LU502428B1 - Polysaccharide Biomedical colloid Liquid enriched with the factor complex of human mesenchymal stem cells from adipose tissue, and its production and use - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung, umfassend die folgenden Schritte: S1, Reinigen von Adipozyten; S2, Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs); S3, Sammeln des Überstands vor der Passage; S4, Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit; Stammzellenkomplex-Faktor-Konzentrat ist mit Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin versetzt, um ein feuchtes Milieu auf der Wundoberfläche zu bilden, das die Granulation und Reepithelisierung der Wundoberfläche fördert und einen Schutzfilm auf der Wundoberfläche bildet, der eine bakterielle Infektion der Wundoberfläche verhindert und den Prozess der Adsorption, Proliferation und Replikation von Bakterien auf der Wundoberfläche hemmt. Das biomedizinische Kolloid ist außerdem flüssig und formbar, so dass es sich für die Anwendung an allen Körperteilen des Patienten eignet.The present invention relates to a polysaccharide biomedical colloid liquid which is enriched with the factor complex of human mesenchymal stem cells from adipose tissue, and its production and use, comprising the following steps: S1, purification of adipocytes; S2, culturing mesenchymal stem cells from adipose tissue (hASCs); S3, collecting supernatant before passage; S4, preparing a complex biomedical colloid liquid; Stem Cell Complex Factor Concentrate is formulated with sodium carboxymethyl cellulose and pectin to create a moist environment on the wound surface that promotes granulation and re-epithelialization of the wound surface and forms a protective film on the wound surface that prevents bacterial infection of the wound surface and the process of adsorption , Proliferation and replication of bacteria on the wound surface inhibits. The biomedical colloid is also fluid and malleable, making it suitable for application to any part of the patient's body.
Description
Description Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem 4502428 Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung Technischer Bereich Die vorliegende Erfindung gehört zum technischen Gebiet der neuen Verwendungen von Stammzellen und betrifft eine Polysaccharıd Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie ihre Herstellung und Verwendung.Description Polysaccharide biomedical colloid liquid enriched with 4502428 factor complex of human adipose tissue mesenchymal stem cells and its production and use Technical Field The present invention belongs to the technical field of new uses of stem cells and relates to a polysaccharide biomedical colloid liquid enriched with the factor complex enriched in human mesenchymal stem cells from adipose tissue, and their production and use.
Technologie im Hintergrund Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe (hASC) sind eine Klasse von pluripotenten Stammzellen mit dem Potenzial zur Selbsterneuerung und multidirektionalen Differenzierung. Es wurde festgestellt, dass Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe zur Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten eingesetzt werden können, wobei ihre therapeutische Rolle häufig eher auf ihre Zytokinsekretion und immunmodulatorische Wirkung als auf ihre Fähigkeit zur gezielten Differenzierung in Zielzellen zurückgeführt wird.Background Technology Human adipose-derived mesenchymal stem cells (hASC) are a class of pluripotent stem cells with the potential for self-renewal and multidirectional differentiation. It has been found that human adipose-derived mesenchymal stem cells can be used to treat a variety of diseases, with their therapeutic role often being attributed to their cytokine secretion and immunomodulatory effects rather than their ability to differentiate into target cells.
Der Überstand des konditionierten Mediums von menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe enthält eine Vielzahl von Wachstumsfaktoren, Zytokinen, Chemokinen, angiogenen Faktoren und Exosomen, die die Zellproliferation, -migration und -differenzierung erheblich fördern. Außerdem ist es einfacher, die Zellen industriell herzustellen, zu gefrieren, zu lagern, zu verpacken und zu transportieren als die direkte Anwendung von Stammzellen. Darüber hinaus ist der Überstand relativ sicher in der Anwendung, da er keine Zellen enthält und daher nicht vom Immunsystem abgestoßen wird.The supernatant of the conditioned medium of human adipose-derived mesenchymal stem cells contains a variety of growth factors, cytokines, chemokines, angiogenic factors, and exosomes that significantly promote cell proliferation, migration, and differentiation. In addition, it is easier to industrially manufacture, freeze, store, package and transport the cells than direct application of stem cells. In addition, the supernatant is relatively safe to use as it does not contain cells and is therefore not rejected by the immune system.
Die Wundheilung ist ein komplexer biologischer Prozess, der die akute Wundheilung und die chronische Wundheilung umfasst. Studien haben gezeigt, dass Wachstumsfaktoren bei akuten Wunden die Bildung von Granulationsgewebe fördern und gleichzeitig die Reepithelisierung begünstigen und die Heilungsrate 1Wound healing is a complex biological process that includes acute wound healing and chronic wound healing. Studies have shown that growth factors promote granulation tissue formation in acute wounds while promoting re-epithelialization and 1
Description beschleunigen. Bei der Behandlung chronischer refraktärer Wunden fördert di&/>02428 Verwendung von rekombinantem humanem Plättchenwachstumsfaktor und Fibroblastenwachstumsfaktor die Granulation und Reepithelisierung von Wunden erheblich und hat sich bei der Behandlung von klinisch refraktären diabetischen FuBgeschwiiren, Dekubitusgeschwüren und anderen Wunden als wirksam erwiesen. Obwohl hohe Dosen eines einzigen Faktors bis zu einem gewissen Grad zur Behandlung refraktärer Wunden verwendet werden können, ist die klinische Anwendung durch den einzigen Regulierungsmechanismus, den komplizierten Reinigungsprozess und die hohen Kosten begrenzt.Accelerate Description. In the treatment of chronic refractory wounds, the use of recombinant human platelet growth factor and fibroblast growth factor significantly promotes granulation and re-epithelialization of wounds and has been shown to be effective in the treatment of clinically refractory diabetic foot ulcers, decubitus ulcers and other wounds. Although high doses of a single factor can be used to some extent to treat refractory wounds, its clinical application is limited by its single regulatory mechanism, complicated purification process, and high cost.
