KR950003921B1 - 장쇄 카복실산이미드 에스테르 - Google Patents

장쇄 카복실산이미드 에스테르 Download PDF

Info

Publication number
KR950003921B1
KR950003921B1 KR1019920006921A KR920006921A KR950003921B1 KR 950003921 B1 KR950003921 B1 KR 950003921B1 KR 1019920006921 A KR1019920006921 A KR 1019920006921A KR 920006921 A KR920006921 A KR 920006921A KR 950003921 B1 KR950003921 B1 KR 950003921B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
acid imide
sod
solution
protein
Prior art date
Application number
KR1019920006921A
Other languages
English (en)
Other versions
KR920019743A (ko
Inventor
이와오 에바시
데츠오 다키가와
마사야스 이노우에
Original Assignee
구라레이 캄파니, 리미티드
나카무라 히사오
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 구라레이 캄파니, 리미티드, 나카무라 히사오 filed Critical 구라레이 캄파니, 리미티드
Publication of KR920019743A publication Critical patent/KR920019743A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR950003921B1 publication Critical patent/KR950003921B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C07D209/48—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3, e.g. phthalimide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/58—[b]- or [c]-condensed
    • C07D209/72—4,7-Endo-alkylene-iso-indoles
    • C07D209/76—4,7-Endo-alkylene-iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/92—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with a hetero atom directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/94—Oxygen atom, e.g. piperidine N-oxide

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

내용 없음.

