KR970005181B1 - 글리코스아미노글리칸을 주성분으로 하는 당뇨병 치료제 - Google Patents

글리코스아미노글리칸을 주성분으로 하는 당뇨병 치료제 Download PDF

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Abstract

내용없음

Description

글리코스아미노글리칸을 주성분으로 하는 당뇨병 치료제
항응고제 및 항트롬빈 치료제에 있어서 글리코스아미노글리칸 특히 헤파린의 사용은 널리 알려진 반면에, 당뇨병 신장병증 및 당뇨병증과 같은 당뇨병의 부행(副行)병리학적 치료에 있어서 이들의 사용은 알려진바가 없다. Kamwar Y.S. 등에 의한 Sem, Nephrol., 5, 307, (1985) 및 Groggel G.C. 등에 의한 Kidney Int., 33, 517, (1988)의 문헌에서 최근에 신장세포의 보전과 기능을 도와주는데 있어서 글리코스아미노글리칸의 바람직한 역할의 증거를 제시한바 있다.
더구나, 종전에 Canfield J.P.등은 Lab. Invest., 39, 5050, (1978)문헌에서 신장병증의 많은 상태에 있어서 멤브레인의 글리코스아미노글리칸의 감소를 제시한바 있는 반면에, Bagio B.등은 Nephron., 43, 187(1986)문헌에서 당뇨병 환자, 비단백뇨성 환자의 뇨에서 글리코스아미노글리칸의 제거가 증가되는 것을 통해서 멤브레인의 글리코스아미노글리칸의 감소를 제시한바 있다. 당뇨병 신장병증에 있어서 글리코스아미노글리칸의 상기 증가된 배설은 Partasarathy N.등에 의한 Diabetes, 31, 738, (1982)문헌에서 제시된바 있으며, 최근에는 Gambaro G.등이 Metabolism, 38, 419, (1989)문헌에서 당뇨병원의 신장병증의 인식에 있어서 미소 단백뇨보다 더 확실한 분석방법으로서 뇨 경로에 의해 배설된 글리코스아미노글리칸 량의 판단에 대한 의존 가능성을 제시한바 있다.
최근에, Diamond J.R.등에 의한 Renal Physiol., 9, 366, (1986)문헌 및 Parkerson M.B.등에 의한 J.Clin. Invest., 81, 69, (1988)문헌에서는 동물에 있어서 헤파린의 잠재적인 보호 효과를 제시한바 있으며 아AL노글리코사이드로 부터의 만성 신증 및 쥐내에서 소계 신장 절제로 비롯한 신장 병리학적 같이, 당뇨병 신장병증에 관련되지 않은 실험적 신장병증의 모델에 있어서 헤파린의 유도체를 제시한바 있다.
당뇨병 사구체병증 및 당뇨병 신장병증의 방지 또는 치료를 위해 투여되는 외인성 글리코스아미노글리칸의 가능한 역할을 보여주는 제약학적 연구는 아직까지 존재하지 않았다.
본 발명의 목적은 글리코스아미노글리칸의 효과적인 량, 특히 헤파린과, 탈증합화 반응에 의하여 또는 예를들면 헤파린 구조 데르미탄 설파이트 및 저분자량 프렉션의 O 또는 N 황산화 또는 탈황산과 같은 기타 화학적 수정에 의하여 얻어진 헤파린 유도체의 효과적인 량을 투여함에 의하여 당뇨병 신장병증을 예방 및 치료하는 의약품을 제공하는 것이다.
당뇨병 신경변증은 당뇨병 환자의 말초신경계의 뉴우런에 타격을 주는 질병이다. 상기 병리학은 신경임펄스의 낮은 전도속도에 의하여 두드러진 신경의 감소된 기능성을 가진채 시작되어 신경의 변성과 뉴우런의 위축이 일어나기까지 점진적으로 진행되는 상기 신경계의 진보적인 형태기능적 변성에 의하여 특징지워진다. 상기 결과는 감각 능력(통점, 온점등)의 점진적인 손실, 근육강화의 감소, 및 자율신경계의 심각한 변성을 야기시킨다. 상기 후자의 합병증은 확실히 당뇨병에 의하여 야기되는 합병증 중에서 가장 흔한 것이다; 사실상 당뇨병 환자의 70%-80%가 자율소장계의 저하된 기능 및 변성에 의해 야기되는 위장질환을 겪고 있다.
