KR970000527B1 - 프라디미신 유도체 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

프라디미신 유도체

본 발명은 반합성 항균제 화합물, 그 치료용도 및 이들을 함유한 약제 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 말하자면, 이들 향균제 화합물은 프라디미신(pradimicin) 유도체이다.

BU-3608 항생제로 알려진 프라디미신은 악티노마두라 히비스카(Actinomadura hibisca)sp. nov.에 의하여 생성된 항균제 항생제의 그룹이다. 악티노마두라 히비스카 또는 그의 변이체 또는 돌연변이체의 발효즙으로부터 분리된 다양한 프라디미신, 및 그들의 구조는 다음에 제시된다 :

(a) 프라디미신 A : R¹=CH₃; R²CH₃; R³=β-D-크실로실 (b) 프라디미신 B : R¹=CH₃; R²=CH₃; R³=H (c) 프라디미신 C : R¹=CH₃; R²=H; R³=β-D-크실로실 (d) 프라디미신 D : R¹=H; R²=CH₃; R³=β-D-크실로실 (e) 프라디미신 E : R¹=H; R²=H; R³=β-D-크실로실 (f)프라디미신 FA-1: R¹=CH₂OH; R²=CH₃; R³=β-D-크실로실 (g) 프라디미신 FA-2: R¹=CH₂OH; R²=H; R³=β-D-크실로실.

프라디미신 A는 뉴욕주 뉴욕시에서 1987년 10월 4~7일에 항균제 및 화학요법에 대한 제27차 인터사이언스(interscience) 회의록의 추록 제984호에 BMY-28567로서 보고되어 있다. 프라디미신 A, B, 및 C는 유럽특허 출원 제277,621호에 기재되어 있다. 프라디미신 D, E 및 그들의 각 데스크실로실 유도체는 1988년 6월 7일에 출원된 본출원인의 계류중인 출원 미국 일련번호 제203,776호에 기재되어 있다.

프라디미신 A, B, C, D, E 및 그들의 데스크실로실 유도체의 N-알킬화된 동족체는 1988년 7월 19일에 출원된 본출원인의 계류중인 출원 미국 일련번호 제221,144호에 기재되어 있다.

프라디미신 FA-1, FA-2, 그들의 각 데스크실로실 유도체, 및 그들의 N-알킬화된 동족체는 1988년 11월 10일에 출원된 본 출원인의 계류중인 출원 미국 일련번호 제269,821호에 기재되어 있다.

베나노미신 A와 B로 알려진 두가지 화합물은 J. Antibiot., 1988, 41 (6) : 807-811, 및 ibid, 41 (8) : 1019-1028에 보고되었다. 베나노미신 B는 프라디미신 C와 동일한 듯하며, 반면에 베나노미신 A는 베나노미신 B의 당 아미노기에 대신하여 수산기를 가지고 있다.

본 발명은 다음 일반식(II)의 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염을 제공한다.

상기 식에서 R¹은 H, 메틸, 및 히드록시메틸 중에서 선택되며, R¹이 메틸 또는 히드록시메틸일 때, 그 결과 얻어진 아미노산은 D-형태를 가지며; R²는 H 또는 β-D-크실로실이며; R³는 H 또는 메틸이며; 그리고 R⁴는(C_2-5)알켄일; (C_2-5)알킨일; 알킬과 알켄일 두가지 모두에 대한 치환체가 카르복시, (C_1-5)알콕시카르보닐, 카르바밀, (C_1-5)알킬 카르바밀, 디(C_1-5)알킬카르바밀, 및 술폰일 중에서 선택된 기인 치환(C_1-5)알킬; 치환(C_2-5)알켄일; 아미노, (C_1-5)알킬아미노, 및 디(C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로서 치환된(C_1-5)알칸오일; L-글루타밀; 포르밀; 벤질; 및 p-톨린술폰일카르바밀 중에서 선택된다.

본 발명의 또한 일예는 이러한 치료가 필요한 포유류 숙주에 일반식(Ⅱ)의 화합물의 항균 유효투여량을 투여하는 것으로 이루어진 포유류 숙주에서 진균감염의 치료방법을 제공한다.

본 발명의 또다른 일예는 일반식(II)의 화합물과 약리적으로 허용되는 담체로 이루어진 약제 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 모체 화합물 프라디미신 A와 B보다 더 높은 수용성을 나타낸다.

본 발명은 보다 바람직한 유형으로서 R⁴가 아미노, (C_1-5)알킬아미노, 및 디(C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로서 치환된(C_1-5)알칸오일인 일반식(II)의 화합물을 제공한다. 보다 바람직한 유형은 R⁴가 아미노, (C_1-5)알킬아미노, 및 디(C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로서 치환된(C_2-3)알칸오일인 일반식(II)의 화합물을 제공하며, 아미노 기가 가장 바람직한 치환체이다.

또한 바람직한 유형은 R⁴가 카르복시, 카르바밀,(C_1-5)알콕시카르보닐, 및 술폰일 중에서 선택된 기로 치환된 (C_1-5)알킬; (C_3-5)알켄일; (C_3-5)알킨일; 또는 카르복시 및 (C_1-5)알콕시카르보닐 중에서 선택된 기로 치환된 (C_3-5)알켄일인 일반식(II)의 화합물을 제공한다.

명세서 및 청구범위에 사용된 바와 같이, 달리 지시되지 않는다면, 알킬은 직쇄 및 측쇄 탄소를 포함한다. 약리적으로 허용되는 염은 분자내 염; 유기 또는 무기 염기 염, 이를테면 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 및 트리알킬 암모늄 염; 무기산 또는 유기산으로서 산부가염 예를들어, 염화수소산염, 황산염, 황산수소염, 인산염, 포름산염, 및 초산염일 수 있다. 아미노 치환(C_1-5)알칸오일은 카르바밀 라디칼을 포함하며; 유사하게도, 모노-또는 디알킬아미노 치환(C_1-5)알칸오일은 동일하게 치환된 카르바밀 라디칼을 포함한다. 프라디미신은 일군의 천연발생 프라디미신, 그들의 데스크실로실 유도체, 및 그들의 각 염을 뜻한다.

프라디미신 출발물질 및 그 제조방법은 본 출원인의 계류중인 출원, 1987년 11월 2일에 출원된 미국 일련번호 제115,273호, 1988년 6월 7일에 출원된 미국 일련번호 제203,776호, 1988년 7월 19일에 출원된 미국 일련번호 제221,144호, 및 1988년 10월 10일에 출원된 미국 일련번호 제269,821호에 기재되어 있다. 이들 출원에 포함된 공개 내용은 참고로서 본 발명에 속한다. 프라디미신은 구체적인 반응조건에 따라 유리염기, 산 또는 염기 부가염, 카르복실기의 쯔비터이온, 또는 에스테르로서 사용될 수 있다. 염기성 염은 예를들어 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 및 트리알킬암모늄 염일 수 있으며; 산부가염은 예를들어, 염화수소산염, 황산염, 질산염 등일 수 있다. 카르복실산 에스테르는 메틸, 에틸 및 이소프로필과 같은 저급 알킬 에스터르; 페닐, 벤질, 또는 시클로알킬 예를들어 시클로핵실 에스테르일 수 있다.

본 발명의 화합물은 본 기술에 잘 알려진 방법에 의하여 제조될 수 있다. 따라서, 치환된 알킬 또는 알켄일기는 직접 친핵성 치환 또는 당 아미노기를 포함한 환원 알킬화에 의하여 도일될 수 있으며; N-아실유도체는 당아미노기를 필요로한 산 또는 그의 아실화 대등물과 반응시켜 제조될 수 있다. 상기에 언급된 각 반응은 아래에 상세히 논의될 것이다.

프라디미신의 N-(치환알킬)유도체는 프라디미신을 일반적으로 L-A(L은 이탈기, 이를테면, 클로라이드, 브로마이드, 또는 요오다이드이며, A는 치환체가 일반식(Ⅱ)에서 이미 정의된 치환(C_1-5)알킬 또는 (C_2-5)알켄일임)로 표시된 화합물과 반응시켜 제조될 수 있다. L-A의 일예로서 요오드화 초산, 요오드화 프로피온산, 요오드아세트아미드, 에틸 요오드아세테이트, 및 메틸 브로모크로토네이트를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 반응은 염화 메틸렌과 같은 불활성 유기용매, 또는 물, 또는 그들 혼합물에서 수행된다. 용매의 선택은 반응물의 특성에 따른다. 반응온도는 중요하지 않으며 유용한 시간내에 생성물 형성을 용이하게 하는 어떠한 온도일 수 있다. 온도는 거의 상온에서 반응액의 환류온도의 범위일 수 있으며, 반응시간은 반응물과 반응환경에 따라 약 30분~약 15시간일 수 있다. 알킬화 반응 수행시, 프라디미신의 히드록실 및 페놀기를 차단하는 것이 바람직하다. 특히 한정되지 않지만, 차단기는 N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드(BSA)를 사용하여 도입될 수 있는 트리메틸실릴(TMS)기인 것이 바람직하다. 사용된 BSA의 몰량은 차단될 OH의 수와 적어도 동일하지만 바람직하게도 그 수에 약 1.2~약 3배의 과량으로 사용된다. 알킬화 반응 완료시, TMS기는 산가수분해 또는 테트라부틸암모늄 플루오라이드와 같은 시약을 사용하여 제거될 수 있다.

다른 방도로서, 프라디미신의 N-(치환알킬) 유도체는 처음에 프라디미신 출발물질을 알데이드 또는 케톤 작용성이 있는 적합한 화합물과 축합시키는 것으로 이루어진 환원 알킬화 이어서 환원제로서 이와 같이 형성된 생성물의 처리에 의하여 제조될 수 있다. 알데히드 또는 케톤은 예를 들어 글리옥실산, 피루브산, 아세토초산. 및 에틸 아세트아세테이트일 수 있다. 환원제는 예를들어 나트륨 보로히드라이드, 나트륨 시아노보로히드라이드, 및 리튬 알루미늄 히드라이드와 같은 수소화 금속일 수 있으며; 나트륨 시아노 보로히드라이드가 바람직한 시약이다. 축합 반응은 아세토니트릴, 저급 알칸올, 디메틸술폭사이드, 또는 그 혼합물과 같은 불활성 유기용매, 또는 그 수용액에서 수행된다. 반응온도는 구체적으로 제한되지 않으며 상온에서 반응 혼합물의 환류온도일 수 있다. 반응시간은 수분 내지 수시간의 범위일 수 있다. 그후 형성된 축합 생성물은 동일 반응관에서 환원될 수 있다. 환원반응은 필요로 한 생성물이 얻어질 때까지 상온에서 수행될 수 있다. 경험상, 상온에서 글리옥실산으로서 그리고 환원제로서 나트륨 시아노보로히드라이드를 사용한 프라디미신 B의 환원 알킬화반응은 수시간내에 완료된다. 물론 최적 반응조건은 사용된 구체적 반응물의 특성 및 반응성에 따를 것이다.

