PT95057B - Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos - Google Patents
Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos Download PDFInfo
- Publication number
- PT95057B PT95057B PT9505790A PT9505790A PT95057B PT 95057 B PT95057 B PT 95057B PT 9505790 A PT9505790 A PT 9505790A PT 9505790 A PT9505790 A PT 9505790A PT 95057 B PT95057 B PT 95057B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- ala
- phe
- methyl
- leu
- trp
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 151
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 60
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 58
- 102100036519 Gastrin-releasing peptide Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000004862 Gastrin releasing peptide Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 28
- PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N gastrin-releasingpeptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CNC=N1 PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 4
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 3
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 claims abstract 8
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 53
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 51
- GDFAOVXKHJXLEI-GSVOUGTGSA-N (2r)-2-(methylamino)propanoic acid Chemical compound CN[C@H](C)C(O)=O GDFAOVXKHJXLEI-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 42
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 31
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 31
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 28
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 claims description 28
- -1 Br Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 22
- OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N 0.000 claims description 18
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 17
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 108010061043 litorin Proteins 0.000 claims description 16
- OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N litorin Natural products C=1N=CNC=1CC(NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)C(C)C)C(=O)NC(C(=O)NC(CCSC)C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 13
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 10
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 8
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 7
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 claims description 7
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000002466 imines Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000001326 naphthylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 claims description 3
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 5
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004112 carboxyamino group Chemical group [H]OC(=O)N([H])[*] 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 46
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 35
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 35
- QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 31362-50-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CNC=N1 QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 0.000 description 32
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 20
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 8
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 8
- RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxob Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(C)C)C1=CN=CN1 RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- XKVSTTHNVBKSHX-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 5-fluoro-2-oxospiro[1h-indole-3,4'-piperidine]-1'-carboxylate Chemical compound C1CN(C(=O)OC(C)(C)C)CCC21C1=CC(F)=CC=C1NC2=O XKVSTTHNVBKSHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 6
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 6
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 101800001638 Neuromedin-C Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000002790 bombesin antagonist Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 4
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- ZJSQZQMVXKZAGW-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC2=C1N=NN2 ZJSQZQMVXKZAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 3
- 229940123804 Bombesin antagonist Drugs 0.000 description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 3
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073466 Bombesin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N fluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)CF QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-MRVPVSSYSA-N (2r)-2-amino-3-(4-chlorophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- FQRURPFZTFUXEZ-MRVPVSSYSA-N (2s)-2,3,3,3-tetrafluoro-2-(n-fluoroanilino)propanoic acid Chemical group OC(=O)[C@](F)(C(F)(F)F)N(F)C1=CC=CC=C1 FQRURPFZTFUXEZ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-3-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CN=C1 WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- UBNICIJPPXGPJB-INIZCTEOSA-N (2s)-4-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)[C@](CC(C)C)(C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C UBNICIJPPXGPJB-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- AABPQXARUSDVOR-USNXXZSXSA-N (3S,4S)-4-amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)[C@@H](O)CC(O)=O.CC(C)C[C@H](N)[C@@H](O)CC(O)=O AABPQXARUSDVOR-USNXXZSXSA-N 0.000 description 1
- UQWNNUPJBDWRHC-UWVGGRQHSA-N (3s,4s)-4-amino-5-cyclohexyl-3-hydroxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 UQWNNUPJBDWRHC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JAJQQUQHMLWDFB-UWVGGRQHSA-N (3s,4s)-4-azaniumyl-3-hydroxy-5-phenylpentanoate Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JAJQQUQHMLWDFB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MLYMSIKVLAPCAK-LURJTMIESA-N (S)-3-Amino-5-methylhexanoic acid Chemical group CC(C)C[C@H](N)CC(O)=O MLYMSIKVLAPCAK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutane Chemical group CC(C)C(C)C ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHBCDAHASFSLMJ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=CC2=NN(O)N=C21 PHBCDAHASFSLMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 4-Amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid Natural products CC(C)CC(N)C(O)CC(O)=O DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 101100294106 Caenorhabditis elegans nhr-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101001071515 Homo sapiens Gastrin-releasing peptide Proteins 0.000 description 1
- 101000841490 Homo sapiens Unique cartilage matrix-associated protein Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003180 amino resin Polymers 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 235000021407 appetite control Nutrition 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000805 composite resin Substances 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- RAABOESOVLLHRU-UHFFFAOYSA-N diazene Chemical compound N=N RAABOESOVLLHRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000071 diazene Inorganic materials 0.000 description 1
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000056782 human Ucma Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N methylidenecarbene Chemical compound C=[C] SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Antecedentes da Invenção presente invento refere-se a péptidos terapêuti. cos úteis, por exemplo para o tratamento da proliferação benã. gna ou maligna de tecidos, para desordens gastro-intestinais e para os diabetes.
A bombesina péptida dos anfibios, pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 (Anastasi e al., Experientia 27: 166-167 (1971), está estreitamente relacionada com os péptidos libertadores de gastrina dos mamíferos (GRP); por exemplo, o GRP porcino, E^N-Ala-Pro-Val-SerVal-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-AsnHis-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-ÍNB^) (McDonald et al., Biochem. Biophys. Res. Comun. 9():227-233 (1979)) e o GRP humano , H^N-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-LysMet-Tyr-Pro-Arg-Gly-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met(Nl·^). Verificou-se que a bombesina era um factor de crescimento para um certo número de linhas de célula do cancro humano, incluindo o carcinoma do pulmão de célula pequena (SCLC), e foi detectada no cancro humano da mama e da próstata (Haveman e al., eds.Recent Results in Câncer research Peptide Hormones in Lung Câncer, Springer-verlag, New York: 1986). Sabe-se que alguns desses cancros segregam hormonas pj^ ptidas relacionadas com o GRP ou a bombesina. Consequentemente, têm-se proposto antagonistas da bombesina para agentes de tratamento desses cancros.
Cuttida e al., demonstraram que um anticorpo monoclonal específico para a bombesina inibida, in vivo, o creíi cimento de uma linha de célula de cancro do pulmão de célula
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108^.1
pequena humano, xeno-enxertada em artos pelados (Cuttita e al., Câncer Survey 4:707-727 (1985). Em fibroblastos de muri. na 3T3, que respondem ao efeito mitótico da bombesina, Zacha ry e Rozengurt observaram que um antagonista da substância P (Espantida) actuava como um antagonista da bombesina (Zachary e al., Proc. Natl.Acad. Sei. (USA), 82:7616-7620 (1985)). Heinz-Erian e al. substituiram His na posição 12, na bombesina, por D-Phe, e observaram a actividade antagonista da bombesina em ácinos dispersos do pâncreas de cobaias (Heinjs -Erian e al., Am.J. of Physiol. 252:G439-G442 (1987). Rivier comunicou um trabalho orientado para a restrição da liberdade conforamcional do decapeptido C-terminal bioactivo da bom besina mediante a incorporação de pontes de dissulfeto intra_ moleculares; no entanto, Rivier mencionou que, até agora, os análogos da bombesina com essa modificação não conseguem apresentar qualquer actividade antagonista (Rivier e al., Compatitive Antagonists of Peptide Hormones em Abstracts of the International Symposium on Bombesin-Like Peptldes in Health and Disease, Roma, Itália (Outubro, 1987).
Abreviaturas (não comuns): ciclohexil-Ala = (ciclohexil alanina) Η2^
H„C grupo identificador
CH
H-C02H;
pGlu = H?C—CH-COOH (ácido piroglutâmico);
HOC NH 2\Z
(norleucina)
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^11
Pal = 3-piridil-alanina ^-Leu= β- homoleucina
T-Leu= gama - homoleucina
D-Cpa= D-p-clorofenilalanina
HyPro= hidroxiprolina
Nal = naftilalanina
Sar = sarcosina
F5-Phe= penta-fluoro-Fenilalanina
Sta (estatina) = ácido (3S, 4S)-4-amino-3-hidroxi-6-metilheptanoico, e tem a estrutura química:
CEL CHo
Mod. 71 -10000 ex. - 89/07
NH, y CH2 ,-Ah--CH—CH2—C02H;
Ah grupo identificador
AHPPA = ácido (3S,4S)-4-amino-3-hidroxi-5-fenilpentanóico,e tem a estrutura química:
grupo identificador
HC ψΗ hA CH
Ϊ
NH2-ÕH-CH-CH2-C-OH 0H
ACHPA = ácido (3S,4S)-4-amino-5-ciclohexil-3-hidroxipentanóico, e tem a estrutura química:
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1083-1
grupo identificador
Çh2 || nh2-ch-ch-ch2-c
OH
C-OH;
R = configuração direita (D); S = configuração esquerda (L); racemate = mistura igual de R e S
1-metil-His; 3-metil-His = grupo metilo (CHg) sobre azoto nas posições 1 ou 3 da Histidina:
CH
C
HCH
NHO—ílH— COOH
Sumário da Invenção presente invento apresenta, de uma forma geral.
um análogo linear (i.e., não cíclico) do péptido libertador da gastrina dos mamíferos (GRP) ou bombesina dos anfíbios biologicamente activos, tendo uma localização activa e uma lc^ calização de fixação responsável pela fixação do péptido a um receptor numa célula alvo; a clivagem de um cinculo péptido na localização activa da bombesina ou do GRP que ocorrem naturalmente é desnecessária para a actividade biológica in vivo . 0 análogo tem uma das seguintes modificações; (1) uma substituição de dois resíduos amino ácidos dentro da localize, ção activa por um resíduo amino ácido β ou amino ácido T;
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1083-1
(2) um vinculo não péptido em vez de um vinculo péptido entre; um resíduo amino ácido da localização activa e um resíduo am:. no ácido adjacente; (3) o desaparecimento de um amino ácido carboxil terminal do péptido, que é acompanhado pelo facto de; o amino ácido carboxil terminal ser de forma éster ou amino, ou (4) a alquilação do vinculo amino entre o penúltimo e o último amino ácidos carboxi terminais.
Em formas de realização preferidas, o análogo tem capacidade para actuar como inibidor competitivo do péptx do que ocorre naturalmente, por fixação ai receptor e, em virtude de uma das modificações, não apresenta a actividade biológica in vivo do péptido que ocorre naturalmente.
As localizações das modificações que dão origem aos antagonistas são determinadas pela situação da localização activa no péptido que ocorre naturalmente. Por exemplo, os péptldos lineares, para os quais a introdução de um vinculo não péptido entre os resíduos amino ácido carboxil terminal e adjacente, ou a substituição dos resíduos amino ácidos naturais carboxil terminal e adjacente por um resíduo amino b- ou T-, ou o desaparecimento (des) do resíduo amino ácido C-terminal são úteis para a criação ou aperfeiçoamento da actividade antagonista, são aqueles em que a actividade está associada com os dois resíduos amino ácidos C-terminal da cadeia de amino ácidos. Do mesmo modo, sempre que a localização activa esteja situada na porção terminal amino do péptido que ocorre naturalmente, os correspondentes análogos, de acordo com este invento, possuirão modificações nas suas porções amino terminais.
Em formas de realização preferidas, a localização activa inclui, pelo menos, um resíduo amino acido loca lizado na metade carboxil terminal do péptido biologicamente activo que ocorre naturalmente, e esse resíduo amino ácido encontra-se localizado na metade carboxil terminal do péptido linear.
Em formas de realização preferidas, as locali^ zações de fixação incluem, pelo menos, um resíduo amino áci5
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108jLl
do localizado na metade amino terminal do péptido biologicamente activo que ocorre naturalmente, e esse resíduo amino ácido encontra-se localizado na metade amino terminal do péptido linear.
Podem ser introduzidas modificações numa regiãc envolvida na fixação receptora ou numa região não fixadora.
De preferência, os análogos deste invento são 25% homólogos, mas, mais preferencialmente, 50% homólogos dos péptidos que ocorrem naturalmente.
Os análogos, de acordo com o invento, podem ter uma das modificações indicadas na fórmula genérica fornecida abaixo; seja um vínculo não péptido em vez de um vínculo péptido entre um resíduo amino ácido da localização activa e um resíduo amino ácido adjacente; seja um amino ácido sintético, como por exemplo, uma estatina, um AHPPA ou um ACHPA, um resíduo amino ácido β - ou U - em vez de dois resíduos amino ác^L dos naturais; seja o desaparecimento do resíduo amino ácido C-terminal, acompanhado pela adição de um substituinte ao gru po C-terminal existente e a presença de um resíduo N-terminal que não é o resíduo amino ácido N-terminal natural dos péptidos, de que os análogos são derivados. (Estatina, AHPPA e ACHPA têm as estruturas químicas acima definidas. Onde aqu:. se utilizar estatina, podem também ser utilizados AHPPA ou ACHPA).
