MX2007009168A - Compuestos antihelminticos. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere al nuevo compuesto antihelmintico [3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)- fenil]-amida de acido tetrahidro-furan-2-carboxilico y a sus sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables y a las formas estereoquimicamente isomericas de estos, asi como tambien a las composiciones farmaceuticas que comprenden dicho nuevo compuesto, a los procedimientos para preparar dichos compuestos y composiciones, y al uso de estos como medicamento, en particular en el tratamiento, control y prevencion de infecciones endo- y ectoparasiticas en animales de sangre caliente.

Description

COMPUESTOS ANTIHELMÍNTICOS MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a nuevos derivados antihelmínticos de tetramisol y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, a las composiciones que comprenden dichos nuevos compuestos, a los procedimientos para preparar dichos compuestos y composiciones, y al uso de los mismos como medicamento, in particular en el tratamiento, control y prevención de infecciones endo y ectoparasíticas en animales de sangre caliente. El tetramisol y el levamisol son antihelmínticos bien conocidos que tienen la estructura siguiente: (el tetramisol es la forma di racémica, el levamisol es la forma I enantiomérica pura). Uno de los antihelmínticos más populares es el levamisol, que ha sido ampliamente usado para controlar parásitos nematodos en animales de corral, en particular ovinos y ganado. Sin embargo el desarrollo de nematodos resistentes a los antihelmínticos se ha convertido en un importante problema para los animales de corral, particularmente el nematodo Haemonchus contortus. Además, se han encontrado cepas multi-resistentes en circunstancias de campo que han desarrollado resistencia contra antihelmínticos muy usados, tales como levamisol, mebendazol e ivermectina. Por consiguiente existe la necesidad de encontrar nuevos agentes antihelmínticos que tengan actividad antihelmíntica contra nematodos resistentes y multi-resistentes al levamisol. Otros antihelmínticos de tetramisol han sido descritos en, por ejemplo la patente norteamericana 4,014,892 que ejemplifica [3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1 -b]tiazol-6-il)-fenil]-amida de ácido furan-2-carboxílico como compuesto (163) y (tetrahidrofuran-2-ilmetil)-[3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenil]-amina como compuesto (110). Este último compuesto ha sido también identificado en la patente británica GB-1 ,365,515 como compuesto (81 ). La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) a sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y sus formas estereoquímicamente isoméricas. Tal como se demuestra en el ejemplo farmacológico C.1 , los compuestos de la presente invención tienen una actividad antihelmíntica inesperada que es superior contra una cepa multi-resistente de Haemonchus contortus (resistente al levamisol, mebendazol, ivermectina y closantel) que los compuestos conocidos en la técnica [3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenil]-amida de ácido furan-2-carboxílico (al cual se hace referencia en la descripción como compuesto (A)) y (tetrahidrofuran-2-ilmetil)-[3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenil]-amina (al cual se hace referencia en la descripción como compuesto (B)) Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables mencionadas anteriormente comprenden las formas de la sal de adición de ácido no tóxica terapéuticamente activa que los compuestos de fórmula (I) son capaces de formar. Estas sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, pueden obtenerse convenientemente por tratamiento de la forma básica con un ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos halohídricos, por ejemplo ácido clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y ácidos similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir etandioico), malónico, succínico (es decir ácido butandioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, p-toluensulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y ácidos similares. A la inversa, dichas formas de sales, pueden convertirse por tratamiento con una base apropiada a la forma de base libre. El término "formas estereoquímicamente isoméricas", tal como se usó anteriormente, define todas las formas isoméricas posibles que los compuestos de fórmula (I) pueden poseer. A menos que se mencione o indique lo contrario, la designación química de los compuestos de fórmula (I), denota la mezcla de todas las formas estereoquímicamente isoméricas posibles, donde dichas mezclas contienen todos los diaestereómeros y enantiómeros de la estructura molecular básica. Más particularmente, los centros estereogénicos pueden tener la configuración R- o S-. Los compuestos de fórmula (I) tienen dos átomos de carbono quirales, tal como se indica mediante un asterisco en la estructura siguiente: HN o . © o U -- ) que proporciona un total de 4 estereooisómeros diferentes. Todas las 4 formas individuales estereoquímicamente diferentes de los compuestos de la fórmula (I), y cada posible mezcla de los mismos, están obviamente abarcados dentro del alcance de esta invención. La configuración estereoquímica absoluta de los compuestos de la fórmula (I) y de los intermediarios usados en su preparación, puede ser fácilmente determinada por los expertos en la materia, usando métodos bien conocidos, tales como, por ejemplo difracción de rayos X. Además, algunos de los compuestos de fórmula (I) y algunos de los intermediarios usados en su preparación, pueden exhibir polimorfismo.