Die traditionelle Methode zur Behandlung von Wunden mit Wachstumsfaktoren besteht darin, die Lösung auf die Wunde zu sprühen. Dies hat den Vorteil, dass die Wachstumsfaktoren schnell und gleichmäßig auf das Reparaturgewebe einwirken, aber der leichte Verlust und die Verdunstung der Lösung schränken die Wirksamkeit und Stabilität der Wachstumsfaktoren bis zu einem gewissen Grad ein.The traditional method of treating wounds with growth factors is to spray the solution onto the wound. This has the advantage that the growth factors act quickly and evenly on the repair tissue, but the easy loss and evaporation of the solution limits the potency and stability of the growth factors to some extent.
Daher ist die Entwicklung eines Stammzellfaktorkomplexes, der mit aus dem Uberstand des Kulturmediums fiir menschlicher mesenchymale Stammzellen gewonnenen Stammzellfaktoren angereichert ist und von einem besseren Hilfsstoff getragen wird, um ein feuchtes Milieu für die Traumaoberfläche zu schaffen, das es den Wachstumsfaktoren ermöglicht, konsistent und gleichmäßig auf das Traumagewebe einzuwirken, fiir die klinische Anwendung sehr vielversprechend. Inhalt der Erfindung In Anbetracht der obigen Ausführungen stellt die vorliegende Erfindung eine Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, sowie thre Herstellung und Verwendung zur Verfiigung, um die obigen Probleme des Standes der Technik bei akuten und chronischen Wunden zu 16sen, die mit vielen unerwünschten Reaktionen, umständlicher Handhabung und begrenzter Anwendung verbunden sind.Therefore, the development of a stem cell factor complex enriched with stem cell factors derived from the supernatant of the culture medium for human mesenchymal stem cells and supported by a better adjuvant to create a moist environment for the trauma surface that allows the growth factors to be consistently and evenly distributed to act on the trauma tissue shows great promise for clinical application. SUMMARY OF THE INVENTION In view of the above, the present invention provides a polysaccharide biomedical colloid liquid enriched in human adipose tissue mesenchymal stem cell factor complex, and its manufacture and use to solve the above problems of the prior art in acute and chronic Wounds to 16s associated with many adverse reactions, cumbersome handling and limited application.
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DescriptionDescription
Um die oben genannten Ziele zu erreichen, bietet die vorliegende Erfindung dt&'>02428 folgenden technischen Lösungen:In order to achieve the above objectives, the present invention offers the following technical solutions:
Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, dass es die folgenden Schritte umfasst:A process for the preparation of a polysaccharide biomedical colloid liquid enriched in the factor complex of human adipose tissue mesenchymal stem cells, comprising the following steps:
S1. Reinigen von AdipozytenS1. Purifying Adipocytes
Entnahme menschlicher Fettproben, Waschen mit Kochsalzlösung, Zugabe eines gleichen Volumens Kollagenase zum Verdau, mehrmaliges Filtrieren und Zentrifugieren nach dem Verdau und Entfernen des Überstands, um gereinigte Adipozyten zu erhalten;Collecting human fat samples, washing with saline, adding an equal volume of collagenase to digest, filtering and centrifuging several times after digestion, and removing the supernatant to obtain purified adipocytes;
S2. Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs)S2. Culturing Mesenchymal Stem Cells from Adipose Tissue (hASCs)
Die gereinigten Adipozyten wurden in serumfreiem Phenolrot-freiem High- Coomassie-Medium mit 5 % Thrombozytenlysat resuspendiert und dann in Zellkulturflaschen zur Inkubation bei einer Inokulationsdichte von 60.000 Zellen/ml transferiert; Züchten Sie mesenchymale Stammzellen aus Fettgewebe unter hypoxischen Bedingungen auf 90 + 5 %, um die Zytokinsekretion zu fördern, und sammeln Sie den Kulturiiberstand zwischen den Generationen P3 und P5;The purified adipocytes were resuspended in serum-free phenol red-free High Coomassie medium containing 5% platelet lysate and then transferred to cell culture flasks for incubation at an inoculation density of 60,000 cells/ml; Culture mesenchymal stem cells from adipose tissue under hypoxic conditions to 90 ± 5% to promote cytokine secretion and collect the culture supernatant between generations P3 and P5;
S3. Sammeln des Uberstands vor der PassageS3. Collect supernatant before passage
Der Uberstand vor der Passage wurde mit hoher Geschwindigkeit durch eine Zentrifuge zentrifugiert und konzentriert, um eine Zellkulturbrühe herzustellen, die durch eine Filtermembran mit einem Durchmesser von 0.22 um gefiltert und entbakterisiert wurde, um schließlich das Stammzellkomplexfaktorkonzentrat zu erhalten;The supernatant before the passage was centrifuged at high speed by a centrifuge and concentrated to prepare a cell culture broth, which was filtered through a filter membrane with a diameter of 0.22 µm and debacterized to finally obtain the stem cell complex factor concentrate;
S4. Herstellen einer komplexen biomedizinischen KolloidflüssigkeitS4. Manufacture of a complex biomedical colloidal fluid
Mischen Sie Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin in einem Molverhältnis von 80-90:1, um ein Hydrokolloidgel von 1 ml zu erhalten, verdünnen Sie das Hydrokolloidgel dann auf das 5-10-fache seines Volumens mit physiologischer Kochsalzlôsung und fügen Sie dann ein Stammzellenkomplexfaktor-Konzentrat (Konzentration von 10ug-20ug/L) hinzu,Mix sodium carboxymethyl cellulose and pectin in a molar ratio of 80-90:1 to obtain a hydrocolloid gel of 1 ml, then dilute the hydrocolloid gel to 5-10 times its volume with normal saline, and then add a stem cell complex factor concentrate ( concentration of 10ug-20ug/L),
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Description um eine komplexe biomedizinische Kolloidflüssigkeit zu erhalten. LUS02428 Die Kollagenase in Schritt S1 ist ein Gemisch aus Typ-I-Kollagenase und Typ- Il-Kollagenase ist, die Verdauungszeit beträgt 30-60 Minuten, die Kollagenase- konzentration beträgt 0.1 % bis 0.5 %, die verdauten Adipozyten filtriert durch eine Membran mit einem Durchmesser von 70 um und dann werden bei 2000rpm/min 5- Minuten lang zentrifugiert, um den Uberstand zu entfernen, und das Zellpräzipitat wurde dann unter den gleichen Bedingungen in PBS dispergiert, und die gereinigten Adipozyten wurden durch Filtration und erneute Zentrifugation gewonnen.Description to obtain a complex biomedical colloid liquid. LUS02428 The collagenase in step S1 is a mixture of type I collagenase and type II collagenase, the digestion time is 30-60 minutes, the collagenase concentration is 0.1% to 0.5%, the digested adipocytes are filtered through a membrane with a diameter of 70 µm and then are centrifuged at 2000rpm/min for 5 minutes to remove the supernatant, and the cell precipitate was then dispersed in PBS under the same conditions, and the purified adipocytes were recovered by filtration and centrifugation again.
