FI104252B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa - Google Patents
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa Download PDFInfo
- Publication number
- FI104252B FI104252B FI911780A FI911780A FI104252B FI 104252 B FI104252 B FI 104252B FI 911780 A FI911780 A FI 911780A FI 911780 A FI911780 A FI 911780A FI 104252 B FI104252 B FI 104252B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- phe
- peptide
- leu
- ala
- gly
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 118
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 16
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 52
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 27
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- -1 β-Nal Chemical group 0.000 claims description 22
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 21
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 11
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000001326 naphthylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 9
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 7
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 7
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 125000003837 (C1-C20) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 101100516563 Caenorhabditis elegans nhr-6 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 125000006295 amino methylene group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N Phenanthrene Natural products C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000006193 alkinyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims 1
- 102100036519 Gastrin-releasing peptide Human genes 0.000 abstract description 40
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 abstract description 22
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 abstract description 19
- 238000009739 binding Methods 0.000 abstract description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 4
- PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N gastrin-releasingpeptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CNC=N1 PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004862 Gastrin releasing peptide Human genes 0.000 abstract 3
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 abstract 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 45
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 40
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 40
- QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 31362-50-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CNC=N1 QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 0.000 description 22
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N 0.000 description 19
- 108010061043 litorin Proteins 0.000 description 18
- OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N litorin Natural products C=1N=CNC=1CC(NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)C(C)C)C(=O)NC(C(=O)NC(CCSC)C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 13
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 13
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 8
- FORGMRSGVSYZQR-YFKPBYRVSA-N L-leucinamide Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(N)=O FORGMRSGVSYZQR-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 6
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- XKVSTTHNVBKSHX-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 5-fluoro-2-oxospiro[1h-indole-3,4'-piperidine]-1'-carboxylate Chemical compound C1CN(C(=O)OC(C)(C)C)CCC21C1=CC(F)=CC=C1NC2=O XKVSTTHNVBKSHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxob Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(C)C)C1=CN=CN1 RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N 0.000 description 5
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 5
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- ZJSQZQMVXKZAGW-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC2=C1N=NN2 ZJSQZQMVXKZAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical group [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002790 bombesin antagonist Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 4
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101800001638 Neuromedin-C Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N methylidenecarbene Chemical compound C=[C] SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YKPQUSLRUFLVDA-UHFFFAOYSA-N $l^{2}-azanylmethane Chemical compound [NH]C YKPQUSLRUFLVDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108010073466 Bombesin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 229940123804 Bombesin antagonist Drugs 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- AABPQXARUSDVOR-USNXXZSXSA-N (3S,4S)-4-amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)[C@@H](O)CC(O)=O.CC(C)C[C@H](N)[C@@H](O)CC(O)=O AABPQXARUSDVOR-USNXXZSXSA-N 0.000 description 1
- UQWNNUPJBDWRHC-UWVGGRQHSA-N (3s,4s)-4-amino-5-cyclohexyl-3-hydroxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 UQWNNUPJBDWRHC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JAJQQUQHMLWDFB-UWVGGRQHSA-N (3s,4s)-4-azaniumyl-3-hydroxy-5-phenylpentanoate Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JAJQQUQHMLWDFB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MLYMSIKVLAPCAK-LURJTMIESA-N (S)-3-Amino-5-methylhexanoic acid Chemical group CC(C)C[C@H](N)CC(O)=O MLYMSIKVLAPCAK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 4-Amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid Natural products CC(C)CC(N)C(O)CC(O)=O DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 101001071515 Homo sapiens Gastrin-releasing peptide Proteins 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000909637 Homo sapiens Transcription factor COE1 Proteins 0.000 description 1
- 101000841490 Homo sapiens Unique cartilage matrix-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FNRXUEYLFZLOEZ-UHFFFAOYSA-N Littorin Natural products CN1C(C2)CCC1CC2OC(=O)C(O)CC1=CC=CC=C1 FNRXUEYLFZLOEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100024207 Transcription factor COE1 Human genes 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020616 amino acid formula Nutrition 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLUJNGJDHCTUJY-UHFFFAOYSA-N beta-leucine Chemical compound CC(C)C(N)CC(O)=O GLUJNGJDHCTUJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 239000009937 cyclo 3 Substances 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFMHGFPPCYBUCK-HBUFSDLISA-N dnc012382 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCC)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H]1N(CC(Cl)C1Cl)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1C=1C=NC=CC=1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)C=1C=NC=CC=1)C1=CC=CC=C1 GFMHGFPPCYBUCK-HBUFSDLISA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000001730 gamma-ray spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 102000056782 human Ucma Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- FNRXUEYLFZLOEZ-FXUDXRNXSA-N littorine Chemical compound C([C@@H](O)C(=O)O[C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)N2C)C1=CC=CC=C1 FNRXUEYLFZLOEZ-FXUDXRNXSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108700024670 spantide Proteins 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000003890 substance P antagonist Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57572—Gastrin releasing peptide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
- C07K7/086—Bombesin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
104252
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa
Keksinnön tausta 5 Tämä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisen peptidin kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa, jolla peptidillä on kaava
Rl.
10 ^^A°-A1-Aa-Trp-A4-A5-A6-A7-W
jossa A° = Gly, Nle, α-aminovoihappo tai aminohapon Ala, Vai, 15 Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal D-isomeeri, tai se on poistettu, A1 = aminohapon p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp tai β-Nal D-isomeeri, 20 A2 = Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys, β-Nal, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, a-aminovoihap-po, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, 25 Trp, Cys tai β-Nal, A5 = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, o-aminovoihappo,-Met, Vai, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, OH, H tai CH3, Trp, Thr tai β-Nal, A6 = Sar, Gly tai aminohapon Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, 30 et, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal D-isomeeri, A7 = 1-metyyli-His, 3-metyyli-His tai His, ja W on 2 104252
Z, O
I II
-NH-CH-Rj-C-V (I) jossa R3 on CHR14- (CH2) nl, jolloin R14 on joko H tai OH ja nl 5 voi olla joko 1 tai 0, tai R3 on poistettu, ja Z1 on jonkin aminohapoista Gly, Ala, sykloheksyyli-Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryh-mä tai isopropyyli, sykloheksyylimetyyli, β-Nal, β-naftyy-10 limetyyli tai fenyylimetyyli, ja V on joko OR4 tai
N
"Nv 15 jolloin R4 on C1_20-alkyyli, C3.20-alkenyyli, C3.20-alkinyyli, fenyyli, naftyyli tai C7.10-fenyylialkyyli, ja R5 ja R6 ovat itsenäisesti H, C1.12-alkyyli, C7_10-fenyylialkyyli, alempi asyyli tai 20 N\
H
25 jossa R15 on C1.12-alkyyli , C7_10-fenyylialkyyli tai alempi asyyli,
Rn Z η Z2 O
Il I II
N-CH-R4-CH-C-V (II) 30 jossa R4 on CH2-NH, CO-CH2 tai CH2-CH2, ja Z3 ja Z2 ovat itsenäisesti jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, β-Nal, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro, HyPro tai syk- i 3 104252 loheksyyli-Ala tunnistusryhmä tai sykloheksyylimetyyli, ja V on joko ORs tai ^Re
5 N
^R7, jossa kukin ryhmistä R8, Rs, R6 ja R7 itsenäisesti on H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyy-10 lialkyyli, R9 Z3 O ^ Rio
I I II
-N-CH—C-N (III)
\R
K11 15 jossa Z1 on jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryhmä, ja R9, R10 ja RX1 kukin on itsenäisesti H, alempi alkyy-20 li, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, tai -N (IV) \r K13 ·. 25 jossa R12 ja R13 ovat kumpikin itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, edellyttäen, että kaavojen (I) - (IV) osalta mikä tahansa asymmetrinen hiiliatomi voi olla R, S tai raseeminen seos, 30 ja edelleen edellyttäen, että R3 ja R2 ovat kumpikin itsenäisesti H, 03_12 — alkyyli, C7.10-fenyylialkyyli, COE1( jos- * sa E3 on C1_20-alkyyli, C3_20-alkenyyli, C3.20-alkinyyli, fenyy-li, naftyyli tai C7.10-fenyylialkyyli, tai alempi asyyli, ja Ri ja R2 ovat sidottuja mainitun peptidin N-terminaaliseen 35 aminohappoon, ja edelleen edellyttäen, että kun joko Rx tai 4 104252 R2 on COElf toisen täytyy olla H, tai peptidin farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi. Uudet peptidit ovat hyödyllisiä esim. hyvänlaatuisten tai pahanlaatuisten kudoskasvannaisten hoidossa ja gastrointestinaalisissa 5 sairauksissa.
Sammakkoeläinten peptidi bombesiini, pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 [Anastasi et ai., Experientia 27:166 - 167 (1971)], on läheistä sukua nisäkkäiden gastriinia vapauttaville peptideille 10 (GRP) , esim. sianGRP:lle, H2N-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-
Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val -Gly-His-Leu-Met- (NH2) [McDonald et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun. 90:227 - 233 (1979)] ja ihmisen GRP:lie, H2N-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-15 Thr-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Vai-Gly-His-
Leu-Met- (NH2) . Bombesiinin on havaittu olevan kasvutekijänä useille ihmisen syöpäsolulinjoille, mukaanluettuna pienisoluinen keuhkokarsinooma (SCLC), ja se on todettu ihmisen rinta- ja eturauhassyövistä (Haveman et ai., toim. 20 Recent Results in Cancer Research - Peptide Hormones in Lung Cancer, Springer-Verlag, New York: 1986) . Useiden näistä syövistä tiedetään erittävän peptidihormoneja, jotka ovat sukua GRP .-lie tai bombesiinille. Niin muodoin bombesiinin antagonisteja on esitetty näiden syöpälaatujen *. 25 hoidossa käytettäviksi aineiksi.
Cuttitta et ai. osoittivat, että spesifinen mono-klonaalinen vasta-aine bombesiinille inhiboi in vivo karvattomaan hiireen siirrostetun ihmisen pienisoluisen keuh-kosyöpäsolulinjan kasvua [Cuttitta et ai., Cancer Survey 30 4:707 - 727 (1985)]. 3T3-hiiren fibroblasteissa, jotka ovat herkkiä bombesiinin mitoottiselle vaikutukselle, Zachary ja Rosengurt havaitsivat, että aine P -antagonisti (Spantide) toimi bombesiiniantagonistina [Zachary et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. (USA), 82:7616 - 7620 (1985].