Debe comprenderse que la presente invención abarca cualquier forma polimórfica que posea propiedades útiles en el tratamiento de las condiciones señaladas antenormente. Un grupo particular de compuestos, son aquellos compuestos de fórmula (I-a) que se definen como compuestos de fórmula (I) que tienen la configuración (S) en la posición 6 de la porción 2,3,5,6-tetrahidro-imidazo [2,1-b]tiazol.

HN o (!-<$ y o Un compuesto preferido es (6S)-[3-(2,3,5,6-tetrah?dro-?midazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenil]-amida de ácido (2R)-tetrahidro-furan-2-carboxílico. Los compuestos de fórmula (I), pueden prepararse en general haciendo reaccionar un intermediario de fórmula (V) disuelto en una solución de dioxano acidificada con HCl con un intermediario de fórmula (IV) en un solvente apropiado inerte a la reacción, tal como acetonitrilo. inim. (V) ÍBttm. (IV) Los intermediarios de fórmula (IV) pueden prepararse tal como se señala a continuación. El compuesto de partida comercialmente obtenible ácido 2-bromo-1 -(3-nitrofenil)-etanona se hace reaccionar con 4,5-dihidrotiazolamina y luego se reduce el intermediario obtenido (I) con un agente reductor apropiado tal como borohidruro de sodio en un solvente apropiado tal como etanol, lo cual proporciona el intermediario (II). El intermediario (II) se trata luego con cloruro de tionilo en un solvente inerte a la reacción tal como dicloroetano, mediante lo cual se forma el anillo 2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazolilo del intermediario (lll). El intermediario (lll) se convertido primero a la sal de adición de HCl antes de que su grupo nitro sea reducido a un grupo amino, empleando agentes de reducción conocidos en el arte, tales como hierro en polvo y NH4CI o SnCl2 acuoso, obteniendo de esta manera el intermediario (IV). foci cc cr> intrn (I) El intermediario (V) se prepara por conversión de ácido tetrahidro-2-furancarboxílico a su análogo de cloruro de acilo por reacción con cloruro de oxalilo. El intermediario (V) puede prepararse también como su enantiómero (R)- o (S)- estereoisómerico puro, a partir de cualquiera de los ácidos (R)- o (S)- tetrahidro-2-furancarboxílico respectivamente. tntm- (V) El intermediario de fórmula (lll) puede separarse en sus estereoisómeros (+)- o (-)- usando técnicas de separación tales como cromatografía líquida empleando una fase estacionaria quiral.

