JPH01199573A - スーパーオキシドジスムターゼ誘導体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、生体に有毒なスーパーオキシドを分解するス
ーパーオキシドジスムターゼの酵素活性を概ね保持した
ままで該スーパーオキシドジスムターゼに比べて大幅に
延長された血中半減期を有する新規なスーパーオキシド
ジスムターゼ誘導体およびその製造法に関する。

本発明により提供さ扛るスーパーオキシドジスムターゼ
誘導体は活性酸素ラジカルが関与する棟々の疾患に対し
て有効でアリ、特に抗炎症剤、抗潰瘍剤、虚血性医恵治
僚剤、脳浮腫治療剤、パラコート甲毒治療剤として使用
することができる。

また該スーパーオキシドジスムターゼ誘導体ハ活性酸素
ラジカルに起因する制癌剤の副作用を軽減するための医
薬としても有用である。

従来の技術 従来、スーパーオキシドジスムターゼ〔以下、こ′ｆＬ
全ＳＯＤと略記する〕は動物、植物、微生物などの生体
内に広く存在し、生体に有害なスーパーオキシドを分解
する酵素として知ら扛ている。

最近、単離された５ＯＤ−（ｉ−抗炎症剤として用いよ
うとする試みがなさｎている〔ファルマシア、１７巻、
４１１頁（１９８１年）およびカレント・セラポイテイ
ツク・リサーチ（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃＲｅｓｅａｒｃｈ）、　１６．７０６（１９７４）
参照〕。

８ＯＤを静脈内投与した場合、その穐中半減期は僅か４
〜６分とされておシ、ＳＯＤは速かに尿中に排泄代謝さ
れる。ＳＯＤの抽中半減期を延長させるためにＳＯＤを
フィコール、ポリエチレングリコールまたはアルブミン
で修飾し、巨大分子化することが試みられてきたが、フ
ィコールまたはポリエチレングリコールで修飾されたＳ
ＯＤではＳＯＤの酵素活性が大幅に低下し、またアルブ
ミンで修飾されたＳＯＤには抗原性があることが報告さ
れている。またイヌリンで修飾されたＳＯＤでは、その
通中半減期が大幅に延長されることが知られているが、
同時にＳＯＤに比べて酵素活性の低下が認められる〔特
開昭５８−３２８２６号公報参照〕。

参照率発明者らのうちの１人は、ＳＯＤ分子表面にリジ
ン残基を介してスチレンーヤレイン酸骨格を有する疎水
性有機酸構造を酸アミド結合によシ導入することによシ
得られたＳＯＤ誘導体は、穐中でアルブミンを主体とす
る血清タンパク質と可逆的に結合・解離し、これによっ
てＳＯＤの面中半減期が延長され、また臓器への移行性
が良好となることを報告した〔第３７回タンパク質構造
討論会講演要旨集、６１−６４頁（昭和６１年９月１０
日発行）参照〕。

発明が解決しようとする課題 上記のフィコール、ポリエチレングリコール、アルブミ
ンまたはイヌリンで修飾されたＳＯＤはすでに述べた理
由、または巨大分子化に伴う生体組織内浸透性の低下な
どの点でいずれも実用上問題がある。

従来知られている種々の修飾ＳＯＤはすべてＳＯＤにそ
の分子内のアミン基を介して各種の高分子物質を結合さ
せることによって得たものである。ヒト型ＳＯＤは１分
子当ジアミノ基を２２個または２４個有しておシ、また
ウシ型ＳＯＤは１分子当ジアミノ基を２０個有する。こ
のようにＳＯＤは多数のアミン基を有しており、ＳＯＤ
に高分子物質を結合させるに際して該ＳＯＤ分子内の結
合部位となるアミン基を特定することは非常に難しい。

しかしながら、医薬の有効成分化合物は単一の化学構造
を有する化合物であることが好ましい状況にあることを
考慮す几ば、医薬用途に供する修飾ＳＯＤはＳＯＤ分子
円の特定の部位に高分子物質を結合さぜた化学構造を有
する化合物であることが望ま九る。

しかして、本発明の１つの目的は、ＳＯＤ分子内の付定
の部位に高分子物質を結合させて得られかつＳＯＤの酵
素活性を概ね保持したままで、該ＳＯＤに比べて大幅に
延長さ′ｉ″Ｌ′ｆ？、、血中半減期を有する新規な非
巨大分子化スーパーオキシドジスムターゼ誘導体を提供
するにある。

不発明の他の１つの目的は、上記のスーパーオキシドジ
スムターゼ誘導体の製造法を提供するにある。

課題を解決するための手段 本発明によ１ば、上記の１つの目的は、式６式％ 〔式中、〔ＳＯＤ〕はメルカプト基に換えてメルカプト
基から水系原子を除いた基を１個または２個有スるスー
パーオキシドジスムターゼヲ表わし、〔Ｚ〕は ＲＩ　　　　　　　　Ｒ３ に′ または　−Ｃ出−Ｃ−（こｎらの式中、Ｒ１、Ｒ３お０
ＯＲ６ よびＲ５はそれぞｎ水素原子またはメチル基を表わし　
Ｒ２は水素原子、塩素原子、臭素原子またはメチル基を
表わし、Ｒ４は水素原子、炭素数１ないし６のアルキル
基または炭素数３ないし６のシクロアルキル基を表わし
、望はメチル基またはエチル基を表わす）で示される基
からなる群から選ばｎる基ならびに （ロ）　−ＣＨ−ＣＨ−（式中、Ｒ７は水素原子を表わ
すＣ００Ｒ７Ｃｏｏｎ か、または炭素数１ないし８のアルカノール、炭素数１
ないし４のアルキル基部分を含むエチレングリコールモ
ノアルキルエーテルもしくは炭素数１ないし４のアルキ
ル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテルから水酸
基を除いた残基を表わす）で示される基を構成単位とし
、かつ（ハ）片末端に　　　　Ｏ （式中、Ｗｆｄ２価の有機基を表わし、スクシンイミド
環の炭素原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するものであ
ることを意味する）で示される基を有するか、または構
成単位間に−ＣＨ−ＣＨ−［式中　ＱＩＩ　　Ｑ２ およびＱ２は一方がカルボキシル基、他方が１Ｉ　　　
　　　０ ＋＋　　　　　０ で示される基を表わし　Ａｔは１個以上の酸素原子、硫
黄原子、−Ｎ−（式中、Ｒ８は水素原子もしくは炭素数
１ないし４のアルキル基を表わす）で示さｎる基ま２１
ｄ　−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−で示される基で中断されていて
もよい二価の炭化水素基を表わし、スクシンイミド環の
炭素原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するものであるこ
とを意味する〕で示される基を有し、かつ平均分子量が
４００ないし２０，０００である共重合体の一価の基を
表わし、ｎは〔ＳＯＤ〕が有するメルカプト基から水素
原子を除いた基の数に対応する１まだは２の整数を表わ
す〕で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体（
以下、こｎ＝１ｓＯＤ誘導体と称す）を提供することに
よって達成される。

また本発明によれば、上記の他の１つの目的はＳＯＤと ＲＩ　　　　　Ｒ３ −ＣＨ２−Ｃ−（コＡらの式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ
４、０ＯＲ６ Ｒ５およびＲ６（ｄ前記定義のとおりである）で示され
る基からなる群から選ばれる基ならびに仲）−ＣＨ−Ｃ
Ｈ−（式中、Ｒ７は前記定義のとおりＣ００Ｒ７ＣＯＯ
Ｈ である）で示さ九る基を構成単位とし、かつ（ハ）片末
端に　　　Ｏ （式中、Ｗは２価の有機基金表わす）で示さ九る基を有
するか、または構成単位間に−ＣＨ−ＣＨ−Ｑｌｌ　　
Ｑ２１ 〔式中、ＱｌｌおよびＱ２１は一方がカルボキシル基、
〇 ことを条件にカルボキシル基または Ｏ １Ｉ　　　　　　０ は１個以上の酸素原子、硫黄原子、　−Ｎ−（式中、Ｒ
８は水素原子もしくは炭素数１ないし４のアルキル基を
表わす）で示される基捷たは−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−ＩＩ で示される基で中断されていてもよい二価の炭化水素基
を表わす〕で示される基を有し、かつ平均分子量が４０
０ないし２０，０００である共重合体（以下、こｆ′Ｌ
をマレイミド基含有共重合体と称する）と１ｐｔ−１６
ないし１０の水溶液中で反応させることを特徴とする上
記のＳＯＤ誘導体の製造法を提供することによって達成
される。

ＳＯＤとマレイミド基含有共重合体との反応は、通常ト
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、炭酸ナ
トリウム、重炭酸ナトリウム、酢酸ナトリウノ・、リン
酸ナトリウムなどの塩の水溶液中に５ＯＤ＝ｉ溶解し、
得ら九た溶液に粉末状のマレイミド基含有共重合体マタ
ハジメチルスルホキシドなどの有機溶媒に溶解したマレ
イミド基含有共重合体を添加することにより行わたる。

反応中、溶液の…は６〜１０、好ましくは６〜９に維持
さ肛ていることが必要であす、田が６より低い場合には
、マレイミド基含有共重合体の溶解性が低下して反応は
進行し難くなる。捷た、州が１０より高い場合には、マ
レイミド基含有共重合体においてマレイミド環の開裂が
起る。反応温度としては室温以下の温度が好ましく、−
５℃〜＋５℃の範囲の温度がさらに好ましい。また、反
応時間は反応温度、マレイミド基含有共重合体の添加方
法により異なるが、通常１０分〜１日間である。マレイ
ミド基含有共重合体の使用量はＳＯＤ１モルに対して約
０５〜３０モルの範囲である。

このようにして得ら几た反応液にはＳＯＤ誘導体と未反
応のＳＯＤおよびマレイミド基含有共重合体などが存在
するが、かかる反応液を濾過し、濾液をゲル濾過し、得
られるＳＯＤ誘導体を含む溶出液を必要に応じてノ・イ
ドロフォービック・カラムクロマトグラフィー、アフイ
ニテイカラムクロマトグラフイー、イオン交換カラムク
ロマトグラフィーなどに付したのち限外濾過に付するこ
とにより濃縮したのち、凍結乾燥することによりＳＯＤ
誘導体の固型物を取得することができる。

上記の反応により、ＳＯＤが有するメルカプト基とマレ
イミド基含有共重合体が有するマレイミド環とが付加反
応により結合し、ＳＯＤ誘導体が生成する。

本発明のＳＯＤ誘導体において、Ｗで表わされる２価の
有機基としては、構成単位（イ）と構成単位−）からな
る共重合体の片末端と、スクシンイミドある）で示され
る基の代表例として、 （１−１）　　　　　０（ＩＩ−１） （ＩＩＩ−１） （これらの式中　Ｑ＋およびＱ２ｉｉ：それぞれ前記定
義のとおりであす、Ｑ３は一価の有機基を表わし　Ｑ４
およびＱ５はそれぞれ水素原子寸たは炭素数１ないし３
のアルキル基を表わし、Ａ１１ｄ前記定義のとおりであ
り、Ａ２は−Ｃ−０−１−Ｃ−ＮＨ−１−Ｃ−Ｍ−ＣＩ
（２−１１１ＩＩ　　　　　　　　１１ Ｑ　　　　　　　Ｏ０ −Ｎ、、＝ＣＨ−１−ＮＬ−ＣＨ２−またはいし４の整
数を表わす）で示される基などがあげられる。

ＳＯＤとマレイミド基含有共重合体との結合部分の代表
例を構造式で次に示す。なお式中、〔Ｚ１〕および〔Ｚ
２〕はマレイミド基含有共重合体の主鎖を表わす。

（ｉ＞　　ｌ：Ｚ）が片末端に式（＋−１）で示される
基を有するか、または構成単位間に式−ＣＨ−ＣＨ−（
ＩＶ−１）ｔ　　Ｑ２ で示される基を石する場合 ０（Ｊ （ｉｉ）　　（Ｚ）が片末端に式（ＩＩ−１）で示さ几
る基″！たは式（ＩＩ−１）で示さｎる基を有する場合
原料として用いられるマレイミド基含有共重合体には１
分子中に通常マレイミド環が１個存在し、またＳＯＤが
有するメルカプト基については、ヒト型ＳＯＤには反応
し得る遊離のメルカプト基は２個存在する。それゆえに
、上記の反応の条件により、ヒト型５ＯＤ１分子Ｍ、？
マレイミド基含有共重合体が１分子もしくは２分子結合
したＳＯＤ誘導体またはそれらＳＯＤ誘導体の混合物が
得られる。かかるＳＯＤ誘導体の混合物を医薬の有効成
分化合物として用いることに不都合はない。しかしなが
ら、医薬の有効成分化合物は単一の化学構造を有する化
合物であることが好ましい状況にあることを考慮すれば
、上記のＳＯＤ誘導体の混合物をカラムクロマトグラフ
ィ一方どの操作に付し、分離された各々のＳＯＤ誘導体
を医薬の有効成分化合物として用いることが好ましい。

