para una proteína que es proinflamatoria, la presencia de IL-3 IRA y OSMRbeta en la médula espinal y ganglio de raíz posterior indica que los antagonistas del IL-3 pueden usarse para reducir la inflamación en estos tejidos. Así, las afecciones tales como meningitis pueden beneficiarse de la administración de los antagonistas, incluyendo los anticuerpos. Las enfermedades que involucran la inflamación neurogénica y estimulación y que pueden beneficiarse de antagonizar IL-31 que induce el dolor en los tejidos neuronales, incluyendo células de ganglio de raíz posterior incluyen: dolor crónico, migraña, osteroartritis , artritis reumatoide, polineuropatía , periferalneuropatía diabética, dolor subsecuente a extensión del nervio (por ejemplo, dolor post-quirúrgico) , afecciones inflamatorias que involucran un componente producido por dolor neurogénico, tales como enfermedad inflamatoria del intestino, nefritis, ciertos carcinomas metastáticos , e inflamación de los vasos sanguíneos. Estas enfermedades pueden también tratarse por un antagonista de la transduccion de señal inducida por IL-31. Además, las afecciones de la piel, incluyendo irritación por radiación y quemaduras, quemaduras químicas, sensibilidad a química múltiple, calor punzante, rinitis, quemaduras térmicas, quemaduras de sol, enrojecimiento de la piel y lesiones químicamente inducidas, y reacciones alérgicas agudas tales como ataque de asma agudo e inflamación de los pulmones causada por la exposición química, y colmenas así como conjuntivitis y enfermedad de las encías pueden tratarse con antagonistas de IL-31. Adicionalmente, los síndromes escapuloperonales son trastornos neuromusculares heterogéneos los cuales se caracterizan por debilidad en la distribución de músculo peroneales y de cintura escapular. Los síndromes escapuloperoneales tanto neurogénico (atrofia muscular espinal escapuloperonal , SPSMA) como miopático (distrofia muscular escapulopernal , SPMD) se han descrito. Las ubicaciones cromosomales para el SPMD recientemente se han asignado al cromosoma 12q, que es la misma ubicación como para el IL-31. De esta manera, los antagonistas IL-31 pueden usarse para tratar estas enfermedades. En los Estados Unidos aproximadamente 500,000 personas padecen de enfermedad inflamatoria del intestino, la cual puede involucrar cualquier o ambos del intestino delgado y grueso. La colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn son las formas mejor conocidas de la enfermedad inflamatoria del intestino, y ambas se colocan en categorías como enfermedad inflamatoria del intestino "idiopática" debido a que su etiología es desconocida. La enfermedad de Crohn puede involucrar cualquier parte del tracto gastrointestinal, pero más frecuentemente involucra el intestino delgado distal y el colón. La inflamación puede producir cualquier cosa desde un úlcera pequeña sobre un folículo linfoide hasta una úlcera fisurada profunda hasta un cicatrizado transmural e inflamación crónica. Aunque la etiología es desconocida, se han propuesto los mecanismos infecciosos e inmunológicos . Los síntomas son variables y pueden incluir diarrea, fiebre y dolor, así como manifestaciones extra-intestinales de artritis, uveítis, eritema nodoso y espondilitis anquilosante. El enfoque tradicional para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino es la inmunodepresión con azatioprina (Ver, por ejemplo, Rutgeerts, J. Gastroenterol . Hepatol. 17(Suppl.):S 176-85 (2002)). Más recientemente, el anticuerpo del factor de necrosis anti-tumor monoclonal quimérico, infliximab, se ha usado para mecanismos de la enfermedad patogénica especifica objetivo, y permite la supresión profunda de los procesos de la enfermedad y el sanado del intestino a largo plazo. Sin embargo, esta terapia se asocia con los problemas de inmunogenicidad. La formación de anticuerpos para infliximab interfiere con la eficacia y se asocia con las reacciones de infusión. El síndrome de intestino irritable (IBS) es un trastorno gastrointestinal funcional crónico. Este es una condición heterogénea caracterizada por una variedad de síntomas del intestino incluyendo dolor abdominal e hinchazón los cuales se asocian usualmente con hábitat intestinal alterado (Collins et al, 2001) . Se estima que entre 12 y 20% de la población de los Estados Unidos padece de esta condición. Se han propuesto criterios diferentes para definir el IBS, incluyendo el criterio de Manning (Manning et al, 1978), el criterio de Rome (Thompson et al, 1992), y más recientemente Rome II (Thompson et al., 1999). Los reportes de investigación en IBS frecuentemente clasifican pacientes con IBS en los dos subtipos de estreñimiento predominante (CON) y diarrea predominante (DIA) y algunas veces incluye un tercer subtipo de patrón alternante (ALT) . Las moléculas, antagonistas, anticuerpos, proteínas enlazadas, variantes y fragmentos anti-IL-31, son útiles para tratar, detectar y asociar el dolor con la Enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) y Síndrome del intestino irritable (IBS) . La enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) puede afectar el colon y/o recto (colitis ulcerativa) , o el intestino grueso y delgado (enfermedad de Crohn) . La patogénesis de estas enfermedades no es clara, pero involucra la inflamación crónica de los tejidos afectados. Los terapéuticos potenciales incluyen omoléculas anti-IL-31 incluyendo anticuerpos anti-IL-31, otras proteína enlazadas, variantes, fragmentos, quimeras y otros antagonistas IL-31. Estas moléculas podrán servir como un terapéutico valioso para reducir la inflamación y efectos patológicos en IBD y enfermedades relacionadas. La colitis ulcerativa (CU) es una enfermedad inflamatoria del intestino grueso, comúnmente llamado colon, caracterizada por la inflamación y ulceración de mucosa o revestimiento interior del colon. Esta inflamación causa que el colon se vacíe frecuentemente, lo que resulta en diarrea.

Los síntomas incluyen aflojamiento de las heces y espasmos abdominales asociados, fiebre y pérdida de peso. Aunque la causa exacta de la CU es desconocida, investigaciones recientes sugieren que las defensas naturales del cuerpo se operan contra las proteínas en el cuerpo que el cuerpo piensa que son externas (una "reacción autoinmune" ) . Quizá debido a que las proteínas bacteriales se asemejan en el intestino, estas proteínas pueden ya sea instigar o estimular los procesos inflamatorios que comienzan a destruir el recubrimiento del colon. Como el recubrimiento del colon se destruye, se forman úlceras, se libera moco, pus y sangre. La enfermedad usualmente comienza en el área rectal y puede eventualmente extenderse por el intestino grueso completo. Los episodios repetidos de la inflamación dan lugar al engrosamiento de la pared del intestino y recto con tejido cicatrizado. La muerte del tejido del colon o sepsis puede presentarse con enfermedad grave. Los síntomas de colitis ulcerativa varían en severidad y su inicio puede ser gradual o súbito. Los ataques pueden provocarse en muchos factores, incluyendo infección respiratoria o tensión. Así, las moléculas anti-IL-31 de la presente invención pueden ser útiles para tratar o detectar CU. Aunque en la actualidad no existe cura para la CU disponible, los tratamientos se enfocan en suprimir el proceso inflamatorio anormal en el recubrimiento del colon.

Los tratamientos incluyen inmunodepresores corticosteroides (por ejemplo, azatioprina, mercaptopurina, y metotrexato) y aminosalicilatos están disponibles para tratar la enfermedad. Sin embargo, el uso a largo plazo de los inmunodepresores tales como corticosteroides y azatioprina puede resultar en efectos colaterales serios incluyendo adelgazamiento de los huesos, cataratas, infección, y efectos en el hígado y médula ósea. En los pacientes en los cuales las terapias actuales no tienen éxito, la cirugía es una opción. La cirugía involucra la remoción del colon completo y el recto. Hay varios modelos de animales que pueden imitar parcialmente la colitis ulcerativa crónica. El modelo más ampliamente usado en el modelo de colitis inducida por ácido 2 , 4 , 6-trinitrobencensulfónico/etanol (TNBS) , que induce la inflamación crónica y ulceración en el colon. Cuando el TNBS se introduce en el colon de ratones susceptibles por medio de instalación intra-rectal , se induce la respuesta inmune mediada en la célula T en la mucosa del colónica, en este caso se lleva a una inflamación mucosal masiva caracterizada por la infiltración densa de células T y macrofagos a través de la pared completa del intestino grueso. Sin embargo, este cuadro histopatológico se acompaña por el cuadro clínico de pérdida de peso progresiva (debilitación) , diarrea sangrante, prolapso rectal, y engrosamiento de la pared del intestino grueso (Neurath et al. Intern. Rev. Immunol . 19:51-62, 2000).

