LU502428B1 - Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung - Google Patents

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biomedical
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adipose tissue
factor
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LU502428A
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Fazhi Qi
Nazzarena Arman
Jianying Gu
Zhiyuan Yin
Jianrui Li
Bogdan Levita
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Zhongshan Krankenhaus Fudan Univ
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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung, umfassend die folgenden Schritte: S1, Reinigen von Adipozyten; S2, Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs); S3, Sammeln des Überstands vor der Passage; S4, Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit; Stammzellenkomplex-Faktor-Konzentrat ist mit Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin versetzt, um ein feuchtes Milieu auf der Wundoberfläche zu bilden, das die Granulation und Reepithelisierung der Wundoberfläche fördert und einen Schutzfilm auf der Wundoberfläche bildet, der eine bakterielle Infektion der Wundoberfläche verhindert und den Prozess der Adsorption, Proliferation und Replikation von Bakterien auf der Wundoberfläche hemmt. Das biomedizinische Kolloid ist außerdem flüssig und formbar, so dass es sich für die Anwendung an allen Körperteilen des Patienten eignet.

Description

Description Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem 4502428 Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung Technischer Bereich Die vorliegende Erfindung gehört zum technischen Gebiet der neuen Verwendungen von Stammzellen und betrifft eine Polysaccharıd Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung.
Technologie im Hintergrund Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe (hASC) sind eine Klasse von pluripotenten Stammzellen mit dem Potenzial zur Selbsterneuerung und multidirektionalen Differenzierung. Es wurde festgestellt, dass Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe zur Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten eingesetzt werden können, wobei ihre therapeutische Rolle häufig eher auf ihre Zytokinsekretion und immunmodulatorische Wirkung als auf ihre Fähigkeit zur gezielten Differenzierung in Zielzellen zurückgeführt wird.
Der Überstand des konditionierten Mediums von menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe enthält eine Vielzahl von Wachstumsfaktoren, Zytokinen, Chemokinen, angiogenen Faktoren und Exosomen, die die Zellproliferation, -migration und -differenzierung erheblich fördern. Außerdem ist es einfacher, die Zellen industriell herzustellen, zu gefrieren, zu lagern, zu verpacken und zu transportieren als die direkte Anwendung von Stammzellen. Darüber hinaus ist der Überstand relativ sicher in der Anwendung, da er keine Zellen enthält und daher nicht vom Immunsystem abgestoßen wird.
Die Wundheilung ist ein komplexer biologischer Prozess, der die akute Wundheilung und die chronische Wundheilung umfasst. Studien haben gezeigt, dass Wachstumsfaktoren bei akuten Wunden die Bildung von Granulationsgewebe fördern und gleichzeitig die Reepithelisierung begünstigen und die Heilungsrate 1
Description beschleunigen. Bei der Behandlung chronischer refraktärer Wunden fördert di&/>02428 Verwendung von rekombinantem humanem Plättchenwachstumsfaktor und Fibroblastenwachstumsfaktor die Granulation und Reepithelisierung von Wunden erheblich und hat sich bei der Behandlung von klinisch refraktären diabetischen FuBgeschwiiren, Dekubitusgeschwüren und anderen Wunden als wirksam erwiesen. Obwohl hohe Dosen eines einzigen Faktors bis zu einem gewissen Grad zur Behandlung refraktärer Wunden verwendet werden können, ist die klinische Anwendung durch den einzigen Regulierungsmechanismus, den komplizierten Reinigungsprozess und die hohen Kosten begrenzt.
Die traditionelle Methode zur Behandlung von Wunden mit Wachstumsfaktoren besteht darin, die Lösung auf die Wunde zu sprühen. Dies hat den Vorteil, dass die Wachstumsfaktoren schnell und gleichmäßig auf das Reparaturgewebe einwirken, aber der leichte Verlust und die Verdunstung der Lösung schränken die Wirksamkeit und Stabilität der Wachstumsfaktoren bis zu einem gewissen Grad ein.