상기 합병증은 장 벽에 2개의 내인성 뉴우런 인자의 변성에 직접 관련된다. 이들은 Met-엔케팔린과 물질P를 함유하는 계이다. Met-엔케팔린은 위와 장간의 괄약근의 수축을 조절하며, 더구나 다른 소장 뉴우런의 자극능력을 조절할 수 있다. 물질P는 수축되므로 장의 운동성에 대해 반응할 수 있는 물질의 하나이다.
최근에 Di Giulio A.M.등에 　한 J. Neurosc. Res., 24, 355-61, (1989)문헌에서 알록산에 의해 야기되는 실험적 당뇨병에 있어서 십이지장 및 공장의 장 영역내의 물질P 및 Met-엔케팔린의 손실과 함께 두 개의 뉴우런 계가 변성되는 것을 증명한바 있다.
인용문헌에는 지금까지 당뇨병 신장병증을 셋업하는데 있어서 내인성 글리코스마아미노글리칸의 가능한 관계에 관하여 제시한바 없으며, 더구나 당뇨병원의 신장병증에 있어서 예방적 혹은 치료적 목적을 가지고 투여된 외인성 글리코스아미노글리칸의 가능한 역할을 보여주는 약학적인 연구는 아직까지 존재하지 않았다.
본 발명에서는 글리코스아미노글리칸의 상을 통한 신장계 및 말초신경계, 특히 당뇨병 신장병증 및 당뇨병 신장병증의 일부 당뇨병 병리학적의 효과적인 치료에 있다.
이들 당뇨병 병리학을 예방 및 치료하기 위한 글리코스아미노글리칸의 능력의 가치는 스트랩토조토신 혹은 알록산으로 처리함에 의하여 발생된 당뇨병이 걸린 알비노 숫쥐에 대한 약리학적 실험에 의하여 수행되어진다. 세가지 다른 종류의 글리코스아미노글리칸으로 치료된 일부 당뇨병 쥐 및 당뇨병이 없는 쥐와 비교하여 스트렙토조토신으로 당뇨병이 유발된 쥐에 있어서의 사구체의 음이온 전하의 측정, 기저 사구체막의 두께측정 및 24시간동안 단백뇨의 측정이 당뇨병 신장병증에 대하여 수행된 실험이었다. 이들 실험은 기저 사구체막이 두꺼워지고 사구체 음이온 전하가 감소되기 때문에 선택되며, 글리코스아미노글리칸 신진대사의 장애의 결과는 당뇨병성 신사구체 병증을 특징짓는 기초가 되며, 이러한 변성은 24시간동안 단백뇨의 측정을 통해 판단될 수 있는 당뇨병 신장병증의 대표적인 단백뇨 신장 신드롬의 병리학적 기초를 형성할 수 있기 때문이다.
세가지 다른 종류의 글리코스아미노글리칸으로 치료된 동일한 당뇨병쥐 및 동일한 세가지 다른 종류의 글리코　아미노글리칸으로 치료되거나 치료되지 않은 비-당뇨성 쥐와 비교하여 볼 때 알록산으로 당뇨병이 유발된 쥐의 십이지장 및 공장과 같은 일부 장 영역에 있어서 Met-엔케팔린과 물질 P의 수준의 측정과 같은 요인은 당뇨병 신장병증을 향한 글리코스아미노글리칸의 효과의 측정에 대하여 시험되었다.
사실상 물질P 및 Met-엔케팔린은 알록산으로부터 야기된 실험적 당뇨병에 의해 생성된 당뇨병 신장병증에 의해 야기되는 소장 뉴우런의 변성의 징조이다. 사실, Di Giulio A.M.등에 의한 J. Neurosc. Res., 24, 355-61, (1989)문헌은 실험적 만성 당뇨병에 있어서 신장병증의 심각한 증세인 위장 신경지배의 변성을 제시한바 있다. 이러한 변성 때문에 물질P 및 Met-엔케팔린의 함량은 많은 장 영역내에서 상당히 감소된다. 물질P 및 Met-엔케팔린의 감소되는 량이 측정될 수 있으므로, 약리학적 치료의 효과가 Di Giulio A.M.등에 의한 Brain Res., 342, 405-8,(1985)에 의하여 기술된 투정 항체를 사용한 방사선 면역측정법에 의하여 아주 정확하게 측정될 수 있다.