본 발명의 N-아실화 프라디미신은 프라디미신을 아미노산, N-알킬 또는 N,N-디알킬아미노산, 또는 그의 아실화 대등물과 반응시켜 제조될 수 있다. 아미노산은 예를들어 글리신, β-아미노알라닌. N,N-디메틸글리신등일 수 있다. 산으로부터 유도된 아실화 대등물은 예를들어 산클로라이드와 같은 산할라이드, N-히드록시숙신이미드 또는 1-히드록시벤조트리아졸로부터 유도된 활성 에스테르, 및 대칭 또는 혼합 무수물일 수 있다. 카르복실산이 아실화 종으로 사용될 때, 축합제, 예를들어 디시클로헥실카르보디이미드(DOC)와 같은 카르보디이미드와 결합하여 사용하는 것이 바람직하다. 산반응물의 아미노기가 보호되는 것이 바람직하다. 아미노기에 대한 보호기는 구체적으로 한정되지 않으며 펩티드 합성기술에 통상적으로 사용된 것일 수 있다. 보호기의 선택, 그외에 보호 및 탈보호 방법은 예를들어 Bodanszky외 그의 공동저자의 Peptide Synthesis, 2판 제4장에 논의되어 있다. 예를들어 트리플루오로 초산을 사용하여 산성 조건하에 제거될 수 있는 t-부톡시 카르보닐(t-BOC)기가 본 발명에 대하여 만족스럽다는 것이 발견된 바 있다. 아실화 반응은 불활성 유기용매, 이를테면 디메틸포롬아미드, 염화메틸렌, 및 디클로로에탄에서 수행될 수 있다. 반응 혼합물은 산이 부산물로 예상될 때 임의로 산 수용체를 포함할 수 있으며; 적합한 산 수용체는 예를들어 피리딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 등과 같은 삼차아민염기, 또는 나트륨 및 칼륨탄산염과 같은 무기염기이다. 반응온도는 상온에서 반응 혼합물의 환륜온도까지 일 수 있으며, 반응은 약 30분 내지 수일일 수 있고; 이들 변수는 중요하지 않으며 반응물의 특성에 따라 조절되어 생성물 수율을 극대화한다. 프라디미신 출발물질의 히드록실 및 페놀기는 비보호되거나 차단될 수 있다. OH기에 대한 바람직한 차단기는 이전에 논의된 바와 같이 TMS이다. 비보호 프라디미신이 사용될 때, OH기는 또한 아실화되어 에스테르를 형성할 수 있다. 이와 같이 형성된 에스테르는 새롭게 형성된 아미드 연결을 분해함이 없이 염기성 조건하에 가수분해될 수 있다.

프라디미신의 N-카르바밀 유도체는 프라디미신과 적합한 이소시아네이트를 반응시켜 얻어질 수 있다. 반응은 불활성 유기용매, 이를테면 아세토니트릴, 및 상온에서 수행된다. 반응시간은 1시간 내지 수일일 수 있다.

이전에 언급된 바와같이, 프라디미신은 유리염기, 염기성염, 산부가염. 또는 카르복실산의 에스테르로서 사용될 수 있다. 에스테르가 사용된다면, 에스테르기는 알칼리 가수분해에 의하여 제거되어 최종 생성물을 발생시킬 수 있다.

본 발명의 화합물 합성은 상기에 요약된 방법 및 시약에 한정되지 않으며, 프라디미신의 당부분에 아미노기를 알킬화 또는 아실화할 수 잇는 다른 방법을 포함할 수 있다는 것이 이해된다. 물론, 반응조건은 출발물질의 선택에 따라 변화하지만 불편한 실험없이 숙련 기술자에 의하여 쉽게 확인될 수 있다.

생물학적 활성

본 발명의 대표 화합물에 대한 시험관내 항진균 활성을 연속 한천 희석법에 의하여 서로 다른 진균에 대하여 측정하였다. 접종 크기를 10⁶세포/㎖로 조절한 다음, 진균 현탁액 부피 약 0.003㎖를 다접종기로서 항생제 함유 한 천판 표면에 접촉시켰다. 항온유지후, 진균성장의 실질적 억제를 야기시키는 항생제의 가장 낮은 농도를 최소 억제 농도(MIC)로서 측정하였다. 그 결과를 표 1과 1a에 요약한다.

( ) : 부분억제; ND : 측정안됨

*배지 : 사보라우드 덱스트로스 한천(pH 7.0); 항온조건; 28 C 40시간.

**A 실시예 8화합물과 프라디미신 A의 1 : 3혼합물.

ND=측정안됨

*배지 : YM 한천(pH 7.0, Difco); 항온조건; 30 C 2일(효모) 또는 4일(필라멘토우스 진균).

**사용된 미생물 균주 : 1, M. gypseum A22810; 2, T. rubrum A24195; 3, T. mentagrophytes A22838; 4, M. gypseum A26835; 5, M. canis A26834; 6, M. canis A22494.

여러가지 화합물을 또한 칸디다 알비칸스(Candida albicans) A95040 정맥내 감염 쥐 모델에서 평가하였다. 20~40g 무게의 수컷 ICR 쥐를 정맥내로 감염시키는데 사용된 진균(10 세포/쥐)의 평균 사멸투여량 약 10배로 시험 미생물을 식염수에 현탁시켰다. 각 투여수준에서 다섯 마리 쥐군에 시험 화합물을 정맥내로 또는 근육내로 제공하였다. 진균 공격후 20 또는 21일에 기록된 생존율로부터 50% 보호 투여량(PD50)을 계산하였다. 억제동물은 7~15일에 치사되었다. 생체내 시험결과를 표 2에 요약한다.

수용성

본 발명의 대표 화합물에 대한 수용성을 다음의 프로토콜의 한가지를 이용하여 측정하였다 : I. 시료(1.0㎎ 또는 2.5㎎)를 둘베코 인산염 완층 식염수(PBS, CaCl와 MgCl. 6HO없이) 250μL에 현탁시키고, 상온에서 10분 음파 파쇄시킨다음 10분간 원심분리 하였다. 상징액(2μL)을 실험단계에서 각 화합물에 특정된 조건을 이용한 HPLC에 의하여 분석하였다. 가시적으로 가용성일 때, 4㎎/mL(또는 사용된 시료 2.5㎎에 대하여10㎎/㎖)로서 용해도를 측정하였다. 가용성이 없을 때, 추가량의 PBS(xμL)를 첨가하고, 음파 파쇄시킨다음, 원심분리 하였다. 가시적으로 가용성일 때, 용액(2μL)을 HPLC로 주입하고 시료의 공지농도에 대하여 피크면적을 사용하였다. 이전의 상징액에서 얻어진 피크면적을 비교하여 용해도를 다음과 같이 계산하였다 :

상기 등식에서 A는 250μL PBS내 시료 1.0㎎의 상징액에 대한 피크면적이며 Ao는 xμL, PBS내 시료 1.0㎎ 의 완성액에 대한 피크면적이다.

II. 시료(3~3.5㎎)를 BPS(-) 또는 PBS(+) 1㎖에 현탁시키고, 10분간 30℃에서 음파 파쇄시킨다음, 상온에서 2시간 방치시켰다. 이와 같이 얻어진 용액 또는 현탁액을 12,000rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 상징액(pH 6.7~7.2)을 0.01N NaOH(pH 약 11.5)로서 희석시키고(5x 또는 50x) 500nm에서 그 UV흡수를 측정하였다. 용해도를 기준치에 참고하여 흡수계수값에 의하여 시험하였다(기준치 : 순수프라디미신알칼리용액내 500nm에서). 쯔비터이온 형태 시료를 용해도 시험에 대하여 그래도 사용하였다. 염화수소산 염 시료(3㎎)를 증류수 3㎖에 용해시키고 0.01N NaOH로 중성화한 다음, 용액을 친액화하여 시험시료를 제공하였다. 프로토콜 II에 사용된 PBS(-) 및 PBS(+) 용액을 다음과 같이 제조하였다.

둘베코 인산염 완충 식염수(BPS) 용액을 사용하였다. PBS(-) 용액의 제조 : PBS(-) 한 정제(Flow Laboratories, Cat. No. 28-103-05)를 증류수 100㎖에 용해시키고, 그 용액을 115℃에서 10분간 오오토클레이브 시켰다. 이 용액은 KCl 0.2g/L, KH₂PO₄0.2g/L, NaCl 8g/L, 및 Na₂HPO₄1.15g/L를 함유한다. PBS(+)용액의 제조:PBS(-)한 정제를 증류수 80㎖에 용해시키고; CaCl₂10㎎을 증류수 10㎖에 용해시키며; MgCl₂.6H₂O 10㎎을 증류수 10㎖에 용해시켰다. 이들 용액을 상기에 기재된 바와 같이 별개로 오오토클레이브시킨 다음, 냉각시 혼합하였다. 대표 화합물의 수용성은 표 3에 제시된다.

*(-) : PBS(-); (+) : PBS(+).

**pH 9에서 증류수에 매우 가용성이며 깨끗한 용액을 제공하지만 pH 7.0에서 분해되어 프라디미신C를 발생시킴.

본 발명의 화합물은 다양한 진균에 대한 활성을 소유하는 것으로 알려진 바 있다. 또한, 그들은 모체 프라디미신 보다 더 수용성이다.

동물 및 인체의 진균 감염치료에 대하여, 본 발명의 항생제는 어떠한 수용된 투여경로에 의하여 항진균 유효량으로 제공될 수 있으며; 이들은 정맥내, 근육내, 경구, 비강내, 및 표면감염에 대하여, 국부투여를 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 비경구 투여용 제제는 무균 수용액 또는 비수용액, 현탄액, 또는 에멀젼을 포함한다. 그들은 또한 무균수, 생리적 식염수, 또는 여러가지 다른 바로 사용되는 무균 주사배지에 용해될 수 잇는 무균 고체 조성물의 형태로 제조될 수 잇다. 경구 배합물은 정제, 젤라틴 캡슐, 분제, 로진, 시럽등의 형태일 수 있다. 국부투여에 대하여, 화합물은 로션, 단연고, 겔, 크림, 연고, 틴크제 등에 혼입될 수 있다. 단위 투여형태는 약제 배합기술에 숙련된 자에게 일반적으로 알려진 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 항생제에 감수성이 있는 진균에 감염된 수주를 치료할 때, 사용된 실제 바람직한 투여경로 및 투여량은 진균 감염치료에 숙련된 참석임상의의 인식에 따르며 원인 미생물, 항생제에 대한 그의 과민성, 감염의 심각성 및 부위, 그리고 환자의 특성, 이를 테면 연령, 체중, 분비율, 공동요법, 및 일반적 신체조건에 따라 변할 것이라는 것이 확인될 것이다.

다음의 실시예는 본 명세서에 첨부된 청구범위에 의하여 정의된 그 범위를 한정함이 없이 본 발명을 예시한다.

실시예 1

N-(카르복시메틸)프라디미신 A(II, R =CH, R =β-D-크실로실, R =CH, R =-CHCOH)의 제조 요오도초산(75㎎, 0.4mmo1)을 프라디미신 A HC1(50㎎, 0.057mmo1) 및 염화메틸렌(1㎖)내 BSA(0.25㎖, 1mmo1)의 혼합물에 첨가하고 그 혼합물을 밤새 환류시켰다. 그후 메탄올(5㎖)과 1N HC1(1㎖)을 이에 첨가하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고, 유상 잔류물을 물 그후 30% 사에토니트릴-물로 용출시키면서 18실리카 겔 컬럼(prePAK cartridge (Waters), 20㎜×250㎜)에 크로마토그래피 하였다. 필요로 한 생성물을 함유한 분율을 결합하고, 농축시킨 다음, 냉동 건조시켜 비정질 분말로서 표제 생성물(43㎎, 84%)을 제공하였다.

IRν(KBr)cm : 1725(Weak), 1628-1607, 1388, 1334, 1296, 1257, 1050.

UVλ(1/100N NaOH) nm(ε) : 232(32400), 318(15000), 497(14400).

MS(SIMS) : m/z 899(M+H) .

H NMR(DMSO-d)δ : 1.18(3H, d, J=6.4HZ, 5'-CH), 1.32(3H, d, J=7.3Hz, 알라닐-CH), 2.28(3H, s, 3-ch), 2.61(3H, s, N-CH), 3.69(1H, dd, J=5.3 11Hz, 5-H), 3.95(3H, s, OCH), 4.39(1H, qui, J=7.3Hz, 알라닐-CH), 4.43(1H, d, J=8Hz, 1-H), 4.43(1H, d, J=12Hz, 5-H), 4.56(1H, br-d, J=12Hz, 6-H), 4.60(1H, d, J=8Hz, 1'-H), 4.99(2H, br)*, 5.59(1H, br)*, 6.02(1H, br)*, 6.93(1H, d, J=2Hz, 10-H), 7.05(1H, s, 4-H), 7.28(1H, d, J=2Hz, 12-H), 8.02(1H, s, 7-H), 8.58(1H, d, J=7Hz, CONH)*, 12.0(1H, br)*, 12.90(1H, s)*, 13.80(1H, br)*.

