EA011024B1

EA011024B1 - Антигельминтные производные имидазола и тиазола

Info

Publication number: EA011024B1
Application number: EA200701601A
Authority: EA
Inventors: Ян Херес; Поль Адриан Ян Жанссен; Паулус Йоаннес Леви; Кэтлин Мари Жан Элис Вламинк; Пьер Йозеф Гектор Валери Оттеваре; Оскар Франц Йозеф Ванпарийс
Original assignee: Янссен Фармацевтика Н.В.
Priority date: 2005-01-28
Filing date: 2006-01-26
Publication date: 2008-12-30
Also published as: CN101107255A; US20080287511A1; NO20074371L; EA200701601A1; BRPI0606869A2; AU2006208712A1; EP1844055A1; IL184862A0; CA2589221A1; WO2006079642A1; NZ555541A; PA8661101A1; KR20070106990A; MX2007009168A; TW200640933A; AR052365A1; JP2008528550A

Abstract

Настоящее изобретение относится к новому антигельминтному соединению [3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,l-b]тиазол-6-ил)фенил]амида тетрагидрофуран-2-карбоновой кислоты и его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли и их стереохимическим изомерным формам, а также к фармацевтической композиции, содержащей указанное новое соединение, способам получения указанного соединения и композиции и использованию их в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения, борьбы и предотвращения эндо- и эктопаразитарных инфекций у теплокровных животных.

Description

Настоящее изобретение относится к новым антигельминтным производным тетрамизола и их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям, композициям, содержащим указанные новые соединения, способам получения указанных соединений и композиций и использованию их в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения, борьбы и предотвращения эндо- и эктопаразитарных инфекций у теплокровных животных.

Тетрамизол и левамизол представляют собой очень хорошо известные антигельминтные средства, имеющие нижеследующую структуру:

(Тетрамизол представляет собой рацемическую άΐ-форму; левамизол является энантиомерной чистой 1-формой).

Левамизол является одним из наиболее распространенных антигельминтных средств, которое широко использовали для борьбы с паразитарными нематодами у сельскохозяйственных животных, в частности у овец и крупного рогатого скота. Однако развитие нематод, резистентных к антигельминтным средствам, превратилось в главную проблему сельскохозяйственных животных, в частности, это относится к нематоде Наешопсйик соп1ог1н5. Более того, в полевых условиях были обнаружены мультирезистентные штаммы, у которых развилась невосприимчивость к широко используемым антигельминтным средствам, таким как левамизол, мебендазол и ивермектин. Следовательно, существует необходимость в нахождении новых антигельминтных средств, обладающих антигельминтной активностью по отношению к резистентным левамизолу и мультирезистентным нематодам.

Другие тетрамизоловые антигельминтные средства были описаны, например, в И8-4014892, примером которых служат [3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6-ил)фенил]амид фуран-2-карбоновой кислоты, описанный как соединение (163) и (тетрагидрофуран-2-илметил)-[3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6-ил)фенил]амин, описанный как соединение (110). Последнее соединение описано также в ОБ-1365515 как соединение (81).

Настоящее изобретение относится к новым соединениям формулы (I)

их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям и их стереохимически изомерным формам.

Как показано в фармакологическом примере С.1, соединения по настоящему изобретению неожиданно обнаруживают большую антигельминтную активность по отношению к мультирезистентному штамму Наешопсйик соп1ог1н5 (резистентному к левамизолу, мебендазолу, ивермектину и клозантелу) по сравнению с известными в данной области соединениями [3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6ил)фенил]амида фуран-2-карбоновой кислоты (обозначаемого в описании как соединение (А)) и (тетрагидрофуран-2-илметил)-[3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6-ил)фенил]амина (в описании обозначаемого как соединение (В)).

Подразумевают, что упомянутые выше фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли содержат терапевтически активные нетоксичные формы кислотно-аддитивной соли, которые соединения формулы (I) способны образовывать. Эти фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли могут быть удобно получены путем обработки основной формы соответствующей кислотой. Подходящие кислоты включают в себя, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например хлористо-водородная или бромисто-водородная кислоты, серная, азотная, фосфорная кислоты и тому подобное; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая (т. е. этандиовая), малоновая, янтарная (т. е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфокислота, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты.

И, наоборот, указанные формы соли обработкой соответствующим основанием могут быть превращены в форму свободного основания.