Com vínculo não péptido quer-se significar que o átomo de carbono que participa no vínculo entre dois resíduos é reduzido a partir de um carbonil carbono para um mete leno carbono, isto é, CH2~NH; ou, menos preferencialmente, que CO-NH é substituído por qualquer um de entre CH2-S,
CH2-0, CH2-CH2, CH2~CO ou C0-CH2.(Uma descrição pormenorizada da química dos vínculos não péptidos é fornrcida em Coy e al. (1988) Tetrahedron 33, 3:835-841, aqui integrada como re ferência, em Tourwe (1985) Janssen Chim.Acta 3:3-15, 17-18, aqui integrada?como referência, e em Spatola (1983), Chemistry and Biochelistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, (B. Weinstein, ed.) M. Dekker, New York e Basel, pp. 267-357,
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10%ll
aqui integrada como referência).
Uma das modificações do péptido que ocorre naturalmente, pela qual se cria um antagonista, é a da extremidade amino da molécula, tal como as descritas para as posições amino terminais na fórmula genérica abaixo indicada; por exemplo, o resíduo amino ácido N-terminal, que é Αθ ou,se Αθ λ 1 0 1 2 estiver ausente, é A ou, se A e A estiverem ausentes, é A abaixo, pode ser um isómero D aromático, ou pode ser um resíduo amino ácido alquilado. Sempre que D não for designado como a configuração de um amino ácido, entende-se que é L; além disso, sempre que R ou S estejam designados na fórmula genérica, a forma D (R) ou L (S) de um amino ácido pode ocorrer em qualquer posição.) péptido terapêutico inclui entre sete e dez resíduos amino ácidos, inclusivé, e é um análogo de um dos se guintes péptldos que terminam na extremidade carboxi por um resíduo Met: (a) litorina; (b) a região carboxi terminal de dez amino ácidos do péptido libertador de gastrina dos mamíferos (GRP); e (c) a região carboxi terminal de dez amino áci dos da bombesina dos anfíbios. 0 péptido terapêutico tem a fórmula seguinte:
em que A0 = Gly, Nle, ácido o--aminobutirico, ou o isómero D de qualquer um de Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, 0H, H ou CH^), Trp, Cys, ou|i-Nal, ou está ausente;
= pGlu, Nle, ácido ^-aminobutirico, Ala, Vai, Gin, Asr, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02,
OH, H, ou CH^), Enj-Phe, Trp, Cys, Ser, ou®-Nal, ou está ausente;
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^.1
= pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, OH, H ou CH^), Trp, Cys,
P>-Nal, His, 1-metil-His ou 3-metil His;
A^ = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido o.-aminobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H,
H, ou CHg), Trp, Cys, ou 6-Nal;
0
A = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido <K-aminobutirico, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, 0H, H ou CHo), Trp, Thr ou β-Nal;
3
A = Sar, Gly,Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile,
Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H, H ou CH^), Trp, Cys ou P-Nal;
A7 = 1-metil His, 3-metil-His ou His;
em que é 0^20-(0^)^ ^20 ® ou ou e nl é de 1 ou de 0), ou está ausente; devendo, onde i A*· por F^-D-Phe ou Αθ por N-metil-DçAla, Z-^ ser o grupo identificador de qualquer um dos amino ácidos Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, NO2, 0H ou CHg), F^-Phe, Trp, Cys, Met, Pro, HuPro, ciclo-hexil-Ala ouô-Nal; devendo, onde A1 por diferente de F^-D-Phe ou A° por fiferente de N-metil-D-Ala, Z-^ ser apenas, F^-Phe; e V é, ou OR, , ou
R, \
R6 em que é qualquer um de entre Cj_2o alQuil°j C3-20 alcelino, C0_2Qalquinilo, fenilo, naftilo ou C^^fenllalquilo; e cada R^ e R^ é, independentemente, qualquer um de entre H, ^^-^alquilo, Cy_^gfenilalquilo, acilo inferior, ou 'R,
-N /K22
- 8 62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108&1 em que R22 θ qualquer um de entre H, Cj-^alquilo, Ογ_^θίβηΐ1 alquilo, ou acilo inferior; devendo, quando um de Rr ou RA 0 00 for -NHR99, o outro ser H; e desde que, se A estiver presen1 01. te, A não seja pGlu; e ainda desde que, se A ou A estive2 rem presentes, A não seja pGlu; e ainda desde que, quando
1 7
A estiver ausente e A for pGlu, R£ seja, obrigatoriamente,
H e R2 seja a porção de Glu que forma o anel de imina em pGlx. e ainda desde que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R^ e R2 sejam, independentemente, H, C-^-^alquilo, Cy_-^Qfenil alquilo, COE^ (em que Ej é Cj^galquilo, C^_2Qalcenllo, Cs-zQalquinilo, fenilo, naftilo ou Cy_jQfenilaqluilo), ou ac:_ lo inferior, e e R2 estejam fixados ao amino ácido termi nal N do referido péptido; e ainda desde que, quando um dos R^ ou R2 for COE|, o outro seja, obrigatoriamente, H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Numa forma de realização preferida, 0 pépti. do terapêutico tem a fórmula
| A° | = Gly, | D-Phe, ou está ausente; |
| A1 | = p-Glu, D-Phe, F„-D-Phe, D-Ala, D-^-Nal, D-Cpa ou D-Asn | |
| A2 | = Leu, | Gin, His, 1-metil-His ou 3-metil-His; |
| A4 | = Ala; | |
| A5 | = Vai; | |
| A6 | = Sar, | Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala ou D-Ala; |
| A7 | = His; | |
| è, | onde | for F^-D-Phe ou Αθ for N-metil-D-Ala, (1) Rg seja |
CH2 ou CI^-CH^, seja o grupo identificador de Leu ou Phe; ou (2) R^ seja CHOH-Cí^, Z^ seja o grupo identificador de Leu, ciclo-hexil-Ala ou Phe, e cada R^ e R^ seja H; devendo onde A^ fôr diferente de F^-D-Phè: ou Αθ fôr diferente de N-metil-D-Ala, Z-^ seja apenas F^-Phe; e onde V fôr NHR^, Rg seja NH2; e cada Rj e R2 sejam independentemente, H, alquilo inferior ou acilo inferior.
De preferência, o péptido terapêutico é da fórmula em que V é OR^, e R^ é qualquer um de C|_2Qalquilo,
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
O péptido terapêutico pode, também, compreender entre sete e dez resíduos amino ácidos, inclusivé, sendo os referidos péptidos um análogo de um dos seguintes péptidoí que ocorrem naturalmente e que terminam na extremidade carboxi por um resíduo Met: (a) litorina; (b) a região carboxi tei^ minai dos dez amino ácidos do péptido libertador de gastrina dos mamíferos; e (c) a região carboxi terminal de dez amino ácidos da bombesina dos anfíbios; sendo o referido péptido terapêutico da fórmula:
em que A0 = Gly, Nle, ácido o-aminobutirico, ou o isómero D de qua quer dos Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NC^, OH, H ou CHg), Trp, Cys ou&-Nal, ou está ausente;
A' = pGlu, Nle, ácido °<-aminobutirico, Ala, Vai, Gin, Asn,
Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Ci, Br, Νθ£> OH, H ou CHg), Fçj-Phe, Trp, Cys,Ser ouG>-Nal, ou está ausente ;
= pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, Νθ£, 0H, H ou CH^), Trp, Cys, β-Nal, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;
= Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido o--aminobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02,0H,
H ou CHg), Trp, Cys, ou &-Nal;
= Hln, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido a_-aminobutiri co, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, 0H, H ou CH3), Trp, Thr ou β-Nal;
= Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H, H ou CH^),
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
Trp, Cys ou ^-Nal;
A? = 1-metil-His, 3-metil-His ou His; (em que R^ é CE^-NH, CE^-S, CH2-O, CO-CH2, CH2-CO ou C^-C^, e ainda Z^e Z2, independentemente, podem sre 0 grupo identificador de qualquer um dos amino ácidos Gly, Ala, Vai, Leu, Ilc; Ser, Asp, Asn, Glu, 0-Nal, p-X-Phe (em que X = H, F,
Cl, Br, NO9, OH ou CH.,), Trp, Cys, Met, Pro, Hypro ou ciclo-hexil-Ala; devendo, onde Ax fôr Fg-D-Phe ou A fôr N-metil-D-Ala,Z| e Z2 poder ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e desde que, onde A^ fôr diferente de Fg-D-Phe ou A fôr diferente de N-metil-D-Ala, R^ seja obrigatoriamente, C^-O, e Z^ e Z2, independentemente, possam ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e V é, ou ORg, ou
onde cada um dos Rg, Rg, R^ e Ry é, independentemente , H, alquilo inferior, fenilalquilo inferior ou naftilalquilo in0 1 ferior;desde que, se A estiver presente, A não possa ser
1 2 pGlu; e desde que, se A ou A estiverem presnetes, A não possa ser pGlu; e ainda desde que, quando Αθ estiver ausente e A seja pGlu, R^ deva ser H e R2 tenha de ser a porção de Glu que forma o anel de imina no pGlu; e ainda desde que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S, ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R-^ e R2 sejam, inde pendentemente, H C^_^2alquilo> Cy_^Qfenilalquilo, COR^ (em que E^ é Cj^galquilo (g_2Qalcenilo, Cg_2Qalquinilo, fenilo, naf tilo ou Cy_-^Qfenilalquilo) ou acilo inferior, e R^ e R2 estejam ligados ao amino acido N terminal do referido péptido; e ainda desde que, quando um dos ou ^2 θθΕΐ» 0 °ϊ tro seja, obrigatoriamente, H ou um seu sal farmaceuticamen_ te aceitável.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108&1
......
Mod. 71 -10000 βχ. - 89/07
Em formas de realização preferidas o péptido terapêutico é da fórmula Αθ = Gly, D-Phe, ou está ausente;
A^ = p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, D- -Nal , D-Cpa ou ; D-Asn;
A = Leu, Gln,His, 1-metil-His ou 3-metil-His;
A^ = Ala;
A5 = Vai;
A^ = Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala ou D-Ala;
A7 = His;
e, onde A^ fôr F^-D-Phe ou Αθ fôr N-metil-D-Ala, e R^ fôr CH2-NH ou CH2-0, cada Z^ e Z2 é, independentemente, o grupo identificador de Leu ou Phe; devendo, onde A^ fôr diferente de F^-D-Phe ou Αθ fôr diferente de N-metil-D-Ala, ser, apenas CH2“O; e e Z2 podem independentemente, ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e cada R^ e R2 é, independentemente, H, alquilo inferior ou acilo inferior.
De preferência, o análogo é da fórmula em que R^ é CH2-NH, e o referido átomo de carbono está ligado a Z2 e é da dita configuração R.
péptido terapêutico pode, também, compreen der entre sete e dez resíduos amino ácidos, inclusivé, sendo o referido péptido análogo de um dos seguintes péptidos que ocorrem naturalmente, e que terminam na extremidade carboxi por um resíduo Met: (a) litorina; (b) a região carboxi terminal dos dez amino ácidos do péptido libertador de gastrina dos mamíferos; e (c) a região carboxi terminal dos dez amino ácidos da bombesina dos anfíbios; sendo o referido péptido da fórmula:
Rn
Rr em que Z4Í1
A°-A1-A2-Trp-AZí-A5-A6-A7-N-CH-C-N
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
Αθ = Gly, Nle, ácido -aminobutirico, ou o isómero D de quaj. quer um de Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH^), Trp, Cys ou
-Nal, ou está ausente;
A^ = pGlu, Nle, ácido -aminobutirico, Ala, Vai, Gin, Asn,
Leu, Ile,, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH. H ou CHg), F^-Phe, Trp, Cys, Ser, ou -Nal, ou está ausente ;
A2 = pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH^), Trp, Cys,
-Nal, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;
A^ = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido -aminobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH,
H ou CHq), Trp, Cys ou -Nal;
J
A = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido -aminobutir:.
co, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, 0H, H ou
GHn), Trp, Thr, ou -Nal;
A
A° = Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile,
Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, 0H, H ou CHg) Trp, Cys, ou -Nal;
A? = 1-metil-His, 3-metil-His ou His;
desde que, onde A1 fôr F^-D-Phe ou A° fôr N-metil-D-Ala, seja o grupo identificador de qualquer um dos amino ácidos Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, -Nal, Gin, p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, N02, 0H ou CH3), F^-Phe, Trp, Cys, Met, Pro ou HyPro; e desde que, onde A^ fôr diferen te de F^-D-Phe ou Ασ fôr diferente de N-metil-D-Ala, A seja o grupo identificador de F^-D-Phe; e cada Z2, e são, independentemente, H,alquilo inferior, fenilalquilo inferior ou naftilalquilo inferior; e ainda desde que, se Αθ estiver
0 presente, A não possa ser pGlu; e ainda desde que, se A ou
2
A estiverem presentes, A não possa ser pGlu; e ainda desde que, quando Αθ estiver ausente e A^ fôr pGlu, R^ seja H e R2 seja a porção Glu que forma o anel imina no pGlu; e ainda des de que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R^ e R2 se13
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108ÇL1
jam independentemente, H, C^_^2alquilo> Cy_jQfenilalquilo,
fenilo, naftilo ou Cy_^Qfenilalquilo) ou acilo inferior, e R| e R2 estejam ligados ao amino ácido terminal N do referido péptido, e ainda desde que, quando um dos R^ ou R2 fôr C0Ep o outro seja, obrigatoriamente, H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em formas de realização preferidas, o péptido terapêutico é da fórmula
Αθ = Gly, D-Phe, ou está ausente;
A = p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, D- -Nal, D-Cpa, ou
D-Asn;
= Leu, Gin, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;
= Ala;
= Vai;
= Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala ou D-Ala; a = His;
e, onde A^ fôr F^-D-Phe ou A^ fôr N-metil-D-Ala, Z-^ é o grupo identificador de qualquer um dos aminoácidos Leu, F^-Phe pi p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, N02, OH ou CH^), e desde onde A^ fôr diferente de F^-D-Phe ou Αθ fôr diferente de N-metil-D-Ala, Z^ apenas possa ser o grupo identificador de F^-Phe; e cada Z2, Z^ e são, independentemente, H, alquilo inferior, fenilalquilo inferior ou naftilalquilo inferior e cada R^ e R2 são, independentemente, H, alquilo inferior ou acilo inferior.
