JPH01257479A

JPH01257479A - スーパーオキシドジスムターゼ誘導体およびその製造方法

Info

Publication number: JPH01257479A
Application number: JP63087529A
Authority: JP
Inventors: Masayasu Inoue; 正康井上; Itsuki Ebata; 江端　厳; Nobukazu Watanabe; 渡邊　信和; Takazo Asano; 浅野　隆蔵; Fumio Nakahara; 文夫中原; Fumio Mori; 文男森
Original assignee: Kuraray Co Ltd
Current assignee: Kuraray Co Ltd
Priority date: 1988-04-08
Filing date: 1988-04-08
Publication date: 1989-10-13

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、生体に有毒なスーパーオキシドを分解するス
ーパーオキシドジスムターゼの酵素活性を概ね保持した
ままで該スーパーオキシドジスムターゼに比べて大幅に
延長された血中半減期を有する新規なスーパーオキシド
ジスムターゼ誘導体およびその製造方法に関する。

本発明により提供されるスーパーオキシドジスムターゼ
誘導体は活性酸素ラジカルが関与する種々の疾患に対し
て有効であり、特に抗炎症剤、抗潰瘍剤、虚血性疾患治
療剤、脳浮腫治療剤、パラコート中毒治療剤として使用
することができる。

また該スーパーオキシドジスムターゼ誘導体は活性酸素
ラジカルに起因する制癌剤の副作用を軽減するための医
薬としても有用である。

従来の技術従来、スーパーオキシドジスムターゼ〔以下、これをＳ
ＯＤと略記する〕は動物、植物、微生物などの生体内に
広く存在し、生体に有害なスーパーオキシドを分解する
酵素として知られている。

最近、単離されたＳＯＤを抗炎症剤として用いようとす
る試みがなされている〔ファルマシア、１７巻、４１１
頁（１９８１年）およびカレント・セラポイテイツク・
リサーチ（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＲ
＠５ｅａｒｃｈ）、１６，７０６（１９７４）参照〕。

ＳＯＤを静脈内投与した場合、その血中半減期は僅か４
〜６分とされており、ＳＯＤは速かに尿中に排泄代謝さ
れる。ＳＯＤの血中半減期を延長させるためにＳＯＤを
フィコール、ポリエチレングリコールまたはアルブミン
で修飾し、巨大分子化することが試みられてきたが、フ
ィコールまたはポリエチレングリコールで修飾されたＳ
ＯＤではＳＯＤの酵素活性が大幅に低下し、またアルブ
ミンで修飾されたＳＯＤには抗原性があることが報告さ
れている。またイヌリンで修飾されたＳＯＤでは、その
血中半減期が大幅に延長されることが知られているが、
同時にＳＯＤに比べて酵素活性の低下が認められる〔特
開昭５１３２８２６号公報参照〕。

また本発明者らのうちの１人は、ＳＯＤ分子表面にリジ
ン残基を介してスチレン−マレイン酸骨格を有する疎水
性有機酸構造を酸アミド結合により導入することにより
得ら熟たＳＯＤ誘導体は、血中でアルブミンを主体とす
る血清タンパク質と可逆的に結合・解離し、これによっ
てＳＯＤの血中半減期が庭長され、また臓器への移行性
が良好となることを報告した〔第３７回タンパク質構造
討論会講演要旨集、６１−６４頁（昭和６１年９月１０
日発行）参照〕。

発明が解決しようとする課題上記のフィコール、ポリエチレングリコール、アルブミ
ンまたはイヌリンで修飾されたＳＯＤはすでに述べた理
由、または巨大分子化に伴う生体組織内浸透性の低下な
どの点でいずれも実用上問題がある。

従来知られている種々の修飾ＳＯＤはすベテＳＯＤにそ
の分子内のアミノ基を介して各種の高分子物質を結合さ
せることによって得たものである。

ヒト型ＳＯＤは１分子当りアミノ基を２２個または２４
個有しており、またウシ型ＳＯＤは１分子当りアミノ基
を２０個有する。このようにＳＯＤは多数のアミノ基を
有しており、ＳＯＤに高分子物質を結合させるに際して
該ＳＯＤ分子内の結合部位となるアミノ基を特定するこ
とは非常に難しい。しかしながら、医薬の有効成分化合
物は単一の化学構造を有する化合物であることが好まし
い状況にあることを考慮すれば、医薬用途に供する修飾
ＳＯＤはＳＯＤ分子内の特定の部位に高分子物質を結合
させた化学構造を有する化合物であることが望まれる。

しかして、本発明の１つの目的は、ＳＯＤ分子内の特定
の部位に高分子物質を結合させて得られかつＳＯＤの酵
素活性を概ね保持したままで、該ＳＯＤに比べて大幅に
延長された血中半減期を有する新規な非巨大分子化スー
パーオキシドジスムターゼ誘導体を提供することにある
。