Термин стереохимически изомерные формы, используемый ранее, определяет все возможные изомерные формы, которые соединения формулы (I) могут иметь. Пока не оговорено или не указано иначе, химическое обозначение соединений формулы (I) означает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм; указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Более конкретно, стереогенные центры могут иметь В- или 8-конфигурацию. Соединения формулы (I) имеют два хиральных атома углерода, обозначаемых звездочкой на структуре, приведенной

- 1 011024 ниже,

что дает всего 4 различных стереоизомера. Очевидно, что объем данного изобретения включает в себя все 4 отдельные стереохимически изомерные формы соединений формулы (I) и любую возможную их смесь.

Абсолютную стереохимическую конфигурацию соединений формулы (I) и промежуточных соединений, используемых при их получении, могут легко определить специалисты в данной области, используя хорошо известные методы, такие как, например, дифракцию рентгеновских лучей.

Более того, некоторые соединения формулы (I) и некоторые из промежуточных продуктов, применяемых при их получении, могут обнаруживать полиморфизм. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любые полиморфные формы, обладающие свойствами, пригодными при лечении состояний, обозначенных выше.

Отдельной группой соединений являются соединения формулы (Ι-а), которые определяют как соединения формулы (I), имеющие в 2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазольном фрагменте (8)конфигурацию в положении 6.

Предпочтительным соединением является (68)-[3-(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6-ил)фенил]амид (2К)-тетрагидрофуран-2-карбоновой кислоты.

Соединения формулы (I), вообще говоря, могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (V), растворенного в растворе диоксана, подкисленном НС1, с промежуточным соединением формулы (IV) в пригодном реакционно-инертном растворителе, таком как ацетонитрил.

промежуточный промежуточный продукт (V) продукт (IV)

Промежуточные соединения формулы (IV) могут быть получены, как описано ниже. Коммерчески доступное исходное соединение 2-бром-1-(3-нитрофенил)этанон подвергают взаимодействию с 4,5дигидротиазоламином и полученный промежуточный продукт (I) затем восстанавливают соответствующим восстановителем, таким как боргидрид натрия в пригодном растворителе, таком как этанол, получая промежуточный продукт (II). Промежуточный продукт (II) затем обрабатывают тионилхлоридом в реакционно-инертном растворителе, таком как дихлорэтан, в результате чего образуется промежуточный цикл 2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазолила (III). Промежуточный продукт (III) сначала превращают в его аддитивную соль НС1, перед восстановлением его нитрогруппы до аминогруппы, используя восстановители, известные в данной области техники, такие как порошок железа и водный раствор ИН₄С1 или 8пС1₂, в результате чего получают промежуточное соединение (IV).

- 2 011024

Промежуточное соединение (V) получают превращением тетрагидро-2-фуранкарбоновой кислоты в ее ацилхлоридный аналог посредством взаимодействия с оксалилхлоридом. Промежуточный продукт (V) также может быть получен как его стереоизомерно чистый (К)- или (8)-энантиомер, исходя, соответственно, из (К)- или (§)-тетрагидро-2-фуранкарбоновой кислоты.

Промежуточное соединение формулы (III) может быть разделено на (+)- или (-)-стереоизомеры с применением известных процедур разделения в данной области техники, таких как жидкостная хроматография, при использовании хиральной стационарной фазы.

Соединения формулы (I), полученные описанными выше способами, могут быть синтезированы в виде рацемических смесей энантиомеров, которые могут быть отделены друг от друга, следуя известным в данной области методикам разделения. Эти соединения формулы (I), которые получают в виде рацемической смеси, могут быть превращены в формы соответствующей диастереомерной соли по реакции с соответствующей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные формы соли затем разделяют, например, путем избирательной или дробной кристаллизации и энантиомеры отделяют с помощью щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает жидкостную хроматографию, при использовании хиральной стационарной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы можно также получать из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм пригодных исходных веществ, при условии, что реакция протекает стереоспецифично. Когда необходим конкретный стереоизомер, предпочтительно, если указанное соединение будет синтезировано посредством стереоспецифичного способа получения. В этих способах преимущественно используют энантиомерно чистые исходные вещества.

Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и стереоизомерные формы обладают предпочтительной антигельминтной активностью. Поэтому настоящие соединения формулы (I) являются применимыми в качестве лекарственного средства при лечении, контролировании и предотвращении эндо- и эктопаразитарных инфекций у теплокровных животных.