péptido terapêutico pode, também, compre.
ender entre sete e dez resíduos amino ácidos, inclusivé, sen do o referido péptido um análogo de um dos seguintes péptidos naturais que terminam na extremidade carboxi com um res.í duo Met; (a) litorina; (b) a região carboxi terminal de dez amino ácidos do péptido libertador da gastrina dos mamíferos e (c) a região carboxi terminal dos dez amino ácidos da bombesina dos anfibios; sendo o referido péptido da fórmula
R-
- 14 62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN ÍO^LI
em que a0 = Gly, Nle, ácido Λ-aminobutirico ou o isómero D de qua_l quer dos Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (en que X = F, Cl, Br, NO2, OH, H ou CHg), Trp, Cys, ou b-Nal, ou está ausente;
= pGlu, Nle, ácido o—aminobutirico, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO25 OH, H, ou CHg), F^-Phe, Trp, Cys, Ser, ou B-Nal, ou está ausente;
= pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2> OH, H ou CHg), Trp, Cys, β-Nal, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;
= Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido ^-arninobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02> OH,
H ou GHn), Trp, Cys, ou B-Nal;
3
A = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido <*--aminobutiri. co, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, OH, H ou CHn), Trp, Thr, ou B-Nal;
A = Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe, Cys ou &-Nal;
A2 = 1-metil-His, 3-metil-His ou His;
em que cada Z2Q e Ζ^θ são, independentemente, H, alquilo inferior, fenilalquilo inferior, neftilalquilo inferior; e des. de que, quando qualquer um dos Ζ£θ e Ζ^θ for diferente de H, A? seja His, A^ seja Gly, A^ seja Vai, A^ seja Ala, A2 seja
His, e quando qualquer um dos R. ou R9 fôr diferente de H, 1 Z 1
A seja Fçj-D-Phe; e ainda desde que tanto A seja F^-D-Phe como A^ seja N-metil-D-Ala, obrigatoriamente; e desde que, se 0 1
A estiver presente , A não possa ser pGlu; e ainda desde
1 2 que, se A ou A estiverem presentes, A não possa ser pGlu; e ainda desde que, quando Αθ estiver ausente e A^ fôr pGlu,
R^ seja H, e R2 seja a porção de Glu que forma o anel imina no pGlu; e ainda que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que ca
fenilalquilo, COE^ (onde E^ é C^_2Qalquilo, Cg_2Qalcenilo,
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
C^_2Qalquinilo, fenilo, naftilo ou enilalquilo), ou aci lo inferior, e R^ e R2 estejam ligados ao amino ácido N terminal do referido péptido; e ainda desde que, quando um dos R^ ou R2 fôr COEp o outro seja, obrigatoriamente, H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Em formas de realização preferidas, o péptido terapêutico é da fórmula
Αθ = Gly, D-Phe,, ou está ausente;
A
A7 e, = p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, ϋ-β-Nal, D-Cpa ou D-Asn = Leu, Gin, His, 1-metil-His, ou 3-metil-His;
= Ala;
= Vai;
= Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala ou D-Ala;
= His; onde cada Z são G; e cada R^ e R2 são, independei, temente, H, alquilo inferior ou acilo inferior; e desde que ou A1 seja F^-D-Phe, ou A° seja N-metil-D-Ala.
Noutras formas de realização preferidas, o aná logo é, pelo menos, 25% homólogo, mas preferencialmente, pele e Z30’ menos 50% homólogo com o péptido que ocorre naturalmente.
Péptidos preferidos, de acordo com este invente incluem p-Glu-Gln-Trp-Ala-Gly-His-estatina-amido;
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-fi’-Leu-NH2;
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-D-Val-D-Ala-His- B-Leu-NH2;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-metil-D-Ala-His-Leu-metilester; e D-F^-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-metilester.
Exemplos adicionais de péptidos de bombesina ot.
GRP são:
D-Ê-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- u fCH2NH 7Phe-NH2, D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-etilamida, p-Glu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-estatina-amido, D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu u /CH2NH ,7”D-Phe-NH2, D-Cpe. -G ln-Trp-Ala-Val-Gly-His-fr-Leu-NH2, D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-&-Leu-NH2, D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu u /CH2NH 7-Phe-NH2.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
São exemplos de péptidos preferidos D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-metil-D-Ala-His-Leu-metilester. D-F^-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-metilester.
(Vinculos não péptidos em que o cínculo péptido está reduzido são aqui simbolizados por U £CH2NH/ ou u.)
Os antagonistas deste invento são úteis para o tratamento de doenças que envolvem a proliferação maligna ou benigna dos tecidos, tais como todas as formas de cancro, onde substancias realcionadas com a bombesina ou o GRP actuan como factores autocrinos ou paracrino mitóticos; por exemplo cancros da região gastro-intestinal, cancro pancreático, can cro do colon, cancro do pulmão, particularmente o subtipo de cálula pequena, cancro da próstata ou da mama; ou para tratamento de arterosclerose e desordens dos tecidos gastro-intestinais relacionadas com as secreções gástricas e pancreáticas e com a motilidade; por exemplo, para provocar a depres são da secreção de amilase ou para controlo do apetite.
Nas fórmulas genéricas acima apresentadas, qualquer grupo R ou Z é um grupo aromático, lipofílico; a actividade in vivo pode ser de longa duração e a administra ção dos compostos do invento ao tecido alvo pode ser facilitada.
grupo identificador de um amino ácidoo-é o átomo ou grupo de átomos, diferentes do átomo de carbono *· -carbonilo, do átomo de azoto o--amino ou do átomo de H, li. gados ao átomo a—carbono assimétrico. Ilustrando com exemplos o grupo identificador de alanina é CH^, o grupo identificado:? de valina é (0Η^)2^Η, o grupo identificador de lisina é ΝβΝ+ (Cí^)^, θ θ grupo identificador de fenilalanina é (C^H^ I CH2. 0 grupo identificador de um amino ácido(3- ou X - é o aná. logo do átomo ou grupo de átomos fixados a, respectivamente, o átomo de carbono P- ouX-. Onde o grupo identificador de um amino ácido não fôr especificado, pode ser <χ_, β ou X .
Outras características e vantagens do invento tornar-se-ão mais claras a partir da descrição seguinte de formas de eralização preferidas do mesmo, e das reivindica17
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
ções.
Descrição das Realizações Preferidas
Primeiramente, descrevem-se, de forma resumida os desenhos.
Desenhos
A figura 1 é um gráfico das curvas de crescimento de um tumor para os xeno-enxertos (NCI-H69) do cancro do pulmão de célula pequena.
A figura 2 é uma série de sequências de amino ácidos dos péptidos que ocorrem naturalmente, dos quais os péptidos do invento são análogos.
Estrutura
Os péptidos do invento têm, ou um vínculo não péptido em, pelo menos, uma das posições indicadas, ou uma substituição por estatina, amino ácido bou amino ácido χ, co mo por exemplo, sta -des-Met^ litorina. Por vínculo não pépt:. do deve entender-se, por exemplo, que o átomo de carbono que participa no vínculo entre dois resíduos a partir de um carbonil carbono para um carbono metileno. 0 método de redução do vínculo péptido que proporciona este vínculo não péptido está descrito em Coy e al., pedido de patente U.S., N2. de Série 879.379, atribuído aos mesmos autores do presente pedi^ do, e aqui incorporado como referência. Qualquer um dos amino ácidos nas posições 0, 1, 2 e 9 dos antagonistas da litorina pode ser retirado dos péptidos, e estes mantêm-se activos como antagonistas.
Os péptidos deste invento podem ser dosponibilizados sob a forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de sais preferidos , são os que têm ácidos orgânicos terapeuticamente aceitáveis, como por exemplos, ácidos acético, lático, maleico, cítrico, málico, ascórbio, succinio, benzóico, salicílico, metanosulfónico, toluenosulfónico ou pamóico, bem como ácidos poliméricos, tais como o ácido tânico ou a carboximetil celulose, e sais com ácidos inorgâ18
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMNESIN 108(11
nicos, tais como os sais hidro-hálicos, como por exemplo, ác:_ do clorídrico, ácido sulfúrico ou ácido fosfórico.
Sintese dos Análogos da Litorina e da Bombesina
Segue-se a sintese do antagonista da bombesina pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu u ^C^NIi/Leu-NH^. Outros antagonistas da bombesina ou do GRP podem ser preparados pela introdução das modificações apropriadas nos seguintes métodos sintéticos.
primeiro passo é a preparação do intermediário de resina de pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(benziloxicarbonil) -Leu u /CH^NH/Leu-benzidrilamina, como segue.
Coloca-se resina de benzidrilamina-polistireno (Vega Biochemicals, Inc.) (0,97 g 0,5 mmole), sob a forma de ião cloreto, no vaso de reacção de um sintetizador de péptidos Beckman 990B, programado para executar o seguinte ciclo de reacção: (a) cloreto de metileno; (b) 33% de ácido trjL fluoroacético (TFA) em cloreto de metileno (2 vezes, durante 1 e 25 minutos cada uma); (c) cloreto de metileno; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; e (f) 10% de trietilamina em clorofórmio.
A resina neutralizada é agitada, com alfa-t-butoxicarbonil(Boc)-leucina e diisopropilcarbodiimida (1,5 mmole cada), em cloreto de metileno, durante 1 hora, e a resina amino ácida resultante é então reciclada através dos pa.s sos (a) a (f) do programa de lavagem acima descrito. Obteve-se aldeido de Boc-leucina (1,25 mmoles), preparado pelo método de Fehrentz e Castro, Synthesis, p.676 (1983), em 5 ml de dimetilformamida seca (DMF) e adiciona-se à suspensão de sal da resina TFA, seguindo-se a adição de 100 mg (2 mmoles) de cianoborohidreto de sódio (Sasaki e Coy, Peptides 8:119-121 (1987); Coy e al., id). Após agitação durante uma hora, verifica-se que a mistura de resina é pegativa à eracção de ninhidrina (1 min.), indicando a derivação completa do grupo amino livre.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^11
Os amino ácidos seguintes (1,5 mmoles) são depois sucessivamente juntos em presença de diisopropilcarbç) diimida (1,5 mmole), e a resina amino ácida resultante é reciclada através dos passos de lavagem/desbloqueamento (a) a (f) no mesmo processo acima descrito:
Bic-His (benziloxicarbonil), Boc-Gly (junto como um excesso de 6 M de p-nitrofenilester), Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boje -Gin (junto vomo um excesso de 6 M do p-nitrofenilester) e pGlu. A resina compelta é, então, lavada com metanol e seca ao ar.
A resina acima descrita (1,6 g, 0,5 mmole) é misturada com anisolo (5 ml) e fluoreto de hidrogénio anidro (35 ml), a 02C, e agitada durante 45 minutos. 0 excesso de fluoreto de hidrogénio é rapidamente evaporado sob uma corrente de azoto seco, e o péptido livre é precipitado e la. vado com éter. 0 péptido em bruto é dissolvido num volume mi nimo de ácido acético 2M, e eluído numa coluna (2,5 x 100 mm de Sephadex G-25 (Pharmacia Fine Chemicals, Inc.).Fracções contendo um componente principal, por absorção UV e cromatograf ia de camada fina (TLC), são então reunidas, evaporadas até um pequeno volume, e aplicadas a uma soluna (2,5 x 50 cm de octadecilsilano-sílica (Whatman LRP-1, rede de 15-20 pm de tamanho).
péptido é eluído com um gradiente linear de 0-30% de acetonitrilo em ácido trifluoroacético a 0,1% em água. As fracções são examinadas por meio de TLC e cromatografia analítica líquida de alto rendimento (HPLC), e concentradas para proporcionarem a máxima pureza. A liofilização repetida da solução a partir da água proporciona 60 mg do produto sob a forma de um pó branco, fino.