Otro modelo de colitis usa sulfato de sodio dextrano (DSS) , que induce una colitis aguda manifestada por diarrea sangrante, pérdida de peso, acortamiento del colon y ulceración mucosal con infiltración de neutrofilos. La colitis inducida por DSS se caracteriza histológicamente por infiltración de células inflamatorias en la lámina propia, con hiperplasia linfoide, daño de cripta focal, y ulceración epitelial. Estos cambios se piensan que se desarrollan debido a un efecto tóxico de DSS en el epitelio y por fagocitosis de las células de lámina propia y producción de TNF-alfa y IFN-gama. El DSS se considera como un modelo independiente de células T debido a que se observa en los animales deficientes de células T tales como ratones SCID. La administración de los antagonistas IL-31 o compañeros de enlace a estos modelos TNBS o DSS pueden usare para medir la mejora de los síntomas y alterar el curso de la enfermedad gastrointestinal. El IL-31 o puede jugar un papel en la respuesta inflamatoria y el dolor asociado con colitis, o la neutralización de la actividad IL-31 al administrar los antagonistas es un enfoque terapéutico potencial para IBD. El síndrome del intestino irritable es una de las afecciones más comunes en la clínica gastrointestinal. Aún, el diagnóstico y tratamiento para IBS sigue siendo limitado. Como la expresión del IL-31 e IL-31RA1 se correlaciona con la sobreregulación de la enfermedad de Crohn (ver Ejemplo 5) .

Los antagonistas IL-31, incluyendo anticuerpos anti-IL-31, otras proteínas de enlace, variantes, fragmentos, quimeras, y otro antagonistas IL-31 son útiles en reducir los síntomas y tratamiento de la enfermedad. La administración de los antagonistas IL-31 o compañeros de enlace a un paciente con IBD o IBS pueden usarse para aliviar los síntomas y alterar el curso de la enfermedad gastrointestinal. El IL-31 puede jugar un papel en la respuesta inflamatoria en la colitis, y la neutralización de la actividad IL-31 al administrar antagonistas es un enfoque terapéutico potencial para IBD e/o IBS. Para los trastornos relacionados para IBS e IBD, las señales clínicas de mejor función incluyen, pero no se limitan a, reducción del dolor, cólicos y sensibilidad, reducción en la diarrea y mejora de la consistencia de las heces, distensión abdominal reducida e incremento del transito intestinal. La mejora puede también medirse por una disminución en el índice de actividad de la enfermedad Crohn medio (CDAI). Ver, Best. W. et al., Gasttoenterology 70: 439-44, 1976. Adicionalmente , la función de mejora puede medirse por una calidad de la vida medida como se describe por Irvine et al. (Irvine, E. et al., Gasttoenterology 106: 287-96, 1994. Los modelos animales del síndrome del intestino irritable se describen por Mayer y Collins. Gastroenterol . 122:2032-2048 (2002). Estos modelos pueden dividirse en aquellos que se median primariamente por los mecanismos dirigidos por el SNC (modelos de "memoria de tensión") y aquellos con etiologías dirigidas al intestino primario (modelos de "memoria de dolor" y "memoria inmune"). En un modelo, los animales se prepararon quirúrgicamente con los electrodos implantados en el colon proximal y músculos estriados, y catéteres implantados en los ventrículos laterales del cerebro. La distensión rectal se realiza por la inflamación de un balón rectalmente insertado, y la presión que obtiene una respuesta viseromotora característica se mide. Un compuesto de prueba, tal como el antagonista IL-31 y/o variantes o antagonistas, se administra por medio de la ruta apropiada (p.o., i.p, s.c, i.v., o i.m.) y el tiempo apropiado (esto es, -20 min, si i.p. o i.c.v.) previo a la distensión. El compuesto de prueba se evalúa por su capacidad para afectar la motilidad colónica, concentraciones abdominales, y dolor visceral. Adicionalmente, los trastornos asociados con la inflamación del intestino pueden tratarse con los antagonistas IL-31 tales como fragmentos, agonistas y antagonistas de los mismos como se describe en la presente. Por ejemplo, síndrome del intestino irritable (IBS) ; se caracteriza por un espectro muy amplio de síntomas (dolor; episodios de diarrea y/o estreñimiento; motilidad gastrointestinal anormal). Se dificulta identificar la etiología, y muchos tienen componentes relacionados para la tensión, genética e/o inflamación. Similarmente, las moléculas anti-IL-31 de la presente invención, incluyendo anticuerpos y compañeros de enlace, pueden usarse para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino (incluyendo colitis y enfermedad de Crohn) . El IBD es más serio que el IBS, y se caracteriza por diarrea, dolor y malnutrición . Los pacientes con IBD frecuentemente tienen riesgo de cáncer gastrointestinal. La actividad motora gastrointestinal puede medirse en un modelo de perro como sigue: Los perros son anestesian y la cavidad abdominal se abre. Los transductores de fuerza extraluminales (sensor para medir la concentración) se saturan en cinco (5) sitios, esto es, el antro gástrico, 3 cm próximo al anillo pilórico, el duodeno, 5 cm distal al anillo pilórico, el yeyuno, 70 cm distal al anillo pilórico, el íleo, 50 cm próximo a la unión íleo-colon, y el colon, 5cm distal a la unión íleo-colon. Los cables de plomo de estos transductores de fuerza se tomaron fuera de la cavidad abdominal y luego se llevaron a través de la incisión en la piel hecha entre el omóplato, al cual un conector se conecta. Después de la operación, una chaqueta protectora se coloca en el perro para proteger el conector. La medición de la actividad motora gastrointestinal se inicia dos semanas después de la operación. Para la medición ad libitum, un telémetro (transmisor de datos de electrondas) se conecta con el contector para determina la motilidad contractiva a cada sitio del tracto gastrointestinal. Los datos se almacenaron en una computadora por medio de un telémetro para el análisis. Un compuesto de prueba, tal como el antagonista IL-31 se administra por medio de la ruta apropiada (p.o., i.v., i.p., s.c, i.m.) en el punto de tiempo apropiado para evaluar su capacidad para afectar la actividad motora gastrointestinal. Esto puede realizarse en perros normales o perros en los cuales la gastroparesis/ileo se ha inducido. El método de arriba es una modificación de aquellos en Yoshida. y Ito. J. Pharmacol. Experiment. Therap. 257, 781-787 (1991) y Furuta et al. Biol . Pharm. Bull. 25: 103-1071 (2002). El IL-31 puede ser un activador para la reactivación de las infecciones virales latentes, tales como la infección de varicela. En la infección con virus zoster de varicela primaria (VZV) , las células T más posiblemente infectadas por el virus zoster de varicela son células T de memoria positiva CD4 expresadas en CLA y CCR4. Estas son células T que se alojan en la piel, las cuales pueden aumentar la viremia asociada con la célula y el transporte de los virus infecciosos a la piel y DRG. Estas células también son los productores primarios de IL-31. Así, el IL-31 en la infección VZV primaria puede contribuir a la picazón/dolor involucrado en las lesiones de la piel. La reactivación del virus latente en el DRG induce las respuestas de células T específicas de VZV, las cuales contribuyen a la inflamación neurogénica. Las células T alojadas en la piel se infectan más fácilmente con VZV, y la transferencia in vivo del virus de las células T al DRG se observa. La neuralgia postherpética es una de las mayores complicaciones del herpes zoster causadas por la reactivación del virus zoster de varicela y se caracteriza por el dolor severo. Ver, Sato-Takeda, M. et al., Anesthesiology . 2006 104(5): 1063-9, en la presente incorporada para referencia. Esta referencia también enseña un modelo de ratón de dolor postherpético , que corresponde a la neuralgia postherpética. Brevemente, los ratones BALB/c (MHC haplotipo: H-2), ratones C57BL/6 (MHC haplotipo: H-2), y ratones BALB/b, una cepa BALB/c cogénica con H-2, se inoculan transdermalmente en la pata trasera con el virus del herpes simplex tipo I. La lesión de la piel unilateralmente zosteriforme y las repuestas relacionadas con el dolor (dolor herpético agudo) se causan, y algunos ratones muestran respuestas relacionadas con el dolor (dolor postherpético) después de la cura de las lesiones de la piel. El antígeno del virus del herpes simplex tipo I y las células positivas CD3 son inmunoteñidas en el ganglio de raíz posterior en la fase aguda. Ver también Argoff, CE., et al., J Dolor Symptom Manage. 2004 Oct; 28 (4) : 396-411. En la presente incorporada para referencia. As , los antagonistas para IL-31 pueden ser útiles limitar o prevenir la reactivación de las infecciones virales con varicela. Los modelos de ratón para encefalomielitis alérgica (EAE) se usan como una herramienta para investigar tanto los mecanismos de la enfermedad mediada por lo inmune, como los métodos de la intervención terapéutica potencial . El modelo se asemeja a la esclerosis múltiple humana, y produce demielinación como un resultado de la activación de células T para neuroproteínas tales como la proteína básica de mielina (MBP) o proteína proteolípica (PLP) . La inoculación con el antígeno conduce a la inducción de CD4+, células T restringidas en MHC clase II (Thl). Los cambios en el protocolo para el EAE pueden producir variantes agudas, recaídas crónicas, o transferencia pasiva del modelo (Weinberg et al., J. Immunol . 162:1818-26, 1999; Mijaba et al., Cell. Immunol. 186:94-102, 1999; y Glabinski, Meth. Enzym. 288: 182-90, 1997). La administración de los antagonistas IL-31 u otras proteínas solubles y de fusión puede ser útil para aliviar los síntomas y alterar el curso de la enfermedad. Un antagonista para la transducción de señal inducida por IL-31 en las células de ganglio de raíz posterior puede ser útil para tratar prurito uraemicus; prurito de hepatitis, insuficiencia hepática, o colestasis; de sarna o pie de atleta; de prurito asociado con embarazo; de pruritos en dualisis; y de pruritos de anestesia y trastornos psicológicos como siguen. Prurito uraemicus o comezón renal es un síntoma a menudo intolerable de insuficiencia renal crónica (Blachley JD, Blankenship DM, Menter A et al. Uremic pruritus: skin divalent ion content and response to ultraviolet phototherapy . Am J Kidney Dis 1985; 5: 237-41.) se presenta en alrededor de 13% de los casos; lesiones de piel secundarias se pueden observar debido a que se rasca. Es aún más común en pacientes que experimentan diálisis o hemodiálisis peritoneal (Murphy M, Carmichael AJ. Renal comezón. Clin Exp Dermatol 2000; 25: 103-6.); puede ser localizado o generalizado. La comezón no se presenta en insuficiencia renal aguda. El tratamiento de prurito renal se basa en diálisis intensiva y eficiente para remover sustancias pruritogénicas de la sangre, y en el uso de membranas que no activan el complemento. También se puede usar la terapia UV, ungüentos de emoliente, carbón vegetal activado, colestiramina (4 gramos dos veces al día) , agentes aglutinantes de fosfato. Algunas veces es necesario paratiroidectomia . La comezón antagoniza el dolor. Ver, por ejemplo, Ward, L. et al., Pain 64:129-138. 1996. Como un mediador de dolor, tal como un antagonista IL-31 se puede usar para tratar dolor asociado con comezón, por ello aliviando no solamente la comezón, o el comportamiento de rascado, sino también el dolor asociado. El prurito es una manifestación bien reconocida entre los pacientes con enfermedades del hígado y colestasis intrahepática o postepática. Las enfermedades hepáticas llevan a prurito incluyendo cirrosis biliar primaria, hepatitis viral B y C, colangitis esclerosante primaria, carcinoma de conductos biliares, cirrosis por alcohol, hepatitis autoinmune y otras. El prurito se generaliza y es más intenso en manos, pie y alrededor de prendas de ajuste entallado, mientras que la cara, cuello y área genital raramente se involucran. El prurito generalizado se presenta en 1-8% de mujeres embarazadas. El prurito gravidarum puede diferenciarse de dermatosas pruritícas en el embarazo, tales como penfigoide gestacional (herpes gestationis) , dermatosis papular y prurítica del embarazo y otras. El prurito gravidarum se manifiesta sin ningún salpullido mayormente en el tercer trimestre del embarazo, pero también puede aparecer previamente, principalmente en el abdomen y luego se vuelve generalizado. Este síntoma usualmente tiende a ser peor en la noche y dispersarse después de la administración (dentro de 1-4 semanas) . Probablemente se asocia con colestasis intrahepática, que tiene un incremento de gamma GT y fosfatasa alcalina, y algunas veces también del nivel de bilirrubina directa en estos pacientes. El prurito es más frecuente en embarazos múltiples y se puede repetir en embarazos posteriores o durante el uso de anticonceptivos orales. Adicionalmente, pápulas urticarias pruríticas y placas del embarazo (PUPP) , la dermatosis más común se asocia con el embarazo, no responde a antihistaminas y a menudo persisten más allá del embarazo. Algunos trastornos hematológicos se conocen para asociarse con prurito. En policitemia rubra vera con sobre producción de tres líneas celulares hematopoyéticas , los pacientes típicamente tienen la experiencia severa de comezón localizada en el tronco, pero es escaso en la cara, manos y pies, unos pocos minutos después del contacto con agua caliente. La comezón inducida por agua (prurito acuagénico, o comezón de baño) se puede presentar en 70% de los pacientes. La comezón puede durar de alrededor de 15 minutos hasta una hora, y ser tan severo que los pacientes se nieguen al baño. En las últimas décadas el prurito se ha descrito en paciente con reacciones hospederas contra injerto después del transplante de médula ósea. La administración crónica de IL-31 induce prurito y alopecia en ratones después del desarrollo de lesiones de la piel similares a la dermatitis sugiere que IL-31 puede inducir la comezón. Ver Dillon S.R., et al., Nat Immunol : 5, 752 (2004) . El involucrado de IL-31 se probó en la inducción de la respuesta de comezón por dos métodos como se muestra en el Ejemplo 2: (i) el tratamiento de capsaicina de ratones tratados con IL-31 y (ii) el tratamiento de IL-31 de ratones Tac 1 agónicos, que tienen respuestas de dolor nociceptivas reducidas de manera importante debido a la carencia de la expresión de neuropéptidos . Además, si la neutralización de IL-31 en ratones tratados con IL-31 puede prevenir el prurito y la alopecia se probó en el Ejemplo 2. Los ratones NC/Nga espontáneamente desarrollan lesiones tipo AD que son paralelas al AD humano en muchos aspectos, incluyendo signos y curso clínico, histopatología e inmunopatología cuando se aloja en afecciones libre de patógeno no específicas (sin SPF) a alrededor de 6-8 semanas de edad. En contraste, los ratones NC/Nga se mantienen bajo afecciones SPF sin desarrollo de lesiones en la piel. Sin embargo, el comienzo de lesiones en la piel espontáneas y comportamiento de rascado puede sincronizarse en ratones NC/Nga alojados en una instalación SPF por inyección intradermal semanalmente de antígeno de los ácaros de polvo crudo. Ver atsuoka H. , et al., Alergia: 58, 139 (2003). Por lo tanto, el desarrollo de AD en NC/Nga es un modelo útil para la evaluación de terapéuticos novedosos para el tratamiento de AD. Además para el modelo NC/Nga de AD espontáneo, sensibilización epicutánea de ratones usando OVA también se puede usar como un modelo para inducir espesante epidermal y termal dependiente de antígeno con un infiltrado mononuclear en la piel de ratones sensibilizados. Esto usualmente coincide con los niveles de suero elevados de IgE total y especifico, sin embargo no hay disfunción de barrera en la piel o prurito normalmente ocurre en este modelo. Ver Spergel J.M., et al., J Clin Invest, 101: 1614, (1998). Este protocolo se puede modificar con objeto de inducir la desregulación de barrera en la piel y prurito al sensibilizar ratones transgénicos DO 11.10 OVA TCR con OVA. El número incrementado de células T especificas de antígeno que pueden reconocer el antígeno sensibilizado puede incrementar el nivel de la inflamación en la piel para inducir el comportamiento de rascado visible y liquenificación/escamado de la piel . Tanto el modelo de AD espontáneo NC/Nga como el modelo DO 11.10 epicutáneo OVA se puede usar para medir la expresión de IL-31 e IL-3 IRA en AD, así como la capacidad de los antagonistas descritos en la presente para inhibir, reducir, o neutralizar los efectos de IL-31. Los antagonistas descritos en la presente son útiles para inhibir el rascado asociado con dermatitis y enfermedades pruríticas incluyendo dermatitis atópica, prurigo nodular, y eczema. En AD, el comportamiento de rascado provocado por comezón intensamente en la piel se cree que agrava la enfermedad por queratinocitos activados y funciones de barrera de la piel completamente rota, llevando a la producción de quimiocina e inflamación incrementada. Muchos médicos ver a AD como un ciclo de auto-propagación, desde lesiones formadas por rascado frecuente son objeto de infección y estimulación de antígeno adicional. En realidad los pacientes con casi involucrado total del área de superficie corporal puede tener piel no afectada en regiones que son duras para rascarse proporciona la creencia para esta hipótesis. Al prevenir la prurito, la administración de antagonistas de IL-31 o su receptor puede ser efectivo para tratar la enfermedad prurítica al disminuir la estimulación neurológica y activación de queratinocito inducido por IL-31, asi rompe la ligadura entre la inflamación y el prurito. La reducción en prurito puede también disminuir la secreción de factores neuroestimulatorios y reducir la inflamación y excoriaciones asociadas con el rascado constante, llevando a una mejora en los registros de la enfermedad y/o una duración más larga entre la inflamación de la enfermedad. Como inhibición, reducción, o prevención del rascado, solo, puede ser efectivo en el tratamiento de enfermedades pruriticas incluyendo, pero no limitado a, dermatitis atópica, prurigo nodular, y eczema, desde suspensión del rascado detendrá la progresión de la dermatitis, cuyo desarrollo depende del rascado.

