MX2007016401A - Proteinas de union il-12/p40. - Google Patents

Proteinas de union il-12/p40.

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MX2007016401A
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MX
Mexico
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seq
binding protein
antibody
group
residues
Prior art date
Application number
MX2007016401A
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Paul R Hinton
Michael Roguska
Richard W Dixon
Susan E Lacy
Emma Fung
Jonathan P Belk
Shankar Kumar
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Abbott Lab
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Publication date
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Abstract

La presente invencion se refiere a proteinas de union IL-12p40, particularmente anticuerpos que unen interleucina-12 humana (hlL-12) y/o IL-23 humana (hlL-23). Especificamente, la invencion se refiere a anticuerpos que son quimericos, anticuerpos CDR-injertados y humanizados. Los anticuerpos preferidos tienen alta afinidad para hlL-12 y/o hlL-23 y neutralizar la actividad de hlL-12 y/o hlL-23 in vitro e in vivo. Un anticuerpo de la invencion puede ser un anticuerpo de longitud completa o una porcion de union de antigeno del mismo. Tambien se proporcionan metodos para hacer y utilizar los anticuerpos de la invencion. Los anticuerpos, o porciones de anticuerpos de la invencion, son utiles para detectar hlL-12 y/o hlL-23 y para inhibir la actividad de hlL-12 y/o hlL-23, por ejemplo, en un sujeto ser humano que sufre de un trastorno en donde la actividad de hlL-12 y/o hlL-23 es danina.

Description

PROTEÍNAS DE UNION 1L-12/P40 Refere une i a Cruzada a Solicitudes Relacionadlas Esta solicitud reclama el beneficio de la prioridad de la Solicitud Provisional de E.U.A. No. 60/695,679 presentada el 30 de junio de 2005. Esta solicitud se refiere a la Solicitud de Patente de E.U.A. No. 09/534717 presentada el 24 de marzo del 2000 (expedida como Número de Patente de E.U.A. 6,914,128) intitulada "Anticuerpos humanos que unen IL-12 y métodos para producción." Los contenidos de esta solicitud de patente, y patentes expedidas en la misma, se incorporan aquí por referencia.
Referencia a ün acuerdo de .nvestogación con ¡y mito Los contenidos de esta solicitud están bajo un acuerdo de investigación conjunta introducido y entre Protein Design Labs, Inc. and Abbott Laboratories el 14 de diciembre de 2005, y se dirigen a anticuerpos recombinantemente diseñados por ingeniería.
Campo de lia Invención La presente invención se refiere a proteínas de unión IL-12p40, y específicamente sus usos en la prevención y/o tratamiento de enfermedades inflamatorias agudas y crónicas.
Antecedentes de la Invención La interleucina-12 (IL-12) humana es una citocina con una estructura única y efectos pleiotrópicos (Kobayashi, et al. (1989) J Exp Med 170:827-845; Seder, et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. 90:10188-10192, Ling, et al. (1995) J Exp Med 154:116-127; Podlaski, et al. (1992) Arch. Biochem. Biophys. 294:230-237). I L-12 juega un papel crítico en la patología asociada con varias enfermedades que involucran respuestas inmunes e inflamatorias. Una revisión de IL-12, sus actividades biológicas, y su papel en enfermedades se puede encontrar en Trinchieri, G. (2003) Nat. Rev. Immun. 3:133-146. Estructuralmente, IL-12 es una proteína heterodimérica (denominada como la "proteína p70") que comprende una subunidad de 35 kDa (p35) y una subunidad de 40 kDa (p40) que están enlazadas conjuntamente por un enlace de disulfuro. La proteína heterodimérica es producida principalmente por células de presentación de antígeno tales como monocitos, macrófagos y células dendríticas. Estos tipos de células también secretan un exceso de la subunidad p40 con relación a la subunidad p70. Las subunidades p40 y p35 están genéticamente no relacionada y ni se ha reportado que posean actividad biológica, aunque el homodímero p40 puede funcionar como un antagonista de IL-12. Funcionalmente, IL-12 juega un papel central en la regulación del equilibrio entre linfocitos de tipo 1 auxiliares T de antígeno específico (Th1) y de tipo 2 (Th2). Las células Th1 y Th2 gobiernan el inicio y progresión de trastornos autoinmunes, e IL-12 es crítica en la regulación de la diferenciación y maduración del linfocito Th1 Las citocinas liberadas por las células Th1 son inflamatorias e incluyen interferon-gamma (IFN-?), IL-2, y linfotoxina (LT) Las células Th2 secretan I L-4, IL-5, IL-6, IL-10 y IL-13 para facilitar la inmunidad humoral, reacciones alérgicas e inmunosupresión De acuerdo con la preponderancia de las respuesta de Th1 en enfermedades autoinmunes y las actividades pro-inflamatorias de IFN-?, IL-12 juega un papel importante en la patología asociada con muchas enfermedades autoinmunes e inflamatorias tales como artritis reumatoide (RA), esclerosis múltiple (MS), psoriasis (PS) y enfermedad de Crohn (CD) Los pacientes humanos con MS han demostrado un incremento en la expresión de IL-12 según documentado por niveles de ARNm p40 en placas de MS aguada (Wmdhagen et al , (1995) J Exp Med 182 1985-1996) Además, la estimulación ex vivo de células de presentación de antígeno con células T que expresan CD40L de pacientes con MS dio como resultado una producción incrementada de IL-12 comparado con células T de control, de acuerdo con la observación de que las interacciones de CD40/CD40L son potentes inductores de IL-12 Los niveles elevados de IL-12 p70 han sido detectados en la sinovia de pacientes con RA comparado con controles saludables (Monta et al (1998) Arth and Rheumat 41 306-314) El perfil de expresión de acido ribonucleico mensajero (ARNm) de citocina en la sinovia de RA identificó predominantemente atocinas Th1 (Bucht et al (1996) Clin Exp Immunol 103 347-367) IL-12 también parece jugar un papel importante en la patología asociada con la enfermedad de Crohn La expresión incrementada de EMF-y e IL-12 ha sido observada en la mucosa intestinal de pacientes con esta enfermedad (Fais et al (1994) J Interferon Res 14235-238, Parronchi et al (1997) Am J Path 150823-832, Monteleone et al (1997) Gastroent 112 1169- 1178, y Berrebí et al (1998) Am J Path 152 667-672) El perfil de secreción de citocina de células T de la lámina propia de pacientes con CD es característica de una respuesta predominantemente Th1, incluyendo niveles de IFN-? enormemente elevados (Fuss, et al (1996) J Immunol 157 1261-1270) Además, las secciones de tejido de colon de pacientes con CD muestra una abundancia de macrófagos que expresan IL-12 y células T que expresan IFN-? (Parronchi et al (1997) Am J Path 150 823-832) IL-23 también es una atocina heterodimérica y pertenece a una familia de cinco de tales atocinas heterodimépcas incluyendo IL-12 y IL-27 (Tpnchiep et al , (2003) Immumty 19 641-644) IL-23 comparte la subunidad p40 idéntica como IL-12, pero está asociada con una subunidad p19 a través de un enlace de disulfuro La subunidad p19 está estructuralmente relacionada con IL-6, factor de estimulación de colonia de granuloato (G-CSF), y la subunidad p35 de IL-12 IL-23 se produce a través de tipos de células similares como IL-12, y su receptor es expresado en células T, células NK, y células hematopoyéticas, fagocíticas y dendríticas IL-23 media la señalización uniéndose a un receptor heterodimérico, compuesto de IL-23R e IL-12beta1. La subunidad I L-12beta 1 es compartida por el receptor 1L-12, el cual está compuesto de IL-12beta1 e IL-12beta2. IL-23 comparte funciones de traslape con IL-12 (induciendo la producción de IFN-?, diferenciación de célula Th1 y activación de las funciones de presentación de antígeno de células dendríficas) sin embargo selectivamente induce la proliferación de células T de memoria (Oppmann et al. (2000) Immunity 13:715-725, Parham, et al. (2002) J. Immunol. 168:5699-5708). El papel de I L-23 en inflamación autoinmune ha sido separado en parte a través de estudios con ratones de ataque p19 (Murphy et al. J Exp Med 198:1951-1957; Cua et al. (2003) Nature 421:744-748). Los estudios han demostrado que t L-23 modula la respuesta inmune a infe cccciióónn ((vveerr,, ppoorr eejjeemmpplloo,, PPiirrhhoonneenn,, eett aall.. ((22000022)) JJ.. IImmmmuinol. 169:5673-5678; Broberg, et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22:641 1--665511;; EEIIkkiinnss,, eett aall.. ((22000022)) IInnffeeccttiioonn IImmmmuunniittyy 7700::11993366--11994488;; Coope ?G, et al. (2002) J. Immunol. 168:1322-1327). IL-23 se cree que juega uunn ppaappeell iimmppoorrtta. nte en enfermedades inflamatorias mediadas inmunologicas (Langrish et.al. (2004) Immunological Reviews 202: 96-105). Debido al papel de IL-12 humana en una variedad de trastornos humanos, se han diseñado estrategias terapéuticas para inhibir o contrarrestar la actividad de IL-12. En particular, anticuerpos que se unen a, y se neutralizan, IL-12 se ha buscado como un medio para inhibir la actividad de IL-12. Algunos de los anticuerpos anteriores eran anticuerpos monoclonales de murino (mAbs), secretos por hibridomas preparados a partir de linfocitos de ratones inmunizados con IL-12 (ver por ejemplo, Strober et al., Publicación de PCT No. WO 97/15327; Gately et al., WO9937682 A2; Neurath et al., J Exp. Med 182:1281-1290 (1995); Duchmarm et al., J Immunol. 26:934-938(1996)). Estos anticuerpos de IL-12 de murino están limitados por su uso in vivo debido a problemas asociados con la administración de anticuerpos de ratón a seres humanos, tal como vida media en suero corta, una incapacidad para activar ciertas funciones efectoras humanas y la producción de una respuesta inmune no deseada contra el anticuerpo de ratón en un ser humano (la reacción de "antianticuerpo de anti-ratón humano" (HAMA)). Un aspecto para superar los problemas asociados con el uso de anticuerpos totalmente de murino en seres humanos es generar anticuerpos totalmente humanos tales como aquellos descritos por Salfeld et al., en la Solicitud de PCT No. WO 00/56772 A1. Otros aspectos para superar los problemas asociados con el uso de anticuerpos totalmente de murino en seres humanos han involucrado diseñar genéticamente por ingeniería los anticuerpos para que sean "de tipo humano". Por ejemplo, se han preparado anticuerpos quiméricos, en donde las regiones variables de las cadenas de anticuerpo son derivadas de murino y las regiones constantes de las cadenas de anticuerpo son derivadas de humanos, (Junghans, et al. (1990) Cáncer Res. 50:1495-1502; Brown et al. (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. 88:2663-2667; Kettleborough et al. (1991) Prot. Engineer. 4:773-783). Dichos anticuerpos quiméricos para IL-12 también se describen por Peritt et al. Solicitud de PCT No. WO2002097048A2. Sin embargo, ya que estos anticuerpos quiméricos siguen reteniendo secuencias de cadena variable de murino, pueden seguir produciendo una reacción ¡nmune no deseada, la reacción de anticuerpo anti-quimérico humano (HACA) especialmente cuando se administran durante períodos prolongados. Existe la necesidad en la técnica de anticuerpos mejorados capaces de unir la subunidad p40 de IL-12 (I L-12p4O) . De preferencia los anticuerpos unen IL-12 e/o IL-23. De preferencia, los anticuerpos son capaces de neutralizar IL-12 e/o 1L-23. La presente invención proporciona una familia novedosa de proteínas de unión, anticuerpos injertados CDR, anticuerpos humanizados, y sus fragmentos, capaces de unir I L-12p40, uniendo con alta afinidad, y uniendo y neutralizando IL-12 e/o IL-23.
Breve Descripción de la Invención Esta invención se refiere a proteínas de unión IL-12p40, particularmente anticuerpos capaces de unirse la subunidad p40 de IL-12 humana y la subunidad p40 de IL-23 humana. Además, la invención proporciona métodos para hacer y utilizar las proteínas de unión IL-12p40. Un aspecto de esta invención se refiere a una proteína de unión que comprende un dominio de unión de antígeno capaz de unir una subunidad p40 de IL-12. En una modalidad, el dominio de unión de antígeno comprende por lo menos una CDR comprendiendo una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: CDR-H1.
(SEC ID NO: 55), en donde; , es D, K, T, o S; X2 es Y, S, o T; X3 es Y, V, G, W, S, o F; X4 es I, o M; X5 es H, G, E, o V; X6 es V, o no está presente; y X7 es S, o no está presente; CDR-H2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-Xg-X1o-Xl1-Xl2-Xl3-X.4-X.5-Xl6- X17-X18-X19-X20 (SEC ID NO: 56), en donde; X2 es I, o F; X3 es Y, W, L, S, N, D o G; X4 es W, P, H, T, o S; X5 es D, G, E, A, o I; X6 es D, G, S, T, o N; X7 es D, G, S, o P; X8 es K, N, S, E, T, o H; X9 es Y, T, P, I, o N; X10 es Y, N, T, H, K, S, o G; Xn es N, o Y; X12 es P, N, A, D, o S; X13 es S, E, D, o P; X14 es L, K, D, T, o Y; X15 es K, F, V, M, R, o A; X16 es S, K, Q, P, o no está presente; X17 es D, G, R, o no está presente; X 8 es F, o no está presente; X19 es Q, o no está presente; y X20 es D, o no está presente; CDR-H3. X1-X2-X3-X4-X5-Xe-X7-X8-X9-X?o-X??-X?2-Xi3 (SEC ID NO: 57), en donde; X, es R, N, o W; X2 es G, T, R, P, o H; X3 es I, R, F, Y, o Q; X4 es R, V, Y, F, o A; X5 es S, N, G, A, o R; X6 es A, Y, L, F, o M; X7 es M, A, D, L, o F; X8 es D, M, Y, o W; X9 es Y, D, o N; X10 es Y, A, o no está presente; Xn es M, o no está presente; X12 es D, o no está presente; y X13 es Y, o no está presente; CDR-L1. X 1 -X2-X3-X -X5-X6-X - 8-X9_X? o"X 11 "X 12"X? 3-X1 - 15 (SEC ID NO: 58), en donde; X, es K, o R; X2 es A; X3 es S; X4 es Q, o E; X5 es S, o N; X6 es V, o I; X7 es S, G, o D; X8 es N, T, o K; X9 es D, N, o Y; X10 es V, G, o L; Xn es A, I, o H; X12 es S, o no está presente; X13 es F, o no está presente; X1 es M, o no está presente; y X15 es N, o no está presente; CDR-L2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (SEC ID NO: 59), en donde; X2 es A, o T; X3 es S, o A; X4 es N, H, S, o Q; X5 es R, N, o S; X6 es Y, Q, o I; X7 es T, S, o G; and X8 es S, o no está presente; CDR-L3. X1-X2-X3-X -X5-X6-X7-X8-X9 (SEC ID NO: 60), en donde; Xi es Q; X2 es Q; X3 es D, Y, o S; X4 es Y, N, K, o I; X5 es N, T, S, o E; X6 es S, Y, V, o W; X7 es P; X8 es W, F, Y, L, o P; y X9 es T, o S. De preferencia, el dominio de unión de antígeno comprende por lo menos una CDR que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de los residuos 31-37 de SEC ID NO.:35; residuos 52-67 de SEC ID NO.:35; residuos 100-108 de SEC ID NO.:35; residuos 24-34 de SEC ID NO..36; residuos 50-56 de SEC ID NO.:36; residuos 89-97 de SEC ID NO.:36; residuos 31-37 de SEC ID NO.:37; residuos 52-67 de SEC ID NO.:37 residuos 100-109 de SEC ID NO.:37; residuos 24-34 de SEC ID NO.:38; residuos 50-56 de SEC ID NO.:38; residuos 89-97 de SEC ID NO.:38; residuos 31-35 de SEC ID NO.:39; residuos 50-66 de SEC ID N0.:39; residuos 99-106 de SEC ID NO..39; residuos 24-34 de SEC ID NO.:40; residuos 50-56 de SEC ID NO.:40; residuos 89- 97 de SEC ID NO.:40; residuos 31- 35 de SEC ID NO.:41; residuos 50-66 de SEC ID NO.:41; residuos 99-106 de SEC ID NO.:41; residuos 24-34 de SEC ID NO.:42; residuos 50-56 de SEC ID NO.:42; residuos 89-97 de SEC ID NO.:42; residuos 31-35 de SEC ID NO.:41; residuos 50-66 de SEC ID NO.:43; residuos 99-106 de SEC ID NO.:43; residuos 24-34 de SEC ID NO.:44, residuos 50-56 de SEC ID NO.:44, residuos 89-97 de SEC ID NO.:44; residuos 31-35 de SEC ID NO :45, residuos 50-66 de SEC ID NO.:45; residuos 99-101 de SEC ID NO.:45; residuos 24-34 de SEC ID NO.:46; residuos 50-56 de SEC ID NO. '46; residuos 89-97 de SEC ID NO.:46; residuos 31-35 de SEC ID NO.:47; residuos 50-66 de SEC ID NO.:47; residuos 99-106 de SEC ID NO.:47; residuos 24-34 de SEC ID NO.:48; residuos 50-56 de SEC ID NO.:48; residuos 89- 97 de SEC ID NO. 48; residuos 31-35 de SEC ID NO.:49; residuos 50-66 de SEC ID NO.:49; residuos 99-111 de SEC ID NO.:49; residuos 24-38 de SEC ID NO.:50; residuos 53-60 de SEC ID NO.:50; residuos 93-101 de SEC ID NO :50; residuos 31-37 de SEC ID NO.:51; residuos 52-67 de SEC ID NO. 51; residuos 100-109 de SEC ID NO.:51; residuos 24-34 de SEC ID NO.:52; residuos 50-56 de SEC ID NO.:52; residuos 89-97 de SEC ID NO.:52; residuos 31-35 de SEC ID NO.:53; residuos 47-66 de SEC ID NO..53; residuos 99-107 de SEC ID NO.:53; residuos 24-34 de SEC ID NO.:54; residuos 50-56 de SEC ID NO.:54; y residuos 89-97 de SEC ID NO.:54. En una modalidad preferida, la proteína de unión comprende por lo menos 3 CDRs seleccionadas del grupo que consiste de las secuencias descritas anteriormente. Muy preferiblemente, las 3 CDRs seleccionadas son de los grupos de CDR de domino variable seleccionados del grupo que consiste de.
En una modalidad, la proteína de unión de la invención comprende por lo menos dos grupos CDR de dominio variable. Muy preferiblemente, los dos grupos CDR de dominio variable se seleccionan de un grupo que consiste de: Grupo VH 1 D4 CDR & VL Grupo 1D4 CDR; Grupo VH 1A6 CDR & Grupo VL 1A6 CDR; Grupo VH 1D8 CDR & Grupo VL 1D8 CDR; Grupo VH 3G7 CDR & Grupo VL 3G7 CDR; Grupo VH 5E8 CDR & Grupo VL 5E8 CDR; Grupo VH 8E1 CDR & Grupo VL 8E1 CDR; Grupo VH 1H6 CDR & Grupo VL 1H6 CDR; Grupo VH 3A11 CDR & Grupo VL 3A11 CDR; Grupo VH 4B4 CDR & Grupo VL 4B4 CDR; y Grupo VH 7G3 CDR & Grupo VL 7G3 CDR.
En otra modalidad, la proteína de unión además comprende una estructura de aceptor humana. De preferencia la estructura de aceptor humana comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO.:6; SEC ID NO.:7; SEC ID NO.:8; SEC ID NO.:9; SEC ID NO.:10; SEC ID NO.:11; SEC ID NO.:12; SEC ID NO.:13; SEC ID NO.:14; SEC ID NO.:15; SEC ID NO.:16; SEC ID NO..17; SEC ID NO.:18 SEC ID NO.:19 SEC ID NO.:20; SEC ID NO.:21; SEC ID NO.:22 SEC ID NO.:23 SEC ID NO.:24; SEC ID NO.:25; SEC ID NO.:26 SEC ID NO.:27 SEC ID NO.:28; SEC ID NO.:29; SEC ID NO.:30 SEC ID NO.:31 SEC ID NO.:32; SEC ID NO.:33; SEC ID NO.:34, SEC ID NO.:92, SEC ID NO.:93, SEC ID NO.:94, SEC ID NO.:95, SEC ID NO.:96, Y SEC ID NO.:97. En una modalidad preferida la proteína de unión es un anticuerpo injertado CDR o su porción de unión de antígeno capaz de unir la subunidad p40 de IL-12 o IL-23. De preferencia el anticuerpo injertado CDR o su porción de unión de antígeno comprenden una o más CDRs descritas anteriormente. Muy preferiblemente, el anticuerpo injertado CDR o su porción de unión de antígeno comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO.:61; SEC ID NO.:62; SEC ID NO.:63 SEC ID NO.:64 SEC ID NO.:65; SEC ID NO.:66; SEC ID NO.:67 SEC ID NO.:68 SEC ID NO.:69; SEC ID NO.:70; SEC ID NO.:71 SEC ID NO.:72 SEC ID NO.:73; SEC ID NO.:74; SEC ID NO.:75 SEC ID NO.:76 SEC ID NO.:77; y SEC TD NO.:78. De preferencia anticuerpo injertado CDR o su porción de unión de antígeno comprende dos dominios variables seleccionados del grupo descrito anteriormente. De preferencia, el anticuerpo injertado CDR o su porción de unión de antígeno del mismo comprende una estructura de aceptor humana. Muy preferiblemente, la estructura de aceptor humana es una de las estructuras de aceptor humanas descritas anteriormente. En una modalidad preferida, la proteína de unión es un anticuerpo humanizado o su porción de unión de antígeno capaz de unir la subunidad p40 de IL-12 o IL-23. De preferencia el anticuerpo humanizado o su porción de unión de antígeno comprende una o más CDRs descritas anteriormente incorporadas en un dominio variable de anticuerpo humano de una estructura de aceptor humana. De preferencia, dominio variable de anticuerpo humano es un dominio variable humano de consenso. Muy preferiblemente, la estructura de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de Región de Estructura en un residuo clave, en donde el residuo clave se seleccionada del grupo que consiste de un residuo adyacente a una CDR; un residuo de sitio de glicosilación; un residuo raro; un residuo capaz de interactuar con una subunidad p40 de IL-12 humana; un residuo capaz de interactuar con una CDR; un residuo canónico; un residuo de contacto entre una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera; un residuo dentro de una zona de Vernier; y un residuo en una región que traslapa entre una CDR1 de cadena pesada variable definida de Chothia y una primera estructura de cadena pesada definida por Kabat. De preferencia, el residuo claves se selecciona del grupo que consiste de 3H, 5H, 10H, 11H, 12H, 13H, 15H, 16H, 18H, 19H, 23H, 24H, 25H, 30H, 41H, 44H, 46H, 49H, 66H, 68H, 71H, 73H, 74H, 75H, 76H, 77H, 78H, 79H, 81H, 82H, 82AH, 82BH, 82CH, 83H, 84H, 85H, 86H, 87H, 89H, 93H, 98H, 108H, 109H, 1L, 2L, 3L, 7L, 8L, 9L, 10L, 11L, 12L, 13L, 15L, 17L, 19L, 20L, 21L, 22L, 36L, 41L, 42L, 43L, 45L, 46L, 58L, 60L, 62L, 63L, 67L, 70L, 73L, 74L, 77L, 78L, 79L, 80L, 83L, 85L, 87L, 104L, y 106L. De preferencia, la estructura de aceptor humana, comprende por lo menos una sustitución de aminoácidos de Región de Estructura en donde la secuencia de aminoácido de la estructura es por lo menos 65% idéntica de dicha estructura de aceptor humana y comprende por lo menos 70 residuos de aminoácido idénticos a la estructura de aceptor humana. En una modalidad preferida, la proteína de unión es un anticuerpo humanizado o su porción de unión de antígeno capaz de unir la subunidad p40 de IL-12 o IL-23. De preferencia, el anticuerpo humanizado, o su porción de unión de antígeno, comprende una o más CDRs descritas anteriormente. Muy preferiblemente, el anticuerpo humanizado, o su porción de unión de antígeno, comprende tres o más CDRs descritas anteriormente. Muy preferiblemente, el anticuerpo humanizado, o su porción de unión de antígeno, comprende seis CDRs antes descritas. En otra modalidad de la invención reclamada, el anticuerpo humanizado o su porción de unión de antígeno comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO.:79, SEC ID NO.:80, SEC ID NO.:81, SEC ID NO.:82, SEC ID NO.:83, SEC ID NO.:84, SEC ID NO,:85, SEC ID NO.:86, SEC ID NO.:87, SEC ID NO.:88, SEC ID NO.:89, SEC ID NO.:90, SEC ID NO.:91, SEC ID NO.:98, SEC ID NO.:99, SEC ID NO.: 100, SEC ID NO.: 101, SEC ID NO.: 102, Y SEC ID NO.: 103, SEC ID NO.: 104, SEC ID NO.: 105, SEC ID NO.: 106, SEC ID NO.. 107, SEC ID NO.: 108, y SEC ID NO.: 109. Muy preferiblemente, el anticuerpo humanizado o su porción de unión de antígeno comprende dos dominios variables seleccionados del grupo descrito anteriormente. De preferencia, el anticuerpo humanizado, o su porción de unión de antígeno comprende dos dominios variables, en donde dichos dos dominios variables tiene las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste de SEC ID NO.:67 & SEC ID NO.:79, SEC ID NO.:80 & SEC ID NO.:81, SEC ID NO.:82 & SEC ID NO.:83, SEC ID NO.:84 & SEC ID NO.:85, SEC ID NO.:86 & SEC ID NO.:87, SEC ID NO.:88 & SEC ID NO.:89, SEC ID NO.:90 & SEC ID NO.:91, SEC ID NO.:98 & SEC ID NO.:99, SEC ID NO.:100 & SEC ID NO.:101, SEC ID NO.:102 & SEC ID NO.:103, SEC ID NO.:104 & SEC ID NO.:105, SEC ID NO.:106 & SEC ID NO.:107, y SEC ID NO.:108 & SEC ID NO.:109. En una modalidad preferida, la proteína de unión descrita anteriormente comprende un dominio constante de inmunoglobulina de cadena pesada seleccionado del grupo que consiste de un dominio constante de IgM humana, un dominio constante de I g G 1 humana, un dominio constante de lgG2 humana, un dominio constante de lgG3 humana, un dominio constante de lgG4 humana, un dominio constante de IgE humana, y un dominio constante de IgA humana. Muy preferiblemente, la proteína de unión comprende SEC ID NO.:2; SEC ID NO.:3; SEC ID NO.:4; y SEC ID NO.:5. La proteína de unión de la invención es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 y IL-23. De preferencia, la proteína de unión es capaz de modular una función biológica de un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 y IL-23. Muy preferiblemente la proteína de unión es capaz de neutralizar un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 y IL-23. En una modalidad, la proteína de unión de la invención tiene una constante de velocidad de encendido (Kencendido) para IL-12 o IL-23 de por lo menos 102M"1s'1; por lo menos aproximadamente 103M"1s"1; por lo menos aproximadamente 104M" s*1; por lo menos aproximadamente 105M"1s "1; o por lo menos aproximadamente 106M" 1s'1, según medida por la resonancia de plasmón de superficie. De preferencia, la proteína de unión de la invención tiene una constante de velocidad de encendido (Kencendido) para IL-12 o IL-23 de entre 102M-V1 a 103M-1 s"\ de entre 103M"V1 a iCM' 1; de entre 104M" V1 a 105M"V1; o de entre 105M- 1 a 10ßM"1s"\ según medido por la resonancia de plasmón de superficie. En otra modalidad, la proteína de unión de la ¡nvención tiene una constante de velocidad de apagado (Kapagado) para IL-12 o IL- 23 de a lo mucho aproximadamente 103s"1; a lo mucho aproximadamente 10~4s"1; a lo mucho aproximadamente 10"5s"1; o a lo mucho de aproximadamente 10~6s"1, según medido por la resonancia de plasmón de superficie. De preferencia, la proteína de unión de la ¡nvención tiene una constante de velocidad de apagado (Kapagado) para I L-12 o IL-23 de 10"V1 a 10"V1; de 10"V1 a KrV1; o de 10"5s" 1 a 10"6s"1, según medido por la resonancia de plasmón de superficie. En otra modalidad, la proteína de unión de la invención tiene una constante de disociación (KD) para IL-12 o IL-23 de a lo mucho aproximadamente 10"7 M; a lo mucho aproximadamente 10"8 M; a lo mucho aproximadamente 10'9 M; a lo mucho aproximadamente 10" 10 a lo mucho aproximadamente 10 -11 a lo mucho aproximadamente 10"12 M; o a lo mucho 10"13 M. De preferencia, la proteína de unión de la invención tiene una constante de disociación (KD) para IL-12 o IL-23 de 10'7 M a 10"8 M; de 10'8 M a 10'9 M; de 10"9 M a 10"10 M; de 10"10 a 10'11 M; de 10"11 M a 10"12 M; o de 10'12 a M 10" 3M. Una modalidad de la invención proporciona una construcción de anticuerpo que comprende cualquiera de las proteínas de unión descritas anteriormente y un polipéptido de enlace o una inmunoglobulina. En una modalidad preferida, la construcción de anticuerpo se seleccionada del grupo que consiste de una molécula de inmunoglobulina, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo injertado CDR, un anticuerpo humanizado, un Fab, un Fab', un F(ab')2, una Fv, enlazada a un disulfuro Fv, un scFv, un anticuerpo de dominio individual, un diacuerpo, un anticuerpo multiespecífico, un anticuerpo específico doble, y un anticuerpo biespecífico. En una modalidad preferida la construcción de anticuerpo comprende un dominio constante de inmunoglobulina de cadena pesada seleccionado del grupo que consiste de un dominio constante de IgM humana, un dominio constante de I g G 1 humana, un dominio constante de lgG2 humana, un dominio constante de lgG3 humana, un dominio constante de lgG4 humana, un dominio constante de IgE humana, y un dominio constante de IgA humana. Muy preferiblemente, la construcción de anticuerpo comprende SEC ID NO.:2; SEC ID NO.:3; SEC ID NO.:4; y SEC ID NO.:5. En otra modalidad la invención proporciona un conjugado de anticuerpo que comprende una construcción de anticuerpo descrita anteriormente y un agente seleccionado del grupo que consiste de; una molécula de inmunoadhesión, un agente formador de imagen, un agente terapéutico, y un agente citotóxico. En una modalidad preferida el agente formador de imagen seleccionado del grupo que consiste de una radio-etiqueta, una enzima, una etiqueta fluorescente, una etiqueta luminiscente, una etiqueta bioluminiscente, una etiqueta magnética, y biotina. Muy preferiblemente, el agente formador de imagen es una radio-etiqueta seleccionada del grupo que consiste de: 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111ln, 125l, 131l, 177Lu, 166Ho, y 153Sm. En una modalidad preferida, el agente terapéutico o citotóxico se selecciona del grupo que consiste de, un anti-metabolito, un agente de alquilación, un antibiótico, un factor de crecimiento, una citocina, un agente anti-angiogénico, un agente anti-m itótico, una antraciclina, toxina, y un agente apoptótico. En otra modalidad, la construcción de anticuerpo es glicosilada. De preferencia, la glicosilación es un patrón de glicosilación humana. En otra modalidad, la proteína de unión, la construcción de anticuerpo o conjugado de anticuerpo descritos anteriormente existen como un cristal. De preferencia, el cristal es un cristal de liberación controlada farmacéutico libre de vehículo. En una modalidad preferida, la proteína de unión cristalizada, la construcción de anticuerpo cristalizada o el conjugado de anticuerpo cristalizado tiene una vida media mayor in vivo que es su contraparte soluble. En otra modalidad preferida, la proteína de unión cristalizada, la construcción de anticuerpo cristalizada o el conjugado de anticuerpo cristalizada retiene la actividad biológica después de la cristalización. Un aspecto de la invención se refiere a un ácido nucleico aislado que codifica a cualquiera de la proteína de unión, construcción de anticuerpo o conjugado de anticuerpo descritos anteriormente. Una modalidad más proporciona un vector que comprende el ácido nucleico aislado descrito anteriormente, en donde dicho vector se selecciona del grupo que consiste de pcDNA; pTT (Durocher et al., Nucleic Acids Research 2002, Vol 30, No.2); pTT3 (pTT with additional múltiple cloning site; pEFBOS (Mi?ushima, S. and Nagata, S., (1990) Nucleic acids Research Vol 18, No. 17); pBV; pJV; and pBJ.
En otro aspecto, una célula huésped es transformada con el vector descrito anteriormente. De preferencia, la célula huésped es una célula procariótica. Muy preferiblemente, la célula huésped es E.Coli. En una modalidad relacionada, la célula huésped es una célula eucariótica. Preferiblemente, la célula eucariótica se selecciona del grupo que consiste de célula protistasa, célula de animal, célula de planta y célula fúngica. Muy preferiblemente, la célula huésped es una célula de mamífero que incluye, pero no se limita a, CHO y COS; o una célula fúngica tal como Saccharomyces cerevisiae; o una célula de insecto tal como Sf9. Otro aspecto de la invención proporciona un método para producir una proteína de unión que une la subunidad p40 de IL-12, que comprende cultivar cualquiera de las células huésped descritas anteriormente en un medio de cultivo bajo condiciones suficientes para producir una proteína de unión que une la subunidad p40 de IL-12. Otra modalidad proporciona una proteína de unión producida de acuerdo con el método descrito anteriormente. Una modalidad proporciona una composición para la liberación de una proteína de unión, en donde la composición comprende una formulación que a su vez comprende una proteína de unión cristalizada, una construcción de anticuerpo cristalizada o un conjugado de anticuerpo cristalizado como se describe anteriormente y un ingrediente; y por lo menos un vehículo polimérico. De preferencia, el vehículo polimérico es un polímero seleccionado de uno o más del grupo que consiste de: poli (ácido acrílico), poli (aanoacplatos), poli (aminoácidos), poli (anhídridos), poli (depsipéptido), poli (esteres), poli (ácido láctico), poli (ácido láctico-co-g cólico) o PLGA, poli (b-hidroxibutirato), poli (caprolactona), poli (dioxanona), poli (ghcol etilén ico) , poli ((hidroxipropil) metacplamida), poli [(órgano)fosfaceno], poli (orto esteres), poli (alcohol vinílico), poli (vinilpirrolidona), copolímeros de anhídrido maleíco-alquil vmil éter, polioles plurónicos, albúmina, alginato, celulosa y derivados de celulosa, colágeno, fibrina, gelatina, ácido hialurónico, oligosacápdos, glicaminog canos, po sacápdos sulfatados, sus mezclas y copolímeros Preferiblemente, el ingrediente se selecciona del grupo que consiste de albúmina, sacarosa, trehalosa, lactitol, gelatina, hidroxipropil-ß-aclodextpna, glicol metoxipohetilénico y g I icol pol letilénico Otra modalidad proporciona un método para tratar un mamífero que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad efectiva de la composición descrita anteriormente La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una proteína de unión, construcción de anticuerpo o conjugado de anticuerpo como se describe anteriormente y un vehículo farmacéuticamente aceptable En una modalidad más, la composición farmacéutica comprende por lo menos un agente terapéutico adicional para tratar un trastorno en donde la actividad de IL-12 y/o IL-23 es peligrosa De preferencia el agente adicional se selecciona del grupo que consiste de Agente terapéutico, agente formador de imagen, agente atotóxico, inhibidores de angiogénesis (incluyendo, pero no limitándose a anticuerpos anti-VEGF o trampa VEGF); inhibidores de cinasa (incluyendo pero no limitándose a inhibidores de KDR y TIE-2); bloqueadores de molécula de co-estimulación (incluyendo pero no limitándose a anti-B7.1, anti-B7.2, CTLA4-lg, anti-CD20); bloqueadores de molécula de adhesión (incluyendo pero no limitándose a anti-LFA-1 Abs, anti-E/L selectin Abs, inhibidores de molécula pequeña); anticuerpo anti-citocina o su fragmento funcional (incluyendo pero no limitándose a anticuerpos de receptor de citocina anti-IL-18, anti-TNF, anti-IL-6); metotrexato; ciclosporina; rapamicina; FK506; etiqueta o reportero detectable; un antagonista de TNF; un antirreumático; un relajador de músculos, un narcótico, un fármaco anti-inflamatorio no esteroide (NSAID), un analgésico, una anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano, un antipsoriático, un corticoesteroide, un esteroide anabólico, una eritropoyetina, una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor, una hormona de crecimiento, un fármaco de reemplazo de hormona, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un antisicótico, un estimulante, un medicamento para asma, un agonista beta, un esteroide inhalado, una epinefrina o análogo, una citocina, y un antagonista de citocina.