Los compuestos de fórmula (I) preparados en los procedimientos anteriormente descritos, pueden sintetizarse en forma de mezclas racémicas de enantiómeros que pueden separarse uno de otro siguiendo procedimientos de resolución conocidos en el arte. Aquellos compuestos de fórmula (I) que se obtienen en forma racémica, pueden convertirse a sus correspondientes formas de sales diaestereoméricas por reacción con un ácido quiral apropiado. Dichas formas de sales diaestereoméricas son subsiguientemente separadas, por ejemplo, por cristalización selectiva o fraccionada y los enantiómeros son liberados de los mismos mediante álcali. Una manera alternativa de separar las formas enantiómericas de los compuestos de fórmula (I) involucra cromatografía líquida usando una fase estacionaria quiral. Dichas formas isoméricas estereoquímicamente puras pueden ser también derivadas de las correspondientes formas estereoquímicamente isoméricas de los materiales de partida apropiados, con la condición de que la reacción ocurra estereoespecíficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizará por métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos se emplearán ventajosamente empleando materiales de partida enantioméricamente puros. Los compuestos de fórmula (I), las sales farmacéuticamente aceptables y las formas estereoisoméricas de los mismos, poseen actividad antihelmíntica favorable. Por lo tanto, los presentes compuestos de fórmula (I) son útiles como medicamentos en el tratamiento, control y prevención de infecciones endo- y ectoparasíticas en animales de sangre caliente. Los endo- y ectoparásitos incluyen Nematohelmintos tales como as Amidostomum, Ancylostoma, Angiostrongylus, Anisakis, Ascaris, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Cyathostomum, Cylicocyclus, Dictyocaulus (lungworm), Dipetalonema, Dirofilaria (heartworm), Dracunculus, Elaeophora, Gaigeña, Globocephalus urosubulatu, Haemonchus, Heterakis, Hyostrongylus, Metastrongylus (lungworm), Muellerius (lungworm), Necator ame canus, Nematodirus, Neoascaris, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, Protostrongylus (lungworm), Setaria, Stephanofila a, Strongyloides, Strongylus, Syngamus, Teladorsagia, Toxascaris, Toxocara, Trichinella, Thchostrongylus, Trichuris, Uncinaria stenocephala, y Wuchereria bancrofti. Animales de sangre caliente tal como se usa a través de todo este texto incluye tanto animales humanos como no humanos, tales como animales de corral (por ejemplo ovinos, ganado, porcinos, caprinos o equinos), animales domésticos (por ejemplo perros, gatos o cobayos) así como también animales salvajes mantenidos en cautividad y aves (por ejemplo aves de corral). En vista de la utilidad de los compuestos de fórmula (I), se concluye que la presente invención provee también un método de tratamiento, control y prevención de infecciones endo- y ecto-parasíticas en animales de sangre caliente. Este método comprende administrar a un animal de sangre caliente que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I). El término "cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I)" tal como se usa aquí, significa que la cantidad de compuesto de fórmula (I) que provee la respuesta biológica o medicinal en el animal de sangre caliente que está siendo tratado por el médico o veterinario, incluye aliviar los síntomas del trastorno que se está tratando. La cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse usando técnicas de optimización rutinarias y depende del trastorno particular que se trata, del estado del animal de sangre caliente, de la vía de administración, de la formulación, y de la opinión del clínico y otros factores evidentes para los expertos en la materia.

Puede lograrse una cantidad terapéuticamente eficaz mediante dosis múltiples. Adicionalmente la presente invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I). Para su uso en animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos, los compuestos de fórmula (I) pueden administrarse solos, pero en general se administrarán en mezcla con un diluyente o portador farmacéuticamente o veterinariamente aceptables, con respecto a la vía de administración propuesta y la práctica farmacéutica convencional. Por ejemplo, pueden administrarse oralmente, incluyendo sublingualmente, en forma de tabletas que contienen excipientes tales como almidón o lactosa, o en cápsulas u óvulos, solos o en mezcla con excipientes, o en forma de elixires, soluciones o suspensiones que contienen agentes saborizantes o colorantes. Los compuestos de fórmula (I) podrían incorporarse a cápsulas, tabletas o bolos para llegar al colon o duodeno a través de disolución demorada de dichas cápsulas, tabletas o bolos durante un tiempo particular, después de la administración oral. Los compuestos de fórmula (I) pueden inyectarse parenteralmente, por ejemplo por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea. Para administración parenteral, se usarán mejor en forma de una solución o suspensión acuosa estéril, que puede contener otras substancias, por ejemplo suficiente sal o glucosa para que la solución sea isotónica con la sangre. Los compuestos de fórmula (I) pueden administrarse tópicamente, en forma de cremas estériles, geles, formulaciones de fluidos de unción continua o puntual, suspensiones, lociones, ungüentos, polvos espolvoreables, rocíos, fármacos incorporados a los vendajes o a parches para la piel. Por ejemplo los compuestos de fórmula (I) pueden incorporarse a una crema que consiste en una emulsión oleosa de polietilen glicoles o parafina líquida, o bien pueden incorporarse a un ungüento que consiste en una base parafinada blanda de cera blanca, o un hidrogel con derivados de celulosa o poliacrilatos u otros modificadores de viscosidad o como un polvo seco o un rocío líquido o aerosol con butano/propano, propelentes de HFA o CFC, o en apositos que incorporan el fármaco ya sea con un aposito de gasa, con apositos de gasa impregnados con parafina blanda blanca o polietilen glicoles o con apositos con hidrogel, hidrocoloide, alginato o película. Los compuestos de fórmula (I) podrían también administrarse intra-ocularmente como gotas para los ojos con buffers apropiados, modificadores de viscosidad (por ejemplo derivados de celulosa), preservadores (por ejemplo cloruro de benzalconio (BZK) y agentes para ajustar la tonicidad (por ejemplo cloruro de sodio). Dichas técnicas de formulación son bien conocidas en el arte. Todas dichas formulaciones, pueden contener también estabilizadores y preservadores apropiados. Para uso veterinario, los compuestos pueden administrarse como una formulación convenientemente aceptable de acuerdo con la práctica veterinaria normal y el veterinario determinará el régimen de dosificación y la vía de administración más apropiados para un animal particular.