Como se usa en la presente, el término "anticuerpos" incluye anticuerpos policlonales , anticuerpos policlonales purificados de afinidad, anticuerpos monoclonales , y fragmento enlazados al antigeno, tales como fragmentos proteoliticos F(ab')2 y Fab. Los anticuerpos o fragmentos intactos preparados por ingeniería genéticamente, tales como anticuerpos quiméricos, fragmentos Fv, anticuerpos de cadena sencilla y los similares, así como péptidos y polipéptidos enlazados al antígeno sintético, también se incluyen. Los anticuerpos no humanos se pueden humanizar al injertar CDRs no humanos en estructura humana y regiones constantes, o al incorporar los dominios variables no humanos enteros (opcionalmente "cubrir" con una superficie tipo humana al reemplazar de los residuos expuestos, en donde el resultado es un anticuerpo "cubierto"). En algunos casos, los anticuerpos humanizados pueden mantener los residuos no humanos dentro de los dominios de estructura de región variable humana para aumentar las características de enlace propias. A través de los anticuerpos humanizados, la vida media biológica se puede incrementar, y el potencial para reacciones inmunes adversas durante la administración a humanos se reduce. Más aún, los anticuerpos humanos se pueden producir en animales no humanos, transgénicos que se han preparado por ingeniería para contener genes de inmunoglobulina humanos como se describe en la Publicación WIPO No. WO 98/24893. Se prefiere que los genes de inmunoglobulina endógenos en estos animales se inactivan o eliminan, tales como por recombinación homologa. Los anticuerpos se consideran para enlazarse específicamente si: 1) muestran un nivel umbral de la actividad de enlace, y 2) no se hacen reaccionar cruzados de manera importante con relación a las moléculas de polipéptido. Un nivel de umbral de enlace se determina si los anticuerpos anti-IL-31 en la presente se enlazan a un polipéptido, péptido o epítopo IL-31 con una afinidad al menos 10 veces mayor que la afinidad de enlace para controlar el polipéptido (sin IL-31). Se prefiere que los anticuerpos muestren una afinidad de enlace (Ka) de 106 M-I o mayor, preferiblemente 107 M-I o mayor, más preferiblemente 108 M-I o mayor, y más preferiblemente 109 -l o mayor. La afinidad de enlace de un anticuerpo se puede determinar fácilmente por alguien de experiencia ordinaria en la técnica, por ejemplo, por análisis Scatchard (Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sci. 51: 660-672, 1949) . Si los anticuerpos anti-IL-31 no se hacen reaccionar cruzados de manera importante con relación de las moléculas de péptido se muestra, por ejemplo, por el anticuerpo que detecta el polipéptido IL-31 pero sin polipéptidos relacionados conocidos usando un análisis de Western blot estándar (Ausubel et al., ibid. ) . Los ejemplos de polipéptidos relacionados conocidos son aquellos descritos en el arte previo, tales como ortólogos conocidos, y paralógos, y miembros conocidos similares de una familia de proteína. La separación por exclusión también se puede hacer usando IL-31 no humano, y polipéptidos mutantes IL-31. Más aún, los anticuerpos pueden ser polipéptidos relacionados conocidos "contra la separación por exclusión", para aislar una población que específicamente enlaza a los polipéptidos IL-31. Por ejemplo, los anticuerpos que se elevan hasta IL-31 se absorben a polipéptidos relacionados adheridos a la matriz insoluble; los anticuerpos específicos para IL-31 fluirán a través de la matriz bajo las afecciones de solución amortiguadora propia. La separación por exclusión permite el aislamiento de anticuerpos monoclonales y policlonales sin reactivo cruzado para conocer los polipéptidos relacionados más cercanos (Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lañe (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al. (eds.), National Institutes of Health, John Wiley and Sons, Inc., 1995) . La separación por exclusión y el aislamiento de anticuerpos específicos es bien conocido en la técnica. Ver, Fundamental Immunology, Paul (eds.), Raven Press, 1993; Getzoff et al., Adv. in Immunol . 43: 1-98, 1988; Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, Goding, J.W. (eds.), Academic Press Ltd., 1996; Benjamín et al., Ann. Rev.