本発明の他の１つの目的は、上記のスーパーオキシドジ
スムターゼ誘導体の製造方法を提供するにある。

課題を解決するための手段本発明によれば、上記の１つの目的は、式％式％）（）〔式中、〔ＳＯＤ〕はメルカプト基に換えてメルカプト
基から水素原子を除いた基を１個または２個有するスー
パーオキシドジスムターゼを表わし、（２）はおよびＲ１１はそれぞれ水素原子またはメチル基を表わ
し、Ｒ１は水素原子、塩素原子、臭素原子またはメチル
基を表わし、Ｒ４は水素原子、炭素数１ないし６のアル
キル基または炭素数３ないし６のシクロアルキル基を表
わし　Ｒ１はメチル基またはエチル基を表わす）で示さ
れる基からなる群から選ばれる基ならびにわずか、または炭素数１ないし８のアルカノール、炭素
数！ないし４のアルキル基部分を含むエチレングリコー
ルモノアルキルエーテルもしくは炭素数１ないし４のア
ルキル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテルから
水酸基を除いた残基を表わす）で示される基を構成単位
とし、かつ（ハ）片末端に −８−Ｗ−（１）（式中、Ｗは２価の有機基を表わし、硫黄原子の結合手
は［５ＯＤ）と結合するものであることを意味する）で
示される基を有し、かつ平均分子量が４００ないし２０
．０００である共重合体の一価の基を表わし、ｎは〔Ｓ
ＯＤ〕が有するメルカプト基から水素原子を除いた基の
数に対応するｌまたは２の整数を表わす〕で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体（以下
、これをＳＯＤ誘導体と称す）を提供することによって
達成される。

また本発明によれば、上記の他の１つの目的はＧＯＯＲ
’ Ｒ’、Ｒ’、Ｒ＆およびＲ８は前記定義のとおりである
）で示される基からなる群から選ばれる基ならびにおり
である）で示される基を構成単位とし、かつ（ハ）片末
端にＸ−５−Ｗ−（ＩＩ）（式中、Ｘは隣接する硫黄原子と共に活性ジスルフィド
結合を形成し得る基を表わし、Ｗは前記定義のとおりで
ある）で示される基を有し、かつ平均分子量が４００な
いし２０，０００である共重合体（以下、これを活性ジ
スルフィド基含有共重合体と称する）とをｐｉ（６ない
しｌＯの水溶液中で反応させることを特徴とする上記の
ＳＯＤ誘導体の製造法を提供することによって達成され
る。

式（１）で示される基におけるＷは２価の有機基を表わ
すが、前記の構成単位（イ）および（ロ）からなる共重
合体の片末端と硫酸原子とを結合させる基であればとく
に制限されるものではな（１゜−８−Ｗ−の基・・・代
表例としては次の式（１−ａ）および式（＋−ｂ）で示
される基が挙げられる。

（１−ａ）　　　　　　　　　（１−ｂ）（これらの式
中、Ｑ’およびＱ′はそれぞれ水素原子または炭素数１
ないし３のアルキル基を表わし、ｍは口ないし４の整数
を表わし、Ａは１個以上の酸素原子または硫黄原子で中
断されていてもよい２価の炭化水素基を表わし、一つの
硫黄原子め結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するものであるこ
とを意味する）式（１−ａ）で示される基において、ＱｌおよびＱ３は
同一または異なっていてもよく、具体的には水素原子、
メチル基、エチル基、プロピル基などを表わし、ｍは好
ましくは０またはｌである。式（１−ｂ）で示される基
において、Ａは酸素原子または硫黄原子で中断されてい
てもよい分枝を有す２価の炭化水素基を表わす。その具
体例としては、例えばエチレン基、　Ｃ１＊ＣＨｔＣＨ
＊−１−ＣＩｌ（ＣＨ８）ＣＨ，−１Ｃ１１ｔＣ１１ｔ
ＣＨ＊Ｃ１［ｌｔ−１ｐ−キシリレン基、ｍ−キシリレ
ン基、ｍ−フェニレン基、０−フェニレン基、トリレン
基、−ＣＨ，ＣＨ，−ｏ−ｃ）Ｉｆｉｃｌｌｌ−１−Ｃ
Ｉｌ、Ｃ■＊−５−Ｃ１ｌ＊ＣＨｔ−などが挙げられる
。

式（ＩＩ）で示される基におけるＸは隣の硫黄原子と共
に活性ジスルフィド結合を形成し得る基を表わす。その
代表例として（ＩＩＩ　）（ＩＶ　）（式中、ＹおよびＺは同一または異なっていてもよく、
水素原子、ニトロ基またはカルボキシル基を表わす）な
どが挙げられる。式（Ｉ［［）で示される基の具体例と
しては２−ピリジルチオ基、４−ピリジルチオ基、４−
ニトロ−２−ピリジルチオ基、４−カルボキシ−２−ピ
リジルチオ基などが挙げられる。式（ｍＶ）で示される
基の具体例としては３−カルポキシー４−ニトロフェニ
ルチオ基、２−ニトロフェニルチオ基などが挙げられる
。

ＳＯＤと活性ジスルフィド基含有共重合体との反応は、
ＳＯＤを通常トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
塩酸塩、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、酢酸ナト
リウム、リン酸ナトリウムなどの塩の水溶液中にその濃
度が０．５〜１００　ａｇ／ｍｌ。