Эндо- и эктопаразиты включают в себя нематгельминты, такие как Ат1бо81отиш, Аису1о81ота, Апщо51гопду1и5. АпГакГ. А^сагГ. Вгид1а, Випойотит, СарШапа, СйаЬегйа, Соорспа. Суа1йо81отит, СуНсосус1и8, Э|с1уосаи1и5 (гельминт, паразитирующий в легких), П1ре1а1опета, ОйоГПапа (гельминт, паразитирующий в сердце), Пгасипси1и8, Е1аеорйота, Сафена, С1оЬосерйа1и8 иго8иЬи1а1и, Наетопсйш, Не1егакщ, Нуо81гопду1и8, Ме1а81гопду1и8 (гельминт, паразитирующий в легких), Мие11егш8 (гельминт, паразитирующий в легких), №са!от атепсаиш, №та1об1ти8, Ыеоаксапк, Оекорйадо^отит, Опсйосегса, О^еПаща,

- 3 011024

Охушщ, Рагаксапк, Рго1о81гоиду1и8 (гельминт, паразитирующий в легких), 8е1апа. §1ерйапой1апа, 81гоиду1снбс5. §1гоиду1и8, Зуидатш, Те1абог5аща. Тохаксапк, Тохосага, 1лсЫие11а, Тпс1ю51гопду1и5. Тпс1шп5. Иисшапа 81еиосерйа1а, и ХУисйегепа ЬаисгоШ.

Термин «теплокровные животные», используемый в тексте, включает в себя человека и других животных, не являющихся человеком, таких как сельскохозяйственные животные (например, овцы, крупный рогатый скот, свиньи, козы или лошади), домашние животные (например, собаки, кошки или морские свинки), а также дикие животные, содержащиеся в неволе, и птицы (например, домашние птицы).

Из эффективности соединений формулы (I) следует, что настоящее изобретение предлагает способ лечения, контролирования и предотвращения эндо- и эктопаразитарных инфекций у теплокровных животных. Этот способ включает введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) теплокровному животному, в нем нуждающемуся.

Термин терапевтически эффективное количество соединения формулы (I), используемый здесь, означает, количество соединения формулы (I), выявляющее биологическую или медицинскую ответную реакцию теплокровного животного, которой добиваются врач или ветеринар и которая включает в себя облегчение симптомов состояния, подвергаемого лечению.

Терапевтически эффективное количество может быть определено, используя стандартную процедуру оптимизирования, и зависит от конкретного состояния, подвергаемого лечению, состояния теплокровного животного, пути введения препарата, мнения практикующего врача и других факторов, очевидных для специалиста в данной области. Терапевтически эффективное количество может быть достигнуто путем многократного дозирования.

Дополнительно настоящее изобретение предлагает фармацевтические композиции, содержащие по крайней мере один фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения формулы (I).

При использовании у теплокровных животных, включая людей, соединения формулы (I) могут быть введены сами по себе, но обычно их вводят в смеси с фармацевтически- или ветеринарноприемлемым разбавителем или носителем, выбираемым с учетом заданного пути введения и общепринятой фармацевтической практики. Например, они могут быть введены орально, включая сублингвальное введение, в виде таблеток, содержащих такие наполнители, как крахмал или лактоза, или в виде капсул или овулей или по-отдельности, или в смеси с наполнителями, или в виде эликсиров, растворов или суспензий, содержащих корригенты, изменяющие вкус и запах, или красители. Соединения формулы (I) могли бы быть включены в капсулы, таблетки или шарики, при выборе мишенью толстой кишки или двенадцатиперстной кишки, при замедленном растворения указанных капсул, таблеток или шариков в течение конкретного времени после орального введения. Соединения формулы (I) могут быть инъецированы парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. При парентеральном введении лучше их использовать в виде стерильного водного раствора или суспензии, которые могут содержать другие вещества, например достаточное количество соли или глюкозы, чтобы получить раствор изотонический по отношению к крови. Соединения формулы (I) могут быть введены местно, в виде стерильных кремов, гелей, орошающих препаратов или препаратов, наносимых точно на определенное место, суспензий, лосьонов, мазей, антисептических порошков, аэрозолей, повязок, содержащих лекарственное средство, или через наклеенный кожный пластырь. Например, соединения формулы (I) могут быть включены в крем, состоящий из водной или маслянистой эмульсии полиэтиленгликолей или жидкого парафина; или они могут быть введены в мазь, состоящую из белой пластичной полутвердой парафиновой основы, или в виде гидрогеля с целлюлозой или производными полиакрилата или другими модификаторами вязкости; или в виде сухого порошка или жидкого аэрозоля или аэрозоля с бутан/пропановым, ΗΤΆ или СТС (хлорфторуглеродным) пропеллентами; или в виде повязок, пропитанных лекарственным средством, или тюлевых повязок с белым полутвердым парафином, или в виде пропитанных полиэтиленгликолями марлевых повязок или гидрогелевых, гидроколлоидных, альгинатных или пленочных повязок. Соединения формулы (I) также могли бы быть введены внутриглазным путем как глазные капли с соответствующими буферными растворами, модификаторами вязкости (например, производными целлюлозы), консервирующими средствами (например, бензалконийхлоридом (ΒΖΚ)) и агентами для регулирования вязкости (например, хлоридом натрия). Такая процедура приготовления препарата хорошо известна в данной области техники. Все такие препараты также могут содержать соответствующие стабилизирующие и консервирующие средства.