Description

장쇄 카복실산이미드 에스테르
제1도는 전기영동의 결과를 나타내는 모식도이며 (a)는 참고 실시예 1에서 사용한 SOD의 전기 영동도의 모식도이며 (b)는 참고 실시예 1에서 수득한 SOD 유도체 C의 전기 영동도의 모식도이며,
제2도는 참고 실시예 1에서 수득한 SOD 유도체 C의 적외선 흡수 스펙트럼을 도시한 도면이며,
제3도는 전기영동의 결과를 도시한 모식도이며 (a)는 참고 실시예 2에서 사용한 SOD의 전기 영동도의 모식도이며 (b)는 참고 실시예 2에서 수득한 SOD 유도체의 전기 영동도의 모식도이며,
제4도는 참고 실시예 2에서 수득한 SOD 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 도시한 도면이며,
제5도는 전기영동의 결과를 도시한 모식도이며 (a)는 참고 실시예 3에서 사용한 SOD의 전기 영동도의 모식도이며 (b)는 참고 실시예 3에서 수득한 SOD 유도체의 전기 영동도의 모식도이며,
제6도는 참고 실시예 3에서 수득한 SOD 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 도시한 도면이며,
제7도는 전기영동의 결과를 도시한 모식도이며 (a)는 참고 실시예 4에서 사용한 NCS의 전기 영동도의 모식도이며 (b)는 참고 실시예 4에서 수득한 NCS 유도체의 전기 영동도의 모식도이며,
제8도는 참고 실시예 4에서 수득한 NCS 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 도시한 도면이며,
제9도는 전기영동의 결과를 나타내는 모식도이며 (a)는 참고 실시예 5에서 사용한 NCS의 전기 영동도의 모식도이며 (b)는 참고 실시예 5에서 수득한 NCS 유도체의 전기 영동도의 모식도이며,
제10도는 참고 실시예 5에서 수득한 NCS 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 도시한 도면이며,
제11도는 시험 실시예 1에서 측정한 혈증 농도의 시간 경과에 따른 변화를 도시한 도면이며 (1), (2), (3) 및 (4)는 각각 SOD, 참고 실시예 1에서 수득한 SOD 유도체, A, SOD 유도체 B 및 SOD 유도체 C의 혈중 농도의 시간 경과에 따른 변화를 나타낸다.
본 발명은 장쇄 카복실산이미드 에스테르 또는 이의 염에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 장쇄 카복실산이미드 에스테르 또는 이의 염은 생리활성을 갖는 효소 또는 단백질(이하, 효소 및 단백질을 단백질로 총칭한다)의 생리 활성을 대체로 유지시킨 그대로, 당해 단백질과 비교하여 대폭적으로 연장된 혈증 반감기를 가지며 항원성이 없는 동시에 생체내 투여할 수 있는 단백질 유도체를 제공하는 단백질의 화학개질제로서 유용하다.
종래에 단백질을 각종 개질제로써 개량하는 시도가 많이 행해졌다. 가장 활발하게 연구가 수행되는 개질제로서 폴리에틸렌글리콜(이하, 이것을 PEG로 약칭한다)을 열거할 수 있다. PEG는 예를 들면, 항암제로서의 아스파라기나제, 아루기나제, 인터류킨-2(이하, 이것을 IL-2라고 약칭한다)등의 개질, 혈전 용해제로서의 유로키나제, 스트렙코키나제, 틱슈플라스미노겐 액티베이터(이하, 이것을 TPA로 약칭한다)등의 개질, 효소 결손증 치료제로서 β-글루코시다제, β-글루클로니다제, α-갈락토시다제, 아데노신데아미나제등의 개질, 통풍 치료제로서의 유리카제의 개질, 항염증제 또는 허혈성질환 치료제로서의 슈퍼옥사이드디스무타제(이하, 이것을 SOD로 약칭한다)의 개질, 당뇨병 치료제로서의 인슐린의 개질, 고리리루빈 혈증 치료제로서의 비리루빈옥시다제의 개질 등에 사용된다. 또한, 최근에 조혈 촉진인자의 하나인 사람 과립구콜로니 자극인자(이하, 이것을 G-CSF로 약칭한다)를 PEG로 개질시키고 이의 혈중 수명을 연장하며 조혈장해의 치료 등에 사용되도록 하는 시도를 하고 있다[일본국 공개 특허공보 제(평)1-316400호 및 국제공개공보 제 WO90/06952호 참조].
또한 PEG 이외의 개질제로서 혈청 알부민, 덱스트란 등의 천연 고분자 물질, 폴리아스파라긴산, 부분반에스테르화된 스티렌-무수말레산 공중합체(이하, 이것을 SMA라고 약칭한다), 장쇄 지방산의 반응성 유도체 등을 예시할 수 있다(「단백질 하이브리드」, 제1장, 제2장, 제3장 및 제6장, 교리쓰숫판 가부시키가이샤, 1987년 4월 1일 발행 ; 「연속된 단백질 하이브리드」, 제3장, 제4장 및 제6장, 고리쓰슛판 가부시키가이샤, 1988년 5월 20일 발행 ; 「SOD 노신짓켄」, 107페이지, 닛폰악셀·슈프린거슛판 가부시키가이샤, 1990년 12월 20일 발행 참조).
혈청 알부민으로 개질된 SOD에서는 항원성이 있다[에이쳔츠·앤드·액션즈(Agents and Actions), 10권, 231페이지(1980)참조]. 또한, 덱스트란, PEG, 폴리아스파라긴산, SMA 등의 개질제는 고분자 화학적으로는 구조가 특정될 수 있지만, 이의 분자량에는 분포가 존재하므로 이들로써 개질된 단백질의 분자량은 일정하지 않으며 의약적이 유효성분은 단일한 화학구조를 갖는 것이 바람직한 상황임을 고려하면 실용상 문제가 있다.
그러나, 본 발명의 목적은 비개질 단백질과 비교하여 대폭적으로 혈중 수명이 연장되고 항원성이 없으며 생체에 투여할 수 있는 단백질 유도체를 제공하는 단백질의 화학개질제인 동시에, 단일한 화학구조를 갖는 신규한 장쇄 카복실산이미드 에스테르 또는 이의 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 이러한 목적 뿐만 아니라 기타의 목적 및 잇점은 하기의 상세한 기술로 부터 본 분야의 숙련인에게는 명백해질 것이다.
본 발명에 따라 하기한 일반식(Ⅰ)의 장쇄 카복실산이미드 에스테르[이하, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)이라고 약칭한다]또는 이의 염이 제공될 수 있다 :
상기식에서, W는 하나 이상의 산소원자, 황원자 또는 일반식 -N(R1)-(여기에서, R1은 저급 알킬이다)의 기로 중단될 수 있는 2가의 탄화수소기이며, X는 치환기를 가질 수 있는 2가의 탄화수소이다.
본 발명의 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)에서 W로 나타낸 2가 탄화수소기로서는, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 단백질 화학 개질제로서 유용성을 고려할 경우, 주쇄 원자수가 8 내지 28인 것이 바람직히며 10 내지 20인 것이 보다 바람직하다.
또한 R1의 저급 알킬기로서는 예를 들면, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기 등을 열거할 수 있다.
그러나, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)에서 W로 나타낸 장쇄 탄화수소기로는 예를 들면, 하기에 기재한 기를 열가할 수 있다 :
(CH2)10, (CH2)11, (CH2)12, (CH2)13, (CH2)14,
(CH2)15, (CH2)16, (CH2)17, (CH2)18, (CH2)19,
(CH2)20, CH2CH=CH(CH2)7, (CH2)2CH=CH(CH2)7,
(CH2)3CH=CH(CH2)7, (CH2)4CH=CH(CH2)7,
(CH2)5CH=CH(CH2)7, (CH2)6CH=CH(CH2)7,
(CH2)7CH=CH(CH2)7, (CH2)8CH=CH(CH2)7,
(CH2)9CH=CH(CH2)7, (CH2)10CH=CH(CH2)7,
(CH2)11CH=CH(CH2)7,
(CH2)8CH=CHCH2, (CH2)8CH=CH(CH2)2,
(CH2)8CH(CH2)3, (CH2)8CH=CH(CH2)4
(CH2)8CH=CH(CH2)5, (CH2)8CH=CH(CH2)6,
(CH2)8CH=CH(CH2)7, (CH2)8CH=CH(CH2)8,
(CH2)8CH=CH(CH2)9, (CH2)8CH=CH(CH2)10, CH2CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)2CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)3CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)4CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)5CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)6CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)7CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)8CH=CHCH2, CH=CH(CH2)7,
(CH2)2-O-(CH2)7, (CH2)2-O-(CH2)8,
(CH2)2-O-(CH2)9, (CH2)-O-(CH2)10,
(CH2)2-O-(CH2)11, (CH2)2-O-(CH2)12,
(CH2)2-O-(CH2)13, (CH2)2-O-(CH2)14,
(CH2)2-O-(CH2)15, (CH2)2-O-(CH2)16,
(CH2)2-O-(CH2)17, (CH2)4-O-(CH2)5,
(CH2)4-O-(CH2)6, (CH2)4-O-(CH2)7,
(CH2)4-O-(CH2)8, (CH2)4-O-(CH2)9,
(CH2)4-O-(CH2)10, (CH2)4-O-(CH2)11,
(CH2)4-O-(CH2)12, (CH2)4-O-(CH2)13,
(CH2)4-O-(CH2)14, (CH2)4-O-(CH2)15,
(CH2)6-O-(CH2)3, (CH2)6-O-(CH2)4,
(CH2)6-O-(CH2)5, (CH2)6-O-(CH2)6,
(CH2)6-O-(CH2)7, (CH2)6-O-(CH2)8,
(CH2)6-O-(CH2)9, (CH2)6-O-(CH2)10,
(CH2)6-O-(CH2)11, (CH2)6-O-(CH2)12,
(CH2)6-O-(CH2)13, (CH2)8-O-CH2,
(CH2)8-O-(CH2)2, (CH2)8-O-(CH2)3,
(CH2)8-O-(CH2)4, (CH2)8-O-(CH2)5,
(CH2)8-O-(CH2)6, (CH2)8-O-(CH2)7,
(CH2)8-O-(CH2)8, (CH2)8-O-(CH2)9,
(CH2)8-O-(CH2)10, (CH2)8-O-(CH2)11,
(CH2)10-O-CH2, (CH2)10-O-(CH2)2,
(CH2)10-O-(CH2)3, (CH2)10-O-(CH2)4,
(CH2)10-O-(CH2)5, (CH2)10-O-(CH2)6,
(CH2)10-O-(CH2)7, (CH2)10-O-(CH2)8,
(CH2)10-O-(CH2)9, (CH2)12-O-CH2,
(CH2)12-O-(CH2)2, (CH2)12-O-(CH2)3,
(CH2)12-O-(CH2)4, (CH2)12-O-(CH2)5,
(CH2)12-O-(CH2)6, (CH2)12-O-(CH2)7, CH2-O-(CH2)5CH=CH(CH2)7,
(CH2)2-O-(CH2)5CH=CH(CH2)7,
(CH2)3-O-(CH2)5CH=CH(CH2)7,
(CH2)4-O-(CH2)5CH=CH(CH2)7,
(CH2)5-O-(CH2)5CH=CH(CH2)7,
(CH2)2-S-(CH2)7, (CH2)2-S-(CH2)8,
(CH2)2-S-(CH2)9, (CH2)2-S-(CH2)10,
(CH2)2-S-(CH2)11, (CH2)2-S-(CH2)12,
(CH2)2-S-(CH2)13, (CH2)2-S-(CH2)14,
(CH2)2-S-(CH2)15, (CH2)2-S-(CH2)16,
(CH2)2-S-(CH2)17, (CH2)4-S-(CH2)5,
(CH2)4-S-(CH2)6, (CH2)4-S-(CH2)7,
(CH2)4-S-(CH2)8, (CH2)4-S-(CH2)9,
(CH2)4-S-(CH2)10, (CH2)4-S-(CH2)11,
(CH2)4-S-(CH2)12, (CH2)4-S-(CH2)13,
(CH2)4-S-(CH2)14, (CH2)4-S-(CH2)15,
(CH2)6-S-(CH2)3, (CH2)6-S-(CH2)4,
(CH2)6-S-(CH2)5, (CH2)6-S-(CH2)6,
(CH2)6-S-(CH2)7, (CH2)6-S-(CH2)8,
(CH2)6-S-(CH2)9, (CH2)6-S-(CH2)10,
(CH2)6-S-(CH2)11, (CH2)6-S-(CH2)12,
(CH2)6-S-(CH2)13, (CH2)8-S-CH2,
(CH2)8-S-(CH2)2, (CH2)8-S-(CH2)3,
(CH2)8-S-(CH2)4, (CH2)8-S-(CH2)5,
(CH2)8-S-(CH2)6, (CH2)8-S-(CH2)7,
(CH2)8-S-(CH2)8, (CH2)8-S-(CH2)9,
(CH2)8-S-(CH2)10, (CH2)8-S-(CH2)11,