Verifica-se que o produto é homogéneo, por meio de HPLC e TLC. A análise de amino ácido de um hidrolisa do ácido confirma a composição do péptido. A presença do vín culo Leu u /C^-NH/Leu é demonstrada por meio de uma espectrometria de massa por bombardeamento atómico rápido.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe u £CH2-NH7Leu-NH2 e pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu u /”CH2-NH7Leu-NH2 ou outros péptidos são preparados com rendimentos semelhantes de uma forma análoga por meio de alterações apropriadas do processo acuma.
pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe u /”CH2-NH7LeuNH2 e pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu u/CH2-NH/Leu-NH2 ou outros péptidos são preparados, com rendimentos semelhantes, de uma maneira análoga, por meio de modificações apropriadas ao processo acima descrito.
Efectuou-se a síntese de fase sólida de D-Phe\ Leu^ u/”CH2-NIí7D-Phe^-litorina, D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu u/OB^-NIiZ-D-Phe-Ní^, conforme segue; a resina de Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(tosil)-Leu u/CH2-NH7-D-Phe-benzidrilamina foi sintetizada em primeiro lugar.
Colocou-se a resina de benzidrilamina-polistireno (Advanced ChemTech, Inc.) (1,25 g, 0,5 mmole), em forma de ião de cloreto, num vaso de reacção de um sintetizador de péptidos Advanced ChemTech ACT 200, programado para executar o seguinte ciclo de reacção: (a) cloreto de metileno; (b) ácido trifluoracético, a 33%, em cloreto de metileno (2 vezes, durante 1 minuto e 25 minutos cada): (c) cloreto de ine tileno; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; (f) 10% de tri£ tilamina em clorofórmio.
A resina neutralizada é agitada com Boc-D-fenilalanina e diisopropilcarbodiimida (1,5 mmole cada) em cloreto de metileno durante 1 h, e a resina amino ácida resultante é então reciclada através dos passos (a) a (g) do programa de lavagem acima indicado. 0 grupo Boc é, depois, removido por meio de tratamento com TFA. Aldeído de Boc-leucina (1,25 mmoles), preparado pelo método de Fehrentz e Castro (1), é dissolvido em 5 ml de DMF seco, e adicionado à suspensão de sal de resina de TFA, seguindo-se a adição de 100 mg (2 mmoles) de cianoboroidreto de sódio (2,3), Após agitação durante 1 hora, verifica-se que a mistura de resina é negativa à reac21
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1O8(L1
ção ninidrina (1 min.), indicando uma derivação completa do grupo amino livre.
Os seguintes amino ácidos (1,5 mmole) são, então, acrescentados sucessivamente, pelo mesmo processo: Boc-His(benziloxicarbonil), Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln (junto em presença de 1 equivalente de hidroxibenzotriazola), Boc-D-Phe (junto em presença de 1 equivalente de hidroxibenzotriazola). Após secagem , a resina péptida pesou 1,93 g.
A resina (1,93 g, 0,5 mmole) é misturada com anisola (5 ml) e fluoreto de hidrogénio anidro (35 ml), a 09C, e é agitada durante 45 minutos. 0 excesso de fluoreto de hidrogénio é rapidamente evaporado sob uma corrente de azoto seco, e o péptido livre é precipitado e lavado com éter. 0 péptido em bruto é dissolvido num volume mínimo de ácido acé. tico 2 M, e eluído numa soluna (2,5 x 100 mm) de Sephadex G-25. As fracções que contêm um componente principal determd nado por meio de absorção UV e cromatografia de camada fina são então reunidas, evaporadas até um pequeno volume, e apli^ cadas a uma coluna (2,5 x 50 cm) de octadecilsilano Vydac (10-15 uM). Esta é depois, eluída com um gradiente linear de
15-45% de acetonitrilo em 0,1% de ácido trifluoroacético em água. As fracções são examinadas por meio de cromatografia de camada fina e cromatografia líquida analítica de alto ren dimento e concentradas para proporcionarem a máxima pureza.
A liofilização repetida da solução a partir da água proporciona 120 mg de produto sob a forma de um pó leve, branco.
Verifica-se que o produto é homogéneo por meio de hplc e tlc. A análise do amino ácido de um hidrolisado ácido confirma a composição do octapéptido. A presença do ;vínculo péptido Leu urCH2NH7 é demonstrada por espectrometria de mas sa por bombardeamento atómico rápido.
Efectuou-se a sintese de fase sólida de D-Phe^8 9
Leu des-Met litorina , D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-LeuNH2, como segue.
Passo (1): coloca-se resina de benzidrilamina-po22
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10SÇL1 t
listireno (Advanced ChemTech, Inc. (0,62 gm, 0,25 mmole), na forma de ião cloreto,no vaso de reacção de um sintetizador de péptidos ACT 200, programado para executar o seguinte ciclo de reacção: (a) cloreto de metileno; (b) 33% de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno; (d) etanol; (e) cl£ reto de metileno; (f) 10% de trietilamina em clorofórmio.
A resina neutralizada é agitada com Boc-leucina e diisopropilcarbodiimida (1,5 mmole cada) em cloreto de metileno, durante 1 hora, e a resina de amino ácido resultan te é depois, reciclada através dos passos (a) a (g) do programa de lavagem acima descrito. Os amino ácidos seguintes (1,5 mmole) são, então, sucessivamente juntos pelo mesmo pro^ cesso: Boc-His (benziloxicarbonil), Boc-Gly, Boc-Val, Boc-Ala Boc-Trp, Boc-Gln (junto sob a forma de um excesso 6M do p-nji triofenilester) e pGlu (junto em presença de hidroxibenzotriazolo). Depois da secagem, a resina péptida pesou 0,92 g.
Passo (2): A ersina (0,92 g) é então misturada com anisola (5 ml), ditiotreitol (200 mg) e fluoreto de hidrogénio anidro (35 ml), a 09C, e agitada durante 45 min.
fluoreto de hidrogénio em excesso é rapidamente evaporado sob uma corrente de azoto seco, e o péptido livre é precipitado e lavado com éter. 0 péptido em bruto é dissolvido num volume mínimo de ácido acético 2 M, e eluído numa coluna (2,5 x 100 cm) de Sephadex G-25. Fracções contendo um componente principal determinado por absorção de UV e cromatografia de camada dina são então concentradas, evaporadas até um pequeno volume, e aplicadas a uma coluna (2,5 x 50 cm) de octadecilsilano Vydac (10-15 microM). A coluna é eluida com um gradiente linear de 0-30% de acetonitrilo em 0,1% de ácido trifluoroacético em água. As fracções são examinadas por cromatografia de camada fina, e concentradas para proporcionarem a máxima pureza. A repetida liofilização da solução a partir da água proporciona um pó branco, leve; verifica-se que este produto é homogéneo por hplc e tlc. A análise de amino ácido de um hidrolisado de ácido confirma a composição
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
do péptido.
Levou-se a efeito a sintese do D-Nal-Gln-Trp-Ala. -Val-Gly-His-Leu-NH2, utilizando-se o mesmo processo acima descrito (0,62 g, 0,25 mmole de resina de benzihidrilamina no passo (1), e 0,92 g no passo (2).
Efectuou-se a síntese do N-acetil-D-Phe-Gln-trpAla-Val-Gly-His-Leu-NH2, mediante o emsmo processo acima des. crito, utilizando-se 0,62 g (0,25 mmole) de ersina de benzihidrilamina no passo (1), e misturando 0,92 g da resina com anisolo no passo (2), com a excepção de que o grupo Boc final é removido e a resina é acetilada com anidrido acético em cloreto de metileno.
A síntese da resina-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-MeD-Ala-His(Tos)-Leu-0 é como segue:
Coloca-se resina Boc-Leu-O-Merrifield (1,0 g 0,5 mmole) no vaso de reacção de um sintetizador de péptidos automático Advanced ChemTech ACT 200, programado para executar o seguinte ciclo de reacção/lavagem: (a) cloreto de metileno (b) 33% de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno (2 vezes, para 1 e 25 min. cada); (c) propanol; (d) dimetilformamida; (e) 10% de tretilamina em dimetilformamida; (f) dimetilformamida .
A ersina neutralizada é agitada com Boc-Nlm-tosil-histidina e diisopropilcarbodiimida (1,5 mmole cada) em cloreto de metileno, durante 1 hora, e a resina de amino áci do ersultante é, depois,reciclada através dos passos (a) a (f) do programa de lavagem acima indicado. 0 grupo Boc é então removido por tratamento com TFA. Os amino ácidos seguintes (1,5 mmole) são então acrescentados, sucessivamente, pelo mesmo processo: Boc-N-Me-D-Ala (fornecido por Bachem, Inc CA), Boc-Val, Boc-Ala, Boc-Trp, Boc-Gln (junto em presença de 1 equivalente de hidroxibenzotriazolo) e Boc-D-Phe. Depois da última adição estar completa, o grupo Boc final foi removido por meio de tratamento com TFA, conforme anteriormente descrito. Depois da secagem, a resina péptida pesou 1,28 g.
- 24 62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
.Ο <9 i. /
A síntese da resina D-F^-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His(Tos)-Leu-0 é como segue:
Ester análogo é preparado sob as mesmas condições acima descritas, com excepção de que o Boc-D-Ala é usado em lugar de N-Me-D-Ala, e o Boc-D-F^Phe em lugar de D-Phe,
A síntese do éster de D-F^Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-metilo é como segue:
Este péptido é clivado a partir da resina Merri^ field, acima descrita, e sob as mesmas condições, para proporcionar 198 mg de produto sob a forma de um pó branco, leve.
Verificou-se que o produto era homogéneo, por meio de hplc e tlc. A análise de amino ácidos de um hidrolisato ácido confirmou a composição do octapéptido, e espectro metria de massa por bombardeamento atómico rápido indicou o peso molecular esperado para o péptido.
A síntese do éster de D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-Me-D-Ala-His-Leu-metilo é como segue:
A resina Merrifield acima descrita (1,28 g, 0,5 mmole) é suspensa em metanol contendo 10% de trietilamina e, é agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. Após filtra ção, a solução é evaporada até um óleo que é dissolvido em água e eluído numa coluna de octadecilsilano Vydac (10-15 μΜ), com um gradiente linear de 10-40% de acetonitrilo em 0,1% de ácido trifluoroacético em água. As fracções são examinadas por meio de cromatografia de camada fina e cromatograf ia líquida analítica de alto rendimento, e concentrada para proporcionar a pureza máxima. A liofilização repetida da solução a partir da água fornece 49 mg do produto sob a forma de um pó branco, leve.
Verificou-se que o produto era homogéneo, por meio de hplc e tlc. A análise de amino ácidos de um hidrolisato ácido confirma a composição do octapéptido, e a especto metria de massa por bombardeamento atómico rápido indicou o peso molecular esperado para o péptido.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
9
Segue-se a síntese da Sta-des-Met litorina. Um resíduo de estatina, AHPPA ou ACHPA pode ser substituído em lugar de quaisquer dois amino ácidos do péptido, onde o péptl 8 do apenas contenha vínculos péptidos. Por exemplo, sta -des9
Met litorina foi preparada de uma forma análoga por meio de primeiramente, junção da estatina à resina e, seguidamente, adição de Boc-His(benzilcarbonil). A estatina e a Boc-estatjL na podem ser sintetizadas de acordo com o processo de Rich e al., 1978, J.Organic Chem. 43;3624; e Rich e al., J.Med.Chem. 23:27; e AHPPA e ACHPA podem ser sintetizados de acordo com o processo de Hui e al., 1987, Schuda e al., 1988, J.Org.Chem 53:873; e Rich e al., 1988, J.Org.Chem. 53:869.
A síntese da fase sólida do péptido BIM-26120, pGlu-Gln-trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-NH2, foi realizada através dos seguintes processos, em que alfa-t-butoxicarbonil estatina (preparada pelo processo de Rich e al., J.Org.Chem.
1978, 43, 3624 é, primeiramente, junta a resina de metilbenzidrilaminapolistireno. Após acetilação, é preparado o inte£ mediário de resina p-Glu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(benziloxicarbonil)-Sta-metilbenzidrilamina. 0 processo sintético utilizado para esta preparação é apresentada a seguir, em pormenor :
1. Incorporação de alfa-t-butoxicarbonll estatina em resina de metilbenzidrilamina.
A resina de metilbenzidrilamina-polistireno (Vega Biochemicals, Inc.) (1,0 G 0,73 mmol), sob a forma de ião de cloreto, é colocada no vaso de reacção de um sintetizador de péptidos Vega 25OC Coupler. 0 sintetizador foi programado para executar as seguintes reacções: (a) cloreto de metileno;
(b) 10% de trietilamina em clorofórmio; (c) cloreto de metileno; e (d) dimetilformamida.
A resina neutralizada foi misturada durante 18 horas com o éster activo pré-formado, obtido a partir de alfa-t-butoxicarbonil estatina (1,46 mmol), diisopropil carbodiimida (2 mmol), e hidrato de hidroxibenzotriazola (1,46 mmol), em dimetilformamida, a 02C, durante uma hora. A resina amino ácido resultante é lavada no sintetizador com dime- 26 62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
tilformamida, e depois com cloreto de metileno. Nessa altura, verificou-se, por meio do ensaio de ninidrina de Kaiser (5 minutos), que a mistura de resina tinha um nível de 84% de incorporação de estatina na resina.