Daher ist die Entwicklung eines Stammzellfaktorkomplexes, der mit aus dem Uberstand des Kulturmediums fiir menschlicher mesenchymale Stammzellen gewonnenen Stammzellfaktoren angereichert ist und von einem besseren Hilfsstoff getragen wird, um ein feuchtes Milieu für die Traumaoberfläche zu schaffen, das es den Wachstumsfaktoren ermöglicht, konsistent und gleichmäßig auf das Traumagewebe einzuwirken, fiir die klinische Anwendung sehr vielversprechend. Inhalt der Erfindung In Anbetracht der obigen Ausführungen stellt die vorliegende Erfindung eine Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie thre Herstellung und Verwendung zur Verfiigung, um die obigen Probleme des Standes der Technik bei akuten und chronischen Wunden zu 16sen, die mit vielen unerwünschten Reaktionen, umständlicher Handhabung und begrenzter Anwendung verbunden sind.
2
Description
Um die oben genannten Ziele zu erreichen, bietet die vorliegende Erfindung dt&'>02428 folgenden technischen Lösungen:
Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, dass es die folgenden Schritte umfasst:
S1. Reinigen von Adipozyten
Entnahme menschlicher Fettproben, Waschen mit Kochsalzlösung, Zugabe eines gleichen Volumens Kollagenase zum Verdau, mehrmaliges Filtrieren und Zentrifugieren nach dem Verdau und Entfernen des Überstands, um gereinigte Adipozyten zu erhalten;
S2. Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs)
Die gereinigten Adipozyten wurden in serumfreiem Phenolrot-freiem High- Coomassie-Medium mit 5 % Thrombozytenlysat resuspendiert und dann in Zellkulturflaschen zur Inkubation bei einer Inokulationsdichte von 60.000 Zellen/ml transferiert; Züchten Sie mesenchymale Stammzellen aus Fettgewebe unter hypoxischen Bedingungen auf 90 + 5 %, um die Zytokinsekretion zu fördern, und sammeln Sie den Kulturiiberstand zwischen den Generationen P3 und P5;
S3. Sammeln des Uberstands vor der Passage
Der Uberstand vor der Passage wurde mit hoher Geschwindigkeit durch eine Zentrifuge zentrifugiert und konzentriert, um eine Zellkulturbrühe herzustellen, die durch eine Filtermembran mit einem Durchmesser von 0.22 um gefiltert und entbakterisiert wurde, um schließlich das Stammzellkomplexfaktorkonzentrat zu erhalten;
S4. Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit
Mischen Sie Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin in einem Molverhältnis von 80-90:1, um ein Hydrokolloidgel von 1 ml zu erhalten, verdünnen Sie das Hydrokolloidgel dann auf das 5-10-fache seines Volumens mit physiologischer Kochsalzlôsung und fügen Sie dann ein Stammzellenkomplexfaktor-Konzentrat (Konzentration von 10ug-20ug/L) hinzu,
3
Description um eine komplexe biomedizinische Kolloidflüssigkeit zu erhalten. LUS02428 Die Kollagenase in Schritt S1 ist ein Gemisch aus Typ-I-Kollagenase und Typ- Il-Kollagenase ist, die Verdauungszeit beträgt 30-60 Minuten, die Kollagenase- konzentration beträgt 0.1 % bis 0.5 %, die verdauten Adipozyten filtriert durch eine Membran mit einem Durchmesser von 70 um und dann werden bei 2000rpm/min 5- Minuten lang zentrifugiert, um den Uberstand zu entfernen, und das Zellpräzipitat wurde dann unter den gleichen Bedingungen in PBS dispergiert, und die gereinigten Adipozyten wurden durch Filtration und erneute Zentrifugation gewonnen.
Das serumfreie Phenolrot-freie High-Coomassie-Medium in Schritt S2 ist ein Mesenchym-Stammzellmedium, das mit 10 mg bis 28 mg Coenzym A, 5 mg bis 15 mg Co-Carboxylase, 4 mg bis 12 mg Flavin-Adenin-Dinukleotid und 0.5 mg bis 2.5 mg Uridylphosphat pro 1L ergänzt ist; Die hypoxischen Zuchtbedingungen sind: die Sauerstoffkonzentration der Zellen beträgt 21% in 24 Stunden, von 24 bis 26 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 21% auf 18% ab, in der 27 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 18%, vom 28 bis 36 Stunde nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 18% auf 8% ab, in der 37 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 8%, vom 38 bis 44 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 8% auf 2% ab, und wird dann bei einer Sauerstoffkonzentration von 2 % weiter bebrütet, wobei die CO2-Konzentration 5 % beträgt und der Rest Stickstoff ist.
