KR101345586B1 - Ｉｌ-31 길항제를 사용한 신경세포 조직의 통증 및 염증 치료 방법 - Google Patents

Ｉｌ-31 길항제를 사용한 신경세포 조직의 통증 및 염증 치료 방법 Download PDF

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Abstract

IL-31에 대한 길항제는 신경세포 조직의 자극을 억제, 예방, 감소, 최소화, 또는 제한함으로써 염증 및 통증을 치료하는데 사용된다. 이러한 길항제들은 항체 및 항체의 단편, 유도체 또는 변이체를 포함한다. 신경병증과 관련된 통증, 자통, 민감화, 간지럼 같은 증상들이 개선된다.
IL-31, 길항제, 신경세포, 통증, 가려움, 피부염, 항체

Description

ＩＬ-31 길항제를 사용한 신경세포 조직의 통증 및 염증 치료 방법{METHODS OF TREATING PAIN AND INFLAMMATION IN NEURONAL TISSUE USING IL-31 ANTAGONISTS}
염증 과정은 염증성 통증 및 운동기능의 붕괴를 일으키는 신경계를 활성화한다. 감각신경의 자극은 혈관확장 및 혈장유출을 야기하여, 신경성 염증 및 자극을 초래해 감각 자극, 과민 및 통증을 일으킨다.
신경성 염증은 조직 내 통각수용기 및 열-민감성 신경종말의 활성화에 의해 야기되며, 알레르기를 비롯한 자가면역질환 같은 선천적 상태, 바이러스 감염, 및 상처에 의해서 야기될 수 있다. 이들 상태로 인한 신경성 염증은 압력, 촉각, 온도, 통증, 가려움, 간지럼, 자통, 및 저림과 같은 감각을 초래하는 각종 신경 수용체들로 구성된 몸감각계에 영향을 미칠 수 있다. 활성화된 신경은 사이토카인 분비, 단핵구 활성화 및 화학주성을 유도함으로써 만성 염증을 지속시킬 수 있다.
신경성 염증에서 활성인 단백질이 질환의 진단 및 치료를 위한 치료학적 접근법의 표적으로서 사용될 수 있다.
통증 치료에 사용되는 약물의 한 예는 뉴론틴(가바펜틴)이며, 이것은 헤르페스 후 신경통인 당뇨성 말초신경병증의 치료에 사용된다. 따라서, 신경병증 통증을 치료하기 위한 추가의 약제가 필요하다.
본원에 설명된 발명의 이해를 돕기 위해 다음의 정의가 제공된다.
용어 "항체" 또는 "항체 펩티드(들)"은 무손상 항체, 또는 특이적 결합에 대해 무손상 항체와 경합하는 항체의 결합 단편을 말하며, 키메라, 인간화, 완전 인간, 및 이중 특이적 항체를 포함한다. 어떤 구체예에서, 결합 단편은 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. 추가의 구체예에서, 결합 단편은 무손상 항체의 효소 또는 화학적 분해에 의해 생산된다. 제한되는 것은 아니지만, 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fν, 및 단쇄 항체를 포함한다.
용어 "분리된 항체"는 항체의 자연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리 및/또는 회수된 항체를 말한다. 항체의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단학적 또는 치료학적 사용을 방해하는 물질로서, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질들을 포함할 수 있다. 구체예들에서, 항체는 (1) 로리(Lowry) 법에 의해 측정했을 때 항체 중량 기준으로 95중량% 이상, 및 99중량% 이상까지, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 획득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 코마시 블루, 또는 바람직하게 은 염색을 이용한 환원 또는 비환원 조건 하의 SDS-PAGE에 의한 상동성까지 정제될 것이다. 분리된 항체는 재조합 세포 내의 인시튜 항체를 포함하는데, 이는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 수 있기 때문이다. 그러나, 일반적으로 분리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
본원에서 "변이체" 항-IL-31 항체는 모 항체 서열에 1개 이상의 아미노산 잔기(들)의 부가, 결실 및/또는 치환에 의하여 "모" 항-IL-31 항체 아미노산 서열과 아미노산 서열이 달라진 분자를 말한다. 한 구체예에서, 변이체는 모 항체의 하나 이상의 과변이영역(들)에 1개 이상의 아미노산 치환(들)을 포함한다. 예를 들어, 변이체는 모 항체의 하나 이상의 과변이영역에 적어도 1개, 예를 들어 약 1개 내지 약 10개, 약 2개 내지 약 5개의 치환을 포함할 수 있다. 일반적으로, 변이체는 모 항체의 중쇄 또는 경쇄 변이 도메인 서열과 적어도 75% 아미노산 서열 동일성, 더 바람직하게 적어도 80%, 더 바람직하게 적어도 85%, 더 바람직하게 적어도 90%, 가장 바람직하게 적어도 95% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 이 서열과 관련하여 동일성 또는 상동성은 서열 정렬 및 갭 도입 후 모 항체 잔기와 동일한 후보 서열에 있는 아미노산 잔기 퍼센트로서 본원에서 정의되며, 필요에 따라 최대 서열 동일성 퍼센트가 달성될 수 있다. 항체 서열에 대한 N-말단, C-말단, 또는 내부 연장, 결실, 또는 삽입의 어느 것도 서열 동일성 또는 상동성에 영향을 미치지 않아야 한다. 변이체는 인간 IL-31과 결합하는 능력을 보유하며, 바람직하게는 모 항체보다 우수한 특성들을 가진다. 예를 들어, 변이체는 더 강한 결합 친화성, 면역세포의 IL-31-유도 자극을 억제하는 강화된 능력을 가질 수 있다. 이러한 특성들을 분석하기 위해서는, 예를 들어 변이체의 Fab 형태와 모 항체의 Fab 형태, 또는 변이체의 전장 형태와 모 항체의 전장 형태가 비교되어야 하며, 이에 따라 본원에 개시된 생물학적 활성 분석에서 항-IL-31 항체의 포맷이 그것의 활성에 영향을 미친다는 것이 판명되었다. 본원에서 특히 관심 있는 변이체 항체는 모 항체와 비교했을 때 생물학적 활성에서 적어도 약 10배, 바람직하게 적어도 약 20배, 가장 바람직하게 적어도 약 50배의 강화를 나타내는 것이다.
본원에서 사용된 용어 "모 항체"는 변이체의 제조에 사용된 아미노산 서열에 의해 암호화된 항체를 말한다. 바람직하게, 모 항체는 인간 프레임워크 영역이며, 존재한다면 인간 항체 불변영역(들)을 가진다. 예를 들어, 모 항체는 인간화된 항체 또는 인간 항체일 수 있다.
용어 "작동제"는 다른 분자의 활성, 활성화 또는 기능을 증가시키는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 항체, 항체 단편, 대형 분자, 또는 소형 분자(10 kD 미만)를 포함하는 어떤 화합물을 말한다. IL-31 작동제는, 예를 들어 NK 세포, T 세포 서브셋 및 B 세포 서브셋 그리고 수지상세포의 자극을 일으킨다.
용어 "길항제"는 다른 분자의 활성, 활성화 또는 기능을 감소시키는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 항체, 항체 단편, 대형 분자, 또는 소형 분자(10 kD 미만)를 포함하는 어떤 화합물을 말한다. IL-31 길항제는 NK 세포, T 세포 서브셋 및 B 세포 서브셋 그리고 수지상세포의 면역 기능 감소를 일으킨다; IL-31과 결합하여 IL-31 단백질의 상호작용을 차단, 억제, 감소, 길항 또는 중화한다.
어떤 구체예에서, "다중 특이적" 또는 "다중 기능적" 항체를 제외한 "2가 항체"는 동일한 항원 특이성을 갖는 결합 부위들을 포함하는 것으로 이해된다.
"이중 특이적" 또는 "이중 기능적" 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 하이브리드 항체이다. 이중 특이적 항체는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있으며, 제한되는 것은 아니지만, 이들 방법은 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함한다. 예를 들어, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992) 참조.
용어 "키메라 항체" 또는 "키메라 항체들"은 경쇄 및 중쇄 유전자가 전형적으로 상이한 종에 속한 면역글로불린 변이영역 및 불변영역 유전자로부터의 유전조작에 의해 구성된 항체를 말한다. 예를 들어, 마우스 단클론 항체로부터의 유전자의 변이 세그먼트가 감마 1 및 감마 3 같은 인간 불변 세그먼트에 이어질 수 있다. 따라서, 전형적인 치료학적 키메라 항체는 마우스 항체로부터의 변이 또는 항원-결합 도메인과 인간 항체로부터의 불변 도메인으로 이루어진 하이브리드 단백질이며, 물론 다른 포유류 종들도 사용될 수 있다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체와 특이적 결합을 할 수 있는 어떤 단백질 결정소를 포함한다. 에피토프 결정소는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹들로 구성되며, 일반적으로 특이적 3차원 구조적 특징들 및 특이적 전하 특징들을 가진다. 더 구체적으로, 본원에서 사용된 용어 "IL-31 에피토프"는 동물에서, 바람직하게 포유류에서, 가장 바람직하게 마우스 또는 인간에서 항원성 또는 면역원성 활성을 갖는 IL-31 폴리펩티드의 일부분을 말한다. 면역원성 활성을 갖는 에피토프는 동물에서 항체반응을 도출하는 IL-31 폴리펩티드의 부분이다. 항원성 활성을 갖는 에피토프는 본 분야에 잘 공지된 어떤 방법, 예를 들어 면역분석법에 의해 측정했을 때 항체가 면역 특이적으로 결합하는 IL-31 폴리펩티드의 부분이다. 항원성 에피토프가 반드시 면역원성일 필요는 없다.
용어 "에피토프 태그된"은 본원에서 사용되었을 때 "에피토프 태그"에 융합된 항-IL-31 항체를 말한다. 에피토프 태그 폴리펩티드는 항체가 만들어질 수 있는 에피토프를 제공하기에는 충분하지만, IL-31 항체의 활성을 방해하지 못할 정도로 충분히 짧은 잔기를 가진다. 바람직하게, 에피토프 태그는 항체가 다른 에피토프들과 실질적으로 교차반응하지 않도록 충분히 독특하다. 적합한 태그 폴리펩티드는 일반적으로 적어도 6개 아미노산 잔기, 일반적으로 약 8-50개 아미노산 잔기(바람직하게 약 9-30개 잔기)를 가진다. 예들은 flu HA 태그 폴리펩티드 및 이의 항체 12CA5(Field et al., Mol. Cell. Biol. 8:2159-2165 (1988)); c-myc 태그 및 이에 대한 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 및 9E10 항체들(Evan et al., Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616 (1985)); 및 단순 헤르페스 바이러스 당단백질 D(gD) 태그 및 이의 항체(Paborsky et al. Protein Engineering 3(6):547-553 (1990))를 포함한다. 어떤 구체예에서, 에피토프 태그는 "재생 수용체 결합 에피토프(salvage receptor binding epitope)"이다. 본원에서 사용된 용어 "재생 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 생체내 혈청 반감기의 증가를 초래하는 IgG 분자의 Fc 영역의 에피토프를 말한다.
본원에서 사용된 용어 "단편"은 IL-31 폴리펩티드 또는 IL-31 폴리펩티드와 면역 특이적으로 결합하는 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개 연속 아미노산 잔기, 적어도 10개 연속 아미노산 잔기, 적어도 15개 연속 아미노산 잔기, 적어도 20개 연속 아미노산 잔기, 적어도 25개 연속 아미노산 잔기, 적어도 40개 연속 아미노산 잔기, 적어도 50개 연속 아미노산 잔기, 적어도 60개 연속 아미노산 잔기, 적어도 70개 연속 아미노산 잔기, 적어도 80개 연속 아미노산 잔기, 적어도 90개 연속 아미노산 잔기, 적어도 100개 연속 아미노산 잔기, 적어도 125개 연속 아미노산 잔기, 적어도 150개 연속 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 말한다.
본원에서 사용된 용어 "면역글로불린"은 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 암호화된 하나 이상의 폴리펩티드로 구성된 단백질을 말한다. 면역글로불린의 한 형태가 항체의 기본 구조 단위를 구성한다. 이 형태는 4량체이며, 2개의 동일한 면역글로불린 사슬 쌍으로 구성되는데, 각 쌍은 하나의 경쇄와 하나의 중쇄를 가진다. 각 쌍에서 경쇄 및 중쇄 변이영역이 함께 항원과의 결합을 초래하고, 불변영역은 항체 이펙터 기능을 초래한다.
전장 면역글로불린 "경쇄"는 NH2-말단에서는 변이영역 유전자에 의해서 그리고 COOH-말단에서는 카파 또는 람다 불변영역 유전자에 의해서 암호화된다. 전장 면역글로불린 "중쇄"는 변이영역 유전자 및 나머지 전술한 불변영역 유전자(약 330개 아미노산) 중 하나에 의해서 유사하게 암호화된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 각각 IgG(IgG1, IgG4 포함), IgM, IgA, IgD 및 IgE로 항체의 이소타입을 한정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서 변이영역과 불변영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해서 이어지며, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다(Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N. Y., 1989), Ch. 7 참조(전문이 참고자료로 포함된다)).
면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 변이영역은 3개의 과변이영역이 개입된 "프레임워크" 영역으로 구성된다. 따라서, 용어 "과변이영역"은 항원 결합을 초래하는 항체의 아미노산 잔기를 말한다. 과변이영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immun-ological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Hea-lth, Bethesda, Md. (1991) 및 Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917 참조)(모두 본원에 참고자료로 포함된다). "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 과변이영역 잔기 이외의 변이 도메인 잔기이다. 상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역의 서열은 종 내에서 비교적 보존된다. 따라서, "인간 프레임워크 영역"은 자연 발생 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역과 실질적으로 동일한(약 85% 이상, 일반적으로 90-95% 이상) 프레임워크 영역이다. 항체의 프레임워크 영역은 구성성 경쇄 및 중쇄의 조합된 프레임워크 영역이며, CDR을 위치시켜 정렬하는데 사용된다. CDR은 주로 항원의 에피토프와의 결합을 초래한다.
따라서, 용어 "인간화" 면역글로불린은 인간 프레임워크 영역과 비-인간(일반적으로 마우스 또는 래트) 면역글로불린으로부터의 하나 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린을 말한다. CDR을 제공하는 비-인간 면역글로불린은 "도너"라고 부르고, 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "어셉터"라고 부른다. 불변영역은 존재할 필요가 없지만, 존재한다면 이들은 인간 면역글로불린 불변영역과 실질적으로 동일, 즉 적어도 약 85-90%, 바람직하게 약 95% 이상 동일해야 한다. 이에 따라, 아마 CDR을 제외한 인간화 면역글로불린의 모든 부분들은 천연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분들과 실질적으로 동일하다. "인간화 항체"는 인간화 경쇄 및 인간화 중쇄 면역글로불린을 포함하는 항체이다. 예를 들어, 인간화 항체는 상기 정의된 전형적인 키메라 항체를 포함하지 않을 텐데, 이는, 예를 들어 키메라 항체의 전체 변이영역이 비-인간의 것이기 때문이다.
본원에서 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하며, 인간 면역글로불린 라이브러리 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대해 트랜스제닉인 동물로부터 분리된 항체를 포함하고, 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 항체를 포함하며, 예를 들어 Kucherlapati 등의 미국특허 제5,939,598호에 설명된 바와 같다.
용어 "유전적으로 변형된 항체"는 아미노산 서열이 자생 항체의 아미노산 서열과 달라진 항체를 의미한다. 항체 생성에 있어서 재조합 DNA 기술의 관련성으로 인해 천연 항체에서 발견된 아미노산의 서열에만 한정될 필요는 없다; 항체는 바람직한 특징들이 획득되도록 다시 설계될 수 있다. 가능한 많은 변이가 있으며, 단지 1개 또는 소수의 아미노산의 변화에서, 예를 들어 변이영역 또는 불변영역의 완전한 재설계의 범위까지 이른다. 불변영역의 변화는 일반적으로 보체 고정, 막과의 상호작용 및 기타 이펙터 기능들과 같은 특징들을 개선 또는 변경하기 위해 만들어진다. 변이영역의 변화는 항원 결합 특징들을 개선하기 위해 만들어진다.
항체에 더하여, 면역글로불린은 여러 가지 다른 형태들로 존재할 수 있으며, 예를 들어 단쇄 또는 Fν, Fab, 및 (Fab')2, 디아체(diabody), 선형 항체, 다가 또는 다중 특이적 하이브리드 항체(상기 설명 참조, 더 상세하게는 Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987) 참조) 및 단쇄 형태를 포함한다(예를 들어, Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S .A.. 85, 5879-5883 (1988) 및 Bird et al., Science. 242:423-426 (1988) 참조, 본원에 참고자료로 포함된다)(일반적으로, Hood et al. "Immunology", Benjamin, N.Y., 2nd ed. (1984) 및 Hunkapiller and Hood, Nature. 323:15-16 (1986) 참조, 본원에 참고자료로 포함된다).
본원에서 사용된 용어 "단쇄 Fν", "단쇄 항체", "Fν" 또는 "scFν"는 단일 폴리펩티드 사슬 내에 중쇄와 경쇄 모두로부터의 변이영역을 포함하지만 불변영역은 결여하는 항체 단편을 말한다. 일반적으로, 단쇄 항체는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더 포함하는데, 이것은 항원 결합을 허용하는 바람직한 구조의 형성을 가능하게 한다. 단쇄 항체는 Pluckthun의 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)에 상세히 논의된다; 또한, 본원에 참고자료로 포함되는 국제 특허출원 공보 WO 88/01649와 미국특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호를 참조한다. 특정 구체예에서, 단쇄 항체는 또한 이중 특이적 항체 및/또는 인간화 항체일 수 있다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 CH1 및 변이영역으로 이루어진다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다.
"Fab' 단편"은 하나의 경쇄 및 CH1과 CH2 도메인 사이에 불변영역 이상을 함유하는 하나의 중쇄를 함유하며, 이로써 두 경쇄 사이에 사슬간 이황화 결합이 형성되어 F(ab')2 분자가 형성될 수 있다.
"F(ab')2 단편"은 2개의 경쇄 및 CH1과 CH2 도메인 사이에 불변영역의 일부분을 함유하는 2개의 중쇄를 함유하며, 이로써 두 중쇄 사이에 사슬간 이황화 결합이 형성된다.
용어 "디아체"는 2개의 항원-결합 부위를 가진 작은 항체 단편을 말하며, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬에서 경쇄 변이 도메인(VL)에 연결된 중쇄 변이 도메인(VH)을 포함한다(VH-VL). 동일한 사슬 상의 두 도메인 사이에 쌍을 이루기에는 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또 다른 사슬의 상보성 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아체는, 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)에 더 상세하게 설명된다.
용어 "선형 항체"는 Zapata et al. Protein Eng. 8(10):1057- 1062 (1995)에 설명된 항체를 말한다. 간단히 말해서, 이들 항체는 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 직렬 Fd 세그먼트 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 선형 항체는 이중 특이적 또는 단일 특이적일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편"은 적어도 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 변이 도메인을 함유하는 폴리펩티드 단편을 말한다. 본 발명의 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편은 리간드와 결합하여, 리간드와 리간드 수용체의 결합을 방지하거나, 리간드와 수용체의 결합으로 인한 생물학적 반응을 저지하거나, 또는 이것들의 어떤 조합을 행할 수 있다.
용어 "단클론 항체"는 어떤 진핵세포, 원핵세포, 또는 포식세포 클론을 포함하는 단일 클론에서 유래하는 항체를 말하며, 생산 방법에는 제한되지 않는다.
본 발명은 IL-31과 결합하는 이종이량체 수용체의 서브유닛, 예를 들어 IL-31Ra 및 OSMRb가 배근신경절세포 같은 신경세포에서 발현된다는 발견에 일부 기초한다. 따라서, 본 발명은 통증 및 염증 그리고 염증성 장 질환, 크론병, 소양증, 및 신경성 통증 및 민감성의 증상을 억제하는데 있어서 IL-31에 대한 길항제의 사용을 포함한다. 또한, 본 발명은 배근신경절세포의 자극을 통한 민감성의 개선에 있어서 IL-31 작동제의 사용을 포함한다.
IL-31은 공개된 미국 특허출원에서 Zcyto17rlig로서 이전에 설명된 사이토카인의 HUGO 명칭이다(미국 특허출원 공개 제2003-0224487호 참조, 2003년 1월 21일자 제출된 미국 특허출원 제10/352,554호, 현재 미국특허 제7,064,186호로 발행됨; Sprecher, Cindy et al., 2003, 본원에 참고자료로 포함된다). IL-31의 이종이량체 수용체는 IL-31Ra와 온코스타틴 M 수용체 베타(OSMRb) 사이에 형성된 이종이량체를 포함한다. IL-31Ra는 본원에 참고자료로 포함되는 2003년 1월 21일자 제출된 공동 소유의 미국 특허출원 제10/351,157호, 미국 특허출원 공개 제2003-0215838호에서 zcytor17이라고 명명한 단백질의 HUGO 명칭이다. 인간 IL-31에 대한 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 각각 SEQ ID NO:1 및 2에 나타낸다. 쥐 IL-31에 대한 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 각각 SEQ ID NO:3 및 4에 나타낸다. 본원에서 사용된 용어 IL-31은 상기 나타낸 미국 특허출원 공개 제2003-0224487호에서 사용된 zcytor17lig를 의미한다. IL-31Ra는 본원에 참고자료로 포함되는 공동 소유의 2001년 6월 26일자 제출된 미국 특허출원 제09/892,949호에서 이전에 설명되었다.
OSMR, 및 IL-31RA 수용체의 아미노산 서열은 이 암호화된 수용체들이, 제한되는 것은 아니지만, IL-2, IL-4, IL-7, Lif, IL-12, IL-15, EPO, TPO, GM-CSF 및 G-CSF의 수용체들을 포함하는 I 형 사이토카인 수용체 서브패밀리에 속한다는 것을 나타내었다(Cosman, "The Hematopoietin Receptor Superfamily" in Cytokine 5(2): 95-106, 1993 참조). zcytor17 수용체는 공동 소유의 PCT 특허출원 US 01/20484에 충분히 설명된다(WIPO 공보 WO 02/00721; 본원에 참고자료로 포함된다).
