BRPI0706487A2 - métodos de tratamento de inflamação em tecido neuronal de um mamìfero, de tratamento de dor em um mamìfero, de antagonizar transdução de sinal induzida por il-31 em células de gánglio da raiz dorsal, de tratamento de sintomas associados com queimadura, de tratamento de sintomas associados com infecção viral em um mamìfero, e, de tratamento de dor associada com doença intestinal inflamatória - Google Patents

Abstract

METODOS DE TRATAMENTO DE INFLAMAçãO EM TECIDO NEURONAL DE UM MAMIFERO, DE TRATAMENTO DE DOR EM UM MAMIFERO, DE ANTAGONIZAR TRANSDUçAO DE SINAL INDUZIDA POR IL-3 1 EM CéLULAS DE GáNGLIO DA RAIZ DORSAL, DE TRATAMENTO DE SINTOMAS ASSOCIADOS COM QUEIMADURA, DE TRATAIVIENTO DE SINTOMAS ASSOCIADOS COM INFECçãO VIRAL EM UM MAMlFERO, E, DE TRATAMENTO DE DOR ASSOCIADA COM DOENçA INTESTINAL INFLAMATORIA Uso de antagonistas para IL-3 1 são usados para o tratamento de inflamação e dor por inibição, prevenção, redução, minimização, limitação ou estímulo à minimização em tecidos neuronais. Estes antagonistas incluem anticorpos e fragmentos, derivado ou variantes dos mesmos. Os sintomas como dor, formigamento, sensibilização, coceira associados com neuropatias são melhorados.

Description

"MÉTODOS DE TRATAMENTO DE INFLAMAÇÃO EM TECIDONEURONAL DE UM MAMÍFERO, DE TRATAMENTO DE DOR EM UMMAMÍFERO, DE ANTAGONIZAR TRANSDUÇÃO DE SINALINDUZIDA POR IL-31 EM CÉLULAS DE GÂNGLIO DA RAIZ DORSAL,DE TRATAMENTO DE SINTOMAS ASSOCIADOS COMQUEIMADURA, DE TRATAMENTO DE SINTOMAS ASSOCIADOSCOM INFECÇÃO VIRAL EM UM MAMÍFERO, E, DE TRATAMENTODE DOR ASSOCIADA COM DOENÇA INTESTINAL INFLAMATÓRIA"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O processo inflamatório ativa o sistema nervoso causando dorinflamatória e uma ruptura na função motora. O estímulo de nervos sensoriaisproduz vasodilatação e extravasão de plasma, levando a inflamaçãoneurogênica e estimulação causando irritação sensorial, hipersensibilidade e dor.

A inflamação neurogênica é causada por ativação determinações nociceptivas e sensíveis térmica em tecidos e pode ser causadapor condições inatas, como doenças autoimunes, incluindo alergia, porinfecção viral, assim como por ferimentos. A inflamação neurogênica destascondições pode afetar o sistema somato-sensorial, que consiste de váriosreceptores sensoriais responsáveis por sensações como pressão, toque,temperatura, dor, coceira, titilação, formigamento e dormência. Os nervosativados podem perpetuar a inflamação crônica por indução de secreção decitocinas, ativando monócitos e quimiotaxia.

As proteínas ativas em inflamação neurogênica podem servircomo alvos para abordagens terapêuticas e tratamento de doenças.

Um exemplo de um fármaco usado para tratar dor éNeurontina (gabapentina) que é usa para tratar neuropatia periférica diabéticacomo neuralgia pós-herpética. Assim, existe uma necessidade de medicaçãoadicional para tratar a dor neuropática.DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

As seguintes definições são dadas para facilitar acompreendida da invenção descrita aqui.

O termo "anticorpo" ou "peptídeo (s) de anticorpo", refere-se aum anticorpo intacto, ou um fragmento de ligação do mesmo, que competecom o anticorpo intacto para ligação específica e inclui anticorposquiméricos, humanizados, completamente humanos, e bi-específicos. Emalgumas formas de realização, os fragmentos de ligação são produzidos portécnicas de DNA recombinante. Em formas de realização adicionais, osfragmentos de ligação são produzidos por clivagem enzimática ou química deanticorpos intactos. Os fragmentos de ligação incluem, mas não limitados aFab5 Fab', F(ab').sub.2, Fv, e anticorpos de cadeia única..

O termo "anticorpo isolado" refere-se a um anticorpo que foiidentificado e separado e/ou recuperado de um componente de seu meionatural. Os componentes contaminantes de seu meio natural são materiais quepodem interferir com os usos diagnósticos ou terapêuticos para o anticorpo, epodem incluir enzimas, hormônios, e outros solutos proteináceos ou nãoproteináceos. Em formas de realização, o anticorpo será purificado (1) a maisdo que 95% em peso de anticorpo como determinado pelo método de Lowry eincluindo mais do que 99% em peso, (2) a um grau suficiente para obter pelomenos 15 resíduos de seqüência de aminoácido N-terminal ou interna pelouso do seqüenciador de copo giratório, ou (3) até homogeneidade por SDS-PAGE sob condições de redução ou não redução usando azul Coomassie ou,preferivelmente, coloração de prata. O anticorpo isolado inclui o anticorpo insitu dentro de células recombinantes porque, pelo menos, um componente domeio natural do anticorpo não estará presente. Comumente, no entanto, oanticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

Um anticorpo anti-EL-31 "variante" refere-se aqui a umamolécula que difere em seqüência de aminoácido de uma seqüência deaminoácido de anti anti-IL-31 "parental", devido à adição, deleção e/ousubstituição de um ou mais resíduo(s) de aminoácido na seqüência deanticorpo parental. Em uma forma de realização, a variante compreende umaou mais substituição (ões) de aminoácido em uma ou mais região (ões)hipervariável(eis) do anticorpo parental. Por exemplo, a variante podecompreender pelo menos um, por exemplo de cerca de uma a cerca de dez, ede cerca de duas a cerca de cinco, substituições em uma ou mais regiõeshipervariáveis do anticorpo parental. Comumente a variante terá umaseqüência de aminoácido tendo pelo menos 75% de identidade de seqüênciade aminoácido, com as seqüências de domínio variável de cadeia pesada ouleve do anticorpo parental, mais preferivelmente pelo menos 80%, maispreferivelmente pelo menos 85%, mais preferivelmente pelo menos 90%, e omais preferivelmente pelo menos 95%. A identidade ou homologia comrelação a esta seqüência é definida aqui como a porcentagem de resíduos deaminoácidos na seqüência candidata que são idênticos com os resíduos doanticorpo parental, após alinhamento das seqüências e introdução dosespaços, se necessário, para obter a identidade de seqüência percentualmáxima.

Nenhuma dentre as extensões N- terminal, C-terminal ou interna,deleções ou inserções na seqüência de anticorpo deve ser construída comoafetando a identidade de seqüência ou homologia. A variante retém acapacidade de ligar IL-31 humana e preferivelmente tem propriedades que sãosuperiores às do anticorpo parental. Por exemplo, a variante pode ter umaafinidade de ligação mais forte, melhorada capacidade para inibir o estímuloinduzido por IL-31 de células imunes. Para analisar estas propriedades, deve-se comparar uma forma Fab da variante a uma forma Fab do anticorpoparental ou uma forma de comprimento completo da variante para uma formade comprimento completo do anticorpo parental, por exemplo, porque foiverificado que o formato o anticorpo anti-IL-31 impacta sua atividade nostestes de atividade biológica descritos aqui. O anticorpo de variante deinteresse particular aqui é um que exibe pelo menos cerca de 10 vezes,preferivelmente pelo menos cerca de 20 vezes, e o mais preferivelmente pelomenos cerca de 50 vezes, de melhora em atividade biológica quandocomparado com o anticorpo parental.

O termo "anticorpo parental" com usado aqui refere-se a umanticorpo que é codificado por uma seqüência de aminoácido usada para apreparação da variante. Preferivelmente, o anticorpo parental tem uma regiãode armação humana e, se presente, tem região (ões) constantes de anticorpohumano. Por exemplo, o anticorpo parental pode ser um anticorpohumanizado ou humano.

O termo "agonista" refere-se a qualquer composto incluindouma proteína, polipeptídeo, peptídeo, anticorpo , fragmento de anticorpo,molécula grande, ou molécula pequena (menos que 10 kD), que aumenta aatividade, ativação ou função de outra molécula. Os agonistas de IL-31causam, por exemplo, estímulo de células NK, subconjuntos de células T esubconjuntos de células B e células dendríticas.

O termo "antagonista" refere-se a um composto incluindo umaproteína, polipeptídeo, peptídeo, anticorpo , fragmento de anticorpo, moléculagrande, ou molécula pequena (menos que 10 kD), que diminui a atividade,ativação ou função de outra molécula. Os antagonistas de IL-31 causamdiminuída função imune de células NK, subconjuntos de células T esubconjuntos de células B e células dendríticas; ligam IL-31 de modo que ainteração de proteína IL-31 é bloqueada, inibida, reduzida, antagonizada ouneutralizada.

Um "anticorpo bivalente" diferente de um "multiespecífico"ou "multifuncional", em algumas formas de realização, é entendido paracompreender sítios de ligação tendo especificidade antigênica idêntica.

Um anticorpo "bi específico" ou "bifuncional" é um anticorpohíbrido tendo dois pares diferentes de cadeia pesada/leve e dois sítios deligação diferentes. Os anticorpos bi-específicos podem ser produzidos porvários métodos incluindo mas não limitados a fusão de hibridomas ou ligaçãode fragmentos Fab'. Ver por exemplo, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp.Imunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., JJmunol. 148:1547-1553 (1992).

O termo "anticorpo quimérico" ou "anticorpos quiméricos"refere-se aos anticorpos cujos genes de cadeia leve e pesada foramconstruídos, tipicamente por engenharia genética, a partir de genes de regiãovariável e constante de imunoglobulina pertencendo a diferentes espécies. Porexemplo, os segmentos variáveis dos genes de um anticorpo monoclonal decamundongo podem ser unidos a segmentos constantes humanos, como gama1 e gama 3. Um anticorpo quimérico terapêutico típico é assim uma proteínahíbrida composta de domínio variável ou de ligação ao anticorpo de umanticorpo de camundongo e o domínio constante de um anticorpo humano,apesar de outras espécies de mamíferos poderem ser usadas.

O termo "epítopo" inclui qualquer determinante de proteínacapaz de ligação específica a uma imunoglobulina ou receptor de células T.

Os determinantes epitópicos geralmente consistem de grupamentos desuperfície quimicamente ativa de moléculas, como aminoácidos ou cadeiaslaterais de açúcar e geralmente tem três características estruturaisdimensionais específicas, assim como características de carga específicas.

Mais especificamente, o termo "epítopo de LL-31" como usado aqui refere-sea uma porção de polipeptídeo EL-31 tendo atividade antigênica ouimunogênica em um animal, preferivelmente um mamífero, e maispreferivelmente em um camundongo ou um humano. Um epítopo tendoatividade imunogênica é uma porção de um polipeptídeo IL-31 que elícitauma resposta de anticorpo em um animal. Um epítopo tendo atividadeantigênica é uma porção de um polipeptídeo IL-31 ao qual o anticorpo ligaimunoespecificamente como determinado por qualquer método bemconhecido na arte, por exemplo, por imunotestes. Os epítopos antigênicos nãoprecisam necessariamente ser imunogênicos.

O termo "etiquetado com epítopo" quando usado aqui refere-seao anticorpo anti-IL-31 fusionado a uma "etiqueta de epítopo". O polipeptídeode 'etiqueta de epítopo tem resíduos suficientes para prover um epítopo contrao qual o anticorpo pode ser feito, ainda é curto o suficiente de modo que nãointerfere com a atividade do anticorpo IL-31. A etiqueta de epítopopreferivelmente é suficientemente singular de modo que o anticorpo não reagesubstancialmente cruzado com outros epítopos. Os polipeptídeos de etiquetaapropriados geralmente tem pelo menos 6 resíduos de aminoácidos egeralmente entre cerca de 8-50 resíduos de aminoácidos (preferivelmenteentre cerca de 9-30 resíduos). Exemplos incluem o polipeptídeo de etiquetafluHAe seu anticorpo 12CA5 (Field et al. Mol. Cell. Biol. 8:2159-2165(1988)); a etiqueta c-myc e os anticorpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 e 9E10 paraos mesmos. (Evan et al., Mol. Cell. Biol. 5£12):3610-3616(1985)); e aglicoproteína do vírus de herpes simples D (gD) tag e seu anticorpo (Paborskyet al., Protein Engineering 3(6):547-553(1990)). Em algumas formas derealização, a etiqueta do epítopo é um "epítopo de ligação ao receptor desalvamento". Como usado aqui, o termo "epítopo de ligação ao receptor desalvamento" refere-se a um epítopo da região Fc de uma molécula IgG (porexemplo, IgGi, IgG2, IgG3, ou IgG^ que é responsável por aumentar a meiavida in vivo no soro da molécula de IgG.

O termo "fragmento" como usado aqui refere-se a um peptídeoou polipeptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido de pelo menos5 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 10 resíduos de aminoácidoscontíguos, pelo menos 15 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 20resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 25 resíduos de aminoácidoscontíguos, pelo menos 40 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 50resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 60 resíduos amino contíguos,pelo menos 70 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 80 resíduos deaminoácidos contíguos, pelo menos 90 resíduos de aminoácidos contíguos,pelo menos 100 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 125 resíduosde aminoácidos contíguos, pelo menos 150 resíduos de aminoácidoscontíguos da seqüência de aminoácidos de um polipeptídeo IL-31 ou umanticorpo que liga imunoespecificamente ao polipeptídeo IL-31.

Como usado aqui, o termo "imunoglobulina" refere-se a umaporção consistindo de um ou mais polipeptídeos substancialmente codificadospelos genes de imunoglobulina. Uma forma de imunoglobulina constitui aunidade estrutural básica de um anticorpo.Esta forma é um tetrâmero econsiste de dois pares idênticos de cadeias de imunoglobulina, cada par tendouma cadeia leve e uma pesada. Em cada par, as regiões variáveis de cadeialeve e pesada são juntas responsáveis por ligação a um antígeno, e as regiõesconstantes são responsáveis pelas funções efetuadoras de anticorpo.

As "cadeias leves" de imunoglobulina de comprimentocompleto são codificadas por um gene de região variável no término NH2 eum gene de região constante kappa ou lambda no término COOH. As "cadeiaspesadas" de imunoglobulina de comprimento completo são similarmentecodificadas por um gene de região variável e um dos outros genes de regiãoconstante acima mencionada (cerca de 330 aminoácidos). As cadeias pesadassão classificadas como gama, mu, alfa, delta, ou epsilon, e definem o isotipodo anticorpo como IgG (incluindo IgGl, IgG4), IgM, IgA, IgD e IgE,respectivamente. Dentro das cadeias leve e pesada, as regiões variáveis econstante são unidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoácidos,com a cadeia pesada também incluindo uma região "D" de cerca de 10 maisaminoácidos. (Ver geralmente, Fundamental Imunology (Paul, W., ed., 2a ed.Raven Press, N.Y., 1989), Ch. 7 (incorporada por referência aqui em suatotalidade).

Uma região variável de cadeia leve ou pesada deimunoglobulina consiste de uma região de "armação" interrompida por trêsregiões hipervariáveis. Assim, o termo "região hipervariável" refere-se aosresíduos de aminoácidos de um anticorpo que são responsáveis por ligação doantígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácidos de uma"região de determinação de complementaridade" ou "CDR" (Ver, Kabat et al.,Sequences of Proteins of Imunological Interest, 5aEd. Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) e Chothia e Lesk, 1987, J.Mol. Biol. 196: 901-917) (ambos incorporados aqui por referência). Resíduosde "região de armação" ou "FR" sãos os resíduos de domínio variáveldiferentes da região hipervariável como aqui definidos. As seqüências dasregiões de armação de diferente cadeias leves ou pesadas são relativamenteconservadas dentro de uma espécie. Assim, uma "região de armação humana"é uma região de armação que é substancialmente idêntica (cerca de 85% oumais geralmente 90-95% ou mais) à região de armação de umaimunoglobulina humana de ocorrência natural. A região de armação de umanticorpo, que são as regiões de armação combinadas das cadeias leve epesada constituintes, serve para posicionar e alinhar os CDR's. Os CDR's sãoprimariamente responsáveis para ligação a um epítopo de um antígeno.

Conseqüentemente, o termo imunoglobulina "humanizada"refere-se a uma imunoglobulina compreendendo uma região de armaçãohumana e um ou mais CDR's de uma imunoglobulina não humana(geralmente de camundongo ou rato). A imunoglobulina não humanaprovendo os CDR's é chamada "doadora" e a imunoglobulina humanaprovendo a armação é chamada "receptora". As regiões constantes nãoprecisam estar presentes, mas se estiverem, elas devem ser substancialmenteidênticas às regiões constantes da imunoglobulina humana, isto é pelo menoscerca de 85-90%, preferivelmente cerca de 95% ou mais idênticas. Assim,todas as partes de uma imunoglobulina humanizada, exceto possivelmente osCDR's, são substancialmente idênticos às partes correspondentes deseqüências de imunoglobulina humana natural. Um "anticorpo humanizado" éum anticorpo compreendendo uma imunoglobulina de cadeia levehumanizada e uma cadeia pesada humanizada. Por exemplo, um anticorpohumanizado não deve englobar um anticorpo quimérico típico como definidoacima, por exemplo porque a região variável completa de um anticorpoquimérico não é humana.

Como usado aqui, o termo "anticorpo humano" inclui qualqueranticorpo que tem uma seqüência de aminoácido de uma imunoglobulinahumana e inclui anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulina humanaou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulina humana e quenão expressa imunoglobulinas endógenas, como descrito, por exemplo, porKucherlapati et al. na Patente U.S. 5.939.598.

O termo "anticorpos geneticamente alterados" significaanticorpos em que a seqüência de aminoácido foi variada da de um anticorponativo. Devido à relevância de técnicas de DNA recombinantes na geração deanticorpos, não se precisa estar confinado a seqüências de aminoácidosencontrados em anticorpos naturais; anticorpos podem ser re-projetados paraobter as características desejadas. As variações possíveis são muitas e estão nafaixa da mudança de apenas um a alguns aminoácidos até um completoprojeto novo de, por exemplo, a região variável ou constante. Mudanças naregião constante serão feitas, geralmente, a fim de melhorar ou alterarcaracterísticas, como fixação de complemento, interação com membranas eoutras funções de efetuador. As mudanças na região variável serão feitas afim de melhorar as características de ligação de antígeno.

Além dos anticorpos, imunoglobulina s podem existir emvárias outras formas incluindo, por exemplo, Fv de cadeia única , Fab, e(Fab1)2, assim como diacorpos, anticorpos lineares, anticorpos híbridosmultivalentes ou multiespecificos (como descrito acima e em detalhes em :Lanzavecchia et al., Eur. J. Imunol. 17, 105 (1987)) e em cadeias únicas (porexemplo, Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 85 5879-5883 (1988) eBird et al., Science.. 242:423-426 (1988),incorporados aqui por referência ).(Ver, geralmente, Hood et al., "Imunology", Benjamin, N.Y., 2nd ed. (1984),e Hunkapiller e Hood, Nature, 323:15-16 (1986), incorporados aqui porreferência ).

Como usado aqui, os termos "Fv de cadeia única," "anticorposde cadeia única," "Fv" ou "scFv" referem-se a fragmentos de anticorpos quecompreendem as regiões variáveis de cadeias tanto pesadas como leves, masfaltam as regiões constantes, mas dentro de uma cadeia de polipeptídeo única.Geralmente, um anticorpo de cadeia única ainda compreende um ligador depolipeptídeo entre os domínios VH e VL que permite que ele forme aestrutura desejada que irá permitir uma ligação de antígeno. Os anticorpos decadeia única são discutidos em detalhes em Pluckthun in The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); ver também publicação de pedido depatente international No. WO 88/01649 e Patentes U.S. 4,946,778 e5,260,203, cujas descrições são incorporadas por referência para qualquerfim. Em formas de realização específicas, os anticorpos de cadeia únicatambém podem ser bi-específicos ou humanizados.