알비노 숫쥐의 군에 대하여 수행된 당뇨병 신장병증 및 당뇨병 신경병증의 치료에 있어서 글리코스아미노글리칸의 치료적 효과의 판단을 위한 약리학적 실험은 본 발명을 제한함 없이 본 발명을 예증하는 두 개의 실시예에서 상세히 설명한다. 이들 실험은 글리코스아미노글리칸으로 치료된 당뇨병 쥐들에 관련된 인자들의 수치가 비-당뇨병 대조용 쥐들의 수치와 대응하기 때문에 이들은 정상이며, 반면에 글리코스아미노글리칸으로 치료되지 않은 당뇨병 쥐들에 관련된 인자들의 수치는 실험용 동물들의 심각한 병리학적 상태를 완전히 증명해주는 상당한 차이를 보여준다.
특히 24시간 동안 알부민의 뇨 배설, 즉 단백뇨는 글리코스아미노글리칸으로 치료되지 않은 당뇨병 쥐들에 있어서 극히 높은데, 대조용 쥐들과 비교하여 볼 때 평균 7배나 더 높으며, 반면에 글리코스아미노그리칸으로 치료된 당뇨병 쥐들과 비교하여 볼 때 기저의 사구체막의 두께가 통계상 유사하게 상당한 방법으로 증가되며, 음이온 전하의 밀도는 통계상 상당히 감소되는 반면에, 대조용 쥐들 및 글리코스아미노글리칸으로 치료된 당뇨병 쥐들중에서는 통계상 상당한 차이도 감지할 수 없었다.
마지막으로 장 영역내에서 물질P 및 Met-엔케팔린의 통계상 상당한 감소가 관찰되며, 반면에 글리코스아미노글리칸을 사용한 치료는 물질P 및 Met-엔케팔린의 수준 모두를 통계상 변함없게 한다.
모든 글리코스아키노글리칸은 본 발명내에서 사용되는 것이 유리하며, 특히 헤파린과 그 제약학적 허용 가능한 염들, 화학적 혹은 효소적 탈중합화 반응에 의하여 얻어진 저분자량 헤파린, 예를들면 O또는 N황산화 반응 또는 탈황산화 반응을 통한 화학적으로 수정된 헤파린, 데르마탄 설페이트 및 예를들면 화학적 혹은 효소적 탈중합화 반응에 의하여 얻어진 데르마탄 설페이트의 저분자량 프랙션과 같이 이미 치료적 분야에서 사용된 바가 있는 것들이 바람직하다. 헤파린의 나트륨, 칼슘, 칼륨 및 마그네슘, 화학적 탈중합화 반응의 방법에 따라 얻어진 저분자량 헤파린이 유럽특허제EP 0121067호에 기술되어 있다. 상기 특허출원서에서는 40-50℃하의 pH7.5-8에서 큐프릭 아세테이트, 히드로겐 퍼옥사이드 및 아스코브산의 존재하에서 시중구입 가능한 헤파린으로부터 얻어진 평균분자량 3000-6000달톤의 올리고삭카라이드가 기술되어 있다. 염기성 매개물내에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체는 미국특허제5,010,063호 및 제5,104,860호에 각각 대응하는 유럽공보 제EP0347588호 및 EP 0380943호에 기술되어 있다. 미국특허제5,010,063호에는 35-60℃온도에서 염기와 헤파린 물질을 함께 처리하고 이어 이온교환수지 또는 투석을 통하여 여과기킨다음 약 중성 pH에서 침전시킴에 의하여 얻어진 약+50°와 약+90°사이의 특정 화전력[*********]20을 갖는 13C-NMR에서 약 53-54p.p.m에서 새로운 시그널을 나타내는 헤파린유도체를 기술하고 있다.