본 발명은 항-IL-31 활성을 갖는 길항제, 항체, 결합 단백질, 변이체 및 단편을 포함하는 항-IL-31의 사용을 포함한다. 본 발명은 피험자에게 항-IL-31 분자를 투여하는 것을 포함하며, 인간 및 수의학의 치료학적 용도를 모두 고려한다. 예시적인 수의학적 대상은 농장 동물 및 가축 등의 포유류 피험자를 포함한다.
IL-31RA의 "긴" 형태의 자생 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:5 및 6에 각각 나타낸다. IL-31RA의 "짧은" 형태의 자생 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:7 및 8에 각각 나타낸다. IL-31RA 폴리펩티드의 추가의 절단 형태들은 자연적으로 발현되는 것으로 드러났다. 두 형태는 모두 가용성 IL-31RA 수용체를 암호화한다. "긴" 가용성 IL-31RA 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:9 및 10에 각각 나타낸다. "짧은" 가용성 IL-31RA 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:11 및 12에 각각 나타낸다. 마우스 IL-31RA의 자생 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:13 및 14에 각각 나타낸다. 인간 OSMR베타의 자생 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열을 SEQ ID NO:15 및 16에 각각 나타낸다. PCT 출원 WO 02/00721 및 WO 04/003140를 참조하며, 이것들은 본원에 참고자료로 포함된다.
IL-31 길항제는 IL-31과 결합하여 이의 동족 수용체와의 결합에 대한 IL-31의 효과를 억제, 제한, 감소, 최소화, 예방, 또는 중화하는, 항체의 변이체, 단편 또는 유도체를 비롯한, 항체 등의 항-IL-31 분자를 포함한다.
인시튜 발현 분석에 의해 IL-31RA 및 OSMR베타가 인간 척수세포 및 배근신경절세포에서 발현된다는 것이 드러났다. 실시예 1을 참조한다. 따라서, IL-31 분자, 그 작동제, 또는 길항제는 신경세포 및 신경성 염증 및 자극의 유지에서 역할을 할 것이다. 이는 IL-31 작동제, 길항제가 근위축성 측삭경화증(ALS), 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 말초신경병증, 및 다발성 경화증을 비롯한 탈수초성 질환과 같은 각종 신경변성 질환의 치료에 사용될 수 있음을 시사한다. IL-31RA 및 OSMRb의 조직 특이성은 IL-31이 척수, 뇌 또는 말초신경계 손상을 치료하는데 사용될 수 있는 척수 및 뇌 내의 성장 및/또는 유지 인자일 수 있음을 시사한다.
IL-31의 통증 자극 능력의 측정 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 배근신경절세포가 분리되어 배양된다. Voilley, N. et al., J. Neurosci. 27 (20):8026-8033. 2001 참조. 예를 들어, 위스터(Wistar) 성체 수컷(5-7주) 및 신생 래트로부터 0.1% 콜라게나제 해리 및 5% 태아 소 혈청이 첨가된 DMEM 중에서 콜라겐 코팅된 P35 접시 위에 평판에 의해 배근신경절세포를 준비한다. 배근신경절세포를 분리하는 유사한 방법이 Steinhoff, M. 등(Steinhoff, M. et al., Nature Medicine. 6(2):151-157. 2000 참조)에 의해서도 설명된다. 간단히 말해서, 배근신경절세포를 냉각한 듈베코스 변형 이글 배지(DMEM) 중에서 저민 다음, 0.05mg/mL 트립신, 1mg/mL 콜라게나제, 및 0.01mg/mL DNAse I를 함유하는 DMEM 중에서 37℃에서 45-60분간 인큐베이션한다. SBTI를 가하여 트립신을 중화하고, 현탁액을 1분간 약 1,000g에서 원심분리한다. 펠릿 형태의 신경세포를 10% 태아 소 혈청, 5ng/mL 신경성장인자, 2mM 글루타민, 1mg/mL 페니실린/스트렙토마이신 및 DNAse I를 함유하는 DEME 중에 현탁하고, 마트리겔(Matrigel)로 코팅한 유리 커버슬립 위에 평판한다. 사용하기 전에 신경세포를 3-5일간 배양한다. 원형질 막에서 IL-31Ra의 발현이 항체를 사용한 면역형광에 의해 확인된다.
배근신경절 자극에 대한 IL-31의 효과를 측정하기 위해서, Steinhoff 등(상동)에 의해 설명된 대로 배양된 신경세포 내의 세포내 칼슘 이온 농도를 측정한다. 신경세포를 5uM Fura-2/AM(Molecular Probes, Eugene, Oregon)을 함유하는 행크스 균형 염 용액, 20mM HEPES, pH 7.4 중에서 37℃에서 1시간 인큐베이션한다. 커버슬립을 세척하고, Zeiss 100 TV 도립현미경 상에서 챔버(1mL 부피)에 장착한 다음, Zeiss x40 Fluar 대물렌즈를 사용하여 관찰한다. 340nm 및 380nm에서 형광을 측정하여 칼슘을 측정한다. 세포는 다른 민감화제의 존재 및 부재 하에 IL-31에 노출되며, IL-31 길항제의 존재 하에서의 억제를 측정한다.
일반적으로 배근신경절 또는 신경세포 상에서 동족 이종이량체 수용체와 IL-31의 결합 효과에 대한 IL-31 길항제의 능력을 측정하기 위해서, 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어, 프로스타글란딘류, 섭스턴스 P, CGRP, 갈라닌, 뉴로펩티드 Y, 히스타민, 브라디키닌, 카나비노이드류, 및 아라키노이드산 경로의 매개인자와 같은 몇 가지 통증 매개인자가 측정될 수 있다.
신경세포 상에서 IL-31의 IL-31 통증-유도 효과에 대한 길항제의 능력을 측정하는 상기 시험관내 방법에 더하여, 몇 가지 생체내 모델이 또한 유용하다. 예를 들어, Honore, P. et al., Neuroscience, 98(3):585-598, 2000 참조. 이 논문은 염증성 통증, 신경성 통증 및 암 통증에 대한 몇 가지 모델을 설명한다. 예를 들어, 한 모델은 길항제 분자의 존재 및 부재 하에 마우스 뒷발의 평평한 면에 IL-31를 피하 주사하는 등, IL-31에 대한 길항제의 효과를 측정한다. 마우스는 주사 후 3일째에 안락사되어 말초 부종이 측정된다. 부종을 억제, 제한, 최소화, 감소, 예방, 또는 중화하는 IL-31 길항제 분자의 효과가 측정된다. 추가의 생체내 모델은 척수신경 리게이션, 좌골신경 트랜스액션, 육종-유발 골암, 행동분석, 및 몰핀 효과이다.
또 다른 마우스 통증 모델은 기계적 이질통증이다. 예를 들어, Sweitzer, S. M. et al., J. Neuroimm.. 125:82-93. 2002 참조. 간단히 말해서, 래트 또는 마우스를 2- 및/또는 12-g 본 프레이 필라멘트를 사용하여 기계적 이질통증에 대해 시험한다. 먼저, 동물을 이 과정에 적응시키고 베이스라인을 측정한다. IL-31을 양을 바꿔가면서 투여한다. 이질통증은 IL-31 투여에 반응하여 정상적인 비-유해 자극에 대한 발의 강한 움츠림을 특징으로 한다. IL-31 길항제 분자의 투여의 존재 및 부재 하에 비교 시험을 행한다.
전염증성 뉴로펩티드인 섭스턴스 P(SP)는 배근신경절에서 만들어진 다음 통각수용기 신경 A 및 C에 의해 말초부로 수송된다(15). SP는 비만세포 과립으로부터 히스타민을 방출함으로써 가려움을 유발할 수 있다. SP는 또한 피부에서 홍반, 부종 및 신경성 염증을 일으킬 수 있는데, 이때는 히스타민, IL-1, 프로스타글란딘 및 리소솜 효소를 방출하며, 이들은 진피에서 빠르게 분해된다(16). 항히스타민제의 사전 경구 투여가 SP에 의해 야기된 소양증을 억제한다. 국소 적용된 고추로부터 획득한 캡사이신은 피부 신경으로부터 SP를 고갈시켜 소양증을 줄인다. IL-31의 수용체 서브유닛들이 배근신경절세포에서 발현되기 때문에, IL-31 길항제 분자의 투여는 이들 세포의 자극을 감소시킬 수 있고, IL-31 투여에 의해 유도될 수 있는 섭스턴스 P를 감소시킬 수 있다.
배근신경절세포 상에서 IL-31과 그 수용체, 즉 IL-31RA 및 OSMR베타의 결합은 압력, 촉각, 온도, 통증, 가려움, 간지럼, 자통, 및 저림과 같은 감각을 초래하는 각종 감각 수용체로 구성된 몸감각계를 자극할 수 있다. IL-31과 그 동족 수용체의 결합은 신경성 염증 및 자극을 초래할 수 있으며, 이는 신경성 자극들을 유도하는 추가의 인자들을 방출할 수 있다. 통증을 매개하는 인자들의 한 그룹은 프로스타글란딘류인데, 이것은 국소 염증에도 기여한다. 따라서, IL-31 길항제는 급성 손상 또는 골관절염에 의해 야기되는 것과 같은 만성 통증으로 인한 근육통, 두통, 관절통 등 NSAID로 흔히 치료되는 급성 염증성 통증에 유리할 수 있다. 이러한 신경성 자극들은, 예를 들어 알레르기 같은 자각면역질환, 수두 같은 바이러스 감염, 및 화상이나 외상 같은 상처에 의해 야기된 염증의 결과일 수 있다. 따라서, IL-31 리간드와 그 동족 수용체의 결합에 의해서 유도되는 신호전달을 방해하는 길항제가 신경성 염증 및 몸감각계의 자극을 감소, 제한, 예방, 또는 최소화하는데 유용할 수 있다. 이와 같이, 배근신경절세포에서의 IL-31-유도 신호전달에 대한 길항제가 자가면역질환, 바이러스 감염 및 외상과 관련된 통증, 가려움, 간지럼을 치료하는데 사용될 수 있다. 더욱이, 신경성 염증이 초기 손상 후 신경 과민을 초래할 수 있으므로, IL-31의 길항제는 증상의 치료에 효과적일 수 있다. 예를 들어, 일부 띠헤르페스 환자들은 바이러스 감염이 깨끗해지거나 최소화된 후에도 오랫동안 통증 및/또는 가려움의 감각 증상을 경험한다. 급성 띠헤르페스를 수반하는 신경통, 및 띠헤르페스 후 신경통은 아마도 배근신경절 및 삼차신경절의 염증으로 인한 것일 수 있는데, 이 경우에는 바이러스 항원이 T 세포 및 다른 염증성 세포들을 공격한다. 장기간 지속되는 통증은 강한 항바이러스 반응 후에 피부분절의 영구적인 염증을 가져올 수 있다. 결과적으로, 바이러스 감염의 수준 또는 단계는 피험자의 감각인지를 나타낼 수 없다. 따라서, IL-31-유도 신호전달을 길항하는 유리한 효과는 바이러스 감염이나 외상 직후의 상태를 넘어서까지 확장될 수 있다.
신경병증 및 감각결손은 통증 및 민감성의 상실을 수반하며, 예를 들어, 아토피, 당뇨병, 다발성 경화증, 및 고혈압 같은 질환들에 관련될 수 있다. IL-31RA와 OSBR베타는 척수세포 및 배근신경절세포에서 발현되는 단백질이므로, IL-31 길항제는 통증 및 감각결손을 치료하는데 유용할 수 있다. 예를 들어, IL-31 길항제는 국소, 피하, 중추, 또는 전신 송달될 수 있으며, 당뇨성 말초신경병증, 헤르페스 후 말초신경병증, 뿐만 아니라 일반적으로 화상 환자의 증상과 같은 통증을 비롯한 통증을 치료할 수 있다.
화상 상처는 강도 높고 장기적인 통증을 야기하며, 통증은 상처 드레싱을 바꿀 때 극대화된다. 감염을 방지하고 치유를 돕기 위해서는 잦은 드레싱 교환이 필요하다. 상처 치료 동안 환자가 경험하는 통증의 양은 화상 희생자뿐만 아니라 다수의 다른 환자 집단에 대하여 전 세계적인 문제로 남아 있다. 환자가 휴식 상태에 있을 때, 화상과 관련된 통증은 오피오이드류로 치료될 수 있지만, 이것은 어떤 원치 않는 효과를 가진다. 그러나, 붕대 교환, 상처 세척, 스테이플 제거 등과 같은 일상적인 상처 치료 동안에는 오피오이드류가 충분하지 않으며, 대부분의 화상 환자들은 상처 치료 동안 중증 내지는 극도의 통증을 보고하고 있다.
IL-31 이종이량체의 두 구성원, 즉 IL-31RA 및 OSMR베타가 배근신경절세포에서 발현되므로, 중화 항체와 같은 IL-31에 대한 길항제가 화상이나 신경병증과 관련된 통증을 비롯한 통증을 예방, 최소화, 제한 및/또는 치료하는데 유용하다. 화상을 모방하는 생체내 모델은 당업자에게 잘 알려져 있다.
영구적인 통증은 과다형성을 유발하여 본래 자극 미만에서도 증가한 통증이 생길 수 있는데, 이것을 이질통증이라고 한다. IL-31RA와 OSMR베타 서브유닛이 모두 배근신경절세포에서 발현되므로, 이들 서브유닛을 지닌 신경세포에서의 IL-31-유도 신호전달에 대한 길항제가 이질통증의 증상을 완화하는데 도움이 될 수 있다.
또한, IL-31과 같은, 본 발명의 폴리펩티드뿐만 아니라, 그것의 작동제, 단편, 변이체 및/또는 키메라가 포유류에서 민감성을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 작동제를 포함하여, 본 발명의 IL-31 폴리펩티드는 당업자에게 공지되고 및/또는 본원에 설명된 어떤 모델 또는 실험에서 국소 또는 국부, 전신, 또는 중추 송달되고 측정되었을 때 민감성(통증, 열 또는 기계적)을 증가시키는데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드는 살아 있는 신경세포의 신경전달물질로의 기능을 개선할 목적으로 척수세포 및 신경세포의 민감도를 증진시키기 위하여 투여될 수 있으며, 이로써 파킨슨병 또는 알츠하이머병뿐만 아니라 마비에도 효과적이 될 수 있다.
유사하게, 환자의 통증에 대한 민감성이 증가된 경우, 신경병증을 가진 환자에서 통증 감각을 줄이기 위해 IL-31 길항제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 당뇨성 신경병증 및 헤르페스 후 신경병증을 가진 환자는 만성적인 증가된 통증을 가지는데, IL-31 길항제가 이런 통증을 제한, 예방 또는 감소시키는데 유용할 수 있다.
전염증성 단백질에 대한 수용체로서 척수 및 배근신경절에 IL-31RA 및 OSMR베타의 존재는 IL-31의 길항제가 이들 조직에서 염증을 줄이는데 사용될 수 있음을 시사한다. 따라서, 수막염 같은 상태가 항체를 비롯한 길항체의 투여로 인해 유리할 수 있다.
신경성 염증 및 자극을 수반하며 배근신경절세포를 비롯한 신경세포 조직의 IL-31-유도 통증을 길항함으로 인해 유리할 수 있는 질환은 만성 통증, 편두통, 관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 다발신경병증, 당뇨성 말초신경병증, 신경 절단 후 통증(예를 들어, 수술 후 통증), 신경성 통증-유발 성분을 수반하는 염증성 상태, 예를 들어 염증성 장 질환, 신장염, 어떤 전이성 암종, 및 혈관 염증을 포함한다. 또한, 이들 질환은 IL-31-유도 신호전달의 길항제에 의해 치료될 수도 있다. 이에 더하여, 방사선 자극 및 화상을 비롯한 피부 상태, 화학적 화상, 복합 화학물질 과민증, 땀띠, 비염, 열화상, 일광화상, 피부 붉어짐 및 화학적으로 유발된 병소, 그리고 급성 천식 발작 같은 급성 알레르기 반응 및 화학물질 노출로 인한 폐의 염증, 그리고 발진뿐만 아니라 결막염 및 잇몸질환이 IL-31 길항제로 치료될 수 있다. 추가하여, 견갑골비골 증후군은 견대 및 비골근 분포의 약화를 특징으로 하는 이질적인 신경근육 장애이다. 신경병증성(견갑골비골 척수 근위축, SPSMA) 및 근육병증성(견갑골비골 근이영양증, SPMD) 견갑골비골 증후군이 모두 설명되었다. 최근에 SPMD의 염색체 유전자좌가 염색체 12q에 배정되었는데, 이것은 IL-31에 대한 것과 동일한 유전자좌이다. 따라서, IL-31 길항제가 이들 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.
미국에서는 대략 500,000명의 사람이 염증성 장 질환으로 고통받고 있는데, 이 질환은 소장 및 대장의 어느 한쪽에 또는 양쪽에 발생할 수 있다. 궤양성 결장염 및 크론병이 가장 잘 알려진 형태의 염증성 장 질환이며, 이들 두 질환은 모두 이들의 병인이 불명이기 때문에 "원인불명" 염증성 장 질환으로 분류된다.
크론병은 소화관의 일부에 생길 수 있으며, 대부분은 소장 원위부와 결장을 주로 수반한다. 염증은 림프양 소포 위의 작은 궤양에서부터 깊은 열구성 궤양 내지는 통벽성 흉터 및 만성 염증 단계의 어떤 것이라도 야기할 수 있다. 병인은 불명이나 감염 및 면역학적 메커니즘이 제안되었다. 증상은 가변적이며, 설사, 열, 및 통증뿐만 아니라, 관절염, 포도막염, 결절혼방 및 강직척추염의 장외 소견을 포함할 수 있다.
염증성 장 질환을 치료하기 위한 종래의 접근법은 아자티오프린을 사용한 면역억제이다(예를 들어, Rutgeerts, J. Gastroenterol. Hepatol. 17(Suppl.):S176-85 (2002) 참조). 더 최근에는 키메라 단클론 항종양 괴사인자 항체인 인플릭시맙을 사용하여 특이적 병원성 질환 메커니즘을 표적화하여 질환 과정을 완전한 억제하고 장기적으로 장을 치유하고 있다. 그러나, 이 치료법은 면역원성의 문제와 관련된다. 인플릭시맙에 대한 항체 형성이 효능을 방해하며 주입반응과 관련된다.
과민성 장 증후군(IBS)는 기능적 만성 소화관 장애이다. 이것은 변화된 장 습관과 일반적으로 관련되는 복부통증 및 복부팽만을 포함한 여러 가지 장 증상을 특징으로 하는 이질적 상태이다(Collins et al, 2001). 미국 인구의 12 내지 20%가 이 상태를 앓고 있다고 추정된다. Manning 기준(Manning et al, 1978), Rome 기준 (Thompson et al, 1992), 가장 최근에는 Rome II (Thompson et al., 1999) 기준을 포함하여 상이한 기준들이 IBS를 규정하기 위해 제안되었다. IBS에 대한 연구 보고서들은 IBS 환자들을 변비형(CON) 및 설사형(DIA)의 두 서브타입으로 주로 분류하며, 때로는 교대 형태(ALT)의 세 번째 서브타입이 포함된다.
항-IL-31 분자, 길항제, 항체, 결합 단백질, 변이체 및 단편들이 염증성 장 질환(IBD) 및 과민성 장 증후군(IBS)을 치료, 검출하고, 이와 관련된 통증을 치료하는데 유용하다.
염증성 장 질환(IBD)은 결장 및/또는 직장(궤양성 결장염), 또는 소장 및 대장(크론병)에 걸릴 수 있다. 이들 질환의 발병기전은 불명이나, 이들은 질환에 걸린 조직의 만성 염증을 수반한다. 가능한 치료제는 항-IL-31 항체, 다른 결합 단백질, 변이체, 단편, 키메라, 및 다른 IL-31 길항제를 비롯한 항-IL-31 분자를 포함한다. 이들 분자는 IBD 및 관련 질환에서 염증 및 병리학적 효과를 감소시키기 위한 가치 있는 치료제로서 사용될 수 있다.
궤양성 결장염(UC)은 흔히 결장이라고 하는 대장의 염증성 질환으로서, 결장의 점막이나 최내층의 염증 및 궤양을 특징으로 한다. 이 염증은 자주 결장을 비게 하여 설사를 일으킨다. 증상은 설사 및 관련된 복부경련, 열 및 체중감소를 포함한다. UC의 정확한 원인은 불명이지만, 최근 연구는 신체가 외래물질이라고 생각하는 체내 단백질에 대해 신체의 자연적 방어기제가 작동한다는 것을 제안한다("자가면역질환"). 아마 이들이 장 내 박테리아 단백질과 비슷하기 때문에, 이들 단백질은 결장의 내층을 파괴하기 시작하는 염증 과정을 조장하거나 자극할 수 있다. 결장의 내층이 파괴됨에 따라서, 궤양이 형성되고, 점액, 고름 및 피가 방출된다. 이 질환은 일반적으로 직장 영역에서 시작되며, 마침내는 전체 대장으로 확장된다. 반복된 염증 사건이 흉터 조직으로 장과 직장의 벽을 두껍게 만든다. 결장 조직의 사멸이나 패혈증이 중증 질환에서 발생할 수 있다. 궤양성 결장염의 증상은 심각성에 따라 다양하며, 이들의 개시는 점진적일 수도 돌연할 수도 있다. 호흡기 감염이나 스트레스를 비롯한 많은 요인들에 의하여 발병이 야기될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항-IL-31 분자는 UC를 치료하거나 UC를 검출하는데 유용할 수 있다.
현재 UC에 대해 유용한 치료법은 없지만, 치료제는 결장 내층의 비정상적인 염증 과정을 억제하는데 초점을 두고 있다. 코르티코스테로이드류 면역억제제(예를 들어, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 및 메토트렉세이트) 및 아미노살리실레이트류를 포함한 치료제가 이 질환의 치료에 이용될 수 있다. 그러나, 코르티코스테로이드류 및 아자티오프린 같은 면역억제제의 장기 사용은 골 희석, 백내장, 감염, 및 간 및 골수 작용을 포함한 심각한 부작용을 초래할 수 있다. 현재의 치료법이 성공적이지 못한 환자에서는 수술이 선택사항이다. 수술은 전체 결장과 직장의 제거를 수반한다.