(CH2)10-S-CH2, (CH2)10-S-(CH2)2,
(CH2)10-S-(CH2)3, (CH2)10-S-(CH2)4,
(CH2)10-S-(CH2)5, (CH2)10-S-(CH2)6,
(CH2)10-S-(CH2)7, (CH2)10-S-(CH2)8,
(CH2)10-S-(CH2)9, (CH2)12-S-CH2,
(CH2)12-S-(CH2)2, (CH2)12-S-(CH2)3,
(CH2)12-S-(CH2)4, (CH2)12-S-(CH2)5,
(CH2)12-S-(CH2)6, (CH2)12-S-(CH2)7,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)7,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)8,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)9,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)10,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)11,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)12,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)13,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)14,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)15,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)16,
(CH2)2-N(CH3)-(CH2)17,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)5,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)6,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)7,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)8,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)9,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)10,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)11,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)12,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)13,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)14,
(CH2)4-N(CH3)-(CH2)15,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)3,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)4,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)5,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)6,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)7,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)8,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)9,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)10,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)11,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)12,
(CH2)6-N(CH3)-(CH2)13,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)7,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)8,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)9,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)10,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)11,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)12,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)13,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)14,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)15,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)16,
(CH2)2-N(C2H5)-(CH2)17,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)5,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)6,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)7,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)8,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)9,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)10,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)11,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)12,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)13,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)14,
(CH2)4-N(C2H5)-(CH2)15,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)3,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)4,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)5,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)6,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)7,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)8,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)9,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)10,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)11,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)12,
(CH2)6-N(C2H5)-(CH2)13,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)4,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)5,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)6,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)7,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)8,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)9,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)10,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)11,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)12,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)13,
(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)14,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)2,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)3,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)4,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)5,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)6,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)7,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)8,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)9,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)10,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)11,
(CH2)4-O-(CH2)2-O-(CH2)12,
(CH2)2-S-S-(CH2)7, (CH2)2-S-S-(CH2)9,
(CH2)2-S-S-(CH2)11, (CH2)2-S-S-(CH2)13,
(CH2)2-S-S-(CH2)15, (CH2)4-S-S-(CH2)5,
(CH2)4-S-S-(CH2)7, (CH2)4-S-S-(CH2)9,
(CH2)4-S-S-(CH2)11, (CH2)4-S-S-(CH2)13,
(CH2)6-S-S-(CH2)3, (CH2)6-S-S-(CH2)5,
(CH2)6-S-S-(CH2)7, (CH2)6-S-S-(CH2)9,
(CH2)6-S-S-(CH2)11, (CH2)8-S-S-CH2,
(CH2)8-S-S-(CH2)3, (CH2)8-S-S-(CH2)5,
(CH2)8-S-S-(CH2)7, (CH2)8-S-S-(CH2)9,
한편, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 이미드 부분은 당해 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 단백질 화학개질제로서의 유용성을 고려할때, 이미드이면 어떠한 구조도 양호하다. 따라서, 상기한 일반식(Ⅰ)에서 X의 기는 본 발명의 본질적인 부분은 아니며 2가의 탄화수소기이면 특별히 제한되지 않는다.
그러나, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 이미드 부분으로는 원료를 입수하기 쉽고 합성이 용이한 것에서 하기 일반식(A)의 이미드 부분(이하, 이것을 이미드 부분 A로 약칭한다)또는 하기 일반식(B)의 이미드부분(이하, 이것을 이미드 부분 B로 약칭한다)이 바람직하며 그 중에서도 이미드 부분 A가 보다 바람직하다 :
상기식에서, R2,R3,R4및 R=는 동일하거나 상이하며 각각 수소원자, 알킬기, 아릴기, 아르일킬기 또는 -SO3H, 일반식 -OR6(여기에서, R6은 수소, 알킬기, 아릴기, 아르알킬기 또는 아실기이다), 일반식 -NR7R8(여기에서, R7, R8은 동일하거나 상이하며 각각 알킬기, 아르알킬기 또는 아실기이다), 일반식 -CO2R9(여기서에서, R9는 수소, 알킬기, 아릴기, 아르알킬기이다)의 기이며; 또한 R2, R3, R4및 R5는 이들의 결합하는 탄소 원자와 함께 치환기를 가질 수 있는 환을 형성할 수 있으며; 또한 R2와 R3및/또는 R4와 R5는 동시에 각각 치환기를 가질 수 있는 메틸렌기일 수 있으며; R10,R11,R12,R13,R14및 R15는 동일하거나 상이하며 각각 수소원자, 알킬기, 아릴기, 아르알킬기 또는 -SO3H, 일반식 -OR6, 일반식 -NR7R8, 일반식 -CO2R9의 기이다.
