LU80124A1 - Procede de production de derives 1-n-alkyles de la kanamycine - Google Patents

Description

• D. 4ο.96ο

-Q Q—Ί—| 7 (AInD-DUCHÊ DE LUXEMBOURG

Brevet N°....................................................

du 1.7 août 197-8.— Monsieur le Ministre de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes

Titre délivré: --------------------------------------- , , . „

Service de la Propriété Industrielle

~r / LUXEMBOURG

’φ /<f-M

/ <H) demande de Brevet d’invention I. Requête _____________La. société. dite :.... PFIZER.. CORPORATION.,.. Calle... 15½ ,.....Mmidâ...£anS& _____________lsabel,.....â. COLON,.....République de.....P.an.âma,.....fet.....ayant.....m .............ment , commercial. àïlo2 rue L6on.%hæ#ac,...OQ9o..Hl^ (2)

___________r^^ésentêe. .par .M2nsieir .Jacqæs--de MaYsec.,...-2giss2mt...en...<^jalitê...de...mandataiE

dépose________ ce________dix- sept août.....19OQ.....s.Qix.ante-dixr.buit.....................................(3) à.................15...... . heures, au Ministère de l’Economie Nationale et des Classes Moyennes, à Luxembourg : 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d’invention concernant : .............."Procédé... de....pEoduction.........de...dérivés....^................................(4) ..................kanamycine"..-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------—............................................

déclare, en assumant la responsabilité de cette déclaration, que l’(es) inventeur(s) est (sont) : .............Michael. JBarrie.....THQms.,.....Lynwaod....Hous.e.,^ (5) .............Gr.eat....Mongeham.,.....Deal.,.....Kent,.....Grande-Bretagne.................................................................................

2. la délégation de pouvoir, datée de ...SM3QKXCE,..JKEiiC................ le —.3.Ρ.....JH.i.n....19..7.8..........

3. la description en langue.............française..............................de l’invention en deux exemplaires ; 4................//........ , planches de dessin, en deux exemplaires ; 5. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, 1e —17..aoÛt.....1978........................................................................-.....................................................................................................-........................................

revendique pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de (6)...............................brevet.....................................déposée® en (7)..............Grande.—Bretagne......................................................

le__________18.août. 1977..........(No.......34.8o8/7.7.)........................................................................................................................................(8) au nom de .............REIZ ER ..LIMITED............................................................................................................................................................................(9) élit domicile pour lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg ..................................— .35.,.....hld.......Royal..................................................................................................................................................................................................................(îo) sollicite la délivrance d’un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les annexes . susmentionnées, — avec ajournement de cette délivrance à ... ............18................... ....... mois.

II, Procès-verbal de Dépôt

La susdite demande de brevet d’invention a été déposée au Ministère de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes, Service de la Propriété Industrielle à Luxembourg, en date du : 17 août 1978 pr. je Ministre à 15 heures /^ '\%Nde l’Économie National^et/ies Classes Moyennes,

- .f . ....................... § \\\ feA

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REVENDICATION DE LA PRIORITE

de la demande de brevet I/du/

En GRANDE-BRETAGNE Du 18 AOÛT 1977 τβΓ Mémoire Descriptif déposé à l’appui d’une demande de

BREVET D’INVENTION

au

Luxembourg

au nom de: PFIZER CORPORATION

pour: "Procédé de production de dériyés 1-N-alkylés de la kanamycine".

/ I La, présente invention concerne un procédé ru· veau de production d’antibiotiques du type d'aminoglucosid» et des composés intermédiaires nouveaux destinés à être utd sés dans ce procédé, et elle a trait en particulier à un pr 5 cédé de production de dérivés 1-N-alkylés de la kanamycine des dérivés de kanamycine sélectivement protégés sur 1 ' azo d’amine, comme composés intermédiaires destinés à être util sés dans ce procédé.

Le brevet britannique N° 1 464 401 donne des 10 exemples de dérivés 1-N-alkylés de kanamycine de ce genre ; d'autres sont décrits dans le brevet belge N° 855 709.