En otro aspecto, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana que comprende poner en contacto IL-12 humana y/o IL-23 humana con una proteína de unión descrita anteriormente, de manera que se inhibe la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana. En un aspecto relacionado, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de IL-12 humana y/o I L-23 humana en un ser humano que sufre de un trastorno en donde la actividad de IL-12 y/o IL-23 esta dañada, que comprende administrar al ser humano una proteína de unión descrita anteriormente, de manera que la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana en el ser humano es inhibida y el tratamiento es logrado. De preferencia, el trastorno se selecciona del grupo que comprende artritis, osteoartritis, artritis crónica juvenil, artritis séptica, artritis de Lyme, artritis psoriática, artritis reactiva, espondiloartropatia, lupus sistémico eritematoso, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus dependiente de insulina, tiroiditis, asma, enfermedades alérgicas, psoriasis, escleroderma de dermatitis, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo de trasplante de órgano, enfermedad inmune aguda o crónica asociada con trasplante de órganos, sarcoidosis, aterosclerosis, coagulación intravascular diseminada, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Grave, síndrome nefrótico, síndrome de fatiga crónica, granulomatosis de Wegener, púrpura de Henoch-Schoenlein, vasculitis microscópica de los riñones, hepatitis activa crónica, uveitis, choque séptico, síndrome de choque tóxico, síndrome de sepsis, caquexia, enfermedades infecciosas, enfermedades parásitas, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, mielitis transversal aguda, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, ataque, cirrosis biliar primaria, anemia hemolítica, malignidades, falla cardiaca, infarto al miocardio, enfermedad de Addison, esporádica, tipo I de deficiencia poliglandular y tipo II de deficiencia poliglandular, síndrome de Schmidt, síndrome de dísfunción respiratoria en adultos (aguda), alopecia, alopecia areata, artropatía seronegativa, artropatía, enfermedad de Reiter, artropatía psoriática, artropatía eolítica ulcerativa, sinovitis enteropática, clamidia, yersinia y salmonela asociada con artropia, espondiloartopatia, enfermedad ateromatosa/arteriosclerosis, alergia atópica, enfermedad bolosa autoinmune, pénfigo vulgaris, pénfigo foliáceo, penfigoide, enfermedad IgA lineal, anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica positiva de Coombs, anemia perniciosa adquirida, anemia perniciosa juvenil, encefalitis mialgica/Enfermedad Libre de Royal, candidiasis mucocutánea crónica, arteritis de célula gigante, hepatitis esclerosante primaria, hepatitis autoínmune criptogénica, Síndrome de Enfermedad de Inmunodeficiencia Adquirida, Enfermedades Relacionadas con Inmunodeficiencia Adquirida, Hepatitis B, Hepatitis C, inmunodeficiencia variada común, (hipogamaglobulinemia variable común), cardiomiopatía dilatada, infertilidad femenina, falla de ovarios, falla de ovarios prematura, enfermedad de pulmón fibrótico, alveolitis de fibrosis criptogénica, enfermedad de pulmón intersticial post-inflamatoria, pneumonitis intersticial, enfermedad de tejido conectivo asociada con enfermedad de pulmón intersticial, enfermedad de pulmón asociada con enfermedad de tejido conectivo mixta, enfermedad de pulmón intersticial asociada con esclerosis sistémica, enfermedad de pulmón intersticial asociada con artritis reumatoide, enfermedad de pulmón asociada con lupus sistémico eritematoso, enfermedad de pulmón asociada con dermatomiositis/polimiositis, enfermedad de pulmón asociada con la enfermedad de Sjogren, enfermedad de pulmón asociada con espondilitis anquilosante, enfermedad de pulmón difusa vasculítíca, enfermedad de pulmón asociada con hemosiderosis, enfermedad de pulmón intersticial inducida por fármacos, fibrosis, fibrosis de radiación, bronquiolitis obliteran, neumonía eosinofílica crónica, enfermedad de pulmón infiltrante linfocitica, enfermedad de pulmón intersticial post-infecciosa, artritis gotosa, hepatitis autoinmune, hepatitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis autoinmune clásica o lipoide), hepatitis autoinmune de tipo 2 (hepatitis de anticuerpo anti-LKM), hipoglicemia mediada autoinmune, resistencia a insulina tipo B con acantosis nigricans, hipoparatiroidismo, enfermedad inmune asociada con trasplante de órgano, enfermedad inmune crónica asociada con trasplante de órgano, osteoartrosis, colangitis esclerosante primaria, psoriasis tipo 1, psoriasis tipo 2, leucopenia idiopática, neutropenia autoinmune, NOS de enfermedad renal, glomerulonefritida, vasculitis microscópica de los riñones, enfermedad de lima, lupus discoide eritematoso, infertilidad masculina idiopática o NOS, autoinmunidad de esperma, esclerosis múltiple (todos los subtipos), oftalmía simpatética, hipertensión pulmonar secundaria a enfermedad de tejido conectivo, síndrome de Goodpasture, manifestación pulmonar de poliarteritis nodosa, fiebre reumática aguda, espondilitis reumatoide, enfermedad de Still, esclerosis sistémica, síndrome de Sjorgren, enfermedad de Takayasu/arteritis, trombocitopenia autoinmune, trombocitopenia idiopática, enfermedad de tiroides autoinmune, hipertiroidismo, hipotiroidísmo autoinmune gotoso (enfermedad de Hashimoto), hipotiroidismo autoinmune atrófico, mixoedema primario, uveítis facogénica, vasculitis primaria, enfermedad del hígado aguda, vitíligo, enfermedades crónicas del hígado, cirrosis alcohólica, daño del hígado inducido por alcohol, coleosatatis, enfermedad de hígado ideosincrática, hepatitis inducida por fármaco, Esteatohepatitis no alcohólica, alergia y asma, infección por estreptococo del grupo B (GBS), trastornos mentales (por ejemplo, depresión y esquizofrenia), enfermedad mediada por el Tipo Th2 y el Tipo Th1, dolor agudo y crónico (diferentes formas de dolor), y cánceres tales como cáncer de pulmón, de mama, de estomago, de vejiga, de páncreas, de ovario, de próstata y rectal y malignidades hematopoyéticas (leucemia y linfoma), Abetalipoprotemia, Acrocianosis, procesos parásitos o infecciosos agudos o crónicos, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), infección bacteriana aguda o crónica, pancreatitis aguda, falla renal aguda, adenocarcinomas, latidos ectópicos aeriales, complejo de demencia por SIDA, hepatitis inducida por alcohol, conjuntivitis alérgica, dermatitis por contacto alérgica, rinitis alérgica, rechazo de aloinjerto, deficiencia de alfa-1 -antitripsina, esclerosis lateral amiotrófica, anemia, angina de pecho, degeneración de célula de cuerno anterior, terapia anti-cd3, síndrome antifosfolípido, reacciones de hipersensibilidad de anti-receptor, aneurismas aórticos y periféricos, disección aórtica, hipertensión arterial, arteriosclerosis, fístula arteriovenosa, ataxia, fibrilación atríal (sostenida o paroxismal), palpitación atrial, bloque atrioventricular, linfoma de célula B, rechazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de medula ósea (BMT), bloqueo de ramificación de grupo, línfoma de Burkitt, Quemaduras, arritmias cardiacas, síndrome de choque cardiaco, tumores cardiacos, cardiomiopatía, respuesta de inflamación de derivación cardiopulmonar, rechazo de trasplante de cartílago, degeneraciones corticales cerebrales, trastornos cerebrales, taquicardia atrial caótica o multifocal, trastornos asociados con quimioterapia, leucemia mielocítica crónica (CML), alcoholismo crónico, patologías inflamatorias crónicas, leucemia linfocítica crónica (CLL), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), intoxicación crónica por salicilato, carcinoma colorectal, falla cardiaca congestiva, conjuntivitis, dermatitis por contacto, cor pulmonale, enfermedad de arteria coronaria, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, sepsis negativa de cultivo, fibrosis quística, trastornos asociados con terapia de citocina, Demencia pugilística, enfermedades de desmielinización, fiebre hemorrágica por dengue, dermatitis, condiciones dermatológicas, diabetes, diabetes mellitus, enfermedad ateriosclerótica diabética, enfermedad difusa del cuerpo de Lewy, cardiomiopatía congestiva dilatada, trastornos de los ganglios básales Síndrome de Down en edad media, trastornos de movimiento inducidos por fármacos, que bloquean receptores de dopamina del Sistema Nervioso Central, sensibilidad a fármacos, eccema, encefalomielitis, endocarditis, endocrinopatia, epiglotitis, infección por virus de epstein-barr, eritromelalgia, trastornos extrapiramidales y cerebrales, linfohistíocitosis hematofagocítica familiar, rechazo de implante de timo fetal, ataxia de Friedreich, trastornos arteriales periféricos funcionales, sepsis fúngica, gangrena de gas, ulcera gástrica, nefritis glomerular, rechazo de injerto de cualquier órgano o tejido, sepsis gram-negativa, sepsis gram-positiva, granulomas debido a organismos intracelulares, leucemia de célula vellosa, enfermedad de Hallerrorden-Spatz, tiroiditis de hashimoto, fiebre de heno, rechazo de trasplante de corazón, hemacromatosis, hemodiálisis, síndrome urémico hemolítico/púrpura trombocitopénico trombolítico, hemorragia, hepatitis (A), arritmias del grupo His, infección por VIH/neuropatía por HIV, enfermedad de Hodgkin, trastornos de movimiento hipercinético, reacciones de hipersensibilidad, neumonitis de hipersensibilidad, hipertensión, trastornos del movimiento hipocinético, evaluación de eje hipotalámico-pituitaria-adrenal, enfermedad de Addison idiopática, fibrosis pulmonar idiopática, citotoxicidad mediada por anticuerpo, astenia, atrofia muscular espinal infantil, inflamación de la aorta, influenza a, exposición a radicación ionizante, iridociclitis/uveitis/neuritis óptica, daño por isquemia-reperfusión, choque isquémico, artritis reumatoide juvenil, atrofia muscular espinal juvenil, sarcoma de Kaposi, rechazo de trasplante de riñon, legionelosis, leishmaniasis, lepra, lesiones del sistema corticoespinal, lipedema, rechazo de trasplante de hígado, linfederma, malaria, linfoma maligno, histiocitosis maligna, melanoma maligno, meningitis, meningococcemia, metabólico/idiopático, dolor de cabeza, migraña, trastorno de sistema múltiple mitocondrial, enfermedad de tejido conectivo mixta, gamopatia monoclonal, mieloma múltiple, degeneraciones de sistemas múltiples (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager y Machado-Joseph), miastenia grave, micobacteria avium intracelular, micobacteria tuberculosis, síndrome mielodiplástico, infarto al miocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carcinoma nasofaríngeo, enfermedad crónica de pulmón neonatal, nefritis, nefrosis, enfermedades neurodegenerativas, atrofias musculares neurogénicas I, fiebre neutropénica, linfoma que no es de hodgkins, oclusión de la aorta abdominal y sus ramificaciones, trastornos arteriales oclusivos, terapia de okt3, orquitis/epididimitis, orquitis/procedimientos inversos de vasectomía, organomegalia, osteoporosis, rechazo de trasplante de páncreas, carcinoma pancreático, síndrome paraneoplástico/hipercalcemia de malignidad, rechazo de trasplante de paratiroides, enfermedad inflamatoria pélvica, rinitis perineal, enfermedad pericardial, enfermedad aterosclerótica periférica, trastornos vasculares periféricos, peritonitis, anemia perniciosa, neumonía carinii Pneumocystis, neumonía, síndrome POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, y síndrome de cambios en piel), síndrome de post-perfusión, síndrome de post- bombeo, síndrome de cardiotomia post-MI, preclampsia, Palsy de supranúcleo progresivo, hipertensión pulmonar primaria, terapia de radiación, fenómeno y enfermedad de Raynaud, enfermedad de Raynoud, enfermedad de Refsum, taquicardia QRS estrecha regular, hipertensión renovascular, daño por reperfusión, cardiomiopatía restrictiva, sarcomas, escleroderma, corea senil, demencia senil de tipo de cuerpo de Lewy, artropatías seronegativas, choque, anemia de célula falsiforme, rechazo de aloinjerto de piel, síndrome de cambios de piel, rechazo de trasplante de intestino delgado, tumores sólidos, arritmias específicas, ataxia espinal, degeneraciones espinocerebrales, miositis de estreptococo, lesiones estructurales del cerebelo, panencefalitis esclerosante sub-aguda, síncope, sífilis del sistema cardiovascular, anafilaxia sistémica, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, artritis reumatoide juvenil de inicio sistémico, célula T o FAB ALL, Telangiectasia, tromboangitis obliterans, trombocitopenia, toxicidad, trasplantes, trauma/hemorragia, reacciones de hipersensibilidad de tipo lll, hipersensibilidad de tipo IV, angina inestable, uremia, urosepsis, urticaria, enfermedades cardiacas valvulares, venas varicosas, vasculitis, enfermedades venosas, trombosis venosa, fibrilación ventricular, infecciones virales y fúngicas, encefalitis vital/meningitis aséptica, síndrome hemafagocítico asociado vital, síndrome de Wernicke-Korsakoff, enfermedad de Wilson, rechazo de xenoinjerto de cualquier órgano o tejido. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar un paciente que sufre de un trastorno en donde IL-12 humana y/o IL-23 humana es dañina, que comprende el paso de administrar cualquiera de las de unión descritas anteriormente antes, concurrentemente, o después de la administración de un segundo agente, como se discutió antes. En una modalidad preferida, el segundo agente se selecciona del grupo que consiste de budenosida, factor de crecimiento epidérmico, corticosteroides, ciclosporina, sulfasalazina, aminosalicilatos, 6-mercaptopurina, azatioprina, metronidazol, inhibidores de lipoxigenasa, mesalamina, olsalazina, balsalazida, antioxidantes, inhibidores de tromboxano, antagonistas del receptor de I L- 1 , anticuerpos monoclonales a nti-l L- 1 ß , anticuerpos monoclonales anti-IL-6, factores de crecimiento, inhibidores de elastasa, compuesto de piridinil-imidazol, anticuerpos o agonistas de TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, I L- 8, EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF, anticuerpos de CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 o sus ligandos, metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSAIDs, ibuprofeno, corticosteroides, prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, IRAK, NIK, IKK, p38, inhibidores de cinasa MAP, inhibidores de enzima de conversión IL-1ß, inhibidores de enzima de conversión TNFa, inhibidores de señalización de inhibición de célula T, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzimas de conversión de angiotensina, receptores de atocina solubles, receptor de TNF p55 soluble, receptor de TNF p75 soluble, sIL- 1 R I , s I L - 1 Rll, SIL-6R, atocinas anti-inflamatopas, IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 y TGFß En una modalidad preferida, las composiciones farmacéuticas descritas anteriormente se administran al sujeto a través de por lo menos un modo seleccionado de parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intra-articular, intrabronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, entre cavidades, intracehal, intracerebral, intracerebroventpcular, mtracóhco, intracervical, intragástpco, intrahepático, intramiocardial, intraosteal, intrapelvico, intrapepcardiaca, intrapeptoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarectal, intrarenal, intraretinal, intraespinal, intrasinovial, intratoráaca, intrauterina, intravesicular, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal, y transdérmica Un aspecto de la invención proporciona por lo menos un anticuerpo a nti-id lotí po de IL-12 para por lo menos una proteína de unión IL-12 de la presente invención El anticuerpo anti-idiotipo incluye cualquier proteína o péptido que contenga molécula que comprende por lo menos una porción de una molécula de inmunoglobulma tal como, pero no limitándose a, por lo menos una región de determinación de complementapdad (CDR) de una cadena pesada o ligera o una porción de unión de ligando del mismo, una región variable de cadena pesada o cadena ligera, una región constante de cadena pesada o cadena ligera, una región de estructura, o cualquier porción de la misma, que se puede incorporar en una proteína de unión de la presente invención.
Posen loción Detallada de la Invención Esta invención se refiere a proteínas de unión IL-12p40, particularmente anticuerpos anti-IL-12p40, o sus porciones de unión de antígeno, que unen IL-12p40. Varios aspectos de la invención se refieren a anticuerpos y fragmentos de anticuerpo, y sus composiciones farmacéuticas, así como ácido nucleicos, vectores de expresión recombinantes y células huésped para hacer dichos anticuerpos y fragmentos. También se abarcan por la presente invención métodos para utilizar los anticuerpos de la invención para detectar I L-12p40 humana, IL-12 humana e IL-23 humana; para inhibir la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana, ya sea in vitro o in vivo; y para regular la expresión de gen. A menos que se defina otra cosa aquí, los términos científicos y técnicos utilizados con relación a la presente invención deben tener significados que comúnmente son entendidos por aquellos expertos en la técnica. El significado y alcance de los términos debe ser claro, sin embargo, en el caso de cualquier ambigüedad latente, las definiciones descritas aquí toman precedente sobre cualquier diccionario o definición extrínseca. Además, a menos que se requiera otra cosa por el contexto, los términos singulares deben incluir pluralidades y los términos plurales deben incluir el singular. En esta solicitud, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se establezca lo contrario Además, el uso del término "que incluye", así como otras formas, tales como "incluye" e "incluido", no es limitante También, los términos tales como "elemento" o "componente" abarcan tanto elementos y componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una sub-unidad a menos que se especifique aquí otra cosa En general, las nomenclaturas utilizadas con relación a y las técnicas de cultivo de célula y tejido, biología molecular, inmunología, microbiología, genética y proteína y química de ácido nucleico e hibridación descritas aquí son aquellas bien conocidas y comúnmente utilizadas en la técnica Los métodos y técnicas de la presente invención en general se realizan de acuerdo con métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en las varias referencias generales más específicas que son citadas y discutidas a través de la presente especificación a menos que se indique otra cosa Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se realizan de acuerdo con las especificaciones del fabricante, como comúnmente se logra en la técnica o como se describe aquí Las nomenclaturas utilizadas con relación a y los procedimientos de laboratorio y técnicas de química analítica, química orgánica sintética y química medicinal y farmacéutica descritas aquí, son aquellas bien conocidas y comúnmente utilizadas en la técnica Las técnicas estándares se utilizan para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación y suministro, y tratamiento de pacientes La presente invención puede entenderse más fácilmente, al seleccionar los términos que se definen a continuación. El término "polipéptido" como se utiliza aquí, se refiere a cualquier cadena polimérica de aminoácidos. Los términos "péptido" y "proteína" se utilizan intercambiablemente con el término polipéptido y también se refieren a una cadena polimérica de aminoácidos. El término "polipéptido" abarca proteínas nativas o artificiales, fragmentos de proteína y análogos de polipéptido de una secuencia de proteína. Un polipéptido puede ser monomérico o polimérico. El término "proteína aislada" o "polipéptido aislado" es una proteína o polipéptido que en virtud de su origen o fuente de derivación no está asociado con componentes naturalmente asociados que lo acompañan en su estado nativo. Es sustancialmente libre de otras proteínas de la misma especie; y se expresa por una célula de una especie diferente; o no ocurre por naturaleza. De esta manera, un polipéptido que está químicamente sintetizado o sintetizado en un sistema celular diferente de la célula a partir de la cual se origina naturalmente, será "aislado" de sus componentes naturalmente asociados. Una proteína también puede ser presentada sustancialmente libre de componentes naturalmente asociados mediante aislamiento, utilizando técnicas de purificación de proteína bien conocidas en el campo. El término "recuperación" como se utiliza aquí, se refiere al procedimiento de presentar una especia química, tal como un polipéptido sustancialmente libre de componentes naturalmente asociados por aislamiento, por ejemplo, utilizando técnicas de purificación de proteína bien conocidas en la técnica. El término "IL-12 humana" (abreviada aquí como hlL-12, o I L- 12), como se utiliza aquí, incluye una citocina humana que es secretada principalmente por células de presentación de antígeno tales como monocitos, macrófagos y células dendríticas. El término incluye una proteína heterodimérica que comprende una subunidad de 35 kD (p35) y una subunidad de 40 kD (p40) las cuales están enlazadas conjuntamente con un puente de disulfuro. La proteína heterodimérica se denomina como una "proteína p70". La estructura de la IL-12 humana se describe más en, por ejemplo, Kobayashi, et al. (1989) J. Exp Med. 170:827- 845; Seder, ef al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. 90:10188-10192; Ling, ef al. (1995) J. Exp Med. 154:116-127; Podlaski, ef al. (1992) Arch. Biochem. Biophys. 294:230-237. El término IL-12 humana pretende incluir IL-12 humana recombinante (rh IL-12), la cual puede ser preparada a través de métodos de expresión recombinantes estándares. El término "IL-23 humana" (abreviada aquí como hlL-23, o IL-23), como se utiliza aquí, incluye una citocina humana heterodimérica que pertenece a una familia de cinco de estas citocinas heterodiméricas incluyendo IL-12 e I L-27 (Trinchieri et al., (2003) Immunity 19:641-644). El término incluye una proteína heterodimérica que comprende una subunidad de 19 kD (p19) y una subunidad de 40 kD (p40) las cuales están enlazadas conjuntamente con un puente de disulfuro. El término IL-23 humana pretende incluir IL-23 humana recombinante (rh IL-23), la cual puede ser preparada a través de métodos de expresión recombinantes estándares. El término "IL-12p40", idéntico a "IL-23p40", y también denominado simplemente como "p40", como se utiliza aquí, incluye la subunidad 40 kD de la citocina IL-12 humana (p40) y la subunidad 40 kD de la citocina IL-23 humana. El Cuadro 1 muestra la secuencia de aminoácido de I L- 12p40 , SEC ID No. 1, la cual es conocida en la técnica.
C y adro 1: Secuencia de la sul unidad p40 de I L-12 e lL-23 "Actividad biológica" como se utiliza aquí, se refiere a todas las propiedades biológicas inherentes de la citocina. Las propiedades biológicas de IL-12 incluyen, pero no se limitan a unión del receptor IL-12; inducción de secreción de interferon-gamma (IFN-?) y regulación del equilibrio entre linfocitos de tipo 1 (Th1) de auxiliar T y de tipo 2 (Th2) específicos de antígeno. Las propiedades biológicas de IL-23 incluyen, pero no se limitan a, unión del receptor IL-23, inducción de producción de IFN-?, diferenciación de célula Th1 y activación de las funciones de presentación de antígeno de células dendríticas, y selectivamente inducción de proliferación de células T.
Los términos "unión específica" o "específicamente unido", como se utiliza aquí, con referencia a la interacción de un anticuerpo, una proteína, o un péptido con una segunda especie química, significa que la interacción depende de la presencia de una estructura particular (por ejemplo, un determinante antigénico o epítopo) en la especie química; por ejemplo, un anticuerpo reconoce y une a una estructura de proteína específica en lugar de a proteínas en general. Si un anticuerpo es específico para el epítopo "A", la presencia de una molécula que contenga el epítopo A (o libre, A no marcada), en una reacción conteniendo "A" marcada y el anticuerpo, reducirá la cantidad de A marcada unida al anticuerpo. El término "anticuerpo", como se utiliza aquí, ampliamente se refiere a cualquier molécula de inmunoglobulina (Ig) compuesta de cuatro cadenas de polipéptido, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L), o cualquier fragmento funcional, mutante, variante o derivación de la misma, que retiene las características esenciales de unión de epítopo de una molécula Ig. Dichos formatos de mutante, variante o anticuerpo derivado son conocidos en la técnica. Modalidades no limitantes las cuales se describen más adelante. En un anticuerpo de longitud completa, cada cadena pesada esta compuesta de una región variable de cadena pesada (abreviada aquí como HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada esta compuesta de tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera esta compuesta de una región variable de cadena ligera (abreviada aquí como LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está compuesta de un dominio, CL. Las regiones VH y VL además pueden ser subdivididas en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones de determinación de complementaridad (CDR), interdispuestas con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de estructura (FR). Cada una de VH y VL esta compuesta de tres CDRs y cuatro FRs, dispuesta a partir del término amino al término carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las moléculas de inmunoglobulina pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA y IgY), clase (por ejemplo, IgG 1, lgG2, IgG 3, lgG4, lgA1 y lgA2) o subclase. El término "porción de unión de antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "porción de anticuerpo"), como se utiliza aquí, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retiene la habilidad de unirse específicamente a un antígeno (por ejemplo, hlL-12). Se ha mostrado que la función de unión de antígeno de un anticuerpo puede ser realizada a través de fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Dichas modalidades de anticuerpo también pueden ser biformatos biespecíficos, específicos dobles, o multi-específicos; específicamente uniéndose a dos o más diferentes antígenos; ejemplos de fragmentos de unión abarcados dentro del término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo incluye (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2 que comprende dos fragmentos Fab enlazados a través de un puente de bisulfuro en la región de gozne; (iii) un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de un brazo individual de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al, (1989) Nature 341:544-546, Winter et al., publicación de PCT WO 90/05144 A1 incorporada aquí para referencia), que comprende un dominio variable individual; y (vi) una región de determinación de complementaridad aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, se codifican por genes separados, estos pueden ser unidos utilizando métodos recombinantes, a través de un enlazador sintético que permite hacerlos como una cadena de proteína individual en donde el par de regiones VL y VH forma moléculas monovalentes (conocido como Fv de cadena individual (scFv); ver, por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; and Huston ef al. (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 8_5:5879-5883). Dichos anticuerpos de cadena individual también pretenden ser abarcados dentro del término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo. Otras formas de anticuerpos de cadena individual, tales como diacuerpo también son abarcadas Los diacuerpos son anticuerpos divalentes, diespeaficos en donde los dominios VH y VL se expresan en una cadena de pohpéptido individual, pero utilizando un enlazador que es demasiado corto para permitir la formación de pares entre los dos dominios en la misma cadena, forzando a los dominios a formar pares con dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de unión de antigeno (ver, por ejemplo, Holliger, P , et al (1993) Proc Nati Acad Sci USA 90 6444-6448, Poljak, R J , ef al (1994) Structure 2 1121-1123) Dichas porciones de unión de anticuerpo conocidas en la técnica (Kontermann y Dubel eds , Antibodv Engmeepng (2001) Sppnger-Verlag New York 790 pp (ISBN 3-540-41354-5) El término "construcción de anticuerpos" como se utiliza aquí se refiere a un polipeptido que comprende una o más de las porciones de unión de antígeno de la invención enlazadas a un pohpéptido enlazador o un dominio constante de inmunoglobulina Los polipéptidos enlazadores comprenden dos o más residuos de aminoácido unidos a través de enlaces de péptido y se utilizan para enlazar una o más porciones de unión de antígenos Dichos po péptidos enlazadores son bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Holliger, P , et al (1993) Proc Nati Acad Sci USA 906444-6448, Poljak, RJ , ef al (1994) Structure 2 1121-1123) Un dominio constante de inmunoglobuhna se refiere a un dominio constante de cadena pesada o ligera Las secuencias de aminoácido de dominio constante de cadena pesada y cadena ligera de IgG humana son conocidas en la técnica y están representadas en el Cuadro 2.
Cyadro 2: Secuencia de dominio constante de cadena pesada dominio constante de cadena ligera de igG humana Aún más, un anticuerpo o su porción de unión de antígeno puede ser parte de una molécula de inmunoadhesión más grande, formada a través de la asociación covalente o no covalente del anticuerpo o porción de anticuerpo con una o más de otras proteínas o péptidos Ejemplos de dichas moléculas de inmunoadhesión incluyen el uso de la región de núcleo de estreptavidina para hacer una molécula scFv tetramepca (Kippyanov, S M , ef al (1995) Human Antibodies and Hybpdomas 693-101) y el uso de un residuo de asteína, un péptido marcador y una etiqueta de po histidina C-terminal para hacer moléculas de scFv bivalentes y biotini I adas (Kippyanov, S M , et al (1994) Mol Imm?nol 3 _ 1047-1058) Las porciones de anticuerpo, tales como los fragmentos Fab y F(ab')2 se pueden preparar a partir de anticuerpos enteros utilizando técnicas convencionales, tales como digestión de papaína o pepsina, respectivamente, de anticuerpos enteros Además, se pueden obtener anticuerpos, porciones de anticuerpos y moléculas de inmunoadhesión utilizando técnicas de ADN recombinante estándares, como se describe aquí Un "anticuerpo aislado", como se utiliza aquí, se refiere a un anticuerpo que está sustanaalmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes caracteres específicos antigénicos (por ejemplo, un anticuerpo aislado que específicamente une hlL-12 está sustanaalmente libre de anticuerpos que específicamente unen antígenos diferentes a hlL-12) Un anticuerpo aislado que específicamente une hlL-12, sin embargo, puede tener reactividad cruzada a otros antígenos, tales como moléculas IL-12 de otras especies. Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o químicos. El término "anticuerpo humano", como se utiliza aquí, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpo humanos de la invención pueden incluir residuos de aminoácido no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o de sitio específico in vitro o a través de mutación somática in vivo), por ejemplo en las CDRs y en particular CDR3. Sin embargo, el término "anticuerpo humano", como se utiliza aqui, no pretende incluir anticuerpos en donde las secuencias de CDR derivadas de la línea germinal de otras especies de mamífero, tales como un ratón, han sido insertadas en secuencias de estructura humanas. El término "anticuerpo humano recombinante", como se utiliza aquí, pretende incluir todos los anticuerpo humanos que son preparados, expresados, creados o aislados a través de medios recombinantes, tales como anticuerpos expresados utilizando un vector de expresión recombinante transfectado a una célula huésped (descrito adicionalmente en la Sección II C, más adelante), anticuerpos aislado de una colección de anticuerpo humana de combinación, recombinante (Hoogenboom H.R., (1997) TIB Tech. 15:62-70; Azzazy H., and Highsmith W.E., (2002) Clin. Biochem. 35:425-445; Gavilondo J.V., and Larrick J.W. (2002) BioTechniques 29:128-145; HoogenboomH. , and Chames P. (2000) Immunology Today 21:371-378), anticuerpos aislado de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para genes de ¡nmunoglobulina humana (ver, por ejemplo, Taylor, L. D., et al. (1992) Nucí. Acids Res. 20:6287-6295; Kellermann S-A., and Green L.L. (2002) Current Opinión in Biotechnology 13:593-597; Little M. et al (2000) Immunology Today 21:364-370) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislado por otros medios que involucran el empalme de secuencias de gen de inmunoglobulina humana a otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En ciertas modalidades, sin embargo, dichos anticuerpos humanos recombinantes son sometidos a mutagénesis in vitro (o, cuando se utiliza un animal transgénico para secuencias de Ig humana, mutagénesis somática in vivo) y de esta manera las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas de y relacionadas con secuencias VH y VL de línea germinal humana, pueden no existir de manera natural dentro del repertorio de línea germinal de anticuerpo humano in vivo. El término "anticuerpo quimérico" se refiere a anticuerpos que comprende secuencias de región variable de cadena pesada y ligera de una especie, y secuencias de región constante de otra especie, tal como anticuerpos que tienen regiones variables de cadena pesada y ligera de murino enlazadas a regiones constantes humanas. El término "anticuerpo injertado a CDR" se refiere a anticuerpos que comprenden secuencias de región variable de cadena pesada y ligera de una especie pero donde las secuencias de una o más de las regiones de CDR de VH y/o VL son remplazadas con secuencias CDR de otra especie, tal como anticuerpos que tienen regiones variables de cadena pesada y ligera de murino en donde una o más de las CDRs de murino (por ejemplo, CDR3) ha sido reemplazada con secuencias de CDR humanas. El término "anticuerpo humanizado" se refiere a anticuerpos que comprenden secuencias de región variable de cadena pesada y ligera de una especie que no es un ser humano (por ejemplo, un ratón) pero en donde por lo menos una porción de las secuencias VH y/o VL ha sido alterada para ser más de "tipo humano", es decir, más similar a las secuencias variables de línea germinal humana. Un tipo de anticuerpo humanizado es un anticuerpo injertado a CDR, en donde las secuencias de CDR humanas son introducidas en secuencias VH y VL no humanas para reemplazar las secuencias CDR no humanas correspondientes. Los términos "numeración de Kabat", "definiciones de Kabat y "marcación de Kabat" se utilizan intercambiablemente aquí. Estos términos, los cuales son reconocidos en la técnica, se refieren a un sistema de residuos de aminoácido de numeración que son más variable (es decir, hipervariables) que otros residuos de aminoácido en las regiones variables de cadena pesada y ligera de un anticuerpo, o una porción de unión de antígeno del mismo (Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad, Sci. 190:382-391 and, Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department de Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Para la región variable de cadena pesada, la región hipervariable varía de las posiciones de aminoácido 31 a 35 para CDR1, posiciones de aminoácido 50 a 65 para CDR2, y posiciones de aminoácido 95 a 102 para CDR3. Para la región variable de cadena ligera, la región hipervariable varía de posiciones de aminoácido 24 a 34 para CDR1, posiciones de aminoácido 50 a 56 para CDR2, y posiciones de aminoácido 89 a 97 para CDR3. Como se utiliza aquí, los términos "aceptor" y "anticuerpo aceptor" se refieren al anticuerpo o secuencia de ácido nucleico que proporciona o codifica por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98% o 100% de las secuencias de aminoácidos de una o más de las regiones de estructura. En algunas modalidades, el término "aceptor" se refiere a la secuencia de aminoácido de anticuerpo o ácido nucleico que proporciona o codifica la región(s) constante. En otra modalidad más, el término "aceptor" se refiere a la secuencia de aminoácido de anticuerpo o ácido nucleico que proporciona o codifica una o más de las regiones de estructura y la región(s) constante. En una modalidad específica, el término "aceptor" se refiere a una secuencias de aminoácido de anticuerpo o ácido nucleico humana que proporciona o codifica por lo menos 80%, de preferencia, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, o 100% de las secuencias de aminoácidos de una o más de las regiones de estructura. De acuerdo con esta modalidad, un aceptor puede contener por lo menos 1, por lo menos 2, por lo menos 3, por lo menos 4, por lo menos 5, o por lo menos 10 residuos de aminoácido que no ocurren en una o más posiciones específicas de un anticuerpo humano. Una región de estructura de aceptor y/o una región(es) constante de aceptor puede, por ejemplo, derivarse o ser obtenida de un gen de anticuerpo de línea germinal, un gen de anticuerpo maduro, un anticuerpo funcional (por ejemplo, anticuerpos bien conocidos en la técnica, anticuerpos en desarrollo o anticuerpos comercialmente disponibles). Como se utiliza aquí, el término "CDR" se refiere a la región de determinación de complementaridad dentro de secuencias variables de anticuerpo. Existen tres CDRs en cada una de las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera, las cuales se designan CDR1, CDR2 y CDR3, para cada una de las regiones variables. El término "grupo CDR " como se utiliza aquí se refiere a un grupo de tres CDRs que ocurren en una región variable individual capaz de unir el antígeno. Los límites exactos de esta CDRs han sido definidos en forma diferente de acuerdo con sistemas diferentes. El sistema descrito por Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) y (1991)) no solo proporciona un sistema de numeración de residuo inequívoco aplicable a cualquier región variable de un anticuerpo, pero también proporciona límites de residuo precisos definiendo las tres CDRs. Esta CDRs pueden ser denominadas como CDRs de Kabat. Chothia and coworkers (Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987) y Chothia et al., Nature 342:877-883 (1989)) encontraron que ciertas sub-porciones dentro de la CDRs de Kabat adoptan conformaciones de estructura de base de péptido casi idénticas, a pesar de tener una gran diversidad a nivel de la secuencia de aminoácidos. Estas subporciones fueron designadas como L1, L2 y L3 o H1, H2 y H3 en donde "L" y "H" designan las regiones de cadena ligera y cadena pesadas, respectivamente. Estas regiones pueden ser denominadas como CDRs de Chothia, las cuales tienen límites que traslapan con CDRs de Kabat. Otros límites que definen las CDRs que traslapan con la CDRs de Kabat han sido descritas por Padlan (FASEB J. 9:133-139 (1995)) y MacCallum (J Mol Biol 262(5):732-45 (1996)). Otras definiciones de límite de CDR estrictamente pueden no seguir uno de los sistemas anteriores, pero sin embargo, traslaparán con la CDRs de Kabat, aunque pueden ser acortadas o alargadas en vista de los hallazgos de predicción experimentales de que residuos o grupos particulares de residuos o aún CDRs completas no impacten significativamente la unión de antígeno. Los métodos utilizados aquí pueden usar CDRs definidas de acuerdo con cualquiera de estos sistemas, aunque las modalidades preferidas utilizan CDRs definidas de Kabat o Chothia.
Como se utiliza aquí, el término residuos "canónicos" se refiere a un residuo en una CDR o estructura que define una estructura CDR canónica particular según definido por Chothia et al. (J. Mol. Biol. 196:901-907 (1987); Chothia et al., J. Mol. Biol. 227:799 (1992), ambas incorporadas aquí por referencia). De acuerdo con Chothia et al., las porciones críticas de las CDRs de muchos anticuerpos tienen confirmaciones de estructura de base de péptido casi idénticas a pesar de su gran diversidad a nivel de la de secuencia de aminoácido. Cada estructura canónica específica principalmente un grupo de ángulos de torsión de estructura de base de péptido para un segmento continuo de de residuos de aminoácido que forman un lazo. Como se utiliza aquí, los términos "donador" y "anticuerpo donador" se refieren a un anticuerpo que proporciona una o más CDRs. En una modalidad preferida, el anticuerpo donador es un anticuerpo de una especie diferente del anticuerpo a partir del cual se obtienen o derivan las regiones de estructura. En el contexto de un anticuerpo humanizado, el término "anticuerpo donador" se refiere a un anticuerpo no humano que proporciona una o más CDRs. Como se utiliza aquí, el término "estructura" o "secuencia de estructura" se refiere a las secuencias restantes de una región variable menos las CDRs. Ya que la definición exacta de una secuencia CDR puede ser determinada por diferentes sistemas, el significado de una secuencia de estructura es sometido a interpretaciones correspondientemente diferentes. Las seis CDRs (CDR-L1, -L2, y -L3 de cadena ligera y CDR-H1, -H2, y -H3 de cadena pesada) también dividen las regiones de estructura en la cadena ligera y en la cadena pesada en cuatro sub-regiones (FR1, FR2, FR3 y FR4) en cada cadena, en donde la CDR1 esta colocada entre FR1 y FR2, CDR2 entre FR2 y FR3, y CDR3 entre FR3 y FR4. Sin especificar las sub-regiones particulares como FR1, FR2, FR3 o FR4, una región de estructura, como denominada por otros, representa FR's combinados dentro de la región variable de una cadena de inmunoglobulina de existencia natural individual. Como se utiliza aquí, FR representa una de las cuatro sub-regiones, y FRs representa dos o más de las cuatro sub-regiones que constituyen una región de estructura. Las secuencias de aceptor de cadena pesada y cadena ligera humanas son conocidas en la técnica. En una modalidad de la invención, las secuencias de aceptor de cadena pesada y cadena ligera humanas se seleccionan de las secuencias descritas en el Cuadro 3 y Cuadro 4.
Cuadro 3: Secuencias de Aceptor de cadena Pesada Cuadro 4: Secuencias de Aceptor de Cadena Liger.
Como se utiliza aquí, el término "gen de anticuerpo de línea germinal" o "fragmento de gen" se refiere a una secuencia de inmunoglobulina codificada por células no linfoides que no han experimentado el proceso de maduración que conduce a la redisposición genética y mutación para la expresión de una inmunoglobulina particular. (Ver, por ejemplo, Shapiro et al., Crit. Rev. Immunol. 22(3): 183-200 (2002); Marchalonis et al., Adv Exp Med Biol. 484:13-30 (2001)). Una de las ventajas provistas por varias modalidades de la presente invención viene del reconocimiento de que los genes de anticuerpo de línea germinal probablemente son mas maduros que los genes de anticuerpo para conservar las estructuras de secuencia de aminoácido esenciales características de individuos en las especies de esta manera probablemente menos sean reconocidos como una fuente extraña cuando se utilizan terapéuticamente en esa especie Como se utiliza aquí, el término "clave" se refiere a ciertos residuos dentro de la región variable que tienen más impacto en el carácter específico de unión y/o afinidad de un anticuerpo, en particular un anticuerpo humanizado Un residuo clave, incluye, pero no se limita a, uno o más de los siguientes un residuo que está adyacente a una CDR, un sitio de glicosilacion potencial (puede ser un sitio ya sea de N- u O-ghcosilaaón), un residuo raro, un residuo capaz de interacturar con el antígeno, un residuo capaz de interactuar con una CDR, un residuo canónico, un residuo de contracto entre la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera, un residuo dentro de la zona de Vernier, y un residuo en la región que traslapa entre la definición de Chothia de una CDR1 de cadena pesada variable y la definición de Kabat de la primera estructura de cadena pesada Como se utiliza aquí, el termino "anticuerpo humanizado" es un anticuerpo o una variante derivada, análogo o fragmento del mismo que inmunoespecificamente se une a un antígeno de interés y que comprende una región de estructura (FR) que tiene sustanaalmente la secuencia de aminoácido de un anticuerpo y una región de determinación de complementapdad (CDR) que tiene sustanaalmente la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo no humano Como se utiliza aquí, el termino "sustanaalmente" en el contexto de una CDR se refiere a una CDR que tiene una secuencia de aminoácidos por lo menos 80%, de preferencia por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98% o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácido de una CDR anticuerpo no humano Un anticuerpo humanizado comprende sustanaalmente todas de por lo menos una, y típicamente dos dominios variables (Fab, Fab', F(ab') 2, FabC, Fv) en donde o sustanaalmente todas las regiones de CDR corresponden a aquellas de una inmunoglobuhna no humana (es decir, anticuerpo donador) y todas o sustanaalmente todas las regiones de estructura son aquellas de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana De preferencia, un anticuerpo humanizado también comprende por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulma (Fc), típicamente aquella de una inmunoglobuhna humana En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado contiene tanto la cadena ligera asi como por lo menos el dominio variable de una cadena pesada El anticuerpo también incluye las regiones CH1, de gozne, CH2, CH3, y CH4 de la cadena pesada En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado solo contiene una cadena ligera humanizada En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado solo contiene una cadena pesada humanizada En modalidades específicas, un anticuerpo humanizado solo contiene un dominio variable humanizado de una cadena ligera y/o una cadena pesada humanizada El anticuerpo humanizado puede ser seleccionado de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo, incluyendo sin limitación lgG1, lgG2, lgG3 e lgG4. El anticuerpo humanizado puede comprender secuencias de más de una clase o isotipo, y en particular dominios constantes que pueden ser seleccionados para optimizar funciones efectoras deseadas utilizando técnicas bien conocidas en el campo. La estructura y las regiones CDR de un anticuerpo humanizado no necesitan corresponder precisamente a las secuencias de origen, por ejemplo, la CDR de anticuerpo donador o la estructura de consenso pueden ser mutagenizadas a través de sustitución, inserción y/o eliminación de al menos una residuo de aminoácido, de manera que la CDR o residuo de estructura en ese sitio no corresponde ni al anticuerpo donador o la estructura de consenso. En una modalidad preferida, sin embargo, dichas mutaciones no serán extensivas. Usualmente, por lo menos 80%, de preferencia por lo menos 85%, preferiblemente por lo menos 90%, y muy preferiblemente por lo menos 95% de los residuos de anticuerpo humanizado corresponderán a aquellos de las secuencias de FR de origen y CDR. Como se utiliza aquí, el término "estructura de consenso" se refiere a la región de estructura en la secuencia de inmunoglobulina de consenso. Como se utiliza aquí, el término "secuencia de inmunoglobulina de consenso" se refiere a la secuencia formada a partir de los aminoácidos más frecuentemente de existencia (o nucleótidos) en una familia de secuencias de inmunoglobulina relacionadas (Ver, por ejemplo, Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987). En una familia de inmunoglobulinas, cada posición en la secuencia de consenso está ocupada por el aminoácido que ocurre más frecuentemente en esa posición en la familia. Si ocurren dos aminoácidos igualmente frecuentes, cualquiera puede ser incluido en la secuencia de consenso. Como se utiliza aquí, zona "Vernier" se refiere a un subgrupo de residuos de estructura que puede ajustar la estructura de CDR y sintonizar en forma fina el ajuste al antígeno como se describe por Foote and Winter (1992, J. Mol. Biol. 224:487-499, la cual se incorpora aquí por referencia). Los residuos de la zona Vernier forman una capa que cubre la CDR y pueden impactar sobre la estructura de la CDRs y la afinidad del anticuerpo. Como se utiliza aquí, el término "neutralizar" se refiere a la neutralización de la actividad biológica de una citocina cuando una proteína de unión específicamente se une a la citocina. De preferencia una proteína de unión de neutralización es un anticuerpo de neutralización cuya unión a hlL-12 y/o hlL-23 da como resultado la inhibición de una actividad biológica de hlL-12 y/o hlL-23. De preferencia, la proteína de unión de neutralización une hlL-12 y/o hlL-23 y reduce una actividad biológica de IL-12 y/o hlL-23 por lo menos aproximadamente 20%, 40%, 60%, 80%, 85% o más. La inhibición de una actividad biológica de hlL-12 y/o hlL-23 a través de una proteína de unión de neutralización puede ser determinada midiendo uno o más indicadores de la actividad biológica de hlL-12 y/o hlL-23 bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la inhibición de proliferación de ráfaga de fitohemaglutinina humana en un Ensayo de Inducción de Interferon-gamma de ráfaga PHA (ver Ejemplo 1.1. C) o la inhibición de la unión de receptor en un ensayo de unión de receptor IL-12 humana, (también ver Salfeld et al., publicación de PCT No. WO 00/56772 A1). El término "actividad" ¡ncluye actividades tales como el carácter específico de unión/afinidad de un anticuerpo para un antígeno, por ejemplo, un anticuerpo anti-hIL- 12 que se une a un antígeno IL-12 y/o la potencia de neutralización de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo anti- l L-12 cuya unión a hlL-12 inhibe la actividad biológica de hlL-12, por ejemplo la inhibición de proliferación de ráfaga de PHA o la ¡nhibición de unión de receptor en un ensayo de unión de receptor de IL-12 humana, o Ensayo de inducción de Interferon-gama de ráfaga de PHA (ver Ejemplo 1.1. C).