35 Heinz-Erian et ai. vaihtoivat bombesiinin asemassa 12 ole van histidiinin D-fenyylialaniiniin ja havaitsivat bombe- 5 104252 siiniantagonistiaktiivisuutta marsun haiman hajotetuissa erityssoluryhmissä [Heinz-Erian et ai., Am. J. of Physiol. 252:G439 - G442 (1987)]. Rivier raportoi työstä, joka oli suunnattu vähentämään bombesiinin bioaktiivisen C-termi-5 naalisen dekapeptidin konformaation vapautta liittämällä molekyyliin sisäisiä disulfidisiltoja; Rivier mainitsi kuitenkin, että toistaiseksi bombesiinianalogit, joissa tämä modifikaatio oli, eivät osoittaneet mitään antagonis-tiaktiivisuutta [Rivier et ai., "Competitive Antagonists 10 of Peptide Hormones", Abstracts of the International Symposium on Bombesin-Like Peptides in Health and Disease, Rooma, Italia (Lokakuu, 1987)].
Lyhenteet (epätavalliset): pGlu = (pyroglutamaattihappo); 15
H,C—CH-COOH
2( I
H,C NH
V
II
0 20
Nle = H2N-CH-COOH (norleusiini) (ch2) 3-ch3 β-leu = β-homoleusiini • 25 γ-leu = gamma-homoleusiini D-Cpa = D-p-kloorifenyylialaniini HyPro = hydroksiproliini Nal = naftyylialaniini Sar = sarkosiini 30 Sta (statiini) = (3S, 4S)-4-amino-3-hydroksi-6-metyylihep-tanoiinihappo, ja sillä on kemiallinen rakenne: 6 104252 /CH3
CH
ίπ2 OH
nh2-ch—ch—ch2—co2h ; 5 AHPPA = {3S, 4 S) -4-amino-3 -hydroksi-5-fenyy1ipentanoi ini-happo ACHPA = (3S, 4S)-4-amino-5-sykloheksyyli-3-hydroksipenta-noiinihappo; 10 R = oikea (D) konfiguraatio; S = vasen (L) konfiguraatio; rasemaatti = R:n ja S:n yhtäsuuri sekoitus 1-metyyli-His, 3-metyyli-His = metyyli (CH3) -ryhmä typessä histidiinin asemissa 1 tai 3: ch2—n3h^ 15 / ,^CH2 CH—N1
HCH
NH2---CH---COOH
20 Yhteenveto keksinnöstä
Lineaarinen peptidi (se on ei-syklinen), joka on luonnossa esiintyvän, biologisesti aktiivisen sammakko-eläinbombesiinin tai nisäkkään gastriinia vapauttavan peptidin (GRP) analogi, jolla on aktiivinen kohta ja sitoutu-*. 25 miskohta, joka vastaa peptidin sitoutumisesta kohdesolun reseptoriin, peptidisidoksen pilkkoutumisen luonnossa esiintyvän bombesiinin tai GRP:n aktiivisessa kohdassa ollessa tarpeeton biologiselle aktiivisuudelle in vivo, ja jolla analogilla on yksi seuraavista muunnelmista: 30 (a) jäännöksen deleetio aktiivisessa kohdassa ja jään nöksen modifikaatio aktiivisen kohdan ulkopuolella, tai (b) yhden tai kahden jäännöksen korvaus aktiivisessa kohdassa synteettisellä aminohapolla.
Analogi kykenee toimimaan luonnossa esiintyvän pep- 35 tidin kompetitiivisena inhibiittorina siten, että se sitoutuu reseptoriin, mutta jonkin muunnelmista avulla siltä 7 104252 puuttuu luonnossa esiintyvän peptidin biologinen aktiivisuus in vivo.
Antagonistit aikaansaavien modifikaatioiden asemat määräytyvät luonnossa esiintyvän peptidin aktiivisen koh-5 dan sijainnin mukaan. Esimerkiksi lineaariset peptidit, joille ei-peptidisidoksen lisääminen kahden jäännöksen väliin, tai kahden luonnollisen aminohapon korvaaminen synteettisillä β- tai γ-aminohapoilla, tai C-terminaalisen jäännöksen deleetio ("des") ovat hyödyllisiä luomaan tai 10 lisäämään antagonistiaktiivisuutta ovat niitä, joiden aktiivisuus liittyy aminohappoketjun kahteen C-terminaali-seen jäännökseen. Siksi luonnossa esiintyvän peptidin, jolle keksinnön mukaisesti saatavat peptidit ovat analogeja, aktiivinen kohta sisältää mieluiten ainakin yhden 15 aminohapon peptidin karboksiterminaalisessa osassa, ja keksinnön mukaisesti saatava lineaarinen peptidi sisältää saman aminohapon karboksiterminaalisessa osassaan. Samoin, kun aktiivinen kohta sijaitsee luonnossa esiintyvän peptidin aminoterminaalisessa osassa, vastaavilla keksinnön 20 mukaisesti saatavilla analogeilla on modifikaatioita aminoterminaalisissa osissaan.
Edullisissa suoritusmuodoissa aktiivinen kohta sisältää vähintään yhden aminohapporyhmän, joka sijaitsee luonnossa esiintyvän peptidin karboksyyliterminaalisessa : 25 osassa, ja tämä aminohapporyhmä sijaitsee lineaarisen pep tidin karboksyyliterminaalisessa osassa.
Toisissa edullisissa suoritusmuodoissa aktiiviset kohdat sisältävät vähintään yhden aminohapporyhmän, joka sijaitsee luonnossa esiintyvän biologisesti aktiivisen 30 peptidin aminoterminaalisessa osassa, ja tämä aminohappo-ryhmä sijaitsee lineaarisen peptidin aminoterminaalisessa osassa.
Modifikaatiot voidaan tehdä alueelle, joka osallistuu reseptoriin sitoutumiseen, tai ei-sitoutuvalle alueel-35 le. Edullisesti keksinnön mukaisesti saatavat analogit • * 8 104252 ovat 25 % homologisia, kaikkein edullisimmin 50 % homologisia luonnossa esiintyvän peptidin kanssa.
Keksinnön mukaisilla analogeilla voi olla yksi modifikaatioista, jotka on annettu alla esitetyissä yleisis-5 sä kaavoissa; joko ei-peptidisidos peptidisidoksen asemasta aktiivisessa kohdassa olevan aminohapon ja seuraavan aminohapon välissä, tai statiini- tai AHPPA- tai ACHPA-ryhmä, tai β- tai γ-aminohappo yhden tai kahden luonnollisen aminohapon paikalla, tai C-terminaalisessa aminohapos-10 sa deleetio, jota voi seurata tai voi olla seuraamatta substituentin lisäys todelliseen C-terminaaliseen ryhmään, tai sellaisen N-terminaalisen ryhmän läsnäolo, joka ei ole niiden peptidien luonnollinen N-terminaalinen aminohappo, joista analogit on johdettu. (Statiinilla, AHPPA:11a ja 15 ACHPA:lla on on yllä määritelty kemiallinen rakenne. Siinä missä on käytetty statiinia, voidaan käyttää myös AHPPA:a tai ACHPA:a.)
Ei-peptidisidoksella tarkoitetaan, että kahden ryhmän välillä olevaan sidokseen osallistuva hiiliatomi pel-20 kistetään karbonyylihiilestä metyleenihiileksi, se on CH2-NH, tai vähemmän edullisesti, että hiiliatomiin sidotulla ryhmällä on metyleenihiili aminoryhmänsä paikalla, se on CO-CH2. [Yksityiskohtaisen esityksen ei-peptidisidosten kemiasta ovat esittäneet Coy et ai. (1988) Tetrahedron 44, 25 3:835 - 841, mikä liitetään tähän viitteeksi.]
Yksi luonnossa esiintyvän peptidin modifikaatio, jolla luodaan antagonisti, on molekyylin aminoterminaali-sessa päässä, joka voi olla elektronin luovuttava jäännös, se on, typpeä sisältävä aminohappo, kuten ne, jotka on 30 kuvattu aminoterminaalisiin asemiin alla kuvatuissa ylei-; sissä kaavoissa; esimerkiksi N-terminaalinen aminohappo, joka on A°, tai jos A° on poistettu A1, voi olla aromaattinen D-isomeeri. (Kun "D":tä ei ole ilmoitettu aminohapon konfiguraatioksi, tarkoitetaan L:ää.) Toinen modifikaatio 9 104252 on C-terminaalisessa ryhmässä, joka voi olla mikä tahansa alla kuvatuista "W"-ryhmistä.
Keksintö koskee sellaisen terapeuttisen peptidin valmistamista, joka sisältää seitsemästä kymmeneen 5 aminohapporyhmää, täydellisenä, ja joka on analogi yhdelle seuraavista luonnossa esiintyvistä peptideistä päättyen karboksipäähän, jossa on Met-jäännös: (a) litoriini, (b) neuromediini, (c) kymmenen aminohapon karboksiterminaalinen alue nisäkkäiden gastriinia vapauttavasta hormonista 10 ja (d) kymmenen aminohapon karboksiterminaalinen alue sam- makkoeläinbombesiinista.
Tarkemmin esitettynä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisen peptidin kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa, jolla peptidillä on 15 kaava
Ri
A°-A1-A2-Trp-A4-A5-A6-A7-W
20 jossa A° = Gly, Nle, α-aminovoihappo tai aminohapon Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02; OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal D-isomeeri, tai se .. 25 on poistettu, A1 = aminohapon p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp tai β-Nal D-isomeeri, A2 = Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys, β-Nal, His, Ι-ΒΟ metyyli-His tai 3-metyyli-His, : A4 = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, o-aminovoihap po, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal, A5 = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, a-aminovoihappo, 10 104252
Met, Vai, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, OH, H tai CH3, Trp, Thr tai β-Nal, A6 = Sar, Gly tai aminohapon Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, 5 Cys tai β-Nal D-isomeeri, A7 = 1-metyyli-His, 3-metyyli-His tai His, ja W on
Z, O
I tl -NH-CH-R3-C-V (I) 10 jossa R3 on CHR14- (CH2) nl, jolloin R14 on joko H tai OH ja nl voi olla joko 1 tai 0, tai R3 on poistettu, ja Zx on jonkin aminohapoista Gly, Ala, sykloheksyyli-Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, 15 N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryh- mä tai isopropyyli, sykloheksyylimetyyli, β-Nal, β-naftyy-limetyyli tai fenyylimetyyli, ja V on joko 0R4 tai
/RS
20 N
^Re· jolloin R4 on C^o-alkyyli, C3.20-alkenyyli, C3.20-alkinyyli, fenyyli, naftyyli tai C7_10-fenyylialkyyli, ja R5 ja R6 ovat ; 25 itsenäisesti H, C1.12-alkyyli, C7_10-f enyylialkyyli, alempi asyyli tai
^RlS
N
30 ^"H
jossa R1S on C^^-alkyyli, C7.10-f enyylialkyyli tai alempi asyyli,
R8 Zi Z2 O
li I )· 35 N—CH-R4-CH-C-V (II) 11 104252 jossa R4 on CH2-NH, CO-CH2 tai CH2-CH2, ja Z1 ja Z2 ovat itsenäisesti jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, β-Nal, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro, HyPro tai syk-5 loheksyyli-Ala tunnistusryhmä tai sykloheksyylimetyyli, ja V on joko ORs tai N ' 10 ^R7, jossa kukin ryhmistä R8, R5, R6 ja R7 itsenäisesti on H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyy-lialkyyli, 15
R-9 O ^RlO
-N— CH— C-N (III) ^ Rn 2 0 jossa Zx on jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile,
Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryhmä, ja R9, R10 ja R1X kukin on itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, tai 25 ^ Rl2 -N (IV)
V
3 0 jossa R12 ja R13 ovat kumpikin itsenäisesti H, alempi alkyy- : li, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, edellyttäen, että kaavojen (I) - (IV) osalta mikä tahansa asymmetrinen hiiliatomi voi olla R, S tai raseeminen seos, ja edelleen edellyttäen, että Rx ja R2 ovat kumpikin itse-35 näisesti H, C1_12-alkyyli, C7_10-fenyylialkyyli, COE1# jos- 12 104252 sa Εχ on C^Q-alkyyli, C3_20-alkenyyli, C3_20-alkinyyli, fenyy-li, naftyyli tai C7.10-fenyylialkyyli, tai alempi asyyli, ja Ri ja R2 ovat sidottuja mainitun peptidin N-terminaaliseen aminohappoon, ja edelleen edellyttäen, että kun joko R3 tai 5 R2 on COE1# toisen täytyy olla H, tai peptidin farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi.