상기한 일반식(A) 및 (B)에서 R2,R3,R4,R5,R6,R7,R8,R9,R10,R11,R12,R13,R14및 R15의 알킬기로는 예를들면, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, 옥타데실기 등을 열거할 수 있다. 또한 아릴기로는 예를 들면, 페닐기, p-브로모페닐기 등을 열거할 수 있다. 또한 R6,R7및 R8의 기로는 예를 들면, 아세틸기, 벤질기 등을 열거할 수 있다.
그러나, 일반식 -OR6의 기로는 수산기, 메톡시기, 에톡시기, 프로폭시기, 이소프로폭시기 등의 알콕시기, 페녹시기, p-브로모페녹시기 등의 아릴옥시기 및 벤질옥시기, p-메톡시벤질옥시기 등의 아르알킬옥시기를 열거할 수 있다. -NR7R8의 기로는 디메틸아미노기, 디에틸아미노기 등의 치환 아미노기 및 N-메틸아세트이미드기, N-메틸벤즈이미드기 등의 N-치환 아실이미드기를 열거할 수 있다. 또한 일반식 -CO2R9의 기로는 카복실기, 메톡시카보닐기, 에톡시카보닐기, 프로폭시카보닐기, 이소프로폭시카보닐기, 벤질옥시카보닐기, p-메톡시벤질옥시카보닐기 등의 알콕시카보닐기 및 페녹시카보닐기, p-브로모페녹시카보닐기 등의 아릴시카보닐기를 열거할 수 있다.
한편, 상기한 일반식(A)에서 R2,R3,R4및 R5가 이들이 결합된 탄소원자와 함께 치환기를 가질 수 있는 포화 또는 불포화 환을 형성하는 경우, 당해 포화 환 또는 치환기를 가질 수 있는 불포화 환으로는 기본 골격으로서 벤젠환, 사이클로헥사환, 사이클로펜탄환과 함께 비사이클로[2,2,1]헵탄골격, 비사이클로[2,2,1]헵탄-2-엔 골격, 7-옥사비사이클로[2,2,1]헵탄 골격 및 7-옥사비사이클로[2,2,1]헵탄-2-엔 골격 등을 갖는 것을 열거할 수 있다.
이러한 포화 또는 불포화 환을 갖는 이미드 부분 A의 구체적인 예로서 하기에 기재한 것을 열거할 수 있다 :
또한, R2와 R3및/또는 R4와 R5가 동시에 각각 치환기를 가질 수 있는 메틸렌기인 경우, 당해 치환기를 가질 수 있는 메틸렌기로는 메틸렌기, 이소프로필리덴기 등을 열거할 수 있다.
이러한 치환기를 가질 수 있는 메틸렌기를 갖는 이미드부분 A의 구체적인 예로서 하기에 기재한 것을 열거할 수 있다 :
장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)는 염으로는 리튬, 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속 및 마그네슘, 칼슘등의 알칼리토금속 등의 염을 열거할 수 있다. 이러한 염은 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 장쇄 카복실산 부분 및/또는 이미드 부분에서 염을 형성시킨다.
장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)는 하기한 일반식(Ⅱ)의 장쇄 디카복실산[이하, 이것을 장쇄 디카복실산(Ⅱ)이라고 약칭한다]을 디사이클로헥실카보디이미드(이하, 이것을 DCC라고 약칭한다)의 존재하에 하기한 일반식(Ⅲ)의 N-하이드록시이드[이하, 이것을 N-하이드록시이미드(Ⅲ)라고 약칭한다]1당량과 탈수축합시킴으로써 제조할수 있다 :
HO2C-W-CO2H (Ⅱ)
상기식에서, W 및 X는 상기한 바와 동일하다.
또한, 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)는 R2와 R3및/또는 R4와 R5가 동시에 각각 치환기를 가질 수 있는 메틸렌기를 형성하는 경우를 제외하고 장쇄 디카복실산(Ⅱ)을 DCC의 존재하에 벤질알콜 1당량과 탈수 축합시킴으로써 하기한 일반식(Ⅳ)의 장쇄 디카복실산모노벤질 에스테르[이하, 이것을 장쇄 디카복실산모노벤질 에스테르(Ⅳ)라고 약칭한다]를 수득한 다음, 당해 장쇄 디카복실산모노벤질 에스테르(Ⅳ)를 통상적인 방법에 따라 N-하이드록시이미드(Ⅲ)와 반응시킴으로써 하기한 일반식(Ⅴ)의 장쇄 디카복실산모노벤질모노이미드 에스테르[이하, 이것을 장쇄 디카복실산 디에스테르(Ⅴ)라고 약칭한다]를 수득하고, 이어서 당해 장쇄 디카복실산 디에스테르(Ⅴ)의 벤질에스테르 부분을 통상적인 방법에 따라 가수소 분해법으로 제거함으로써 제조할 수 있다 :
상기식에서, W 및 X는 상기한 바와 같다.
장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 염은 통상적인 염형성 반응에 따라 합성할 수 있다. 또한 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 이미드 부분이 염을 형성하는 경우에는 당해 장쇄 카복실산이미드 에스테르(Ⅰ)의 염은 염을 형성하는 N-하이드록시이미드(Ⅲ)를 출발원료로 하며 상기와 동일한 반응을 실시함으로써 합성시킬 수 있다.
본 발명의 장쇄 카복실산아미드(Ⅰ) 또는 이의 염(이하, 이것을 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체라고 약칭한다)은 단백질의 화학 개질제로서 유용하다.
장쇄 카복실산아미드 에스테르 유도체와 단백질을 pH 6 내지 10의 수용액 속에서 반응시킴으로써 하기 일반식의 단백질 유도체를 제조할 수 있다.
[단백질][Z]n
상기식에서, [단백질]은 아미노기로 치환하여 아미노기에서 하나의 수소원자를 제거시킨 잔기를 n개를 갖는 단백질이며, [Z]는 일반식(여기에서, W는 상기한 바와 같다)의 장쇄 디카복실산(Ⅱ)의 한쪽 카복실기에서 수산기를 제거시킨 잔기(이하, 이것을 장쇄 카복실산 잔기를 약칭한다)이며, n은 [Z]가 [단백질]과 아미드 결합하는 수의 평균치이며 1 내지 8의 범위이다.
단백질과 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체와의 반응은 단백질에 따라 다소 상이하지만 통상적으로 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 아세트산나트륨, 인산나트륨 등의 염의 수용액속에 단백질을 용해시키고, 수득한 용액에 분말상의 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체 또는 디메틸설폭시드 등의 유기용매에 용해시킨 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체를 첨가함으로써 실시된다. 반응중에 용액의 pH는 6 내지 10의 범위내로 유지시킬 필요가 있다. pH가 6보다 낮은 경우에는 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체의 용해성이 저하되어 반응은 진행시키기 어렵게 된다. 또한 pH가 10보다 높은 경우에는 단백질의 활성을 잃어버리는 경우가 많으며 본 발명의 단백질 유도체를 효율적으로 수득할 수 없다. 반응온도로는 단백질의 변성온도 이하의 온도, 통상적으로 약 3 내지 50℃의 범위의 온도가 바람직하며 약 3 내지 40℃의 범위의 온도가 보다 바람직하다. 또한 반응시간은 반응온도, 장쇄 카복실산이미드 에스레르 유도체의 첨가방법에 따라 상이하며 통상적으로 10분 내지 30일 동안의 범위이다. 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체의 사용량은 단백질 1몰에 대해 약 1 내지 100몰의 범위이다. 단백질로서 SOD를 사용하는 경우에 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체의 사용량은 SOD 1몰에 대해 약 2 내지 50몰의 범위로 하는 것이 바람직하다. 이의 사용량에 따라 단백질에 결합시키는 장쇄 카복실산 잔기의 분자수를 조정할 수 있다.
이와 같이 수득된 반응액에는 단백질 유도체와 미반응의 단백질 및 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체등이 존재하지만, 이러한 반응액을 여과하고 여액을 겔여과하며 수득된 단백질 유도체를 함유하는 용출액을 필요에 따라 하이드로포빅, 크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피 등으로 처리한 다음, 한외여과 처리함으로써 농축하고 동결 건조시킴으로써 단백질 유도체의 교형물을 수득할 수 있다.
상기한 반응에 따라 단백질이 갖는 아미노기와 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체가 갖는 이미드 에스테르 부분이 반응하여 단백질 유도체가 생성된다.
상기한 반응에 따라 수득된 단백질 유도체는 단백질에 각종 분자수의 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체가 반응하여 수득된 것이 혼합물이며 개개의 유도체의 한 분자당 결합된 장쇄 카복실산 잔기의 수는 동일하지 않다. 따라서, 단백질 유도체를 나타내는 상기한 일반식에서 은 단백질 한 분자에 결합된 장쇄 카복실산 잔기수의 평균치이다. 그러나, 단백질에 결합된 장쇄 카복실산 잔기의 동수의 단백질 유도체를 원하는 경우에는 상기한 방법에 따라 수득되는 단백질 유도체를 다시 겔여과, 이온교환 크로마토그래피 등의 조작으로 처리함으로써 원하는 단백질 유도체를 수득할 수 있다. 또한, 상기한 반응 및 반응후의 처리에서 단백질 유도체가 갖는 카복실기가 알칼리 금속염 또는 암모늄염을 형성할 가능성이 있지만 이러한 염을 형성하는 카복실기를 갖는 단백질 유도체도 의약적인 유효성분 화합물로서 사용하는데 부적당한 것은 아니다.
단백질 유도체는 단백질 한 분자에 대해 1 내지 8의 범위의 수는 장쇄 카복실산 잔기가 결합된 것이며 비개질 단백질과 비교하여 대폭적으로 연장된 혈중 반감기를 갖는다. 단백질 유도체 중에서 네오카르티노스타틴(이하, 이것을 NCS라고 약칭한다) 유도체는 혈중 수명연장 및 화학구조 간략화라는 관점에서 NCS의 1위치의 알라닌 및 20위치의 라이신 양쪽의 아미노기를 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체로 개질시킨 것이 바람직하다.
원료로서 사용할 수 있는 단백질로서는 예를 들면 다음과 같은 것을 열거할 수 있다 :
아스파라기나제, 알기나제, 인터류킨-1, 1L-2, 인터류킨-3, 인터류킨-4, 인터류킨-5, 인터류킨-6, 인터류킨-7, 인터류킨-8, 유로키나제, 프로유로키나제, 스트렙토키나제, TPA, β-글루코시다제, β-글루클로니다제, α-갈락토시다제, 아데노신데아미나제, 유리카제, SOD, 인슐린, 비리루빈옥시다제, G-CSF, 과립구-마크로파지콜로니-자극인자, 마크로파지콜리니-자극인자, NCS, 카타라제, 에라스타제, 에리슬로포에틴, 인터페론-α, 인터페론-β, 인터페론-γ, 종양괴사인자-α, 종양괴사인자-β, 신경성장인자, 상피성장인자, 계란알부민, 혈소판 유래 성장인자, 트롬보모듈린, α1-안티트립신, 뼈형성 단백질, 연골유래인자, 선유아세포성장인자, 성장홀몬, 형질전환 성장인자-β(TGF-β), 혈액응고 IX인자, 프로테인 C, 프로테인 S, 인슐린모양 성장인자, 칼시토닌, 소마토스타틴, 조직성 메탈로프로테아제 저해인자(TIMP), 심방성 나트륨이뇨홀몬, CD-4 단백질, 시트타틴, 카르파스타틴, 유리나스타틴, 부갑상선홀몬.
본 발명의 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체는 지방산 부분을 갖는다. 따라서, 이러한 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체로 개질된 단백질은 혈청 단백질 및 생체막과 가역적인 결합성을 가지며 이에 따라 혈중 반감기가 연장되고 또한 장기에 대한 이행성이 양호하게 된다.
장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체에서 W의 장쇄 탄화수소기의 주쇄 원자수는 8 내지 28이 바람직하며 10 내지 20이 보다 바람직하다. SOD를 개질하는 경우에는 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체에서 W의 장쇄 탄화수소기의 주쇄 원자수는 10 내지 15가 특히 바람직하다. 주쇄 원자수 8보다 적은 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체를 단백질과 반응시켜 수득한 단배질 개질체는 혈청 단백질에 대한 결합능이 불량하게 되므로 바람직하지 않다. 주쇄 원자수가 28보다 많은 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체는 pH 6 내지 10의 수용액속에서 용해성이 불량해지며 이러한 장쇄 카복실산이미드 에스테르 유도체를 단백질에 결합시키는 것이 곤란해진다.