Um "fragmento Fab" é composto de uma cadeia leve e a Chi eas regiões variáveis de uma cadeia pesada. A cadeia pesada de uma moléculaFab não pode formar uma ligação dissulfeto como outra molécula de cadeiapesada.

Um "fragmento Fab'"contém uma cadeia leve e uma cadeiapesada que contém mais da região constante, entre os domínios Chi e Ch2,como uma ligação dissulfeto inter-cadeias pode ser formada entre duascadeias pesadas para formar uma molécula F(ab')2.

Um "fragmento F(ab')2 contém duas cadeias leves e duascadeias pesadas contendo uma porção da regulação constante entre osdomínios Chi e CH2, como uma ligação de dissulfeto intercadeia é formadaentre duas cadeias pesadas.

O termo "diacorpos" refere-se a fragmentos de anticorpopequenos tendo dois sítios de ligação a antígeno, cujos fragmentos contém umdomínio variável de cadeia pesada (Vh) concatenado a um domínio variávelde cadeia leve (Vl) na mesma cadeia de polipeptídeo (Vh-Vl). Ao usar umligador que é muito curto para permitir a formação de pares entre os doisdomínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a formar pares com osdomínios complementares de outra cadeia, criando dois sítios de ligação aantígeno.

Diacorpos são descritos mais completamente,, por exemplo,em EP 404,097; WO 93/11161; e Hollinger et al., 1993, Proc. Natl. Acad Sei.USA 90:6444-6448 (1993).

O termo "anticorpos lineares "refere-se a anticorpos descritosem Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10): 1057-1062. Brevemente, estesanticorpos compreendem um par de segmentos de Fd in tandem (VH -ChI- Vh-ChI) que formam um par de regiões de ligação de antígeno. Os anticorposlineares podem ser bi-específicos ou mono-específicos.

O termo "fragmento de imunoglobulina imunologicamentefuncional", como usado aqui, refere-se a um fragmento de polipeptídeo quecontém, pelo menos, os domínios variáveis das cadeias pesada e leve deimunoglobulina. Um fragmento de imunoglobulina imunologicamentefuncional da invenção é capaz de se ligar a um ligando, evitando a ligação doligando a seu receptor, interrompendo a resposta biológica resultante daligação do ligando a receptor, ou qualquer combinação dos mesmos.

O termo "anticorpo monoclonal" refere-se a um anticorpo queé derivado de um clone único, incluindo o clone eucariótico, procariótico, oufago, e não ao método pelo qual ele é produzido.

A presente invenção é baseada em parte na descoberta de queas subunidades do receptor heterodimérico que liga IL-31, por exemplo IL-3 IRa e OSMRb5 são expressadas em células neurais, como as células degânglio da raiz dorsal. Assim5 a presente invenção engloba o uso deantagonistas para IL-31 na inibição da dor e inflamação e os sintomas dedoença intestinal inflamatória, doença de Crohn5 prurido, e dor neurogênica esensibilização. A presente invenção também engloba o uso de agonistas deIL-31 para melhorar a sensibilização através do estímulo das células degânglio da raiz dorsal.

IL-31 é o nome HUGO para uma citocina que foi previamentedescritas como Zcyto 17rlig em um pedido de patente US publicado (Verpatente US publicada 20030224487, no pedido de patente US número de série10/352,554, depositado em 21 de janeiro de 2003, agora patente expedidanúmero US 7,064,186; Sprecher, Cindy et ai., 2003, incorporada aqui porreferência). O receptor heterodimérico para IL-31, compreende umheterodímero formado entre IL-31Ra e receptor beta de OncostatinM(OSMRb). IL-31Ra é o nome HUGO para uma proteína chamada zcytorl7em pedido de patente US publicado de comum propriedade número20030215838, no pedido de patente US número de série 10/351,157,depositado em 21 de janeiro de 2003, aqui incorporados por referência. Asseqüências de polinucleotídeos e polipeptídeos para IL-31 humano sãomostradas em SEQ ID NOs: 1 e 2, respectivamente. As seqüências depolipeptídeos e polipeptídeos para IL-31 murinos são mostradas em SEQ DDNOs: 3 e 4, respectivamente. Como usado aqui o termo IL-31 deve significarzcytorl71ig como usado na Patente U.S. 20030224487, como mostrado acima.IL-3 IRa foi previamente descrito no pedido de patente US número de série09/892.949 de comum propriedade, depositado em Junho de 26, 2001, que éaqui incorporado por referência.

A seqüência de aminoácido para receptores OSMR, e IL-3 IRAindicou que os receptores codificados pertenciam à subfamília de receptor decitocinas de Classe I, mas não é limitada aos receptores para IL-2, IL-4, IL-7,Lif, IL-12, IL-15, EPO, TPO, GM-CSF e G-CSF (para uma revisão, ver,Cosman, "The Hematopoietin Receptor Superfamily" em Cytokine 5(2): 95-106, 1993). O receptor zcytorl7 é completamente descrito no pedido depatente PCT de comum propriedade , US1/0484 (publicação WIPO No. WO02/00721; aqui incorporada por referência).

A presente invenção inclui o uso de anti-IL-31, incluindoantagonistas, anticorpos, proteínas de ligação, variantes e fragmentos, tendoatividade anti-IL-31. A invenção inclui a administração a um indivíduo deuma molécula anti-IL-31 e contempla tanto usos terapêuticos humanos comoveterinários.Os indivíduos veterinários ilustrativos incluem indivíduosmamíferos, como animais de fazenda e animais domésticos.

As seqüências de polinucleotídeos e polipeptídeos nativas paraa forma "longa" de IL-31RA são mostradas em SEQ ED NOs:5 e 6,respectivamente. As seqüências de polinucleotídeos e polipeptídeos nativaspara a forma "curta" de IL-31RA são mostradas em SEQ ID NOs:7 e 8,respectivamente. As formas trancadas adicionais de polipeptídeo IL-31RAparecem ser expressadas naturalmente. Ambas as formas codificam osreceptores de IL-31RA solúveis. As seqüências de polinucleotídeos epolipeptídeos de IL-31RA solúveis "longas" são mostradas em SEQ IDNOs:9 e 10, respectivamente. As seqüências de polinucleotídeos epolipeptídeos de IL-31RA solúveis "curtas" são mostradas em SEQ IDNOs:ll e 12, respectivamente. As seqüências de polinucleotídeos epolipeptídeos nativas IL-31RA de camundongo são mostradas em SEQ IDNOs:13 e 14, respectivamente. As seqüências de polinucleotídeos epolipeptídeos nativas para OSMRbeta humano são mostradas em SEQ IDNOsrl5 e 16, respectivamente. Ver pedidos PCT WO 02/00721 e WO04/003140, ambos sendo incorporados por referência.

Os antagonistas de IL-31 incluem moléculas anti-IL31 comoos anticorpos que ligam IL-31, incluindo variantes, fragmentos ou derivadosdos mesmos que inibem, limitam, reduzem, minimizam, evitam ouneutralizam o efeito que IL-31 tem sobre a ligação de seu receptor cognato.

A análise de expressão in situo revelou que IL-31RA eOSMRbeta são

Expressados nas células da medula espinhal células de gânglioda raiz dorsal em humanos. Ver. Exemplo 1. Assim, as moléculas de EL-31,seus agonistas, ou antagonistas desempenham um papel na manutenção deneurônios e inflamação e estimulação neurogênicas. Isto indica que osagonistas de IL-31, antagonistas podem ser usados para tratar várias doençasneurodegenerativas como esclerose lateral amiotrófica, (ALS), mal deAlzheimer, doença de Huntington, mal de Parkinson, neuropatias periféricas edoenças desmilinantes incluindo esclerose múltipla. A especificidade detecido de IL-3 IRA e OSMRb sugere que IL-31 pode ser um fator decrescimento e/ou manutenção na medula espinhal e cérebro que podem serusados para tratar a medula espinhal, cérebro, ou danos ao sistema nervosoperiférico.

Os métodos para medir a capacidade de IL-31 de estimular ador são bem conhecidos na arte. Por exemplo, as células de gânglio da raizdorsal podem ser isoladas e cultivadas. Ver Voilley, N. et al., J. Neurosci.,27{20):8026-8033, 2001. Por exemplo, células de gânglio da raiz dorsal sãoproduzidas a partir de ratos machos adultos Wistar (5-7 semanas e recém-nascidos por 0,1% dissociação de colagenase e colocação em discos P35revestidos com colágeno em DMEM mais soro de bezerro fetal a 5%.Similarmente, métodos de isolamento de células de gânglio da raiz dorsal sãodescritos por Steinhoff, M. et al. (ver Steinhoff, M. et al., Nature Medicine,6(2^:151-157, 2000). Brevemente, células de gânglio da raiz dorsal sãoafinadas em meio Eagle modificado por Dulbeccos frio, (DMEM) e incubadasem DMEM contendo 0,05mg/ml tripsina, 1 mg/ml colagenase, e 0,01 mg/mlDNAse I durante 45-60 minutos a 37 0C. SBTI é adicionado para neutralizar atripsina e a suspensão é centrifugada a cerca de 1,000 g durante 1 min.Neurônios na pelota são colocados em suspensão em DMEm contendo 10%soro bovino fetal, 5 ng/ml de fator de crescimento de nervos, 2 mMglutamina, 1 mg/ml penicilina/estreptomicina e DNAse I, e colocada emplacas de coberturas de vidro revestidas com Matrigel. Neurônios sãocultivados de 3-5 dias antes do uso. A expressão de IL-31Ra nas membranasde plasma é verificada por imunofluorescência usando um anticorpo.

Para medir o efeito de IL-31 no estímulo do gânglio da raizdorsal, a concentração de íon cálcio intracelular é medida em neurônioscultivados como descrito por Steinhoff et al., supra. Os neurônicos sãoincubados em solução de sal equilibrada de Hank, 20 mM HEPES, pH 7,4contendo 5uM Fura-2/ΑΜ (Molecular Probes, Eugene, Oregon) durante lha37 °C. As tampas são lavadas, montadas em uma câmara (1 ml volume) emum microscópio invertido Zeiss 100 TV e observadas usando uma objetivaZeiss x40 Fluar. A fluorescência é medida a 340 nm e 380 nm para permitir adeterminação de cálcio. Células são expostas a IL-31 com e sem outrosagentes de sensibilização, e inibição na presença de antagonista de EL-31 émedida.

Para medir a capacidade de um antagonista de IL-31 sobre oefeito da ligação de IL-31 a seu receptor heterodimérico cognato em gânglioda raiz dorsal, ou células neurais em geral, em dor, vários mediadores de dorpodem ser medidos, como por exemplo, mas não limitados a , prostaglandina,substância P, CGRP, galanina, Neuropeptídeo Y, histamina, bradiquinina,canabinóides e mediadores da via de ácido araquinóide.

Além dos métodos in vitro acima para medir a capacidade deantagonistas para o efeito de induzir dor de IL-31 de IL-31 em células neurais,vários modelos em in vivo são também utilizáveis. Ver, por exemplo, Honore,P. et al., Neuroscience, 98(3):585-598, 2000. Este artigo descreve váriosmodelos para dor inflamatória, dor neuropática e dor de câncer. Por exemplo,um modelo mede o efeito de um antagonista para IL-31, como uma injeçãosubcutânea de IL-31, com e sem a molécula de antagonista, na superfícieplantar da pata traseira de um camundongo. O camundongo é submetido aeutanásia 3 dias após a injeção e o edema periférico é medido. O efeito damolécula de antagonista de IL-31 para inibir, limitar, minimizar, reduzir,evitar ou neutralizar o edema é medido. Os modelos in vivo adicionais sãoligação de nervo espinhal, transação de nervo ciático, câncer de osso induzidopor sarcoma, análise comportamental, e efeitos de morfina.

Outro modelo de camundongo de dor é a alodinia mecânica.Ver por exemplo, Sweitzer, S.M. et al., J. Neuroimm., 125:82-93, 2002.Brevemente, os ratos ou camundongos são testados para alodinia mecânicacom 2 e/ou 12 g de filamentos de Von Frey. Primeiro, os animais sãoaclimatados ao procedimento e medida de linha de base são tomadas. O IL-31é administrado em quantidades variadas. Alodina é caracterizada como umaretirada intensa da pata a um estímulo normalmente não nocivo em resposta aadministração de IL-31. A comparação é feita com e sem a administração demolécula de antagonistas de IL-31.

Um neuropeptídeo pró-inflamatório, substância P (SP) élevado aos gânglios dorsais e então transportado para a periferia por nervosnociceptivos A e C (15). SP pode induzir coceira por liberação de histaminados grânulos de células tronco. Na pele, SP pode também causar eritema,edema e inflamação neurogênica liberando histamina IL-1, prostaglandinas eenzimas lissossomais mas é rapidamente degrada na derme (16).Aadministração oral anterior de anti-histaminas inibe o prurido causado por sP.Capsaicina obtida de pimentão vermelho aplicado localmente deleta SP denervos cutâneos e assim diminui o prurido. Como as subunidades de receptorpara EL-31 são expressadas nas células de gânglio da raiz dorsal, aadministração de moléculas de antagonista de IL-31 podem diminuir aestimulação destas células e pode diminuir a substância P que pode serinduzida por administração de EL-31.

A ligação de IL-31 a seu receptor, isto é, IL-31RA e OSMRbeta, sobre as células de gânglio da raiz dorsal pode estimular o sistemasomato-sensorial, que consiste de vários receptores sensoriais responsáveispor sensações como pressão, toque, temperatura, dor, coceira, titilação,formigamento, e dormência. A ligação a IL-31 a seu receptor cognato poderesultar em inflamação neurogênica e estimulação, que pode levar a umaliberação de fatores adicionais que induzem o estímulo neurogênico. Umgrupo de fatores que media a dor é das prostaglandinas, que tambémcontribuem para inflamação local. Assim, um antagonista de IL-31 pode terbenefício sobre a dor inflamatória aguda comumente tratada com NSAIDs,como mialgia, dor de cabeça, dor nas juntas, de danos agudos ou dor crônica,como a causada por osteoartrite. Estes estímulos neurogênicos podem ser oresultado de inflamação causada por, por exemplo, reações autoimunes, comoalergia, infecção viral, como varicela, e dano, como queimadura ou trauma.Assim, antagonistas que interferem com a transdução de sinal induzida pelaligação do ligando de ILI-31 a seu receptor cognato podem ser utilizáveis naredução, limitação, prevenção ou minimização de inflamação neurogênica e oestímulo do sistema somato-sensorial. Como tal, antagonistas da transduçãode sinal induzida por IL-31 em células de gânglio da raiz dorsal podem serusados para tratar dor, coceira, formigamento, associados com doençasautoimunes, infecção viral, e trauma. Além disso, porque a inflamaçãoneurogênica pode resultar em hipersensibilidade do nervo após o insultoinicial, antagonistas de IL-31 podem ser um tratamento efetivo dos sintomas.Por exemplo, alguns pacientes com herpes-zóster experimentam os sintomassensoriais de dor e/ou coceira em conjunto após a infecção viral ter sidodepurada ou minimizada. A neuralgia que acompanha a herpes zoster aguada,e neuralgia pós-herpética são provavelmente devido à inflamação dosgânglios da raiz dorsal e gânglios trigeminais, onde os antígenos virais atacamas células T e outras células inflamatórias. A dor de longa duração poderesultar de inflamação persistente do dermatoma após uma resposta antiviralrobusta. Conseqüentemente, o nível ou estágio da infecção viral pode não serrepresentativo de percepção sensorial do indivíduo. Assim, o efeito benéficode antagonizar a transdução de sinal induzida por IL-31 pode se estender alémdo estado imediato de infecção viral ou trauma.

A neuropatia e deficiência sensorial envolvem dor e perda desensibilidade, e podem estar relacionadas a doenças como atopia, diabete,esclerose múltipla e hipertensão, por exemplo. Como EL-31RA e OSBRbetasão proteínas que são expressadas nas células de gânglio da raiz dorsal e damedula espinhal, antagonistas de IL-31 podem ser úteis para tratar dor edeficiências sensoriais. Por exemplo, os antagonistas para IL-31 podem serdistribuídos topicamente, subcutaneamente, centralmente ou sistemicamente,para tratar neuropatia diabética periférica, neuropatia periférica pós-herpética,assim como dor, em geral, incluindo dor como um sintoma em pacientes comqueimaduras.

Os pacientes cm queimaduras causam dor intensa e prolongadaque é intensificada quando o curativo da ferida é trocado. As mudanças decurativo freqüentes são necessárias para evitar infecção e auxiliar acicatrização. A quantidade de dor experimentada por pacientes durante ocuidado da ferida permanece um problema mundial para as vítimas dequeimaduras assim com várias outras populações de pacientes. Quando elesestão em repouso, a dor associada com a queimadura pode ser tratada comopióides, que tem alguns efeitos indesejados. No entanto, durante o cuidadoda ferida como mudanças de bandagens diárias, limpeza da ferida, remoçãode prendedores, etc, os opióides não são suficientes, com a maior parte dospacientes com queimaduras relatando dor severa a excruciante durante ocuidado da ferida.

Porque ambos os membros do heterodímero para IL-31, isto é,IL-31RA e OSBRbeta são expressados em células de gânglio da raiz dorsal,um antagonista para IL-31, como anticorpo neutralizante é utilizável paraevitar, minimizar, limitar e/ou tratar dor, incluindo dor associada comqueimaduras ou neuropatia. Os modelos in vivo imitando queimaduras sãobem conhecidos do versado.

A dor persistente pode provocar hiperplasia de modo quemenos do que o estímulo original pode causar dor aumentada, tambémchamada alodinia. Como ambas as subunidades IL-31RA e OSBRbeta sãoexpressadas em células de gânglio da raiz dorsal, um antagonista paratransdução de sinal induzida por IL-31 em células neuronais contendo estassubunidades pode ajudar a mitigar os sintomas de alodinia.

Os polipeptídeos da presente invenção, como IL-31, assimcomo agonistas, fragmentos variantes e/ou quimeras dos mesmos, tambémpodem ser usados para aumentar a sensibilização em mamíferos, por exemplo,polipeptídeos IL-31 da presente invenção, incluindo agonistas, podem serusados para aumentar a sensibilização (dor, calor ou mecânica) quandoliberados local ou topicamente, sistemicamente, ou centralmente e medidosem quaisquer modelos ou experiências bem conhecidas do versado e/oudescritas aqui. Também, os polipeptídeos da presente invenção podem seradministrados para melhorar a sensibilidade de células espinhais e neuronais afim de melhorar a função dos neurônios sobreviventes aos neurotransmissorese assim podem ser efetivos em mal de Alzheimer ou Parkinson, assim comoparalisia.

Similarmente, onde um paciente tem uma sensibilizaçãoaumentada a dor, antagonistas para IL-31 podem ser usados para diminuir asensação de dor em um paciente com neuropatia. Por exemplo, um pacientecom neuropatia diabética e neuropatia pós-herpética tem dor crônica,aumentada, o antagonista para IL-31 pode ser utilizável para limitar, evitar oudiminuir a dor.Como um receptor para uma proteína que é pró-inflamatórias,a presença de IL-31RA e OSBRbeta nos gânglio da raiz dorsal e medulaespinhal indicam que antagonistas de IL-31 podem ser usados para reduzir ainflamação destes tecidos. Assim, condições como meningite podem sebeneficiar da administração de antagonistas, incluindo anticorpos.