Das serumfreie Phenolrot-freie High-Coomassie-Medium in Schritt S2 ist ein Mesenchym-Stammzellmedium, das mit 10 mg bis 28 mg Coenzym A, 5 mg bis 15 mg Co-Carboxylase, 4 mg bis 12 mg Flavin-Adenin-Dinukleotid und 0.5 mg bis 2.5 mg Uridylphosphat pro 1L ergänzt ist; Die hypoxischen Zuchtbedingungen sind: die Sauerstoffkonzentration der Zellen beträgt 21% in 24 Stunden, von 24 bis 26 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 21% auf 18% ab, in der 27 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 18%, vom 28 bis 36 Stunde nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 18% auf 8% ab, in der 37 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 8%, vom 38 bis 44 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 8% auf 2% ab, und wird dann bei einer Sauerstoffkonzentration von 2 % weiter bebrütet, wobei die CO2-Konzentration 5 % beträgt und der Rest Stickstoff ist.The serum-free phenol red-free High Coomassie medium in step S2 is a mesenchymal stem cell medium supplemented with 10 mg to 28 mg coenzyme A, 5 mg to 15 mg co-carboxylase, 4 mg to 12 mg flavin adenine dinucleotide and 0.5 mg to 2.5 mg uridyl phosphate per 1L supplemented; The hypoxic culture conditions are: the oxygen concentration of the cells is 21% in 24 hours, from 24 to 26 hours the oxygen concentration decreases steadily from 21% to 18%, in the 27 hour the oxygen concentration is 18%, from the 28 to 36 hour the Oxygen concentration decreases smoothly from 18% to 8%, in the 37 hour the oxygen concentration is 8%, from 38 to 44 hours the oxygen concentration decreases smoothly from 8% to 2%, and then continues to incubate at an oxygen concentration of 2%, where the CO2 concentration is 5% and the rest is nitrogen.
Die Sekrete, die während der Gewinnung der extrahierten mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe in Schritt S2 in Kultur erhalten werden, mindestens den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- Wachstums- faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden = Wachstumsfaktor ß (TGF-B), den insulinähnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) umfassen.The secretions obtained in culture during the recovery of the extracted mesenchymal stem cells from adipose tissue in step S2 contain at least vascular endothelial growth factor (VEGF), keratinocyte growth factor (KGF), hepatocyte growth factor (HGH), transforming = growth factor β (TGF-B), insulin-like growth factor (IGF) and platelet-derived growth factor (PDGF).
Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe sezernieren den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- 4Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue secrete vascular endothelial growth factor (VEGF), the keratinocyte-4
Description Wachstums-faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), der°02428 transformierenden Wachstumsfaktor PB (TGF-B), den insulindhnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). Die wichtigsten biologischen Aktivitäten dieser Zytokine sind entzündungshemmend, anti-apoptotisch und immunmodulatorisch wirksam. Sie fördern stark die Mitose, sind an der stammzellinduzierten Differenzierung, dem Wachstum von Gewebezellen, der Regeneration und dem Wiederaufbau beteiligt, verbessern die Gewebefunktion an der Stelle eines Traumas und fördern die Wundheilung.Description Growth factor (KGF), hepatocyte growth factor (HGH), PB transforming growth factor (TGF-B), insulin-like growth factor (IGF) and platelet-derived growth factor (PDGF). The main biological activities of these cytokines are anti-inflammatory, anti-apoptotic and immunomodulatory. They strongly promote mitosis, are involved in stem cell-induced differentiation, tissue cell growth, regeneration and reconstruction, improve tissue function at the site of trauma, and promote wound healing.
Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) lag zwischenVascular endothelial growth factor (VEGF) was between
728.56+124.23pg/ml, der Keratinozyten-Wachstumsfaktor (KGF) lag zwischen728.56+124.23pg/ml, the keratinocyte growth factor (KGF) was between
623.46+136.78pg/ml, der Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH) lag zwischen623.46+136.78pg/ml, the hepatocyte growth factor (HGH) was between
2501.11+18.36pg/ml, der transformierende Wachstumsfaktor B (TGF-B) lag zwischen 4223.23+220 36pg/ml, der insulinähnliche Wachstumsfaktor (IGF) zwischen 1653.56+56.23pg/ml und der von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) zwischen 102.56+23.53pg/ml.2501.11+18.36pg/ml, transforming growth factor B (TGF-B) was between 4223.23+22036pg/ml, insulin-like growth factor (IGF) was between 1653.56+56.23pg/ml and platelet-derived growth factor (PDGF) was between 102.56+ 23.53pg/ml.
Die Natriumcarboxymethylcellulose in Schritt S4 ist eine Mischung aus niedrigviskoser Natriumcarboxymethylcellulose, mittelviskoser Natriumcarboxy- methylcellulose und hochviskoser Natriumcarboxymethylcellulose in einem molaren Verhältnis von 1:1:1.The sodium carboxymethyl cellulose in step S4 is a mixture of low-viscosity sodium carboxymethyl cellulose, medium-viscosity sodium carboxymethyl cellulose and high-viscosity sodium carboxymethyl cellulose in a molar ratio of 1:1:1.
Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, hergestellt nach dem Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, das menschlichen mesenchymaler Stammzellfaktorkomplex aus Fettgewebe und Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit kombiniert.Polysaccharide Biomedical Colloid Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cell Factor Complex-enriched Liquid prepared by the Process for the Production of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cell Factor Complex-Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cell Factor Complex and Polysaccharide Biomedical Colloid liquid combined.
Verwendung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit einem Faktor-Komplex aus menschlicher mesenchymaler Stammzellen ausUse of a polysaccharide biomedical colloid liquid made with a factor complex derived from human mesenchymal stem cells
Description Fettgewebe angereichert ist, bei der Behandlung von akuten und chronische*°°428 Wunden.Description Adipose tissue enriched in the treatment of acute and chronic*°°428 wounds.
Die vorteilhaften Wirkungen der vorliegenden Erfindung sind:The beneficial effects of the present invention are:
1. Die Erfindung offenbart eine Polysaccharıd Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, Stammzellen-Komplex-Faktor- Konzentrat als Kern Inhalt der Behandlung von Trauma, kann effektiv und schnell zu reparieren akuten und chronischen Wunden, und die Reparatur-Prozess hat geringe Nebenwirkungen und schnelle Ergebnisse, das Füllen der Lücke auf dem Markt, um direkt die Reparatur von akuten und chronischen Wunden von topischen Drogen. Das Stammzellfaktorkonzentrat ist mit Natrrumcarboxymethylcellulose und Pektin versetzt, um ein feuchtes Milieu auf der traumatischen Oberfläche zu bilden. Es wird für die Zellreparatur verwendet, um einen Schutzfilm auf der Trauma-Oberfläche zu bilden, der die bakterielle Infektion der Trauma-Oberfläche blockiert und den Prozess der bakteriellen Adsorption und Proliferation auf der Trauma-Oberfläche hemmt. Gleichzeitig ist dieses biomedizinische Kolloid flüssig und dehnbar und eignet sich für die Anwendung auf allen Körperteilen des Patienten.1. The invention discloses a polysaccharide biomedical colloid liquid enriched with human adipose tissue mesenchymal stem cell factor complex, stem cell complex factor concentrate as the core content of the treatment of trauma, can effectively and quickly repair acute and chronic wounds, and the repair process has low side effects and quick results, filling the gap in the market to directly repair acute and chronic wounds of topical drugs. Stem Cell Factor Concentrate is formulated with sodium carboxymethyl cellulose and pectin to create a moist environment on the traumatic surface. It is used for cell repair to form a protective film on the trauma surface, which blocks bacterial infection of the trauma surface and inhibits the process of bacterial adsorption and proliferation on the trauma surface. At the same time, this biomedical colloid is fluid and malleable, making it suitable for application to any part of the patient's body.
2. Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, die in der vorliegenden Erfindung offenbart wird, fördert die Reparatur von verbrühten Wunden mit offensichtlicher Wirkung, die Epidermis der Wunden ist nach 7 Tagen Anwendung intakt und dick, das subkutane Kollagen ist ordentlich angeordnet; Haarfollikel und Blutgefäße wurden regelmäßig und häufiger regeneriert.2. Polysaccharide Biomedical Colloid Liquid enriched with human adipose tissue mesenchymal stem cell factor complex disclosed in the present invention promotes the repair of scalded wounds with obvious effect, the epidermis of the wounds is intact and thick after 7 days of application, the subcutaneous collagen is neatly arranged; Hair follicles and blood vessels were regenerated regularly and more frequently.
3. Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert 1st, die in der vorliegenden Erfindung offenbart wird, ist das konzentrierte mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe- Kulturüberstandspräparat menschlichen Ursprungs und weist keine 63. Polysaccharide Biomedical Colloid Liquid enriched with human adipose tissue mesenchymal stem cell factor complex disclosed in the present invention is the concentrated adipose tissue mesenchymal stem cell culture supernatant preparation of human origin and has no 6
Description Keimbahnprobleme auf; Das fertige Produkt enthält keine lebender/>92428 Zellkomponenten, keine ethischen oder immunologischen Sicherheitsprobleme, keine Notwendigkeit für eine gebrauchsfertige Zubereitung und einfache Anwendung.Description germ line problems; The finished product contains no live/>92428 cell components, no ethical or immunological safety issues, no need for ready-to-use preparation, and ease of use.
Weitere Vorteile, Gegenstände und Merkmale der vorliegenden Erfindung werden zum Teil in der nachfolgenden Beschreibung dargelegt und sind zum Teil für den Fachmann auf der Grundlage einer Untersuchung der folgenden Studie offensichtlich oder können aus der Praxis der vorliegenden Erfindung gelernt werden. Die Ziele und anderen Vorteile der vorliegenden Erfindung können mit Hilfe der folgenden Beschreibung erreicht und erhalten werden.Additional advantages, objects, and features of the present invention will be set forth in part in the description that follows, and in part will be apparent to those skilled in the art based on examination of the following study, or may be learned from practice of the present invention. The objectives and other advantages of the present invention may be attained and attained by the use of the following description.