Immunol . 2: 67-101, 1984. Los anticuerpos anti-IL-31 enlazados específicamente se pueden detectar por un número de métodos en la técnica, y descritos a continuación. La preparación de anticuerpos monoclonales es bien conocida para alguien experto en la técnica. El polipéptido IL-31 humano recombinante maduro purificado (residuos de aminoácido 27 (Leu) hasta 167 (Thr) de SEQ ID NO : 2 ) o el ortólogo de ratón, producido de los sistemas de expresión se pueden usar para generar anticuerpos monoclonales. El efecto de administrar los antagonistas de IL-31 mediados por transduccion de señal se puede medir in vivo por una reducción, inhibición, prevención, minimización, neutralización de inflamación, de espesante de piel o termal, de reclutamiento de linfocitos, y acantosis, por ejemplo, y otros síntomas o composiciones de síntomas, tales como el área de eczema e índice de severidad (EASI), que son evidentes para alguien experto en la técnica. Los efectos adicionales pueden incluir un cambio o disminución en la producción de citoquinas o quimiocinas por piel lesionada, reducción en un registro de prueba de parche de atopía, y disminuye en la liberación de factores solubles tales como citoquinas, quimiocinas o neuropéptidos , como se mide por microdiálisis intradermal u otros métodos. La evaluación del grado de comezón o dolor se puede medir usando instrumentos o herramientas aprobadas clínicamente tales como la Escala Análoga Visual. La frecuencia del rascado se puede monitorear por metros con movimiento de limbo, dispositivos transductores de piezoeléctrico enlazados a las uñas, o fotografía o videografía de infrarrojo con lapso de tiempo de rascado nocturno en pacientes. Otros métodos para evaluar una disminución del dolor o comezón son evidentes para alguien experto en la técnica. Los anticuerpos monoclonales purificados del medio de cultivo de tejido se caracterizan por su utilidad en un ELISA para la determinación cuantitativa de IL-31 humano nativo y recombinante . Los anticuerpos se seleccionan y un ensayo cuantitativo se desarrolla. Los anticuerpos monoclonales purificados del medio de cultivo del tejido se caracterizan por su capacidad para bloquear o reducir la actividad de enlace del receptor ("ensayo de neutralización") de huIL-31 recombinante purificado en células nerviosas que expresan el IL-3lRa y OSMRb. Un número de anticuerpos monoclonales "neutralizantes" se identifican de esta manera. Los hibridomas que expresan los anticuerpos monoclonales neutralizantes para IL-31 humano descrito luego se puede depositar con la American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA) con el depositario de patente como se deposita original bajo el Tratado de Budapest . Cinco hibridomas anti-ratón de rata se generaron en una forma similar y se dieron las siguientes designaciones de clon: clon 271.9.4.2.6, clon 271.26.6.6.1, clon 271.33.1.2.2, clon 271.33.3.2.1, y clon 271.39.4.6.5. Los anticuerpos monoclonales producidos por estos clones se caracterizaron en un número de formas incluyendo "binning" (esto es, determinar si cada anticuerpo puede inhibir el enlace de cualquier otro enlace) , con relación a la afinidad, y neutralización. Los anticuerpos monoclonales aparecen para caer en dos recipientes separados con clon 271.33.3.2.1 enlazado a un epítopo separado diferente a cuatro. Los anticuerpos monoclonales en el medio de cultivo del tejido se caracterizan por su capacidad para bloquear o reducir el enlace del receptor cuando crece en presencia de las proteínas recombinantes purificadas IL-31 de humano. La afinidad de enlace de los anticuerpos monoclonales se puede generar. El anticuerpo específico gamma IgG-Fc de cabra-anti-rata (Jackson) se inmoviliza en un chip CM5 Biacore. Este ensayo se optimiza para enlazar cada mAb en la superficie de captura anti-Rata y luego una serie de concentraciones de IL-31 se inyecta a través de mAb para ver la asociación (Ka) y disociación (Kd) . Después de cada corrida, la superficie se vuelve a regenerar para el anticuerpo anti-rata con 2 inyecciones de HC1 20 mM. Los datos se generan para cada una y se usa el software de evaluación (software BIAevaluation versión 3.2, Pharmacia BIAcore, Uppsala, Suecia) para evaluar los cinéticos del anticuerpo anti-IL-31 enlazado a la proteína IL-31. La confirmación bioquímica de la molécula objetivo, IL-31, reconocida por los mAbs anti-IL-31 supuestos verdaderamente IL-31 se realiza por inmunoprecipitación estándar seguido por análisis SDS-PAGE o procedimiento de western blotting, ambos empleando preparaciones de membrana soluble de IL-31 transfectado contra celular Baf3 no transíectadas . Los mAbs se prueban por su capacidad para inmunoprecipitar específicamente o western blot de la proteína IL-31-muFc soluble. Los anticuerpos monoclonales para IL-31 se describen en la Solicitud de Patente de E.U.A. 11/430,066 de propiedad comúnmente, presentada el 8 de mayo de 2006, Solicitud de Patente publicada en E.U.A. número 2006-0275296. Estos anticuerpos monoclonales se purificaron del medio de cultivo del tejido se caracterizaron por su capacidad para bloquear o inhibir la capacidad de IL-31 para enlazar a su receptor en un ensayo de neutralización. Veinte anticuerpos monoclonales "neutralizantes" se identificaron de esta manera. Los anticuerpos monoclonales producidos por estos clones se caracterizaron en un número de formas incluyendo "binning" (esto es, determinar si cada anticuerpo puede inhibir el enlace de cualquier otro enlace) , afinidad relativa, y neutralización. Los diez anticuerpos bien neutralizados aparecen para estar en el mismo recipiente, con los otros anticuerpos monoclonales agrupados en tres recipientes separados. Además, ocho de los anticuerpos bien neutralizados son isotipo IgGl y los otros dos son isotipo IgG2a. Tales anticuerpos monoclonales pueden ser IgGl o IgG4 de tal manera para minimizar el enlace de complemento y la actividad ADCC. Los hibridomas que expresan los anticuerpos monoclonales neutralizantes para IL-31 humano descrito arriba se depositaron con la American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA) de depositario de patente como se deposita original bajo el Tratado de Budapest y se dieron los siguientes números de acceso ATCC: designación de depósito de patente ATCC PTA-6815, depositado el 29 de junio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6816, depositado el 29 de junio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6829, depositado el 6 de julio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6830, depositado el 6 de julio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6831, depositado el 6 de julio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6871, depositado el 19 de julio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6872, depositado el 19 de julio de 2005; designación de depósito de patente ATCC PTA-6875, depositado el 19 de julio de 2005; y designación de depósito de patente ATCC PTA-6873, depositado el 19 de julio de 2005. Un hibridoma que expresa los anticuerpos monoclonales neutralizantes para IL-31 de ratón descritos en la presente se depositaron con la American Type Tissue Culture Collection (ATCC; anassas VA) con el depositario de patente como un depósito original bajo el Tratado de Budapest y se dio el siguiente No. de acceso ATCC: designación de depósito de patente ATCC PTA-6874, depositado el 19 de julio de 2005. Los anticuerpos monoclonales producidos por estos clones de hibridoma se pueden cultivar en un medio de crecimiento de medio Iscove modificado de Dulbecco al 90% con L-glutamina 2mM, penicilina 100 yg/mL, y sulfato de estreptomicina 100 yg/mL, y suero de clon I fetal al 10% (Hyclone Laboratories) . Los clones se pueden propagar al iniciar los cultivos en 2 X 105 células/ml y manteniendo entre 1 X 105 y 5 X 105 células/ml a 37°C y CO al 5-6%. Las células se pueden adaptar a condiciones de suero libre durante la transferencia posterior. Las células se congelan, se almacenan en suero al 90%, DMSO al 10% y se almacenan en fase vapor de congelado de nitrógeno líquido. Los antagonistas IL-31 generados por los métodos descritos en la presente se pueden probar para neutralización, inhibición, reducción, antagonización por una variedad de métodos. Además la neutralización se puede probar al medir una disminución en la producción de quimiocinas pro-inflamatorias tales como TARC y MDC de cultivos de queratin'ocitos en la presencia del ligando y el anticuerpo monoclonal . Otros biomarcadores , tales como MCP-1, MlPla, TARC , MCP-1, MDC , IL-6, IL-8, 1-309, SCYA19, MPIF-1, TECK, IP-lb, SCYB13 , GROa/MGSA, CTACK, SCCAl/Serpin B3 , TSLP, y NT-4 también se pueden usar. La neutralización también se puede medir por los modelos in vivo descritos en la presente. Los antagonistas bioactivos o conjugados de anticuerpo descritos en la presente se pueden administrar intravenosamente, intraarterialmente o intraductalmente, subcutáneamente, tópicamente, o se puede introducir localmente como el sitio pretendido de acción. Los antagonistas de la presente invención se pueden medir por su capacidad para enlazar el ligando IL-31 como se determina por cualquiera de los modelos in vivo descritos en la presente, incluyendo pero no limitado al modelo NcNga, el modelo epicutáneo Ova, el modelo de hipersensibilidad crónica, el modelo de hapteno crónico, el modelo de flujo de calcio, el modelo de alodinia. Los modelos adicionales para medir los efectos inhibidores de los anticuerpos anti-IL-31 se conocen para alguien experto en la técnica y descritos en la presente se describen por Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518: 133-139, 2005; y por Yoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202:541-549, 2005. Los modelos de ratón para medir la inflamación neurogénica se conocen en la técnica. Ver, por ejemplo, Sweitzer, S. M. , et al., J. Neuroimmunology 125: 82-93; 2002, and Honore, P., et al., Neuroscience, (98) : 585-598, 2000. Ver también, Yonehara, N. and Yoshimura M. , Dolor, 2001 (92/1-2) : pp. 259-265) . Dentro de los aspectos de la invención, la invención proporciona los métodos para tratar la inflamación en el tejido neuronal de un mamífero; los métodos para tratar el dolor en un mamífero; método para antagonizar IL-31 inducido por transducción de señal es células de ganglio de raíz dorsal; métodos para tratar los síntomas asociados con quemaduras; métodos para tratar los síntomas asociados con la infección viral y para prevenir la reactivación de la infección viral; y métodos para tratar el dolor asociado con la enfermedad del intestino inflamatorio. Dentro de una modalidad, la enfermedad del intestino inflamatorio es enfermedad de Crohn. Dentro de las modalidades de estos aspectos, la invención proporciona, comprende administrar el tejido neuronal con un antagonista IL-31, en donde la inflamación, dolor, transducción de señal de ganglio de raíz dorsal, infección o reactivación viral, o tejido de quemadura, o dolor asociado con enfermedad del intestino inflamatorio se reduce, limita, previene, minimiza o neutraliza. Dentro de otras modalidades, el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido como se muestra en SEQ ID NO: 2 del residuo 27 hasta el residuo 164. Dentro de otras modalidades, el antagonista se selecciona de: anticuerpos anti-idiotipo; fragmentos de anticuerpo; anticuerpos quiméricos; y anticuerpos humanizados. Dentro de otra modalidad el antagonista es un anticuerpo. Dentro de otras modalidades el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal . Dentro de otras modalidades el anticuerpo específicamente enlaza un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 2 y en donde el polipéptido es capaz de enlazar el anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma seleccionado del grupo que consiste de: a) designación de depósito de patente ATCC PTA-6815; b) designación de depósito de patente ATCC PTA-6816; c) designación de depósito de patente ATCC PTA-6829; d) designación de depósito de patente ATCC PTA- 6830; e) designación de depósito de patente ATCC PTA- 6831; f ) designación de depósito de patente ATCC PTA- 6871; g) designación de depósito de patente ATCC PTA- 6872; h) designación de depósito de patente ATCC ] PTA-6875; e i) designación de depósito de patente ATCC PTA-6873. Dentro de otra modalidad el anticuerpo monoclonal se selecciona de un recipiente de anticuerpos en donde el hibridoma que produce el anticuerpo se selecciona de: a) designación de depósito de patente ATCC PTA-6815; b) designación de depósito de patente ATCC PTA-6829; c) designación de depósito de patente ATCC PTA-6816; d) designación de depósito de patente ATCC PTA-6871; y e) designación de depósito de patente ATCC PTA-6830.