Doenças que envolvem inflamação neurogênica e estimulaçãoe também podem se beneficiar de antagonização de dor induzida por IL-31em tecidos neuronais, incluindo células de gânglio da raiz dorsal, incluem:dor crônica, enxaqueca, artrite, osteoartrite, artrite reumatóide, polineuropatia,periferalneuropatia diabética, dor subseqüente a corte de nervos (por exemplodor pós-cirúrgica), condições inflamatórias que envolvem um componenteproduzindo dor neurogênica, como doença intestinal inflamatória, nefrite,alguns carcinomas metásticos, e inflamação dos vasos sangüíneos. Estasdoenças também podem ser tratadas por um antagonista de transdução desinal induzida por IL-31. Além disso, as condições da pele, incluindo irritaçãopor radiação e queimaduras, queimaduras químicas, sensibilidade a produtosquímicos múltiplos, calor pruriginoso, rinite, queimaduras térmicas,queimaduras solares, vermelhidão da pele e lesões quimicamente induzidas, ereações alérgicas agudas, como ataque de asma agudo e inflamação dopulmão causada por exposição a produtos químicos, e urticária assim comoconjuntivite e doença das gengivas podem ser tratados com antagonistas deIL-31. Além disso, as síndromes escapulo peroneais são distúrbiosneuromusculares heterogêneos que são caracterizados por fraqueza nadistribuição de músculos peroneais e da cinta do ombro. As síndromesescapulo peroneais tanto neurogênicas (atrofia muscular espinhal escapuloperoneal, SPSMA) como miopática (distrofla muscular escapulo peroneal,SPMD) foram descritas. O locus cromossômico para SPMD foi recentementedesignado para cromossomo 12q, que é o mesmo locus como para EL-31.Assim, os antagonistas de IL-31 podem ser usados para tratar estas doenças.Nos Estados Unidos, aproximadamente 500.000 pessoassofrem de doença intestinal inflamatória, que podem envolver tanto ointestino delgado como o grosso. A colite ulcerativa e doença de Crohn são asformas melhor conhecidas de doença intestinal inflamatória, e ambas sãocategorizadas como doença intestinal inflamatória "idiopática" porque aetiologia para as mesmas é desconhecida.

A doença de Crohn pode envolver qualquer parte do tratogastrointestinal, mas com maior freqüência envolve o intestino delgado distaie cólon. A inflamação pode produzir qualquer aspecto deste uma úlcerapequena sobre um foliculo linfóide até uma úlcera com fissura profunda auma ferida transmural e inflamação crônica. Apesar da etiologia serdesconhecida, os mecanismos infecciosos e imunológicos foram propostos.Os sintomas são variáveis e podem incluir diarréia, febre, e dor, assim comomanifestações extra-intestinais de artrite, uveíte, eritema nodoso e espondiliteanquilosante.

A abordagem tradicional para o tratamento de doença éimunossupressão com azatioprina (Ver, por exemplo, Rutgeerts, J.Gastroenterol. Hepatol. 17(Suppl.):S 176-85 (2002)). Mais recentemente, oanticorpo de fator de necrose anti-tumor monoclonal, quimérico, infliximab,foi usado para marcar mecanismos de doença patogênica específicos, epermitir a supressão do processo da doença e cicatrização do intestino a longoprazo. No entanto, esta terapia está associada com problemas deimunogenicidade. A formação de anticorpos para infliximab interfere com aeficácia e é associada com as reações de infusão.

A síndrome de intestino irritável (IBS) é um distúrbio do tratogastrointestinal funcional crônica. Ela é uma condição heterogêneacaracterizada pro vários sintomas do intestino incluindo dor abdominal egases que são geralmente associados com os hábitos alterados (Collins et al,2001). Estima-se que entre 12 e 20% da população dos U.S. sofrem destacondição. Critérios diferentes foram propostos para definir IBS, incluindo ocritério de Manning (Manning et al, 1978), o critério de Rome (Thompson etal, 1992), e mais recentemente Rome II (Thompson et al., 1999). Relatóriosde pesquisa em DBS com freqüência classificam os pacientes com IBS em doissubtipos de constipação predominante (CON) e diarréia predominante (DIA)e às vezes incluem um terceiro subtipo de padrão alternante (ALT).

As moléculas anti-IL-31, antagonistas, anticorpos, proteínas deligação, variantes e fragmentos, são utilizáveis no tratamento, detecção e dorassociados com a doença intestinal inflamatória (IBD) e a síndrome deintestino irritável (IBS).

A doença intestinal inflamatória (IBD) pode afetar o cólone/ou o reto (colite ulcerativa) ou o intestino delgado e grosso (doença deCrohn). A patogênese destas doenças não é clara, mas elas envolveminflamação crônica dos tecidos afetados. As terapêuticas potenciais incluemmoléculas anti-IL-31, incluindo anticorpos anti-IL-31, outras proteínas deligação, variantes, fragmentos, quimeras, e outros antagonistas de IL-31. Estasmoléculas podem servir como uma terapêutica valiosa para reduzir ainflamação e efeitos patológicos em IBD e doenças relacionadas.

A colite ulcerativa (UC) é uma doença inflamatória dointestino grosso, comumente chamado o cólon, caracterizada por inflamação eulceração da mucosa e forro mais interno do cólon. Esta inflamação leva ocólon a esvaziar com freqüência, resultando em diarréia. Os sintomas incluemalívio das fezes e cólicas abdominais associadas, febre e perda de peso.Apesar da causa exata de UC ser desconhecida, pesquisa recente sugere queas defesas naturais do corpo estão operando contra as proteínas no corpo queo corpo pensa ser estranhas (uma "reação autoimune"). Talvez porque elas separecem com proteínas bacterianas no intestino, estas proteínas podem ouinstigar ou estimular o processo inflamatório que começa a destruir o forro docólon. Como o forro do cólon é destruído, úlceras se formam, liberando muco,pus e sangue. A doença geralmente começa na área retal e podeeventualmente se estender através de todo o intestino grosso. Episódiosrepetidos de inflamação levam ao espessamento da parede do intestino e retocom tecido de feridas. A morte do tecido do cólon ou sepsia podem ocorrercom doença severa. Os sintoma da colite ulcerativa variam em severidade eseu início pode ser gradual ou rápido. Os ataques foram provocados pormuitos fatores, incluindo infecções respiratórias ou estresse. Assim, asmoléculas anti-IL-31 da presente invenção podem ser utilizáveis para tratar epara detectar UC.

Apesar de não existir atualmente cura para UC disponível, ostratamentos são focalizados na supressão do processo inflamatório anormal noforro do cólon. Os tratamentos incluindo imunossupressivos corticosteróides(por exemplo, azatioprina, mercaptopurina, e metotrexato) e aminossalicitatossão disponíveis para tratar a doença. No entanto, o uso a longo prazo deimunossupressivos como corticosteróides e azatioprina pode resultar emefeitos laterais sérios incluindo diminuição dos ossos, cataratas, infecção, eefeitos no fígado e medula óssea. Nos pacientes em que as terapias correntesnão tem sucesso, cirurgia é uma opção. A cirurgia envolve a remoção docólon completo e do reto.

Existem vários modelos de animais que podem parcialmenteimitar a colite ulcerativa crônica. O modelo mais amplamente usado é omodelo de colite induzida por ácido 2,4,6-trinitrobenossulfônico/etanol(TNBS) que induz a inflamação crônica e ulceração no cólon. Quando TNBSé introduzido no cólon de camundongos suscetíveis via instilação intra-retal,ele induz uma resposta imune mediada por células T na mucosa colônica,neste caso levando a uma inflamação mucosal maciça, caracterizada pelainfiltração densa de células T e macrófagos através da parede completa dointestino grosso. Além disso, este quadro histopatológico é acompanhado peloquadro clínico de perda de peso progressiva (debilitante), diarréia comsangue, prolapso retal, e grande espessamento da parede do intestino grosso(Neurath et al. Intern. Rev. Imunol. 19:51-62, 2000).

Outro modelo de colite usa dextrano sulfato de sódio (DS S),que induz uma colite aguda manifestada por diarréia com sangue, perda depeso, encurtamento do cólon e ulceração mucosal com infiltração deneutrófilos. A colite induzida por DSS é caracterizada histologicamente porinfiltração de células inflamatórias na lamina própria, com hiperplasialinfóide, dano da cripta focai, e ulceração epitelial. Estas mudanças sedesenvolvem, como se pena, devido a um efeito tóxico de DSS sobre oepitélio e por fagocitose de células da lamina própria e produção de TNF-alfae IFN-gama. DSS é considerado como um modelo independente de células Tporque é observado em animais deficientes em células T como camundongosSCID.

A administração de antagonistas de IL-31 ou parceiros deligação para estes modelos de TNBS ou DSS pode ser usada para medir amelhora de sintomas e alterar o curso de doença gastrointestinal. EL-31 podedesempenhar um papel na resposta inflamatória e dor associada com colite e aneutralização da atividade de IL-31 por administração de antagonistas é umaabordagem terapêutica potencial para IBD.

A síndrome de intestino irritável é uma das condições maiscomuns na clinica gastrointestinal. Ainda, diagnóstico e tratamento de IBSpermanece limitado.Como a expressão de IL-31 e EL-3 IRAI estavacorrelacionada com a regulação positiva de doença de Crohn (Ver Exemplo5). Os antagonistas de IL-31, incluindo anticorpos anti-IL-31, outras proteínasde ligação, variantes, fragmentos quimeras, e outros antagonistas de IL-31 sãoutilizáveis na redução de sintomas e tratamento da doença.

A administração de antagonista de IL-31 ou de parceiros deligação a um paciente com IBD ou EBS pode ser usada para melhorar ossintomas e alterar o curso da doença do trato gastrointestinal. IL-31 podedesempenhar um papel na resposta inflamatória em colite, e a neutralizaçãode atividade de IL-31 por administração de antagonistas é uma abordagemterapêutica potencial para EBD e/ou IBS.

Para distúrbios relacionados com IBS e IBD, sinais clínicos demelhorada função incluem, mas não são limitados a redução da dor, cólicas, esensibilidade, redução em diarréia e melhorada consistência das fezes,reduzida distensão abdominal, e aumentado trânsito intestinal. A melhoratambém pode ser medida por uma diminuição no índice de atividade dedoença de Crohn médio. (CDAI). Ver Best. W. et al., Gastroenterology 70:439-44, 1976. Adicionalmente, melhorada função pode ser medida por umaqualidade da avaliação da vida como descrito por Irvine et al. (Irvine, E. et al.,Gastroenterology 106: 287-96, 1994.

Os modelos de animais da síndrome de intestino irritável sãodescritos por Mayer e Collins. Gastroenterol. 122:2032-2048 (2002). Estesmodelos podem ser divididos nos que são mediados primariamente pormecanismos dirigidos ao sistema nervoso central (modelos de "memória emestresse") e os com etiologias dirigidas ao intestino primárias (modelos de"memória de dor" e "memória imune"). Em um modelo os animais sãocirurgicamente preparados com eletrodos implantados no cólon proximal emúsculos estriatados, e cateteres implantados em ventrículos laterais docérebro. A distensão retal é realizada por inflação de um balão retalmenteinserido e a pressão elicitando uma resposta visceromotora característica émedida. Um composto de teste, como antagonista de IL-31 e/ou variantes ouantagonistas, é administrado através da via apropriada (p.o., i.p., s.c., i.v., oui.m.) e no tempo apropriado (isto é, ~ 20 min, se i.p. ou i.c.v.) antes dadistensão. O composto de teste é avaliado por sua capacidade de afetar amotilidade colônica, contrações abdominais e dor visceral.

Adicionalmente, distúrbios associados com inflamação dointestino podem ser tratados com os antagonistas de EL-31 como fragmentos,agonistas e antagonistas dos mesmos descritos aqui. |Por exemplo, a síndromede intestino irritável (IBS) é caracterizada por um espectro muito amplo desintomas (dor, surtos de diarréia e/ou constipação, motilidade gastrointestinalanormal). É difícil apontar a etiologia, e podem ter componentes relacionadoscom o estresse, genética e/ou inflamação. Similarmente, as moléculas anti-IL-31 da presente invenção incluindo anticorpos e parceiros de ligação, podemser usados para tratar a doença intestinal inflamatória (incluindo colite edoença de Crohn). IBD é mais séria que IBS, e é caracterizada por diarréia,dor e má nutrição. Os pacientes com IBD com freqüência tem riscoaumentado e câncer gastrointestinal.

A atividade motora gastrointestinal pode ser medida em ummodelo de cachorro como a seguir: os cães são anestesiados e a cavidadeabdominal aberta. Os transdutores de força extraluminal (sensor para medir acontração) são suturados em cinco sítios (5), isto é, antro gástrico, 3 cmproximal do anel pilórico, o duodeno 5 cm distai do anel pirólico, o jejuno 70cm distai do anel pirólico, o íleo, 5 cm proximal da junção íleo- cólon, e ocólon 5 cm distai da junção íleo- cólon. Os fios de guia destes transdutores deforça são retirados da cavidade abdominal e então levados para fora através deuma incisão na pele feita entre a escápula, em que um conector é conectado.Após a operação, um protetor de camisa é colocado no cão para proteger oconector. A medida da atividade motora gastrointestinal é iniciada duassemanas após a operação. Para uma medida ad libitum, um telêmetro(transmissor de dados de eletroondas) é conectado com o conector paradeterminar a motilidade de contração em cada sítio do trato gastrointestinal.Os dados são armazenados em um computador via um telêmetro para análise.Um composto de teste, como antagonista de IL-31, é administrado através davia apropriada (p.o., i.v., i.p., s.c., i.m.) no ponto de tempo apropriado paraavaliar sua capacidade de afetar a atividade motora gastrointestinal. Isto podeser realizado em cães normais ou cães em que a gastroparese/ íleo foiinduzida. O método acima é uma modificação dos descritos em Yoshida. eIto. J. Pharmacol. Experiment. Therap. 257, 781-787 (1991) e Furuta et al.Biol. Pharm. Buli. 25:103-1071 (2002).

IL-31 pode ser um desencadeador para uma reativação deinfecções virais latentes, como infecção por varicela. Em infecção por vírusvaricela zoster (VZV) primária, as células T mais provavelmente a sereminfectadas por vírus de varicela zoster são células T de memória positiva paraCD4 expressando CLA e CCR4. Estas são células T de abrigo da pele, quepodem melhorar a viremia associada com a célula e o transporte de vírusinfecciosos para a pele e DRG. Estas células são também os produtoresprimários de IL-31. Assim, IL-31 em infecção de VZV primário podemcontribuir para a coceira/ dor envolvidas nas lesões da pele. A reativação devírus latente em DRG induz respostas de células T específicas para VZV, quecontribuem para a inflamação neurogênica. As células T de abrigo da pele sãomais facilmente infectadas com VZV, e a transferência in vivo de vírus decélulas T para DRG foi observada. A neuralgia pós-herpética é uma dascomplicações principais de herpes zoster causada pela reativação de vírus devaricela-zoster e é caracterizada por dor severa. Ver Sato-Takeda, M. et al.,Anesthesiology. 2006 104(5): 1063-9, aqui incorporado por referência. Estareferência também ensina um modelo de camundongo de dor pós-herpética,que corresponde a neuralgia pós-herpética. Brevemente, camundongos,BALB/c (MHC haplotipo: H-2), camundongos C57BL/6 (MHC haplotipo: H-2), e camundongos BALB/b, uma cepa congênita BALB/c com H-2, sãoinoculados transdermicamente na pata de trás com o vírus de herpes simplestipo I. Unilateralmente, a lesão de pele zosteriforme e a resposta relacionadacom dor (dor herpética aguda) são causadas, e alguns camundongos mostramrespostas relacionadas com dor (pós-herpética) após a cura das lesões da pele.O antígeno do vírus de herpes simples I e células positivas para CD3 sãoimunocoloridos nos gânglios da raiz dorsal na fase aguda. Ver tambémArgoff, C.E., et al., J Pain Symptom Manage. 2004 Oct;28f4):396-411, aquiincorporado por referência. Assim, antagonistas para IL-31 podem serutilizáveis para limitar ou evitar a reativação de infecções virais com varicela.

Os modelos de camundongos para encefalomielite alérgicaexperimental (EAE) foram usados como uma ferramenta para investigar tantoos mecanismo s de doença mediada imune, como métodos de intervençãoterapêutica potencial. O modelo se parece com esclerose múltipla humana eproduz desmielinação como um resultado de ativação de células T para neuro-proteínas como proteína básica mielina (MBP), ou proteína proteolipídeo(PLP). A inoculação com antígeno leva a indução de CD4+, células Tlimitadas em MHC classe II (Thl). As mudanças no protocolo para EAEpodem produzir variantes agudos, de relapso - crônico, ou transferênciapassiva de modelo (Weinberg et al., J. Imunol. 162:1818-26, 1999; Mijaba etal., Cell. Imunol. 186:94-102, 1999; e Glabinski, Meth. Enzym. 288:182-90,1997). Administração de antagonista de IL-31 ou outras proteínas de fusão esolúveis pode ser utilizável para melhorar os sintomas e alterar o curso dadoença.

Um antagonista para a transdução de sinal induzida por IL-31em células de gânglio da raiz dorsal pode ser utilizável para tratar pruridouracêmico, prurido de hepatite, falha hepática, ou colestase; de sarna ou pé-de-atleta, de prurido associado com gravidez, de prurido em pacientes emdiálise, e de prurido de anestesia e distúrbios psicológicos como a seguir.

Prurido uracêmico ou coceira renal é com freqüência umsintoma intolerável de insuficiência renal crônica (Blachley JD, BlankenshipDM, Menter A et al. Uremic pruritus: skin divalent ion content and responseto ultraviolet phototherapy. Am J Kidney Dis 1985; 5: 237-41.) estandopresente em cerca de 13% dos casos; lesões de pele secundárias devido àcoceira podem ser vistas. E mesmo mais comum em pacientes sofrendo dediálise peritoneal ou hemodiálise (Murphy M, Carmichael AJ. Renal coceira.Clin Exp Dermatol 2000; 25: 103-6.); pode estar localizado ou generalizado.A coceira não está presente em falha renal aguda. O tratamento de pruridorenal é baseado em diálise intensiva e eficiente para remover as substânciaspruridogênicas do sangue, e no uso de membranas de ativação nãocomplemento. Pode-se também usar terapia com Uva, ungüentos emolientes,carvão ativado, colestiramina (4 g duas vezes por dia, agentes de ligação defosfato. As vezes, paratiroidectomia é necessária.

A dor antagoniza a coceira. Ver, por exemplo, Ward, L. et al.,Pain 64:129-138, 1996. Como um mediador de dor, um tal antagonista de IL-31 pode ser usado para tratar dor associada com coceira, assim melhorandonão somente a coceira, ou o comportamento de coçar, mas também a dorassociada.

Prurido é uma manifestação bem reconhecida dentre pacientescom doenças do fígado e colestase intrahepática ou pós-hepática. As doençashepáticas levando a prurido incluem cirrose biliar primária, hepatite viral B eC, colangite esclerosante primária, carcinoma dos dutos biliares, cirrosealcoólica, hepatite autoimune e outros. O prurido é generalizado e maisintenso nas mãos, pés e em torno de roupas ajustadas, enquanto a face,pescoço e área genital são raramente envolvidos.

O prurido generalizado está presente em 1-8% das mulheresgrávidas. Pruritus gravidarum pode ser diferenciado de dermatoses prurídicasna gravidez, como penfigóide gestationis (herpes gestationis), dermatosepapular e prurídica de gravidez e outras. O prurido gravidarum se manifestasem qualquer exantema principalmente no terceiro trimestre da gravidez, mastambém pode aparecer antes, primeiro no abdome e então se tornageneralizado. Este sintoma geralmente tende a ser pior à noite e desapareceapós o parto (em 1-4 semanas). Provavelmente, está associado com colestaseintrahepática, como se tem um aumento em gama GT e fosfatase alcalina, e àsvezes também de nível de bilirubina direta nestes pacientes. Prurido é maisfreqüente em gravidez múltipla e pode ter recorrência em gravidezsubseqüentes ou durante o uso de contraceptivos orais. Além disso, as pápulasurticárias prurídicas e placas da gravidez (PUPP), a dermatose mais comumassociada com gravidez, não responde a antihistaminas e com freqüênciapersiste além do parto.