Beschreibung der beigefügten Zeichnungen Um den Gegenstand, die technischen Lösungen und die Vorteile der vorliegenden Erfindung zu verdeutlichen, wird die Erfindung vorzugsweise nachstehend in Verbindung mit den beigefügten Zeichnungen näher beschrieben, in denen: Bild 1 zeigt ein Flussdiagramm eines Verfahrens zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist. Detaillierte Beschreibung Beispiel 1 Verfahren zur Herstellung einer Polysaccharid Biomedizinisches Kolloid Flüssigkeit, die mit dem Faktorenkomplex menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe angereichert ist, wie in Bild 1 gezeigt, angereichert ist, umfassend die Schritte: S1. Reinigen von Adipozyten; Entnahme menschlicher Fettproben, Waschen mit Kochsalzlôësung, Zugabe eines gleichen Volumens Kollagenase zum Verdau, mehrmaliges Filtrieren und Zentrifugieren nach dem Verdau und Entfernen des Überstands, um gereinigte Adipozyten zu erhalten; Die Kollagenase ist ein Gemisch aus Typ-I-Kollagenase und 7Description of the attached drawings In order to clarify the object, the technical solutions and the advantages of the present invention, the invention is preferably described in more detail below in connection with the attached drawings, in which: Figure 1 shows a flow chart of a process for the production of a polysaccharide biomedical colloid Fluid enriched with the factor complex of human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue. DETAILED DESCRIPTION Example 1 A method of preparing a polysaccharide biomedical colloid liquid enriched in human adipose tissue mesenchymal stem cell factor complex as shown in Figure 1, comprising the steps of: S1. purifying adipocytes; collecting human fat samples, washing with saline, adding an equal volume of collagenase for digestion, filtering and centrifuging several times after digestion and removing the supernatant to obtain purified adipocytes; The collagenase is a mixture of type I collagenase and 7
Description Typ-Il-Kollagenase ist, die Verdauungszeit beträgt 30-60 Minuten, die Kollagenasé/*02428 konzentration beträgt 0.1 % bis 0.5 %, die verdauten Adipozyten filtriert durch eine Membran mit einem Durchmesser von 70 um und dann werden bei 2000rpm/min 5- Minuten lang zentrifugiert, um den Uberstand zu entfernen, und das Zellpräzipitat wurde dann unter den gleichen Bedingungen in PBS dispergiert, und die gereinigten Adipozyten wurden durch Filtration und erneute Zentrifugation gewonnen.Description is type II collagenase, the digestion time is 30-60 minutes, the collagenase/*02428 concentration is 0.1% to 0.5%, the digested adipocytes are filtered through a membrane with a diameter of 70um, and then at 2000rpm/min 5 - Centrifuged for minutes to remove the supernatant, and the cell precipitate was then dispersed in PBS under the same conditions, and the purified adipocytes were recovered by filtration and centrifugation again.
S2. Kultivieren von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (hASCs) Die gereinigten Adipozyten wurden in serumfreiem Phenolrot-freiem High- Coomassie-Medium mit 5 % Thrombozytenlysat resuspendiert und dann in Zellkulturflaschen zur Inkubation bei einer Inokulationsdichte von 60.000 Zellen/ml transferiert; Das serumfreie Phenolrot-freie High-Coomassie-Medium ist ein Mesenchym-Stammzellmedium, das mit 10 mg bis 28 mg Coenzym A, 5 mg bis 15 mg Co-Carboxylase, 4 mg bis 12 mg Flavin-Adenin-Dinukleotid und 0.5 mg bis 2.5 mg Uridylphosphat pro 1L ergänzt ist; Unter hypoxischen Bedingungen kultiviert, um die Sekretion von Zytokinen zu fôrdern, mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe wurden zu 90 + 5 % kultiviert, und die Kulturüberstände der P3- Generation wurden gesammelt; Die hypoxischen Zuchtbedingungen sind: die Sauerstoffkonzentration der Zellen beträgt 21% in 24 Stunden, von 24 bis 26 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäBig von 21% auf 18% ab, in der 27 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 18%, vom 28 bis 36 Stunde nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 18% auf 8% ab, in der 37 Stunde beträgt die Sauerstoffkonzentration 8%, vom 38 bis 44 Stunden nimmt die Sauerstoffkonzentration gleichmäßig von 8% auf 2% ab, und wird dann bei einer Sauerstoffkonzentration von 2 % weiter bebrütet, wobei die CO2-Konzentration 5 % beträgt und der Rest Stickstoff 1st.S2. Cultivation of Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells (hASCs) The purified adipocytes were resuspended in serum-free phenol red-free High Coomassie medium containing 5% platelet lysate and then transferred to cell culture flasks for incubation at an inoculation density of 60,000 cells/ml; The serum-free phenol red-free high-Coomassie medium is a mesenchymal stem cell medium supplemented with 10 mg to 28 mg coenzyme A, 5 mg to 15 mg co-carboxylase, 4 mg to 12 mg flavin adenine dinucleotide and 0.5 mg to 2.5 mg uridyl phosphate per 1L supplemented; Cultured under hypoxic conditions to promote the secretion of cytokines, mesenchymal stem cells from adipose tissue were cultured at 90±5%, and the culture supernatants of the P3 generation were collected; The hypoxic culture conditions are: the oxygen concentration of the cells is 21% in 24 hours, from 24 to 26 hours the oxygen concentration decreases smoothly from 21% to 18%, in the 27 hour the oxygen concentration is 18%, from 28 to 36 hours it increases Oxygen concentration decreases smoothly from 18% to 8%, in the 37 hour the oxygen concentration is 8%, from 38 to 44 hours the oxygen concentration decreases smoothly from 8% to 2%, and then continues to incubate at an oxygen concentration of 2%, where the CO2 concentration is 5% and the remainder is nitrogen.
Die Sekrete umfassen mindestens den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten-Wachstums- faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden Wachstumsfaktor B (TGF-B), den insulinähnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen 8The secretions include at least vascular endothelial growth factor (VEGF), keratinocyte growth factor (KGF), hepatocyte growth factor (HGH), transforming growth factor B (TGF-B), insulin-like growth factor (IGF), and platelet-derived 8th
Description stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). LUS02428 Menschlicher mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe sezernieren den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF), den Keratinozyten- Wachstums-faktor (KGF), den Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH), den transformierenden Wachstumsfaktor PB (TGF-B), den insulindhnlichen Wachstumsfaktor (IGF) und den von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF). Die wichtigsten biologischen Aktivitäten dieser Zytokine sind entzündungshemmend, anti-apoptotisch und immunmodulatorisch wirksam. Sie fördern stark die Mitose, sind an der stammzellinduzierten Differenzierung, dem Wachstum von Gewebezellen, der Regeneration und dem Wiederaufbau beteiligt, verbessern die Gewebefunktion an der Stelle eines Traumas und fördern die Wundheilung. Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) lag zwischenDescription derived growth factor (PDGF). LUS02428 Human adipose-derived mesenchymal stem cells secrete vascular endothelial growth factor (VEGF), keratinocyte growth factor (KGF), hepatocyte growth factor (HGH), transforming growth factor PB (TGF-B), insulin-like growth factor (IGF) and platelet-derived growth factor (PDGF). The main biological activities of these cytokines are anti-inflammatory, anti-apoptotic and immunomodulatory. They strongly promote mitosis, are involved in stem cell-induced differentiation, tissue cell growth, regeneration and reconstruction, improve tissue function at the site of trauma, and promote wound healing. Vascular endothelial growth factor (VEGF) was between
728.56+124.23pg/ml, der Keratinozyten-Wachstumsfaktor (KGF) lag zwischen728.56+124.23pg/ml, the keratinocyte growth factor (KGF) was between
623.46+136.78pg/ml, der Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGH) lag zwischen623.46+136.78pg/ml, the hepatocyte growth factor (HGH) was between
2501.11+18.36pg/ml, der transformierende Wachstumsfaktor B (TGF-B) lag zwischen 4223.23+=220 36pg/ml, der insulinähnliche Wachstumsfaktor (IGF) zwischen 1653.56+56.23pg/ml und der von Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor (PDGF) zwischen 102.56+23.53pg/ml.2501.11+18.36pg/ml, transforming growth factor B (TGF-B) was between 4223.23+=220 36pg/ml, insulin-like growth factor (IGF) between 1653.56+56.23pg/ml and platelet-derived growth factor (PDGF) between 102.56 +23.53pg/ml.