なお、前記の反応および反応後の処理において、ＳＯＤ
誘導体が有するカルボキシル基がアルカリ金属塩まだは
アンモニウム塩を形成する可能性があるが、かかる塩を
形成したカルボキシル基を有するＳＯＤ誘導体も本発明
のＳＯＤ銹導体に包含さｎる。

本発明の５ＱＬ）誘導体は５ＯＤ１分子当り高々２分子
のマレイミド基含有共重合体が結合して得ら汎たもので
あり、ＳＯＤの酵累活性が高く保持さｎ、かつ血中半減
期が大幅に延長さｎるなどの特長を有する。

原料として用いらｎるＳＯＤは、動物（ヒト、ウシなど
）、植物、微生物などの生物中に含まれているものを公
知の方法によりそｎぞれの生物体から抽出されたもの、
または遺伝子工学の手法を用いて取得されたものなどで
ある。ＳＯＤの化学構造（配位金属、分子量、アミノ酸
配列など）はかなり解明さｎてきており、ＳＯＤはＦｅ
配位ＳＯＤ、Ｍｎ配位ＳＯＤ、Ｃｕ−Ｚｎ配位ＳＯＤの
３種類に分類さ九、存在している生体組織によって異な
るが３万〜８万の分子量ヲ肩している。ＳＯＤのアミノ
酸配列も存在している生体組織によって若干相異してい
るが、その詳細は［スーパーオキサイドと医学」（太柳
善彦者、共立出版刊、昭和５６年５月２５日発行）；ジ
ャーナル・オブ・バイオロジーｊ）ルーケミストリー（
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）、　２４６．２８７５〜２８８０（１９７
１）；同左Σ立、６１０７〜６１１２（１９７５）；プ
ロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイ
・オプ・サイエフ　シス（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏ
ｆ　ｔｈｅ　ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　
５ｃｉｅｎｃｅｓ　）、７０．　３７２５〜３７２９　
（１９７３）；アルカイブス・オプ・バイオケミストリ
ー・アンド＋　バイオフィジックス（Ａｒｃｈｉｖｅｓ
　ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈ
ｙｓｉｃｓ　）、１７９．２４３〜２５６（１９７７）
などの文献の記載を参照されたい。ヒト型のＣｕ　−Ｚ
ｎ配位ＳＯＤは分子量が３１，２００でるす、反応性の
遊離のメルカプト基が２個存在する。このヒト型ＳＯＤ
は、例えば、ヒトの血液を順次熱処理、イオン交換、ゲ
ル濾過に付することにより、また遺伝子工学の手法を用
いることによって取得さｎる。

原料として用いられるマレイミド基含有共重合体は前記
（イ）および（ロ）で示さ九る基を構成単位とし、のと
おりである）で示される基を有するか、または構成単位
間に−ＣＨ−ＣＨ−（式中、ＱｌｌおよびＱ２１Ｑｌｌ
　Ｑ２１ は前記定義のとおりである）で示さｎる基を有しかつ平
均分子量４００ないし２０，０００を有する新規化合物
である。

マレイミド基含有共重合体において、Ｗで表わされる有
機基はマレイミド基の窒素原子の結合手と構成単位（イ
）および（ロ）からなる共重合体とを連結させるもので
ある。マレイミド基と該共重合体とを連結させる方法の
一例として、後で詳しく述べるとおり、重合時に加えら
れた連鎖移動剤により該共重合体の片末端には連鎖移動
剤に起因する基が存在するので、この連鎖移動剤に起因
する基にマレイミド基を連結させる方法が挙げられる。

この場合、榎々の連鎖移動剤を用いて、種々の結合方法
によって連結することが可能であるので、有機基はいろ
いろな構造であってよい。

マレイミド基含有共重合体において、 る）で示さｎる基の代表例として、Ｑ３−ＣＨ−ＣＨ−
１Ｑｌｌ　Ｑ２１ （ＩＩＩ−２） （こＡらの式中、Ｑｌｌ、Ｑ２１、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、
Ａ１、Ａ２およびｍは前記定義のとおりである）などが
あげられる。

マレイミド基含有共重合体は構造上次の３つのタイプを
含む。

（１）　　前記（イ）および（ロ）で示される基を構成
単位とし、かつ片末端に式（１〜２）で示される基を有
するか、′または構成単位間に式−ＣＨ−ＣＨ−（ＩＶ
　−２）Ｑｌｌ　　Ｑ２１ で示される基を有する共重合体〔以下、こｎをマレイミ
ド基含有共重合体（１）と称す〕（２）　　前記（イ）
および（［：Ｉ）で示さ几る基を構成単位とし、かつ片
末端に式（■〜２）で示される基を有する共重合体〔以
下、とｆｌ−ヲマレイミド基含有共重合体（２）と称す
〕 （３）　　前記（イ）および（ロ）で示される基を構成
単位とし、かつ片末端に式（１−２）で示される基を有
する共重合体〔以下、これをマレイミド基含有共重合体
（３）と称す〕 マレイミド基含有共重合体は例えば次の１）〜３）の方
法により製造さ几る。

１）　マレイミド基含有共重合体（１）の製造構成単位
（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との共重合体
を、その１分子中に無水マレイン酸環が平均０５〜２個
、好１しくけ約１個存在するように常法により片エステ
ル化または／および刃口水分解する。次に、得られた共
重合体にその無水マレイン酸環において式 （式中　Ａｌは前記定義のとおりでるる）で示さ九る化
合物を片アミド型で結合させることによりマレイミド基
含有共重合体（１）ヲ得る０このアミド生成反応は通常
炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、
リン酸ナトリウム、リン醸カリウムなどの塩の水溶液中
で行わするか、またはりｏ　ｏ　ホルム、１．２−ジク
ロルエタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセト
ニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミドなどの有慨溶媒中で必要に応じて重炭酸ナト
リウム、炭酸カリウム、ピリジン、トリエチルアミンな
どの塩基の存在下に行わｎる。反応を塩の水溶液中で行
う場合には、マレイミド環の安定性の点で、該反応は州
９以下で水冷下ないし呈温までの温度で行うのが好まし
く、轡に水冷下に行うのが好ましい。反応時間は通常１
時間ないし１日間である。

一般式（Ｖ）で示される化合物の仕込み童は前記の無水
マレイン醒環合有する共重合体に対して約０．５〜１０
倍モル量である。また反応を有機溶媒中で行う場合には
、該反応は水冷下ないし約８０℃までの加温下の温度で
約１〜１０時間を要して行う。一般式（Ｖ）で示さ九る
化合物の仕込み量は上記の塩の水溶液中での反応の場合
におけると同様であるが、塩基を使用する場合のその使
用量は該一般式（■）で示さ九る化合物に対して約１〜
１０倍モル量が好ましい。

２）マレイミド基含有共重合体（２）の製造構成単位（
イ）に対応する単量体と無水マレイン酸とをラジカル共
重合反応させるに際して、式（式中、Ｑ４　、Ｑ５およ
びｍは前記定義のとおりでお−ＮＯ２または一〇Ｎで示
される基を表わし、　ここでＲ９、ＲＩＯおよびＨｌｌ
はそｎぞれ炭素数ＩＺいし４のアルキル基を表わす）で
示される化合＠を連鎖移動剤かつ反応溶媒として用い、
必要に応じてオクタン、ベンゼン、アセトンなどの有機
溶媒を共存させることにより、片末端に式 （式中、Ｘ、　Ｑ４、Ｑ５およびｍは前記定義のとおり
である）で示される基を有する共重合体を得る。

一般式（Ｖｌ）で示される化合物としては、例えば、ｐ
−エチルベンジルコアセテート、ｐ−インプロピルベン
ジル＝アセテート、５−ｐ−イソプロピルフェニル；チ
オアセテート、５−ｐ−イソプロピルベンジルエチオア
セテート、ｐ−イングロピルベンズアルデヒドージメチ
ルアセタール、ｐ−イングロピルベンズアルデヒド＝ジ
ブｆ　ルアセタール、ｐ−ニトロクメン、ｐ−シアノク
メンなどが使用さｎる０得らｎた共重合体を常法により
片エステル化または／および刃口水分解し、該共重合体
に存在する無水マレイン酸環を消失させたのち、その片
末端に存在する上記の式（■′）で示される基における
Ｘで表わさｎる基を反応性の官能基Ｙに変換させること
により、片末端に式 （式中、Ｑ４、Ｑ５およびｍは前記定義のとおりであり
、Ｙはヒドロキシル基、メルカプト基、ポルミル基、ア
ミン基またはアミノメチル基を表わす）で示される基を
有する共重合体〔以下、これを共重合体（■）と称す〕
を得る。Ｘで表わさｎる基ので示さｎる基は常法により
加水分解されてそれぞれヒドロキシル基、メルカプト基
またはホルミル基に変換さｎ、またニトロ基またはシア
ン基は常法により還元されてそれぞｎアミノ基またはア
ミノメチル基に変換さｎる。共重合体（■）に官能基ｙ
＝６利用してＡ２で表わさｎる結合によりｆ （式中　ＡＩは前記定義のとおりである）で示される基
を導入することにより、マレイミド基含有共重合体（２
）を得る。結合Ａ２を生せしめる反応について次に詳し
く説明する。

■　Ｙがヒドロキシル基、アミン基またはアミンメチル
基である共重合体（■）を用いる場合共重合体（■）に
式 （式中　ＡＩは前記定義のとおりである）で示されるカ
ルボン酸の反応性誘導体または式 （式中、Ａ１（ｌ−１，前記定義のとおりである）で示
さｎるイソシアナート化合物を反応させることにより、
マレイミド基含肩共重合体（２）ヲ得る。式（■−１）
で示さｎるカルボン酸の反応性誘導体としては酸クロリ
ド、酸無水物、Ｎ−オキシコハク酸イミドエステル、ア
シルイミダゾール、８−オキシキノリンエステルなどが
挙げらｎる。これらのカルボン酸の反応性誘導体と共重
合体（■）との反応は常法に従い水またはクロロホルム
、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン
、アセトン、ベンゼン、アセトニトリルなどの有機溶媒
の存在下、必要に応じてピリジン、トリエチルアミン、
重炭醒ナトリウムなどの反応助剤の共存下に行われる。

この反応によりＡ２が一〇−０−１−Ｃ−ＮＨ−まＩＩ
　　　　　　　　　１１ たけ−Ｃ−ＮＨ−ＣＨ２−で示される基であるマレイミ
ド基含有共重合体（２）が得られる。また、式（■−２
）で示さ九るイソシアナート化合物と共重合体（■）と
の反応は常法に従い、クロロホルム、テトラヒドロフラ
ン、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルボルムアミドなどの有機溶媒中で室温ないし便用する
溶媒の沸点までの加温下の温度で行われる。この反応に
よりＡ２が一＋−Ｃ−Ｏ−１４唄−Ｃ−ＮＨ−または−
双一〇−■−ＣＨ２−で示される基であるマレイミド基
含有共重合体（２）が得られる。

■　Ｙがホルミル基である共重合体（■）を用いる場合 共重合体（■）に式（Ｖ）で示さ九る化合物を反応させ
ることにより、Ａ２が−Ｎ＝　ＣＨ−で示される基であ
るマレイミド基含有共重合体（２）ヲ得る。反応は常法
に従いシッフ塩基の生成条件下、すなわち温和な脱水条
件下で行われ、通常クロロホルム、テトラヒドロフラン
、アセトニトリルなどの有機溶媒中で行われる。この反
応を水素化シアノポウ素ナトリウムなどの；４（３Ｅ下
に行うか、または得らｎたＡ２が−Ｎ−ＣＨ−で示さ九
る基であるマレイミド基含有共重合体（２）ヲ水素化シ
アノホウ素ナトリウムなどで還元することにより、Ａ２
が−Ｎｌ（−ＣＨ２−で示される基であるマレイミド基
含有共重合体（２）ヲ得る。

■　Ｙがメルカプト基である共重合体（■）を用いる場
合 共重合体（■）に式 ％式％ （式中　Ａｌは前記定義のとおりである）で示されルヒ
スマレイミド化合物〔以下、と九ヲビスマレイミド化合
物（ＩＸ）と称す〕を反応させることによ１！ イミド基含有共重合体（２）を得る。反応は通常水、ク
ロロホルム、テトラヒドロフラン、エタノール、アセト
ン、アセトニトリルなどの溶媒中で、必要に応じてピリ
ジン、トリエチルアミン、重炭酸ナトリウム、重炭酸ア
ンモニウムなどの反応助剤の存在下に行われる。共重合
体（■）およびビスマレイミド化合物（ＩＸ）の溶解性
、マレイミド環およびメルカプト基の安定性などの点か
ら、溶媒としてはクロロポルムおよびアセトニトリルを
便用するのが好ましい。ビスマレイミド化合物（■）の
使用量は共重合体（■）に対して過剰量が好ましく、通
常１．５〜１０倍モル量、より好ましくは３〜５倍モル
量でらる。反応は水冷下ないし室温までの温度で約１〜
１０時間を要して行う。