미국특허제5,104,860호는 약 101.3p.p.m에서 특징적인 시그날, 수용액에서 약+15°와 약+40°사이에 546nm에서 특정 회전력, 약6% 및 9%사이의 황함량, 약 1.20 및 약1.70사이의 설페이트/카복실의 비, 약0.4% 및 약2.1%사이의 유리아미노기 함향을 나타내는, 102-92p.p.m사이의 영역에서 13C-NMR스펙트럼을 갖는 헤파린 유도체를 기술하고 있다. 제조방법은 75℃에서부터 반응 혼합물이 끓을때까지의 온도에서 약0.5- 약24시간동안 알칼리성 혹은 알칼리토금속 염기0.01N-1N용액과 함께 시중구입 가능한 정제된 혹은 저분자량 헤파린을 함유하는 수용액을 반응시키는 공정과, 이 반응혼합물로부터 헤파린 유도체를 분리해내는 공정으로 구성된다. 국제공보(PCT 제WO 86/06729호에서 기술된 화학적 탈중합화 반응의 방법에 따라 얻어진 데르마탄 설페이트 및 저분자량 데르마탄 셀페이트는 본 발명을 수행하는데 있어 특히 바람직하다. (PCT)제 제WO 86/06729호는 촉매로서 Cu++,Fe++,CR+++,Cr2O7의 존재하에서 20-70℃의 온도의 수용액 내에서 헤파린 및 기타 천연 폴리삭카라이드에 의해 얻어진 3500-8000달톤의 분자량의 저분자량 데르마탄 설페이트를 기슬하고 있으며, 상기 반응은 퍼옥사이드 혹은 과산에 의하여 시작된다. 글리코스아미노글리칸은 당뇨병 신장병증 및 당뇨병 신장병증의 예방 및 치료에 있어서, 근육내 혹은 정맥내 경로와 같은 전통적인 투여법 및 피하, 트랜스더말(transdermal), 이온삼투요법 또는 경구법과 같은 기타 투여법 모두에 접합할 수 있는 약을 통해 투여될 수 있다.
본 발명을 재한함 없이 본 발명은 예증하는 두가지 실시예에서 사용되는 글리코스아미노글리칸은 유럽특허제EP 012067호에서 기술된 화학적 탈중합화 반응의 공정에 따라 얻어진 4500±1000달톤의 평균 분자량을 갖는 저분자량 데르마탄 설페이트, 및 유럽공보제EP 0380843호에 기술된 공정에 다라 얻어진 염기성 매개물 내에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체가 있다.
실시예 1
글리코스아미노글리칸을 사용한 당뇨병 신장의 실험적 치료
코모호에 있는 찰스강 농장에서 온 7주 된 나이의 백변종 스프라규-다우레이 숫쥐 12마리 각각에 대하여 체중 1kg당 스트렙토조토신 35mg을 함유하는 생리적 수성용액을 정맥주사 방법으로 투여하여 당뇨병을 유발시켰다. 스트렙토조토신이 없는 생리적 용액을 주사하였던 세 마리의 백변종 스프라규-다우레이 숫쥐는 동일한 나이와 같은 태생으로서 대조용이었다.
스트렙토조토신 처리는 처리된 모든 쥐에서 당뇨병을 유발하며, 항상1000mg/d********보다 높은 당뇨에 의하여 증명되어진다. 모든 시험기간동안 쥐에게는 프로테인이 20% 함유된 볼자노의 리퍼상사의 알트로민********(Altromin********)을 기초로한 표준 다이어트에 의해 무제한 다이어트 시켰다. 스트렙토조토신에 의해 당뇨병이 유발된 후, 당뇨병에 걸린 12마리의 쥐를 3마리씩 4그룹으로 구분시켰다. 즉,
A그룹 - 대조용 당뇨병 거린 쥐 :
B그룹 - 저분자량 헤파린으로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐 :
C그룹 - 저분자량 데르마탄 설페이트로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐 :
D그룹 - 염기성 매개물레서 화학적으로 수정돈 헤파린 유도체로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐 :
당뇨병에 걸리지 않은 3마리의 쥐는 대조용 E그룹이었다.
8달 동안, 한주에 5일식, B그룹의 당뇨병 걸린 쥐에게 저분자량 헤파린 6mg/kg/die를 동일한 방법에 따라 주사하였다. 어떠한 활성 원소도 들어있지 않은 생리적 용액을 동시에 A그룹의 당뇨병 걸린 쥐와 E그룹의 대조용 쥐에게 동일한 방법으로 진피 아래에 주사하였다.
동물의 체중은 한달에 하번 조절시켰으며, 이뇨를 측정하기 위해서 24시간동안 각각 다른 우리안에 넣었다.
이렇게 8달 동안 당뇨병에 걸린 모든 쥐는 건강한 대조용 쥐에 비해 체중이 줄어들며 고혈달증, 단배뇨증, 당뇨증 및 케토누리아증(ketonuria)과 함께 산성 소변 등이 강하게 나타나서 비신진대사 상태를 나타낸다.
당뇨병이 유발된 후 8달 동안 단백뇨증을 측정하기 위햐여 24시간 이뇨를 시킨다음 라파라토미(laparatomy)시켰다.