A acetilação foi executada misturando-se a resina amino ácida, durante 15 minutos, com N-acetil imidazola (5 mmol), em cloreto de metileno. A derivação para o nível de 94-99% dos grupos amino livres da resina foi indicada pelo ensaio de ninidrina de Kaiser ( 5 minutos). A Boc-estatina-resina, foi então, lavada com cloreto de metileno.
2. Adições dos restantes amino ácidos.
sintetizador de péptidos é programado para executar o seguinte ciclo de reacção: (a) cloreto de metileno; (b) 33% de ácido trifluoroacético (TFA) em cloreto de me tileno 2 vezes para 5 e 25 minutos cada); (c) cloreto de metileno; (d) álcool isopropilico; (e) 10% trietilamina em cl£ rofórmio; e (f) cloreto de metileno.
Os amino ácidos seguintes (2,19 mmol) são, então acrescentados sucessivamente por meio de diisopropil car. bodiimida (4 mmol) apenas, ou diisopropil carbodiimida (4 mmol) mais hidrato de hidroxibenzotriazola (1,47 ou 0,73 mmol), e a resina-péptido resultante é lavada no sintetizador com dimetilformamida e, depois, com cloreto de metileno, e, seguidamente, reciclada através dos passos de lavagem e desbloqueamento (a) a (f) do processo acima descrito.
Boc-His (benziloxicarbonil) junto em rpesença de 2 equivalentes de hidroxibenzotriazola); Boc-Gly; boc-Val Boc-Ala e Boc-Trp (junto como os ésteres activos de hidroxibenzotriazola pré-formada, obtidos por reacção, a 09C., e du rante uma hora, com 1 equivalente de hidrato de hidroxibenzotriazola); Boc-Gln e pGlu (também junto como os ésteres activos pré-formados de hidroxibenzotriazola, obtida por reacção, a 09C, e durante uma hora, com 1 equivalente de hidrato de hidroxibenzotriazola). A resina-péptido completada é, então, lavada com metanol e seca ao ar .
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11 acima descrito (1,60 g, 0,73 péptido-resina mmol) é misturado com anisola (2,5 mL), ditioeritreitol (50 mg) e fluoreto de hidrogénio anidro (30mL) , a 02C, durante uma hora. 0 excesso de fluoreto de hidrogénio é evaporado rapidamente sob uma corrente de azoto seco, e o péptido livre é precipitado e lavado com éter. 0 péptido bruto é disso: vido em lOOmL de ácido acético 1 M, e a solução é, depois evaporada sob pressão reduzida. 0 péptido em bruto é dissolvido num volume minimo de metanol/água 1/1, e triturado com 10 volumes de acetato de etilo, péptido triturado é aplicado a uma coluna (9,4 mm I.D. x 50 cm) de octadecilsilano-sílica (Whatman Partisil 10 ODS-2 M 9). 0 péptido é eluído com um gradiente linear de 20-80% de 20/80 de 0,1% de ácido trifluoroacético/ acetonitrilo em 0,1 % de ácido trifluoroacético em água. As fracções são examinadas por TLC e cromatografia líquida analítica de alto rendimento (HPLC), e concentradas para propor cionarem uma pureza máxima. A liofilização da solução a partir da água proporciona 77 mg de produto sob a forma de um pó branco leve.
Podem preparar-se outros compostos, incluindo 18 9
D-Cpax, P>-Leu , desMer Litorina, conforme acima se indicou, e podem ser testados quanto à sua eficácia como agonistas ou antagonistas através do programa de ensaios descrito abaixo.
Um resíduo estatina, AHPPA, ACHPA, P-amino ácido ou ΐ-amino ácido é adicionado da mesma maneira que um resíduo amino ácido natural, por meio de junção como um de. rivado Boc.
O
Fase 1_ -Ensaio de Tomada da Λη7 Timidina 3T3 Estimulada por Péptido
Cultura de Células. Desenvolvem-se culturas nor mais de cálulas Suíças 3T3 num Meio Eagles Modificado por Dulbecco (DMEM), suplementado com 10% de sôro de fetos de vi
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10SW.1 tela, em atmosfera humidificada de 10% de 002/90% de ar a 372C. Para uso experimental, as cálulas são colocadas em tabuleiros de 24 furos, e utilizadas quatro dias depois da última mudança de meio. As células são partadas na fase Gl/GO do ciclo celular, por meio da mudança do DMEM sem soro 24 horas antes do ensaio de tomada da timidina.
Ensaio de Síntese do ADN. As células são lavadas duas vezes com 1 ml de aliquotas de DMEM (-soro), depois incubadas com DMEM (- soro), 0,5 μΜ /metil- H7 timidina (20 Ci/mmole, New England Nuclear), bombesina (3nM) e, inicialmente, quatro concentrações dos compostos do ensaio (1, 10, 100, 1000 nM), num volume final de 1,0 ml. Após 28 horas a 37aC, a incorporação da /metil- Hj timidina nos concentrados insolúveis nos ácidos é ensaiada como segue. As células são lavadas duas vezes com 0,9% de NaCl gelado (aliquotas de 1 ml) e a radioactividade solúvel no ácido é removida por meio de uma incubação de 30 min. (42C) com 5% de ácido trlcloroacético (TCA), As culturas são, então, lavadas uma vez ( 1 ml) com etanol a 95%, e solubillzadas por meio de uma incuba ção de 30 min. (1 ml) com 0,1 N NaOH. O material solubiliza do é transferido para frascos contendo 10 ml de ScintA (Packard), e a radioactividade é determinada por meio de espectrometria líquida de cintilação.
Fase 2. - Carcinoma de Célula Pequena (SCLG) - Ensaio da
Aborção da / Hj Timidina Estimulada pela Bombesina
Cultura das Células. Culturas da linha de célula das células de carcinoma humano (NCI-H69) (obtidas da American Type Culture Association) são mantidas em meio RPMI 1640, suplementado com 10% de soro fetal de vitela, em 10% 002/90% de ar, a 372C. Vinte e quatro horas antes do ensaio, as células são lavadas com meio sem soro, e plantadas em tabuleiros conjuntos de 24 cavidades.
Ensaio de Sintese do ADN. Bombesina (lnm), 0,5 3 juM de /metil- H7 timidina (20 Ci/mmole, New England Nuclear)
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^11
e quatro concentrações dos compostos do ensaio (1, 10, 100, lOOOnM) são adicionados às culturas para se conseguir um volume final de 0,5 ml. Após uma incubação de 28 Hr a 372C, as células são recolhidas em filtros de fibra de vidro GF/B, e o ADN é precipitado com TCA gelado. A incorporação da Z/H? timidina nas fracções insolúveis no ácido do ADN é determina da por espectometria líquida de cintilação.
Fase _3 - Pancreatite Provocada pelo Péptido
São utilizados ratos Sprague-Dawley (250g) nestas experiências. 0 composto de ensaio, ou 0,9% NaCl é administrado s.c. 15 minutos antes da injecção de bombesina. As injecções de bombesina são dadas s.c. numa dose de 10 pg/Kg, obtenso-se amostras de sangue passadas lhr,30mln., e 3hr. e 6hr. As concentrações da amllase do plasma são determinadas por meio do teste Pantrak Amylase.
Fase £ - Inibição In Vitro da Fixação do Péptido Liberta··
125 dor da Gastrina [ ij (GRP) aos Receptores da Bombesina
Preparam-se membranas de diversos tecidos (cér£ bro de ratos, pancreas de ratos, pituitária anterior de ratos, SCLC, células 3T3) por meio de homogeneização em 50 mM de TrisHCl, contendo 0,1% de albumina de soro bovino e 0,lmg/ml de bacitracina, seguindo-se duas centrifugações (39.000 x g x 15 min., 49C) com uma resuspensão intermediária em tampão fresco. Para ensaio , são incubadas aliquotas (0,8 ml) com 0,5 nM de f^^^ljGRP (200 Ci/mmol, Amersham Corp I e várias concentrações dos compostos de ensaio, num volume final de 0,5 ml. Após 30 minutos de incubação a 4QC, a reacção de ligação é terminada com uma filtragem rápida através de filtros Whatman GF/C que foram prevlamente embebidos em 0,3% de poletileneimina aquosa para reduzir o nível de fixação não específica. Os filtros e tubos são lavados três vezes com aliquotas de 4ml de tampão gelado, e a redioactivida^ de retida nos filtros é contada por meio de espectrometria
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108ÇL1 gama. A fixação específica é definida como a fixação total de £ I_/GRP menos o vínculo em presença de lOOOnM de bombesina ou um péptido com ela aparentado.
Fase 2 Inibição da Libertação da Gastrina estomago de ratos anestesiados é aspergido com solução salina recolhida ao longo de períodos de 15 minutos por via canulação polórica, enquanto o péptido do ensaio é introduzido através da veia femural, ao longo de períodos de entre 0 e 150 minutos.
Fase - Actividade Anti-tumor ”In Vivo”
Células de carcinoma do pulmão de cálula pequena
NCI-H69 foram transplantadas de uma cultura in vitro por im plantação, em cada animal, do equivalente a 5 frascos de cul 2 tura de tecido de 75 cm confluentes, no flanco direito. In vitro as células NCI-H69 desenvolvem-se como uma suspensão de agragados celulares. Por isso, não foi feita qualquer ten tativa para desagregar os aglomerados de células por meios físicos ou químicos. 0 tamanho do tumor foi calculado como a média de dois diâmetros, isto é, (comprimento e largura/2) mm.
Resultados de Ensaio dos Péptidos de Teste
Um certo número de análogos da bombesina ou GRP, cada um contendo um vínculo não péptido ou um resíduo de estaina, AHPPA ou AGHPA, G»-amino ácido ou X-amino ácido, podem ser sintetizados e ensaiados num ou mais dos ensaios acima descritos das fases 1 - 6; os resultados dos ensaios das Fases 1 e 2 são fornecidos no Quadro 1 em anexo. 0 Quadro 1 apresenta fórmulas para os análogos não péptidos e resulta125 dos da inibição in vitro da fixação de £ ijGKP aos receptores de bombesina dos fibroblastos 3T3 e da absorção da β
f BjTimidina estimulada pela bombesina pelas células 3T3 cul tlvadas. (0s dados do receptor de GRP 3T3 e da absorção da
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11 ?ΐ.
timidina são expressos em IC50 (nM).) 0 Quadro 1 fornece, também, os resultados para os análogos que contém vínculos não péptidos de um outro péptido natural, Neuromedina C, cujos sete amino ácidos C terminais são semelhantes aos da bom besina e do GRP. (No Quadro 1, Litorina indica um análogo de péptido com 9 resíduos ou seu derivado, enquanto que C indica um análogo de 10 resíduos ou seu derivado.)
No Quadro 1, a posição do vínculo não péptido é indicada pela posição do símbolo u/CB^NHj; isto é., u/CH2NH7 é sempre representado precedendo o amino ácido que, neste péptido, está vinculado ao seu amino ácido N-terminal por intermédio do vínculo não péptido. Sempre que não seja especificado nenhum amino ácido sob estrutura, o vínculo não péptido liga os dois péptidos representados pelos números apresentados como pós-escritos.
No Quadro 1 pode ver-se que uma posição preferida do vínculo não péptido nos análogos da litorina é na
9 posição A - A . dois dos análogos mais activos (conforme in dicado por um baixo valor IC50 do receptor de GRP) são BIM26100 (Phe u/C^NHjLeu9) e BIM-26101 (Leu8 ufCH2NH_7Leu9).
Além disso, conforme se represneta no Quadro
1, BIM-26113 (D-Phe1, Leu8 u/CH9NHl/Leu9) e BIM-26114 (D-Nal1, 8 9
Leu uZCH2NIí7Phe'?) , são activos no vínculo do receptor de GRP 3T3 e nos ensaios de absorção da timidina. Especificamen te, BIM-26136 (D-Nal1, Leu8 uíCH2NH7Phe9), que contém resíduos amino e carboxi terminal aromático que podem formar uma interação hidrófoba, é o análogo mais potente. Finalmente,
9 quando estatina ou -leucina substituem os resíduos A e A da litorina, os análogos BIM-26120 e BIM-26182 resultantes são também antagonistas potentes.
Quadro 1 mostra, igualmente, que os análogos de Neuromedina C que contêm um vínculo não péptido entre os resíduos A9 - Α^θ, ou seja, BIM-26105, 26106 e 26107, são antagonistas quando testados no receptor de GRP 3T3 e nos en saios de absorção da timidina.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
ΑΓΊ19?0
O Quadro 1 fornece, igualmente, resultados negativos para os análogos de Neuromedina C e GRP 19-27, como por exemplo, BOM-261O8. Assim as indicações de localização do vínculo não péptido aqui indicadas deverão ser usadas em conjunto com os ensaios de rotina acima descritos para sele£ cionar antagonistas úteis.