만성 궤양성 결장염을 부분적으로 모방할 수 있는 몇 가지의 동물 모델이 있다. 가장 널리 사용되는 모델은 2,4,6-트리니트로벤술폰산/에탄올(TNBS) 유발 결장염 모델로서, 이것은 결장에서 만성 염증 및 궤양을 유발한다. TNBS가 직장-내 점안에 의해 감수성 마우스의 결장에 도입되면, 이것은 결장 점막에서 T-세포 매개 면역반응을 유도하며, 이 경우 대장 벽 전체에 T 세포 및 대식세포의 조밀한 침윤을 특징으로 하는 대량 점막 염증이 생긴다. 더욱이, 이 조직병리학적 그림은 진행성 체중감소(소모성), 피 섞인 설사, 직장탈출, 및 대장 벽 비후화의 임상적 그림을 수반한다(Neurath et al. Intern. Rev. Immunol. 19:51-62, 2000).
다른 결장염 모델은 덱스트란 술페이트 나트륨(DSS)을 사용하는데, 이것은 피 섞인 설사, 체중감소, 결장 단축 및 호중구 침윤이 있는 점막 궤양화에 의해 나타나는 급성 결장염을 유발한다. DSS-유도 결장염은 림프양 과다형성, 국소 움 손상, 및 상피 궤양화와 함께, 고유판에의 염증성 세포 침윤을 조직학적 특징으로 한다. 이들 변화는 상피에 대한 DSS의 독성 효과와 고유판 세포의 포식작용 및 TNF-알파 및 IFN-감마의 생성으로 인해 발생하는 것이라고 생각된다. DSS는 SCID 마우스 같은 T 세포-결핍 동물에서 관찰되기 때문에 T 세포-독립적 모델로서 간주된다.
이들 TNBS 또는 DSS 모델에 IL-31 길항제 또는 결합 파트너의 투여가 증상의 개선을 측정하고 소화관 질환의 진행과정을 변경시키기 위해 사용될 수 있다. IL-31은 결장염과 관련된 염증반응 및 통증에서 역할을 할 수 있으며, 길항제의 투여에 의한 IL-31 활성의 중화는 IBD에 대한 가능한 치료학적 접근법이다.
과민성 장 증후군은 소화관 클리닉에서 가장 흔한 상태 중 하나이다. 아직도 IBS에 대한 진단 및 치료는 제한적이다. IL-31 및 IL-31RA1의 발현은 크론병의 상향조절과 상호관련된다(실시예 5 참조). 항-IL-31 항체, 다른 결합 단백질, 변이체, 단편, 키메라, 및 다른 IL-31 길항제를 포함하는 IL-31 길항제가 이 질환의 증상을 감소시키고 질환을 치료하는데 유용하다.
IBD 또는 IBS 환자에게 IL-31 길항제 또는 결합 파트너의 투여는 소화관 질환의 증상을 개선하고 질환의 진행과정을 변경시키기 위해 사용될 수 있다. IL-31은 결장염의 염증 반응에서 역할을 할 수 있으며, 길항제의 투여에 의한 IL-31 활성의 중화는 IBD 및/또는 IBS에 대한 가능한 치료학적 접근법이다.
IBS 및 IBD와 관련된 장애에 대해, 제한되는 것은 아니지만, 개선된 기능의 임상적 징후들은 통증, 경련 및 민감도의 감소, 설사의 감소 및 개선된 변 규칙성, 복부팽창 감소, 및 장 통과 증가를 포함한다. 또한, 개선은 평균 크론병 활성 지수(CDAI)의 감소에 의해서도 측정될 수 있다. Best. W. et al., Gasttoenterology 70:439-44, 1976를 참조한다. 추가하여, 개선된 기능은 Irvine 등(Irvine, E. et al., Gasttoenterology 106: 287-96, 1994)에 의해 설명된 삶의 질 평가에 의해서도 측정될 수 있다.
Mayer 및 Collins(Gastroenterol. 122:2032-2048 (2002))에 의해 과민성 장 증후군의 동물 모델이 설명되었다. 이들 모델은 CNS-관련 메커니즘에 의하여 주로 매개된 것들("스트레스 기억" 모델)과 장-관련 병인을 주로 가진 것들("통증 기억" 및 "면역 기억" 모델)로 구분될 수 있다. 한 모델에서, 동물을 결장 근위부와 횡문근 상에 이식된 전극, 및 뇌의 외측내실 내에 이식된 카테테르로 외과적으로 준비한다. 직장에 삽입된 풍선을 팽창시켜 직장을 팽창시키고, 특징적인 내장운동반응을 도출하는 압력을 측정한다. IL-31 길항제 및/또는 변이체 또는 길항제들 같은 시험 화합물이 팽창 전 적합한 시간(즉, 약 20분, i.p. 또는 i.c.v.의 경우)에 적합한 경로(p.o., i.p., s.c, i.v., 또는 i.m.)에 의해 투여한다. 결장 운동성, 복부수축, 및 내장 통증에 영향을 미치는 능력에 대해 시험 화합물을 평가한다.
추가하여, 장 염증과 관련된 장애는 본원에 설명된 단편, 작동제 및 길항제 등의 IL-31 길항제로 치료될 수 있다. 예를 들어, 과민성 장 증후군(IBS)은 매우 광범한 증상(통증; 설사 및/또는 변비의 발생; 비정상적 소화관 운동성)을 특징으로 한다. 병인을 정확하게 진단하는 것은 어려우며, 스트레스, 유전적 특질, 및/또는 염증과 관련된 요소들을 가질 수 있다. 유사하게, 항체 및 결합 파트너를 포함하는 본 발명의 항-IL-31 분자가 염증성 장 질환(결장염 및 크론병을 포함하는)을 치료하는데 사용될 수 있다. IBD는 IBS보다 더 심각하며, 설사, 통증, 및 영양실조를 특징으로 한다. IBD 환자는 대체로 소화관 암의 위험이 증가한다.
소화관 운동 활성이 개 모델에서 다음과 같이 측정될 수 있다: 개를 마취하고 복강을 개방한다. 장관외 힘 변환기(수축 측정 센서)를 5개 부위 위에, 즉 유문윤 3cm 근위부인 유문동, 유문윤 5cm 원위부인 십이지장, 유문윤 70cm 원위부인 공장, 회장-결장 접합부 5cm 근위부인 회장, 그리고 회장-결장 접합부 5cm 원위부인 결장 위에 봉합한다. 이들 힘 변환기의 리드 와이어를 복강 밖으로 꺼낸 다음 견갑골 사이의 피부 절개부를 통해 가지고 나와 커넥터에 연결한다. 작업 후 재킷 보호장치로 개를 덮어 커넥터를 보호한다. 작업 2주 후에 소화관 운동 활성의 측정을 시작한다. 임의 측정을 위해 계측기(전자파 데이터 송신기)를 커넥터와 연결하고 소화관 각 부위에서 수축 운동성을 측정한다. 분석을 위해 계측기를 통해 데이터를 저장한다. 소화관 운동 활성에 영향을 미치는 능력을 평가하기 전 적합한 시간에 적합한 경로(p.o., i.v., i.p., s.c, i.m.)에 의해 IL-31 길항제 등의 시험 화합물을 투여한다. 이것은 정상 개 또는 위마비/장폐쇄증이 유발된 개에서 수행될 수 있다. 상기 방법은 Yoshida. and Ito. J. Pharmacol. Experiment. Therap. 257, 781-787 (1991) 및 Furuta et al. Biol. Pharm. Bull. 25:103-1071 (2002)에 설명된 방법의 변형이다.
IL-31은 수두 감염과 같은 잠복 바이러스 감염의 재활성화의 촉발제일 수 있다. 초기 바리셀라 조스터 바이러스(VZV) 감염에서, 바리셀라 조스터 바이러스에 의해 가장 감염될 가능성이 높은 T 세포는 CLA 및 CCR4를 발현하는 CD4-양성 기억 T 세포이다. 이들은 피부-귀소성 T 세포로서, 세포-관련 바이러스혈증 및 피부와 DRG로의 감염성 바이러스의 전달을 증진시킬 수 있다. 이들 세포는 또한 IL-31의 일차 생산자이다. 따라서, 초기 VZV 감염에서 IL-31은 피부 병소에 관련된 가려움/통증에 기여할 수 있다. DRG에서 잠복 바이러스의 재활성화는 VZV-특이적 T 세포 반응을 유발하는데, 이것이 신경성 염증에 기여한다. 피부-귀소성 T 세포는 VZV로 가장 쉽게 감염되며, T 세포로부터 DRG로 생체내 바이러스 전달이 관찰되었다. 헤르페스 후 신경통이 바리셀라 조스터 바이러스의 재활성화에 의해 생긴 띠헤르페스의 주요 합병증 중 하나이며, 심한 통증을 특징으로 한다. 본원에 참고자료로 포함되는 Sato-Takeda, M. et al., Anesthesiology. 2006 104(5):1063-9를 참조한다. 이 참고문헌은 또한 헤르페스 후 신경통에 해당하는 헤르페스 후 통증의 마우스 모델을 교시한다. 간단히 말해서, BALB/c 마우스(MHC 일배체형: H-2), C57BL/6 마우스(MHC 일배체형: H-2), 및 H-2를 가진 유사유전자형 BALB/c 균주인 BALB/b 마우스의 뒷발에 단순 헤르페스 바이러스 I형을 경피 접종한다. 한쪽으로 띠헤르페스 모양 피부 병소 및 통증-관련 증상(급성 헤르페스 통증)이 발생하고, 일부 마우스는 피부 병소의 치유 후에도 통증-관련 반응(헤르페스 후 통증)을 나타낸다. 단순 헤르페스 바이러스 I형 항원 및 CD3-양성 세포가 급성기 배근신경절에서 면역염색된다. 본원에 참고자료로 포함되는 Argoff, C.E., et al., J Pain Symptom Manage. 2004 Oct;28(4):396-411를 참조한다. 따라서, IL-31 길항제는 수두에 의한 바이러스 감염의 재활성화를 제한 또는 예방하는데 유용할 수 있다.
실험적 알레르기 뇌척수염(EAE)의 마우스 모델이 면역-매개 질환의 메커니즘 및 가능한 치료학적 개입 방법을 조사하기 위한 도구로서 사용되었다. 이 모델은 인간의 다발성 경화증과 유사하며, 미엘린 염기성 단백질(MBP) 또는 단백지질 단백질(PLP)과 같은 신경단백질에 대한 T 세포 활성화의 결과로서 탈미엘린화를 야기한다. 항원 접종이 CD4+, II형 MHC-제한 T 세포(Th1)를 유발한다. EAE에 대한 프로토콜을 변화시켜 이 모델의 급성, 만성-재발성, 또는 수동적-전달 변이형들을 만들 수 있다(Weinberg et al., J. Immunol. 162:1818-26, 1999; Mijaba et al., Cell. Immunol. 186:94-102, 1999; and Glabinski, Meth. Enzym. 288:182-90, 1997). IL-31 길항제 또는 다른 가용성 및 융합 단백질의 투여가 증상을 개선하고 질환의 진행과정을 변경시키는데 유용할 수 있다.
배근신경절세포에서의 IL-31-유도 신호전달에 대한 길항제는 다음과 같은 요독성 소양증; 간염, 간부전, 또는 담즙울체로 인한 소양증; 옴 또는 발백선증으로 인한 소양증; 임신 관련 소양증; 투석 환자의 소양증; 및 마취 및 심리적인 장애로 인한 소양증을 치료하는데 유용할 수 있다.
요독성 소양증 또는 신장 가려움은 만성 신부전에서 흔한 견디기 힘든 증상으로서, 만성 신부전 사례의 약 13%에 존재한다(Blachley JD, Blankenship D. M., Menter A. et al., Uremic pruritus: skin divalent ion content and response to ultraviolet phototherapy. Am J Kidney Dis 1985; 5:237-41); 긁어서 생기는 이차 피부 병소가 보일 수 있다. 이것은 복막투석이나 혈액투석을 하고 있는 환자에서 더욱 흔하다(Murphy M, Carmichael AJ. Renal itch. Clin Exp Dermatol 2000; 25: 103-6.); 이것은 국소적일 수도 또는 전신적일 수도 있다. 가려움은 급성 신부전에서는 나타나지 않는다. 신장 소양증의 치료는 혈액으로부터 가려움 유발 물질을 제거하기 위한 집중적이고 효과적인 투석 및 비-보체-활성화 멤브레인의 사용을 기초로 한다. 또한, UV 치료법, 피부연화연고, 활성숯, 콜레스티라민(하루 2회 4g), 포스페이트 결합제를 사용할 수도 있다. 때로는 부갑상선절제술이 필요하다.
통증은 가려움을 상쇄한다. 예를 들어, Ward, L. et al., Pain 64:129-138. 1996를 참조한다. 이와 같이, IL-31 길항제 같은 통증의 매개제가 가려움과 관련된 통증을 치료하는데 사용될 수 있으며, 이로써 가려움이나 긁는 행동뿐만 아니라 관련된 통증을 개선할 수 있다.
소양증은 간 질환 및 간내 담즙울체 또는 헤르페스 후 담즙울체를 가진 환자들 사이에서 잘 인식된 증상이다. 소양증을 가져오는 간 질환은 초기 담관성 간경화, B형 및 C형 바이러스 간염, 초기 경화 담관염, 담관암종, 알코올성 간경화, 자가면역 간염 및 기타 등등을 포함한다. 이 소양증은 전신적이며, 손, 발 및 꽉 끼는 옷 주위에서 더 강하고, 안면, 목 및 생식기 부위는 비교적 덜하다.
전신적 소양증이 임산부의 1-8%에서 나타난다. 임신성 소양증은 임신성 유사천포창(헤르페스 유사천포창), 임신 구진성 및 소양성 피부염 등과 같은 임신 중 소양성 피부염과 구별될 수 있다. 임신성 소양증은 임신 7~9개월에서 대부분 어떤 발진 없이 나타나며, 초기에는 먼저 배 쪽에 나타난 다음 전신에 전파될 수 있다. 이 증상은 일반적으로 밤에 악화되는 경향이 있으며 출산 후에 사라진다(1~4주 내에). 이들 환자에서 감마 GT 및 알칼리성 포스파타제가 증가되고, 때로는 직접 빌리루빈 수준도 증가하기 때문에, 이것은 아마도 간내 담즙울체와 관련되는 듯하다. 소양증은 다태 임신에서 더욱 빈번하며, 다음번 임신에서 또는 경구 피임약을 사용하는 동안 재발할 수 있다. 추가하여, 임신과 관련된 가장 흔한 피부염인 임신 소양성 두드러기양 구진 및 판(PUPP)은 항히스타민제에 반응하지 않으며, 대체로 분만 이후에도 지속된다.
일부 혈액학적 장애가 소양증에 관련된 것으로 알려져 있다. 세 조혈 셀라인이 모두 과생산되는 진성 적혈구증가증에서, 환자는 전형적으로 온수와 접촉한지 수분 후에 안면, 손 및 발을 제외한 몸통에 국한된 심한 가려움을 경험한다. 물-유발 가려움(수인성 소양증, 또는 목욕 가려움)이 이 환자의 70%에서 나타날 수 있다. 가려움은 약 15분 내지 1시간 지속될 수 있으며, 환자가 목욕을 거부할 만큼 심할 수 있다. 지난 10년간 소양증은 골수 이식 후의 이식편 대 숙주 반응을 가진 환자에서 설명되었다.
IL-31의 장기 송달이 마우스에서 소양증 및 탈모증을 유발하며, 이어서 피부염과 유사한 피부 병소가 발생하는데, 이는 IL-31이 가려움을 유발할 수 있음을 암시한다. Dillon S.R., et al., Nat Immunol: 5, 752 (2004)를 참조한다. 가려움 반응의 유발에서 IL-31의 연관성을 실시예 2에 나타낸 대로 두 가지 방법에 의하여 시험하였다: (i) IL-31-처치 마우스의 캡사이신 치료 및 (ii) Tac1 녹아웃 마우스의 IL-31 치료, 이들은 뉴로펩티드 발현의 결여로 인해 현저히 감소된 통각수용기 통증 반응을 가진다. 이에 더하여, IL-31-처치 마우스에서 IL-31의 중화가 소양증 및 탈모증을 예방할 수 있는지를 실시예 2에서 시험하였다.
NC/Nga 마우스는 약 6-8주 나이 근처에 비-특정 병원균-프리(비-SPF) 조건에 수용되었을 때 임상 진행과정 및 징후, 조직병리학 및 면역병리학을 비롯하여 인간 AD와 많은 면에서 유사한 AD-형 병소를 자발적으로 발생시킨다. 반면에, SPF 조건 하에서 유지된 NC/Nga 마우스는 피부 병소를 발생시키지 않는다. 그러나, 자발적 피부 병소의 개시 및 긁는 행동은 미정제 먼지 진드기 항원의 주 1회 피내 주사에 의하여 SPF 시설에 수용된 NC/Nga 마우스들에서 동시에 발생할 수 있다. Matsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003)를 참조한다. 따라서, NC/Nga에서 AD의 발생은 AD의 치료를 위한 신규 치료제의 평가에 유용한 모델이다.
자발적 AD의 NC/Nga 모델에 더하여, 민감화된 마우스 피부에 단핵 침윤이 있는 항원-의존성 표피 및 진피 비후화를 유도하기 위한 모델로서 OVA를 사용한 마우스의 경피 민감화가 또한 사용될 수 있다. 이것은 일반적으로 총 IgE 및 특정 IgE의 혈청 수준 상승과 일치하지만, 피부 장벽 기능부전 또는 소양증은 이 모델에서는 일반적으로 발생하지 않는다. Spergel J.M., et al., J Clin Invest, 101:1614 (1998)를 참조한다. 이 프로토콜은 DO 11.10 OVA TCR 트랜스젠 마우스를 OVA로 민감화함으로써 피부 장벽 이상 및 소양증을 유도하도록 변형될 수 있다. 민감화 항원을 인식할 수 있는 항원-특이적 T 세포 수의 증가는 피부 염증 수준을 증가시켜 가시적인 긁는 행동 및 피부의 태선화/낙설을 유도할 수 있다.
NC/Nga 자발적 AD 모델 및 OVA 경피 DO 11.10 모델이 모두 AD에서 IL-31 및 IL-31RA의 발현을 측정하는데 사용될 수 있을 뿐만 아니라, IL-31의 효과를 억제, 감소, 또는 중화하는 본원에 설명된 길항제의 능력을 측정하는데 사용될 수 있다. 본원에 설명된 길항제는 아토피 피부염, 결절성 양진, 및 습진을 비롯한 피부염 및 소양성 질환과 관련된 긁는 것을 억제하는데 유용하다. AD에서 매우 가려운 피부에 의해 유발되는 긁는 행동이 피부 장벽 기능을 파괴하고 각질세포를 활성화함으로써 케모카인을 생성하고 염증을 증가시켜 질환을 악화시킨다고 생각된다. 잦은 긁음에 의해 형성된 병소가 감염되고, 더 나아가 항원 자극을 일으킬 수 있으므로, 많은 임상의들이 AD를 자기-증식형 사이클로서 간주한다. 신체 표면적의 거의 전체가 연관된 환자들도 긁기 어려운 병소 내에 질환의 침범이 없는 피부를 가질 수 있다는 사실이 이 가설에 대해 신뢰성을 제공한다. 소양증을 예방함으로써, IL-31 또는 그 수용체의 길항제의 투여가 IL-31-유도 각질세포 활성화 및 신경학적 자극을 감소시켜 염증과 소양증 사이의 연결을 파괴함으로써 소양성 질환을 치료하는데 효과적일 수 있다. 또한, 소양증의 감소는 신경자극성 인자의 분비를 감소시키고, 계속된 긁음과 관련된 염증 및 찰과상을 줄일 수 있으며, 이로써 질환 점수가 개선되고 및/또는 질환 발적 사이의 간격이 길어진다. 긁는 것의 중단이 그 발생이 긁는 것에 의존하는 피부염의 진행을 중지시킬 것이므로, 긁는 것의 억제, 감소, 또는 예방은 그 자체만으로 제한은 아니지만 아토피 피부염, 결절성 양진, 및 습진을 포함하는 소양성 질환을 치료하는데 효과적일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "항체"는 다클론 항체, 친화성-정제 다클론 항체, 단클론 항체, 및 F(ab')2 및 Fab 단백질 가수분해 단편 같은 항원-결합 단편을 포함한다. 또한, 키메라 항체, Fν 단편, 단쇄 항체 등의 유전조작된 무손상 항체 또는 단편뿐만 아니라, 합성 항원-결합 펩티드 및 폴리펩티드가 포함된다. 비-인간 항체는 인간 프레임워크 및 불변영역 위에 비-인간 CDR을 접목시킴으로써, 또는 전체 비-인간 변이 도메인(노출된 잔기들을 치환함으로써 이들을 인간-유사 표면으로 선택적으로 "차폐"하며, 그 결과 "베니어드" 항체가 된다)을 통합시킴으로써 인간화될 수 있다. 어떤 경우, 인간화 항체는 인간 변이 영역 프레임워크 도메인 내에 비-인간 잔기를 보유할 수 있으며, 이로써 적합한 결합 특징들이 강화된다. 항체를 인간화함으로써 생물학적 반감기가 증가될 수 있고, 인간에 투여시 불리한 면역반응의 가능성이 감소된다. 더욱이, 인간 항체는 WIPO 공보 WO 98/24893에 개시된 대로 인간 면역글로불린 유전자를 함유하도록 조작된 트랜스젠, 비-인간 동물에서 생산될 수도 있다. 이들 동물 안의 내인성 면역글로불린 유전자는 동종성 재조합 등에 의해 불활성화되거나 제거되는 것이 바람직하다.
1) 항체가 역치 수준의 결합 활성을 나타내는 경우, 및 2) 항체가 관련된 폴리펩티드 분자들과 유의하게 교차반응하지 않는 경우, 항체는 특이적으로 결합하는 것으로 간주된다. 본원의 항-IL-31 항체가 대조군(비-IL-31) 폴리펩티드와의 결합 친화성에 비해 IL-31 폴리펩티드, 펩티드 또는 에피토프와 적어도 10배 이상의 친화성으로 결합하는지를 결합의 역치 수준으로 결정한다. 항체는 106 M-1 이상, 바람직하게는 107 M-1 이상, 더 바람직하게는 108 M-1 이상, 가장 바람직하게는 109 M-1 이상의 결합 친화성(Ka)을 나타내는 것이 바람직하다. 항체의 결합 친화성은 당업자에 의해 쉽게 측정될 수 있으며, 예를 들어 Scatchard 분석(Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sci. 51:660-672, 1949)에 의해 측정될 수 있다.