S3. Sammeln des Uberstands vor der Passage Der Überstand vor der Passage wurde mit hoher Geschwindigkeit durch eine Zentrifuge zentrifugiert und konzentriert, um eine Zellkulturbrühe herzustellen, die durch eine Filtermembran mit einem Durchmesser von 0.22 um gefiltert und entbakterisiert wurde, um schließlich das Stammzellkomplexfaktorkonzentrat zu erhalten; S4. Herstellen einer komplexen biomedizinischen Kolloidflüssigkeit Mischen Sie Natriumcarboxymethylcellulose und Pektin in einem Molverhältnis von 80-90:1, um ein Hydrokolloidgel von 1 ml zu erhalten, verdünnen Sie das Hydrokolloidgel dann auf das 5-10-fache seines Volumens mit physiologischer Kochsalzlösung und fügen Sie dann ein 9S3. Collection of the supernatant before the passage The supernatant before the passage was centrifuged at high speed by a centrifuge and concentrated to prepare a cell culture broth, which was filtered through a filter membrane with a diameter of 0.22 µm and debacterized to finally obtain the stem cell complex factor concentrate; S4. Preparing complex biomedical colloid liquid Mix sodium carboxymethyl cellulose and pectin in a molar ratio of 80-90:1 to obtain a hydrocolloid gel of 1ml, then dilute the hydrocolloid gel to 5-10 times its volume with physiological saline, and then add a 9
Description Stammzellenkomplexfaktor-Konzentrat (Konzentration von 10ug-20ug/L) hinztY>92428 um eine komplexe biomedizinische Kolloidflüssigkeit zu erhalten.Description Stem cell complex factor concentrate (concentration of 10ug-20ug/L) hinztY>92428 to obtain complex biomedical colloid liquid.
Beispiel 2 Der Unterschied zwischen Beispiel 2 und Beispiel 1 besteht darin, dass die Natriumcarboxymethylcellulose in Schritt S4 eine Mischung aus niedrigviskoser Natriumcarboxymethylcellulose, mittelviskoser Natriumcarboxymethylcellulose und hochviskoser Natrrumcarboxymethylcellulose in einem molaren Verhältnis von 1:1:1 ist.Example 2 The difference between Example 2 and Example 1 is that the sodium carboxymethyl cellulose in step S4 is a mixture of low viscosity sodium carboxymethyl cellulose, medium viscosity sodium carboxymethyl cellulose and high viscosity sodium carboxymethyl cellulose in a molar ratio of 1:1:1.
Beispiel 3 Der Unterschied zwischen Beispiel 3 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S2 der gesammelte Überstand der Überstand der P4-Generation ist.Example 3 The difference between example 3 and example 2 is that in step S2 the supernatant collected is the supernatant of the P4 generation.
Beispiel 4 Der Unterschied zwischen Beispiel 4 und Beispiel 2 besteht darın, dass in Schritt S2 der gesammelte Überstand der Uberstand der P5-Generation ist.Example 4 The difference between example 4 and example 2 is that in step S2 the supernatant collected is the supernatant of the P5 generation.
Beispiel 5 Der Unterschied zwischen Beispiel 5 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S4 die Konzentration des Stammzellkomplexfaktorkonzentrats 15ug/L beträgt.Example 5 The difference between example 5 and example 2 is that in step S4 the concentration of the stem cell complex factor concentrate is 15 µg/L.
Beispiel 6 Der Unterschied zwischen Beispiel 6 und Beispiel 2 besteht darin, dass in Schritt S4 die Konzentration des Stammzellkomplexfaktorkonzentrats 20 ug/L beträgt.Example 6 The difference between Example 6 and Example 2 is that in step S4, the concentration of the stem cell complex factor concentrate is 20 µg/L.
Vergleichende Beispiele Die biomedizinische Polysaccharid-Kolloidlösung enthält in Gewichtsprozent: niedrigviskose Natriumcarboxymethylcellulose 0.3 %, mittelviskose Natriumcarboxymethylcellulose 1.2 %, hochviskose Natriumcarboxymethylcellulose 0.4 %, Natriumchlorid 0.9 %, der Rest ist Wasser für Injektionszwecke. Natriumchlorid in Wasser fiir Injektionszwecke auflösen, dann Natriumcarboxymethylcellulose mit niedriger, mittlerer und hoher ViskositätComparative Examples The biomedical polysaccharide colloid solution contains in weight percent: low viscosity sodium carboxymethyl cellulose 0.3%, medium viscosity sodium carboxymethyl cellulose 1.2%, high viscosity sodium carboxymethyl cellulose 0.4%, sodium chloride 0.9%, the balance being water for injection. Dissolve sodium chloride in water for injections, then low, medium and high viscosity sodium carboxymethyl cellulose
Description in das Wasser geben, den Thermostat einschalten und bei einer Temperatur vdrr°02428 65 °C mechanisch rühren, bis die Natriumcarboxymethylcellulose mit niedriger, mittlerer und hoher Viskosität vollständig aufgelöst ist, um eine biomedizinische kolloidale Polysaccharidlösung zu erhalten.Description into the water, turn on the thermostat and stir mechanically at a temperature of vdrr°02428 65°C until the low, medium and high viscosity sodium carboxymethyl cellulose is completely dissolved to obtain a biomedical colloidal polysaccharide solution.