При ветеринарном использовании соединения могут быть введены в виде соответственно приемлемого препарата, согласно обычной ветеринарной практике, и ветеринар будет определять режим дозирования и путь введения, который будет наиболее подходящим для конкретного животного.

Для местного нанесения могут быть использованы погружение, аэрозоль, порошок, дуст, орошение, нанесение на определенное место, эмульгирующийся концентрат, впрыскивание текучей среды, шампуни, воротник, кисточка или накладка. Такие препараты получают общепринятым способом, в соответствии со стандартной ветеринарной и фармацевтической практикой. Таким образом, капсулы, шарики или таблетки могут быть получены смешиванием активного ингредиента с пригодным мелкоизмельченным разбавителем или носителем, дополнительно содержащим расщепляющий агент и/или связующий агент,

- 4 011024 такой как крахмал, лактоза, тальк или стеарат магния. Пропитывающий препарат может быть получен путем диспергирования активных ингредиентов в водном растворе вместе с диспергирующим или смачивающим веществом. Инъецируемые препараты могут быть получены в виде стерильного раствора или эмульсии. Препараты для орошения или нанесения на определенное место могут быть получены растворением активных ингредиентов в приемлемом жидком носителе наполнителе, таком как бутилдигол, жидкий парафин или нелетучий сложный эфир с добавлением или без добавления летучего компонента, такого как изопропанол.

Альтернативно, препараты для орошения, для нанесения на определенное место или аэрозольные препараты могут быть получены инкапсуляцией для того, чтобы остаток активного агента оставался на поверхности тела животного. В этих препаратах масса активного соединения будет варьировать в зависимости от вида животного-хозяина, подлежащего лечению, тяжести и типа инфекции, вида хозяина и массы тела хозяина. Препараты, содержащие соединение формулы (I), могут быть введены известными способами в непрерывном режиме, в частности для профилактики.

В качестве альтернативы комбинации могут быть введены животному вместе с кормом, и с этой целью может быть получена концентрированная кормовая добавка или премикс для смешивания с обычным кормом для животного.

При использовании для человека соединения формулы (I) вводят в виде фармацевтически приемлемого препарата в соответствии с обычной медицинской практикой.

Соединения формулы (I) могут быть использованы в сочетании с другим антигельминтным или антипаразитарными агентами, таким образом, чтобы расширить спектр действия или предотвратить развитие резистентности. Другими антигельминтными веществами являются, например, авермектины и милбемицины, такие как абамектин, цидектин, дорамектин, эприномектин, ивермектин, милбемицин, милбемицин Ό, оксим милбемицина, моксидектин, селамектин и тому подобное; бензимидазолы, такие как албендазол, камбендазол, фенбендазол, флубендазол, мебендазол, оксфендазол, парбендазол, оксибендазол и циклобендазол; пробензимидазолы, такие как фебантел, тиофанат и нетобимин; салициланилиды, такие как клозантел и никлозамид; имидазотиазолы, такие как бутамизол и левамизол; тетрагидропиримидины, такие как морнател, пирантел и пирантелпамоат; гексагидропиразиноизохинолины, такие как празиквантел; и макролиды, получаемые ферментацией §ассйагоро1у8рога кршока, такие как спинозин А, спинозин Ό или спиносад.

Специалисты по лечению гельминтоза легко определят терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) по результатам теста, представленным далее. Вообще говоря, предусмотрено, что терапевтически эффективная доза будет составлять от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/кг массы тела, более предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг массы тела теплокровного животного, подлежащего лечению. Может оказаться полезным вводить терапевтически эффективную дозу на протяжении дня через соответствующие интервалы в виде двух или более поддоз.

Точная дозировка и частота введения лекарственного средства зависят от конкретного используемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы и общего физического состояния конкретного теплокровного животного, так же, как и от других лекарственных средств (включая указанные выше дополнительные антигельминтные или антипаразитарные средства), которые в данный момент может принимать теплокровное животное, как хорошо известно специалисту в данной области. Более того, указанное эффективное ежедневное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от ответной реакции животного, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки врачом или ветеринаром, прописывающим соединения по настоящему изобретению. Поэтому указанные выше интервалы для эффективного ежедневного количества являются только ориентировочной нормой.

