LV10108B - Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation - Google Patents

Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation Download PDF

Info

Publication number
LV10108B
LV10108B LVP-92-589A LV920589A LV10108B LV 10108 B LV10108 B LV 10108B LV 920589 A LV920589 A LV 920589A LV 10108 B LV10108 B LV 10108B
Authority
LV
Latvia
Prior art keywords
formula
asp
cys
compounds
glu
Prior art date
Application number
LVP-92-589A
Other languages
English (en)
Other versions
LV10108A (lv
Inventor
Ole Didrik Laerum
Original Assignee
Hafslund Nycomed Bioreg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hafslund Nycomed Bioreg filed Critical Hafslund Nycomed Bioreg
Publication of LV10108A publication Critical patent/LV10108A/lv
Publication of LV10108B publication Critical patent/LV10108B/lv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4722—G-proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C07K7/067—Hemoregulatory peptides based on sequence Glp-Glu-Asp-Cys-Lys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

PROLIFERĀCIJAS INHIBITORI, FARMACEITISKĀ KOMPOZĪCIJA. SAVIENOJUMU IEGŪŠANAS METODE, ŠŪNU PROLIFERĀCIJAS INHIBĒŠANAS PAŅĒMIENI
Apraksts
Izgudrojums attiecināms uz tādu peptīdu izmantošanu, kuriem piemīt Inhibējoša iedarbība uz šūnu prollferāciju, un uz jauniem peptīdiem, kuriem piemīt specifiska un/vai vispārēja inhibējoša iedarbība.
Piena dziedzeris satur šūnas, kurām piemīt liela struktūru un funkciju dažādība, un to diferenciācijas un attīstības mehānismi ii· daudzu pētnieku -uzmanības centrā. Zināms, ka šūnu sistēmu nepārtrauktas maiņas mehānismu nodrošina polipotentu stumbra šūnu rezerve, kuras dalās un pastāvīgi piegādā sistēmai jaunas šūnas. Pie tam sākotnēji homogēnās . stumbra šūnas, kuras tiek piegādātas no .rezerves , drīz iegūst to vai citu morfoloģiju un rezultātā attīstās par vajadzīgajām funkcionālajām šūnām.Kā piemēru tādām stumbra šūnu sistēmām var minēt hemopoētlsko (aslnsradošo) sistēmu kaulu smadzenēs, kā arī epiteliālo un epidermālo sistēmu.
Agrāk tika ziņots, ka peptīdi ar noteiktu vispārīgo formulu var inhibēt hemopoēsi (asinsradi) (skat. EP-A-0112656), kamēr grupa dimēro peptīdu ar nedaudz paplašinātu vispārīgo formulu un disulfīda saiti vai' stimulēt hemopoSzi ( skat. Vi 08Θ/03535). Tomēr abos gadījumos nekādi citi efekti bez. hemopoēzes sistēmās nav novēroti.
Tagad mēs negaidīti atklājām, ka peptīdu klasei, kurā ieiet daži peptīdi, kas atklāti patentā EP-A-0112656, piemīt spēja inhibēt šūnu proliferāciju, un ka neliela modifikācija aminoskābju secībā un/vai sānu kSdes funkcionālo grupu bloķēšana var virzīt peptīdu iedarbību uz mūs interesējošām specifiskām sistēmām. Mūsu paziņojums balstās uz novērojumiem, ka noteiktas pentapeptīdu secības, atklātas mūsu augstāk minētos patentos, var atrasties tā saucamajās G-olbaltumvielās, konkrēti G^-olbaltumvielās. G-olbaltumvielas tika atrastas šūnu membrānu iekšpusē un tās nodrošina nepieciešamo saiti starp transmembrāniem receptoriem un efektoriem, kuri atrodas pie G-olbaltumvielām šūnu iekšpusē.
Tās piedalās daudzās šūnu funkcijās, atkarībā no efektoriem, ar kuriem tās ir· saistītas. . Tās sastāv no 3 savstarpēji saistītām apakšdaļiņām ŪC, β un 7« Pie kam & apakšdaļiņa piedalās blakusefektora aktivācijā. G-olbaltumvielas atšķiras pēc to funkcijas, un G-olbaltumvielu apakšklase ir tās sāk o tnē j i atrastās olbaltumvielas, kuras inhibē adenilātciklāzi. Tālāk jāaplūko peptīdu loma epiteliālo un epidermālo sistēmu prolif erāci jas inliibēšanā un šūnu sistēmu proliferācijas inhibēšanā vispār.
Tāpēc, saskaņā ar izgudrojumu. mēs piedāvājām izmantot 35 savienojumus ar formulu (I)
Ra - Rb - R° - Rd - (Re) - R£ n
LV
- 3 kur Ra ir
R ir
R ir
R ir
R ir
CH-C0(CH2>m
-HN-CH-COCOR t,
-HN-CH-CO(CH2,q
COR7
-HN-CH-CO' 8 CH„SR
d.
-NH-CH-CO*9
R un R ir* vai
-NH-CH-COR (ch2)4
NH, vai vai vai vai
RNH-CH-σΟΙ (CH„)p
COR°
-HN-CH-COI
CH OH vai
-HN-CHg-CO-HN-CH-COI . CH„
-HN-CH-COCH„-C J3
-NH-CH-COR (CH2)3 ; NH I
HN=C-NH„
-NH-CHg-COR (kur n un m neatkarīgi ir 0 vai 1 ;
p un q neatkarīgi ir 1 vai 2;
2 _
R un R abi ir ūdeņraža atomi vai · abi kopā veido oksogrupu;
4
R un R abi ir ūdeņraža, atomi vai abi kopā veido oglekļaoglekļa saiti;
R ir ūdeņradis vai aoilgrupa;
Rb un R' neatkarīgi ir hidroksigrupas vai aminogrupas; p.
R” ir ūdeņradis, Cg_g alkllgrupa, aralkilgrupa, kura var saturēt vienu vai vairākus hidroksi-, amino- vai metoksiaizvietotājus, vai metaboliski labila S-aizsargāJoša grupa; ' g
R ir ūdeņradis vai metilgrupa;
R ir hidroksi- vai aniinogrupa, glutainīna. palieka vai peptīds, kura N-galā ir glutamīns;
.izņemot alanīnu, kurš var būt D- vai L-formā, un glioīnu, visas minētās aminoskābju paliekas atrodas L-formā), lai pagatavotu ārstniecisku preparātu nehcrnopoētiskās šūnu prolif©rācijas inhibēšanai.
Kā iepriekš noi-ādīts, grupa R , kas aizsargā peptīda
N-galu, var būt acilgrupa ar 1-20 oglekļa atomiem, piemēram, zemākā alkanoilgrupa ar 1-5 oglekļa atomiem, tāda kā acetilgrupa, vai aroil- vai aralkanoilgrupa ar 7-20 oglekļa atomiem, tāda kā benzoil- vai fenacetilgrupa.
R tāpat var būt acilgrupa, kas iegūta no. aminoskābes 5 vai peptīda ķēdes. Tajā skaitā, R var būt acilgrupa, kas iegūta no serīna vai no Jebkura peptīda, kas iegūts no sekojošas aminoskābju virknes, secīgi atdalot N-gala aminoskābes;
Lys - Ile - Ile - His - Glu - Asp - Gly - Tyr - Ser
Kā zemāk detalizēti paskaidrots', peptīdiem, kuriem ir augstāk minētā aminoskābju secība vai ' tās daļa, piemīt augsta homoloģljas pakāpe ar G^j-olbaltumvielām, kuras, kā zināms, kontrolē šūnas .vāirākas' funkcijas, ieskaitot augšanas inhlbēš&nu. Peptīdam ar višp&rēj\l formulu (I) gala
-διό piemēram, etil-, butil- vai heksilgrupa. grupa, visbiežāk tā ir arilmetilgrupa, difenllinetil- vai trifenll- metilgrupa. ir metaboliskl labila grupa, tā va aminogrupu vēlams aizsargāt, .piemēram, ac-ilējot ar alkanoil-, aralkanoil- vai aroilgrupu.