* DO의 첨가에 의하여 사라짐.

실시예 2

N-(카르바모일메틸)프라디미신 A(II, R =CH, R =β-D-크실로실, R =CH, R =-CHCONH)의 제조

요오드아세트아미드 (150㎎, 0.81mmol)를 프라디미신 A HC1(100㎎, 0.11mmol)과 염화메틸렌(4㎖)내 BSA(0.56㎖, 2.2mmol)의 혼합물에 첨가하고 그 혼합물을 밤새 환류시켰다. 그후 반응 혼합물에 추가의 BSA(0.56㎖)와 요오드아세트아미드(150㎎)를 첨가하고 그 혼합물을 추가의 5시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 IN HCL(3㎖)과 메탄올(10㎖)로 처리한 다음 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 물 그 후 30% 아세토니트릴-물로 용출하면서 C실리카 겔 컬럼(2㎜×200㎜)에 크로마토그래피 하였다. 필요로 한 생성물을 함유한 분율을 결합하고, 농축시킨다음, 냉동 건조시켜 짙은 적색 비정질 분말로서 표제 화합물(81㎎, 수율 82%)을 제공하였다. M.P. 225℃(분해)

IRν(KBr)cm : 1607, 1296, 1063.

UVλ(1/100N NaOH) nm(ε) : 319(15200), 497(14600).

MS(SIMS) : m/z 899 (M+H)+.

H NMR(DMSO-d)δ : 1.20(3H, d, J=6 Hz, 5'-CH), 1.32(3H, d, J=7.3Hz, 알라닐-CH), 2.29(3H, s, 3-CH), 2.56(3H, s, N-CH), 3.71(1H, dd, J=5 12 Hz, 5-H), 3.95(3H, s, OCH), 4.38(1H, qui, J=67Hz, 알라닐-CH), 4.45(1H, d, J=8Hz, 1-H), 4.46(1H, d, J=12Hz, 5-H), 4.54(1H, br-d, J=12Hz, 6-H), 4.61(1H, d, J=8Hz, 1'-H), 5.20(2H, br)*, 5.63(1H, br)*, 6.05(1H, br)*, 6.93(1H, d, J=2Hz, 10-H), 7.05(1H, s, 4-H), 7.20(2H, br, CONH)*, 7.29(1H, d, J=2 Hz, 12-H), 8.05(1H, s, 7-H), 8.58(1H, d, J=7 Hz, CONH)*, 12.55(1H, br)*, 12.90(1H, s)*, 13.80(1H, br)*.

* DO의 첨가에 의하여 사라짐.

실시예 3

N-(에톡시카르보닐메틸)프라디미신 A(Ⅱ, R =CH, R =β-D-크실로실, R =CH, R =-CHCOCH)의 제조

프라디미신 A. HC1(50㎎, 0.057mmol), BSA(0.28㎖, 1.1mmol), 및 에틸 요오드아세테이트(0.20㎖,1.7mmo1)를 사용하여 실시예 1의 방법을 반복시켜 짙은 적색 비정질 분말로서 표제 화합물(39㎎, 수율 74%)을 제공하였다. M.P. 225℃(분해).

IRν(KBr)cm : 1737, 1607, 1296, 1066.

UVλ(1/100N NaOH) nm(ε) : 320(15600), 498(15100).

MS(SIMS) : m/z 927(M+H) .

H NMR(DMSO-d)δ : 1.17(3H, d, J=7Hz, 5'-CH), 1.18(3H, t, J=7Hz, CHCH), 1.33(3H, d, J=7 Hz, 알라닐-CH), 2.28(3H, s, 3-CH), 2.61(3H, s, N-CH), 3.95(3H, s, OCH), 4.06(2H, m, CHCH), 4.39(1H, qui, J=7 Hz, 알라닐-CH), 4.52(1H, br-d, J=12 Hz, 6-H), 4.59(1H, d, J=8Hz, 1'-H), 5.00(3H, br)*, 5.58(1H, br)*, 5.99(1H, br)*, 6.91(1H, d, J=2 Hz, 10-H), 7.04(1H, s, 4-H), 7.28(1H, d, J=2Hz, 12-H), 8.03(1H, s, 7-H), 8.59(1H, d, J=7Hz, CONH)*, 12.55(1H, br)*, 12.92(1H, s)*, 13.90(1H, br)*.

* DO의 첨가에 의하여 사라짐.

실시예 4

N-카르복시메틸 프라디미신 B(Ⅱ,R =CH, R =H, R =CH, R =-CHCOH)의 제조

프라디미신 B(1.00g, 1.41mmo1)와 글리옥실산 일 수화물(2.13g, 23.1mmo1)의 수용액(40㎖)에 1N NaOH(20㎖, 20mmo1)을 첨가하여 용해시켰다. 이 용액을 아세토니트릴(40㎖)로 회석시킨다음 상온에서 10분간 교반하였다. 이에 나트륨 시아노보로히드라이드(0.353g, 5.6mmo1)를 첨가하고 상온에서 1시간 교반하였다. 아세토니트릴을 진공하에 제거시키고, 그 혼합물을 물(20㎖)로 회석시켜 1N HC1(20㎖) 첨가에 의하여 pH3으로 산성화하였다. 형성된 침전물을 원심분리시키고, 물(2×20㎖)로 세척하고, 소량의 물(2㎖)에 현탁시킨다음 친액화하여 적색분말로서 원 표제 화합물 960㎎을 얻었다. 이것을 음파 파쇄에 의하여 1N NaOH(1.8㎖) 함유물(5㎖)에 용해시킨다음 물로 용출하면서 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Lichroprep RP-18, 40-63㎛, EM, Science)에 의하여 정제시켰다. 해당분율을 결합하고, 농축시킨다음, 1N HC1의 처가에 의하여 pH3으로 산성화하였다. 형성된 침전물을 원심분리에 의하여 수집하여 표제 화합물 139㎎을 얻었다. 오염된 분율의 반복 컬럼 정제는 표제 화합물 총 669㎎(0.833mmo1, 수율 59.1%)을 제공하였다.

Rt 1.90분(순도 93%; HPLC, 칼럼 : Microsorb Short One C, 용출액 : 50% 완충액(0.15% KHPO, pH3.5)/아세토니트릴-HO(4 : 1), 유속 : 1.2㎖/분).

IR(KBr)ν: 3420, 1735, 1630㎝ .

UV(MeOH: HO; 1: 1)λ: 234(ε27,000), 290(ε22,300),466nm(ε9,640).

MS(FAB) : m/z 767 (M+H) ; HRMS:CHNO(M+H) 에 대한 계산치 767.2300, 실측치 767.2283.

H NMR(300 MHz, DMSO-d)δ(ppm) : 1.17(3H, d, J=6.3Hz, 5'-Me), 1.31(3H, d, J=7.3Hz, 17-Me), 2.27(3H, s, 3-Me), 2.67(3H, s, N-Me), 3.2-4.0(6H, m, 4'-H, 2'-H, 3'-H, 5'-H, CH), 3.93(3H, s, 11-OMe), 4.3-4.6(4H, m, 17-H, 5-H, 6-H, 1'-H), 5.54(br s, DO로 교환), 6.14(s, DO로 교환), 6.93(1H, s, 10-H), 7.06(1H, s, 4-H), 7.27(1H, d, J=2.3Hz, 12-H), 8.05(1H, s, 7H), 8.55(1H, d, J=2.7Hz, CONH, DO로 교환), 12.85(1H, s, DO로 교환).

C-NMR(300 MHz, DMSO-d6/CDC1) δ (ppm) : 17.1, 17.3(5'-Me, 17-ME), 19.4(3-Me), 42.6(N-Me), 47.8(C-17), 56.5(11-OMe), 57.8(NCH), 65.3(C-5'), 71.4(C-2'), 71.8(C-6), 72.7, 73.6(C-4', C-3'), 8.08(C-5), 105.3(C-1'), 106.7(C-10), 107.7(C-12), 110.1(C-8a), 114.1(C-7), 115.8(C-4), 126.4(C-2), 127.3(C-), 131.5(C-14a), 134.6(C-7a), 137.3(C-4a), 138.5(C-12a), 148.0(C-6a), 151.6(C-), 157.8(C-1), 164.8(C-9), 166.0(C-11), 167.2(C-), 173.3(C-), 174.2(C-), 185.2(C-13), 186-9(C-8).

실시예 5

N-(카르바모일메틸) 프라디미신 B(II, R =CH, R =H, R =CH, R =-CHCONH)의 제조

1,2-디클로로에탄(5㎖)내 프라디미신 B(100㎎, 0.14mmo1; HPLC에 의한 85% 순도)의 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.4mmo1)를 주입하고, 그 혼합물을 건조 질소 분위기하에 70℃에서 1.5시간 교반하였다. 이와 같이 짙은 용액에 요오드아세트아미드(189㎎, 0.99mmo1)를 첨가하고 그 혼합물을 100℃에서 6시간 교반하였다. 그 혼합물을 진공 농축하고 잔류물을 아세토니트릴(10㎖)에 용해시키고 그 용액을 1N HC1(1.5㎖)로서 10분간 처리하였다. 형성된 침전물은 수집하고 35% 아세토니트릴/HO로 용출하면서 컬럼 크로마토그래피(역상 시리카겔, Lichroprep, RP-18 EM Science)에 의하여 정제시켜 짙은 오렌지색 분말로서 표제 화합물 51㎎(0.067mmo1, 수율 48%)을 얻었다 : Rt 3.29분(순도 87.5%; HPLC, 용출액 : A/B=1/1 (A=50% 아세토니트릴/0.15% 칼륨 인산염 완충액, pH 3.5, B=80% 아세토니트릴/ HO, 다른 조건 : 실시예 4와 동일함.

IR(KBr)ν: 3423, 1697, 1625㎝ .

UV(MeOH: HO; 1: 1)λ: 234(ε29,300), 290(ε24,000), 470nm(ε10,00).

MS(FAB) : m/z 766 (M+H) .

H NMR(300 MHz, DMSO-d)δ(ppm) : 1.19(3H, d, J=7.2HZ, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=6.8MHz, 17-Me), 2.28(3H, s, 3-Me), 2.63(3H, brs, N-Me), 3.2-3.8(m), 3.93(3H, s, 11-OMe), 4.3-4.6(4H, m), 5.5(1H, br, DO 교환가능), 6.0(1H, br, DO 교환가능), 6.89(1H, d, J=2 Hz, 10-H), 7.03(1H, s, 4-H), 7.25(1H, br, 12-H 및 한가지의 CONH, 부분적으로 DO 교환가능), 7.6(1H, brs, 한가지의 CONH, DO 교환가능), 8.0(1H, s, 7-H), 8.62(1H, d, J=7 Hz, CONH, DO 교환가능), 12.92(1H, s, DO 교환가능).

실시예 6

N-(에톡시카르보닐메틸) 프라디미신 B(II, R =CH, R =H, R =CH, R =-CHCOCH)의 제조

프라디미신 B(100㎎, 0.14mmo1; HPLC에 의한 85% 순도), BSA(0.6㎖, 2.4mmo1), 및 에틸요오드아세테이트 (0.12㎖, 1.01mmo1), 그리고 컬럼 크로마토그래피에 대한 용출액으로서 물, 20% 아세토니트릴/HO 및 40% 아세토니트릴/HO를 사용하여 실시예 5의 방법을 반복시켜 오렌지색 분말로서 표제 화합물(32㎎, 수율 29%)을 제공하였다 : Rt 5.63분(순도 95%; HPLC, 용출액 : 50% 아세토니트릴/0.15% 칼륨 인산염 완충액, pH 3.5, 다른 조건 : 실시예 4와 동일.

IR(KBr)ν: 3426, 1731, 1635, 1608㎝ .

UV(MeOH: HO; 1: 1)λ: 234(ε32,000), 290(ε26,000), 468nm(ε11,000).