好ましくは１〜２０　Ｂ／ｍｌになるように溶解し、得
られた溶液に粉末状の活性ジスルフィド基含有共重合体
または該共重合体をジメチルスルホキシド、ジオキサン
、アセトン、テトラヒドロフラン、エチルアルコールな
どの有機溶媒もしくは上記の塩の水溶液に溶解させた溶
液を添加することによって行われる。反応中、溶液のｐ
ｎは６〜ｌＯに維持されていることが必要であり、ｐｍ
が６より低い場合には、活性ジスルフィド基含有共重合
体の溶解性が低下して反応は進行し難くなる。また、ｐ
ｎがｌＯより高い場合は反応時間にもよるが、ＳＯＤ自
身の酵素活性に影響を与える。反応温度としては室温以
下の温度が好ましく、−５℃〜＋５℃の範囲の温度がさ
らに好ましい。また、反応時間は反応温度、活性ジスル
フィド基含有共重合体の添加方法により異なるが、通常
１０分〜１日間である。

活性ジスルフィド基含有共重合体の使用量は５ＯＤ１モ
ルに対して約０．５〜１００モルの範囲である。

このようにして得られた反応液にはＳＯＤ誘導体と未反
応のＳＯＤおよび活性ジスルフィド基含有共重合体など
が存在するが、かかる反応液を濾過し、濾液をゲル濾過
し、得られるＳＯＤ誘導体を含む溶出液を必要に応じて
ハイドロフォービック・カラムクロマトグラフィー、ア
フイニテイカラムクロマトグラフイー、イオン交換カラ
ムクロマトグラフィーなどに付し精製したのち、限外濾
過に付することにより濃縮し、凍結乾燥することにより
ＳＯＤ誘導体の固型物を取得することができる。

上記の反応により、ＳＯＤが有するメルカプト基と活性
ジスルフィド基含有共重合体が有する活性ジスルフィド
基とが縮合反応をおこし、目的とするＳＯＤ誘導体が生
成する。ＳＯＤと活性ジスルフィド基含有共重合体との
結合部分の代表例を構造式で下記に示す。

（１）共重合体の片末端が式（１−ａ）で示される基を
有する場合：　（Ｚ’）は構成単位（イ）および（ロ）
からなる共重合体の主鎖を表わす。

（ｌ、Ｌ（２）共重合体の片末端が式（１−ｂ　）で示される基
を有する場合：　（Ｚ’）は構成単位（イ）および（ロ
）からなる共重合体の主鎖を表わす。

（ＳＯＤＩ−Ｓ−Ｃ［１，ＣＬ　−Ｓ−（Ｚ″〕（ＳＯ
ＤＩ−Ｓ−Ｃ）１．ＣＨ，ＣＩ！、−Ｓ−（Ｚ’）１：
５ＯＤ）−Ｓ−ＣＨ，＋ＣＬ　−Ｓ−（Ｚ”）〔ＳＯＤ
〕　Ｓ　ＣＨ−−ｏ−ＣＨ＊　Ｓ　（Ｚ’）［ＳＯＤＩ
　−Ｓ−ＣＨ，ＣＨ，−０−ＣＨ，ＣＦｌ、　−Ｓ−Ｃ
Ｚ″〕〔ＳＯＤ〕　−Ｓ−ＣＨｌＣｌｌ、　−８−ＣＨ
，ＣＨ，−Ｓ−（Ｚ″〕Ｃ５ＯＤＩ　−ｓ＋ｓ−（Ｚ″
〕〕原料て用いられる活性ジスルフィド基含有共重合体に
は１分子中に活性ジスルフィド基が１個存在し、またＳ
ＯＤが有するメルカプト基については、ヒト型ＳＯＤに
は反応し得る遊離のメルカプト基は２個存在する。それ
ゆえに、上記の反応の条件により、ヒト型５ＯＤ１分子
当り活性ジスルフィド基含有共重合体が１分子もしくは
２分子線合反応することによりＳＯＤ誘導体またはそれ
らＳＯＤ誘導体の混合物が得られる。かかるＳＯＤ誘導
体の混合物を医薬の有効成分化合物として用いることに
不都合はない。しかしながら、医薬の有効成分化合物は
単一の化学構造を有する化合物であることが好ましい状
況にあることを考慮すれば、上記のＳＯＤ誘導体の混合
物をカラムクロマトグラフィーなどの操作に付し、分離
された各々のＳＯＤ誘導体を医薬の有効成分化合物とし
て用いることが好ましい。なお、前記の反応および反応
後の処理において、ＳＯＤ誘導体が有するカルボキシル
基がアルカリ金属塩またはアンモニウム塩を形成する可
能性があるが、かかる塩を形成したカルボキシル基を有
するＳＯＤ誘導体も本発明のＳＯＤ誘導体に包含される
。

本発明のＳＯＤ誘導体は５ＯＤ１分子当り高々２分子の
活性ジスルフィド基含有共重合体が縮合反応して得られ
たものであり、ＳＯＤの酵素活性が高く保持され、かっ
血中半減期が大幅に延長されるなどの特長を有する。