El término "epítopo" incluye cualquier determinante de polipéptido capaz de unión específica a una ¡nmunoglobulina o receptor de célula T. En ciertas modalidades, los determinantes de epítopo incluyen agrupaciones de superficie químicamente activa de moléculas tales como aminoácidos, cadenas laterales de azúcar, fosforilo, o sulfonilo, y, en ciertas modalidades, pueden tener características estructurales tridimensionales específicas, y/o características de carga específica. Un epítopo es una región de un antígeno que está unida por un anticuerpo. En ciertas modalidades, un anticuerpo se utiliza para unir específicamente un antígeno cuando preferencialmente reconoce su antígeno objetivo en una mezcla compleja de proteínas y/o macromoléculas. El término "resonancia de plasmón de superficie", como se utiliza aquí, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones bioespecíficas en tiempo real a través de la detección de alteraciones en concentraciones de proteína dentro de una matriz de biosensor, por ejemplo utilizando el sistema BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ). Para más descripciones, ver Jónsson, U., ef al. (1993) Ann. Biol. Clin. 5J_:19-26; Jónsson, U., et al (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al (1995J J. Mol Recognit. 8:125-131; y Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277. El término "Kencend¡do", como se utiliza aquí, se refiere a la constante de velocidad de encendido para asociación de un anticuerpo al antígeno para formar el complejo de anticuerpo/antígeno como es conocido en la técnica. El término "Kapagado", como se utiliza aquí, se refiere a la constante de velocidad de apagado para la disociación de un anticuerpo a partir del complejo de anticuerpo/antígeno como es conocido en la técnica. El término "Kd", como se utiliza aquí, pretende referirse a la constante de disociación de una interacción de anticuerpo-antígeno particular como es conocido en la técnica. El término "proteína de unión marcada" como se utiliza aquí, se refiere a una proteína con una etiqueta incorporada que proporciona la identificación de la proteína de unión. De preferencia, la etiqueta es un marcador detectable, por ejemplo, la incorporación de un aminoácido radio-marcado o unión a un polipéptido de porciones biotiniladas que pueden ser detectadas a través de avidina marcada (por ejemplo, estreptavidina conteniendo un marcador fluorescente o actividad enzimática que puede ser detectada a través de métodos ópticos o colorimétricos). Ejemplos de etiquetas para polipéptidos se incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: radioisótopos o radionúclidos (por ejemplo, 3H 14C, 35S, 90Y, "Te, 1 1ln, 1 5ll, 131l, 177Lu, 166Ho, o 153Sm); etiquetas fluorescentes (por ejemplo, FTTC, rodamina, fósforo de lantanidas), etiquetas enzimáticas (por ejemplo, peroxidasa de rábano, luciferasa, fosfatasa alcalina) marcadores quimioluminiscentes; grupos biotinilados; epítopos de polipéptido predeterminados reconocidos por un agente de reporte secundario (por ejemplo, secuencias de par de cierre de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión de metal, etiquetas de epítopo); y agentes magnéticos, tales como quelatos de gadolinio.
El término "conjugado de anticuerpo" se refiere a una proteína de unión, tal como un anticuerpo, químicamente enlazada a una segunda porción química, tal como un agente terapéutico o citotóxico. El término "agente" se utiliza aquí para denotar un compuesto químico, una mezcla de compuestos químicos, una macromolécula biológica, o un extracto hecho de materiales biológicos. De preferencia los agentes terapéuticos o citotóxicos incluyen, pero no se limitan a, pertussis toxina, taxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colquicina, doxorubicina, daunorubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1 -deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, y puromicina y análogos u homólogos de los mismos. Los términos "cristal", y "cristalizado" como se utiliza aquí, se refiere a un anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, que existe en la forma de un cristal. Los cristales son una forma del estado sólido de la materia, que es distinto de otras formas tales como el estado sólido amorfo o el estado cristalino líquido. Los cristales están compuestos de arreglos regulares, de repetición, tridimensionales de átomos, ¡ones, moléculas (por ejemplo, proteínas tales como anticuerpos), o ensambles moleculares (por ejemplo, complejos de antígeno/anticuerpo). Estos arreglos tridimensionales están dispuestos de acuerdo con relaciones matemáticas específicas que son bien entendidas en el campo. La unidad fundamental, o bloque de construcción, que se repite en un cristal se denomina como la unidad asimétrica. La repetición de la unidad asimétrica en una disposición que se conforma a una simetría cristalográfica bien definida proporciona la "célula unitaria" del cristal. La repetición de la célula unitaria por traducciones regulares en las tres dimensiones proporciona el cristal. Ver, Giege, R. and Ducruix, A. Barrett, Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practical Approach, 2nd ea., pp. 20 1-16, Oxford University Press, New York, New York, (1999)." El término "polinucleótido" como se utiliza aquí, significa una forma polimérica de dos o más nucleótidos, ya sea ribonucleótidos o desoxinucleótidos o una forma modificada de cualquier tipo de nucleótido. El término incluye formas de estructura de cadena individual y doble de ADN pero preferiblemente es ADN de estructura de cadena doble. El término "polinucleótido aislado" como se utiliza aquí, significa un polinucleótido (por ejemplo, de origen genómico, ADNc, o sintético, o alguna combinación de los mismos) que, en virtud de su origen, el "polinucleótido aislado" no está asociado con todo o una porción de un polinucleótido con el cual el "polinucleótido aislado" se encuentra por naturaleza; esta operablemente enlazado a un polinucleótido que no está enlazado por naturaleza; o no ocurre por naturaleza como parte de una secuencia más grande. El término "vector", como se utiliza aquí, se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al cual ha sido enlazado. Un tipo de vector es un "plásmido", el cual se refiere a un bucle de ADN de estructura de cadena doble circular, en donde se pueden ligar segmentos adicionales de ADN. Otro tipo de vector es un vector viral, en donde se pueden ligar segmentos adicionales de ADN al genoma viral. Ciertos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula huésped en donde se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen bacteriano de replicación y vectores de mamífero episómicos). Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no episómicos) pueden ser integrados en el genoma de una célula huésped después de introducción en la célula huésped, y así se replican junto con el genoma huésped. Además, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de genes a los cuales están operativamente enlazados. Dichos vectores son denominados aquí como "vectores de expresión recombinante" (o simplemente, "vectores de expresión). En general, los vectores de expresión de utilidad en técnicas de ADN recombinantes están por lo regular en la forma de plásmidos. En la presente especificación, "plásmido" y "vector" pueden ser utilizados intercambiablemente ya que el plásmido es la forma más comúnmente utilizada del vector. Sin embargo, la invención pretende incluir otras formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovirus defectuosos de replicación, adenovirus y virus adeno-asociados), los cuales sirven como funciones equivalentes. El término "operablemente enlazado" se refiere a una yuxtaposición, en donde los componentes descritos están en una relación que les permite funcionar en su forma pretendida. Una secuencia de control "operablemente enlazada" a una secuencia de codificación está ligada de tal manera que la expresión de la secuencia de codificación se logra bajo condiciones compatibles con las secuencias de control. Las secuencias "operablemente enlazadas" incluyen tanto secuencias de control de expresión que son contiguas con el gen de interés como secuencias de control de expresión que actúan en trans o a una distancia para controlar el gen de interés. El término "secuencia de control de expresión" como se utiliza aquí, se refiere a secuencias de polinucleótido, las cuales son necesarias para efectuar la expresión y procesamiento de secuencias de codificación a las cuales están ligadas. Las secuencias de control de expression incluyen iniciación de transcripción apropiada, terminación, secuencias de promotor y de mejorador; señales de procesamiento de ARN eficientes tales como señales de empalme y de poliadenilación; secuencias que estabilizan ARNm citoplásmico; secuencias que mejoran la eficiencia de traducción (es decir, secuencia de consenso de Kozak); secuencias que mejoran la estabilidad de proteína; y cuando se desea, secuencias que mejoran la secreción de proteína. La naturaleza de dichas secuencias de control difiere dependiendo del organismo huésped; en procariotes, dichas secuencias de control generalmente incluyen secuencias de promotor, de sitio de unión ribosómico, y de terminación de transcripción; en eucariotes, generalmente dichas secuencias de control incluyen secuencia de promotores y terminación de transcripción. El término "secuencias de control" pretende incluir componentes cuya presencia es esencial para la expresión y procesamiento, y también pueden incluir componentes adicionales cuya presencia es ventajosa, por ejemplo, secuencias líderes y secuencias de patrón de fusión. "Transformación", como se utiliza aquí, se refiere a cualquier proceso a través del cual el ADN exógeno entra a una célula huésped. La transformación puede ocurrir bajo condiciones naturales o artificiales utilizando varios métodos bien conocidos en la técnica. La transformación puede basarse en cualquier método conocido para la inserción de secuencias de ácido nucleico extraño en una célula huésped procariótica o eucariótica. El método se selecciona basándose en la célula huésped que va a ser transformada y puede incluir, pero no se limita a, infección viral, electroporación, lipofección y bombardeo de partículas. Dichas células "transformadas" incluyen células establecidamente transformadas en donde el ADN insertado es capaz de replicación ya sea como un plásmido autónomamente de replicación o como parte del cromosoma huésped. También incluyen células que expresan en forma pasajera el ADN o ARN insertado durante periodos limitados de tiempo. El término "célula huésped recombinante" (o simplemente "célula huésped"), como se utiliza aquí, se refiere a una célula en donde el ADN exógeno ha sido introducido. Se debe entender que dichos términos pretenden referirse no solamente a la célula particular, sino que más bien a la progenie de dichas células. Ya que pueden ocurrir ciertas modificaciones en generaciones subsiguientes debido a sus influencias de mutación o ambientales, dicha progenie en realidad no puede ser idéntica a la célula de origen, pero también se incluyen dentro del alcance del término "célula huésped" como se utiliza aquí. De preferencia, las células huésped incluyen células procarióticas y eucarióticas seleccionadas de cualquiera de los Reinos de la vida. Las células eucarióticas preferidas incluyen células protistas, fúngicas, vegetales y animales. Muy preferiblemente, las células huésped incluyen, pero no se limitan a la línea de célula procariótica E.Coli; líneas de célula de mamífero CHO, HEK 293 y COS; la línea de célula de insecto Sf9; y la célula fúngica Saccharomyces cerevisiae. Se pueden utilizar técnicas estándares para ADN recombinante, síntesis de olígonucleótido, y cultivo y transformación de tejido (por ejemplo, electroporación, lipofección). Se pueden realizar reacciones enzimáticas y técnicas de purificación de acuerdo con las especificaciones del fabricante o como comúnmente se logra en la técnica o como se describe aquí. Las técnicas anteriores y procedimientos en general se pueden realizar de acuerdo con métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se citan y se discuten a través de la presente especificación. Ver, por ejemplo, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)), la cual se incorporan aquí por referencia para cualquier propósito. "Organismo transgénico", como se conoce en la técnica y como se utiliza aquí, se refiere a un organismo que tiene células que contienen un transgen, en donde el transgen introducido en el organismo (o un ancestro del organismo) expresa un polipéptido no naturalmente expresado en el organismo. Un "transgen" es una construcción de ADN, la cual está estable y operablemente integrada en el genoma de una célula a partir de la cual se desarrolla un organismo transgénico, dirigiendo la expresión de un producto de gen codificado en uno o más tipo de célula o tejido del organismo transgénico. El término "regular" y "modular" se utiliza intercambiablemente, y, como se utiliza aquí, se refiere a un cambio o a una alteración en la actividad de una molécula de interés (por ejemplo, la actividad biológica de hlL-12). La modulación puede ser un incremento o una reducción en la magnitud de cierta actividad o función de la molécula de interés. Actividades y funciones ilustrativas de una molécula incluyen, pero no se limitan a, características de unión, actividad enzimática, activación de receptor de célula, y transducción de señal. Correspondientemente, el término "modulador," como se utiliza aquí, es un compuesto capaz de cambiar o alterar una activad o función de una molécula de interés (por ejemplo, la actividad biológica de hlL-12). Por ejemplo, un modulador puede ocasionar un incremento o reducción en la magnitud de cierta actividad o función de una molécula comparado con la magnitud de la actividad o función observada en ausencia del modulador. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor, el cual reduce la magnitud de por lo menos una actividad o función de una molécula. Inhibidores ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, proteínas, péptidos, anticuerpos, pepticuerpos, carbohidratos o moléculas orgánicas pequeñas. Los pepticuerpos se describen en, por ejemplo, 5 El término "agonista", como se utiliza aquí, se refiere a un modulador que, cuando hace contacto con una molécula de interés, ocasiona un incremento en la magnitud de cierta actividad o función de la molécula, comparado con la magnitud o función de la actividad observada en ausencia del agonista Los agonistas particulares de interés pueden incluir, pero no se limitan a, polipéptidos de IL-12 o po péptidos, ácido nucleicos, carbohidratos, o cualquier otra molécula que se una a hlL-12 El término "antagonista" o "inhibidor", como se utiliza aquí, se refiere a un modulador que, cuando hace contacto con una molécula de interés, ocasiona una reducción en la magnitud de cierta actividad o función de la molécula comparado con la magnitud de la actividad o función observada en ausencia del antagonista Antagonistas de interés particulares incluyen aquellos que bloquean o modula la actividad biológica o mmunológica de hlL-12 y/o h I L-23 Los antagonista e inhibidores de hlL-12 y/o hlL-23 pueden incluir, pero no se limitan a, proteínas, ácido nucleico, carbohidratos, o cualquier otra molécula, que se una s hlL-12 y/o hlL-23 Como se utiliza aquí, el término "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad de una terapia que es suficiente para reducir o mitigar la severidad y/o duración de un trastorno o uno o más de sus síntomas, evitar el avance de una enfermedad, ocasionar la regresión de una enfermedad, evitar la recurrenaa, desarrollo, inicio o progresión de uno o más síntomas asociados con un trastorno, detectar un trastorno, o mejorar el ejemplo(s) profiláctico o terapéutico de otra terapia (por ejemplo, agente profiláctico o terapéutico). El término "muestra", como se utiliza aquí, se utiliza en su sentido más amplio. Una "muestra biológica", como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a, cualquier cantidad de una sustancia de una cosa viviente o de una cosa antiguamente viviente. Dichas cosas vivientes incluyen, pero no se limita a, seres humanos, ratones, ratas, monos, perros, conejos y otros animales. Dichas sustancias incluyen, pero no se limitan a, sangre, suero, orina, fluido sinovial, células, órganos, tejidos, médula ósea, nodos linfáticos y bazo. 0. Anticuerpos que unen IL-12p40 humana. Un aspecto de la presente invención proporciona anticuerpos monoclonales de murino aislados, o sus porciones de unión a antígenos, que se unen a I L- 12p40 con alta afinidad, una lenta velocidad de apagado y alta capacidad de neutralización. Un segundo aspecto de la invención proporciona anticuerpos quiméricos que unen IL-12p40. Un tercer aspecto de la invención proporciona anticuerpo injertados con CDR, o sus porciones de unión a antígeno, que unen I L-12p40. Un cuarto aspecto de la invención proporciona anticuerpos humanizados, o sus porciones de unión de antígeno, que unen, I L-12p40. De preferencia, los anticuerpos, o sus porciones son anticuerpos aislados. Preferiblemente, los anticuerpos de la invención son anticuerpos anti-l L-12 humana y/o anti-IL-23 humana de neutralización.
A. [Método para hacer anticuerpos anti iL-12p4Q Los anticuerpos de la presente invención pueden hacerse de un número de técnicas conocidas en el campo. 1. Anticuerpos monoclonales anti-iL-12 p40 utilizando tecnología de Hibridoma Se pueden preparar anticuerpos monoclonales utilizando una amplia variedad de técnicas conocidas en el campo, incluyendo el uso de hibridoma, tecnologías recombinantes y de representación de fago, o una combinación de los mismos. Por ejemplo, se pueden producir anticuerpos monoclonales utilizando técnicas de hibridoma incluyendo aquellas conocidas en el campo y enseñadas por, por ejemplo, Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies y T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N. Y., 1981) (dichas referencias se incorporan aquí por referencia e su totalidad). El término "anticuerpo monoclonal" como se utiliza aquí, no está limitado a anticuerpos producidos por tecnología de hibridoma. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que se deriva de un clon individual, incluyendo cualquier clon eucariótico, procariótico, o de fago, y no el método a través del cual se produce. Los métodos para producir y clasificar anticuerpos específicos utilizando tecnología de hibridoma son rutinarios y bien conocidos en la técnica. En una modalidad, la presente invención proporciona métodos para generar anticuerpos monoclonales así como anticuerpos producidos por el método que comprende cultivar una célula de hibpdoma que secreta un anticuerpo de la invención en donde, preferiblemente, el hibpdoma es generado fusionando esplenoatos aislados de un ratón inmunizado con un antígeno de la invención con células de mieloma y después clasificando los hibpdomas que resultan de la fusión para clones de hibpdoma que secretan un anticuerpo capaz de unir un pohpéptido de la invención (Ver Ejemplo 1 2) En resumen, se pueden inmunizar ratones con un antígeno de IL-12 En una modalidad preferida, el antígeno de IL-12 se administra con un auxiliar y para estimular la respuesta inmune Dichos auxiliares incluyen auxiliar de Freund completo o incompleto, RIBI (dipéptidos de muramilo) o ISCOM (complejos inmunoestimulantes) Dichos auxiliares pueden proteger al polipéptido de una rápida dispersión secuestrándolo en un depósito local, o pueden contener sustancias que estimulen al huésped para secretar factores que sean quimiotácticos para macrófagos y otros componentes del sistema inmune De preferencia, si un pohpéptido va a ser administrado, el programa de inmunización involucrará dos o más administraciones del pol ipépt ido , extendidas durante varias semanas Después de la inmunización de un animal con un antígeno IL-12, se pueden obtener anticuerpos y/o células de producción de anticuerpo a partir del animal Se obtiene un suero que contiene el anticuerpo ant?-IL-12 del animal sangrando o sacrificando al animal El suero puede ser utilizado como se obtiene el animal, se puede obtener una fracción de inmunoglobuhna del suero, o los anticuerpos a nt i-l L- 12 pueden ser purificados del suero El suero o inmunoglobulinas obtenidas de esta manera son policlonales, teniendo así un arreglo heterogéneo de propiedades. Una vez que se detecta una respuesta inmune, por ejemplo, anticuerpos específicos para el antígeno IL-12 son detectados en el suero de ratón, el vaso de ratón es cosechado y los esplenoatos aislados. Los esplenoatos después se fusionan a través de técnicas bien conocidas para cualquiera de las células de mieloma adecuadas, por ejemplo células de una línea de célula SP20 disponible de ATCC Los hibpdomas se seleccionan y se clonan a través de dilución limitada Los clones de hibpdoma después son analizados a través de métodos bien conocidos en la técnica para células que secreten anticuerpos capaces de unir IL-12 Se puede generar fluido de asatos, el cual generalmente contiene altos niveles de anticuerpo, inmunizando ratones con clones de hibridoma positivos. En otra modalidad, se pueden preparar hibridomas inmortalizados de producción de anticuerpo a partir del animal inmunizado Después de la inmunización, el animal es sacrificado y se fusionan las células B esplénicas a células de mieloma inmortalizadas como es bien conocido en la técnica. Ver, por ejemplo, Harlow and Lañe, supra En una modalidad preferida, las células de mieloma no secretan polipéptidos de inmunoglobulina (una línea de célula no secretoria). Después de la fusión y selección antibiótica, los hibridomas son clasificados utilizando IL-12, o una porción de la misma, o una célula que expresa IL-12. En una modalidad preferida, la clasificación inicial se realiza utilizando un inmunoensayo enlazado a enzima (ELISA) o un radioinmunoensayo (RÍA), preferiblemente un ensayo ELISA. Un ejemplo de clasificación de ELISA se proporciona en WO 00/37504, incorporada aquí por referencia. Se seleccionan hibridomas de producción del anticuerpo anti-IL-12p40, se clonan y además se clasifican para características deseadas, incluyendo crecimiento de hibridoma robusto, alta producción de anticuerpo y características de anticuerpo deseables, como se discute más adelante. Los hibridomas pueden ser cultivados y expandido in vivo en animales singeneicos, en animales que carecen de un sistema inmune, por ejemplo, ratones, sin pelo, o en cultivo de célula in vitro. Los métodos para clasificar, clonar y expandir hibridomas son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. En una modalidad preferida, los hibridomas son hibridomas de ratón, como se describe anteriormente. En otra modalidad preferida, los hibridomas son producidos en una especie que no es un ser humano, que no es un ratón, tal como ratas, ovejas, cerdos, cabras, ganado o caballos. En otra modalidad, los hibrídomas son hibridomas humanos, en donde un mieloma de no secreción humano es fusionado con una célula humana que expresa un anticuerpo anti-IL- 12. Los fragmentos de anticuerpo que reconocen epítopos específicos pueden ser generados a través de técnicas conocidas. Por ejemplo, se pueden producir fragmentos de Fab y F(ab')2 de la invención a través de escisión proteolítica de moléculas de inmunoglobulina, utilizando enzimas tales como papaína (para producir fragmentos de Fab) o pepsina (para producir fragmentos de F(ab')2). Los fragmentos de F(ab')2 contienen la región variable, la región constante de cadena ligera y el dominio CHI de la cadena pesada. 2. Anticuerpos monoclonales anti-il-12p4Q utilizando SLAM En otro aspecto de la invención, se generan anticuerpos recombinantes a partir de linfocitos individuales, aislados utilizando un procedimiento denominado en la técnica como método de anticuerpo de linfocito seleccionado (SLAM), como se describe en la Patente de E.U.A. No. 5,627,052, Publicación de PCT WO 92/02551 y Babcock, J.S. et al. (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:7843-7848. En este método, las células individuales que secretan anticuerpos de interés, por ejemplo, linfocitos derivados de cualquiera de los animales inmunizados descritos en la Sección 1, se clasifican utilizando un ensaño de placa hemolítica de antígeno específico, en donde el antígeno IL-12, una sub-unidad de IL-12, o fragmento del mismo, se acopla a glóbulos rojos de oveja utilizando un enlazador, tal como biotina, y se utilizan para identificar células individuales que secretan anticuerpos con carácter específico para IL-12. Después de la identificación de células de interés que secretan anticuerpo, se rescatan los ADNcs de región variable de cadena pesada y ligera de las células a través de transfectasa inversa-PCR y estas regiones variables después pueden ser expresadas, en el contexto de regiones constantes de inmunoglobulina apropiadas (por ejemplo, regiones constantes humanas) en células huésped de mamífero, tales como células COS o CHO. Las células huésped transfectadas con las secuencias de inmunoglobulina amplificadas, derivadas in vivo de linfocitos seleccionados, después pueden experimentar otro análisis y selección in vitro, por ejemplo, tomando una panorámica de las células transfectadas para aislar células que expresan los anticuerpos a IL-12 Las secuencias de inmunoglobulina amplificadas además pueden ser manipuladas in vitro, tal como a través de métodos de maduración de afinidad in vitro tales como aquellos descritos en la Publicación de PCT WO 97/29131 y Publicación de PCT WO 00/56772 3. Anticuerpos monoclonales anfi-DL-12p4Q utilizando animales transgénocos En otra modalidad de la presente invención, se producen anticuerpos inmunizando un animal que no es un ser humano que comprenden algunos o todos de los sitios de inmunoglobulina humana con un antígeno IL-12. En una modalidad preferida, el animal que no es un ser humano es un ratón transgénico XENOMOUSE, una cepa de ratón diseñada por ingeniería que comprende fragmentos grandes de los sitios de ipmunoglobulina humana y es deficiente en producción de anticuerpo de ratón. Ver, por ejemplo, Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994) y Patentes de E.U.A. 5,916,771, 5,939,598, 5,985,615, 5,998,209, 6,075,181, 6,091,001, 6,114,598 y 6,130,364. También ver WO 91/10741, publicada el 25 de Julio de 1991, WO 94/02602, publicada el 3 de febrero de 1994, WO 96/34096 y WO 96/33735, ambas publicadas el 31 de octubre de 1996, WO 98/16654, publicada el 23 de abril de 1998, WO 98/24893, publicada el 11 de junio de 1998, WO 98/50433, publicada el 12 de noviembre de 1998, WO 99/45031, publicada el 10 de septiembre de 1999, WO 99/53049, publicada el 21 de octubre de 1999, WO 0009560, publicada el 24 de febrero de 2000 y WO 00/037504, publicada el 29 de junio del 2000. El ratón transgénico XENOMOUSE produce un repertorio humano de tipo adulto de anticuerpos totalmente humanos, y genera Mabs humanos de antígeno específico. El ratón transgénico XENOMOUSE contiene aproximadamente 80% del repertorio de anticuerpo humano a través de la introducción de fragmentos YAC de configuración de línea germinal, dimensionados de megabase de los sitios de cadena pesada humanos y x sitios de cadena ligera. Ver Méndez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Green and Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495 (1998), las descripciones de las cuales se incorporan aquí por referencia. 4.. Anticuerpos tnonoclonales anti-OL-12 que utilizan colecciones de anticuerpo recombinante También se pueden utilizar métodos in vitro para hacer los anticuerpos de la invención, en donde una colección de anticuerpo es clasificada para identificar un anticuerpo que tiene el carácter específico de unión deseado. Los métodos para dicha clasificación de colecciones de anticuerpo recombinantes son bien conocidos en la técnica e incluyen métodos descritos en, por ejemplo, Ladner ef al. Patente de E.U.A. No. 5,223,409; Kang ef al. Publicación de PCT No. WO 92/18619; Dower ef al. Publicación de PCT No. WO 91/17271; Winter ef al. Publicación de PCT No. WO 92/20791; Markland ef al. Publicación de PCT No. WO 92/15679; Breitling et al. Publicación de PCT No. WO 93/01288; McCafferty ef al. Publicación de PCT No. WO 92/01047; Garrard ef al. Publicación de PCT No. WO 92/09690; Fuchs ef al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay ef al. (1992) Hum Antibody Hybridomas 3:81-85; Huse ef al. (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty ef al, Nature (1990) 348:552-554; Griffiths et al. (1993) EMBO J 11:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson ef al. (1991) Nature 352:624-628; Gram ef al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad ef al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom ef al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; y Barbas ef al. (1991) PNAS 8_8.:7978-7982, solicitud de publicación de Patente de E.U.A. 20030186374, y Publicación de PCT No. WO 97/29131, los contenidos de las cuales se incorporan aquí por referencia.
La colección de anticuerpo recombinante puede ser de un sujeto inmunizado con IL-12 o IL-23, o una porción de IL-12 o IL-23. Alternativamente, la colección de anticuerpo recombinante puede ser de un sujeto natural, es decir, uno que no haya sido inmunizado con IL-12 o IL-23, tal como una colección de anticuerpo humano de un sujeto humano que no ha sido inmunizado con IL-12 o I L-23 humana. Los anticuerpos de la invención se seleccionan clasificando la colección de anticuerpo recombinante con el péptido que comprende I L- 12p40 humana para seleccionar así aquellos anticuerpos que reconocen I L-12p40. Los métodos para conducir dicha clasificación y selección son bien conocidos en la técnica, tal como se describe en las referencias en el párrafo precedente. Para seleccionar anticuerpos de la invención que tienen afinidades de unión particulares para hlL-12, tales como aquellos que disocian de IL-12 humana con una constante de velocidad kapagaia particular, el método conocido en la técnica de resonancia de plasmón de superficie puede ser utilizado para seleccionar anticuerpos que tienen la constante de velocidad kapagada deseada. Para seleccionar anticuerpos de la invención que tienen una actividad de neutralización particular para hlL-12, tales como aquellos con una IC50 particular, se pueden utilizar métodos estándares conocidos en la técnica para determinar la inhibición de la actividad de hlL-12. En un aspecto, la invención se refiere a un anticuerpo aislado, o una porción de unión de antígeno del mismo, que une IL-12 humana y/o IL-23 humana. De preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo de neutralización. En varias modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo recombinante o un anticuerpo monoclonal. Por ejemplo, los anticuerpos de la presente invención también pueden ser generados utilizando varios métodos de presentación de fago conocidos en la técnica. En los métodos de presentación de fago, se presentan dominios de anticuerpo funcionales sobre la superficie de partículas de fago que llevan las secuencias de polinucleótido que los codifican. En particular, dicho fago puede ser utilizado para presentar dominios de unión de antígeno expresados de un repertorio o colección de anticuerpo de combinación (por ejemplo, humano o de murino). El fago que expresa un dominio de unión de antígeno que une el antígeno de interés puede ser seleccionado o identificado con el antígeno, por ejemplo, utilizando un antígeno marcado o un antígeno unido o capturado a una superficie sólida o perla. El fago utilizado en estos métodos típicamente es un fago filamentoso que ¡ncluye dominios de unión fd y M13 expresados del fago con dominios de anticuerpo de Fab, Fv o anticuerpo Fv estabilizado con disulfuro recombinantemente fusionados ya sea al gen lll del fago o proteína del gen VIII. Ejemplos de métodos de presentación de fago para hacer los anticuerpos de la presente invención incluyen aquellos descritos por Brinkman et al., J. Immunol. Methods 182:41-50 (1995); Ames et al., J. Immunol. Methods 184:177-186 (1995); Kettleborough et al., Eur. J. Immunol. 24:952-958 (1994); Persic et al., Gene 187 9-18 (1997); Burton et al., Advances in Immunology 57:191-280 (1994); solicitud de PCT No. PCT/GB91/01134; publicación de PCT WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; y Patentes de E.U.A.. Nos. 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780, 225; 5,658,727; 5,733,743 y 5,969,108; cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Como se describió en las referencias anteriores, después de la selección del fago, las regiones de codificación del anticuerpo del fago pueden ser aisladas y utilizadas para generar anticuerpos enteros incluyendo anticuerpo humanos o cualquier otro fragmento de unión de antígeno deseado, y expresarse en cualquier huésped deseado, incluyendo células de mamífero, células de insecto, células de vegetales, levadura, y bacterias, por ejemplo, como se describe con detalle más adelante. Por ejemplo, las técnicas para producir recombinantemente fragmentos Fab, Fab' y F(ab')2 también pueden ser empleadas utilizando métodos conocidos en la técnica tales como aquellos descritos en la publicación de PCT WO 92/22324; Mullinax et al., BioTechniques 12(6): 864-869 (1992); and Sawai et al., AJRI 34:26-34 (1995); and Better et al., Science 240:1041-1043 (1988) (dichas referencias se incorporan aquí por referencia en su totalidad). Ejemplos de técnicas que pueden ser utilizadas para producir Fvs de cadena individual y anticuerpos incluyen aquellas descritas en la Patente de E.U.A. 4,946,778 y 5,258, 498; Huston et al., Methods in Enzymology 203:46-88 (1991); Shu et al., PNAS 90:7995-7999 (1993); and Skerra et al., Science 240:1038-1040 (1988). Alternativa a la clasificación de colecciones de anticuerpo recombinante a través de presentación de fago, otras metodologías conocidas en la técnica para clasificar grandes colecciones de combinación pueden ser aplicadas a la identificación de anticuerpos de carácter específico doble de la invención. Un tipo de sistema de expresión alternativo es uno en donde la colección de anticuerpo recombinante expresada como fusiones de ARN-proteína, como se describe en la Publicación de PCT No. WO 98/31700 por Szostak and Roberts, y en Roberts, R.W. y Szostak, J.W. (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:12297-12302. En este sistema, se crea una fusión covalente entre un ARNm y el péptido o proteína que codifica a través de traducción in vitro de ARNms sintéticos que llevan puromicina, un antibiótico aceptor peptidílico, en su extremo 3'. De esta manera, un ARNm específico puede ser enriquecido a partir de una mezcla compleja de ARNms (por ejemplo, una colección de combinación) basándose en las propiedades del péptido o proteína codificada, por ejemplo, anticuerpo, o su porción, tal como la unión del anticuerpo, o su porción, al antígeno de carácter específico doble. Las secuencias de ácido nucleico que codifican anticuerpos, o sus porciones, recuperadas de la clasificación de tales colecciones pueden ser expresadas a través de medios recombinantes como se describe anteriormente (por ejemplo, en células huésped de mamífero) y, además, pueden ser sometidas a maduración de afinidad adicional a través de rondas adicionales de clasificación de fusiones de ARNm-péptido en donde se han introducido mutaciones en la secuencia(s) originalmente seleccionada, o a través de otro métodos para maduración de afinidad in vitro de anticuerpos recombinantes, como se describe anteriormente. En otro aspecto, los anticuerpos de la presente invención también pueden ser generados utilizando métodos de presentación de levadura conocidos en el campo. En los métodos de presentación de levadura, se utilizan métodos genéticos para la cautividad de dominios de anticuerpo a la pared de célula de levadura y presentarlo sobre la superficie de levadura. En particular, dicha levadura puede ser utilizada para presentar dominios de unión de antígeno expresados a partir de un repertorio o colección de anticuerpo de combinación (por ejemplo, humano o murino). Ejemplos de métodos de presentación de levadura que pueden ser utilizados para ser los anticuerpos de la presente invención incluyen aquellos descritos por Wittrup, et al. Patente de E.U.A. No. 6,699,658 incorporada aquí por referencia.
B. Producción de anticuerpos iL-12p40 recombinante Los anticuerpos de la presente invención pueden ser producidos a través de cualquier número de técnicas conocidas el campo. Por ejemplo, la expresión de células huésped, en donde el vector(es) de expresión que codifica las cadenas pesada y ligera es transfectado a una célula huésped a través de técnicas estándares.
Las varias formas del término "transfección" pretenden abarcar una amplia variedad de técnicas comúnmente utilizadas para la introducción de ADN exógeno en una célula huésped procariótica o eucariótica, por ejemplo, electroporación, precipitación de fosfato de calcio, transfección de DEAE-dextrana y similares. Aunque es posible expresar los anticuerpos de la invención ya sea en células huésped procarióticas o eucarióticas, la expresión de anticuerpos en células eucarióticas es preferible, y de preferencia en células huésped de mamífero, ya que dichas célula eucarióticas (y en particular células de mamífero) se ensamble mejor que las células procarióticas y secreten un anticuerpo inmunológicamente activo, apropiadamente doblado. Las células huésped de mamífero preferidas para expresar los anticuerpos recombinantes de la invención incluyen Ovario de Hámster Chino (células CHO) (incluyendo células dhfr-CHO, descritas por Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 7-7:4216-4220, utilizadas con un marcador seleccionable de DHFR, por ejemplo, como se describe en R.J. Kaufman and P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621). células de mieloma NSO, células COS y células SP2. Cuando los vectores de expresión recombinantes que codifican genes de anticuerpo son introducidos en células huésped de mamífero, los anticuerpos son producidos cultivando las células huésped durante un período suficiente de tiempo para permitir la expresión del anticuerpo en las células huésped o, muy preferiblemente, la secreción del anticuerpo en el medio de cultivo en donde se desarrollan las células huésped. Los anticuerpos pueden ser recuperados a partir del medio de cultivo utilizando métodos de purificación de proteína estándar. También se pueden utilizar células huésped para producir fragmentos de anticuerpo funcional, tales como fragmentos Fab o moléculas scFv. Se entenderá que las variaciones en el procedimiento anterior están dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, puede ser deseable transfectar una célula huésped con fragmentos funcionales que codifican ADN de cadena ligera y/o cadena pesada de un anticuerpo de esta invención. También se puede utilizar tecnología de ADN recombinante para remover algo o todo el ADN que codifica a cualquiera o ambas de las cadenas pesada y ligera que no son necesarias para la unión a los antígenos de interés. Las moléculas expresadas de dichas moléculas de ADN truncado también son abarcadas por los anticuerpos de la invención. Además, se pueden producir anticuerpos bifuncionales en donde una cadena pesada y una ligera son un anticuerpo de la invención y la otra cadena pesada y la ligera son específicas para un antígeno diferente a los antígenos de interés que entrelazan un anticuerpo de la invención a un segundo anticuerpo a través de métodos de entrelazamiento químicos estándares. En un sistema preferido para expresión recombinante de un anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, de la invención, un vector de expresión recombinante que codifica tanto la cadena pesada de anticuerpo como la cadena ligera de anticuerpo es introducido en células dhfr-CHO a través de transfección mediada por fosfato de calcio. Dentro del vector de expresión recombinante, los genes de cadena ligera y pesada del anticuerpo son cada uno operativamente enlazado a elementos reguladores del mejorador CMV/promotor AdMLP para conducir altos niveles de transcripción de los genes. El vector de expresión recombinante también lleva un gen DHFR, que permite la selección de células CHO que han sido transfectadas con el vector utilizando selección/amplificación de metotrexato. Las células huésped transformantes seleccionadas son cultivadas para permitir la expresión de las cadena pesada y ligera del anticuerpo y el anticuerpo intacto es recuperado del medio de cultivo. Se utilizan técnicas de biología molecular estándares para preparar el vector de expresión recombinante, transfectar las células huésped, seleccionar para transformantes, cultivar las células huésped y recuperar el anticuerpo del medio de cultivo. Aún más, la invención proporciona un método para sintetizar un anticuerpo recombinante de la invención cultivando una célula huésped de la invención en un medio de cultivo adecuado hasta que se sintetiza un anticuerpo recombinante de la invención. El método puede comprender además aislar el anticuerpo recombinante del medio de cultivo. 1. Anticuerpos anti IL-12p40 El Cuadro 5 es una lista de secuencias de aminoácido de regiones VH y VL de anticuerpos anti-hlL-12p40 de la invención.
Cuadro 5: Lista de Secuencias de Aminoácido de regiones VH y VL Las secuencias de CDR de anticuerpo anti-IL-12p40 aisladas anteriores establecen una familia novedosa de proteínas de unión IL-12p40, aisladas de acuerdo con esta invención, y que comprenden polipéptidos que incluyen las secuencias de CDR listadas en el Cuadro 6 más adelante. Para generar y seleccionar CDR de la invención teniendo actividad de unión y/o neutralización I L-12p40 preferida con respecto a hlL-12 y o hlL-23, se pueden utilizar métodos estándares conocidos en la técnica para generar proteínas de unión de la presente ¡nvención y determinar las características de unión y/o de neutralización de IL-12 y o I L-23 de aquellas proteínas de unión, incluyendo pero no limitándose a aquellas específicamente descritas aquí.
Cuadro d: Ligandos de afinidades CDR de IL-12p40 CDR de consenso (residuos alternativos se enlistan debajo de cada posición de aminoácido Andica residuo que puede estar ausente). 2. Anticuerpos quiméricos anti IL-12p4Q Un anticuerpo quimérico es una molécula en donde diferentes porciones del anticuerpo son derivadas de diferentes especies de animal, tal como anticuerpos que tienen una región variable derivada de un anticuerpo monoclonal de murino y una región constante de inmunoglobulina humana. Los métodos para producir anticuerpos quiméricos son conocidos en la técnica y se discuten con detalle en el Ejemplo 2.1. Ver, por ejemplo, Morrison, Science 229:1202 (1985); Oi et al, BioTechniques 4:214 (1986); Gillies et al., (1989) J. Immunol. Methods 125:191-202; las Patentes de E.U.A. Nos. 5,807,715; 4,816,567; y 4,816,397, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Además, las técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos" (Morrison et al., 1984, Proc. Nati. Acad. Sci. 81:851-855; Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608; Takeda et al., 1985, Nature 314:452-454 las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad) empalmando genes de una molécula de anticuerpo de ratón de carácter específico de antígeno apropiado junto con genes de una molécula de anticuerpo humano de actividad biológica apropiada, pueden ser utilizadas. En una modalidad, los anticuerpos quiméricos de la invención son producidos reemplazando la región constante de cadena pesada de los anticuerpos IL-12 anti-humana monoclonales de murino descritos en la sección 1 con una región constante de IgG 1 humana. En una modalidad específica, el anticuerpo quimérico de la invención comprende una región variable de cadena pesada (VH) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 35; SEC ID NO: 37; SEC ID NO: 39; SEC ID NO: 41; SEC ID NO: 43; SEC ID NO: 45; SEC ID NO: 47; SEC ID NO: 49; SEC ID NO: 51; o SEC ID NO: 53 y una región variable de cadena ligera (V ) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 36; SEC ID NO: 38; SEC ID NO: 40; SEC ID NO: 42; SEC ID NO: 44; SEC ID NO: 46; SEC ID NO: 48; SEC BD NO: 50; SEC ID NO: 52; o SEC ID NO: 54. 3. Amíicuerpos injertados de CDR anti-IL-12p4Q Los anticuerpos injertados con CDR de la invención comprenden secuencias de una región variable de cadena pesada y ligera de un anticuerpo humano en donde uno o más de las regiones de CDR de VH y/o VL son reemplazadas con secuencias de CDR de los anticuerpos de murino de la invención. Una secuencia de estructura de cualquier anticuerpo humano puede servir como la plantilla para el injerto de CDR. Sin embargo, el reemplazo de cadena recta en dicha estructura por lo regular conduce a una pérdida de afinidad de unión al antígeno. Entre más homólogo un anticuerpo humano es al anticuerpo de murino original, menor es la posibilidad de que la combinación de CDR de murino con la estructura humana introducirá distorsiones en la CDR que puedan reducir la afinidad. Por lo tanto, se prefiere que la estructura variable humana que es elegida para reemplazar la estructura variable de murino además de la CDR tenga por lo menos un 65% de identidad de secuencia con la estructura de región variable de anticuerpo de murino. Es muy preferido que las regiones variables humanas y de murino además de la CDR tengan por lo menos 70% de identidad de secuencia. Es aún muy preferiblemente que las regiones variables humanas y de murino además de las CDRs tengan por lo menos 75% de identidad de secuencia. Es muy preferible que las regiones variables humanas y de murino además de las CDRs tengan por lo menos 80% de identidad de secuencia. Los métodos para producir anticuerpos quiméricos son conocidos en la técnica y se discuten con detalle en el Ejemplo 2.2. (también ver EP 239,400; publicación de PCT WO 91/09967; Patentes de E.U.A. Nos. 5,225,539; 5,530,101; y 5,585,089), revestimiento o rehacer superficie (EP 592,106; EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska et al., PNAS 91:969-973 (1994)), y cadena promiscua (Patente de E.U.A. No. 5,565,352). En una modalidad específica, la invención proporciona anticuerpos injertados de CDR con cadenas VH y/o VL como se describe en el Cuadro 7.