Die in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigerzeugnisse wurden auf folgende Weise an Ratten getestet:The finished products produced in Examples 1 to 6 were tested on rats in the following manner:
1. Akutes Traumamodell für Ratten: Mindestens 18 erwachsene SD-Ratten wurden entnommen und in 6 Behandlungsgruppen aufgeteilt, 3 Ratten in jeder Gruppe. 12 Stunden vor der Modellierung die Haare auf dem Rücken der Ratten entfernen, fasten und reichlich Wasser trinken. Vor der Modellierung wurden die Ratten durch intraperitoneale Injektion von Chloralhydratlösung betäubt, und der Bereich der dorsalen Haarentfernung wurde routinemäßig desinfiziert. Auf jeder Seite der Wirbelsäule jeder Ratte wurde ein kreisförmiger Bereich (der Abstand zwischen den kreisförmigen Markierungen betrug >1 cm) von 2 cm Durchmesser markiert, und die gesamte Haut wurde entlang der kreisförmigen Markierungen mit einem sterilen Skalpell ausgeschnitten, wobei die Wunde tief in die tiefe Faszie reichen sollte.1. Rat Acute Trauma Model: At least 18 adult SD rats were collected and divided into 6 treatment groups, 3 rats in each group. 12 hours before modeling, remove the hair on the rats' backs, fast and drink plenty of water. Prior to modeling, rats were anesthetized by intraperitoneal injection of chloral hydrate solution and the dorsal hair removal area was routinely disinfected. A circular area (distance between circular marks was >1 cm) 2 cm in diameter was marked on each side of the spinal column of each rat, and the entire skin was excised along the circular marks with a sterile scalpel, making the wound deep into the deep fascia should be enough.
2. Behandlungsmethode: Die Wunden auf der linken und rechten Seite des Rattenrückens wurden als Behandlungs- bzw. Kontrollgruppe eingerichtet. Die Fertigprodukte 1 bis 6 wurden auf die Hautwunden der jeweiligen Rattengruppen aufgetragen, und die Wunden wurden mit steriler Kochsalzlösung gereinigt und nach Desinfektion der Wunden mit Amyljod alle 2 Tage durch neue Verbände ersetzt. Während der Behandlung wurden die Ratten hinsichtlich der Gewebereparatur und anderer Reaktionen wie Ernährung und Bewegung beobachtet.2. Treatment method: The wounds on the left and right side of the rat back were set up as treatment and control groups, respectively. The finished products 1 to 6 were applied to the skin wounds of the respective groups of rats, and the wounds were cleaned with sterile saline and replaced with new dressings after disinfecting the wounds with amyl iodine every 2 days. During treatment, the rats were observed for tissue repair and other responses such as diet and exercise.
3. Ermittlung von Behandlungseffekten Nach der Behandlung wurden die Ratten exekutiert und die gesamte Haut sowie einige zufällige subkutane Gewebeproben aus dem verletzten Bereich entnommen und zur pathologischen Sektion eingeschickt, und jede Probe wurde mit Hämatoxylin-Eosin gefärbt; 113. Evaluation of Treatment Effects After treatment, the rats were excised and all skin and some random subcutaneous tissue samples were taken from the injured area and sent to pathological section, and each sample was stained with hematoxylin-eosin; 11
Description Die Testergebnisse lauten wie folgt: LUS02428 Die Ratten der Beispiele 1-6 hatten eine intakte und dicke, Epidermis mit einer geordneten Kollagenanordnung; Haarfollikel waren vorhanden, Blutgefäße wuchsen regelmäßig und waren zahlreicher; subkutanes Kollagen wurde produziert und ordentlich angeordnet, und die Ergebnisse waren besser als das umgekehrte Verhältnis.Description The test results are as follows: LUS02428 The rats of Examples 1-6 had an intact and thick epidermis with an ordered collagen arrangement; Hair follicles were present, blood vessels grew regularly and were more numerous; subcutaneous collagen was produced and properly assembled, and the results were better than the inverse ratio.
Die Beispiele 1-6 und die Skala der Restaurierung sind in Tabelle 1 dargestellt, wobei + für den Grad der Restaurierung steht, je mehr +, desto besser die Restaurierung, und - für keine Restaurierung.Examples 1-6 and the scale of restoration are presented in Table 1, where + represents the degree of restoration, the more + the better the restoration, and - for no restoration.
Tabelle 1 [ee [rn [ee Infiltration Beispiel | | er | fo | Beispiel 2 | eer | SH NE Beispiel 3 | ee (OT fo | Beispiel 4 | er | oe fo | TE | Beispis SE OT EE NE EET | OT (OT UOTE Vergleichende + + + + + [rés LIL Hinweis: Die Anzahl der "+" gibt den Grad der Gewebereparatur nach der Behandlung an.Table 1 [ee [rn [ee Infiltration Example | | he | fo | Example 2 | eer | SH NE Example 3 | ee (OT fo | Example 4 | er | oe fo | TE | Examples SE OT EE NE EET | OT (OT UOTE Comparative + + + + + [rés LIL Note: The number of "+" indicates the degree of tissue repair after the treatment on.