MS(FAB) : m/z 795 (M+H) ; HRMS:CHNO(M+H) 에 대한 계산치 795.2613, 실측치 795.2594.

H NMR(300 MHz, DMSO-d)δ : 1.22(3H, t, J=7Hz, CHCH-), 1.29(3H, d, J=7.3Hz, 5'-Me), 1.37(3H, d, J=6.6Hz, 17-Me), 2.28(3H, s, 3-Me), 3.12(3H, s, N-Me), 3.85(1H, m), 3.92(3H, s, 11-OMe), 3.93-3.98(2H, m), 4.08-4.6(5H, m), 4.7(1H, d, J=6.7 Hz, 1'-H), 6.9(1H, d, 12-H), 8.06(1H, s, 7-H ), 8.54(1H, d, J=7 Hz, CONH, DO 교환가능), 12.8(1H, s, DO 교환가능).

실시예 7

N-(소디오술포메틸) 프라디미신 C(II, R =CH, R =β-D-크실로실, R =H, R =-CHSONa)의 제조

프라디미신 C(50㎎, 0.058mmo1)수용액(10㎖)에 중탄산 나트륨(14.6㎎, 0.174mmo1) 및 히드록시메탄술폰산 나트륨 염(11.7㎖, 0.087mmo1)을 첨가하였다. 전체 혼합물을 상온에서 30분간 교반하고 친액화하여 고체 80㎎을 얻었다. M.P. 100℃(점차분해).

IRν(KBr)cm : 1618, 1623.

UVλ(1/100N NaOH) nm: 319(115), 498(112).

¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆)δ : 1.20(3H, d, J=6.5Hz, 5'-CH₃), 1.30(3H, d, J=6.9Hz, CH-CH₃), 2.23(3H, s, 3-CH₃), 3.90(3H, s, 11-OCH₃), 4.59(1H, d, J=7.7 Hz, 1'-H), 6.71(1H, d, J=2.0Hz, 10-H), 6.93(1H, s, 4-H), 7.13(1H, d, J=2.0 Hz, 12-H), 7.71(1H, s, 7-H).

실시예 8

N-(소디오술포메틸) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CH₂SO₃Na)의 제조

H₂O(5㎖)내 프라디미신 A HC1(50㎎, 0.057mmo1)현탁액에 중탄산 나트륨(9.6㎎, 0.114mmo1)과 히드록시메탄술폰산 나트륨염 일산화물(8.7mg, 0.057mmo1)을 첨가하고, 전체 혼합물을 상온에서 2시간 교반한 다음 천액화하여, 양성자 NMR에 의하여 표제 화합물과 프라디미딘 A의 혼합물이 약 1:3의 비율로 존재한다고 알려진시료(63mg; 이론치=59mg)를 얻었다. 두가지 성분의 완전분리는 만족스럽지 않았다. M.P. 220℃.

IRν_max(KBr)cm^-1: 3413, 1618, 1603, 1442, 1384, 1355, 1290, 1256.

UVλ_max(H₂O) nm: 222(241), 276(197).

¹H NMR(DMSO-d₆+D₂O)δ : 1.14와 1.23[총 3H(약 3 : 1), 각 d, J_5',Me=6.4Hz, 5'Me), 1.31(3H, d, J_17,Me=6.8Hz, 17-Me), 2.22와 2.24[총 3H(약 1:3), 각 s, 4'-NMe), 2.40(3H, s, 3-Me), 약 3.0-3.2(3H, m, 2-H, 5-Hax, 및 3-H), 약 3.6(2H, m, 2'-H, 및 3'-H), 3.70(1H, dd, J_5''ax,5''eq=11.2Hz, J_4'',5''eq=5.4Hz, 5-Heq), 3.90(3H, s, 11-OMe), 4.10(1H, q, 17-H), 4.36(1H, d, J_1,2=7.3Hz, 1-H), 4.39(1H, d, J_5,6=10.8Hz, 5-H), 4.44(1H, d, J_10,12=2.4Hz, 10-H), 6.93(1H, s, 4-H), 7.14(1H, d, 12-H), 7.69(1H, s, 7-H).

실시예 9

N-포르밀 프라디미신 A(Ⅱ, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₄, R⁴=-COH)의 제조

염화 메틸렌(2㎖)내 프라디미신 A HC1(100㎎, 0.11mmo1) 및 BSA(0.50㎖, 2mmo1)의 혼합물에 아세트 포름산 무수물(0.1㎖)을 첨가하고, 그 혼합물을 상온에서 밤새 교반하였다. 혼합물에 1N HC1(1㎖)과 MeOH(3㎖)를 첨가하고, 그 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 소량의 NaHCO₃수용액에 용해시킨다음 용출액으로서 물 그후 10% 아세토니트릴-물을 사용한 C₁₈-실리카겔 컬럼(20×150㎜)에 크로마토그래피 하였다. 아세토니트릴 분율을 HPLC에 의하여 검사하였고, 필요로 한 분율을 결합하고, 농축시킨다음, 냉동-건조시켜 짙은 적색 비정질 분말로서 표제 화합물(78㎎, 수율 82%)을 얻었다. M.P. 250℃(분해).

IRν_max(KBr)cm^-1: 1653-1607, 1445, 1162.

UVλ_max(1/100N NaOH) nm(ε) : 319(14300), 497(13900).

MS(SIMS) : m/z 891 (M+Na)⁺.

¹H NMR(DMSO-d₆)δ : 1.04(3H, d, J=6.4Hz, 6'-H)* *, 1.33(3H, d, J=7.2Hz, 알라닐-CH₃), 2.26(3H, s, 3-CH₃), 2.97(3H, s, N-CH₃), 3.68(1H, dd, J=5 12 Hz, 5-H), 3.90(3H, s, OCH₃), 4.34(1H, qui, J=7.2Hz, 알라닐-CH), 4.40(1H, d, J=8 Hz, 1-H), 4.44(2H, m, 5,6-H), 4.74(1H, d, J=8Hz, 1'-H), 6.71(1H, d, J=2.1 Hz, 10-H), 6.85(1H, s, 4-H), 7.11(1H, d, J=2.1 Hz, 12-H), 7.75(1H, s, 7-H), 7.92(s, CHO)* *, 8.65(1H, br, CONH)*, 13.20(1H, br)*, 15.15(1H, br)*.

* D₂O의 첨가에 의하여 사라짐.

** 소량의 회전 이성체로 인한 신호동반.

실시예 10

N-글로실 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-COCH₂NH₂)의 제조

건조 염화 메틸렌(3㎖)내 프라디미신 A HC1(105㎎, 0.12mmo1)과 BSA(0.6㎎, 2.4mmo1)용액에 N-t-BOC-글리신의 1-벤조트리아졸릴 에스테르(350mg, 1.2mmo1)을 첨가하였다. 혼합물을 환류하에 밤새 가열한 다음 상온으로 냉각시켰다. 테트라히드로푸란(2.5㎖)내 테트라부틸암모늄 플루오라이드 1M 용액을 첨가하고, 그 혼합물을 상온에서 30분간 교반한다음, 감압에서 농축시켰다. 잔류물을 H₂O로 희석시키고, 1N HC1로서 pH5로 산성화하였고 형성된 고체를 여과에 의하여 수집하였다. 여과물을 초산에틸로 추출하고, 용매를 증발시키고, 잔류물을 이전에 얻어진 고체와 결합하였다. 40% 아세토니트릴-pH3.5완충액을 사용한 C₁₈컬럼에서 혼합물을 크로마토그래피 하였다. 필요로 한 생성물 함유 분율을 결합하고 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 초산에틸에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기층을 Na₂SO₄로서 건조시킨다음 증발시켜 프라디미신 A의 Nt-BOC-글리실 유도체 52mg(46%)을 얻었다.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ : 1.03(3H, d, J=6.0Hz, 6'-H)* *, 1.33(3H, d, J=7.3Hz, 17-CH₃), 1.37와 1.38(9H, s, tert-부틸), 2.29(3H, s, 3-CH₃), 3.0-3.2(5H, m, 4'-H, 2-5H), 3.71(1H, dd, J=5.4와 11Hz, 5-H), 3.95(3H, s, 11-OCH₃), 4.39(1H, qui, J=7.3Hz, 17-H), 4.4-4.6(3H, m, 5-H, 6-H, 1-H),), 4.71(1H, d, J=6.8Hz, 1'-H), 4.9-5.1(3H, br-s, OH)*, 5.6-5.8(1H, br-s, OH)*, 5.99(1H, br-s, OH)*, 6.91(1H, s, 10-H), 7.02(1H, s, 4-H), 7.27(1H, s, 12-H), 8.00(1H, s, 7-H), 8.62(1H, s, 16-NH)*, 12.57(1H, br-s, OH)*, 12.94(1H, s, OH)*.

* D₂O의 첨가에 의하여 사라짐.

** 소량의 회전 이성체로 인한 신호동반.

트리플루오로초산(TFA)(1㎖)내 N-(t-BOC-글리실)-프라디미신 A(52mg, 0.055mmo1) 용액을 상온에서 30분간 교반하였다. TFA가 증발된 후, 이소프로필에테르를 그 잔류물에 첨가시키고 형성된 침전물을 여과에 의하여 수집하였다. 혼합물을 예비 HPLC(Nihon seimitsu, 칼럼 NS-20250, 용매 30% MeCN-pH3.5완충액), 이어서 용출액으로서 25~30% 아세토니트릴-H₂O를 사용한 C₁₈실리카겔 컬럼에서 크로마토그래피에 의하여 정제시켜 용출액의 친액화후 표제 화합물(23.0mg, 수율46%)을 제공하였다. M.P. 220℃(분해).

IRν_max(KBr)cm^-1: 3413, 2390, 1620, 1380, 1332, 1054.

UVλ_max(0.01N NaOH) nm(ε) : 320(12,300), 497(12,000).

MS(FAB) : m/z 900 (M+3H)⁺.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ : 1.08(3H, d, J=6.4Hz, 6'-H)* *, 1.33(3H, d, J=7.3Hz, 17-CH₃), 2.26(3H, s), 3.69(1H, dd, J=5.6 11.1Hz, 5-H)* *, 3.91(3H, s, 11-OCH₃), 4.25(1H, br-m, 17-H), 4.4-4.5(2H, 5-H, 6-H), 4.48(1H, d, J=7.7Hz, 1-H), 4.73(1H, d, J=7.3Hz, 1'-H)* *, 5.0-5.15(3H, brs, OH)*, 5.72(1H, brs, OH)*, 5.80(1H, br-s, OH)*, 6.71(1H, d, J=2.6Hz, 10-H), 6.83(1H, s, 4-H), 7.13(1H, d, J=2.6Hz, 12-H), 7.74(1H, s, 7-H), 8.6(1H, br, 16-NH)*.

* D₂O의 첨가에 의하여 사라짐.

** 소량의 회전 이성체로 인한 신호동반.

실시예 11

N-(β-알라닐) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CO(CH₂)₂NH₂)의 제조

건조 염화 메틸렌(5㎖)내 프라디미신 A HC1(100㎎, 0.11mmo1)과 BSA(0.6㎖, 2.4mmol) 용액에 N-t-BOC-β-알라닌의 1-벤조트리아졸릴에스테르(349mg, 1.1mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2일간 환류시킨다음 상온으로 냉각시켰다. 테트라히드로푸란(3㎖)내 테트라부틸암모늄 플루오라이드 1M 용액을 첨가하였고, 자주색 혼합물을 상온에서 30분간 교반하였다. 용매를 감압하에 증발시켰고, 초산에틸과 10% 시트르산을 그 잔류물에 첨가하였다. 혼합물을 흔든다음 여과시켜 불용성 고체를 수집하며, 유기층을 분리하고 물과 염수로 세척하였다. 불용성 고체를 유기층에 첨가하고 그 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 35~40% 아세토니트릴-HO로 용출하면서 C₁₈실리카겔 컬럼에서 크로마토그래피 하였다. 필요로 한 화합물 함유분율을 결합하고, 증발시킨다음 초산에틸로 추출하였다. 추출물을 농축시키고, 1,4-디옥산으로부터 냉동 건조시켜 N-t-BOC-β-알라닐 유도체 100mg(87%)을 제공하였다.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ : 1.3-1.4(tert-부틸), 2.28(3H, s, 3-CH₃), 3.71(1H, dd, J=5.4와 11 Hz, 5-H)* *, 3.93(3H, s, 11-OMe), 4.38(1H, qui, J=7.3Hz, 17-H), 4.4-4.7(3H, m, 5-H, 6-H, 1-H), 4.70(1H, d, J=7.3Hz, 1'-H)* *, 4.9-5.1(3H, OH)*, 5.7-5.9(2H, OH)*, 6.83(1H, d, J=2.3Hz, 10-H), 6.95(1H, s, 4-H), 7.20(1H, d, J=2.2Hz, 12-H), 7.90(1H, s, 7-H), 8.69(1H, br, 16-NH)*, 13.03(1H, s, OH)*.