Alguns distúrbios hematológicos são conhecidos comoassociados com prurido. Em policitemia rubra vera com super-produção detodas as linhagens de células hematopoiéticas, pacientes tipicamenteexperimentam uma severa coceira localizada no tronco, mas rara na face,mãos e pés, alguns minutos após contato com água quente. A coceira induzidapor água (prurido aquagênico, ou coceira do banho) pode estar presente em70% dos pacientes. A coceira pode durar durante cerca de 15 min a uma hora,e ser tão severa que os pacientes recusam a tomar banho. Nas últimasdécadas, prurido foi descrito em pacientes com reações de enxerto versushospedeiro após transplante de medula óssea.

A liberação crônica de IL-31 induz prurido e alopecia emcamundongos seguido por desenvolvimento de lesões na pele se parecendocom dermatite sugerindo que IL-31 pode induzir coceira. Ver Dillon S.R., etal., Nat Imunol: 5, 752 (2004). O envolvimento de IL-31 foi testado emindução de resposta de coceira por dois métodos, como mencionado noexemplo 2: (i) tratamento com capsaicina de camundongos tratados com IL-31 e (ii) tratamento com IL-31 do camundongos de nocaute Tac 1, que têmrespostas a dor nociceptiva significantemente reduzidas devido à falta deexpressão de neuro-peptídeos. Além disso, se a neutralização de EL-31 emcamundongos tratados com IL-31 pode evitar prurido e alopecia foi testado noexemplo 2.

Os camundongos NC/Nga espontaneamente desenvolvemlesões de tipo Ad que estão paralelas a AD humano em muitos aspectos,incluindo curso clínico e sinais, histopatologia e imunopatologia, quandoalongados em condições isentas de patógenos não especificados (não SPF) emtorno de 6-8 semanas de idade. Em contraste, camundongos NC/Ngamantidos sob condições de SPF não desenvolvem lesões da pele. No entanto,o início de lesões na pele espontâneas e comportamento de coçar podem sersincronizados em camundongos NC/Nga alojados em uma instalação SPF porinjeção intradérmica semanal de antígeno de ácaro de poeira não tratado. VerMatsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003). Assim, o desempenho de AD emNC/Nga é um modelo utilizável para a avaliação de novas terapêuticas para otratamento de AD.

Além do modelo NC/Nga de AD espontâneo, a sensibilizaçãoepicutânea de camundongos usando OVA também pode ser usada como ummodelo para induzir espessamento epidérmico e dérmico dependente deantígeno com um infiltrado mononuclear em pele de camundongossensibilizados. Isto geralmente coincide com níveis no soro elevados de IgEtotal e específico, no entanto nenhuma disfunção na barreira da pele ouprurido normalmente ocorre neste modelo. Ver Spergel J.M., et al., J ClinInvest, 101: 1614, (1998). Este protocolo pode ser modificado a fim deinduzir a desregulação e prurido por sensibilização de camundongostransgênicos DOl 1.10 OVA TCR com OVA. O aumento no número decélulas T específicas para antígeno que podem reconhecer o antígenosensibilizante pode aumentar o nível de inflamação na pele para induzir umcomportamento de arranhar visível e liquidificação/ escamação da pele.

Tanto o modelo AD espontâneo de NC/Nga como o modeloDOl 1.10 epicutâneo de OVA podem ser usados para medir a expressão deIL-31 e IL-31 RA em AD, assim como a capacidade dos antagonistasdescritos aqui pra inibir, reduzir ou neutralizar os efeitos de IL-31. Osantagonistas descritos aqui são utilizáveis para inibir os arranhões associadoscom dermatite e doenças prurídicas incluindo dermatite atópica, pruridonodularis, e eczema. Em AD, o comportamento de arranhar provocado poruma pele coçando intensamente agrava, como se acredita, a doença ao romperas funções de barreira da pele e ativar os queratinócitos, levando a produçãode quemocinas e aumentada inflamação. Muitos clínicos vêem AD como umciclo de auto-propagação, porque as lesões formadas por arranhões freqüentessão submetidas a infecção e outro estímulo dos antígenos. O fato de que ospacientes com um envolvimento quase total da área de superfície do corpopodem ter pele não afetada em regiões que são difíceis de arranhar se presta acredenciar esta hipótese. Ao evitar o prurido, a administração de antagonistasde IL-31 ou seu receptor pode ser efetiva para o tratamento da doençaprurídica por diminuição da ativação de queratinócitos induzida por IL-31 eestímulo neurológico, assim rompendo a ligação entre inflamação e prurido.

A redução no prurido pode também diminuir a secreção de fatoresneuroestimulatórios e reduzir a inflamação e escoriações associadas comarranhões constantes, levando a uma melhora nos escores da doença e/ou umaduração mais longa entre os surtos de doença. Uma inibição, redução ouprevenção de arranhões, sozinha, pode ser efetiva no tratamento de doençasprurídicas incluindo, mas não limitado a dermatite atópica, prurido nodularis,e eczema, porque o cessar de arranhões irá parar a progressão da dermatite ,cujo desenvolvimento é dependente do arranhar.

Como usado aqui, o termo "anticorpos" inclui anticorpospoliclonais, anticorpos policlonais purificados por afinidade , anticorposmonoclonais, e fragmentos de ligação a antígeno, como fragmentosproteolíticos F(ab')2 e Fab. Os anticorpos intactos geneticamenteengenheirados ou fragmentos, como anticorpos quiméricos, fragmentos Fv,anticorpos de cadeia única e outros, assim como peptídeos e polipeptídeos deligação a antígeno sintético, são também incluídos. Os anticorpos nãohumanos podem ser humanizados por enxerto de CDRs não humanos emarmação humana e regiões constante, ou por incorporação dos domíniosvariáveis não humanos completos (opcionalmente "mascarando" os mesmoscom uma superfície de tipo humana por substituição dos resíduos expostos,em que o resultado é um anticorpo "embutido"). Em alguns casos, osanticorpos humanizados podem reter resíduos não humanos dentro dosdomínios de armação de região variável humana para melhorar ascaracterísticas de ligação apropriadas. Através de anticorpos humanizantes, ameia-vida biológica pode ser aumentada, e o potencial para reações imunesadversas quando da administração a humanos é reduzido. Além disso, osanticorpos humanos podem ser produzidos em animais transgênicos, nãohumanos, que foram engenheirados para conter genes de imunoglobulinahumana como descrito na publicação WIPO No. WO 98/24893. Prefere-seque os genes de imunoglobulina endógenos nestes animais sejam inativadosou eliminados, como por recombinação homóloga.

Os anticorpos são considerados como especificamente ligandose: 1) eles demonstram um nível de limitar de atividade de ligação, e 2) elesnão reagem cruzado de modo significante com moléculas de polipeptídeorelacionadas. Um nível de limiar de ligação é detecção se os anticorpos anti-IL-31 ligam a um polipeptídeo IL-31, peptídeo ou epítopo com uma afinidadede pelo menos 10-vezes maior do que a afinidade de ligação para controlarpolipeptídeo (não -IL-31). Prefere-Ose que os anticorpos demonstrem umaafinidade de ligação (Ka) de 106 M-I ou mais, preferivelmente 107 M-I oumais, mais preferivelmente 108 M-I ou mais, e o mais preferivelmente 109M-I ou mais. A afinidade de ligação de um anticorpo pode ser prontamentedeterminada por um versado na arte, por exemplo, por análise de Scatchard(Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sei. 51: 660-672, 1949).

Se os anticorpos anti-IL-31 não reagem cruzado de modosignificante com as moléculas de polipeptídeo relacionadas for demonstrado,por exemplo, pelo anticorpo detectando polipeptídeo IL-31 mas nãopolipeptídeos relacionados usando uma análise de Western blot padrão(Ausubel et al., ibid.). Exemplos de polipeptídeos relacionados conhecidossão os descritos na arte anterior, como os ortólogos conhecidos, e parálogos, emembros conhecidos similares de uma família de proteínas. A triagemtambém pode ser feita usando IL-31 não humano, polipeptídeos mutantes deIL-31. Além disso, os anticorpos podem ser "triados contra" polipeptídeosrelacionados conhecidos, para isolar uma população que especificamente ligaaos polipeptídeos IL-31. Por exemplo, os anticorpos criados para IL-31 sãoadsorvidos em polipeptídeos relacionados aderidos a matriz insolúvel;anticorpos específicos para IL-31 irão fluir através da matriz sob as condiçõesde tampão apropriado. A triagem permite o isolamento de anticorposmonoclonais e policlonais não reativos cruzados com polipeptídeosintimamente relacionados conhecidos (Antibodies: A Laboratory Manual,Harlow e Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; CurrentProtocols in Imunology, Cooligan, et al. (eds.), National Institutes of Health,John Wiley and Sons, Inc., 1995). A triagem e isolamento de anticorposespecíficos é bem conhecida na técnica. Ver, Fundamental Imunology, Paul(eds.), Raven Press, 1993; Getzoff et al., Adv. in Imunol. 43: 1-98, 1988;Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, Goding, J.W. (eds.),Academic Press Ltd., 1996; Benjamin et al., Ann. Rev. Imunol. 2: 67-101,1984. Especificamente, a ligação de anticorpos anti-IL-31 pode ser detectadapor vários métodos conhecidos na arte, e discutidos abaixo.

A preparação de anticorpos monoclonais é bem conhecida natécnica. O polipeptídeo IL-31 humano, recombinante, maduro, purificado(resíduos de aminoácidos 27 (Leu) a 167 (Thr) de SEQ ID NO:2) ou oortólogo de camundongo, produzidos a partir dos sistemas de expressão podeser usado para gerar anticorpos monoclonais.

O efeito da administração de antagonistas de transdução desinal mediada por IL-31 pode ser medido in vivo por uma redução, inibição,prevenção, minimização, neutralização de inflamação, de pele ouespessamento dérmico, do recrutamento de linfócitos, e acantose, porexemplo, e outros sintomas ou compósitos de sintomas, como o índice de áreade eczema e severidade (EASI), que são bem conhecidos dos versados. Osefeitos adicionais podem incluir uma mudança ou diminuição na produção decitocinas ou quemocinas por pele lesional, redução em escore no teste depedaço de atopia, a diminuição na liberação de fatores solúveis comocitocinas, quimocinas, ou neuropeptídeos, como medido por microdiáliseintradérmica ou outros métodos. As avaliações do grau de coceira ou dorpodem ser medidas usando instrumentos clinicamente aprovados ouferramentas como a escala de análogo visual. A freqüência de arranhões podeser monitorada por medidores dos movimentos dos membros, dispositivostransdutores piezoelétricos fixados às unhas dos dedos, ou fotografia deinfravermelho de lapso de tempo, ou videografia de arranhar noturno empacientes. Outros métodos para a avaliação de uma diminuição na dor oucoceira são evidentes do versado.

Os anticorpos monoclonais purificados a partir dos meios decultura de tecido são caracterizados por sua utilidade em um ELISA para adeterminação quantitativa de IL-31 humano e recombinante. Os anticorpossão selecionados e um teste quantitativo é desenvolvido.

Os anticorpos monoclonais purificados de meios de cultura detecido são caracterizados por sua capacidade de bloquear ou reduzir aatividade de ligação do receptor, ("teste de neutralização") de huIL-31recombinante purificado em células neurais expressando o IL-31RA eOSBRb. Vários anticorpos monoclonais "neutralizantes" são identificadosdeste modo. Hibridomas expressando os anticorpos monoclonaisneutralizantes para IL-31 humano descritos podem ser então depositadosjunto ao depositório de patentes do American Type Tissue Culture Collection(ATCC; Manassas VA) como depósitos originais sob o tratado de Budapeste.

Cinco hibridomas anti-camundongo de rato foram gerados emum modo similar e receberam as seguintes designações de clones: clone271.9.4.2.6, clone 271.26.6.6.1, clone 271.33.1.2.2, clone 271.33.3.2.1, eclone 271.39.4.6.5. Os anticorpos monoclonais produzidos por estes clonesforam caracterizados por vários modos incluindo "compartimento" (isto é,determinação se cada anticorpo poderia inibir a ligação de qualquer outraligação), afinidade relativa e neutralização. Os anticorpos monoclonaisparecem estar em dois compartimentos separados com clone 271.33.3.2.1.ligando a um epítopo separado do que os outros quatro.

Os anticorpos monoclonais em meio de cultura de tecido sãocaracterizados por sua capacidade de bloquear ou reduzir a ligação doreceptor quando cultivado na presença de proteínas recombinantes purificadasde IL-31 humano.

A afinidade de ligação dos anticorpos monoclonais pode sergerada. O anticorpo específica para IgG-Fc gama de cabra-anti-rato (Jackson)é imobilizado sobre um chip CM5 Biacore. O teste é otimizado para ligarcada mAb sobre a superfície de captura anti-Rato e então uma série deconcentração de IL-31 é injetada através do mAb para ver a associação (Ka) edissociação (Kd). Após cada ciclo, a superfície é retro-regenerada para oanticorpo anti-rato com 2 injeções de 20 mM HCl. Os dados são gerados paracada e o software de avaliação (BIAevaluation software versão 3.2,Pharmacia BIAcore, Uppsala, Suécia) é usado para avaliar a cinética daligação do anticorpo anti-IL-31 para a proteína IL-31.

A confirmação bioquímica de que a molécula alvo, IL-31,reconhecida pelos mAbs anti-IL-31 putativo é de fato IL-31 é realizada porimuno-precipitação padrão seguido por análise SDS-PAGE ou procedimentosde Western blot, ambos empregando preparações de membrana solúvel do EL-31 transfectado versus células Baf3 não transfectadas. Os mAbs são testadospor sua capacidade de imunoprecipitar especificamente ou western blot aproteína IL-31 - muFc solúvel.

Os anticorpos monoclonais para IL-31 são descritos no Pedidode patente US 11/430.066, depositado em 8 de maio de 2006, e pedido depatente U.S. publicado número 2006-0275296, de comum propriedade. Estesanticorpos monoclonais foram purificados de meio de cultura de tecido foramcaracterizados por sua capacidade de bloquear ou inibir a capacidade de IL-31de ligar a seu receptor em um teste de neutralização. Vinte anticorposmonoclonais "neutralizantes" foram identificados deste modo. Os anticorposmonoclonais produzidos por estes clones foram caracterizados em váriosmodos incluindo "compartimento" (isto é, determinação se cada anticorpopoderia inibir a ligação de qualquer outra ligação), afinidade relativa eneutralização. Os dez anticorpos neutralizantes parecem ser do mesmocompartimento, com os outros anticorpos monoclonais se agrupando em trêscompartimentos separados. Além disso, oito dos bons anticorposneutralizantes são de isotipo IgGl e os outros dois são de isotipo IgG2a. Estesanticorpos monoclonais podem ser IgGl ou IgG4 de modo a minimizar aligação do complemento e atividade de ADCC.

Os hibridomas expressando os anticorpos monoclonaisneutralizantes para IL-31 humano descrito acima foram depositados nodepositário de patentes do American Type Tissue Culture Collection (ATCC;Manassas VA) como depósitos originais sob o tratado de Budapeste ereceberam os seguintes números de acesso ao ATCC: Depósito de PatenteATCC Designação PTA-6815, depositado em Junho de 29, 2005; Depósito dePatente ATCC Designação PTA-6816, depositado em 29 de Junho de 2005;Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6829, depositado em 6 de julhode 2005; Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6830, depositado em 6de julho de 2005; Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6831,depositado em 6 de julho de 2005; Depósito de Patente ATCC DesignaçãoPTA-6871, depositado em 19 de julho de 2005; Depósito de Patente ATCCDesignação PTA-6872, depositado em 19 de julho de 2005; Depósito dePatente ATCC Designação PTA-6875, depositado em 19 de julho de 2005; eDepósito de Patente ATCC Designação PTA-6873, depositado em 19 de julhode 2005.

Um hibridoma expressando os anticorpos monoclonaisneutralizantes para IL_31 de camundongo descrito aqui foi depositado nodepositário de patentes do American Type Tissue CuIture Collection (ATCC;Manassas VA) como um depósito original sob o tratado de Budapeste erecebeu o seguinte número de acesso ao ATCC : Depósito de Patente ATCCDesignação PTA-6874, depositado em 19 de julho de 2005. Os anticorposmonoclonais produzidos por estes clones de hibridoma podem ser cultivadosem um meio de crescimento de 90% de meio de Dulbecco modificado porIsocve, com 2mM L-glutamina, 100 μg/πlL penicilina, e 100 \iglmL sulfatode estreptomicina, e 10% soro de clone fetal I (Hyclone Laboratories). Osclones podem ser propagados pro culturas de partida a 2 X 105 células/mlandmantendo entre 1 X 105 e 5 X 105 célula/ml a 37 0C e 5-6% CO. Célulaspodem ser adaptadas a condições isentas de soro quando de subseqüentestransferências. Células que são congeladas são armazenadas em 90% de soro,10% DMSO e armazenadas em fase de vapor de congelador de nitrogêniolíquido.

Os antagonistas de IL-31 gerados pelos métodos aqui descritospodem ser testados para neutralização, inibição, redução, antagonização porvários métodos. Além disso, neutralização pode ser testada por medida deuma diminuição na produção de quimocinas pro-inflamatórias como TARC eMDC de culturas de queratinócitos na presença de ligando e o anticorpomonoclonal. Outros biomarcadores, como MCP-1, MIP la, TARC, MCP-1,MDC, IL-6, IL-8, 1-309, SCYA19, MPIF-1, TECK, ΜΙΡ-lb, SCYB13,GROa/MGSA, CTACK, SCCAl/Serpin B3, TSLP, e NT-4 também podemser usados. Neutralização pode ser também medida nos modelos in vivo aquidescritos.

Os antagonistas bioativos ou conjugados de anticorposdescritos aqui podem ser distribuídos de modo intravenoso, intraarterial, ouintraductal, subcutâneo, tópico ou podem ser introduzidos localmente no sítiopretendido de ação.

Os antagonistas da presente invenção podem ser medidos porsua capacidade de ligar o ligando de IL-31 como determinado por qualquerum dos modelos in vivo descritos aqui,incluindo mas não limitados ao modeloMcNga, o modelo epicutâneo Ova, o modelo de hipersensibilidade crônica, omodelo de hapteno crônico, o modelo de fluxo de cálcio, e o modelo dealodinia.

Os modelos adicionais para medir os efeitos inibidores deanticorpos anti-IL-31 são bem conhecidos na técnica e descritos aqui comoem Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518: 133-139,2005; e por Yoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202:541-549, 2005.

Os modelos de camundongo para medir a inflamaçãoneurogênica são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Sweitzer,S.M., et al., J. Neuroimunology 125: 82-93; 2002, e Honore, P., et al.,Neuroscience, (98): 585-598, 2000. Ver também, Yonehara, N. e YoshimuraM., Pain, 2001 (92/1-2): pp. 259-265).

Dentro dos aspectos da invenção, a invenção provê métodos detratamento de inflamação em tecido neuronal de um mamífero; métodos detratamento de dor em um mamífero; métodos de antagonização de transduçãode sinal induzida por IL-31 e células de gânglio da raiz dorsal; métodos para otratamento de sintomas associados com queimaduras; métodos para otratamento de sintomas associados com infecção viral e para prevenir areativação de infecção viral; e métodos de tratamento de dor associados comdoença intestinal inflamatória. Dentro de uma forma de realização, a doençaintestinal inflamatória é doença de Crohn.

Dentro das formas de realização destes aspectos, a invençãoprove, compreender misturar tecido neuronal com um antagonista de IL-31,em que a inflamação, dor, transdução de sinal do gânglio da raiz dorsal,infecção viral ou reativação, ou tecido de queimadura, ou dor associada comdoença intestinal inflamatória é reduzida, limitada, prevenida, minimizada ouneutralizada.