Para aplicación tópica, pueden usarse baños de inmersión, rocío, polvos, polvillos, fluidos de unción dorsal continua o unción dorsal puntual, concentrado emulsionable, fluido a chorros, champúes, collares, marbetes o arneses. Dichas formulaciones se preparan de manera convencional de acuerdo con la práctica veterinaria y farmacéutica convencional. Por lo tanto pueden prepararse cápsulas, bolos o tabletas, mezclando el ingrediente activo con un diluyente o portador finamente dividido apropiado, que contiene adicionalmente un agente desintegrante y/o un aglutinante tal como almidón, lactosa, talco o estearato de magnesio. Puede prepararse una formulación para baño, dispersando los ingredientes activos en una solución acuosa conjuntamente con agentes dispersantes o humectantes y pueden prepararse formulaciones inyectables en forma de una solución o emulsión estéril. Pueden prepararse formulaciones para unción dorsal continua o para unción dorsal puntual disolviendo los ingredientes activos en un vehículo portador líquido aceptable, tal como butil digol, parafina líquida o éster no volátil con o sin adición de un componente volátil tal como isopropanol. Alternativamente, pueden prepararse formulaciones para unción dorsal continua, para unción dorsal puntual o en aeorosol, mediante encapsulación para dejar un residuo de agente activo sobre la superficie del animal. Estas formulaciones variarán con respecto al peso del compuesto activo, dependiendo de la especie de animal huésped que debe tratarse, de la gravedad y del tipo de infección y el peso corporal del huésped. Las formulaciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) pueden administrarse en forma continua, particularmente para profilaxis, mediante métodos conocidos. Como alternativa, las combinaciones pueden administrarse en la comida del animal y con tal propósito, puede prepararse un aditivo o premezcla alimenticia concentrada, para mezclarla con la comida normal del animal. Para uso humano, los compuestos de fórmula (I) se administran en forma de una formulación farmacéutica aceptable de acuerdo con la práctica médica normal. Los compuestos de fórmula (I) pueden usarse conjuntamente con otros agentes antihelmínticos o antiparasíticos para ampliar el espectro de acción o para prevenir la acumulación de resistencia. Otros agentes antihelmínticos son por ejemplo avermectinas y milbemicinas tales como abamectina, cidectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina, milbemicina, milbemicina D, milbemicina oxima, moxidectina, selamectina y similares; bencimidazoles tales como albendazol, cambendazol, fenbendazol, flubendazol, mebendazol, oxfendazol, parbendazol, oxibendazol y ciclobendazol; probencimidazoles tales como febantel, tiofanato y netobimina; salicilanilidas tales como closantel y niclosamida; imidazotiazoles tales como butamisol y levamisol; tetrahidropirimidinas tales como morantel, pamoato de pirantel; hexahidro pirazino isoquinolinas tales como praziquantel; y macrolidas producidas por fermentación de Saccharopolyspora spinosa tal espinosina A, espinosina D o spinosad.

Los expertos en el tratamiento de helmintiasis determinarán fácilmente, la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) a partir de los resultados de ensayo que se presentan a continuación. En general, se ha contemplado que una dosis terapéuticamente eficaz será de aproximadamente 0.1 mg/kg hasta aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente de desde aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal de una animal de sangre caliente a ser tratado. Puede ser apropiado administrar la dosis terapéuticamente eficaz en forma de dos o más sub-dosis a intervalos apropiados durante todo el día. La dosis y frecuencia exacta de administración depende del compuesto particular de fórmula (I) que se emplea, del trastorno particular que se está tratando, de la gravedad del trastorno que se está tratando, de la edad, el peso y el estado físico general del animal de sangre caliente particular, así como también de cualquier otra medicación (incluyendo los agentes adicionales antihelmínticos o antiparasíticos antes mencionados), que el animal de sangre caliente pudiera estar tomando, tal como es bien conocido por los expertos en la materia. Además dicha cantidad diaria eficaz puede disminuirse o incrementarse, dependiendo de la respuesta del animal tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico o veterinario que prescribe los compuestos de la presente invención. Las cantidades diarias eficaces mencionadas anteriormente, son por lo tanto, solamente recomendaciones generales.

