KR960017851A - 유전자를 식물체내에 도입시키는 벡터, 유전자전이 식물체를 제조하는 방법, 및 식물체내에 유전자를 다중으로 도입시키는 방법 - Google Patents

유전자를 식물체내에 도입시키는 벡터, 유전자전이 식물체를 제조하는 방법, 및 식물체내에 유전자를 다중으로 도입시키는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 원하는 유전자를 식물체내에 도입시키기 위한 벡터에 관한 것으로서, 상기 원하는 유전자, 및 마커 유전자로서의 1개 이상의 비정상적 형태-유발 유전자로 이루어지는 벡터에 관한 것이다. 또한 본 발명은 원하는 유전자를 식물체내에 도입시킨, 마커 유전자의 영향이 전혀 없는 유전자전이 식물체의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 상기 방법에서는 원하는 유전자들을 다중으로 다단계로 1개의 식물체에 도입시키게 된다.

Description

유전자를 식물체내에 도입시키는 벡터, 유전자전이 식물체를 제조하는 방법, 및 식물 체네에 유전자를 다중으로 도입시키는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 A, 투메파시엔스(tumefaciens)주 PO22의 T-DNA에 대한 Tea 플라스미드 및 Pst1 단편 제한 엔도누클레아제 지도를 도시한 것이다.
제2도는 plPT2의 구성도를 도시한 것이다.
제3도는 plPT2로부터 plPT3의 구성을 도시한 것이다.

Claims (36)