* D₂O의 첨가에 의하여 사라짐.

** 소량의 회전 이성체로 인한 신호동반.

TFA내 N-(N-t-BOC-β-알라닐) 프라디미신 A(90mg, 0.089mmo1) 용액을 상온에서 15분 교반하였다. TFA를 증발시킨후, 잔류물을 20~40% 아세토니트릴-H₂O로서 용출하면서 C₁₈실리카겔 컬럼에서 그로마토그래피하였다. 필요로 한 화합물 함유 분율을 결합하고 농축시켰다. 잔류물을 소량의 물에 용해시키고 친액화하여 비정질 분말로서 N-(β-알라닐) 프라디미신 A 20mg(25%)을 제공하였다. M.P. 230℃(분해).

IRν_max(KBr)cm^-1: 3390, 1620, 1445, 1386, 1260.

UVλ_max(0.01N NaOH) nm(ε) : 318(13,000), 498(12,700).

MS(FAB) : m/z 912 (M+H)⁺.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ : 0.95(3H, br, 5'-CH₃), 1.33(3H, d, J=7.3Hz, 17-CH₃), 2.23(3H, s, 3-CH₃)* *, 3.74(1H, dd, J=4.7및 11 Hz, 5-H)* *, 3.91(3H, s, 11-OMe), 4.2(1H, br, 17-CH), 4.3-4.5(3H, m, 5-H, 6-H, 1-H), 4.61(1H, d, J=7.8Hz, 1'-H)* *, 4.9-5.2(2-3H, OH)*, 5.6-5.9(2H, OH)*, 6.71(1H, d, J=2.1Hz, 10-H), 6.82(1H, s, 4-H)* *, 7.13(1H, br, 12-H), 7.73(1H, s, 7-H), 8.22(1H, br, 16-NH)*, 8.30(1H, s, OH)*.

* D₂O의 첨가에 의하여 사라짐.

** 소량의 회전 이성체로 인한 신호동반.

실시예 12

N-(트란스-3-메톡시카르보닐-2-프로펜일) 프라디미신 A(Ⅱ, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CH₂CH=CHCO₂CH₃)의 제조

건조 디클로로메탄(3㎖)내 프라디미신 A HC1(78㎎, 0.089mmo1)과 BSA(0.44㎖, 1.8mmol) 용액에 메틸4-브로모 크로토네이트(80mg, 0.445mmol)를 첨가하고, 그 혼합물을 4일간 환류시켰다. 용매를 증발시키고, 그 잔류물을 메탄올(3㎖)과 1N HC1(3㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 메탄올을 증발시키고, 수성 농축물을 C₁₈실리카겔 컬럼에서 크로마토그래피 하였다. 컬럼을 물로 세척한 다음 70% 수성 아세토니트릴로 용출시켰다. HPLC에 의하여 검사된 필요로 한 분율을 결합하고, 농축시킨다음, 친액화하여 표제 화합물 55mg(수율 66%)을 얻었다. M.P. 180℃(분해).

IRνmax(KBr)cm^-1: 1720, 1610, 1440.

UVλmax(O/100N NaOH) nm: 300(200), 500(223).

MS(FAB) : m/z 939 (M+H)⁺.

'H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.13(3H, d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=7.3 Hz, 17-Me), 2.27(3H, s, 3-Me), 3.95(3H, s, OCH₃), 4.39(1H, qui, J=7.3 Hz, 알라닐-CH), 6.00(1H, d, J=15.8 Hz, =CH-COOMe), 6.83(1H, dt, J=15.8 및 5.5 Hz, CH₂-CH=CH-COOMe), 6.90(1H, br-s, 10-H), 7.02(1H, s, 4-H), 7.27(1H, d, J=2.2 Hz, 12-H), 8.00(1H, s, 7-H).

실시예 13

N-(트란스-3-카르복시-2-프로펜일) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CH₂CH=CHCO₂H)의 제조

메탄올과 1N NaOH의 혼합물내 N-(트란스-3-메톡시카르보닐-2-프로펜일) 프라디미신 A 용액을 상온에서 밤새 교반하였다. 메탄올을 증발시키고 수성 잔류물을 1N HC1로 산성화한다음 C₁₈실리카겔 컬럼에 크로마토그래피 하였다. 컬럼을 물로 세척하고 40% 수성 아세토니트릴로 용출하였다. HPLC에 의하여 검사된 필요로 한 분율을 결합하고, 농축시킨다음 친액화하여 표제 화합물 34mg(수율 85%)을 얻었다. M.P. 180℃.

IRν_max(KBr)cm^-1: 1610, 1450, 1390.

UVλ_max(O/100N NaOH) nm: 320(235), 500(235).

MS(FAB) : m/z 927 (M+3H)⁺. 949(M+Na+2H)⁺.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.13(3H, d, J=6.4 Hz, 5'-Me), 1.33(3H, d, J=7.2 Hz, 17-Me), 2.25(3H, s, 3-Me), 2.56(3H, s, N-Me), 3.91(3H, s, OMe), 4.3-4.5(3H, m, 5,6-H 및 17-H), 4.60(1H, d, J=7.7Hz, 1'-H), 5.90(1H, d, J=15.8 Hz, =CH-COOH), 6.72(1H, d, J=2.1Hz, 10-H), 6.73(1H, dt, J=15.8 및 5.5 Hz, CH=CH-COOH), 6.86(1H, s, 4-H), 7.12(1H, d, J=2.1 Hz, 12-H). 7.76(1H, s, 7-H).

실시예 14

N-(글리실) 프라디미신 B 포름산염(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-COCH₂NH₂)의 제조.

건조 디메틸포름아미드(2㎖: 분자망 3A위에서 건조)내 프라디미신 B 메틸 에스테르 HC1(114mg, 0.15mmol : HPLC에 의한 순도 80%)과 트리에틸아민(20μL, 0.15mmol; 분자망 4A 위에서 건조)의 교반용액에 상온에서 N-(t-BOC) 글리신 N-히드록시숙신이미드에스테르(204mg, 0.75mmol; Sigma)를 첨가하였다. 혼합물을 220℃에서 건조 질소 분위기하에 12시간 교반한다음 근접 건조상태로 진공 농축시켰다. 유상 잔류물을 n-펜탄으로 수회 분쇄시켰고 크로마토그래피하여(SiO₂; MeOH-CH₂Cl₂/5 : 95-15:85) 다가아실화 원물질 120mg을 얻었다 : Rt 1.84분(순도 75%; HPLC, 컬럼 : Microsorb Short One C₁₈,4.6㎜ I.D.×100㎜, 3㎛, Rainin Instrument Company, 용출제 : A/B=1 : 1, A, 아세토니트릴-0.15% KH₂PO₄pH 3.5=1 : 1, v/v; B, 아세토니트릴-H₂O=4 : 1; 유속 1.2㎖/분, 검출 : 254 nm에서 UV흡수).

MeOH(6.5㎖)내 이와 같은 다가아실화 원물질(80㎎)을 0.25N NaOH(3.2㎖)와 혼합하고, 그 혼합물을 상온에서 6시간 교반하였다. 이것을 천천히 그리고 조심스럽게 pH2(pH 페이퍼)가 얻어질 때까지 0.1N HCl로 산성화하였다. 뿌연 혼합물을 H₂O(6.5㎖)로 희석하고 MeOH를 진공제거하였다. 얻어진 침전물을 여과시켜, H₂O로 세척한 다음, 건조시켜 원고체로서 표제 화합물 25㎎(0.029mmol, 수율 29%)을 얻는다 : Rt 2.12분(79% 순도, HPLC, 조건 : 상기와 동일).

75% 순도인 이 원물질(200㎎)을 C-18역상 실리카겔(Whatman partisil Prep 40 ODS-3, C-18; 1.5㎝×30㎝)위 Michel-Miller 고성능 저압 액체 크로마토그래피 장치가 사용된 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하였다. 칼럼을 H₂O 그후 80% 아세토니트릴-H₂O로 용출시켜 적색분말로서 N-(t-BOC-글리실) 프라디미신 B 20㎎을 얻었다 : Rt 3.48분(순도 97%; HPLC, 칼럼 : Waters Radial Pak C₁₈, 용출제 : 50%(pH 4, 0.05M 암모늄 포스페이트 완충액)/(H₂O내 80% 아세토니트릴), 유속 : 4㎖/분).

M.P. 170°-270℃(완속분해).

IR(KBr)ν_max: 3420, 1730, 1630, 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 232(ε32,300), 290(ε26,100), 468nm(ε11,000).

MS(FAB) : m/z 866 (M+H)⁺. 766(M-tBoc+2H)⁺, 433.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 0.97, 1.07(3H, 2d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.31(3H, d, J=7 Hz, 17-Me), 1.36(9H, s, tBu), 2.29(3H, s, 3-Me), 3.02, 3.14(3H, 2s, N-Me), 3.5-4.0(6H, m, 2'-H, 3'-H, 4'-H, 5'-H, CH₂), 3.95(3H, s, 11-OMe), 4.38(1H, qi, J=7 Hz, 17-H), 4.4-4.6(2H, m, 5-H, 6-H), 4.71(1H, br, 1'-H), 5.13, 5.42, 6.61, (3H, br, D₂O로 교환), 6.16(1H, br, s, OH, D₂O로 교환), 6.58(1H, t, J=5 Hz, NH, D₂O로 교환), 6.94(1H, d, J=2 Hz, 10-H), 7.08(1H, s, 4-H), 7.29(1H, d, J=2 Hz, 12-H), 8.07(1H, s, 7-H), 8.55(1H, d, J=7 Hz, CONH, D₂O로 교환), 12.84(1H, s, D₂O로 교환).

80% 포름산(3㎖ 내 N-(t-BOC-글리실) 프라디미신 B(30㎎, 0.035mmol, 순도~86%)의 혼합물을 상온에서 6시간 교반하였다. 여과에 의하여 불용성 물질을 제거하고 여과물을 건조상태로 진공 농축하였다. 잔류물을 EtOAc로 분쇄하고 건조시켜 적색 분말로서 표제 화합물 20㎎(0.025mmol, 수율 70%)을 얻었다 : Rt 2.31분(순도 80%, HPLC, 50% A/B(암모늄 포스페이트 완충계), 유속 2㎖/분; 이물질은 프라디미신 B가 없었음. 2%).

IR(KBr)ν_max: 3420, 1730, 1630, 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε17,400), 290(ε14,100), 464nm(ε6,100).

MS(FAB) : m/z 766 (M+H-HCO₂H)⁺.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆/D₂O/DC1)δ(ppm) : 1.00, 1.08(3H, 2d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=7 Hz, 17-Me), 2.23(3H, s, 3-Me), 3.13(3H, br, N-Me), 3.17(3H, s, 11-OMe), 3.7-4.0(4H, m, 2'-H, 3'-H, 4'-H, 5'-H), 4.1-4.8(6H, m, 17-H, 5-H, 6-H, 1'-H, CH₂), 6.60(1H, brs, 10-H), 7.00(1H, s, 4-H), 7.09(1H, brs, 12-H), 7.83(1H, s, 7-H), 8.08(1H, s, HCO₂).