Pour préparer ces composés à partir de la ka mycine que l!on obtient aisément par fermentation, il est d sirable de protéger tous les groupes amino autres que le gr 15 amino en position 1. Une alkylation peut ensuite être effec tuée préférentiellement sur le groupe amino occupant la po tion 1 et l’isolement du produit 1-N-substitué final en est simplifié. Le but de la présente invention est de trouver u procédé de production de dérivés de kanamycine à fonction 1 20 amino substituée, par formation de ces composés intermédiai sélectivement N—protégés.

En conséquence, la présente invention offre procédé de production de composés de formule : CH2NH2 HO '—"Τ'—fe- O .

HO 5 /6 NUR1 tf CII^OH / h N / HO O ' Λ 2 : ΐ Λ ί (dans laquelle R un q) oupe amino ou hydroxyle et RA est '! " r y i un groupe alkyle ]nférieui dont tout atome de carbone autre que celui par leqnG^ ^ ept attaché à l'atome d'azote peut éventuellement êttR substitua avec un groupe hydroxyle ou 5 amino), procédé cm*nctériP® par le fait qu'il consiste à alky-ler un composé de formuie : 3 CH NK* B0' 0 NHR2 '' HO--NH ---(II) H v Z' o' 2 3 (dans laquelle R 0.st un <roupe formyle, R est un groupe alcanoyle en C~ à v*; 4 Du u- groupe benzoyle et est un groupe ^ Ht 2 hydroxyle ou un gr oupe NH5· ) pour obtenir un composé de for-lo mule : „„3

CH,'dR

HO * 3V 2 . ^ Ju-Λ ' r® r‘ 1 -^Χ^Λ çh2c,-: ° KHR1 (III) ho

R3NH yS

HO / (dans laquelle R^ >_ r4 Qn les définitions données ci-dessus), 12 3 Ν χ à éliminer les groupes R et R ; et à isoler le composé de formule (I).

Dans le présent mémoire, l’expression "alkyle inférieur·* signifie que le groupe alkyle contient 1 à 6 ato-5 mes de carbone et peut avoir une chaîne droite ou ramifiée.

Des exemples particuliers de groupes alkyle inférieurs substitués R^ comprennent les groupes £s3-4-amino-2-hydroxybutyle et 1,3-dihydroxyprop-2-yle. Le groupe R^ protecteur est de préférence un groupe acétyle.

10 Ce procédé de production de composés de formule (I) implique comme étape initiale l'alkylation d’un composé de formule (II) en vue d'introduire le substituant R sur le groupe amino en position 1. Cette réaction peut être conduite de diverses façons bien connues de l'homme de l'art. Par exem-15 pie, l'alkylation peut être effectuée par voie de réduction en utilisant un aldéhyde ou une cétone convenable ou un composé du type décrit dans le brevet belge N° 851 777.

La seconde étape du procédé consiste à éliminer les groupes protecteurs R^ du groupe 2'-amino éventuellement 20 présent et des groupes amino en positions 6' et 3" ainsi que le groupe formyle porté par le groupe 3-amino. Lorsque le subsi tuant du groupe 1-amino porte lui-même un substituant amino, il peut être désirable de protéger ce groupe pendant la mise en oeuvre du procédé, et il est ensuite nécessaire d’éliminer 25 également ce groupe protégeant la fonction amino dans l'étape finale du procédé. Il existe diverses conditions d'élimination totale de groupes protégeant des fonctions amino, qui sont bien connues de l'homme de l'art et qui dépendent naturel lement de la nature du groupe protecteur utilisé et du milieu 30 dans lequel se trouve l'amine protégée. Le milieu utilisé peut être anhydre ou aqueux et, dans des cas particuliers, il peut être acide ou basique à divers degrés. Par exemple, le groupe benzyle* lorsqu’il est présent, peut être éliminé par hydro-génolyse catalytique d'une manière classique en présence d'un 35 catalyseur au palladium. Les groupes protecteurs alcanoyle ou benzoyle peuvent en général être éliminés par hydrolyse dans des conditions basiques douces, par exemple par traitement à 1'hydroxyde de sodium dilué, à 65*0 pendant plusieurs heures.

4

Ces conditions éliminent également le groupe formylé. Le produit (I) peut finalement être purifié, le cas échéant, par des opérations classiques, par exemple par cristallisation ou par chromatographie.