CUADRO 7: Anticuerpos injertados con CDR 4. A mi ti cuerpos humanizados aní?-llL-12p40 Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo de anticuerpo de especie no humana que une el antígeno deseado que tiene una o más regiones de determinación de complementaridad (CDRs) de la especie no humana y regiones de de estructuras de una molécula de inmunoglobulina humana. Las secuencias de Ig humana conocidas se describen en, por ejemplo, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.sciquest.com/; www.abcam.com/; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www. publ i ciastate.edu/. a bout.pedro/resea rch_tools.html; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html; www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm; www.library.thinkquest.org/12429/lmmune/Antibody.html; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/; www. path. cam. ac.uk/. about. mrc7/m-i keim ages, htm I; www.antibodyresource.com/; mcb.harvard.edu/BioLinks/lmmunology.html. www.immunologylink.com/; pathbox.wustl.edu/. about. hcenter/ index. html; www. biotech. ufl.edu/. about. hcl/; www.pebio.com/pa/340913/340913. html-; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibodv/; www.rn.ehime-u.acjp/. about. yasuhito-/Elisa. html; www.biodesign.com/table.asp; www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html; www. biotech. ufl.edu/. a bout.fccl/protocol. htm I; www.isac-net.org/sites geo. html; aximtl. imt.uni-marburg.de/. about. rek/AEP-Start. html; base rv. uci.kun.nl/. about. jraats/l inksl . html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html; www.ibt.unam.mx/vir/V mice.html; imgt.cnusc.fr:8104/; www. biochem. ucl.ac.uk/. about. martin/abs/index. html; antibody.bath.ac.uk/; abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html; www.unizh.ch/.about.honegger/AHOseminar/Sli eOl .html; www.cryst.bbk.ac.Uk/.about.ubcg07s/; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm; www. pat h. cam. ac.uk/. about. mrc7/humanisation/TAHHP. html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www, cryst. bioc.ca .ac.u /. abo-ut.fmol i n a/Web -paqes/Pept/ spo ttech.html; www.jerini.de/fr roducts.htm; www.patents.ibm.com/ibm.html.Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), cada una incorporada aquí por referencia. Dichas secuencias importadas pueden ser utilizadas para reducir la inmunogenicidad o reducir, o mejorar o modificar la unión, afinidad, velocidad de encendido, velocidad de apagado, avidez, carácter específico, vida media o cualquier característica adecuada adicional, como es conocido en la técnica. Los residuos de estructuras en las regiones de estructuras humanas pueden ser sustituidos con el residuo correspondiente del anticuerpo donador de CDR para operar, preferiblemente mejorar, la unión de antígeno. Estas sustituciones de estructura son identificadas a través de métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, modelando las interacciones de los residuos de CDR y de estructura para identificar residuos de estructura importantes para la unión de antígeno y comparación de secuencia para identificar residuos de estructura inusuales en posiciones particulares. (Ver, por ejemplo, Queen et al., Patente de E.U.A. No. 5,585,089; Riechmann et al., Nature 332:323 (1988), la cual se incorporan aquí por referencia en su totalidad.) Comúnmente están disponibles modelos de inmunoglobulina tridimensionales y son familiares para aquellos expertos en el campo. Están disponibles programas de computadora que ilustran y presentan estructuras conformacionales tridimensionales probables de secuencias de ¡nmunoglobulina candidatas seleccionadas. La inspección de estas presentaciones permite el análisis del probable papel de los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el análisis de residuos que tienen influencia en la habilidad de la inmunoglobulina candidata para unir su antígeno. De esta manera, se pueden seleccionar residuos FR y combinarse a partir de secuencias de consenso y de importación, de manera que la característica de anticuerpo deseada, tal como una afinidad incrementada para el antígeno(s) objetivo, es obtenida. En general, los residuos de CDR están directa y muy sustancialmente involucrados en la influencia de la unión de antígeno. Los anticuerpos pueden ser humanizados utilizando una variedad de técnicas conocidas en el campo, tales como, pero no limitándose a aquellas descritas por Jones et al., Nature 321:522 (1986); Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Cárter et al., Proc. Nati. Acad. Sci. U S A. 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993), Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska. et al., PNAS 91:969-973 (1994); publicación de PCT WO 91/09967, PCT/:US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP 229246, EP 592,106; EP 519,596, EP 239,400, Patentes de E.U.A. Nos. 5,565,332, 5,723,323, 5,976,862, 5,824,514, 5,817,483, 5814476, 5763192, 5723323, 5,766886, 5,714,352, 6,204,023, 6,180,370, 5,693,762, 5,530,101, 5,585,089, 5,225,539; 4,816,567, cada una completamente incorporada aquí por referencia, incluidas las referencias citadas ahí.
C. Producción de Anticuerpos y Líneas de Celóla d® Pirodycción de Anticuerpo Preferiblemente, los anticuerpos anti-IL-12p40 de la presente invención, exhiben una alta capacidad para reducir o para neutralizar la actividad de IL-12, por ejemplo, según determinado por uno de los varios ensayos in vitro e in vivo en la técnica (por ejemplo, ver Ejemplo 1.1. C). Por ejemplo, estos anticuerpos neutralizan la producción inducida por IL-12 de interferon-gamma a través de ráfagas de PHA con valores de IC5o en la escala de por lo menos aproximadamente 10' aproximadamente 10' aproximadamente 10'10 M. De preferencia, los anticuerpos anti- 1 L-12p40 de la presente invención, también exhiben una alta capacidad para reducir o neutralizar la actividad de IL-23 En modalidades preferidas, el anticuerpo aislado, o su porción de unión de antígeno, une I L- 12p40 humana, en donde el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, se disocia de IL-12p40 con una constante de velocidad a kapagad0 de aproximadamente 0.1s"1 o menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, 0 que inhibe la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10"6M o menos. Alternativamente, el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, puede disociarse de IL-12p40 humana con una constante de velocidad kapagaC|0 de aproximadamente 1 x 10'2S'1 o menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, o puede inhibir la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10"7M o menos. Alternativamente, el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, puede disociarse de I L- 12p40 humana con una constante de velocidad kapagado de aproximadamente 1 x 10"V1 o menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, 0 puede inhibir IL-12 humana y/o t L-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10"8M o menos. Alternativamente, el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, puede disociarse de I L- 12p40 humana con una constante de velocidad kapaga o de aproximadamente 1 x 10"V o menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, o puede inhibir la actividad de IL-12 humana y/o I L-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10"9M o menos. Alternativamente, el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, puede disociarse de IL-12p40 humana con una constante de velocidad kapagad0 de aproximadamente 1 x 10'V1 o menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, o puede inhibir IL-12 y/o IL-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10" 0M o menos. Alternativamente, el anticuerpo, o su porción de unión de antígeno, puede disociarse de IL-12p40 humana con una constante de velocidad apaga o de aproximadamente 1 x 10"V1 ° menos, según determinado por resonancia de plasmón de superficie, o puede inhibir la actividad de IL-12 y/o IL-23 humana con una IC50 de aproximadamente 1 x 10"11M o menos. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende una región constante de cadena pesada, tal como una región constante de IgG 1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgE, IgM o IgD. De preferencia, la región constante de cadena pesada es una región constante de cadena pesada Ig G 1 o una región constante de cadena pesada lgG4. Además, el anticuerpo puede comprender una región constante de cadena ligera, ya sea una región constante de cadena ligera kappa o una región constante de cadena ligera lambda. De preferencia, el anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera kappa. Alternativamente, la porción de anticuerpo puede ser, por ejemplo, un fragmento de Fab o un fragmento Fv de cadena individual. Los reemplazos de residuos de aminoácido en la región Fc para alterar la función efectora de anticuerpo son conocidos en la técnica (Winter, eí al. PATENTES DE E.U.A NOS 5,648,260; 5624821). La porción Fc de un anticuerpo media varias funciones efectoras importantes, por ejemplo inducción de citocina, ADCC, fagocitosis, citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) y velocidad media/velocidad de eliminación de anticuerpo y complejos de antígeno-anticuerpo. En algunos casos, estas funciones efectoras son deseables para el anticuerpo terapéutico pero en otros casos pueden ser innecesarias o aún peligrosas, dependiendo de los objetivos terapéuticos Ciertos isotipos IgG humana, particularmente Ig G 1 e lgG3, median ADCC y CDC a través de la unión a Fc?Rs y Clq de complemento, respectivamente Los receptores Fc neonatales (FcRn) son los componentes críticos que determinan la vida media en circulación de los anticuerpos En otra modalidad más, por lo menos un residuo de aminoácido es reemplazado en la región constante del anticuerpo, por ejemplo, la región Fc del anticuerpo, de manera que se alteran las funciones afectoras del anticuerpo Una modalidad proporciona una proteína de unión marcada, en donde un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención es depvatizado en enlazado a otra molécula funcional (por ejemplo, otro péptido o proteína) Por ejemplo, una proteína de unión marcada de la invención puede ser derivada enlazando funclonalmente un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención (a través de acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente, o de otra forma) a una o más de otras entidades moleculares, tales como otro anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico o un diacuerpo), un agente detectable, un agente citotóxico, un agente farmacéutico, y/o una proteína o péptido que puede mediar y asociar el anticuerpo o porción de anticuerpo con otra molécula (tal como una región de núcleo de estreptavidina o un etiqueta de poli h istid i n a) Los agentes detectables útiles con los cuales un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención puede ser derivatizado, incluyen compuestos fluorescentes. Agentes detectables fluorescentes ilustrativos incluyen fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloruro de 5-dimetilamina-1-naftalensulfonilo, ficoeritrina y similares. Un anticuerpo también puede ser derivatizado con enzimas detectables, tales como fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano, oxidasa de glucosa y similares. Cuando un anticuerpo es derivatizado con una enzima detectable, se detecta agregando reactivos adicionales que la enzima utiliza para producir un producto de reacción detectable. Por ejemplo, cuando el agente detectable, peroxidasa de rábano en la presente, la adición de peróxido de hidrógeno y diaminobencidina conduce a un producto de reacción de color, el cual es detectable. Un anticuerpo también puede ser derivatizado con biotina, y detectado a través de medición indirecta de unión de avidina o estreptavidina. Otra modalidad de la invención proporciona una proteína de unión cristalizada. De preferencia, la invención se refiere a cristales de anticuerpos anti-IL-12p40 enteros y sus fragmentos, como se describe aquí, y formulaciones y composiciones que comprenden dichos cristales. En una modalidad, la proteína de unión cristalizada tiene una vida media mayor ¡n vivo que la contraparte soluble de la proteína de unión. En otra modalidad, la proteína de unión retiene actividad biológica después de cristalización. La proteína de unión cristalizada de la invención puede ser producida de acuerdo con métodos conocidos en la técnica y como se describe en WO 02072636, incorporada aquí por referencia. Otra modalidad de la invención, proporciona una proteína de unión glicosilada, en donde el anticuerpo o su porción de unión de antígeno comprende uno o más residuos de carbohidrato. La producción de proteína in vivo naciente puede experimentar otro procesamiento, conocido como modificación de post-traducción. En particular, se pueden agregar enzimáticamente residuos de azúcar (glicosilo) un procedimiento conocidos como glicosilación. Las proteínas resultantes que llevan cadenas laterales de oligosacárido covalentemente enlazadas son conocidas como proteínas glicosiladas o glicoproteínas. Los anticuerpos son glicoproteínas con uno o más residuos de carbohidrato en el dominio Fc, así como el dominio variable. Los residuos de carbohidrato en el dominio Fc tienen un efecto importante en la función efectora del dominio Fc, con un efecto mínimo en la unión de antígeno o vida media del anticuerpo (R. Jefferis, Biotechnol. Prog. 21 (2005), pp. 11-16). En contraste, la glicosilación del dominio variable puede tener un efecto en la actividad de unión del antígeno del anticuerpo. La glicosilación en el dominio variable puede tener un efecto negativo sobre la afinidad de unión de anticuerpo, probablemente debido a impedimento estérico (Co, M.S., et al., Mol. Immunol. (1993) 30:1361-1367), o dar como resultado una afinidad incrementada para el antígeno (Wallick, S.C., et al., Exp. Med. (1988) 168:1099-1109; Wright, A., et al., EMBO J. (1991) 10:2717 2723). Un aspecto de la presente invención está dirigido a generar mutantes de sitio de glicosilación en donde el sitio de glicosilación O- o N- enlazado de la proteína de unión ha sido mutado. Un experto en la técnica puede generar dichos mutantes utilizando tecnologías bien conocidas estándares. Los mutantes de sitio de glicosilación que retienen la actividad biológica pero han incrementado o reducido la actividad de unión son otro objeto de la presente invención. En otra modalidad más, la glicosilación del anticuerpo o porción de unión de antígeno de la ¡nvención es modificada. Por ejemplo, se puede hacer un anticuerpo aglicosilado (es decir, el anticuerpo carece de glicosilación). La glicosilación puede ser alterada, por ejemplo, para incrementar la afinidad del anticuerpo para el antígeno. Dichas modificaciones de carbohidrato pueden ser logradas, por ejemplo, alterando uno o más sitios de glicosilación dentro de la respuesta de anticuerpo. Por ejemplo, se pueden hacer una o más sustituciones de aminoácido que dan como resultado la eliminación de uno o más sitios de glicosilación de región variable para eliminar así la glicosilación en ese sitio. Dicha aglicosilación puede incrementar la afinidad del anticuerpo para antígeno. Dicho aspectos e describe con mayor detalle en la Publicación de PCT WO2003016466A2, y Patentes de E.U.A. Nos. 5,714,350 y 6,350,861, cada una de las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Además o alternativamente, se puede hacer un anticuerpo modificado de la invención que tenga un tipo alterado de glicosilación, tal como un anticuerpo hipofucosilado que tiene cantidades reducidas de residuos de fucosilo residuos o un anticuerpo que tiene estructuras GIcNAc de bisección incrementadas Se ha demostrado que dichos patrones de ghcosilacion alterados incrementan la habilidad de anticuerpos ADCC Dichas modificaciones de carbohidrato pueden lograrse, por ejemplo, expresando el anticuerpo en una célula huésped con maquinaria de glicosilación alterada Las células con maquinaria de ghcosi lación alterada han sido descritas en la técnica y pueden ser utilizadas como células huésped las cuales expresan anticuerpo recombinantes de la invención para producir así un anticuerpo con g cosilación alterada Ver, por ejemplo, Shields, R L et al (2002) J Biol Chem 277 26733-26740, Umana et al (1999) Nat Biotech 17 176-1, así como Solicitud de Patente Europea No EP 1,176,195, Publicaciones de PCT WO 03/035835, WO 99/54342 80, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad La ghcosilación de proteína depende de la secuencia de aminoácido de la proteína de interés, así como la célula huésped en donde se expresa la proteína Diferentes organismos pueden producir diferentes enzimas de ghcosilación (por ejemplo, ghcosiltransferasas y glicosidasas), y tener diferentes sustratos disponibles (azúcares de nucleótido) Debido a tales factores, el patrón de glicosilación de proteína y la composición de residuos de g I icos i lo pueden diferir dependiendo del sistema huésped en donde se expresa la proteina particular Los residuos de glicosilo útiles en la invención pueden incluir, pero no se limitan a, glucosa, galactosa, mañosa, fucosa, n-acetilglucosamina y ácido siálico. De preferencia, la proteína de unión glicosilada comprende residuos de glicosilo de manera que el patrón de glicosilación es humano. Es conocido por aquellos expertos en la técnica que una glicosilación de proteína diferente puede dar como resultado diferentes características de proteína. Por ejemplo, la eficacia de una proteína terapéutica producida en un huésped de microorganismo, tal como una levadura, y glicosilada utilizando la trayectoria endógena de levadura puede ser reducida comparada con aquella de la misma proteína expresada en una célula de mamífero, tal como una línea de célula CHO. Dichas glicoproteínas también pueden ser inmunogénicas en seres humanos y mostrar vida media reducida in vivo después de administración. Los receptores específicos en seres humanos y otros animales pueden reconocer residuos de glicosilo específicos y promover la rápida eliminación de la proteína de la corriente sanguínea. Otros efectos adversos pueden incluir cambios en el doblamiento de proteína, solubilidad, susceptibilidad a proteasas, tráfico, transporte, capacidad de formar compartimentos, secreción, reconocimiento por otras proteínas o factores, antigenicidad, o alergenicidad. Por consiguiente, un practicante puede preferir una proteína terapéutica con una composición específica y patrón de glicosilación, por ejemplo composición de glicosilación y patrón idéntico, o por lo menos similar, a aquel producido en células humanas o en las células de especie específica del animal destinado.
La expression de proteínas glicosiladas diferentes de aquellas de una célula huésped puede lograrse modificando genéticamente la célula huésped para expresar enzimas de glicosilación heterólogas. Al utilizar técnicas conocidas en el campo, un practicante puede generar anticuerpos o porciones de unión de antígenos de los mismos exhibiendo glicosilación de proteína humana. Por ejemplo, se han modificado genéticamente cepas de levadura para expresar enzimas de glicosilación de existencia no natural, de manera que las proteínas glicosiladas (glicoproteínas) producidas en estas cepas de levadura exhiben glicosilación de proteína idéntica a aquella de células de animal, especialmente células humanas (solicitudes de patente de E.U.A. 20040018590 y 20020137134 y publicación de PCT WO2005100584 A2). Además de las proteínas de unión, la presente invención también está dirigida a un anticuerpo anti-idiotípico (anti-ld) específico para dichas proteínas de unión de la invención. Un anticuerpo anti-ld es un anticuerpo que reconoce determinantes únicos generalmente asociados con la región de unión de antígeno de otro anticuerpo. El anti-ld puede ser preparado inmunizando un animal con la proteína de unión o una región que contiene CDR del mismo. El animal inmunizado reconocerá, y responderá a los determinantes idiotípicos del anticuerpo de inmunización y producen un anticuerpo anti-ld. El anticuerpo anti-ld también puede ser usado como un "inmunógeno" para inducir una respuesta inmune en otro animal más, produciendo un así llamado anticuerpo anti-anti-ld.
Además, se apreciará por algún experto en la técnica que una proteína de interés puede ser expresada utilizando una colección de célula huésped genéticamente diseñadas por ingeniería para expresar varias enzimas de glicosilación, de manera que las células huésped miembro de la colección producen la proteína de interés con patrones de glicosilación variante. Después, un practicante puede seleccionar y aislar la proteína de interés con patrones de glicosilación novedosos particulares. De preferencia, la proteína que tiene un patrón de glicosilación novedoso particularmente seleccionado exhibe propiedades biológicas seleccionadas o alteradas.
D. Usos de anticuerpos Anti-IL-12p40 Dada su habilidad para unirse a I L-12p40 humana, los anticuerpos I L-12p40 anti-humanos, o sus porciones, de la invención pueden ser utilizados para detectar IL-12 y/o IL-23 humana (por ejemplo, en una muestra biológica, tal como suero o plasma), utilizando un inmunoensayo convencional, tal como ensayos inmunoabsorbentes enlazados a enzima (ELISA), un radioinmunoensayo (RÍA) o inmunohistoquímica de tejido. La invención proporciona un método para detectar IL-12 y/o IL-23 humana en una muestra biológica que comprende poner en contacto una muestra biológica con un anticuerpo, o porción de anticuerpo, de la invención y detectar ya sea el anticuerpo (o porción de anticuerpo) unido a IL-12 y/o IL-23 humana o anticuerpo no unido (o porción de anticuerpo), para detectar así IL-12 y/o I L-23 humana en la muestra biológica. El anticuerpo es directa o indirectamente marcado con una sustancia detectable para facilitar la detección del anticuerpo unido o no unido. Las sustancias detectables adecuadas incluyen varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes y materiales radioactivos. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, o acetilcolinesterasa; ejemplos de complejos de grupo prostético adecuado incluyen estreptavidina/biotina y avidina/biotina; ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen, umbeliferona, fluorescina, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, fluoresceína de diclorotriazinilamina, cloruro de dansilo o ficoeritrina; un ejemplo de un material luminiscente incluye luminol; y ejemplos de materiales radioactivos adecuados incluyen H *C, 35( Si 90Y, "Te, 111ln, 125l, 131l, 177Lu, 116060UHo?, o « 153 Sm. Alternativa a la marcación de anticuerpo, la IL-12 humana puede ser analizada en fluidos biológicos a través de un inmunoensayo de competencia utilizando estándares ds rhlL-12 marcados con una sustancia detectable y un anticuerpo I L-12p40 anti-humano no marcado. En este ensayo, ia muestra biológica, los estándares rhlL-12 marcados y el anticuerpo I L- 12p40 anti-humano se combinan y se determina la cantidad de estándar de rhlL-12 marcado unido al anticuerpo no marcado. La cantidad de IL-12 humana en la muestra biológica es inversamente proporcional a la cantidad del estándar de rhlL-12 unido al anticuerpo anti-l L-12p40.
Similarmente, la IL-23 humana también puede ser analizada en fluidos biológicos a través de un inmunoensayo de competencia utilizando estándares de rh I L-23 marcados por una sustancia detectable y un anticuerpo I L-12p40 anti-humano no marcado. Los anticuerpos y porciones de anticuerpos de la invención de preferencia son capaces de neutralizar la actividad de IL-12 humana y/o IL-23 humana tanto in vitro como in vivo. Por consiguiente, dichos anticuerpos y porciones de anticuerpos de la invención pueden ser utilizados para inhibir la actividad de hlL-12 y/o hlL-23, por ejemplo, en un cultivo de célula conteniendo hlL-12 y/o hlL-23, en seres humanos o en otros mamíferos que tengan IL-12 y/o hlL-23 con el cual un anticuerpo de la invención reacciona en forma cruzada. En una modalidad, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de hlL-12 y/o hlL-23 que comprende poner en contacto hlL-12 y/o hlL-23 con un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención de manera que se inhibe la actividad de hlL-12 y/o hlL-23. Por ejemplo, en un cultivo de célula que contiene, o que hay sospecha de contener hlL-12 y/o hlL-23, se puede agregar un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención al medio de cultivo para inhibir la actividad de hlL-12 y/o hlL-23 en el cultivo. En otra modalidad, la invención proporciona un método para recudir la actividad de hlL-12 y/o hlL-23 en un sujeto, ventajosamente de un sujeto que sufre de una enfermedad o trastorno en donde la actividad de IL-12 o IL-23 es dañina. La invención proporciona métodos para reducir la actividad de IL-12 y/o IL-23 en un sujeto que sufre de una enfermedad o trastorno, dicho método comprende administrar al sujeto un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención de manera que se reduce la actividad de IL-12 y/o IL-23 en el sujeto. De preferencia, la IL-12 es IL-12 humana, la I L-23 es IL-23 humana, y el sujeto es un ser humano. Alternativamente, el sujeto puede ser un mamífero que expresa una IL-12 y/o IL-23 en donde un anticuerpo de la invención es capaz de unirse. Aún más, el sujeto puede ser un mamífero en donde se ha introducido IL-12 y/o I L-23 (por ejemplo, a través de administración de IL-12 y/o IL-23 o a través de la expresión de un transgen de IL-12 y/o IL-23). Un anticuerpo de la invención puede ser administrado a un sujeto para propósitos terapéuticos. Además, un anticuerpo de la invención puede ser administrado a un mamífero que no sea un ser humano que expresa una IL-12 y/o IL-23 con la cual el anticuerpo es capaz de unión para propósitos veterinarios o como un modelo de animal de enfermedad en seres humanos. Con respecto a esto último, dichos modelos de animal pueden ser útiles para evaluar la eficacia terapéutica de los anticuerpos de la invención (por ejemplo, la prueba de dosis y cursos de tiempo de administración). Como se utiliza aquí, el término "un trastorno en donde la actividad de IL-12 y/o I L-23 es dañina" pretende incluir enfermedades y otros trastornos en donde la presencia de IL-12 y/o IL-23 en un sujeto que sufre del trastorno ha mostrado estar o hay sospecha de ser ya sea responsable de la patofisiología del trastorno o un factor que contribuye a un empeoramiento del trastorno. Por consiguiente, un trastorno en donde la actividad de IL-12 y/o IL-23 es peligrosa es un trastorno en donde la reducción de la actividad de IL-12 y/o JL-23 se espera que alivie los síntomas y/o progresión del trastorno. Dichos trastornos puede ser evidenciados, por ejemplo, a través de un incremento en la concentración de IL-12 y/o IL-23 en un fluido biológico de un sujeto que sufre del trastorno (por ejemplo, un incremento en la concentración de IL-12 y/o IL-23 en el suero, plasma, fluido sinovial, etc. del sujeto), que puede ser detectado, por ejemplo, utilizando un anticuerpo anti-IL-12p40 como se describió anteriormente. Ejemplos no limitantes de trastornos que pueden ser tratados por los anticuerpos de la invención incluyen aquellos trastornos discutidos en la sección que sigue que se refiere a composiciones farmacéuticas de los anticuerpos de la invención.
D. Composición Farmacéutica La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo, o una porción de unión de antígeno de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos de la invención son para utilizarse en, pero no se limita a, el diagnóstico, detección o verificación de un trastorno, para prevenir, tratar, manejar o mitigar un trastorno o uno o más de sus síntomas, y/o en la investigación. En una modalidad específica, una composición comprende uno o más anticuerpos de la ¡nvención, en otra modalidad, la composición farmacéutica comprende uno o más anticuerpos de la invención y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos distintos a los anticuerpos de la ¡nvención para tratar un trastorno en donde la actividad de IL-12 y/o IL-23 es dañina. De preferencia, los agentes profilácticos o terapéuticos conocidos como útiles o que han sido o actualmente son utilizados en la prevención, tratamiento, manejo o mitigación de un trastorno o uno o más de sus síntomas. De acuerdo con estas modalidades, la composición la composición además puede comprender un vehículo, diluyente o excipiente. Los anticuerpos y porciones de anticuerpo de la invención pueden ser incorporados en composiciones farmacéuticas adecuadas para administrarse a un sujeto. Típicamente, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se utiliza aquí, "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y de retraso de absorción y similares, que se han fisiológicamente compatibles. Ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de agua, salina, salina regulada en su pH con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como sus combinaciones. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en la composición. Los vehículos farmacéuticamente aceptables además pueden comprender cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes, conservadores o reguladores de pH, los cuales mejoran la vida de almacenamiento o efectividad del anticuerpo o porción de anticuerpo Varios sistemas de suministro son conocidos y pueden ser utilizados para administrar uno o más anticuerpos de la invención o la combinación de uno o más anticuerpos de la invención y un agente profiláctico o agente terapéutico útil para prevenir, manejar, tratar o mitigar un trastorno o uno o más de sus síntomas, por ejemplo, encapsulación en hposomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capaces de expresar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo, endocitosis mediada por receptor (ver, por ejemplo, Wu y Wu, J Biol Chem 2624429-4432 (1987)), construcción de un ácido nucleico como parte de un retrovirus u otro vector, etc los métodos para administrar un agente profiláctico o terapéutico de la invención incluyen, pero no se limitan a, administración parenteral (por ejemplo, intradérmica, intramuscular, intrapeptoneal, intravenosa y subcutánea), administración epidural, administración intratumoral, y administración mucosal (por ejemplo, intranasal y rutas orales) Además, se puede emplear administración pulmonar, por ejemplo, a través del uso de un inhalador o nebulizador, y una formulación con un agente en aerosol Ver, por ejemplo, Patentes de E U A Nos 6, 019,968, 5,985, 320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540, y 4,880,078, y Solicitudes de PCT Nos WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, y WO 99/66903, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. En una modalidad, un anticuerpo de la invención, terapia de combinación, o una composición de la invención se administra utilizando tecnología de suministro de fármaco pulmonar Alkermes AIR® (Alkermes, Inc., Cambridge, Mass.). En una modalidad específica, los agentes profiláctico o terapéuticos de la ¡nvención se administran intramuscular, intravenosa, intratumoral, oral, intranasal, pulmonar, o subcutáneamente. Los agentes profilácticos o terapéuticos pueden ser administrados a través de una ruta conveniente, por ejemplo a través de infusión o inyección de bolo, mediante absorción a través de cubiertas epiteliales o mucocutáneas (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.) y se pueden administrar junto con otros agentes biológicamente activos. La administración puede ser sistémica o local. En una modalidad específica, puede ser deseable administrar los agentes profilácticos o terapéuticos de la invención localmente al área que necesita el tratamiento; esto puede lograrse, por ejemplo, y no en forma de limitación a través de infusión local, mediante inyección, o a través de un implante, dicho implante siendo de un material poroso o no poroso, que incluye membranas y matrices, tales como membranas sialásticas, polímeros, matrices fibrosas (por ejemplo, Tissuel®), o matrices de colágeno. En una modalidad, una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos de los agonistas de la invención se administra localmente al área afectada de un sujeto para prevenir, tratar, manejar, y/o mitigar un trastorno o un síntoma del mismo. En otra modalidad, una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos de la invención se administra localmente al área afectada en combinación con una cantidad efectiva de una o más terapias (por ejemplo, uno o más agentes profiláctico o terapéuticos) distinto a un anticuerpo de la invención para un sujeto para prevenir, tratar, manejar, y/o mitigar un trastorno o uno o más síntomas del mismo. En otra modalidad, el agente profiláctico o terapéutico puede ser suministrado en un sistema de liberación controlada o de liberación sostenida. En una modalidad, se puede utilizar una bomba para lograr una liberación controlada o sostenida (ver Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwaid et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). En otra modalidad, se pueden utilizar materiales poliméricos para obtener una liberación controlada o sostenida de las terapias de la invención (ver por ejemplo, Medical Applications of Controlled Reléase, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Ratón, Fia. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; también ver Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105); Patente de E.U.A. No. 5,679,377; Patente de E.U.A. No. 5, 916,597; Patente de E.U.A. No. 5,912,015; Patente de E.U.A. No. 5,989,463; Patente de E.U.A. No. 5,128,326; Publicación de PCT No.