예를 들어, 표준 웨스턴 블롯 분석(Ausubel et al., 상동)을 사용하여 항체가 IL-31 폴리펩티드는 검출하지만 공지의 관련된 폴리펩티드들은 검출하지 않음으로써 항-IL-31 항체는 관련된 폴리펩티드 분자들과 유의하게 교차반응하지 않는 것을 나타낸다. 공지된 관련된 폴리펩티드의 예는 선행기술에 개시된 것들이며, 예를 들어 공지된 오르토로그, 및 파라로그, 및 단백질 패밀리의 유사한 공지된 구성원들이다. 비-인간 IL-31, 및 IL-31 돌연변이 폴리펩티드를 사용해서도 스크리닝을 행할 수 있다. 더욱이, 항체는 공지의 관련된 폴리펩티드에 "대해 스크리닝"될 수 있으며, 이로써 IL-31 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는 집단을 분리할 수 있다. 예를 들어, IL-31에 대해 발생된 항체는 불용성 매트릭스에 부착된 관련 폴리펩티드에 흡착된다; IL-31에 특이적인 항체는 적합한 버퍼 조건 하에서 매트릭스를 통해 흐를 것이다. 스크리닝은 공지의 밀접히 관련된 폴리펩티드와 교차반응하지 않는 다클론 및 단클론 항체의 분리를 허용한다(Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al., (eds.), National Institutes of He-alth, John Wiley and Sons, Inc., 1995). 특정 항체의 스크리닝 및 분리에 대해서는 본 분야에 잘 공지되어 있다. Fundamental Immunology, Paul, (eds.), Raven Press, 1993; Getzoff et al., Adv. in Immunol. 43:1-98, 1988; Monoclonal Anti-bodies: Principles and Practice, Goding, J.W., (eds.), Academic Press Ltd., 1996; Benjamin et al., Ann. Rev. Immunol. 2:67-101, 1984를 참조한다. 특이적으로 결합한 항-IL-31 항체는 본 분야의 다수의 방법에 의해 검출될 수 있으며, 이에 대해서는 아래 설명한다.
단클론 항체의 제조에 대해서는 당업자에게 잘 공지되어 있다. 발현 시스템으로부터 생성된, 정제된 성숙한 재조합 인간 IL-31 폴리펩티드(SEQ ID NO:2의 아미노산 잔기 27(Leu)-167(Thr)) 또는 마우스 오르토로그를 사용하여 단클론 항체를 생성할 수 있다.
IL-31 매개 신호전달의 길항제를 투여한 효과가 염증, 피부 또는 진피 비후화, 림프구 모집, 및 가시세포증, 예를 들어 다른 증상 또는 증상의 복합, 예를 들어 습진 부위 및 심도 지수(EASI)의 감소, 억제, 예방, 최소화, 중화에 의해 생체내 측정될 수 있으며, 이들은 당업자에게 자명한 바이다.
추가의 효과는, 피내 미세투석 또는 다른 방법에 의해 측정했을 때, 피부 병소에서 사이토카인 또는 케모카인 생산의 변화 또는 감소, 아토피 패치 시험점수의 감소, 및 사이토카인, 케모카인 또는 뉴로펩티드 같은 가용성 인자 방출 감소를 포함할 수 있다. 가려움 또는 통증 정도의 평가는 Visual Analogue Scale 같은 임상 승인된 기기나 도구를 사용하여 측정될 수 있다. 긁는 빈도는 사지 운동 계기, 손톱에 연결된 압전 변환기 장치에 의해, 또는 밤에 환자가 긁는 것을 시간-경과 적외선 사진촬영 또는 비디오촬영 함에 의해 모니터될 수 있다. 통증 또는 가렴움의 감소를 평가하기 위한 다른 방법들도 당업자에게 자명하다.
조직배양 배지로부터 정제된 단클론 항체는 재조합 및 자생 인간 IL-31의 정량 측정을 위한 ELISA에서의 활용도에 대해 특성화된다. 항체가 선별되고 정량 분석이 전개된다.
조직배양 배지로부터 정제된 단클론 항체는 IL-31RA 및 OSMRb를 발현하는 신경세포 상에서 정제된 재조합 huIL-31의 수용체 결합 활성("중화 분석")을 차단 또는 감소시키는 능력에 대해 특성화된다. 많은 "중화" 단클론 항체가 이 방식으로 확인된다. 이후, 설명된 인간 IL-31에 대한 중화 단클론 항체를 발현하는 하이브리도마가 아메리칸 타입 티슈 컬쳐 콜렉션(ATCC; Manassas VA) 특허 기탁기관에 부다페스트 조약 하의 원 기탁물로서 기탁될 수 있다.
5개의 래트 항-마우스 하이브리도마가 유사한 방식으로 생성되었고, 다음의 클론 명칭이 주어졌다: 클론 271.9.4.2.6, 클론 271.26.6.6.1, 클론 271.33.1.2.2, 클론 271.33.3.2.1, 및 클론 271.39.4.6.5. 이들 클론에 의해 생산된 단클론 항체를 상자 담기(binning)(즉, 각 항체가 어떤 다른 결합의 결합을 억제할 수 있는지를 측정), 상대 친화성, 및 중화를 비롯한 다수의 방식으로 특성화하였다. 단클론 항체들은 두 별도의 상자에 들어가는 것으로 나타났으며, 클론 271.33.3.2.1은 다른 4개와는 다른 별도의 에피토프와 결합한다.
조직배양 배지 중의 단클론 항체는 정제된 재조합 단백질 인간 IL-31의 존재하에 성장했을 때 수용체 결합을 차단 또는 감소시키는 능력에 대해 특성화된다.
단클론 항체의 결합 친화성을 알아낼 수 있다. 염소-항-래트 IgG-Fc 감마 특이적 항체를 CM5 Biacore 칩 위에 고정한다. 이 분석은 각 mAb를 항-래트 포착 표면 위에 결합시킨 다음, 연속 농도의 IL-31 mAb를 가로질러 주사하여 결합(Ka) 및 해리(Kd)를 알 수 있도록 최적화된다. 각 작동 후, 20mM HCl을 2번 주사하여 항-래트 항체에 대해 각 표면을 다시 재생한다. 각각에 대한 데이터가 발생하며, 평가 소프트웨어(BIAevaluation 소프트웨어 버전 3.2, Pharmacia BIAcore, Uppsala, Sweden)를 사용하여 IL-31 단백질에 대한 항-IL-31 항체 결합의 운동역학을 평가한다.
잠정적 항-IL-31 mAb에 의해 인식된 표적 분자 IL-31가 실제 IL-31인지의 생화학적 확인이 표준 면역침전법과 이어진 SDS-PAGE 분석 또는 웨스턴 블롯 과정에 의해서 수행되며, 이 둘은 모두 IL-31 트랜스펙트된 Baf3 세포 대 트랜스펙트되지 않은 Baf3 세포로부터의 가용성 멤브레인 제제를 사용한다. 가용성 IL-31-muFc 단백질을 특이적으로 면역침전시키거나 웨스턴 블롯하는 능력에 대해서 mAb가 시험된다.
IL-31에 대한 단클론 항체는 2006년 5월 8일자 제출된 공동 소유의 미국 특허출원 제11/430,066호, 미국 특허출원 공개 제2006-0275296호에 설명된다. 이들 단클론 항체는 조직배양 배지로부터 정제되었으며, 중화 분석에서 IL-31이 그 수용체와 결합하는 능력을 차단 또는 억제하는 능력에 대해 특성화되었다. 20개의 "중화" 단클론 항체가 이 방식으로 확인되었다. 이들 클론에 의해 생산된 단클론 항체들은 상자 담기(즉, 각 항체가 어떤 다른 결합의 결합을 억제할 수 있는지를 측정), 상대 친화성, 및 중화를 비롯한 다수의 방식으로 특성화되었다. 10개의 우수한 중화 항체가 동일한 상자에 들어 있는 것으로 나타났으며, 나머지 단클론 항체는 3개의 별도의 상자에 그룹화된다. 이에 더하여, 우수 중화 항체 중 8개는 IgG1 이소타입이고, 나머지 2개는 IgG2a 이소타입이다. 이러한 단클론 항체는 IgG1 또는 IgG4일 수 있으며, 이로써 보체 결합 및 ADCC 활성이 최소화될 수 있다.
상기 설명된 인간 IL-31에 대한 중화 단클론 항체를 발현하는 하이브리도마가 아메리칸 타입 티슈 컬쳐 콜렉션(ATCC: Manassas VA) 특허 기탁기관에 부다페스트 조약 하의 원 기탁물로서 기탁되었고, 다음의 ATCC 수탁번호를 받았다: ATCC 특허기탁명 PTA-6815, 2005년 6월 29일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6816, 2005년 6월 29일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6829 2005년 7월 6일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6830, 2005년 7월 6일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6831 2005년 7월 6일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6871, 2005년 7월 19일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6872, 2005년 7월 19일 기탁; ATCC 특허기탁명 PTA-6875, 2005년 7월 19일 기탁; 및 ATCC 특허기탁명, 2005년 7월 19일 기탁.
본원에 설명된 마우스 IL-31에 대한 중화 단클론 항체를 발현하는 하이브리도마가 아메리칸 타입 티슈 컬쳐 콜렉션(ATCC: Manassas VA) 특허 기탁기관에 부다페스트 조약하의 원 기탁물로서 기탁되었고, 다음의 ATCC 수탁번호를 받았다: ATCC 특허기탁명 PTA-6874, 2005년 7월 19일 기탁. 이들 하이브리도마 클론에 의해 생산된 단클론 항체들은 2mM L-글루타민, 100㎍/mL 페니실린, 및 100㎍/mL 스트렙토마이신 술페이트가 첨가된 90% 이스코브스 변형 듈베코스 배지, 및 10% 태아 클론 I 혈청(Hyclone Laboratories)으로 된 성장 배지 중에서 배양될 수 있다. 클론들은 37℃ 5-6% 일산화탄소에서 2 x 105 세포/mL에서 배양을 시작하고 1 x 105 내지 5 x 105 세포/mL를 유지함으로써 증식될 수 있다. 세포는 그 다음 옮겨지는 혈청 무함유 조건에 적합하게 될 수 있다. 냉동한 세포를 90% 혈청, 10% DMSO 중에 보관하고, 액체 질소 냉동장치의 증기상에 보관한다.
본원에 설명된 방법에 의해 생성된 IL-31 길항제는 여러 방법에 의해 중화, 억제, 감소, 길항작용에 대해서 시험될 수 있다. 이에 더하여, 리간드 및 단클론 항체의 존재 하에 각질세포 배양물로부터 TARC 및 MDC 같은 전염증성 케모카인 생산의 감소를 측정함으로써 중화가 시험될 수 있다. 또한, 다른 생체마커들, 예를 들어 MCP-1, MIP1a, TARC, MCP-1, MDC, IL-6, IL-8, I-309, SCYA19, MPIF-1, TECK, MIP-1b, SCYB13, GROa/MGSA, CTACK, SCCA1/Serpin B3, TSLP, 및 NT-4가 사용될 수 있다. 또한, 중화는 본원에 설명된 생체내 모델에 의해서 측정될 수도 있다.
본원에 설명된 생체활성 길항제 또는 항체 콘쥬게이트는 정맥내, 동맥내 또는 관내, 피하, 국부 경로로 송달될 수 있거나, 또는 의도된 작용 부위에 국소적으로 도입될 수 있다.
본 발명의 길항제는 IL-31 리간드와 결합하는 능력에 대하여 측정될 수 있으며, 이것은 제한되는 것은 아니지만, NcNga 모델, Ova 경피 모델, 만성 과민성 모델, 만성 합텐 모델, 칼슘 플럭스 모델, 이질통증 모델을 포함하는 본원에 설명된 생체내 모델 중 어느 하나에 의해 측정될 수 있다.
항-IL-31 항체의 억제성 효과를 측정하기 위한 추가의 모델들이 당업자에게 공지되어 있으며, 본원에 설명되었고, Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518:133-139, 2005; 및 Yoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202:541-549, 2005에서 설명되었다.
신경성 염증을 측정하기 위한 마우스 모델이 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Sweitzer, S.M., et al. J. Neuroimmunology 125:82-93, 2002 및 Honore, P., et al. Neuroscience, (98), 585-598, 2000을 참조한다. 또한, Yonehara, N. and Yoshimura M., Pain, 2001 (92/1-2) pp. 259-265를 참조한다.
본 발명의 양태 내에서, 본 발명은 포유류의 신경세포 조직 내 염증의 치료 방법; 포유류에서 통증 치료 방법; 배근신경절세포에서 IL-31-유도 신호전달을 길항하는 방법; 화상과 관련된 증상의 치료 방법; 바이러스 감염과 관련된 증상의 치료 및 바이러스 감염 재활성화의 예방 방법; 및 염증성 장 질환과 관련된 통증 치료 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 염증성 장 질환은 크론병이다.
이들 양태의 구체예에서, 본 발명은 신경세포 조직과 IL-31 길항제를 혼합하는 것을 포함하며, 이때 염증, 통증, 배근신경절 신호전달, 바이러스 감염 또는 재활성화, 또는 화상 조직, 또는 염증성 장 질환과 관련된 통증이 감소, 제한, 예방, 최소화 또는 중화된다.
다른 구체예에서, IL-31 길항제는 SEQ ID NO:2에 나타낸 아미노산 서열의 잔기 27-164를 포함하는 폴리펩티드와 결합한다. 다른 구체예에서, 길항제는 항-유전자형 항체; 항체 단편; 키메라 항체; 및 인간화 항체로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 길항제는 항체이다. 다른 구체예에서, 항체는 단클론 항체이다. 다른 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드와 특이적으로 결합하며, 이때 상기 폴리펩티드는 a) ATCC 특허기탁명 PTA-6815; b) ATCC 특허기탁명 PTA-6816; c) ATCC 특허기탁명 PTA-6829; d) ATCC 특허기탁명 PTA-6830; e) ATCC 특허기탁명 PTA-6831; f) ATCC 특허기탁명 PTA-6871; g) ATCC 특허기탁명 PTA-6872; h) ATCC 특허기탁명 PTA-6875; 및 i) ATCC 특허기탁명 PTA-6873으로 구성된 군으로부터 선택된 하이브리도마에 의해 생산된 단클론 항체와 결합할 수 있다. 다른 구체예에서, 단클론 항체는 항체를 생산하는 하이브리도마가 a) ATCC 특허기탁명 PTA-6815; b) ATCC 특허기탁명 PTA-6829; c) ATCC 특허기탁명 PTA-6816; d) ATCC 특허기탁명 PTA-6871; 및 e) ATCC 특허기탁명 PTA-6830로부터 선택되는 항체 상자로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 단클론 항체는 항체를 생산하는 하이브리도마가 a) ATCC 특허기탁명 PTA-6872; b) ATCC 특허기탁명 PTA-6873; c) ATCC 특허기탁명 PTA-6875; 및 d) ATCC 특허기탁명 PTA-6831로부터 선택되는 항체 상자로부터 선택된다.
다른 구체예에서, 신경세포 조직은 배근신경절 조직 또는 척수 조직을 포함한다.
실시예 1
신경세포 조직에서 IL -31 RA , IL -31, 및 pOSMRb 의 인시튜 혼성화
모두 동일한 개체로부터 얻은 5개의 인간 뇌 조직 샘플과 척수 샘플, 및 상이한 환자로부터 얻은 배근신경절(DRG)을 본 연구에서 분석하였다.
사용된 프로브는 IL-31RA, IL-31, 및 OSMR베타에 대한 프로브였다.
결과를 표 1에 나타낸다.
조직/프로브 IL-31RA pOSMRb IL-31
뇌 전두엽 - - -
뇌 해마 - - -
뇌 두정엽 - - -
뇌 관자엽 - - -
뇌 시상하부 - +/- -
척수 + + -
DRG + + -
뇌 절편: 3개 프로브 모두에 대해 모든 뇌 영역에서 검출가능한 양의 신호는 없었다. 해마에 있는 신경세포 서브셋에서 pOSMRb의 염색은 일관되지 않았다. 이 불균일성은 검출 수준 근처인 매우 낮은 수준의 pOSMRb 발현 때문일 수 있다.
척수: 척수의 한 영역에서 양성 염색이 있었다. 척수 절편의 가능한 위치나 방향에 대한 정보는 이용할 수 없었다. 신호는 척수 전방(배쪽)부에서 나타난 듯하다. 반대 면/영역(또는 전방)은 음성이었다. 양성 신호는 더 큰 신경세포의 서브셋에 한정되는 듯하다. IL-31RA와 pOSMRb는 모두 이 영역에서 유사한 발현 패턴을 나타냈다. IL-31은 음성이었다.
배근신경절(DRG): DRG에 있는 단극 신경세포의 서브셋은 IL-31RA와 pOSMRb에 대해 모두 양성이었다. 작은 위성 세포들은 음성이었다. IL-31은 신경세포를 포함한 모든 세포에서 음성이었다.
따라서, IL-31 길항제는 신경성 자극과 관련된 증상 및 신경성 자극을 개선하는데 유용할 수 있다. 이와 같이, IL-31 길항제는 배근신경절 자극과 같은 신경세포 자극과 관련된 염증 및 통증을 치료하는데 사용될 수 있으며, 통증 및 염증의 감소, 제한, 최소화, 예방, 또는 중화로서 측정될 수 있다.
실시예 2
가려움 반응의 유도에 있어서 IL -31의 관련성
A. 방법 I (IL-31-처치 마우스의 캡사이신 치료)
10주령 BALB/c 동물(CRL)을 마취하고, 장기 지속 진통제인 부프라노핀 염산염을 0.1mg/kg으로 피하 주사한 다음, 식염수 중의 10% 에탄올 + 10% Tween 80 중의 캡사이신 4mg/mL 용액 0.25mL를 목덜미에 피하 주사하였다. 신경독소 처치 후 동물을 적어도 30분간 마취된 상태로 유지하였다. 48시간 후 14-일 삼투펌프를 피하 이식하고, IL-31을 20ug/일로 14일간 계속 송달하였다. 탈모 및 소양증에 대해 6일간 매일 마우스를 모니터하였으며, 다음 기준을 사용하였다: 0 = 긁지 않음, 동물은 정상으로 보인다, 1 = 작은 영역에서 외피가 얇아짐, 긁는 것이 눈에 띈다, 2 = 미소한 탈모(작은 반), 긁는다, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁는다, 4 = 심한 탈모, 과도하게 긁는다.
결과는 IL-31 송달 3일 후 비-캡사이신-치료 마우스는 평균 2.625의 긁음/탈모 점수를 나타내었고, 캡사이신-치료 마우스는 상당히 더 낮은 1의 점수를 나타내었음을 증명하였다. 따라서, IL-31 송달 전에 캡사이신으로 치료된 마우스는 긁음 및 탈모의 발생이 지연됨과 동시에 6일간의 실험에 걸쳐서 긁음 및 탈모의 강도에 있어서도 낮은 점수를 나타내었다. 이들 데이터는 IL-31이 IL-31에 의해 유도되는 탈모 및 소양증에 기여하는 어떤 신경세포 성분을 유도한다는 것을 시사한다. 따라서, IL-31의 중화는 가려움을 수반한 피부 장애를 앓는 환자에서 가려움의 발생 및 강도를 감소시킬 수 있으며, 이에 따라 피부염도 감소될 수 있다.
B. 방법 II
Tac1 유전자에 대한 동종접합 널 마우스(homozygous null mice)는 섭스턴스 P 또는 뉴로키닌 A를 검출가능한 정도로 발현하지 않는다. 이들 마우스는 상당히 감소된 통각수용기 통증 반응을 가짐으로써 강도 높은 자극을 완화하며, 따라서 통증/가려움 과정 및 염증성 질환 상태에 대한 타치카이닌 펩티드의 기여를 연구하기 위한 유용한 도구이다. 12주령 Tac1 녹아웃 마우스에 IL-31 단백질을 1ug/일로 송달하는 14-일 삼투펌프를 이식하고, 다음 기준을 사용하여 탈모 및 소양증에 대해 매일 관찰하였다: 0 = 긁지 않음, 동물은 정상으로 보인다, 1 = 작은 영역에서 외피가 얇아짐, 긁는 것이 눈에 띈다, 2 = 미소한 탈모(작은 반), 긁는다, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁는다, 4 = 심한 탈모, 과도하게 긁는다.
이 연구의 결과는 야생형 대조군 마우스에 비해 Tac1 결핍 마우스가 IL-31-유도 긁음/탈모에 덜 민감하였음을 나타낸다. 야생형 마우스는 100%(10/10)가 IL-31 처치 후 6일까지 긁음 및 탈모의 증거를 나타냈지만, Tac1 결핍 마우스는 단지 33.3%(2/6)만이 동일한 시간 지점에서 긁음 및 탈모의 징후를 나타내었다. 이들 데이터는 IL-31이 IL-31-처치 마우스에서 긁음/탈모 표현형에 기여하는 신경세포 성분을 유도한다는 것을 나타내며, IL-31의 중화가 피부염과 관련된 긁음의 발생 및 강도를 감소시킬 수 있다.
C. 방법 III (IL-31 중화 항체의 투여)
약 8-12주령 된 정상 암컷 BALB/c 마우스(CRL)에 mIL-31을 1ug/일로 송달하는 14-일 삼투펌프(Alzet, #2002)를 피하 이식하였다. 마우스 군은 IL-31을 송달하기 1주 전에 시작하여 래트 항-마우스 IL-31 단클론 항체 10mg/kg(200ug/마우스)를 주 2회 받았다. 마우스 대조군은 동일한 투약 일정으로 비히클(PBS/0.1% BSA) i.p. 주사를 받았다. 다음 기준을 사용하여 탈모 및 소양증에 대해 매일 마우스를 점수 매겼다: 0 = 긁지 않음, 동물은 정상으로 보인다, 1 = 작은 영역에서 외피가 얇아짐, 긁는 것이 눈에 띈다, 2 = 미소한 탈모(작은 반), 긁는다, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁는다, 4 = 심한 탈모, 과도하게 긁는다.