실시예 15

N-(N,N-디메틸글리실) 프라디미신 B(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-COCH₂N(CH₃)₂)의 제조.

건조 디메틸포름아미드(12㎖, 분자망 3A위에서 건조)내 프라디미신 B 메틸 에스테르 HC1(500mg, 0.66mmol : HPLC에 의한 순도 81%순도)과 트리에틸아민(92.4μL, 0.66mmol))의 교반용액에 상온에서 N,N-디메틸글리신 N-히드록시숙신이미드에스테르(1.68g, 8.4mmol)를 첨가하고 그 혼합물을 약 40℃에서 24시간 교반하였다. 이혼합물에 N,N-디메틸글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르(1.68g, 8.4mmol) 추가량을 첨가하고, 그 혼합물을 약 45℃에서 추가의 48시간동안 연속 교반하였다. 용매를 진공 건조시키고, 잔류물을 펜탄 그후 에테르로 반복하여 분쇄하였다. 이 물질을 MeOH(30㎖)와 H₂O(20㎖)의 혼합물에 용해시키고, 여기서 H₂O(15㎖)내 NaOH(1.9g)의 냉각용액을 15분에 걸쳐 첨가하였다. 그 혼합물을 상온에서 2시간 교반하고, 얼음 중탕에서 H₃PO₄의 첨가에 의하여 pH7로 중성화하였고, 그 침전물을 제거하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔 Whatman partisil Prep 40 ODS-3, C-18)에 의하여 정제하였다. 컬럼을 처음에 H₂O로 그후 50% 아세토니트릴/H₂O로 용출하여 적갈색 분말로서 표제 화합물 86㎎(0.10mmol, 수율 15%)을 얻었다 : Rt 5.36분(순도 74%; HPLC, 칼럼 : Waters Radial Pak C₁₈, 용출제 : (pH 4 완충액, 0.05M 암모늄 포스페이트)/(H₂O내 80% 아세토니트릴)= 3 : 2, 유속 : 2㎖/분).

IR(KBr)ν_max: 3400, 1640, 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε26,200), 288(ε21,300), 476nm(ε9,000).

MS(FAB) : m/z 794 (M+H)⁺; HRMS, C₃₉H₄₄N₃O₁₅(M+H)⁺에 대한 계산치 799.2772, 실리측 799.2774.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 0.99(3/4H, d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.01(3/2H, d, J=6Hz, 5'-Me), 1.10(3/4H, d, J=6Hz, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=7.3Hz, 17-Me), 2.27(3H, s, 3-Me), 2.73(3H, s, NMe₂), 2.77(3H, s, NMe₂), 3.10, 3.14(3H, 2s, 4'-NMe), 3.5-4.3(m), 3.90(3H, s, 11-OMe), 4.3-4.5(m, 17-H, 5-H, 6-H), 4.6-4.75(m, 1'-H), 6.72(1H, s, 10-H), 6.85(1H, s, 4-H), 7.12(1H, s, 12-H), 7.77(1H, s, 7-H), 8.82, 8.84(1H, 2d, J=7.2Hz, CONH, D₂O로 교환), 13.14(1H, s, D₂O로 교환)

N,N-디메틸글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르를 다음 방법에 의하여 제조하였다.

CH₂Cl₂(200㎖)내 N-히드록시숙신이미드(11.5g, 0.1mmol)와 N,N-디메틸글리신(10.3g, 0.1mmol)의 교반 혼합물에 N, N-디시클로헥실카르보디이미드(22.1g, 0.11mmol)를 첨가하였고, 혼합물을 상온에서 18시간 교반하고 환류에서 10분간 가열한다음 추가의 4시간동안 교반하였다. 침전물을 제거하고, 여과물을 증발시켰다. 유상 잔류물을 n-헥산으로 분쇄하고, 불용물을 제거하면서 무수 헤테르로서 고체를 추출하였다. 에테르의 진공내 증발은 백색 흡습성 고체로 표제 화합물 13.0g(0.065mmol, 수율 65%)을 제공하였다.

IR(KBr)ν_max: 1780, 1710, 1650(br)㎝^-1.

MS(DCI) : m/z 201 (M+H)⁺.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃)δ(ppm) : 2.40(6H, s, NMe₂), 2.81(4H, s, CH₂CH₂), 3.51(2H, s, NCH₂).

실시예 16

N-(N,N-디메틸글리실) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-COCH₂N(CH₃)₂)의 제조.

디클로로메탄(1.2㎖)내 프라디미신 A HCl(61mg, 0.07mmol)과 BSA(0.35㎖, 1.4mmol)의 혼합물에 N,N-디메틸글리실클로라이드 HCl(55mg, 0.35mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 1시간 교반하였고 진공 농축하였다. 잔류물을 메탄올(2㎖)과 1N-HCl(1㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 메탄올을 증발시키고, 수성 잔류물을 C₁₈실라카겔 컬럼에서 크로마토그래피 하였다. 컬럼을 물로 세척하고 30% 수성 아세토니트릴로서 추출하여 표제 화합물 42㎎(수율 65%)을 얻었다. M.P. 190℃(점차 분해).

IRν_max(KBr)cm^-1: 1620(broad).

UVλ_max(1/100N NaOH) nm(ε) : 318(15200), 497(14600).

MS(FAB) : m/z 926 (M+H)⁺.

¹H NMR(400 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.00, 1.11(총 3H, 2d, J=6.4 Hz, 5'-Me), 1.34(3H, d, J=7.3 Hz, 17-Me), 2.28, 2.29(총 3H, 2s, 3-Me), 2.67(3H, s, N-Me), 2.72(3H, s, N-Me), 3.90(3H, s, OMe), 6.72(1H, d, J=2.6 Hz, 10-H), 6.83(1H, s, 4-H), 7.12(1H, m, 12-H), 7.76(1H, s, 7-H).

실시예 17

N-카르바밀 프라디미신 B(Ⅱ, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-COCH₂)의 제조

아세토니트릴(5㎖)내 프라디미신 B 메틸에스테르 HC1(100mg, 0.13mmol)의 교반 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.4mmol)를 첨가하였고 그 혼합물을 50℃에서 30분 가열하였다. 이 혼합물에 상온으로 냉각후, 트리에틸아민(18μl, 0.13mmol)이어서 트리클로로메틸카르보닐 이소시아네이트(32μl, 0.26mmol)를 첨가하였다. Rt 5.42분(HPLC, 컬럼 : Waters Radical PAK C₁₈, 용출제 : A/B=35/65 A=pH 4, 0.5M 암모늄 포스테이트 완충액, B=H₂O내 80% 아세토니트릴, 유속 : 3㎖/분)에서 HPLC가 새로운 생성물의 형성을 나타낸 시간인 20시간동안 건조 질소 분위기하 상온에서 이 혼합물을 교반하였다. 혼합물을 MeOH(2㎖)로 희석한 다음 1N HCl(1㎖)로 처리하였다. 혼합물을 건조상태로 신속히 진공 농축시켰다. 잔류물을 H₂O(10㎖)내 5% 아세토니트릴에 용해시키고 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 형성된 고체를 수집하여 N-카르바밀)- 및 N-(트리클로로메틸-카르보닐카르바밀) 데스크실로실프라디미신 A 메틸에스테르의 혼합물 77㎎을 얻었다 : Rt 2.06분(49%)과 5.42(38%) (HPLC, 조건 : 상기와 동일).

이 혼합물(77㎎)을 아세토니트릴(2㎖)과 H₂O(2㎖)의 용액에 용해시켰다. 여기서 H₂O(0.5㎖)내 NaOH(10㎎) 용액을 첨가하고 HPLC가 반응 완료를 나타낸 시간인 30분간 혼합물을 상온에서 교반하였다. 이것을 희석 H₃PO₄로서 pH 2.5로 조심스럽게 산성화하였다. 침전물을 모으고(80% 아세토니트릴/H₂O) : (pH 4, 0.025M 암모늄 포스페이트 완충액)=1:4로서 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Partisil Prep 40ODS-3, C-18)에 의하여 정제하였다. 해당 분율을 모으고, 희석 H₃PO₄로서 pH 2.5로 산성화한다음, 농축시켜 아세토니트릴을 제거하였다. 형성된 침전물을 모으고, H₂O로 세척한다음, 진공 건조시켜 짙은 적색 분말로서 표제 화합물 31㎎(0.041mmol, 수율 32%)을 얻었다. M.P. 120℃(분해).

Rt 3.99분(순도 75% : HPLC, 컬럼 : 상기와 동일, 용출제 : A/B=45/44 A와 B는 상기에 정의됨, 유속 : 2㎖/분).

IR(KBr)ν_max: 3400, 1730(w), 1620(br)㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε27,700), 292(ε22,900), 462nm(ε9,800).

MS(FAB) : m/z 752 (M+H)⁺; HRMS, C₃₆H₃₈N₃O₁₅(M+H)⁺계산치 752.2303, 실리측 752.2288.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.01(3H, d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.31(3H, d, J=7Hz, 17-H), 2.28(3H, s, 3-Me), 3.01(3H, s, N-Me), 3.66(1H, brs), 3.77(1H, m), 3.94(3H, s, 11-OMe), 4.35-4.6(5H, m, 17-H, 5-H, 6-H, 1'-H), 6.93(1H, s, 10-H), 7.09(1H, s, 4-H), 7.29(1H, s, 12-H), 8.06(1H, s, 7-H), 8.55(1H, d, J=6.5Hz, CONH, D₂O로 교환), 12.85(1H, s, D₂O로 교환)

실시예 18

N-(N-메틸카르바모일) 프라디미신 B(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-CONHCH₃)의 제조

아세토니트릴(5㎖)내 프라디미신 B 메틸에스테르 HC1(100mg, 0.13mmol)의 교반 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.4mmol)를 첨가하고 혼합물을 50℃에서 30분간 가열하였다. 상온에서 냉각후, 이 혼합물에 트리에틸아민(18μL, 0.13mmol), 이어서 메틸 이소시아네이트(7.7μL, 0.13mmol)를 주입하였다. 혼합물을 상온에서 건조 질소 분위기하에 2시간 교반한다음, 메틸 이소시아네이트 추가량(15.4μL, 0.26mmo1)을 주입하고 또다른 4시간동안 연속 교반하였다. MeOH(2㎖)로 희석시킨 혼합물을 1N HCl(1㎖)로 처리한다음 진공 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 얻어진 침전물을 모아서, 물로 세척하고 20% 아세토니트릴/pH 4, 0.025M 암모늄 포스페이트 완충액으로 그후 100% 아세토니트릴로서 용출하면서 칼럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Whatman Partisil Prep 40 ODS-3, C-18)에 의하여 정제하였다. 해당 분율(아세토니트릴)을 진공 농축시켜 메틸에스테르로서 표제 화합물 32㎎(0.041mmo1, 수율 32%)을 얻었다 : Rt 6.00분(순도 91%; HPLC, 칼럼 : Whaters Radial PAK C₁₈, 용출제 : A/B=1/1 A=pH 4, 0.05M 암모늄 포스페이트 완충액, B=80% 아세토니트릴/H₂O, 유속 : 3㎖/분).

이 에스테르(27㎎, 0.035mmo1)를 MeOH(1㎖)와 H₂O(1㎖)의 혼합물에 용해시키고 HPLC가 반응 완료를 나타낸 시간인 1시간동안 상온에서 이것을 H₃O₄(0.3㎖)내 NaOH(12㎎) 용액으로 처리하였다. 혼합물을 10% HPO의 첨가에 의하여 pH3으로 산성화시키고 근접 건조상태로 진공 농축하였다. 침전물을 수집하고 H₂O(0.3㎖×2)로 세척한다음 건조시켜 적색 분말로서 표제 화합물 24㎎(0.031mmol, 수율 89%; 총수율 28%)을 얻었다. M.P. 138℃(분해).

Rt 2.29분(순도 93% : HPLC, 조건 : 상기와 동일).

IR(KBr)ν_max: 3400, 1730(w), 1620(br)㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε32,200), 290(ε26,100), 468nm(ε11,300).