WO 99/15154; y Publicación de PCT No. WO 99/20253. Ejemplos de polímeros utilizados en formulaciones de liberación sostenida incluyen, pero no se limitan a, metacrilato de poli (2-hid roxi etilo), metacrilato de poli(metilo), ácido (poliacrílico), acetato de poli(etilen-co-vinilo), ácido poli(metacrílico), poliglicólidos (PLG), polianhídridos, po I i ( N- vi n i I pirrolidona), alcohol poli(vinílico), poliacrilamida, glicol poli (etilénico) , poliláctidas (PLA), pol i (láctida-co-glicolidas) (PLGA), y poliortoésteres. En una modalidad preferida, el polímero utilizado en una formulación de liberación sostenida es inerte, libre de impurezas lexidiables, estable al almacenamiento, estéril y biodegradable. En otra modalidad, un sistema de liberación controlada o sostenida puede ser colocado cerca del agente profiláctico o terapéutico, requiriendo de esta manera solo una fracción de la dosis sistémica (ver, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Reléase, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Los sistemas de liberación controlada se describen en la revisión hecha por Langer (1990, Science 249:1527-1533). Cualquier técnica conocida por algún experto en el campo puede ser utilizada para producir formulaciones de liberación sostenida que comprendan uno o más agentes terapéuticos de la invención. Ver, por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 4,526, 938, publicación de PCT WO 91/05548, publicación de PCT WO 96/20698, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cáncer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy &Oncology 39:179-189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Intl. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, y Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760, cada una de las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. En una modalidad específica, cuando la composición de la invención es un ácido nucleico que codifica un agente profiláctico o terapéutico, el ácido nucleico puede ser administrado in vivo para promover la expresión de su agente profiláctico o terapéutico codificado, construyéndolo como parte de un vector de expresión de ácido nucleico apropiado y administrándolo de manera que se vuelve intracelular, por ejemplo, a través del uso de un vector retroviral (ver Patente de E.U.A. No. 4,980,286), o a través de inyección directa, o a través del uso de bombardeo de micropartículas (por ejemplo, una pistola de gen; Biolistic, Dupont), o recubrimiento con lípidos o receptores de superficie de célula o agentes de transfección, o administrándolo en un enlace a un péptido de tipo caja que es conocido por entrar al núcleo (ver, por ejemplo, Joliot et al., 1991, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:1864-1868). Alternativamente, un ácido nucleico puede ser introducido intracelularmente e incorporado dentro del ADN de célula huésped para la expresión a través de combinación homologa. Una composición farmacéutica de la invención se formula para ser compatible con su ruta de administración pretendida. Ejemplos de rutas de administración incluyen, pero no se limitan a, administración parenteral, por ejemplo, intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral, intranasal (por ejemplo, inhalación), .transdérmica (por ejemplo, tópica), transmucosal y rectal. En una modalidad específica, la composición se formula de acuerdo con procedimientos de rutina para que la composición farmacéutica se adapte a administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, oral, intranasal, o tópica a seres humanos. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa son soluciones en regulador de pH acuoso isotónico estéril. Cuando es necesario, la composición también puede incluir un agente de solubilización y un anestésico local tal como lignocame para reducir el dolor en el sitio de la inyección. Si las composiciones de la invención van a ser administradas tópicamente, las composiciones pueden ser formuladas en la forma de un ungüento, crema, parche transdérmico, loción, gel, champú, aspersión, aerosol, solución, emulsión, u otra forma bien conocida por algún experto en la técnica. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 19th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995). Para formas de dosis tópicas que no sean de aspersión, típicamente se emplean formas viscosas sólidas a semisólidas que comprenden un vehículo o uno o mas excipientes compatibles con aplicación tópica y que tengan una viscosidad dinámica preferiblemente mayor que el agua Las formulaciones adecuadas incluyen, sin limitación, soluciones, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, polvos, li mentos, salvados, y similares los cuales si se desea, son esterilizados o mezclados con agentes auxiliares (por ejemplo, conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, reguladores de pH o sales) para influenciar vanas propiedades tales como, por ejemplo, la presión osmótica Otras formas de dosis tópicas adecuadas incluyen preparaciones en aerosol que se pueden rociar, en donde el ingrediente activo, preferiblemente en combinación con un vehículo inerte sólido o líquido, se empaca en una mezcla con un volátil presupzado (por ejemplo, un propulsor gaseoso, tal como freón) o en una botella comprimible También se pueden agregar humectantes o agentes de humectación a las composiciones farmacéuticas y formas de dosis si se desea Ejemplos de dichos ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica Si el método de la invención comprende administración intranasal de una composición, la composición la composición puede ser formulada en una forma en aerosol, aspersión, bruma o en la forma de gotas En particular, los agentes profilácticos o terapéuticos para utilizarse de acuerdo con la presente invención pueden ser convenientemente suministrados en la forma de una presentación en aerosol de aspersión a partir de paquetes presupzados o un nebulizador con el uso de un propulsor adecuado (por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, u otro gas adecuado). En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis puede ser determinada proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Se pueden formular cápsulas y cartuchos (compuestos de, por ejemplo, gelatina) para utilizarse en un inhalador o insuflador, conteniendo una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. Si el método de la invención comprende administración oral, se pueden formular composiciones oralmente en la forma de tabletas, cápsulas, pequeños bolsillos, cápsulas de gelatina, soluciones, suspensiones, y similares. Las tabletas o cápsulas pueden ser preparadas a través de medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes de unión (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona, o hidroxipropil metilcelulosa); llenadores (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, o fosfato ácido de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, o sílice); agentes de desintegración (por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón de sodio); o agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Las tabletas pueden ser cubiertas a través de métodos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden tomar la forma de, pero no se limita a, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden ser presentadas como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de uso. Dichas preparaciones líquidas pueden ser preparadas a través de medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptable tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivado de celulosa, o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsificantes (por ejemplo, lecitina o acacia); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, esteres oleosos, alcohol etílico, o aceites vegetales fraccionados); y conservadores (por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales reguladoras de pH, agentes saborizantes, colorantes y edulcorantes según sea apropiado. Las preparaciones para administración oral pueden ser formuladas convenientemente para liberación lenta, liberación controlada, o liberación sostenida de un agente(s) profiláctico o terapéutico. El método de la invención puede comprender administración pulmonar, por ejemplo, a través del uso de un inhalador o nebulizador, de una composición formulada con un agente en aerosol. Ver, por ejemplo, Patentes de E.U.A. Nos. 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540, y 4,880,078; y Solicitudes de PCT Nos. WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, y WO 99/66903, cada una de las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. En una modalidad específica, un anticuerpo de la invención, terapia de combinación, y/o composición de la invención se administra utilizando una tecnología de suministro de fármaco pulmonar Alkermes AIR® (Alkermes, Inc Cambridge, Mass ) El método de la invención puede comprender la administración de una composición formulada para administración parenteral a través de inyección (por ejemplo, a través de inyección de bolo o infusión continua) Las formulaciones para inyección pueden ser presentadas en una forma de dosis unitaria (por ejemplo, en ampollas o en recipientes de dosis múltiple) con un conservador agregado Las composiciones pueden tener formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, de estabilización y/o de dispersión Alternativamente, el ingrediente active puede estar en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua libre de pirógeno estéril) antes de uso Los métodos de la invención además pueden comprende la administración de composiciones formuladas como preparaciones de depósito Dichas formulaciones de acción larga pueden ser administradas a través de implante (por ejemplo, subcutánea o intramuscularmente) o a través de inyección intramuscular De esta manera, por ejemplo, las composiciones pueden ser formuladas con materiales polimépcos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio de ion, o como derivados escasamente solubles (por ejemplo, como una sal escasamente soluble) Los métodos de la invención abarcan la administración de composiciones formuladas como formas neutras o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas formadas con aniones tales como aquellos derivados de ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquellas formadas con cationes tales como aquellos derivados de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, etc. En general, los ingredientes de las composiciones se suministran ya sea en forma separada o mezclados conjuntamente en una forma de dosis unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o un concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado tal como una ampolla o cavidad pequeña indicando la cantidad de un ingrediente activo. Cuando el modo de administración es mediante infusión, la composición puede ser suministrada con una botella de infusión conteniendo agua o salina de grado farmacéutico estéril. Cuando el modo de administración es a través de inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua estéril para inyección o salina de manera que los ingredientes pueden ser mezclados antes de la administración. En particular, la invención también proporciona que uno o más de los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención sean empacados en un recipiente o contenedor herméticamente sellado tal como una ampolla o cavidad pequeña indicando la cantidad de agente. En una modalidad, uno o más de los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra como un polvo liofilizado esterilizado seco o un concentrado libre de agua en un recipiente o contenedor herméticamente sellado y puede ser reconstituido (por ejemplo, con agua o salina) a la concentración apropiada para administrarse a un sujeto. De preferencia, uno o más de los agentes profiláctico o terapéuticos o composiciones farmacéuticas de la invención se suministran como un polvo liofilizado estéril seco en un recipiente herméticamente sellado a una dosis unitaria de por lo menos 5 mg, de preferencia por lo menos 10 mg, por lo menos 15 mg, por lo menos 25 mg, por lo menos 35 mg, por lo menos 45 mg, por lo menos 50 mg, por lo menos 75 mg, o por lo menos 100 mg. Los agentes profiláctico o terapéuticos liofilizados o composiciones farmacéuticas de la invención deben ser almacenadas de entre 2°C y 8°C en su recipiente original y los agentes profiláctico o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención deben ser administradas en 1 semana, preferiblemente en 5 días, en 72 horas, en 48 horas, en 24 horas, en 12 horas, en 6 horas, en 5 horas, en 3 horas, o en 1 hora después de haber sido reconstituidos. En una modalidad alternativa, uno o más de los agentes profilácticos o terapéuticos o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra en una forma líquida en un recipiente o contenedor herméticamente sellado indicando la cantidad y concentración del agente. De preferencia, la forma líquida de la composición administrada se suministra en un recipiente herméticamente sellado a por lo menos 0.25 mg/ml, de preferencia por lo menos 0.5 mg/ml, por lo menos 1 mg/ml, por lo menos 2.5 mg/ml, por lo menos 5 mg/ml, por lo menos 8 mg/ml, por lo menos 10 mg/ml, por lo menos 15 mg/kg, por lo menos 25 mg/ml, por lo menos 50 mg/ml, por lo menos 75 mg/ml o por lo menos 100 mg/ml. La forma líquida puede ser almacenada de entre 2°C y 8°C en su recipiente original. Los anticuerpos y porciones de anticuerpo de la invención pueden ser incorporados en una composición farmacéutica adecuada para administración parenteral. De preferencia, el anticuerpo o porciones de anticuerpo se prepararan como una solución inyectable conteniendo 0.1-250 mg/ml de anticuerpo. La solución inyectable puede componerse ya sea de una forma de dosis líquida o liofilizada en un frasco de cristal de roca o ámbar, ampolla o una jeringa pre-llenada. El regulador de pH puede ser L-histidina (1-50 mM), opcionalmente 5-10mM, a un pH de 5.0 to 7.0 (óptimamente pH 6.0). Otros reguladores de pH adecuados incluyen, pero no se limitan a, succinato de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio o fosfato de potasio. Se puede usar cloruro de sodio para modificar la toxicidad de la solución a una concentración de 0-300 mM (óptimamente 150 mM para una forma de dosis líquida). Se pueden incluir crioprotectores para una forma de dosis liofilizada, principalmente 0-10% de sacarosa (óptimamente 0.5-1.0%). Otros crioprotectores adecuados incluyen trehalosa y lactosa. Se pueden incluir agentes proporcionadores de volumen para una forma de dosis liofilizada, principalmente 1-10% de manitol (óptimamente 2-4%). Se pueden utilizar estabilizadores en forma de dosis tanto liquidas como of il izadas , principalmente 1-50 mM de L-metionina (óptimamente 5-10 mM) Otros agentes proporcionadores de volumen adecuados incluyen glicina, arginina, y pueden ser incluidos como 0-005% de pol?sorbato-80 (óptimamente 0 005-001%) Agentes tensoactivos adicionales incluyen, pero no se limitan a polisorbato 20 y agentes tensoactivos BRIJ La composición farmacéutica que comprende los anticuerpos y porciones de anticuerpo de la invención preparados como una solución inyectable para administración parenteral, además pueden comprender un agente útil como un auxiliar, tales como aquellos utilizados para incrementar la absorción, o dispersión de una proteína terapéutica (por ejemplo, anticuerpo) Un auxiliar particularmente útil es hialuronidasa, tal como Hylenex® (hialuronidasa humana recombinante) La adición de hialuronidasa en la solución inyectable mejora la biodisponibhdad humana después de administración parenteral, particularmente administración subcutánea También permite volúmenes de sitio de inyección mayores (es decir, mayor que 1 ml) con menos dolor e incomodidad, e incidencia mínima de reacciones en el sitio de la inyección (ver WO2004078140, US2006104968 incorporadas aquí por referencia) Las composiciones de esta invención pueden estar en una variedad de formas Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosis líquidas, semi-sólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusión), dispersiones o suspensiones, tabletas, pildoras, polvos, hposomas y supositorios La forma preferida depende del modo pretendido de administración y aplicación terapéutica. Las composiciones preferidas típicas están en la forma de soluciones inyectables o infusión, tales como las composiciones similares a aquellas utilizadas para inmunización pasiva de seres humanos con otros anticuerpos. El modo preferido de administración es parenteral (por ejemplo, intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular). En una modalidad preferida, el anticuerpo se administra a través de infusión intravenosa o inyección. En otra modalidad preferida, el anticuerpo se administra a través de inyección intramuscular o subcutánea. Las composiciones terapéuticas típicamente deben ser estériles estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede ser formulada como una solución, microemulsión, dispersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. Las soluciones inyectables estériles pueden ser preparadas incorporando el compuesto activo (es decir, anticuerpo o porción de anticuerpo) en la cantidad requerida en un solvente apropiado o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por esterilización filtrada. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto active en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de aquellos mencionados anteriormente. En el caso de polvos liofilizados estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado al vacío y secado por aspersión que produce el polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional. A partir de una solución filtrada previamente estéril del mismo. La fluidez apropiada de una solución puede ser mantenida, por ejemplo, a través del uso de un revestimiento tal como lecitina, a través del mantenimiento de tamaño de partículas requerido en el caso de dispersión y a través del uso de agentes tensoactivos. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede ser producida, incluyendo, en la composición, un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina. Los anticuerpos y porciones de anticuerpo de la presente invención se pueden administrar a través de una variedad de métodos conocidos en la técnica, aunque para muchas aplicaciones terapéuticas, la ruta/modo preferido de administración es inyección subcutánea, inyección o infusión intravenosa. Como se apreciará por algún experto en la técnica, la ruta y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. En ciertas modalidades, el compuesto active puede ser preparado con un vehiculo que protegerá al compuesto contra una rápida liberación, tal como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos, y sistemas de suministro microencapsulados. Se pueden utilizar polímeros biocompatibles, biodegradables, tales como acetato de etilen-vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de dichas formulaciones están patentados o generalmente son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Ver, por ejemplo, Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978. En ciertas modalidades, un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención puede ser oralmente administrado, por ejemplo, con un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable. El compuesto (y otros ingredientes, si se desea) también puede ser encerrado en una cápsula de gelatina dura o suave, comprimirse en tabletas, o incorporarse directamente en la dieta del sujeto. Para administración terapéutica oral, los compuestos pueden ser incorporados con excipientes y utilizados en la forma de tabletas ingeribles, tabletas bucales, trociscos, cápsulas, elíxires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Para administrar un compuesto de la invención a través de otra administración distinta a la parenteral, puede ser necesario cubrir el compuesto con, o coadministrar el compuesto con un material para evitar su inactivación. También se pueden incorporar compuestos suplementarios activos en las composiciones. En ciertas modalidades, un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención se co-formula con y/o se coadministra con uno o más agentes terapéuticos adicionales que son útiles para tratar trastornos en donde la actividad de IL-12 es dañina. Por ejemplo, un anticuerpo anti-hlL-12 o porción de anticuerpo de la invención puede ser co-formulado y/o co-administrado con uno o más anticuerpos adicionales que se unen a otros objetivos, (por ejemplo, anticuerpos que unen otras citocinas o que unen moléculas de superficie de célula). Además, uno o más anticuerpos de la invención pueden ser utilizados en combinación con dos o más de los agentes terapéuticos anteriores. Dichas terapias de combinación ventajosamente pueden utilizar dosis más bajas de los agentes terapéuticos administrados, evitando así posibles toxicidades o complicaciones asociadas con las varias monoterapias. En ciertas modalidades, un anticuerpo para IL-12 o su fragmento está enlazado a un vehículo de extensión de vida media conocido en la técnica. Dichos vehículos incluyen, pero no se limitan a, el dominio Fc, poliglicol etilénico, y dextrana. Dichos vehículos se describen en, por ejemplo, en Solicitud de E.U.A. Serie No. 09/428,082 y Solicitud de PCT publicada No. WO 99/25044, las cuales se incorporan aquí por referencia para cualquier propósito. En una modalidad específica, las secuencias de ácido nucleico que codifican secuencias de nucleótido que codifica un anticuerpo de la invención u otro agente profiláctico o terapéutico de la invención se administran para tratar, prevenir, manejar, o mitigar un trastorno o uno o más síntomas del mismo a través de terapia de gen. La terapia de gen se refiere a una terapia realizada a través de la administración a un sujeto de un ácido nucleico expresado o que se puede expresar. En esta modalidad de la invención, los ácidos nucleicos producen su anticuerpo codificado o agente profiláctico o terapéutico de la invención que media un efecto profiláctico o terapéutico. Cualquiera de los métodos para terapia de gen disponibles en la técnica puede ser utilizado de acuerdo con la presente invención. Para revisiones generales de los métodos de terapia de gen, ver Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505; Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, Science 260:926-932 (1993); and Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIBTECH 11(5): 155-215. Los métodos comúnmente conocidos en la técnica de tecnología de ADN recombinante que pueden ser usados se describen por Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley &Sons, NY (1993); y Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990). La descripción detallada de los varios métodos de terapia de gen se describe en US20050042664 A1, la cual se incorporan aquí por referencia. La interleucina 12 juega un papel crítico en la patología asociada con una variedad de enfermedades que involucran elementos inmunes e inflamatorios. Estas enfermedades incluyen, pero no se limita a, artritis reumatoide, osteoartritis, artritis crónica juvenil, artritis séptica, artritis de Lyme, artritis psoriática, artritis reactiva, espondiloartropatia, lupus sistémico eritematoso, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus dependiente de insulina, tiroiditis, asma, enfermedades alérgicas, psoriasis, escleroderma de dermatitis, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo de trasplante de órgano, enfermedad inmune aguda o crónica asociada con trasplante de órganos, sarcoidosis, aterosclerosis, coagulación intravascular diseminada, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Grave, síndrome nefrótico, síndrome de fatiga crónica, granulomatosis de Wegener, púrpura de Henoch-Schoenlein, vasculitis microscópica de los riñones, hepatitis activa crónica, uveitis, choque séptico, síndrome de choque tóxico, síndrome de sepsis, caquexia, enfermedades infecciosas, enfermedades parásitas, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, mielitis transversal aguda, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, ataque, cirrosis biliar primaria, anemia hemolítica, malignidades, falla cardiaca, infarto al miocardio, enfermedad de Addison, esporádica, tipo I de deficiencia poliglandular y tipo II de deficiencia poliglandular, síndrome de Schmidt, síndrome de disfunción respiratoria en adultos (aguda), alopecia, alopecia areata, artropatía seronegativa, artropatía, enfermedad de Reiter, artropatía psoriática, artropatía eolítica ulcerativa, sinovitis enteropática, clamidia, yersinia y salmonela asociada con artropia, espondíloartopatia, enfermedad ateromatosa/arteriosclerosis, alergia atópica, enfermedad bolosa autoinmune, pénfigo vulgaris, pénfigo foliáceo, penfigoide, enfermedad IgA lineal, anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica positiva de Coombs, anemia perniciosa adquirida, anemia perniciosa juvenil, encefalitis mialgica/Enfermedad Libre de Royal, candidiasis mucocutánea crónica, arteritis de célula gigante, hepatitis esclerosante primaria, hepatitis autoinmune cpptogénica, Síndrome de Enfermedad de Inmunodeficiencia Adquirida, Enfermedades Relacionadas con Inmunodeficiencia Adquirida, Hepatitis B, Hepatitis C, inmunodeficiencia variada común, (hipogamaglobuhnemia variable común), cardiomiopatía dilatada, infertilidad femenina, falla de ovarios, falla de ovarios prematura, enfermedad de pulmón fibrótico, alveohtis de fibrosis cpptogénica, enfermedad de pulmón intersticial post-inflamatopa, pneumonitis intersticial, enfermedad de tejido conectivo asociada con enfermedad de pulmón intersticial, enfermedad de pulmón asociada con enfermedad de tejido conectivo mixta, enfermedad de pulmón intersticial asociada con esclerosis sistémica, enfermedad de pulmón intersticial asociada con artritis reumatoide, enfermedad de pulmón asociada con lupus sistémico eptematoso, enfermedad de pulmón asociada con dermatomiositis/pohmiositis, enfermedad de pulmón asociada con la enfermedad de Sjogren, enfermedad de pulmón asociada con espondilitis anquilosante, enfermedad de pulmón difusa vasculítica, enfermedad de pulmón asociada con hemosiderosis, enfermedad de pulmón intersticial inducida por fármacos, fibrosis, fibrosis de radiación, bronquiolitis obliteran, neumonía eosinofílica crónica, enfermedad de pulmón infiltrante I inf ocítica , enfermedad de pulmón intersticial post-infecciosa, artritis gotosa, hepatitis autoinmune, hepatitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis autoinmune clásica o lipoide), hepatitis autoinmune de tipo 2 (hepatitis de anticuerpo anti-LKM) hipoglicemia mediada autoinmune, resistencia a insulina tipo B con acantosis nigricans, hipoparatiroidismo, enfermedad inmune asociada con trasplante de órgano, enfermedad inmune crónica asociada con trasplante de órgano, osteoartrosis, colangitis esclerosante primaria, psoriasis tipo 1, psoriasis tipo 2, leucopenia idiopática, neutropenia autoinmune, NOS de enfermedad renal, glomerulonefritida, vasculitis microscópica de los riñones, enfermedad de lima, lupus discoide eritematoso, infertilidad masculina idiopática o NOS, autoinmunidad de esperma, esclerosis múltiple (todos los subtipos), oftalmía simpatética, hipertensión pulmonar secundaria a enfermedad de tejido conectivo, síndrome de Goodpasture, manifestación pulmonar de poliarteritis nodosa, fiebre reumática aguda, espondilitis reumatoide, enfermedad de Still, esclerosis sistémica, síndrome de Sjorgren, enfermedad de Takayasu/arteritis, trombocitopenia autoinmune, trombocitopenia idiopática, enfermedad de tiroides autoinmune, hipertiroidismo, hipotiroidismo autoinmune gotoso (enfermedad de Hashimoto), hipotiroidismo autoinmune atrófico, mixoedema primario, uveítis facogénica, vasculitis primaria, enfermedad del hígado aguda, vitíligo, enfermedades crónicas del hígado, cirrosis alcohólica, daño del hígado inducido por alcohol, coleosatatis, enfermedad de hígado ideosincrática, hepatitis inducida por fármaco, Esteatohepatitis no alcohólica, alergia y asma, infección por estreptococo del grupo B (GBS), trastornos mentales (por ejemplo, depresión y esquizofrenia), enfermedad mediada por el Tipo Th2 y el Tipo Th 1 , dolor agudo y crónico (diferentes formas de dolor), y cánceres tales como cáncer de pulmón, de mama, de estomago, de vejiga, de páncreas, de ovario, de próstata y rectal y malignidades hematopoyéticas (leucemia y linfoma), Abetalipoprotemia, Acrocianosis, procesos parásitos o infecciosos agudos o crónicos, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), infección bacteriana aguda o crónica, pancreatitis aguda, falla renal aguda, adenocarcinomas, latidos ectópícos aeriales, complejo de demencia por SIDA, hepatitis inducida por alcohol, conjuntivitis alérgica, dermatitis por contacto alérgica, rinitis alérgica, rechazo de aloinjerto, deficiencia de alfa-1 -antitripsina, esclerosis lateral amiotrófica, anemia, angina de pecho, degeneración de célula de cuerno anterior, terapia anti-cd3, síndrome antifosfolípido, reacciones de hipersensibilidad de anti-receptor, aneurismas aórticos y periféricos, disección aórtica, hipertensión arterial, arteriosclerosis, fístula arteriovenosa, ataxia, fibrilación atrial (sostenida o paroxismal), palpitación atrial, bloque atrioventricular, linfoma de célula B, rechazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de medula ósea (BMT), bloqueo de ramificación de grupo, linfoma de Burkitt, Quemaduras, arritmias cardiacas, síndrome de choque cardiaco, tumores cardiacos, cardiomiopatía, respuesta de inflamación de derivación cardiopulmonar, rechazo de trasplante de cartílago, degeneraciones corticales cerebrales, trastornos cerebrales, taquicardia atrial caótica o multifocal, trastornos asociados con quimioterapia, leucemia mielocítica crónica (CML), alcoholismo crónico, patologías inflamatorias crónicas, leucemia linfocítica crónica (CLL), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), intoxicación crónica por salicilato, carcinoma colorectal, falla cardiaca congestiva, conjuntivitis, dermatitis por contacto, cor pulmonale, enfermedad de arteria coronaria, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, sepsis negativa de cultivo, fibrosis quística, trastornos asociados con terapia de citocina, Demencia pugilística, enfermedades de desmielinización, fiebre hemorrágica por dengue, dermatitis, condiciones dermatológicas, diabetes, diabetes mellitus, enfermedad ateriosclerótica diabética, enfermedad difusa del cuerpo de Lewy, cardiomiopatía congestiva dilatada, trastornos de los ganglios básales Síndrome de Down en edad media, trastornos de movimiento inducidos por fármacos, que bloquean receptores de dopamina del Sistema Nervioso Central, sensibilidad a fármacos, eccema, encefalomielitis, endocarditis, endocrinopatia, epiglotitis, infección por virus de epstein-barr, eritromelalgia, trastornos extrapiramidales y cerebrales, linfohistiocitosis hematofagocítica familiar, rechazo de implante de timo fetal, ataxia de Friedreich, trastornos arteriales periféricos funcionales, sepsis fúngica, gangrena de gas, ulcera gástrica, nefritis glomerular, rechazo de injerto de cualquier órgano o tejido, sepsis gram-negativa, sepsis gram-positiva, granulomas debido a organismos intracelulares, leucemia de célula vellosa, enfermedad de Hallerrorden-Spatz, tiroiditis de hashimoto, fiebre de heno, rechazo de trasplante de corazón, hemacromatosis, hemodíálisis, síndrome urémico hemolítico/púrpura trombocitopénico trombolítico, hemorragia, hepatitis (A), arritmias del grupo His, infección por VIH/neuropatia por HIV, enfermedad de Hodgkin, trastornos de movimiento hipercinético, reacciones de hipersensibilidad, neumonitis de hipersensibilidad, hipertensión, trastornos del movimiento hipocinético, evaluación de eje hipotalámico-pituitaria-adrenal, enfermedad de Addison idiopática, fibrosis pulmonar idiopática, citotoxicidad mediada por anticuerpo, astenia, atrofia muscular espinal infantil, inflamación de la aorta, influenza a, exposición a radicación ionizante, iridociclitis/uveitis/neuritis óptica, daño por isquemia-reperfusión, choque isquémico, artritis reumatoide juvenil, atrofia muscular espinal juvenil, sarcoma de Kaposi, rechazo de trasplante de riñon, legionelosis, leishmaniasis, lepra, lesiones del sistema corticoespinal, lipedema, rechazo de trasplante de hígado, linfederma, malaria, linfoma maligno, histiocitosis maligna, melanoma maligno, meningitis, meningococcemia, metabólico/idiopático, dolor de cabeza, migraña, trastorno de sistema múltiple mitocondrial, enfermedad de tejido conectivo mixta, gamopatia monoclonal, mieloma múltiple, degeneraciones de sistemas múltiples (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager y Machado-Joseph), miastenia grave, micobacteria avium intracelular, micobacteria tuberculosis, síndrome mielodiplástico, infarto al miocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carcinoma nasofaríngeo, enfermedad crónica de pulmón neonatal, nefritis, nefrosis, enfermedades neurodegenerativas, atrofias musculares neurogénicas I, fiebre neutropénica, línfoma que no es de hodgkins, oclusión de la aorta abdominal y sus ramificaciones, trastornos arteriales oclusivos, terapia de okt3, orquitis/epididimitis, orquitis/procedimientos inversos de vasectomía, organomegalia, osteoporosis, rechazo de trasplante de páncreas, carcinoma pancreático, síndrome paraneoplástíco/hipercalcemia de malignidad, rechazo de trasplante de paratiroides, enfermedad inflamatoria pélvica, rinitis perineal, enfermedad pericardial, enfermedad aterosclerótica periférica, trastornos vasculares periféricos, peritonitis, anemia perniciosa, neumonía carinii Pneumocystis, neumonía, síndrome POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, y síndrome de cambios en piel), síndrome de post-perfusión, síndrome de postbombeo, síndrome de cardiotomia post-MI, preclampsia, Palsy de supranúcleo progresivo, hipertensión pulmonar primaria, terapia de radiación, fenómeno y enfermedad de Raynaud, enfermedad de Raynoud, enfermedad de Refsum, taquicardia QRS estrecha regular, hipertensión renovascular, daño por reperfusión, cardiomiopatía restrictiva, sarcomas, escleroderma, corea senil, demencia senil de tipo de cuerpo de Lewy, artropatías seronegativas, choque, anemia de célula falsiforme, rechazo de aloinjerto de piel, síndrome de cambios de piel, rechazo de trasplante de intestino delgado, tumores sólidos, arritmias específicas, ataxia espinal, degeneraciones espinocerebrales, miositis de estreptococo, lesiones estructurales del cerebelo, panencefalitis esclerosante sub-aguda, síncope, sífilis del sistema cardiovascular, anafílaxia sistémica, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, artritis reumatoide juvenil de inicio sistémico, célula T o FAB ALL, Telangiectasia, tromboangitis obliterans, trombocitopenia, toxicidad, trasplantes, trauma/hemorragia, reacciones de hipersensibilidad de tipo lll, hipersensibilidad de tipo IV, angina inestable, uremia, urosepsis, urticaria, enfermedades cardiacas valvulares, venas varicosas, vasculitis, enfermedades venosas, trombosis venosa, fibplación ventpcular, infecciones virales y fúngicas, encefalitis vital/meningitis aséptica, síndrome hemafagocítico asociado vital, síndrome de Wernicke-Korsakoff, enfermedad de Wilson, rechazo de xenoinjerto de cualquier órgano o tejido (Ver Peptt et al publicación de PCT No WO2002097048A2, Leonard et al , publicación de PCT No WO9524918 A1, y Salfeld et al , publicación de PCT No WO00/56772A1) Los anticuerpos, y porciones de anticuerpos de la invención pueden ser utilizados para tratar seres humanos que sufren de enfermedades autoinmunes, en particular aquellas asociadas con inflamación, incluyendo, espondilitis reumatoide, alergia, diabetes autoinmune, uveítis autoinmune De preferencia, los anticuerpos de la invención o sus porciones de unión de antígenos, se utilizan para tratar artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, diabetes mellitus dependiente de insulina y psoriasis Un anticuerpo, o porción de anticuerpo, de la invención también puede ser administrado con uno o más agentes terapéuticos adicionales útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígenos pueden ser utilizados solos o en combinación para tratar dichas enfermedades. Se debe entender que los anticuerpos de la invención o su porción de unión de antígeno se pueden utilizar solos o en combinación con un agente adicional, por ejemplo, un agente terapéutico, dicho agente adicional se selecciona por algún experto en la técnica para su propósito pretendido. Por ejemplo, el agente adicional puede ser un agente terapéutico reconocido en la técnica por ser útil para tratar la enfermedad o condición que es tratada por el anticuerpo de la presente invención. El agente adicional también puede ser un agente que imparte un atributo benéfico a la composición terapéutica, por ejemplo, un agente que afecta la viscosidad de la composición. Además se debe entender que las combinaciones que deben ser incluidas dentro de esta invención son aquellas combinaciones útiles para su propósito pretendido. Los agentes establecidos más adelante son ilustrativos para propósitos y no pretenden ser limitados. Las combinaciones, que son parte de esta invención, pueden ser los anticuerpos de la presente invención y por lo menos un agente adicional seleccionado de las listas que se presentan a continuación. La combinación también puede incluir más de un agente adicional, por ejemplo, dos o tres agentes adicionales si la combinación es tal que la composición formada puede realizar su función pretendida. Las proteínas de unión descritas aquí pueden ser utilizadas en combinación con agentes terapéuticos adicionales tales como un Fármaco Anti-Reumático de Modificación de Enfermedad (DMARD) o un Fármaco Anti-lnflamatorio No Esferoidal (NSAID) o un esteroide o cualquier combinación de los mismos. Ejemplos preferidos de un DMARD son hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato, oro parenteral, oro oral y sulfasalazina. Ejemplos preferidos de fármacos anti-inflamatorios no esteroidales también denominados como NSAIDS incluyen fármacos como ibuprofeno. Otras combinaciones preferidas son corticosteroides incluyendo prednisolona; los efectos laterales bien conocidos en el uso de esteroides pueden ser reducidos aún eliminado midiendo la dosis de esteroide requerida cuando se tratan pacientes en combinación con los anticuerpos anti-IL-12 de esta invención. Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para artritis reumatoide con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención puede ser combinados incluyendo los siguientes: fármacos anti-inflamatorios supresores de citocina (CSAIDs); anticuerpos para o antagonistas de otras citocinas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, I L-18, IL-21, IL-23, interferones, EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígenos, pueden combinarse con anticuerpos con moléculas de superficie de célula tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA o sus ligandos incluyendo CD154 (gp39 o CD40L). Las combinaciones preferidas de agentes terapéuticos pueden interferir en diferentes puntos en la cascada inflamatoria autoinmune y subsecuente, ejemplos preferidos incluyen antagonistas de TNF tales como receptores de TNF p55 o p75 solubles, derivados de los mismos, (p75TNFR1gG (Enbrel™) o p55TNFR1gG (Lenercept), anticuerpos TNF quiméricos humanizados o humanos, o un fragmento de los mismos, incluyendo infliximab (Remicade®, Johnson and Johnson, descrito en la Patente de E U A No 5,656,272, incorporada aquí por referencia), CDP571 (un anticuerpo lgG4 de anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), CDP 870 (un fragmento de anticuerpo anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), un anti-TNF dAb (Peptech), CNTO 148 (golimumab, Medarex and Centocor, ver WO 02/12502), y adalimumab (Humira® Abbott Laboratories, un mAb anti-TNF humano, descrito en US 6,090,382 como D2E7) Se pueden utilizar anticuerpos TNF adicionales en la invención y se describen en las Patentes de E U A Nos 6,593,458, 6,498,237, 6,451,983, y 6,448,380, cada una de las cuales se incorporan aquí por referencia Otras combinaciones incluyen inhibidores de enzima de conversión TNFa (TACE), inhibidores de IL-1 (inhibidores de enzima de conversión ?nterleuc?na-1 , 1L-1RA etc ) pueden ser efectivas para la misma razón Otras combinaciones preferidas incluyen interleucina 11 Otra combinación aun más preferida son otros jugadores clave de la respuesta inmune que pueden actuar paralelo a, dependientes de o en contacto con la función de IL-12, especialmente preferidos son los antagonistas IL-18 que incluyen anticuerpos IL-18 o receptores IL-18 solubles, o proteínas de unión IL-18 Se ha mostrado que IL-12 y IL-18 tienen funciones traslapantes pero distintas y una combinación de antagonistas para ambas puede ser muy efectiva. Otra combinación muy preferida son inhibidores anti-CD4 no carentes. Otras combinaciones preferidas incluyen antagonista de la trayectoria co-estimulante CD80 (B7.1) o CD86 (B7.2) incluyendo anticuerpos, receptores solubles o ligandos antagonísticos. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígenos también se pueden combinar con agentes, tales como metotrexato, 6-MP, azatioprina-sulfasalazina, mesalazina, olsalazina-cloroquinina/hidroxicloroquina, pencilamina, aurotiomaleato (intramuscular y oral), azatioprina, coquicina, corticosteroides (oral, inyección inhalada y local), agonistas beta-2 adrenoreceptor (salbutamol, terbutalina, salmeteral), xantinas (teofilina, aminofilina), cromoglicato, nedocromil, cetotifen, ¡pratropio y oxitropio, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofeno, corticosteroides tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización a través de citocinas pro-inflamatorias tales como TNFa o IL-1 (por ejemplo IRAK, NTK, IKK, p38 o inhibidores de MAP cinasa), inhibidores de enzima de conversión de I - 1 ß inhibidores de enzima de conversión TNFa (TACE), inhibidores de señalización de célula T tales como inhibidores de cinasa, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzima de conversión de angiotensina, receptores de citocina soluble y sus derivados (por ejemplo receptores TNF p55 o p75 solubles y los derivados p75TNFRIgG (Enbrel™ y p55TNFRIgG (Lenercept)), sIL-1RI, sIL-IRIL slL-6R), citocinas anti-inflamatorias (por ejemplo IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 y TGFß), celecoxib, ácido fólico, sulfato de hidroxicloroquina, rofecoxib, etanercept, infliximab, naproxen, valdecoxib, sulfasalazina, metilprednisolona, meloxicam, acetato de metilprednisolona, tiomalato de sodio de oro, aspirina, triamcinolona-acetonida, napsilato de propoxifeno/apap, folato, nabumetona, diclofenaco, piroxicam, etodolac, diclofenaco sódico, oxaprozina, clorhidrato de oxicodona, bitartrato de hidrocodona/apap, diclofenaco-sodio/misoprostol, fentanilo, anaquinra, recombinante humano, clorhidrato de tramadol, salsalato, sulindac, cianocobalamina/fa/piridoxina, acetaminofen, alendronato de sodio, prednisolona, sulfato de morfina, clorhidrato de lidocaína, indometacina, sulfato de glucosamina/condroitina, clorhidrato de amitriptilina, sulfadiazina, clorhidrato de oxicodona/acetaminofen, clorhidrato de olopatadina, misoprostol, naproxen sódico, omeprazol, ciclofosfamida, rituximab, IL-1 TRAP, MRA, CTLA4-IG, I L-18 BP, anti-IL-18, Anti-IL15, BIRB-796, SCIO-469, VX-702, AMG-548, VX-740, Roflumilast, IC-485, CDC-801, y Mesopram. Las combinaciones preferidas incluyen metotrexato o leflunomida y en casos de artritis reumatoide moderada o severa, ciclosporina. Agentes adicionales no limitantes que también pueden ser utilizados en la combinación con un anticuerpo de IL-12 o IL-23, o una porción de unión de antigeno del mismo, para tratar artritis reumatoide incluyen, pero no se limitan a, los siguientes fármacos anti-inflamatorios no esferoidales (NSAIDs), fármacos anti-inflamatopos supresores de citocma (CSADDs), CDP-571/BAY-10-3356 (anticuerpo anti-TNFa humanizado, Celltech/Bayer), cA2/?nfl?x?mab (anticuerpo anti-TNFa quimérico, Centocor), 75 kdTNFR-lgG/etanercept (proteína de fusión de receptor de TNF-lgG de 75kD, Immunex, ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol 37, S295, J Invest Med (1996) Vol 44, 235A), 55 kdTNF-lgG (proteína de fusión de receptor de TNF-lgG de 55 kD, Hoffmann-LaRoche), IDEC-CE9 1/SB 210396 (anticuerpo ant?-CD4 ppmatizado no carente, IDEC/SmithKhne, ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1995) Vol 38, S185), DAB 486-IL-2 y/o DAB 389-1L-2 (proteínas de fusión IL-2, Seragen, ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1993) Vol 36, 1223), Anti-Tac (ant?-IL-2Ra humanizada, Protein Design Labs/Roche), I L-4 (citocina anti-inflamatopa, ADNX/Schepng), I L-10 (SCH 52000, IL-10 reco binante, citocina anti-inflamatoria, ADNX/Schepng), IL-4, agonistas de IL-10 y/o I L-4 (por ejemplo, anticuerpos agonistas), IL-1RA (antagonista de receptor IL-1, Synergen/Amgen), anaquinra (K?neret®/Amgen), TNF-bp/s-TNF (proteína de unión de TNF soluble, ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol 3_9, No 9 (suplemento), S284, Amer J Physiol - Heart and Circulatory Physiology (1995) Vol 268, PP 37-42), R973401 (inhibidor de fosfodiesterasa de Tipo IV, ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282); MK-966 (inhibidor de COX-2; ver por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S81); lloprost (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S82); metotrexato; talidomida (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282) y fármacos relacionados con talidomida (por ejemplo, Celgen); lefiunomida (anti-inflamatorio e ¡nhibidor de citocina; ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S131; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107); ácido tranexámico (inhibidor de activación de plasminógeno; ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S284); T-614 (inhibidor de citocina; ver, por ejemplo, Arthritis <& Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282); prostaglandina E1 (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282); Tenidap (fármaco antiinflamatorio no esteroidal; ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S280); naproxen (fármaco antiinflamatorio no esteroidal; ver, por ejemplo, Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213); Meloxicam (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); Ibuprofeno (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); Piroxicam (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); Diclofenaco (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); indometacina (fármaco antiinflamatorio no esteroidal); sulfasalazina (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S281); Azatioprina (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S281), inhibidor de ICE (inhibidor de la enzima de conversión de ?nterleuc?na-1 ß de enzima), inhibidor de zap-70 y/o Ick (inhibidor de zap-70 o Ick de cinasa de tirosina), inhibidor de VEGF y/o inhibidor de VEGF-R (inhibidores del factor de crecimiento de célula endotehal vascular o receptor de factor de crecimiento de célula endotelial vascular, inhibidores de angiogénesis), fármacos anti-inflamatopos de corticoesteroide (por ejemplo, SB203580), inhibidores de TNF-convertasa, anticuerpos ant?-IL-12, anticuerpos ant?-IL-18, ?nterleuc?na-11 (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol 39, No 9 (suplemento), S296), ?nterleuc?na-13 (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol 39, No 9 (suplemento), S308), inhibidores de ?nterleuc?na-17 (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol 39, No 9 (suplemento), S120), oro, penicilamina, cloroquina, clorambucil, hidroxicloroquina, ciclospopna, ciclofosfamida, irradiación hnfoide total, globulina anti-timocito, anticuerpos ant?-CD4, toxinas CD5, péptidos y colágeno oralmente administrados, lobenzapt disódico, Agentes de Regulación de atocina (CRAs) HP228 y HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc ), o go-desoxinucleótidos de fosforotioato antisentido ICAM-1 (ISIS 2302, I sis Pharmaceuticals, Inc ), receptor 1 de complemento soluble (TPIO, T Cell Sciences, Inc ), prednisona, orgoteína, polisulfato de ghcosaminoglican, minocichna, anticuerpos ant?-IL2R, lípidos marinos y botánicos (ácidos grasos de pescado y semilla de planta, ver, por ejemplo, DeLuca et al (1995) Rheum Dis Clin North Am 2?_ 759-777), auranofin, fenilbutazona, ácido meclofenámico; ácido flufenámico; globulina inmune intravenosa; zileuton; azaribina; ácido micofenólico (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicina); amiprilosa (terafectina); cladribina (2-clorodesoxiadenosina); metotrexato; antivirales; y agentes moduladores inmunes. En una modalidad, el anticuerpo IL-12, o su porción de unión de antígeno, se administra en combinación con uno de los siguientes agentes para el tratamiento de artritis reumatoide: inhibidor de molécula pequeña de KDR (ABT-123), inhibidor de molécula pequeña de Tie-2; metotrexato; prednisona; celecoxib; ácido fólico; sulfato de hidroxicloroquina; rofecoxib; etanercept; infliximab; leflunomida; naproxen; valdecoxib; sulfasalazina; metilprednisolona; ibuprofeno; meloxicam; acetato de metilprednisolona; tiomalato de oro sódico; aspirina; azatioprina; acetonida de triamcinolona; napsilato de propxifeno/apap; folato; nabumetona; diclofenaco; piroxicam; etodolac; diclofenacoo de sodio; oxaprozina; clorhidrato de oxicodona; bitartrato de hidrocodona/apap; diclofenacoo de sodio/misoprostol; fentanilo; anaquinra, recombinante humano; clorhidrato de tramadol; salsalato; sulindac; cianocobalamina/fa/piridoxina; acetaminofen; alendronato de sodio; prednisolona; sulfato de morfina; clorhidrato de lidocaína; indometacina; sulfato de glucosamina/condroitina; ciclosporina; clorhidrato de amitriptilina; sulfadiazina; clorhidrato de oxicodona/acetaminofen; clorhidrato de olopatadina; misoprostol; naproxen de sodio; omeprazol; micofenolato mofetil; ciclofosfamida; rituximab; I L-1 TRAP; MRA; CTLA4-IG; IL-18 BP; ABT-874; ABT-325 (anti-IL 18); anti-IL 15; BIRB-796; SCIO-469; VX-702; AMG-548; VX-740; Roflumilast; IC-485; CDC-801; y mesopram. En otra modalidad, un anticuerpo de IL-12 o IL-23, o su porción de unión de antígeno, se administra para el tratamiento de un trastorno reaccionado con IL-12 o IL-23 en combinación con uno de los agentes anteriormente mencionados para el tratamiento de artritis reumatoíde. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para enfermedad inflamatoria del intestino con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención pueden ser combinados incluyen los siguientes: budenosida; factor de crecimiento epidérmico; corticosteroides; ciclosporina, sulfasalazina; aminosalicilatos; 6-mercaptopurina; azatioprina; metronidazol; inhibidores de lipoxigenasa; mesalamina; olsalazina; balsalazida; antioxidantes; inhibidores de tromboxano; antagonistas de receptor de IL-1; anticuerpos monoclonales anti-IL-1 ß; anticuerpos monoclonales anti-IL-6; factores de crecimiento; inhibidores de elastasa; compuestos de piridinil-imidazol; anticuerpos para o antagonistas de otras citocínas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, LT, IL-1, I L-2 , IL-6, ELA, IL-8, I L-15, I L-16, TL-17, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, pueden ser combinados con anticuerpos a moléculas de célula de superficie tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 o sus ligandos. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, también puede ser combinados con agentes tales como metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSABDs, por ejemplo, ibuprofeno, corticosteroides tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización a través de citocinas pro-inflamatorias tales como TNFa o IL-1 (por ejemplo IRAK, NIK, IKK, p38 o inhibidores de cinasa MAP), inhibidores de enzima de conversión de IL-1ß, inhibidores de enzima de conversión de TNFa, inhibidores de señalización de célula T tales como inhibidores de cinasa, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzima de conversión de angiotesina, receptores de citocina solubles y sus derivados (por ejemplo receptores de TNF p55 o p75 solubles, si L-1 Rl , sl L-1 Rl L sIL-6R) y citocinas anti-inflamatorias (por ejemplo IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 y TGFß). Ejemplos preferidos de agente terapéuticos para la enfermedad de Crohn en donde un anticuerpo o porción de unión de antígeno puede ser combinado, incluyen los siguientes: antagonistas de TNF, por ejemplo, anticuerpos anti-TNF, D2E7 (Publicación de PCT No. WO 97/29131; HUMIRA), CA2 (REMICADE), CDP 571, TNFR-lg construcciones de inhibidores de (p75TNFRIgG (ENBREL) y p55TNFRIgG (LENERCEPT)) e inhibidores de PDE4. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, pueden ser combinados con corticosteroides, por ejemplo, budenosida y dexametasona. Los anticuerpos de la invención o sus porciones de unión de antígenos, también se pueden combinar con agentes tales como sulfasalazina, ácido 5-aminosalicílico y olsalazina, y agentes que interfieren con la síntesis o acción de citocinas pro-inflamatorias tales como IL-1, por ejemplo, inhibidores de enzima de conversión de IL-1ß e I L- 1 ra . Los anticuerpos de la invención o su porción de unión de antígeno también se pueden utilizar con inhibidores de señalización de célula T, por ejemplo, inhibidores de cinasa de tirosina 6-mercaptopurinas. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, pueden combinarse con IL-11. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, se pueden combinar con mesalamina, prednisona, azatioprina, mercaptopurina, infliximab, succinato de metilprednisolona-sodio, difenoxilato/sulfato de atrop, clorhidrato de loperamida, metotrexato, omeprazol, folato, ciprofloxacina/dextrosa-agua, bitartrato de hidrocodona/apap, clorhidrato de tetraciclina, fluocinonida, metronidazol, timerosal/ácido bórico, colestiramina/sacarosa, clorhidrato de ciprofloxacina, sulfato de hiosciamina, clorhidrato de meperidina, clorhidrato de midazolam, clorhidrato de oxicodona/acetaminofen, clorhidrato de prometazina, fosfato de sodio, sulfametoxazol/trímetoprim, celecoxib, policarbofil, napsilato de propoxifeno, hidrocortisona, multivitaminas, balsalazida disódíca, fosfato de codeína/apap, clorhidrato de colesevelam, cianocobalamina, ácido fólico, levofloxacina, metilprednisolona, natalizumab e ¡nterferon-gama Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para esclerosis múltiple con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención pueden combinarse incluyen los siguientes: corticosteroides; prednisolona; metilprednisolona; azatioprina; ciclofosfamida; ciclosporina; metotrexato; 4-aminopiridina; tizanidina; interferon-ß1a (AVONEX; Biogen); interferon-ß1 b (BETASERON; Chiron/Berlex); interferon a-n3) (Interferon Sciences/Fujimoto), interferon-a (Alfa Wassermann/J&J), interferon ß 1 A-l F (Serono/lnhale Therapeutics), Peginterferon a2b (Enzon/Schering-Plough), Copolímero 1 (Cop-1; COPAXONE; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); oxígeno hiperbárico; inmunoglobulina intravenosa; clabribina; anticuerpos para o antagonistas de otras citocina humanas o factores de crecimiento y sus receptores, por ejemplo, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-23, IL-15, I L-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, se pueden combinar con anticuerpos a moléculas de superficie de célula tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 o sus ligandos. Los anticuerpos de la ¡nvención, o sus porciones de unión de antígeno, también se pueden combinar con agentes tales como metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofeno, corticosteroides tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización a través de citocinas pro-inflamatorias tales como TNFa o IL-1 (por ejemplo IRAK, NIK, IKK, inhibidores de cinasa p38 o MAP), inhibidores de enzima de conversión IL-1ß, inhibidores de TACE, inhibidores de señalización de célula T tales como inhibidores de cinasa, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzima de conversión de angiotensina, receptores de citocina solubles y sus derivados (por ejemplo receptores de TNF p55 o p75 solubles, si L-1 Rl , s I L- 1 Rl I , sIL- 6R) y citocinas anti-inflamatorias (por ejemplo IL-4, IL-10, IL-13 y TGFß). Los ejemplos preferidos de agentes terapéuticos para esclerosis múltiple en donde el anticuerpo o su porción de unión de antígeno se puede combinar incluyen interferon-ß, por ejemplo, IFNßla y IFNßlb; copaxona, corticosteroídes, inhibidores de caspasa, por ejemplo inhibidores de caspasa-1, inhibidores de IL-1, inhibidores de TNF, y anticuerpos para el ligando CD40 y CD80. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, también se pueden combinar con agentes, tales como alemtuzumab, dronabinol, Unimed, daclizumab, mitoxantrona, clorhidrato de xaliproden, fampridina, acetato de glatiramer, natalizumab, sinnabidol, a-inmunocina NNSO3, ABR-215062, AnergiX.MS, antagonista de receptor de quimiocina, BBR-2778, calagualina, C Pl- 1189, LEM (mitoxantrona encapsulada en liposoma), THC. CBD (agonista de canabinoide) MBP-8298, mesopram (inhibidor de PDE4), MNA-715, anticuerpo de receptor anti-IL-6, neurovax, pirfenidona allotrap 1258 (RDP-1258), sTNF-RI, tala panel, teriflunomida,TGF-beta2, tiplimotida, antagonistas de VLA-4 (por ejemplo, TR-14035, VLA4 Ultrahaler, Antegran-ELAN/Biogen), antagonistas de interferon-gamma, agonistas de IL-4. Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para angina con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención se puede combinar, incluyen los siguientes: aspirina, nitroglicerina, mononitrato de isosorbida, succinato de metoprolol, atenolol, tartrato de metoprolol, besilato de amlodipina, clorhidrato de diltiazem, dinitrato de isosorbida, bisulfato de clopidogrel, nifedipina, atorvastatina de calcio, cloruro de potasio, furosemida, simvastatina, clorhidrato de verapamil, digoxina, clorhidrato de propranolol, carvedilol, lisinopril, espironolactona, clorhidrato de tíazida, maleato de enalapril, nadolol, ramipril, enoxaparina sódica, heparina sódica, valsartan, clorhidrato de sotalol, fenofibrato, ezetimiba, bumetanida, losartan potásico, lisinopril/hidroclorotiazida, felodipina, captopril, fumarato de bisoprolol. Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para Spondilitis Anquilosante con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención pueden combinarse, incluyen los siguientes: ibuprofeno, diclofenaco y misoprostol, naproxen, meloxicam, indometacina, diclofenaco, celecoxib, rofecoxib, Sulfasalazina, Metotrexato, azatioprina, minociclina, prednisona, etanercept, infliximab. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para Asma con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo, de la invención pueden ser combinados, incluyen los siguientes: albuterol, salmeterol/fluticasona, montelukast sódico, propionato de fluticasona, budesonida, prednisona, xinafoato de salmeterol, clorhidrato de levalbuterol, sulfato de albuterol/ipratropío, fosfato de prednisolona-sodio, acetonida de triamcinolona, dipropionato de beclometasona, bromuro de ipratropio, azitromicina, acetato de pirbuterol, prednisolona, teofilina anhidra, succinato de metilprednisolona-sodio, claritromicina, zafirlukast, fumarato de formoterol, vacuna de virus de influenza, metilprednisolona, trihidrato de amoxicilina, flunisolida, inyección de alergia, cromolin sódico, clorhidrato de fexofenadina, flunisolida/mentol, amoxicilina/clavulanata, levofloxacina, dispositivo auxiliar inhalador, guaifenesina, fosfato de dexametasona-sodio, clorhidrato de moxifloxacina, hiclato de doxiciclina, guaifenesina/d-metorfan, p-efedrina/cod/clorfenir, gatifloxacina, clorhidrato de cetirizina, furoato de mometasona, xinafoato de salmeterol, benzonatato, cefalexina, pe/hidrocodona/clorfenir, clorhidrato de cetirizina/pseudoefed, fenilefrina/cod/prometazina, codeína/prometazina, cefprozil, dexametasona, guaifenesina/pseudoefedrina, cío rfe ni ra min a/ hidrocodona, nedocromil sódico, sulfato de terbutalina, epinefrina, metilprednisolona, sulfato de metaproterenol. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para COPD con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención se puede combinar, incluyen los siguientes: sulfato de albuterol/ipratropio, bromuro de ipratropio, salmeterol/fluticasona, albuterol, xinafoato de salmeterol, propionato de fluticasona, prednisona, teofilina anhidra, succionato de metilprednisolona-sodio, montelukast sodio, budesonida, fumarato de formoterol, acetonida de triamcinolona, levofloxacina, guaifenesina, azitromicina, dipropionato de beclometasona, clorhidrato de levalbuterol, f I u n ¡solida , ceftriaxona sódica, trihidrato de amoxicilina, gatifloxacina, zafirlukast, amoxicilina/clavulanato, flunisolida/mentol, clorfeniramina/hidrocodona, sulfato de metaproterenol, metilprednisolona, furoato de mometasona, p-efedrina/cod/clorfenir, acetato de pirbuterol, p-efedrina/loratadina, sulfato de terbutalina, bromuro de tiotropio, (R,R)-formoterol, TgAAT, Cilomilast, Roflumilast. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para HCV con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención se puede combinar, incluyen los siguientes: lnterferon-alfa-2a, lnterferon-alfa-2b, Interferon-alfa conl, lnterferon-alfa-n1 , interferon-alfa-2a pegilado, interferon-alfa-2b pegilado, ribavirin, alfa-2b + ribavirin pegilado, Ácido Ursodesoxicólíco, Ácido Glicirrízico, Thymalfasin, Maxamine, VX-497 y cualquier compuesto que se utilice para tratar HCV a través de la intervención con los siguientes objetivos: polimerasa de HCV, proteasa de HCV, helicasa de HCV, HCV IRES (sitio de entrada de ribosoma interno). Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para Fibrosís Pulmonar I d 10 pática con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención pueden ser combinados, incluyen los siguientes prednisona, azatioppna, albuterol, colquicina, sulfato de albuterol, digoxina, gama interferon, metilprednisolona sod succ, lorazepam, furosemida, lisinoppl, nitroglicerina spironolactona, ciclofosfamida, bromuro de ipratropio, actinomicina d, alteplasa, propionato de fluticasona, levofloxacina, sulfato de metaproterenol, sulfato de morfina, clorhidrato de oxicodona, cloruro de potasio, acetonida de tpamcinolona, tacrohmus anhidro, calcio, interferon-alfa, metotrexato, micofenolato mofetil, lnterferon-gamma-1 ß Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para ¡Infarto al Miocardio con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención se pueden combinar, incluyen los siguientes aspirina, nitroglicerina, tartrato de metoprolol, enoxapapna sódica, hepapna sódica, bisulfato de clopidogrel, carvedilol, atenolol, sulfato de morfina, succinato de metoprolol, warfapna sódica, lismoppl, mononitrato de isosorbida, digoxma furosemida, simvastatma, ramippl, tenecteplasa, maleato de enalappl, torsemida, retavasa, losartan potásico, clorhidrato de quinappl/mag carb, bumetanida, alteplasa, enalapplat, clorhidrato de amiodarona, m-hidrato de clorhidrato de tirofiban, clorhidrato de diltiazem, captoppl, irbesartan, valsartan, clorhidrato de propranolol, fosmopril sódico, clorhidrato de lidocaína, eptif ibatida , cefazohna sódica, sulfato de atropina, ácido aminocaproico, spironolactona, interferon, clorhidrato de sotalol, cloruro de potasio, docusato sódico, clorhidrato de dobutamina, alprazolam, pravastatina sódica, atorvastatina de calcio, clorhidrato de midazolam, clorhidrato de meperidina, dinitrato de isosorbida, epinefrina, clorhidrato de dopamina, bivalirudina, rosuvastatina, ezetimiba/simvastatina, avasimiba, cariporida. Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para Psoriasis con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la ¡nvención pueden ser combinados, incluyen los siguientes: inhibidor de molécula pequeña de KDR (ABT-123), inhibidor de molécula pequeña de Tie-2, calcipotrieno, propionato de clobetasol, acetonida de triamcinolona, propionato de halobetasol, tazaroteno, metotrexato, fluocinonida, betametasona diprop aumentada, acetonida de fluocinolona, acitretina, champú de alquitrán, valerato de betametasona, furoato de mometasona, ketoconazol, pramoxina/fluocinolona, valerato de hidrocortisona, flurandrenolida, urea, betametasona, propionato de clobetasol/emol, propionato de fluticasona, azitromicina, hidrocortisona, fórmula humectante, ácido fólico, desonida, pimecrolimus, alquitrán, diacetato de diflorasona, folato de etanercept, ácido láctico, metoxsalen, hc/bismuth subgal/znox/resor, acetato de metilprednisolona, prednisona, filtro solar, halcinonida, ácido salicílico, antralina, pivalato de clocortolona, extracto de carbón, alquitrán/ácido salicílico, alquitrán/ácido salicílico/azufre, desoximetasona, diazepam, emoliente, fluocinonida/emoliente, aceite mineral/aceite de ricino/lactana, aceite mineral/aceite de cacahuate, petróleo/miristato de isopropilo, psoralen, ácido salicílico, jabón/tribromsalan, timerosal/ácido bórico, celecoxib, infliximab, ciclosporina, alefacept, efalizumab, tacrolimus, pimecrolimus, PUVA, UVB, sulfasalazina. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para Artritis Psoriática con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención, pueden ser combinados, incluyen los siguientes: metotrexato, etanercept, rofecoxib, celecoxib, ácido fólico, sulfasalazina, naproxen, leflunomida, acetato de metilprednisolona, indometacina, sulfato de hidroxicloroquina, prednisona, sulindac, diprop de betametasona aumentado, infliximab, metotrexato, folato, acetonida de triamcinolona, diclofenacoo, sulfóxido de dimetilo, piroxicam, diclofenacoo sódico, cetoprofen, meloxicam, metilprednisolona, nabumetona, tolmetin sódico, calcipotriena, ciclosporina, diclofenaco sódico/misoprostol, fluocinonida, sulfato de glucosamina, tiomalato de oro-sodio, bitartrato de hidrocodona/apap, ibuprofeno, risedronato sódico, sulfadiazina, tioguanina, valdecoxib, alefacept, efalizumab. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para Restenosis con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención, pueden combinarse, incluyen los siguientes: sirolimus, paclitaxel, everolimus, tacrolimus, ABT-578, acetaminofen. Ejemplos no limitantes de agente terapéuticos para Ciática con los cuales un anticuerpo, o porción de anticuerpo de la invención, pueden ser combinados, incluyen los siguientes: bitartrato de hidrocodona/apap, rofecoxib, clorhidrato de ciclobenzaprina, metilprednisolona, naproxen, ibuprofeno, clorhidrato de oxicodona/acetaminofen, celecoxib, valdecoxib, acetato de metilprednisolona, prednisona, fosfato de codeína/apap, clorhidrato de tramadol/acetaminofen, metaxalona, meloxicam, metocarbamol, clorhidrato de lidocaína, diclofenacoo sódico, gabapentin, dexametasona, carisoprodol, ketorolac trometamina, indometacína, acetamínofen, diazepam, nabumetona, clorhidrato de oxicodona, clorhidrato de tizanidina, diclofenacoo sódico/misoprostol, napsilato de propoxifeno/apap, asa/oxicod/oxicodona ter, ibuprofeno/trozo de hidrocodona, clorhidrato de tramadol, etodolac, clorhidrato de propoxifeno, clorhidrato de amitriptilina, carisoprodol/codeína phos/asa, sulfato de morfina, multivitaminas, naproxen sódico, citrato de orfenadrina, temazepam. Ejemplos preferidos de agentes terapéuticos para SLE (Lupus) en los cuales un anticuerpo o una porción de unión de antígeno, se pueden combinar, incluyen los siguientes: NSAIDS, por ejemplo, diclofenaco, naproxen, ¡buprofeno, piroxicam, indometacina; inhibidores de COX2, por ejemplo, Celecoxib, rofecoxib, valdecoxib; anti-malaria, por ejemplo, hidroxicloroquina; Esteroides, por ejemplo, prednisona, prednisolona, budenosida, dexametasona; Citotóxicos, por ejemplo, azatioprina, ciclofosfamida, micofenolato mofetil, metotrexato; inhibidores de PDE4 o inhibidor de síntesis de purina, por ejemplo Cellcept. Los anticuerpos de la invención o sus porciones de unión de antígeno, también se pueden combinar con agentes tales como sulfasalazina, ácido 5-aminosalicílico, olsalazina, Imuran y agentes que interfiere con la síntesis, producción o acción de citocinas pro-inflamatorias tales como IL-1, por ejemplo, inhibidores de caspasa, tal como inhibidores de enzima de conversión IL-1ß e I L- 1 ra . Los anticuerpos de la invención o su porción de unión de antígeno también se pueden utilizar con inhibidores de señalización de célula T, por ejemplo, inhibidores de cinasa de tirosina; o moléculas que activan moléculas de activación de célula T, por ejemplo, CTLA-4-lgG o anticuerpos de la familia anti-B7, anticuerpos de la familia anti-PD-1. Los anticuerpos de la invención, o sus porciones de unión de antígeno, se pueden combinar con IL-11 o anticuerpos anti-citocina, por ejemplo, fonotolizumab (anticuerpo anti-IFNg), o anticuerpos de receptor antireceptor, por ejemplo, anticuerpo receptor anti-IL-6 y anticuerpos para moléculas de superficie de célula B. Los anticuerpos de la invención o su porción de unión de antígeno también se pueden utilizar con LJP 394 (abetimus), agentes que reducen o inactivas células B, por ejemplo, Rituximab (anticuerpo anti-CD20), limfostato-B (anticuerpo anti-BlyS), antagonistas de TNF, por ejemplo, anticuerpos anti-TNF, D2E7 (Publicación de PCT No. WO 97/29131; HUMIRA), CA2 (REMICADE), CDP 571, construcciones TNFR-lg, (p75TNFRIgG (ENBREL) y p55TNFRIgG (LENERCEPT)). Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden incluir una "cantidad terapéuticamente efectiva" o una "cantidad profilácticamente efectiva" de un anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, a dosis y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo o porción de anticuerpo se puede determinar por algún experto en la técnica y puede variar de acuerdo con factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo y peso del individuo, y la habilidad del anticuerpo o porción de anticuerpo para producir una respuesta deseada del individuo. Una cantidad terapéuticamente efectiva también es una en donde cualquier efecto tóxico o dañino del anticuerpo, o porción de anticuerpo, es excedido por los efectos terapéuticamente benéficos. Una "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, a dosis durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, ya que una dosis profiláctica se utiliza en sujetos antes de o en la etapa inicial de la enfermedad, la cantidad profilácticamente efectiva será menor que la cantidad terapéuticamente efectiva. Los regímenes de dosis pueden ser ajustados para proporcionar la respuesta deseada óptima (por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica). Por ejemplo, se puede administrar un bolo individual, varias dosis divididas pueden ser administradas durante un tiempo o la dosis puede ser proporcionalmente reducida o incrementada según indicado por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de dosis unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosis. La forma de dosis unitaria como se utiliza aquí, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los sujetos mamíferos que serán tratados; cada unidad conteniendo una cantidad predeterminada del compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado junto con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación par alas formas de dosis unitaria de la invención son dictadas por y directamente dependen de (a) las características únicas del compuesto activo y el terapéutico o profiláctico particular que será logrado, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de la composición tal como un compuesto activo para el tratamiento de sensibilidad en individuos. Una escala no limitante ilustrativa para una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de ¡n anticuerpo o porción de anticuerpo de la invención es de 0.1-20 mg/kg, muy preferiblemente de 1-10 mg/kg. Se debe observar que los valores de dosis pueden variar con el tipo y severidad de la condición que será aliviada. Además se debe entender que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosis específicos deben ser ajustados con el tiempo de acuerdo con la necesidad del individuo y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que las escalas de dosis establecidas aquí son solo ilustrativas y no pretenden limitar el alcance o práctica de la composición reclamada. Será fácilmente evidente para aquellos expertos en la técnica que otras modificaciones y adaptaciones adecuadas de los métodos de la invención descritos aquí son obvias y se pueden hacer utilizando equivalentes adecuados sin apartarse del alcance de la invención o modalidades descritas aquí. Habiendo ahora descrito la presente invención con detalle, la misma será más claramente entendida haciendo referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se incluyen con el propósito de ilustrar solamente y no pretenden ser limitantes de la invención.
Ejemplos Ejemplo 1: Generación y asilam-ento de a r-tii cuerpos imor-oc.oina.es IL-H2 anti-huippianos Ejemplo 1.H: Ensayos para identificar anticuerpos -L°H2 anti- h mímanos A través del Ejemplo 1 se utilizaron los siguientes ensayos para identificar y caracterizar anticuerpos IL-12 anti-humanos a menos que se establezca otra cosa.
Ejemplo 1.1 A: ELISA Se realizaron como sigue Ensayos Inmunoabsorbentes Enlazados a Enzima para clasificar los anticuerpos que unen IL-12 humana.
Ejemplo 1.1.A.1: ELISA para detectar la unión d® an<-icu?e?rpos IL-12 anti-lhumanos a IL-12 IP7Q Placas ELISA (Corning Costar, Acton, MA) se cubrieron con 50µL/cavidad de 5µg/ml de IgG Fc de antiratón de cabra específico (Pierce # 31170, Rockford, IL.) en Salina Regulada en su pH con Fosfato (PBS) durante la noche a 4 grados centígrados. Las placas se lavaron una vez con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Las places se bloquearon a través de la adición de 200 µL/cavidad de una solución de bloqueo diluida a 2% en PBS (BioRad #170-6404, Hercules, CA.) durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron una vez después de bloquear con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se agregaron cincuenta microlitros por cavidad de suero de ratón o sobrenadantes de hibridoma diluidos en PBS conteniendo 0.1% de Albúmina de Suero de Bovino (BSA) (Sigma, St. Louis, MO.) a la placa de ELISA preparada como se describió anteriormente y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron tres veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se agregaron cincuenta microlitros de IL-12 p70 purificada recombinante, biotinilada, diluida a 100ng/mL en PBS conteniendo 0.1% BSA a cada cavidad y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyó Streptavidina HRP (Pierce # 21126, Rockland, IL.) 1:20000 en PBS conteniendo 0.1% BSA; se agregaron 50 µL/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se agregaron a cada cavidad cincuenta microlitros de la solución TMB (Sigma # T0440, St. Louis, MO.) y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. La reacción se detuvo a través de la adición de 1N de ácido sulfúrico. Las placas se leyeron espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm.
Ejemplo 1.1. A. : ELISA para determinar la habilidad d® CL-H2 p70> o 1L-12 p40 para competir con la unión de anticuerpos .L-12 antó-humar-os a BL-12 p70 Las placas de ELISA (Corning Costar, Acton, MA) se cubrieron con 50µL/cavidad de 5µg/ml de IgG Fc de anti-ratón de cabra específico (Pierce # 31170, Rockford, IL.) en PBS durante la noche a 4 grados centígrados. Las placas se lavaron una vez con PBS + 0.05% Tween-20. Las placas se bloquearon a través de la adición de PBS + 10% de leche en polvo durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces después de bloquear con PBS + 0.05% Tween-20.
Ejemplo 1.1. A 2(a): Protocolo de ELISA de competencia de 1L-12 p70 De diluyeron sueros de ratón o sobrenadantes de hibridoma en PBS conteniendo 0.1% BSA (Sigma, St. Louis, MO.) dependiendo de la titulación de anticuerpo anticipada. Se preparó IL-12 p70 humana purificada recombinante, biotinilada como una solución de abastecimiento concentrada tres veces (3x) a 0.1µg/ml in PBS conteniendo 0.1% BSA. Se prepare IL-12 p70 humana purificada recombinante a varias concentraciones variando de 0.1 a 10µg/ml en PBS conteniendo 0.1% BSA. Se mezclaron volúmenes iguales (75µL) de cada una de las siguientes soluciones: sueros de ratón o sobrenadante de hibridoma diluidos, IL-12 p70 humana purificada recombinante biotinilada, e IL-12 p70 humana purificada recombinante. Se agregaron cincuenta microlitros de esta mezcla a las placas de ELISA descritas anteriormente, y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron tres veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyó estreptavidina HRP (Pierce # 21126, Rockland, IL.) 1:20000 en PBS conteniendo 0.1% BSA; 50 µL/cavidad; se agregaron y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se agregaron cincuenta microlitros de la solución TMB (Sigma # T0440, St. Louis, MO.) a cada cavidad y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. La reacción se detuvo a través de la adición de 1N de ácido sulfúrico. Las placas se leyeron espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm.
Ejemplo 1.1. A 2(b): Protocolo de ELISA d® competencia d® 1L-12 Eü Se diluyeron sueros de ratón o sobrenadantes de hibridoma en PBS conteniendo 0 1% BSA (Sigma, St Louis, MO ) dependiendo de la titulación de anticuerpo anticipada Se preparó IL-12 p70 humana purificada recombinante, biotmilada, como una solución de abastecimiento tres veces concentrada (3x) a 0 1µg/ml en PBS conteniendo 0 1% BSA Se preparó IL-12 p40 humana purificada recombinante a varias concentraciones variando de 0 1 a 10µg/ml en PBS conteniendo 0 1% BSA Se mezclaron volúmenes iguales (75µL) de cada una de las siguientes soluciones sueros de ratón o sobrenadante de hibpdoma diluidos, IL-12 p70 humana purificada recombinante biotini lada, e IL-12 p40 humana purificada recombinante Se agregaron cincuenta microhtros de esta mezcla a las placas de ELISA revestidas y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente Las cavidades se lavaron tres veces con PBS conteniendo 0 05% Tween-20 Se diluyó estreptavidina HRP (Pierce # 21126, Rockiand, IL ) 1 20000 en PBS conteniendo 0 1% BSA, se agregaron 50 µL/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0 05% Tween-20 Se agregaron a cada cavidad cincuenta microhtros de la solución de TMB (Sigma # T0440, St Louis, MO ) y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente La reacción se detuvo a través de la adición de 1N de ácido sulfúrico Las placas se leyeron espectrofotométpcamente a una longitud de onda de 450 nm Ejemplo 1.1. B: Determinaciones de Afinidad utilizando tecnología BIACORE El ensayo de BIACORE (Biacore, Inc, Piscataway, NJ) determina la afinidad de anticuerpos con medidas cinéticas de constantes de velocidad de encendido, apagado. La unión de anticuerpos a IL-12 p70 humana purificada recombinante o IL-12 p40 humana purificada recombinante se determinó a través de mediciones a base de resonancia de plasmón de superficie con un instrumento Biacore® 3000 (Biacore® AB, Uppsala, Sweden) utilizando HBS-EP corrido (10 mM HEPES [pH 7.4], 150 mM NaCI, 3 mM EDTA, y 0.005% de agente tensoactivo P20) a 25°C. Todos los químicos se obtuvieron de Biacore® AB (Uppsala, Sweden) o de otra manera de una fuente diferente como se describe en el texto. Aproximadamente 5000 RU de IgG de anti-ratón de cabra, (FCY), anticuerpo policlonal de fragmento específico (Pierce Biotechnology Inc, Rockford, IL) diluidos en 10 mM de acetato de sodio (pH 4.5) se inmovilizaron directamente a través de un circuito de biosensor de grado de investigación CM5 utilizando un equipo de acoplamiento de amina estándar de acuerdo con las instrucciones del fabricante y procedimientos a 25 µg/ml. Las porciones sin reaccionar sobre la superficie del biosensor se bloquearon con etanolamina. Se utiliza, como una superficie de reacción, una superficie de carboximetil dextrana modificada en un flujo de célula 2 y 4. Se utilizo, como una superficie de referencia, carboximetil dextrana no modificada sin IgG de anti-ratón de cabra en célula de flujo 1 y 3. Para el análisis cinético, las ecuaciones de velocidad derivadas del modelo de unión de 1 1 Langmuir se fijaron simultáneamente a fases de asociación y disociación de las ocho inyecciones (utilizando análisis de fijación global) con el uso del software Bioevaluation 4 0 1 Los anticuerpos purificados se diluyeron en solución regulada en su pH en HEPES para capturar a través de las superficies de reacción específicas de IgG de anti-raton de cabra Se inyectaron anticuerpos de ratón que serán capturados como un ligando (25 µg/ml) a través de matrices de reacción a una velocidad de flujo de 5 µl/mm Las constantes de velocidad de asociación y disociación, kencend?do (unidad M-1s 1) y kapagado (unidad s ) se determinaron bajo una velocidad de flujo continuo de 25 µl/mm Las constantes de velocidad se derivaron haciendo mediciones de unión cinéticas a diez diferentes concentraciones de antigeno que vanan de 10 - 200 nM La constante de disociación de equilibrio (unidad M) de la reacción entre anticuerpos de ratón y IL-12 p70 humana purificada recombinante o IL-12 p40 humana purificada recombinante después se calculó a partir de las constantes de velocidad cinética a través de la siguiente fórmula KD = kencendrdo/kapagado La unión se registro como una función del tiempo y se calcularon las constantes de velocidad cinética En este ensayo, se pueden medir velocidades en encendido tan rápidas como 106M 1s 1 y las velocidades de apagado tan lentas como 106 s Ejemplo 1.1. C: Actividad Funcional de anticuerpos 1L-12 anti-humanos Para examinar la actividad funcional de los anticuerpos IL-12 anti-humanos de la ¡nvención, los anticuerpos se utilizaron en los siguientes ensayos que miden la habilidad de un anticuerpo para inhibir la actividad de IL-12.
Ejemplo 1.11. C 1: Preparación de Linffoblastos PHA activados humanos Se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (PBMCs) a partir de un paquete de leucocitos (leukopac) recolectado de un donador saludable a través de centrifugación de gradiente Ficoll-Hypaque durante 45 minutos a 1500 rpm como se describe en Current Protocols in Immunology, Unit 7.1. Las PBMC en la superficie colindante de la solución sanguínea acuosa y el medio de separación de linfocitos se recolectaron y se lavaron tres veces con salina regulada en su pH con fosfato (PBS) a través de centrifugación durante 15 minutos a 1500 rpm para remover las partículas de Ficoll-Paque. Las PBMC después se activaron para formar linfoblastos como se describe en Current Protocols in Immunology, Unit 6.16. Las PBMC lavadas se volvieron a suspender a 0.5-1x106 células/mL en un medio completo de RPMl (medio RPMl 1640, 10% suero de bovino fetal (FBS), 100 U/ml penicilina, 100 tg/ml estreptomicina), suplementado con 0.01mg/mL PHA-P (Sigma #L8754, St. Louis, MO) y se cultivo durante 4 días a 37°C en una atmósfera de 5% CO2. Después de cuatro días, todos los cultivos de célula después se volvieron a sembrar en 1x106 células/mL en un medio de cultivo con 0.01mg/mL PHA-P y 50U/mL I L-2 humana recombinante (R&D Systems #202-IL, Minneapolis, MN.). Las células se incubaron a 37°C durante 24 horas, se lavaron con un medio completo de RPMl, después se concentraron en 95% FBS, 5% DMSO a 1x107 células/ml.
Ejemplo 1.1. C 2: Ensayo de inducción de IFN-y de áfaga PHA: Ir-lr-ibición de la actividad de 1L-12 humana La habilidad de los anticuerpos IL-12 anti-humanos para inhibir la producción de IFN-? inducida por IL-12 humana a través de ráfagas de PHA se analizó como sigue. Varias concentraciones de suero de ratón inmunizado, sobrenadante de hibridoma de murino o anticuerpos de IL-12 anti-humanos purificados se pre-íncubaron durante una hora a 37 grados centígrados con 400 pg/ml de IL-12 p70 humana purificada recombinante en 100µL de un medio completo de RPMl en una placa de microtitulación (fondo con forma de U, 96 cavidades, Costar). Las ráfagas de PHA aisladas como se describe anteriormente, se lavaron una vez y se volvieron a suspender en un medio completo de RPMl a una densidad de célula de 1X107 células/ml. Se agregaron ráfagas de PHA (100µL de 1X106 células/ml) al anticuerpo más la mezcla de IL-12 p70 humana purificada recombinante (concentración final de IL-12 p70 concentración fue de 200 pg/ml) y se incubaron durante 18 horas a 37 grados centígrados. Después de la incubación, se retiraron 150 µL del sobrenadante libre de célula de cada cavidad y se midió el nivel de IFN-? humano producido utilizando un ensayo IFN-? ELISA humano (R&D Systems Cat#DIF50).
Ejemplo 1.1. C 3: Ensayo de inducción de IFN-y d@ ráfaga de PHA: Inhibición de actividad de IL-12 de mono cinomolgus (cyr-ot La habilidad de anticuerpos IL-12 anti-humanos para inhibir la producción de IFN-? inducida por IL-12 de mono cinomolgus a través de ráfagas de PHA se analizó como sigue. Varias concentraciones de suero de ratón inmunizado, sobrenadante de hibridoma de murino o anticuerpos IL-12 anti-humanos purificados se pre-incubaron durante una hora a 37 grados centígrados con 150 pg/mL IL-12 p70 cyno purificado recombinante en 100µL de un medio completo de RPMl en una placa de microtitulación (fondo con forma de U, 96-cavidades, Costar). Las ráfagas de PHA aisladas como se describió anteriormente, se lavaron una vez y se volvieron a suspender en un medio completo de RPMl a una densidad de célula de 1X107 células/ml. Se agregaron ráfagas de PHA (100µL de 1X107 células/mL) al anticuerpo más la mezcla de IL-12 p70 cyno purificada recombinante (la concentración de IL-12 p70 cyno final fue de 75µg/ml) y se incubaron durante 18 horas a 37 grados centígrados. Después de la incubación, se retiraron 150 µL del sobrenadante libre de célula de cada cavidad y se midió el nivel de IFN-? humano producido utilizando un ensayo IFN-? ELISA humano (R&D Systems Cat#D]F50).
Ejemplo 1.2: Generación de anticuerpos monoclonales d® 1L-12 anti-humanos Se obtuvieron como sigue anticuerpos monoclonales de IL-12 anti-humanos como sigue: Ejemplo 1.2. A: Inmunización de ratones con ant?fliepo 1L-12 humana Se inyectaron subcutáneamente veinte microgramos de IL-12 p70 humana purificada recombinante mezclada con auxiliar complete de Freund (Rockiand Immunochemicals, Gilbertsville, PA) a cinco ratones Balb/C y 5 AJ de 6-8 semanas de edad en el día 1. En los días 24, 38, y 49, se inyectaron subcutáneamente veinte microgramos de IL-12 p70 humana purificada recombinante mezclada con auxiliar Immunoeasy (Qiagen, Valencia, CA) a los mismos 5 ratones Balb/C y 5 AJ. En el día 84 o el día 112 o el día 144, los ratones fueron inyectados intravenosamente con 10 ug de 1L-12 p70 humana purificada recombinante o 2ug IL-12 p40 humana purificada recombinante (R & D Systems, Minneapolis, MN).
Ejemplo 1.2.B: Generación de Hibridoma Se fusionaron esplenocitos obtenidos de los ratones inmunizados descritos en el Ejemplo 1.2. A con células SP2/O-Ag-14 a una relación de 5: 1 de acuerdo con el método establecido descrito por Kohler, G. and Milestein 1975, Nature, 256:495 para generar hibridomas. Los productos de fusión se colocaron en medios de selección conteniendo azaserina e hipoxantína en placas de 96 cavidades a una densidad de 2.5x106 células de bazo por cavidad. De siete a diez días después de la fusión, se observaron coonas de hibridoma macroscópicas. El sobrenadante de cada cavidad conteniendo colonias de hibridoma se probó a través de ELISA para la presencia del anticuerpo a IL-12 p70 (como se describe en el Ejemplo 1.1.A.1). Después se probaron los sobrenadantes que fueron positivos para la unión a IL-12 p70 para determinar si fueron p40-específicos a través del ensayo ELISA de competencia de IL-12 p70 o IL-12 p40 (como se describe en el Ejemplo 1.1. A.2). Después, se probaron los sobrenadantes que desplegaron actividad IL-12 p40-específica para la habilidad para neutralizar IL-12 en el ensayo de ráfaga de PHA para IFN-? (como se describe en el Ejemplo 1.1. C).
Cuadro 8: Fusión y datos de clasificación después d® i?p??pr.u?riizs?c?or??es de ratones con 111 = 112 humüir-a Ejemplo 1.2.C: Identificación y caracterización de anticuerpos monoclonales I L-12 p40 anti-hu anos Los hibrodomas que producen anticuerpos que unen IL-12, generados de acuerdo con los Ejemplos 1.2.B y 1.2.C, y capaces de unir IL-12 p40 específica y particularmente aquellos con valores de IC50 en el ensayo de ráfaga de PHA de 12nM o menos de 12nM fueron escalados y clonados a través de dilución limitante. Las células de hibridoma se expandieron en medios conteniendo 10% de suero de bovino fetal con un bajo contenido de IgG (Hyclone #SH30151, Logan, UT.). En promedio, se cosecharon 250 mL de cada sobrenadante de hibridoma (derivado de una población clonal), se concentraron y se purificaron a través de cromatografía de afinidad de proteína A, como se describe por Harlow, E. y Lañe, D. 1988 "Antibodies: A Laboratory Manual". Se determinó la habilidad de mAbs purificados para inhibir la actividad de IL-12 utilizando el ensayo de ráfaga de PHA como se describe en los Ejemplos 1.1. C2 y 1.1. C3. El Cuadro 9 muestra valores de IC50 de los ensayos de ráfaga de PHAs para diez anticuerpos monoclonales.
Cuadro 9: Neutralización de DL-12 a través d@ anticuerpos mraonocIona.es de murino anti-lL-12p40 Las afinidades de unión de los anticuerpos monoclonales a IL-12 p70 humana purificada recombinante se determinaron utilizando una medición de resonancia de plasmón de superficie (Biacore®) como se describe en Ejemplo 1.1. B. El Cuadro 10 muestra la afinidad de los diez anticuerpos monoclonales descritos anteriormente para IL-12 p70 humana.
Cuadro 10: Afinidad de Anticuerpos [Monoclonales de Rf-urono anti 11-12 p40 para IL-12 p7Q Ejemplo 1.2.C.1: Carácter específico de especie de aA e eripos IL°12p40 anti-riumanos monoclonales ® miurino Para determinar si los diez anticuerpos monoclonales descritos anteriormente reconocen IL-12 de murino, se establecieron dos ensayos de ELISA. Primero, se estableció un ensayo ELISA directo recubriendo directamente placas de ELISA con 5 ug/ml de IL-12 de ratón purificado recombinante (Peprotech). Se prepararon mAbs de IL-12 p40 anti-humano de murino a varias concentraciones que variaron de 3 a 200 ng/ml en PBS conteniendo 0.1% BSA (Sigma, StLouis, MO). Se agregaron 50 µl de cada dilución de anticuerpo a la placa de ELISA revestida y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyó anticuerpo IgG-HRP de antiratón (R&D #HAF007, Minneapolis, MN) 1:2000 en PBS conteniendo 0.1% BSA; se agregaron 50 ul/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Se agregaron a cada cavidad cincuenta microlitros de la solución de TMB (Sigma # T0440, St. Louis, MO.) y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. La reacción se detuvo a través de la adición de 2N de ácido sulfúrico. Las placas se leyeron espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm. En segundo lugar, se estableció un ensayo de ELISA indirecto revistiendo placas de ELISA con 5ug/ml de anticuerpo específico de fragmento Fc, IgG de anti-ratón de cabra, (Pierce # 31170, Rockiand, IL). Se prepararon mAbs de IL-12 p40 anti-humano de murino a varias concentraciones variando de 0.1 a 100 ng/ml en PBS conteniendo 0.1% BSA; se agregaron 50 ul de cada dilución de anticuerpo a la placa de ELISA revestida y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyó IL-12 de ratón purificada recombinante (Preprotech) a 0.2 ug/ml en PBS conteniendo 0.1% BSA; se agregaron 50 ul/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyó el anticuerpo IL-12 de anti-ratón biotinilado (R&D # BAF419) a 0.2 ug/ml en PBS conteniendo 0 1% BSA; se agregaron 50 ul/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se diluyo estreptavidina HRP (Pierce # 21126, Rockiand, IL.) 1:20000 en PBS conteniendo 0.1% BSA; se agregaron 50 µL/cavidad y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces con PBS conteniendo 0.05% Tween-20. Se agregaron cincuenta microlitros de solución TMB a cada cavidad y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. La reacción se detuvo a través de la adición de 2N de ácido sulfúrico. Las placas se leyeron espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm. Los resultados de los ensayos de ELISA directo e indirecto realizados con los diez anticuerpos monoclonales se muestran en el Cuadro 11.
Cuadro 11: Unión de Anticuerpos Monoclonaíss de ilurino anti-II 12 a IL-12 p40 de ratón Ejemplo 1.2.D: Determinación de la secuencia d® a imiolicidos d® ia región variable para cada mAb d® 1L-12 o O anti-humano de murino Para cada determinación de secuencia de aminoácidos aproximadamente 10x106 células de hibridoma se aislaron a través de centrifugación y se procesaron para aislar ARN total con Trizol (Gibco BRL/Invitrogen, Carisbad, CA.), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ARN total se sometió a síntesis de AND de Primera Estructura de Cadena utilizando el Sistema de Síntesis (Invitrogen, Carisbad, CA) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se utilizó Oligo(dT) para iniciar la síntesis de primera estructura de cadena para seleccionar ARN poli(A)J El producto de ADNc de primera cadena de estructura de base después se amplificó a través de PCR con iniciadores designados para la amplificación de regiones variables de inmunoglobulina de murino (Ig-Primer Sets, Novagen, Madison, Wl). Los productos de PCR se resolvieron sobre un gel de agarosa, se separaron, se purificaron y después se subclonaron con el equipo de TOPO Cloning en el vector pCR2.1-TOPO (Invitrogen, Carisbad, CA) y se transformaron a E. coli químicamente competente, TOP10 (Invitrogen, Carisbad, CA). Se realizó la PCR en la colonia en los transformantes para identificar los clones que contienen el inserto. El ADN de plásmido se aisló de los clones conteniendo el inserto utilizando un equipo QIAprep Miniprep (Qiagen, Valencia, CA). Los insertos en los plásmidos se secuencíaron en ambas estructuras de cadena para determinar las secuencia de ADN de cadena pesada variable o ligera variable utilizando iniciadores M13 de avance y M13 inversos (Fermentas Life Sciences, Hanover MD). Las secuencias de cadena pesada variable y de cadena ligera variable de los diez anticuerpos monoclonales descritos en el Ejemplo 1.2.C se describen en el Cuadro 1.
Ejemplo 2: Anticuerpos IL-12p40 anti-humanos recombinantes Ejemplo 2.1: Construcción y expresión de anticuerpos !L-12p40 anti-humanos cauiméricos recombinantes El ADN que codifica la región constante de cadena pesada de anticuerpos monoclonales I L- 12p40 anti-humanos de murino, 3G7, 8E1, 1A6, y 1 D4 se reemplazó con un fragmento de ADNc que codifica la región constante de I gG 1 humana conteniendo 2 mutaciones de aminoácido de región de gozne a través de recombinación homologa en bacteria. Estas mutaciones son un cambio de leucina a alanina en la posición 234 (enumeración EU) y un cambio de leucina a alanina en la posición 235 (Lund et al., 1991, J. Immunol., 147:2657). La región constante de cadena ligera de cada uno de estos anticuerpos se reemplazo por una región constante kappa humana. Se expresaron en forma pasajera anticuerpos quiméricos de longitud completa en células COS a través de co-transfección de ADNc de cadena quimérica y de cadena ligera ligados al plásmido de expresión pBOS (Mizushima and Nagata, Nucleic Acids Research 1990, Vol 18, pg 5322) que comprende una secuencia de señal de cadena pesada MEFGLSWLFLVAILKGVQC (SEC ID NO. 110), y una secuencia de señal de cadena ligera MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC ((SEC ID NO. 111). Los sobrenadantes de célula conteniendo el anticuerpo quimérico recombinante se purificaron a través de cromatografía de Sepharose de proteína A y el anticuerpo unido se eluyó a través de la adición de regulador de pH de ácido. Los anticuerpos se neutralizaron y se dializaron en PBS. El ADNc de cadena pesada que codifica 3G7 quimérico (descrito anteriormente) fue co-transfectado con el ADNc de cadena ligera quimérico 1 D4 (ambos ligados en el vector pBOS) en células COS. El sobrenadante de célula conteniendo el anticuerpo quimérico recombinante se purificó a través de cromatografía de Sepharose de Proteína A y el anticuerpo unido se eluyo a través de la adición de regulador de pH de ácido. Los anticuerpos se neutralizaron y se dializaron en PBS. Los anticuerpos monoclonales a nt i-l L- 12 humanos quiméricos modificados después se probaron para su habilidad para inhibir la producción de IFN-? inducida por 11-12 a través de ráfagas de PHA como se describe en los Ejemplos 1.1. C 2 y 1.1. C3. El Cuadro 12 muestras los valores de IC50 a partir de los ensayos de ráfaga de PHAs para cinco anticuerpos quiméricos.
Cuadro 12: Neutralización de D -12 a través de anticuerpos u?méiricos anti-lL-12 Ejemplo 2.2: Construcción y expresión de anticuerpos BL-12p Q anti-numanos CDR-iniertados Se generaron como sigue anticuerpo IL-12 anti-humanos CDR-injertados.
Ejemplo 2.2.1: Selección de estructuras de bas® d® anticuerpo humano Cada secuencia de gen de cadena pesada variable y de cadena ligera variable de murino (como se describe en el Cuadro 3) se alineó en forma separada contra 44 secuencias de cadena pesada variable de línea germinal de inmunoglobulina humana o 46 secuencias de cadena ligera variable de línea germinal (derivada del sitio web NCBl Ig Blast en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.htm1 ) utilizando el software Vector NTI. Las secuencias de dominio variable humanas teniendo la homología total más alta a las secuencias de murino origínales (así como la homología más alta en las posiciones conocidas como importantes para la unión de antígeno) (Welschof, M. and Krauss, J. Methods In Molecular Biology, Vol 207) se seleccionaron para cada secuencia de cadena pesada y cadena ligera para proporcionar la estructura de base (FW) de las secuencias 1, 2 y 3 para propósitos de CDR-injerto. La identificación de una región FW4 de cadena pesada variable y de cadena ligera variable humana adecuada (también conocida como la unión de "unión") se logró alineando en forma separada cara región FW4 de cadena pesada y de cadena ligera de murino con 6 secuencias de cadena pesada de unión de línea germinal de inmunoglobulina y 5 secuencias de cadena ligera de unión de línea germinal en la base de datos NCBI. In silico, la construcción de los anticuerpos CDR injertados completos se logró a través de las secuencias CDR de dominio variable humanas (derivadas del sitio web NCBl) con secuencias CDR de murino (derivadas de los hibridomas) con la adición de una región FW4 (derivada del sitio web NCBl) a cada extremo 3'.
Ejemplo 2.2.2: Construcción de anticuerpos CD s-inierta os In silico, los anticuerpos injertados construidos descritos anteriormente fueron construidos de nuevo utilizando oligonucleótidos. Para cada ADNc de región variable, se diseñaron 6 oligonucleótidos de 60-80 nucleótidos cada uno para traslapar entre sí por 20 nucleótidos en el extremo 5' y/o 3' de cada oligonucleótido. En una reacción de fijación, se combinaron 6 oligos, hirvieron, y se fijaron en presencia de dNTPs. Después, se agregó el fragmento grande (Klenow) de polimerasa I de ADN (New England Biolabs #M0210, Beverley, MA.) para llenar los huecos de aproximadamente 40bp entre los oligonucleótidos traslapantes. Después se realizó la PCR para amplificar el gen de región variable completo utilizando dos iniciadores muy externos conteniendo secuencias colgantes complementarias al sitio de clonación múltiple en un vector pBOS modificado (Mizushima, S. and Nagata, S., (1990) Nucleic acids Research Vol 18, No. 17)). Los productos de PCR derivados de cada ensamble de ADNc se separaron en un gel de agarosa y la banda que corresponde al tamaño de ADNc de región variable pronosticado se cortó y se purificó. La región pesada variable se inserto en marco en un fragmento de ADNc que codifica la región constante IgG 1 humana conteniendo 2 mutaciones de aminoácidos de región de gozne (SEC ID NO. 3) a través de recombinación homologa en bacteria. Estas mutaciones son un cambio de leucina a alanina en la posición 234 (enumeración EU) y un cambio de leucina a alanina en la posición 235 (Lund et al., 1991, J. Immunol., 147:2657). La región de cadena ligera variable fue insertada en marco con la región constante kappa humana (SEC ID NO. 4) a través de recombinacíón homologa. Las colonias bacterianas fueron aisladas y se extrajo el ADN de plásmído; se secuenciaron los insertos de ADNc en su totalidad. Las cadenas ligera y pesada CDR-injertadas correctas correspondiendo a cada anticuerpo fueron co-transfectadas en células COS para producir en forma pasajera anticuerpos IL-12 anti-humanos CDR-injertados de longitud completa. Para vectores 1A6, pBOS conteniendo el ADNc injertado de cadena pesada 1A6 y el ADNc injertado de cadena ligera 1D4, fueron co-transfectados en células COS (la secuencia de cadena ligera 1A6, cuando se injertó, fue idéntica a la secuencia de cadena ligera 1D4). Los sobrenadantes de célula conteniendo el anticuerpo quimérico recombinante fueron purificados a través de cromatografía de Sepharose de Proteína A y el anticuerpo unido fue eluído a través de la adición de regulador de pH de ácido. Los anticuerpos se neutralizaron y se díalizaron en PBS. En el Cuadro 5 se describen nueve anticuerpos CDR-injertados. La habilidad en los anticuerpos CDR-injertados purificados para inhibir la actividad de IL-12 se determinó utilizando el ensayo de ráfaga de PHA como se describe en Ejemplos 1.1. C 2 y 1.1. C3. las afinidades de unión de los anticuerpos CDR-injertados purificados a I L- 12 p70 humana purificada recombinante se determinaron utilizando la medición de resonancia de plasmón de superficie (Biacore®) como se describe en el Ejemplo 1.1. B. El Cuadro 13 muestra los valores de IC50 a partir de los ensayo de ráfaga de PHA y la afinidad de los nueve anticuerpos CDR-injertados descritos en el Cuadro 7 para IL-12p70 humana e I L- 12p70 cynomolgous.