모든 실험에서, 래트 항-mIL-31 mAb로 치료된 마우스는 약 5 내지 7일의 증상 개시의 지연을 나타냈으며, 탈모 및 소양증에 대해 전체적인 점수가 더 낮았다. 모든 mAb 치료 마우스 군(투약 빈도 또는 농도에 관계없이)은 연구 13일까지 대조군 마우스와 유사한 탈모 및 소양증을 나타내었다. 이들 데이터는 IL-31의 중화가 IL-31에 의해 유도되는 긁음/탈모 반응의 개시를 지연시킬 수 있음을 시사한다.
실시예 3
IL -31 RA / OSMR 베타 수용체 루시페라제 분석
4개 유전자로부터의 STAT 전사인자 결합 요소를 함유하는 상보성 올리고뉴클레오티드를 사용하여 KZ134 플라스미드를 구성하였으며, 변형된 c-fos Sis 유도성 요소(m67SIE 또는 hSIE)(Sadowski, H. et al. Science 261:1739-1744, 1993), p21 WAF1 유전자로부터의 p21 SIE1(Chin, Y. et al., Science 272:719-722, 1996), 베타-카세인 유전자의 유선 반응 요소(Schmitt-Ney, M. et al., Mol. Cell. Biol. 11:3745-3755, 1991), 및 Fcg RI 유전자의 STAT 유도성 요소(Seidel, H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 92:3041-3045, 1995)를 포함한다. 이들 올리고뉴클레오티드는 Asp718-XhoI 호환성 단부를 함유하며, 표준 방법을 사용하여, 동일한 효소로 소화되고 네오마이신 선택성 마커를 함유하는 c-fos 프로모터(Poulsen, L. K., et al., J. Biol. Chem. 273:6229-6232, 1998)를 가진 수여자 개똥벌레 루시페라제 리포터 벡터에 리게이션되었다. 표준 트랜스펙션 및 선별 방법을 사용하여, KZ134 플라스미드를 이용하여 BaF3 세포를 안정하게 트랜스펙트하여, BaF3/KZ134 셀라인을 제조하였다.
전장 IL-31RA 또는 IL-31RA/OSMR베타 수용체를 발현하는 안정한 BaF3/KZ134 표시자 셀라인을 구성하였다. 표준 기술을 사용하여 클론들을 희석, 평판, 선별하였다. 인간 IL-31 조건 배지 또는 정제된 IL-31 단백질을 유도제로 사용하여 루시페라제 분석(아래 B 참조)에 의해 클론들을 스크리닝하였다. 최고 루시페라제 반응(STAT 루시페라제에 의한)을 가진 클론과 최저 바탕값을 선택하였다. 안정한 트랜스펙턴트 셀라인을 선별하였다. 이 셀라인들을 셀라인에 트랜스펙트된 수용체에 따라서 BaF3/KZ134/IL-31RA 또는 BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMR베타로 명명하였다.
유사하게, BHK 셀라인을 본원에 설명된 방법을 사용하여 또한 구성하고, 본원에 설명된 루시페라제 분석에 사용하였다. 이 셀라인들을 셀라인에 트랜스펙트된 수용체에 따라서 BHK/KZ134/IL-31RA 또는 BHK/KZ134/IL-31RA/OSMR베타로 명명하였다.
BaF3/KZ134/IL-31RA 및 BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMR베타 세포를 회전시켜 가라 앉힌 다음 mIL-3 무함유 배지 중에서 세척하였다. 세포를 회전시키고 세척하는 것을 3번 반복하여 mIL-3를 확실히 제거하였다. 다음에, 혈구계수기에서 세포를 계수하였다. 96-웰 포맷에서 mIL-3 무함유 배지를 사용하여 웰 당 100㎕ 부피 중에 웰 당 약 30,000 세포로 세포를 평판하였다. 트랜스펙트되지 않은 BaF3/KZ134 세포에 대해서도 동일한 과정을 사용하였고, 이것을 이후 분석에서 대조군으로 사용하였다. 96-웰 포맷에서 100㎕ 배지 중에 웰 당 15,000 세포로 BHK/KZ134/IL-31RA 또는 BHK/KZ134/IL-31RA/OSMR베타 세포를 평판하였다. 모 BHK/KZ134 세포를 대조군으로 사용하였다.
BaF3/KZ134/IL-31RA, BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMR베타, BHK/KZ134/IL-31RA, 또는 BHK/KZ134/IL-31RA/OSMR베타 세포의 STAT 활성화를 조건 배지 또는 정제된 단백질을 사용하여 평가한다. 희석된 조건 배지 또는 단백질 100㎕를 BaF3/KZ134/IL-31RA, BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMR베타, BHK/KZ134/IL-31RA, 또는 BHK/KZ134/IL-31RA/ OSMR베타 세포에 첨가한다. 조건 배지를 사용한 분석을 대조군으로서 트랜스펙트되지 않은 BaF3/KZ134 또는 BHK/KZ134 세포와 병행하여 행한다. 총 분석 부피는 200㎕이다. 분석 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% 이산화탄소에서 인큐베이션하고, 24시간째에 10분간 2000rpm에서 원심분리하여 BaF3 세포를 펠릿으로 만들고, 배지를 흡입한 다음, 세포용해 버퍼(Promega) 25㎕를 첨가한다. BHK 셀라인은 세포가 유착성이므로 원심분리 단계가 필요하지 않다. 실온에서 10분 후에, 5초 인테그레이션에서 루시페라제 분석 기질(Promega) 40㎕를 첨가하고 발광분석기(Labsystems Luminoskan, model RS)에서 플레이트를 판독함으로써 STAT 수용체 구성물의 활성화에 대해 플레이트를 측정한다.
실시예 4
아데노바이러스 STAT / SRE 리포터 유전자로의 일시적 감염에 의한 인간 형질전환 상피 셀라인의 루시페라제 분석
IL-31 활성의 억제, 감소 및/또는 중화를 루시페라제 분석에 의해 측정할 수 있다. 예를 들어, 인간 형질전환 셀라인을 각 세포 타입에 대해 특정된 정규 성장 배지 중에 10,000 세포/웰로 바닥이 평평한 96-웰 플레이트에 접종할 수 있다. 다음날 세포를 아데노바이러스 리포터 구성물 KZ136으로 5000의 감염 다중도로 감염시킨다. KZ136 리포터는 혈청 반응 요소에 더하여 STAT 요소들을 함유한다. 2mM L-글루타민(GibcoBRL), 1mM 나트륨 피루베이트(GibcoBRL) 및 1 x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 보충제(GibcoBRL)로 보충된 DMEM(이후 혈청 무함유 배지라고 한다)을 사용하며, 총 부피는 100uL/웰이다. 세포를 하룻밤 배양한다.
다음날 배지를 제거하고 유도 배지 100㎕로 교환한다. 유도 배지는 혈청 무함유 배지 중에 100ng/mL, 50ng/mL, 25ng/mL, 12.5ng/mL, 6.25ng/mL, 3.125ng/mL 및 1.56ng/mL로 희석된 인간 IL-31이다. 20% FBS의 양성 대조군을 사용하여 분석을 유효하게 하고 아데노바이러스에 의한 감염이 성공하도록 확실히 한다. 세포를 5시간 동안 유도하고, 5시간째에 배지를 흡입한다. 다음에, 세포를 웰 당 50㎕의 PBS로 세척하고, 1 x 세포용해 버퍼(Promega) 30㎕/웰에 용해한다. 실온에서 10분간 인큐베이션한 후, 세포용해물 25㎕/웰을 불투명 흰색 96-웰 플레이트로 옮긴다. 다음에, 플레이트를 루시페라제 기질(Promega)를 40㎕/웰 주사하고 5초 인테그레이션을 사용하여 발광분석기에서 판독한다.
실시예 5
염증성 장 질환의 결장 조직에서 IL -31 분석
A) IL-31 면역조직화학
다클론 항체(토끼 항-인간 IL-31 CEE, 1.0mg/mL까지 친화성 정제)를 사용하여 ABC-Elite 기반 검출 시스템을 통해 염증성 장 질환 환자의 소화관 조직에서 인간 IL-31을 검출하였다. 1.66mg/mL까지 정제된 정상 토끼 혈청, 단백질 A를 음성 대조군으로 사용하며, 동일한 프로토콜 및 항체 농도를 사용한다.
프로토콜은 다음과 같다: ABC-HRP Elite(Vector Laboratories PK-6100); 20' 증기, 20' 실온 냉각 동안 표적 재생(ph 9); 30' 동안 단백질 차단; 60' 동안 일차 Ab(1:1,000-2,500); 45' 동안 이차 Ab(Bi:ant-Rabbit); 45' 동안 ABC-HRP 복합체; 및 권고된 DAB 기질.
본 연구에서는 토끼 항-인간 IL-31 다클론 항체를 사용하여 총 19명의 GI 조직을 분석하였다. 이 군에서 5개의 결장 샘플은 IBD 또는 암 조직 근처의 정상 조직에서 획득하였다. 9개의 샘플은 크론병으로 진단되었고, 5개는 궤양성 결장염이었다. 전반적으로, IBD 또는 암 조직 또는 궤양성 결장염 조직 근처의 정상 조직에서보다 크론병 샘플에서 양성 세포가 더 많았다. 크론병 샘플에서 신호를 나타내는 두드러진 세포들은 고유판 및 점막밑에 위치하며, 침윤 세포들은 평활근 다발 사이에서 신호를 나타낸다. 육아종에서는 결절 중심에 있는 많은 큰 세포들은 양성이지만, 이들 결절의 피질, 및 페이어 반은 음성으로 나타난다. 장샘의 상피는 경우에 따라 양성이다. 궤양성 결장염 샘플에서는 점막밑에 소수의 세포가 산포되어 있고, 평활근 다발 사이의 침윤 세포는 양성이다. 궤양성 결장염 샘플에서 양성 세포의 퍼센트는 크론병보다 적지만, "정상" 샘플에 비해서는 유사하거나 약간 더 높다. 궤양성 결장염의 고유판 세포는 대부분 음성이다. 요약하면, 본 연구는 IL-31이 크론병 GI 샘플에서 상향조절된다는 것을 증명한다. 본 연구에 의해, IL-31이 궤양성 결장염 샘플과 "정상" 대조군에서 유사한 발현 프로파일을 나타낸다는 것이 밝혀졌다.
B) IL-31 인시튜 혼성화
또한, 인시튜 혼성화(ISH)를 사용하여 조직들의 서브셋을 분석하였다. ISH에서는 IL-31 mRNA가 점막밑 및 지방 조직 내의 소수의 침윤 세포에서 관찰되었다. 우리는 IHC를 사용하여 IL-31 단백질이 이미 언급한 세포 집단뿐만 아니라 고유판 및 육아종 중심에 있는 세포들에서 양성 염색된 것을 관찰하였다. 이들 두 분석의 차이는 분석 감도에 의해 설명될 수 있었다.
실시예 6
염증성 장 질환의 결장 조직에서 IL -31 RA 분석
A) IL-31RA 면역조직화학
다클론 항체(토끼 항-인간 IL-31RA(버전4) CEE, 1.33mg/mL까지 친화성 정제)를 사용하여 ABC-Elite 기반 검출 시스템을 통해 염증성 장 질환 환자의 소화관 조직에서 인간 IL-31RA을 검출하였다. 1.66mg/mL까지 정제된 정상 토끼 혈청, 단백질 A를 음성 대조군으로 사용하며, 동일한 프로토콜 및 항체 농도를 사용한다.
프로토콜은 다음과 같다: ABC-HRP Elite(Vector Laboratories PK-6100); 20' 증기, 20' 실온 냉각 동안 표적 재생(ph 9); 30' 동안 단백질 차단; 60' 동안 일차 Ab(1:2,000); 45' 동안 이차 Ab; 45' 동안 ABC-HRP 복합체; 및 10' 동안 DAB+Dako Cytomation.
본 연구에서는 토끼 항-인간 IL-31RA(버전 4) CEE 항체를 사용하여 총 19명의 GI 조직을 분석하였다. 이 군에서 약 5개의 결장 샘플은 IBD 또는 암 조직 근처의 정상 조직에서 획득하였다. 9개의 샘플은 크론병으로 진단되었고, 5개는 궤양성 결장염이었다. 전반적으로, IBD 또는 암 조직 또는 궤양성 결장염 조직 근처의 정상 조직에서보다 크론병 샘플에서 양성 세포가 더 많았다. 크론병에서 양성 세포는 점막밑의 연결 조직에 주로 위치한다. 육아종 결절은 음성이다. 경우에 따라 크론병 샘플에서 약한 상피 신호가 있다. 궤양성 결장염(UC) 샘플에는 검출가능한 신호가 없었다. 점막밑의 소수의 세포가 IL-31RA 단백질에 대해 IHC에서 양성 염색되었다.
B) IL-31RA 인시튜 혼성화
이전 연구에서 5개의 조직을 ISH를 사용하여 연구하였는데, 이 중 3개는 크론병 결장이었다. 이들 크론병 조직에서는 IL-31RA mRNA가 정상 대응부에 비해 상당히 상향조절되었으며, 신호는 육아종 결절의 피질에 국한되었고, 점막밑의 연결 조직과 지방 조직 영역에는 많은 침윤 세포가 있었다. IHC와 인시튜 분석의 불일치에 대한 가능한 이유는 일시적 mRNA 발현, 단백질 가공 시간, IL-31RA 단백질 안정성, 및/또는 두 분석의 감도 차이를 포함한다.
실시예 7
Eμ Lck IL -31 트랜스젠 마우스에서 DSS -유도 결장염 연구
EμLck IL-31 트랜스젠 마우스와 비-트랜스젠 한배 대조군 마우스를 점막 염증의 덱스트란 술페이트 나트륨(DSS)-유도 모델로서 시험하여 질환 감수성 및 심도에 있어서의 가능한 차이를 조사하였다. 음용수 중에 2-3% DSS를 받은 정상 마우스는 인간 염증성 장 질환을 모방한 증상 및 병리학을 나타낸다(Strober, Fuss and Blumberg, Annu. Rev. Immunol. 2002 참조). 구조적으로, DSS는 대장의 점막 상피 장벽을 파괴하여 염증을 일으킨다. 이 염증의 결과, DSS 처치 마우스는 체중이 감소되고 설사가 발생한다. 체중, 변 규칙성 및 변에 존재하는 혈액에 기초한 누적 점수인 질환 활성 지수(DAI)를 사용하여 결장염의 심도에 대해 마우스를 모니터한다. DSS를 사용하여 급성 또는 만성 형태의 결장염을 유발할 수 있다. 급성 결장염은 0일에서 7일까지 음용수 중에 DSS(본 연구에서는 2% 또는 3%)를 송달함으로써 유발되고, 만성 결장염은 5일간 음용수 중에 DSS를 송달하고, 7 내지 12일의 회복기를 둔 다음, DSS 처치를 반복함으로써 유발된다.
EμLck IL-31 트랜스젠 마우스에서 4번의 연구를 수행하였다. 급성 또는 만성 DSS 모델 중 어느 것이 사용되었는지와 관계없이, EμLck IL-31 트랜스젠 마우스는 한배 대조군 마우스와 비교하여 초기에 더 많은 체중이 감소되었다. 사실, 4번의 연구 중 3번에서 IL-31 트랜스젠 마우스는 대조군에 비해 상당히 더 많은 체중손실을 나타내었다(p<0.001, p=0.011). 이에 더하여, 트랜스젠 마우스는 야생형 대조군에 비해 상당히 짧은 결장을 가졌다(p<0.05). 만성 결장염 연구에서 DAI 점수는 비-트랜스젠 대조군에 비해 IL-31 트랜스젠 마우스에서 상당히 더 높았다(p< 0.001).
IL-31의 전신 송달이 정상 비-트랜스젠 마우스에서 DSS-유도 결장염의 발생에 영향을 미칠 수 있는지를 판단하기 위하여, 우리는 동물에 DSS 처치 전 매일 일정 용량의 IL-31 또는 비히클(PBS, 0.1% BSA)을 송달하는 삼투펌프를 이식하였다. 한 연구에서, N3 세대의 비-트랜스젠 마우스(B6C3F2 x C57BL/6)에 DSS 투여 진행과정 동안 하루 20㎍의 IL-31 또는 비히클을 송달하는 펌프를 피하 이식하였다. IL-31 치료 마우스 대 부형제 치료 마우스 사이에 체중손실, DAI 점수, 또는 결장 길이의 차이는 없었다. 또한, 정상 C57BL/6 마우스에서 유사한 펌프 송달 연구를 수행하였다; 마우스에 하루 10㎍의 IL-31 또는 비히클을 송달하는 펌프를 이식하고, 급성 섭생으로 2% DSS를 주었다. 역시, IL-31-송달 펌프가 이식되든 또는 비히클-송달 펌프가 이식되든 DSS-결장염 변수들은 마우스 사이에 차이가 없었다. 마지막으로, 2% DSS-급성 결장염 연구를 IL-31RA 결핍(IL-31RA-/-) 마우스에서 수행하였다. 역시, IL-31RA 결핍 마우스와 야생형 대조군 사이에 체중손실, DAI 점수 또는 결장 길이의 차이는 없었다.
요약하면, 급성 결장염 연구에서 정상 마우스에의 IL-31의 전신 송달이 질환 성과에 영향을 미치지 않았으므로, IL-31은 DSS에 의해 유도된 점막 염증에 직접적인 영향을 미치는 것 같지는 않다. 트랜스젠 표현형으로 인한 스트레스의 결과로서 IL-31 트랜스젠 동물은 DSS-유도 결장염에 더 감수성일 수 있다. 그러나, EμLck IL-31 트랜스젠 마우스에서는 말초 림프절에서 활성화 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수가 증가하며(Dillon, et al, 2004), EμLck IL-31 트랜스젠 마우스에서 관찰된 DSS-유도 결장염에 대한 증가된 감수성이 이들 활성화 림프구 존재의 결과일 수 있다.
실시예 8
미세투석을 사용한 진피 간질액의 샘플링에 의한 항- IL -31 치료의 효과
미세투석을 본 발명의 분자와 함께 사용하여 피부에서 항체의 생체이용성 및 분포를 직접 분석할 수 있다. 미세투석은 세포간 유체를 수집 및 분석하기 위하여 사용된다. Luminex 비드에 교차연결된 종-특이적 항-IgG를 사용하여 간질액 중의 항체가 측정될 수 있다. 더 나아가, IgG-결합 IL-31에 대한 자유도의 평가를 이차 항체로서 항-IgG가 아닌 항-IL-31을 사용하여 행한다. 2. 각질세포 및/또는 배근신경절의 IL-31 활성화에 의해 생산된 전염증성 사이토카인 및 케모카인을 분석한다. British J., Dermatology 142(6):1114-1120, (2000); J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 73:299-302, (2002); Am J. Physiol Heart Circ. Physiol 286:108-112, (2004); Neuroscience Letters 230:117-120, (1997); 및 AAPS J. 7(3); E686-E692, (2005)를 참조한다. 또한, Steinhoff, M. et al., J. Neuroscience, 23(15):6176-6180, 2003을 참조한다.
미세투석 프로브는 TSE Systems(Midland, Michigan)에서 공급된다. 이 프로브는 T-자형이며, 15mm 줄기에 부착된 4mm L에 의한 3000 kDa 멤브레인 0.3mm로 구성된다. 입구와 출구는 0.12mm ID 픽 튜빙에 연결된다. 생체외 분석을 생체내 분석에 사용된 것과 동일한 길이의 배관을 사용하여 수행한다. 푸쉬/풀 펌프 시스템을 사용하여 HMWCO 프로브를 구동시킴으로써 외부로의(간질쪽) 흐름을 최소화한다. 그러나, 푸쉬만 사용해도 된다(Harvard PHD 2000). Δp 및 ΔΠ로 인한 유체 손실을 여러 유속에서 측정한다. 비-멤브레인(외부) 확산을 배제하기 위해서 혼합 챔버에 넣은 기지량의 IgG를 사용하여 여러 유속에서 멤브레인 효능(Ed)을 측정한다. 마우스 IgG 및 마우스 헤모글로빈의 Ed를 측정하고, 생체내 대조군으로 사용한다. Luminex 비드에 연결된 염소 항-래트-IgG에 의해 정량하고, 비-특이적 반응성을 줄이기 위해서 토끼 또는 원숭이 바이오틴-항-래트 IgG로 포착을 기록한다. 마우스 IgG 및 헤모글로빈에 대한 분석을 생체내 연구에서 대조군에 대해서도 행한다. 비드 연결은 표준 키트 및 프로토콜을 사용하여 수행될 것이다.
삼투펌프, ID 또는 미세투석 섬유에 의해 사이토카인으로 마우스 및 래트를 처치하는 것이 사용된다. 항체는 I.V.로 주사한다. 프로브는 UV 멸균한다. 미세투석 프로브를 삽입하고 혈액 분석물질을 샘플링한다. 생체외 특정된 멤브레인 변수들을 사용하여 순환계로부터 피부로의 IgG 전달량을 측정하고, 항체 투과성과 관류 속도를 추정한다.
동물 쌍 당 1번의 시간 지점 및 시간에 따른 순환 항체 수준 및 진피/표피로의 확산을 추정하기에 충분한 수의 시간 지점에서 다음의 단계를 수행한다: i) 미세투석 멤브레인을 피부에 삽입하고, 생체외 분석에 의해 결정된 속도로 예비 샘플을 회수한다. 이 대조군 샘플에 의해 투과 유체의 베이스라인 반응성을 결정한다; 2) 래트 항-IL-31 항체를 꼬리에 I.V. 주사하여 도입하고, 미리 정해진 시간 지점에서 안와내 혈액 샘플을 취하여 순환 항체 수준을 결정한다; 3) 분석에 충분한 부피의 미세투석 샘플을 프로토콜의 펌프 속도로 취한다; 4) 분석물질 샘플링의 마지막에 안와내 샘플을 취하여 항-IL-31 순환 수준을 결정한다.
Luminex에 의하여 분석물질과 혈장의 다중 분석을 수행하고, 1) 항-IL-31 항체, 2) 고갈/확산 대조군인 항-마우스-IgG, 및 3) 미세투석 삽입 외상 및 혈관 손상에 대한 대조군인 항-마우스 헤모글로빈에 대해 정량 측정한다. 생체외 측정된 멤브레인 변수들과 주어진 순환 항체 농도에서 측정된 항-IL-31의 분석물질로의 유입 속도를 사용하여 피부 확산 속도의 추정치를 측정한다. 분석물질의 마우스 IgG의 농도를 사용하여 프로브 근처에서 단백질의 국소 고갈을 평가한다. 확산 분석에서 국소 고갈을 보상하기 위한 공식을 고안할 필요가 있을 수 있다.