단백질 유도체는 당해 단백질이 보유한다고 공지되어 있는 약리작용을 효과적으로 발현시킨다. 예를 들면, SOD 유도체는 하기한 시험 실시예 2의 결과에서 명백한 바와 같이 항궤양 작용이 우수하다. 또한 SOD 유도체는 항염증 작용, 항부정맥 작용, 항허혈장애 작용, 항뇌부종작용 등의 약리작용도 갖는다. 또한 NCS 유도체는 항암작용이 우수하다.
단백질 유도체는 독성 시험에서도 저독성을 확인할 수 있다.
상기한 결과에서 단백질 유도체는 당해 단백질이 보유한다고 공지되어 있는 약리작용에 따라 각종 질환의 치료제 및 예방제로서 사용할 수 있다.
SOD 유도체는 활성 산소 라디칼이 관여하는 각종 질환에 대해 효과적이며 특히 항염증제, 항궤양제, 허혈성 질환 치료제, 뇌부종 치료제, 피라코트 치료제로서 사용할 수 있다. 또한, SOD 유도체는 활성 산소 라디칼에 기인하는 제암제의 부작용을 경감시키므로 의약으로서도 유용하다. 또한 SOD 유도체는 화상, 외상, 각종 피부염 등의 피부질환의 치료제로도 유용하다. SOD 유도체는 상기한 약효 이외에 본래의 SOD가 보유한다고 공지되어 있는 약효[사이신이가쿠, 39권 2호, 339(1984) ; 이가쿠도약가쿠, 14권 1호, 55(1985) ; 짓켄이가쿠, 4권 1호(1986), 도쿠슈/세이다이나이푸리래디컬도싯칸 ; 및 프레그런스 져널, No, 79, 89(1986) 참조]를 보다 효과적으로 보유하며 또한 SOD에서는 약효과 확인되지 않는 활성 산소 라디칼이 관여하는 질병에 대해서도 약효를 나타낸다.
또한 NCS 유도체는 항암제로서 유용하다.
단백질 유도체의 투여량은 질병, 환자의 중한 정도, 약물에 대한 인용성 등에 따라 상이하다. 예를 들면, SOD 유도체의 투여량은 통상적으로 성인 1일 0.1 내지 500mg의 범위이며 바람직하게는 0.5 내지 100mg범위의 양이다. NCS 유도체의 투여량은 투여법과 암의 악성도, 암의 종류, 환자의 증상 및 일반적인 상태, 암의 진행도 등에 따라 일정하지 않으며 또한 수술등의 림프절 전이예방 등의 목적 또는 치료 목적에 따라 상이하지만, 통상적으로 성인 1일 0.01 내지 100mg의 범위이며 바람직하게는 0.1 내지 100mg범위의 양이다. 이들의 투여량은 한번에 또는 분할하여 투여하는 것이 적당하다. 투여할때에는 투여 루트에 적절한 임의의 형태를 취할 수 있다. NCS 유도체를 사람에게 투여하는데는 암의 원래 발병부위, 수술후의 암 적출 부위 등의 국소조직내 투여법, 피내, 피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 경구 등의 투여법 및 국소에의 도포, 분무, 좌약, 방광내 주입 등의 외용적 투여법이 적절하다. 단백질 유도체는 임의의 통상적인 방법을 사용하여 투여용으로 조제할 수 있다. 단백질 유도체를 하나 이상 함유하는 의약 조성물은 임의의 장소에서 사용하는 제약용 담체, 부형제 등의 의료상으로 허용되는 첨가제 등을 사용하여 통상적인 수단에 따라 조제한다.
이러한 의약 조성물이 경구용 제제인 경우에는 당해 제제는 소화관에서 흡수하기에 적절한 형태로 제공되는 것이 바람직하다. 경구투여의 정제 및 캡슐은 단위량 투여형태이며 결합제, 예를 들면, 시럽, 아라비아고무, 젤라틴, 솔비트, 트라가칸트, 폴리비닐피롤리돈 등 ; 부형제, 예를 들면, 유당, 옥수수전분, 인산칼슘, 솔비트, 글리신 등 ; 윤활제, 예를 들면, 스테아르산마그네슘, 활석, 폴리에틸렌글리콜, 실리카등 ; 붕괴제 예를 들면, 감자전분 등 ; 또는 허용할 수 있는 습윤제, 예를 들면, 라우릴 황산나트륨 등과 같은 통상적인 부형제를 함유할 수 있다. 정제는 당업계에서 주지의 방법으로 코팅할 수 있다. 경구용 액체 제제는 수성 또는 유성의 현탁제, 용액, 시럽, 엘릭시르제, 기타 여러가지가 있을 수 있으며 또는 사용하기 전에 물 또는 기타 적당한 비히클로 재용해시키는 건조 생성물일 수 있다. 이와 같은 액체 제제는 통상적으로 사용되는 첨가제, 예를 들면, 현탁화제, 예를 들면, 솔비트 시럽, 메틸셀룰로스, 글루코스/당시럽, 젤라틴, 하이드록시에틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 스테아르산알루미늄젤, 수소화식용기름 등 ; 유화제, 예를 들면, 레시틴, 모노올레산솔비탄, 아라비아 고무 등 ; 비수용성 비히클, 예를 들면, 아몬드 기름, 분별 코코닛유, 유성 에스테르, 프로필렌 글리콜, 에탄올 등 ; 방부제, 예를 들면, p-하이드록시 벤조산메틸, p-하이드록시벤조산프로필, 솔빈산 등을 함유할 수 있다.
또한 주사제를 조제하는 경우에는 단백질 유도체를 생리식염수, 주사용 포도당액 등의 용제에 용해시키고, 단백질 유도체 2 내지 20mg/용제 2 내지 10ml의 농도로 조정하고 통상적인 방법에 따라 피하, 근육내, 정맥내 주사제로 제조한다. 조제할 때에 필요에 따라 수용액에 pH 조정제, 완충제, 안정화제, 보존제, 가용화제 등을 첨가할 수도 있다.
상기한 의약 조성물은 이의 형태 등에 의존하여 단백질 유도체를 통상적으로 약 0.01 내지 50중량%, 바람직하게는 약 0.1 내지 20중량%장쇄 카복실산이미드 에스테르의 농도로 함유할 수 있다.
[실시예]
본 발명의 기타 특성은 본 발명의 설명을 위해 주어졌으나 본 발명을 제한하지는 않는 하기의 예시적 양태에 대한 기술에 의해 명백해질 것이다.
1H-NMR은 테트라메틸실란을 내부표준으로 사용하여 측정하고 IR은 KBr 정제법에 따라 측정한다.
[실시예 1]
N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
1, 14-테트라데칸이산(1.0g, 3.87mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 15ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 이미드(445mg, 3.87mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 5ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(3.1mg, 0.02mmol)을 가하고, 30분간 교반한 후 DCC(799mg, 3.87mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 5ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 벤젠과 클로포름의 혼합액(용량비 : 1 대 3)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드(510mg, 37H)를 수득한다.
융점 : 116∼118℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+356
1H-NMR(CDCl3, 270MHz) : δ1.18∼1.47(n, 16H), 1.63(n, 2H), 1.74(n, 2H), 2.35(t, 2H), 2.57(t, 2H), 2.84(s, 4H), 7.85∼10.50(br, 1H)
IR(cm-1) : 2920, 2850, 1825, 1790, 1740, 1725, 1710, 1210, 1070
[실시예 2]
N-(15-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
1, 16-헥사데칸이산(1.0g, 3.49mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 30ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 이미드(402mg, 3.49mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(2.8mg, 0.018mmol)을 가하고, 30분간 교반한 후 DCC(720mg, 3.49mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 벤젠과 클로포름의 혼합액(용량비 : 1 대 3)로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드(429mg, 32%)를 수득한다.
융점 : 118.5∼121℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+384
1H-NMR(CDCl3, 270MHz) : δ1.18∼1.45(n, 20H), 1.62(n, 2H), 1.74(n, 2H), 2.34(t, 2H), 2.60(t, 2H), 2.83(s, 4H).
IR(cm-1) : 2920, 2850, 1825, 1790, 1740, 1725, 1710, 1210, 1070
[실시예 3]
N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
1, 18-옥타데칸이산(1.0g, 3.18mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 30ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 이미드(366mg, 318mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(2.5mg, 0.016mmol)을 가하고 30분간 교반한 후 DCC(656mg, 3.18mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 벤젠과 클로포름의 혼합액(용량비 : 1 대 3.5)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드(480mg, 37%)를 수득한다.
융점 : 120∼122.5℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+412
1H-NMR(CDCl3, 270MHz) : δ1.13∼1.47(n, 24H), 1.63(n, 2H), 1.75(n, 2H), 2.34(t, 2H), 2.60(t, 2H), 2.84(s, 4H), 5.0∼7.0(br, 1H)
IR(cm-1) : 2920, 2850, 1825, 1790, 1740, 1725, 1710, 1210, 1070
[실시예 4]
N-(19-카복시노나데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
1, 20-에이코산이산(1.0g, 2.92mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 50ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 이미드(336mg, 2.92mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(2.3mg, 0.015mmol)을 가하고 30분간 교반한 후 DCC(602mg, 2.92mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 벤젠과 클로포름의 혼합액(용량비 : 1 대 3.5)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(19-카복시노나데카노일옥시)석신산 이미드(420mg, 33%)를 수득한다.
융점 : 215∼124℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+440
1H-NMR(CDCl3, 270MHz) : δ1.14∼1.45(n, 28H), 1.63(n, 2H), 1.74(n, 2H), 2.35(t, 2H), 2.60(t, 2H), 2.84(s, 4H)
IR(cm-1) : 2920, 2850, 1825, 1790, 1740, 1725, 1710, 1210, 1070
[실시예 5]
N-(21-카복시헨에이코사노일옥시)석신산 이미드의 합성
1, 22-도코산이산(1.0g, 2.70mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 70ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 이미드(311mg, 2.70mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(2.1mg, 0.014mmol)을 가하고, 30분간 교반한 후 DCC(602mg, 2.70mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 벤젠과 클로포름의 혼합액(용량비 : 1 대 3.5)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(21-카복시헨에이코사노일옥시)석신산 이미드(440mg, 35%)를 수득한다.
융점 : 122∼124.5℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+: 468
1H-NMR(CDCl3, 270MHz) : δ1.12∼1.43(n, 16H), 1.63(n, 2H), 1.74(n, 2H), 2.34(t, 2H), 2.60(t, 2H), 2.84(s, 4H)