Die Sekrete, die während der Gewinnung der extrahierten mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe in Schritt S2 in Kultur erhalten werden, mindestens den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- Wachstums- faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden = Wachstumsfaktor ß (TGF-B), den insulinähnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) umfassen.
Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe sezernieren den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- 4
Description Wachstums-faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), der°02428 transformierenden Wachstumsfaktor PB (TGF-B), den insulindhnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). Die wichtigsten biologischen Aktivitäten dieser Zytokine sind entzündungshemmend, anti-apoptotisch und immunmodulatorisch wirksam. Sie fördern stark die Mitose, sind an der stammzellinduzierten Differenzierung, dem Wachstum von Gewebezellen, der Regeneration und dem Wiederaufbau beteiligt, verbessern die Gewebefunktion an der Stelle eines Traumas und fördern die Wundheilung.
Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) lag zwischen
728.56+124.23pg/ml, der Keratinozyten-Wachstumsfaktor (KGF) lag zwischen
623.46+136.78pg/ml, der Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH) lag zwischen
2501.11+18.36pg/ml, der transformierende Wachstumsfaktor B (TGF-B) lag zwischen 4223.23+220 36pg/ml, der insulinähnliche Wachstumsfaktor (IGF) zwischen 1653.56+56.23pg/ml und der von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) zwischen 102.56+23.53pg/ml.
Die Natriumcarboxymethylcellulose in Schritt S4 ist eine Mischung aus niedrigviskoser Natriumcarboxymethylcellulose, mittelviskoser Natriumcarboxy- methylcellulose und hochviskoser Natriumcarboxymethylcellulose in einem molaren Verhältnis von 1:1:1.
Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, hergestellt nach dem Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, das menschlichen mesenchymaler Stammzellfaktorkomplex aus Fettgewebe und Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit kombiniert.
Verwendung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit einem Faktor-Komplex aus menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus
Description Fettgewebe angereichert ist, bei der Behandlung von akuten und chronische*°°428 Wunden.
Die vorteilhaften Wirkungen der vorliegenden Erfindung sind:
1. Die Erfindung offenbart eine Polysaccharıd Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, Stammzellen-Komplex-Faktor- Konzentrat als Kern Inhalt der Behandlung von Trauma, kann effektiv und schnell zu reparieren akuten und chronischen Wunden, und die Reparatur-Prozess hat geringe Nebenwirkungen und schnelle Ergebnisse, das Füllen der Lücke auf dem Markt, um direkt die Reparatur von akuten und chronischen Wunden von topischen Drogen. Das Stammzellfaktorkonzentrat ist mit Natrrumcarboxymethylcellulose und Pektin versetzt, um ein feuchtes Milieu auf der traumatischen Oberfläche zu bilden. Es wird für die Zellreparatur verwendet, um einen Schutzfilm auf der Trauma-Oberfläche zu bilden, der die bakterielle Infektion der Trauma-Oberfläche blockiert und den Prozess der bakteriellen Adsorption und Proliferation auf der Trauma-Oberfläche hemmt. Gleichzeitig ist dieses biomedizinische Kolloid flüssig und dehnbar und eignet sich für die Anwendung auf allen Körperteilen des Patienten.
2. Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, die in der vorliegenden Erfindung offenbart wird, fördert die Reparatur von verbrühten Wunden mit offensichtlicher Wirkung, die Epidermis der Wunden ist nach 7 Tagen Anwendung intakt und dick, das subkutane Kollagen ist ordentlich angeordnet; Haarfollikel und Blutgefäße wurden regelmäßig und häufiger regeneriert.
3. Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert 1st, die in der vorliegenden Erfindung offenbart wird, ist das konzentrierte mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe- Kulturüberstandspräparat menschlichen Ursprungs und weist keine 6
Description Keimbahnprobleme auf; Das fertige Produkt enthält keine lebender/>92428 Zellkomponenten, keine ethischen oder immunologischen Sicherheitsprobleme, keine Notwendigkeit für eine gebrauchsfertige Zubereitung und einfache Anwendung.