原料として用いられるＳＯＤは、動物（ヒト、ウシなど
）、植物、微生物などの生物中に含まれているものを公
知の方法によりそれぞれの生物体から抽出されたもの、
または遺伝子工学の手法を用いて取得されたものなどで
ある。ＳＯＤの化学構造（配位金属゛、分子量、アミノ
酸配列など）はかなり解明されてきており、ＳＯＤはＦ
ｅ配位ＳＯＤ、Ｍｎ配位５ＯＤ１Ｃｕ−Ｚｎ配位ＳＯＤ
の３種類に分類され、存在している生体組織によって異
なるが３万〜８万の分子量を有している。ＳＯＤのアミ
ノ酸配列も存在している生体組織によって若干相異して
いるが、その詳細は「スーパーオキサイドと医学」（大
柳善彦著、共立出版刊、昭和５６年５月２５日発行）：
ジャーナル・才ブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｂｉ−ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ）、出、２８７５〜２８８Ｇ（１９７１）
二同出、６１０７〜６１１２（１９７５）　；プロシー
デイングズ・オプ・ザ・ナショナル・アカデミイ・オブ
・サイエンシス（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｒ　ｔｈ
ｅ　ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ　ｏｒ　５ｃｉｅ
ｎｃｅｓ）、７０，３７２５〜３７２９（１９７３）：
アルカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バ
イオフィジックス（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｏ−
ｃｈｅａｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ’ｓ
）、１７９，２４３〜２５６（１９７７）などの文献の
記載を参照されたい。ヒト　−型のＣｕ−Ｚｎ配位ＳＯ
Ｄは分子量が３１．２００であり、反応性の遊離のメル
カプト基が２個存在する。

このヒト型ＳＯＤは、例えば、ヒトの血液を順次熱処理
、イオン交換、ゲル濾過に付することにより、また遺伝
子工学の手法を用いることによって取得される。

本発明において原料として用いられる活性ジスルフィド
基含有共重合体は前記（イ）および（ロ）で示される基
を構成単位とし、かつ片末端に式（ｎ）で示される基を
有し、かつ平均分子量４００ないし２０．Ｇｏｏを有す
る新規化合物である。

活性ジスルフィド基含有共重合体の代表的な製造法につ
いて説明する。まず、保護されたＳＨ基を有する連鎖移
動剤を用いて構成単位（イ）に対応する単量体と無水マ
レイン酸とをラジカル共重合反応させ、片末端に連鎖移
動剤に起因する基を有する共重合体を得る。次いで、共
重合体の無水マレイン酸環を片エステル化または／およ
び加水分解したのち、共重合体の片末端に存在する保護
されたメルカプト基を脱保護し片末端にメルカプト基を
有する共重合体とし、さらに該メルカプト基に活性ジス
ルフィド化合物を反応させることにより活性ジスルフィ
ド基含有共重合体を得る。

保護されたＳＨ基を育する連鎖移動剤の代表例としては
、（Ｖ）　　　　　　　　　　　　　　（Ｖｌ）（これら
の式中、Ｒ春は炭素数１ないし３のアルキル基を表わし
、Ｑ’、　Ｑ”、Ａおよびｍは前記定義のとおりである
）で示される化合物が挙げられる。以下連鎖移動剤として
上記式（Ｖ）または（Ｖｌ）で示される連鎖移動剤を用
いて重合を行った場合について説明する。

式（Ｖ）で示される化合物としては、例えばｐ−メチル
ベンジルメルカブタン、ｐ−エチルベンジルメルカプタ
ン、ｐ−イソプロピルベンジルメルカプタン、ｐ−メチ
ルチオフェノール、ｐ−エチルチオフェノール、ｐ−イ
ソプロピルチオフェノール、Ｏ−イソプロピルチオフェ
ノールなどの酢酸、プロピオン酸、酪酸などとの各エス
テルが挙げられる。式（Ｖｌ）で示される化合物として
は、例えば１．２−エタンジチオール、１．３−プロパ
ンジチオール、１．４−ブタンジチオール、２−メルカ
プトエチルスルフィド、ジ（２−メルカプトエチル）エ
ーテル、２．２−ジチオビスエタンチオール、１．２−
ベンゼンジチオール、１．３−ベンゼンジチオール、３
．４−）ルエンジチオール、１．３−ビス（メルカプト
メチル）ベンゼン、１．４−ビス（メルカプトメチル）
ベンゼンなどの酢酸、プロピオン酸、酪酸などとの各片
エステルなどが挙げられる。

構成単位（イ）に対応する単量体としては、例えばスチ
レン、ｐ−クロロスチレン、ｐ−ブロムスチレン、α−
メチルスチレン；エチレン、プロピレン、α−ブチレン
、イソブチレン、！−ペンテン、２−メチル−１−ブテ
ン、ビニルシクロヘキサン、！−ヘキ・ン、１−ヘプテ
ン：酢酸ビニル：（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）
アクリル酸エチルなどが挙げられる。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
ラジカル共重合反応はジクミルパーオキシド、アゾイソ
ブチロニトリル、過酸化ベンゾイル、ｔ−ブチルパーベ
ンゾエートなどの触媒の存在下に行われる。触媒の使用
量は構成単位（イ）に対応する単量体に対して約１−１
０重量％である。ラジカル共重合反応を行うに際しては
、前記の連鎖移動剤が重合系に加えられる。これらの連
鎖移動剤に重合溶媒としての役割を兼ねさせることもで
き、また必要に応じてオクタン、ベンゼン、エチルベン
ゼン、メチルエチルケトン、アセトンなどの有機溶媒を
併用することができる。