Gadījumos, kad R ir Cp_(, alkllgrupa, ta vai- but,
Ja R® ir aralkiltāda kā benzil-, p
Gadījumos, kad R būt, . . piemēram, ariltiogrupa, kas satur 5-10 oglekļa atomus, piemēram, piridiltiogrupa, vai acilgrupa, kā norādīts augstāk.
Izgudrojuma savienojumi galvenokārt ir pentapep bīdi, t.i., n ir galvenokārt 0 .
Cikliskās grupas paliekā1 R galvenokārt ir pieclocekļu grupas, t.i., m ir galvenokārt 0 .
Izgudrojuma pentapeptīdu spēja inhibēt daudzu veidu šunu proliferāciju papildus hemopoētiskai sistēmai vai pat izslēdzot hemopoētisko sistēmu ir vērtīga medicīnai gadījumos, kad ir jāārstē pārmērīga šūnu proliferāclja, piemēram, psoriāzes gadījumā, vai gadījumos, kad vēža terapija ir vēlama, lai bojātu, noteiktu šūnu populāciju. Daudzi šūnu tipi ir sevišķi jūtīgi pret citotoksiskām. ārstnieciskām vielām vai pret apstarošanu, ko izmanto pretvēža terapijā, un viena zināma metodika balstās uz to, ka tiek izmantots ārstniecisks preparāts, kas inliibē tādu šūnu proliferāciju kā hemopoētiskās sistēmas šūnas, pretvēža terapijas laikā, lai pēc' tam, kad lnliibējošā preparāta darbība izbeigsies, atjaunotos normāla proliferācija. Iespējams,, izgudrojuma peptīdlem ir atbilstoši īsi bioloģiskie dzīves pusperlodi tādai terapijai. Analogi, atsevišķu šūnu populāciju proliferācija, kas ir jūtīga pret vēža terapiju, var pati tikt inhibēta reizē ar vēža šūnām un pretvēža terapija iniciējas tikai tad, kad vēža šūnas sasniedz proliferācijas jūtīgo fāzi, tai laikā, kad normālas šūnas atrodas mazāk jūtīgā fāzē.
Ir tāds šūnu proliferācijas veids, kad šūnas, tādas kā 35 kaulu smadzeņu šūnas, fagocīti vai granulocītl, tiek stimulētas ax· CSF ārstnieciskiem preparātiem terapijas laikā. Šūnu augšanas inhibēšana var atjaunot tādas šūnas
-βίο līdz normāliem augšanas ātrumiem.
Daudzu autoimGno saslimšanu gadījumos subjekts ražo leikocītus, kas ir aktīvi pret viņa paša audiem. Inhibējot leikocītu funkciju, vismaz uz kādu laiku, tādas autoimūnās reakcijas var tikt būtiski samazinātas.
Iekļaujot G^-olbaltumvielu starpšūnu signālmehānlsmā, citas funkcijas, kuras ir G^-olbaltumvielu kontrolētas, var tikt modificētas ar aktīvo peptīdu palīdzību,' piemēram, šūnas kustīgums kalcija metabolismā, un citoplazmatiskie šūnu procesi, kuru mediāciju veic G^^-olbaltumvielas.
Tādējādi izgudrojums paredz arī jaunus polipeptīdus, kas satui’ G -olbaltumvielām būtiski homologas pilnas vai daļējas aminoskābju konkrēti secības, kas aprakstītas augstāk,
Lys-Ile-Ile-His-Glu-Asp-Gly-Tyr~Ser-Ra-Rb-RC-
ir vēlams aizstat ar
par savieno jumiem ar
par savienojumiem ar
1b RGRe_Ri-GXn_'pyr _ vai to .daļas vai to nelielas variācijas, tādas kā pollpeptīdl, kas aprakstīti Ann.Rev.Biochem. 56, pp.624-625 (1937) un Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85, pp.3066-3070 (1989). Tādas secības (vēlams) satur vismaz vienu Tyr palieku, kura palīdz pollpeptīda marķēšanā. Kā norādīts zemāk, N -gal a NH^-grupu vēlams aizsargāt, piemēram., N-acilējot, kā minēts augstāk. Ja šādā homoloģiskā secībā N-gala atlikumam jābūt Glu, tad tc p~Glu.
Šādus polipeptīdus var saukt formulu (la) un tos var uzskatīl fonnulu (I), kā definēts augstāk, kur R ir acilgrupa, kas iegūta no serīna paliekas vai no peptīda ķēdes, kurai ir serīna posms C-galā, un/vai R1° ir glutamīna palieka vai peptīds, kuram ir glutamīna posms N-galā. Tie visbiežāk satur summāri 1 īdz 12 aminoskābju paliekām, biežāk 10 vai mazāk.
Vispār ir vēlams, lai N-gala NH^ grupa jebkurai papildinātai peptīda virknei būtu aizsargāta, piemēram, acilējot. Tas palīdz izvairīties no peptīda fermentatīvās degradācijas. Lielākā daļa Ra palieku, kas pieļaujamas formulā (I), nav piemērotas aminoskābju pievienošanai 'bez deprotekcijas vai bez analoģiskas pārvēršanas par paliekām.
- 7 citoplazmaiiskiem šunu G^-olbal tumvielas.
Tikai savienojumi, E.P. $112656, ir tikuši c
kurām li* brīva NH^-grupa. Tādā veidā, gadījumā, kad R ir acllgrupa, kas nav iegūta no aminoskābes vai peptīda, 1 2 nepieciešama deaciiē'šana. Analogi, tur, kur R un R kopā veido oksogrupu, kā p-Olu posmos, nepieciešama pārvēršana par atbilstošu vaļējas ķēdes palieku, tādu kā Glu vai Gln.
Tādā veidā, izgudrojums izmanto peptīdu iedarbību uz procesiem, kuru mediāciju veic kas aprakstīti mūsu agrākā patents aprakstīti kā izmantojami medicīnā.
Visi citi savienojumi ar formulu (I), kas.definēta augstāk, ir vai nu jauni, vai ir aprakstīti tikai kā starpprodukti. .Saskaņā ar citu Izgudrojuma pazīmi, mēs piedāvājam savienojumus ar formulu (I), kā definēts augstāk, līdz ar savi eno j um i em pGlu - Asp - Asp - Cys - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys - Lys pGlu - Gln - Asp - Cys - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys - Glu - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys - Ala - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys,- LysNH2 , izmantot kā šūnu prolifGrācijas kontroles aģentus.
Daži peptldi no augstāk minētās formulas (I) ir jauni savienojumi un ,kā noskaidrots, tiem piemīt īpašību nepieciešamās kombinācijas. Tāpēc saskaņā ar vienu no Izgudrojuma aspektiem, mēs piedāvājam savienojumus ar formulu
R3 - Rb - R° - HN - CH - CO - (R0) - Rf (II)
I n '
CHgSR kur R&, Rb, '.R°, Re, R^ un n ir tie paši, kas formulā (I),
R1 1 ir C„ alkil- vai C„ aralkilgrupa, kura var saturēt £?—o i“dU vienu, vai vairākus hidroksi-, amino- vai metilaizvietotājus, un visas aminoskābes ir -tādā hirālā formā, kā norādīts formulai (I). Konkrēti, priekšroka, saskaņā ar šo formulu, dodama tādiem savienojumiem kā pGlu-Glu-Asp-bGnzilCys-Lys un pGlu-AIa~Asp-benzilCys~Lys .