Bombesina e análogos de bombesina revelaram ini. bir o efeito da interleucina-2 (IL-2) (Fink e al., 1988, Klin.Wonchenschr. 66, Suppl.13, 273). Dado que o IL-2 faz com que os lifócitos T proliferem, é possível que os antagonistas da litorina possam evitar o efeito inibitório da bombesina ou seus análogos sobre a IL-2. Os linfócitos estimula^ dos pela IL-2 conseguem, efectivamente, lisar in vitro células do carcinoma do pulmão de célula pequena. Embora os anta. gonistas da bombesina tenham um efeito antiproliferativo directo sobre os tecidos neoplásticos, podem igualmente favor£ cer a proliferação dos linfócitos que tenham uma actividade lítica para o carcinoma do pulmão de célula pequena.
Estas observações incitam à avaliação do efeito do BIM-26100 sobre o crescimento in vivo das linhas de células do tumor SCLC descrito na Fase 6. Vinte fêmeas atimicas peladas, com 5 a 6 semanas de idade, foram implantadas no dia O com SCLC humano NCI-H69, individualmente identifica do, e depois distribuído aleatoriamente pelos seguintes grupos de controlo do veículo e de ensaio:
| Grupo No. | Tratamento No. de | animais |
| 1 | Controlo tratado c/veículo salino: | |
| 0,2 ml, s.c. inf. b.i.d., QD1-28 | 10 | |
| 2 | BIM-26100: | |
| 50pg%inj., s.c., b.i.d., QD1-28 | 5 | |
| 3 | BIM-26100: | |
| 50pg/inj., s.c. inf., b.i.d., QD1-28 | 5 |
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
(s.c. = subcutaneamente; inf. = tumor totalmente aspergido; inj. = injectado ; b.i.d. = duas vezes por dia; QDl-28 = tratamento diário, nos dias 1 - 28.) crescimento de xeno-enxertos NCI-H69 e a actividade inibitória do crescimento do tumor do antagonista da bombesina BIM-26100 (pGlu.Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe u^Cí^NH/Leu-NHz) são ilustrados como curvas de crescimento do tumor na Fig. 1, e os tamanhos relativos do tumor no Quadro 2. A administração de BIM-26100 sob a forma de uma infusão s.c. em torno do tumor inibiu significativamente o crescimento do tumor. A eficácia da actividade anti-tumor do BIM 26100 é evidente, tendo em vista o grande inoculo das células do tumor NCI-H69 (isto é, o equivalente de 5 frascos de cultura de células de 75 cm confluentes por animal) e o estado aglomerado das células. Nos frascos confluentes, os aglo merados de NCI-H69 são macroscopicamente visíveis, e juntos fazem lembrar uma colónia metastática de tumor. Muitas dessas colónias de tumor foram implantadas por animal. A dose de BIM-26100 foi arbitrariamente escolhida com abse na disponibilidade do composto e não é óptima. Doses mais elevadas de BIM-26100 podem ser administrados, conforme indicado pelo ga nho de peso do corpo (menos o peso do tumor) obtido no decu£ so do tratamento (Quadro 3). Isto sugere que falta ao BIM26100 toxicidade local ou sistémica e que é terapeuticamente útil como um factor anti-crescimento com efeitos anti-tumor,
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-metil-D-Ala-His-Leu metilester e D-F^-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-metilester foram examinados pelas suas capacidades para desalojarem a bombesina marcada ^ag céquqag ^os ácinos pancreáticos de ratos e para inibirem a libertação da amilase dessas célu las, produzida pela própria bombesina. Os análogos exibem potenciais nas variações de dose eficaz meio máxima de 5-10 nM, e são, portanto, potentes antagonistas do erceptor da combesina.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080-1
à?w?q
Utilização
Os péptidos do invento podem ser administrados a um mamífero, particularmente um ser humano, numa das for-mas tradicionais (por exemplo, oralmente, parentericamente, transdermicamente ou transmucosamente), numa formulação de libertação retardada que utilize um polímero biodegradável e biocompatível, ou por administração local (por exemplo, no caso da bombesina anti-cancro, directamente aos pulmões), utilizandi-se micélios, geleias e liposomas.
Os antagonistas da bombesina do presente inven to são adequados para o tratamento de todas as formas de can cro, em que as substâncias aparentadas com a bombesina agem como agentes mitóticos autocrinos ou paracrinos, particularmente o cancro do pulmão de célula pequena. Os péptidos podem, também, ser usados para a inibição da secreção ácida gástrica e para desordens da motilidade da região gastro-intestinal, para o alívio sintomático e/ou tratamento do adenocarcinoma pancreático exócrino e para a restauração do péptido em pacientes caquéxicos. Os péptidos podem ser admini£ trados ao paciente humano numa dosagem de 0,5 pg/Kg/dia a 5 mg/Kg/dia. Para algumas formas de cancro, como por exemplo, para o carcinoma do pulmão de célula pequena, a dosagem pre. ferida para o tratamento curativo é de 250mg/paciente/dia.
composto pode ser administrado a um mamífero como por exemplo, um ser humano, nas dosagens utilizadas para o factor de libertação da hormona de crescimento ou, devi^ do à sua potência diminuída, em doses maiores. Os compostos podem ser administrados a um mamífero, como por exemplo, um ser humano, numa dosagem de 0,01 a 1000 mcg/Kg/dia, mas, pre ferencialmente, de 0,1 a 100 mcg/Kg/dia.
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11 ?>
n i • .«Z
Quadro 1
Código
BIM-26092
BIM-26095
BIM-26100
BIM-26101
BIM-26105
BIM-26106
BIM-26107
BIM-26108
BIM-26113
BIM-26114
Receptor 3T3 dè GRP
Estrutura IC50(nM)
Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-GlyHis-Leu>/CH2NH/Leu-NH2
Neuromedina C 242 pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-D-AlaHis-Leu^/CH2NH/Leu-NH2
Litorina 2623 pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-HisPheV/CH2NH/Leu-NH2
Litorina 23 pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-AlaLeu^/ CH2NH/Leu-NH2
Litorina · 118
D-Ala-Asn-His-Trp-Ala-ValD-Ala-His-Leu^/CH2CH/Leu-NH2
Neuromedina C 107 desGly-D-Ala-His-Trp-Ala-ValD-Ala-His-Leu)f/CH2NH/Met-NH2 .
Neuromedina C 401
D-Phe-His-Trp-Ala-Val-GlyHiS“Leu)4/CH2NH/Leu-NH2
Neuromedina G 199
N-Ac-D-Ala-His-Trp-Ala-ValGly-His-Leuy/CH2NH/Leu-NH2
GRP (19-27) 841
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-GlyHis-Leuy/CH2NH/Leu-NH2
Litorina 5.8
D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-GlyHis-LeutyCH2NH/Leu-NH2
Litorina 23.5
Absorção do TIM.
IC50(nM)
466
1209
296
107
354
154 >1000
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
Quadro 1 (Continuação)
| Receptor 3T3 de GRP | Absorção TIM | ||
| Código | Estrutura | IC50(nM) | IC50(nM) |
| BIM-26120 | pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly- His-Sta-NH2 Litorina | 150 | 165 |
| BIM-26122 | D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly- His-Leu-NH^ Litorina | 5. | 9 28.6 |
| BIM-26136 | D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His· Leu>/CH2NH/Phe-NH2 Litorina | 1. | 4 3.3 |
| BIM-26182 | D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His· &-Leu-NH2 Litorina | 0. | 88 4.77 |
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
ΑΓ11920
I p
o o
H
H
O
P
X)
CO
P θ' o
o !—i o
CH
I £
H pq §
H ω
M pq £
O m
<0 «
<!
H
W
H £
O
O <1
H <1 o
Ω
O !>
H >
&
<0 H tó O EH f—i pq
H £
H
H
Q <1
Q
H i>
H
EH
O
O
VO w
I
H
O &
<1 £
P3
W u
Zl u
co
| •r| | O | co | VO | ||||
| sh | CO i—1 | o | co | ||||
| CO | O | rH | |||||
| P | P | . | |||||
| H | P | o | |||||
| •rl | |||||||
| CO | |||||||
| P | CO | ||||||
| 0 | P | ||||||
| e | CU | ||||||
| P | |||||||
| EH | * | CU | • | ||||
| Ό | Xi | rH | |||||
| O | a | co | σν | vO | O | ||
| XJ | s | • | . | . | co | . | |
| CM | rH | o | o | O | |||
| O | +1 | +1 | + 1 | £ | \/ | ||
| Λ | 00 | co | 1^ | P | Ph | ||
| P | CH | • | • | • | P | * | |
| cO | CO | co | * | ||||
| e | to | T“H | v—I | ΐ—1 | |||
| CO | •ri | 02 | • | ||||
| EH | Q | o | LTl | ||||
| P | O | ||||||
| O | r» | ||||||
| rH | in | O | |||||
| O | \z | ||||||
| P | CU | CH | |||||
| P | * | ||||||
| P | O | ||||||
| O | rH | • · | |||||
| o | O | O | |||||
| CO | o | P | 1-i | ||||
| o | σν | •P | o | ||||
| •ri | P | P | |||||
| cO | o | -P | |||||
| CO | o | P | |||||
| P | o | ||||||
| H | o | o | |||||
| P | |||||||
| o | |||||||
| P | co | X) | |||||
| O | •ri | ||||||
| S | C0 | cO | |||||
| P | * | S | o> | ||||
| EH | * | •ri | P |
o
X)
O
Λ
P c0 β
cO
H
O
P
P
CU
S c0
P
CO
P
H co i—)
CO •rl
Ω i—I
S
CH
| CH | r-' | \O |
| co | LT\ | |
| • | • | • |
| rH | iH | iH |
| +1 | + 1 | +1 |
| cn | r—1 | Ό |
| • | • | • |
| o | O | r-- |
| rH | rH |
| o | |||||
| rH | co | α | O | ||
| P | CH | . | . | ||
| O | 1 | co | 02 | ||
| Ή | rH | ||||
| CU | Q | ||||
| > | cr | • | • | co | |
| •T-) | CH | ||||
| u | P | P | 1 | ||
| • | •ri | •ri | rH | ||
| o | r^j | Q | |||
| X) | • | M | CO | cr | |
| CO | •H | P, | 00 | P- | |
| •P | • | O | CH | o | ev |
| CO | rO | tn | 1 | in | • |
| P | rH | nj | |||
| •P | rv | . | O | . | • |
| • | o | cr | O | •H | |
| o | o | O | • | ||
| rH | fí | rH | r» | rH | rQ |
| O | •H | Ό | • | vO | |
| P | CH | CH | |||
| P | • | 1 | • | 1 | • |
| P | O | a | •H | £ | CH |
| o | • | H | • | H | P |
| o | ω | pq | rQ | pq | •ri |
| . | . | . | |||
| r-l | CH | CO |
P
CO fí cu
O 02 + 1
CO
CO •ri
X) 'CU
S o
S o
o
U) o
X)
CO
P
P cu
M
CU
P ft
CO m
o xl
CO «
cu
P cu tH •rH
Xf
C0 xJ co •ri
O p
cd u
•rl
PH •ri
P bO •rl
W
CO
XJ •P
P cu xi
P
-P
W
CU xJ
P cu
-P co cu
H
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1
Ptí o
PM tó
O o
o w
H
PM
O
H tá pq
O co o
O tá
| CO | <u | |
| 1 | CJ> | |
| s | tá | |
| H | s | |
| « | -tá tá | |
| s | co | |
| o | tá | |
| u | tá | |
| o | H | |
| tá | tá | |
| & | <1 | |
| H | tá | |
| S | tá | |
| <1 | U | |
| tá | H | |
| <d | X | |
| tá | O | |
| H | tá | tá |
| H | ||
| H | O | W |
| tá | tá | |
| O | ||
| M | tá | <n |
| tO | tá | |
| β | tá | 7 |
| β | O | < |
| θ' | S | tá |
H
O
O
O
H
Í3
H
O
CO w
tá o
o
Ω
O
H tá
H tá tá '_' tá β
M
O tá
M
O
O
O ra
Φ tá co
C0 β
tá
Ω
| &0 v—' tá β M O tá M O O | co |
| O β | tá CO |
| Φ | Ή |
| tá | Q |
| tá B CO tá co M O tá M O φ o CO | O cO |
| cu | tá |
| tá | tá |
O
P β
CU s
β
P
CO
M tá
O tá β
M
O
O
Ϊ3
| tá | ΓΗ | |
| • | • | • |
| σ> | σ\ | r-1 |
| rH | rH | CN |
| ό | CO | <r |
| • | • | .. |
| σ\ | σ\ | o |
| rH | rH | CO |
| m | cy> | tá |
| • | • | • |
| r- | V© | h- |
| rH | tá | 5—1 |
| 00 C0 | |||||
| 1 r-1 | |||||
| O | Ω | • | • | ||
| tá | O* | o | o | ||
| β | • | . | • | ||
| o | T) | co | ω | ||
| tá | • | ||||
| CU | •rl | ||||
| > | • | • | • | ||
| tá | •tá | •tá | CO | ||
| o | β | β | co | ||
| •Η | •rl | 1 | |||
| o | • | 1— | tá | ||
| 7Z) | tá | ω | M | Q | |
| cO | c | tá | co | tá | cr |
| P | •rl | ο | CO | O | |
| C0 | m | 1 | IA | • | |
| M | • | tá | T) | ||
| P | o | Ω | e» | • | |
| • | o | θ' | O | •H | |
| O | co | o | o | • | |
| 1-1 | •—I | •s | 1-1 | rQ | |
| o | Λ | tá | • | tá | |
| M | tá | CO | T) | CO | |
| P | s | 1 | • | 1 | * |
| β | co | s | •rl | s | M-l |
| O | . | tá | • | tá | fí |
| o | o | PQ | tá | pq | •rl |
• · « rH C\1 m
| co o | 1 •rl | Φ tá | ||
| tá | -i—1 | |||
| β | •rl | o | ||
| M | P | tá) | ||
| M | β | β | ||
| co | • | o | ||
| O | CO | tU | ||
| fí | oo | 'rl | ||
| B | β | |||
| O | M | |||
| o | β | P | ||
| β | M | tá | ||
| •rl | β | β | ||
| Φ | tá | β | ||
| cu | O | Β | ||
| tá) | β | |||
| o | tá | β | ||
| tá | P | Ο | ||
| o | M | Ρ | ||
| M | CU | |||
| P | > | |||
| β | β | β | ||
| O | O | Μ | ||
| o | Φ | ε | ||
| o | <\ | |||
| β | B | co | ||
| β | ||||
| co | co | |||
| •rl | B | |||
| C0 | cu | β | ||
| E | Μ | |||
| tá | co | β | ||
| β | cu | Μ | ||
| CO | M | Μ | ||
| O | β | |||
| o | •rl | tá | ||
| i—1 | β | |||
| B | XI | |||
| cu | ||||
| tá) | W | Ο | ||
| O | Ρ | |||
| co | M | β | ||