Weitere Vorteile, Gegenstände und Merkmale der vorliegenden Erfindung werden zum Teil in der nachfolgenden Beschreibung dargelegt und sind zum Teil für den Fachmann auf der Grundlage einer Untersuchung der folgenden Studie offensichtlich oder können aus der Praxis der vorliegenden Erfindung gelernt werden. Die Ziele und anderen Vorteile der vorliegenden Erfindung können mit Hilfe der folgenden Beschreibung erreicht und erhalten werden.
Beschreibung der beigefügten Zeichnungen Um den Gegenstand, die technischen Lösungen und die Vorteile der vorliegenden Erfindung zu verdeutlichen, wird die Erfindung vorzugsweise nachstehend in Verbindung mit den beigefügten Zeichnungen näher beschrieben, in denen: Bild 1 zeigt ein Flussdiagramm eines Verfahrens zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist. Detaillierte Beschreibung Beispiel 1 Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, wie in Bild 1 gezeigt, angereichert ist, umfassend die Schritte: S1. Reinigen von Adipozyten; Entnahme menschlicher Fettproben, Waschen mit Kochsalzlôësung, Zugabe eines gleichen Volumens Kollagenase zum Verdau, mehrmaliges Filtrieren und Zentrifugieren nach dem Verdau und Entfernen des Überstands, um gereinigte Adipozyten zu erhalten; Die Kollagenase ist ein Gemisch aus Typ-I-Kollagenase und 7
Description Typ-Il-Kollagenase ist, die Verdauungszeit beträgt 30-60 Minuten, die Kollagenasé/*02428 konzentration beträgt 0.1 % bis 0.5 %, die verdauten Adipozyten filtriert durch eine Membran mit einem Durchmesser von 70 um und dann werden bei 2000rpm/min 5- Minuten lang zentrifugiert, um den Uberstand zu entfernen, und das Zellpräzipitat wurde dann unter den gleichen Bedingungen in PBS dispergiert, und die gereinigten Adipozyten wurden durch Filtration und erneute Zentrifugation gewonnen.
S2. Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs) Die gereinigten Adipozyten wurden in serumfreiem Phenolrot-freiem High- Coomassie-Medium mit 5 % Thrombozytenlysat resuspendiert und dann in Zellkulturflaschen zur Inkubation bei einer Inokulationsdichte von 60.000 Zellen/ml transferiert; Das serumfreie Phenolrot-freie High-Coomassie-Medium ist ein Mesenchym-Stammzellmedium, das mit 10 mg bis 28 mg Coenzym A, 5 mg bis 15 mg Co-Carboxylase, 4 mg bis 12 mg Flavin-Adenin-Dinukleotid und 0.5 mg bis 2.5 mg Uridylphosphat pro 1L ergänzt ist; Unter hypoxischen Bedingungen kultiviert, um die Sekretion von Zytokinen zu fôrdern, mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe wurden zu 90 + 5 % kultiviert, und die Kulturüberstände der P3- Generation wurden gesammelt; Die hypoxischen Zuchtbedingungen sind: die Sauerstoffkonzentration der Zellen beträgt 21% in 24 Stunden, von 24 bis 26 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäBig von 21% auf 18% ab, in der 27 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 18%, vom 28 bis 36 Stunde nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 18% auf 8% ab, in der 37 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 8%, vom 38 bis 44 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 8% auf 2% ab, und wird dann bei einer Sauerstoffkonzentration von 2 % weiter bebrütet, wobei die CO2-Konzentration 5 % beträgt und der Rest Stickstoff 1st.
Die Sekrete umfassen mindestens den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten-Wachstums- faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden Wachstumsfaktor B (TGF-B), den insulinähnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen 8
Description stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). LUS02428 Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe sezernieren den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- Wachstums-faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden Wachstumsfaktor PB (TGF-B), den insulindhnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). Die wichtigsten biologischen Aktivitäten dieser Zytokine sind entzündungshemmend, anti-apoptotisch und immunmodulatorisch wirksam. Sie fördern stark die Mitose, sind an der stammzellinduzierten Differenzierung, dem Wachstum von Gewebezellen, der Regeneration und dem Wiederaufbau beteiligt, verbessern die Gewebefunktion an der Stelle eines Traumas und fördern die Wundheilung. Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) lag zwischen
728.56+124.23pg/ml, der Keratinozyten-Wachstumsfaktor (KGF) lag zwischen
623.46+136.78pg/ml, der Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH) lag zwischen
2501.11+18.36pg/ml, der transformierende Wachstumsfaktor B (TGF-B) lag zwischen 4223.23+=220 36pg/ml, der insulinähnliche Wachstumsfaktor (IGF) zwischen 1653.56+56.23pg/ml und der von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) zwischen 102.56+23.53pg/ml.