Ir noskaidrots, ka savienojumi, kuri satur šāda tipa bloķētas cīsteīna paliekas, ir· stabilāki in vivo un uzrāda neapšaubāmu, aktivitāti šūnu proliferācijas inhlbSšanā.
Augstāk minētiem benziloisteīna savienojumiem vai' iegūt analogus, kui· fenllaizvietošana ir mazāk labila, turklāt šādi savienojumi oisteīna paliekas vietā 4-stāvoklī satur fenilalanīna palieku. Tādējādi, saskaņā ar izgudrojuma nākošo aspektu, mēs piedāvājam savienojumus ar formulu
Ra - Rb - RC - HN - CH - CO - (Re) - Rf (III)
I Ώ •ι η 1 · CHO-CPHP
6 5 .kur Ra, Rb, R°, RC, un n ir tie paši, kas formulā (I), uti visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts formulai (I). Arī šie savienojumi uzrāda aktivitāti in. vivo un šādu savienojumu labākie piemēri ir pGlu-G.ly-Asp-Phe-Lys- un pGlu-Gly-Asp-Cys~Lys.'
Pretēji tam, iespējams arī pagatavot peptīdus, kuriem ir metaboliski labila bloķējošā grupa, un nebloķēta peptīda lēna atbrīvošana ir panākama in vivo. Tādējādi, saskaņā, ar izgudrojuma nākošo aspektu, mēs piedāvājam savienojumus ar formulu
R - HN
CH - CO - (R®)„ - Ra (IV) * 12 ch2-sr kur R R12
Ja
R . R , R* ir metaboliski f \
R un n ir tie paši , kas formulā 71), labila grupa, piemēram, 2-pii-ldiltio~ grupa, un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, ,.kā norādīts formulai (I). Priekšroka dodama savienojumim pGlu-Glu-Asp-(2-plridilditioCys)-Lys, kuram, ka noskaidrots, piemīt palēnināta inhibē joša iedarbība uz hemopoēzi', kas • * novērojama pēc 3 dienām in vivo , salīdzinājumā ar 1 nebloķētam analogam. ·
Leikocitārās funkcijas lnhibSšanu (ieslialtcķl/ 'imūno 35 sistēmu) papildus hemopoēzei var panākt, nedaudz modificējot dienu i \ aminoskābju virkni, konkrēti, aizvietojot Glņ ar\ Gly2
Tādējādi, saskaņā ar citu Izgudrojuma pazīmi mēj piedāvājam i
y\ i
/ !
i l\
- 9 savienojumus ar formulu
Ra - HN - CH_ - CO - R° - Rd - (Re) - Rf (V) n
kur Ra, R°, Rd, Re, R^ un n Ir tie paši, kas formulā (I), un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts formulai (I). Priekšroka dodama savienojumiem pGlu-Gly-Asp-Phe-Lys un pūlu~Gly~ Asp-Cys-Lys, no kuriem pēdējais, kā noskaidrots, ihhibē granulocītu un makrofāgu migrāciju in vivo (veidojot ādas logu jūrascūciņām un veicot lokālu BCG stimulāciju) un. stimulē granulocītu veikto 3taphļiīococcu8 aureus uzsūkšanu In vitro (kā citometriski izmērīts plūsmā), papildus viņa hemopoētiski inhibejošai iedarbībai.
Peptīdu grupu, kurā hemopoētiskas lnhibējošās darbības vispār nav un to aizstāj epidermālās un epiteliālās šūnu proliferācijas inhibešana, var iegūt, aizvietojot clsteīna palieku 4-stāvoklī ar serīna palieku. Tādi savienojumi,,/ saskaņā ar izgudrojumu, atbilst formulai
Ra - Rb - Rc - HN - CH - CO - (Re) - Rf (VI) i n
CHgOH kur Ra, Rb, R°, Re, R^ un n ir tie paši, kas formulā (I), un visas aminoskābes, ir tādā hirālā formā, kā norādīts formulai (I), priekšroka dodama savienojumiem pGlu-Glu~Asp-Ser-Lys, pGlu-Asp-Glu-Ser-Lys un pGlu-Glu-Glu~Ser-Lys.
Minētie savienojumi ir ļoti vērtīgi nehemopoētiskās šūnu proliferācijas inhlbēšanā ļaundabīgu hemopoētisku šūnu selektīvas cltostatiskās apstrādes gaitā, kā arī nomācot ļaundabīgas epidermālās un epiteliālās šūnas, kuras sastopamas, piemēram, zvīnalnās karcinomas un psorlāzes progresējošos gadījumos.
Visbeidzot, atbilstoši Izgudrojumam, iespējams izmantot peptīdus kā slazdus citām molekulām, sasaistot molekulas ar peptīda kedi.
Tātad, mēs piedāvājam
a) savienojumus izmantošanai terapijā, diagnostikā un
- 10 » analīzē, kuri satur radioizotopu vai ar radioižotopu iezīmētu ligandu, kas, atbilstoši izgudrojumam, ir kovalenti, tieši vai netieši, saistīts ar peptīdu;
b) savienojumus izmantošanai terapijā, kuri satur cltotoksisku ligandu, kas, atbilstoši izgudrojumam, ir kovalenti saistīts ar peptīdu; un
c) savienojumus izmantošanai diagnostikā un analīzē, kuri satur iluorohromu ligandu, kas, atbilstoši izgudrojumam, ir kovalenti saistīts ar peptīdu.
Vispārīgā gadījumā, lai Uz cltotoksisko ārstniecisko preparātu fona izpaustos alzsargdarbība, izgudrojuma peptīdus cilvēkam var Ievadīt injicējot dozās 1-10 ng, piemēram,
4-5 ng dienā, cilvēkam ar svaru 70 kg. Ievadot ar infūzijas metodi vai analoģiski, doza var būt diapazonā 30-300 ng ķermeņa svaram 70 kg, piemēram, ap 100 ng, sešu dienu laikā.
Būtībā, ir vēlams panākt peptīda koncentrāciju ap 10 M —T līdz 10 M pacienta ārpusšūnu šķidrumā.
Vispār, kombinētā terapija ar citotoksiskiem ārstnieciskiem preparātiem, tādiem kā citozīna arabinozīds, prasa rūpīgu hronometrēšanu, lai garantētu mlelopoētlskās sistēmas aizsardzību tik ilgi, cik darbojas citotoksiskais ārstnieciskais preparāts.
Atbilstoši vēl vienam Izgudrojuma mērķim ir nodrošināta tādu farmaceitisku kompozīciju izstrāde, kurās kā aktīvais Ingredients ietilpst vismaz viens savienojums ar formulu (la), (II). (III), (IV), (V) vai (VI), kā šeit un agrāk norādīts, vai tā fizioloģiski saderīga sāls, kopā ar farmaceitisku nesējvielu vai pildvielu. · Kompozīcijas, atbilstoši izgudrojumam, var būt formā, kas piemērota orālai, nazālai, parenterālai vai rektālai ievadīšanai.
Šeit izmantojamais termins farmaceitisks ietver arī izgudrojuma lietošanu veterinārijā. .
Savienojumi, atbilstoši izgudrojumam, var pastāvēt parastās farmakoloģiskās formās, tādās kā tabletes, tabletes ar apvalku, aerosoli degunam, šķīdumi, emulsijas, pulveri, kapsulas vai pi'olongētās formas, šo formu Izgatavošanai var lietot parastās farmaceitiskās pildvielas, kā arī parastās
Izgatavošanas metodes. Tabletes var pagatavot, piemēram.
ingredientus ar zināmām atšķaidītāji kā kalcija laktoze, dezintegrē joši samaisot aktīvo ingredientu vai plldvielām, tādām kā, piemēram, karbonāts, kalcija fosfāts vai līdzekļi kā kukurūzas ciete vai alginīņskabe, saistvielas kā ciete vai želatīns, smSrvielas kā magnija stearāts vai talks, un/vai prolongešanas aģenti kā karboksipollmetilēns, karboksimetilceluloze, celulozes ftalātacetāts, vai pollvinllacetābs.