전술한 내용으로부터, 본 발명의 특정 구체예들이 예시를 위해 본원에 설명되었지만, 본 발명의 사상 및 범위에서 벗어남 없이 다양한 변형이 만들어질 수 있음이 인정될 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구범위를 제외하고는 제한되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> ZYMOGENETICS, INC. YAO, YUE BILSBOROUGH, JANINE KREJSA, CECILE ZUCKERMAN, LINDA ROGGE, MARK <120> METHODS OF TREATING PAIN AND INFLAMMATION IN NEURONAL TISSUE USING IL-31 ANTAGONISTS <130> 06-02PC <150> 60/758,066 <151> 2006-01-10 <150> 60/757,979 <151> 2006-01-10 <150> 60/773,031 <151> 2006-02-14 <150> 60/805,552 <151> 2006-06-22 <150> 60/805,550 <151> 2006-06-22 <150> 60/805,554 <151> 2006-06-22 <150> 60/823,982 <151> 2006-08-30 <150> 60/823,987 <151> 2006-08-30 <160> 16 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 904 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (28)...(522) <400> 1 ctgaagctgg ccttgctctc tctcgcc atg gcc tct cac tca ggc ccc tcg acg 54 Met Ala Ser His Ser Gly Pro Ser Thr 1 5 tct gtg ctc ttt ctg ttc tgc tgc ctg gga ggc tgg ctg gcc tcc cac 102 Ser Val Leu Phe Leu Phe Cys Cys Leu Gly Gly Trp Leu Ala Ser His 10 15 20 25 acg ttg ccc gtc cgt tta cta cga cca agt gat gat gta cag aaa ata 150 Thr Leu Pro Val Arg Leu Leu Arg Pro Ser Asp Asp Val Gln Lys Ile 30 35 40 gtc gag gaa tta cag tcc ctc tcg aag atg ctt ttg aaa gat gtg gag 198 Val Glu Glu Leu Gln Ser Leu Ser Lys Met Leu Leu Lys Asp Val Glu 45 50 55 gaa gag aag ggc gtg ctc gtg tcc cag aat tac acg ctg ccg tgt ctc 246 Glu Glu Lys Gly Val Leu Val Ser Gln Asn Tyr Thr Leu Pro Cys Leu 60 65 70 agc cct gac gcc cag ccg cca aac aac atc cac agc cca gcc atc cgg 294 Ser Pro Asp Ala Gln Pro Pro Asn Asn Ile His Ser Pro Ala Ile Arg 75 80 85 gca tat ctc aag aca atc aga cag cta gac aac aaa tct gtt att gat 342 Ala Tyr Leu Lys Thr Ile Arg Gln Leu Asp Asn Lys Ser Val Ile Asp 90 95 100 105 gag atc ata gag cac ctc gac aaa ctc ata ttt caa gat gca cca gaa 390 Glu Ile Ile Glu His Leu Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro Glu 110 115 120 aca aac att tct gtg cca aca gac acc cat gaa tgt aaa cgc ttc atc 438 Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe Ile 125 130 135 ctg act att tct caa cag ttt tca gag tgc atg gac ctc gca cta aaa 486 Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys 140 145 150 tca ttg acc tct gga gcc caa cag gcc acc act taa ggccatctct 532 Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln Gln Ala Thr Thr * 155 160 tcctttcgga ttggcaggaa cttaaggagc cttaaaaaga tgaccgacag ctaagtgtgg 592 gaactctgcc gtgattcctt aagtacattt ttccaatgaa taatctcagg gacccctcat 652 atgggctagt cccgggaggg ctgagatgtg aatttgtgaa ttaccttgaa aaacattagg 712 ttattgttat tagtcttggt atttatggaa tgcttttctt ctgcaggctt aagtcttact 772 tattataccc tcgtgagggt gggaggtggc agctatgtta atttattgat atttattgta 832 ctaagagttg tcaatgctcc ctgggggagc cctcggaatc tatttaataa attatattga 892 atttttctca ta 904 <210> 2 <211> 164 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Ser His Ser Gly Pro Ser Thr Ser Val Leu Phe Leu Phe Cys 1 5 10 15 Cys Leu Gly Gly Trp Leu Ala Ser His Thr Leu Pro Val Arg Leu Leu 20 25 30 Arg Pro Ser Asp Asp Val Gln Lys Ile Val Glu Glu Leu Gln Ser Leu 35 40 45 Ser Lys Met Leu Leu Lys Asp Val Glu Glu Glu Lys Gly Val Leu Val 50 55 60 Ser Gln Asn Tyr Thr Leu Pro Cys Leu Ser Pro Asp Ala Gln Pro Pro 65 70 75 80 Asn Asn Ile His Ser Pro Ala Ile Arg Ala Tyr Leu Lys Thr Ile Arg 85 90 95 Gln Leu Asp Asn Lys Ser Val Ile Asp Glu Ile Ile Glu His Leu Asp 100 105 110 Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr 115 120 125 Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe 130 135 140 Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln 145 150 155 160 Gln Ala Thr Thr <210> 3 <211> 1235 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (482)...(973) <400> 3 tgagaacgca aggacaaggg caggccctgg agcacagatg ccttctcctt atgccttccc 60 tgtgttcact agagccatcc ccctgcctcc ggaattccca cagatggatc gctctgtggc 120 ttcttaaaac ttccctgcag ggcactgacc ctcagcccct ctaagtcact tcttccccag 180 tgattgtact tttcaatcgg gcttcaaact ttcctctcat taaatcagca agcactttcc 240 aagaaaagag agatgctcaa gatgccttcc tgtgtgccct gctttcccca ggccgagccg 300 aggctggcaa ccttttgaaa atgttttctg gagaaaagct gagcaatggt tttgccatgg 360 gcgggccttt gatctgcttc ctcatgacaa ccctttatat attgcctggt ggccatggcg 420 aacacaccag gctccagaga ccacaggcaa agcgggcctt cctcactctc ttaccgtcgc 480 c atg atc ttc cac aca gga aca acg aag cct acc ctg gtg ctg ctt tgc 529 Met Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Lys Pro Thr Leu Val Leu Leu Cys 1 5 10 15 tgt ata gga acc tgg ctg gcc acc tgc agc ttg tcc ttc ggt gcc cca 577 Cys Ile Gly Thr Trp Leu Ala Thr Cys Ser Leu Ser Phe Gly Ala Pro 20 25 30 ata tcg aag gaa gac tta aga act aca att gac ctc ttg aaa caa gag 625 Ile Ser Lys Glu Asp Leu Arg Thr Thr Ile Asp Leu Leu Lys Gln Glu 35 40 45 tct cag gat ctt tat aac aac tat agc ata aag cag gca tct ggg atg 673 Ser Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Tyr Ser Ile Lys Gln Ala Ser Gly Met 50 55 60 tca gca gac gaa tca ata cag ctg ccg tgt ttc agc ctg gac cgg gaa 721 Ser Ala Asp Glu Ser Ile Gln Leu Pro Cys Phe Ser Leu Asp Arg Glu 65 70 75 80 gca tta acc aac atc tcg gtc atc ata gca cat ctg gag aaa gtc aaa 769 Ala Leu Thr Asn Ile Ser Val Ile Ile Ala His Leu Glu Lys Val Lys 85 90 95 gtg ttg agc gag aac aca gta gat act tct tgg gtg ata aga tgg cta 817 Val Leu Ser Glu Asn Thr Val Asp Thr Ser Trp Val Ile Arg Trp Leu 100 105 110 aca aac atc agc tgt ttc aac cca ctg aat tta aac att tct gtg cct 865 Thr Asn Ile Ser Cys Phe Asn Pro Leu Asn Leu Asn Ile Ser Val Pro 115 120 125 gga aat act gat gaa tcc tat gat tgt aaa gtg ttc gtg ctt acg gtt 913 Gly Asn Thr Asp Glu Ser Tyr Asp Cys Lys Val Phe Val Leu Thr Val 130 135 140 tta aag cag ttc tca aac tgc atg gca gaa ctg cag gct aag gac aat 961 Leu Lys Gln Phe Ser Asn Cys Met Ala Glu Leu Gln Ala Lys Asp Asn 145 150 155 160 act aca tgc tga gtgatggggg ggggggggtg cagtgtcctc agcagtgcct 1013 Thr Thr Cys * gtccttcgag ggctgagctt gcaacccagg acttaactcc aaagggactg tgcggtcatt 1073 actagtcatg ttatttatgt ttttattttg tccactgaaa tcttgttctg ctaccctgta 1133 gggactggaa gtggcagcta tatttattta tttatgtact gagtttgtta acgctccatg 1193 gaggagcctt cagagtctat ttaataaatt atattgacat ga 1235 <210> 4 <211> 163 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Met Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Lys Pro Thr Leu Val Leu Leu Cys 1 5 10 15 Cys Ile Gly Thr Trp Leu Ala Thr Cys Ser Leu Ser Phe Gly Ala Pro 20 25 30 Ile Ser Lys Glu Asp Leu Arg Thr Thr Ile Asp Leu Leu Lys Gln Glu 35 40 45 Ser Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Tyr Ser Ile Lys Gln Ala Ser Gly Met 50 55 60 Ser Ala Asp Glu Ser Ile Gln Leu Pro Cys Phe Ser Leu Asp Arg Glu 65 70 75 80 Ala Leu Thr Asn Ile Ser Val Ile Ile Ala His Leu Glu Lys Val Lys 85 90 95 Val Leu Ser Glu Asn Thr Val Asp Thr Ser Trp Val Ile Arg Trp Leu 100 105 110 Thr Asn Ile Ser Cys Phe Asn Pro Leu Asn Leu Asn Ile Ser Val Pro 115 120 125 Gly Asn Thr Asp Glu Ser Tyr Asp Cys Lys Val Phe Val Leu Thr Val 130 135 140 Leu Lys Gln Phe Ser Asn Cys Met Ala Glu Leu Gln Ala Lys Asp Asn 145 150 155 160 Thr Thr Cys <210> 5 <211> 2393 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (66)...(2360) <400> 5 tgtgtgtgca gtatgaaaat tgagacagga aggcagagtg tcagcttgtt ccacctcagc 60 tggga atg tgc atc agg caa ctc aag ttt ttc acc acg gca tgt gtc tgt 110 Met Cys Ile Arg Gln Leu Lys Phe Phe Thr Thr Ala Cys Val Cys 1 5 10 15 gaa tgt ccg caa aac att ctc tct ccc cag cct tca tgt gtt aac ctg 158 Glu Cys Pro Gln Asn Ile Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu 20 25 30 ggg atg atg tgg acc tgg gca ctg tgg atg ctc ccc tca ctc tgc aaa 206 Gly Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys 35 40 45 ttc agc ctg gca gct ctg cca gct aag cct gag aac att tcc tgt gtc 254 Phe Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val 50 55 60 tac tac tat agg aaa aat tta acc tgc act tgg agt cca gga aag gaa 302 Tyr Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu 65 70 75 acc agt tat acc cag tac aca gtt aag aga act tac gct ttt gga gaa 350 Thr Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu 80 85 90 95 aaa cat gat aat tgt aca acc aat agt tct aca agt gaa aat cgt gct 398 Lys His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala 100 105 110 tcg tgc tct ttt ttc ctt cca aga ata acg atc cca gat aat tat acc 446 Ser Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr 115 120 125 att gag gtg gaa gct gaa aat gga gat ggt gta att aaa tct cat atg 494 Ile Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met 130 135 140 aca tac tgg aga tta gag aac ata gcg aaa act gaa cca cct aag att 542 Thr Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile 145 150 155 ttc cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc atc aaa cga atg att caa att gaa 590 Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu 160 165 170 175 tgg ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tct gat tta aaa tac aca 638 Trp Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr 180 185 190 ctt cga ttc agg aca gtc aac agt acc agc tgg atg gaa gtc aac ttc 686 Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe 195 200 205 gct aag aac cgt aag gat aaa aac caa acg tac aac ctc acg ggg ctg 734 Ala Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu 210 215 220 cag cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag 782 Gln Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu 225 230 235 tca aag ttc tgg agt gac tgg agc caa gaa aaa atg gga atg act gag 830 Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu 240 245 250 255 gaa gaa gct cca tgt ggc ctg gaa ctg tgg aga gtc ctg aaa cca gct 878 Glu Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala 260 265 270 gag gcg gat gga aga agg cca gtg cgg ttg tta tgg aag aag gca aga 926 Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg 275 280 285 gga gcc cca gtc cta gag aaa aca ctt ggc tac aac ata tgg tac tat 974 Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr 290 295 300 cca gaa agc aac act aac ctc aca gaa aca atg aac act act aac cag 1022 Pro Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gln 305 310 315 cag ctt gaa ctg cat ctg gga ggc gag agc ttt tgg gtg tct atg att 1070 Gln Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile 320 325 330 335 tct tat aat tct ctt ggg aag tct cca gtg gcc acc ctg agg att cca 1118 Ser Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro 340 345 350 gct att caa gaa aaa tca ttt cag tgc att gag gtc atg cag gcc tgc 1166 Ala Ile Gln Glu Lys Ser Phe Gln Cys Ile Glu Val Met Gln Ala Cys 355 360 365 gtt gct gag gac cag cta gtg gtg aag tgg caa agc tct gct cta gac 1214 Val Ala Glu Asp Gln Leu Val Val Lys Trp Gln Ser Ser Ala Leu Asp 370 375 380 gtg aac act tgg atg att gaa tgg ttt ccg gat gtg gac tca gag ccc 1262 Val Asn Thr Trp Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro 385 390 395 acc acc ctt tcc tgg gaa tct gtg tct cag gcc acg aac tgg acg atc 1310 Thr Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile 400 405 410 415 cag caa gat aaa tta aaa cct ttc tgg tgc tat aac atc tct gtg tat 1358 Gln Gln Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr 420 425 430 cca atg ttg cat gac aaa gtt ggc gag cca tat tcc atc cag gct tat 1406 Pro Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr 435 440 445 gcc aaa gaa ggc gtt cca tca gaa ggt cct gag acc aag gtg gag aac 1454 Ala Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn 450 455 460 att ggc gtg aag acg gtc acg atc aca tgg aaa gag att ccc aag agt 1502 Ile Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser 465 470 475 gag aga aag ggt atc atc tgc aac tac acc atc ttt tac caa gct gaa 1550 Glu Arg Lys Gly Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu 480 485 490 495 ggt gga aaa gga ttc tcc aag aca gtc aat tcc agc atc ttg cag tac 1598 Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr 500 505 510 ggc ctg gag tcc ctg aaa cga aag acc tct tac att gtt cag gtc atg 1646 Gly Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Ile Val Gln Val Met 515 520 525 gcc agc acc agt gct ggg gga acc aac ggg acc agc ata aat ttc aag 1694 Ala Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys 530 535 540 aca ttg tca ttc agt gtc ttt gag att atc ctc ata act tct ctg att 1742 Thr Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile 545 550 555 ggt gga ggc ctt ctt att ctc att atc ctg aca gtg gca tat ggt ctc 1790 Gly Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu 560 565 570 575 aaa aaa ccc aac aaa ttg act cat ctg tgt tgg ccc acc gtt ccc aac 1838 Lys Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn 580 585 590 cct gct gaa agt agt ata gcc aca tgg cat gga gat gat ttc aag gat 1886 Pro Ala Glu Ser Ser Ile Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp 595 600 605 aag cta aac ctg aag gag tct gat gac tct gtg aac aca gaa gac agg 1934 Lys Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg 610 615 620 atc tta aaa cca tgt tcc acc ccc agt gac aag ttg gtg att gac aag 1982 Ile Leu Lys Pro Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val Ile Asp Lys 625 630 635 ttg gtg gtg aac ttt ggg aat gtt ctg caa gaa att ttc aca gat gaa 2030 Leu Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gln Glu Ile Phe Thr Asp Glu 640 645 650 655 gcc aga acg ggt cag gaa aac aat tta gga ggg gaa aag aat ggg tat 2078 Ala Arg Thr Gly Gln Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Tyr 660 665 670 gtg acc tgc ccc ttc agg cct gat tgt ccc ctg ggg aaa agt ttt gag 2126 Val Thr Cys Pro Phe Arg Pro Asp Cys Pro Leu Gly Lys Ser Phe Glu 675 680 685 gag ctc cca gtt tca cct gag att ccg ccc aga aaa tcc caa tac cta 2174 Glu Leu Pro Val Ser Pro Glu Ile Pro Pro Arg Lys Ser Gln Tyr Leu 690 695 700 cgt tcg agg atg cca gag ggg acc cgc cca gaa gcc aaa gag cag ctt 2222 Arg Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Arg Pro Glu Ala Lys Glu Gln Leu 705 710 715 ctc ttt tct ggt caa agt tta gta cca gat cat ctg tgt gag gaa gga 2270 Leu Phe Ser Gly Gln Ser Leu Val Pro Asp His Leu Cys Glu Glu Gly 720 725 730 735 gcc cca aat cca tat ttg aaa aat tca gtg aca gcc agg gaa ttt ctt 2318 Ala Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Ala Arg Glu Phe Leu 740 745 750 gtg tct gaa aaa ctt cca gag cac acc aag gga gaa gtc taa 2360 Val Ser Glu Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val * 755 760 atgcgaccat agcatgagac cctcggggcc tca 2393 <210> 6 <211> 764 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Cys Ile Arg Gln Leu Lys Phe Phe Thr Thr Ala Cys Val Cys Glu 1 5 10 15 Cys Pro Gln Asn Ile Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu Gly 20 25 30 Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 35 40 45 Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Tyr 50 55 60 Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 65 70 75 80 Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 85 90 95 His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 100 105 110 Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr Ile 115 120 125 Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr 130 135 140 Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile Phe 145 150 155 160 Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp 165 170 175 Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 180 185 190 Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 195 200 205 Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln 210 215 220 Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 225 230 235 240 Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 245 250 255 Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu 260 265 270 Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 275 280 285 Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr Pro 290 295 300 Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gln Gln 305 310 315 320 Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile Ser 325 330 335 Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro Ala 340 345 350 Ile Gln Glu Lys Ser Phe Gln Cys Ile Glu Val Met Gln Ala Cys Val 355 360 365 Ala Glu Asp Gln Leu Val Val Lys Trp Gln Ser Ser Ala Leu Asp Val 370 375 380 Asn Thr Trp Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr 385 390 395 400 Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile Gln 405 410 415 Gln Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro 420 425 430 Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala 435 440 445 Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn Ile 450 455 460 Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Glu 465 470 475 480 Arg Lys Gly Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu Gly 485 490 495 Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr Gly 500 505 510 Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Ile Val Gln Val Met Ala 515 520 525 Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys Thr 530 535 540 Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile Gly 545 550 555 560 Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys 565 570 575 Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn Pro 580 585 590 Ala Glu Ser Ser Ile Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys 595 600 605 Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg Ile 610 615 620 Leu Lys Pro Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val Ile Asp Lys Leu 625 630 635 640 Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gln Glu Ile Phe Thr Asp Glu Ala 645 650 655 Arg Thr Gly Gln Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Tyr Val 660 665 670 Thr Cys Pro Phe Arg Pro Asp Cys Pro Leu Gly Lys Ser Phe Glu Glu 675 680 685 Leu Pro Val Ser Pro Glu Ile Pro Pro Arg Lys Ser Gln Tyr Leu Arg 690 695 700 Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Arg Pro Glu Ala Lys Glu Gln Leu Leu 705 710 715 720 Phe Ser Gly Gln Ser Leu Val Pro Asp His Leu Cys Glu Glu Gly Ala 725 730 735 Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Ala Arg Glu Phe Leu Val 740 745 750 Ser Glu Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val 755 760 <210> 7 <211> 2903 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (497)...