無水マレイン酸の仕込み量は構成単位（イ）に対応する
単量体に対して約１〜５倍モル量、好ましくは約２倍モ
ル量である。かかる割合の構成単位（イ）に対応する単
量体と無水マレイン酸との仕込み総量は溶媒中の濃度が
約５〜４０重量％、好ましくは約１０〜３０重量％とな
るように調整する。

反応は約４０〜１８０℃の範囲、好ましくは約１１０〜
１６０℃の範囲の温度で行われる。このラジカル共重合
反応は、溶媒中に無水マレイン酸を溶解させて得られた
溶液に上記の温度下に構成単位（イ）に対応する単量体
を触媒とともに徐々に添加することにより行うのが好ま
しい。かくしてラジカル共重合反応させて得られた共重
合体は、片末端にＱ’ （■）　　　　　　　　　　　　　（■）（式中、Ｒ＠
、Ｑ’、　Ｑ”、Ａおよびｍは前記定義のとおりである
）で示される基を有する共重合体である。

該共重合体はそのまま分別することなく、または分別し
て分子量分布を狭くしたのち、次の無水マレイン酸環の
片エステル化反応または／および加水分解反応に供され
る。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環を片エステル化して
得られるエステルとしては、メチルエステル、エチルエ
ステル、プロピルエステル、ｎ−ブチルエステル、ｎ−
アミルエステル、イソアミルエステル、ｎ−ヘキシルエ
ステル、ｎ−オクチルエステル、メトキシエチルエステ
ル、エトキシエチルエステル、プロポキシエチルエステ
ル、２−ブトキシエチルエステル、１．３−ジフトキノ
−２−プロピルエステル、２．３−ジメトキシ−１−プ
ロピルエステル、１．３−ジェトキシ−２−プロピルエ
ステル、２−エトキシ−３−メトキシ−１−プロピルエ
ステル、ｌ、３−ジプロポキシ−２−プロピルエステル
、１．３−ジブトキシ−２−プロピルエステル、ベンジ
ルエステルなどが挙げられる。これら片エステル化され
た共重合体は構成単位（イ）に対応する単量体と無水マ
レイン酸との共重合体にそれぞれ対応するアルコールを
必要に応じて酢酸リチウムなどの触媒の存在下に約５０
〜１２Ｑ”Ｃの範囲の温度で反応させることにより得ら
れる。対応するアルコールを過剰に用いて、そのアルコ
ールに溶媒としての役割を兼ねさせることができる。ま
た溶媒としてジオキサン、テトラヒドロフランなどを使
用することができる。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環の加水分解反応は、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム
などの塩基の水溶液を用いて常法により行われる。反応
液からの目的とする共重合体の分離精製は常法に従いゲ
ル濾過法または酸沈殿法により行われる。

次に、片末端に式（■）または式（■）で示される基を
有する上記で得られた共重合体の末端チオエステル部分
を加水分解することにより、片末端にＱ’ （ＩＸ）　　　　　　　　　　　（Ｘ）（これらの式中
、Ｑｌ、Ｑ３、Ａおよびｍは前記定義のとおりである）で示される基を有する共重合体を得る。この末端チオエ
ステル部分の加水分解は温和な条件で行うことが可能で
ある。例えば水溶媒中、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム
、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどを用いて
、水冷下ないし室温で、数分ないし約１０時間までの反
応時間で行われる。

次に片末端に式（ＩＫ）または式（Ｘ）で示される基を
有する共重合体の末端のメルカプト基に活性ジスルフィ
ド化合物を反応させることにより、片末端にＱ’ （■−λ）　　　　　　　　　　　（ｎ−ｂ）（式中、
Ｘ、Ｑ’、Ｑｌ、Ａおよびｍは前記定義のとおりである
）で示される基を有する活性ジスルフィド基含有共重合体
を得る。この反応は通常ｐＨ６〜１０の緩衝液またはア
セトニトリル、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくは
ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒中または緩衝液と
これら有機溶媒の混合系で行われる。共重合体に対し活
性ジスルフィド化合物は等モルないし１０倍モル用いる
。反応温度は水冷下ないし約７０℃で、反応時間は１〜
２４時間が適当である。

上記の目的に用いることができる活性ジスルフィド化合
物としては、例えば、２−？”リジルジスフィト（（Σ
Ｓ−３−Ｃ１１）、５．５′−ジチオビス４−カルボキ
シ−２−ピリジルジスルフィドトロ−２−ピリジルジス
ルフィド＜　Ｏ＊ＮＱＳ−ｓ＜＞ｌｌｏハ、２−ベンゾチアゾイ
ルジスルフィド（α二＞５−ｓ−５二）Ｏ）、２−ベン
Ｎ−フェニルアミノ−Ｎ−フェニルイミノメチルること
かできる。

以上の方法により得られた反応液からの活性ジスルフィ
ド基含有共重合体の分離精製操作を次に説明する。反応
を水溶媒中で行った場合には、得られた反応液をそのま
まゲル濾過し、目的とする溶出液を分取し、凍結乾燥す
る。また反応を有機溶媒中で行った場合には、得られた
反応液を必要に応じてこれより有機溶媒を除去したのち
同様にしてゲル濾過し、目的とする溶出液を凍結乾燥す
るか、または反応液を必要に応じて濃縮するか、もしく
はこれより有機溶媒を除去したのち、展開液としてテト
ラヒドロフラン、クロロホルム、アセトンなどを用いて
行う分取液体クロマトグラフィーに付し、目的とする溶
出液を分取し、凍結乾燥する。