Dentro de otra modalidad el anticuerpo monoclonal se selecciona de un recipiente de anticuerpos en donde el hibridoma que produce el anticuerpo se selecciona de: a) designación de depósito de patente ATCC PTA-6872; b) designación de depósito de patente ATCC PTA-6873; c) designación de depósito de patente ATCC PTA-6875; y d) designación de depósito de patente ATCC PTA-6831. Dentro de otras modalidades el tejido neuronal comprende tejidos de espina dorsal o ganglio de raíz dorsal.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Hibridación in Situ para IL-31RA, IL-31, y pOSMRb en tejidos neuronales Cinco muestras de tejido de cerebro humano y una muestra de espina dorsal todas del mismo individuo, y un ganglio de raíz dorsal (DRG) de un paciente diferente se analizaron en este estudio. Las sondas se usaron para IL-3 IRA, IL-31, y OSMRbeta. Los resultados se muestran en la Tabla 1: Tabla 1 Resultados del análisis ISH: Secciones del cerebro: No hay una cantidad detectable de señal en todas las regiones del cerebro para las tres sondas . Existe una tinción inconsistente de pOSMRb en un subconjunto de neuronas en el hipotálamo. La inconsistencia se puede provocar por nivel muy bajo de expresión pOSMRb que es alrededor del nivel de detección. Espina dorsal: Existe una tinción positiva en una región de la espina dorsal. La información alrededor de la ubicación u orientación posible de la sección de espina dorsal no está disponible. La señal aparece para estar en la porción interior (ventral) de la espina dorsal. El lado/región opuesto (también anterior) fue negativo. La señal positiva aparece para confinar en un subconjunto de neuronas grandes. Tanto IL-3 IRA como pOSMRb muestran patrones de expresión similares en esta área. IL-31 fue negativo . Ganglio de raíz dorsal (DRG) : Un subconjunto de neuronas unipolares en el DRG fue positivo para tanto IL-31RA como pOSMRb. Las células de satélite pequeñas fueron negativas. IL-31 fue negativo en todas las células incluyendo neuronas . Así un antagonista IL-31 puede ser útil para aliviar los síntomas asociados con la estimulación neurogénica y estimulación neurogénica. Como tales los antagonistas IL-31, se pueden usar para tratar inflamación y dolor asociado con estimulación celular nerviosa, tales como estimulación de ganglio de raíz dorsal, y se puede medir como una reducción, limitación, minimización, prevención, o neutralización de dolor e inflamación.