S3. Sammeln des Uberstands vor der Passage Der Überstand vor der Passage wurde mit hoher Geschwindigkeit durch eine Zentrifuge zentrifugiert und konzentriert, um eine Zellkulturbrühe herzustellen, die durch eine Filtermembran mit einem Durchmesser von 0.22 um gefiltert und entbakterisiert wurde, um schließlich das Stammzellkomplexfaktorkonzentrat zu erhalten; S4. Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit Mischen Sie Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin in einem Molverhältnis von 80-90:1, um ein Hydrokolloidgel von 1 ml zu erhalten, verdünnen Sie das Hydrokolloidgel dann auf das 5-10-fache seines Volumens mit physiologischer Kochsalzlösung und fügen Sie dann ein 9
Description Stammzellenkomplexfaktor-Konzentrat (Konzentration von 10ug-20ug/L) hinztY>92428 um eine komplexe biomedizinische Kolloidflüssigkeit zu erhalten.
Beispiel 2 Der Unterschied zwischen Beispiel 2 und Beispiel 1 besteht darin, dass die Natriumcarboxymethylcellulose in Schritt S4 eine Mischung aus niedrigviskoser Natriumcarboxymethylcellulose, mittelviskoser Natriumcarboxymethylcellulose und hochviskoser Natrrumcarboxymethylcellulose in einem molaren Verhältnis von 1:1:1 ist.
Beispiel 3 Der Unterschied zwischen Beispiel 3 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S2 der gesammelte Überstand der Überstand der P4-Generation ist.
Beispiel 4 Der Unterschied zwischen Beispiel 4 und Beispiel 2 besteht darın, dass in Schritt S2 der gesammelte Überstand der Uberstand der P5-Generation ist.
Beispiel 5 Der Unterschied zwischen Beispiel 5 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S4 die Konzentration des Stammzellkomplexfaktorkonzentrats 15ug/L beträgt.
Beispiel 6 Der Unterschied zwischen Beispiel 6 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S4 die Konzentration des Stammzellkomplexfaktorkonzentrats 20 ug/L beträgt.
Vergleichende Beispiele Die biomedizinische Polysaccharid-Kolloidlösung enthält in Gewichtsprozent: niedrigviskose Natriumcarboxymethylcellulose 0.3 %, mittelviskose Natriumcarboxymethylcellulose 1.2 %, hochviskose Natriumcarboxymethylcellulose 0.4 %, Natriumchlorid 0.9 %, der Rest ist Wasser für Injektionszwecke. Natriumchlorid in Wasser fiir Injektionszwecke auflösen, dann Natriumcarboxymethylcellulose mit niedriger, mittlerer und hoher Viskosität
Description in das Wasser geben, den Thermostat einschalten und bei einer Temperatur vdrr°02428 65 °C mechanisch rühren, bis die Natriumcarboxymethylcellulose mit niedriger, mittlerer und hoher Viskosität vollständig aufgelöst ist, um eine biomedizinische kolloidale Polysaccharidlösung zu erhalten.
Die in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigerzeugnisse wurden auf folgende Weise an Ratten getestet:
1. Akutes Traumamodell für Ratten: Mindestens 18 erwachsene SD-Ratten wurden entnommen und in 6 Behandlungsgruppen aufgeteilt, 3 Ratten in jeder Gruppe. 12 Stunden vor der Modellierung die Haare auf dem Rücken der Ratten entfernen, fasten und reichlich Wasser trinken. Vor der Modellierung wurden die Ratten durch intraperitoneale Injektion von Chloralhydratlösung betäubt, und der Bereich der dorsalen Haarentfernung wurde routinemäßig desinfiziert. Auf jeder Seite der Wirbelsäule jeder Ratte wurde ein kreisförmiger Bereich (der Abstand zwischen den kreisförmigen Markierungen betrug >1 cm) von 2 cm Durchmesser markiert, und die gesamte Haut wurde entlang der kreisförmigen Markierungen mit einem sterilen Skalpell ausgeschnitten, wobei die Wunde tief in die tiefe Faszie reichen sollte.