5 Le procédé est illustré par la préparation de la 1-N—£(S) —4-amino-2-hydroxybutyl]kanamycine A. Dans ce cas, la kanamycine intermédiaire protégée de formule (II)/ dans la- 4 3 quelle R est un groupe hydroxyle et R est un groupe acetyle^, • est alkylée par une alkylation par voie de réduction, en uti- 10 lisant un aldéhyde convenable ou un composé du type décrit dans le brevet belge N° 851 777 précité. Ainsi, on peut utiliser la 3-benzyl-6-(S)-dihydroxyméthyltétrahydro-l,3-oxazine- 2-one et on peut conduire l'alkylation par voie de réduction en utilisant le borohydrure de sodium ou de préférence le cya-15 noborohydrure de sodium comme agent réducteur. On peut utiliser un excès d'aldéhyde (ou d'un autre composé) et d'agent réducteur pour assurer la réaction, totale du groupe 1-amino libre. Des solvants convenables sont le méthanol ou le dioxan-ne aqueux $ le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxyde con-20 vient également. Un acide tel que l'acide acétique peut aussi être ajouté avantageusement. La réaction est généralement conduite à la température ambiante et elle est habituellement terminée en 5 ou 6 heures. Le produit brut peut être isolé par évaporation du solvant et peut ensuite être purifié, le 25 cas échéant, par recristallisation ou par chromatographie. Toutefois, en général, il est plus avantageux d'utiliser di- » rectement le produit brut dans 1'étape suivante du procédé. Ainsi, le produit brut est dissous dans de 1'hydroxyde de sodium dilué et la solution est chauffée à 55°C pendant une 30 période d'environ 5 heures pour éliminer les groupes formyle et acétyle protecteurs. Après neutralisation, le produit de préférence séparé de la matière inorganique est soumis à une hydrogénation catalytique classique dont le but est d'éliminer le groupe benzyle protecteur. Une période de 4 ou 5 heures à 35 60°C et une pression de 4,2 bars sont en général suffisantes pour éliminer totalement le groupe benzyle et le produit est enfin traité de manière classique et purifié, le cas échéant, par chromatographie par échange d'ions, pour donner le produit l\ 5 final. Etant donné qu'il n'y a qu'un groupe amino réactif dans le composé de départ de formule (II), le produit final est essentiellement formé de l'isomère 1-N-substitué désiré et on évite ainsi la séparation difficile d'isomères très proches.

5 On peut aussi conduire la réaction exactement de la même manière en utilisant la 2',3",6'-tri-N-acétyl-3-formyl-kanamycine B pour obtenir le dérivé correspondant de kanamycine B à fonction l-amino substituée;

On peut aussi conduire la réaction d'alkylation 10 en utilisant un aldéhyde ou une cétone à substituant hydroxy pour obtenir des dérivés 1-N-hydroxyalkylés de kanamycine, comme décrit dans le brevet belge N° 855 709. Ainsi, par exemple, lorsque, la 1,3-dihydroxyacétone est utilisée dans le pro- cédé, le produit obtenu de formule (I) a pour groupe R un 15 groupe 1,3-dihydroxyprop~2-yle.

Les composés de formule (II) sont eux-mêmes des composés nouveaux conformément à l'invention. On peut les préparer à partir d'une 3",6'-di-N-acyl-kanamycine A ou d'une 2',3",6’-tri-N-acyl-kanamycine B par une réaction qui implique 20 (1) la formylation des groupes l-amino et 3-amino non substi tués restants et (2) une hydrolyse sélective qui s'est révélée, de façon surprenante, apte à éliminer le groupe formyle de la . position l-amino tout en laissant intact le groupe formyle qui j se trouve en position 3- ! 25 La préparation de dérivés acylés convenables de ! la kanamycine* substitués sur les groupes 3"- et 6'-amino dans j la kanamycine A et en outre sur le groupe 2'-amino dans la i kanamycine B, avec un groupe alcanoyle en C2 à ou un groupe benzoyle, est décrite dans le brevet belge Ne 853 554. Par 30 exemple, on trouve dans ce brevet la description de la préparation de la 3",6'-di-N-acétyl-kanamycine A en passant par une réaction sélective de migration du groupe acétyle de l’oxygène à l'azo'te. D'autres dérivés peuvent être préparés de la même : manière.