| β | P | Φ | ||
| •rl | cu | Β | ||
| tá) | B | •rl | ||
| 'CU | <β | β | ||
| B | •rl | tá | ||
| tá) | Β | |||
| o | ο | |||
| a | CO | φ | ||
| o | ||||
| o | cu | |||
| tá) | φ | |||
| co | tá) | |||
| o | M | •rl | ||
| tá) | •rl | Ό | ||
| β | P | β | ||
| P | M | tá | ||
| fi | β | tá | ||
| CU | tá | tá | ||
| co | Φ | |||
| cu | β | |||
| M | Β | |||
| tá | to | β | ||
| β | o | |||
| tá) | β | |||
| O | β | β | ||
| 2β | tá | β | ||
| CO | β | tá | ||
| o | ||||
| β | rH | β | ||
| tá | cd | tá | • | |
| β | o | β | tá | |
| M | Β | β | ||
| O | M | β | Ρ | |
| tá | O | Ό | Ο | |
| M | 6 | tá | Ρ | |
| O | β | |||
| Φ | • · | P | β | tá |
| o | β | |||
| β | •rl | o | Φ | β |
| O | β | tá) | β | ο |
| CO | CO | 1 | tá | |
| cu | β | CG | Ο | ο |
| tá | CU | O | tá) | φ |
| β | β | |||
| co | cu | CU | β | ο |
| o | tá) | tá | Ν | β |
rd
62.605
Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11
Claims (21)
- -REIVINDICAÇÕESlã. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, caracterizado pelo facto de estes serem análogos da bombesina biologicamente activa ou do péptido liberta dor de gastrina dos mamíferos que ocorrem naturalmente, que tem uma localização activa e uma localização de fixação responsável pela ligação do referido péptido a um reecptor de uma célula alvo, sendo desnecessária a clivagem de um vínculo péptido na referida localização activa da bombesina ou do péptido libertador de gastrina dos ammíferos para a activida de biológica in vivo, tendo os referidos análogos as seguintes modificações: (1) uma substituição de dois resíduos de amino ácidos no interior da localização activa por um resíduo de β-amino ácido, ou T-amino ácido, (2) um vínculo não péptido em vez de um vínculo péptido entre um resíduo de ami no ácido da referida localização activa e um resíduo de amino ácido adjacente, (3) uma anulação de um amino ácido carboxi terminal do referido péptido, que é acompanhada pelo facto de o amino ácido carboxi terminal ser da forma éster ou amlda, ou (4) alquilação do vínculo de amino entre o penúltimo e o último amino ácido carboxi terminal.
- 2-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto dos referidos análogos serem capazes de se fixar ao referido receptor de forma que os referidos análogos podem actuar como inibidores competitivos do referido péptido que ocorre naturalmente, por meio da fixação ao referido receptor e, em virtude de uma das referidas modificações, deixar de exibir a actividade biológica in vivo da bombesina ou do péptido libertador de gastrina dos mamíferos que ocorrem naturalmente.
- 3â. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a referida localização activa compreender pelo menos um amino ácido na metade terminal carboxi do péptido- 40 62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108çll biologicamente activo que ocorre naturalmente, incluindo o referido péptido linear o referido resíduo de amino ácido na sua metade terminal carboxi.
- 4ã. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 1, caracteri. zado pelo facto de a referida localização de fixação compreender pelo um amino ácido na metade amino do péptido biologi^ camente activo que ocorre naturalmente, incluindo os referidos péptidos lineares o referido resíduo de amino ácido na sua metade terminal amino.
- 5-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 1, caracteri_ zado pelo facto de compreenderem entre sete e dez resíduos de amino ácidos inclusivé, sendo os referidos péptidos anál<) gos de um dos seguintes péptidos que ocorrem naturalmente e que terminam no seu extremo carboxi com um resíduo Met: (a) litorina; (b) os dez amino ácidos da região terminal carbpxido péptido libertador da gastrina dos mamíferos; e (c) os dez amino ácidos da região terminal carboxi da bombesina dos anfibios; sendo os referidos péptidos terapêuticos da fórmula.12 Λ 5A1 - A - Trp - A4 - A3A6 - A7 -NH-CH-R3-C-V, em queA° = Gly, Nle, ácido «s—aminobutirico, ou o isómero D de qualquer um de entre Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile,Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, HCH9), Trp, Cys, ou B-Nal, ou está anulado;1 zA = pGlu, Nle, ácido <*-aminobutirico, Ala, Vai, Gin,
Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, NO OH, H ou CH3, está anulado; F5-Phe, Trp, Cys, Ser, ou β-Nal, ou pGlu, Ala, Vai , Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X- Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH3), Trp 9 62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108<Ll *71990Cys, C-Nal, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;A4 = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido <x-aminobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, Νθ£, OH, H ou CHg), Trp, Cys ou &-Nal;A4 = Gin, Asn, Gly, Ala, Ile, Nle, ácido <*-aminobutiri co, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, OH,H ou CH„), Trp, Thr, ou B-Nal;A° = Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu,Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, OH,H ou CH„), Trp, Cys, ou P-Nal;7 JA = 1-metil-His, 3-metil-His, ou His;nos quais Rg é CHR2g-CH2)n-^ (em que R20 é ou H ou OH; e nl qualquer um de 1 ou 0), ou está anulado e desde que, onde seja Fg-D-Phe ou A^ seja N-metil-D-Ala, Zg seja o grupo iden tificador de qualquer um dos amino ácido Gly, Ala, Vai, Leu,Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, p-X-Phe (em que X = H, F, Cl,Br, N02» OH, ou CHg), Fg-Phe, Trp, Cys, Met, Pro, HyPro, ciclohexil-Ala, ou -Nal; desde que onde A^ seja diferente de θFg-D-Phe pu A seja diferente de N-metil-D-Ala, Z^ apenas possa ser Fg-Phe; e V seja ou OR^ ouJR, •R, onde R^ é qualquer um dos Cg_2Qalquilo, Cg_2Qalcenilo, ^β_20 alquinilo, fenilo, naftilo, ou Cy-^fenilalquilo e cada um de Rc e R6 θ , independentemente, qualquer um de H, ^-123^- quilo, Cy_iQfenilalquilo, acilo infreior ou62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108^1ΑΓΊ1990 em que R22 é qualquer um de H, C-^_-^2alquilo, Cy_jQfenilalquilo ou acilo inferior; desde que, quando um dos R^ ou R^ é o 1 se Au estiver presente, A1-NHR o outro é H; desde que não possa ser pGlu; desde ainda que, se A° ou A^ estiver2 o presente, A não possa ser pGlu; ainda desde que, quando A esteja anulado e A seja pGlu, R^ seja obrigatoriamente a porção do Glu que forma o anel imino em pGlu; e ainda desde que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R^ e R2 seja, independentemente, H, Cj_-^2alquilo, Cy_jQfenilalquilo, COE^ (onde E^ é C^^Qalquilo, C2_2Qalcenilo, Cg-^alquinilo, fenilo, naftilo ou Cy_^Qfenilalquilo), ou acilo inferior e R^ e R^ estejam ligados ao amino ácido N-terminal do referido péptido e ainda desde que, quando um dos R^ ou R2 seja COE-^, o outro seja obrigatoriamente H ou um seu sal farmacologicamente aceitável. - 6ã. - Processo para a preparação de péptidos t£ rapêuticos de acordo com a reivindicação 5, caracterizado p£ lo facto deA° = Gly, D-Phe, ou está anulado;A^ = p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, D-fc-Nal, D-Cpa, ou D-Asn;A = Leu, Gin, His, 1-metil-His ou 3-metil-His;A4 = Ala;A5 = Vai;Αθ = Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala, ou D-Ala;A? = His;e onde A1 é F^-D-Phe ou A° é N-metil-D-Ala, (1) Rg é CHg ou CH2-CH2, Z^ é o grupo identificador de Leu ou Phe, ou (2)Rg é CHOH-CH2, Z^ é o grupo identificador de Leu, ciclohexil-Ala, ou Phe E cada R^ e R^ é H; desde que onde A^ seja diferente de F^-D-Phe ou Αθ seja diferente de N-metil-D-Ala; apenas pode ser F^-Phe e onde V seja NHR^-R^ e NH2 e cada R^ e R2, independentemente, é N, alquilo inferior ou acilo infe. rior.43 62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1 /
- 7?. - Processo para a preparação de péptidos te.rapêuticos de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de compreenderem entre sete e dez, inclusivé, resíduos de amino ácidos, sendo os referidos péptidos análogos de um dos seguintes péptidos naturais, que terminam na extrje midade carboxi com um resíduo Met:(a) litorina;(b) região carboxi terminal de dez amino ácidos do péptido libertador de gastrina dos mamíferos; e (c) a região carboxi terminal de dez amino ácidos da bombesina dos anfíbios; sendo o referido péptido terapêutico da fórmula:1.em que soA' = Gly, Nle, ácido °—aminobutirico ou o isómero D de qualquer um dos Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NC^, OH, H ou CH^) Trp, Cys, ou &-Nal, ou está anulado;= pGlu, Nle, ácido ^-aminobutirico, Ala, Vai, Gin,Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br NO2, OH, H ou CHg), F^-Phe, Trp, Cys, Ser, ouB-Nal ou está anulado;= pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H, H ou CH^) Trp, Cys, β-Nal, His, 1-metil-His, ou 3-metil-His = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido aminobutirico, met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H, H ou CHg), Trp, Cys, ou &-Nal;Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido ^--aminobutirico, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br 0H, H ou CH3), Trp, Thr, ou &-NA1;Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, 0H,62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 108(11H ou CHo), Trp, Cys, ou β-Nal;7 JA = 1-metil-His, 3-metil-His, ou His;em que R4 é CH2-NH, CH2-S, CH2-0, C0-CH2, CH2-C0, ou CH2CH2, e cada Z^ e Z2, independentemente, pode ser o grupo identifjL cador de qualquer um dos amino ácidos Gly, Ala, Vai, Leu, His Ser, Asp, Asn, Glu, Gin, fr-Nal, p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, N02, OH ou CH^), trp, Cys, Met, Pro, HyPro, ou ciclohexil-Ala; desde que, onde A^ seja F^-D-Phe ou A^ seja N-meti7 -D-Ala, e Z2 possam ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e desde que onde A^ seja diferente de Fq-D-Phe ou A seja diferente de N-metil-D-Ala, R^ seja obrigatoriamente CH2~O e e Z2, independentemente, possam ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e V seja ou OR^ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada um dos R^ e ±v2, em que cada R^, R^, Ρθ e R?, independentemente, é H, alquilo inferior, fenilalquilo inferior, ou naftilalquilo inferior; o 1 desde que, se A estiver presnete, A1 não possa ser pGlu;1 2 desde ainda que, se A° ou A1 estiverem presentes, Az não pos sa ser pGlu; desde ainda que, quando A° está anulado e A^ é pGlu, R^ sejam obrigatoriamente H e R2 seja obrigatoriamente a porção do Glu que forma o anel imina no pGlu; e ainda desde que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou R independentemente , seja H, C^_^2alquilo, Cy_-^Qfenilalquilo, COE^ (em que E^ é C-^_2Qalquilo , Cg-^alquinilo, fenilo, naftilo, ou Cy^igfenilalquilo) ou acilo inferior, e R2 estão ligados ao amino ácido n- terminal do referido péptido e ainda desde que quando um Rj ou R2 seja COE^ o outro seja obrigatoriamente H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
- 8-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080.1 pelo facto deA° = Gly, D-Phe, ou está anulado;= p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, ϋ-β-Nal, D-Cpa, D-Asn;A = Leu, Gin, His, 1-metil-His, ou 3-metil-His;A = Ala;A5 = Vai;/2A = Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala, ou D-Ala;A7 = His;1 <e em que Ax é F^-D-Phe ou A é N-metil-D-Ala e R^ é C^-NH ou CH2~O cada Zj e Z2, independentemente, é o grupo identifi^ cador de Leu ou Phe; desde que onde A^ seja diferente deF^-D-Phe ou Αθ seja diferente de N-metil-D-Ala, R^ apenas pos sa ser qualquer um dos referidos grupos identificadores; e 1 2 cada R e R , independentemente, sejam H, alquilo inferior on acilo inferior.