３）マレイミド基含有共重合体（３）の製造構成単位（
イ）に対応する単量体と無水マレイン酸と全ラジカル共
重合反応させるに際して、式％式％（） （式中　ＡＩは前期定義のとおりであり、Ｒ１２は炭素
数１ないし４のアルキル基を表わす）で示される化合物
を連鎖移動剤かつ反応溶媒として用い、必要に応シてオ
クタン、ベンゼン、エチルベンゼン、クメン、アセトン
などの有機溶媒を共存させることにより、片末端に式 ％式％（） （式中　ＡＩおよびＲ１２は前記定義のとおりである）
で示される基を有する共重合体を得る。一般式（Ｘ）で
示される化合物としては、例えば１，２−エタンジチオ
ール、ｌ、ｄ−プロパンジチオール、１゜４−ブタンジ
チオール、２−メルカプトエチルスルフィド、ジ（２−
メルカプトエチル）エーテル、２、２−　ジチオビスエ
タンチオール、１．２−ベンゼンジチオール、１．３−
ベンゼンジチオール、３，４−トルエンジチオール、１
．３−ビス（メルカプトメチル）ベンゼン、１．４−ビ
ス（メルカプトメチル）ベンゼンなどの酢酸、プロピオ
ン酸、酪酸などとの各片エステルなどが挙げら九る。得
らｆした共重合体を常法により片エステル化または／お
よび加水分解し、該共重合体に存在する無水マレイン酸
環を消失させたのち、その片末端に存在する上記の式（
Ｘ′）で示される基における末端基Ｒ１２−Ｃ−８−を
常法により加水分解してメルカプト基Ｉ に変換させることにより、片末端に式 ％式％（） （式中　ＡＩは前記定義のとおりである）で示される基
を有する共重合体〔以下、これを共重合体（至）と称す
〕を得る。共重合体（ＸＩ）にビスマレイミド化合物（
■）全反応させることにより、マレイミド基含有共重合
体（３）ヲ得る。この反応は前記２）の■におけると同
様にして行われる。

以上の方法により得らｎた反応液からのマレイミド基含
有共重合体の分離精製操作を次に説明する。反応を水溶
媒中で行った場合には、得らｆ′した反応液をそのまま
セファデックスＧ−２５またはセファデックスＧ−１５
（いずれも商品名、ファルマシア社製）を充填したカラ
ムに注入し、溶出液として重炭酸アンモニウム水溶液を
用いて約０〜５℃の温度でゲル濾過し、目的とする溶出
液を分取し、凍結乾燥する。また反応を有機溶媒中で行
った場合には、得られた反応液から有機溶媒を除去した
のち同様にしてゲル濾過し、目的とする溶出液を凍結乾
燥するか、または反応液を必要に応じて濃縮するか、も
しくはこれよりｖ機溶媒を除去したのち、溶出液として
テトラヒドロフラン、クロロホルム、アセトンなどを用
いて行う分取液体クロマトグラフィーに付し、目的とす
る溶出液を分取し、凍結乾燥する。かかる方法によりマ
レイミド基含有共電体を分離取得することができる。

また、反応を水溶媒中で行って得られた反応液から酸沈
殿法により、また反応を有機溶媒中で行って得らｎた反
応液から該有機溶媒を除去し、その残渣を水に溶解して
得られた水溶液から酸沈殿法により、そｎ−ｔｎマレイ
ミド基含有共重合体を分離取得することができる。

次に、前記の構成単位（イ）に対応する単量体と無水マ
レイン酸との共重合体ならびにその片エステル化または
／および加水分解さｆした共重合体の製造方法について
説明する。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
ラジカル共重合反応はジクミルパーオキシド、アゾイソ
ブチロニトリル、過酸化ベンゾイル、を−ブチルパーベ
ンゾエートなどの触媒の存在下に行わｎる。触媒の使用
量は構成単位（イ）に対応する単量体に対して約１〜１
０重量％である。ラジカル共重合反応を行うに際して式
（Ｖｌ）で示される化合物または式（Ｘ）で示される化
合物を連鎖移動剤として用いる場合には、前述のとおシ
、該化合物に反応溶媒としての役割を兼ねさせることが
でキ、マた必要に応じて他の有機溶媒を併用することが
できる。この場合に得られる共重合体は主として前記の
マレイミド基含有共重合体（２）またはマレイミド基含
有共重合体（３）を製造するために使用される。

式（ＶＩ）で示される化合物または式（Ｘ）で示される
化合物の不存在下にラジカル共重合反応を行う場合には
、反応溶媒としてクメン、シメン、トルエン、エチルベ
ンゼン、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロ
フラン、ジエチレングリコールジメチルエーテルなどが
使用される。これらの溶媒中、クメン、シメン、トルエ
ンまたはエチルベンゼンヲ使用するのが好ましい。この
場合、反応系にベンジルアルコール、ドデシルメルカプ
タン、ベンズアルデヒドなどの連鎖移動剤を存在させて
もよい。得られる共重合体は前記のマレイミド基含有共
重合体（１）を製造するために使用される。い゛ずれの
場合に４６一 おいても無水マレイン醒の仕込み量は可成単位（イ）に
対応する単量体に対して約１〜５倍モル量、好ましくは
約２倍モル量である。かかる割合の構成ましくは約１０
〜３０重量％となるように調整する。反応は約４０〜１
８０℃の範囲、好ましくは約１１０〜１６０℃の範囲の
温度で行われる。このラジカル共重合反応は、溶媒子に
無水マレイン醒全溶解させて得られた溶液に上記の温度
下に構成単位（イ）に対応する単量体全触媒ととも・に
徐々に添加することにより行うのが好ましい。かくして
ラジカル共重合反応させて得られた共重合体は、そのま
ま分別することなく、または分別して分子量分布を狭く
シタのち、次の無水マレイン酸環の片エステル化反応マ
タば／および加水分解反応に供さ九る。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環を片エステル化して
得られるエステルとしては、メチルエステル、エチルエ
ステル、フロビルエステル、ｎ−ブチルエステル、ｎ−
ペンチルエステル、イソペンチルエステル、ｎ−ヘキシ
ルエステル、ｎ−へブチルエステル、ｎ−オクチルエス
テル、メトキシエチルエステル、エトキシエチルエステ
ル、フロポキシエチルエステル、２−ブトキシエチルエ
ステル、　１．３−ジメトキシ−２−プロピルエステル
、２，３−ジメトキシ−１−プロピルエステル、１．３
−ジェトキシ−２−フロビルエステル、２−エトキシ−
３−メトキシ−１−プロピルエステル、１．３−ジプロ
ポキシ−２−プロピルエステル、１，３−シフトキシ−
２−プロピルエステル、ベンジルエステルなどが挙げら
れる。これら片エステル化された共重合体は構成単位（
イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との共重合体に
それぞれ対応するアルコールを必要に応じて酢酸リチウ
ムなどの触媒の存在下に約５０〜１２０℃の範囲の温度
で反応させることによシ得られる。対応するアルコール
を過剰に用いて、そのアルコールに溶媒としての役割を
兼ねさせることができる。また溶媒としてジオキサン、
テトラヒドロフラン々どを使用することができる。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環の加水分解反応は、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム
などの塩基の水溶液を用いて常法によシ行われる。反応
液からの目的とする共重合体の分離精製は常法に従いゲ
ル濾過法または酸沈殿法によシ行われる。

構成単位（イ）に対応する単量体としては、例えばスチ
チレン、ｐ〜ジクロロチレン、ｐ−ブロムスチレン、α
−メチルスチレン；エチレン、フロピレン、α−ブチレ
ン、イソフチレン、１−ペンテン、２−メチル−１−ブ
テン、ビニルシクロヘキサン、１−ヘキセン、１−ヘプ
テン；酢酸ビニル；（メタ）アクリル酸メチル、（メタ
）アクリル酸エチルなどが挙げられる。

前記の式（１−１）および（ｌ−２）におけるＱ３は前
述のとおシー価の有機基を表わすが、これはラジカル共
重合反応を行って得られた共重合体の末端基を意味する
。その末端基としては触媒として用いたラジカル反応開
始剤から発生したラジカル基、またはそのラジカル基が
反応溶媒もしくは他の共存物質に連鎖移動して生じたラ
ジカル基がなり得る。Ｑ３が表わす一価の有機基として
は溶媒に連鎖移動して生じたラジカル基が好１しく、例
えば、塩素原子、臭素原子などのハロゲン原子、メトキ
シ基、プロポキシ基などの低級アルコキシル基、メチル
基、メトキシメチル基、ジメトキシメチル基、アセトキ
シメチル基、アセチルチオ基、アセチルチオメチル基、
メトキシカルボニル基などで核置換されていてもよいベ
ンジル基、α−メチルベンシル基、α−エチルベンジル
基、α、α−ジメチルベンジル基などのアルアルキル基
が挙げられる。

本発明で原料として用いられるマレイミド基含有共重合
体はいずれも疎水性基と親水性基の両者を持つことによ
る適度な疎水性を有し、かつ極性の高いカルボキシル基
を有する。したがって、かかるマレイミド基含有共重合
体が結合しているＳＯＤ誘導体は血清蛋白および生体膜
との可逆的な結合性を有しておシ、このことにより血中
半減期が延長され、寸だ臓器への移行性が良好となる。

なかでも構成単位（イ）としてスチレン由来の基を有す
るＳＯＤ誘導体および構成単位仲）として片エステル化
された基を有するＳＯＤ誘導体は疎水性がより高く、こ
れらの効果を発現する点で好ましい。

マレイミド基含有共重合体において、構成単位（イ）と
構成単位（ロ）の構成モル比「（イ）／（ロ）」は笑質
的に約１〜１．３の範囲であることが好ましく、通常は
１である。構成モル比が１よりも小さいものは構成単位
（イ）に相当する単量体と無水マレイン酸との共重合で
得ることは困難である。また、構成モル比が１．３より
も太きいものは、構成単位（ロ）が片エステル化された
ものである場合、かかるマレイミド基含有共重合体を塩
の水溶液中に溶解させてＳＯＤと反応させる際に、マレ
イミド基含有共重合体の水溶液への溶解性が不良となる
ので好ましくない。

上記のマレイミド基含有共重合体の重量平均分子量は通
常４００〜２０，０００の範囲である。このマレイミド
基含有共重合体から得られるＳＯＤ誘導体の疾患局所へ
の移行性の点から、マレイミド基含有共重合体の重量平
均分子量は３，０００以下であることが好ましい。マレ
イミド基含有共重合体の分子量分布については特に制限
はないが、重量平均分子量と数平均分子量との比が約１
．０２ないし１．３の範囲にらるマレイミド基含有共重
合体が医薬の有効成分化合物として好ましいＳＯＤ誘導
体を与える。

ＳＯＤ誘導体は後述の試駿例２の粘果から明らかなよう
に優れた抗不整脈作用を有する。またＳＯＤ誘導体は抗
炎症作用、抗潰瘍作用、抗虚血障害作用、抗脳浮腫作用
などの薬理作用をも有する。

また、ＳＯＤ誘導体は毒性試験においても低毒性である
ことが確認さｎている。

以上の結果より、ＳＯＤ誘導体は活性酸素ラジカルが関
与する種々の疾患に対して有効でるり、特に抗炎症剤、
抗潰瘍剤、虚血性疾患治療剤、脳浮腫治療剤、パラコー
ト中毒治療剤として使用することができる。またＳＯＤ
誘導体は活性酸素ラジカルに起因する制癌剤の副作用を
軽減するための医薬としてＭ用である。さらにＳＯＤ誘
導体は火傷、外傷、各種の皮膚炎などの皮膚の疾病など
の治療薬としても有用である。

ＳＯＤ誘導体は上記の薬効以外に本来ＳＯＤが有するこ
とが知られている薬効〔最新医学、３９巻２号、３３９
頁（１９８４年）；医学と薬学、１４巻１号、５５頁（
１９８５年）；実験医学、４巻１２号、特集／生体内フ
リーラジカルと疾患；およびフレグランヌ・ジャーナル
、Ｎｏ、７９．８９頁（１９８６年）参照〕をよシ効果
的に保有しておシ、またＳＯＤでは薬効が認められてい
ない活性酸素ラジカルが関与する疾病に対しても薬効を
示す。

ＳＯＤ誘導体の投与量は疾病、患者の重篤度、薬物に対
する忍容性などによシ異なるが、通常成人１日あたシ０
．１〜５００１１ｇ、好ましくは０．５〜１００■の量
であシ、これを１回または分割して投与するのがよい。