本発明で原料として用いられる活性ジスルフィド基含有
共重合体はいずれも疎水性基と親水性基の両者を持つこ
とによる適度な疎水性を有し、かつ極性の高いカルボキ
シル基を有する。したがって、かかる活性ジスルフィド
基含有共重合体が結合しているＳＯＤ誘導体は血清蛋白
および生体膜との可逆的な結合性を有しており、このこ
とにより血中半減期が延長され、また臓器への移行性が
良好となる。なかでも構成単位（イ）としてスチレン由
来の基を有するＳＯＤ誘導体および構成単位（ロ）とし
て片エステル化された基を有するＳＯＤ誘導体は疎水性
がより高く、これらの効果を発現する点で好ましい。

活性ジスルフィド基含有共重合体において、構成単位（
イ）と構成単位（ロ）の構成モル比「（イ）／（ロ）」
は実質的に約１−１．３の範囲であることが好ましく、
通常はｌである。構成モル比が１よりも小さいものは構
成単位（イ）に相当する単量体と無水マレイン酸との共
重合で得ることは困難である。また、構成モル比が１．
３よりも大きいものは、構成単位（ロ）が片エステル化
されたものである場合、かかる活性ジスルフィド基含有
共重合体を塩の水溶液中に溶解させてＳＯＤと反応させ
る際に、活性ノスルフイド基含有共重合体の水溶液への
溶解性が不良となるので好ましくない。

上記の活性ジスルフィド基含有共重合体の重量平均分子
量は通常４００〜２０，０００の範囲である。

この活性ノスルフイド基含有共重合体から得られるＳＯ
Ｄ誘導体の疾患局所への移行性の点から、活性ジスルフ
ィド基含有共重合体の重電平均分子量は３，０００以下
であることが好ましい。活性ジスルフィド基含存共重合
体の分子量分布については特に制限はないが、重最平均
分子量と数平均分子量との比が約１．０２ないしＩＪの
範囲にある活性ジスルフィド基含有共重合体が医薬の有
効成分化合物として好ましいＳＯＤ誘導体を与える。

ＳＯＤ誘導体は優れた抗不整脈作用、抗炎症作用、抗潰
瘍作用、抗虚血障害作用、抗脳浮腫作用などの薬理作用
を有する。

また、ＳＯＤ誘導体は毒性試験においても低毒性である
ことが確認されている。

以上の結果より、ＳＯＤ誘導体は活性酸素ラジカルが関
与する種々の疾患に対して有効であり、特に抗炎症剤、
抗潰瘍剤、虚血性疾患治療剤、脳浮腫治療剤、パラコー
ト中毒治療剤として使用することができる。またＳＯＤ
誘導体は活性酸素ラジカルに起因する制癌剤の副作用を
軽減するための医薬として有用である。さらにＳＯＤ誘
導体は火傷、外傷、各種の皮膚炎などの皮膚の疾病など
の治療薬としても有用である。

ＳＯＤ誘導体は上記の薬効以外に本来ＳＯＤが有するこ
とが知られている薬効（最新医学、３９巻２号、３３９
頁（１９８４年）；医学と薬学、１４＠１号、５５頁（
１９８５年）：実験医学、４巻１２号、特集／生体内フ
リーラジカルと疾患；およびフレグランス・ジャーナル
、Ｎｏ、７９．８９頁（１９８６年）参照〕をより効果
的に保有しており、またＳＯＤでは薬効が認められてい
ない活性酸素ラジカルが関与する疾病に対しても薬効を
示す。

ＳＯＤ誘導体の投与量は疾病、患者の重篤度、薬物に対
する忍容性などにより異なるが、通常成人１日あたりｏ
、ｉ〜５００　Ｉｌｇ、好ましくは０．５〜１０Ｇｔａ
ｇの量であり、これを１回または分割して投与するのが
よい。投与に際しては投与ルートに適した任意の形態を
とることができる。

ＳＯＤ誘導体は任意慣用の製剤方法を用いて投与用に調
製することができる。ＳＯＤ誘導体を少なくとも１種含
有する医薬組成物は任意所要の製薬用担体、賦形剤など
の医薬上許容される添加剤などを使用して慣用の手段に
よって調製される。

この組成物が経口用製剤である場合には、該製剤は消化
管からの吸収に好適な形態で提供されるのが望ましい。

経口投与の錠剤およびカプセルは単位量投与形態であり
、結合剤、例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、
ソルビット、トラガカント、ポリビニルピロリドンなど
；賦形薬、例えば乳糖、とうもろこし澱粉、りん酸カル
シウム、ソルビット、グリシンなど：潤滑剤、例えばス
テアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコ
ール、シリカなど：崩壊剤、例えば馬鈴薯澱粉など；ま
たは許容し得る湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム
などのような慣用の賦形剤を含有していてもよい。錠剤
は当業界において周知の方法でコーティングしてもよい
。経口用液体製剤は水性または油性懸濁剤、溶液、シロ
ップ、エリキシル剤、その他であってもよく、あるいは
使用する前に水または他の適当なビヒクルで再溶解させ
る乾燥生成物であってもよい。このような液体製剤は普
通に用いられる添加剤、例えば懸濁化剤、例えばソルビ
ットシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロ
ップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル
、水素化食用脂など；乳化剤、例えばレシチン、モノオ
レイン酸ソルビタン、アラビアゴムなど：非水性ビヒク
ル、例えばアーモンド油、分別ココナツト油、油性エス
テル、プロピレングリコール、エチルアルコールなど；
防腐剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒ
ドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸などを含有して
もよい。