- 9§. - Processo para a produção de péptidos terapêuticos de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de compreenderem entre sete e dez , inclusivé, resíduos de amino ácidos péptidos esses que são análogos de um dos se guintes péptidos que ocorrem naturalmente e que terminam, na extremidade carboxi, por um resíduo Met: (a) litorina; (b) a região carboxi terminal de dez amino ácidos do péptido liber. tador da gastrina dos mamíferos; e (c) a região terminal car boci de dez amino ácidos da bombesina dos anfíbios; apresentando os referidos péptidos terapêuticos a seguinte fórmulaR-,A°-A1-A2-Irp-A4-A5-A6-A7r;em queA° = Gly, Nle, ácido *—aminobutirico, on o isómeroD de qualquer um de entre Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br,62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 1080-1NO2, OH, H 09 CHg), Trp, Cys, ou β-Nal, ou es tá anulado;AX = pGlu, Nle, ácido ^-aminobutirico, Ala, Vai, Gl^Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NO2, OH, H ou CHg), Fg-Phe, Trp, Cys, Ser, ou B-Nal, ou está anulado;A = pGlu, Gly, Ala,Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NOg, OH, H ouCHg), Trp, Cys, Β-Nal, His, 1-metil-His, ou3-metil-His;A = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido ^--aminobutirico, Met, p-X-Phe (em que X = F,Cl, Br, NO2, OH, H ou CHg), Trp, Cys, ou b-NalA^ = Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido ^-ami nobutirico, met, Vai, p-X-Phe (em que X = F,Cl, Br, 0H, H ou CH„), Trp, Thr, ou β-ΝΑΙ;6 3A = Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu,Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, NOg,OH, H ou CH-), Trp, Cys, ou β-Nal;A = 1-metil-His, 3-metil-His, ou His;1 6 desde que, onde A seja Fg-D-Phe ou A seja N-metil-D-Ala,Zj~ seja o grupo identificador de qualquer um dos amino ácidos Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Glu, β-Nal, Gin, p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, NO2, OH ou CHg), Fg-Phe,Trp, Cys, Met, Pro, ou HyPro; e desde que onde A2 seja dife6 1 rente de Fg-D-Phe ou A seja diferente de N-metil-D-Ala, A tem obrigatoriamente de ser o grupo identificador do Fg-Phe; e cada Zg, Zg e Z^, independentemente, é H, alquilo inferior fenilalquilo inferior ou naftalquilo inferior; desde ainda que, se esriver presente A° presente, AX não possa ser pGlu; ainda desde que, quando A° está anulado e A1 * * * * 6 seja pGlu, R^ seja obrigatoriamente H e Rg seja obrigatoriamente a.porção do Glu que forma o anel imina em pGlu; e ainda desde que qualquer átomo de carbono assimétrico possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R-^ e Rg, independen62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN ÍOQÇLI temente, seja H, C^_^2alquilo, Cy_2gfenilalquilo, COE^ (em que E^ é C-^_2galquilo, C2_2galcenilo, C2_2Qalquinilo, fenilo, naftilo ou Cy_^gfenilalquilo), ou acilo inferior, e R^ e R2 estão ligados ao amino ácido N-terminal dos referidos péptidos e ainda desde que, quando um dos R^ ou R2 é CORp o outro seja obrigatoriamente H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável .
- 10-. - Processo para a preparação de péptidos te.rapêuticos, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo facto de = Gly, D-Phe, ou está anulado;= p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, D-B-Nal, D-Cpa, ox.D-Asn;= Leu, Gin, His, 1-metil-His, ou 3-metil-His;= Vai;= Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala, ou D-Ala; = His;1 6 e onde A1 fôr F^-D-Phe ou A fôr N-metil-D-Ala, R^ é o grupo identificador de qualquer um dos amino ácidos Leu, F^-Pbe, ov p-X-Phe (em que X = H, F, Cl, Br, N09, OH ou CH9); desde que onde A1 seja diferente de F^-D-Phe ou A° seja diferente de N-metil-D-Ala, Z-^ apenas possa ser o grupo identificador do F^-Phe; e cada um dos Z2, Z^ e Z^, independentemente, é H, lquilo inferior, fenilalquilo inferior ou naftilalquilo infe. riorç e cada um dos R^ e R2 , independentemente, é H, alquile inferior, ou acilo inferior.
- 11-. - Processo para a preparação de péptidos t£ rapêuticos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de compreenderem entre sete e dez resíduos de ami no ácidos, inclusivé, sendo os referidos péptidos análogos de um dos seguintes péptidos dos naturais que terminam, na extremidade carboxi por um resíduo Met, (a) litorina; (b) a região terminal carboxi de dez amino ácidos do péptido líber tador da gastrina dos mamíferos; e (c) a região carboxi terminal de dez amino ácidos de bombesina dos anfíbios; sendo oí62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^(11 referidos péptidos terapêuticos da seguinte fórmulaR, o 1 2 4 5 6 7A -A -A -Trp-A -A -A -A-NRí em queA° = Gly, Nle, ácido ^-aminobutirico, ou o isómero D de qualquer um dos Ala, Vai, Gin, Asn, Leu Ile, Met, p-X-Phe (em que X= F, Cl, Br, N02, 0H, H ou CH^), Trp, Cys ou P>-Nal, ou está anulado;= pGlu, Nle, ácido aminobutirico, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br N02, OH, H ou CH^), Fçj-Phe, Trp, Cys, Ser, ouB-Na ou está anulado;= pGlu, Gly, Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X -Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH^), Trp, Cys, fc-Nal, His, 1-metil-His, ou 3-metil-His = Ala, Vai, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, ácido ^-aminobutirico , Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH^), Trp, Cys, ou fc-Nal;= Gin, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, ácido ^-aminobutirico, Met, Vai, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br Oh, H ou CHg), Trp, Thr, ou β-Nal;= Sar, Gly, Ala, N-metil-Ala, Vai, Gin, Asn, Leu, Ile, Met, p-X-Phe (em que X = F, Cl, Br, N02, OH, H ou CH^), Trp, Cys, ou B-Nal;= 1-metil-His, 3-metil-His, ou His;em que cada Ζ2θ e Ζ^θ, independentemente, é H alquilo inferior, fenilalquilo inferior, naftilalquilo inferior; desde ainda que, tanto Z9n como Z9n sejam diferentes de H, èJ sejaA' 6 J205como Z30 , 2A° seja Gly, A3 seja Vai, A4 seja Ala, AZ seja His eHisR^ ou R2 sejam diferentes de Η, A1 seja F^-D-Phe; desde ainda que A1 seja obrigatoriamente F^-D-Phe ou A^ seja obrigat£ riamente N-metil-D-Ala; desde que, se A° ou A^ esriver presente, A^ não possa ser pGlu; desde ainda que quando A° está anulado e A^ é pGlu, Rj seja obrigatoriamente H e R2 seja62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 10^11 obrigatoriamente a porção de Glu que forma o anel de imina em pGlu; desde ainda que qualquer átomo de carbono assimétri co possa ser R, S ou uma mistura racémica; e ainda desde que cada R^ R2, independentemente, seja H, C^^alquilo, Cy_-^gfe. nilalquilo, COE^( em que E^ é C^_2Qalquilo, C^^alcenilo, C2_2oalquinil°, fenilo naftilo, ou Cy_-^Qfenilalquilo, ou aci^ lo inferior e R^ e R2 estejam ligados ao amino ácido N-termi. nal dos referidos péptidos e ainda desde que quando um dos Rj ou R2 seja COE^, o outro seja obrigatoriamente H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
- 12§. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo facto deA° = Gly, D-Phe, ou está anulado;A^ = p-Glu, D-Phe, F^-D-Phe, D-Ala, D-β-ΝΑΙ, D-Cpa ouAzD-Asn;= Leu, Gin, His, 1-metil-His ou 3-metil-His; = Ala;= Vai;= Sar, Gly, D-Phe, N-metil-D-Ala ou D-Ala;= His;e em que cada um dos Z20 θ Z30 e H; e cada R-^ e R2, independentemente, é H, alquilo inferior, ou acilo inferior; desde que A^ seja obrigatoriamente F^-D-Phe ou Αθ seja obrigatória mente N-metil-D-Ala.
- 13ã. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo afeto de conter a seguinte fórmula:p-Glu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-estatina-amida
- 14-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5, 7, 9 e 11, caracterizado pelo facto dos referidos análogos serem pelo menos 25% homólogos com os referidos péptidos naturais .62.605Ref: BIOEMASURE-BOMBESIN 10&11
- 15ã. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos , de acordo com qualquer uma das reivindicações 5, 7, 9 e 11, caracterizado pelo facto de os referidos análo. gos serem pelo menos 50% homólogos com os referidos péptidos naturais.
- 169. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de R^ ser CH2-NH e o referido átomo de carbono Li gado a Z2 ser da referida configuração R.
- 17-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo facto de conter a seguinte fórmula:D-Cpa-,Gln-Trp-Ala-Val-Gly-P’-Leu-NH2.
- 18-. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo facto de conter a seguinte fórmula:D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-B-Leu-NH2.
- 19§. - Processo para a preparação de péptidop terapêuticos, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo facto de V ser OR^, e R^ ser qualquer um de entre Ci_2oalquil°j Cg_2Qalcenilo, C^-^alquinilo, fenilo, naftilo ou Cy-^fenilalquilo e Αθ ser N-metil-D-Ala ou A^ ser D-F^-Phe.
- 20s. - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos , de acordo com a reivindicação 19, caracte. rizado pelo facto de conter a seguinte fórmula:D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-metil-D-Ala-His-Leu-metilester.
- 21-, - Processo para a preparação de péptidos terapêuticos, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo facto de conter a seguinte fórmula:d-Fçj-Phe-Gln-trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-metilester.62.605Ref: BIOMEASURE-BOMBESIN 109(111 Lisboa,Por BIOMEASURE, INC.;,THE ADMINISTRATORS OF THE TULANE EDUCATIONAL FUND0 AGENTE OFICIAR..£g-'ií: ·:·ί dõ Prc>—'ndustriolCsríório-z-.fcc· :> ConceifSC, 3» 3.3«Η·β tHHMod. 71-10000 ex. - 89/07
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US39716989A | 1989-08-21 | 1989-08-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT95057A PT95057A (pt) | 1991-05-22 |
| PT95057B true PT95057B (pt) | 1997-12-31 |
Family
ID=23570102
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT9505790A PT95057B (pt) | 1989-08-21 | 1990-08-21 | Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PT (1) | PT95057B (pt) |
-
1990
- 1990-08-21 PT PT9505790A patent/PT95057B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT95057A (pt) | 1991-05-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0489089B1 (en) | Therapeutic peptides | |
| EP0438519B1 (en) | Therapeutic peptides | |
| EP0309297B1 (en) | Therapeutic peptides | |
| US6307017B1 (en) | Octapeptide bombesin analogs | |
| US5723578A (en) | Peptide analogs of bombesin | |
| US5217955A (en) | Treatment of cancer with peptide analog of bombesin, grp, litorin or neuromedin | |
| US5162497A (en) | Bradykinin analogs with non-peptide bond | |
| EP1011716B9 (en) | Neuromedin b receptor antagonists | |
| PT95016B (pt) | Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos | |
| WO1991004040A1 (en) | Treatment of colon cancer | |
| EP0588873B1 (en) | Treatment of liver cancer | |
| HK1006947B (en) | Treatment of liver cancer | |
| PT95057B (pt) | Processo para a preparacao de peptidos terapeuticos | |
| RU2088592C1 (ru) | Терапевтические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли | |
| AU622123C (en) | Therapeutic peptides | |
| CA1340988C (en) | Therapeutic peptides | |
| HK1010785B (en) | Therapeutic peptides | |
| IE900222A1 (en) | Therapeutic peptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB1A | Laying open of patent application |
Effective date: 19910107 |
|
| FG3A | Patent granted, date of granting |
Effective date: 19970915 |
|
| MM3A | Annulment or lapse |
Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES Effective date: 20000331 |