投与に際しては投与ルートに適した任意の形態をとるこ
とができる。

ＳＯＤ誘導体は任意慣用の製剤方法を用いて投与用に調
製することができる。ＳＯＤ誘導体を少なくとも１種言
有する医薬組成物は任意所要の製薬用担体、賦形剤など
の医薬上許容さｎる添刀口剤などを使用して慣用の手段
によって調製される。

この組成物が経口用製剤でるる場合には、該製剤は消化
管からの吸収に好適な形態で提供されるのが望ましい。

経口投与の錠剤２よびカプセルは単位量投与形態であす
、結合剤、例えばシロップ、７−ｙビアゴム、ゼラチン
、ソルビット、トラガカント、ポリビニルピロリドンな
ど：賦形薬、例えば乳糖、とうもろこし澱粉、りん酸カ
ルシウム、ソルビット、グリシンなど；潤滑剤、例えば
ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリ
コール、シリカなど；崩壊剤、例えば馬鈴薯澱粉など；
または許容し得る湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウ
ムなどのような慣用の賦形剤を含有していてもよい。錠
剤は当業界において周知の方法でコーティングしてもよ
い。経口用液体製剤は水性または油性懸濁剤、溶液、シ
ロップ、エリキシル剤、その他であってもよく、あるい
は使用する前に水または他の適当なビヒクルで再溶解さ
せる乾燥生成物であってもよい。このような液体製剤は
普通に用いら九る添加剤、例えば懸濁化剤、例えばソル
ビットシロップ、メチルセルロース、グルツース／糖シ
ロップ、ゼラチン、ヒトミキシエチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲ
ル、水素化食用７脂など；乳化剤、例えばレシチン、モ
ノオレイン酸ソルビタン、アラビアゴムなど；非水性ビ
ヒクル、例えばアーモンド油、分別ココナツト油、油性
エステル、フロピレンゲリコール、エチルアルコールな
ど；防腐剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ
−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸などを含有
してもよい。

また注射剤を調製する場合には、ＳＯＤ誘導体を生理食
塩水、注射用ブドウ糖液などの溶剤に溶解シ、ＳＯＤ誘
導体２〜２０ｍ９／溶剤２〜１０ｍｅの濃度に調整し、
常法により皮下、筋肉内、静脈内注射剤とする。調襄時
に必要により水溶液に州調整剤、緩衝剤、安定化剤、保
存剤、可溶化剤などを添加することができる。

上記の医薬組成物は、その形態等に依存して、ＳＯＤ誘
導体を一般に約０．０１〜５０重量％、好ましくは約０
１〜２０重量％の濃度で含有することができる。

実施例 以下に、実施例により本発明を説明する。なお、本発明
はこれらの実施例によシ限定されるものではない。マレ
イミド基含有共重合体の製造例を参考例として示し、Ｓ
ＯＤ誘導体の生化学的特性を試験例として示す。参考例
中、マレイミド基含有共重合体のマレイミド基含有量は
４　Ｐ　Ｄ　Ｓ　（４，４’−ジチオジピリジン）法に
より測定した。

参考例１ 塩の合成 １．６−ジアミツヘキサン２３．２０　？　（０，２０
ｍｏｌｅ）をジオキサン９０ｒｕｌに溶解して得られた
溶液に、２−（ｔ−ブトキシカルボニルチオ）−４，６
−ジメチルビリミジン２４．６０　ｆ　（０，１０ｍｏ
１．ｅ　）をジオキサン１ｏｏｍｇに溶解して得られた
溶液を攪拌下に３時間を要して徐々に滴下した。滴下終
了後、−夜攪拌を続けた。反応液から沈殿物を濾別し、
その濾液を約１００　ｍｌに濃縮した。その濃縮液に水
１５０　ｍｌを加え、析出したヒ、：ｘ、　（Ｎ、Ｎ’
　−ｔ−ブトキシカルボニル）−１，６−ジアミツヘキ
サンの沈殿物を濾別し、その濾液を減圧下に約１／２の
容積となるように濃縮した。その濃縮液に塩化ナトリウ
ム４０７を加え、酢酸エチル５０罰で４回抽出した。そ
れらの抽出液を合し、これより酢酸エチルを減圧下に留
去した。得られた残留物を水１００　ｍｌ！に溶解し、
その水溶液にＩＮ塩酸を加えて水溶液の田をほぼ３に調
整した。次いで、この水溶液を酢酸エチルで数回洗滌し
たのち、水層に塩化ナトリウムを加えることによｐ、Ｎ
−ｔ−ブトキシカルボニル−１，６−ジアミツヘキサン
塩酸塩を析出させた。その収量は１５．１０　ｆ！　［
：　２−（ｔ−ブトキシ力ルポニルチオ）　−４，６−
ジメチルビリミジンを基準として算出した収率：６０％
’：ｌであった。

Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−１，６−ジアミ、ノヘキ
サン塩酸塩５．１５９　（２０ｍｍｏｌｅ　）　、無水
マレイン酸１．９５　？　（２０ｍｍｏｌｅ）およびト
リエチルアミン２．０３ｙ　（２０ｍｍｏｌｅ）をり０
０ホルム７５ｍＪに加えて、加熱還流下に４時間反応さ
せた。反応終了後、反応液から減圧下に溶媒を留去し、
その残留物に無水酢酸ナトリウム６．３０ｆおよび無水
酢酸６５ｄを加え、約９０℃の温度で４時間反応させた
。反応液を室温まで冷却し、沈殿物を濾去し、その濾液
から減圧下に溶媒を留去した。その残留物をアセトンと
ｎ−ヘキサンの容積比が２対８の混合液を展開液として
用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付するこ
とにより、６−（Ｎ−マレイミド）−ｍ−ｔ−ブトキシ
カルボニル−１−アミンヘキサンを２．４８ｊ（Ｎ−ｔ
−ブトキシカルボニル−１，６−ジアミツヘキサン塩酸
塩を基準として算出した収率：　４１％）得た。

６−（Ｎ−マレイミド）−Ｎ’−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−１−アミノヘキサン２．３６　？　（８，０ｒｎｍ
ｏｌｅ）を４Ｎ塩酸・ジオキサン溶液１６．８　ｍｌに
加え、１５℃の温度で１時間攪拌した。得られた反応液
にジエチルエーテル１２０ｉ／を加え、３０分間攪拌し
たのち、析出した沈殿物を濾別した。この沈殿物をクロ
ロホルムとメタノールの混合溶媒で再結晶することによ
シ、下記の物性値を有するＮ−（６−アミ′ノヘキシル
）マレイミド塩ｅ塩をｘ、４ｏｔ（６−（Ｎ−マレイミ
ド）−Ｎ’−ｔ−ブトキシカルボニル−１−アミンヘキ
サンを基準として算出した収率ニア６％〕得た。

融点：１５６〜１５８℃ 元素分析値（幅）： 実測値：　Ｃ５１，３６，Ｈ７，４８，Ｎｌ　１．９２
．α１４．９８計算値：　Ｃ５１，６１，Ｈ７，３６，
Ｎｌ　２．０４．　Ｃ１１５，２３無水マレイン酸３８
３．Ｏｆ　（３，９０ｍｏｌｅ　）をクメン３．７Ｅに
加えてクメン還流下に攪拌した。この溶液にジクミルパ
ーオキシド１６．３　ｆ　（６０ｍｍｏｌｅ）およびス
チレン２０３．Ｏｆ　（１，９５ｍｏｌｅ　）をクメン
１．７１に溶解させて得られた溶液を約４０分間を要し
て徐々に滴下した。滴下終了後、１時間加熱攪拌を続け
た。得られた反応液を一夜静置し、上澄液を除去したの
ち、容器に付着した粘稠生成物をアセトンに溶解さぞて
回収した。得られた回収液からアセトンを減圧下に留去
してスチレン−無水マレイン酸共重合体を３’　５３．
　Ｏｆ得た。

スチレン−無水マレイン酸共重合１１２０．Ｏｆ’をア
セトン３．ＯＡに溶解し、この溶液にｎ−ヘキサン４．
９１を攪拌下に約１時間で滴下した。白濁したアセトン
とｎ−ヘキサンとの混合液を別の容器に移し、この混合
液にｎ−ヘキサン９．７Ｅを攪拌下に約１．５時間を要
して滴下した。容器の器壁に付着したアメ状物をアセト
ンに溶解させて回収した。得られた回収液からアセトン
を減圧下に留去したのち、その残留物を７０〜８０℃の
温度で一夜真空乾燥を行い、分別沈殿されたスチレン−
無水マレイン酸共重合体を４９．：ＩＭ得た。

分別沈殿されたスチレン−無水マレイン酸共重合体４０
．Ｏｆをアセトン１．０ｋに溶解し、この溶液に表面シ
ラン処理をしたガラスピーズ（平均粒径０．１□）　３
．８　Ｋｙを加えたのち、アセトンを蒸発させることに
よシガラスビーズ表面に分別沈殿されたスチレン−無水
マレイン酸共重合体を付着させた。このガラスピーズを
内径８０　ｍ　、長さ８０工のカラムにアセトンとｎ−
ヘキサンとの混合液（２５℃における容積比が２４対７
６であるもの）１．４１とともに充填し、カラム系の温
度を２５℃に保ちつつ２種の容積比のアセトンとｎ−ヘ
キサンとの混合液〔アセトンとｎ−ヘキサンとの２５℃
における容積比が（ｉ）２４対７６の混合液１．６Ｅお
よび（ｉｉ）　３７対６３の混合液６．０！の順で〕、
次いでアセトン３．ＯＪの順でカラムの上部よシ滴下供
給した。上記のアセトンとｎ−ヘキサンとの容積比が３
７対６３の混合液の流出分を集めた。この流出分から減
圧下に低沸点物を留去し、ついで７０〜８０℃の温度で
一夜真空乾燥することによシ、分別されたスチレン−無
水マレイン酸共重合体を３１．８ｆ得た。このもののゲ
ルパーミェーションクロマトグラフィー（以下、これを
ＧＰＣと略称する；溶出液としてテトラヒドロフランを
用い、標準物質としてポリスチレンを用いた。以下同様
）による分析で重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分
子量（Ｍｎ）を求めたところ、Ｍｗは１３４０蒸気圧浸
透圧計による測定ではＭｎは１２１０であった。また得
られた分別されたスチレン−無水マレイン酸共重合体中
の構成単位である無水マレイン酸環の含有率を電位差滴
定法によシ求めたところ、４７．３モルチであった。

分別されたスチレン−無水マレイン酸共重合体１０．０
０　ｔ、ｎ−ブチルアｈコ−／Ｉ／２．２０　ｆ、無水
酢酸リチウム０．１０ｒおよびジオキサン２０ｙｕｌを
磁気攪拌子を備えた約４０ｄ容のアンプルに仕込み封管
した。このアンプルの内容物を攪拌下に９０℃の温度で
２０時間加熱した。得られた反応液の一部をサンプリン
グし、反応液中の未反応ｎ−ブチルアルコール量をエチ
ルセロンルプを内部標準としてガスクロマトグラフィー
により定量し、仕込みｎ−ブチルアルコールの反応率か
ら共重合体中に存在していた無水マレイン酸環の片ブチ
ル＝６２− エステル化度を算出したところ６２％であった。

次に、反応液をジオキサン２０ｍＡ！で希釈し、との希
訳液をｎ−ヘキサン４００　ｒｕｌ中に滴下して再沈殿
の操作を行い、得られた沈殿を回収して約６゜°Ｃの温
度で一夜真空乾燥することによシ、目的とする部分片ｎ
−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共
重合体を１１．５（Ｈ’得た。このものの赤外線吸収ス
ペクトル（ＦＴ−ＩＲ，ＫＢｒディスク法、以下同様）
の１７８Ｑｃｍｌおよび７００α−１における吸収強度
を基にして残存無水マレイン酸環の含有率を求めたとこ
ろ、３０．３モル係（１分子中に無水マレイン酸環が平
均１．８個存在）であった。またＧＰＣ分析から、この
もののＭｗは１５３０ｆ、Ｓす、Ｍｎ　ｉ！：　１４４
０　テ；ｈッｆｃ　（Ｍｗ／Ｍｎ＝１０６）。