W:n ollessa (I) terapeuttisella peptidillä on edullisesti kaava, jossa A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, 10 A1 = D-Phe, Ό-β-Nal tai D-Cpa, A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala, 15 A7 = His, edellyttäen, että kun R3 on CH2-CH2, Z3 on Leu:n tai Phe:n tunnistusryhmä, tai kun R3 on CH2, Z1 on P~Leu:n tai Leu:n tunnistusryhmä, tai kun R3 on CHOH-CH2, Z3 on Leu:n tunnistusryhmä, tai isopropyyli, sykloheksyylimetyyli, β-naftyy-20 limetyyli tai fenyylimetyyli, edellyttäen, että kun V on R_ / ^
N
\ o δ ' .. 25 sekä R5 että R6 on H.
Edullisesti peptidillä on yleinen kaava, jossa V on NHR6, kun R6 on NH2.
Edullisimmin terapeuttisella peptidillä on seuraava aminohappokaava: 3 0 D-p-Cl-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- β-1ιθη-ΝΗ2.
: W:n ollessa (II), terapeuttisella peptidillä on edullisesti kaava, jossa A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, A1 = D-Phe, Ο-β-Nal tai D-Cpa, 35 A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, • « 13 104252 A4 = Ala, A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala ja A7 = His, 5 ja jossa R4 on CH2NH, jokainen Zx on sykloheksyyl ime tyyli tai Leu:n tai Phe:n tunnistusryhmä, tai Z2 on Met:n, Leu:n tai Phe:n tunnistusryhmä.
Edullisimmin terapeuttisella peptidillä on Ό-β-Nal asemassa A1, jolloin sekä Z3 että Z2 ovat itsenäisesti joko 10 Leu tai Phe.
Esimerkkejä tällaisista peptideistä ovat: D-P-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|r [CH2NH] Leu-NH2 tai D- β -Nai -Gln-Trp-Ala-Val -Gly-His -Leui|f [CH2NH] Phe -NH2 .
Lisäksi terapeuttinen peptidi voi käsittää sen, 15 että R4 on CH2NH ja Z2:een liittynyt hiiliatomi on R-konfi-guraatiossa. Esimerkki tällaisesta peptidistä on D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|»CH2NH] -D-Phe-NH2.
Lisäksi peptidi voi käsittää seuraavan: A° tai A1 on D-aminohappo, V on OR4; esimerkiksi metyyliesterijohdannai-20 nen, kuten terapeuttinen peptidi D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-
Gly-His-Leu-Met-metyyliesteri.
W:n ollessa (III), peptidissä on edullisesti A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, A1 = D-Phe, ϋ-β-Nal tai D-Cpa, ;· 25 A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala, A7 = His, 30 edellyttäen, että on minkä tahansa aminohapoista Leu tai : D- tai L- p-X-Phe, jossa X H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3 tunnistusryhmä, ja R9, R10 ja Rn kukin on itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyy-lialkyyli.
» 14 104252
Edullisimmin peptidi käsittää sen, että Zx on Leu, R9 on H, ja sekä R10 että RX1 on alempi alkyyli. Esimerkkejä tällaisista peptideistä ovat: D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-etyyliamidi ja 5 D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-NH2.
W:n ollessa IV, terapeuttinen peptidi käsittää edullisesti sen, että A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, A1 = D-Phe, Ό-β-Nal tai D-Cpa, 10 A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala, A7 = His, 15 ja sekä R12 että R13 ovat H, ja sekä R3 että R2 ovat itsenäisesti H, alempi alkyyli tai alempi asyyli.
Edullisesti, kun joko R12 tai R13 on muu kuin H, A7 on His, A6 on Gly, A5 on Vai, A4 on Ala ja A2 on His.
Edullisesti tässä kuvattujen kaavojen mukaisten 20 terapeuttisten peptidien aminohapposekvenssit ovat vähintään 25 % homologisia luonnossa esiintyvän peptidin aminohapposekvenssin kanssa; edullisimmin tämä homologia on vähintään 50 %.
(Ei-peptidisidoksia, joista peptidisidos on pelkis-;· 25 tetty on merkitty tässä "i|i[CH2NH]" tai "ψ" .) Tämän keksinnön mukaisesti saatavat antagonistit ovat hyödyllisiä sairauksien hoidossa, jotka käsittävät pahanlaatuisten tai hyvänlaatuisten kudosten lisääntymisen, kuten syövän muodot, joissa bombesiinin sukuiset tai 30 GRP:n sukuiset aineet toimivat autokriinisinä tai para-\ kriinisinä mitoottisina tekijöinä, esim. maha-suolisto- kanavan syövät, haimasyöpä, paksusuolensyöpä, keuhkosyöpä, erityisesti pienisoluinen alatyyppi, tai rintasyöpä, tai arteroskleroosin hoidossa ja gastrointestinaalisten kudos-35 ten häiriöissä, jotka liittyvät mahalaukun ja haiman eri- • » 15 104252 tykseen ja liikkuvuuteen, esimerkiksi estämällä amylaasin eritystä, tai ruokahalun kontrolloijana.
Yllä annetuissa yleisissä kaavoissa, kun mikä tahansa R1-33 tai R15 on aromaattinen, lipofiilinen ryhmä, 5 in vivo aktiivisuus voi olla pitkäkestoinen, ja keksinnön mukaisesti saatavien yhdisteiden vapauttamista kohdekudok-seen voidaan edistää.
a-aminohapon tunnistusryhmä on atomi tai atomiryh-mä, muu kuin a-karbonyylihiiliatomi, a-aminotyppiatomi tai 10 H-atomi, liittyneenä asymmetriseen a-hiiliatomiin. Esimerkein kuvattuna, alaniinin tunnistusryhmä on CH3, valiinin tunnistusryhmä on (CH3)2CH, lysiinin tunnistusryhmä on H3N+ (CH2)4 ja fenyylialaniinin tunnistusryhmä on (C6H6)CH2. β- tai γ-aminohapon tunnistusryhmä on analoginen atomi tai 15 atomiryhmä, joka on vastaavasti liittyneenä β- tai γ-hii-liatomiin. Kun aminohapon tunnistusryhmää ei ole määritelty, se voi olla o, β tai γ.
Muut keksinnön piirteet ja edut tulevat ilmeisiksi seuraavasta edullisten suoritusmuotojen kuvauksesta ja 20 patenttivaatimuksista.
Edullisten suoritusmuotojen kuvaus
Kuvaamme ensin lyhyesti piirrokset.
Piirrokset
Kuvio 1 on sarja luonnossa esiintyvien peptidien ;· 25 aminohapposekvenssejä, joille keksinnön mukaisesti saata vat peptidit ovat analogeja.
Kuvio 2 on kaavio, joka esittää bombesiinianalogin D-Phe6BN(6-l3)metyyliesterin injektion vaikutuksen bombe-siinilla stimuloituvan haiman amylaasin määritykseen.
30 Kuvaamme nyt keksinnön mukaisten, edullisten suori- • tusmuotojen rakenteen, synteesin ja käytön.
Rakenne
Keksinnön mukaisesti saatavilla peptideillä on kaikilla ei-peptidisidos vähintään yhdessä osoitetuista 35 asemista, lukuunottamatta statiinilla korvattuja analogeja ja β-leurta, kuten stae-desLeue-Met -litoriinilla.
» 16 104252
Ei-peptidisidoksella tarkoitetaan, että kahden ryhmän väliseen sidokseen osallistuva hiiliatomi on pelkistetty karbonyylihiilestä metyleenihiileksi . Peptidisidoksen pel-kistysmenetelmän, jolla saadaan tämä ei-peptidisidos, ovat 5 kuvanneet Coy et ai., US-patenttihakemus, sarjanumero 879 348, joka on saman hakijan, kuin tämä hakemus, ja täten liitetään tähän viitteeksi. Mikä tahansa litoriinian-tagonistien aminohapoista asemissa 0, 1, 2 ja 9 voidaan poistaa peptideistä, ja peptidit ovat yhä aktiivisia anta-10 gonisteina.
Keksinnön mukaisesti peptidit voidaan antaa käyttöön farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen muodossa. Esimerkkejä edullisista suoloista ovat sellaiset, joilla on terapeuttisesti hyväksyttävät orgaaniset hapot, esim. 15 etikka-, maito-, sitruuna-, omena-, askorbiini-, meripihka-, bentsoe-, salisyyli-, metaanisulfoni-, tolueenisulfo-ni tai pamiinihappo, samoin kuin polymeerihapot, kuten tanniinihappo tai karboksimetyyliselluloosa, ja suolat, joilla on epäorgaaniset hapot, kuten hydrohaliinihapot, 20 esim. suolahappo, rikkihappo tai fosforihappo.
Litoriinianalogien synteesi (peptidi ei keksinnön mukainen)
Litoriiniantagonistin pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|r [CH2NH] Leu-NH2 synteesi esitetään seuraavassa. Muut ;· 25 bombesiini-, litoriini-, neuromediini- tai GRP-antagonis tit voidaan valmistaa tekemällä soveliaat muutokset seu-raavaan synteesimenetelmään.
Ensimmäinen vaihe on välituotteen pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His (bentsyylioksikarbonyyli) -Leui|r[CH2NH] Leu-bents-30 hydryyliamiinihartsin valmistus seuraavalla tavalla.