IR(cm-1) : 2920, 2850, 1825, 1790, 1740, 1725, 1710, 1210, 1070
[실시예 6]
(a) 1, 14-테트라데칸이산 모노벤질에스테르의 합성
1, 14-테트라데칸이산(5.0g, 19.4mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 80ml에 용해시키고 수득된 용액에 벤질알콜(2.19g, 19.4mmol)의 테트라하이드로푸란 10ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(15mg, 0.1mmol)을 가하고 30분간 교반한 후 DCC(4.0mg, 19.4mmol)의 테트라하이드로푸란 10ml 용액을 가하여 실온에서 20시간 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 헥산과 디에틸에테르의 혼합액(용량비 : 2 대 1)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 1,14-테트라데카나이산 모노벤질에스테르(2.42g, 38%)를 수득한다.
융점 : 73.5~74℃
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.17~1.40(n,16H), 1.50~1.70(n,4H), 2.23~2.39(m,4H), 5.11(s,2H), 7.32(n,5H), 7.40~9.35(br,1H)
(b) N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
1,14-테트라데칸이산모노벤질에스테르(2.4g,6.98mmol)을 테트라하이드로푸란 30ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시석신산 아미드(793mg,6.89mmol)의 테트라하이드로푸란 15ml용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘 염산염(3.3mg,0.02mmol)을 가하고 실온에서 15시간 반응시킨다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[전개액 : 헥산과 아세트산에틸의 혼합액(용량비 : 2 대 1)]로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)석신산 이미드(2.31g,75%)를 수득한다.
융점 : 61.5~62.5℃
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.05~1.46(n,16H), 1.63(n,2H), 1.72(n,2H), 2.33(t,2H), 2.58(t,2H), 2.79(s,4H), 5.11(s,2H), 7.33(n,5H)
(c) N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드의 합성
N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)석신산 이미드(2.28g,5.12mmol)를 테트라하이드로푸란 15ml에 용해시키고 수득된 용액에 10% 파라듐탄소 229mg을 가하고 수소대기하에서 15시간 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 재결정(에탄올)하고 N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드(1.71g,94%)를 수득한다.
융점 : 116~118℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+356
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.18~1.47(n,16H), 1.63(n,2H), 1.74(n,2H), 2.35(t,2H), 2.57(t,2H), 2.84(s,4H), 7.85~10.50(br,1H), 7.85~10.50(br,1H)
IR(cm-1) : 2920,2850,1825,1790,1740,1725,1710,1210,1070
[실시예 7]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)프탈이미드의 합성
1,16-헥사데칸이산(500mg,1.75mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 15ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시프탈이미드(285mg,1.75mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 10ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(1.4mg)을 가하고 30분간 교반한 후 DCC(361mg,1.75mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 3ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)프탈이미드(310mg,41%)를 수득한다.
융점 : 109~110.5℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+432
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.14~1.50(m,20H), 1.63(m,2H), 1.78(m,2H), 2.34(t,2H), 2.66(t,2H), 7.72~7.94(m,4H).
[실시예 8]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)테트라메틸프탈이미드의 합성
1,16-헥사데칸이산(100mg,0.35mmol)을 무수 테트라하이드로푸란 3ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시테트라메틸프탈이미드(77mg,0.35mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 2ml 용액 및 N,N-디메틸아미노피리딘염산염(0.3mg)을 가하고 30분간 교반한 후 DCC(72mg,0.35mmol)의 무수 테트라하이드로푸란 0.5ml 용액을 가하여 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)테트라메틸프탈이미드(58mg,34%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+488
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.14~1.49(m,20H), 1.61(m,2H), 1.78(m,2H), 2.29(s,6H), 2.34(t,2H), 2.66(t,s,8H)
[실시예 9]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)-5-노루보루넨-2,3-디카복시이미드의 합성
실시예 7에서 사용한 N-하이드록시프탈이미드(285mg,1.75mmol) 대신에 N-하이드록시-5-노부보루넨-2,3-디카복시이미드(313mg,1.75mmol)를 사용하는것 이외에는 실시예 7과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)-5-노루보루넨-2,3-디카복시이미드(340mg,44%)를 수득한다.
융점 : 103~104.5℃
FD-MS(m/z) : [M+H]+448
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.14~1.43(m,20H), 1.48~1.82(m,6H), 2.34(t,2H), 2.52(t,2H), 3.32(s,2H), 3.44(s,2H), 6.19(s,2H)
[실시예 10]
(a) N-(15-벤질옥시카보닐펜타데카노일옥시)타르타르산 이미드의 합성
N-하이드록시타르타르산 이미드(59mg,0.40mmol)를 테트라하이드로푸란 1.5ml에 용해시키고 수득된 용액에 1.16-헥사데칸이산 모노벤질에스테르(150mg,0.40mmol) 및 DCC(83mg,0.40mmol)의 테트라하이드로푸란 0.5ml 용액을 가하고 4℃에서 밤새 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리 정제하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-벤질옥시카보닐펜타데카노일옥시)타르타르산 이미드(7mg,4%)를 수득한다.
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.14~1.45(m,20H), 1.51~1.80(m,4H), 2.34(t,2H), 2.59(t,2H), 3.28(br,2H), 4.73(s,2H), 5.11(s,2H), 7.33(s,5H)
(b) N-(15-카복시펜타데카노일옥시)타르타르산 이미드의 합성
N-(15-벤질옥시카보닐펜타데카노일옥시)타르타르산 이미드(7mg,0.014mmol)를 테트라하이드로푸란 1ml에 용해시키고 수득된 용액에 10% 팔라듐탄소 1mg을 가하고 수소대기하에서 한시간 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 감압하에 농축시켜, 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)타르타르산 이미드(5mg,87%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+416
1H-NMR(DMSO-6,270MHz) : δ1.05~1.40(m,20H), 1.48(m,2H), 1.62(m,2H), 2.18(t,2H), 2.51(t,2H), 4.51(br,2H), 6.10~7.50(br,1H)
[실시예 11]
(a) N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)설포석신산 이미드 나트륨염의 합성
1,14-테트라데칸이산 모노벤질에스테르(100mg,0.29mmol)을 무수 디메틸포름아미드 0.4ml에 용해시키고 수득된 용액에 N-하이드록시설포석신산 이미드 나트륨염(63mg,0.29mmol) 및 DCC(65mg,0.29mmol)의 무수 디메틸포름아미드 0.4ml 용액을 가하여 실온에서 14시간 교반한다. 반응액을 여과하고 여액을 빙냉하 온도에서 두시간 교반한 후 생성된 고체를 여과분리한다. 여액에 아세트산에틸 30ml를 가하고 30분 교반한 후 생성된 고체를 여과 제거하고 감압하에 건조하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)설포석신산 이미드 나트륨염(66mg,42%)을 수득한다.
1H-NMR(DMSO-d6,270MHz) : δ1.13~1.42(m,16H), 1.47~1.68(m,4H), 2.33(t,2H), 2.62(t,2H), 2.87(d,1H), 3.14(m,1H), 3.94(m,1H), 5.08(s,2H), 7.34(s,5H)
(b) N-(13-카복시트리데카노일옥시)설포석신산 이미드 나트륨염의 합성
N-(13-벤질옥시카보닐트리데카노일옥시)설포석신산 이미드 나트륨염(50mg, 0.11mmol)을 디메틸포름아미드 1ml에 용해시키고 수득된 용액에 10% 팔라듐 탄소 5mg을 가하고 수소대기하에서 20시간 교반한다. 반응액을 여과하고 여액에 아세트산에틸 30ml를 가한 후 30분간 교반한다. 석출된 고체를 여과제거하고 감압하에 건조시켜 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(13-카복시트리데카노일옥시)설포석신산 이미드 나트륨염(22mg,63%)을 수득한다.
FAB-MS(m/z) : 480,458,435,413
1H-NMR(DMSO-d6,270MHz) : δ1.15~1.39(m,16H), 1.47(m,2H), 1.60(m,2H), 2.17(t,2H), 2.63(t,2H), 2.87(d,1H), 3.14(m,1H), 3.94(m,1H)
[실시예 12]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)-3-이소프로필석신산 이미드의 합성
실시예 8에서 사용한 N-하이드록시테트라메틸프탈아미드(77mg,0.35mmol) 대신에 N-하이드록시-3-이소프로필석신산 이미드(55mg,0.35mmol)를 사용하는것 이외에는 실시예 8과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)-3-이소프로필석신산 이미드(42mg,28%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+426
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ0.80(d,3H), 1.00(d,3H), 1.18~1.45(m,20H), 1.62(m,2H), 1.74(m,2H), 2.34(m,3H), 2.55(dd,1H), 2.60(t,2H), 2.79(dd,1H), 2.91(m,1H)