Экспериментальная часть

А. Синтез промежуточных продуктов

Пример А.1. Получение промежуточного соединения (1).

Раствор (+)-(К.)-тетрагидро-2-фуранкарбоновой кислоты (6,65 мл) в дихлорметане (250 мл) перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре и затем добавляли этандиоилдихлорид (12,1 мл) и безводный диметилформамид (3 капли). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч и затем растворитель выпаривали и выпаривали совместно с толуолом два раза, получая (2К.)-тетрагидро-2фуранкарбонилхлорид (промежуточное соединение 1).

Аналогичным способом получали рацемический тетрагидро-2-фуранкарбонилхлорид, исходя из коммерчески доступной тетрагидро-2-фуранкарбоновой кислоты, а (2Б)-тетрагидро-2-фуранкарбонилхлорид получали, исходя из коммерчески доступной (-)-(8)-тетрагидро-2-фуранкарбоновой кислоты.

- 5 011024

Пример А.2.

а) Получение промежуточного соединения (2).

Суспензию 4,5-дигидротиазоламина (1,95 моль) в 2-пропаноне (1000 мл) перемешивали в 4-горлой колбе с механической мешалкой, термометром и капельной воронкой. Затем по каплям добавляли раствор 2-бром-1-(3-нитрофенил)этанона (1,93 моль) в 2-пропаноне (2500 мл), охлаждая на ледяной бане, чтобы температуру поддерживать ниже 20°С. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Полученный осадок отфильтровывали, промывали 2-пропаноном и сушили, получая 640 г промежуточного продукта (2).

Ь) Получение промежуточного соединения (3).

Суспензию промежуточного соединения (2) (1,85 моль) в этаноле (3000 мл) охлаждали на ледяной бане. Частями добавляли боргидрид натрия (2,78 моль) и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Добавляли насыщенный раствор ЫаНСО₃ (1000 мл) и воду (500 мл) и после гашения добавляли дихлорметан. Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч и водный слой экстрагировали дихлорметаном (4 раза по 1000 мл). Органические слои объединяли, сушили, отфильтровывали и растворитель выпаривали, получая 469 г промежуточного соединения (3).

с) Получение промежуточного соединения (4).

Суспензию промежуточного соединения (3) (0,34 моль) в 1,2-дихлорэтане (3000 мл) перемешивали при комнатной температуре и по каплям на протяжении 6 ч добавляли раствор тионилхлорида (0,68 моль) в 1,2-дихлорэтане (150 мл). Реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи и осторожно добавляли ЫаНСО₃ (1500 мл). Реакционную смесь нагревали до 40°С, перемешивали в течение 6 ч и затем водный слой удаляли. Органический слой промывали насыщенным раствором ЫаНСО₃ (4 раза по 1000 мл), сушили, отфильтровывали и растворитель выпаривали. Полученный остаток растворяли в смеси СН₂С1₂/СН₃ОН (95/5; 2000 мл) и перемешивали с силикагелем (250 г). Силикагель отфильтровывали. Фильтрат снова фильтровали через силикагель (1000 г) и растворитель выпаривали, получая 253 г промежуточного соединения (4).

б) Получение промежуточного соединения (5).

Промежуточный продукт (4) разделяли на энантиомеры хиральной колоночной хроматографией на СЫга1се1 А8 1000А 20 мкм (элюент: смесь этанол/гептан 30/70). Нужные фракции, содержащие (8)энантиомер, собирали и растворитель выпаривали, получая (68)-(3-нитрофенил)-2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол (промежуточного соединения 5). Фракции, содержащие (Я)-энантиомер, также собирали и после выпаривания растворителя получали (6К)-(3-нитрофенил)-2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1Ь]тиазол (промежуточного соединения 6).

Пример А.3. Получение промежуточного соединения (7).

η₂ν

а) Раствор промежуточного соединения (5) (0,15 моль) в этилацетате перемешивали при комнатной температуре. По каплям добавляли 1М раствор хлористо-водородной кислоты (0,199 моль) в диэтиловом эфире (190 мл). Полученный осадок отфильтровывали и сушили при низком давлении, получая 39,4 г

- 6 011024 соли хлористо-водородной кислоты промежуточного соединения (5).