Tabletes, ja nepieciešams, var sastāvēt no vairākām kārtām. Tabletes ar apvalku var iegūt, pārklājot sagataves, kas iegūtas ar tablešu izgatavošanai parastām metodēm, ar parasti tablešu pārklāšanai izmantojamiem aģentiem, piemSram, polivinilpirolldons vai šellaka, gumiarabiks, talks, titāna dioksīds vai cukurs. Lai iegūtu prolongetu efektu vai lai izvairītos no nesaderības, arī sagatave, vai· sastāvēt no vairākām kārtām. Arī tabletes ar apvalku var sastāvēt no vairākām kārtām, lai panāktu ilgāku preparāta ievadīšanu, un šādā gadījumā var tikt izmantotas augstāk minētās tablešu pildvielas.
Šķīdumus injekcijām var iegūt ar parastām metodēm, tādām kā konservējošu aģentu, tādu kā p-hidroksibenzoātl, vai stabilizatoru, tādu kā EDTA, pievienošana. Pēc tam šķīdumus sapilda mēģenēs vai injekciju ampulās. Palēninātu injekcijas ievadīšanu var nodrošināt ar tā saucamajiem minisūkņiem.
Deguna aerosolus vai· pagatavot analoģiski ūdens šķīdumā un iesaiņot konteineros izsmidzināšanai vai nu kopā ar aerosolu izsmidzināšanas līdzekli, vai arī paredzot manuālo kompresi ju. Kapsulas, kas satur vienu vai vairākus aktīvus ingredientus, var iegūt, piemēram, samaisot aktīvos ingredientus ar* inertām nesējvielām kā laktoze vai sorbīts, un iepildot maisījumu želatīna kapsulās.
Piemērotus supozitorijus var iegūt, piemēram, samaisot aktīvo ingredientu vai kādu tā kombināciju ar šādam mērķim paredzētām parastām nesējvielām, tādām kā dabiskie tauki, polletllēnglikols vai to atvasinājumi.
Šī IzgudroJuma savienojumus saturošām vienreizējām dozām vēlams būt diapazonā 1-10 mg, piemēram 4-5 mg peptīda.
Izgudrojuma peptīdi var tikt sintezēti, Izmantojot jebkuru parocīgu metodi. Parasti visas sintēzes laikā ir jāaizsargā sānvirkņu kīmlski aktīvās grupas (amino-, tiolun/vai karboksilgrupas), tomēr ir pieļaujams visā sintēzes gaitā vairākas grupas atzarojumos atstāt neaizsargātas (hidroksi-, Imidazolgi-upas, pirmējās amīdgrupas, amīdgrupas cikliskās aminoskābēs kā plroGlu).
• Tāpēc pēdējai stadijai jābūt vispārējās formulas (I) pilnīgi vai daļēji aizsargāta peptīda atvasinājuma deprotekcijai (aizsardzības noņemšanai), un šādas metodes veido izgudrojuma turpmāko aspektu.
Pagarinot peptīdu virknes, principā var sākt vai nu no C-gala, vai no N-gala, kaut gan parasti izmanto metodiku, kurā augšana sākas no C-gala.
Tāpēc sintēzi var· sākt no C-gala,' piemērotam aizsargājamam atvasinājumam, piemēram, lizīnam, liekot reaģēt ar piemērotu aizsargātu·clsteīna atvasinājumu. Lizīna atvasinājumam jfisatur brīva Ot-aminogrupa, kamēr otram reakcijas dalībniekam Jāsatur brīva vai aktivēta karboksilgrupa un aizsargāta aminogrupa. Pēc mijiedarbības x*eakcijas starpproduktu var attīrīt, piemēram, hromatogrāfiski. un pēc tam to selektīvi N-deprotektēt, lai varētu notikt nākamās N-aizsargātās un C-brīvās vai aktivētās aminoskābes paliekas pievienošanās. Šī procedūra turpinās, līdz ir izveidojusies vajadzīgā aminoskābju secība.
Var tikt izmantoti tādi karbonskābi aktivējoši aizvietotāji kā simetriski vai jaukti anhidrīdl vai aktivēti esteri, tādi kā p-nitrofenilesterls, 2,4.5-trlhlorfe.n.ilesteris, N-hldroksibenztriazolesteris (HBT), N-hldroksisukcīnlmldllesteris (HSI) vai pentafluorfenilesterls (PPP).
Brīvo amino- un karboksilgrupu mijiedarbība var tikt veikta, piemēram, izmantojot dicikloheksilkabodiimīdu (DCK). Cits saistošs aģents, kas var tikt Izmantots, ir N-etoksikarbonil-2-etoksl- 1,2-dihidrohinolīns (EEDQ).
Parasti mijiedarbības reakcijas ir parocīgi veikt zemās
- η temperatūrās, piemēram, no -20 °C līdz pat Istabas temperatūrai, piemērota šķīdinātājā, piemēram, tetraliidrof.urānā, dioksānā, dimetilformamīdā, metilēnhlorīdā vai. šo šķīdinātāju maisījumā.
Parocīgāk var izrādīties veikt 1 sintēzi uz cletfāzes polimēra pamatnes. Hlormetilēts polistirols (sašūts ai* 1 % divlnilbenzola) ir viens no pieļaujamiem pamatnes materiāliem; šādā gadījumā sintēze tiks sākta no C-gala, piemēram, saistot N-aizsargātu llzīnu ar pamatni.
Vairākas cietās fāzes sintēzes metodikās aprakstītas Eric Atherton, Ch.istopb.er I. Logan, and Robert C. Sheppard, J.Chem.Soc.Perkin I, pp.538-46 (1981); James P. Tam, Foe S. Tjoeng, and R.B. Merrlfield, J.Am.Chem.Soc 102, pp.6117-27 (1980); James P. Tam, Richard D. Dimarchi, and R.B. Merrlfield, Int. J.Peptide Protein Res 16, pp. 412-25 (1980); Manfrēd Mutter, and Dleter Bellof, Helvetica Chimica Acta 67, pp.2009-16 (1984).
Ir zināms liels skaits grupu aminoskābju aizsargāšanai; tās lr aplūkotas Schroder, E., and Ltibke, K., The Peptides, Vols. 1 and 2, Academic Press, New York and London, 1965 and 1966; Pettit, G.R., Synthetic Peptides, Vols. 1-4, Van Nostrand, Reinhold, New York, 1970, 1971, 1975, and 1976;
Houben-Weyl, Methoden der Org&nischen Chemie, Synthese von Peptiden, Band 15, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, NY, 1983; The Peptides, Analysis, Synthesls, Biology, Vols. 1-7, Ed.: Ei’hard Gross, Johannes Meienhofer, Academic Press, NY, San Fransisco, London; Solid phase peptide synthesis, 2nd ed., John M. Stewaet, Jānis D. Youg, Pierce Chemical Company.
Tātad, piemēra pēc, aminogrupu aizsargājošās grupas satur tādas aizsargājošas grupas kā karbobenzoksi- (Z-), t-butoksikarbonil- (B0K-), 4-metoksi-2,3,6-trimetilbenzolsulfonil- (Mtr-), 9-f luoi*f enilmetoksikarbonil- (FMOC-). Jāņem vērā, ka, peptīdu veidojot no C-gala, katras pievienojamās aminoskābes paliekas Cl-amlnogrupai jābūt aizsargātai, un šī aizsai’dzība selektīvi jānovāc pirms nākošās pievienošanas stadijas. īpaši vērtīga šādai īslaicīgai aminogrupas aizsardzībai ir FMOC-grupa, kuru var selektīvi noņemt, apstrādājot ar piperidīnu organiska šķīdinātājā. ’
Karboksilgrupu var aizsargāt, piemēram, ar viegli noārdāmām estergrupām, tādām kā benzil- (-OBzl), p-nitrobenzil- (-ONBzl) vai t-butilgrupa (-tOBu), kā arī mijiedarbojoties ar oietfāzes pamatnēm, piemēram,· ar metilgrupām, kas saistītas ar polistirolu.