복부 대동맥을 분리시켰고 봉합실을 신장 동맥위에 풀매듭을 할 목적으로 복부 대동맥 아래를 통과시킨 다음 제2의 실을 그 아래에 통과시켰다. 폴리에틸렌으로 만들어진 작은 카테터를 보다 낮은 풀매듭으로 죄어서 고정시켰던 신장 동맥의 수준까지 잡아당겨서 제2 풀매듭 아래에 있는 대동맥으로 도입시켰다. 다음에 신장 정맥을 자르고 위쪽 풀매듭으로 죈 다음 가르노우스키의 염착제(karnowski's fixative)내의 레드루테늄 0.2%를 함유하는 용액을 수은압 100mm하에 펌푸를 사용해서 연속적으로 주입시켰다.
그다음 신장을 들어내고 부신을 전개시킨 다음 커다랗게 커브를 그리면서 세로로 잘라서 골반까지 책의 페이지처럼 선 세포조직을 개방하였다. 측면이 1÷2mm보다 큰 두 조각을 피질로부터 떼어내는 레드 루테늄 0.2%를 함유하는 카르노우스키의 염착제 안에서 20시간 동안 실온으로 흠뻑 적셔놓았다. 그런다음 취한 피질을 카코딜화 완충액에 두 번 세정한 후 오스뮴테트록시드 1%와 레드 루테늄 0.05%를 함유하는 수용액에 실온에서 1시간동안 처리하여 후-고착시켰다. 그런다음 그것을 먼저 에틸 알코올에 넣어서 탈수시킨후 프로필렌 옥사이드에 넣었다. 이렇게 해서 얻어진 작은 세포덩어리를 에폰(Epon)안에 끼워넣고 전자 현미경을 통해 시험할 수 있도록 하기 위해 현미경용 초박편 절단기로 절단하여 레드 루테늄으로 처리된 기초 신사구체 막의 두께와 음이온 전하수가 나타내어졌다.
35,000배 확대한 사진이 형태미터법(morphometic)측정을 위해 수행되었으며, 기초 신사구체막의 평균두께가 측정되었다.
빈 자동 이미지 분석기인 이바스 콘트롤을 사용함에 의하여 기초 신사구체막의 외표면 길이가 측정되었으며, 레드 루테늄으로 처리함에 의하여 음이온 전하수가 나타내어졌는데, 상기 수가 1000nm인 것에 관계가 있다. 쥐군간에 평균의 통계적인 평가는 중요 한계(sinificance threshold) P=0.05에서, Individual com-parision by ranking method에 기재된 월콕손 F. 의 논-파라메트릭 시함을 하여 수행하였다.
기초 막의 두께와 신사구체 음이온 전하수 및 단백뇨증에 관련된 실험데이타가 다음 표1에 기록되어 있다.
표1에 기록된 시험데이타는, 글리코스아미노글리칸으로 처리되지 않은 당뇨병 걸린 쥐(A그룹)가 심각한 형태적 변이가 진행되며, 기초막의 두께가 두꺼워지고 신사구체 음이온 전하가 뚜렷하게 감속하고, 계속해서 대조용 쥐(E그룹)보다 더 많이 여러시간 동안 단백뇨증을 보이는 매우 뚜렷한 임상학적 변이로 진행됨을 분명히 보여준다.
이와 대조적으로, 저분자량 헤파린으로 처리시킨 당뇨병 걸린 주(B그룹), 저분자량 데루마탄 설페이트로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐(C그룹) 및 염기성 매개물에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐(D그룹)모두는 형태적 요인과 임상학적 요인 모두의 값이 당뇨병에 걸리지 않은 대조용 쥐군(E그룹)의 데이터대로인 것을 보여준다.
그러므로 저분자량 헤파린, 저분자량 데르마탄 설페이트 및 염기성 매개물에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체와 같은 글리코스아미노글리칸이 처리는 쥐에게 스트렙토조토신을 처리시켜 야기된 당뇨병 신장애의 실험 모델에서 뛰어난 형태적 임상학적 향상을 유발시킬 수 있다. 사실상 당뇨병 신장애를 예방하는 글리코스아미노글리칸의 능력은 기초 신사구체 막의 두께가 두꺼워지는 것을 약하게하고, 신사구체 음이온 전하를 감속시키며 단백뇨증의 현상을 억제시켜줌으로써 분명히 증명된다.