また注射剤を調製する場合には、ＳＯＤ誘導体を生理食
塩水、注射用ブドウ糖液などの溶剤に溶解し、ＳＯＤ誘
導体２〜２０ｍｇ／溶剤２〜１０ｓｌの濃度に調整し、
常法により皮下、筋肉内、静脈内注射剤とする。調製時
に必要により水溶液にｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、
保存剤、可溶化剤などを添加することができる。

上記の医薬組成物は、その形態等に依存して、ＳＯＤ誘
導体を一般に約０．０１〜５０重量％、好ましくは約０
．１〜２０重量％の濃度で含有することができる。

実施例以下に、実施例により本発明を説明する。なお、本発明
はこれらの実施例により限定されるものではない。活性
ジスルフィド基含有共重合体の合成例を参考例として示
し、ＳＯＤ誘導体の生化学的特性を試験例として示す。

参考例１イソプロピルベンゼン８Ｇ、Ｏｇ　（０，６７ａｏｌｅ
）をクロロホルム３００１に加え、−１０℃〜０℃の水
浴で冷却しながら撹拌した。この溶液に蒸留精製したク
ロルスルホン酸８９　ｍｌ　（１，３４ｓｏｌｅ）を約
３０分間を要して徐々に滴下した。滴下終了後、室温で
３０分間撹拌した。得られた反応液を氷水中に注ぎ、次
いでクロロホルム２００ｍ１で抽出した。

抽出液を氷水５００ｍ１で３回洗浄したのち、無水硫酸
マグネシウムを加えて乾燥した。この抽出液から減圧下
に低沸点物を留去することにより、ｐ−イソプロピルベ
ンゼンスルホニルクロリドを５５．０ｇ　（イソプロピ
ルベンゼンを基準として算出した収率：３８％）得た。

２Ｑ容三つロフラスコに氷５００ｇを加え、次いで濃硫
酸１００ｍ１を注意深く加えた。得られた水溶液を０℃
に冷却したのち、これに上記で得られたｐ−イソプロピ
ルベンゼンスルホニルクロリド５５．Ｏｇ　（０，２５
ｓｏｌｅ）を加え、次いで溶液の温度を０〜２℃に維持
しながら亜鉛粉末１１０ｇを徐々に添加したのち、撹拌
下に２４時間反応させた。

引続き、反応液を加熱還流下に１．５時間撹拌した。

得られた反応液を室温まで冷却したのち、ｎ−ヘキサン
で抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した
のち、蒸留することにより沸点ｌｏｇ、ｓ、〜１Ｇ７．
５℃／　２１　ｍｍＹＩｇのｐ−イソプロピルチオフェ
ノールを２４．２ｇ　（ｐ−イソプロピルベンゼンスル
ホニルクロリドを基準として算出した収率：６３％）得
た。

得られたｐ−イソプロピルチオフェノール２４．２ｇ　
（０，１３ｓｏｌｅ）をジエチルエーテル５００ｍ１に
溶解し、この溶液に塩化アセチル１０．７ｍｌ　（０，
１４ｓｏｌｅ）を添加した。得られた溶液を水浴で冷却
しながら撹拌し、これにピリジン１１．４ｓ＋１　（０
，１４ａｏｌｅ）を約１０分間を要して徐々に滴下した
。滴下終了後、室温で一夜撹拌した。得られた反応液か
ら沈殿物を濾去した。濾液を蒸留水で２回洗條したのち
、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸留することにより
沸点１４８〜１５０℃７２０　ｍｍｇｉｃの５−ｐ−イ
ソプロピルフェニル−チオアセテートを２１．６ｇ　（
ｐ−イソプロピルチオフェノールを基準として算出した
一率二８５％）得た。

（ｂ）片末端にＨ５−Ｏ−Ｃ（ＣＨｓ　）　＊−で示さ
れる基を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチ
レン−無窒素雰囲気下、上記（ａ）で得られた５−ｐ−
イソプロピルフェニルエチオアセテ−）１５■１に無水
マレイン酸４．３０　ｇ　（４４ｍｍｏｌｅ）を加え、
約１５０℃の温度で撹拌下に溶解させた。この溶液に、
ジクミルパーオキサイド０．１６　ｇ　（０，５９ｍｍ
ｏｌｅ）およびスチレン２．３０　ｇ　（２２ｍｍｏｌ
ｅ）を５−ｐ−イソプロピルフェニル＝チオアセテート
１０謂ｌに溶解させて得られた溶液を約１５分間を要し
て徐々に滴下した。滴下終了後、１５分間加熱撹拌した
。得られた反応液を室温まで冷却したのち、ｎ−ヘキサ
ン２ｇに撹拌下に約３０分間を要して滴下した。