Parte experimental A. Síntesis de los intermediarios EJEMPLO A.

Preparación del intermediario (1 ) Una solución de ácido (+)-(R)-tetrahidro-2-furancarboxílico (6.65 ml) en diclorometano (250 ml) se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente y luego se agregaron dicloruro de etandioilo (12.1 ml) y dimetilformamida anhidra (3 gotas) La mezcla de reacción se agitó durante 2.5 horas y luego el solvente se evaporó y co-evaporó dos veces con tolueno, lo cual proporcionó cloruro de (2R)-tetrahidro-2-furancarbonilo (intermediario 1 ). De manera análoga, se preparó cloruro de tetrahidro-2-furancarbonilo racémico a partir del ácido tetrahidro-2-furancarboxílico comercialmente obtenible y se preparó cloruro de (2S)-tetrahidro-2-furancarbonilo a partir del ácido (-)-(S)-tetrahidro-2-furancarboxílico comercialmente obtenible.

EJEMPLO A.2 a) Preparación del intermediario (2) Una suspensión de 4,5-dihidrotiazolamina (1.95 mol) en 2-propanona (1000 ml) se agitó en un frasco de 4 cuellos con agitador mecánico, termómetro y embudo de goteo. Luego se agregó por goteo una solución de 2-bromo-1-(3-nitrofenil)etanona (1.93 mol) en 2-propanona (2500 ml) mientras se enfriaba en un baño de hielo para mantener la temperatura por debajo de 20°C. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. El precipitado resultante se separó por filtración, se lavó con 2-propanona y se secó, lo cual proporcionó 640 g del intermediario (2). b) Preparación del intermediario (3) Una suspensión del intermediario (2) (1.85 mol) en etanol (3000 ml) se enfrió en un baño de hielo. Se agregó, en porciones, borohidruro de sodio (2.78 moles) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. Se agregaron una solución saturada de NaHCO3 (1000 ml) y agua (500 ml) y después de enfriar se agregó diclorometano. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora y se extrajo la capa acuosa con diclorometano (4 x 1000 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron, se separaron por filtración y el solvente se evaporó, lo cual proporcionó 469 g del intermediario (3). c) Preparación del intermediario (4) Una suspensión del intermediario (3) (0.34 mol) en 1 ,2-dicloroetano (3000 ml) se agitó a temperatura ambiente y se agregó una solución de cloruro de tionilo (0.68 mol) en 1 ,2-dicloroetano (150 ml) en el término de 6 horas. La mezcla de reacción se agitó durante la noche y se agregó cuidadosamente NaHCO3 (1500 ml). La mezcla de reacción se calentó a 40°C, se agitó durante 6 horas y luego se extrajo la capa acuosa. La capa orgánica se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (4 x 1000 ml), se secó, se separó por filtración y el solvente se evaporó. El residuo obtenido se disolvió en CH2CI2/CH3OH (95/5; 2000 ml) y se agitó con gel de sílice (250 g). El gel de sílice se separó por filtración. El filtrado se separó nuevamente sobre gel de sílice (1000 g) y el solvente se evaporó, lo cual proporcionó 253 g del intermediario (4). ^ SN d) Preparación del / (S N» intermediario (5) 02N El intermediario (4) se separó en sus enantiómeros por cromatografía en columna quiral sobre Chiralcel AS 1000Á 20 µm (eluyente: etanol/heptano 30/70). Se recogieron las fracciones deseadas que comprendían el (S)-enatiómero y el solvente se evaporó, lo cual proporcionó (6S)-(3-nitro-fenil)-2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol (interm. 5). Las fracciones que comprendían el (R)-enantiómero fueron también recogidas y después de evaporación del solvente, se obtuvo (6R)-(3-nitro-fenil)-2, 3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1 -b]tiazol (interm. 6).