  1. 원하는 유전자를 식물체내에 도입시키기 위한 벡터로서, 상기 원하는 유전자, 및 마커 유전자로서의 1개이상의 비정상적 형태-유발 유전자로 이루어지는 벡터.
  2. 제1항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 아그로박테리움 속의 미생물로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 벡터.
  3. 제1항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 사이토킨 합성 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  4. 제3항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 아그로박테리움 투메파시엔스의 T-DNA에 존재하는 이소펜틸트랜스페라제 ipt 유정자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  5. 제1항에 있어서, 상기 비정상적인 형태-유발 유전자가 rol 유전자로 부터 선택된 1개 이상의 유전자인것을 특징으로 하는 벡터.
  6. 제5항에 있어서, 상기 rol 유전자가 아그로박테리움 리조게네스의 T-DNA에 존재하는 rol A, rol B 및 rol C 유전자를 함유하는 rol 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  7. 원하는 유전자를 마커 유전자와 함께 식물체내에 도입시키기 위한 벡터로서, 상기 마커 유전자는 자체의 발현 후에는 이 유전자가 존재하고 기능을 하는 DNA로부터 제거하여 자체의 기능을 소실하게 되고, 마커 유전자의 발현과 그 기능의 소실은 상기 마커 유전자를 도입시키는 식물체 세포로부터 유래된 조직의 형태적 변화에 의해 검출할 수 있는 벡터.
  8. 원하는 유전자를 식물체내에 도입시키기 위해 원하는 유전자, 마커 유전자로서의 1개 이상의 비정상적 형태-유발 유전자, 및 제거가 가능한 DNA원소로 이루어지는 벡터로서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자는 제거가 가능한 DNA원소와 일체식으로 수반되는 태양을 가지도록 위치하고, 여기에서 상기 원하는 유전자는 제거가 가능한 DNA원소와 일체식으로 수반되지 않는 태양을 가지도록 위치하는 벡터.
  9. 제8항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 상기 제거가 가능한 DNA원소내에 존재하는 것을 특징으로 하는 벡터.
  10. 제8항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 트래스포손인 것을 특징으로 하는 벡터.
  11. 제8항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 부위-특이적 재조합 시스템으로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 벡터.
  12. 제8항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 아그로박테리움 속의 미생물로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 벡터.
  13. 제8항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 사이토킨 합성 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  14. 제12항에 있어서, 상기 사이토킨 합성 유전자가 아그로박테리움 투메파시엔스의 T-DNA에 존재하는 이소펜틸트랜스페라제 ipt 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  15. 제8항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 rol 유전자로부터 선택된 1개 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  16. 제15항에 있어서, 상기 rol 유전자가 아그로박테리움 리조게네스의 T-DNA에 존재하는 rol A, rol B 및 rol C 유전자를 함유하는 rol 유전자인 것을 특징으로 하는 벡터.
  17. 마커 유전자의 영향이 없이 유전자전이 식물체를 제조하는 방법으로서, (A) 원하는 유전자, 마커 유전자로서 1개 이상의 비정상 형태-유발 유전자, 및 제거 가능한 DNA원소를 포함하는 벡터를 식물세포에 도입시키되, 이때 비정상 형태-유발 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내도록 위치하고, 상기 원하는 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내지 않도록 위치하도록 하는 단계, (B) 상기 단계(A)에서 얻은 식물세포를 배양하고, 배양 도중에 나타나는 비정상 형태의 식물조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (C) 상기 단계(B)에서 선별한 비정상 형태의 조직을 배양하고, 배양도중 나타나는 정상형태의 조직을 검출하여 선별하는 단계로 이루어지는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 상기 제거가 가능한 DNA원소내에 존재하는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  19. 제17항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 트래스포손인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  20. 제17항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 부위-특이적 재조합 시스템으로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  21. 제17항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 아그로박테리움 속의 미생물로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  22. 제17항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 사이토킨 합성 유전자인 것을 특징으로 유전자전이 식물체의 제조방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 사이토킨 합성 유전자가 아그로박테리움 투메파시엔스의 T-DNA에 존재하는 이소펜틸트랜스페라제 ipt 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  24. 제17항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 rol 유전자로부터 선택된 1개 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 rol 유전자가 아그로박테리움 리조게네스의 T-DNA에 존재하는 rol A, rol B 및 rol C 유전자를 함유하는 rol 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  26. 원하는 2개 이상의 유전자를 1개의 식물체에 도입시키는 방법으로서, (A) 원하는 유전자, 마커 유전자로서 1개 이상의 비정상 형태-유발 유전자, 및 제거 가능한 DNA원소를 포함하는 벡터를 식물세포에 도입시키되, 이때 비정상 형태-유발 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내도록 위치하고, 상기 원하는 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내지 않도록 위치하도록 하는 단계, (B) 상기 단계(A)에서 얻은 식물세포를 배양하고, 배양 도중에 나타나는 비정상 형태의 식물조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (C) 상기 단계(B)에서 선별한 비정상 형태의 조직을 배양하고, 배양도중 나타나는 정상형태의 조직을 검출하여 선별하는 단계로 이루어지는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 상기 제거가 가능한 DNA원소내에 존재하는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  28. 제26항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 트래스포손인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  29. 제26항에 있어서, 상기 제거가 가능한 DNA원소가 부위-특이적 재조합 시스템으로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  30. 제26항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 아그로박테리움 속의 미생물로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  31. 제26항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 사이토킨 합성 유전자인 것을 특징으로 유전자전이 식물체의 제조방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 사이토킨 합성 유전자가 아그로박테리움 투메파시엔스의 T-DNA에 존재하는 이소펜틸트랜스페라제 ipt 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  33. 제26항에 있어서, 상기 비정상적 형태-유발 유전자가 rol 유전자로부터 선택된 1개 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 rol 유전자가 아그로박테리움 리조게네스의 T-DNA에 존재하는 rol A, rol B 및 rol C 유전자를 함유하는 rol 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자전이 식물체의 제조방법.
  35. 마커 유전자의 영향이 없는 유전자전이 식물체로서, 다음의 단계들로 이루어지는 제조방법에 의해 제조 되는 유전자전이 식물체 : (A) 원하는 유전자, 마커 유전자로서 1개 이상의 비정상 형태-유발 유전자, 및 제거 가능한 DNA원소를 포함하는 벡터를 식물세포에 도입시키되, 이때 비정상 형태-유발 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내도록 위치하고, 상기 원하는 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내지 않도록 위치하도록 하는 단계, (B) 상기 단계(A)에서 얻은 식물세포를 배양하고, 배양 도중에 나타나는 비정상 형태의 식물조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (C) 상기 단계(B)에서 선별한 비정상 형태의 조직을 배양하고, 배양도중 나타나는 정상형태의 조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (D) 상기 정상 형태의 조직을 배양하여 식물체를 재생시키는 단계.
  36. 원하는 2개 이상의 유전자를 1개의 식물체에 도입시키는 다음 단계들로 이루어지는 방법에 의해 제조된 유전자전이 식물체 : (A) 원하는 유전자, 마커 유전자로서 1개 이상의 비정상 형태-유발 유전자, 및 제거 가능한 DNA원소를 포함하는 벡터를 식물세포에 도입시키되, 이때 비정상 형태-유발 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내도록 위치하고, 상기 원하는 유전자는 제거 가능한 DNA원소와 일체화되는 태양을 나타내지 않도록 위치하도록 하는 단계, (B) 상기 단계(A)에서 얻은 식물세포를 배양하고, 배양 도중에 나타나는 비정상 형태의 식물조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (C) 상기 단계(B)에서 선별한 비정상 형태의 조직을 배양하고, 배양도중 나타나는 정상형태의 조직을 검출하여 선별하는 단계, 및 (D) 상기 단계(A)내지 (C)단계를 1회 이상 수행하는 단계, 및 (E) 상기 정상 형태의 조직을 배양하여 식물체를 재생시키는 단계.
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