Ь) К смеси соли хлористо-водородной кислоты промежуточного соединения (5) (0,0122 моль), порошка железа (0,061 моль) и хлорида аммония (0,061 моль) добавляли воду (105 мл) и затем метанол (35 мл). Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 70°С в течение 30 мин и затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Добавляли 0,1н. НС1 (14 мл) и полученную смесь фильтровали над диатомитом. Диатомит промывали 0,01н. НС1 (175 мл) и дихлорметаном (175 мл). Полученный фильтрат перемешивали, при этом добавляя насыщенный раствор №НС.’О₃, (175 мл) и ЫаНСО₃ (10 г). Органический слой отделяли, а водный слой экстрагировали дихлорметаном (4 раза по 175 мл). Органические слои объединяли, сушили, отфильтровывали и растворитель выпаривали, получая 2,61 г промежуточного соединения (7).

Используя аналогичную методику, но исходя из промежуточного соединения (4), получали 3(2,3,5,6-тетрагидроимидазо[2,1-Ь]тиазол-6-ил)фениламин в качестве промежуточного соединения (8).

промежуточное соединение (8)

Пример А.4. Получение промежуточного соединения (9).

промежуточное соединение (9)

К 2М раствору оксалилхлорида (26,9 мл, 0,308 моль) в дихлорметане при -60°С по каплям добавляли раствор диметилсульфоксида (36,5 мл, 0,514 моль) в дихлорметане (700 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и затем по каплям добавляли раствор тетрагидрофурфурилового спирта (25 мл, 0,257 моль) в дихлорметане (100 мл). Смесь перемешивали в течение 20 мин и затем медленно добавляли триэтиламин (181 мл, 1,29 моль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь отфильтровывали и осадок промывали дихлорметаном (250 мл). Объединенные слои дихлорметана промывали водой (150 мл), сушили и осторожно упаривали при 25°С. К остатку добавляли диэтиловый эфир, осадок отфильтровывали и промывали диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои осторожно упаривали. Продукт очищали дистилляцией из колбы в колбу (75°С, 20 мбар), получая 12,6 г промежуточного соединения (9).

В. Получение целевых соединений

Пример В.1. Получение соединения (1).

соединение (1)

К раствору промежуточного соединения (7) (0,066 моль) в безводном ацетонитриле (500 мл) по каплям добавляли 4М раствор хлористо-водородной кислоты в диоксане (16,43 мл). Полученную смесь охлаждали на ледяной бане. По каплям добавляли смесь промежуточного соединения (1) (0,069 моль) в ацетонитриле (100 мл) и реакционную смесь оставляли на ночь для достижения комнатной температуры. Ацетонитрил выпаривали. Добавляли насыщенный раствор ИаНСО₃ (500 мл) и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (3 раза по 500 мл). Органические слои объединяли, сушили, отфильтровывали и растворитель выпаривали. Остаток очищали флеш-колоночной хроматографией (элюент: смесь СН₂С1₂/СН₃ОН 95/5) на силикагеле. Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали, получая 12,23 г соединения (1) (т.пл. 42-57°С) (удельное оптическое вращение, ОК=-3,77° (λ=589 нм, с=0,4636 мас./об.%, метанол, 20°С)).

Используя методику, описанную выше, также получали соединения (2), (3) и (4); в качестве исходных веществ была, соответственно, выбрана комбинация промежуточного соединения (8) и рацемического тетрагидро-2-фуранкарбонилхлорида, или промежуточного продукта (7) и рацемического тетрагидро-2-фуранкарбонилхлорида, или промежуточного соединения (7) и (28)-тетрагидро-2фуранкарбонилхлорида.

- 7 011024

соединение (3)

Пример В.2. Получение соединения (А).

Промежуточный продукт (7) (470 мг) растворяли в безводном ацетонитриле (40 мл). По каплям добавляли раствор 4М НС1 в диоксане (0,538 мл). Смесь охлаждали на ледяной бане и по каплям добавляли раствор 2-фуранкарбонилхлорида (0,213 мл) в ацетонитриле (20 мл). Реакционную смесь прогревали при 40°С в течение ночи. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор ИаНСО₃ (150 мл). Реакционную смесь экстрагировали три раза дихлорметаном (150 мл) и объединенные органические слои сушили, фильтровали и растворитель удаляли выпариванием. Остаток отделяли и очищали, используя препаративную тонкослойную хроматографию, смесью дихлорметан/метанол (95:5) в качестве элюента, получая 210 мг соединения (А) (т.пл. 77°С).

Это соединение (А) известно из И8-4014892, где оно описано как соединение (163).

Пример В.3. Получение соединения (В).