Em outras formas de realização, o antagonista de IL-31 ligaum polipeptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido comomostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo 27 ao resíduo 164. Em outras formasde realização, o antagonista é selecionado dentre anticorpos anti-idiotipo,fragmentos de anticorpo, anticorpos quiméricos, e anticorpos humanizados.Em outra forma de realização, o antagonista é um anticorpo. Em outrasformas de realização, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em outrasformas de realização, o anticorpo especificamente liga um polipeptídeocompreendendo a seqüência de aminoácidos de SEQ DD NO: 2 e em que opolipeptídeo é capaz de ligar o anticorpo monoclonal produzido pelohibridoma selecionado dentre o grupo consistindo de: a) Depósito de PatenteATCC Designação PTA-6815; b) Depósito de Patente ATCC DesignaçãoPTA-6816; c) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6829; d) Depósitode Patente ATCC Designação PTA-6830; e) Depósito de Patente ATCCDesignação PTA-6831; f) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6871;g) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6872; h) Depósito de PatenteATCC Designação PTA-6875; e i) Depósito de Patente ATCC DesignaçãoPTA-6873. Em outra forma de realização, o anticorpo monoclonal éselecionado dentre um compartimento de anticorpos, em que o hibridomaproduzindo o anticorpo é selecionado dentre: a) Depósito de Patente ATCCDesignação PTA-6815; b) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6829;c) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6816; d) Depósito de PatenteATCC Designação PTA-6871; e e) Depósito de Patente ATCC DesignaçãoPTA-6830. Em outra forma de realização, o anticorpo monoclonal éselecionado dentre um compartimento de anticorpos, em que o hibridomaproduzindo o anticorpo é selecionado dentre: a) Depósito de Patente ATCCDesignação PTA-6872; b) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6873;c) Depósito de Patente ATCC Designação PTA-6875; e d) Depósito dePatente ATCC Designação PTA-6831.

Em outras formas de realização, o tecido neuronal compreendetecidos do gânglio da raiz dorsal ou medula espinhal.

EXEMPLOS

Exemplo 1 hibridização in situ par a IL-3 IRA, IL-31. e pOSMRb em tecidosneuronais.

Cinco amostras de tecido de cérebro humano e uma amostra demedula espinhal, todos do mesmo indivíduo, e uma de gânglio da raiz dorsal(DRG) de um paciente diferente foram analisados neste estudo.

As sondas usadas foram sondas para IL-3 IRA, IL-31, eOSMRbeta.

Resultados são mostradas em Tabela 1:

Tabela 1

Resultados da análise de ISH:

<table>table see original document page 42</column></row><table>

Seções do cérebro: não se tem uma quantidade detectável desinal em todas as regiões do cérebro para todas as três sondas. Se tem umacoloração inconsistente de pOSMRb em um subconjunto de neurônios nohipotálamo. A inconsistência pode ser causada por nível muito baixo deexpressão de pOSMRb que está em torno do nível de detecção.

Medula espinhal: Se nota uma coloração positiva em umaregião da medula. A informação sobre a localização possível ou orientação daseção de medula espinhal não foi disponível. O sinal parece estar na porçãoanterior (ventral) da medula espinhal. O lado oposto/ região (tambémanterior) foi negativo. O sinal positivo parece confinar em um subconjunto deneurônios maiores. Tanto IL-3 IRA como pOSMRb mostraram padrões deexpressão similares nesta área. IL-31 foi negativo.

Gânglio da raiz dorsal (DRG): um subconjunto de neurôniosunipolares no DRG foi positivo para IL-31RA e OSBRbeta. As células desatélite pequenas foram negativas. IL-31 foi negativo em todas as célulasincluindo neurônios.

Assim, um antagonista de IL-31 pode ser utilizável paramelhorar os sintomas associados com estímulo neurogênico e estímuloneurogênico. Como tal, os antagonistas de LL-31 podem ser usados para tratarinflamação e dor associadas com estímulo neural de células, como estímulode células de gânglio da raiz dorsal, e podem ser medidos como uma redução,limitação, minimização, prevenção, ou neutralização de dor e inflamação.

Exemplo 2 : Envolvimento na indução da resposta à coceira

A. Métodos I (tratamento com Capsaicina de camundongostratados com IL-31)

Animais BALB/c de três semanas (CRL) foram anestesiados einjetados com um agente analgésico de longa duração, cloridrato de ,bupranorfina, subcutaneamente a 0,1 mg/kg antes da injeção de 0,25 ml de 4mg/ml solução de capsaicina em 10% etanol + 10% Tween-80 em soluçãosalina subcutaneamente na nuca do pescoço. Os animais foram mantidosanestesiados pelo menos 30 min após o tratamento com neurotoxina. 48 hdepois, bombas osmóticas de 14 dias foram implantadas subcutaneamentepara a liberação contínua de 20 ug/dia de IL-31 durante 14 dias. Oscamundongos foram monitorados diariamente durante 6 dias para alopecia eprurido usando os seguintes critérios : 0 = sem arranhões, animal parecenormal, 1 = afmamento do pelo em áreas pequenas, arranhões notados, 2 =perda de cabelo pequena (pedaços pequenos), arranhões, 3 = perda de cabelomoderada, arranhões, e 4 = perda de cabelo severa, excessivos arranhões.

Resultados demonstraram que enquanto os camundongos nãotratados com capsaicina mostraram um escore médio de arranhões / perda depêlo de 2,625 após três dias de liberação de IL-31, camundongos tratados comcapsaicina mostraram um escore significantemente menor de 1. Assim,camundongos tratados com capsaicina antes da liberação de IL-31 mostraramtanto um retardo na incidência de arranhões e perda de pêlo e um escoremenor na intensidade de arranhões e perda de pêlo nos seis dias doexperimento. Estes dados sugerem que IL-31 não induz algum componenteneuronal que contribui para a alopecia e prurido induzidos por IL-31. Assim,neutralização de IL-31 pode diminuir a incidência e intensidade de coceira, eassim dermatite, em pacientes sofrendo de distúrbios da pele que envolvemcoceira.

B. Métodos II

Camundongos que são homozigóticos nulos para o gene Taclnão expressam substância P ou neuroquinina A detectável. Estescamundongos tem respostas a dor nociceptiva significantemente reduzida aestímulos moderados a intensos e são assim uma ferramenta utilizável paraestudar a contribuição de peptídeos de taquicinina a dor para processar dor/coceira e estados doentios inflamatórios. Camundongos de nocaute Tacl dedoze semanas de idade foram implantadas com bombas osmóticas de 14 dias,liberando lug/dia de proteína IL-31 e observados diariamente para alopecia eprurido usando os seguintes critérios : 0 = sem arranhões, animal parecenormal, 1 = afínamento do pêlo em áreas pequenas, arranhões notados, 2 =perda de cabelo pequena (pedaços pequenos), arranhões, 3 = perda de cabelomoderada, arranhões, e 4 = perda de cabelo severa, excessivos arranhões.

Resultados deste estudo mostram que camundongosdeficientes em Tacl foram menos susceptíveis a arranhões/perda de pêloinduzidos por EL-31 comparados a camundongos de controle de tiposelvagem. Apesar de 100% (10/10) de camundongos de tipo selvagem teremdesenvolvido evidência de arranhões e perda de pêlo pelo dia 6 de tratamentocom IL-31, somente 33,3 % (2/6) de camundongos deficientes em Taclestavam mostrando sinais de arranhões e perda de pêlo no mesmo ponto detempo. Estes dados mostram que IL-31 induz um componente neuronal quecontribui para o fenótipo de arranhão /perda de pêlo em camundongostratados com IL-31 e neutralização de IL-31 pode diminuir a incidência eintensidade de arranhões no contexto de dermatite.

C. Métodos III ("Administração anticorpo neutralizante IL-31)

Camundongos BALB/c normais fêmeas (CRL) deaproximadamente 8 a 12 semanas de idade foram implantadassubcutaneamente com bombas osmóticas de 14 dias (Alzet, #2002) liberandolug/dia mIL-31. Grupos de camundongos receberam injeções intraperitoneais(i-P·) de anticorpo monoclonal anti-camundongo de rato IL-31 lOmg/kg(200ug/camundongo ) duas vezes semanalmente partindo de 1 semana antesda liberação de IL-31. Os grupos de controle de camundongos receberaminjeções i.p. de veículo (PBS/0,1%BSA) com os esquemas de dosagemidênticos. Os camundongos foram classificados diariamente para alopecia eprurido usando os seguintes critérios : 0 = sem arranhões, animal parecenormal, 1 = afinamento do pelo em áreas pequenas, arranhões notados, 2 =perda de cabelo pequena (pedaços pequenos), arranhões, 3 = perda de cabelomoderada, arranhões, e 4 = perda de cabelo severa, excessivos arranhões.

Em todos os experimentos, camundongos tratados com mAbanti-mIL-31 de rato tinham um retardo do início dos sintomas deaproximadamente 5 a 7 dias e um menor escore global para alopecia eprurido. Todos os grupos de camundongos tratados com mAb (sem levar emconta a freqüência ou concentração da dose) desenvolveram alopecia eprurido similares aos camundongos de controle pelo dia 13 do estudo. Estesdados sugerem que a neutralização de EL-31 pode retardar o início da respostade arranhões/perda de pêlo induzida por IL-31.

Exemplo 3

Teste de Luciferase de receptor IL-31RA/OSMRbeta

O plasmídeo KZ134 foi construído com oligonucleotídeoscomplementares que contém elementos de ligação de fator de transcriçãoSTAT de 4 genes, que inclui um elemento indutível de c-fos Sis modificado(m67SIE, ou hSIE) (Sadowski, H. et al., Science 261:1739-1744, 1993), o p21SIEl do gene p21 WAFl (Chin, Y. et al., Science 272:719-722, 1996), oelemento de resposta de glândula mamária do gene de β-caseina (Schmitt-Ney, M. et al., Mol. Cell. Biol. 11:3745-3755, 1991), e um elemento indutívelde STAT do gene Fcg RI, (Seidel, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. 92:3041-3045, 1995). Estes oligonucleotídeos contem as extremidades compatíveiscom Asp718-XhoI e foram ligados, usando métodos padrões em um vetor deluciferase de vaga-lume recipiente com um promotor c-fos (Poulsen, L.K. etal., J. Biol. Chem. 273:6229-6232, 1998) digerido com as mesmas enzimas econtendo um marcador selecionável para neomicina. O plasmídeo KZl34 foiusado para transfectar estavelmente as células BaF3 , usando métodos padrõesde transfecção e de seleção para fazer a linhagem de células BaF3/KZ134.

Uma linhagem de células indicadora de BaF3/KZ134 estável,expressando o receptor de comprimento completo h EL-3 IRA ou IL-31RA/OSMRbeta foi construída. Clones foram diluídos colocados em placase selecionado usando técnicas padrões. Clones foram triados pelo teste deluciferase (ver B, abaixo) usando o meio condicionado LL-31 humano ouproteína IL-31 purificada como um indutor. Clones com a maior resposta deluciferase (via luciferase STAT) e o menor antecedente foram selecionadosAs linhagens de células transfectantes estáveis foram selecionadas. Aslinhagens de células foram chamadas BaF3/KZ134/LL-31RA ouBaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRbeta dependendo dos receptores transfectadosna linhagem de células.

Similarmente, as linhagens de células BHK cell também foramconstruídas usando o método descrito aqui, e foram usadas em testes deluciferase como aqui descrito. As linhagens de células foram chamadasBHK/KZ134/IL-3 IRA ou BHKTKZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta dependendo dosreceptores transfectados na linhagem de células.

As células B aF3/KZ134/IL-31RA e BaF3/KZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta foram giradas e lavadas em meio sem mIL-3. As célulasforam giradas e lavadas 3 vezes para assegurar a remoção de mIL-3. Célulasforam então contadas em um hemacitômetro. Células foram colocadas emplacas em um formato de 96 cavidades a cerca de 30.000 células por cavidadeem um volume de 100 μΐ por cavidade usando o meio isento de mIL-3. Omesmo procedimento foi usado para células não transfectadas BaF3/KZ134para uso como um controle no teste subseqüente. As células BHK/KZ134/IL-3 IRA ou BHK/KZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta foram colocadas em placas emum formato de 96 cavidades a 15,000 células por cavidade em meio de 100μΐ. As células BHK/KZ134 parentais foram usadas como controle.

A ativação por STAT das células BaF3/KZ134/ IL-31RA,BaF3/KZ134/ EL-31RA /OSMRbeta, BHK/KZ134/ IL-31RA, ouBHK/KZ134/ IL-3 IRA /OSMRbeta é avaliada usando meio condicionado ouproteína purificada. Cem microlitros de meio condicionado diluído ouproteína É adicionado às células BaF3/KZ134/ IL-31RA, BaF3/KZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta, BHK/KZ134/IL-31RA, ou BHK/KZ134/IL-3 IRA/OSMRbeta. O teste usando o meio condicionado é feito em paralelo emcélulas não transfectadas BaF3/KZ134 ou BHK/KZ134 como um controle. Ovolume de teste total é 200 μΐ. As placas de teste são incubadas a 37°C, 5%CO2 durante 24 hora quando então as células BaF3 são pelotizadas porcentrifugação a 2000 rpm durante 10 min., e o meio é aspirado e 25 μΐ detampão de Iise (Promega) são adicionados. Para as linhagens de células deBHK, a etapa de centrifiigação não é necessária porque as células sãoaderentes. Após 10 minutos a temperatura ambiente, as placas são medidaspor ativação da construção de repórter STAT por leitura das mesmas em umdispositivo luminômetro (Labsystems Luminoskan, modelo RS) queadicionou 40 μΐ de substrato de teste de luciferase (Promega) em umintegração de cinco segundos.

Exemplo 4

Teste de Luciferase em linhagens de células epiteliaistransformadas humanas via infecção transiente em gene repórter adenoviralSTAT/SRE

A inibição, redução e/ou neutralização de atividade de IL-31podem ser medidas pelo teste de luciferase. Por exemplo, as linhagens decélulas transformadas humanas podem ser semeadas em placas de fundoplano de 96 cavidades a 10.000 células / cavidade em meio de crescimentoregular como especificado para cada tipo de célula. No dia seguinte, as célulassão infectadas com uma construção de repórter de adenovírus, KZl 36, emuma multiplicidade de infecção de 5000. O repórter KZ136 contém oselementos STAT além do elemento de resposta a soro. O volume total é 100ul/cavidade usando DMEM suplementado com 2 mM L-glutamina(GibcoBRL), 1 mM Piruvato de sódio (GibcoBRL) e Ix suplemento deInsulina-Transferrina-Selenio (GibcoBRL) (a seguir referido como meioisento de soro). Células são cultivadas durante a noite.

No dia seguinte, o meio é removido e substituído com 100 μΐde meio de indução. O meio de indução é IL-31 humano diluído em meioisento de soro a lOOng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12,5 ng/ml, 6,25 ng/ml, 3,125ng/ml e 1,56 ng/ml. Um controle positivo de 20% FBS é usado para validar oteste e para assegurar a infecção por adenovírus seja de sucesso. As célulassão induzidas por 5 h, quando então o meio é aspirado. As células são entãolavadas em 50 μΐ/cavidade de PBS, e subseqüentemente lisadas em 30μl/cavidade de IX tampão de Iise de célula (Promega). Após 10 min deincubação a temperatura ambiente, 25 μl/cavidade de lisado são transferidospara placas de 96 cavidades opacas brancas. As placas são lidas então em umLuminômetro usando uma integração de 5 segundos com uma injeção de 40μl/cavidade de substrato de luciferase (Promega).

Exemplo 5

Análise de IL-31 em tecidos de cólon de doença intestinalinflamatória

A) Imunohistoquímica de IL-31:

Um anticorpo policlonal (IL-31 CEE anti-humano de coelho,purificado por afinidade a 1,0 mg/ml) foi usado para detectar IL-31 humanoem tecidos gastrointestinais de pacientes com doença intestinal inflamatóriavia um sistema de detecção com base em ABC-elite. Soro de coelho normal,proteína A purificada a 1,66 mg/ml foi usado como um controle negativousando o mesmo protocolo e concentrações de anticorpo.

O protocolo foi o seguinte: ABC-HRP Elite (VectorLaboratories, PK-6100); recuperação do alvo (ph 9) para vaporização em 20min, resfriamento em 20 min a RT; bloco de proteína durante 30 min, Abprimário (1:1,000-2,500) durante 60 minutos, Ab secundário (Bi:anti-coelho)durante 45 minutos, complexo ABC-HRP durante 45 minutos; e substrato deDAB como recomendado.

Neste estudo, um total de 19 tecidos de GI individuais foramanalisados com o anticorpo policlonal IL-31 anti-humano de coelho. Nestegrupo, se tem cinco amostras de cólon de tecido normal adjacente a IBD outecidos de câncer. Nove amostras foram diagnosticadas com doença de Crohne cinco com colite ulcerativa. No todo, parece que se tem mais célulaspositivas nas amostras de Crohn do que os tecidos normais adjacentes ao IBDou tecidos de câncer ou tecidos de colite ulcerativa. As células predominantescom sinal nas amostras de Crohn estão localizadas na lâmina própria esubmucosa, com células infiltrantes mostrando sinal entre os feixes demúsculo liso. Em granulomas, células bem maiores no centro do nódulo sãopositivas, no entanto, o córtice destes nódulos, e pedaços de Peyers parecemnegativos. O epitélio de glândulas intestinais é ocasionalmente positivo. Emamostras de colite ulcerativa, se tem um número pequeno de células dispersasna submucosa e células infiltrantes entre os feixes de músculo liso sãopositivas. A porcentagem de células positivas em amostras de colite ulcerativaé menor do que de Crohn, mas similares, ou levemente superiores à dasamostras "normais". As células na lâmina própria de colite ulcerativa sãoprincipalmente negativas. Em resumo, este estudo demonstra que IL-31 éregulado de modo positivo em amostras GI de Crohn. Parede que, nesteestudo, IL-31 mostra perfis de expressão similares em amostras de coliteulcerativa e controles "normais".

B) IL-31 em hibridização in situ:

Um subconjunto de tecidos foi também analisado usandohibridização in situ (ISH). Em ISH, mRNA de IL-31 foi observado em poucascélulas infiltrantes na submucosa e tecidos adiposos. Usando IHC, osrequerentes observaram que a proteína de IL-31 coloriu positivo na populaçãode células previamente mencionada assim como em células na lâmina própriae centros do granuloma. A diferença entre estes dois testes pode ser explicadopela sensibilidade do teste.

Exemplo 6

Análise de IL-3 IRa em tecidos do cólon de doença intestinalinflamatória

A) Imunohistoquímica de IL-31 Ra:

Um anticorpo policlonal (IL-3 IRA CEE (versão 4) anti-humano de coelho, purificado por afinidade a 1,33 mg/ml) foi usado paradetectar IL-3 IRA humano em tecidos gastrointestinais de pacientes comdoença intestinal inflamatória via um sistema de detecção com base em ABC-elite. Soro de coelho normal, proteína A purificada a 1,66 mg/ml foi usadocomo um controle negativo usando o mesmo protocolo e concentrações deanticorpo. O anticorpo de IL31RA anti-humano de coelho (versão 4) foiusado a 1:2000 (665 ng/ml).

O protocolo foi o seguinte: ABC-HRP Elite (VectorLaboratories, PK-6100); recuperação do alvo (ph 9) para vaporização em 20min, resfriamento em 20 min a RT; bloco de proteína durante 30 min, Abprimário (1:2,000) durante 60 minutos, Ab secundário durante 45 minutos,complexo ABC-HRP durante 45 minutos; e DAB+ Dako Cytomation durante10 minutos.

Neste estudo, um total de 19 tecidos de GI individuais foramanalisados com o anticorpo CEE (versão 4) IL-3 IRA anti-humano de coelho.Neste grupo, se tem cerca de cinco amostras de cólon de tecido normaladjacente a IBD ou tecidos de câncer. Nove amostras foram diagnosticadascom doença de Crohn e cinco com colite ulcerativa. No todo, parece que setem mais células positivas nas amostras de Crohn do que os tecidos normaisadjacentes ao IBD ou tecidos de câncer ou tecidos de colite ulcerativa. Ascélulas positivas em Crohn estão primariamente localizadas nos tecidosconectivos de submucosa. Os nódulos de granulomas são negativos.Ocasionalmente, se tem um sinal de epitélio fraco nas amostras de Crohn.Não se tem sinal detectável nas amostras de colite ulcerativa (UC). Algumascélulas na submucosa são coloridas positivas por IHC para a proteína IL-3 IRA.