35 La réaction de formylation peut être conduite de plusieurs façons différentes bien connues de l'homme de l'art. Par exemple, on peut la conduire en utilisant un mélange d'anhydride formique et d'anhydride acétique, mais on a dé— A—.

t 6 couvert que la réaction peut avantageusement être conduite en utilisant le formiate de 4-nitrophényle. Des solvants avantageux à utiliser pour la réaction sont le dioxanne aqueux, le tétrahydrofuranne aqueux ou le diméthylformamide, et la réac-5 .tion est conduite avec addition d’un excès (par exemple trois fois la quantité nécessaire) de formiate de 4-nitrophényle, par portions, au dérivé de kanamycine. Une base est de préférence ajoutée pour favoriser la réaction et on peut choisir à cette fin une base organique telle que la triéthylamine. On 10 préfère ajouter au moins un équivalent de base pour chaque groupe amino réactif. La réaction de formylation s’accomplit généralement en 24 heures à la température ambiante et le produit peut .ensuite être isolé par des opérations classiques, par exemple par évaporation du solvant ou par précipitation, 15 et on peut en outre le purifier, le cas échéant.

On conduit l'hydrolyse sélective en utilisant le produit 1,3-di-N-formylé a l'état dissous dans l’eau ou dans un solvant organique aqueux, par exemple une solution aqueuse de dioxanne ou le tétrahydrofuranne^et on ajuste soi-2o gneusement le pH de la solution dans la plage de 12,0 à 12,5 par addition d'une base alcaline, par exemple une solution diluée d'hydroxÿde de sodium ou de potassium. La solution est agitée à la température ambiante pendant plusieurs jours, l'évolution de la réaction étant suivie par chromatographie 25 sur couche mince, jusqu'à ce que la transformation en dérivé 3-N-formylé désiré de formule (II) soit achevée. La solution est ensuite neutralisée par l'addition d'un acide ou bien, plus avantageusement, par addition d'une résine échangeuse d'ions sous la forme de l'ion hydrogène. Cela offre 1'avanta-30 ge d'empêcher l'accumulation d'une matière inorganique dans la solution, et aussi l’avantage que tout sous-produit dont les deux groupes 1—formyle et 3-formyle ont été clivés, est fixé par adsorption sur la résine. Le produit est finalement isolé par des opérations classiques, par exemple par évapora-35 tion à faible volume et précipitation avec un solvant organique tel que 1'isopropanol. Le cas échéant, on peut parfaire la purification par une chromatographie mais, en général, le produit est suffisamment pur pour être utilisé directement dans /

Ila préparation composés de formule (I).

Le procédé de préparation de composés de formule (II) peut être mis en oeuvre en utilisant la 3",6'-di-N- acétyl-kanamycine A pour obtenir le composé de formule (II) 3 4 5 dans laquelle R est un groupe acétyle et R est un groupe hydroxy. De même, la 2', 3", 6'-tri-N-acétyl-kanamycine B peut être utilisée pour former le composé de formule (II) dans la-4 3 3 quelle R est un groupe NHR et R est un groupe acetyle.

L'invention est illustrée par les exemples sui-10 vants, parmi lesquels les exemples 1 et 3 sont les exemples de préparation de composés intermédiaires nouveaux de formule (II) et les exemples 2 et 4 sont des exemples illustrant le nouveau procédé de préparation de composés de formule (I).

La chromatographie sur couche mince a été con-15 duite sur des plaques de silice, en utilisant le mélange de solvants indiqué. Les taches ont été décelées, après séchage des plaques, par pulvérisation d'une solution à 5 % d'hypo-chlorite de tertio-butyle dans le cyclohexane, séchage à 100°C pendant 10 minutes dans une étuve à circulation d'air, refroi-20 dissement et application par pulvérisation d'une solution d'amidon et d’iodure de potassium.

L'électrophorèse sur couche mince a été effectuée sur des plaques de silice de 20 cm en appliquant une différence de potentiel de 900 volts pendant 45 minutes. L'élec-25 trolyte consistait en un mélange d'acide formique et d'acide acétique donnant un pH égal a 2, la détection étant effectuée comme indiqué ci-dessus.

"Amberlite" et "Sephadex" désignent des marques déposées.