Раствор промежуточного соединения (7) (550 мг) перемешивали в сухом ацетонитриле (30 мл) и добавляли ИаНСО₃ (181 мг). Добавляли раствор промежуточного соединения (9) в сухом ацетонитриле (15 мл) и через 15 мин в виде твердого вещества добавляли ИаВН(ОАс)₃ (547 мг). Тонкослойная хроматография показала (ТЬС), что через 2 ч реакция была завершена. Добавляли насыщенный водный раствор ИаНСО₃ и продукт дважды экстрагировали этилацетатом. Объединенные слои этилацетата сушили и упаривали. Полученный остаток очищали флеш-колоночной хроматографией на диоксиде кремния, используя смесь дихлорметана и метанола в нижеследующих соотношениях и при нижеследующих временах элюирования: 10 мин, 3% метанола; 20 мин, от 3 до 5% метанола; 20 мин, 5% метанола, при скорости течения 30 мл/мин, получая 237 мг соединения (В).

Это соединение (В) известно из И8-4014892, где оно описано как соединение (163), и из ОВ1365515, где оно описано как соединение (81).

С. Фармакологические примеры

С.1. Изучение ίη νίνο эффективности антигельминтных средств на модели Н. сойойик/малая пес чанка.

Антигельминтную эффективность соединений по настоящему изобретению оценивали на модели ίη νίνο, используя не подвергавшуюся лечению малую песчанку (Мепоиек иидшси1а1и8). Малую песчанку инокулировали три раза приблизительно 300 освобожденными от оболочки инфицирующими личинками Наешоисйик соп1ог1и5 (мультирезистентный штамм), лечили тестируемыми соединениями, вводя их орально, через 11 дней после первого инфицирования личинками Н. соп1огШ5. На 14-й день их подвергали вскрытию для того, чтобы пересчитать число извлекаемых червей Н. соп1огШ5. Антигельминтную эф

- 8 011024 фективность соединений (А) и (В), известных в данной области техники, оценивали также, используя аналогичную модель.

Животные.

Использовали самок С.’Е\У песчанок в возрасте от 28 до 35 дней, имеющих массу 30-35 г (СЬаг1е§ Клуег, 8и1хГе1й. Сегтапу). Три малые песчанки, каждая из которых по приезде была произвольно помещена в полисульфоновые полупрозрачные индивидуально проветриваемые клетки (48x37,5x21 см), содержащие древесные стружки. Имеющуюся в продаже еду и воду грызунам давали по желанию. После четырехдневного периода акклиматизации малые песчанки были искусственно инфицированы.

Паразит.

Были использованы Наетопсйик сопЮйик, штамм Ро1уВе8 (резистентный к левамизолу, мебендазолу, ивермектину, ивермектину и клозантелу). Этот штамм сохраняли в искусственно инфицированном самце ягненка, служившего донором.

Индивидуальные фекалии, содержащие яйца Наетопсйик, собирали в фекальные мешки. Фекальные шарики разбивали, смешивали с древесным углем, увлажняли и помещали в инкубатор с температурой 28°С и относительной влажностью 95% для развития эмбрионов. Через семь дней эту смесь помещали в воронки Вермана и через 12 ч собирали личинки в оболочке третьей стадии развития. Эти личинки очищали промыванием водой и дезинфицировали 2% раствором формалина. Такие личинки могут быть использованы для искусственного инфицирования немедленно или могут сохраняться в холодильнике приблизительно при 8°С в течение максимального периода, составляющего 6 месяцев.

Инфицирующие личинки (возраст менее 6 месяцев) освобождали от оболочки, промывая 10 мин коммерческим 3,3 об.% раствором гипохлорита натрия, затем фильтровали через воронку Бюхнера, промывали водой, концентрировали на воронке Бермана и через 2 ч собирали. Полученные таким образом освобожденные от оболочки личинки можно использовать для следующего инфицирования песчанок или оставить для длительного хранения в качестве запасного материала, охлаждая их в течение 1 ч в парах жидкого азота и сохраняя в жидком азоте при -196°С.

Инфекции.

Все песчанки были инокулированы орально приблизительно 300 освобожденными от оболочки инфицирующими личинками Н. Соп!ойи8 - доза на три следующих дня. Посевной материал вводили, используя тупоконечную 18 г дозирующую иглу, соединенную с 1 мл шприцом.

Лечение.