MS(FAB) : m/z 766 (M+H)⁺; HRMS, C₃₇H₄₀N₃O₁₅(M+H)⁺에 대한 계산치 766.2459, 실측치 766.2441.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.02(3H, d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.34(3H, d, J=7.3Hz, 17-Me), 2.31(3H, s, 3-Me), 2.59(3H, d, J=4 Hz, NHMe), 3.03(3H, s, NMe), 3.69(2H, brs), 3.82(1H, m), 3.97(3H, s, 11-OMe), 4.35-4.6(5H, m, 17-H, 5-H, 6-H, 1'-H), 5.00(br), 5.57(br), 6.17(d, D₂O로 교환), 6.95(1H, d, J=2.4Hz, 10-H), 7.11(1H, s, 4-H), 7.31(1H, d, J=2.4 Hz, 12-H), 8.08(1H, s, 7-H), 8.57(1H, d, J=7 Hz, CONH, D₂O로 교환), 12.87(1H, s, D₂O로 교환).

실시예 19

N-(p-톨루엔술포닐카르바밀) 프라디미신 B(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=CONHSO₂-p-톨릴)의 제조

아세토니트릴(5㎖)내 프라디미신 B 메틸에스테르 HC1(100mg, 0.13mmol)의 교반 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.4mmol)를 첨가하였고, 그 혼합물을 50℃에서 30분간 가열하였다. 상온으로 냉각후, 이 반응 혼합물에 트리에틸아민(18μL, 0.13mmol)과 p-톨루엔술포닐이소시아네이트(25.3㎎, 0.13mmo1)를 첨가하였다. 혼합물을 건조 질소 분위기하 상온에서 5시간 교반하였다. 추가의 p-톨루엔술포닐이소시아네이트(약 10㎎)를 첨가하고, HPLC가 생성물 약 80%가 형성되었다는 것을 나타내는 시간인 또다른 18시간 동안 연속 교반하였다. 혼합물을 MeOH(2㎖)로서 희석시키고 여기서 1N HCl(1㎖)를 첨가하였다. 용액을 건조상태로 신속히 진공 농축하였다. H₂O(3㎖)내 잔류물의 현탄액을 3시간 교반하고, 고체를 수집하여, Et₂O로 분쇄한다음, 건조시켜 적색 고체로서 표제 화합물의 메틸에스테르 77㎎(0.084mmo1, 수율 64%)을 얻었다 : Rt 3.39분(순도 85%; HPLC, 컬럼 : Waters Radial PAK C₁₈, 용출제 : A/B=35/65 A=pH 4.0, 0.05M 암모늄 포스페이트 완충액, B=H₂O내 80% 아세토니트릴, 유속 4㎖/분).

메틸에스테르(50㎎, 0.056mmo1)를 MeOH(3㎖)와 H₂O(3㎖)의 혼합물에 현탁시켰다. 여기서 H₂O(1㎖)내 NaOH(22㎎, 0.056mmo1)용액을 첨가하고, 혼합물을 상온에서 1시간 교반하였다. 이것을 얼음 중탕에서 회석된 H₃PO₄로서 pH3으로 산성화한다음 부피 약 3㎖로 진공 농축하였다. 침전물을 모으고, H₂O로 세척한다음, 진공 건조시켜 적색 분말로서 표제 화합물 34㎎(0.038mmol, 수율 67%; 총수율 43%)을 얻었다. M.P. 125℃(분해).

Rt 1.61분(순도 83% : HPLC, 용출제 : A/B=35/65 A=pH 4. 0.05M 암모늄 포스페이트 완충액, B=H₂O내 80%, 아세토니트릴, 다른 조건 : 상기와 동일)

IR(KBr)ν_max: 3420, 1720(w), 1620(sh), 1600㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 230(ε35,500), 290(ε21,300), 468nm(ε9,000).

MS(FAB) : m/z 906 (M+H)⁺.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 0.91, 1.05(3H, 2 br, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=7Hz, 17-Me), 2.30(3H, s, 3-Me), 2.38(3H, s, p-Me), 2.89, 3.12(3H, 2s, NMe), 3.94(3H, s, 11-OMe), 4.2-4.7(m, 17-H, 5-H, 6-H, 1'-H), 6.91(1H, s, 10-H), 7.03(1H, s, 4-H), 7.26(1H, s, 12-H), 7.36(2H, d, J=8 Hz, ArHs), 7.77(2H, d, J=8Hz, ArHs), 8.02(1H, s, 7-H), 8.59(1H, d, J=6.5 Hz, CONH, D₂O로 교환), 12.89(1H, s, D₂O로 교환).

실시예 20

N-(L-글루타밀) 프라디미신 B 포름산염(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-COCH(NH₂)(CH₂)₂CO₂H)의 제조

DMF(5㎖, 분자망 3A위에서 건조)내 프라디미신 B 메틸에스테르 HC1(760mg, 1.0mmol; HPLC에 의한 80%순도)의 교반 현탁액에 트리에틸아민(0.14㎖, 1.0mmo1) 이어서 N-t-BOC-(L)-글루나민산γ-벤질-α-N-히드록시-숙신이미드 에스테르(2.60g, 6.0mmo1; N-t-BOC-(L)-글루타민산-벤질에스테르로부터 제조)를 첨가하였다. 얻어진 짙은 적색 혼합물을 35℃에서 24시간 교반한다음 근접 건조상태로 진공 농축하였다. 잔류물을 수회 n-펜탄으로 분쇄한다음 실리카겔(MeOH-CH₂C1₅: 95-25:80)에서 크로마토그래피하여 반순수-다가아실화 물질 1.0g을 제공하였다. MeOH(10㎖) 및 H₂O(5㎖)내 이 반순수 물질(1.0g)을 H₂O(5㎖)내 NaOH(280㎎) 용액과 혼합하였다. 혼합물을 상온에서 6시간 교반하였다.

이것을 5% H₃PO₄로서 pH~3으로 산성화하고, 형성된 침전물을 여과시킨다음 건조시켜 원고체 258㎎을 얻었다. 이것을 이전에 기재된 바와같이 컬럼 크로마토그래피(C₁₈컬럼, A : B=70:30~50:50; A,B는 이전에 정의된 것과 같음)에 의하여 정제하였다. 해당 분율을 결합하고 pH 약 3으로 산성화 하였고 침전물을 여과시킨 다음 건조시켜 적색분말로서 표제 화합물 27㎎(0.029mmo1, 수율 2.9%)을 얻었다: Rt 7.00분(순도 95%; HPLC, 50% A/B, 유속 : 2㎖/분).

IR(KBr)ν_max: 3420, 1730(w), 1630(sh), 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε35,700), 296(ε29,000), 464nm(ε12,200).

MS(FAB) : m/z 906 (M+H)⁺, 838(M-t-Boc+2H), 443.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 0.95, 1.12(3H, 2d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.33(3H, d, 17-Me), 1.34, 1.37(9H, 2s, tBu), 1.65, 1.83, 2.20(2H, m, CH₂), 2.30(3H, s, 3-Me), 3.02(s, NMe), 3.3, 3.73, 3.85(6H, m, 2'-H, 3'-H, 4'H, 5'-H, CH₂CO), 3.94(3H, s, 11-OMe), 4.2-4.75(5H, m, 17-H, CHCO, 5-H, 6-H, 1'-H), 5.27, 5.65, 6.16(3H, br, D₂O로 교환), 6.94(1H, d, J=2.5 Hz, 10-H), 7.09(1H, s, 4-H), 7.29(1H, d, J=2.5 Hz, 12-H), 8.07(1H, s, 7-H), 8.56(1H, d, J=7 Hz, 16-NH, D₂O로 교환), 12.31(br, D₂O로 교환) 12.85(1H, s, D₂O로 교환), 13.78(br, D₂O로 교환).

75%(v/v) HCO₂H/H₂O(4㎖)내 N-t-Boc-Glu-프라디미신 B(29㎎, .0.031mmo1: HPLC에 의한 95% 순도)의 혼합물을 약 30℃에서 5시간 교반하였다. 이것을 건조상태로 진공 농축하였고, 잔류물을 EtOAc로 분쇄하여 짙은 적색 고체로서 표제 화합물 22㎎(0.025mmo1, 수율 80%)을 얻었다: Rt 6.8분(HPLC, 용출제 A/B=40:60, 유속 : 0.5㎖/분).

IR(KBr)ν_max: 3420, 1740(w), 1640(sh), 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε23,300), 290(ε17,200), 470nm(ε7,700).

MS(FAB) : m/z 838 (M+H-HCO₂H)⁺; 고분해 질량 스펙트럼, C₄₀H₄₄N₃O₁₇(M+H)⁺에 대한 계산치 838.2671, 실측치 838.2659.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 0.91, 1.15(3H, 2d, J=6 Hz, 5'-Me), 1.34(3H, d, J=7 Hz, 17-Me), 2.28, 2.29(3H, 2s, 3-Me), 3.11, 3.21, (3H, 2s, NMe), 3.0-4.0(m), 3.91(3H, s, 11-OMe), 4.3-4.7(5H, m, 17-H, CHCO, 5-H, 6-H, 1'-H), 5.7(3 br), 6.72, (1H, s, 10-H), 6.84(1H, s, 4-H), 7.13(1H, d, J=2.2 Hz, 12-H), 7.75(1H, s, 7-H), 8.13(1H, s, HCO₂), 8.78, 8.85(2H, d, J=7 Hz, 16-NH), 13.17(br).

N-t-BOC-(L)-글루타민산γ-벤질-α-N-히드록시숙신이미드에스테르를 다음의 방법에 따라 제조하였다.

CH₂C1₂(200㎖)내 N-t-BOC-(L)-글루타민산γ-벤질에스테르(10.12g, 30mmo1; Vega Chemical)와 N-히드록시숙신이미드(4.30g, 33mmo1; Aldrich)의 교반 혼합물에 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드(6.81g, 33mmo1; E. Merck)를 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 10분간 가열한다음 상온에서 5시간 교반하였다. 침전물을 제거하고 CH₂C1₂로 세척하였다. 여과물과 세척액을 결합한다음 건조상태로 진공 증발하였다. 잔류 오일을 헥산 그후 n-펜탄으로 분쇄하였다. 반고체를 Et₂O(300㎖)에 용해시키고 불용물을 여과에 의하여 제거하였다. 여과물을 건조상태로 진공 농축하여 회백색 발포체로서 표제 화합물 11.8g(27.2mmo1, 수율 90.6%)을 제공하였다.¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.44(9H, s, t-Bu), 2.05(1H, m, 3-H), 2.17(1H, m, 3-H), 2.64(2H, s, succ-CH₂), 2.65(1H, m, 4-H), 2.86(3H, brs, succ-CH₂, 4-H), 4.50(1H, dd, J=8, 13 Hz, 2-H), 5.16(2H, s, CH₂Ar), 7.41(5H, s, ArHs), 7.73(1H, d, J=8 Hz, NH).

실시예 21

N-(알릴) 프라디미신 B(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=CH₂C=CH₂)의 제조

1,2-디클로로에탄(4㎖)내 프라디미신 B(100mg, 0.15mmol; HPLC에 의한 85% 순도)의 현탁액에 BSA(0.60㎖, 2.42mmol)를 주입하고 혼합물을 건조 질소분위기하 70℃에서 2시간 교반하였다. 얻어진 짙은 갈색용액에 알릴요오다이드(0.088㎖, 0.94mmo1)를 주입하고, HPLC가 반응이 완료된 것을 나타내는 시간인 2.5시간동안 혼합물을 건조질소분위기하 100℃에서 교반하였다. 냉각후, 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 메탄올(10㎖)에 용해시키고 1N HCl(2㎖)로서 처리하였고, 그들은 신속히 진공 농축되어 메탄올을 제거하였다. H₂O로 희석된 잔류물을 H₂O 그후 40% CH₃CN/H₂O로 용출하면서 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Lichroprep RP-18, EM Science)에 의하여 정제시켜 짙은 오렌지색 분말로서 표제 화합물 37㎎(0.051mmo1, 수율 35%)을 얻었다: Rt 4.95분(순도 96%);HPLC, 컬럼 : Microsorb Short One C_18'용출제 : 50% CH₃CN/0.15% 칼륨 포스페이트 완충액, pH 3.5, 유속 : 1.2㎎/분).