Tiolgiupu aizsargā p-metoksibenzil- (p-MBzl-), tribil(Trt-) un aoetamidometilgrupas' (AcAMe-).
Ir Jāņem vērā, eksistē'daudz oitu tādu grupu, piemēram tās, kas detalizēti aprakstītas augstāk minētajās literatūras atsaucēs, un visu tādu grupu izmantošana šeit un agrāk aprakstītajās metodēs atrodas šī izgudrojuma darbības sfērā. ' .
Ir zināms liels skaits metodiku aizsardzības noņemšanai no amino- un karboksilgrupām. Tomēr tās Jāsaskaņo ar izmantojamo sintēzes stratēģiju. Sānu virknes aizsargājošām grupām ir Jabūt stabilām apstākļos, kādos notiek Ot-aminor grupu īslaicīgās aizsardzības noņemšana, līdz pat nākošai pievienošanas stadijai.
Amlnogrupu aizsargājošas grupas, tādas kā . BOK, un karboksilgrupu aizsargājošas grupas, tādas kā tOBu, var tikt noņemtas vienlaicīgi, apstrādājot ar skābi, piemēram, trifluoretikskābi. Tiolgrupu aizsargājošas grupas, tādas kā
Trt, var tikt noņemtas selektīvi, izmantojot oksidējošu aģentu, tādu kā' Jods.
Cisternu saturošus peptīdus var sintezēt ar tekstā aprakstītām metodēm, sintēzes beigās noņemot visas aizsargājošās grupas, tai skaitā tiolgrupas aizsardzību.
Turpmākie piemēri ir tikai ilustratīvi.
Šķīdinātāji tika atkārtoti pārdestilēti no komei'ciāli pieejamiem materiāliem un tika uzglabāti sekojošā veidā:
dimetilformamīds (DMFA) virs molekulārā sieta 4A, dihlormetfins (DHM) virs CaCl„ , trietilamīns (TEA) virs Na/Pb 2 sakausējuma (Baker) un trifluoretlkskābe (TFE) virs
I · molekulārā sieta 4A.
Plānslāņa hromatogrāf-ijas (PSH) sistēmas bija sekojošas:
- 15 S1: silīcija dioksīds / ΟΗΟΙθ : MeOH (98:2)
Sg: (95:5)
S3: silīcija dioksīds RP 8/0 / 1% TPE škīd. 5$6 EtOH (ūd. )
Attīrītus galaproduktus analizē ar augsti efektīvas šķidruma hromatogrāfijas (AŠH) ar apgrieztu fāzi palīdzību. AŠH sistēma sastāv no hromatogrāfa HP 1090M ar iebūvētu automātisku paraugu noņĒm5ju un HP. 1040 indikāciju no gaismas diodēm (Hewlett-Packard, WaldBronn, PRO), un Supercosil LC-18 kolonas (250x4.5 mm, 5 |lm daļiņas). Paraugus šķīdina 0.1 % (tilp./tilp. ) TPE (ūd. ) un elue ar lineāru gradientu no 0 līdz 30. % acetonitrila 0.1 %-īgā TPE (ūd.). Plūsmas ātrums bija 2 ml/min. Eluentam sekoja pie 214 nm ar līnijas platumu 4 nm. Šķīdinātāja hromatogramma tika atskaitīta elektroniski, un rezultāti tika doti laukuma procentu vienībās.
Aminoskābju analīze:
Cistīņu saturošus peptīdus oķside ar skudrpārskābi, pārvēršot skābes labilo cistīna palieku par skābes izturīgu cisteīna skābi, pirms skābās hidrolizēs ar 6 M HCl 110 °C temperatūrā 16 stundu laikā. P6c tam sausus hidrollzātus modificē, izmantojot fenllizotiocianātu, un analizē kā aprakstīts Heinrikson (Anal.Bioch. 136, pp.65-74, 1984).
- 16 1.PIEMERS
L-PIROGLUTAMIL-L-GLUTAMIL-L-ASPARTIL-L-CISTEINIL-L-LIZĪNS.: Savienojums (I) ja)____t-BOK- (S-p-METOKSIBENZID-L-CISTEINIl·- (S-BENZILOKSIKARBONIl·)-L-LIZĪNA BENZILESTERIS (I)
6-Benziloksikarbonillizīna benzilestera hldrohlorīdu' šķīdina 3 ml BMP un pievieno TEA tik ilgi, kamēr tvaika fāzē var noteikt brīvu TEA ar mitru pH indipatora papīra gabalu.
Šķīdumam pievieno 491 mg t-BOK- (S-p-metoksibenzil )-L-eisteīn-N-hidroksisukcīnimīda esteri, kas izšķīdināts 3 ml DMF. Laiku pa laikam pievieno pa porcijām TEA, lai uzturētu vāji bāzisku i*eakciju. Maisījumu atstāj pa nakti istabas temperatūrā. pārbauda ninhidrīna reakciju, kurai jābūt negatīvai, pēc tam maisījumu lej 2.5x75 cm kolonā ar Sephadex LH-20 pildījumu, kas piesātināta ar DMF un kalibrēta ar standartreaģentiem (piemēram, šeit t-BOK-(7-benzil )-L-glutainīnskābes p-nitrofenilesteri3 un p-nitrofenols). Plūsmas tecēšanu kolonā nodrošina tās gravitācija un no kolonas iztekošo plūsmu analizē pie 280 nm, vācot frakcijas apmēram pa 10 ml. Produktu var identificēt, analizējot ar planslāņa hromatogrāfijas (PSH) palīdzību katru frakciju, pie kam attiecīgās frakcijas apvieno un destilē vakuumā, iznākums: 700 mg (100 %) eļļaina produkta, kas ir viendabīgs pēc PSH (hloro25 formszacetons) (9/1), 1^=0.64.
(b)___t-BOK- ((3-BENZID-L-ASPARTIL- (S-P-METOKSIBENZID-LCISTEINIL- (S-BENZILOKSIKARBONIL)-L-LIZĪNA BENZILESTERI3 (II)
700 mg bloķēta un aizsaī’gāta dipeptīda (I) šķīdina 25 ml bezūdens DIIM un pievieno 25 ml bezūdens TFE. Pēc 30 min.
skābi un šķīdinātāju atdestilē vakuumā. Atlikumu šķīdina DHM un no jauna atdestilē šķīdinātāju. Atlikumu šķīdina DMF (3 ml). to nedaudz pasārmina ar TEA, un tam pievieno t-BOK-(β-benzll)-L-aspargīnskābes p-nitrofenilestera (488 rng) šķīdumu. 3 ml-os DMF. Bāziskumu nepieciešams bieži pārbaudīt un uzturēt, pievienojot nelielus TEA daudzumus. Pēc tam, kad ninhidrīna reakcija kļūst negatīva (pēc apmēram 2 stundām), reakcijas maisījumu padod uz Sephadex LH-20 kolonu. (2.5x75 cm) un attīra kā Iepriekš aprakstīts. Iznākums pēc vakuumietvaices ir 900 mg (100 %) kristāliska produkta, kas ir homogēns pēc PSH (hloroforms/acetons (9/1)), R =0.70.