Cuadro 13: Neutralización de I L-12 a través de anticuerpos CDR-injertados anti-IL-12p4Q y afinidad de anticuerpos CDR-irajerttados anti 0L-12p4Q para lL-12p70 humana y cynomolgous Ejemplo 2.3: Construcción de anticuerpos 1L- 2 anti-lhiumanos humanizados Se realizó como sigue la humanización de los anticuerpos IL-12 anti-humanos.
Ejemplo 2.3.1: ¡ odelación de homolo aia con anticuerpos CDR- injertados La modelación de homología se utilizó para identificar residuos únicos a la secuencia de anticuerpo de murino que se pronostica que son críticas para la estructura del sitio de combinación de anticuerpo (las CDRs). La modelación de homología es un método computacional mediante el cual se generar coordenadas tridimensionales aproximadas para una proteína. La fuente de coordenadas iniciales y la guía para su refinamiento adicional es una segunda proteína, la proteína de referencia, para la cual las coordenadas tridimensionales son conocidas y la secuencia de la cual está relacionada con la secuencia de la primera proteína. La relación entre las secuencias de las dos proteínas se utilizó para generar una correspondencia entre la proteína de referencia y la proteína para la cual se desean las coordenadas, la proteína objetivo. Las secuencias primarias de las proteínas de referencia y objetivo son alineadas con coordenadas de porciones idénticas de las dos proteínas transferidas directamente de la proteína de referencia a la proteína objetivo. Las coordenadas para porciones desiguales de las dos proteínas, por ejemplo de mutaciones de residuo, inserciones, o eliminaciones, se construyen a partir de plantillas estructurales genéricas y energía refinada para asegurar la consistencia con las coordenadas modelo ya transferidas. Esta estructura de proteína computacional además puede ser refinada o empleada directamente en estudios de modelación. Se debe aclarar a partir de esta descripción que la calidad de la estructura modelo se determina por la exactitud de la contención de que las proteínas de referencia y objetivo están relacionadas y la precisión con la cual se construye la alineación de secuencia. Para las secuencias de murino 1A6, 8E1 y 1D4, se utilizó una combinación de investigación BLAST e inspección visual para identificar estructuras de referencia adecuadas. Las estructuras de referencia seleccionadas para 1A6 y 1 D4 fueron PDB entrada 1JRH. Para 8E1, la estructura de referencia de cadena pesada fue PDB entrada 1FL3 y la referencia de cadena ligera fue 1MEX. La identidad de secuencia de 25% entre las secuencias de aminoácido de referencia y objetivo se consideró como el mínimo necesario para intentar un ejercicio de modelación de homología. Se construyeron alineaciones de secuencia manualmente y se generaron coordenadas modelo con el programa Jackal (ver, Petrey, D., Xiang, 2., Tang, C.L., Xie, L., Gimpelev, M., Mitros, T., Soto, C.S., Goldsmith-Fischman, S., Kernytsky, A., Schmenosinger, A., et al. 2003. Using múltiple structure alignments, fast model building, and energetic analysís in fold recognition and homology modeling. Proteins 53 (Suppl. 6): 430-435). Las secuencias primarias de las regiones de estructura de base de murino y humanas de los anticuerpos seleccionados comparten identidad significativa. Las posiciones de residuo que difieren son candidatos para la inclusión del residuo de murino en la secuencia humanizada con el fin de retener la potencia de unión observada del anticuerpo de murino. Una lista de residuos de estructura de base que difieren entre las secuencias humanas y de murino se construye manualmente. La probabilidad de que un residuo de estructura de base dado pudiera impactar en las propiedades de unión del anticuerpo depende de su cercanía a los residuos CDR. Por lo tanto, al utilizar las estructuras modelo, los residuos que difieren entre las secuencias de murino y humanas fueron clasificados de acuerdo con su distancia a partir de cualquier átomo en la CDR. Aquellos residuos que caen dentro de 4.5 Á de cualquier átomo de CDR fueron identificados como muy importantes y se recomendaron para ser candidatos para la retención del residuo de murino en el anticuerpo humanizado (es decir, retro- mutación). El examen del modelo de computadora sugirió que un anticuerpo 1A6.1, residuos L1, L2, L36, y L67 de la cadena ligera (1D4.1 VKB3) están en contacto importante con las CDRs y por lo tanto, sugiere que los residuos de murino deben ser retenidos en esas posiciones. En el caso de 1D4.1, los residuos H1 y H98 de la cadena pesada (1D4.1 VH2-70), así como L2 y L67 de la cadena ligera (1D4.1 VKB3) fueron identificados como posiciones para la retro-mutación.
Ejemplo 2.3.2: Generación de anticuerpos híbridos Para determinar que cadena CDR-injertada (VH, VL o ambas) pueden beneficiarse de las retro-mutaciones de estructura de base, se construyeron anticuerpos "híbridos" formando pares de una cadena H o L CDR-injertada con una cadena H o L de murino quimérica apropiada seguido por la co-transfección en células COS. El Cuadro 14 muestra las secuencias de aminoácidos VH y VL de los anticuerpos híbridos 1A6.3, 1A6.4, 1A6.7, 1A6.8, 1D4.4, y 1D4.5.
Cuadro 14: Secuencias de aminoácido de anticuerpos híbridos Los anticuerpos híbridos fueron purificados a través cromatografía de afinidad de proteína A (Ejemplo 1.2.C) y se probaron para potencia en el ensayo de ráfaga de PHA como en los Ejemplos 1.1. C2 y 1.1. C3. Se determinaron mediciones cinéticas utilizando BIAcore como en el Ejemplo 1.1. B. El Cuadro 15 muestra los valores de KD e IC50 de los anticuerpos híbridos. Los datos de potencia y afinidad derivados con los mAbs híbridos se compararon con datos generados con los mAbs CDR-injertados apropiados (Ejemplo 2.3.1) para identificar cambios en potencia y afinidad atribuidos a una cadena VH o VL particular. Si una cadena VH o VL humanizada fue o no la cadena óptima, se determinó utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 2.3.1. En algunos casos, los residuos que no cayeron dentro de 4.5 A° de cualquier átomo de CDR adicionalmente se activaron para retro-mutaciones.
Cuadro 15: Neutralización de IIL-12 a través de aonl-ieuerpos I obridos ar.ti-lL- 2p40 y afinidad de anticuerpos fo .fon dos antii- IL-12 Q Ejertr-pOo 2.3.3: Construcción de retro-inmutaciones de estructura de base en anticuerpo CDR-iniertados Para generar anticuerpos humanizados, se introdujeron retro-mutaciones de estructura de base en los anticuerpos CDR-injertados utilizando iniciadores mutagénicos y el equipo de Mutagénesis Dirigida al Sitio Múltiple (Stratagene #200513, La Jolla, CA) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se construyeron diferentes combinaciones de de retro-mutaciones para cada uno de los injertos CDR para identificar la importancia relativa de cada residuo. Cadena ligera 1A6.1 variante VKB3 1 (L1-D? S, L2-I-»V, L36-Y?F, L67-S?Y), 1D4.1 variante VKB3 2 (L1-D? S, L36-Y?F, L67-S?Y), 1D4.1 variante VKB3 3 (L1-D? S, L67-S?Y), 1D4.1 variante VKB3 4 (L2-I?V, L67-S?Y), y 1D4.1 variante VKB3 5 (L67-S?Y). Cadena pesada 1D4.1 VH2-70 variante 1 (H1-E->Q, H93-A?T), y 1D4.1 variante VH2-70 2 (H93-A?T). Después, el ADN de estructura de cadena individual mutado fue transformado a células ultracompetentes XL10-Oro. Se realizó la secuenciación de colonia en los transformantes para identificar clones que llevan las mutaciones deseadas. El ADN de plásmido se aislo de clones utilizando un equipo Qiagen Maxiprep (Qiagen, Valencia, CA) y las regiones variables y constantes se secuenciaron en su totalidad. Como se describió anteriormente, se construyeron varias combinaciones adicionales de retro-mutaciones para cada uno de los anticuerpos CDR-injertados. La caracterización de los anticuerpos humanizados generados, como se describe anteriormente, se realizó como se describe a continuación en el Ejemplo 2.3.4.
EJempio 2.3.4: Expresión y caracterización de anticuerpos humanizados Los vectores de expresión PBOS (ver, Ejemplos 2.1 y 2.2.2) llevando cadenas pesada y ligera conteniendo retro-mutaciones de estructura de base fueron co-transfectados en células COS para producir en forma pasajera anticuerpos humanizados de longitud completa. Las secuencias de aminoácido de las regiones VH y VL de los anticuerpos humanizados se describen en el Cuadro 16.
Cuadro 16: Secuencia de Anticuerpos Humanizados Las posiciones de aminoácido retro-mutadas en las regiones VH y VL de los anticuerpos CDR-injertados se enlistan en el Cuadro 17.
Cuadro 17: Aminoácidos retro-mutados presentes en anticuerpos humanizados Los sobrenadantes de célula conteniendo anticuerpos humanizados se purificaron como se describió en el Ejemplo 1.2.C. Se determinó la habilidad de los anticuerpos humanizados purificados para neutralizar IL-12 in vitro utilizando el ensayo de ráfaga de PHA como se describió en los Ejemplos 1.1. C2 y 1.1. C3. Las afinidades de unión de los anticuerpos purificados para 11-12 p70 humana purificada recombinante se determinaron utilizando BIAcore como se describió en el Ejemplo 1.1. B. El Cuadro 18 muestra los valores de IC50 del ensayo de ráfaga de PHA y los valores de KDS a partir de BIAcore.
Cuadro 18: Neutralización de DL-12 a través de anticuerpos humanizados antti-lL- 2p40 y afinidad de anticuerpos I umanizados antt?-IL-12p40 Ejemplo 2.4; Generación de anticuerpos ll L- 2 anti-l umanos humanizados adicionales La humanización de las regiones variables de anticuerpos monoclonales de murino 8E1 y 1A6 se realizó esencialmente de acuerdo con el procedimiento de Queen, C, et al., Proc. Nati. Acad.
Sci. USA 86: 10029-10033 (1989). Primero, se identificaron segmentos V humanos con alta homología a las secuencias de aminoácido Vh o VL de anticuerpo monoclonal de murino. Después, las secuencias de región de determinación de complementaridad (CDR) junto con aminoácidos de estructura de base importantes para mantener las estructuras de las CDRs se injertaron en las secuencias de estructura de base humanas seleccionadas. Además, los aminoácidos de estructura de base humanos que se encontraron como raros en el subgrupo de región V correspondiente fueron sustituidos con aminoácidos de consenso para reducir la inmunogenicidad potencial. Los anticuerpos monoclonales humanizados fueron expresados células, purificados y caracterizados como se describe a continuación. Los anticuerpos monoclonales humanizados 8E1.4, 8E1.5, 8E1.6, 1A6.10, 1A6.11, y 1A6.12 fueron generados como sigue.
Ejemplo 2.4.1: Generación de anticuerpos onoclonalles humanizados 8E1.4. 8E1.S. 8E1.8 Para la humanización de las regiones variables 8E1, se seleccionaron estructuras de base de la región V humana utilizadas como aceptores para las CDRs de 8E1 basándose en la homología de secuencia. Primero, se construyó un modelo molecular de las regiones variables 8E1 con ayuda de los programas de computadora ABMOD y ENCAD (Levitt, M., J. Mol. Biol. 168: 595-620 (1983)). Después, basándose en la búsqueda de homología contra secuencias de segmento V y J humanas, el segmento VH HA3D1 (Olee, T., et al., J. Exp. Med. 175: 831-842 (1992)) y el segmento J JH4 (Ravetch, J.V., et al., Cell 27: 583-591 (1981)) se seleccionaron para proporcionar las estructuras de base para las regiones variables de cadena pesada 8E1.4, 8E1.5, y 8E1.6. Para las regiones variables de cadena ligera 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6, el segmento VL HK137 (Bentley, D.L., and Rabbitts, T.H., Cell 32: 181-189 (1983)) y el segmento J JK2 (Hieter, P.A., et al., J. Biol. Chem. 257: 1516-1522 (1982)) fueron utilizadas. La identidad de los aminoácidos de estructura de base entre 8E1 VH y los segmentos HA3D1 y JH4 humanos aceptores fue de 84%, mientras que la identidad entre 8E1 VL y los segmentos HK137 y JK4 humanos aceptores fue de 67%. Las secuencias de aceptor de cadena pesada y de cadena ligera de anticuerpo humanas utilizadas para generar anticuerpos IL-12 anti-humanos humanizados adicionales se enlistan en los Cuadros 19 y 20.
Cuadro 19: Secuencias de Aceptor de Cadena Pesada utilizadas para Anticuerpos Humanizados adicionales Cuadro 20: Aceptor de Cadena Ligera utilizada para Anticuerpos Humanizados adicionales Ejempllo 2.4.2: Construcción de los anticuerpos 8E1.4, 8E1.§ y 8EH.6. Los genes de región variable de cadena pesada y ligera se construyeron y se amplificaron utilizando aproximadamente 30 oligonucleótidos sintéticos traslapantes variando en longitud de aproximadamente 20 a 40 bases siguiendo un método publicado (Rouillard, J.-M., et al, Nucleic Acids Res. 32: W176-W180 (2004)). Los oligonucleótidos fueron fijados y ensamblados con el sistema Expand High Fidelity PCR System (Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, IN), produciendo un producto de longitud completa. El producto resultante se amplificó a través de la reacción en cadena de polimerasa (PCR) utilizando el sistema Expand High Fidelity PCR System. Los fragmentos amplificados mediante PCR fueron purificados mediante gel, digeridos con Mlul y Xbal, purificados con gel y subclonados, respectivamente, a una forma modificada de pVgl.D.Tt (Colé, M.S., et al., J. Immunol. 159: 3613-3621 (1997); y ver, mas adelante) y pVk (Co, M.S., et al., J. Immunol. 148: 1149-1154 (1992)). En las posiciones de estructura de base en donde el modelo de computadora sugirió un contacto significativo con las CDRs, los aminoácidos de las regiones V de ratón fueron sustituidos por los aminoácidos de estructura de cadena humana original. Esto se realizó en el residuo 49 para cadenas pesadas 8E1.4 y 8E1.5, y además en el residuo 74 para la cadena pesada de 8E1.6. Para las cadenas ligeras de 8E1.5 y 8E1.6, se hicieron reemplazos en el residuo 46, y adicionalmente en el residuo 60 para 8E1.5. Los residuos de estructura de base que ocurrieron solamente en forma rara en sus posiciones respectivas en los subgrupos de región V humana correspondientes se reemplazaron con aminoácidos de conceso humanos en esas posiciones. Esto se realizó en el residuo 78 para las cadenas pesadas de 8E1.5 y 8E1.6, y en el residuo 36 para las cadenas ligeras de 8E1.5 y 8E1.6. La mutagénesis dirigida al sitio de los genes V sintéticos se realizó utilizando el equipo QuikChange II Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene, La Jolla, CA), siguiendo las recomendaciones del fabricante. Se crearon mutaciones específicas en el gen 8E1.6 VH creadas utilizando mutagénesis de oligo y métodos PCR bien conocidos en la técnica. El paso de PCR se realiza utilizando PfuUltra HF ADN Polymerase (Stratagene), siguiendo las recomendaciones del fabricante, incubando a 95°C durante 30 segundos, seguido por 18 ciclos de 95°C durante 30 segundos, 55°C durante 1 minuto y 68°C durante 1 minuto, seguido por la incubación a 68°C durante 7 minutos. Después de la digestión con Dpnl, se transformaron Células Químicamente Competentes de E. coli de la cepa TOP10 (Invitrogen Corporation, Carisbad, CA) con una pequeña porción del producto de PCR. El ADN de minipreparación verificado de secuencia fue digerido con Mlul y Xbal, y el fragmento de restricción resultante conteniendo el gen 8E1.6 VH clonado se subclonó en el vector de expresión pVgl.D.Tt modificado descrito más adelante. Similarmente, se crearon mutaciones específicas en el gen 8E1.5 VL utilizando mutagénesis oligos y métodos de PCR bien conocidos en la técnica. El paso de PCR se realizó como se describió anteriormente, y después de la digestión con Mlul y Xbal, el fragmento de restricción resultante fue subclonado en el vector de expresión pVk. Las mutaciones fueron verificadas a través de secuenciación de nucleótido. Los genes que codifican VH o VL humanizados fueron designados como mini-exones incluyendo péptidos de señal, señales de donador de empalme, y sitios de enzima de restricción apropiados para clonación subsecuente en un vector de expresión de mamífero. Las señales de donador de empalme en los mini-exones VH y VL se derivaron de las secuencias JH y JK de línea germinal humanas correspondientes, respectivamente. Las secuencias de péptido de señal en el mini exón VH humanizado fue MEFGLSWLFLVA1LKGVQC (SEC ID NO. 110), y en los mini-exones VL humanizados fue de MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC (SEC ID NO. 111). Los genes 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 VH y VL se construyeron a través de ensamble de oligonucleótidos sintéticos traslapantes y métodos de PCR bien conocidos en la técnica.
Ejemplo 2.4.3: Generación de anticuerpo mor-oclonaies humanizados 1 A6.10. 1 A6.11 y 1 A6.12 Para la humanización de las regiones variables 1A6.10, 1A6.11 y 1A6.12, se siguió el aspecto general provisto en la presente invención. Primero, se construyo un modelo molecular de las regiones variables 1A6 con la ayuda de los programas de computadora ABMOD y ENCAD (Levitt, M., J. Mol. Biol. 168: 595-620 (1983)). Después, basándose en una búsqueda de homología contra secuencias de segmento V y J humanas, el segmento VH M60 (Schroeder, Jr., H.W. and Wang, J. Y., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 6146-6150 (1990)) y el segmento J JH4 (Ravetch, J.V., et al., Cell 27: 583-591 (1981)) se seleccionaron para proporcionar las estructuras de base para las regiones variables de cadena pesada 1A6.10 y 1A6.12. Para las regiones variables de cadena ligera 1A6.10, 1A6.11 y 1A6.12, el segmento VL III-3R (Manheimer-Lory, A., et al., J. Exp. Med. 174: 1639-1652 (1991)) y el segmento J JK4 (Hieter, P.A., et al., J. Biol. Chem. 257: 1516-1522 (1982)) se utilizaron la identidad de los aminoácidos de estructura de base entre 1 A6 VH y los segmentos M60 y JH4 humanos aceptores fuer de 74%, mientras que la identidad entre 1A6 VL y los segmentos III-3R y JK4 humanos aceptores fue de 71%. Las secuencias de anticuerpo se generaron como se describió en el Ejemplo 2.3.3. En las posiciones de estructura de base en donde el modelo de computadora sugirió un contacto importante con las CDRs, los aminoácidos de las regiones V de ratón fueron sustituidos por los aminoácidos de estructura de base humanos originales. Esto se realizó en el residuo 68 para las cadenas pesadas de 1A6.10, 1A6.11 y 1A6.12. Para las cadenas ligeras, se hicieron reemplazos en los residuos 36 y 67 para 1A6.11 y 1A6.12, y además en el residuo 60 para 1A6.12. Los residuos de estructura de base que ocurrieron solamente en forma rara en sus posiciones en los subgrupos de región V humanos correspondientes se reemplazaron con aminoácidos de consenso humanos en esas posiciones. Esto se realizó en los residuos 10, 46, 83, 84, 86 y 87 de la cadena pesada, y en el residuo 62 de las cadenas ligeras de 1A6.10, 1A6.11 y 1A6.12. Se realizó mutagénesis dirigida al sitio utilizando oligos mutagénicos y el método de PCR como se describió anteriormente.
Las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL resultantes de los anticuerpos anti-IL-12 humanizados adicionales generados se enlistan en el Cuadro 21.
Cuadro 21: Secuencia de Anticuerpos humanizados adic?onales Las posiciones de aminoácido en las estructura de base que fueron mutadas se enlistan en el Cuadro 22.
Cuadro 22: Posiciones de Mutaciones de Estructtur. I® bas® en Anticuerpos Humanizados Adicionales Ejemplo 2.4.4: Expresión de anticuerpos humanizados adicionales El alotipo de gen de región constante gamma-1 humano en el plásmido de expresión pVgl.D.Tt fue modificado a partir de G1m (z,a) al alotipo z, no-a. El método de PCR de extensión traslapante (Higuchi, R., en "PCR Technology: Principies y Applications for ADN Amplificaron", Stockton Press, New York (1989), pp. 61-70) fue utilizado para generar las sustituciones de aminoácido D356E y L358M (enumeradas de acuerdo con el índice EU de Kabat, E.A., et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th ed., National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)), utilizando iniciadores de mutagénesis. El paso de PCR se realizó utilizando el equipo de Mutagénesis Dirigida al Sitio QuikChange II (Stratagene). Después de la digestión o producto generado por PCR con Sfil y Eagl, el fragmento de restricción resultante fue subclonado en una forma modificada del vector de expresión pVgl.D.Tt conteniendo el sitio de restricción Nhel en el intrón entre el gozne y los exones CH2. También se generaron mutaciones para la región de gozne inferior del gen de región constante gamma-1 a través de mutagénesis dirigida al sitio. Específicamente, se generaron sustituciones de aminoácido L234A y L235A (enumeradas de acuerdo con el índice EU de Kabat, E.A., et al.) utilizando oligos de mutagénesis. El paso de PCR se realizó utilizando el equipo de Mutagénesis Dirigida al Sitio QuikChange II (Stratagene) como se describió anteriormente. Después de la digestión del producto generado por PCR con Nhel y Eagl, el fragmento de restricción resultante subclonado en el vector de expresión modificado pVgl.D.Tt descrito anteriormente conteniendo las mutaciones D356E y L358M y el sitio Nhel en el intrón entre el gozne y exones CH2. Las mutaciones fueron verificadas a través de secuenciación de nucleótido. Las secuencias de aminoácidos de los mini-exones VH y VL humanizados se muestran en el Cuadro 21. Los fragmentos del gen V resultantes fueron clonados, respectivamente, a una forma modificada de pVgl.D.Tt y pVk. Se mantuvo una línea de célula de riñon humano 293T/17 (American Type Culture Collection, Manassus, VA) en DMEM (BioWhittaker, Walkersville, MD) conteniendo 10% de Suero de Bovino Fetal (FBS) (HyClone, Logan, UT), 0.1 mM de aminoácidos no esenciales MEM (Invitrogen Corporation) y 2 mM de L-glutamina (Invitrogen Corporation), de aquí en adelante denominado como medio 293, a 37°C en un incubador con 7.5% CO2. Para la expresión y purificación de anticuerpo monoclonales después de la transfección pasajera, se incubaron células 293T/17 en DMEM conteniendo 10% de FBS con bajo contenido de IgG (HyClone), 0.1 mM de aminoácidos no esenciales MEM y 2 mM de L-glutamina, de aquí en adelante denominado como medio 293 con bajo contenido de IgG. Se realizó la transfección pasajera de células 293T/17 utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen Corporation) siguiendo las recomendaciones del fabricante. Aproximadamente 2 x 107 células por transfección fueron colocadas en places en un matraz T-175 en 50 ml del medio 293 y se desarrollaron durante la noche a confluencia. Al día siguiente, se combinaron 35 µg del plásmido de cadena ligera y 35 µg del plásmido de cadena pesada con 3.75 ml de Hibridoma-SFM (HSFM) (Life Technologies, Rockville, MD). En un tubo separado, se combinaron 175 µl del reactivo Lipofectamine 2000 y 3.75 ml de HSFM y se incubaron durante 5 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de 3.75 ml de Lipofectamine 2000-HSFM se mezcló moderadamente con la mezcla de 3.75ml ADN-HSFM y se incubaron a temperatura ambiente durante 20 minutos. El medio que cubre las células 293T/17 fue aspirado y reemplazado con un medio 293 con un bajo contenido de IgG, después los complejos de lipofectamine-ADN se agregaron gota a gota a las células, se mezclaron moderadamente mediante revolvimiento, y las células se incubaron durante 7 días a 37°C en un incubador de 7.5% CO2 antes de cosechar los sobrenadantes. Se generaron transfectantes pasajeros produciendo 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 como se describió anteriormente. Se midió la expresión de los anticuerpos 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 humanizados a través de ELISA emparedado. Se cubrieron placas de ELISA MaxiSorp (Nunc Nalge International, Rochester, NY) durante la noche a 4°C con 100 µl/cavidad de una dilución de 1:1000 de anticuerpos monoclonales específicos de cadena AffiniPure de IgG de anti-humano de cabra Fc? (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA) en 0.2 M de regulador de pH de carbonato de sodio-bicarbonato, pH 9.4, se lavaron con Regulador de pH de Lavado (PBS conteniendo 0.1% Tween 20), y se bloquearon durante 1 hora a temperatura ambiente con 300 µl/cavidad de Regulador de pH de Bloqueo en TBS (Pierce Chemical Company, Rockduranted, IL). Después de lavar con el Regulador de pH de Lavado, las muestras conteniendo 8E1.4, 8E1.5 o 8E1.6 fueron apropiadamente diluidas en Regulador de pH de ELISA (PBS conteniendo 1% BSA y 0.1% Tween 20) y 100 µl/cavidad se aplicaron a las placas de ELISA. Como un estándar, se utilizó el anticuerpo IgG humanizado/daclizumab (PDL BioPharma, Inc.). Después de incubar las placas durante 1 hora a temperatura ambiente, y de lavar con Regulador de pH de lavado, se detectaron anticuerpos unidos utilizando 100 µl/cavidad de una dilución de 1:1000 de anticuerpos policlonales específicos de cadena ligera de kappa anti-humanos de cabra conjugados con HRP (Southern Biotechnology Associates, Inc., Birmingham, AL). Después de incubar durante 1 hora a temperatura ambiente, y de lavar con el Regulador de pH de avado, se realizó el desarrollo de color agregando 100 µl/cavidad de la Solución B de Sustrato de Peroxidasa ABTS/Peroxidasa (KPL, Inc., Gaithersburg, MD). Después de incubar durante 7 minutos a temperatura ambiente, se detuvo el desarrollo de color agregando 50 µl/cavidad de 2% de ácido oxálico. Se leyó la absorbencia a 415 nm utilizando un lector de microplaca VersaMax (Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA). Los sobrenadantes de cultivo obtenidos de células 293T/17 pasajeramente transfectadas fueron analizados a través de ELISA para la producción de 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6. Los niveles de expresión de aproximadamente 30-50 µg/ml fueron típicamente observados. Las muestras que fueron positivas fueron sometidas a purificación como se describe más adelante.
Ejemplo 2.4.5: Purificación de anticuerpos imanizados adicionales Se purificaron anticuerpos monoclonales 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 lgG1/? a partir del sobrenadante de cultivo exhausto con una columna de Sepharose de proteína A como sigue. Los sobrenadantes de cultivo de las transfecciones pasajeras se cosecharon a través de centrifugación, y se filtraron en forma estéril. El pH de los sobrenadantes filtrados se ajusto a través de la adición de un volumen de 1/50 de 1 M de citrato de sodio, pH 7.0. Los sobrenadantes se corrieron sobre una columna HP de proteína A HiTrap de 1 ml (GE Healthcare Bio-Sciences Corporation, Piscataway, NJ) que fue pre-equilibrado con 20 mM de citrato de sodio, 150 mM NaCI, pH 7.0. La columna se lavó con el mismo regulador de pH, y el anticuerpo unido se eluyo con 20 mM de citrato de sodio, pH 3.5. Después de la neutralización a través de la adición de un volumen de 1/50 de 1.5 M de citrato de sodio, pH 6.5, las fracciones de anticuerpo combinadas se concentraron a aproximadamente 0.5-1.0 mg/ml utilizando un dispositivo de filtro centrífugo de 15 ml Amicon Ultra-15 (30,000 daltons MWCO) (Millipore Corporation, Bedduranted, MA). Las muestra después se esterilizaron mediante un filtro utilizando un filtro de jeringa de 0.2 µm Acrodisc con una membrana HT Tuffryn (Pall Corporation, East Hills, NY). Se determinaron las concentraciones de los anticuerpos purificados a través de espectroscopia UV midiendo la absorbancia a 280 nm (1 mg/ml = 1.4 A28o)- El análisis de SDS-PAGE bajo condiciones de no reducción indicó que los anticuerpos tuvieron un pero molecular de aproximadamente 150-160 kD. El análisis bajo condiciones de reducción indico que los anticuerpos estuvieron compuestos de una cadena pesada con un peso molecular de aproximadamente 50 kD y una cadena ligera con un peso molecular de aproximadamente 25 kD. La pureza de los anticuerpos pareció ser de más de 95%.
Ejemplo 2.4.6: Caracterización de anticuerpos humanizados adicionales utilizando ELISA d® competencia Se cubrieron placas de MaxiSorp ELISA (Nalge Nunc International) durante la noche a 4°C con 100 µl/cavidad de 1.0 µg/ml de IL-12 humana en 0.2 M de regulador de pH de carbonato de sodio-bicarbonato, pH 9.4, se lavaron Regulador de pH de Lavado (PBS conteniendo 0.1% Tween 20), y se bloquearon durante 1 hora a temperatura ambiente con 300 µl/cavidad de Regulador de pH de Bloqueo SuperBIock en TBS (Pierce Chemical Company). Después de lavar con Regulador de pH de Lavado, una mezcla de 8E1 biotinilado (concentración final de 0.8 µg/ml) y el anticuerpo competidor (8E1 o 8E1.4 o 8E1.5 o 8E1.6) empezando a una concentración final de 100 µg/ml y serialmente de diluyó 3 veces) en 100 µl/cavidad de regulador de pH ELISA se agregó por duplicado. Como controles de isotipo, se utilizaron 100 µl/cavidad de 100 µg/ml de anticuerpos monoclonales de lgG1/? (MuFd79) de ratón o de lgG1/? (HuFd79) humanizados en regulador de pH de ELISA. Como un control no competidor, se utilizaron 100 µl/cavidad de Regulador de pH de ELISA. Después de incubar las placas durante 1 hora a temperatura ambiente, y de lavar con el Regulador de pH de Lavado, se detectaron anticuerpos unidos utilizando 100 µl/cavidad de 1 µg/ml de estreptavidina conjugada con HRP (Pierce Chemical Company) en regulador de pH ELISA. Después de incubar durante 1 hora a temperatura ambiente, y de lavar con Regulador de pH de Lavado, se realizó el desarrollo de color agregando 100 µl/cavidad de una solución B de Sustrato de Peroxidasa ABTS/Peroxidasa (KPL, Inc.). Después de incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente, se detuvo el desarrollo de color agregando 50 µl/cavidad de 2% de ácido oxálico. La absorbancia se leyó a 415 nm. La afinidad de 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 a IL-12 humana se analizo a través de ELISA de competencia como se describió anteriormente. Tanto 8E1 como las tres versiones humanizadas compitieron con 8E1 biotinilada en una forma dependiente de concentración. El Cuadro 23 muestra los valores de ICs0 de 8E1, 8E1.4, 8E1.5 y 8E1.6 obtenidos utilizando el programa de software de computadora GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA).
Cuadro 23: Propiedades de unión de Dos anticuerpos 8E1.4, 8EH y 8E1.6 Los valores representan IC50 (µg/ml) requerida para competir 0.8 (µg/ml) de anticuerpo 8E1 biotinilado. También se generaron anticuerpos 1A6.10, 1A6.11, 1A6.12, 8E1.4 y 8E1.5 utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 2.3. Los anticuerpos se expresaron en células COS y se purificaron mediante cromatografía de afinidad de Proteína A como se describe en los ejemplos 2.2.2 y 1.2.C, respectivamente. Estos mAbs purificados fueron caracterizados para IC50 y KD de acuerdo con el ejemplo 1.1. B y.1.C 2. El Cuadro 24 muestra las propiedades de unión de 1A6.10, 1A6.11, 1A6.12, 8E1.4 y 8E1.5.
Cuadro 24: Parámetros cinéticos y de potencia de anticuerpos humanizados adicionales La presente invención incorpora por referencia en su totalidad técnicas bien conocidas en el campo de la biología molecular. Estas técnicas se incluyen, pero no se limitan a, técnicas descritas en las siguientes publicaciones: Ausubel, F.M. et al. eds., Short Protocols In Molecular Biology (4th Ed. 1999) John Wiley & Sons, NY. (ISBN 0-471-32938-X). Lu and Weiner eds., Cloning and Expression Vectors for Gene Function Analysis (2001) BioTechniques Press. Westborough, MA. 298 pp. (ISBN 1-881299-21-X). Kontermann and Dubel eds., Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York. 790 pp. (ISBN 3-540-41354-5). Oíd, R.W. & S.B. Primrose, Principies of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering (3d Ed. 1985) Blackwell Scientific Publications, Boston. Studies in Microbiology; V.2:409 pp. (ISBN 0-632-01318-4).