2. Behandlungsmethode: Die Wunden auf der linken und rechten Seite des Rattenrückens wurden als Behandlungs- bzw. Kontrollgruppe eingerichtet. Die Fertigprodukte 1 bis 6 wurden auf die Hautwunden der jeweiligen Rattengruppen aufgetragen, und die Wunden wurden mit steriler Kochsalzlösung gereinigt und nach Desinfektion der Wunden mit Amyljod alle 2 Tage durch neue Verbände ersetzt. Während der Behandlung wurden die Ratten hinsichtlich der Gewebereparatur und anderer Reaktionen wie Ernährung und Bewegung beobachtet.
3. Ermittlung von Behandlungseffekten Nach der Behandlung wurden die Ratten exekutiert und die gesamte Haut sowie einige zufällige subkutane Gewebeproben aus dem verletzten Bereich entnommen und zur pathologischen Sektion eingeschickt, und jede Probe wurde mit Hämatoxylin-Eosin gefärbt; 11
Description Die Testergebnisse lauten wie folgt: LUS02428 Die Ratten der Beispiele 1-6 hatten eine intakte und dicke, Epidermis mit einer geordneten Kollagenanordnung; Haarfollikel waren vorhanden, Blutgefäße wuchsen regelmäßig und waren zahlreicher; subkutanes Kollagen wurde produziert und ordentlich angeordnet, und die Ergebnisse waren besser als das umgekehrte Verhältnis.
Die Beispiele 1-6 und die Skala der Restaurierung sind in Tabelle 1 dargestellt, wobei + für den Grad der Restaurierung steht, je mehr +, desto besser die Restaurierung, und - für keine Restaurierung.
Tabelle 1 [ee [rn [ee Infiltration Beispiel | | er | fo | Beispiel 2 | eer | SH NE Beispiel 3 | ee (OT fo | Beispiel 4 | er | oe fo | TE | Beispis SE OT EE NE EET | OT (OT UOTE Vergleichende + + + + + [rés LIL Hinweis: Die Anzahl der "+" gibt den Grad der Gewebereparatur nach der Behandlung an.
Die in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigerzeugnisse wurden auf folgende Weise an Ratten getestet:
1. Finführung eines chronischen Traumamodells bei Ratten mit schwieriger Heilung Mindestens 21 erwachsene SD-Ratten wurden entnommen und in 7 Gruppen eingeteilt, 1 Kontrollgruppe und 6 Gruppen mit chronischem Trauma, 3 Ratten in Jeder Gruppe, die vor der Modellierung durch intraperitoneale Injektion von Chloralhydratlôsung betäubt wurden. Das Dorsum wurde debridiert und der Bereich 12
Description der Abformung wurde mit einer 3,0 cm x 3,0 cm großen Karte markiert, die um der 502428 debridierten Bereich herum mit Nähten fixiert wurde. Bereiten Sie ein steriles Einweg-Inzisionsbesteck und andere Utensilien vor, und desinfizieren Sie, nachdem die Anästhesie gewirkt hat, den Hautpräparationsbereich des Rattenrückens dreimal mit Jodophor, schneiden Sie das subkutane Gewebe entlang der markierten Linie bis zur Myofaszie weg, stoppen Sie die Blutung und bilden Sie einen offenen Vollhautdefekt bei der Ratte.
2. Behandlungsmethode: Unmittelbar nach der Formgebung wurde Hydrocortison (80 mg/kg) intramuskulär für 7 Tage injiziert. 2 ml des in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigprodukts wurden auf die Wunde aufgetragen. Penicillin-Kaliumsalz (4 000 Einheiten) wurde ab 1 Tag vor dem Versuch 4 Tage lang intramuskulär injiziert, um Infektionen zu verhindern. Die Wunden wurden jeden zweiten Tag gewechselt, routinemäßig gespült und verbunden. Während der Behandlung wurden die Ratten hinsichtlich der Gewebereparatur und anderer Reaktionen wie Ernährung und Bewegung beobachtet.