·, Bentshydryyliamiini-polystyreenihartsi (Vega Bio- chemicals, Inc.) (0,97 g, 0,5 mmol) kloridi-ionimuodossa laitetaan seuraavan reaktiosyklin toteuttamaan ohjelmoidun Beckman 990B peptidisyntetisaattorin reaktiokammioon: (a) 35 metyleenikloridi; (b) 33 % trifluorietikkahappo (TFA) metyleenikloridissä (2 kertaa 1 ja 25 minuuttia, kumpi- 17 104252 kin) ; (c) metyleenikloridi; (d) etanoli; (e) metyleeniklo-ridi; ja (f) 10 % trietyyliamiini kloroformissa.
Neutraloitua hartsia sekoitetaan alfa-t-butoksikar-bonyyli(Boc)-leusiinin ja di-isopropyylikarbodi-imidin 5 kanssa (1,5 mmol kumpaakin) metyleenikloridissa 1 tunnin ajan, ja saatu aminohappohartsi viedään yllä kuvatun pesuohjelman vaiheiden (a) - (f) läpi. Boc-leusiinialdehydi (1,25 mmol), valmistettu Fehrentzin ja Castron, Synthesis, p.676 (1983) menetelmällä, liuotetaan 5 ml:aan kuivaa di-10 metyyliformamidia (DMF) ja lisätään hartsi-TFA-suolasus-pensioon, jonka jälkeen lisätään 100 mg (2 mmol) natrium-syanoborohydridiä [Sasaki ja Coy, Peptides 8:119 - 121 (1987); Coy et ai., id.]. Yhden tunnin sekoituksen jälkeen hartsiseoksen havaitaan olevan negatiivinen ninhydriini-15 reaktiossa (1 min), mikä osoittaa vapaiden aminoryhmien täydellistä derivatisoitumista.
Seuraavat aminohapot (1,5 mmol) liitetään sitten peräkkäin di-isopropyylikarbodi-imidin (1,5 mmol) läsnäollessa, ja saatu aminohappohartsi viedään pesu/suojauksen 20 poisto -vaiheiden (a) - (f) läpi samalla menettelytavalla kuin yllä: Boc-His(bentsyylioksikarbonyyli), Boc-Gly,
Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln (kytketty 6 M p-nitro-fenyyliesterin ylimääränä) ja pGlu. Valmistettu hartsi pestään sitten metanolilla ja ilmakuivataan.
25 Yllä kuvattu hartsi (1,6 g, 0,5 mmol) sekoitetaan anisolin (5 ml) ja vedettömän vetyfluoridin (35 ml) kanssa 0 °C:ssa ja sekotetaan 45 min. Ylimäärä vetyfluoridia haihdutetaan nopeasti kuivan typpivirran alla ja vapaa peptidi saostetaan ja pestään eetterillä. Raakapeptidi 30 liuotetaan pienimpään mahdolliseen määrään 2 M etikkahap-.· poa ja eluoidaan Sephadex G-25 -pylväässä (2,5 x 100 mm) (Pharmacia Fine Chemicals, Inc.). Fraktiot, jotka UV-ab-sorptiolla ja ohutkerroskromatografiällä (TLC) sisältävät pääyhdisteen, yhdistetään, haihdutetaan pieneen tilavuu- 18 104252 teen ja lisätään oktadekyylisilaani-silikapylvääseen (2,5 x 50 cm) (Whatman LRP-1, 15-20 μια mesh-koko) .
Peptidi eluoidaan lineaarisella 0 - 30 % asetonit-riiligradientilla 0,1 % trifluorietikkahapossa vedessä.
5 Fraktiot tutkitaan TLC:llä ja analyyttisellä korkean erotuskyvyn nestekromatografiällä (HPLC) ja ne yhdistetään, jotta saadaan suurin puhtausaste. Liuoksen toistetulla lyofilisoinnilla vedestä saadaan 60 mg tuotetta valkoisena kuohkeana j auheena.
10 Tuotteen havaitaan HPLC:llä ja TLC:llä olevan homo geeninen. Happohydrolysaatin aminohappoanalyysi vahvistaa peptidin koostumuksen. Leui|r [CH2-NH] Leu -sidoksen läsnäolo osoitetaan nopea-atomipommitusmassaspektrometrialla. pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phet|i [CH2NH] Leu-NH2 ja pGlu-Gln-15 Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|r [CH2NH] Leu-NH2 tai muut peptidit valmistetaan samanlaisilla saannoilla analogisella tavalla muuntamalla tarkoituksenmukaisesti yllä kuvattua menettelytapaa .
D-Phe^n, Leusij; [CH2NH] D-Phe9-litoriinin, D-Phe-Gln-20 Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui); [CH2NH] -D-Phe-NH2 :n kiinteät aasi- synteesi suoritettiin seuraavasti: ensin syntetisoitiin
Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His (tosyyli) -Leut|i [CH2NH] -D-Phe-bentshydryyliamiinihartsi.
Bentshydryyliamiini-polystyreenihartsi (Advanced . 25 ChemTech, Inc.) (1,25 g, 0,5 mmol) kloridi-ionimuodossa laitetaan kohdissa (a) - (f) yllä kuvatut vaiheet suorit tamaan ohjelmoidun Advanced ChemTech ACT 200 peptidisynte-tisaattorin reaktiokammioon.
Neutraloitua hartsia sekoitetaan Boc-D-fenyyliala-30 niinin ja di-isopropyylikarbodi-imidin kanssa (1,5 mmol kumpaakin) metyleenikloridissa 1 tunnin ajan ja saatu ami-nohappohartsi viedään yllä kuvatun pesuohjelman vaiheiden (a)-(f) läpi. Boc-ryhmä poistetaan sen jälkeen TFA-käsit-telyllä. Boc-leusiinialdehydi (1,25 mmol), valmistettu 35 Fehrentzin ja Castron menetelmän mukaan (1) , liuotetaan • 19 104252 5 ml:aan kuivaa DMF ja lisätään hartsi-TFA-suolasuspensi-oon, jonka jälkeen lisätään 100 mg (2 mmol) natriumsyano-borohydridiä (2,3). Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen hartsiseoksen havaitaan olevan negatiivinen ninhydriini-5 reaktiossa (1 min), mikä viittaa vapaiden aminoryhmien täydelliseen derivatisaatioon.
Seuraavat aminohapot (1,5 mmol) liitetään sitten peräkkäin samalla menettelytavalla: Boc-His(bentsyylioks-ikarbonyyli), Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln 10 (liitetty saman määrän hydroksibentsotriatsolia läsnäollessa) , Boc-D-Phe (liitetty saman määrän hydroksibentsotriatsolia läsnäollessa). Kuivauksen jälkeen peptidihartsi painoi 1,93 g.
Hartsi (1,93 g, 0,5 mmol) sekoitetaan anisolin 15 (5 ml) ja vedettömän vetyfluoridin (35 ml) kanssa 0 °C:ssa ja sekoitetaan 45 min. Ylimäärä vetyfluoridia haihdutetaan nopeasti kuivan typpivirran alla ja vapaa peptidi saoste-taan ja pestään eetterillä. Raakapeptidi liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään 2 M etikkahappoa ja eluoidaan 20 Sephadex G-25 -pylväässä (2,5 x 100 mm). Fraktiot, jotka uv-absorptiolla ja ohutkerroskromatografiällä sisältävät pääkomponentin, yhdistetään, haihdutetaan pieneen tilavuuteen ja lisätään Vydac oktadekyylisilaani (10 - 15 μΜ) -pylvääseen (2,5 x 50 cm). Tämä eluoidaan lineaarisella 25 gradientilla 15 - 45 % asetonitriiliä 0,1 % trifluorietik-kahapossa vedessä. Fraktiot tutkitaan ohutkerroskromatograf iällä ja analyyttisellä korkean erotuskyvyn nestekro-matografiällä ja yhdistetään suurimman puhtausasteen saavuttamiseksi. Liuoksen toistetulla lyofilisaatiolla ve-30 destä saadaan 120 mg tuotetta valkoisena, kuohkeana jauheena.
Muut peptidit, esim. D-p-Cl-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-LeuiliCHjNH] -D-Phe-NH2 voidaan syntetisoida käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa.
20 104252 Ι<βνιβψ[ΟΗ2ΝΗ] D-Phe9 litoriinin synteesi D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu\|r [CH2NH] -D-Phe-NH2:n kiinteäfaasisynteesi suoritettiin seuraavasti: ensin syntetisoitiin Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(tosyyli)-5 Leuijr [CH2NH] -D-Phe-bentshydryyliamiinihartsi .
Bentshydryyliamiini-polystyreenihartsi (Advanced
ChemTech, Inc.) (1,25 g, 0,5 mmol) kloridi-ionimuodossa laitetaan seuraavan reaktiosyklin toteuttamaan ohjelmoidun Advanced ChemTech ACT 200 peptidisyntetisaattorin reak-10 tiokammioon: (a) metyleenikloridi; (b) 33 % trifluorietik-kahappo (TFA) metyleenikloridissa (2 kertaa 1 ja 25 minuuttia, kumpikin); (c) metyleenikloridi; (d) etanoli; (e) metyleenikloridi; ja (f) 10 % trietyyliamiini kloroformissa .
15 Neutraloitua hartsia sekoitetaan Boc-D-fenyyliala- niinin ja di-isopropyylikarbodi-imidin kanssa (1,5 mmol kumpaakin) metyleenikloridissa 1 tunnin ajan ja saatu ami-nohappohartsi viedään yllä kuvatun pesuohjelman vaiheiden (a)-(f) läpi. Boc-ryhmä poistetaan sen jälkeen TFA-käsit-20 telyllä. Boc-leusiinialdehydi (1,25 mmol), valmistettu Fehrentzin ja Castron menetelmän mukaan (1) , liuotetaan 5 ml:aan kuivaa DMF ja lisätään hartsi-TFA-suolasuspensi-oon, jonka jälkeen lisätään 100 mg (2 mmol) natriumsyano-borohydridiä (2,3) . Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen 25 hartsiseoksen havaitaan olevan negatiivinen ninhydriini-reaktiossa (1 min), mikä viittaa vapaiden aminoryhmien täydelliseen derivatisaatioon.
Seuraavat aminohapot (1,5 mmol) liitetään sitten peräkkäin samalla menettelytavalla: Boc-His(bentsyylioks-30 ikarbonyyli), Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln (liitetty saman määrän hydroksibentsotriatsolia läsnäollessa) , Boc-D-Phe (liitetty saman määrän hydroksibentsotriatsolia läsnäollessa). Kuivauksen jälkeen peptidihartsi painoi 1,93 g.