실시예 2
글리코스아미노글리칸을 사용한 당뇨병 신장의 실험적 치료
코모호에 있는 찰스강 농장에서 온 체중이 250g인 백변종 스프라규-다우레이 숫쥐에 대하여 체중 1kg당 알록산 100mg을 pH3 시트레이트-포스페이트 완충액에 용해시킨 것을 피하주사하여 당뇨병을 유발시켰다. 알록산으로 처리시킨후 한주일 내에 당뇨병 증세가 확인되었는데, 이는 보에링거 바이오케미아의 글루쿠르 테스트를 사용한 당뇨 측정과 보에링거 바이오케미아의 글루코-쿠안트를 사용한 핵소키나제 방법에 의한 혈당증 측정으로 알 수 있다. 혈당증치가 400mg/d********이상이고 체중이 320g이하인 당뇨병 걸린 쥐만을 시험용으로 채택하였다. 시트레이트-포스페이트 완충액만 피하주사하여 처리된 백변종 스프라규-다우레이 숫쥐는 동일한 나이와 같은 체중을 가진 쥐로서 당뇨병에 걸리지 않은 대조용 쥐로서 채택하였다.
당뇨병에 걸린 쥐와 대조용 쥐 모두 우리에 넣고 물과 음식을 무제한 사용하여 동일방법으로 먹였다.
당뇨병 걸린 12마리의 쥐를 4그룹으로 나누었다;
A그룹-대조용 당뇨병 걸린 쥐:
B그룹-저분자량 헤파린으로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐:
C그룹-저분자량 데르마탄 설페이트로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐:
D그룹-염기성 매개물에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체로 처리시킨 당뇨병 걸린 쥐:
또한 당뇨병에 걸리지 않은 12마리의 쥐를 4그룹으로 나누었다;
E그룹-당뇨병 걸리지 않은 대조용 쥐:
F그룹-저분자량 헤파린으로 처리시킨 당뇨병 걸리지 않은 쥐:
G그룹-저분자량 데르마탄 설페이트로 처리시킨 당뇨병 걸리지 않은 쥐:
H그룹-염기성 매개물에서 화학적으로 수정된 헤파린 유도체로 처리시킨 당뇨병에 걸리지 않은 쥐:
18주동안 B그룹과 F그룹에는 저분자량 헤파린 6mg/kg/die을 생리적 용액 1m******에 용해시켜 피하주사하여 처리시켰고, C그룹과 G그룹에는 저분자량 데르마탄 설페이트 15mg/kg/kie를 같은 방법으로 주안 실시되었다. 어떤 활성원소도 들어있지 않은 생리적 용액을 동시에 A그룹의 당뇨병 걸린 대조용 쥐와 E그룹의 당뇨병 걸리지 않은 대조용 쥐에게 동일한 방법으로 진피 아래에 주사하였다.
처리기간인 18주말에 모든 쥐를 24시간 굶긴후 참수시켜 죽인다. 장을 단편으로 해부하였다. 즉 십이지장과 공장을 분리해낸후 약0℃로 냉각된 크렙스 용액으로 세척한 후 최종적으로 5mm 길이의 조각으로 절개하였다. Di Giulio A.M. et al., Brain Res., 342, 405-8,(1985)에 기술된바 대로 특정면역 혈청을 사용하여 측정되어지는 P물질과 Met-엔케팔린의 측정을 위해 방사 면역 측정법을 수행하는 순간까지 액체질소를 사용해서 상기 조작들을 30℃에서 동결시켰다.
실험동물의 십이지장과 공장에서 ng/mg프로테인으로서 측정된 P물질과 Met-엔케팔린의 수준과 관련된 실험데이타가 다음 표2와 3에 기록되어 있으며 평균(##)±표준오차(s.e)로 표현되었다.
처리시키지 않은 당뇨병 걸린 동물(A그룹)의 십이지장과 공장에 있어서 P물질과 Met-엔케팔린 모두의 수준(ng/mg프로테인으로서)이 건강한 대조용 동물(E그룹)의 해당기관에서 발견되어지는 것보다 아주 낮다는 것을 실험 데이터로부터 분명히 할알 수 있다. P물질과 메트 엔케팔린의 이러한 감소는 글리코스아미노글리칸으로 약리 차료함으로써(B, C 및 D그룹)예방된다. 사실상 B, C 및 D그룹의 데이터는 대조용 E그룹에 비해 어떠한 심한 차이도 나타내지 않는다. 더구나, F, G 및 H그룹으로 얻어진 결과 즉 글리코스아미노글리칸으로 처리시킨 당뇨병 걸리지 않은 동물에서 얻어진 결과는 글리코스아미노글리칸의 투여가 건강한 동물에서 P물질과 Met-엔케팔린 함량을 심하게 변화시키지 않는다는 것을 분명히 보여준다. 이러한 사실은 글리코스아미노글리칸의 약리학적 효과가 신장장애 원인에만 발생하며 건강한 동물에 있어서 P물질과 Met-엔케팔린의 합성에는 아무런 영향을 미치지 않는다는 것을 알려준다.