30 Exemple 1

Préparation de la 3",6'-di-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine A

(A) On ajoute par portions en 45 minutes 5,88 g de forrniate de 4-nitrophényle à une suspension de 3,9 g de 3",6'-di-N-acétyl-kanamycine A dans 21 ml d'eau et 21 ml de 35 tétrahydrofuranne contenant 6,91 g de triéthylamine. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant environ 16 heures, puis on l'évapore à faible volume en chassant les dernières traces d'eau par distillation azéotropique avec { de 1Msnnrnnannl ivnlnme final 36 mil. Un nrérinîfe de « 8 3”,6 *-di-N-acétyl-1,3-di-N-formyl-kanamycine A (2,41 g) se forme dans la solution ; il est filtré et séché sous vide à 50°C.

Le composé donne par électrophorèse sur couche 5 mince (pH = 2) une valeur de 0,09 en ce qui concerne la kana-mycine A. Dans la chromatographie sur couche mince effectuée en utilisant comme éluant un mélange à 40:40:1:30 de méthanol, d'acétate d'éthyle, d'ammoniaque et d'eau, on trouve pour ce composé un égal à 0,42. Le spectre de résonance magnétique 10 nucléaire des protons présente des signaux à £= 7,96 ppm (proton de formyle), 8,02 ppm (proton de formyle) et 2,02 ppm (6 protons d'acétyle).

(B) Le produit venant de (A) (2,4 g) est dissous dans 72 ml d'eau et le pH de la solution est ajusté à 12,0-15 12,5 avec 2,0 ml de solution d'hydroxyde de sodium 2N. La solution est agitée à la température ambiante pendant 7 jours en maintenant le pH entre 12,0 et 12,5, puis elle est neutralisée par l'addition de 10 ml de résine "Amberlite IR120" échangeuse d'ions (forme H+). La résine est filtrée et le fil-20 trat est concentré à faible volume, les dernières traces d’eau étant éliminées par déplacement au reflux avec 5 ml de diméthyl-formamide. On ajoute ensuite lentement 30 ml d'isopropanol à la solution de diméthylformamide et on filtre le précipité de 3',6'-di-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine A (1,75 g), puis on 25 le sèche à 40°C sous vide.

Le composé est assez pur pour être utilisé dans l'étape suivante du procédé. Un échantillon est encore purifié par chromatographie sur colonne de "CM Sephadex C25" (forme NH^+) en utilisant comme éluant une solution d'hydroxyde d'am-30 monium 0,1M. Il donne un spectre de résonance magnétique des noyaux de 13^, qui concorde tout à fait avec la structure désirée et qui confirme: la monoformylation du groupe 3-ami- no. L'électrophorèse sur couche mince (pH = 2) donne une valeur de 0,43 relativement à la kanamycine A. D'après la chro-35 matographie sur couche mince effectuée en utilisant comme éluant un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle, d'ammoniaque et d'eau à 40:40:1:30, le composé donne un R^ de valeur a égale à 0,23.

9 Ι·

Exemple 2 »

Préparation de la l-N-£(S)-4-amino-2-hydroxybutyl]-kanamycine A_

On ajoute 0,21 g de cyanoborohydrure de sodium 5 dans 40 ml d'eau à 2,0 g de 3",6'-di-N-acétyl-3-N-formyl- kanamycine A, 2,38 g de 3-benzyl-6-(S)-dihydroxyméthyl-tétra-hydro-2H-l,3-oxazine-2-one et 0,1 g de sulfate de cuivre dans 66 ml d'eau et 322 ml de méthanol, en une période de 5 heures. On évapore le mélange réactionnel à sec sous pression réduite 10 et on traite le résidu avec 25 ml d'eau et 25 ml de chlorure ' de méthylène. On évapore la phase aqueuse à sec et on chauffe le résidu avec 20 ml de solution d'hydroxyde de sodium 3N, pendant 4 heures à 65-70°C. On laisse refroidir la solution et on la neutralise par addition d'acide chlorhydrique concentré 15 en éliminant correctement les émanations (dégagement de HCN), puis on la fait passer sur une colonne de 600 ml de résine "Amberlite CG-50" échangeuse d'ions (forme NH4+), en éluant les substances minérales avec de l'eau et les matières amino-glucosidiques avec une solution d'hydroxyde d'ammonium 0,2N.