21 104252
Hartsi (1,93 g, 0,5 mmol) sekoitetaan anisolin (5 ml) ja vedettömän vetyfluoridin (35 ml) kanssa 0 °C:ssa ja sekoitetaan 45 min. Ylimäärä vetyfluoridia haihdutetaan nopeasti kuivan typpivirran alla ja vapaa peptidi saoste-5 taan ja pestään eetterillä. Raakapeptidi liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään 2 M etikkahappoa ja eluoidaan Sephadex G-25 -pylväässä (2,5 x 100 mm). Fraktiot, jotka UV-absorptiolla ja ohutkerroskromatografiällä sisältävät pääkomponentin, yhdistetään, haihdutetaan pieneen tilavuu-10 teen ja lisätään Vydac oktadekyylisilääni (10 - 15 μΜ) -pylvääseen (2,5 x 50 cm). Tämä eluoidaan lineaarisella gradientilla 15 - 45 % asetonitriiliä 0,1 % trifluorietik-kahapossa vedessä. Fraktiot tutkitaan ohutkerroskromato-grafialla ja analyyttisellä korkean erotuskyvyn nestekro-15 matografiällä ja yhdistetään suurimman puhtausasteen saa vuttamiseksi. Liuoksen toistetulla lyofilisaatiolla vedestä saadaan 120 mg tuotetta valkoisena, kuohkeana jauheena .
Tuotteen havaitaan HPLC:llä ja TLCrllä olevan homo-20 geeninen. Happohydrolysaatin aminohappoanalyysi vahvistaa oktapeptidin koostumuksen. Leui|i [CH2-NH] Leu -sidoksen läsnäolo osoitetaan nopea-atomipommitusmassaspektrometrialla.
D-Phe1-Des-Met9 -litoriinin synteesi D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-NH2 :n kiinteäfaa-/ 25 sisynteesi suoritettiin seuraavasti:
Vaihe (1) : Bentshydryyliamiini-polystyreenihartsi (Advanced ChemTech, Inc.) (0,62 g, 0,25 mmol) kloridi-io-nimuodossa laitetaan seuraavan reaktiosyklin toteuttamaan ohjelmoidun Advanced ChemTech ACT 200 peptidisyntetisaat-30 torin reaktiokammioon: (a) metyleenikloridi; (b) 33 % tri-fluorietikkahappo (TFA) metyleenikloridissa (2 kertaa 1 ja 25 minuuttia, kumpikin); (c) metyleenikloridi; (d) etanoli; (e) metyleenikloridi; ja (f) 10 % trietyyliamiini kloroformissa.
22 104252
Neutraloitua hartsia sekoitetaan Boc-leusiinin ja di-isopropyylikarbodi-imidin kanssa (1,5 mmol kumpaakin) metyleenikloridissa 1 tunnin ajan ja saatu aminohappohart-si viedään yllä kuvatun pesuohjelman vaiheiden (a) - (f) 5 läpi. Seuraavat aminohapot (1,5 mmol) liitetään sitten peräkkäin samalla menettelytavalla: Boc-His(bentsyylioks-ikarbonyyli), Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln (liitetty 6 M ylimääränä p-nitrofenyyliesteriä) ja pGlu (liitetty hydroksibentsotriatsolin läsnäollessa). Kuivauk-10 sen jälkeen peptidihartsi painoi 0,92 g.
Vaihe (2): hartsi (0,92 g) sekoitetaan anisolin (5 ml), ditiotreitolin (200 mg) ja vedettömän vetyfluori-din (35 ml) kanssa 0 °C:ssa ja sekoitetaan 45 min. Ylimäärä vetyfluoridia haihdutetaan nopeasti kuivan typpivirran 15 alla ja vapaa peptidi saostetaan ja pestään eetterillä. Raakapeptidi liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään 2 M etikkahappoa ja eluoidaan Sephadex G-25 -pylväässä (2,5 x 100 mm). Fraktiot, jotka UV-absorptiolla ja ohutkerroskro-matografiällä sisältävät pääkomponentin yhdistetään, haih-20 dutetaan pieneen tilavuuteen ja lisätään Vydac oktadekyy-lisilaani (10 - 15 μΜ) -pylvääseen (2,5 x 50 cm). Pylvästä eluoidaan lineaarisella gradientilla 0 - 30 % asetonitrii-liä 0,1 % trifluorietikkahapossa vedessä. Fraktiot tutkitaan ohutkerroskromatografiällä ja analyyttisellä korkean . 25 erotuskyvyn nestekromatografiällä ja yhdistetään suurimman puhtausasteen saavuttamiseksi. Liuoksen toistetulla lyofi-lisaatiolla vedestä saadaan tuote valkoisena, kuohkeana jauheena; tämän tuotteen havaitaan HPLC:llä ja TLC:llä olevan homogeeninen. Happohydrolysaatin aminohappoanalyysi 30 vahvistaa peptidin koostumuksen.
D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-NH2 :n synteesi toteutettiin käyttäen samaa menetelmää, kuin yllä on kuvattu (0,62 g, 0,25 mmol bentshydryyliamiinihartsia vaiheessa (1), ja 0,92 g vaiheessa (2)).
104252 N-asetyyli-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-NH2: n synteesi suoritettiin käyttäen samaa menetelmää, kuin yllä on kuvattu, käyttäen 0,62 g (0,25 mmol) bentshydryyliamii-nihartsia vaiheessa (1) ja sekoittaen 0,92 g hartsia 5 anisolin kanssa vaiheessa (2) , paitsi että lopullinen Boc-ryhmä poistettiin ja hartsi asetyloitiin etikka-anhyd-ridillä metyleenikloridissa.
Sta8-Des-Met9-litoriinin synteesi (peptidi ei keksinnön mukainen) 10 Statiini, AHPPA tai ACHPA -jäännös voidaan substi- tuoida minkä tahansa kahden aminohapon paikalle peptidissä, kun peptidi sisältää vain peptidisidoksia. Esimerkiksi sta8-des Met9 -litoriini valmistettiin analogisella tavalla liittämällä ensin statiini hartsiin ja jatkamalla sitten 15 Boc-His(bentsyylikarbonyyli):n lisäyksellä. Statiini tai Boc-statiini voidaan syntetoida Richin et ai. menetelmän mukaan, Rich et ai. 1978, J. Organic Chem. 43; 3624; ja Rich et ai, 1980, J. Med. Chem. 23: 27, ja AHPPA ja ACHPA voidaan syntetoida Huin et ai. menetelmän mukaan, Hui et 20 ai. 1987, J. Med. Chem. 30: 1287; Schuda et ai., 1988, J. Org. Chem. 53:873; ja Rich et ai., 1988, J. Org. Chem. 53:869.
Peptidin BIM-26120 , pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-NH2 kiinteäfaasisynteesi suoritettiin käyttäen seuraa-. 25 via menettelytapoja, joissa alfa-t-butoksikarbonyylista- tiini (valmistettu Richin et ai. menetelmän mukaan, Rich et ai., J. Org. Chem. 1978, 43:3624) liitetään ensin me-tyylibentshydryyliamiini-polystyreenihartsiin. Asetylaa-tion jälkeen välituote p-Glu-Gln-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-30 (bentsyylioksikarbonyyli)-Sta-metyylibentshydryyliamiini-: hartsi valmistetaan. Synteettinen menetelmä, jota tässä valmistuksessa käytetään, on yksityiskohtaisesti seuraava: 1) Alfa-t-butoksikarbonyylistatiinin liittäminen me tyy 1 iben t shydryy li euni inihar t s i in 35 Metyylibentshydryyliamiini-polystyreenihartsi (Vega
Biochemicals, Inc.) (1,0 g, 0,73 mmol) kloridi-ionimuodos- 24 104252 sa laitetaan Vega 250C Coupler peptidisyntetisaattorin reaktiokammioon. Syntetisaattori oli ohjelmoitu toteuttamaan seuraavat reaktiot: (a) metyleenikloridi; (b) 10 % trietyyliamiini kloroformissa; (c) metyleenikloridi ja (d) 5 dimetyyliformamidi.
Neutraloitua hartsia sekoitetaan 18 tunnin ajan valmistetun aktiivisen esterin kanssa, joka on tehty alfa-t-butoksikarbonyylistatiinista (1,46 mmol), di-isopropyy-likarbodi-imidin (2 mmol) ja hydroksibentsotriatsolihyd-10 raatin (1,46 mmol) kanssa dimetyyliformamidissa 0 °C:ssa yhden tunnin ajan. Saatu aminohappohartsi pestään syntetisaattorissa dimetyyliformamidilla ja sen jälkeen mety-leenikloridilla. Hartsiseoksessa havaittiin Kaiser nin- hydriinitestillä (5 minuuttia) tässä vaiheessa statiinin 15 hartsiin liittymisen tasoksi 84 %.
Asetylaatio tehtiin sekoittamalla aminohappohartsia 15 minuutin ajan N-asetyyli-imidatsolin (5 mmol) kanssa metyleenikloridissa. Hartsin vapaiden aminoryhmien deriva-tisaatiota 94 - 99 % tasolle osoitettiin Kaiser ninhydrii-20 ni-testillä (5 minuuttia). Boc-statiini-hartsi pestään sitten metyleenikloridilla.
2) Loppujen aminohappojen liittäminen.
Peptidisyntetisaattori ohjelmoidaan toteuttamaan seuraava reaktiosykli: (a) metyleenikloridi; (b) 33% trif-. 25 luorietikkahappo (TFA) metyleenikloridissa (2 kertaa 5 ja 25 minuuttia, kumpikin); (c) metyleenikloridi; (d) iso- propyylialkoholi; (e) 10 % trietyyliamiini kloroformissa ja (f) metyleenikloridi.
Seuraavat aminohapot (2,19 mmol) liitetään sen jäl-30 keen peräkkäin di-isopropyylikarbodi-imidillä (4 mmol) yk-sin tai di-isopropyylikarbodi-imidillä (4 mmol) plus hyd-roksibentsotriatsolihydraatilla (1,47 tai 0,73 mmol) ja saatu peptidihartsi pestään syntetisaattorissa dimetyyli-formamidilla ja sen jälkeen metyleenikloridilla, ja sitten 25 104252 viedään yllä kuvatun pesu -ja suojauksenpoisto-ohjelman vaiheiden (a) - (f) läpi.
Boc-His (bentsyylioksikarbonyyli) (kytketty kaksinkertaisen määrän hydroksibentsotriatsolia läsnäollessa); 5 Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala ja Boc-Trp (kytketty ennalta muodostettuina hydroksibentsotriatsolin aktiivisina estereinä, jotka valmistettiin reaktiolla 0 °C:ssa yhden tunnin ajan saman määrän hydroksibentsotriatsolihydraattia kanssa); Boc-Gln ja pGlu (myös kytkettynä ennalta muodos-10 tettuina hydroksibentsotriatsolin aktiivisina estereinä, jotka valmistettiin reaktiolla 0 °C:ssa yhden tunnin ajan saman määrän hydroksibentsotriatsolihydraattia kanssa). Valmiiksi tehty peptidihartsi pestään sitten metanolilla ja ilmakuivataan.