더구나 당뇨병에 걸린 동물에 있어서 P물질과 Met-엔케팔린에 대해 작용하는 글리코스아미노글리칸의 정상화 효과는 처리시키지 않은 당뇨병에 걸린 쥐의 것과 동일한 혈당증 수준을 유지한다. 그러므로 모든 이들 실험 데이터는 글리코스아미노글리칸이 실험적 당뇨병 신경장애를 억제하는 활성이 있으며 그 사실은 당뇨병 신경장애의 예방 및 치료에 있어서 글리코스아미노글리칸의 사용을 특허청구하는 것의 정당성을 입증해준다.

Claims (5)

  1. 글리코스아미노글리칸은 헤파린의 제약학적으로 수용가능한 헤파린의 염, 화학적 또는 효소적 탈증합화 반응에 의해 얻어진 저분자량 헤파린, 화학적으로 변형된 헤파린 유도체, 화학적 또는 효소적 탈중합 반응에 얻어진 데르마탄 설페이트와 저분자량 데르마탄 설페이트, 으로부터 산택된 것임을 특징으로하는 글리코스아미노글리칸을 주성분으로하는 당뇨병 치료제.
  2. 제1항에 있어서, 제약학적으로 수용가능한 헤파린의 염은 나트륨염, 칼슘염, 칼륨염 및 마그네슘 임을 특징으로하는 글리코스아미노글리칸을 주성분으로하는 당뇨병 치료제.
  3. 제1항에 있어서, 저분자량 헤파린은 온도 40℃-50℃, pH7.5-8에서 큐프릭 아세테이트, 히드로겐 퍼옥사이드 및 아스코브산의 존재하에서 헤파린으로부터 얻어진 평균분자량 3000-600달톤의 올리고삭카라이드 임을 특징으로하는 글리코스아미노글리칸을 주성분으로하는 당뇨병 치료제.
  4. 제1항에 있어서, 화학적으로 변형된 헤파린 유도체는13C-NMR에서 53-94p.p.m으로 새로운 시그널을 나타내고, 약+50°와 약+90°사이의 비선광도(比旋光度)[α]20를 갖는 물질로서, a)35℃-60℃사이의 온도에서 헤파린 물질로 염기로 처리된 후에 이온교환수지를 통한 투수 도는 다이알 리시스를 행하고 약중성인 pH에서 침전시킴으로서 얻어지거나, b)황함량이 6%-9%이고 황산염/카르복실비가 1.20-1.70이며, 유리아미노기 함량이 0/4%-2.1%인 수용액 중에서 102-92p.p.m사이의 영역에서13C-NMR스펙트럼을 가지며, 약101.3p.p.m에서 특성 시그날을 나타내고 546nm에서 비선광도(比旋光度)가 +15°와 약+40°사이인 헤파린 유도체로서 산업용 정제 또는 저분자량 헤파린을 함유하는 수용액을 0.5-24시간동안 75℃ 내지 빈응 혼합물의 끓는점 사이의 온도에서 알칼리 또는 알칼리 토금속 염기의 0.01N-1N용액과 반응시킨 다음 반응혼합물로부터 분리시킨 헤파린 유조체임을 특징으로하는 글리코스아미노글리칸을 주성분으로하는 당뇨병 치료제.
  5. 제1항에 있어서, 저분자량 데르마탄 설페이트는 3500-8000달톤 사이의 분자량을 가지며, 20℃-70℃사이의 온도에서. 촉매로서 Cu++,Fe++,CR+++,Cr2O7의 존재하의 수용액 중에서 헤파린과 천연 다당류를 탈중합시켜 얻어지는 것이며, 이때 반응은 과산화물 또는 과산에 의해 개시되는 것을 특징으로하는 글리코스아미노글리칸을 주성분으로하는 당뇨병 치료제.
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Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1264530B (it) * 1992-07-31 1996-10-02 Crinos Industria Farmaco Impiego dei polisaccaridi nelle neuropatie atrofico degenerative
US5696100A (en) * 1992-12-22 1997-12-09 Glycomed Incorporated Method for controlling O-desulfation of heparin and compositions produced thereby
IT1270846B (it) * 1993-05-10 1997-05-13 Alfa Wassermann Spa Uso di sulodexide e delle specialita' medicinali che lo contengono nel trattamento della nefropatia diabetica.