EJEMPLO A3 Preparación del intermediario (7) a) Una solución del intermediario (5) (0.15 mol) en acetato de etilo, se agitó a temperatura ambiente. Se agregó por goteo una solución 1 M de ácido clorhídrico (0.199 mol) en éter dietílico (190 ml). El precipitado resultante se separó por filtración y se secó a baja presión, lo cual proporcionó 39.4 g de la sal de ácido clorhídrico del intermediario (5). b) Se agregaron agua (105 ml) y luego metanol (35 ml) a una mezcla de la sal de ácido clorhídrico del intermediario (5) (0.0122 mol), hierro en polvo (0.061 mol) y cloruro de amonio (0.061 mol). La mezcla de reacción se agitó y se calentó a 70°C durante 30 minutos y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se agregó HCl 0.1 N (14 ml) y la mezcla resultante se filtró sobre Kieselguhr. El Kieselguhr se lavó con HCl 0.01 N (175 ml) y con diclorometano (175 ml). El filtrado obtenido se agitó mientras se agregaban una solución saturada de NaHCO3 (175 ml) y NaHCO3 (10 g). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (4 x 175 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron, se separaron por filtración, y el solvente se evaporó, lo cual proporcionó 2.61 g del intermediario (7). Usando un procedimiento análogo, pero a partir del intermediario (4), se preparó 3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenilamina como intermediario (8). intermediario (8) EJEMPLO A.4 Preparación del intermediario (9) A -60 °C, una solución de sulfóxido de dimetilo (36.5 ml, 0.514 mol) en diclorometano (700 ml) se agregó por goteo a una solución 2M de cloruro de oxalilo (26.9 ml, 0.308 mol) en diclorometano. La mezcla se agitó durante 30 minutos y luego se agregó, por goteo, una solución de alcohol tetrahidrofurfurílico (25 ml, 0.257 mol) en diclorometano (100 ml). La mezcla se agitó durante 20 minutos y luego se agregó lentamente trietilamina (181 ml, 1.29 mol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se separó por filtración y el residuo se lavó con diclorometano (250 ml). Las capas combinadas de diclorometano se lavaron con agua (150 ml), se secaron y se evaporaron cuidadosamente a 25°C. Al residuo se agregó éter dietílico, el precipitado se separó por filtración y se lavó con éter dietílico. Las capas orgánicas combinadas se evaporaron cuidadosamente. El producto se purificó por destilación de bulbo a bulbo (75°C, 20 mbares) lo cual proporcionó 12.6 gramos del intermediario (9).

B. Preparación de los compuestos finales EJEMPLO B.1 Preparación del compuesto (l ) Una solución 4M de ácido clorhídrico en dioxano (16.43 ml) se agregó por goteo a una solución del intermediario (7) (0.066 mol) en acetonitrilo anhidro (500 ml). La mezcla resultante se enfrió en un baño de hielo. Una mezcla del intermediario (1 ) (0.069 mol) en acetonitrilo (100 ml) se agregó por goteo y la mezcla de reacción se dejó llegar a la temperatura ambiente durante la noche. El acetonitrilo se evaporó. Se agregó una solución saturada de NaHCO3 (500 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 x 500 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron, se separaron por filtración y el solvente se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna evaporativa (eluyente: CH2CI2/CH3OH 95/5) sobre gel de sílice. Las fracciones del producto se recogieron y el solvente se evaporó, lo cual proporcionó 12.23 g del compuesto (1 ) (pf. 42-57°C) (rotación óptica específica OR = -3.77° (589 nm, c = 0.4636 p/v %, metanol, 20°C)). Usando el procedimiento señalado anteriormente, se prepararon también los compuestos (2), (3) y (4) usando respectivamente una combinación del intermediario (8) y cloruro de tetrahidro-2-furancarbonilo racémico, o el intermediario (7) y cloruro de tetrahidro-2-furancarbonilo racémico, o el intermediario (7) y cloruro de (2S)-tetrahidro-2-furancarbonilo, como materiales de partida. compuesto (4) compuesto (3) EJEMPLO B.2 Preparación del compuesto (A) HN \ ,o- O V El intermediario (7) (470 mg) se disolvió en acetonitrilo anhidro (40 ml). Se agregó por goteo una solución de HCl 4 M en dioxano (0.538 ml). La mezcla se enfrió usando un baño de hielo y se agregó por goteo una solución de cloruro de 2-furancarbonilo (0.213 ml) en acetonitrilo (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a 40°C durante la noche. Se agregó a la mezcla de reacción una solución saturada acuosa de NaHC03 (150 ml). La mezcla de reacción se extrajo tres veces con diclorometano (150 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y el solvente se extrajo por evaporación. El residuo se aisló y purificó usando cromatografía de capa delgada preparativa, con una mezcla de diclorometano/ metanol (95:5) como eluyente, lo cual proporcionó 210 mg del compuesto (A) (pf. 77°C). Este compuesto (A) se conoce por la US-4, 014,892 como compuesto (163).