IR(KBr)ν_max: 3390, 2927(w), 1731(sh), 1606㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε21,700), 286(ε17,600), 480nm(ε7,600).

MS(FAB) : m/z 906 (M+H)⁺.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.25(3H, d, J=7.2 Hz, 5'-Me), 1.31(3H, d, J=7.3 Hz, 17-Me), 2.27(3H, s, 3-Me), 2.83(3H, brs, NMe), 3.2-3.9(m, 2'-H, 3'H, 4'H, 5'-H), 3.93(3H, s, 11-OMe), 4.35-4.49(3H, m, 5-H, 6-H, 17-H), 4.67(1H, d, 1'-H), 5.50-5.57(2H, m, H₂C=), 5.55-5.64(1H, m, =CH), 5.80-5.95(2H, brs, D₂O로 교환가능), 6.1-6.2(2H, brs, D₂O로 교환가능), 6.89(1H, d, J=2 Hz, 10-H), 7.02(1H, s, 4-H), 7.25(1H, d, J=2 Hz, 12-H), 8.01(1H, s, 7-H), 8.58(1H, d, J=6.9 Hz, CONH, D₂O 교환가능), 12.88(1H, s, D₂O 교환가능).

실시예 22

N-(알릴) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CH₂CH=CH₂)의 제조

1,2-디클로에탄(2㎖)내 프라디미신 A HC1(50mg, 0.057mmol)의 현탁액에 BSA(0.25㎖, 1.01mmol)를 주입하고, 대부분의 프라디미신 A가 용액으로 된 시간인 1시간동안 건조질소 분위기하40℃에서 혼합물을 가열하였다. 이용액에 알릴요오다이드(40μL, 0.44mmol)를 첨가하였고, 혼합물을 환류 온도에서 11시간동안 교반하였다. 냉각후, 혼합물을 진공 농축시켰고, 잔류물을 MeOH(5㎖)에 용해시켜 1N HCl(1㎖)로 처리하였다. 혼합물을 진공 농축시켰고, 잔류물을 처음에 H₂O 그후 80%(V/V) 아세톤/H₂O(pH 3)로 용출하면서 HP-20 컬럼에 의하여 탈염시켜 적색 분말로서 표제 화합물 42㎎(0.048mmo1, 수율 85%)을 얻었다 : Rt 3.10분(순도 93%; HPLC, 컬럼 : Microsorb Short One C₁₈, 4.6㎜ I. D. x 100㎜, 3㎛, Rainin Instrument Co., 용출제 : 50% 완충액(0.15% KH₂PO₄, pH 3.5)/CH₂CN, 유속 : 1.2㎖/분, 검출 : 254mm에서 UV 흡수).

IR(KBr)ν_max: 3400, 1730, 1630(sh), 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 234(ε29,000), 288(ε23,000), 476nm(ε9,850).

MS(FAB) : m/z 881 (M+H)⁺; HRMS; C₄₃H₄₉N₂O₁₈(M+H)⁺에 대한 계산치 881.1980, 실측치 881.2960.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.32(3H, brm, 5'-Me), 1.32(3H, d, J=7.3Hz, 17-Me), 2.28(3H, s, 3-Me), 2.66(3H, br, NMe), 3.0~3.2(3H, m, 5-H, 2-H, 3-H), 3.71(1H, dd, J=11Hz, 5Hz, 5-H), 3.95(3H, s, 11-OMe), 4.3-4.7(5H, m, 17-H, 1-H, 5-H, 6-H, 1'-H), 5.1(2H, m, =CH₂), 5.8(1H, m, CH=), 6.93(1H, d, 10-H), 7.04(1H, s, 4-H), 7.28(1H, d, J=2 Hz, 12-H), 8.04(1H, s, 7-H), 8.57(1H, d, J=6.9 Hz, CONH, D₂O로 교환), 12.88(1H, s, D₂O로 교환).

실시예 23

N-(프로파르길) 프라디미신 B(II, R¹=CH₃, R²=H, R³=CH₃, R⁴=-CH₂C=CH)의 제조

1,2-디클로에탄(5㎖)내 프라디미신 B(100mg, 0.14mmol; HPLC에 의한 85% 순도)의 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.4mmol)를 주입하였고, 혼합물을 질소 분위기하 70℃에서 1.5시간 교반하였다. 여기서 프로파르길 브로마이드(0.11㎖, 0.98mmol, 톨루엔내 80중량% 용액)를 주입하였고, 혼합물을 90℃에서 6시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였고, 메탄올(10㎖)에 용해된 잔류물을 1N NaOH와 혼합하였다. 형성된 침전물을 수집하고 70% MeOH/H₂O로 용출하면서 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Lichroprep RP-18, EM Science)에 의하여 정제시켜 오렌지식 분말로서 표제 화합물 31㎎(0.033mmol, 수율 23%)을 얻었다: Rt 4.05분(순도 83%; HPLC, 조건 : 실시예 21에 제시된 것과 동일).

IR(KBr)ν_max: 3851, 3417, 2921, 2132, 1728, 1608㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 232(ε26,000), 288(ε21,600), 474nm(ε9,050).

MS(FAB) : m/z 747 (M+H)⁺.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.00(3H, d, J=6.2Hz, 5'-Me), 1.31(3H, d, J=6.1Hz, 17-Me), 2.28(3H, s, 3-Me), 2.67(3H, s, NMe), 2.88(1H, br, HCC-), 3.07(1H, br, 4'-H), 3.32(s, D₂O로 교환가능), 3.7(4H, brs), 3.94(3H, s, 11-OMe), 4.38~4.58(4H, m), 6.08(1H, d, D₂O로 교환가능), 6.9(1H, d, J=2Hz, 10-H), 7.05(1H, s, 4-H), 7.25(1H, d, J=2Hz, 12-H), 8.0(1H, s, 7-H), 8.6(1H, d, J=7Hz, CONH, D₂O로 교환가능), 12.91(1H, s, D₂O로 교환가능).

실시예 24

N-(벤질) 프라디미신 A(II, R¹=CH₃, R²=β-D-크실로실, R³=CH₃, R⁴=-CH₂Ph)의 제조

1,2-디클로로에탄(6㎖)내 프라디미신 A HCl(80㎎, 0.095mmol)의 현탁액에 BSA(0.6㎖, 2.42mmol)를 주입하고, 혼합물을 건조 질소 분위기하 70℃에서 1.5시간 가열하였다. 이 용액에 벤질 브로마이드(83㎕, 0.70mmol)를 주입하였고, 혼합물을 70℃에서 17시간 교반하였다. 냉각후, 혼합물을 진공 농축하였고, MeOH(8㎖)에 용해된 잔류물을 1N HCL(0.8㎖)로서 처리하였다. 혼합물을 진공 농축하였고 잔류물을 H₂O, CH₂CN, 그후 MeOH로서 용출하면서 컬럼 크로마토그래피(역상 실리카겔, Lichroprep RP-18, EM Science)에 의하여 정제하였다. MeOH 분율을 진공 농축시켜 갈색 분말로서 표제 화합물 37㎎(0.04mmol, 수율 43%)을 얻었다 : Rt 4.40분(순도 91%; HPLC, 용출제 : 50% 완충액(0.15% KH₂PO₄, pH 3.5)/CH₃CN, 다른 조건 : 실시예 22에 제시된 것과 동일).

IR(KBr)ν_max: 3400, 1740, 1630(sh), 1610㎝^-1.

UV(MeOH : H₂O=1 : 1)λ_max: 232(ε26,000), 284(ε20,900), 480nm(ε9,860).

MS(FAB) : m/z 932 (M+2H)⁺; HRMS; C₄₇H₅₁N₂O₁₈(M+H)⁺에 대한 계산치 931.3137, 실측치 931.3116.

¹H NMR(300 MHz DMSO-d₆)δ(ppm) : 1.16(3H, d, J=6.2Hz, 5'-Me), 1.30(3H, d, J=7.3Hz, 17-Me), 2.17(3H, s, 3-Me), 2.52(3H, br, NMe), 2.9~3.2(m), 3.71(m), 3.92(3H, s, 11-OMe), 4.00(2H, s, CH₂Ph), 4.3~4.5(4H, m, 17-H, 1-H, 5-H, 6-H), 4.60(1H, d, J=6Hz, 1'-H), 6.85(1H, s, 10-H), 6.97(1H, s, 4-H), 7.22(1H, s, 12-H), 7.2~7.4(5H, m, ArHs), 7.94(1H, s, 7-H), 8.59(1H, d, J=7Hz, CONH), 12.97(1H, s).

Claims (12)

1. 다음 식을 가진 화합물 또는 약리학적으로 허용되는 그의 염.

   상기 식에서 R¹은 H, 메틸 및 히드록시메틸 중에서 선택되며, R¹이 메틸 또는 히드록시메틸일 때, 얻어진 아미노산은 D-형태를 가지며; R²는 H 또는 β-D-크실로실이며; R³는 H 또는 메틸이며; 그리고 R⁴는 (C_2-5)알케닐;(C_2-5)알키닐; 카르복시, (C_1-5)알콕시카르보닐, 카르바밀, (C_1-5)알킬카르바밀, 디 (C_1-5)알킬카르바밀 및 술포닐 중에서 선택된 기로 치환된 (C_1-5)알킬; 카르복시, (C_1-5)알콕시카르보닐, 카르바밀, (C_1-5)알킬카르바밀, 디(C_1-5)알킬카르바밀 및 술포닐 중에서 선택된 기로 치환된 (C_2-5)알케닐; 아미노, (C_1-5)알킬아미노, 및 디 (C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로 치환된 (C_1-5)알카노일; L-글루타밀; 포르밀; 벤질; 및 p-톨릴술포닐카르바밀 중에서 선택된다.
2. 제1항에 있어서, R⁴가 카르복시, (C_1-5)알콕시카르보닐, 카르바밀, (C_1-5)알킬카르바밀, 디 (C_1-5)알킬카르바밀 및 술포닐 중에서 선택된 기로 치환된 (C_1-5)알킬인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
3. 제1항에 있어서, R⁴가 카르복시, (C_1-5)알콕시카르보닐, 카르바밀, (C_1-5)알킬카르바밀 및 디 (C_1-5)알킬카르바밀 중에서 선택된 기로 치환된 (C_3-5)알케닐인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
4. 제1항에 있어서, R⁴가 아미노, (C_1-5)알킬아미노 및 디 (C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로 치환된 (C_1-5)알카노일인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
5. 제1항에 있어서, R⁴가 L-글루타밀, 포르밀 및 p-톨릴술포닐카르바밀 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
6. 제1항에 있어서, R⁴가 벤질, (C_3-5)알케닐 및 (C_3-5)알키닐 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
7. 제3항에 있어서, R⁴가 카르복시 및 (C_1-5)알콕시카르보닐 중에서 선택된 기로 치환된 (C_3-5)알케닐인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
8. 제2항에 있어서, R⁴가 카르복시메틸, 카르바밀메틸, (C_1-5)알콕시카르보닐메틸 및 술포닐메틸 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
9. 제7항에 있어서, R⁴가 3-카르복시-2-프로페닐 및 3-(C_1-5)알콕시카르보닐-2-프로페닐 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
10. 제4항에 있어서, R⁴가 아미노, (C_1-5)알킬아미노 및 디 (C_1-5)알킬아미노 중에서 선택된 기로 치환된 (C_2-3)알카노일인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
11. 제4항에 있어서, R⁴가 글리실,N,N-디메틸글리실 및 β-알라닐 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.
12. 인간을 제외한, 치료가 필요한 숙주에 제1항에 화합물의 항진균 유효투여량을 투여하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 진균 간염의 치료방법.