IT1271685B (it) * 1994-08-03 1997-06-04 Crinos Industria Farmaco Impiego dei polidesossiribonucleotidi nelle neuropati diabetiche
IT1274351B (it) * 1994-10-06 1997-07-17 Alfa Wassermann Spa Uso di alcuni glicosaminoglicani nella dialisi peritoneale.
US5744457A (en) * 1995-03-31 1998-04-28 Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis
US5763427A (en) * 1995-03-31 1998-06-09 Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis
US6001820A (en) * 1995-03-31 1999-12-14 Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis
US5767269A (en) * 1996-10-01 1998-06-16 Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. Processes for the preparation of low-affinity, low molecular weight heparins useful as antithrombotics
DE29900874U1 (de) 1999-01-20 1999-07-22 Knoll AG, 67061 Ludwigshafen Organprotektive Lösungen
US6083933A (en) * 1999-04-19 2000-07-04 Stellar International Inc. Treatment of cystitis-like symptoms with chondroitin sulfate following administration of a challenge solution
US6562836B1 (en) * 1999-05-24 2003-05-13 Queen's University Of Kingston Methods and compounds for inhibiting amyloid deposits
CA2377734A1 (en) * 1999-06-30 2001-01-11 Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. Heparin compositions that inhibit clot associated coagulation factors
CA2377382A1 (en) * 1999-07-01 2001-01-11 Scios, Inc. Prevention and treatment of amyloid-associated disorders
US7259152B2 (en) 2000-06-07 2007-08-21 Alfa Wasserman, Inc. Methods and compositions using sulodexide for the treatment of diabetic nephropathy
BR0113886A (pt) * 2000-09-08 2003-07-15 Hamilton Civic Hospitals Res Composição, composição farmacêutica, tratamento de combinação para prevenir ou inibir a geração ou atividade de trombina num paciente, método para inibir ou prevenir a geração ou atividade de trombina num paciente, uso de uma composição ou tratamento de combinação, uso de uma composição, uso e kit
MXPA03011514A (es) * 2001-06-12 2004-10-28 Keryx Biopharmaceuticals Inc Metodos que utilizan glucosaminoglicanos para tratamiento de nefropatia.
US20040161476A1 (en) 2003-02-19 2004-08-19 Hahn Sungtack Samuel Cystitis treatment with high dose chondroitin sulfate
WO2004084932A2 (en) * 2003-03-28 2004-10-07 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of clusterin for the treatment and/or prevention of peripheral neurological diseases
AU2005292202A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-13 Keryx Biopharmaceuticals, Inc. Methods using glycosaminoglycans for the treatment of kidney disease
ITBO20050123A1 (it) 2005-03-07 2005-06-06 Alfa Wassermann Spa Formulazioni farmaceutiche gastroresistenti contenenti rifaximina
DE102005017799A1 (de) * 2005-04-18 2006-10-19 Abbott Gmbh & Co. Kg Verwendung von Heparin und Heparinderivaten zur Modulation des Neuritenwachstum-kontrollierenden Nogo-Rezeptors
JP5622346B2 (ja) * 2006-05-19 2014-11-12 愛知県 神経細胞の細胞死抑制剤等
ITMI20061692A1 (it) 2006-09-05 2008-03-06 Alfa Wassermann Spa Uso di polioli per ottenere forme polimorfe stabili di rifaximina
GB0714500D0 (en) * 2007-07-25 2007-09-05 Hunter Fleming Ltd composition and treatment
CN101632686A (zh) * 2008-04-04 2010-01-27 马斯特里赫特大学 糖胺聚糖用于修复糖萼的用途
ES2340902B1 (es) * 2008-07-01 2011-05-03 Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. Composicion farmaceutica con glicosaminoglicanos y su uso en tratamiento de ulceras cronicas.
JP2013522172A (ja) * 2010-03-12 2013-06-13 ジ オーストラリアン ナショナル ユニバーシティ ヘパラン硫酸補充療法
IT1401253B1 (it) * 2010-04-23 2013-07-18 Uni Degli Studi Carlo Bo Urbino Uso del sulodexide per la riduzione delle metalloproteinasi di matrice.

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990000058A1 (de) * 1988-06-27 1990-01-11 Roland Reiner Glykosaminoglykan zur behandlung von diabetischer mikroangiopathie

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US5236910A (en) 1993-08-17
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