EJEMPLO B.3 Preparación del compuesto (B) Una solución del intermediario (7) (550 mg) se agitó en acetonitnlo seco (30 ml) y se agrego NaHCO3 (181 mg) Se agregó una solución del intermediario (9) en acetonitnlo seco (15 ml) y después de 15 minutos se agregó una cantidad de NaBH(OAc)3 (547 mg) en forma de un sólido Después de 2 horas la TLC reveló que la reacción estaba completa Se agregó NaHCO3 saturado acuoso y el producto se extrajo dos veces en acetato de etilo Las capas de acetato de etilo combinadas se secaron y evaporaron El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna sobre sílice usando una mezcla de diclorometano y metanol en la siguiente relación y tiempos de elución 10 minutos 3% metanol; 20 minutos 3% metanol a 5% de metanol, 20 minutos 5% metanol con un régimen de flujo de 30 ml/minuto, lo cual proporcionó 237 mg del compuesto (B) Este compuesto (B) se conoce por la US-4, 014,892 como compuesto (163) y por la GB-1 ,365,515 como compuesto (81 ) C. EJEMPLOS FARMACOLÓGICOS C.1. Estudio de la eficacia de los antihelmínticos en un modelo in vivo de H. contortusl Meriones unguiculatus (jirds, del género de los jerbos) La eficacia antihelmíntica de los compuestos de la presente invención se evaluó en un modelo in vivo, usando Meriones unguiculatus no medicados, inoculados tres veces con aproximadamente 300 larvas infectivas ex élitro de Haemonchus contortus (cepa multirresistente), tratados oralmente con un compuesto de ensayo, 11 días después de su primera infección con larvas de H. contortus y sometidos a necropsia a los 14 días, para contar la cantidad de vermes de H. contortus recuperados. La eficacia antihelmíntica de los compuestos conocidos de la técnica anterior (A) y (B) fue también evaluada, usando el mismo modelo.

Animales Se usaron hembras de Meriones unguiculatus CRW, de una edad comprendida entre 28 y 35 días y con un peso de 30-35 g (Charles River, Sulzfeld, Alemania). Cada uno de tres Meriones unguiculatus fue asignado, al azar, a la llegada, a jaulas de polisulfona translúcida, individualmente ventiladas (48 x 37.5 x 21 cm) que contenían doladuras de madera. Se les suministró comida para roedores comercial, y agua ad libitum. Después de un período de aclimatación de cuatro días, los Meriones unguiculatus fueron infectados artificialmente.

Parásito Se usó una cepa de PolyRes de Haemonchus contortus (resistente contra levamisol, mebendazol, ivermectina y closantel). Esta cepa ha sido mantenida en corderos macho donantes, infectados artificialmente. Se recogieron, en bolsas fecales, heces individuales que contenían huevos de Haemonchus. Se disgregaron las bolas fecales, se mezclaron con carbón vegetal, se humedecieron y se colocaron en una incubadora para embrionación a 28°C y una humedad relativa de 95%. Siete días más tarde esta mezcla se colocó en embudos Baermann y se recogieron larvas en élitro de tercer estadio, después de 12 horas. Estas larvas fueron enjuagadas con agua para limpiarlas y desinfectarlas con una solución de formalina al 2%. Dichas larvas pueden usarse inmediatamente para una infección artificial o bien pueden almacenarse en el congelador a aproximadamente 8°C por un período máximo de 6 meses. Las larvas infectivas (< 6 meses de vida) fueron despojadas del élitro mediante enjuague con 3.3 vol. % de una solución de hipoclorito de sodio comercial durante 10 minutos, se filtraron a través de un embudo Buchner, se enjuagaron con agua, se concentraron en un embudo Baermann, y se recogieron después de 2 horas. Las larvas despojadas de élitro, preparadas de esta manera, pueden usarse para la subsiguiente infección de Meriones unguiculatus o pueden dejarse guardados por periodos prolongados, mediante enfriamiento en gas sobre nitrógeno líquido durante 1 hora y pueden almacenarse en nitrógeno liquido a -196°C.