B) Hibridização in situ de IL-3 IRa

No estudo anterior, cinco tecidos foram estudados usando ISH,três dos quais foram de cólon de Crohn. Nestes tecidos de Crohn, mRNA deIL-3 IRA foi significantemente regulado de modo positivo comparado comsuas contra-partes normais, e o sinal estava localizado no córtex de nódulosde granuloma e muitas células infiltrantes nos tecidos conectivos desubmucosa e áreas de tecido adiposo. As razões possíveis para a discrepânciaentre IHC e análise in situ inclui a expressão de mRNA transiente, tempo deprocesso de proteína, estabilidade da proteína IL-31 RA e/ou diferenças desensibilidade entre os dois testes.

Exemplo 7

Estudos de colite induzida por DSS em camundongostransgênicos ΕμLck LL-31

Os camundongos de controle de ninhada não transgênica etransgênica ΕμLck LL-31 foram testados em um modelo induzido pordextrano sulfato de sódio (DSS) de inflamação mucosal para procurar asdiferenças potenciais em severidade e susceptibilidade à doença. Oscamundongos normais que receberam 2/3% DSS na água de beberdesenvolveram patologia e sintomas que imitam a doença intestinalinflamatória humana (Ver, Strober, Fuss e Blumberg, Annu. Rev. Imunol.2002). Mecanisticamente, DSS rompe a barreira epitelial mucosal do intestinogrosso, que causa inflamação subseqüente. Como resultado desta inflamação,os camundongos tratados com DSS perdem peso corporal e desenvolvemdiarréia. Os camundongos são monitorados para severidade de colite usandoum índice de atividade da doença (DAI), que é um escore cumulativo combase no peso corporal, consistência das fezes e sangue presente nas fezes.DSS pode ser usado para induzir formas agudas ou crônicas de colite. A coliteaguda é induzida via liberação de DSS (2% a 3% nos estudos dos requerentes)em água de beber do dia 0 ao dia 7, onde a colite crônica é induzida vialiberação de DSS na água de beber durante 5 dias seguido por uma fase derecuperação de 7 a 12 dias, antes de repetir o tratamento com DSS.

Quatro estudos nos camundongos transgênicos ΕμLck LL-31foram realizados. Sem levar em conta se o modelo de DSS agudo ou crônicofoi usado, os camundongos transgênicos EμLck IL-31 perderam mais pesocorporal antes quando comparados com os camundongos da ninhada decontrole. De fato, em 3 dos 4 estudos, os camundongos transgênicos IL-31demonstraram uma perda de peso significantemente mais curta comparadoscom os controles (p< 0,001, ρ = 0,011). Adicionalmente, camundongostransgênicos tinham cólons significantemente mais curtos comparados com oscontroles de tipo selvagem (p<0,05). O escore DAI foi significantementemaior em camundongos transgênicos IL-31 comparados com controles nãotransgênico em estudo de colite crônica (p< 0,001).

Para determinar se a liberação sistêmica de IL-31 podeinfluenciar o desenvolvimento de colite induzida por DSS em camundongosnão transgênicos normais, os requerentes implantaram animais com bombasosmóticas liberando uma dose diária de IL-31 ou veículo (PBS, 0,1% BSA)antes do tratamento com DSS. Em um estudo, a geração de N3, camundongosnão transgênicos (B6C3F2 χ C57BL/6) foram implantados com bombassubcutaneamente que liberavam ou 20 μg/dia de IL-31 ou veículo durante ocurso da administração de DSS. Não se notam diferenças em perda de peso,escore de DAI, ou comprimento do cólon entre os camundongos tratadoscom IL-31 versus camundongos tratados com veículo. Um estudo deliberação por bomba similar foi também realizado em camundongos C57BL/6normais; camundongos foram implantados com bombas que liberavam 10μg/dia de IL-31 ou veículo e recebiam 2% DSS no regime agudo. Novamente,não se notam diferenças entre camundongos em qualquer um dos parâmetrosde DSS-colite, sejam implantados com bombas liberando IL-31 ou veículo.

Finalmente, um estudo de 2% DSS- colite aguda foi realizado emcamundongos deficientes em IL-3 IRA (IL-3 IRA-/-). Novamente não senotam diferenças em perda de peso corporal, o escore DAI ou comprimentodo cólon entre os camundongos deficientes em IL-31 RA e os controles detipo selvagem.

Em resumo, IL-31 não parece afetar diretamente a inflamaçãomucosal induzida por DSS porque a liberação sistêmica de IL-31 acamundongos normais em estudos de colite aguda não tem efeito sobre osurto da doença. Os animais transgênicos de IL-31 são mais suscetíveis àcolite induzida por DSS como um resultado do estresse causado pelo fenótipotransgênico. No entanto, os camundongos transgênicos Εμίχΐί IL-31 temnúmeros aumentados de células CD4+ e CD8+ T ativadas nos linfonodosperiféricos (Dillon, et al, 2004) e uma aumentada susceptibilidade para coliteinduzida por DSS observada em camundongos transgênicos ΕμΙχΙ: EL-31pode ser uma conseqüência da presença destes linfócitos ativados.

Exemplo 8:

Efeitos de tratamento anti-IL31 por amostragem de fluidointersticial dérmico com microdiálise

A microdiálise pode ser usada com as moléculas da presenteinvenção para medir a análise direta de biodisponibilidade e a distribuição deanticorpos na pele. A microdiálise é o uso para coletar e analisar o fluidointercelular. O anticorpo no fluido intersticial pode ser determinado usandoanti-IgG específico da espécie reticulado a uma conta de luminex. Alémdisso, uma avaliação de IL-31 livre a ligado a IgG é feita usando um anti-IL-31 em vez de anti-IgG como anticorpo secundário. 2. As citocinas equimocinas pró-inflamatórias produzidas por ativação de IL-31 dequeratinócitos e/ou gânglio da raiz dorsal são testadas. Ver British J.Dermatology 142(6); 1114-1120, (2000); J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 73;299-302, (2002); Am J. Physiol Heart Circ. Physiol 286; 108-112, (2004);Neuroscience Letters 230; 117-120, (1997); e AAPS J. 7(3); E686-E692,(2005). Ver também Steinhoff, M., et al., J. Neuroscience, 23 (15): 6176-6180, 2003.

As sondas de microdiálise são supridas por TSE Systems(Midland, Michigan). A sonda tem a forma de T e consiste de uma membranade 3000 kDa 0,3 mm OD por 4 mm L fixada a uma vareta de 15 mm. Aentrada e saída são conectadas a uma tubulação de espia ID de 0,12 mm. Aanálise ex vivo é realizada usando comprimentos de tubos idênticos aosusados para análise in vivo. As sondas de HMWCO são cicladas com umsistema de bomba empurrar/ puxar para minimizar o fluxo para fora (nointerstício). No entanto uma de empurrar apenas é também usada (HarvardPHD 2000). A perda de fluido devido a Δρ e ΔΙΙ é determinada em váriastaxas de fluxo. A eficiência (Ed) da membrana é determinada em várias taxasde fluxo usando quantidades conhecidas de IgG em uma câmara de misturapara eliminar difusão de não membrana (externa). O Ed de IgG decamundongo e hemoglobina de camundongo é determinado e serve comocontroles in vivo. A quantificação é por IgG anti-rato de cabra copulado emcontas de Luminex e captura é relatada com IgG anti-rato de biotina de coelhoou asno para reduzir a reatividade não específica. Os testes para IgG decamundongo e hemoglobina são desenvolvidos por controles em estudos invivo. A copulação das contas será realizada usando um kit e protocolopadrões.

O tratamento de camundongos e ratos com citocinas porbomba osmótica, ED ou através de uma fibra de microdiálise é usado. Oanticorpo é injetado por IV. A sonda é esterilizada com UV. A sonda demicrodiálise é inserida e o sangue em analitos são amostrados. Aquantificação de transporte de IgG da circulação na pele é medida usandoparâmetros de membrana determinados ex vivo, permeabilidade de anticorpose as taxas de perfusão são estimadas.

As seguintes etapas foram realizadas usando um ponto emtempo por par de animais e um número suficiente de pontos no tempo paraestimar os níveis de anticorpo circulante e a difusão na derme / epiderme comtempo: i) uma membrana de microdiálise é inserida na pele e uma amostrapreliminar retirada a uma taxa determinada pela análise ex vivo. Esta amostrade controle determina a reatividade de linha de base do fluido do permeado,2) anticorpo anti-IL-31 de rato é introduzido por injeção IV na cauda e em umponto de tempo predeterminado uma amostra de sangue intraorbital é tomadapara determinar os níveis de anticorpo circulantes; 3) uma amostra demicrodiálise de volume suficiente para análise é tomada na taxa debombeamento do protocolo, 4) no final da amostragem do analito, outraamostra intraorbital é tomada para determinar os níveis circulantes de anti-EL-31.

Uma análise multiplex de analito e plasma é realizada porLuminex, e a quantificação determinada para 1) anticorpo anti-IL-31, IgGanti-camundongo como um controle de depleção/ difusão, e 3) hemoglobinaanti-camundongo para inserção da microdiálise em danos aos vasossangüíneos e trauma. Usando parâmetros de membrana determinados ex vivoe a taxa de influxo medida de anti-IL31 no analito a uma dada concentraçãode anticorpo circulante, uma estimativa da taxa de difusão na pele édeterminada. A concentração de IgG de camundongo no analito é usada paraavaliar a depleção local de proteínas próximo da sonda. Uma fórmula podeprecisar ser projetada para compensar a depleção local na análise de difusão.

A partir do acima, será notado que, apesar de formas derealização específicas da invenção terem sido descritas aqui para fins deilustração, várias modificações podem ser feitas sem sair do espírito e escopoda invenção. Conseqüentemente, a invenção não é limitada, exceto pelasreivindicações anexas.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> YAO, YUE

BILSBOROUGH, JANINEKREJSA, CECILEZUCKERMAN, LINDAROGGE, MARK

<120> MÉTODOS DE TRATAR DOR E INFLAMAÇÃO EM TECIDO NEURONAL USANDOANTAGONISTAS DE L-31

<130> 06-02

<150> 60/758.066<151> 10-01-2006

<150> 60/757.979<151> 10-01-2006

<150> 60/773.031<151> 14-02-3006

<150> 60/805.552<151> 22-06-2006

<150> 60/805.550<151> 22-06-2006-

<150> 60/805.554<151> 220-06-2006

<150> 60/823.982<151> 30-08-2006

<150> 60/823.987<151> 30-08-2006

<160> 16

<170> FastSEQ PARA Windows Versão 4.0

<210> 1

<211> 904

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<220>

<221> CDS

<222> (28)...(522)

<4 00> 1

ctgaagctgg ccttgctctc tctcgcc atg gcc tct cac tca ggc ccc tcg acg 54

Met Ala Ser His Ser Gly Pro Ser Thr1 5

tct gtg ctc ttt ctg ttc tgc tgc ctg gga ggc tgg ctg gcc tcc cac 102Ser Val Leu Phe Leu Phe Cys Cys Leu Gly Gly Trp Leu Ala Ser His10 15 20 25

acg ttg ccc gtc cgt tta cta cga cca agt gat gat gta cag aaa ata 150Thr Leu Pro Val Arg Leu Leu Arg Pro Ser Asp Asp Val Gln Lys Ile

30 35 40

gtc gag gaa tta cag tcc ctc tcg aag atg ctt ttg aaa gat gtg gag 198

Val Glu Glu Leu Gln Ser Leu Ser Lys Met Leu Leu Lys Asp Val Glu

45 50 55

gaa gag aag ggc gtg ctc gtg tcc cag aat tac acg ctg ccg tgt ctc 24 6

Glu Glu Lys Gly Val Leu Val Ser Gln Asn Tyr Thr Leu Pro Cys Leu

60 65 70

age cct gac gcc cag ccg cca aac aac ate cac age cca gcc ate cgg 294

Ser Pro Asp Ala Gln Pro Pro Asn Asn Ile His Ser Pro Ala Ile Arg

75 80 85

gea tat ctc aag aca ate aga cag cta gac aac aaa tet gtt att gat 342

Ala Tyr Leu Lys Thr Ile Arg Gln Leu Asp Asn Lys Ser Val Ile Asp

90 95 100 105

gag ate ata gag cac ctc gac aaa ctc ata ttt caa gat gea cca gaa 390

Glu Ile Ile Glu His Leu Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro Glu

110 115 120

aca aac att tet gtg cca aca gac acc cat gaa tgt aaa cgc ttc ate 438

Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe Ile

125 130 135

ctg act att tet caa cag ttt tca gag tgc atg gac ctc gea cta aaa 486

Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys

140 145 150

tca ttg acc tet gga gcc caa cag gcc acc act taa ggccatctct ' 532

Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln Gln Ala Thr Thr *

155 160

tcctttcgga ttggcaggaa cttaaggagcgaactctgcc gtgattcctt aagtacatttatgggctagt cccgggaggg ctgagatgtgttattgttat tagtcttggt atttatggaatattataccc tcgtgagggt gggaggtggcctaagagttg tcaatgctcc ctgggggagcatttttctca ta

cttaaaaaga tgaccgacag ctaagtgtgg 592ttccaatgaa taatctcagg gacccctcat 652aatttgtgaa ttaccttgaa aaacattagg 712tgcttttctt ctgcaggctt aagtcttact 772agctatgtta atttattgat atttattgta 832cctcggaatc tatttaataa attatattga 892

904

<210> 2<211> 164<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2Met Ala1

Cys Leu

Arg Pro

Ser Lys

50Ser Gln65

Asn AsnGln Leu

Ser His Ser5

Gly Gly Trp20

Ser Asp Asp35

Met Leu Leu

Asn Tyr Thr

Ile His Ser85

Asp Asn Lys100

Gly Pro Ser ThrLeu AlaVal Gln

Lys Asp

55Leu Pro70

Pro AlaSer Val

Ser His

25Lys Ile40

Val Glu

Cys Leu

Ile Arg

Ile Asp105

Ser Val10

Thr Leu

Val Glu

Glu Glu

Ser Pro

75Ala Tyr90

Glu Ile

Leu Phe Leu

Pro Val Arg30

Glu Leu Gln45

Lys Gly Val60

Asp Ala Gln

Leu Lys Thr

Ile Glu His110

Phe Cys15

Leu Leu

Ser Leu

Leu Val

Pro Pro80Ile Arg95

Leu AspLys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr

115 120 125

Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe

130 135 140

Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln145 150 155 160

Gln Ala Thr Thr

<210> 3

<211> 1235

<212> DNA

<213> Mus musculus

<220><221> CDS

<222> (482)...(973)<400> 3

tgagaacgca aggacaaggg caggccctgg agcacagatg ccttctcctt atgccttccc 60tgtgttcact agagccatcc ccctgcctcc ggaattccca cagatggatc gctctgtggc 120ttcttaaaac ttccctgcag ggcactgacc ctcagcccct ctaagtcact tcttccccag 180tgattgtact tttcaatcgg gcttcaaact ttcctctcat taaatcagca agcactttcc 240aagaaaagag agatgctcaa gatgccttcc tgtgtgccct gctttcccca ggccgagccg 300aggctggcaa ccttttgaaa atgttttctg gagaaaagct gagcaatggt tttgccatgg 360gcgggccttt gatctgcttc ctcatgacaa ccctttatat attgcctggt ggccatggcg 420aacacaccag gctccagaga ccacaggcaa agcgggcctt cctcactctc ttaccgtcgc 480c atg ate ttc cac aca gga aca acg aag cct acc ctg gtg ctg ctt tgc 529Met Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Lys Pro Thr Leu Val Leu Leu Cys15 10 15

tgt ata gga acc tgg ctg gcc acc tgc age ttg tcc ttc ggt gcc cca 577Cys Ile Gly Thr Trp Leu Ala Thr Cys Ser Leu Ser Phe Gly Ala Pro20 25 30

ata tcg aag gaa gac tta aga act aca att gac ctc ttg aaa caa gag 625Ile Ser Lys Glu Asp Leu Arg Thr Thr Ile Asp Leu Leu Lys Gln Glu35 40 45

tet cag gat ctt tat aac aac tat age ata aag cag geatet ggg atg 673Ser Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Tyr Ser Ile Lys Gln Ala Ser Gly Met50 55 60

tca gea gac gaa tca ata cag ctg ccg tgt ttc age ctg gac cgg gaa 721Ser Ala Asp Glu Ser Ile Gln Leu Pro Cys Phe Ser Leu Asp Arg Glu65 70 75 80

gea tta acc aac ate tcg gtc ate ata gea cat ctg gag aaa gtc aaa 769Ala Leu Thr Asn Ile Ser Val Ile Ile Ala His Leu Glu Lys Val Lys85 90 95

gtg ttg age gag aac aca gta gat act tet tgg gtg ata aga tgg cta 817Val Leu Ser Glu Asn Thr Val Asp Thr Ser Trp Val Ile Arg Trp Leu100 105 110

aca aac ate age tgt ttc aac cca ctg aat tta aac att tet gtg cct 865Thr Asn Ile Ser Cys Phe Asn Pro Leu Asn Leu Asn Ile Ser Val Pro115 120 125

gga aat act gat gaa tcc tat gat tgt aaa gtg ttc gtg ctt acg gtt 913Gly Asn Thr Asp Glu Ser Tyr Asp Cys Lys Val Phe Val Leu Thr Val130 135 140tta aag cag ttc tca aac tgc atg gca gaa ctg cag gct aag gac aat 961Leu Lys Gln Phe Ser Asn Cys Met Ala Glu Leu Gln Ala Lys Asp Asn145 150 155 160

act aca tgc tga gtgatggggg ggggggggtg cagtgtcctc agcagtgcct 1013

Thr Thr Cys *

gtccttcgag ggctgagctt gcaacccagg acttaactcc aaagggactg tgcggtcatt 1073actagtcatg ttatttatgt ttttattttg tccactgaaa tcttgttctg ctaccctgta 1133gggactggaa gtggcagcta tatttattta tttatgtact gagtttgtta acgctccatg 1193gaggagcctt cagagtctat ttaataaatt atattgacat ga 1235

<210> 4

<211> 163

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 4

Met Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Lys Pro Thr Leu Val Leu Leu Cys1 5 10 15 Cys Ile Gly Thr 20 Trp Leu Ala Thr Cys 25 Ser Leu Ser Phe Gly 30 Ala ProIle Ser Lys 35 Glu Asp Leu Arg Thr 40 Thr Ile Asp Leu Leu 45 Lys Gln GluSer Gln 50 Asp Leu Tyr Asn Asn 55 Tyr Ser Ile Lys Gln 60 Ala Ser Gly MetSer Ala Asp Glu Ser Ile Gln Leu Pro Cys Phe Ser Leu Asp Arg Glu65 70 75 80Ala Leu Thr Asn Ile 85 Ser Val Ile Ile Ala 90 His Leu Glu Lys Val 95 LysVal Leu Ser Glu 100 Asn Thr Val Asp Thr 105 Ser Trp Val Ile Arg 110 Trp LeuThr Asn Ile 115 Ser Cys Phe Asn Pro 120 Leu Asn Leu Asn Ile 125 Ser Val ProGly Asn Thr Asp Glu Ser Tyr Asp Cys Lys Val Phe Val Leu Thr Val 130 135 140 Leu Lys Gln Phe Ser Asn Cys Met Ala Glu Leu Gln Ala Lys Asp Asn145 150 155 160Thr Thr Cys

<210> 5<211> 2393<212> DNA<213> Homo sapiens

<220><221> CDS

<222> (66)...(2360)<400> 5

tgtgtgtgca gtatgaaaat tgagacagga aggcagagtg tcagcttgtt ccacctcagc 60tggga atg tgc ate agg caa ctc aag ttt ttc acc acg gca tgt gtc tgt 110Met Cys Ile Arg Gln Leu Lys Phe Phe Thr Thr Ala Cys Val Cys15 10 15

gaa tgt ccg caa aac att ctc tet ccc cag cct tca tgt gtt aac ctg 158Glu Cys Pro Gln Asn Ile Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu20 25 30ggg atg atg tgg acc tgg gca ctg tgg atg ctc ccc tca ctc tgc aaa 206