Die in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigerzeugnisse wurden auf folgende Weise an Ratten getestet:The finished products produced in Examples 1 to 6 were tested on rats in the following manner:
1. Finführung eines chronischen Traumamodells bei Ratten mit schwieriger Heilung Mindestens 21 erwachsene SD-Ratten wurden entnommen und in 7 Gruppen eingeteilt, 1 Kontrollgruppe und 6 Gruppen mit chronischem Trauma, 3 Ratten in Jeder Gruppe, die vor der Modellierung durch intraperitoneale Injektion von Chloralhydratlôsung betäubt wurden. Das Dorsum wurde debridiert und der Bereich 121. Implementation of chronic trauma model in rats with difficult healing At least 21 adult SD rats were taken and divided into 7 groups, 1 control group and 6 chronic trauma groups, 3 rats in each group anesthetized by intraperitoneal injection of chloral hydrate solution prior to modeling became. The dorsum was debrided and the 12th
Description der Abformung wurde mit einer 3,0 cm x 3,0 cm großen Karte markiert, die um der 502428 debridierten Bereich herum mit Nähten fixiert wurde. Bereiten Sie ein steriles Einweg-Inzisionsbesteck und andere Utensilien vor, und desinfizieren Sie, nachdem die Anästhesie gewirkt hat, den Hautpräparationsbereich des Rattenrückens dreimal mit Jodophor, schneiden Sie das subkutane Gewebe entlang der markierten Linie bis zur Myofaszie weg, stoppen Sie die Blutung und bilden Sie einen offenen Vollhautdefekt bei der Ratte.The impression was marked with a 3.0 cm x 3.0 cm card that was fixed with sutures around the 502428 debrided area. Prepare a sterile disposable incision set and other utensils, and after the anesthesia has taken effect, disinfect the skin preparation area of the rat's back with iodophor three times, cut away the subcutaneous tissue along the marked line up to the myofascia, stop the bleeding and make up an open full-thickness skin defect in the rat.
2. Behandlungsmethode: Unmittelbar nach der Formgebung wurde Hydrocortison (80 mg/kg) intramuskulär für 7 Tage injiziert. 2 ml des in den Beispielen 1 bis 6 hergestellten Fertigprodukts wurden auf die Wunde aufgetragen. Penicillin-Kaliumsalz (4 000 Einheiten) wurde ab 1 Tag vor dem Versuch 4 Tage lang intramuskulär injiziert, um Infektionen zu verhindern. Die Wunden wurden jeden zweiten Tag gewechselt, routinemäßig gespült und verbunden. Während der Behandlung wurden die Ratten hinsichtlich der Gewebereparatur und anderer Reaktionen wie Ernährung und Bewegung beobachtet.2. Treatment method: Immediately after the shaping, hydrocortisone (80 mg/kg) was injected intramuscularly for 7 days. 2 ml of the finished product prepared in Examples 1 to 6 were applied to the wound. Penicillin potassium salt (4,000 units) was injected intramuscularly for 4 days from 1 day before the experiment to prevent infection. Wounds were changed every other day, routinely irrigated and bandaged. During treatment, the rats were observed for tissue repair and other responses such as diet and exercise.
3. Ermittlung von Behandlungseffekten Die Größe der Wunde wird mit Hilfe von Transparentfolien und fotografischen Methoden erfasst, und einige Tierwunden werden mit einem computergestützten Bildanalysesystem bearbeitet und kalibriert, um die Geschwindigkeit und Qualität der Wundheilung zu berechnen. Darüber hinaus wurden die Ratten am Ende der Behandlung hingerichtet, und die gesamte Haut und ein Teil des beiliegenden subkutanen Gewebes wurden aus dem verletzten Bereich entnommen und zur pathologischen Sektion eingeschickt, und jede Probe wurde mit Hämatoxylin-Eosin gefärbt.3. Determination of Treatment Effects The size of the wound is recorded using transparencies and photographic methods, and some animal wounds are processed and calibrated using a computerized image analysis system to calculate the speed and quality of wound healing. In addition, the rats were executed at the end of the treatment, and all the skin and part of the attached subcutaneous tissue were taken out from the injured area and sent to the pathological section, and each specimen was stained with hematoxylin-eosin.
Die Testergebnisse lauten wie folgt: Beispiele 1-6 Ratten mit rotem und feuchtem Trauma, wenig Sekretion, unregelmäßiger Form des Traumarandes und deutlicher Kontraktion.The test results are as follows: Examples 1-6 Rats with red and wet trauma, little secretion, irregular shape of the trauma margin and clear contraction.
Die Beispiele 1-6 und die Skala der Reparatur sind in Tabelle 1 dargestellt, 13Examples 1-6 and the scale of repair are shown in Table 1, 13
Description wobei + für den Grad der Reparatur steht, je mehr +, desto besser der Reparatureffekt/202428 - steht für keine Reparatur.Description where + stands for the level of repair, the more +, the better the repair effect/202428 - stands for no repair.
TS TEE Infiltration Beispiel | ee | | | (eer |e [ee [ee | Beispils | ew | ew | TE EEE I UOTE | 8 | Beispiel 5 | ev UOTE 2 om | | Bewielo | we | oe UT EL | | CV 8181 + + + + + Beispiele AbschlieBend sei darauf hingewiesen, dass die obigen Ausführungsformen nur dazu dienen, die technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung zu veranschaulichen und sie nicht einzuschränken.Obwohl die vorliegende Erfindung unter Bezugnahme auf die bevorzugten Ausführungsformen ausführlich beschrieben wurde, sollte der Durchschnittsfachmann verstehen, dass die technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung modifiziert oder gleichwertig ersetzt werden können, ohne vom Geist und Schutzumfang der technischen Lösungen abzuweichen, die alle im Schutzumfang der Ansprüche von vorliegender Erfindung enthalten sollten.TS TEE infiltration example | ee | | | (eer |e [ee [ee | Examples | ew | ew | TE EEE I UOTE | 8 | Example 5 | ev UOTE 2 om | | Bewielo | we | oe UT EL | | CV 8181 + + + + + Examples Finally let noted that the above embodiments only serve to illustrate the technical solutions of the present invention and not limit them. Although the present invention has been described in detail with reference to the preferred embodiments, those skilled in the art should understand that the technical solutions of the present invention modified or equivalently substituted without departing from the spirit and scope of the technical solutions, all of which should be included within the scope of the claims of the present invention.
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Effective date: 20230106 |