[실시예 13]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)테트라메틸석신산 이미드의 합성
실시예 8에서 사용한 N-하이드록시테트라메틸프탈이미드(77mg,0.35mmol) 대신에 N-하이드록시테트라메틸석신산 이미드(60mg,0.35mmol)을 사용하는것 이외에는 실시예 8과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일녹시)테트라메틸석신산 이미드(40mg,26%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+440
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.18~1.46(m,32H), 1.62(m,2H), 1.74(m,2H), 2.34(t,2H), 2.60(t,2H)
[실시예 14]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)-3-벤질석신산 이미드의 합성
실시예 8에서 사용한 N-하이드록시테트라메틸프탈이미드(77mg,0.35mmol) 대신에 N-하이드록시-3-벤질석신산 이미드(72mg,0.35mmol)을 사용하는것 이외에는 실시예 8과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(13-카복시펜타데카노일옥시(-3-벤질석신산 이미드(45mg,27%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+474
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.18~1.45(m,20H), 1.62(m,2H), 1.74(m,2H), 2.30~2.92(m,9H), 7.06(s,5H)
[실시예 15]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)이타콘산 이미드의 합성
실시예 8에서 사용한 N-하이드록시테트라메틸프탈이미드(77mg,0.35mmol) 대신에 N-하이드록시이타콘산 이미드(44mg,0.35mmol)을 사용하는것 이외에는 실시예 8과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)이타콘산 이미드(49mg,31%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+396
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.19~1.44(m,20H), 1.62(m,2H), 1.74(m,2H),, 2.34(t,2H), 2.60(t,2H), 3.70(t,2H), 6.00~6.59(m,2H)
[실시예 16]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)글루타르산 이미드의 합성
실시예 8에서 사용한 N-하이드록시테트라메틸프탈이미드(77mg,0.35mmol) 대신에 N-하이드록시글루타르산 이미드(45mg,0.35mmol)을 사용하는것 이외에는 실시예 8과 동일하게 조작을 실시하고 하기 물리적 특성치를 나타내는 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)글루타르산 이미드(40mg,29%)를 수득한다.
FD-MS(m/z) : [M+H]+398
1H-NMR(CDCl3,270MHz) : δ1.18~1.47(m,20H), 1.63(m,2H), 1.74(m,2H), 2.02(m,2H), 2.35(t,2H), 2.50~2.70(m,4H), 7.85~10.50(br,1H)
[참고실시예 1]
N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드와 SOD의 반응에 의한 SOD 유도체의 합성
사람 적혈구형 SOD 수용액(71.2mg/ml) 1.4ml에 0.5M 중탄산 나트륨수용액(pH 8.0) 2.6ml를 가하고 이어서 실시예 6에서 수득한 N-(13-카복시트리데카노일옥시)석신산 이미드 10.1mg을 디메틸 설폭사이드 0.2ml에 용해시켜 수득된 용액을 교반하에 서서히 첨가한다. 실온에서 밤새 교반하고 여과한 후 반응액을 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]시키고 고분자 분획을 모은다. 이 분획을 그대로 DEAE-세파로즈(DEAE-Sepharode Fast Flow : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 이온 교환 크로마토그래피에 넣고 10mM 트리스-염산 완충액(pH 8)과 0.15M 염화나트륨 수용액의 혼합액, 10mM 트리스-염 완충액(pH 8)과 0.20M 염화나트륨 수용액의 혼합액, 10mM 트리스-염산 완충액(pH 8)과 0.25M 염화나트륨 수용액의 혼합액으로 순차적으로 용출하고 각각의 분획(이하, 이들 분획을 각각 분획 A, 분획 B, 분획 C라 약칭함)을 분취한다.
이들 분획을 각각 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하여 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]하고 탈염한 후 고분자 분획을 동결 건조하여 각각 분획 A로부터 SOD 유도체(이하 이를 SOD 유도체 A라 약칭함)를 33mg, 분획 B로부터 SOD 유도체(이하, 이를 SOD 유도체 B라 약칭함)를 18mg, 분획 C로부터 SOD 유도체(이하 이를 SOD 유도체 C라 약칭함)를 15mg 수득한다. SOD 유도체 A, B 및 C의 각 아미노기를 트리니트로벤젠 설폰산(이하 이를 TNBS라 약칭함)법으로 정량한 바, SOD 유도체 A, B 및 C는 원료 SOD의 아미노기중 각각 3.6개, 4.4개 및 5.4개가 개질되어 있음이 확인된다.
사용한 SOD와 수득된 SOD 유도체 C의 각각의 전기 영동도면을 모식적으로 제1도(a) 및 (b)에 도시한다. 또한 SOD 유도체 C이 적외선 흡수 스펙트럼을 제2도에 도시한다.
[참고실시예 2]
N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드와 SOD의 반응에 의한 SOD 유도체의 합성
사람 적혈구형 SOD 수용액(88.9mg/ml) 1.12ml에 물 1.88ml 및 0.5M 중탄산 나트륨 수용액(pH 8.0) 0.8ml를 가하고 이어서 실시예 3에서 수득한 N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드 3.9mg를 디메틸설폭사이드 0.2ml에 용해시켜 수득된 용액을 교반하에 서서히 첨가한다. 실온에서 밤새 교반하고 여과한 후 용액을 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]시키고 고분자 분획을 모은다. 이 분획을 그대로 DEAE-세파로즈(DEAE-Sepharose Fast Flow : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 이온 교환 크로마토그래피[용출액 : 10mM 트리스-염산 완충액(pH 8)과 0.20M 염화나트륨 수용액의 혼합액]시키고 SOD 유도체를 함유하는 분획을 분취한다. 이들 분획을 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]시키고 탈염한 후 고분자 분획을 동결 건조하여 SOD 유도체 18mg을 수득한다. 수득된 SOD 유도체의 아미노기를 TNBS법으로 정량한바 원료 SOD의 아미노기중 2.0개가 개질되어 있음이 확인된다.
사용한 SOD와 수득된 SOD 유도체의 각각의 전기 영동도면을 모식적으로 제3도(a) 및 (b)에 도시한다. 또한 수득된 SOD 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 제4도에 도시한다.
[참고실시예 3]
N-(19-카복시노나데카노일옥시)석신산 이미드와 SOD의 반응에 의한 SOD 유도체의 합성
참고실시예 2에서 N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드 3.9mg 대신에 실시예 4에서 수득한 N-(19-카복시노나데카노일옥시)석신산 이미드 4.1mg을 사용하는것 이외에는 동일한 조작을 실시하여 SOD 유도체 14mg을 수득한다. 수득된 SOD 유도체의 아미노기를 TNBS법으로 정량한바 원료 SOD의 아미노기중 2.0개가 개질되어 있음이 확인된다.
사용한 SOD와 수득된 SOD 유도체의 각각의 전기 영동도면을 모식적으로 제5도(a) 및 (b)에 도시한다. 또한 수득된 SOD 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 제6도에 도시한다.
[참고실시예 4]
N-(15-카복시펜타데카노일옥시)석신산 이미드와 NCS의 반응에 의한 NCS 유도체의 합성
NCS 50mg을 빙냉하에서 0.5M 중탄산 나트륨 수용액 18ml에 용해시켜 수득한 용액에 실시예 2에서 수득한 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)석신산 이미드 79.8mg을 디메틸설폭사이드 2ml에 용해시켜 수득된 용액을 교반하에 서서히 적가한다. 차광하에서 4℃에서 2주간 교반하고 여과한 후 반응액을 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]시키고 고분자 분획을 모은다. 이 분획을 그대로 DEAE-세파로즈(DEAE-Sepharose Fast Flow : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 이온 교환 크로마토그래피[용출액 : 10mM 트리스-염산 완충액(pH 8)과 0.20M 염화나트륨 수용액의 혼합액]시키고 NCS 유도체를 함유하는 분획을 분취한다. 이 분획을 세파덱스 G-25(Sephadex G-25 : 상품명, 파마시아사제)를 담체로 사용하는 겔 여과[용출액 : 10mM 중탄산 암모늄 수용액]시키고 탈염한 후 고분자 분획을 동결건조하여 NCS 유도체 7mg을 수득한다. 수득된 NCS 유도체의 아미노기를 TNBS법으로 측정한바 유리 아미노기는 검출되지 않는다.
사용한 NCS와 수득된 NCS 유도체의 각각의 전기 영동도면을 모식적으로 제7도(a) 및 (b)에 도시한다. 또한 수득된 NCS 유도체의 적외선 흡수 스펙트럼을 제8도에 도시한다.
[참고실시예 5]
N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드와 NCS의 반응에 의한 NCS 유도체의 합성
참고실시예 4에서 N-(15-카복시펜타데카노일옥시)석신산 이미드 79.8mg 대신에 실시예 3에서 수득한 N-(17-카복시헵타데카노일옥시)석신산 이미드 85.6mg을 사용하는것 이외에는 동일한 조작을 실시하여 NCS 유도체 5mg을 수득한다. 수득된 NCS 유도체의 아미노기를 TNBS법으로 정량한바 유리 아미노기는 검출되지 않는다.
사용한 NCS와 수득된 NCS 유도체의 각각의 전기 영동도면을 모식적으로 제9도(a) 및 (b)에 도시한다. 또한 수득된 NCS 유도체의 적외선 스펙트럼을 제10도에 도시한다.
[시험실시예 1]
SOD 유도체의 혈중농도
펜토바비탈 마취하에 랫트(Wistar계 숫컷, 7주된것, 체중 약 200g)의 대퇴정맥에서 캐뉼레이션을 실시하고 헤파린 용액(1000U/ml)을 0.2ml 주사한다. SOD 또는 SOD 유도체를 생리식염수에 용해시켜 수득되는 용액(10mg/ml)을 각각 랫트 한마리 당 0.2ml로 대퇴정맥으로 주사한다. 시간 경과에 따라 0.2ml씩 채혈하고 혈장중의 SOD 활성을 측정함으로써 혈중농도를 측정한다. SOD의 혈중농도 및 SOD 유도체의 혈중농도의 시간 경과에 따른 변화를 제11도에 도시한다.
[시험실시예 2]
랫트 급성 위점막병변(위궤양)에 관한 SOD 유도체의 효과
SD계 숫컷 랫트(체중 200g)를 하루밤 굶긴 후 1그룹당 세마리씩 스트레스 케이지에 넣어 구속하고 랫트가슴 밑을 22℃의 물에 침지시키고 랫트에 스트레스를 부하한다. 여섯시간후에 랫트를 물에서 꺼낸후 탈혈사시켜 위를 적출한다. 위 내강에 1% 포르말린을 주입하고 조직을 고정시킨다. 고정후 점막면의 선상 궤양의 길이를 측정하고 그 총계를 궤양계수로 한다.
또한 대조군에는 0.5ml의 생리식염수를, 또한 시험군에는 2mg/랫트의 참고실시예 1에서 수득한 SOD 유도체 C를 0.2ml의 생리식염수 용액으로 수침 구속 5분전에 정맥내 투여한다. 결과를 표 1에 기재한다.
[표 1]
표 1로부터 명백한 바와 같이 시험군에서는 당해 SOD 유도체의 현저한 항궤양작용이 확인된다.
상기한 교시를 기초로하여 다수의 변형 및 변화를 가할 수 있음은 명백하다. 그러므로, 첨부된 특허청구범위의 관점내에서 본원에 특정적으로 기술된 바와는 달리 본 발명을 수행시킬 수도 있음이 이해될 것이다.