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ttc age ctg gca gct ctg cca gct aag cct gag aac att tcc tgt gtc 254

Phe Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val50 55 60

tac tac tat agg aaa aat tta acc tgc act tgg agt cca gga aag gaa 302

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acc agt tat acc cag tac aca gtt aag aga act tac gct ttt gga gaa 350

Thr Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu80 85 90 95

aaa cat gat aat tgt aca acc aat agt tet aca agt gaa aat cgt gct 398

Lys His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala

100 105 110

tcg tgc tet ttt ttc ctt cca aga ata acg ate cca gat aat tat acc 446

Ser Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr115 120 125

att gag gtg gaa gct gaa aat gga gat ggt gta att aaa tet cat atg 4 94

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aca tac tgg aga tta gag aac ata gcg aaa act gaa cca cct aag att 542

Thr Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile145 150 155

ttc cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc ate aaa cga atg att caa att gaa 590

Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu160 165 170 175

tgg ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tet gat tta aaa tac aca 638

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180 185 190

ctt cga ttc agg aca gtc aac agt acc age tgg atg gaa gtc aac ttc 686

Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe195 200 205

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cag cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag 782

Gln Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu225 230 235

tca aag ttc tgg agt gac tgg age caa gaa aaa atg gga atg act gag 830

Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu240 245 250 255

gaa gaa gct cca tgt ggc ctg gaa ctg tgg aga gtc ctg aaa cca gct 878

Glu Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala

260 265 270

gag gcg gat gga aga agg cca gtg cgg ttg tta tgg aag aag gca aga 926Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg275 280 285gga gcc cca gtc cta gag aaa aca ctt ggc tac aac ata tgg tac tat 974Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr290 295 300

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cag ctt gaa ctg cat ctg gga ggc gag age ttt tgg gtg tet atg att 1070Gln Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile320 325 330 335

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gtg aac act tgg atg att gaa tgg ttt ccg gat gtg gac tca gag ccc 1262Val Asn Thr Trp Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro385 390 395

acc acc ctt tcc tgg gaa tet gtg tet cag gcc acg aac tgg acg ate 1310Thr Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile400 405 410 415

cag caa gat aaa tta aaa cct ttc tgg tgc tat aac ate tet gtg tat 1358Gln Gln Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr420 425 430

cca atg ttg cat gac aaa gtt ggc gag cca tat tcc ate cag gct tat 1406Pro Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr435 440 445

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att ggc gtg aag acg gtc acg ate aca tgg aaa gag att ccc aag agt 1502Ile Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser465 470 475

gag aga aag ggt ate ate tgc aac tac acc ate ttt tac caa gct gaa 1550Glu Arg Lys Gly Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu480 485 490 495

ggt gga aaa gga ttc tcc aag aca gtc aat tcc age ate ttg cag tac 1598Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr500 505 510

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gcc age acc agt gct ggg gga acc aac ggg acc age ata aat ttc aagAla Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys

1694530 535 540

aca ttg tca ttc agt gtc ttt gag att ate ctc ata act tet ctg att 1742

Thr Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile545 550 555

ggt gga ggc ctt ctt att ctc att ate ctg aca gtg gea tat ggt ctc 1790

Gly Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu

560 565 570 575

aaa aaa ccc aac aaa ttg act cat ctg tgt tgg ccc acc gtt ccc aac 1838

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cct gct gaa agt agt ata gcc aca tgg cat gga gat gat ttc aag gat 1886

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aag cta aac ctg aag gag tet gat gac tet gtg aac aca gaa gac agg 1934

Lys Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg610 615 620

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640 645 650 655

gcc aga acg ggt cag gaa aac aat tta gga ggg gaa aag aat ggg tat 2078

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gag ctc cca gtt tca cct gag att ccg ccc aga aaa tcc caa tac cta 2174Glu Leu Pro Val Ser Pro Glu Ile Pro Pro Arg Lys Ser Gln Tyr Leu690 695 700 cgt tcg agg atg cca gag ggg acc cgc cca gaa gcc aaa gag cag ctt 2222 Arg Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Arg Pro Glu Ala Lys Glu Gln Leu 705 710 715 ctc ttt tet ggt caa agt tta gta cca gat cat ctg tgt gag gaa gga 2270 Leu Phe Ser Gly Gln Ser Leu Val Pro Asp His Leu Cys Glu Glu Gly 720 725 730 735 gcc cca aat cca tat ttg aaa aat tca gtg aca gcc agg gaa ttt ctt 2318 Ala Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Ala Arg Glu Phe Leu 740 745 750 gtg tet gaa aaa ctt cca gag cac acc aag gga gaa gtc taa 2360 Val Ser Glu Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val * 755 760 atgcgaccat agcatgagac cctcggggcc tca 2393 <210> 6 <211> 764 <212> PRT<213> Homo sapiens<400> 6

Met Cys Ile Arg Gln Leu Lys Phe Phe Thr Thr Ala Cys Val Cys Glu

1 5 10 15

Cys Pro Gln Asn Ile Leu Ser Pro Gln Pro Ser Cys Val Asn Leu Gly

20 25 30

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe

35 40 45

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50 55 60

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr Ile

115 120 125

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr

130 135 140

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile Phe145 150 155 160

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp

165 170 175

Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu

180 185 190

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala

195 200 205

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser225 230 235 240

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu

245 250 255

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu

260 265 270

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly

275 280 285

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr Pro

290 295 300

Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gln Gln305 310 315 320

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile Ser

325 330 335

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro Ala

340 345 350

Ile Gln Glu Lys Ser Phe Gln Cys Ile Glu Val Met Gln Ala Cys Val

355 360 365

Ala Glu Asp Gln Leu Val Val Lys Trp Gln Ser Ser Ala Leu Asp Val

370 375 380

Asn Thr Trp Met Ile Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr385 390 395 400

Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile Gln

405 410 415

Gln Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro

420 425 430

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala

435 440 445

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn Ile

450 455 460

Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Glu465 470 475 480<formula>formula see original document page 65</formula>ttc age ctg gea gct ctg cca gct aag cct gag aac att tcc tgt gtc 628Phe Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val30 35 40

tac tac tat agg aaa aat tta acc tgc act tgg agt cca gga aag gaa 676Tyr Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu45 50 55 60

acc agt tat acc cag tac aca gtt aag aga act tac gct ttt gga gaa 724Thr Ser Tyr Thr Gln Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu65 70 75

aaa cat gat aat tgt aca acc aat agt tet aca agt gaa aat cgt gct 772Lys His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala80 85 90

tcg tgc tet ttt ttc ctt cca aga ata acg ate cca gat aat tat acc 820Ser Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg Ile Thr Ile Pro Asp Asn Tyr Thr95 100 105

att gag gtg gaa gct gaa aat gga gat ggt gta att aaa tet cat atg 868Ile Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met110 115 120

aca tac tgg aga tta gag aac ata gcg aaa act gaa cca cct aag att 916Thr Tyr Trp Arg Leu Glu Asn Ile Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys Ile125 130 135 140

ttc cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc ate aaa cga atg att caa att gaa 964Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu145 150 155

tgg ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tet gat tta aaa tac aca 1012Trp Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr160 165 170

ctt cga ttc agg aca gtc aac agt acc age tgg atg gaa gtc aac ttc 1060Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe175 180 185

gct aag aac cgt aag gat aaa aac caa acg tac aac ctc acg ggg ctg 1108Ala Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu190 195 200

cag cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag 1156Gln Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu205 210 215 220

tca aag ttc tgg agt gac tgg age caa gaa aaa atg gga atg act gag 1204Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu225 230 235

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gag gcg gat gga aga agg cca gtg cgg ttg tta tgg aag aag gea aga 1300Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg255 260 265

gga gcc cca gtc cta gag aaa aca ctt ggc tac aac ata tgg tac tatGly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Tyr

1348270 275 280

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285 290 295 300

cag ctt gaa ctg cat ctg gga ggc gag age ttt tgg gtg tet atg att 1444

Gln Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met Ile

305 310 315

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320 325 330

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335 340 345

gtt gct gag gac cag cta gtg gtg aag tgg caa age tet gct cta gac 1588

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350 355 360

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365 370 375 380

acc acc ctt tcc tgg gaa tet gtg tet cag gcc acg aac tgg acg ate 1684

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385 390 395

cag caa gat aaa tta aaa cct ttc tgg tgc tat aac ate tet gtg tat 1732

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400 405 410

cca atg ttg cat gac aaa gtt ggc gag cca tat tcc ate cag gct tat 1780

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430 435 440

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Ile Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser

445 450 455 460

gag aga aag ggt ate ate tgc aac tac acc ate ttt tac caa gct gaa 1924

Glu Arg Lys Gly Ile Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu

465 470 475

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Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gln Tyr

480 485 490

ggc ctg gag tcc ctg aaa cga aag acc tet tac att gtt cag gtc atg 2020

Gly Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Ile Val Gln Val Met

495 500 505

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Ala Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys

510 515 520

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2116Thr Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile525 530 535 540

ggt gga ggc ctt ctt att ctc att ate ctg aca gtg gea tat ggt ctcGly Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile Ile Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu545 550 555

2164

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2212

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2260

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2308

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2356

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2404

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2452

aga att ctg tet tcc tgc cca act tca ata taa gtgtggacta aaatgcgaga 2505Arg Ile Leu Ser Ser Cys Pro Thr Ser Ile *655 660

aaggtgtcctctgaatctgtatggaccaccagtgtgaaaatttcatacaaatgtaatactgtaatactat

gtggtctatgggccccaagatacggatgcacatggttatgaaaagccataatacttctatacttctatat

caaattagaagaaccatctcatctgtaatggtaataggaaataccattttactattttcataaagtttta

aggacatgcatgaagactggcatgtgcatgcagcttttaacatgtaatgctgtaatactacccactca

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2565262526852745280528652903

<210> 8<211> 662<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 8Met Lys1

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Ala Leu

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130 135 140

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165 170 175

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195 200 205

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210 215 220

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275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

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420 425 430

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645 650 655

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<211> 975

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<220>

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<222> (1) ... (975)

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<223> forma "longa" de IL-31RA solúvel

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15 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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115 120 125

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290 295 300

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<221> CDS

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cgt gtg aaa cca gtt ttg ggc ate aaa cga atg att caa att gaa tgg 432 Arg Val Lys Pro Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Ile Gln Ile Glu Trp 130 135 140 ata aag cct gag ttg gcg cct gtt tca tct gat tta aaa tac aca ctt 480 Ile Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160 cga ttc agg aca gtc aac agt acc age tgg atg gaa gtc aac ttc gct 528 Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175 aag aac cgt aag gat aaa aac caa acg tac aac ctc acg ggg ctg cag 576 Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gln Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln 180 185 190 cct ttt aca gaa tat gtc ata gct ctg cga tgt gcg gtc aag gag tca 624 Pro Phe Thr Glu Tyr Val Ile Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205 aag ttc tgg agt gac tgg age caa gaa aaa atg gga atg act gag gaa 672 Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gln Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220 gaa ggc aag cta ctc cct gcg att ccc gtc ctg tct gct ctg gtg tag 720 Glu Gly Lys Leu Leu Pro Ala Ile Pro Val Leu Ser Ala Leu Val * 225 230 235 <210> 12 <211> 239 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 00> 12 Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15 Ser Leu Ala Ala 20 Leu Pro Ala Lys Pro 25 Glu Asn Ile Ser Cys 30 Val Tyr Tyr Tyr Arg 35 Lys Asn Leu Thr Cys 40 Thr Trp Ser Pro Gly 45 Lys Glu Thr Ser Tyr 50 Thr Gln Tyr Thr Val 55 Lys Arg Thr Tyr Ala 60 Phe Gly Glu Lys His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80 Cys Ser Phe Phe Leu 85 Pro Arg Ile Thr Ile 90 Pro Asp Asn Tyr Thr 95 IleGlu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val Ile Lys Ser His Met Thr

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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165 170 175

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195 200 205

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210 215 220

Glu Gly Lys Leu Leu Pro Ala Ile Pro Val Leu Ser Ala Leu Val225 230 235

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<211> 1989

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<220>

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<400> 13

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15 10 15

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432Ser Asp Ile Thr Tyr Trp His Leu Ile Ser Ile Ala Lys Thr Glu Pro130 135 140

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580 585 590

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625 630 635 640age att ttg gga gga gaa gcg aat gag tat ate tta tcc cag gaa cca 1968Ser Ile Leu Gly Gly Glu Ala Asn Glu Tyr Ile Leu Ser Gln Glu Pro645 650 655

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15 10 15

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195 200 205

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210 215 220

Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr Met Glu Glu Val Pro225 230 235 240

His Val Leu Asp Leu Trp Arg Ile Leu Glu Pro Ala Asp Met Asn Gly

245 250 255

Asp Arg Lys Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val

260 265 270

Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His Ile Gln Tyr Phe Ala Glu Asn Ser

275 280 285

Thr Asn Leu Thr Glu Ile Asn Asn Ile Thr Thr Gln Gln Tyr Glu Leu

290 295 300

Leu Leu Met Ser Gln Ala His Ser Val Ser Val Thr Ser Phe Asn Ser305 310 315 320

Leu Gly Lys Ser Gln Glu Thr Ile Leu Arg Ile Pro Asp Val His Glu

325 330 335

Lys Thr Phe Gln Tyr Ile Lys Ser Met Gln Ala Tyr Ile Ala Glu Pro

340 345 350

Leu Leu Val Val Asn Trp Gln Ser Ser Ile Pro Ala Val Asp Thr Trp

355 360 365

Ile Val Glu Trp Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser Lys Phe Pro Ala Leu370 375 380

Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Val Thr Asn Trp Thr Ile Glu Gln Asp385 390 395 400

Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro Val Leu

405 410 415

Gly His Arg Val Gly Glu Pro Tyr Ser Ile Gln Ala Tyr Ala Lys Glu

420 425 430

Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val Glu Asn Ile Gly Leu

435 440 445

Arg Thr Ala Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Ala Arg Asn

450 455 460

Gly Phe Ile Asn Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gln Ala Glu Gly Gly Lys465 470 475 480

Glu Leu Ser Lys Thr Val Asn Ser His Ala Leu Gln Cys Asp Leu Glu

485 490 495

Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp Val Met Ala Ser Thr

500 505 510

Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Val Arg Ile Asn Phe Lys Thr Leu Ser

515 520 525

Ile Ser Val Phe Glu Ile Val Leu Leu Thr Ser Leu Val Gly Gly Gly

530 535 540

Leu Leu Leu Leu Ser Ile Lys Thr Val Thr Phe Gly Leu Arg Lys Pro545 550 555 560

Asn Arg Leu Thr Pro Leu Cys Cys Pro Asp Val Pro Asn Pro Ala Glu

565 570 575

Ser Ser Leu Ala Thr Trp Leu Gly Asp Gly Phe Lys Lys Ser Asn Met

580 585 590

Lys Glu Thr Gly Asn Ser Gly Asn Thr Glu Asp Val Val Leu Lys Pro

595 600 605

Cys Pro Val Pro Ala Asp Leu Ile Asp Lys Leu Val Val Asn Phe Glu

610 615 620

Asn Phe Leu Glu Val Val Leu Thr Glu Glu Ala Gly Lys Gly Gln Ala625 630 635 640

Ser Ile Leu Gly Gly Glu Ala Asn Glu Tyr Ile Leu Ser Gln Glu Pro

645 650 655

Ser Cys Pro Gly His Cys660

<210> 15<211> 2940<212> DNA<213> Homo sapiens

<220>

<221> CDS

<222> (1)...(2940)

<400> 15

atg gct cta ttt gca gtc ttt cag aca aca ttc ttc tta aca ttg ctg 48

Met Ala Leu Phe Ala Val Phe Gln Thr Thr Phe Phe Leu Thr Leu Leu

1 5 10 15

tcc ttg agg act tac cag agt gaa gtc ttg gct gaa cgt tta cca ttg 96Ser Leu Arg Thr Tyr Gln Ser Glu Val Leu Ala Glu Arg Leu Pro Leu20 25 30

act cct gta tca ctt aaa gtt tcc acc aat tct acg cgt cag agt ttg 14<Thr Pro Val Ser Leu Lys Val Ser Thr Asn Ser Thr Arg Gln Ser Leu35 40 45

cac tta caa tgg act gtc cac aac ctt cct tat cat cag gaa ttg aaa 192His Leu Gln Trp Thr Val His Asn Leu Pro Tyr His Gln Glu Leu Lys50 55 60

atg gta ttt cag ate cag ate agt agg att gaa aca tcc aat gtc ate 240

Met Val Phe Gln Ile Gln Ile Ser Arg Ile Glu Thr Ser Asn Val Ile

65 70 75 80

tgg gtg ggg aat tac age acc act gtg aag tgg aac cag gtt ctg cat 288

Trp Val Gly Asn Tyr Ser Thr Thr Val Lys Trp Asn Gln Val Leu His

85 90 95

tgg age tgg gaa tet gag etc cct ttg gaa tgt gcc aca cac ttt gta 336

Trp Ser Trp Glu Ser Glu Leu Pro Leu Glu Cys Ala Thr His Phe Val

100 105 110

aga ata aag agt ttg gtg gac gat gcc aag ttc cct gag cca aat ttc 384

Arg Ile Lys Ser Leu Val Asp Asp Ala Lys Phe Pro Glu Pro Asn Phe

115 120 125

tgg age aac tgg agt tcc tgg gag gaa gtc agt gta caa gat tet act 432 Trp Ser Asn Trp Ser Ser Trp Glu Glu Val Ser Val Gln Asp Ser Thr 130 135 140 gga cag gat ata ttg ttc gtt ttc cct aaa gat aag ctg gtg gaa gaa 480 Gly Gln Asp Ile Leu Phe Val Phe Pro Lys Asp Lys Leu Val Glu Glu 145 150 155 160 ggc acc aat gtt acc att tgt tac gtt tet agg aac att caa aat aat 528 Gly Thr Asn Val Thr Ile Cys Tyr Val Ser Arg Asn Ile Gln Asn Asn 165 170 175 gta tcc tgt tat ttg gaa ggg aaa cag att cat gga gaa caa ctt gat 576 Val Ser Cys Tyr Leu Glu Gly Lys Gln Ile His Gly Glu Gln Leu Asp 180 185 190 cca cat gta act gea ttc aac ttg aat agt gtg cct ttc att agg aat 624 Pro His Val Thr Ala Phe Asn Leu Asn Ser Val Pro Phe Ile Arg Asn 195 200 205 aaa ggg aca aat ate tat tgt gag gea agt caa gga aat gtc agt gaa 672 Lys Gly Thr Asn Ile Tyr Cys Glu Ala Ser Gln Gly Asn Val Ser Glu 210 215 220 ggc atg aaa ggc ate gtt ctt ttt gtc tca aaa gta ctt gag gag ccc 720 Gly Met Lys Gly Ile Val Leu Phe Val Ser Lys Val Leu Glu Glu Pro 225 230 235 240 aag gac ttt tet tgt gaa acc gag gac ttc aag act ttg cac tgt act 768 Lys Asp Phe Ser Cys Glu Thr Glu Asp Phe Lys Thr Leu His Cys Thr 245 250 255 tgg gat cct ggg acg gac act gcc ttg ggg tgg tet aaa caa cct tcc 816 Trp Asp Pro Gly Thr Asp Thr Ala Leu Gly Trp Ser Lys Gln Pro Ser 260 265 270 caa age tac act tta ttt gaa tca ttt tet ggg gaa aag aaa ctt tgt 864 Gln Ser Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Phe Ser Gly Glu Lys Lys Leu Cys 275 280 285 aca cac aaa aac tgg tgt aat tgg caa ata act caa gac tca caa gaa 912 Thr His Lys Asn Trp Cys Asn Trp Gln Ile Thr Gln Asp Ser Gln Glu 290 295 300 acc tat aac ttc aca ctc ata gct gaa aat tac tta agg aag aga agt 960Thr Tyr Asn Phe Thr Leu Ile Ala Glu Asn Tyr Leu Arg Lys Arg Ser