(c) t-BOK- (T-BENZID -L-GLUTAMIl·- (β-BENZID-L-ASPARTIL(S-p-METOKSIBENZIL)-L-CISTBINIL-(g-BENZILOKSIKARBONIL)-L-LIZĪNA BEMZILESTERIS (III)
900 mg aizsargāta tripeptīda atvasinājuma (II) vispirms deblokē ar TEE, kā augstāk aprakstīts, tad šķīdina 3 ml-os DMF un vāji pasārmina ar TEA. šim šķīdumam pievieno 504- mg t-BOK- (’f-benzil )-L-glutamīnskābes p-nitrofenilestera šķīdumu 3 ml-os DMF. Apmēram pēc 2.5 stundām ninhidrīna reakcija kļūst negatīva, un maisijumu padod uz Sephadex LH-20 kolonu, lai attīrītu, kā augstāk aprakstīts. Reakcijas maisījuma komponentu atdalīšanu un to identificēšanu var veikt, kā augstāk aprakstīts. Attiecīgās fi-akoijas (šajā gadījumā 9-15) savāc, ietvaicē un žāvē. Iznākums: 1140 mg (100 %) bāli dzeltenas eļļas, kas Ir homogēna pēc PSH (hloroforms/ acetons (9/1)), R^=0.53.
. (d) BENZILOKSIKARBONIL-L-PIROGLUTAMIL- (ļ’-BEHZIL) -I>GLUTAMTL- (β-BENZIL) -L-ASPARTIL- (S-p-METOKSIBENZIL) -L-CISTEIMIL- (e-BEIISILOKSIKARBOTiļL) -L-LIZĪNA BENZILESTERIS (IV)
1140 mg tetrapeptīda atvasinājuma (III) deblokē ar TFE DI-1M šķīdumā, kā api’akstīts savienojuma (I) gadījumā, un šķīdina 3 ml DMF. Šķīdumu nedaudz pasārmina ar TEA un. pievieno 423 mg benziloksikarbonil-L-piroglutamīnskābes ρ-nitrof enilestera šķīdumu 3 ml DMF. Reakcijas maisi juma bāziskumu vairākkārtīgi jāpārbauda un, ja nepieciešams, jāatjauno, pievienojot TEA. Apmēram pēc 3 stundām ninhidrīna tests kļūst negatīvs un pentapeptīda atvasinajumu (IV) var attīrīt, kā augstāk aprakstīts. Iznākums 1230 mg (96 %), bāli dzeltena eļļa, homogēna pēc PSH (hloroforms/acetons (9/1)), R^=0.44 (ar pēdējo frakciju).
(e) Ε-ΡΙΡΟΟΕυΤΑΜΙΕ-Ρ-ΰΙιυΤΑΜΙΕ-Ε-ΑΒΡΑΗΤΙΡ-Ε-ΟΙβΤΕΙΝΙΡ-ΡLizīiis ‘10 mg aizsargāta pentapeptīda atvasinājuma (IV) šķīdina ! Q ml iškidra fluoiūdepraža 0 C temperatūrā, pievienojot 500 mg metlonīna kā akceptoru, un iztur 1 stundu. Pēc tam fluorūdeņradi vakuumā 0 °C temperatūrā iztvaicē un sauso atlikumu samaisa ar etilacetātu. Etilacetātu dekantē, un atmet. Atlikumu šķīdina atšķaidītā etiķskābē un liofllizē.
Liofilizēto materiālu (2 mg) var attīrīt ar AŠH ar apgrieztu fāzi, izmantojot 10mmx10cm kolonu C18 ar plūsmas ātrumu 2.8 ml/min un izmantojot gradiento eluēšanu ar šķīdumu A: 0.1 % trif iuoretikskabes šķīdums ūdenī, un šķīdumu B: 0.1 % trifluoretikskābes šķīdums acetonitrilā, turklāt 0.10 % šķīdumu B pievieno 30 minūšu laikā. Produkta analīzē izmanto absorbciju UV diapazonā pie 214 nm, vai arī izmanto plridīndisulfīda reaģentu (SH-grupām).
Vairāki citi peptīdl var· tikt · sintezēti pēc 1 .piemērā dotās metodikas. Tie ir identificēti un raksturoti sekojošā tabulā.
TABULA
Piemērs________Aminoskābju analīze Tīrība (ASĪ!)
2 pGlu-Gln-Asp-Cys-Lys Glu: 2.00; Asp: 1.07; 95 %
Cys: 0.87; Lys: 1.15
3 Ac-Glu-Glu-Asp~Cys-Lys Glu: 3.00; Asp: 1.11; '94 %
Cys: 0.84; Lys; 1.11
4 pGlu-Glu-Glu-Cys-Lys . Glu: 2.98; Cys: 1.00; 93 %
Lys 1.19
5 pGlu-Glu-Asp-Cys-D-A1a-Lys Glu: 1.99; 94 %
Asp: 1 .00; Cys: 0.89;
Lys: 1.12; Ala; 1 .01
6 pG lu-G lu-Asp - Cys-Ly s -NHg Glu: 2.00; 94 %
Asp: 1.07; Cys: 0.87;
* Lys: 1.14
7 pGlu-Asp-Asn-Cys-Lys Glu: 0.94; Asp: 2.00; 96 %
Cys: 0.85; Lys: 1 .10
8 ρ G1 u- G lu- A s p -- Cy s - G ly ~Ly s Glu: 2.05; 98 %
Asp: 0.90; Cys: 0.95;
Lys: 0.99; Gly: 1 .07
TABULA (turpinājums)
Piemērs_____________AmlnoskābJu analIze TīrĪbatĀSilj
9 pGIu-Glu-Asp-(benzil- -Cy.s) -Lys Glu: 1.91; 99 %-
Asp: 1.06: Cys: *“* <
Lys: 1 .00
10 pGlu-Ala-Asp-(benzil· -Cys)-Lys Glu: 1.00; 95 %
Asp: 1.00; Cys: 1.13;
Lys: 0.97; Ala: 0.97
1 1 pGlu-Ala-Asp-Cys-Lys Glu: 1.08; Asp: 0.95; 98 %
Cys: 0.99; Lys: 1.03;
Ala: 0.94
12 pGlu-D~Ala~Asp-Cys-Lys Glu: 1.10; Asp: 0.95; 98 %
Cys: 0,89; Lys: 1.03;
Ala: 0.92
13 Gln~Glu-Asp-Cys-Lys Glu: 2.00; Asp: 0.98; 97 %
Cys: 0.81; Lys: 1.16
14 pGlu-GIu~Asp~Cys-Gly NAV DATU 88 %
'15 pGlu-GIu-Asp- (2“plričLiltio-Cys )-Lys NAV DATU 97 %
16 pGlu-Gly-Asp-(benzil- -Cys)-Lys Glu: 1 .00; 98 %
Asp: 1.00; CyS: 1.16;
• Lys: 0.99; Gly: 1 .04
17 pGlu-Glu-Glu-(benzil- •Cys) ~Lys Glu: ; 3.00; 93 %
Cys: '1.1 ; Lys: 1 .0
18 pGlu-Gly~Asp-Plie-Lys Glu: 1.00; Asp: 1.00; 99 %
Gly: 1.00; Phe:' 1 .00;
Lys: 1 .00
19 pGlu~Gly~Asn~Cys-Lys Glu: 2.10; Asp: 1 .00; 70 %
- Cys: 1.00; Lys: 1 .00
20 pGlu-GIn-Asn-Cys-Lys Glu: 2.06; Asp: 0.94; 75 %
Cys: 1.01; Lys: 0.99
21 pGlu-Glu-Asp-Ser-Lys NAV DATU >92 %
22 pGlu-Gly-Asp-Cys-Lys NAV DATU >95 %
23 pGlu-Asp-Asp-Cys-Lys Glu: 1.92; Asp: 1.08; 100 %
Cys: 1.02; Lys; 1 .00
2.4 pGlu-Asp-Asp-Cys-Arg Glu: 1.96: Asp: 1.12; 99 %
Cys: 1.00; Arg: -
- 20 TABULA (turpinājums)
Piemērs__________Aminoskābju analīze Tīrība(AŽH)
25 Glu-GIu-Asp-Cys-Lys Glu: ·2.00: Asp: 0.98; 97 %
Cys: 0.81 ; Lys: 1.10
26 Pro-Glu-Asp-Cys-Lys Glu: 0.99; Asp: .1.04; 98 %
Cys: 1 .01 ; Lys: 0.99;
Pro: -
27 pGlu-Glu-Glu-Gys-Arg Glu: 2.93; Cys: 1 .01 ; 100 %
.Arg: 1 .03
28 Ser-Glu-Glu-Glu-Cys-Arg Glu: 2.98; Ser: 0.97; 95 %
/ Cys: 0.98; Arg; 1.08
29 Ser-Gln-Glu-Glu-Cys~Arg Glu: 2.96; Ser: 0.96; 98 %
Cys: 0.96; Arg: 1.11
Peptīdī identificēti ar PSH, AŠH un aminoskābju analīzes metodēm.