上記（ｂ）で得られた部分片ｎ−ブチルエステル化され
たスチレン−無水マレイン酸共重合体８００Ｔｎｙ（０
，５ｍｍｏｌｅ　）を０．８Ｍ重炭酸ナトリウム水溶液
８．０　ｍｌに加え、約３℃の温度で３．５時間攪拌す
ることによシ、該共重合体中の無水マレイン酸環を１分
子当）平均１細根度になるように開環させた。この反応
液に上記（ａ）で得られたＮ−（６−アミノヘキシル）
マレイミド塩酸ｕ１１６■（０，５ｍｍｏｌｅ）を添加
し、約３℃の温度で２４時間反応させた。得られた反応
液の一部をサンプリングし、アミン基の反応率をＴＮＢ
Ｓ（）リニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム）法によ
シ測定したところ、８９チであった。この反応液を濾過
し、その濾液をセファデック、ｘ、Ｇ　−１５（Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘＧ−１５：商品名、ファルマシア社製）を担
体とするゲル濾過〔カラム：に５０／６０（ファルマシ
ア社製）、溶出液：５ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液と
５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液の容積比が６対４の混合
液、線速度：　１１．　Ｏｃｍ／　ｈｒ：］に付し、目
的トスル溶出分を分取し、凍結乾燥することにより、下
記の物性値を有するマレイミド基含有共重合体、すＲ７
はｎ−ブチル基または水素原子を表わす）でポウ、Ｑｌ
ｌおよびＱ２１の一方はカルボキシル基を表ゎわす）で
示される基を有する共重合体と、構成単ル基または水素
原子を表わす）で示される基を有およびＱ　の一方はカ
ルボキシル基を表わし、他方示される基を有する共重合
体との混合物を６００■得た。このもののマレイミド基
含有量は共重合体１分子当り平均０．７個であった。

紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ　　３０５　ｎｍ赤外
線吸収スペクトル：　３４４０．２９６０，１７３０．
１７１０゜１５７０．１１８０．７ＱＱｍ−１ 元素分析値（％、実測値）　：　Ｃ６２，８０，Ｈ６，
９４，Ｎ３．０４ＧＰＣ分析ヨ！ｌ）求メタ分子量：　
Ｍｗ＝１８１０．　Ｍｎ＝１７００゜Ｍｗ／Ｍ　ｎ　＝
　１．０６ 参考例２ 参考例１の（′ｂ）におけると同様の方法によシ得られ
たスチレン−無水マレイン酸共重合体１０．Ｏｆをジオ
キサン３０．　Ｏａｌに溶解し、次いで、得られた溶液
に水１５．０ＷＬｌを加えて加熱還流下に２４時間攪拌
した。次に、反応液をそのまま凍結乾燥することにより
、下記の物性値を有する部分加水分解されたスチレン−
無水マレイン酸共重合体を１０．２ｆ得た。このものの
無水マレイン酸環含有量を参考例１の（ｂ）におけると
同様にして赤外線吸収スペクトルの測定によシ求めたと
ころ、共重合体１分子当シ平均１．０個であった。

ＧＰＣ分析よシ求めた分子量”Ｗ＝１４６０．　Ｍｎ＝
　１３４０．　Ｍｗ／Ｍｎ＝　１．０９参考例１の（ａ
）におけると同様の方法によシ得られたＮ−（６−アミ
ンヘキシル）マレイミド塩酸塩１１６”？　（０，５ｍ
ｍｏｌｅ）を０．８Ｍ重炭酸ナトリウム水溶液８．０　
ｄに加え、次いで水冷下に攪拌しながら上記（ａ）で得
られた部分加水分解されたスチレン−無水マレイン酸共
重合体８００ｍ１（０，５５ｍｍｏｌｅ）を徐々に添加
し、攪拌下に４時間反応させた。得られた反応液の一部
をサンプリングし、アミノ基の反応率をＴＮＢＳ法によ
シ測定したところ７８％であった。この反応液を参考例
１の（ｃ）におけると同様にしてゲル濾過に付し、凍結
乾燥することによシ、目的とするマレイミド基含有弁型
（式中、ＱｌｌおよびＱ２１の一方はカルボキシル基を
を表わす）で示される基を有する共重合体と、構および
Ｑ２１の一方はカルボキシル基を表わし、他方示される
基を有する共重合体との混合物を５６０■得た。このも
ののマレイミド基含有量は共重合体１分子当シ平均０．
６個であった。また、とのものの赤外線吸収スペクトル
を第１図に示す。

以下余白 参考例３ の合成 ６一アミノーｎ−カプロン酸１３．２０ｒ（０，１０ｍ
ｏｌｅ　）および無水マレイン酸９．８０　Ｓ’　（０
，１０ｍｏｌｅ）をクロロホルム８Ｑｍｌに加え、加熱
還流下に５時間攪拌した。反応液から減圧下にクロロホ
ルムを留去したのち、その残留物に無水酢酸８０ｍ１お
よび無水酢酸ナトリウム２．５　Ｏｆを加え、９０°Ｃ
の温度で４時間攪拌した。得られた反応液を室温まで冷
却し、析出した沈殿物を濾去した。濾液から減圧下に溶
媒を留去することにより粘稠な液体を得た。この液体を
アセト°ンとｎ−ヘキサンの容積比が２対８の混合液を
展開液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーに付することによシ、下記の物性値を有する６−（Ｎ
−マレイミド）カプロン酸を５４０２得た。

融点：８４．Ｏ〜８５０°Ｇ 紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ２９８ｎｍ赤外線吸収
スペクトル：　２９４０，１７０５，１４０６，８１８
゜７００ｃｎ１〜１ ５−　（Ｎ　−マレイミド）カプロン酸２５３　”Ｖ（
１，２ｍｍｏｌｅ　）、塩化チオ＝ルア　１４”ｆ　（
６，０ｍｍｏｌｅ　）およびピリジンｌＯμ！を蒸留に
よジェタノールを除去したクロロホルム５　ｔｒｔｌに
加え、室温で５時間攪拌した。得られた反応液から低沸
点物を留去することによ！１．６−（Ｎ−マレイミド）
カプロン酸クロリドを２８３　ｍｇ得た。

無水マレイン酸４．３０　ｆ　（４４ｍｍｏｌｅ）をｐ
−イソプロビルベンジルアセテート３０ＷＬｌに加えて
１５０℃の温度で攪拌下に溶解させた。得られた溶液に
ジクミルパーオキシド０．１６７（０，５９ｍｍｏｌｅ
　）およびスチレン２．３０　ｆ　（２２ｍｍｏｌｅ）
をｐ−イソプロピルベンジルアセテート１５ｍＡ！に溶
解させて得られた溶液を約１７分間を要して徐々に滴下
した。滴下終了後、１５分間加熱攪拌を続けた。得られ
た反応液を冷却したのち、この反応液をヘキサン２Ｅに
攪拌下約３０分間を要して滴下した。生成した沈殿物を
濾別し、乾燥することによシ、片末端にＣＨ３ＣＯ０Ｃ
Ｈ２−ＱＣ（Ｃ，Ｈａ　）２−で示される基を有するス
チレン−無水マレイン酸共重合体を８１０７得た。

得られたスチレン−無水マレイン酸共重合体８００７を
アセトン１６０ｍ１に溶解し、この溶液にｎ−ヘキサン
２４０　ａｌを攪拌下に約２０分間を要して滴下した。

白濁したアセトンとｎ−ヘキサンとの混合液を別の容器
に移し、この混合液にｎ−ヘキサン４００＋ｎＡ’を攪
拌下に約３０分間を要して滴下した。得られたアメ状物
をアセトンに溶解させて回収した。回収液からアセトン
を減圧下に留去したのち、その残留物を７０〜８０℃の
温度で一夜真空乾燥することによシ、分別沈殿された片
末端にＣＨ３ＣＯ０ＣＨ２ＱＣ（ＣＨ３）　２−で示さ
れる基を有するスチレン−無水マレイン酸共重合体を２
．８０２得た。このもののＧＰＣ分析よシ求めたＭｗは
１４６０ｆあ地Ｍｎは１１９０で、ｉつだ（Ｍｗ／Ｍｎ
＝１．２３）。

分別沈殿されたスチレン−無水マレイン酸共重合体１．
０Ｏｆおよび無水酢酸リチウム１０７’１ｇをｎ−ブチ
ルアルコール２０ｍ１に加え、９５℃の温度で攪拌下に
２０時間加熱した。得られた反応液から減圧下にｎ−ブ
チルアルコールを留去した。残留物にジオキサン１０ｒ
ｒｔｌを加えて凍結乾燥するととに！Ｄ、片末端Ｋ　Ｃ
Ｈ３ＣＯ０ＣＨ２−Ｃ＞Ｃ（ＣＨ３）　２−　テ示され
る基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレ
ン−無水マレイン酸共重合体の白色粉末を１．２（１’
得た。赤外線吸収スペクトルの測定結果より、このもの
には残存無水マレイン酸環は認められなかった。またＧ
ＰＣ分析から、とのもＣ１（Ｄ　Ｍｗは１９ｏｏで６Ｄ
、Ｍｌｔ１５４０−ｒ、％つた（　Ｍｗ／Ｍｎ　＝　１
．２３）。

得られた片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水
マレイン酸共重合体１．０（１’をＩＮ水酸化ナトリウ
ム水溶液２Ｑｒｒｔｌに加え、室温で４時間攪拌した。

得られた反応液に２．５Ｎ塩酸を攪拌下に徐々に加えて
反応液の州が１ないし２の範囲内になるように調整した
。析出した沈殿物を濾別し、水洗したのち、アセトン２
０ｙｄに溶解させた。得られた溶液に２．５Ｎ塩酸ｌ　
ｍｌを加え、均一な酸性溶液を得た。この酸性溶液に水
３Ｑｒｒｔｌを加えたのち、これより減圧下にアセトン
を留去し、析出した沈殿物を濾別し、水洗したのち、乾
燥することによシ、下記の物性値を有する片末端にＨＯ
ＣＨ２−（ΣＣ（ＣＨ３）２−で示される基を有し、か
つ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイ
ン酸共重合体を０．８５ｆ得た。

赤外線吸収スペクトル：　３２００，２９６０，１７４
０，１７１２゜１４６０、１１７０．７０８ｃｒ＋＋ 上記（ａ）で得られた６−（Ｎ−マレイミド）カプロン
酸クロリド２８３　”？　（１，２ｍｍｏｌｅ　）、ピ
リジン５０　ｐｌ　および前記（ｂ）で得られた片末端
に＝７４− ＨＯＣＨ２−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有し
、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水マ
レイン酸共重合体１００Ｔｑ（０，０５ｍｍｏｌｅ）を
テトラヒドロフラン２．０　ｄ　Ｋ加え、攪拌下に室温
で５時間反応させた。反応液を濾過し、その濾液をこれ
よシ未反応の６−（Ｎ−マレイミド）カプロン酸クロリ
ドを除去する目的で分取ＧＰＣ（装置：日本分析工業製
ＬＣ−９，カラム：　ＪＡＩＧＥＬ　ｌＨ２ＯＸ６００
ｍｍφ２本、溶出液：テトラヒドロフラン）に付し、得
られた目的とする溶出液から減圧下にテトラヒドロフラ
ンを留去することによシ、固型の反応生成物を１０５■
得た。次に、このようにして得られた反応生成物をｐｆ
（８，０のリン酸緩衝液２００　ｒｕｌに加え、室温で
３時間攪拌することによ、９．６−（Ｎ−マレイミド）
カプロン酸クロリドが原料の共重合体のカルボキシル基
に反応して生成した混合酸無水型の結合部分を加水分解
した。

反応液に攪拌下に２．５Ｎ塩酸を加えて反応液の田が１
ないし２の範囲内になるように調整した。析出した沈殿
物を濾別し、水洗したのち、アセトン２Ｑｍｌに溶解さ
せた。得られた溶液に２．５Ｎ塩酸をＱ、　５　ａｌ加
え、均一な酸性溶液を得た。この酸性溶液に水３０ｍ１
を加えたのち、これよシ減圧下にアセトンを留去し、析
出した沈殿物を濾別し、水洗したのち、乾燥することに
より、片末端に有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化され
たスチレン−無水マレイン酸共重合体を８０■得た。こ
のもののマレイミド基含有量は共重合体１分子当り平均
０．４個であった。また、このものの赤外線吸収スペク
トルを第２図に示す。

参考例４ 参考例３の（ｂ）におけると同様にして得られた片末端
にＣＨｓ　Ｃ００ＣＨｚ　（ΣＣ（ＣＨ３）２−で示さ
れる基を有するスチレン−無水マレイン酸共重合体を同
様にして分別沈殿に付した。得られたアメ状物を容器内
に残し、アセトン左ｎ−ヘキサンの容積比が２対８の混
合液を別の容器に移し、この混合液から減圧下に溶媒を
留去することによシ、粘稠な液体を３．０り得た。次に
、この粘稠な液体をテトラヒドロフラン４５ｍ１に溶解
して得られた溶液を参考例３の（Ｃ）　Ｋおけると同様
にして分取ＧＰＣＫ付し、得られた目的とする溶出液か
ら減圧下にテトラヒドロフランを留去することによシ、
分別された片末端Ｋ　ＣＨ３ＣＯ０ＣＨ２ＧＣ（ＣＨ３
）　２−　テ示す：ｈ　ル基を有するスチレン−無水マ
レイン酸共重合体を０．９０２得た。ＧＰＣ分析から、
このもののＭｗは７９０であ、ｂ、Ｍｎ、Ｈ７７０テｈ
　ツタ（Ｍｗ／Ｍｎ　＝　１．０３　）。