Ejemplo 2: Involucramiento IL-31 en la inducción de la respuesta de comezón A. Métodos I (tratamiento de capsaicina de ratones tratados con IL-31) Los animales BALB/c de diez semanas de edad (CRL) se anestesiaron e inyectaron con un agente analgésico de larga duración, clorohidrato de bupranorfina, subcutáneamente a 0.1 mg/kg antes de la inyección de 0.25 mi de solución 4 mg/ml de capsaicina en etanol al 10% + Tween-80 al 10% en solución amortiguadora salina subcutáneamente en la nuca del cuello. Los animales se mantuvieron anestesiados durante al menos 30 min después del tratamiento de neurotoxina. Cuarenta y ocho horas después, las bombas osmóticas en el día 14 se implantaron subcutáneamente durante la administración continua de 20 ug/día de IL-31 durante 14 días. Los ratones se monitorearon diariamente durante 6 días para alopecia y prurito usando el siguiente criterio: 0 = sin rascarse, el animal aparece normal, 1 = adelgazamiento del recubrimiento en las áreas pequeñas, se nota rascado, 2 = perdida de pelo menor (parches pequeños), rascado, 3 = perdida de pelo moderada, rascado, y 4 = perdida de pelo severa, rascado excesivo. Los resultados demuestran que mientras los ratones tratados sin capsaicina muestran un registro de perdida de pelo/rascado medio de 2.625 después de 3 días de administración IL-31, los ratones tratados con capsaicina muestran un registro inferior importante de 1. De esta manera los ratones tratados con capsaicina antes de la administración de IL-31 muestran tanto una eliminación en la incidencia del rascado como perdida de pelo y un registro inferior en la intensidad de rascado y perdida de pelo durante el día seis del experimento. Estos datos sugieren que IL-31 no induce algún componente neuronal que contribuya a la alopecia y prurito inducida por IL-31. Por lo tanto, la neutralización de IL-31 puede disminuir la incidencia e intensidad de comezón, y por lo tanto la dermatitis, en pacientes que padecen de trastornos de la piel que involucran la comezón.

B. Métodos II Los ratones que son homocigotos nulos para el gen Tacl no expresan sustancia detectable P o neurocinina A. Estos ratones tienen respuestas de dolor nociceptivas reducidas de manera importante para moderar, para el estimulo intenso y son por lo tanto una herramienta útil para estudiar la contribución de péptidos de taquicinina para los estados de la enfermedad de inflamación y proceso de dolor /comezón . Los ratones agénicos Tacl, de doce semanas de edad se implantaron con bombas osmóticas en el día 14 administrados con lug/dia de prote na IL-31 y se observaron diariamente para alopecia y prurito usando el siguiente criterio: 0 = sin rascado, el animal aparece normal, 1 = adelgazamiento del recubrimiento en las áreas pequeñas, se nota rascado, 2 = perdida de pelo menor (parches pequeños), rascado, 3 = perdida de pelo moderada, rascado, y 4 = perdida de pelo severa, rascado excesivo . Los resultados de este estudio muestran que los ratones deficientes de Tacl fueron menos susceptibles a IL-31 induciendo rascado/perdida de pelo comparado con los ratones de control de tipo silvestre. Mientras que el 100% (10/10) de ratones tipo silvestre han desarrollado evidencia de rascado y perdida de pelo en el día 6 del tratamiento IL-31, solamente el 33.3% (2/6) de los ratones deficientes de Tacl mostraron señales de rascado y perdida de pelo en el mismo punto de tiempo. Estos datos muestran que IL-31 induce un componente neuronal que contribuye al fenotipo rascado/perdida de pelo en ratones tratados con IL-31 y la neutralización de IL-31 puede disminuir la incidencia e intensidad de rascado en el contexto de la dermatitis .

C. Métodos III (Administración de anticuerpo neutralizante IL-31) Los ratones BALB/c hembra normales (CRL) aproximadamente de 8 hasta 12 semanas de edad se implantaron subcutáneamente con bombas osmóticas en el día 14 (Alzet, #2002) administrados 1 ug/día con mIL-31. Los grupos de ratones reciben inyecciones intraperitoneales (i.p.) de anticuerpo monoclonal IL-31 anti-ratón de rata 10mg/kg ( 200ug/ratón) dos veces por semana iniciando en la semana 1 antes de la administración de IL-31. Los grupos de control de ratones que reciben inyecciones i.p. de vehículo (PBS/BSA al 0.1%) con programas de dosificación idénticos. Los ratones se registraron diariamente para alopecia y prurito usando el siguiente criterio: 0 = sin rascado, animal aparece normal, 1 = adelgazamiento del recubrimiento en las áreas pequeñas, se nota rascado, 2 = perdida de pelo menor (parches pequeños), rascado, 3 = perdida de pelo moderada, rascado, y 4 = perdida de pelo severa, rascado excesivo . En todos los experimentos, los ratones que se tratan con mAb anti-mIL-31 de rata tuvieron un retraso en el comienzo de los síntomas de aproximadamente 5 hasta 7 días y un registro general inferior para alopecia y prurito. Todos los grupos de ratones tratados con mAb (sin tener en cuenta la frecuencia de la dosis o concentración) desarrollan alopecia y prurito similar a los ratones de control en el día 13 del estudio. Estos datos sugieren que la neutralización de IL-31 puede retardar el comienzo de la respuesta de rascado/perdida de pelo inducido por IL- Ejemplo 3 Ensayo de Luciferasa del receptor IL-3lRA/0SMRbeta El plásmido KZ134 se construyo con oligonucleótidos complementarios que contienen Elementos de enlace de factor de transcripción STAT de 4 genes, que incluyen un elemento inducible c-fos Sis modificado (m67SIE, o hSIE) (Sadowski, H. et al., Science 261: 1739-1744, 1993), el p21 SIEl del gen p21 WAF1 (Chin, Y. et al., Science 272: 719-722, 1996), el elemento de respuesta de glándula mamaria del gen de caseína ß (Schmitt-Ney, M. et al., Mol. Cell. Biol . 11:3745-3755, 1991), y un elemento inducible STAT del gen Fcg RI, (Seidel, H. et al., Proc. Nati. Acad. Sci . 92: 3041-3045, 1995). Estos oligonucleótidos contienen entremos compatibles Asp718-XhoI y se ligaron, usando métodos estándar, en un recipiente de vector reportero de luciferasa de luciérnaga con un promotor c-fos (Poulsen, L.K. et al., J. Biol. Chem. 273: 6229-6232, 1998) digerido con las mismas enzimas y que contiene un marcador seleccionable de neomicina. El plásmido KZ 134 se usó para células BaF3 establemente transíectadas , usando transfección estándar y métodos de selección, para hacer la línea celular BaF3/KZ134. Una línea celular indicadora BaF3/KZl34 estable, que expresa el receptor IL-31RA de longitud completa o IL-3lRA/OSMRbeta se construyo. Los clones se diluyeron, blindaron y seleccionaron usando técnicas estándar. Los clones se separaron por exclusión por ensayo de luciferasa (ver B, abajo) usando el medio condicionado IL-31 humano o proteína IL-31 purificada como un inductor. Los clones con la respuesta de luciferasa más alta (por medio de luciferasa STAT) y el fondo más bajo se seleccionaron. Líneas celulares transíectadas estables se seleccionaron. Las líneas celulares se llamaron BaF3 /KZ134 /IL-3 IRA o BaF3 /KZ134 /IL-3 lRA/OSMRbeta dependiendo de los receptores transfectados en la línea celular . Similarmente, las líneas celulares BHK se construyeron también usando el método descrito en la presente, y se usaron en ensayos de luciferasa descritos en la presente. Las líneas celulares se llamaron BHK/KZ134/IL-31RA o BHK/KZ134/IL-3lRA/OSMRbeta dependiendo de los receptores transfectados en la línea celular. Las células BaF3 /KZ134/IL-31RA y BaF3 /KZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta se giraron hacia abajo y lavaron en medios libres mIL-3. Las células se giraron y lavaron 3 veces para asegurar la eliminación de mlL-3. Las células se contaron luego en un hemacitómetro . Las células se blindaron en un formato de.96 pozos a alrededor de 30,000 células por pozo en un volumen de 100 µ? por pozo usando el medio libre de mIL-3. El mismo procedimiento se usó para células BaF3/KZl34 no transfectadas para usar como un control en el ensayo posterior. Las células BH /KZ134/IL-31RA o BHK/KZ134/IL- 3 IRA/OSMRbeta se blindaron en un formato de 96 pozos a 15,000 células por pozo en medio 100 µ? . Las células BHK/KZ134 precursoras se usaron como un control . La activación STAT de las células BaF3 /KZ134/IL-31RA, BaF3/KZl34/IL-3lRA /OSMRbeta, BHK/KZ134/IL-31RA, o BHK/KZ134 / IL-3lRA/OS Rbeta se evalúa usando medios condicionados o proteína purificada. Cien microlitros de los medios condicionados diluidos o proteína se agrega a las células BaF3/KZl34/ IL-31RA, BaF3 /KZ134 /IL-3IRA/OSMRbeta, BHK/KZ134/IL-31RA, o BHK/KZl34/IL-3lRA/OSMRbeta . El ensayo usando el medio condicionado se hace en paralelo con células BaF3/KZl34 o BHK/KZ134 no transíectadas como un control. El volumen de ensayo total es 200 µ?. Las placas de ensayo se incubaron a 37°C, C02 5% durante 24 horas tiempo en el cual las células BaF3 se peletizaron por centrifugación a 2000 rpm durante 10 min., y el medio se aspira y 25 µ? de solución amortiguadora de lisis (Promega) se agrega. Para las líneas celulares BHK, la etapa de centrifugación no es necesaria como las células son adherentes . Después de 10 minutos a temperatura ambiente, las placas se miden por activación del constructor reportero STAT por lectura de un luminómetro (Labsystems Luminoskan, model RS) que agrega 40 µ? de substrato de ensayo de luciferasa (Promega) a una integración de cinco segundos .