3O.plemēx*s pGlu- Glu - Asp - Ser - Lyš - OH
Peptīdu sintezē pilnīgi automātiskā peptīdu sintezatorā LKB Biolynx 4.170, veicot monitoringu UV apgabalā pie 304 nm. PMOC izmanto īslaicīgai N-aizsardzībai un kā UV indikatoru. C-gala aminoskābi saista ar polimēru ar skābes labila indikatora anm palīdzību.
Standarta metodika:
Saistīšana ar recirkulāciju 30 min
Mazgāšana ar DMP 10 min
Aizsardzības noņemšana ai' 20 % piperidīna šk. BMP 10 min
Mazgāšana ar DMP 10 min
C-gala aminoskābi aktivē kā simetrisko anhidrīdu ar DCK un pēc tam saista ar polimēru katalizatora N,N-dimetilaminopirldīna klātbūtnē. Pēc 50 min ilgas recirkulācijas tālāk visā sintēzes gaitā izmanto standarta metodiku.
Izmantojamie aminoskābju atvasinājumi:
PMOC - Lys(S-N-BOC) - OH
PMOC - Ser(O-tBu) - OBBH
PMOC - Āšp((3-tObu) - OPfP
PMOC - Glu(V-tOBu) - OP„P i pGlu - OPCIP
Pēc tam, kad pilnīgi aizsargātais peptīds pēdējo reizi mazgāts, polimēru mazgā ar dietllēteri un žāvē gaisā. No peptīda noip.em visa3 aizsarggrupas un to atdala no polimēra vienas operācijas laikā, 1 stundu apstrādājot ar 95 % TPE šķīdumu ūdenī. Pēc filtrēšanas, mazgāšanas ar TPE un izžāvēšanas iegūto peptīdu attīra kolonā RP 8 un eluē ar etanolu un 0.1 % TPE.
Iznākums: 44 %
Tīrība: Vairāk par 92 % (AŠH RP18, 214.nm)
Aminoskābju analīze: apmierinoša.

Claims (14)

IZGUDROJUMA FORMULA
1«^ O 6 f kur R , R , R , R , R un n ir tie paši, kas 1.p., un visās aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts 1.p. .
1.0 (kur n un m neatkarīgi ir 0 vai 1;
p un q neatkarīgi ir 1 vai 2;
R un R abi ir ūdeņraža atomi vai abi kopā veido oksogrupu;
1. Izmantot savienojumus ar formulu (I)
Ra - Rb - R° - Rd - (R®)n - Rf (I) kur Ra ir
Rb ir
R
R£
R
NH · ’CH-COCH„).
R NH-CH-CO(CHg)2
COR
-HN-CH-CO- .
(CH„) 1 %P COR° vai vai
-HN-ČHg-CO-HN-CH-COCH.
R° ir
-HN-CH-CO<S>Q
COR7
Rd ir
-HN-CH-COvai CH2SR
-HN-CH-COCH2-C6H5 vai
-HN-CH-COI
CHgOH
35 R ir
-NH-CH-CO' 9
R .
un lr
-MH-C.H-C0R vai
-NH-CH-COR
HN=C-NH, vai
-nh-ch2-cor
2. Izmantot savienojumus ar formulu (I), kas definēta 1.p. , izņemot pGlu - Āsp - Asp - Cys - Lys pGlu. - Glu - Asp - Cys. - Lys pGlu - Gln - Asp - Cys - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys - Gly - Lys
3. Savienojumi ar formulu (I), kas definēta 1.p. , kur 5
R ir palieka aminoskābei serinam vai peptīdam, kam C-ga.lā 10 ir serīns, un/vai R palieka aminoskābei glutamīnam vai peptīdam, kam N-galā ir glutamīns.
• '1
3 4
R un R abi ir ūdeņraža atomi vai abi kopā veido oglekļaoglekļa saiti;
R ir ūdeņradis vai aoilgrupa;
4. Savienojumi ar formulu (II)
Ra - Rb - R° - HN - CH - CO - (Re) - Rf (II)
I “ ' CHgSR' kur Ra, Rb, Rc, Re, un n ir tie paši, kas formulā (I), R1 1 ir alkil- vai aralkllgrupa, kura var saturēt vienu vai vairākus hidroksi-, amino- vai metliaizvletotājus, un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts 1.p.
5. Savienojumi ar formulu (III)
Ra - Rb - RC - HN - CH - C0 - (Re) -* R* (III)
I n CVC6H5 ’ '
5 kur R , R , R , R , R un n ir tie paši, kas 1 .p. , un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts 1.p. .
6. Savienojumi ar formulu (IV)
Ra - Rb - RC - HN - CH - C0 - (Re) - Rf (IV)
I n
CHg-SR c kur Ra, Rb. R°, Re, R^ un n ir tie paši, kas 1.p. , R^ ir metaboliski labila grupa, un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts 1.p. .
to, ka ievada efektīvu daudzumu savienojuma ar formulu (V), kas definēta 7.p. .
6 7
R un R neatkarīgi ir. hidroksigrupas vai aminogrupas;
R ir ūdeņradis, C2_g · ^γ_20 ara » kura var· saturēt vienu vai vairākus hidroksi-, amino- vai metoķsiaizvietotājus, vai metaboliski labila S-aizsargājoša grupa; .
peptīds, kura N-galā ir glutamīns;
izņemot alanīnu, kurš var būt D- vai L-formā, un glicīnu, visas minētās aminoskābju paliekas atrodas L-formā), lai pagatavotu ārstniecisku preparātu nehemopoētiskās šūnu proliferācijas inhlbēšanai.
7. Savienojumi ar formulu (V)
Ra - HN - CHg - CO - R° - Rd - (Re) - R£ (V). θ ο (X ©
8. Savienojumi ar formulu (VI)
9. Farmaceitiskas kompozīcijas, kas atšķiras ar to, ka satur kā aktīvo ingredientu vismaz vienu savienojumu pēc jebkura no 3.-Θ. punktiem vai tā fizioloģiski saderīgu sāli, kopā ar farmaceitisku nesējvielu vai pildvlelu^
10. Punktos 3-8 definēta savienojumā iegūšanas metode, kas atšķiras ar to, ka tiek iegūts norādītā savienojuma pilnīgi vai daļSji , aizsargāts atvasinājums un šo atvasinajumu pakļauj deprotekcijai.
10 Ra - Rb - R° - HN - CH - CO - (Re) - Rf (VI) |
CHgOH
Vs *f kur R , R , R , R , R un n ir tie paši, kas 1.p. , un visas aminoskābes ir tādā hirālā formā, kā norādīts 1. p. .