得られたスチレン−無水マレイン酸共重合体０．８Ｏｆ
を参考例３の（ｂ）におけると同様にして片ｎ−ブチル
エステル化し、次いで加水分解することによシ、片末端
にＨＯＣＨ２−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有
し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水
マレイン酸共重合体を０．５４グ得た。ＧＰＣ分析よシ
、このもののＭＷＪ’Ｎ０ＩＯであシ、Ｍｎは９８０で
あった（　Ｍｗ／Ｍ　ｎ　＝　１．０３　）。

上記（ａ）で得ら九た片末端にＨＯＣＨ２−Ｃ＞ｃ　（
ＣＨ３）　２−で示される基を有し、かつ片ｎ−ブチル
エステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体０
．２０？　（０，２ｍｍｏｌｅ　）と参考例３の（ａ）
におけると同様にして得られた６−（Ｎ−マレイミド）
カプロン酸クロリド０．２３　ｆ　（１，０ｍｍｏｌｅ
　）とを参考例３の（Ｃ）におけると同様の方法によシ
反応させ、月末基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化
されたスチレン−無水マレイン酸共重合体を０．１７Ｆ
得た。

参考例５ −７８＝ マレイミド基含有共重合体（２）の合成無水マレイン酸
２１．６０９　（０，２２ｍｏｌｅ　）をアセトン５　
、Ｑ　ｍｌに溶解して得られた溶液にエチレングリコー
ルビス（３−・・アミノプロピル）エーテル１７．６０
　ｆ　（０，１０ｍｏｌｅ　）をアセト７９　Ｑ　ｒｔ
ｔｌ！に溶解して得られた溶液を２５〜３０℃の温度で
攪拌下に１時間を要して徐々に滴下した。滴下終了後、
反応液に臭化リチウム０．２０１、）リエチルアミン５
　ｖｔｌおよび無水酢酸２５．５０７（０，２５ｍｏｌ
ｅ　）を加え、６０℃の温度で２時間攪拌した。得られ
た反応液を室温まで冷却したのち、これに水２００ｍ１
を滴下した。得られた混合液を塩化メチレンで抽出し、
有機層を水洗したのち、無水硫酸す）　ＩＪウムで乾燥
した。この有機層から減圧下に溶媒を留去することによ
シ、粘稠な液体を得た。この粘稠な液体にシクロヘキサ
ンｓｏ’ｏｍｇを加え、５０〜６０℃の温度で加温しな
がら１０分間攪拌したのち、しばらく静置した。上澄液
を室温まで冷却することにより、下記の物性値を有する
エチレンクリコールビス（３−Ｎ−マレイミドフロビル
）エーテルの白色結晶を０．８０２得だ。

紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ３００ｎｍ赤外線吸収
スペクトル：　３１００，２８９０，１７００，１４１
０゜１１１６．８４４，６９８ｚ” （ｂ）に１ニイソプロピルフェニルーチオアセテートの
合成 イソプロピルベンゼア　８０．０　？　（０，６７ｍｏ
ｌｅ）をクロロホルム３００ゴに加え、−１０℃〜０℃
の水浴で冷却しながら攪拌した。この溶液に蒸留精製し
だりＩ：Ｉ　／ｌ／　ス／ｌ／ホン酸８９　ｒｕｅ　（
１，３４ｍｏｌｅ）を約３０分間を要して徐々に滴下し
た。滴下終了後、室温で３０分間攪拌した。得られた反
応液を氷水中に注ぎ、次いでクロロホルム２００　ｗｅ
で抽出した。抽出液を氷水５００　ｍｌで３回洗滌した
のち、無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥した。この抽
出液から減圧下にクロロホルムを留去することにより、
ｐ−イソプロピルベンゼンスルホニルクロリドを５５．
Ｏｆ（イソプロピルベンゼンを基準として算出した収率
：３８％）得た。

２７１容三つロフラスコに氷５００２を加え、次いで濃
硫酸１００１ｒＬｌを注意深く加えた。得られた水溶液
を０℃に冷却したのち、これに上記で得られだｐ−イソ
プロピルベンゼンスルホニルクロリド５５．Ｏｆ　（０
，２５ｍｏｌｅ　）を加え、次イテ溶液ノ温度を０〜２
℃に維持しながら亜鉛粉末を徐々に添加したのち、攪拌
下に２４時間反応させた。引続き、反応液を加熱還流下
に１．５時間攪拌した。得られた反応液を室温まで冷却
したのち、ｎ−ヘキサンで抽出した。抽出液を無水硫酸
マグネシウムで乾燥したのち、蒸留することによシ、沸
点１０６．５〜１０７．５℃／　２１　ｔｔｍＨ９のｐ
−イソプロピルチオフェノールを２４．２９Ｃｐ−イソ
プロピルベンゼンスルホニルクロリドを基準として算出
した収率：６３％）得た。

得うしたｐ−イソプロピルチオフェノール２４２９　（
０，１３ｍｏｌｅ）をジエチルエーテル５００　ｍｌに
溶解し、この溶液に塩化アセチル１０．７　ｍｌ（０，
１４ｍｏｌｅ　）を添加した。得られた溶液を水浴で冷
却しながら攪拌し、これにピリジン１１．４ｍ１（０，
１４ｍｏｌｅ　）を約１０間を要して徐々に滴下した。

滴下終了後、室温で一夜攪拌した。得られた反応液から
沈殿物を濾去した。濾液を蒸留水で２回洗滌したのち、
無水硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸留することによシ、
沸点１４８〜ｂ ５−ｐ−イソプロピルフェニル−チオアセテートを２１
．６ｒ（１）−’ｆソプロピルチオフェノールを基準と
して算出した収率：８５％）得た。

窒素雰囲下、上記（ｂ）で得られた５−ｐ−イソプロピ
ルフェニルエチオアセテート１ｓ レイン酸４．３　０　ｆ　（　４　４ｍｍｏｌｅ　）を
加え、約１５０℃の温度で攪拌下に溶解させた。この溶
液に、ジクミルパーオキシド０．１　６　９　（　０．
５　９　ｍｍｏｌｅ　）およびスチｌ／：／　２，３　
０　？　（　２　２ｍｍｏｌｅ）を５−ｐ−イソプロピ
ルフェニル−チオアセテ−）　１　０　ｍｌに溶解させ
て得られた溶液を約１５分間を要して徐々に滴下した。

滴下終了後、１５分間加熱攪拌した。

得られた反応液を室温まで冷却したのち、ｎ−ヘキサン
２！に攪拌下に約３０分間を要して滴下した。生成した
沈殿物を濾別し、乾燥することにより、片末端にＣＨ３
ＣＯＳ　−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有する
スチレン−無水マレイン酸共重合体を７、６　Ｏｒ得た
。

得られたスチレン−無水マレイン酸共重合体７．６０ｆ
をアセトン１５０ｍ１ＩＫ溶解し、この溶液にｎ−ヘキ
サン２２５ｄを攪拌下に約３０分間を要して滴下した。

白濁したアセトンとｎ−ヘキサンとの混合液を別の容器
に移し、この混合液にｎ−ヘキサン３７５ｔｒｔｌを攪
拌下に約４０分間を要して滴下した。得られたアメ状物
をアセトンに溶解させて回収した。回収液からアセトン
を減圧下に留去したのち、その残留物を室温で一夜真空
乾燥することにより、分別沈殿された片末端にＣＨ３Ｃ
Ｏ８−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有するスチ
レン−無水マレイン酸共重合体を２．９０２得た。

このもののＧＰＣ分析よシ求めたＭｗは１４５０であり
、Ｍｎは１１８０であった（　Ｍｗ／Ｍｎ　＝　１．２
３　）。

分別沈殿されたスチレン−無水マレイン酸共重合体１．
０　Ｏｆおよび無水酢酸リチウム１０■をｎ−ジプチル
アルコール２０ゴ加え、９５℃の温度で攪拌下に２０時
間加熱した。得られた反応液から減圧下にｎ−ブチルア
ルコールを留去した。残留物にジオキサン１０ｍＡ’を
加えて凍結乾燥することによシ、片末端にＣＨ３０Ｏ８
（叉Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有し、かつ片ｎ−
ブチルエステル化すれたスチレン−無水マレイン酸共重
合体を１．２０ｆ得た。赤外線吸収スペクトルの測定結
果よシ、このものには残存無水マレイン酸環は認められ
なかった。またＧＰＣ分析から、このもののＭｗは１９
５０であシ、Ｍｎは１５９０であった（　Ｍｗ／Ｍｎ＝
１．２３）。

得られた片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水
マレイン酸共重合体０．２５９をＩＮ水酸化ナトリウム
水溶液２０ｍ１に加え、室温で２０分間攪拌した。得ら
れた反応液Ｋ　２．５　Ｎ塩酸を攪拌下に徐々に加えて
反応液の州が１ないし２の範囲内になるように調整した
。析出した沈殿物を濾別し、水洗したのち、アセトン２
０１１Ｌｌに溶解させた。

得られた溶液に２．５Ｎ塩酸１　ｔｕｇを加え、均一な
酸性溶液を得た。この酸性溶液に水３０ｄを加えたのち
、これよシ減圧下にアセトンを留去し、析出した沈殿物
を濾別し、水洗したのち、乾燥することにより、下記の
物性値を有する片末端にＭＳ−Ｑ−Ｃ（ＣＨす２−で示
される基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたス
チレン−無水マレイン酸共重合体を０．２３ｆ得た。

赤外線吸収スペクトル：　３２００．２９６０．１７４
０．１７１０゜１４５５、１１７０．７０５ｃｒｎ−１
里 上記（ａ）で得られたエチレングリコールビス（３−Ｎ
−マレイミドプロピル）エーテル４０ｗ！（１，２８５
−Ｘ１Ｏりをアセトニトリル１ゴに溶解し、室温で攪拌
しながら、この溶液に上記（Ｃ）で得られた片末端Ｋ　
Ｈ８−ｏ−Ｃ（ＣＨ３）２−　ｆ示すレル基ヲ有Ｌ、か
つ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイ
ン酸共重合体４０■（２ｘ　１０−５ｍｏｌｅ　）を約
５分間を要して徐々に添加した。添加後、５時間攪拌を
続けた。得られた反応液を濾過し、その濾液をこれより
未反応のエチレングリコールビス（３−Ｎ−マレイミド
プロピル）エーテルを除去する目的で分取ＧＰＣ（装置
：日本分析工業膜ＬＣ−９．カラム：ＪＡＩＧＥＬ　　
ＩＨ２０Ｘ６００ｍφ２本、溶出液：クロロホルム）に
付し、得られた目的とする溶出液から減圧下にクロロホ
ルムを留去することによシ、片末端に される基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたス
チレン−無水マレイン酸共重合体を２８■得た。このも
ののマレイミド基含有量は共重合体１分子当シ平均０．
６個であった。また、このものの赤外線吸収スペクトル
を第３図に示す。

参考例６ クロロホルム５Ｑｒｒｔｌに１，６−ジアミツヘキサン
１１．６ｏｒ（０、ｌ　Ｑ　ｍｏｌｅ　）を溶解して得
られた溶液に、無水マレイン酸１９．６０２（０，２０
ｍｏｌｅ　）をクロロホルム１ｏｏｍｇに溶解させて得
られた溶液を攪拌下に約１時間を要して徐々に滴下した
。滴゛下終了後、クロロホルム還流下に４時間加熱反応
させた。得られた反応液から減圧下にクロロホルムを留
去し、その残留物に無水酢酸ナトリウム７．５りおよび
無水酢酸１００　ｍｌを加え、９０℃の温度で４時間攪
拌した。反応液を室温まで冷却し、析出した沈殿物を濾
去し、濾液かも減圧下に溶媒を留去することにより粘稠
な液体を得た。この液体をアセトンとｎ−ヘキサンの容
積比が２対８の混合液を展開液として用いるシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付することにより粗結晶を
得た。