305 310 315 320

gtc aat ate ctt ttt aac ctg act cat cga gtt tat tta atg aat cct 1008

Val Asn Ile Leu Phe Asn Leu Thr His Arg Val Tyr Leu Met Asn Pro

325 330 335

ttt agt gtc aac ttt gaa aat gta aat gcc aca aat gcc ate atg acc 1056

Phe Ser Val Asn Phe Glu Asn Val Asn Ala Thr Asn Ala Ile Met Thr

340 345 350

tgg aag gtg cac tcc ata agg aat aat ttc aca tat ttg tgt cag att 1104

Trp Lys Val His Ser Ile Arg Asn Asn Phe Thr Tyr Leu Cys Gln Ile

355 360 365

gaa ctc cat ggt gaa gga aaa atg atg caa tac aat gtt tcc ate aag 1152

Glu Leu His Gly Glu Gly Lys Met Met Gln Tyr Asn Val Ser Ile Lys370 375 380

gtg aac ggt gag tac ttc tta agt gaa ctg gaa cct gcc aca gag tac 1200

Val Asn Gly Glu Tyr Phe Leu Ser Glu Leu Glu Pro Ala Thr Glu Tyr

385 390 395 400

atg gcg cga gta cgg tgt gct gat gcc age cac ttc tgg aaa tgg agt 1248

Met Ala Arg Val Arg Cys Ala Asp Ala Ser His Phe Trp Lys Trp Ser

405 410 415

gaa tgg agt ggt cag aac ttc acc aca ctt gaa gct gct ccc tca gag 1296

Glu Trp Ser Gly Gln Asn Phe Thr Thr Leu Glu Ala Ala Pro Ser Glu

420 425 430

gcc cct gat gtc tgg aga att gtg age ttg gag cca gga aat cat act 1344

Ala Pro Asp Val Trp Arg Ile Val Ser Leu Glu Pro Gly Asn His Thr

435 440 445

gtg acc tta ttc tgg aag cca tta tca aaa ctg cat gcc aat gga aag 1392

Val Thr Leu Phe Trp Lys Pro Leu Ser Lys Leu His Ala Asn Gly Lys450 455 460

ate ctg ttc tat aat gta gtt gta gaa aac cta gac aaa cca tcc agt 1440

Ile Leu Phe Tyr Asn Val Val Val Glu Asn Leu Asp Lys Pro Ser Ser

465 470 475 480

tca gag ctc cat tcc att cca gea cca gcc aac age aca aaa cta ate 1488

Ser Glu Leu His Ser Ile Pro Ala Pro Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ile

485 490 495

ctt gac agg tgt tcc tac caa ate tgc gtc ata gcc aac aac agt gtg 1536

Leu Asp Arg Cys Ser Tyr Gln Ile Cys Val Ile Ala Asn Asn Ser Val

500 505 510

ggt gct tet cct gct tet gta ata gtc ate tet gea gac ccc gaa aac 1584

Gly Ala Ser Pro Ala Ser Val Ile Val Ile Ser Ala Asp Pro Glu Asn

515 520 525

aaa gag gtt gag gaa gaa aga att gea ggc aca gag ggt gga ttc tet 1632

Lys Glu Val Glu Glu Glu Arg Ile Ala Gly Thr Glu Gly Gly Phe Ser530 535 540

ctg tet tgg aaa ccc caa cct gga gat gtt ata ggc tat gtt gtg gac 1680

Leu Ser Trp Lys Pro Gln Pro Gly Asp Val Ile Gly Tyr Val Val Asp

545 550 555 560tgg tgt gac cat acc cag gat gtg ctc ggt gat ttc cag tgg aag aat 1728 Trp Cys Asp His Thr Gln Asp Val Leu Gly Asp Phe Gln Trp Lys Asn 565 570 575 gta ggt ccc aat acc aca age aca gtc att age aca gat gct ttt agg 1776 Val Gly Pro Asn Thr Thr Ser Thr Val Ile Ser Thr Asp Ala Phe Arg 580 585 590 cca gga gtt cga tat gac ttc aga att tat ggg tta tet aca aaa agg 1824 Pro Gly Val Arg Tyr Asp Phe Arg Ile Tyr Gly Leu Ser Thr Lys Arg 595 600 605 att gct tgt tta tta gag aaa aaa aca gga tac tet cag gaa ctt gct 1872 Ile Ala Cys Leu Leu Glu Lys Lys Thr Gly Tyr Ser Gln Glu Leu Ala 610 615 620 cct tca gac aac cct cac gtg ctg gtg gat aca ttg aca tcc cac tcc 1920 Pro Ser Asp Asn Pro His Val Leu Val Asp Thr Leu Thr Ser His Ser 625 630 635 640 ttc act ctg agt tgg aaa gat tac tet act gaa tet caa cct ggt ttt 1968 Phe Thr Leu Ser Trp Lys Asp Tyr Ser Thr Glu Ser Gln Pro Gly Phe 645 650 655 ata caa ggg tac cat gtc tat ctg aaa tcc aag gcg agg cag tgc cac 2016 Ile Gln Gly Tyr His Val Tyr Leu Lys Ser Lys Ala Arg Gln Cys His 660 665 670 cca cga ttt gaa aag gea gtt ctt tca gat ggt tca gaa tgt tgc aaa 2064 Pro Arg Phe Glu Lys Ala Val Leu Ser Asp Gly Ser Glu Cys Cys Lys 675 680 685 tac aaa att gac aac ccg gaa gaa aag gea ttg att gtg gac aac cta 2112 Tyr Lys Ile Asp Asn Pro Glu Glu Lys Ala Leu Ile Val Asp Asn Leu 690 695 700 aag cca gaa tcc ttc tat gag ttt ttc ate act cca ttc act agt gct 2160 Lys Pro Glu Ser Phe Tyr Glu Phe Phe Ile Thr Pro Phe Thr Ser Ala 705 710 715 720 ggt gaa ggc ccc agt gct acg ttc acg aag gtc acg act ccg gat gaa 2208 Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Phe Thr Lys Val Thr Thr Pro Asp Glu 725 730 735 cac tcc tcg atg ctg att cat ate cta ctg ccc atg gtt ttc tgc gtc 2256 His Ser Ser Met Leu Ile His Ile Leu Leu Pro Met Val Phe Cys Val 740 745 750 ttg ctc ate atg gtc atg tgc tac ttg aaa agt cag tgg ate aag gag 2304 Leu Leu Ile Met Val Met Cys Tyr Leu Lys Ser Gln Trp Ile Lys Glu 755 760 765 acc tgt tat cct gac ate cct gac cct tac aag age age ate ctg tca 2352 Thr Cys Tyr Pro Asp Ile Pro Asp Pro Tyr Lys Ser Ser Ile Leu Ser 770 775 780 tta ata aaa ttc aag gag aac cct cac cta ata ata atg aat gtc agt 2400 Leu Ile Lys Phe Lys Glu Asn Pro His Leu Ile Ile Met Asn Val Ser 785 790 795 800 gac tgt ate cca gat gct att gaa gtt gta age aag cca gaa ggg aca 2448 Asp Cys Ile Pro Asp Ala Ile Glu Val Val Ser Lys Pro Glu Gly Thr 805 810 815aag ata cag ttc cta ggc act agg aag tca ctc aca gaa acc gag ttg 2496

Lys Ile Gln Phe Leu Gly Thr Arg Lys Ser Leu Thr Glu Thr Glu Leu

820 825 830

act aag cct aac tac ctt tat ctc ctt cca aca gaa aag aat cac tct 2544

Thr Lys Pro Asn Tyr Leu Tyr Leu Leu Pro Thr Glu Lys Asn His Ser

835 840 845

ggc cct ggc ccc tgc ate tgt ttt gag aac ttg acc tat aac cag gea 2592

Gly Pro Gly Pro Cys Ile Cys Phe Glu Asn Leu Thr Tyr Asn Gln Ala

850 855 860

gct tct gac tct ggc tct tgt ggc cat gtt cca gta tcc cca aaa gcc 2640

Ala Ser Asp Ser Gly Ser Cys Gly His Val Pro Val Ser Pro Lys Ala

865 870 875 880

cca agt atg ctg gga cta atg acc tca cct gaa aat gta cta aag gea 2688

Pro Ser Met Leu Gly Leu Met Thr Ser Pro Glu Asn Val Leu Lys Ala

885 890 895

cta gaa aaa aac tac atg aac tcc ctg gga gaa ate cca gct gga gaa 2736

Leu Glu Lys Asn Tyr Met Asn Ser Leu Gly Glu Ile Pro Ala Gly Glu

900 905 910

aca agt ttg aat tat gtg tcc cag ttg gct tca ccc atg ttt gga gac 2784

Thr Ser Leu Asn Tyr Val Ser Gln Leu Ala Ser Pro Met Phe Gly Asp

915 920 925

aag gac agt ctc cca aca aac cca gta gag gea cca cac tgt tca gag 2832

Lys Asp Ser Leu Pro Thr Asn Pro Val Glu Ala Pro His Cys Ser Glu

930 935 940

tat aaa atg caa atg gea gtc tcc ctg cgt ctt gcc ttg cct ccc ccg 2880

Tyr Lys Met Gln Met Ala Val Ser Leu Arg Leu Ala Leu Pro Pro Pro

945 950 955 960

acc gag aat age age ctc tcc tca att acc ctt tta gat cca ggt gaa 2928

Thr Glu Asn Ser Ser Leu Ser Ser Ile Thr Leu Leu Asp Pro Gly Glu

965 970 975

cac tac tgc taa 2940

His Tyr Cys

<210> 16<211> 979<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 16

Met Ala Leu Phe Ala Val Phe Gln Thr Thr Phe Phe Leu Thr Leu Leu

15 10 15

Ser Leu Arg Thr Tyr Gln Ser Glu Val Leu Ala Glu Arg Leu Pro Leu

20 25 30

Thr Pro Val Ser Leu Lys Val Ser Thr Asn Ser Thr Arg Gln Ser Leu

35 40 45

His Leu Gln Trp Thr Val His Asn Leu Pro Tyr His Gln Glu Leu Lys

50 55 60

Met Val Phe Gln Ile Gln Ile Ser Arg Ile Glu Thr Ser Asn Val Ile65 70 75 80

Trp Val Gly Asn Tyr Ser Thr Thr Val Lys Trp Asn Gln Val Leu His85 90 95Trp Ser Trp Glu Ser Glu Leu Pro Leu Glu Cys Ala Thr His Phe Val

100 105 110

Arg Ile Lys Ser Leu Val Asp Asp Ala Lys Phe Pro Glu Pro Asn Phe

115 120 125

Trp Ser Asn Trp Ser Ser Trp Glu Glu Val Ser Val Gln Asp Ser Thr

130 135 140

Gly Gln Asp Ile Leu Phe Val Phe Pro Lys Asp Lys Leu Val Glu Glu145 150 155 160

Gly Thr Asn Val Thr Ile Cys Tyr Val Ser Arg Asn Ile Gln Asn Asn

165 170 175

Val Ser Cys Tyr Leu Glu Gly Lys Gln Ile His Gly Glu Gln Leu Asp

180 185 190

Pro His Val Thr Ala Phe Asn Leu Asn Ser Val Pro Phe Ile Arg Asn

195 200 205

Lys Gly Thr Asn Ile Tyr Cys Glu Ala Ser Gln Gly Asn Val Ser Glu

210 215 220

Gly Met Lys Gly Ile Val Leu Phe Val Ser Lys Val Leu Glu Glu Pro225 230 235 240

Lys Asp Phe Ser Cys Glu Thr Glu Asp Phe Lys Thr Leu His Cys Thr

245 250 255

Trp Asp Pro Gly Thr Asp Thr Ala Leu Gly Trp Ser Lys Gln Pro Ser

260 265 270

Gln Ser Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Phe Ser Gly Glu Lys Lys Leu Cys

275 280 285

Thr His Lys Asn Trp Cys Asn Trp Gln Ile Thr Gln Asp Ser Gln Glu

290 295 300

Thr Tyr Asn Phe Thr Leu Ile Ala Glu Asn Tyr Leu Arg Lys Arg Ser305 310 315 320

Val Asn Ile Leu Phe Asn Leu Thr His Arg Val Tyr Leu Met Asn Pro

325 330 335

Phe Ser Val Asn Phe Glu Asn Val Asn Ala Thr Asn Ala Ile Met Thr

340 345 350

Trp Lys Val His Ser Ile Arg Asn Asn Phe Thr Tyr Leu Cys Gln Ile

355 360 365

Glu Leu His Gly Glu Gly Lys Met Met Gln Tyr Asn Val Ser Ile Lys

370 375 380

Val Asn Gly Glu Tyr Phe Leu Ser Glu Leu Glu Pro Ala Thr Glu Tyr385 390 395 400

Met Ala Arg Val Arg Cys Ala Asp Ala Ser His Phe Trp Lys Trp Ser

405 410 415

Glu Trp Ser Gly Gln Asn Phe Thr Thr Leu Glu Ala Ala Pro Ser Glu

420 425 430

Ala Pro Asp Val Trp Arg Ile Val Ser Leu Glu Pro Gly Asn His Thr

435 440 445

Val Thr Leu Phe Trp Lys Pro Leu Ser Lys Leu His Ala Asn Gly Lys

450 455 460

Ile Leu Phe Tyr Asn Val Val Val Glu Asn Leu Asp Lys Pro Ser Ser465 470 475 480

Ser Glu Leu His Ser Ile Pro Ala Pro Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ile

485 490 495

Leu Asp Arg Cys Ser Tyr Gln Ile Cys Val Ile Ala Asn Asn Ser Val

500 505 510

Gly Ala Ser Pro Ala Ser Val Ile Val Ile Ser Ala Asp Pro Glu Asn

515 520 525

Lys Glu Val Glu Glu Glu Arg Ile Ala Gly Thr Glu Gly Gly Phe Ser

530 535 540

Leu Ser Trp Lys Pro Gln Pro Gly Asp Val Ile Gly Tyr Val Val Asp545 550 555 560

Trp Cys Asp His Thr Gln Asp Val Leu Gly Asp Phe Gln Trp Lys Asn

565 570 575

Val Gly Pro Asn Thr Thr Ser Thr Val Ile Ser Thr Asp Ala Phe Arg

580 585 590

Pro Gly Val Arg Tyr Asp Phe Arg Ile Tyr Gly Leu Ser Thr Lys Arg595 600 605

Ile Ala Cys Leu Leu Glu Lys Lys Thr Gly Tyr Ser Gln Glu Leu Ala

610 615 620

Pro Ser Asp Asn Pro His Val Leu Val Asp Thr Leu Thr Ser His Ser625 630 635 640

Phe Thr Leu Ser Trp Lys Asp Tyr Ser Thr Glu Ser Gln Pro Gly Phe

645 650 655

Ile Gln Gly Tyr His Val Tyr Leu Lys Ser Lys Ala Arg Gln Cys His

660 665 670

Pro Arg Phe Glu Lys Ala Val Leu Ser Asp Gly Ser Glu Cys Cys Lys

675 680 685

Tyr Lys Ile Asp Asn Pro Glu Glu Lys Ala Leu Ile Val Asp Asn Leu

690 695 700 Lys Pro Glu Ser Phe Tyr Glu Phe Phe Ile Thr Pro Phe Thr Ser Ala 705 710 715 720 Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Phe Thr Lys Val Thr Thr Pro Asp Glu 725 730 735 His Ser Ser Met Leu Ile His Ile Leu Leu Pro Met Val Phe Cys Val 740 745 750 Leu Leu Ile Met Val Met Cys Tyr Leu Lys Ser Gln Trp Ile Lys Glu 755 760 765 Thr Cys Tyr Pro Asp Ile Pro Asp Pro Tyr Lys Ser Ser Ile Leu Ser 770 775 780 Leu Ile Lys Phe Lys Glu Asn Pro His Leu Ile Ile Met Asn Val Ser 785 790 795 800 Asp Cys Ile Pro Asp Ala Ile Glu Val Val Ser Lys Pro Glu Gly Thr 805 810 815 Lys Ile Gln Phe Leu Gly Thr Arg Lys Ser Leu Thr Glu Thr Glu Leu 820 825 830 Thr Lys Pro Asn Tyr Leu Tyr Leu Leu Pro Thr Glu Lys Asn His Ser 835 840 845 Gly Pro Gly Pro Cys Ile Cys Phe Glu Asn Leu Thr Tyr Asn Gln Ala 850 855 860 Ala Ser Asp Ser Gly Ser Cys Gly His Val Pro Val Ser Pro Lys Ala 865 870 875 880 Pro Ser Met Leu Gly Leu Met Thr Ser Pro Glu Asn Val Leu Lys Ala 885 890 895 Leu Glu Lys Asn Tyr Met Asn Ser Leu Gly Glu Ile Pro Ala Gly Glu 900 905 910 Thr Ser Leu Asn Tyr Val Ser Gln Leu Ala Ser Pro Met Phe Gly Asp 915 920 925 Lys Asp Ser Leu Pro Thr Asn Pro Val Glu Ala Pro His Cys Ser Glu 930 935 940 Tyr Lys Met Gln Met Ala Val Ser Leu Arg Leu Ala Leu Pro Pro Pro 945 950 955 960 Thr Glu Asn Ser Ser Leu Ser Ser Ile Thr Leu Leu Asp Pro Gly Glu 965 970 975 His Tyr Cys

Claims (27)

1. Método de tratamento de inflamação em tecido neuronal deum mamífero, caracterizado pelo fato de compreender misturar tecidoneuronal com um antagonista de IL-31, em que a inflamação é reduzida,limitada, prevenida, minimizada ou neutralizada.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendo umaseqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo 27 aoresíduo 164.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o antagonista é um anticorpo.

4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelofato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

5. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o tecido neuronal compreende tecidos do gânglio da raiz dorsal oumedula espinhal.

6. Método de tratamento de dor em um mamífero,caracterizado pelo fato de compreender misturar tecido neuronal do mamíferocom um antagonista de IL-31, em que a inflamação é reduzida, limitada,prevenida, minimizada ou neutralizada.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendo umaseqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo 27 aoresíduo 164.

8. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que o agonista é um anticorpo.

9. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

10. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizadopelo fato de que o tecido neuronal compreende tecidos do gânglio da raizdorsal ou medula espinhal.

11. Método de antagonizar transdução de sinal induzida porIL-31 em células de gânglio da raiz dorsal, caracterizado pelo fato decompreender misturar um antagonista de IL-31 com as células de gânglio daraiz dorsal, pelo que a transdução de sinal é inibida.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendouma seqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo 27 ao resíduo 164.

13. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que o antagonista é um anticorpo.

14. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

15. Método de tratamento de sintomas associados comqueimadura, caracterizado pelo fato de compreender misturar tecido dequeimadura com um antagonista de IL-31.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizadopelo fato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendouma seqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo 27 ao resíduo 164.

17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizadopelo fato de que o antagonista é um anticorpo.

18. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizadopelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

19. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizadopelo fato de que os sintomas são dor ou coceira.

20. Método de tratamento de sintomas associados cominfecção viral em um mamífero, caracterizado pelo fato de compreenderadministrar um antagonista de IL-31 ao mamífero.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizadopelo fato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendouma seqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo-27 ao resíduo 164.

22. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizadopelo fato de que o antagonista é um anticorpo.

23. Método de acordo com a reivindicação 22, caracterizadopelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

24. Método de tratamento de dor associada com doençaintestinal inflamatória, caracterizado pelo fato de compreender misturar tecidoneuronal com um antagonista de IL-31, em que a dor da inflamação éreduzida, limitada, prevenida, minimizada ou neutralizada.

25. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o antagonista de IL-31 liga um polipeptídeo compreendendouma seqüência de aminoácido como mostrada em SEQ ID NO: 2 do resíduo-27 ao resíduo 164.

26. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o antagonista é um anticorpo.

27. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.