20 Les fractions aminoglucosidiques sont évaporées à sec et le résidu est dissous dans un mélange de 13 ml de méthanol, 13 ml d'acide acétique et 13 ml d'eau, puis hydrogénées par passage sur du palladium à 5 % fixé sur du charbon (0,4 g) à 60°C et sous pression de 4,2 bars pendant 4 heures.

25 Le catalyseur est filtré et le filtrat est évaporé à sec. Le • résidu est dissous dans 20 ml d'eau et la solution est chroma- * i tographiée sur une colonne de 200 ml de résine d'échange ionique "CG-50" (forme NH4+) en utilisant comme éluant une solution d'hydroxyde d'ammonium (0,25 - 0,1M). Par évaporation des 30 fractions correspondantes, on obtient 0,75 g (37 %) de 1-N— [(S)-4-amino-2-hydroxybutyl]-kanamycine A identique à un échantillon authentique d'après la chromatographie et 1'électropho-* rèse sur couche mince.

Exemple 3

35 Préparation de la 2',3",6'-tri-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine B

(A) On ajoute 128 g de chloroformiate de benzyle en 10 minutes à une solution de 80,5 g de sulfate de kanamycine / B et 76 g de carbonate de sodium dans 400 ml d'eau, et on agite 10 la solution pendant 1 heure à la température ambiante. On recueille le précipité par filtration» on le lave à l’eau, à l'acide chlorhydrique dilué et à l'eau et on le sèche pour obtenir la penta-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine B en un ren-5 dement de 125,7 g.

(B) On ajoute 230,8 g de penta-N-benzyloxycar-bonyl-kanamycine B par portions en 15 minutes à une solution sous agitation de 189 ml d’anhydride acétique dans 346 ml de pyridine et 346 ml de dichlorométhane et on agite la suspen- 10 sion à la température ambiante pendant 48 heures. On verse la solution dans un mélange de 1,5 litre de dichlorométhane et 2,3 litres d’eau. On sépare la phase organique et on la lave avec de l'acide chlorhydrique dilué (pH 4) et avec de l'eau.

On évapore le solvant à un volume de 0,75 litre et on verse 15 la solution dans 4 litres d’éther diéthylique. Le précipité de tétra-O-acétyl-penta-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine B est recueilli par filtration et séché sous vide (rendement 244,8 g ; 92,6 %).

(C) Une solution de 33,0 g de tétra-O-acétyl-20 penta-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine B dans 132 ml de tétra- hydrofuranne, 66 ml d'eau et 3,3 ml d'acide acétique est hydrogénée sur 3,3 g de catalyseur à 5 % de palladium fixé sur du charbon de bois à 50°C et sous pression de 3,5 bars pendant 7 heures. Le catalyseur est enlevé par filtration et le fil-25 trat est concentré à un volume de 25 ml. Le résidu est traité -à 1'hydroxyde d'ammonium (7N, 81,5 ml) et agité pendant environ 16 heures à la température ambiante. La solution est évaporée à sec et le résidu est chromatographié sur une colonne de résine "Amberlite CG-50" d'échange ionique sous la 30 forme de l'ion ammonium (2 litres), l'élution étant effectuée avec de l'eau, puis avec de l'ammoniaque 0,0lN. On rassemble les fractions contenant le produit désiré et on les évapore pour obtenir 9,37 g (61,6 %) de 2',3",6'-tri-N-acétyl-kanamy- cine B fondant à 191—198°C en se décomposant. Ό (KBr) - max.

35 1650, 1550 cm ; Rf 0,11 (méthanol : éther diéthylique : eau : ammoniaque, 0,880 dans la proportion de 6:3:1:2), Rf 0,11 (méthanol: acétate d'éthyle:eau:ammoniaque, 0,880 dans la pro-λ portion de 40:40:30:1).

11 : # (D) On ajoute par portions en 40 minutes 153,1 g Ψ de formiate de p-nitrophényle à une solution refroidie de 93 g de 2',3",6'-tri-N-acétyl-kanamycine B dans un mélange de 465 ml d’eau, 558 ml de tétrahydrofuranne et 154 g de triéthylamine.