Ejemplo 4 Ensayo de Luciferasa en Líneas Celulares Epiteliales Transformadas Humanas Por medio de Infección Transitoria con un Gen Reportero Adenoviral STAT/SRE Inhibición, reducción, y/o neutralización de actividad IL-31 se puede medir por el ensayo de luciferasa. Por ejemplo, líneas celulares transformadas humanas se pueden sembrar en placas de fondo plano de 96 pozos a 10,000 célula/pozo en medios de crecimiento regular como se especifica para cada tipo de célula. Al día siguiente, las células se infectan con un constructor reportero de adenovirus, KZ 136, en una multiplicidad de infección de 5000. El reportero KZ136 contiene los elementos STAT además de un elemento de respuesta de suero. El volúmen total es 100 ul/pozo usando DMEM complementado con 2 mM L-glutamina (GibcoBRL) , 1 mM Piruvato de sodio (GibcoBRL) y complemento lx Insulina-Transferina-Selenio (GibcoBRL) (de aquí en adelante referido como medios libres de suero) . Las células se cultivaron durante la noche. Al siguiente día, el medio se remueve y reemplaza con 100 µ? de medio de inducción. El medio de inducción es IL-31 humano diluido en medio libre de suero a 100 ng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml, 6.25 ng/ml, 3.125 ng/ml y 1.56 ng/ml. Un control positivo de 20% FBS se usa para validar el ensayo y para asegurar que la infección por adenovirus es exitosa.

Las células se inducen durante 5 horas tiempo en el cual el medio se aspira. Las células se lavan luego en 50 µ?/???? de PBS, y posteriormente se lisan en 30 µ?/???? de solución amortiguadora de lisis celular IX (Promega) . Después de una incubación de 10 minutos a temperatura ambiente, 25 µ?/???? de lisado se transfiere a placas de 96 pozos blanco opaco. Las placas se leyeron luego en el Luminometro usando integración 5 segundos con 40 µ?/well inyección de substrato de luciferasa (Promega) .

Ejemplo 5 Análisis IL-31 en Tejidos Colon de Enfermedad Inflamatoria del intestino A) Inmunohistoquímica IL-31: Un anticuerpo policlonal (IL-31 CEE anti-humano de conejo, afinidad purificada a 1.0 mg/ml) se usó para detectar IL-31 humano en tejidos gastrointestinales de pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino por medio de Sistema de detección basado en el mejor ABC. Suero de Conejo normal, Proteína A purificada a 1.66 mg/ml se usó como un control negativo usando el mismo protocolo y concentraciones de anticuerpo . El protocolo fue como sigue: Lo mejor ABC-HRP (Vector Laboratories, P -6100); Recuperación objetivo (ph 9) por 20' de vapor, 20' de enfriamiento a TA; Bloqueo de Proteína durante 30'; Ab primario (1: 1,000-2,500) por 60'; Ab secundario (Bi : ant-Rabbit ) por 45'; complejo ABC-HRP por 45'; y sustrato DAB como se recomienda. En este estudio, un total de 19 tejidos Gl individuales se analizaron con el anticuerpo policlonal IL-31 anti-humano de conejo. En este grupo, hay cinco muestras de colon de tejido normal adyacente a IBD o tejidos con cáncer. Nueve muestras se diagnosticaron con enfermedad de Crohn y cinco con colitis ulcerativa. Total, parece que hay más células positivas en las muestras de Crohn que los tejidos normales adyacentes al IBD o tejidos con cáncer o tejidos de colitis ulcerativa. Las células predominantes con señal en las muestras de Crohn se localizan en la laminar propria y submucosa, con células infiltradas que muestran señal entre conjuntos de músculo liso. En granulomas, muchas células grandes en el centro de nodulos son positivas, sin embargo la corteza de estos nodulos, y parches de Peyers parecen negativos. El epitelio de glándulas intestinales es positivo ocasionalmente. En muestras de colitis ulcerativa, hay un pequeño número de células dispersas en la submucosa y células infiltradas entre conjuntos de músculo liso son positivas. El porcentaje de células positivas en muestras de colitis ulcerativa es menor que el de Crohn, pero similar, o ligeramente mayor al de muestras "normales" . Las células en la laminar propria de colitis ulcerativa son mayormente negativas. En resumen, este estudios demuestran que IL31 se sobre-regula en muestras de Crohn GI . Parece que en este estudio, IL31 muestra perfiles de expresión similar en muestras de colitis ulcerativa y controles "Normales" .

B) Hibridización IL-31 In situ: Un subconjunto de los tejidos se analizó también usando hibridización in situ (ISH). En ISH, mARN IL-31 se observó en pocas células infiltradas en la submucosa y tejidos adiposa. Usando IHC, se observa que proteína IL31 positiva teñida en la población celular previamente mencionada así como en células en la laminar propria y centros de granuloma. La diferencia entre estos dos ensayos podría explicarse por la sensibilidad del ensayo.

Ejemplo 6 Análisis IL-3lRa en Tejidos de Colon de Enfermedad Inflamatoria del Intestino A) Inmunohistoquimica IL-3lRa: Un anticuerpo policlonal (IL-31RA anti-humano de conejo (versión 4) CEE, afinidad purificada a 1.33 mg/ml) se usó para detectar IL-31RA humano en tejidos gastrointestinales de pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino por medio de un sistema de detección basado en lo mejor ABC. El Suero de Conejo Normal, Proteína A purificada a 1.66 mg/ml se usó como un control negativo usando el mismo protocolo y concentraciones de anticuerpo. El anticuerpo (versión 4) IL-31RA anti-humano de conejo se usó a 1:2000 (665 ng/ml) . El protocolo fue como sigue: ABC-HRP Elite (Vector Laboratories, PK-6100) ; Recuperación objetivo (ph 9) por 20' de vapor, 20' de enfriamiento a TA; Bloqueo de Prote na por 30'; Ab Primaría (1:2,000) por 60'; Ab Secundaria por 45'; complejo ABC-HRP por 45'; y DAB + Dako Cytomation por 10'. En este estudio, un total de 19 tejidos GI individuales se analizaron usando el anticuerpo CEE (versión 4) IL-31RA anti-humano de conejo. En este grupo, hay alrededor de cinco muestras de colon de tejido normal adyacente a IBD o tejidos con cáncer. Nueve muestras se diagnosticaron con enfermedad de Crohn y cinco con colitis ulcerativa. En general, parece que hay más células positivas en las muestras de Crohn que tejido normal adyacente a IBD o tejidos con cáncer o tejidos con colitis ulcerativa. Las células positivas en Crohn se localizan primariamente en los tejidos conectivos de submucosa. Los nodulos de granulomas son negativos. Ocasionalmente hay una señal débil en el epitelio en las muestras de Crohn. No hubo señal detectable en las muestras de colitis ulcerativa (UC) . Pocas células en la submucosa se tiñeron positivas por IHC para la proteína IL31RA.

B) Hibridizacion In situ IL-3lRa: En un estudio previo cinco tejidos se estudiaron usando ISH, tres de los cuales fueron colones con Crohn. En estos tejidos de Crohn, IL31RA mARN se sobre-regulo significativamente comparado con su contraparte normal, y la señal se localizó en la corteza de nodulos de granuloma y muchas células infiltradas en los tejidos conectivos de áreas de tejido submucosa y adiposa. Posibles razones para la discrepancia entre IHC y análisis in situ incluye expresión de mARN transitoria, tiempo de proceso de proteína, estabilidad de proteína IL31RA, y/o diferencias de sensibilidad entre los dos ensayos.