次いで、この粗結晶をベンゼンで再結晶することによシ
、下記の物性値を有するＮ、Ｎ’−−キサメチレンビス
マレイミドを１．３７；４た。

融点：１３６〜１３７℃ 紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ３００ｎｍ赤外線吸収
スペクトル：　３０００，２９５０，１７００，１４５
０゜１４１０．８４０，７００Ｃｒｎ−” 上記（ａ）で得られたＮ、　Ｎ’−−キサメチレンビス
マレイミド１９９ｑ（７，２ｘｌ　Ｏ’ｍｏｌｅ）をア
セトニトリルｌＱｍＡ’に溶解させて得られた溶液に、
参考例５の（Ｃ）におけると同様にして得られだ片末端
にＨ８−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有し、か
つ片ｎ−ブチルエステル化すしたスチレン−無水マレイ
ン酸共重合体２４０　”Ｉｉ’　（１，２Ｘ　１０−’
ｍｏｌｅ）を約５分間を要して徐々に添加した。添加後
、５時間攪拌を続けた。得られた反応液から減圧下にア
セトニトリルを留去し、その残留物にクロロホルム３　
ｍｌを加えた。この溶液を濾過し、その濾液をこれより
未反応のＮ、　Ｎ’−ヘキサメチレンビスマレイミドを
除去する目的で参考例５の（ｄ）におけると同様にして
分取ＧＰＣに付することにより、片末端にし、かつ片ｎ
−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共
重合体を１２０　ｍｙ得た。このもののマレイミド基含
有量は共重合体１分子当り平均０．５個であった。また
、このものの赤外線吸収スペクトルを第４図に示す。

参考例７ マレイミド基含有共重合体（１）の合成参考例１　（ｂ
）において、ｎ−ブチルアルコール２２０Ｌｉの代りに
ｎ−ヘキシルアルコール３．０２２を用いる以外は、参
考例１（ｂ）と同様に行って、目的とする部分片ｎ−ヘ
キシルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重
合体を９．８″ｉ得た。

次に参考例１（Ｃ）と同様の方法に従って、Ｎ−（６−
アミノヘキシル）マレイミド塩酸塩１１６■と部分片ｎ
−ヘキシルエステル化さｉたスチレン−無水マレイン酸
共重合体８５０７＋１！７とを反応させ、目的とする下
記のマレイミド基含有共重合体、すＲ７はｎ−ヘキシル
基または水素原子を表わす）で（式中、ＱｌｌおよびＱ
２１の一方はカルボキシル基を表わす）で示される基を
有する共重合体と、構成単位（イ）として−ＣＨ２−Ｃ
Ｈ−で示される基を有し、構成シル基または水素原子を
表わす）で示される基をおよびＱ２１の一方はカルボキ
シル基を表わし、他方される基を有する共重合体との混
合物を５５０■得た。このもののマレイミド基含有量は
共重合体１分子当シ平均０．５個であった。

参考例８ 無水マレイン酸２．１６Ｆをエチルベンゼン２０ｄに加
えて約１１０℃の温度で攪拌した。この溶液にアゾイソ
ブチロニトリル１ｏ８１ｎｆ１スチレン２．０８Ｆおよ
び５−４−メルカプ・ドブチルチオアセテート２８９＃
ＩＦをエチルベンゼンｌＱｍｌに溶解させて得られた溶
液を約１５分間を要して徐々に滴下した。滴下終了後、
１５分間加熱攪拌を続けだ。得られた反応液を冷却した
のち、この反応液をヘキサン２Ｅに攪拌下約３０分間要
して滴下した。生成した沈殿物を濾別し、ヘキサンで洗
浄したのち乾燥することによシ、片末端にＣＨ３ＣＯ８
−（ＣＨ２）４−８−で示される基を有するスチレン−
無水マレイン酸共重合体４．１０２を得た。

上記で得られた共重合体２．００　ｆおよび無水酢酸リ
チウム２０　ｍｇをインペンチルアルコール４０ｒｕｇ
に加え、９５℃の温度で攪拌下に２０時間加熱した。得
られた反応液から減圧下にイソペンチルアルコールを留
去した。残留物にジオキサン２０ｍ１を加えて凍結乾燥
することにょシ、片末端にＣＨ３ＣＯ３−（ＣＨ２）４
−８−で示される基を有し、かつ片インペンチルエステ
ル化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体を２．３
８９得た。

参考例５（Ｃ）の片末端にＣＨ３ＣＯ８−Ｑ−Ｃ（ＣＨ
３）２−で示される基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステ
ル化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体のＩＮ水
酸化ナトリウム水溶液による処理と同様の方法に従って
、片末端にＣＨ３ＣＯ３−（ＣＨ２）４−８−で示され
る基を有し、かつ片イソペンチルエステル化されたスチ
レン−無水マレイン酸共重合体０．２５ｆをＩＮ水酸化
ナトリウム水溶液２０ｒｕｌで処理して、片末端にＨ８
−（ＣＨ２）４−８−で示される基を有し、かつ片イン
ペンチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共
重合体を０．２１ｆ得た。

次に参考例５（ｄ）と同様の方法に従って、片末端にＨ
８−（ＣＨ２）４−８−で示される基を有し、かつ片イ
ンペンチルエステル化さレタスチレンー無水マレイン酸
共重合体４０■とエチレングリコールビス（３−Ｎ−マ
レイミドプロピル）エーテル４０■とを反応させ、片末
端に で示される基を有し、かつ片イソペンチルエステル化さ
れたスチレン−無水マレイン酸共重合体を２４■得た。

このもののマレイミド基含有量は共重合体当シ平均０．
４個であった。

９３一 実施例１ ０、　Ｉ　Ｎ　）リス塩酸水溶液（田８．０）２．５ｍ
ｌにヒト型ＳＯＤ水溶液（８７ｍＷ／ｗｅ）　３６０　
ｐｌを加えて溶解させた。この溶液に、参考例１で得ら
れたマレイミド基含有共重合体３６．６　ｍＷをジメチ
ルスルホキシド１５０μｌに溶解して得られた溶液を攪
拌下に徐々に添加し、室温で３時間攪拌したのち、４°
Ｃの温度で一夜放置した。得られた反応液を濾過し、そ
の濾液をセファデックスＧ−７５（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ
−７５：商品名、ファルマシア社製）を担体として用い
るゲル濾過〔溶出液’　２０’ｍＭ　＋）ン酸緩衝液（
田７．２））に付し、ＳＯＤおよびＳＯＤ誘導体を含む
画分を合して限外濾過することによシ、約３　ｙＬｌに
濃縮した。得られた濃縮液のタンパク質濃度は７．７　
ｍ’ｉ　／　ｍｅであった。濃縮液５００μｌを、ＡＨ
−−１＝７アｏ　−ス４　Ｂ　（ＡＨ−５ｅｐｈａｒｏ
ｓｅ　４　Ｂ　：商品名、ファルマシア社製）を担体と
して用いるアフイニテイカラムクロマトグラフイー（ゲ
ル２　ｍｌ　）に付し、溶出液として０．１Ｍ重炭酸ナ
トリウムを含む１０　ｍＭ　リン酸緩衝液ＩＱ＋＋＋Ｊ
を用いて未反応のＳＯＤを含む画分を分取し、次いでＱ
、１Ｍ重炭酸ナトリウムおよび３Ｍ塩化ナトリウムを含
む１０ｍＭ　＋）ン酸緩衝液１０ＷＬｌを用いてＳＯＤ
誘導体を含む両分を分取した。ＳＯＤ誘導体を含む画分
を限外濾過により２００μｌに濃縮した。ＳＯＤ誘導体
の収量は１■であった。使用したＳＯＤ、上記で得られ
た反応液、ゲル濾過によシ得られたＳＯＤおよびＳＯＤ
誘導体を含む画分、アフイニテイ力ラムクロマトグラフ
イーによシ得られたＳＯＤを含む画分、ならびにアフイ
ニテイカラムクロマトグラフイーにより得られたＳＯＤ
誘導体を含む画分をそれぞれ電気泳動させて得られた結
果を、第５図の（ａ）、（ｂ）、（Ｃ）、（ｄ）　ｂよ
び（ｅ）に示す。また、使用したＳＯＤおよびマレイミ
ド基含有共重合体、々らびに得られたＳＯＤ誘導体のそ
れぞれの紫外部吸収スペクトルを第６図の（１）１　（
２）および（３）に示す。

実施例２ リン酸緩衝液（Ｆ’Ａ　７．５　）　２．５　ｍｌにヒ
ト型ＳＯＤ水溶液（６Ｂ７ｎ９／ｒｕｇ　）　１５０μ
Ｊ（６，４Ｘ１０７ｍｏｌｅ）を加え、５〜１０℃の温
度で攪拌した。得られた溶液に、参考例３で得られたマ
レイミド基含有共重合体（２）　２５．ＯｒｎＹ　（１
，２Ｘ　１０　’ｍｏｌｅ）を徐々に加えたのち、２０
時間攪拌を続けた。反応液を濾過し、その濾液を−ｔ７
７デツｙ　ｙ、　Ｇ　−７５Ｓ　Ｆ　（５ｅｐｈａｄｅ
ｘＧ−７５３Ｆ　：商品名、ファルマシア社製）を担体
として用いるゲル濾過（カラム：に２６／４０．ファル
マシア社製、溶出液：　１０　ｍＭ重炭酸アンモニウム
水溶液）に付し、ＳＯＤ誘導体を含む画分を分取し、凍
結乾燥することによｐ、ＳＯＤ誘導体を１１、２　ｍ￥
得た。このものの赤外線吸収スペクトルを第７図に示す
。

実施例３ ヒト型ＳＯＤ水溶液（８７ｍｇ／ｗｔｌ）　４００　ｐ
１３に０．２５Ｍリン酸水素二カリウム水溶液４００μ
ｌを加えて、水溶液の田を８０に調整した。この水溶、
液に、参考例３で得られたマレイミド基含有共重合体（
２）　４３．０　ｍＷをジメチルスルホキシド１００μ
ｌに溶解して得られた溶液を攪拌下に徐々に碓加した。

添加後、反応液ＫＩＭ）ＩＪス水溶液を加えて＝９７− その川を８０に調整し、得られた水溶液を室温で３時間
攪拌したのち、４℃の温度で一夜放置した。

得られた反応液を濾過し、その濾液をセファデック、＜
Ｇ−５０（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−５０：商品名、ファル
マシア社製）を担体として用いるゲル濾過〔溶出液：　
２０　ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ７，２）］に付し、ＳＯ
ＤおよびＳＯＤ誘導体を含む画分を合して限外濾過する
ことにより、約１．３　ｍｌに濃縮した。得られた濃縮
液のタンパク質濃度は２３．６ｍｙ／ＷＬｌであった。

濃縮液１．２　ｒｕｇを、ＡＨ−セファロース４Ｂ（Ａ
　Ｈ−５ｅｐｈａｒｏｓｅ　４　Ｂ　：商品名、ファル
マシア社製）を担体として用いるアフイニテイ力ラムク
ロマトグラフイー（ゲル１５ｒｒｔｌ）に付し、溶出液
としテ０．１　Ｍ　）リス塩酸水溶液（ｐｆ−１８，Ｏ
）４５ｍ／を用いて未反応のＳＯＤを含む両分を分取し
、次いで１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．１　Ｍ　）リス
塩酸水溶液（ＰＨ８，０）４５ｍｌを用いてＳＯＤ誘導
体を含む画分を分取した。ＳＯＤ誘導体を含む両分を限
外濾過に付し、次いでその濃縮液を２Ｑ　ｍＭ　ＩＪン
酸緩衝液（ＰＨ７，２）を透析液として用いる透析処理
（１，５ｔｘ３回）に付することによシ、ＳＯＤ誘導体
を含む溶液を１．６　ｔｕｌ得た。ＳＯＤ誘導体の収量
は１７■であった。使用したＳＯＤ、上記で得られた反
応液、ゲル濾過によシ得られたＳＯＤおよびＳＯＤ誘導
体を含む両分、アフイニテイカラムクロマトグラフイー
によシ得られたＳＯＤを含む画分、ならびにアフイニテ
イ力ラムクロマトグラフイーにより得られたＳＯＤ誘導
体を含む画分をそれぞれ電気泳動させて得られた結果を
、第８図の（ａ）、（ｂ）、（Ｃ）、（ｄ）および（ｅ
）に示す。

実施例４ 実施例２において参考例３で得られたマレイミド基含有
共重合体（２）　２５．０　ｍ９を用いる代シに参考例
４で得られたマレイミド基含有共重合体（２）１３．０
■（１，３Ｘ　１０−５ｍｏｌｅ）を用いる以外は同様
にして反応および分離操作を行うことによシ、目的とす
るＳＯＤ誘導体を８．８■得た。

実施例５ 参考例５で得られたマレイミド基含有共重合体実施例２
において参考例３で得られたマレイミド基含有共重合体
（２）２５．０■を用いる代シに参考例５で得られたマ
レイミド基含有共重合体（２）２９．２Ｔｑ（１，３Ｘ
　１０’　”ｍｏｌｅ）を用いる以外ハ同ｉ＋、−ｔ、
テ反応および分離操作を行うことによシ、目的とするＳ
ＯＤ誘導体を１０．３ｍグ得た。