(2485) <400> 7 tgaaaagaca tgtgtgtgca gtatgaaaat tgagacagga aggcagagtg tcagcttgtt 60 ccacctcagc tgggaatgtg catcaggcaa ctcaagtttt tcaccacggc atgtgtctgt 120 gaatgtccgc aaaacattag tttcactctt gtcgccaggt tggagtacaa tggcacgatc 180 ttggctcact gcaacctctg cctcccgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcctcccga 240 gtagctggga ttacagttaa caataatgca atccatttcc cagcataagt gggtaagtgc 300 cactttgact tgggctgggc ttaaaagcac aagaaaagct cgcagacaat cagagtggaa 360 acactcccac atcttagtgt ggataaatta aagtccagat tgttcttcct gtcctgactt 420 gtgctgtggg aggtggagtt gcctttgatg caaatccttt gagccagcag aacatctgtg 480 gaacatcccc tgatac atg aag ctc tct ccc cag cct tca tgt gtt aac ctg 532 Met Lys Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu 1 5 10 ggg atg atg tgg acc tgg gca ctg tgg atg ctc cct tca ctc tgc aaa 580 Gly Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys 15 20 25 ttc agc ctg gca gct ctg cca gct aag cct gag aac att tcc tgt gtc 628 Phe Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val 30 35 40 tac tac tat agg aaa aat tta acc tgc act tgg agt cca gga aag gaa 676 Tyr Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu 45 50 55 60 acc agt tat acc cag tac aca gtt aag aga act tac gct ttt gga gaa 724 Thr Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu 65 70 75 aaa cat gat aat tgt aca acc aat agt tct aca agt gaa aat cgt gct 772 Lys His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala 80 85 90 tcg tgc tct ttt ttc ctt cca aga ata acg atc cca gat aat tat acc 820 Ser Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr 95 100 105 att gag gtg gaa gct gaa aat gga gat ggt gta att aaa tct cat atg 868 Ile Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met 110 115 120 aca tac tgg aga tta gag aac ata gcg aaa act gaa cca cct aag att 916 Thr Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile 125 130 135 140 ttc cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc atc aaa cga atg att caa att gaa 964 Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu 145 150 155 tgg ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tct gat tta aaa tac aca 1012 Trp Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr 160 165 170 ctt cga ttc agg aca gtc aac agt acc agc tgg atg gaa gtc aac ttc 1060 Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe 175 180 185 gct aag aac cgt aag gat aaa aac caa acg tac aac ctc acg ggg ctg 1108 Ala Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu 190 195 200 cag cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag 1156 Gln Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu 205 210 215 220 tca aag ttc tgg agt gac tgg agc caa gaa aaa atg gga atg act gag 1204 Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu 225 230 235 gaa gaa gct cca tgt ggc ctg gaa ctg tgg aga gtc ctg aaa cca gct 1252 Glu Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala 240 245 250 gag gcg gat gga aga agg cca gtg cgg ttg tta tgg aag aag gca aga 1300 Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg 255 260 265 gga gcc cca gtc cta gag aaa aca ctt ggc tac aac ata tgg tac tat 1348 Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr 270 275 280 cca gaa agc aac act aac ctc aca gaa aca atg aac act act aac cag 1396 Pro Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gln 285 290 295 300 cag ctt gaa ctg cat ctg gga ggc gag agc ttt tgg gtg tct atg att 1444 Gln Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile 305 310 315 tct tat aat tct ctt ggg aag tct cca gtg gcc acc ctg agg att cca 1492 Ser Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro 320 325 330 gct att caa gaa aaa tca ttt cag tgc att gag gtc atg cag gcc tgc 1540 Ala Ile Gln Glu Lys Ser Phe Gln Cys Ile Glu Val Met Gln Ala Cys 335 340 345 gtt gct gag gac cag cta gtg gtg aag tgg caa agc tct gct cta gac 1588 Val Ala Glu Asp Gln Leu Val Val Lys Trp Gln Ser Ser Ala Leu Asp 350 355 360 gtg aac act tgg atg att gaa tgg ttt ccg gat gtg gac tca gag ccc 1636 Val Asn Thr Trp Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro 365 370 375 380 acc acc ctt tcc tgg gaa tct gtg tct cag gcc acg aac tgg acg atc 1684 Thr Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile 385 390 395 cag caa gat aaa tta aaa cct ttc tgg tgc tat aac atc tct gtg tat 1732 Gln Gln Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr 400 405 410 cca atg ttg cat gac aaa gtt ggc gag cca tat tcc atc cag gct tat 1780 Pro Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr 415 420 425 gcc aaa gaa ggc gtt cca tca gaa ggt cct gag acc aag gtg gag aac 1828 Ala Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn 430 435 440 att ggc gtg aag acg gtc acg atc aca tgg aaa gag att ccc aag agt 1876 Ile Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser 445 450 455 460 gag aga aag ggt atc atc tgc aac tac acc atc ttt tac caa gct gaa 1924 Glu Arg Lys Gly Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu 465 470 475 ggt gga aaa gga ttc tcc aag aca gtc aat tcc agc atc ttg cag tac 1972 Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr 480 485 490 ggc ctg gag tcc ctg aaa cga aag acc tct tac att gtt cag gtc atg 2020 Gly Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Ile Val Gln Val Met 495 500 505 gcc agc acc agt gct ggg gga acc aac ggg acc agc ata aat ttc aag 2068 Ala Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys 510 515 520 aca ttg tca ttc agt gtc ttt gag att atc ctc ata act tct ctg att 2116 Thr Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile 525 530 535 540 ggt gga ggc ctt ctt att ctc att atc ctg aca gtg gca tat ggt ctc 2164 Gly Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu 545 550 555 aaa aaa ccc aac aaa ttg act cat ctg tgt tgg ccc acc gtt ccc aac 2212 Lys Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn 560 565 570 cct gct gaa agt agt ata gcc aca tgg cat gga gat gat ttc aag gat 2260 Pro Ala Glu Ser Ser Ile Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp 575 580 585 aag cta aac ctg aag gag tct gat gac tct gtg aac aca gaa gac agg 2308 Lys Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg 590 595 600 atc tta aaa cca tgt tcc acc ccc agt gac aag ttg gtg att gac aag 2356 Ile Leu Lys Pro Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val Ile Asp Lys 605 610 615 620 ttg gtg gtg aac ttt ggg aat gtt ctg caa gaa att ttc aca gat gaa 2404 Leu Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gln Glu Ile Phe Thr Asp Glu 625 630 635 gcc aga acg ggt cag gaa aac aat tta gga ggg gaa aag aat ggg act 2452 Ala Arg Thr Gly Gln Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Thr 640 645 650 aga att ctg tct tcc tgc cca act tca ata taa gtgtggacta aaatgcgaga 2505 Arg Ile Leu Ser Ser Cys Pro Thr Ser Ile * 655 660 aaggtgtcct gtggtctatg caaattagaa aggacatgca gagttttcca actaggaaga 2565 ctgaatctgt ggccccaaga gaaccatctc tgaagactgg gtatgtggtc ttttccacac 2625 atggaccacc tacggatgca atctgtaatg catgtgcatg agaagtctgt tattaagtag 2685 agtgtgaaaa catggttatg gtaataggaa cagcttttaa aatgcttttg tatttgggcc 2745 tttcatacaa aaaagccata ataccatttt catgtaatgc tatacttcta tactattttc 2805 atgtaatact atacttctat actattttca tgtaatacta tacttctata ctattttcat 2865 gtaatactat acttctatat taaagtttta cccactca 2903 <210> 8 <211> 662 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Lys Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu Gly Met Met Trp 1 5 10 15 Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe Ser Leu Ala 20 25 30 Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Tyr Tyr Tyr Arg 35 40 45 Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr Ser Tyr Thr 50 55 60 Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys His Asp Asn 65 70 75 80 Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser Cys Ser Phe 85 90 95 Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr Ile Glu Val Glu 100 105 110 Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr Tyr Trp Arg 115 120 125 Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile Phe Arg Val Lys 130 135 140 Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp Ile Lys Pro 145 150 155 160 Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu Arg Phe Arg 165 170 175 Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala Lys Asn Arg 180 185 190 Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln Pro Phe Thr 195 200 205 Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser Lys Phe Trp 210 215 220 Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu Glu Ala Pro 225 230 235 240 Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu Ala Asp Gly 245 250 255 Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val 260 265 270 Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr Pro Glu Ser Asn 275 280 285 Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gln Gln Leu Glu Leu 290 295 300 His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile Ser Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro Ala Ile Gln Glu 325 330 335 Lys Ser Phe Gln Cys Ile Glu Val Met Gln Ala Cys Val Ala Glu Asp 340 345 350 Gln Leu Val Val Lys Trp Gln Ser Ser Ala Leu Asp Val Asn Thr Trp 355 360 365 Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr Thr Leu Ser 370 375 380 Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile Gln Gln Asp Lys 385 390 395 400 Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro Met Leu His 405 410 415 Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala Lys Glu Gly 420 425 430 Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn Ile Gly Val Lys 435 440 445 Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Glu Arg Lys Gly 450 455 460 Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu Gly Gly Lys Gly 465 470 475 480 Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr Gly Leu Glu Ser 485 490 495 Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Ile Val Gln Val Met Ala Ser Thr Ser 500 505 510 Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys Thr Leu Ser Phe 515 520 525 Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile Gly Gly Gly Leu 530 535 540 Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys Lys Pro Asn 545 550 555 560 Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn Pro Ala Glu Ser 565 570 575 Ser Ile Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys Leu Asn Leu 580 585 590 Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg Ile Leu Lys Pro 595 600 605 Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val Ile Asp Lys Leu Val Val Asn 610 615 620 Phe Gly Asn Val Leu Gln Glu Ile Phe Thr Asp Glu Ala Arg Thr Gly 625 630 635 640 Gln Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Thr Arg Ile Leu Ser 645 650 655 Ser Cys Pro Thr Ser Ile 660 <210> 9 <211> 975 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(975) <221> misc_feature <222> (1)...(975) <223> soluble IL-31RA "long" form <400> 9 atg atg tgg acc tgg gca ctg tgg atg ctc ccc tca ctc tgc aaa ttc 48 Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15 agc ctg gca gct ctg cca gct aag cct gag aac att tcc tgt gtc tac 96 Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Tyr 20 25 30 tac tat agg aaa aat tta acc tgc act tgg agt cca gga aag gaa acc 144 Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45 agt tat acc cag tac aca gtt aag aga act tac gct ttt gga gaa aaa 192 Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60 cat gat aat tgt aca acc aat agt tct aca agt gaa aat cgt gct tcg 240 His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80 tgc tct ttt ttc ctt cca aga ata acg atc cca gat aat tat acc att 288 Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr Ile 85 90 95 gag gtg gaa gct gaa aat gga gat ggt gta att aaa tct cat atg aca 336 Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr 100 105 110 tac tgg aga tta gag aac ata gcg aaa act gaa cca cct aag att ttc 384 Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile Phe 115 120 125 cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc atc aaa cga atg att caa att gaa tgg 432 Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp 130 135 140 ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tct gat tta aaa tac aca ctt 480 Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160 cga ttc agg aca gtc aac agt acc agc tgg atg gaa gtc aac ttc gct 528 Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175 aag aac cgt aag gat aaa aac caa acg tac aac ctc acg ggg ctg cag 576 Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln 180 185 190 cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag tca 624 Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205 aag ttc tgg agt gac tgg agc caa gaa aaa atg gga atg act gag gaa 672 Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu 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Glu Asn Ile Ser Cys Val Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45 Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60 His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80 Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr Ile 85 90 95 Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr 100 105 110 Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile Phe 115 120 125 Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp 130 135 140 Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175 Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln 180 185 190 Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205 Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220 Glu Gly Lys Leu Leu Pro Ala Ile Pro Val Leu Ser Ala Leu Val 225 230 235 <210> 13 <211> 1989 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)...(1989) <400> 13 atg ctg agc agc cag aag gga tcc tgc agc cag gaa cca ggg gca gcc 48 Met Leu Ser Ser Gln Lys Gly Ser Cys Ser Gln Glu Pro Gly Ala Ala 1 5 10 15 cac gtc cag cct ctg ggt gtg aac gct gga ata atg tgg acc ttg gca 96 His Val Gln Pro Leu Gly Val Asn Ala Gly Ile Met Trp Thr Leu Ala 20 25 30 ctg tgg gca ttc tct ttc ctc tgc aaa ttc agc ctg gca gtc ctg ccg 144 Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser Leu Ala Val Leu Pro 35 40 45 act aag cca gag aac att tcc tgc gtc ttt tac ttc gac aga aat ctg 192 Thr Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Phe Tyr Phe Asp Arg Asn Leu 50 55 60 act tgc act tgg aga cca gag aag gaa acc aat gat acc agc tac att 240 Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn Asp Thr Ser Tyr Ile 65 70 75 80 gtg act ttg act tac tcc tat gga aaa agc aat tat agt gac aat gct 288 Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn Tyr Ser Asp Asn Ala 85 90 95 aca gag gct tca tat tct ttt ccc cgt tcc tgt gca atg ccc cca gac 336 Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys Ala Met Pro Pro Asp 100 105 110 atc tgc agt gtt gaa gta caa gct caa aat gga gat ggt aaa gtt aaa 384 Ile Cys Ser Val Glu Val Gln Ala Gln Asn Gly Asp Gly Lys Val Lys 115 120 125 tct gac atc aca tat tgg cat tta atc tcc ata gca aaa acc gaa cca 432 Ser Asp Ile Thr Tyr Trp His Leu Ile Ser Ile Ala Lys Thr Glu Pro 130 135 140 cct ata att tta agt gtg aat cca att tgt aat aga atg ttc cag ata 480 Pro Ile Ile Leu Ser Val Asn Pro Ile Cys Asn Arg Met Phe Gln Ile 145 150 155 160 caa tgg aaa ccg cgt gaa aag act cgt ggg ttt cct tta gta tgc atg 528 Gln Trp Lys Pro Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe Pro Leu Val Cys Met 165 170 175 ctt cgg ttc aga act gtc aac agt agc cgc tgg acg gaa gtc aat ttt 576 Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp Thr Glu Val Asn Phe 180 185 190 gaa aac tgt aaa cag gtc tgc aac ctc aca gga ctt cag gct ttc aca 624 Glu Asn Cys Lys Gln Val Cys Asn Leu Thr Gly Leu Gln Ala Phe Thr 195 200 205 gaa tat gtc ctg gct cta cga ttc agg ttc aat gac tca aga tat tgg 672 Glu Tyr Val Leu Ala Leu Arg Phe Arg Phe Asn Asp Ser Arg Tyr Trp 210 215 220 agc aag tgg agc aaa gaa gaa acc aga gtg act atg gag gaa gtt cca 720 Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr Met Glu Glu Val Pro 225 230 235 240 cat gtc ctg gac ctg tgg aga att ctg gaa cca gca gac atg aac gga 768 His Val Leu Asp Leu Trp Arg Ile Leu Glu Pro Ala Asp Met Asn Gly 245 250 255 gac agg aag gtg cga ttg ctg tgg aag aag gca aga gga gcc ccc gtc 816 Asp Arg Lys Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val 260 265 270 ttg gag aaa aca ttt ggc tac cac ata cag tac ttt gca gag aac agc 864 Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His Ile Gln Tyr Phe Ala Glu Asn Ser 275 280 285 act aac ctc aca gag ata aac aac atc acc acc cag cag tat gaa ctg 912 Thr Asn Leu Thr Glu Ile Asn Asn Ile Thr Thr Gln Gln Tyr Glu Leu 290 295 300 ctt ctg atg agc cag gca cac tct gtg tcc gtg act tct ttt aat tct 960 Leu Leu Met Ser Gln Ala His Ser Val Ser Val Thr Ser Phe Asn Ser 305 310 315 320 ctt ggc aag tcc caa gag acc atc ctg agg atc cca gat gtc cat gag 1008 Leu Gly Lys Ser Gln Glu Thr Ile Leu Arg Ile Pro Asp Val His Glu 325 330 335 aag acc ttc cag tac att aag agc atg cag gcc tac ata gcc gag ccc 1056 Lys Thr Phe Gln Tyr Ile Lys Ser Met Gln Ala Tyr Ile Ala Glu Pro 340 345 350 ctg ttg gtg gtg aac tgg caa agc tcc att cct gcg gtg gac act tgg 1104 Leu Leu Val Val Asn Trp Gln Ser Ser Ile Pro Ala Val Asp Thr Trp 355 360 365 ata gtg gag tgg ctc cca gaa gct gcc atg tcg aag ttc cct gcc ctt 1152 Ile Val Glu Trp Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser Lys Phe Pro Ala Leu 370 375 380 tcc tgg gaa tct gtg tct cag gtc acg aac tgg acc atc gag caa gat 1200 Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Val Thr Asn Trp Thr Ile Glu Gln Asp 385 390 395 400 aaa cta aaa cct ttc aca tgc tat aat ata tca gtg tat cca gtg ttg 1248 Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro Val Leu 405 410 415 gga cac cga gtt gga gag ccg tat tca atc caa gct tat gcc aaa gaa 1296 Gly His Arg Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala Lys Glu 420 425 430 gga act cca tta aaa ggt cct gag acc agg gtg gag aac atc ggt ctg 1344 Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val Glu Asn Ile Gly Leu 435 440 445 agg aca gcc acg atc aca tgg aag gag att cct aag agt gct agg aat 1392 Arg Thr Ala Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Ala Arg Asn 450 455 460 gga ttt atc aac aat tac act gta ttt tac caa gct gaa ggt gga aaa 1440 Gly Phe Ile Asn Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gln Ala Glu Gly Gly Lys 465 470 475 480 gaa ctc tcc aag act gtt aac tct cat gcc ctg cag tgt gac ctg gag 1488 Glu Leu Ser Lys Thr Val Asn Ser His Ala Leu Gln Cys Asp Leu Glu 485 490 495 tct ctg aca cga agg acc tct tat act gtt tgg gtc atg gcc agc acc 1536 Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp Val Met Ala Ser Thr 500 505 510 aga gct gga ggt acc aac ggg gtg aga ata aac ttc aag aca ttg tca 1584 Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Val Arg Ile Asn Phe Lys Thr Leu Ser 515 520 525 atc agt gtg ttt gaa att gtc ctt cta aca tct cta gtt gga gga ggc 1632 Ile Ser Val Phe Glu Ile Val Leu Leu Thr Ser Leu Val Gly Gly Gly 530 535 540 ctt ctt cta ctt agc atc aaa aca gtg act ttt ggc ctc aga aag cca 1680 Leu Leu Leu Leu Ser Ile Lys Thr Val Thr Phe Gly Leu Arg Lys Pro 545 550 555 560 aac cgg ttg act ccc ctg tgt tgt cct gat gtt ccc aac cct gct gaa 1728 Asn Arg Leu Thr Pro Leu Cys Cys Pro Asp Val Pro Asn Pro Ala Glu 565 570 575 agt agt tta gcc aca tgg ctc gga gat ggt ttc aag aag tca aat atg 1776 Ser Ser Leu Ala Thr Trp Leu Gly Asp Gly Phe Lys Lys Ser Asn Met 580 585 590 aag gag act gga aac tct ggg aac aca gaa gac gtg gtc cta aaa cca 1824 Lys Glu Thr Gly Asn Ser Gly Asn Thr Glu Asp Val Val Leu Lys Pro 595 600 605 tgt ccc gtc ccc gcg gat ctc att gac aag ctg gta gtg aac ttt gag 1872 Cys Pro Val Pro Ala Asp Leu Ile Asp Lys Leu Val Val Asn Phe Glu 610 615 620 aat ttt ctg gaa gta gtt ttg aca gag gaa gct gga aag ggt cag gcg 1920 