3. Ermittlung von Behandlungseffekten Die Größe der Wunde wird mit Hilfe von Transparentfolien und fotografischen Methoden erfasst, und einige Tierwunden werden mit einem computergestützten Bildanalysesystem bearbeitet und kalibriert, um die Geschwindigkeit und Qualität der Wundheilung zu berechnen. Darüber hinaus wurden die Ratten am Ende der Behandlung hingerichtet, und die gesamte Haut und ein Teil des beiliegenden subkutanen Gewebes wurden aus dem verletzten Bereich entnommen und zur pathologischen Sektion eingeschickt, und jede Probe wurde mit Hämatoxylin-Eosin gefärbt.
Die Testergebnisse lauten wie folgt: Beispiele 1-6 Ratten mit rotem und feuchtem Trauma, wenig Sekretion, unregelmäßiger Form des Traumarandes und deutlicher Kontraktion.
Die Beispiele 1-6 und die Skala der Reparatur sind in Tabelle 1 dargestellt, 13
Description wobei + für den Grad der Reparatur steht, je mehr +, desto besser der Reparatureffekt/202428 - steht für keine Reparatur.
TS TEE Infiltration Beispiel | ee | | | (eer |e [ee [ee | Beispils | ew | ew | TE EEE I UOTE | 8 | Beispiel 5 | ev UOTE 2 om | | Bewielo | we | oe UT EL | | CV 8181 + + + + + Beispiele AbschlieBend sei darauf hingewiesen, dass die obigen Ausführungsformen nur dazu dienen, die technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung zu veranschaulichen und sie nicht einzuschränken.Obwohl die vorliegende Erfindung unter Bezugnahme auf die bevorzugten Ausführungsformen ausführlich beschrieben wurde, sollte der Durchschnittsfachmann verstehen, dass die technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung modifiziert oder gleichwertig ersetzt werden können, ohne vom Geist und Schutzumfang der technischen Lösungen abzuweichen, die alle im Schutzumfang der Ansprüche von vorliegender Erfindung enthalten sollten.
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Claims (7)

Claims
1. Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid°°2%28 Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, dadurch gekennzeichnet, dass es die folgenden Schritte umfasst: S1. Reinigen von Adipozyten Entnahme menschlicher Fettproben, Waschen mit Kochsalzlösung, Zugabe eines gleichen Volumens Kollagenase zum Verdau, mehrmaliges Filtrieren und Zentrifugieren nach dem Verdau und Entfernen des Überstands, um gereinigte Adipozyten zu erhalten; S2. Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs) Die gereinigten Adipozyten wurden in serumfreiem Phenolrot-freiem High- Coomassie-Medium mit 5 % Thrombozytenlysat resuspendiert und dann in Zellkulturflaschen zur Inkubation bei einer Inokulationsdichte von 60.000 Zellen/ml transferiert; Züchten Sie mesenchymale Stammzellen aus Fettgewebe unter hypoxischen Bedingungen auf 90 + 5 %, um die Zytokinsekretion zu fördern, und sammeln Sie den Kulturiiberstand zwischen den Generationen P3 und P5; S3. Sammeln des Uberstands vor der Passage Der Uberstand vor der Passage wurde mit hoher Geschwindigkeit durch eine Zentrifuge zentrifugiert und konzentriert, um eine Zellkulturbrühe herzustellen, die durch eine Filtermembran mit einem Durchmesser von 0.22 um gefiltert und entbakterisiert wurde, um schlieBlich das Stammzellkomplexfaktorkonzentrat zu erhalten; S4. Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit Mischen Sie Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin in einem Molverhältnis von 80-90:1, um ein Hydrokolloidgel von 1 ml zu erhalten, verdünnen Sie das Hydrokolloidgel dann auf das 5-10-fache seines Volumens mit physiologischer Kochsalzlôsung und fügen Sie dann ein Stammzellenkomplexfaktor-Konzentrat (Konzentration von 10ug-20ug/L) hinzu, um eine komplexe biomedizinische Kolloidflüssigkeit zu erhalten.
1
Claims
2. Präparationsverfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass d}4/502428 Kollagenase in Schritt SI ein Gemisch aus Typ-I-Kollagenase und Typ-II- Kollagenase ist, die Verdauungszeit 30-60 Minuten beträgt, die Kollagenasekonzentration 0.1 % bis 0.5 % beträgt, die verdauten Adipozyten durch eine Membran mit einem Durchmesser von 70 um filtriert und dann bei 2000rpm/min 5-10 Minuten lang zentrifugiert werden, um den Uberstand zu entfernen, und das Zellpräzipitat wurde dann unter den gleichen Bedingungen in PBS dispergiert, und die gereinigten Adipozyten wurden durch Filtration und erneute Zentrifugation gewonnen.
3. Herstellungsverfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das serumfreie Phenolrot-freie High-Coomassie-Medium in Schritt S2 ein Mesenchym- Stammzellmedium ist, das mit 10 mg bis 28 mg Coenzym A, 5 mg bis 15 mg Co- Carboxylase, 4 mg bis 12 mg Flavin-Adenin-Dinukleotid und 0.5 mg bis 2.5 mg Uridylphosphat pro 1L ergänzt ist; Die hypoxischen Zuchtbedingungen sind: die Sauerstoffkonzentration der Zellen beträgt 21% in 24 Stunden, von 24 bis 26 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 21% auf 18% ab, in der 27 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 18%, vom 28 bis 36 Stunde nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 18% auf 8% ab, in der 37 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 8%, vom 38 bis 44 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 8% auf 2% ab, und wird dann bei einer Sauerstoffkonzentration von 2 % weiter bebrütet, wobei die CO2-Konzentration 5 % beträgt und der Rest Stickstoff ist.
4. Praparationsverfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Sekrete, die während der Gewinnung der extrahierten mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe in Schritt S2 in Kultur erhalten werden, mindestens den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten-Wachstumsfaktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden Wachstumsfaktor B (TGF-B), den insulinähnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) umfassen.
2
Claims
5. Herstellungsverfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass di&'°02428 Natriumcarboxymethylcellulose in Schritt S4 eine Mischung aus niedrigviskoser Natriumcarboxymethylcellulose, mittelviskoser Natriumcarboxymethylcellulose und hochviskoser Natriumcarboxymethylcellulose in einem molaren Verhältnis von 1:1:1 1st.
6. Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, hergestellt nach dem Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, dass der adipose mesenchymale Stammzellfaktorkomplex und die biomedizinische Polysaccharid- kolloidlôsung verschmolzen sind.
7. Verwendung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit einem Faktor-Komplex aus menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, bei der Behandlung von akuten und chronischen Wunden gemäB Anspruch 6.
3
LU502428A 2022-06-01 2022-06-30 Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung LU502428B1 (de)

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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116687837B (zh) * 2023-07-14 2024-04-05 黑龙江八一农垦大学 一种促进创面愈合的干细胞制剂及其制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1204777B (it) * 1986-02-04 1989-03-10 Crinos Industria Farmaco Composizione per la preparazione estemporanea di formulazioni per applicazioni topiche per uso farmaceutico e cosmetico
US20120294893A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Nitto Denko Corporation Edible jelly-form composition, jelly-form preparation and method for producing jelly-form preparation
CN105126159B (zh) * 2015-09-11 2017-12-08 任汉学 一种多糖生物医用胶体液及其制备方法
CN105709270B (zh) * 2016-03-18 2019-01-01 中国科学院长春应用化学研究所 一种用于干细胞治疗的水凝胶敷料
CN106701672B (zh) * 2017-01-10 2018-02-13 广东康仹生命科技有限公司 一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途
CN107224614A (zh) * 2017-05-11 2017-10-03 黎洪棉 一种富含细胞因子的脂肪源性基质细胞复合移植材料的制备及其临床应用
CN107714727A (zh) * 2017-10-24 2018-02-23 成都远山博桥生物科技有限公司 一种浓缩脂肪干细胞培养上清制剂、其制备方法及应用
CN110540678B (zh) * 2018-05-29 2022-09-06 怡诺博(北京)生物医学技术有限公司 改性海藻酸钠水凝胶及其制备的细胞培养基质材料和应用
US11364323B2 (en) * 2018-09-17 2022-06-21 Rejuvablast LLC Combination grafts for tissue repair or regeneration applications
CN113957040A (zh) * 2020-07-20 2022-01-21 维他利肤(北京)生物科技有限公司 一种脂肪干细胞生长因子提取物及其制备方法和应用
CN113712996A (zh) * 2021-09-09 2021-11-30 江苏中衍生科细胞技术研究院有限公司 一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法

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