Claims (1)

  1. 하기 일반식(I)의 장쇄 카복실산이미드 에스테르 또는 이의 염.
    상기식에서, W는 하나 이상의 산소원자, 황원자 또는 일반식 -N(R1)-여기에서, R1은 저급 알킬기이다)의 기로 중단될 수 있는 2가의 탄화수소이며, X는 치환기를 가질 수 있는 2가의 탄화수소기이다.
KR1019920006921A 1991-04-24 1992-04-24 장쇄 카복실산이미드 에스테르 KR950003921B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP12273791 1991-04-24
JP91-122,737 1991-04-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR920019743A KR920019743A (ko) 1992-11-19
KR950003921B1 true KR950003921B1 (ko) 1995-04-20

Family

ID=14843348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019920006921A KR950003921B1 (ko) 1991-04-24 1992-04-24 장쇄 카복실산이미드 에스테르

Country Status (5)

Country Link
US (3) US5336782A (ko)
EP (1) EP0511600B1 (ko)
KR (1) KR950003921B1 (ko)
AT (1) ATE177743T1 (ko)
DE (1) DE69228627T2 (ko)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5336782A (en) * 1991-04-24 1994-08-09 Kuraray Co., Ltd. Long chain carboxylic acid imide ester
ATE204882T1 (de) * 1993-09-17 2001-09-15 Novo Nordisk As Acyliertes insulin
US6869930B1 (en) 1993-09-17 2005-03-22 Novo Nordisk A/S Acylated insulin
US6680295B1 (en) * 1994-09-22 2004-01-20 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Method and pharmaceutical composition for prevention and treatment of brain damage
JP3708151B2 (ja) * 1994-12-15 2005-10-19 協和醗酵工業株式会社 Ｐｅｇ化したヒト顆粒球コロニー刺激因子の定量法
US5869602A (en) * 1995-03-17 1999-02-09 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
US6251856B1 (en) 1995-03-17 2001-06-26 Novo Nordisk A/S Insulin derivatives
US6451970B1 (en) * 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
US7235627B2 (en) * 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
JP2001504831A (ja) * 1996-11-21 2001-04-10 プロメガ・コーポレーション アルキルペプチドアミドおよび適用
US6218001B1 (en) * 1997-10-22 2001-04-17 Mannington Mills, Inc. Surface coverings containing dispersed wear-resistant particles and methods of making the same
US6291078B1 (en) 1997-10-22 2001-09-18 Mannington Mills, Inc. Surface coverings containing aluminum oxide
US6228463B1 (en) 1997-02-20 2001-05-08 Mannington Mills, Inc. Contrasting gloss surface coverings optionally containing dispersed wear-resistant particles and methods of making the same
ATE409193T1 (de) 1999-03-17 2008-10-15 Novo Nordisk As Verfahren zur acylierung von peptiden und proteinen
US6451974B1 (en) 1999-03-17 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Method of acylating peptides and novel acylating agents
US7316999B2 (en) 2000-06-02 2008-01-08 Novo Nordisk A/S Glucose dependent release of insulin from glucose sensing insulin derivatives
US20080063844A1 (en) * 2001-06-29 2008-03-13 Mannington Mills, Inc. Surface coverings containing aluminum oxide
EP1433527B1 (en) 2001-09-28 2013-11-06 Daicel Chemical Industries, Ltd. Catalysts comprised of n-substituted cyclic imides and processes for preparing organic compounds with the catalysts
US7273921B2 (en) 2002-09-25 2007-09-25 Novo Nordisk A/S Method for producing acylated peptides
FR2862642B1 (fr) * 2003-11-20 2006-01-27 Oreal Utilisation cosmetique de n-hydroxy imides
FR2862643B1 (fr) * 2003-11-20 2005-12-30 Oreal Utilisation cosmetique de n-hydroxy imides
TWI372629B (en) 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
WO2007052780A1 (en) * 2005-11-04 2007-05-10 Nippon Shokubai Co., Ltd. Composition, protein modifier, and modified protein
ES2542146T3 (es) 2006-07-31 2015-07-31 Novo Nordisk A/S Insulinas extendidas PEGiladas.
KR101699370B1 (ko) 2006-09-22 2017-02-14 노보 노르디스크 에이/에스 프로테아제 내성 인슐린 유사체
CN101674812B (zh) 2007-04-30 2013-12-11 诺沃-诺迪斯克有限公司 干燥蛋白组合物的方法、干燥的蛋白组合物和包含干燥的蛋白的药物组合物
EP2679597A1 (en) 2007-09-05 2014-01-01 Novo Nordisk A/S Glucagon-like peptide-1 derivatives and their pharmaceutical use
EP2254905B1 (en) 2008-03-14 2016-12-14 Novo Nordisk A/S Protease-stabilized insulin analogues
WO2009115469A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, acylated insulin analogues
WO2011080102A2 (en) 2009-12-16 2011-07-07 Novo Nordisk A/S Glp-1 analogues and derivatives
JP6039569B2 (ja) 2010-11-09 2016-12-07 ノヴォ ノルディスク アー／エス 二重アシル化されたｇｌｐ−１誘導体
CN106117344B (zh) 2011-04-12 2020-11-03 诺沃—诺迪斯克有限公司 双酰化glp-1衍生物
WO2013153000A2 (en) 2012-04-11 2013-10-17 Novo Nordisk A/S Insulin formulations
US11274135B2 (en) 2012-05-08 2022-03-15 Novo Nordisk A/S Double-acylated GLP-1 derivatives
JP6250034B2 (ja) 2012-05-08 2017-12-20 ノヴォ ノルディスク アー／エス 二重アシル化されたｇｌｐ−１誘導体
WO2014078895A1 (en) * 2012-11-21 2014-05-30 The University Of Sydney Omega-3 analogues
AU2014333979B2 (en) 2013-10-07 2018-02-15 Novo Nordisk A/S Novel derivative of an insulin analogue
HUE055231T2 (hu) 2016-12-16 2021-11-29 Novo Nordisk As Inzulint tartalmazó gyógyászati készítmények
CN111925321B (zh) * 2020-09-24 2020-12-29 北京纳百生物科技有限公司 一种百草枯半抗原、完全抗原、抗体、检测试纸及试剂盒

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2041265A (en) * 1936-05-19 Actlated polypepxides
US2794796A (en) * 1957-06-04 ouucg
US2729628A (en) * 1952-10-31 1956-01-03 Godfrey E Mann Acylated proteins
US2872450A (en) * 1955-12-06 1959-02-03 Bayer Ag Thio- and dithio-carboxylic acid esters and a process for their manufacture
US2932589A (en) * 1956-03-12 1960-04-12 Glidden Co Paper coating compositions and process
US2866783A (en) * 1956-07-05 1958-12-30 Bovarnick Max Glutamic and aspartic acid polypeptide polymers as plasma volume extenders
US3685998A (en) * 1970-10-27 1972-08-22 Monsanto Co Protein cross-linked with polymerized unsaturated carboxylic acid
US3847893A (en) * 1972-03-01 1974-11-12 Bayer Ag Process for the preparation of insulin derivatives cross-linked by a dicarboxylic acid group at the amino a-1 glycine and amino b-29 lysine
JPS5141603B2 (ko) * 1974-06-08 1976-11-11
US4234475A (en) * 1975-08-15 1980-11-18 The Gillette Company Reacting protein with organic acid
US4732863A (en) * 1984-12-31 1988-03-22 University Of New Mexico PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors
IT1207996B (it) * 1986-03-18 1989-06-01 Magis Farmaceutici Composti contenenti ferro biodisponibile, procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono.
US4841023A (en) * 1986-06-25 1989-06-20 New York Blood Center, Inc. Inactivation of viruses in labile protein-containing compositions using fatty acids
JPH01199573A (ja) * 1987-10-25 1989-08-10 Kuraray Co Ltd スーパーオキシドジスムターゼ誘導体およびその製造法
JPH0796558B2 (ja) * 1988-03-31 1995-10-18 協和醗酵工業株式会社 修飾ポリペプチド
GB2217319A (en) * 1988-04-19 1989-10-25 Synpharm Ltd Racemic and optically active fatty amino acids, their homo- abd hetero-oligomers and conjugates, the process of their production, their pharmaceutical composi
EP0401384B1 (en) * 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
AU636104B2 (en) * 1989-01-09 1993-04-22 Meiji Milk Products Co., Ltd. Anti-hiv agent
JPH0395125A (ja) * 1989-05-23 1991-04-19 Otsuka Pharmaceut Co Ltd カルシウム代謝改善剤
US5336782A (en) * 1991-04-24 1994-08-09 Kuraray Co., Ltd. Long chain carboxylic acid imide ester

Also Published As

Publication number Publication date
DE69228627D1 (de) 1999-04-22
EP0511600A3 (en) 1993-01-20
US5336782A (en) 1994-08-09
ATE177743T1 (de) 1999-04-15
KR920019743A (ko) 1992-11-19
US5414089A (en) 1995-05-09
EP0511600B1 (en) 1999-03-17
USRE36359E (en) 1999-10-26
DE69228627T2 (de) 1999-10-21
EP0511600A2 (en) 1992-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR950003921B1 (ko) 장쇄 카복실산이미드 에스테르
US6620916B1 (en) Modified physiologically active proteins and medicinal compositions containing the same
RU2318004C2 (ru) Добавки в виде полиалкиленгликолевой кислоты
EP0406804B1 (en) Modified biologically active protein
LT3174B (en) Polyethylene glycol -interferon conjugates
JPH0662634B2 (ja) 治療上活性な化合物
BG60800B2 (bg) Полиетиленгликолови конюгати на протеина
JPH0211569B2 (ko)
HU193737B (en) Process for preparing transferrin-indole-dihydroindole alkaloid derivatives
US5342977A (en) Aminosulfonic acid derivatives and processes for their preparation
JP2002520288A (ja) クマリン及び関連芳香族系ポリマープロドラッグ
EP1279405A1 (en) Drugs retained in target tissue over long time
US4650785A (en) Pharmaceutical composition having an excellent absorption property
JPH04248984A (ja) スーパーオキシドジスムターゼ誘導体およびその製造方法
JP3857338B2 (ja) レシチン化スーパーオキシドディスムターゼおよびそれを有効成分とする医薬
EP2205281B1 (en) Protein-polymer conjugates
JP3070980B2 (ja) レシチン化スーパーオキシドディスムターゼ及びそれを有効成分とする医薬
JP3021954B2 (ja) 長鎖カルボン酸イミドエステル
JP3032599B2 (ja) 長鎖カルボン酸マレイミド
JP3366341B2 (ja) 蛋白質誘導体およびその製造方法
US5762929A (en) Anti-motoneuron-disease agent
KR100480432B1 (ko) Ｇ-ｃｓｆ와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
KR100480423B1 (ko) 에리트로포이에틴과 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
JPS6160617A (ja) マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法
EP0507348B1 (en) Superoxide dismutase derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
G160 Decision to publish patent application
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20020209

Year of fee payment: 8

LAPS Lapse due to unpaid annual fee