15 Yllä kuvattua peptidihartsia (1,60 g, 0,73 mmol) sekoitetaan anisolin (2,5 ml), ditioerytreitolin (50 mg) ja vedettömän vetyfluoridin (30 ml) kanssa 0 °C:ssa yhden tunnin ajan. Ylimäärä vetyfluoridia haihdutetaan nopeasti kuivan typpivirran alla ja vapaa peptidi saostetaan ja 20 pestään eetterillä. Raakapeptidi liuotetaan 100 ml 1 M etikkahappoa ja liuos haihdutetaan alennetussa paineessa. Raakapeptidi liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään metanoli/vettä l/l ja trituroidan 10 tilavuudella etyyliasetaattia .
' 25 Trituroitu peptidi lisätään oktadekyylisilaani-si- likapylväseen (9,4 mm I.D. x 50 cm) (Whatman Partisil 10 ODS-2 M 9). Peptidi eluoidaan lineaarisella gradientilla 20-80 % 20/80 0,1 % trifluorietikkahappo/asetonitriiliä 0,1 % trifluorietikkahapossa vedessä. Fraktiot tutkitaan 30 TLCillä ja analyyttisellä korkean erotuskyvyn nestekroma-tografiällä (HPLC) ja yhdistetään suurimman puhtausasteen saavuttamiseksi. Liuoksen lyofilisoinnilla vedestä saadaan 77 mg tuotetta valkoisena, kuohkeana jauheena.
Muut yhdisteet, jotka sisältävät D-Cpa1, β-leu8, 35 desMet9 -litoriinia voidaan valmistaa kuten yllä on kuvattu • < 26 104252 ja testata agonisti- tai antagonistitehokkuutensa suhteen seuraavalla testiohjelmalla.
Vaihe 1
Peptidin stimuloiman [3H] -tyrnidiinin oton määritys 5 3T3-soluviljelmässä
Soluviljelmä
Swiss 3T3 solujen kantaviljelmiä kasvatetaan Dulbeccon munnetulla Eagles ravintoalustalla (Dulbecco's Modified Eagles Medium, DMEM), jota on täydennetty 10 % 10 vasikan sikiöseerumilla, kostutetussa 10 % CO2/90 % ilma -atmosfäärissä 37 °C:ssa. Tutkimuskäyttöä varten solut levitetään 24-kuoppaisiin ryhmälevyihin ja käytetään neljä päivää viimeisen alustanvaihdon jälkeen. Solut pidätetään solusyklin G1/G0 -vaiheeseen vaihtamalla seerumivapaaseen 15 DMEM:iin 24 tuntia ennen tymidiinin oton määritystä.
DNA-synteesimääritys
Solut pestään kahdesti 1 ml:lla DMEM (-seerumia), inkuboidaan sitten DMEM (-seerumin), 0,5 μΜ [metyyli3H] tymidiinin (20Ci/mmol, New England Nuclear) , bombesiinin 20 (3 nM) ja lopulta neljän eri konsentraation testiyhdistei- tä kanssa (1, 10, 100, 1 000 nM) 1,0 ml lopullisessa tilavuudessa. 28 tunnin inkuboinnin jälkeen 37 °C:ssa, määritetään [metyyli-3H] -tymidiinin liittäminen happoon liukenemattomiin pooleihin, kuten seuraavassa on esitetty. Solut 25 pestään kahdesti jääkylmällä 0,9 % NaClrlla (1 ml erissä) ja happoon liukoinen radioaktiivisuus poistetaan 30 minuutin (40C:ssa) inkuboinnilla 5 % trikloorietikkahapon (TCA) kanssa. Viljelmät pestään sitten kerran (1 ml) 95 % etanolilla ja tehdään liukoisiksi 30 minuutin inkuboinnilla 30 (1 ml) 0,1 N NaOH:n kanssa. Liukoiseksi tehty materiaali siirretään pulloihin, jotka sisältävät 10 ml ScintArta (Packard), ja radioaktiivisuus määritetään nestetuikespek-trometrialla.
27 104252
Vaihe 2
Pienisoluinen karsinooma (SCLC)
Bombesiinin stimuloiman [3H] -tymidiinin oton määritys 5 Soluviljelmä
Ihmisen solujen karsinoomasolulinja (NCI-H69) -viljelmiä (saatu American Type Culture Associationista) pidetään yllä RPMI 1640 -alustalla, jota on täydennetty 10 % vasikan sikiöseerumilla 10 % CO2/90 % ilmassa 37 °C:ssa. 10 Kaksikymmentäneljä tuntia ennen määritystä solut pestään seerumivapaalla alustalla ja levitetään 24-kuoppaisille ryhmälevyille.
DNA-synteesimääritys
Bombesiini (lnM), 0,5 μΜ [metyyli-3H] -tymidiini 15 (20 Ci/mmol, New England Nuclear) ja neljä konsentraatiota testattavista yhdisteistä (1, 10, 100, 1000 nM) lisätään viljelmiin, jotta saadaan lopullinen tilavuus 0,5 ml. 28 tunnin inkuboinnin jälkeen 37 °C:ssa solut kerätään GF/B -lasikuitusuodattimille ja DNA saoste jääkylmällä 20 TCA:lla. [3H] -tymidiinin liittyminen happoon liukenemattomiin DNA-fraktioihin määritetään nestetuikespektromet-rialla.
Vaihe 3
Peptidi-indusoitu pankreatiitti . 25 Näissä tutkimuksissa käytetään Sprague-Dawley koi- rasrottia (250 g). Testattava yhdiste tai 0,9 % NaCl annetaan s.c. 15 minuuttia ennen bombesiini-injektiota. Bombe-siini-injektiot annetaan s.c. annoksena 10 μg/kg, ja verinäytteet otetaan 1 t 30 min, 3 t ja 6 t. Plasman amylaasi-30 konsentraatio määritetään Pantrak Amylaase-testillä.
Vaihe 4 [125I] -gastriinia vapauttavan peptidin (GRP) sitoutumisen bombesiinireseptoreihin inhibitio in vitro
Membraaneja eri kudoksista (rotan aivot, rotan hai-35 ma, rotan aivolisäkkeen etulohko, SCLC, 3T3 solut) valmis- « 28 104252 teilaan homogenisoimalla 50 mM Tris-HCl:ssä, joka sisältää 0,1 % naudan seerumin albumiinia ja 0,1 mg/ml basitrasii-nia, mitä seuraa kaksi sentrifugointia (39 000 xg x 15 min, 4 °C:ssa), joiden välillä uudelleen suspendointi 5 tuoreeseen puskuriin. Määritystä varten näytteitä (0,8 ml) inkuboidaan 0,5 nM [125I]GRP:n ('2000 Ci/mmol, Amersham
Corp.) ja eri konsentraatioden testiyhdisteitä kanssa lopullisessa tilavuudessa 0,5 ml. 30 minuutin inkuboinnin jälkeen 4 °C:ssa sitoutumisreaktio lopetetaan nopealla 10 suodatuksella Whatman GF/C suodattimien läpi, jotka on esiliotettu 0,3 % vesipitoisessa polyetyleeni-imiinissä, jotta vähennetään epäspesifistä sitoutumista. Suodattimet ja putket pestään kolme kertaa 4 ml :11a jääkylmää puskuria, ja suodattimiin kiinnittynyt radioaktiivisuus laske-15 taan gammaspektrometrialla. Spesifinen sitoutuminen määritetään sitoutuneen totaali [125I]-GRP:n määränä, josta vähennetään 1 000 nM bombesiinin läsnäollessa sitoutuneen määrä.
Vaihe 5 20 Gastriinin vapautumisen inhibitio
Nukutettujen rottien mahat perfusoitiin suolaliuoksella, joka on kerätty yli 15 minuutin jaksoina mahanpor-tin kanyloinnilla, kun testipeptidiä on infusoitu reisi-laskimon läpi ajanjaksoilla nollasta 150 minuuttiin.
. 2 5 Vaihe 6
Kasvainten vastainen aktiivisuus in vivo NCI-H69 pienisoluiset keuhkokarsinoomasolut siirrettiin in vitro -viljelmistä siirrostamalla jokaiseen eläimeen viiden 75 cm2 kudosviljelmä-virtauspullon määrä 30 oikeaan kylkeen. In vitro NCI-H69 -solut kasvavat soluagg-: regaattisuspensiona. Siksi ei tehty mitään yritystä hajot taa soluaggregaatteja fysikaalisilla tai kemiallisilla tavoilla. Kasvaimen koko laskettiin kahden läpimitan keskiarvona, se on (pituus ja leveys/2) mm.
29 104252
Tulokset testipepti.di.en määrityksistä
Joukko bombesiinin tai GRP:n analogeja, joista jokainen sisälsi ei-peptidisidoksen tai statiini-, AHPPA-tai ACHPPA-jäännöksen, voidaan syntetisoida ja testata yhdellä 5 tai useammalla yllä kuvatuista vaiheen 1-6 määritysmenetelmistä; tulokset vaiheen 1 ja 2 testeistä on annettu taulukossa 1, joka on liitetty tähän. Taulukko 1 esittää ei-peptidianalogien kaavat ja tulokset [12SI] -GRP:n sitoutumisen 3T3-fibroblast ien bombesiinireseptoreihin ja viljel-10 tyjen 3T3-solujen bombesiinin stimuloiman [3H]tymidiinin oton in vitro -inhibitiolle. [T3 GRP-reseptori ja tymidiinin oton tulokset on esitetty IC50:nä (nM).] Taulukossa I annetaan myös tulokset erään toisen luonnossa esiintyvän peptidin, neuromediini C:n, jonka C-terminaaliset seitse-15 män aminohappoa ovat samat kuin bombesiinilla ja GRPLillä, ei-peptidisidoksen sisältäville analogeille. (Taulukossa I "litoriini" tarkoittaa 9 jäännöksen peptidianalogia tai sen johdannaista, kun taas "neuromediini-C" tarkoittaa 10 jäännöksen analogia tai sen johdannaista.) 20 Taulukossa I ei-peptidisidoksen paikkaa osoittaa symbolin ψ [CH2NH] paikka, se on i|r[CH2NH] on aina esitetty ennen aminohappoa, joka siinä peptidissä on sitoutunut siitä N-terminaaliseen aminohappoon ei-peptidisidoksella. Kun mitään aminohappoa ei ole spesifioitu "rakenteella", . 25 ei-peptidisidos yhdistää kaksi peptidiä, jotka on kuvattu jälkikirjoituksina annetuilla numeroilla.
Taulukosta I voidaan nähdä, että edullinen sijoituspaikka ei-peptidisidokselle litoriinianalogeissa on A8 -A9 -asemassa, kaksi aktiivisinta analogia (osoitettuna al-30 haisella GRP-reseptorin IC50-arvolla) ovat BIM-26100 (Phe8 [CH2NH]Leu9) jaBIM-26101 (Leu8 [CH2NH] Leu9) .