5 On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant environ 16 heures, puis on le concentre à faible volume sous pression réduite. On dilue le concentré aqueux à l'iso-propanol pour précipiter le produit, l’eau résiduelle étant chassée par distillation azéotropique avec de 1'isopropanol.

10 Le produit est finalement recueilli par filtration, lavé à 11isopropanol et séché sous vide en donnant 89,2 g de 2',3",6'-

tri-N-acétyl-1,3-di-N-formyl-kanamycine B fondant à 3l0-318°C

v -1 en se décomposant. ~v (KBr) 1665, 1545 cm ; Rf 0,49 ΓΠ8.Χ · (méthanol: éther diéthylique:eau:ammoniaque, 0,880 dans la 15 proportion de 6:3:1:2), Rf 0,54 (méthanol: acétate d’éthyle: eau:ammoniaque 0,880 dans la proportion de 40:40:30:1).

(F) On ajuste à 12-12,5 avec une solution d’hydroxyde de sodium ION le pH d'une solution de 86,9 g de 21,3",61-tri-N-acétyl-1,3-di-N-formyl-kanamycine B dans 2,61 20 litres d’eau. On maintient le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 4 jours en réajustant le pH de la solution à 12 par addition éventuelle de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium, puis on neutralise la solution par l'addition de résine "Amberlite IR 120” (forme H+). On filtre le 25 mélange et on chromatographie le filtrat sur une résine échan-geuse d'ions "Amberlite 200" (forme NH4+ , 5,5 litres) en effectuant l'élution avec de l'eau, puis avec de l’ammoniaque 0,1N. Par évaporation des fractions correspondantes, on ob-! tient 55,4 g de 2',3",6'-tri-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine B

30 fondant à 266-268° en se décomposant. (KBr) 1665, 1555 cm” ; Rf 0,49 (méthanol: acétate d'éthyle:eau:ammoniaque 0,880 dans la proportion de 40:40:30:1). La structure a été confirmée par spectroscopie de résonance magnétique des noyaux de 13c.

35 Exemple 4

Préparation de la l-N-(l,3-dihydroxyprop-2-yl)-kanamycine B

On traite une solution de 8,8 g de 2 ' ,3",6'-tri-A N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine B dans 880 ml de méthanol et 0 12 176 ml d'eau avec·· 4,0 g de 1,3-dihydroxyacétone et 3,9 g de cyanoborohydrure de sodium et on ajuste le pH de la solution résultante à 6,5 par addition d'acide chlorhydrique 5N. On chauffe la solution au reflux pendant 18 heures, on la refroi-5 dit et on y ajoute encore 4,0 g de 1,3-dihydroxyacétone et 3,9 g de cyanoborohydrure de sodium- On réajuste le pH à 5,5 par addition d'acide chlorhydrique et on chauffe la solution au reflux pendant encore 6 heures. On châsse le méthanol sous pression réduite et on chromatographie le concentré aqueux » 10 sur une colonne de résine d'échange ionique "Amberlite 200" sous la forme NH^+, en effectuant l'élution avec de l'eau.

On rassemble les fractions contenant la 2',3",6'-tri-N-acétyl- 3-N-f ormyl—l-N-d, 3-dihydroxyprop~2-yl )-kanamycine B désirée et on les concentre à un volume de 40 ml sous pression réduite. 15 On traite le concentré avec 40 ml de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium ION et on chauffe le mélange au bain-marie bouillant pendant 16'heures. On neutralise la solution refroidie par addition d'acide chlorhydrique concentré,..on ajoute de l'eau à un volume de 1 litre et on chroma-20 tographie le mélange sur une colonne de résine d'échange ionique "Amberlite 200" (forme NH^+, 3 litres). On lave la colonne avec de l'eau pour éliminer les substances minérales, puis avec de l'ammoniaque IN pour éluer les matières aminoglucosidiques. On rechromatographie le produit brut sur la résine d'échange 25 ionique "Amberlite CG-50" (forme NH4+, 2 litres) en effectuant l'élution avec de l'eau, de 1'hydroxyde d'ammonium aqueux 0,05N et finalement de l'hydroxyde d'ammonium aqueux 0,lN.

Par évaporation des fractions correspondantes, on obtient 3,2 g de 1-N-(1,3-dihydroxyprop-2-yl)-kanamycine B identique à un 30 échantillon de référence, d'après la chromatographie sur couche mince.