Ejemplo 7 Estudios de colitis inducida por DSS en ratones transgénicos EpLck IL-31 Los ratones de control de la carnada EpLck IL-31 transgénicos y no transgénicos se probaron en un modelo inducido por (DSS) dextrano sulfato sodio de inflamación de la mucosa para ver las diferencias potenciales en susceptibilidad y severidad de la enfermedad. Los ratones normales dan 2-3% DSS en agua potable desarrollando síntomas y patologías que imitan enfermedad inflamatoria del intestino humano (Ver, Strober, Fuss and Blumberg, Annu. Rev. Immunol . 2002) . Mecánicamente, DSS perturba la barrera epitelial de mucosa del intestino grueso, que causa inflamación posterior. Como un resultado de esta inflamación, ratones tratados DSS pierden peso corporal y desarrollan diarrea. Los ratones son observados por severidad de colitis usando un índice de actividad de enfermedad (DAI), que es un marcador acumulativo basado en el peso corporal, consistencia de heces y sangre presente en las heces . DSS se puede usar para inducir formas agudas o crónicas de colitis. La colitis aguda se induce por medio de liberación de DSS (2% o 3% en nuestros estudios) en agua potable desde día 0 hasta el día 7, mientras la colitis crónica se induce por medio de liberación de DSS en el agua potable durante 5 días seguido por una fase de recuperación de 7 hasta 12 días, antes de repetir el tratamiento DSS. Cuatro estudios en los ratones transgénicos ?µ?-jck IL-31 se realizaron. Independientemente de si el modelo agudo o crónico de DSS se usó, los ratones transgénicos E Lck IL-31 pierden más peso corporal en comparación con ratones control de carnada. De hecho, en 3 de 4 estudios los ratones transgénicos IL-31 muestran significativamente más perdida de peso comparado a controles (p< 0.001, p = 0.011). Adicionalmente, los ratones transgénicos tienen significativamente puntos más cortos comparados a controles tipo silvestre (p < 0.05) . El marcador DAI fue significativamente mayor en ratones transgénicos IL-31 comparados a controles no transgénicos en un estudios de colitis crónica (p< 0.001). Para determinar si la administración sistémica de IL-31 podría influir en el desarrollo de colitis inducida por DSS en ratones no transgénicos normales, se implantaron animales con bombas osmóticas liberando una dosis diaria de IL-31 o vehículo (PBS, 0.1% BSA) antes de tratamiento con DSS. En un estudio, generación N3 , ratones no transgénicos (B6C3F2 x C57BL/6) se implantaron con bombas subcutáneamente que liberó ya sea 20 pg/día IL-31 o vehículo durante el curso de la administración DSS. No hubo diferencias en la pérdida de peso, resultado DAI, o longitud de dos puntos entre los ratones tratados con IL-31 contra ratones tratados con vehículo. Un estudio de liberación de bomba similar se realizó también en ratones C57BL/6 normales; los ratones se implantaron con bombas que liberan 10 pg/día IL-31 o vehículo y dan 2% DSS en el régimen agudo. Nuevamente, no hubo diferencias entre ratones en cualquiera de los parámetros de colitis DSS si implanta con IL-31 o bombas que liberan vehículo. Finalmente, un estudio de colitis aguda DSS 2% se realizó en ratones deficientes de IL-31RA (IL-31RA-/- ) . Nuevamente, no hubo diferencias en perdida de peso corporal, resultado DAI o longitud de dos puntos entre ratones deficientes IL-31RA y controles de tipo silvestre. En resumen, IL-31 no aparece afectar directamente la inflamación de mucosa inducido por DSS desde la administración sistémica de IL-31 a ratones normales en estudios de colitis aguda no tienen efecto en los resultados de la enfermedad. Los animales transgénicos IL-31 pueden ser más susceptibles a colitis inducida por DSS como un resultado de tensión causada por el fenotipo transgénico. Sin embargo, ratones transgénicos E Lck IL-31 han aumentado los números de células CD4+ y CD8+ T activadas en los ganglios linfáticos periféricos (Dillon, et al, 2004) y el aumento de la susceptibilidad a colitis inducida por DSS observada en los ratones transgénicos EpLck IL-31 puede ser una consecuencia de la presencia de estos linfocitos activados.

Ejemplo 8: Efectos de Tratamiento anti-IL31 por muestreo de Fluido intersticial cutáneo con Microdiálisis La microdiálisis se puede usar con las moléculas de la presente invención para medir el análisis directo de biodisponibilidad y la distribución de anticuerpos en la piel. La microdiálisis se usa para colectar y analizar el fluido intercelular. El anticuerpo en el fluido intersticial se puede determinar usando un anti-IgG específico de especie de enlace cruzado para una perla luminex. Además, una evaluación de libertad para enlace IgG, IL31 se hace usando un anti-IL31 en lugar de anti-IgG como el anticuerpo secundario. 2. Las citoquinas proinflamatorias y quimiocinas producidas por activación IL31 de queratinocitos y/o ganglio de raíz dorsal se ensayan. Ver British J. Dermatology 142(6); 1114-1120, (2000); J. Neurol . Neurosurg. Psychiatry 73; 299- 302, (2002) ; Am J. Physiol Heart Circ. Physiol 286; 108-112, (2004) ; Neuroscience Letters 230; 117-120, (1997); and AAPS J. 7(3) ; E686-E692, (2005) . Ver también Steinhoff, M. , et al., J. Neuroscience, 23 (15) : 6176-6180, 2003. Sondas de microdiálisis se ofrecen por sistemas TSE (Midland, Michigan) . La sonda es en forma de T y consiste de una membrana 3000 kDa 0.3 mm OD por 4 mm L enlazado a un tallo 15 mm. La entrada y salida se conectan a tubos de pico 0.12 mm ID. El análisis ex vivo se realiza usando tubos idénticos a longitudes que se usan por análisis in vivo. Las sondas HMWCO se corren con un sistema de bomba presionar/ tirar para minimizar el flujo exterior (en el intersticial) . Sin embargo solamente presionar (Harvard PHD 2000) también se usa. La perdida de fluido debido a ?? y ?p se determina en diversas relaciones de flujo. La eficiencia (Ed) de la membrana se determina en diversas relaciones de flujo usando cantidades conocidas de IgG en una cámara de mezcla para eliminar difusión sin membrana (exterior) . El Ed de IgG de ratón y hemoglobina de ratón se determina y sirve como controles in vivo. La cuantificación es por anti-Rat-IgG de cabra acoplado a perlas Luminex y la captura se reporta con IgG biotina-anti-rata de conejo o burro para reducir la reactividad no específica. Los ensayos para IgG de ratón y Hemoglobina se desarrolla para los controles en los estudios in vivo. El acoplamiento de perla se realizará usando un kit y protocolo estándar. El tratamiento de ratones y ratas con citoquinas por bomba osmótica, ID o a través de una fibra de microdiálisis se usa. El anticuerpo se inyecta por IV. La sonda se esteriliza UV. La sonda de microdiálisis se inserta y sangre en analitos se muestras. La cuantificación de transporte IgG de circulación en la piel se mide usando parámetros de membrana determinados ex vivo, permeabilidad de anticuerpo y la relación de perfusión se estima. Las siguientes etapas se realizan usando un punto de tiempo por par de animales y un número suficiente de puntos de tiempo para estimar la circulación de los niveles de anticuerpo y difusión en la dermis /epidermis durante el tiempo: i) una membrana de microdiálisis se inserta en la piel y un retiro de muestra preliminar en una relación determinada por el análisis ex vivo. Esta muestra control determina la reactividad de línea base del fluido impregnado; 2) anticuerpo anti-IL31 de rata se introduce por inyección en la cola de IV y el punto de tiempo predetermina una muestra de sangre intraorbital se toma para determinar la circulación de los niveles de anticuerpo; 3) una muestra de microdiálisis de volumen suficiente para análisis se toma en los protocolos de la relación de bombeo; 4) al final del muestreo de analito otra muestra intraorbital se toma para determinar los niveles de circulación de anti-IL31.

Un análisis múltiple de Analito y plasma se realiza por Luminex y cuantificación determinada por, 1.) anticuerpo anti-IL31, 2.) anti-ratón-IgG como un control agotamiento/difusión, y 3.) Hemoglobina anti-ratón a control para trauma de inserción de microdiálisis y daño de los vasos sanguíneos . Usando los parámetros de membrana determinados ex vivo y la medición de relación de afluencia de anti-lL31 en el analito en una concentración de anticuerpo circulante dado, una estimación de la relación de difusión de la piel se determina. La concentración de IgG de ratón en el analito se usa para evaluar agotamiento local de proteínas cerca de la sonda. Una fórmula puede necesitar que se conciba para compensar el agotamiento local en el análisis de difusión. De lo anterior, se apreciará que, aunque las modalidades específicas de la invención se han descrito en la presente para propósitos de ilustración, diversas modificaciones se puede hacer sin desviarse del espíritu y alcance de la invención. En consecuencia, la invención no se limita excepto como por las reivindicaciones en adjuntas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (27)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para tratar inflamación en tejido neuronal de un mamífero, que comprenden tejido neuronal en mezcla con un antagonista IL-31, caracterizado porque la inflamación se reduce, limita, previene, minimiza o neutraliza.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 del residuo 27 al residuo 164.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el antagonista es un anticuerpo.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3 , caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tejido neuronal comprende ganglio de raíz dorsal o tejidos de la médula espinal.
6. 6. Un método para tratar dolor en un mamífero, caracterizado porque comprende tejido neuronal en mezcla del mamífero con un antagonista IL-31, en donde la inflamación se reduce, limita, previene, minimiza o neutraliza.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 desde el residuo 27 hasta el residuo 164.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el agonista es un anticuerpo.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el tejido neuronal comprende ganglio de raíz dorsal o tejidos de la médula espinal.
11. 11. Un método para antagonizar la transducción de señal inducida por IL-31 en células de ganglio de raíz dorsal, caracterizado porque comprende mezclar un antagonista IL-31 con las células de ganglio de raíz dorsal por lo que la transducción de señal se inhibe.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido como se muestra en la SEQ ID NO: 2 desde el residuo 27 hasta el residuo 164.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el antagonista es un anticuerpo.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
15. 15. Un método para tratar síntomas asociados con quemaduras, caracterizado porque comprende mezclar el tejido quemado con un antagonista IL-31.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 desde el residuo 27 hasta el residuo 164.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el antagonista es un anticuerpo.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal:
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque los síntomas son dolor o comezón.
20. 20. Un método para tratar síntomas asociados con infección viral en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar un antagonista IL-31 al mamífero.
21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido como se muestra en la SEQ ID NO: 2 desde el residuo 27 hasta el residuo 164.
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el antagonista es un anticuerpo.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
24. 24. Un método para tratar dolor asociado con Enfermedad Inflamatoria del Intestino, caracterizado porque comprende mezclar tejido neuronal en mezcla con un antagonista IL-31, en donde la inflamación por dolor se reduce, limita, previene, minimiza o neutraliza.
25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el antagonista IL-31 enlaza un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido como se muestra en la SEQ ID NO: 2 desde el residuo 27 hasta el residuo 164.
26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el antagonista es un anticuerpo.
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.