Через одиннадцать дней после первого инфицирования песчанок обрабатывали тестируемыми соединениями, суспендированными или растворенными в 0,4 мл ДМСО (ΌΜ8Θ), вводя тестируемую дозу объемом 0,1 мл/50 г массы тела через тупоконечную 18 г дозирующую иглу, соединенную с 1 мл шприцом. Контрольных животных, включенных в каждый опыт, не обрабатывали. Чтобы проверить достоверность модели, левамизол гидрохлорид, мебендазол, ивермектин и клозантел использовали в разных опытах с титрованием доз.

Аутопсия.

Перед вскрытием все песчанки голодали 20 ч, и на 14 день после первого инфицирования были убиты ингаляцией СО₂. Для извлечения червей их желудки удаляли, открывали в продольном направлении, и 3 ч инкубировали в химическом стакане с 20 мл пищеварительной текучей среды (10 г пепсина+30 мл концентрированной хлористо-водородной кислоты) при 37°С. После пищеварения содержание желудка пропускали через чайное ситечко; проходящая текучая среда захватывалась в ситечке (32 мкм) и червей извлекали водопроводной водой. Химический стакан сохраняли в холодильнике для последующего счета.

Обследование и процент эффективности.

Содержание каждого стакана перемешивали, выливали в 6-лунковый планшет по 6 аликвотных частей и червей пересчитывали под инвертированным микроскопом. Процент эффективности определяли для каждого тестируемого соединения и результаты суммировали в таблице, приведенной ниже.

- 9 011024

Таблица

Данные по эффективности очищения песчанки от Наетопсбик сойобик. штамм Ро1уКе8. после орального лечения тестируемым соединением

Тестируемое соединение	Доза трк	Ν' животных	Среднее количество червей	% эффективности
Контроль (при отсутствии лечения)	0	36	30,0
Соединение № 1	2,5	3	36,0	65, 9
Соединение № 1	5	3	6,0	79,3
Соединение № 1	10	6	0,0	100,0

Соединение № 4	5	3	5,0	68,8
Соединение № 4	10	3	3,0	85,0

Соединение № А	5	3	11,0	35,3
Соединение № А	¹⁰	3	7,0	65, 0

Соединение Ю в	5	6	10,0	55, 6
Соединение № В	10	3	14,0	60,6

Доза трк: доза тестируемого соединения в мг на кг массы тела больного № животных: номер тестируемых животных

Меб. А.Ь.: среднее количество червей

Процент эффективности=({(среднее число червей, извлеченных в контрольной группе) минус (среднее число червей. извлеченных в обработанной группе)}. деленное на (среднее число червей. извлеченных в контрольной группе)) х 100.

Как можно видеть из таблицы, и соединение (1) и соединение (4) демонстрируют лучшую антигельминтную эффективность, чем известные в данной области соединения (А) и (В).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) его фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и стереохимически изомерные формы.
2. Соединение по п.1. которое в положении 6 2.3.5,б-тетрагидроимидазо[2.1-Ь]тиазольного фрагмента имеет (^-конфигурацию.
3. Соединение по п.2, которое представляет собой (68)-[3-(2.3.5.6-тетрагидроимидазо[2.1-Ь]тиазол6-ил)фенил]амид (2В)-тетрагидрофуран-2-карбоновой кислоты и его фармацевтически приемлемые ки слотно-аддитивные соли.
4. Соединение по п.2. которое представляет собой (68)-[3-(2.3.5.6-тетрагидроимидазо[2.1-Ь]тиазол6-ил)фенил]амид (28)-тетрагидрофуран-2-карбоновой кислоты и его фармацевтически приемлемые ки слотно-аддитивные соли.
5. Фармацевтическая композиция. содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически активное количество соединения по любому из пп.1-4.
6. Способ получения фармацевтической композиции по п.4. где терапевтически активное количест

- 10 011024 во соединения по любому из пп.1-4 тщательно перемешивают с фармацевтически приемлемым носителем.
7. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве лекарственного средства.
8. Применение соединения по любому из пп.1-4 для получения лекарственного средства для лечения, борьбы и предотвращения эндо- и эктопаразитарных инфекций.
9. Композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-4 в качестве первого активного ингредиента, и еще один антигельминтный или антипаразитарный агент в качестве второго активного ингредиента.
10. Способ получения соединения формулы (I), в котором промежуточное соединение формулы (V) подвергают взаимодействию с промежуточным соединением формулы (IV) в пригодном реакционноинертном растворителе или, если необходимо, соединение формулы (I) превращают в фармацевтически приемлемую кислотноаддитивную соль, или наоборот, кислотно-аддитивную соль соединения формулы (I) действием щелочи превращают в форму свободного основания и, если необходимо, получают их стереоизомерные формы.