実施例６ 実施例２において参考例３で得られたマレイミド基含有
共重合体（２）　２５．０　ｍＷを用いる代シに参考例
６で得られたマレイミド基含有共重合体（２）　２６．
０ｍＷ　（１，３ｘ　Ｉ　Ｑ’　”ｍｏｌｅ　）を用イ
ル以外ハ同様ニジて反応および分離操作を行うことによ
シ、目的とするＳ’　ＯＤ誘導体を９．８■得た。使用
したＳＯＤおよびマレイミド基含有共重合体、ならびに
得られたＳＯＤ誘導体のそれぞれの紫外部吸収スペクト
ルを第９図の（１）、（２）および（８）に示す。また
、得られたＳＯＤ誘導体の赤外線吸収スペクトルを第１
０図に示す。　・ 実施例７ 実施例１において、参考例１で得られたマレイミド基含
有共重合体（１）　３６．６　”ｆの代シに参考例７で
得られたマレイミド基含有共重合体（１）　４５．０■
を用いる以外は同様にして反応および分離操作を行うこ
とにより、目的とするＳＯＤ誘導体３５．８■を得た。

実施例８ 実施例２において参考例３で得られたマレイミド基含有
共重合体（２）　２５．０　ｍｙを用いる代シに参考例
８で得られたマレイミド基共重合体（８１３０ｍＶを用
いる以外は同様にして反応および分離操作を行うことに
よシ、目的とするＳＯＤ誘導体を１３．８■得た。

試験例ｌ ５ＯＤ誘導体の血中濃度 ＳＯＤまだは実施例１で得られたＳＯＤ誘導体のそれぞ
れの水溶液に２５μＣｉの１２５ニーポルトンハンター
試薬を加え、室温で１時間振盪下に反応させ、得られた
反応液を４℃の温度で一夜放置した。得られた反応液を
０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む２０’　ｍＭ　＋Ｊン
酸緩衝液（ＰＨ７，３）を透析液として用いて透析した
（５ＡＸ３回）。透析処理されだ液について単位容積当
たシの放射活性を測定し、次いで、この液を生理食塩水
で希釈し、所定の濃度に調製した。

ベンドパルビタール麻酔下にラツ）’（ＳＤ系雄性、７
週齢２体重約２００ｒ）の大腿静脈よシカニュレーショ
ンヲ行い、ヘハリン溶ｆ（１ｏｏｏｕ／　ｍ６’　）を
０．２　ｎｔｌ注入した。ラット１匹当たシ上記で得ら
れた標識ＳＯＤまだは標識ＳＯＤ誘導体の調製液をそれ
ぞれ２００．ＯＯＯｃｐｍ（５００μｊｉ）大腿静脈に
注射した。経時的に１００μβづつ大腿静脈よシ採血し
、ガンマ−カウンターで放射活性を測定することによシ
血中濃度を測定した。ＳＯＤの血中濃度およびＳＯＤ誘
導体の血中濃度の経時変化を第１１図の（１）および（
２）に示す。

試験例２ ラット冠動脈再潅流性不整脈に対するＳＯＤ誘、導体の
効果 ラット（Ｗｉｓｔｅｒ系雄性、体重２００〜２３０ｆ）
ヲー晩絶食させたのち、ベンドパルビタール（５０■／
　Ｋｒ体重）を腹腔内投与することにより麻酔した。麻
酔したラットを、気管切開してレスピレータによシ呼吸
管理しく１回の換気量：　１．５ＣｒＶ１００２体重、
換気回数二６０回／ｍ１ｎ）、胸骨縦切開によシ心臓を
露出させた。冠動脈の閉塞を、左冠動脈前下行枝を回旋
枝分峡部よシ約３■末梢で吸引することにより１５分間
行った。閉塞−再潅流の操作を３０分間隔で２回行い、
第１回目の再潅流１５分後に、薬剤をラットの大腿静脈
に５■／　Ｋ９体重（総量０．１　ｄ　）投与した。薬
剤として、ヒト赤血球よシ分離した５ＯＤ−ｊたけ実施
例１で得られたＳＯＤ誘導体の生理食塩水による調製液
を用いた。各再潅流時に心電図（■誘導）を３分間連続
モニターし、心室性期外収縮（ｐｖｃ）、心室性頻拍（
ＶＴ）および心室細動（Ｖｆ　）を調べだ。

第２回目の虚血前、第２回目の虚血後１５分経過時、な
らびに第２回目の再潅流後１０秒経過時、３０秒経過時
および３分経過時における心電図を第１２図の横列（１
）、（２）、（３）、（４）および（５）に示す。

なお図中、ヒト赤血球よシ分離したＳＯＤを投与した群
の心電図を縦列（Ａ）に示し、実施例１で得られだＳＯ
Ｄ誘導体を投与した群の心電図を縦列（Ｂ）に示す。

薬剤を投与しないコントロール群において、前後２回の
再潅流時の不整脈の出現に有意差はなかった。第１２図
よシ明らかなとおり、ＳＯＤを投与した群では再潅流時
に出現する不整脈は抑えられなかったが、ＳＯＤ誘導体
を投与した群では該ＳＯＤ誘導体の著明な抗不整脈作用
が認められた。

発明の効果 本発明によれば、ＳＯＤの酵素活性を概ね保持したまま
で、該ＳＯＤに比べて大幅に延長された血中半減期を有
する新規な非巨大分子化ＳＯＤ誘導体が提供される。Ｓ
ＯＤ誘導体は血清タン・（り質との可逆的な相互作用を
有しておシ、ＳＯＤを疾患局所へ移行させるうえで非常
に有利である。

またＳＯＤ誘導体は優れた抗不整脈作用を有し、さらに
抗炎症作用、抗潰瘍作用、抗虚血障害作用、抗脳浮腫作
用などの薬理作用を併わせ有する。また本発明によれば
、ＳＯＤ分子内の特定の部位番こ前記の新規なマレイミ
ド基含有共重合体を結合させることによシ単一の化学構
造を有する上記のＳＯＤ誘導体を製造する方法が提供さ
れる。

【図面の簡単な説明】

第１〜４図は、それぞれ参考例２、参考例３、参考例５
および参考例６で得られたマレイミド基含有共重合体の
赤外線吸収スペクトルを示す図である。第５図は電気泳
動の結果を示す写真であシ、写真中の（ａ）、（ｂ）、
（Ｃ）、（ｄ）および（ｅ）は、それぞれ実施例１で使
用したＳＯＤ、得られた反応液、ゲル濾過によシ得られ
たＳＯＤおよびＳＯＤ誘導体を含む画分、アフイニテイ
力ラムクロマトグラフイーによシ得られたＳＯＤを含む
画分、ならびにアフイニテイカラムクロマトグラフイー
により得られたＳＯＤ誘導体を含む両分を電気泳動させ
て得られた結果を示す。第６図は紫外部吸収スペクトル
を示す図であシ、図中の（１）、（２）および（８）は
、それぞれ実施例１で使用したＳＯＤおよびマレイミド
基含有共重合体、々らびに得られたＳＯＤ誘導体の紫外
部吸収スペクトルを示す。第７図は実施例２で得られた
ＳＯＤ誘導体の赤外線吸収スペクトルを示す図である。 第８図は電気泳動の結果を示す写真であシ、写真中の（
ａ）、（ｂ）、（Ｃ）、（ｄ）および（ｅ）は、それぞ
れ実施例３で使用したＳＯＤ、得られた反応液、ゲル濾
過によシ得られたＳＯＤおよびＳＯＤ誘導体を含む両分
、アフイニテイカラムクロマトグラフイーによシ得られ
たＳＯＤを含む両分、ならびにアフイニテイカラムクロ
マトグラフイーにより得られたＳＯＤ誘導体を含む画分
を電気泳動させて得られた結果を示す。第９図は紫外部
吸収スペクトルを示す図であシ、図中の（１）、　（２
）および（３）は、それぞれ実施例６で使用したＳＯＤ
およびマレイミド基含有共重合体、ならびに得られたＳ
ＯＤ誘導体の紫外部吸収スペクトルを示す。第１０図は
実施例６で得られたＳＯＤ誘導体の赤外線吸収スペクト
ルを示す図である。第１１図は試験例１で測定した血中
濃度の経時変化を示す図であシ、図中の（１）および（
２）は、それぞれＳＯＤの血中濃度およびＳＯＤ誘導体
の血中濃度の経時変化を示す。第１２図は試験例２で連
続モニターした心電図（■誘導）の１部を示す図であり
、図中の縦列（Ａ）および（Ｂ）はそれぞれＳＯＤ投与
群およびＳＯＤ誘導体投与群の心電図を示し、横列（１
）、（２）　ｓ　＜ｓ）、（４）および（５）はそれぞ
れ第２回目の虚血前、第２回目の虚血後１５分経過時、
ならびに第２回目の再潅流後ｌＯ秒経過時、３０秒経過
時および３分経過時における心電図を示す。 特許出願人　　株式会社　り　ラ　し 同　　　　井　　上　　正　　康

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式〔ＳＯＤ〕〔Ｚ〕＿ｎ 〔式中、〔ＳＯＤ〕はメルカプト基に換えてメルカプト
   基から水素原子を除いた基を１個または２個有するスー
   パーオキシドジスムターゼを表わし、〔Ｚ〕は （イ）▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化
   学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼ または▲数式、化学式、表等があります▼（これらの式
   中、Ｒ＾１、Ｒ＾３およびＲ＾５はそれぞれ水素原子ま
   たはメチル基を表わし、Ｒ＾２は水素原子、塩素原子、
   臭素原子またはメチル基を表わし、Ｒ＾４は水素原子、
   炭素数１ないし６のアルキル基または炭素数３ないし６
   のシクロアルキル基を表わし、Ｒ＾６はメチル基または
   エチル基を表わす）で示される基からなる群から選ばれ
   る基ならびに （ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾
   ７は水素原子を表わすか、または炭素数１ないし８のア
   ルカノール、炭素数１ないし４のアルキル基部分を含む
   エチレングリコールモノアルキルエーテルもしくは炭素
   数１ないし４のアルキル基部分を含むグリセリシンアル
   キルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）で示さ
   れる基を構成単位とし、かつ （ハ）片末端に ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｗは２価の有機基を表わし、スクシンイミド環
   の炭素原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するものである
   ことを意味する）で示される基を有するか、または構成
   単位間に ▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｑ＾１およ
   びＱ＾２は一方がカルボキシル基、他方が▲数式、化学
   式、表等があります▼で示され る基であることを条件にカルボキシル基または▲数式、
   化学式、表等があります▼で示される基を表わし、 Ａ＾１は１個以上の酸素原子、硫黄原子、▲数式、化学
   式、表等があります▼（式中、Ｒ＾８は水素原子もしく
   は炭素数１ないし４のアルキル基を表わす）で示される
   基または ▲数式、化学式、表等があります▼で示される基で中断
   されていてもよ い二価の炭化水素基を表わし、スクシンイミド環の炭素
   原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するものであることを
   意味する〕で示される基を有し、かつ平均分子量が４０
   ０ないし２０，０００である共重合体の一価の基を表わ
   し、ｎは〔ＳＯＤ〕が有するメルカプト基から水素原子
   を除いた基の数に対応する１または２の整数を表わす〕 で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体。 ２、スーパーオキシドジスムターゼと （イ）▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化
   学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼または ▲数式、化学式、表等があります▼（これらの式中、Ｒ
   ＾１、Ｒ＾３およびＲ＾５はそれぞれ水素原子またはメ
   チル基を表わし、Ｒ＾２は水素原子、塩素原子、臭素原
   子またはメチル基を表わし、Ｒ＾４は水素原子、炭素数
   １ないし６のアルキル基または炭素数３ないし６のシク
   ロアルキル基を表わし、Ｒ＾６はメチル基またはエチル
   基を表わす）で示される基からなる群から選ばれる基な
   らびに （ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾
   ７は水素原子を表わすか、または炭素数１ないし８のア
   ルカノール、炭素数１ないし４のアルキル基部分を含む
   エチレングリコールモノアルキルエーテルもしくは炭素
   数１ないし４のアルキル基部分を含むグリセリシンアル
   キルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）で示さ
   れる基を構成単位とし、かつ ▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｗは２価の
   有機基を表わす）で示される基を有するか、または構成
   単位間に▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｑ
   ＾１＾１およびＱ＾２＾１は一方がカルボキシル基、他
   方が▲数式、化学式、表等があります▼ で示される基であることを条件にカルボキシル基または ▲数式、化学式、表等があります▼で示される基を表わ
   し、Ａ＾１ は１個以上の酸素原子、硫黄原子、▲数式、化学式、表
   等があります▼（式中、Ｒ＾８は水素原子もしくは炭素
   数１ないし４のアルキル基を表わす）で示される基また
   は▲数式、化学式、表等があります▼ で示される基で中断されていてもよい二価の炭化水素基
   を表わす〕で示される基を有し、かつ平均分子量が４０
   ０ないし２０，０００である共重合体とをｐＨ６ないし
   １０の水溶液中で反応させることを特徴とする請求項１
   記載のスーパーオキシドジスムターゼ誘導体の製造法。