15 '
11. Cilvēka vai dzīvnieka nehomopoētiskās šūnu proliferācijas inhibēšanas metode, kas atšķiras ar to, ka ievada efektīvu daudzumu savienojuma ar formulu (I), kas definēta
I.p..
12. Cilvēka vai dzīvnieka šūnu proliferācljas inhibSšanas metode, kas atšķiras ax* to, ka ievada efektīvu daudzumu savienojuma ar formulu (I), kas definēta jebkurā no punktiem 3-G .
13. Cilvēka vai dzīvnieka šūnu proliferācijas un/vai lelkocitārās funkcijas inhibēšanas metode, kas atšķiras ar pGlu - Glu - Asp - Cys - Ala - Lys pGlu - Glu - Asp - Cys - LysNHg ,, kā šūnu proliferāoijas kontroles aģentus.
14. Cilvēka vai dzīvnieka epidermālās un/vai epiteliālās šūnu proliferācijas inliibešanas metode, kas atšķiras ar to, ka ievada efektīvu daudzumu savienojuma ai~ formulu (VI), kas definēta 8.p...
LVP-92-589A 1988-09-16 1992-12-30 Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation LV10108B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB888821785A GB8821785D0 (en) 1988-09-16 1988-09-16 Peptide compounds
PCT/EP1989/001071 WO1990002753A1 (en) 1988-09-16 1989-09-13 Peptide compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LV10108A LV10108A (lv) 1994-05-10
LV10108B true LV10108B (en) 1994-10-20

Family

ID=10643722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LVP-92-589A LV10108B (en) 1988-09-16 1992-12-30 Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation

Country Status (22)

Country Link
US (1) US5484770A (lv)
EP (2) EP0434718A1 (lv)
JP (1) JPH04500666A (lv)
KR (1) KR900701828A (lv)
CN (1) CN1041159A (lv)
AT (1) ATE110742T1 (lv)
AU (1) AU641366B2 (lv)
CA (1) CA1339947C (lv)
DE (1) DE68917837T2 (lv)
DK (1) DK39591A (lv)
ES (1) ES2058479T3 (lv)
GB (1) GB8821785D0 (lv)
GE (1) GEP19971041B (lv)
HU (2) HU208027B (lv)
IE (1) IE64181B1 (lv)
LT (1) LT3714B (lv)
LV (1) LV10108B (lv)
MY (1) MY104909A (lv)
NZ (1) NZ230654A (lv)
RU (1) RU2079509C1 (lv)
WO (1) WO1990002753A1 (lv)
ZA (1) ZA896980B (lv)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5620957A (en) * 1989-07-14 1997-04-15 Smithkline Beecham Corporation Hemoregulatory peptides
HU206372B (en) * 1990-09-03 1992-10-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing new oligopeptides which selectively inhibit proliferation of haemopoietic cells and pharmaceutical compositions comprising same
HU206374B (en) * 1990-09-03 1992-10-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing pentapeptide and its salts specifically inhibiting proliferation of epidermic cells, as well as pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient
TW222280B (lv) * 1991-11-26 1994-04-11 Smithkline Beecham Corp
IL104323A0 (en) * 1992-01-10 1993-05-13 Smithkline Beecham Corp Hemoregulatory peptides
GB9211674D0 (en) 1992-06-02 1992-07-15 Nycomed Bioreg As Peptide compounds
GB9211677D0 (en) 1992-06-02 1992-07-15 Nycomed Bioreg As Peptide compounds
GB9211668D0 (en) * 1992-06-02 1992-07-15 Nycomed Bioreg As Peptide compounds
GR1001502B (el) * 1992-11-26 1994-02-28 Smithkline Beecham Corp Αιμορυ?μιστικά πεπτίδια.
CN1034735C (zh) * 1993-01-02 1997-04-30 史密丝克莱恩比彻姆公司 血调节肽
US5521284A (en) * 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
CN1403474A (zh) * 2001-09-05 2003-03-19 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 一种短肽及以其为活性成份的药物
RU2373220C2 (ru) 2002-07-23 2009-11-20 Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик (С.К.Р.А.С.) Аналоги грелина

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI77875C (fi) * 1982-11-26 1989-05-10 Nyegaard & Co As Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara peptider.
NO860752L (no) * 1985-06-26 1986-12-29 Bio Tech As Pentapeptider med cellevekstregulerende virkning og fremgangsmaate for fremstilling derav.
US4748154A (en) * 1985-12-24 1988-05-31 Takeda Chemical Industries, Ltd. Peptide derivatives, their production and use
GB8626539D0 (en) * 1986-11-06 1986-12-10 Nycomed As Peptide compounds

Also Published As

Publication number Publication date
DE68917837T2 (de) 1994-12-22
DK39591D0 (da) 1991-03-06
AU641366B2 (en) 1993-09-23
US5484770A (en) 1996-01-16
MY104909A (en) 1994-06-30
WO1990002753A1 (en) 1990-03-22
ES2058479T3 (es) 1994-11-01
JPH04500666A (ja) 1992-02-06
DK39591A (da) 1991-03-06
EP0359338A1 (en) 1990-03-21
AU4218389A (en) 1990-04-02
RU2079509C1 (ru) 1997-05-20
NZ230654A (en) 1991-10-25
EP0434718A1 (en) 1991-07-03
IE64181B1 (en) 1995-07-12
HU895788D0 (en) 1991-08-28
CN1041159A (zh) 1990-04-11
GEP19971041B (en) 1997-11-26
IE892954L (en) 1990-03-16
ATE110742T1 (de) 1994-09-15
DE68917837D1 (de) 1994-10-06
GB8821785D0 (en) 1988-10-19
CA1339947C (en) 1998-07-07
LTIP610A (en) 1994-12-27
EP0359338B1 (en) 1994-08-31
LT3714B (en) 1996-02-26
HUT58765A (en) 1992-03-30
KR900701828A (ko) 1990-12-04
LV10108A (lv) 1994-05-10
ZA896980B (en) 1990-06-27
HU208027B (en) 1993-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5604203A (en) Analogs of peptide YY and uses thereof
EP0309297B1 (en) Therapeutic peptides
JP2744910B2 (ja) ペプチド誘導体類
KR101319740B1 (ko) 시클릭 펩티드 ｃｘｃｒ４ 길항제
US4499081A (en) Peptide compounds
FI104252B (fi) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa
WO2004020462A1 (ja) Ｃｘｃｒ４拮抗薬およびその用途
RU2115659C1 (ru) Производные нонапептидов или их солей с фармацевтически приемлемыми кислотами, способ их получения и фармацевтическая композиция
PT2213680E (pt) Péptidos que possuem uma atividade farmacológica para o tratamento de distúrbios associados à migração de células alteradas, tais como o cancro
LV10108B (en) Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation
DK2473518T3 (en) Stabilized melanocortin ligands
NO313418B1 (no) Bombesinantagonistpeptider, farmasöytisk sammensetning inneholdende disse, samt anvendelse
NO177713B (no) Analogifremgangsmåte ved fremstilling av hemoreguleringspeptider
EP0333071A2 (en) Polypeptides, methods for their preparation, pharmaceutical compositions comprising them and use
CA2405704C (en) Bombesin analogs for treatment of cancer
JPS62209096A (ja) バソプレシン化合物
WO2014075137A1 (en) Peptides incorporating amino-substituted lactams for treatment of retinopathy
JPH03141298A (ja) 活性ペプチド
Schwartz Neurohypophyseal hormones: old and new slants on the relationship of chemical structure to biological activity
GB1568195A (en) Synthetc peptides
CA2008454A1 (en) Linear analog of biologically active mammalian grp or amphibian bombesin