JL

Claims (14)

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1. Procédé de production de composés de formule : (/ CH NH A* I ^ Z HO-- -VjY + pa HO-- NHR1 CH„OH / HO—/ h2n'—/ HO I / (dans laquelle R est un groupe amino ou hydroxyle et est 5 un groupe alkyle inférieur dont tout atome de carbone autre que celui par lequel il est attaché à l'atome d'azote peut éventuellement être substitué avec un groupe hydroxyle ou avec un groupe amino), procédé caractérisé par le fait qu'il consiste à alkyler un composé de formule : :h2nhr3 HO--- HO -\-**"*NA nhr2 — (ii) ch2oh / HCT-Y'-'J-'"' °. / • Κ3ΝΗ~-^Τή / HO I / X i 14 2 3 (dans laquelle R est un groupe formyle, R est un groupe N 4 alcanoyle en C2 a C4 ou un groupe benzoyle et R est un groupe hydroxy ou un groupe NHR3) pour produire un composé de formule : ch2nhr3 HO-—L- 0 2 \ \ NHR HO— r I 7--4- j — (III) NHR ' O 1x4 5 (dans laquelle les variables R à R ont les définitions don-nées ci-dessus), à éliminer les groupes R et R ; et à isoler le composé de formule (I).

2. Procédé suivant la revendication 1, caracté- Ί risé par le fait que R est un groupe S-4-amino-2-hydroxy- 10 butyle ou un groupe 1,3-dihydroxyprop-2-yle.

3. Procédé suivant l'une des revendications 1 3 et 2, caractérisé par le fait que R est un groupe acétyle.

4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé par le fait que le composé de formule (II) est la 15 3",5'-di-N-acétyl-3-N-formyl“kanamycine A ou la 2',3",6'-tri- N-acétyl-3—N-formyl-kanamycine B.

5. Procédé suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'alkylation est une alkylation par voie de réduction. 20

' 6. Procédé suivant la revendication 5, carac térisé par le fait que l'alkylation par voie de réduction est conduite avec la 3-benzyl-6-(S)-dihydroxyméthyl-tétrahydro- 1,3-oxazine-2-one ou-la 1,3-dihyaroxyacétone.

7. Procédé suivant llune des revendications 5 25 et 6, caractérisé par le fait que l'agent réducteur est le ( borohvdrure ou le cvanoborohvdrure de sodium. ' * J

8. Composé cautérisé par le fait qu'il répond ψ à la formule : CH2NHf H0-2 \ nhr HO- R4 HO-- NH^ ---CI ch2oh / O ? 3 , dans laquelle R est un groupe formylej R est un groupe alcanoyle en C2 à C4 ou un groupe benzoyle et R est un groupe 5 hydroxy ou un groupe NHR^.

9. La 3",6'~di-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine A ou la 2',3", 6'-tri-N-acétyl-3-N-formyl-kanamycine B suivant la revendication 8.

10. Procédé de production d'un composé de for-10 mule (II) suivant la revendication 8, caractérise par le fait qu'il consiste à formyler un composé de formule (II) dans la- 2 3 4 , quelle R est un atome d'hydrogène et R et R ont les définitions données dans la revendication 8, puis a effectuer une hydrolyse sélective pour éliminer le groupe formyle de la posi-15 tion 1-amino.

* 11. Procédé suivant la revendication 10, carac térisé par le fait que le composé de départ de formule (II) dan laquelle R est un atome d'hydrogène est la 3",6'-di-N-acétyl-kanamycine A ou la 2',3",6'-tri-N-acétyl-kanamycine B. 2o

, 12. Procédé suivant l’une des revendications 10 et 11, caractérisé par le fait que la formylation est conduite avec le formiate de 4-nitrophényle.

13. Procédé suivant la revendication 12, caractérisé par le fait que la formylation est conduite dans un 25 solvant organique aqueux en présence d'une base. r 16

14. Procédé suivant l’une quelconque des revendications 10 à l5, caractérisé par le fait que l'hydrolyse sélective est conduite à un pH de 12,0 à 12,5 avec une solution diluée d'hydroxyde de sodium ou de potassium. j ! t ! I * | " ;-A. f I ‘ : " *' u'· -1 il. i t » »