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Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Una proteína de unión que comprende un dominio de unión a antígeno, dicha proteína de unión capaz de unir una subunidad p40 de IL-12, dicho dominio de unión a antígeno comprendiendo por lo menos una CDR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: CDR-H1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEC ID NO: 55), en donde; XT es D, K, T, o S; X2 es Y, S, o T; X3 es Y, V, G, W, S, o F; X4 es I, o M; X5 es H, G, E, o V; X6 es V, o no está presente; y X7 es S, o no está presente; CDR-H2. X1-X2-X3-X -X5-X6-X7-X8-X9-X10-X ?-X?2-X13-X? -Xi5-Xi6- X17-X18-X19-X20 (SEC ID NO: 56), en donde; XT es H, D, G, W, S, Y o R; X2 es I, o F; X3 es Y, W, L, S, N, D o G; X4 es W, P, H, T, o S; X5 es D, G, E, A, o I; X6 es D, G, S, T, o N; X7 es D, G, S, o P; X8 es K, N, S, E, T, o H; X9 es Y, T, P, I, o N; X10 es Y, N, T, H, K, S, o G; Xn es N, o Y; X12 es P, N, A, D, o S; X14 es L, K, D, T, o Y; X15 es K, F, V, M, R, o A; X16 es S, K, Q, P, o no está presente; X17 es D, G, R, o no está presente; Xiß es F, o no está presente; X19 es Q, o no está presente; y X20 es D, o no está presente; CDR-H3. X1-X2-X3-X4-X5-Xe-X7-X8-X9-X1o-X?1-X?2-Xi3 (SEC ID NO: 57), en donde; X2 es G, T, R, P, o H; X3 es I, R, F, Y, o Q; X4 es R, V, Y, F, o A; X5 es S, N, G, A, o R; X6 es A, Y, L, F, o M; X7 es M, A, D, L, o F; X8 es D, M, Y, o W; X9 es Y, D, o N; X10 es Y, A, o no está presente; Xn es M, o no está presente; X12 es D, o no está presente; y X13 es Y, o no está presente; CDR-L1 Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9"Xl0-Xl1-Xl2-Xl3-Xl - l5 (SEC ID NO: 58), en donde; X, es K, o R; X2 es A; X3 es S; X4 es Q, o E; X5 es S, o N; X6 es V, o I; X7 es S, G, o D; X8 es N, T, o K; X9 es D, N, o Y; X10 es V, G, o L; Xn es A, I, o H; X12 es S, o no está presente; X13 es F, o no está presente; X14 es M, o no está presente; y X?5 es N, o no está presente; CDR-L2. XT-Xz-Xs-X.-Xs-Xe-X.-Xs (SEC ID NO: 59), en donde; X! es Y, o S; X2 es A, o T; X3 es S, o A; X4 es N, H, S, o Q; X5 es R, N, o S; X6 es Y, Q, o I, X7 es T, S, o G, and X8 es S, o no esta presente, CDR-L3 XÍ-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEC ID NO 60), en donde, X2 es Q, X3 es D, Y, o S, X4 es Y, N, K, o I, X5 es N, T, S, o E, X6 es S, Y, V, o W, X7 es P, X8 es W, F, Y, L, o P, y X9 es T, o S 2 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, en donde por lo menos una CDR comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de residuos 31-37 de SEC ID NO 35, residuos 50-66 de SEC ID NO 45, residuos 52-67 de SEC ID NO 35, residuos 99-101 de SEC ID NO 45, residuos 100-108 de SEC ID NO 35, residuos 24-34 de SEC ID NO 46, residuos 24-34 de SEC ID NO 36 residuos 50-56 de SEC ID NO 46, residuos 50-56 de SEC ID NO 36, residuos 89-97 de SEC ID NO 46, residuos 89-97 de SEC ID NO 36, residuos 31-35 de SEC ID NO 47, residuos 31-37 de SEC ID NO 37, residuos 50-66 de SEC ID NO 47, residuos 52-67 de SEC ID NO 37, residuos 99-106 de SEC ID NO 47, residuos 100-109 de SEC ID NO 37, residuos 24-34 de SEC ID NO 48, residuos 24-34 de SEC ID NO 38, residuos 50-56 de SEC ID NO 48, residuos 50-56 de SEC ID NO 38, residuos 89-97 de SEC ID NO 48, residuos 89-97 de SEC ID NO 38, residuos 31-35 de SEC ID NO 49, residuos 31-35 de SEC ID NO 39, residuos 50-66 de SEC ID NO 49, residuos 50-66 de SEC ID NO 39, residuos 99-111 de SEC ID NO 49, residuos 99-106 de SEC ID NO 39, residuos 24-38 de SEC ID NO 50, residuos 24-34 de SEC ID NO 40, residuos 53-60 de SEC ID NO 50, residuos 50-56 de SEC ID NO 40, residuos 93-101 de SEC ID NO 50, residuos 89-97 de SEC ID NO 40 residuos 31-37 de SEC ID NO 51, residuos 31-35 de SEC ID NO 41, residuos 52-67 de SEC ID NO 51, residuos 50-66 de SEC ID NO 41 residuos 100-109 de SEC ID NO 51, residuos 99-106 de SEC ID NO 41, residuos 24-34 de SEC ID NO 52, residuos 24-34 de SEC ID NO 42, residuos 50-56 de SEC ID NO 52, residuos 50-56 de SEC ID NO 42, residuos 89-97 de SEC ID NO 52, residuos 89-97 de SEC ID NO 42, residuos 31-35 de SEC ID NO 53, residuos 31-35 de SEC ID NO 43, residuos 47-66 de SEC ID NO 53, residuos 50-66 de SEC ID NO 43, residuos 99-107 de SEC ID NO 53, residuos 99-106 de SEC ID NO 43, residuos 24-34 de SEC ID NO 54, residuos 24-34 de SEC ID NO 44, residuos 50-56 de SEC ID NO 54, residuos 50-56 de SEC ID NO 44, y residuos 89-97 de SEC ID NO 44, residuos 89-97 de SEC ID NO 54 residuos 31-35 de SEC ID NO 45 3 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha proteína de unión comprende por lo menos 3 CDRs 4 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 3, en donde por lo menos las 3 CDRs se seleccionan de un grupo CDR de dominio variable que consiste de 5. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende por lo menos dos grupos de CDR de dominio variable. 6. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 5, en donde por lo menos dos grupos CDR de dominio variable se seleccionan de un grupo que consiste de: Grupo VH 1D4 CDR & Grupo VL 1 D4 CDR; Grupo VH 1A6 CDR & Grupo VL 1A6 CDR; Grupo VH 1D8 CDR & Grupo VL 1D8 CDR; Grupo VH 3G7 CDR & Grupo VL 3G7 CDR; Grupo VH 5E8 CDR & Grupo VL 5E8 CDR; Grupo VH 8E1 CDR & Grupo VL 8E1 CDR; Grupo VH 1H6 CDR & Grupo VL 1H6 CDR; Grupo VH 3A11 CDR & Grupo VL 3A11 CDR; Grupo VH 4B4 CDR & Grupo VL 4B4 CDR; y Grupo VH 7G3 CDR & Grupo VL 7G3 CDR. 7. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende además una estructura de base de aceptor humano. 8. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende además una estructura de base de aceptor humano. 9. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende además una estructura de base de aceptor humano. 10. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además una estructura de base de aceptor humano. 11. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la estructura de base de aceptor humano comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO.: 6 SEC ID NO.: 19 SEC ID NO.: 32 SEC ID NO.: 7 SEC ID NO.: 20 SEC ID NO.: 33 SEC ID NO.: 8 SEC ID NO.: 21 SEC ID NO.: 34 SEC ID NO.: 9 SEC ID NO.: 22 SEC ID NO.: 92 SEC ID NO.: 10 SEC ID NO.: 23 SEC ID NO.: 93 SEC ID NO.: 11 SEC ID NO.: 24 SEC ID NO.: 94 SEC ID NO.: 12 SEC ID NO.: 25 SEC ID NO.: 95 SEC ID NO.: 13 SEC ID NO.: 26 SEC ID NO.: 96 SEC ID NO.: 14 SEC ID NO.: 27 Y SEC ID NO.: 15 SEC ID NO.: 28 SEC ID NO.: 97. SEC ID NO.:16 SEC ID NO..29 SEC ID NO.:17 SEC ID NO.:30 SEC ID NO.: 18 SEC ID NO.:31 12. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicha estructura de base de aceptor humana comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO.: 6 SEC ID NO.: 19 SEC ID NO.: 32 SEC ID NO.:7 SEC ID NO..20 SEC ID NO.:33 SEC ID NO.:8 SEC ID NO.: 21 SEC ID NO.:34 SEC ID NO.: 9 SEC ID NO.: 22 SEC ID NO.: 92 SEC ID NO.: 10 SEC ID NO.: 23 SEC ID NO.: 93 SEC ID NO.:11 SEC ID NO.:24 SEC ID NO.:94 SEC ID NO.: 12 SEC ID NO.: 25 SEC ID NO.: 95 SEC ID NO.:13 SEC ID NO.:26 SEC ID NO.:96 SEC ID NO.: 14 SEC ID NO.: 27 Y SEC ID NO.:15 SEC ID NO.:28 SEC ID NO.:97 SEC ID NO.: 16 SEC ID NO.: 29 SEC ID NO.: 17 SEC ID NO. 30 SEC ID NO 18 SEC ID NO 31 13 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha estructura de base de aceptor humana comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO 6 SEC ID NO 19 SEC ID NO. 32 SEC ID NO 7 SEC ID NO 20 SEC ID NO. 33 SEC ID NO 8 SEC ID NO 21 SEC ID NO 34 SEC ID NO 9 SEC ID NO 22 SEC ID NO 92 SEC ID NO 10 SEC ID NO 23 SEC ID NO. 93 SEC ID NO 11 SEC ID NO 24 SEC ID NO. 94 SEC ID NO 12 SEC ID NO 25 SEC ID NO 95 SEC ID NO 13 SEC ID NO 26 SEC ID NO 96 SEC ID NO 14 SEC ID NO 27 Y SEC ID NO 15 SEC ID NO 28 SEC ID NO 97 SEC ID NO 16 SEC ID NO 29 SEC ID NO 17 SEC ID NO 30 SEC ID NO 18 SEC ID NO 31 14 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la estructura de base de aceptor humana comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO 6 SEC ID NO 19 SEC ID NO. 32 SEC ID NO 7 SEC ID NO 20 SEC ID NO 33 SEC ID NO 8 SEC ID NO 21 SEC ID NO 34 SEC ID NO 9 SEC ID NO 22 SEC ID NO. 92 SEC ID NO 10 SEC ID NO 23 SEC ID NO 93 SEC ID NO.:11 SEC ID NO.:24 SEC ID NO.:94 SEC ID NO.: 12 SEC ID NO.: 25 SEC ID NO.: 95 SEC ID NO.: 13 SEC ID NO.: 26 SEC ID NO.: 96 SEC ID NO.: 14 SEC ID NO.: 27 Y SEC ID NO.: 15 SEC ID NO.: 28 SEC ID NO.: 97. SEC ID NO.: 16 SEC ID NO.: 29 SEC ID NO.: 17 SEC ID NO.: 30 SEC ID NO.:18 SEC ID NO.:31 15. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha proteína de unión comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de; SEC ID NO. : 61 SEC ID NO. : 62 SEC ID NO.: 63 SEC ID NO.: 69 SEC ID NO.: 75 SEC ID NO.: 64 SEC ID NO.: 70 SEC ID NO.: 76 SEC ID NO.:65 SEC ID NO.: 71 SEC ID NO.:77 SEC ID NO.: 66 SEC ID NO.: 72 y SEC ID NO.: 67 SEC ID NO.: 73 SEC ID NO.: 78. SEC ID NO.:68 SEC ID NO.:74 16. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 15, en donde dicha proteína de unión comprende dos dominios variables, en donde los dos dominios variables tienen secuencias de aminoácido seleccionadas del grupo que consiste de: SEC ID NO.: 61 & SEC ID NO.: 62, SEC ID NO.: 63 & SEC ID NO.: 64, SEC ID NO.: 65 & SEC ID NO.: 66, SEC ID NO.: 67 & SEC ID NO.: 68, SEC ID NO.: 69 & SEC ID NO.: 70, SEC ID NO.: 71 & SEC ID NO.: 72, SEC ID NO.: 73 & SEC ID NO.: 74, SEC ID NO.:75 & SEC ID NO.: 76, SEC ID NO. :77 & SEC ID NO.: 78 SEC ID NO.: 67 & SEC ID NO.: 70, Y SEC ID NO.: 69 & SEC ID NO.: 68. 17. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 7, en donde dicha estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base en un residuo clave, dicho residuo clave seleccionado del grupo que consiste de: un residuo adyacente a una CDR; un residuo de sitio de glicosilación; un residuo raro; un residuo capaz de interactuar con una subunidad p40 de IL-12 humana; un residuo capaz de interactuar con una CDR; un residuo canónico; un residuo de contacto entre una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera; un residuo dentro de una zona Vernier; y un residuo en una región que traslapa entre una CDR1 de cadena pesada variable definida por Chothia y una estructura de base de cadena pesada primera definida por Kabat. 18. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base en un residuo clave, dicho residuo clave seleccionado del grupo que consiste de: un residuo adyacente a una CDR; un residuo de sitio de glicosilación; un residuo raro; un residuo capaz de interactuar con una subunidad p40 de IL-12 humana; un residuo capaz de interactuar con a CDR; un residuo canónico; un residuo de contacto entre una región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera; un residuo dentro de una zona Vernier; y un residuo en una región que traslapa entre una CDR1 de cadena pesada variable definida por Chothia y una estructura de base de cadena pesada primera definida por Kabat. 19. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 16, en donde dicha estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base en un residuo clave, dicho residuo clave seleccionado del grupo que consiste de: un residuo adyacente a una CDR; un residuo de sitio de glicosilación; un residuo raro; un residuo capaz de interactuar con una subunidad p40 de IL-12 humana; un residuo capaz de interactuar con a CDR; un residuo canónico; un residuo de contacto entre una región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera; un residuo dentro de una zona Vernier; y un residuo en una región que traslapa entre una CDR1 de cadena pesada variable definida por Chothia y una estructura de base de cadena pesada primera definida por Kabat. 20. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el residuo clave se selecciona del grupo que consiste de 3H, 5H, 10H, 11H, 12H, 13H, 15H, 16H, 18H, 19H, 23H, 24H, 25H, 30H, 41H, 44H, 46H, 49H, 66H, 68H, 71H, 73H, 74H, 75H, 76H, 77H, 78H, 79H, 81H, 82H, 82AH, 82BH, 82CH, 83H, 84H, 85H, 86H, 87H, 89H, 93H, 98H, 108H, 109H, 1L, 2L, 3L, 7L, 8L, 9L, 10L, 11L, 12L, 13L, 15L, 17L, 19L, 20L, 21L, 22L, 36L, 41L, 42L, 43L, 45L, 46L, 58L, 60L, 62L, 63L, 67L, 70L, 73L, 74L, 77L, 78L, 79L, SOL, 83L, 85L, 87L, 104L, y 106L. 21. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el residuo clave se selecciona del grupo que consiste de 3H, 5H, 10H, 11H, 12H, 13H, 15H, 16H, 18H, 19H, 23H, 24H, 25H, 30H, 41H, 44H, 46H, 49H, 66H, 68H, 71H, 73H, 74H, 75H, 76H, 77H, 78H, 79H, 81H, 82H, 82AH, 82BH, 82CH, 83H, 84H, 85H, 86H, 87H, 89H, 93H, 98H, 108H, 109H, 1L, 2L, 3L, 7L, 8L, 9L, 10L, 11L, 12L, 13L, 15L, 17L, 19L, 20L, 21L, 22L, 36L, 41L, 42L, 43L, 45L, 46L, 58L, 60L, 62L, 63L, 67L, 70L, 73L, 74L, 77L, 78L, 79L, 80L, 83L, 85L, 87L, 104L, y 106L. 22. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el residuo clave se selecciona del grupo que consiste de 3H, 5H, 10H, 11H, 12H, 13H, 15H, 16H, 18H, 19H, 23H, 24H, 25H, 30H, 41H, 44H, 46H, 49H, 66H, 68H, 71H, 73H, 74H, 75H, 76H, 77H, 78H, 79H, 81H, 82H, 82AH, 82BH, 82CH, 83H, 84H, 85H, 86H, 87H, 89H, 93H, 98H, 108H, 109H, 1L, 2L, 3L, 7L, 8L, 9L, 10L, 11 L, 12L, 13L, 15L, 17L, 19L, 20L, 21L, 22L, 36L, 41L, 42L, 43L, 45L, 46L, 58L, 60L, 62L, 63L, 67L, 70L, 73L, 74L, 77L, 78L, 79L, 80L, 83L, 85L, 87L, 104L, y 106L. 23. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 17, en donde la proteína de unión es un dominio variable humano de consenso. 24. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 18, en donde la proteína de unión es un dominio variable humano de consenso. 25. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 19, en donde la proteina de unión es un dominio variable humano de consenso. 26. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base, en donde la secuencia de aminoácido de la estructura es por lo menos 65% idéntica a la secuencia de dicha estructura de base de aceptor humana y comprende por lo menos 70 residuos de aminoácido idénticos a dicha estructura de base de aceptor humana. 27. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base, en donde la secuencia de aminoácido de dicha estructura es por lo menos 65% idéntica a la secuencia de la estructura de base de aceptor humana y comprende por lo menos 70 residuos de aminoácido idénticos a dicha estructura de base de aceptor humana. 28. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la estructura de base de aceptor humana comprende por lo menos una sustitución de aminoácido de región de estructura de base, en donde la secuencia de aminoácido de dicha estructura es por lo menos 65% idéntica a la secuencia de la estructura de base de aceptor humana y comprende por lo menos 70 residuos de aminoácido idénticos a dicha estructura de base de aceptor humana. 29. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha proteína de unión comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de: SEC ID NO.: 79 SEC ID NO.: 88 SEC ID NO.: 103 SEC ID NO.:80 SEC ID NO.:89 SEC ID NO..104 SEC ID NO.:81 SEC ID NO.:90 SEC ID NO.:105 SEC ID NO.:82 SEC ID NO.: 91 SEC ID NO.:106 SEC ID NO.: 83 SEC ID NO.: 98 SEC ID NO.: 107 SEC ID NO.:84 SEC ID NO.:99 SEC ID NO.:108 SEC ID NO.: 85 SEC ID NO.:100 SEC ID NO.:86 SEC ID NO.: 101 SEC ID NO.:109. SEC ID NO.: 87 SEC ID NO.: 102 30. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 29, en donde la proteína de unión comprende dos dominios variables, en donde estos dos dominios variables tienen secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste de: SEC ID NO.: 67 & SEC ID NO.:79, SEC ID NO.: 80 & SEC ID NO.: 81, SEC ID NO.: 82 & SEC ID NO.: 83, SEC ID NO.: 84 & SEC ID NO.: 85, SEC ID NO.: 86 & SEC ID NO.: 87, SEC ID NO.: 88 & SEC ID NO.: 89, SEC ID NO.:90 & SEC ID NO..91, SEC ID NO.:98 & SEC ID NO. :99, SEC ID NO.: 100 & SEC ID NO.: 101, SEC ID NO.: 102 & SEC ID NO.:103, SEC ID NO.:104 & SEC ID NO.:105, SEC ID NO.: 106 & SEC ID NO.: 107, Y SEC ID NO.: 108 & SEC ID NO.: 109. 31. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la proteína de unión comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO.:79 SEC ID NO..88 SEC ID NO.:103 SEC ID NO.:80 SEC ID NO.:89 SEC ID NO.:104 SEC ID NO.:81 SEC ID NO.:90 SEC ID NO.:105 SEC ID NO.:82 SEC ID NO.:91 SEC ID NO.:106 SEC ID NO.:83 SEC ID NO.:98 SEC ID NO..107 SEC ID NO.:84 SEC ID NO.:99 SEC ID NO.:108, SEC ID NO.:85 SEC ID NO.:100 Y SEC ID NO.:86 SEC ID NO.:101 SEC ID NO.:109, SEC ID NO.:87 SEC ID NO.:102 32. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la proteína de unión comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO. :79 SEC ID NO. :88 SEC ID NO. :103 SEC ID NO. :80 SEC ID NO. :89 SEC ID NO. :104 SEC ID NO. :81 SEC ID NO. :90 SEC ID NO. :105 SEC ID NO. :82 SEC ID NO. :91 SEC ID NO. :106 SEC ID NO. :83 SEC ID NO. :98 SEC ID NO. :107 SEC ID NO. :84 SEC ID NO. :99 SEC ID NO. : 108, SEC ID NO. :85 SEC ID NO. :100 Y SEC ID NO. :86 SEC ID NO. 101 SEC ID NO. :109. SEC ID NO. :87 SEC ID NO. .102 33. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 22, en donde la proteína de unión comprende por lo menos un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO. :79 SEC ID NO. :87 SEC ID NO. : 101 SEC ID NO. :80 SEC ID NO. :88 SEC ID NO. :102 SEC ID NO. :81 SEC ID NO. :89 SEC ID NO. :103 SEC ID NO. :82 SEC ID NO. :90 SEC ID NO. :104 SEC ID NO. :83 SEC ID NO. :91 SEC ID NO. :105 SEC ID NO. :84 SEC ID NO. :98 SEC ID NO. :106 SEC ID NO. :85 SEC ID NO. :99 SEC ID NO. :107 SEC ID NO. :86 SEC ID NO. :100 SEC ID NO. : 108 Y SEC ID NO . : 109. 34. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 35. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 36. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL- 12 e IL-23. 37. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 38. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 39. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 40. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 17, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 41. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 42. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 26, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 43. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 29, en donde la proteína de unión es capaz de unir un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 44. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 34, en donde la proteína de unión es capaz de modular una función biológica de un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 45. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la proteína de unión es capaz de modular una función biológica de un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 46. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la proteína de unión es capaz de modular una función biológica de un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 47. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 34, en donde la proteína de unión es capaz de neutralizar un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 48. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la proteína de unión es capaz de neutralizar un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 49. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la proteína de unión es capaz de neutralizar un objetivo seleccionado del grupo que consiste de IL-12 e IL-23. 50. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 34, en donde dicha proteína de unión tiene una constante de velocidad en encendido (KenCend?do) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: por lo menos aproximadamente 102M"1s"1; por lo menos aproximadamente 103M"1s"1; por lo menos aproximadamente 104M"1s"1; por lo menos aproximadamente 105M'1s"1; y por lo menos aproximadamente 105M"1s'1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 51. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en encendido (KenCend?do) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: por lo menos aproximadamente 102M"1s"1; por lo menos aproximadamente 103M" s"1; por lo menos aproximadamente 104M"1s "1; por lo menos aproximadamente 105M"1s"1; y por lo menos aproximadamente 106M"1s"1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 52. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 42, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en encendido (Kencend?do) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: por lo menos aproximadamente 102M"1s"1; por lo menos aproximadamente 103M"1s~1; por lo menos aproximadamente 104M"1s"1; por lo menos aproximadamente 105M'1s'1; y por lo menos aproximadamente 106M" s"1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 53. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en encendido (Kencend?do) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: por lo menos aproximadamente 102M"1s"1; por lo menos aproximadamente 103M"1s"1; por lo menos aproximadamente 104M"1s"1; por lo menos aproximadamente 105M'1s'1; y por lo menos aproximadamente 106M" s"1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 54. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 34, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en apagado (Kapagado) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente KrV1; a lo mucho aproximadamente 10~ s~1; a lo mucho aproximadamente 10"5s'1; y a lo mucho aproximadamente 10"6s"1 según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 55. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en apagado (Kapagad0) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 1QJV1; a lo mucho aproximadamente 10"4s"1; a lo mucho aproximadamente 10"5s'1; y a lo mucho aproximadamente 10"6s"\ según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 56. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 42, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en apagado (Kapaga 0) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10'3s'1; a lo mucho aproximadamente 10"4s"1; a lo mucho aproximadamente 10"5s"1; y a lo mucho aproximadamente 10"6s"1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 57. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la proteína de unión tiene una constante de velocidad en apagado (Kapagad0) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10"3s"1; a lo mucho aproximadamente 10"4s"1; a lo mucho aproximadamente 10"5s"1; y a lo mucho aproximadamente 10"6s"1, según medido a través de resonancia de plasmón de superficie. 58. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 34, en donde dicha proteína de unión tiene una constante de disociación (KD) a dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10"7 M; a lo mucho aproximadamente 10"8 M; a lo mucho aproximadamente 10"9 M; a lo mucho aproximadamente 10~10 M; a lo mucho aproximadamente 10~11 M; a lo mucho aproximadamente 10'12 M; y a lo mucho 10 13 M. 59. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la proteína de unión tiene una constante de disociación (KD) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10"7 M, a lo mucho aproximadamente 10"8 M; a lo mucho aproximadamente 10'9 M; a lo mucho aproximadamente 10"10 M; a lo mucho aproximadamente 10'11 M; a lo mucho aproximadamente 10"12 M; y a lo mucho 10"13M. 60. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 42, en donde la proteína de unión tiene una constante de disociación (KD) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10"7 M; a lo mucho aproximadamente 10"8 M; a lo mucho aproximadamente 10"9 M; a lo mucho aproximadamente 10'10 M; a lo mucho aproximadamente 10"11 M; a lo mucho aproximadamente 10 "12 M; y a lo mucho 10 "13M. 61. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la proteína de unión tiene una constante de disociación (K ) para dicho objetivo seleccionada del grupo que consiste de: a lo mucho aproximadamente 10'7 M; a lo mucho aproximadamente 10"8 M; a lo mucho aproximadamente 10"9 M; a lo mucho aproximadamente 10"10 M; a lo mucho aproximadamente 10~11 M; a lo mucho aproximadamente 10~12 M; y a lo mucho 10~13 M. 62. Una construcción de anticuerpo que comprende una proteína de unión descrita en cualquiera de las reivindicaciones 1-61, dicha construcción de anticuerpo además comprende un polipéptido un dominio enlazador o un dominio constante de inmunoglobulina. 63. La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 62, en donde dicha proteína de unión es seleccionada del grupo que consiste de: una molécula de inmunoglobulina, un Fv enlazado a disulfuro, un anticuerpo monoclonal, un scFv, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo de dominio individual, un anticuerpo CDR-injertado, un diacuerpo, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo multiespecífico, un Fab, un anticuerpo específico doble, y un Fab' , un anticuerpo biespecífico. un F(ab')2, un Fv, 64. La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 62, en donde dicha proteína de unión comprende un dominio constante de ¡nmunoglobulina de cadena pesada seleccionado del grupo que consiste de: un dominio constante de IgM humano, un dominio constante de lgG4 humano, un dominio constante de lgG1 humano, un dominio constante de IgE humano, un dominio constante de lgG2 humano, y un dominio constante de lgG3 humano, un dominio constante de IgA humano. 65. La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 62, que comprende un dominio de constante de inmunoglobulina que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: SEC ID NO.:2 SEC ID NO.:4 SEC ID NO.:5. SEC ID NO.:3 y 66. Un conjugado de anticuerpo que comprende una construcción de anticuerpo descrita en cualquiera de las reivindicaciones 62-65, dicho conjugado de anticuerpo además comprende un agente seleccionado del grupo que consiste de: una molécula de inmunoadhesión, un agente formador de imagen, un agente terapéutico, y un agente citotóxico. 67. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 66, en donde dicho agente es un agente formador de imagen seleccionado del grupo que consiste de una radio-etiqueta, una enzima, una etiqueta fluorescente, una etiqueta luminiscente, una etiqueta bioluminiscente, una etiqueta magnética, y una biotina. 68. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 66, en donde el agente formador de imagen es una radio-etiqueta seleccionada del grupo que consiste de: 3H, 14C, 35S, 90Y, 9?Tc, 111ln, 123l, 131l, 77Lu, 166Ho, y 153Sm. 69. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 66, en donde dicho agente es un agente terapéutico o citotóxico seleccionado del grupo que consiste de un anti-metabolito, un agente de alquilación, un antibiótico, un factor de crecimiento, una citocma, un agente anti-angiogénico, un agente anti-mitótico, una antracic na, una toxina, y un agente apoptótico 70 La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 64, en donde dicha proteína de unión posee un patrón de glicosilación humano 71 El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 66, en donde dicha proteína de unión posee un patrón de glicosilación humano 72 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 3, en donde la proteína de unión existe como un cristal 73 La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 62, en donde dicha construcción de anticuerpo existe como un cristal 74 El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 66, en donde dicha construcción de anticuerpo existe como un cristal 75 La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 72, en donde dicho cristal es un cristal de liberación controlada farmacéutico libre de vehículo 76 La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 73, en donde dicho cristal es un cristal de liberación controlada farmacéutico libre de vehículo 77. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 74, en donde dicho cristal es un cristal de liberación controlada farmacéutico libre de vehículo. 78. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 72, en donde dicha proteína de unión tiene una vida media mayor in vivo que la contraparte soluble de dicha proteína de unión. 79. La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 73, en donde dicha construcción de anticuerpo tiene una vida media mayor in vivo que la contraparte soluble de dicha construcción de anticuerpo. 80. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 74, en donde dicho conjugado de anticuerpo tiene una vida media mayor in vivo que la contraparte soluble de dicho conjugado de anticuerpo. 81. La proteína de unión de acuerdo con la reivindicación 72, en donde dicha proteína de unión retiene la actividad biológica. 82. La construcción de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 73, en donde dicha construcción de anticuerpo retiene la actividad biológica. 83. El conjugado de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 74, en donde dicho conjugado de anticuerpo retiene la actividad biológica. 84. Un ácido nucleico aislado que codifica una secuencia de aminoácido de proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1- 61. 85. Un ácido nucleico aislado que codifica una secuencia de aminoácido de construcción de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 62-65. 86. Un ácido nucleico aislado que codifica una secuencia de aminoácido de conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 66-69. 87. Un vector que comprende un ácido nucleico aislado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 84-86. 88. El vector de acuerdo con la reivindicación 87, en donde dicho vector se selecciona del grupo que consiste de pADNc, pTT, pTT3, pEFBOS, pBV, pJV, y pBJ. 89. Una célula huésped que comprende un vector de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 87-88. 90. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 89, en donde dicha célula huésped es una célula procariótica. 91. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 90, en donde dicha célula huésped es E.Coli. 92. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 89, en donde dicha célula huésped es una célula eucariótica. 93. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula eucariótica se selecciona del grupo que consiste de célula protista, célula de animal, célula vegetal y célula fúngica. 94. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula eucariótica es una célula de animal seleccionada del grupo que consiste de: una célula de mamífero, una célula de ave y una célula de insecto. 95. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula huésped es una célula CHO. 96. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula huésped es COS. 97. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula huésped es una célula de levadura. 98. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 97, en donde dicha célula de levadura es Saccharomvces cerevisiae. 99. La célula huésped de acuerdo con la reivindicación 92, en donde dicha célula huésped es una célula Sf9 de insecto. 100. Un método para producir una proteína capaz de unir la subunidad p40 de IL-12, que comprende cultivar una célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 89-99 en un medio de cultivo bajo condiciones suficientes para producir una proteína de unión capaz de unir la subunidad p40 de IL-12. 101. Una proteína producida de acuerdo con el método de la reivindicación 100. 102. Una composición para la liberación de una proteína de unión dicha composición comprende: (a) una formulación, en donde la formulación comprende una proteína de unión cristalizada, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 72-83, y un ingrediente; y (b) por lo menos un vehículo polimérico. 103. La composición de acuerdo con la reivindicación 102, en donde dicho vehículo polimérico es un polímero seleccionado de uno o más del grupo que consiste de: ácido poli(acrílíco), poli (cianoacrilatos), poli(aminoácidos), poli(anhídridos), poli (depsipéptido), poli(ésteres), ácido poli(láctico), ácido poli(láctici-co-glicólico) o PLGA, poli(b-hidroxibutirato), poli(caprolactona), poli(dioxanona); poli (g li co I etilénico), poli((hidroxipropil) metacrilamida, poli[(órgano) fosfaceno], poli(orto esteres), alcohol poli(vinílico), poli(vínilpirrolidona), copolímeros de anhidro maleíco-alquil vinil éter, polioles plurónicos, albúmina, alginato, celulosa y derivados de celulosa, colágeno, fibrina, gelatina, ácido hialurónico, oligosacáridos, glicaminoglicanos, polisacáridos sulfatados, mezclas y copolímeros de los mismos. 104. La composición de acuerdo con la reivindicación 102, en donde dicho ingrediente se selecciona del grupo que consiste de albúmina, sacarosa, trehalosa, lactitol, gelatina hidroxipropil-ß-ciclodextrina, glicol metoxipolietilénico y glicol polietilé nico . 105. Un método para tratar un mamífero, que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad efectiva de la composición de acuerdo con la reivindicación 96. 106. Una composición farmacéutica que comprende la proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-61, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 107. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 106, en donde dicho vehiculo farmacéuticamente aceptable funciona como un auxiliar útil para incrementar la absorción, o dispersión de dicha protema de unión 108 La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 107 en donde el auxiliar es hialuronidasa 109 La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 106, que comprende además por lo menos un agente terapéutico adicional para tratar un trastorno en donde la actividad de IL-12 es dañina 110 La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 109, en donde dicho agente adicional se selecciona del grupo que consiste de agente terapéutico, agente formador de imagen, agente citotóxico, inhibidores de angiogénesis, inhibidores de cinasa, bloqueadores de molécula de co-estimulación, bloqueadores de molécula de adhesión, anticuerpo anti-citocina o su fragmento funcional, metotrexato, ciclospopna, rapamicina, FK506, etiqueta o reporte detectable, un antagonista de TNF, un antirreumático, un relajante muscular, un narcótico, un fármaco anti-inflamatopo no esteroidal (NSAID), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano, un antipsopático, un corticostepode, un esteroide anabólico, una eptropoyetma, una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor, una hormona de crecimiento, un fármaco de reemplazo de hormona, un radiofarmacéutico, un antidepresor, un antisicótico, un estimulante, un medicamento para asma, un agonista beta, un esteroide inhalado, una epmefpna o análogo, una citocina, y un antagonista de atocina 111. Un método para reducir la actividad de 1L-12 humana, que comprende poner en contacto IL-12 humana con la proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-61, de manera que la actividad de 1L-12 se reduce. 112. Un método para reducir la actividad IL-12 humana en un sujeto ser humano que sufre de un trastorno en donde la actividad de IL-12 es dañina, que comprende administrar al sujeto ser humano la proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-61 de manera que la actividad de IL-12 humana en el sujeto ser humano se reduce. 113. Un método para tratar un sujeto para una enfermedad o un trastorno en donde la actividad de IL-12 es dañina administrando al sujeto la proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-61 de manera que se obtiene el tratamiento. 114. El método de acuerdo con la reivindicación 113, en donde dicho trastorno se selecciona del grupo que comprende artritis reumatoide, osteoartritis, artritis crónica juvenil, artritis séptica, artritis de Lyme, artritis psoriática, artritis reactiva, espondiloartropatia, lupus sistémico eritematoso, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus dependiente de insulina, tiroiditis, asma, enfermedades alérgicas, psoriasis, escleroderma de dermatitis, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo de trasplante de órgano, enfermedad inmune aguda o crónica asociada con trasplante de órganos, sarcoidosis, aterosclerosis, coagulación intravascular diseminada, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Grave, síndrome nefrótico, síndrome de fatiga crónica, granulomatosis de Wegener, púrpura de Henoch-Schoenlein, vasculitis microscópica de los riñones, hepatitis activa crónica, uveitis, choque séptico, síndrome de choque tóxico, síndrome de sepsis, caquexia, enfermedades infecciosas, enfermedades parásitas, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, mielitis transversal aguda, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, ataque, cirrosis biliar primaria, anemia hemolítica, malignidades, falla cardiaca, infarto al miocardio, enfermedad de Addison, esporádica, tipo I de deficiencia poliglandular y tipo II de deficiencia poliglandular, síndrome de Schmidt, síndrome de disfunción respiratoria en adultos (aguda), alopecia, alopecia areata, artropatía seronegativa, artropatía, enfermedad de Reiter, artropatía psoriática, artropatía eolítica ulcerativa, sinovitis enteropática, clamidia, yersinia y salmonela asociada con artropia, espondiloartopatia, enfermedad ateromatosa/arteriosclerosis, alergia atópica, enfermedad bolosa autoinmune, pénfigo vulgaris, pénfigo foliáceo, penfigoide, enfermedad IgA lineal, anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica positiva de Coombs, anemia perniciosa adquirida, anemia perniciosa juvenil, encefalitis mialgica/Enfermedad Libre de Royal, candidiasis mucocutánea crónica, arteritis de célula gigante, hepatitis esclerosante primaria, hepatitis autoinmune criptogéníca, Síndrome de Enfermedad de Inmunodeficiencia Adquirida, Enfermedades Relacionadas con Inmunodeficiencia Adquirida, Hepatitis B, Hepatitis C, inmunodeficiencia variada común, (hipogamaglobuhnemia variable común), cardiomiopatía dilatada, infertilidad femenina, falla de ovarios, falla de ovarios prematura, enfermedad de pulmón fibrótico, alveolitis de fibrosis cpptogénica, enfermedad de pulmón intersticial post-inflamatopa, pneumonitis intersticial, enfermedad de tejido conectivo asociada con enfermedad de pulmón intersticial, enfermedad de pulmón asociada con enfermedad de tejido conectivo mixta, enfermedad de pulmón intersticial asociada con esclerosis sistémica, enfermedad de pulmón intersticial asociada con artritis reumatoide, enfermedad de pulmón asociada con lupus sistémico eptematoso, enfermedad de pulmón asociada con dermatomiositis/pohmiositis, enfermedad de pulmón asociada con la enfermedad de Sjogren, enfermedad de pulmón asociada con espondilitis anquilosante, enfermedad de pulmón difusa vasculítica, enfermedad de pulmón asociada con hemosiderosis, enfermedad de pulmón intersticial inducida por fármacos, fibrosis, fibrosis de radiación, bronq uio litis obliteran, neumonía eosinofílica crónica, enfermedad de pulmón infiltrante hnfocítica, enfermedad de pulmón intersticial post-infecciosa, artritis gotosa, hepatitis autoinmune, hepatitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis autoinmune clásica o poide), hepatitis autoinmune de tipo 2 (hepatitis de anticuerpo anti-LKM), hipoglicemia mediada autoinmune, resistencia a insulina tipo B con acantosis nigpcans, hipoparatiroidismo, enfermedad inmune asociada con trasplante de órgano, enfermedad inmune crónica asociada con trasplante de órgano, osteoartrosis, colangitis esclerosante primaria, psoriasis tipo 1, psoriasis tipo 2, leucopenia idiopática, neutropenia autoinmune, NOS de enfermedad renal, glomerulonefritida, vasculitis microscópica de los riñones, enfermedad de lima, lupus discoide eritematoso, infertilidad masculina idiopática o NOS, autoinmunidad de esperma, esclerosis múltiple (todos los subtipos), oftalmía simpatética, hipertensión pulmonar secundaria a enfermedad de tejido conectivo, síndrome de Goodpasture, manifestación pulmonar de poliarteritis nodosa, fiebre reumática aguda, espondilitis reumatoide, enfermedad de Still, esclerosis sistémica, síndrome de Sjorgren, enfermedad de Takayasu/arteritis, trombocitopenia autoinmune, trombocitopenia idiopática, enfermedad de tiroides autoinmune, hipertiroidismo, hipotiroidismo autoinmune gotoso (enfermedad de Hashimoto), hipotiroidismo autoinmune atrófico, mixoedema primario, uveítis facogénica, vasculitis primaria, enfermedad del hígado aguda, vitíligo, enfermedades crónicas del hígado, cirrosis alcohólica, daño del hígado inducido por alcohol, coleosatatis, enfermedad de hígado ideosincrática, hepatitis inducida por fármaco, Esteatohepatitis no alcohólica, alergia y asma, infección por estreptococo del grupo B (GBS), trastornos mentales (por ejemplo, depresión y esquizofrenia), enfermedad mediada por el Tipo Th2 y el Tipo Th1, dolor agudo y crónico (diferentes formas de dolor), y cánceres tales como cáncer de pulmón, de mama, de estomago, de vejiga, de páncreas, de ovario, de próstata y rectal y malignidades hematopoyéticas (leucemia y linfoma), Abetalipoprotemia, Acrocianosis, procesos parásitos o infecciosos agudos o crónicos, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), infección bacteriana aguda o crónica, pancreatitis aguda, falla renal aguda, adenocarcinomas, latidos ectópicos aeriales, complejo de demencia por SIDA, hepatitis inducida por alcohol, conjuntivitis alérgica, dermatitis por contacto alérgica, rinitis alérgica, rechazo de aloinjerto, deficiencia de alfa-1 -antitripsina, esclerosis lateral amiotrófica, anemia, angina de pecho, degeneración de célula de cuerno anterior, terapia anti-cd3, síndrome antifosfolípido, reacciones de hipersensibilidad de anti-receptor, aneurismas aórticos y periféricos, disección aórtica, hipertensión arterial, arteriosclerosis, fístula arteriovenosa, ataxia, fibrílación atrial (sostenida o paroxismal), palpitación atrial, bloque atrioventricular, linfoma de célula B, rechazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de medula ósea (BMT), bloqueo de ramificación de grupo, linfoma de Burkitt, Quemaduras, arritmias cardiacas, síndrome de choque cardiaco, tumores cardiacos, cardiomiopatía, respuesta de inflamación de derivación cardiopulmonar, rechazo de trasplante de cartílago, degeneraciones corticales cerebrales, trastornos cerebrales, taquicardia atrial caótica o multifocal, trastornos asociados con quimioterapia, leucemia mielocítica crónica (CML), alcoholismo crónico, patologías inflamatorias crónicas, leucemia linfocítica crónica (CLL), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), intoxicación crónica por salicilato, carcinoma colorectal, falla cardiaca congestiva, conjuntivitis, dermatitis por contacto, cor pulmonale, enfermedad de arteria coronaria, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, sepsis negativa de cultivo, fibrosis quística, trastornos asociados con terapia de citocina, Demencia pugílística, enfermedades de desmielinización, fiebre hemorrágica por dengue, dermatitis, condiciones dermatológicas, diabetes, diabetes mellitus, enfermedad ateriosclerótica diabética, enfermedad difusa del cuerpo de Lewy, cardiomiopatía congestiva dilatada, trastornos de los ganglios básales Síndrome de Down en edad medía, trastornos de movimiento inducidos por fármacos, que bloquean receptores de dopamina del Sistema Nervioso Central, sensibilidad a fármacos, eccema, encefalomielitis, endocarditis, endocrinopatia, epiglotitis, infección por virus de epstein-barr, eritromelalgia, trastornos extrapiramidales y cerebrales, linfohistiocitosis hematofagocítica familiar, rechazo de implante de timo fetal, ataxia de Friedreich, trastornos arteriales periféricos funcionales, sepsis fúngica, gangrena de gas, ulcera gástrica, nefritis glomerular, rechazo de injerto de cualquier órgano o tejido, sepsis gram-negativa, sepsis gram-positiva, granulomas debido a organismos intracelulares, leucemia de célula vellosa, enfermedad de Hallerrorden-Spatz, tiroiditis de hashimoto, fiebre de heno, rechazo de trasplante de corazón, hemacromatosis, hemodiálisis, síndrome urémico hemolítico/púrpura trombocitopénico trombolítico, hemorragia, hepatitis (A), arritmias del grupo His, infección por VIH/neuropatía por HIV, enfermedad de Hodgkin, trastornos de movimiento hipercinético, reacciones de hipersensibilidad, neumonitis de hipersensibilidad, hipertensión, trastornos del movimiento hipocinético, evaluación de eje hipotalámico-pituitaria-adrenal, enfermedad de Addison idiopática, fibrosis pulmonar idiopática, citotoxicidad mediada por anticuerpo, astenia, atrofia muscular espinal infantil, inflamación de la aorta, influenza a, exposición a radicación ionizante, iridociclitis/uveitis/neuritis óptica, daño por isquemia-reperfusión, choque isquémico, artritis reumatoíde juvenil, atrofia muscular espinal juvenil, sarcoma de Kaposi, rechazo de trasplante de riñon, legionelosis, leishmaniasis, lepra, lesiones del sistema corticoespinal, lipedema, rechazo de trasplante de hígado, linfederma, malaria, linfoma maligno, histiocitosis maligna, melanoma maligno, meningitis, meningococcemia, metabólico/idiopático, dolor de cabeza, migraña, trastorno de sistema múltiple mitocondrial, enfermedad de tejido conectivo mixta, gamopatia monoclonal, mieloma múltiple, degeneraciones de sistemas múltiples (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager y Machado-Joseph), miastenia grave, micobacteria avium intracelular, micobacteria tuberculosis, síndrome mielodiplástíco, infarto al miocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carcinoma nasofaríngeo, enfermedad crónica de pulmón neonatal, nefritis, nefrosis, enfermedades neurodegenerativas, atrofias musculares neurogénicas I, fiebre neutropénica, linfoma que no es de hodgkins, oclusión de la aorta abdominal y sus ramificaciones, trastornos arteriales oclusivos, terapia de okt3, orquitis/epididimitis, orquitis/procedimientos inversos de vasectomía, organomegalia, osteoporosis, rechazo de trasplante de páncreas, carcinoma pancreático, síndrome paraneoplástico/hipercalcemia de malignidad, rechazo de trasplante de paratiroides, enfermedad inflamatoria pélvica, rinitis perineal, enfermedad pericardial, enfermedad aterosclerótica periférica, trastornos vasculares periféricos, peritonitis, anemia perniciosa, neumonía carinii Pneumocystis, neumonía, síndrome POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, y síndrome de cambios en piel), síndrome de post-perfusión, síndrome de postbombeo, síndrome de cardiotomia post-MI, preclampsia, Palsy de supranúcleo progresivo, hipertensión pulmonar primaria, terapia de radiación, fenómeno y enfermedad de Raynaud, enfermedad de Raynoud, enfermedad de Refsum, taquicardia QRS estrecha regular, hipertensión renovascular, daño por reperfusión, cardiomiopatía restrictiva, sarcomas, escleroderma, corea senil, demencia senil de tipo de cuerpo de Lewy, artropatías seronegativas, choque, anemia de célula falsiforme, rechazo de aloinjerto de piel, síndrome de cambios de piel, rechazo de trasplante de intestino delgado, tumores sólidos, arritmias específicas, ataxia espinal, degeneraciones espinocerebrales, miositis de estreptococo, lesiones estructurales del cerebelo, panencefalitis esclerosante sub-aguda, síncope, sífilis del sistema cardiovascular, anafilaxia sistémica, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, artritis reumatoide juvenil de inicio sistémico, célula T o FAB ALL, Telangiectasia, tromboangitis obliterans, trombocitopenia, toxicidad, trasplantes, trauma/hemorragia, reacciones de hipersensibilidad de tipo lll, hipersensibilidad de tipo IV, angina inestable, uremia, urosepsis, urticaria, enfermedades cardiacas valvulares, venas varicosas, vasculitis, enfermedades venosas, trombosis venosa, fibrilación ventricular, infecciones virales y fúngicas, encefalitis vital/meningitis aséptica, síndrome hemafagocítico asociado vital, síndrome de Wernicke-Korsakoff, enfermedad de Wilson, rechazo de xenoinjerto de cualquier órgano o tejido. 115. Un método para tratar a un paciente que sufre de un trastorno en donde 1L-12 es dañina, que comprende el paso de administrar la proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-61, antes, concurrente o después de la administración de un segundo agente, en donde el segundo agente se selecciona del grupo que consiste de budenosida, factor de crecimiento epidérmico, corticosteroides, ciclosporina, sulfasalazina, aminosalicilatos, 6-mercaptopurina, azatioprina, metronidazol, inhibidores de lipoxigenasa, mesalamina, olsalazina, balsalazida, antioxidantes, inhibidores de tromboxano, antagonistas de receptor de 1L-1, anticuerpos monoclonales anti-1 L-1 ß, anticuerpos monoclonales anti-1 L-6, factores de crecimiento, inhibidores de elastasa, compuestos de piridinil-imidazol, anticuerpos o agonistas de TNF, LT, IL-1, 1L-2, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1 L-15, 1 L-16, 1 L-18, EMAP-II GM-CSF, FGF, y PDGF, anticuerpos de CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 o sus ligandos, metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSAIDs, ibuprofeno, corticosteroides, prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, IRAK, NIK, IKK, p38, inhibidores de cinasa MAP, inhibidores de enzima de conversión de 1 L-1 ß , inhibidores de enzima de conversión TNFa, inhibidores de señalización de célula T, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzima de conversión de angiotensina, receptores de citocina solubles, receptor TNF p55 soluble, receptor TNF p75 soluble, si L-1 R I , s I L- 1 Rll, slL-6R, citocinas anti-inflamatorias, 1L-4, 1 L-10, IL-11, 1 L-13 y TGFß. 116. El método de acuerdo con la reivindicación 113, en donde dicha administración al sujeto es a través de por lo menos un modo seleccionado de parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intrarticular, intrabronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavidad, intracelial, intracerebelar, intracerebroveptricular, intracólico, intracervical, intragástrica, intrahepática, intramiocardio, intraoesteal, intrapélvica, intrapericardiaca, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrapulmonar, intrarectal, intrarenal, intraretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácica, intrauterina, intravesicular, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal, y transdérmica.
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