Asn Phe Leu Glu Val Val Leu Thr Glu Glu Ala Gly Lys Gly Gln Ala 625 630 635 640 agc att ttg gga gga gaa gcg aat gag tat atc tta tcc cag gaa cca 1968 Ser Ile Leu Gly Gly Glu Ala Asn Glu Tyr Ile Leu Ser Gln Glu Pro 645 650 655 agc tgt cct ggc cat tgc tga 1989 Ser Cys Pro Gly His Cys * 660 <210> 14 <211> 662 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Met Leu Ser Ser Gln Lys Gly Ser Cys Ser Gln Glu Pro Gly Ala Ala 1 5 10 15 His Val Gln Pro Leu Gly Val Asn Ala Gly Ile Met Trp Thr Leu Ala 20 25 30 Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser Leu Ala Val Leu Pro 35 40 45 Thr Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Phe Tyr Phe Asp Arg Asn Leu 50 55 60 Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn Asp Thr Ser Tyr Ile 65 70 75 80 Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn Tyr Ser Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys Ala Met Pro Pro Asp 100 105 110 Ile Cys Ser Val Glu Val Gln Ala Gln Asn Gly Asp Gly Lys Val Lys 115 120 125 Ser Asp Ile Thr Tyr Trp His Leu Ile Ser Ile Ala Lys Thr Glu Pro 130 135 140 Pro Ile Ile Leu Ser Val Asn Pro Ile Cys Asn Arg Met Phe Gln Ile 145 150 155 160 Gln Trp Lys Pro Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe Pro Leu Val Cys Met 165 170 175 Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp Thr Glu Val Asn Phe 180 185 190 Glu Asn Cys Lys Gln Val Cys Asn Leu Thr Gly Leu Gln Ala Phe Thr 195 200 205 Glu Tyr Val Leu Ala Leu Arg Phe Arg Phe Asn Asp Ser Arg Tyr Trp 210 215 220 Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr Met Glu Glu Val Pro 225 230 235 240 His Val Leu Asp Leu Trp Arg Ile Leu Glu Pro Ala Asp Met Asn Gly 245 250 255 Asp Arg Lys Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val 260 265 270 Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His Ile Gln Tyr Phe Ala Glu Asn Ser 275 280 285 Thr Asn Leu Thr Glu Ile Asn Asn Ile Thr Thr Gln Gln Tyr Glu Leu 290 295 300 Leu Leu Met Ser Gln Ala His Ser Val Ser Val Thr Ser Phe Asn Ser 305 310 315 320 Leu Gly Lys Ser Gln Glu Thr Ile Leu Arg Ile Pro Asp Val His Glu 325 330 335 Lys Thr Phe Gln Tyr Ile Lys Ser Met Gln Ala Tyr Ile Ala Glu Pro 340 345 350 Leu Leu Val Val Asn Trp Gln Ser Ser Ile Pro Ala Val Asp Thr Trp 355 360 365 Ile Val Glu Trp Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser Lys Phe Pro Ala Leu 370 375 380 Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Val Thr Asn Trp Thr Ile Glu Gln Asp 385 390 395 400 Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro Val Leu 405 410 415 Gly His Arg Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala Lys Glu 420 425 430 Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val Glu Asn Ile Gly Leu 435 440 445 Arg Thr Ala Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Ala Arg Asn 450 455 460 Gly Phe Ile Asn Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gln Ala Glu Gly Gly Lys 465 470 475 480 Glu Leu Ser Lys Thr Val Asn Ser His Ala Leu Gln Cys Asp Leu Glu 485 490 495 Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp Val Met Ala Ser Thr 500 505 510 Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Val Arg Ile Asn Phe Lys Thr Leu Ser 515 520 525 Ile Ser Val Phe Glu Ile Val Leu Leu Thr Ser Leu Val Gly Gly Gly 530 535 540 Leu Leu Leu Leu Ser Ile Lys Thr Val Thr Phe Gly Leu Arg Lys Pro 545 550 555 560 Asn Arg Leu Thr Pro Leu Cys Cys Pro Asp Val Pro Asn Pro Ala Glu 565 570 575 Ser Ser Leu Ala Thr Trp Leu Gly Asp Gly Phe Lys Lys Ser Asn Met 580 585 590 Lys Glu Thr Gly Asn Ser Gly Asn Thr Glu Asp Val Val Leu Lys Pro 595 600 605 Cys Pro Val Pro Ala Asp Leu Ile Asp Lys Leu Val Val Asn Phe Glu 610 615 620 Asn Phe Leu Glu Val Val Leu Thr Glu Glu Ala Gly Lys Gly Gln Ala 625 630 635 640 Ser Ile Leu Gly Gly Glu Ala Asn Glu Tyr Ile Leu Ser Gln Glu Pro 645 650 655 Ser Cys Pro Gly His Cys 660 <210> 15 <211> 2940 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(2940) <400> 15 atg gct cta ttt gca gtc ttt cag aca aca ttc ttc tta aca ttg ctg 48 Met Ala Leu Phe Ala Val Phe Gln Thr Thr Phe Phe Leu Thr Leu Leu 1 5 10 15 tcc ttg agg act tac cag agt gaa gtc ttg gct gaa cgt tta cca ttg 96 Ser Leu Arg Thr Tyr Gln Ser Glu Val Leu Ala Glu Arg Leu Pro Leu 20 25 30 act cct gta tca ctt aaa gtt tcc acc aat tct acg cgt cag agt ttg 144 Thr Pro Val Ser Leu Lys Val Ser Thr Asn Ser Thr Arg Gln Ser Leu 35 40 45 cac tta caa tgg act gtc cac aac ctt cct tat cat cag gaa ttg aaa 192 His Leu Gln Trp Thr Val His Asn Leu Pro Tyr His Gln Glu Leu Lys 50 55 60 atg gta ttt cag atc cag atc agt agg att gaa aca tcc aat gtc atc 240 Met Val Phe Gln Ile Gln Ile Ser Arg Ile Glu Thr Ser Asn Val Ile 65 70 75 80 tgg gtg ggg aat tac agc acc act gtg aag tgg aac cag gtt ctg cat 288 Trp Val Gly Asn Tyr Ser Thr Thr Val Lys Trp Asn Gln Val Leu His 85 90 95 tgg agc tgg gaa tct gag ctc cct ttg gaa tgt gcc aca cac ttt gta 336 Trp Ser Trp Glu Ser Glu Leu Pro Leu Glu Cys Ala Thr His Phe Val 100 105 110 aga ata aag agt ttg gtg gac gat gcc aag ttc cct gag cca aat ttc 384 Arg Ile Lys Ser Leu Val Asp Asp Ala Lys Phe Pro Glu Pro Asn Phe 115 120 125 tgg agc aac tgg agt tcc tgg gag gaa gtc agt gta caa gat tct act 432 Trp Ser Asn Trp Ser Ser Trp Glu Glu Val Ser Val Gln Asp Ser Thr 130 135 140 gga cag gat ata ttg ttc gtt ttc cct aaa gat aag ctg gtg gaa gaa 480 Gly Gln Asp Ile Leu Phe Val Phe Pro Lys Asp Lys Leu Val Glu Glu 145 150 155 160 ggc acc aat gtt acc att tgt tac gtt tct agg aac att caa aat aat 528 Gly Thr Asn Val Thr Ile Cys Tyr Val Ser Arg Asn Ile Gln Asn Asn 165 170 175 gta tcc tgt tat ttg gaa ggg aaa cag att cat gga gaa caa ctt gat 576 Val Ser Cys Tyr Leu Glu Gly Lys Gln Ile His Gly Glu Gln Leu Asp 180 185 190 cca cat gta act gca ttc aac ttg aat agt gtg cct ttc att agg aat 624 Pro His Val Thr Ala Phe Asn Leu Asn Ser Val Pro Phe Ile Arg Asn 195 200 205 aaa ggg aca aat atc tat tgt gag gca agt caa gga aat gtc agt gaa 672 Lys Gly Thr Asn Ile Tyr Cys Glu Ala Ser Gln Gly Asn Val Ser Glu 210 215 220 ggc atg aaa ggc atc gtt ctt ttt gtc tca aaa gta ctt gag gag ccc 720 Gly Met Lys Gly Ile Val Leu Phe Val Ser Lys Val Leu Glu Glu Pro 225 230 235 240 aag gac ttt tct tgt gaa acc gag gac ttc aag act ttg cac tgt act 768 Lys Asp Phe Ser Cys Glu Thr Glu Asp Phe Lys Thr Leu His Cys Thr 245 250 255 tgg gat cct ggg acg gac act gcc ttg ggg tgg tct aaa caa cct tcc 816 Trp Asp Pro Gly Thr Asp Thr Ala Leu Gly Trp Ser Lys Gln Pro Ser 260 265 270 caa agc tac act tta ttt gaa tca ttt tct ggg gaa aag aaa ctt tgt 864 Gln Ser Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Phe Ser Gly Glu Lys Lys Leu Cys 275 280 285 aca cac aaa aac tgg tgt aat tgg caa ata act caa gac tca caa gaa 912 Thr His Lys Asn Trp Cys Asn Trp Gln Ile Thr Gln Asp Ser Gln Glu 290 295 300 acc tat aac ttc aca ctc ata gct gaa aat tac tta agg aag aga agt 960 Thr Tyr Asn Phe Thr Leu Ile Ala Glu Asn Tyr Leu Arg Lys Arg Ser 305 310 315 320 gtc aat atc ctt ttt aac ctg act cat cga gtt tat tta atg aat cct 1008 Val Asn Ile Leu Phe Asn Leu Thr His Arg Val Tyr Leu Met Asn Pro 325 330 335 ttt agt gtc aac ttt gaa aat gta aat gcc aca aat gcc atc atg acc 1056 Phe Ser Val Asn Phe Glu Asn Val Asn Ala Thr Asn Ala Ile Met Thr 340 345 350 tgg aag gtg cac tcc ata agg aat aat ttc aca tat ttg tgt cag att 1104 Trp Lys Val His Ser Ile Arg Asn Asn Phe Thr Tyr Leu Cys Gln Ile 355 360 365 gaa ctc cat ggt gaa gga aaa atg atg caa tac aat gtt tcc atc aag 1152 Glu Leu His Gly Glu Gly Lys Met Met Gln Tyr Asn Val Ser Ile Lys 370 375 380 gtg aac ggt gag tac ttc tta agt gaa ctg gaa cct gcc aca gag tac 1200 Val Asn Gly Glu Tyr Phe Leu Ser Glu Leu Glu Pro Ala Thr Glu Tyr 385 390 395 400 atg gcg cga gta cgg tgt gct gat gcc agc cac ttc tgg aaa tgg agt 1248 Met Ala Arg Val Arg Cys Ala Asp Ala Ser His Phe Trp Lys Trp Ser 405 410 415 gaa tgg agt ggt cag aac ttc acc aca ctt gaa gct gct ccc tca gag 1296 Glu Trp Ser Gly Gln Asn Phe Thr Thr Leu Glu Ala Ala Pro Ser Glu 420 425 430 gcc cct gat gtc tgg aga att gtg agc ttg gag cca gga aat cat act 1344 Ala Pro Asp Val Trp Arg Ile Val Ser Leu Glu Pro Gly Asn His Thr 435 440 445 gtg acc tta ttc tgg aag cca tta tca aaa ctg cat gcc aat gga aag 1392 Val Thr Leu Phe Trp Lys Pro Leu Ser Lys Leu His Ala Asn Gly Lys 450 455 460 atc ctg ttc tat aat gta gtt gta gaa aac cta gac aaa cca tcc agt 1440 Ile Leu Phe Tyr Asn Val Val Val Glu Asn Leu Asp Lys Pro Ser Ser 465 470 475 480 tca gag ctc cat tcc att cca gca cca gcc aac agc aca aaa cta atc 1488 Ser Glu Leu His Ser Ile Pro Ala Pro Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ile 485 490 495 ctt gac agg tgt tcc tac caa atc tgc gtc ata gcc aac aac agt gtg 1536 Leu Asp Arg Cys Ser Tyr Gln Ile Cys Val Ile Ala Asn Asn Ser Val 500 505 510 ggt gct tct cct gct tct gta ata gtc atc tct gca gac ccc gaa aac 1584 Gly Ala Ser Pro Ala Ser Val Ile Val Ile Ser Ala Asp Pro Glu Asn 515 520 525 aaa gag gtt gag gaa gaa aga att gca ggc aca gag ggt gga ttc tct 1632 Lys Glu Val Glu Glu Glu Arg Ile Ala Gly Thr Glu Gly Gly Phe Ser 530 535 540 ctg tct tgg aaa ccc caa cct gga gat gtt ata ggc tat gtt gtg gac 1680 Leu Ser Trp Lys Pro Gln Pro Gly Asp Val Ile Gly Tyr Val Val Asp 545 550 555 560 tgg tgt gac cat acc cag gat gtg ctc ggt gat ttc cag tgg aag aat 1728 Trp Cys Asp His Thr Gln Asp Val Leu Gly Asp Phe Gln Trp Lys Asn 565 570 575 gta ggt ccc aat acc aca agc aca gtc att agc aca gat gct ttt agg 1776 Val Gly Pro Asn Thr Thr Ser Thr Val Ile Ser Thr Asp Ala Phe Arg 580 585 590 cca gga gtt cga tat gac ttc aga att tat ggg tta tct aca aaa agg 1824 Pro Gly Val Arg Tyr Asp Phe Arg Ile Tyr Gly Leu Ser Thr Lys Arg 595 600 605 att gct tgt tta tta gag aaa aaa aca gga tac tct cag gaa ctt gct 1872 Ile Ala Cys Leu Leu Glu Lys Lys Thr Gly Tyr Ser Gln Glu Leu Ala 610 615 620 cct tca gac aac cct cac gtg ctg gtg gat aca ttg aca tcc cac tcc 1920 Pro Ser Asp Asn Pro His Val Leu Val Asp Thr Leu Thr Ser His Ser 625 630 635 640 ttc act ctg agt tgg aaa gat tac tct act gaa tct caa cct ggt ttt 1968 Phe Thr Leu Ser Trp Lys Asp Tyr Ser Thr Glu Ser Gln Pro Gly Phe 645 650 655 ata caa ggg tac cat gtc tat ctg aaa tcc aag gcg agg cag tgc cac 2016 Ile Gln Gly Tyr His Val Tyr Leu Lys Ser Lys Ala Arg Gln Cys His 660 665 670 cca cga ttt gaa aag gca gtt ctt tca gat ggt tca gaa tgt tgc aaa 2064 Pro Arg Phe Glu Lys Ala Val Leu Ser Asp Gly Ser Glu Cys Cys Lys 675 680 685 tac aaa att gac aac ccg gaa gaa aag gca ttg att gtg gac aac cta 2112 Tyr Lys Ile Asp Asn Pro Glu Glu Lys Ala Leu Ile Val Asp Asn Leu 690 695 700 aag cca gaa tcc ttc tat gag ttt ttc atc act cca ttc act agt gct 2160 Lys Pro Glu Ser Phe Tyr Glu Phe Phe Ile Thr Pro Phe Thr Ser Ala 705 710 715 720 ggt gaa ggc ccc agt gct acg ttc acg aag gtc acg act ccg gat gaa 2208 Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Phe Thr Lys Val Thr Thr Pro Asp Glu 725 730 735 cac tcc tcg atg ctg att cat atc cta ctg ccc atg gtt ttc tgc gtc 2256 His Ser Ser Met Leu Ile His Ile Leu Leu Pro Met Val Phe Cys Val 740 745 750 ttg ctc atc atg gtc atg tgc tac ttg aaa agt cag tgg atc aag gag 2304 Leu Leu Ile Met Val Met Cys Tyr Leu Lys Ser Gln Trp Ile Lys Glu 755 760 765 acc tgt tat cct gac atc cct gac cct tac aag agc agc atc ctg tca 2352 Thr Cys Tyr Pro Asp Ile Pro Asp Pro Tyr Lys Ser Ser Ile Leu Ser 770 775 780 tta ata aaa ttc aag gag aac cct cac cta ata ata atg aat gtc agt 2400 Leu Ile Lys Phe Lys Glu Asn Pro His Leu Ile Ile Met Asn Val Ser 785 790 795 800 gac tgt atc cca gat gct att gaa gtt gta agc aag cca gaa ggg aca 2448 Asp Cys Ile Pro Asp Ala Ile Glu Val Val Ser Lys Pro Glu Gly Thr 805 810 815 aag ata cag ttc cta ggc act agg aag tca ctc aca gaa acc gag ttg 2496 Lys Ile Gln Phe Leu Gly Thr Arg Lys Ser Leu Thr Glu Thr Glu Leu 820 825 830 act aag cct aac tac ctt tat ctc ctt cca aca gaa aag aat cac tct 2544 Thr Lys Pro Asn Tyr Leu Tyr Leu Leu Pro Thr Glu Lys Asn His Ser 835 840 845 ggc cct ggc ccc tgc atc tgt ttt gag aac ttg acc tat aac cag gca 2592 Gly Pro Gly Pro Cys Ile Cys Phe Glu Asn Leu Thr Tyr Asn Gln Ala 850 855 860 gct tct gac tct ggc tct tgt ggc cat gtt cca gta tcc cca aaa gcc 2640 Ala Ser Asp Ser Gly Ser Cys Gly His Val Pro Val Ser Pro Lys Ala 865 870 875 880 cca agt atg ctg gga cta atg acc tca cct gaa aat gta cta aag gca 2688 Pro Ser Met Leu Gly Leu Met Thr Ser Pro Glu Asn Val Leu Lys Ala 885 890 895 cta gaa aaa aac tac atg aac tcc ctg gga gaa atc cca gct gga gaa 2736 Leu Glu Lys Asn Tyr Met Asn Ser Leu Gly Glu Ile Pro Ala Gly Glu 900 905 910 aca agt ttg aat tat gtg tcc cag ttg gct tca ccc atg ttt gga gac 2784 Thr Ser Leu Asn Tyr Val Ser Gln Leu Ala Ser Pro Met Phe Gly Asp 915 920 925 aag gac agt ctc cca aca aac cca gta gag gca cca cac tgt tca gag 2832 Lys Asp Ser Leu Pro Thr Asn Pro Val Glu Ala Pro His Cys Ser Glu 930 935 940 tat aaa atg caa atg gca gtc tcc ctg cgt ctt gcc ttg cct ccc ccg 2880 Tyr Lys Met Gln Met Ala Val Ser Leu Arg Leu Ala Leu Pro Pro Pro 945 950 955 960 acc gag aat agc agc ctc tcc tca att acc ctt tta gat cca ggt gaa 2928 Thr Glu Asn Ser Ser Leu Ser Ser Ile Thr Leu Leu Asp Pro Gly Glu 965 970 975 cac tac tgc taa 2940 His Tyr Cys * <210> 16 <211> 979 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Ala Leu Phe Ala Val Phe Gln Thr Thr Phe Phe Leu Thr Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Thr Tyr Gln Ser Glu Val Leu Ala Glu Arg Leu Pro Leu 20 25 30 Thr Pro Val Ser Leu Lys Val Ser Thr Asn Ser Thr Arg Gln Ser Leu 35 40 45 His Leu Gln Trp Thr Val His Asn Leu Pro Tyr His Gln Glu Leu Lys 50 55 60 Met Val Phe Gln Ile Gln Ile Ser Arg Ile Glu Thr Ser Asn Val Ile 65 70 75 80 Trp Val Gly Asn Tyr Ser Thr Thr Val Lys Trp Asn Gln Val Leu His 85 90 95 Trp Ser Trp Glu Ser Glu Leu Pro Leu Glu Cys Ala Thr His Phe Val 100 105 110 Arg Ile Lys Ser Leu Val Asp Asp Ala Lys Phe Pro Glu Pro Asn Phe 115 120 125 Trp Ser Asn Trp Ser Ser Trp Glu Glu Val Ser Val Gln Asp Ser Thr 130 135 140 Gly Gln Asp Ile Leu Phe Val Phe Pro Lys Asp Lys Leu Val Glu Glu 145 150 155 160 Gly Thr Asn Val Thr Ile Cys Tyr Val Ser Arg Asn Ile Gln Asn Asn 165 170 175 Val Ser Cys Tyr Leu Glu Gly Lys Gln Ile His Gly Glu Gln Leu Asp 180 185 190 Pro His Val Thr Ala Phe Asn Leu Asn Ser Val Pro Phe Ile Arg Asn 195 200 205 Lys Gly Thr Asn Ile Tyr Cys Glu Ala Ser Gln Gly Asn Val Ser Glu 210 215 220 Gly Met Lys Gly Ile Val Leu Phe Val Ser Lys Val Leu Glu Glu Pro 225 230 235 240 Lys Asp Phe Ser Cys Glu Thr Glu Asp Phe Lys Thr Leu His Cys Thr 245 250 255 Trp Asp Pro Gly Thr Asp Thr Ala Leu Gly Trp Ser Lys Gln Pro Ser 260 265 270 Gln Ser Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Phe Ser Gly Glu Lys Lys Leu Cys 275 280 285 Thr His Lys Asn Trp Cys Asn Trp Gln Ile Thr Gln Asp Ser Gln Glu 290 295 300 Thr Tyr Asn Phe Thr Leu Ile Ala Glu Asn Tyr Leu Arg Lys Arg Ser 305 310 315 320 Val Asn Ile Leu Phe Asn Leu Thr His Arg Val Tyr Leu Met Asn Pro 325 330 335 Phe Ser Val Asn Phe Glu Asn Val Asn Ala Thr Asn Ala Ile Met Thr 340 345 350 Trp Lys Val His Ser Ile Arg Asn Asn Phe Thr Tyr Leu Cys Gln Ile 355 360 365 Glu Leu His Gly Glu Gly Lys Met Met Gln Tyr Asn Val Ser Ile Lys 370 375 380 Val Asn Gly Glu Tyr Phe Leu Ser Glu Leu Glu Pro Ala Thr Glu Tyr 385 390 395 400 Met Ala Arg Val Arg Cys Ala Asp Ala Ser His Phe Trp Lys Trp Ser 405 410 415 Glu Trp Ser Gly Gln Asn Phe Thr Thr Leu Glu Ala Ala Pro Ser Glu 420 425 430 Ala Pro Asp Val Trp Arg Ile Val Ser Leu Glu Pro Gly Asn His Thr 435 440 445 Val Thr Leu Phe Trp Lys Pro Leu Ser Lys Leu His Ala Asn Gly Lys 450 455 460 Ile Leu Phe Tyr Asn Val Val Val Glu Asn Leu Asp Lys Pro Ser Ser 465 470 475 480 Ser Glu Leu His Ser Ile Pro Ala Pro Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ile 485 490 495 Leu Asp Arg Cys Ser Tyr Gln Ile Cys Val Ile Ala Asn Asn Ser Val 500 505 510 Gly Ala Ser Pro Ala Ser Val Ile Val Ile Ser Ala Asp Pro Glu Asn 515 520 525 Lys Glu Val Glu Glu Glu Arg Ile Ala Gly Thr Glu Gly Gly Phe Ser 530 535 540 Leu Ser Trp Lys Pro Gln Pro Gly Asp Val Ile Gly Tyr Val Val Asp 545 550 555 560 Trp Cys Asp His Thr Gln Asp Val Leu Gly Asp Phe Gln Trp Lys Asn 565 570 575 Val Gly Pro Asn Thr Thr Ser Thr Val Ile Ser Thr Asp Ala Phe Arg 580 585 590 Pro Gly Val Arg Tyr Asp Phe Arg Ile Tyr Gly Leu Ser Thr Lys Arg 595 600 605 Ile Ala Cys Leu Leu Glu Lys Lys Thr Gly Tyr Ser Gln Glu Leu Ala 610 615 620 Pro Ser Asp Asn Pro His Val Leu Val Asp Thr Leu Thr Ser His Ser 625 630 635 640 Phe Thr Leu Ser Trp Lys Asp Tyr Ser Thr Glu Ser Gln Pro Gly Phe 645 650 655 Ile Gln Gly Tyr His Val Tyr Leu Lys Ser Lys Ala Arg Gln Cys His 660 665 670 Pro Arg Phe Glu Lys Ala Val Leu Ser Asp Gly Ser Glu Cys Cys Lys 675 680 685 Tyr Lys Ile Asp Asn Pro Glu Glu Lys Ala Leu Ile Val Asp Asn Leu 690 695 700 Lys Pro Glu Ser Phe Tyr Glu Phe Phe Ile Thr Pro Phe Thr Ser Ala 705 710 715 720 Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Phe Thr Lys Val Thr Thr Pro Asp Glu 725 730 735 His Ser Ser Met Leu Ile His Ile Leu Leu Pro Met Val Phe Cys Val 740 745 750 Leu Leu Ile Met Val Met Cys Tyr Leu Lys Ser Gln Trp Ile Lys Glu 755 760 765 Thr Cys Tyr Pro Asp Ile Pro Asp Pro Tyr Lys Ser Ser Ile Leu Ser 770 775 780 Leu Ile Lys Phe Lys Glu Asn Pro His Leu Ile Ile Met Asn Val Ser 785 790 795 800 Asp Cys Ile Pro Asp Ala Ile Glu Val Val Ser Lys Pro Glu Gly Thr 805 810 815 Lys Ile Gln Phe Leu Gly Thr Arg Lys Ser Leu Thr Glu Thr Glu Leu 820 825 830 Thr Lys Pro Asn Tyr Leu Tyr Leu Leu Pro Thr Glu Lys Asn His Ser 835 840 845 Gly Pro Gly Pro Cys Ile Cys Phe Glu Asn Leu Thr Tyr Asn Gln Ala 850 855 860 Ala Ser Asp Ser Gly Ser Cys Gly His Val Pro Val Ser Pro Lys Ala 865 870 875 880 Pro Ser Met Leu Gly Leu Met Thr Ser Pro Glu Asn Val Leu Lys Ala 885 890 895 Leu Glu Lys Asn Tyr Met Asn Ser Leu Gly Glu Ile Pro Ala Gly Glu 900 905 910 Thr Ser Leu Asn Tyr Val Ser Gln Leu Ala Ser Pro Met Phe Gly Asp 915 920 925 Lys Asp Ser Leu Pro Thr Asn Pro Val Glu Ala Pro His Cys Ser Glu 930 935 940 Tyr Lys Met Gln Met Ala Val Ser Leu Arg Leu Ala Leu Pro Pro Pro 945 950 955 960 Thr Glu Asn Ser Ser Leu Ser Ser Ile Thr Leu Leu Asp Pro Gly Glu 965 970 975 His Tyr Cys

Claims (27)

  1. ATCC 특허 기탁 번호 PTA-6815의 하이브리도마에 의해 생산되는 단일클론항체를 포함하는 자가면역 질환 또는 바이러스 감염과 관련된 가려움 또는 자통 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 단일클론항체는 SEQ ID NO:2의 아미노산 잔기 27-164로 이루어진 폴리펩티드에 특이적으로 결합하고, 및
    상기 단일클론항체는 상기 폴리펩티드의 동족 수용체를 통한 상기 폴리펩티드에 의해 유도된 배근신경절세포 내 신호전달을 저해하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  2. 제1 항에 있어서, 상기 단일클론항체는 ATCC 특허 기탁 번호 PTA-6815의 하이브리도마에 의해 생산되는 항체로부터 유도된 인간화된 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 단일클론항체는 인간 불변영역을 가지는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 단일클론항체의 이소타입은 IgG인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 제3 항에 있어서, 상기 단일클론항체의 이소타입은 IgG인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  6. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 단일클론 항체의 이소타입은 IgG4인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 제3 항에 있어서, 상기 단일클론항체의 이소타입은 IgG4인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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