Lisäksi, kuten taulukossa I on kuvattu, BIM-26113 (D-Phe1, Leu8i|r [CH2NH] Leu9 ja BIM-26114 (D-Nal1, Leu8i|f [C-H2NH] Leu9) ovat aktiivisia 3T3 GRP -resep-35 torin sitomisessa ja tymiinin oton määrityksissä. Aivan » 30 104252 erityisesti BIM-26136 (D-Nal1, Leui|f [CH2NH] Phe9) , joka sisältää amino-ja karboksiterminaaliset aromaattiset ryhmät, jotka kykenevät muodostamaan hydrofobisia vuorovaikutuksia, on hyvin tehokas analogi. Lopuksi, kun statiini tai 5 β-leusiini korvaa litoriinin A8- ja A9- jäännökset, saadut analogit BIM-26120 ja BIM-26182 ovat myös tehokkaita antagonisteja. Taulukko I esittää myös, että neuromediini C -analogit, jotka sisältävät ei-peptidisidoksen ryhmien A9 ja A10 välillä, esim. BIM-26092, 26095, 26106 ja 26107, 10 ovat antagonisteja, kun ne testataan 3T3 GRP -reseptorilla ja tymidiinin oton määrityksillä.
Taulukossa I annetaan myös negatiiviset tulokset neuromediini C -analogeille, esim. BIM-26108. Siten ei-peptidisidoksen sijaintipaikan tässä annettuja ohjeita 15 tulisi käyttää yhdessä yllä kuvattujen rutiinimääritysme-netelmien kanssa, jotta selektoidaan hyödylliset antagonistit .
Kuvio 2 esittää bombesiiniantagonistin D-p-Cl-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|j [CH2NH] Phe-NH2 vaikutusta bom-20 besiinin stimuloimaan amylaasin eritykseen rotassa. Tulokset osoittavat, että tämä analogi on tehokas antagonisti; 5 nM analogia voi inhiboida amylaasin erityksen, jonka 0,5 nM bombesiinia on stimuloinut 150 minuuttia boluksen injektion jälkeen.
2 5 Käyttö
Keksinnön mukaisesti saatavia peptideitä voidaan antaa nisäkkäälle, erityisesti ihmiselle, yhdellä tavanomaisista tavoista (esim. oraalisesti, parenteraalises-ti, transdermaalisesti tai transmukosaalisesti) , jatkuvan 30 vapautumisen tarjoavassa muodossa käyttäen biohajoavia, biosoveltuvia polymeerejä, tai paikallisena antona (esim. kasvaimenvastaisen bombesiinin tapauksessa keuhkoihin) käyttäen misellejä, geelejä ja liposomeja.
Keksinnön mukaisesti saatavat bombesiiniantagonis-35 tit soveltuvat kaikkien sellaisten syövän muotojen hoita- 31 104252 miseen, joissa bombesiinin sukuiset aineet toimivat auto-kriinisinä tai parakriinisinä mitoottisina aineina, erityisesti ne soveltuvat pienisoluisen keuhkokarsinooman hoitamiseen. Peptidejä voidaan myös käyttää mahahapon eri-5 tyksen estämiseen ja GI-kanavan liikkeen häiriöihin, ekso-kriinisen haiman adenokarsinooman oireiden helpottamiseen ja/tai hoitamiseen ja näivetystautisten potilaiden ruokahalun parantamiseen. Peptidit voidaan antaa ihmispotilail-le annoksena 0,5 Mg/kg/päivä - 5 mg/kg/päivä. Joillekin 10 syövän muodoille, esim. pienisoluiselle keuhkokarsinoomal-le, edullinen annos parantavaa hoitoa varten on 250 mg/po-tilas/päivä.
·<
Taulukko I
32 104252
3T3 GRP
g resep- Tymidiinin tori otto
Tunnus _Rakenne_ IC 5 0 (nM) IC50( nM) BIM-26092 Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leum[CH2NFjLeu-NH2 j· ' t~> u 4 2 466 2q neuromeduni u SIM-26095 pGlu-Gln-Trp-Ala-V&l-D-Äla-Hi s-Leuiv t CHjNH ] Leu-NH2 litoriini x> 2623 1209 BIM-26100 pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-15 Pheψ[CH2NH]L·eu-NK2 litoriini 1! 23 26 Ξ IM—2 6101 pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-
Leui[CH2NH]Leu-NK2 litoriini 11 118 296 20 E IM-2 610 5 D-Ala-Asr.-Hi s-Trp-Al a-Vai- D-ALa-His-Leuvji[CH2CH]Leu-NH2 neuromediini C 11 107 107 ΞΙΚ-26106 desGlv-D-Ala-His-Tro-Ala-Val- . 25 D-Ala-His-Leu«i[CH2NH]Het-NH2 neuromediini C 11 4C1 354 EIK-2 6107 D-Pne-Hi s-Trp-Ala-Val-Gly-
Hl E-Leuu; [ CHjKH ] Leu-NH2 neuromediini C
33 1 0 4 2 5 2
Taulukko 1 (jatkuu) 3T3 GRP Tymidiinin resep- otto c tori ° Tunnus Rakenne IC50(nM) IC50(nM) BIM-2610 8 N-Ac-D-Ala-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-L.eui|j[CHjNH)Leu-NH2 neuromediini C 1 841 >1000 10 BIM-26113 D-?he-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-Hi s-Leuv(/ [ CH2NH ] Leu-NH2 litoriini 5jB 9 EIH-26114 D-Nal-C-ln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu*|)[CH,NH)Leu-NK_ litoriini 23,5 28 BIM-26120 pGiu-Glr.-Trp-Äla-Val-Gly-His-Sta-NH2 litoriini 1 150 165 20 BLM-26122 D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-C-ly-His-Leu-NHj litoriini 5,9 28,6 ΞΙΜ-26136 D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-25 Leum[CH_NH]Phe-NH2 litoriini 1,4 3,3 EIK-25182 D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- 0,88 4,77 3-Leu-N»2 litoriini peptidi ei keksinnön mukainen
Claims (20)
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen peptidin kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa, 5 jolla peptidillä on kaava Ri A° - A1 - A2 - Trp - A4 - A5 - A6 - A7 - W R2^ 10 jossa A° = Gly, Nle, α-aminovoihappo tai aminohapon Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal D-isomeeri, tai se 15 on poistettu, A1 = aminohapon p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp tai β-Nal D-isomeeri, A2 = Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys, β-Nal, His, 1-20 metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, a-aminovoihap-po, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal, A5 = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, a-aminovoihappo, : 25 Met, Vai, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, OH, H tai CH3, Trp, Thr tai β-Nal, A6 = Sar, Gly tai aminohapon Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, jossa X = F, Cl, Br, N02, OH, H tai CH3, Trp, Cys tai β-Nal D-isomeeri,
30 A7 = 1-metyyli-His, 3-metyyli-His tai His, ja . W on Z, O I H -NH-CH-R3-C-V (I) 35 jossa R3 on CHR14- (CH2) nl, jolloin R14 on joko H tai OH ja nl 35 104252 voi olla joko 1 tai 0, tai R3 on poistettu, ja Z1 on jonkin aminohapoista Gly, Ala, sykloheksyyli-Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryh-5 mä tai isopropyyli, sykloheksyylimetyyli, β-Nal, β-naftyy- 1imetyyli tai fenyylimetyyli, ja V on joko OR4 tai N 10 ^R,, jolloin R4 on C^Q-alkyyli, C3_20-alkenyyli, C3_20-alkinyyli, fenyyli, naftyyli tai C7.10-fenyylialkyyli, ja Rs ja R6 ovat itsenäisesti H, C1.12-alkyyli, C7_10-fenyylialkyyli, alempi 15 asyyli tai ^R1S N 20 jossa R15 on C1.12-alkyyli, C7.10-fenyylialkyyli tai alempi asyyli, Ro Zi Z2 o I I I II V 25 N-CH-R4-CH-C-V (II) jossa R4 on CH2-NH, CO-CH2 tai CH2-CH2, ja Z3 ja Z2 ovat itsenäisesti jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, β-Nal, p-X-Phe, jossa X = H, F, 30 Cl, Br, N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro, HyPro tai syk loheksyyli-Ala tunnistusryhmä tai sykloheksyylimetyyli, ja V on joko ORs tai 36 104252 /R‘ N ^R7, 5 jossa kukin ryhmistä Rg, R5, R6 ja R7 itsenäisesti on H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyy-lialkyyli, R9 Zx O R10 I I II
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, A1 = D-Phe, D-p-Nal tai D-Cpa, A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala,
20 A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala, A7 = His, ja W on (I), edellyttäen, että kun R3 on CH2-CH2, Z3 on aminohapon Leu : 2 5 tai Phe tunnistusryhmä, tai kun R3 on CH2, Z1 on aminohapon β-Leu tai Leu tunnistusryhmä, tai kun R3 on CHOH-CH2, Z1 on aminohapon Leu tunnistusryhmä, tai isopropyyli, syklohek-syylimetyyli, β-naftyylimetyyli tai fenyylimetyyli, edellyttäen, että kun V on 30 :· Z* N xr6. 3. sekä R5 että R6 on H. 38 104252
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa V on NHRg ja R6 on H.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, t u n- 5. e t t u siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaa va D-p-Cl-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-P-Leu-NH2.
5 A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, A6 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala, A7 = His, ja 10 W on (III), edellyttäen, että Z1 on jonkin aminohapoista Leu tai D- tai L- p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, N02, OH tai CH3, tun-nistusryhmä ja R9, R10 ja Ru kukin on itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylial- 15 kyyli.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu,
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa A1 on D-β-Nal ja Z1 ja Z2 ovat itsenäisesti joko Leu tai Phe.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaa- ; 25 va D- P-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|r [CH2NH] Leu-NH2.
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaava D-P-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leui|i [CH2NH] Phe-NH2.
9. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa R„ . on CH2-NH ja Z2:een liittynyt hiiliatomi on R-konfiguraa- tiossa.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla 35 on kaava D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu [CH2NH] -D-Phe-NH2. 39 104252
10 A1 = D-Phe, Ό-β-Nal tai D-Cpa, A2 = Gin, His, 1-metyyli-His tai 3-metyyli-His, A4 = Ala, A5 = Vai, A6 = Sar, Gly, D-Phe tai D-Ala,
15 A7 = His, ja W on (II), jossa R4 on CH2-NH, jokainen Z2 on sykloheksyyl ime tyyli tai aminohapon Leu tai Phe tunnistusryhmä, tai Z2 on aminohapon Met, Leu tai Phe tunnistusryhmä.