Infecciones Todos los Meriones unguiculatus fueron inoculados oralmente con aproximadamente 300 larvas infectivas ex élitro de H. contortus por dosis en tres días consecutivos. Las inoculaciones fueron administradas usando una jeringa de 1 ml provista de una aguja dosificadora 18 G de punta roma.

Tratamientos Once días después de su primera infección, los Meriones unguiculatus fueron tratados con los compuestos de ensayo, en suspensión o disolución en 0.4 ml de DMSO, y la dosis a ensayar, fue administrada en un volumen de 0.1 ml/50 g de peso corporal a través de una jeringa de 1 ml provista de aguja dosificadora 18 G de punta roma. Los animales e control, incluidos en cada experimento, permanecieron sin tratamiento. Se usaron clorhidrato de levamisol, mebendazol, ivermectina y closantel en diferentes experimentos de valoración de dosis para validar el modelo.

Necropsia Todos los Meriones unguiculatus fueron mantenidos en ayunas durante 20 horas antes de la necropsia y fueron muertos a los 14 días después de la primera infección mediante inhalación con CO2. Para la recuperación de los vermes, se extrajeron sus estómagos, se abrieron longitudinalmente y se incubaron en un recipiente con 20 ml de fluido de digestión (10 g de pepsina + 30 ml de ácido clorhídrico concentrado) a 37°C durante 3 horas. Después de la digestión, el contenido del estómago se pasó a través de un colador de té, el fluido de pasaje fue atrapado en un tamiz (32 µm) y los vermes se recuperaron con agua corriente. Los frascos se almacenaron en el congelador para el recuento subsiguiente.

Examen y eficacia porcentual El contenido de cada recipiente se mezcló, se vertió sobre una placa de 6 receptáculos en 6 alícuotas, y se contaron los vermes bajo un microscopio invertido. Se determinó la eficacia porcentual para cada compuesto de ensayo, y los resultados se resumen en el Cuadro 1 siguiente.

CUADRO 1 : Datos de la eficacia en el aclaramiento de la cepa PolyRes de Haemonchus contortus de Meriones unguiculatus después de tratamiento oral con un compuesto de ensayo Dosis mpk : dosis del compuesto de ensayo en mg por kg de peso corporal No. de Animales: cantidad de animales de ensayo Med. W. b.: carga media de vermes Eficacia porcentual = ({(número promedio de vermes recuperados del grupo de control)- (número promedio de vermes recuperados del grupo tratado)} dividido por (número promedio de vermes recuperados del grupo de control)) x 100 Tal como puede observarse en el Cuadro 1 , ambos compuestos (1 ) y (4), tienen una eficacia mejor demostrada, que los compuestos de la técnica anterior (A) y (B).

Claims (8)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula (I)

N-^-S HN O .. ? I 0 ° sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y sus formas estereoquímicamente isoméricas. 2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque en el cual la posición 6 de la porción 2,3,5,6-15 tetrahidro-imidazo[2,1 -b]tiazol tiene la configuración (S).

U»- I ) 0 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque en el cual el compuesto es (6S)-[3-(2,3,5,6- tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-fenil]-amida de ácido (2R)-tetrahidrofuran- 2-carboxílico y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque en el cual el compuesto es (6S)-[3-(2,3,5,6-tetrahidro-imidazo[2,1-b]tiazol-6-¡l)-fenil]-amida de ácido (2S)-tetrahidrofuran-2-carboxílico y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.

5. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente activa de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la manufactura de un medicamento útil para el tratamiento, control y prevención de infecciones endo- y ectoparasíticas.

7. Una composición que comprende como primer ingrediente activo, un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y como segundo ingrediente activo, otro agente antihelmíntico o antiparasítico.

8. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) en el cual un intermediario de fórmula (V) se hace reaccionar con un intermediario de fórmula (IV) en un solvente de reacción apropiado inerte o /=v *^,--S J p ' \ - — Cl (O ¥ ll / o H,N o si se desea; un compuesto de fórmula (I) se convierte a una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, o a la inversa, una sal de adición de ácido de un compuesto de fórmula (I), se convierte a una forma de base libre con álcali; y si se desea, se preparan formas estereoquímicamente isoméricas del mismo.