10 -N— CH—C-N (III) jossa Z1 on jonkin aminohapoista Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe, jossa X = H, F, Cl, Br, 15 N02, OH tai CH3, Trp, Cys, Met, Pro tai HyPro tunnistusryh- mä, ja R9, R10 ja RX1 kukin on itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, tai ^/-^12
20 -N (IV) jossa R12 ja R13 ovat kumpikin itsenäisesti H, alempi alkyyli, alempi fenyylialkyyli tai alempi naftyylialkyyli, ·’ 25 edellyttäen, että kaavojen (I) - (IV) osalta mikä tahansa asymmetrinen hiiliatomi voi olla R, S tai raseeminen seos, ja edelleen edellyttäen, että Rx ja R2 ovat kumpikin itsenäisesti H, C1.12-alkyyli, C7_10-f enyylialkyyli, COEj, jossa Ej on C-L^o-alkyyli , C3_20-alkenyyli, C3.20-alkinyyli , fenyy-30 li, naftyyli tai C7_10-fenyylialkyyli, tai alempi asyyli, ja , R1 ja R2 ovat sidottuja mainitun peptidin N-terminaaliseen aminohappoon, ja edelleen edellyttäen, että kun joko R3 tai R2 on COE^ toisen täytyy olla H, tai peptidin farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi, tunnet -35 t u siitä, että 37 104252 (a) C-terminaalinen aminohapporyhmä sidotaan kiinteään faasiin karboksyyliryhmänsä välityksellä, (b) C-terminaaliseen aminohapporyhmään kytketään valittu aminohappo peptidisidoksella, jolloin valitun aminohapon 5 funktionaalinen ryhmä, jota ei vaadita kytkemiseen, suoja taan ennen kytkemistä ja suojaus poistetaan sen jälkeen, (c) kiinteään faasiin sidotun peptidin N-terminaaliseen aminohapporyhmään kytketään peptidisidoksella toinen valittu aminohappo vaiheessa (b) kuvatulla tavalla, 10 (d) toistetaan vaihe (c), kunnes valitun koostumuksen omaava peptidi on muodostettu, ja (e) pilkotaan peptidi kiinteästä faasista ja modifioidaan pilkottua peptidiä edelleen, jos se on tarpeen.
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa A° = Gly, D-Phe tai se on poistettu, A1 = D-Phe, Ό-β-Nal tai D-Cpa,
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jossa Zx on Leu, R9 on H, ja R10 ja Rn kukin on alempi alkyyli.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaava D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-etyyliamidi.
14. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaava D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-NH2. • , „ 104252 40
Applications Claiming Priority (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US25799888A | 1988-10-14 | 1988-10-14 | |
| US25799888 | 1988-10-14 | ||
| US28232888 | 1988-12-09 | ||
| US07/282,328 US5162497A (en) | 1987-09-24 | 1988-12-09 | Bradykinin analogs with non-peptide bond |
| US31794189A | 1989-03-02 | 1989-03-02 | |
| US31794189 | 1989-03-02 | ||
| US37655589A | 1989-07-07 | 1989-07-07 | |
| US37655589 | 1989-07-07 | ||
| US39716989A | 1989-08-21 | 1989-08-21 | |
| US39716989 | 1989-08-21 | ||
| PCT/US1989/004616 WO1990003980A1 (en) | 1988-10-14 | 1989-10-13 | Therapeutic peptides |
| US8904616 | 1989-10-13 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI911780A0 FI911780A0 (fi) | 1991-04-12 |
| FI104252B true FI104252B (fi) | 1999-12-15 |
| FI104252B1 FI104252B1 (fi) | 1999-12-15 |
Family
ID=27540392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI911780A FI104252B1 (fi) | 1988-10-14 | 1991-04-12 | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0438519B1 (fi) |
| JP (1) | JP2919889B2 (fi) |
| KR (1) | KR900701827A (fi) |
| AT (1) | ATE165836T1 (fi) |
| AU (1) | AU638423B2 (fi) |
| DE (1) | DE68928667T2 (fi) |
| DK (1) | DK66391A (fi) |
| FI (1) | FI104252B1 (fi) |
| HU (1) | HU208439B (fi) |
| MC (1) | MC2144A1 (fi) |
| TW (1) | TW201754B (fi) |
| WO (1) | WO1990003980A1 (fi) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2877775A (en) * | 1957-12-23 | 1959-03-17 | Preston M Hall | Rotary type filing and abrading appliance |
| US5877277A (en) | 1987-09-24 | 1999-03-02 | Biomeasure, Inc. | Octapeptide bombesin analogs |
| AU618029B2 (en) * | 1987-11-02 | 1991-12-12 | Imperial Chemical Industries Plc | Polypeptide compounds |
| US6218364B1 (en) | 1988-06-20 | 2001-04-17 | Scott L. Harbeson | Fluorinated neurokinin A antagonists |
| US5830863A (en) * | 1988-06-20 | 1998-11-03 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Neurokinin A antagonists |
| CA2042027A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-03-16 | Arthur E. Bogden | Treatment of colon cancer |
| WO1991006563A1 (en) * | 1989-11-06 | 1991-05-16 | Farmitalia Carlo Erba S.R.L. | Reduced irreversible bombesin antagonists |
| US5834433A (en) * | 1990-07-26 | 1998-11-10 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Compounds and pharmaceutical uses of peptides of bombesin and GRP |
| ZA915740B (en) * | 1990-07-26 | 1992-05-27 | Merrell Dow Pharma | Peptides |
| US5369094A (en) * | 1990-11-29 | 1994-11-29 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Polypeptide bombesin antagonists |
| US5244883A (en) * | 1990-11-29 | 1993-09-14 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Nonapeptide bombesin antagonists |
| DE69221486T2 (de) * | 1991-05-23 | 1998-03-19 | Merrell Pharmaceuticals Inc., Cincinnati, Ohio | Bombesinanaloge |
| AU668909B2 (en) * | 1992-02-07 | 1996-05-23 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Phenylalanine analogs of bombesin |
| DE4320201A1 (de) * | 1993-06-18 | 1995-01-12 | Asta Medica Ag | Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation |
| FR2739553B1 (fr) * | 1995-10-06 | 1998-01-02 | Oreal | Utilisation d'antagonistes de la bradykinine pour stimuler ou induire la pousse des cheveux et/ou stopper leur chute |
| US6492330B1 (en) | 1996-08-16 | 2002-12-10 | National Institute Of Immunology | Antiangiogenic drugs |
| US6156725A (en) * | 1996-08-16 | 2000-12-05 | National Institute Of Immunology | Drug for the treatment of cancer |
| US7226577B2 (en) | 2003-01-13 | 2007-06-05 | Bracco Imaging, S. P. A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7611692B2 (en) | 2003-01-13 | 2009-11-03 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US8420050B2 (en) | 2003-01-13 | 2013-04-16 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7922998B2 (en) | 2003-01-13 | 2011-04-12 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7850947B2 (en) | 2003-01-13 | 2010-12-14 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| EP1624884A4 (en) | 2003-04-22 | 2009-08-05 | Ipsen Pharma | SOMATOSTATIN VECTORS |
| MX2009002492A (es) * | 2006-09-08 | 2009-08-28 | Bayer Schering Pharma Ag | Agentes que comprenden compuestos marcados con 18f y metodos relacionados. |
| EP2719392B1 (en) | 2008-06-12 | 2019-07-24 | Ipsen Bioinnovation Limited | Fusion proteins for use in the treatment of acromegaly |
| CA2726092A1 (en) | 2008-06-12 | 2009-12-17 | Syntaxin Limited | Suppression of cancers |
| GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
| EP2198878A1 (en) | 2008-12-18 | 2010-06-23 | University Of Miami | Polypeptide bombesin antagonists |
| CN116333041A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-06-27 | 湖南中晟全肽生化有限公司 | 一种激活grp受体的多肽化合物及其用途 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4207311A (en) | 1977-07-18 | 1980-06-10 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides having analgesic and thermoregulative properties |
| US4331611A (en) | 1979-12-21 | 1982-05-25 | International Flavors & Fragrances Inc. | Nitrile and uses of same in perfumes, colognes and perfumed articles |
| US4331661A (en) * | 1980-10-03 | 1982-05-25 | The Salk Institute For Biological Studies | Bombesin analogs |
| US4613586A (en) | 1984-04-19 | 1986-09-23 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Gastrin releasing peptide-like peptides |
| US4803261A (en) * | 1986-06-27 | 1989-02-07 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide |
-
1989
- 1989-10-13 WO PCT/US1989/004616 patent/WO1990003980A1/en not_active Ceased
- 1989-10-13 AT AT89912292T patent/ATE165836T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-10-13 HU HU896391A patent/HU208439B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-10-13 EP EP89912292A patent/EP0438519B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-13 AU AU44949/89A patent/AU638423B2/en not_active Ceased
- 1989-10-13 MC MC@@@@D patent/MC2144A1/xx unknown
- 1989-10-13 JP JP1511442A patent/JP2919889B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-10-13 DE DE68928667T patent/DE68928667T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-04-11 TW TW079102881A patent/TW201754B/zh active
- 1990-06-15 KR KR1019900701287A patent/KR900701827A/ko not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-04-12 DK DK066391A patent/DK66391A/da not_active Application Discontinuation
- 1991-04-12 FI FI911780A patent/FI104252B1/fi active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU896391D0 (en) | 1991-07-29 |
| HK1010785A1 (en) | 1999-06-25 |
| JP2919889B2 (ja) | 1999-07-19 |
| FI911780A0 (fi) | 1991-04-12 |
| MC2144A1 (fr) | 1992-02-19 |
| AU4494989A (en) | 1990-05-01 |
| DE68928667D1 (de) | 1998-06-10 |
| AU638423B2 (en) | 1993-07-01 |
| EP0438519A1 (en) | 1991-07-31 |
| DK66391D0 (da) | 1991-04-12 |
| EP0438519A4 (en) | 1991-10-30 |
| HU208439B (en) | 1993-10-28 |
| JPH04504406A (ja) | 1992-08-06 |
| WO1990003980A1 (en) | 1990-04-19 |
| FI104252B1 (fi) | 1999-12-15 |
| TW201754B (fi) | 1993-03-11 |
| DE68928667T2 (de) | 1998-10-01 |
| DK66391A (da) | 1991-06-14 |
| EP0438519B1 (en) | 1998-05-06 |
| HUT59420A (en) | 1992-05-28 |
| ATE165836T1 (de) | 1998-05-15 |
| KR900701827A (ko) | 1990-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI104252B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa | |
| AU648037B2 (en) | Therapeutic peptides | |
| JP2795449B2 (ja) | 治療用ペプチド | |
| US5877277A (en) | Octapeptide bombesin analogs | |
| US5723578A (en) | Peptide analogs of bombesin | |
| US5217955A (en) | Treatment of cancer with peptide analog of bombesin, grp, litorin or neuromedin | |
| HUT62604A (en) | Process for producing peptides for treating tissue proliferation and pharmaceutical compositions comprising same | |
| US6083915A (en) | Method for treating liver cancer | |
| RU2088592C1 (ru) | Терапевтические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли | |
| AU622123C (en) | Therapeutic peptides | |
| CA1340988C (en) | Therapeutic peptides | |
| IE900222A1 (en) | Therapeutic peptides | |
| HK1010785B (en) | Therapeutic peptides | |
| PT95057B (pt) | Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos | |
| HK1006947B (en) | Treatment of liver cancer |