るスチレン−無水マレイン酸共重合体を７．６０．得た
。

次に該共重合体の分別沈殿を行う。すなわち、得られた
スチレン−無水マレイン酸共重合体７．６０ｇをアセト
ン１５０騰ｌに溶解し、この溶液にｎ−ヘキサン２２５
ｍ１を撹拌下に約３０分間を要して滴下するとアメ状物
が器壁に付着した。９０分間静置後、白濁したアセトン
／ｎ−ヘキサン系混合液を別の容器に移し、得られたア
メ状物をアセトンに溶解させて回収した。回収液からア
セトンを減圧下に留去したのち、その残留物を室温で一
夜真空乾燥することにより、片末端にｃｕ、ａｓ−／：Σｃ（ｃＨｓ）ｔ−で示される基を有
するスチレン−無水マレイン酸共重合体の高分子分画を
１．９４ｇ得た。このもののゲルパーミェーションクロ
マトグラフィー（これをＧＰＣと略称する：溶出液とし
てテトラヒドロフランを用い、標準物質としてポリスチ
レンを用いた。以下同様）分析による重量平均分子量（
ｒ；）は２８５０であり、数平均分子ｍ　（Ｍｎ）　ハ
２０７０テアツタ（Ｍｙ／Ｍｎ＝ｌＪ８）。

次に、白濁したアセトン／ｎ−ヘキサン系混合液にさら
にｎ−ヘキサン３７５ｍ１を撹拌下に約４０分間を要し
て滴下すると再びアメ状物が器壁に付着した。６０分間
静置後、白濁したアセトン／ｎ−ヘキサン系混合液を別
の容器に移し、得られたアメ状物をアセトンに溶解させ
て回収した。回収液からアセトンを減圧下に留去したの
ち、その残留物を室温で一夜真空乾燥することにより、
片末端にＣ１，凸ｓ　−Ｑ−ｃ　＜　ｃ　Ｈ，）ｔ−で
示される基を有するスチレン−無水マレイン酸共重合体
の中分子分画を２．９０ｇ得た。このもののＧＰＣ分析
によるｉは１４５０であり、ｉは１１８０であった（Ｍ
ｙ／Ｍｎ＝１．２３）。また、上記操作により得られた
アセトン／ｎ−ヘキサン系混合液よりアセトンおよびｎ
−ヘキサンを減圧下に留去したのち、得られた残留物を
分取ＧＰＣ（装置：日本分析工業製ＬＣ−９、カラム：
　ＪＡＩＧＥＬ　ｌＨ２ＯＸ　Ｂｏｏｍｓφ２本、溶出
液：テトラヒドロフラン）に付し、得られた目的とする
溶出液から減圧下にテトラヒドロフランを留去したのち
、室温で一夜真空乾燥することにより、片末端にｃ　Ｈ
ｓ　６　ｓ　−Ｑ−ｃ　（ｃ　Ｈｓ　）　＊−で示され
る基を有するスチレン−無水マレイン酸共重合体の低分
子分画を２．７４ｇ得た。このもののＧＰＣ分析による
ｉは７００であり、ｉは６１０であった（Ｍｙ／Ｍｎ＝
１．１５）。

上記で得られた中分子分画の共重合体２．ＯＯｇお鼾よび無水・酸リチウム２０ｍｇをｎ−ブチルアルコール
４０ｍ１に加え、９５℃の温度で２０時間撹拌した。得
られた反応液から減圧下にｎ−ブチルアルコールを留去
した。残留物にジオキサン２０ｍＩｎ−ブチルエステル
化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体を２．４０
ｇ得た。赤外吸収スペクトルの測定結果より、このもの
には残存無水マレイン酸環は認められなかった。また、
ＧＰＣ分析からこのものの６は１９５Ｇであり、６は１
５９０であった（　Ｍｙ／　Ｍｎ＝　１．２３）。

上記の片ｎ−ブチルエステル化共重合体２．０ＧｇをＩ
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１６０ｍ１に加え、室温で２
０分間撹拌した。得られた反応液に２．５Ｎ塩酸を撹拌
下に徐々に加えて反応液のｐ■がｌないし２の範囲内に
なるように調整した。析出した沈殿物を濾別し、水洗し
たのち、アセトン１６０ｇ＋１に溶解させた。得られた
溶液に２．５Ｎ塩酸８ｇ＋１を加え、均一な酸性溶液を
得た。この酸性溶液に水２４０ｍ１を加えたのち、これ
より減圧下にアセトンを留去し、析出した沈殿物を濾別
し、水洗したのち乾燥することにより、片末端にＨＳ−
Ｑ−Ｃ（ＣＩり＊　−で示される基を有し、かつ片ｎ−
ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重
合体を１．８４．得た。このものの赤外吸収スペクトル
は次のとおりである。

赤外吸収スペクトル（Ｉ［Ｂｒ　ｄｉｓｋ）：　３２Ｇ
０．２９６Ｇ。

１７４０、１７１０．１４５５．１１７０．７０５ｃｍ
−’体の合成２−ピリジルジスルフィド１．００　ｇ　（４，５ｘ　
１０−”５ｏｌｅ）とトリエチルアミン１８０　Ｂ　（
１，８Ｘ　１Ｇ−’■ｏｌｅ）をアセトニトリル５０１
に溶解し、室温で撹拌しながら、この溶液に上記（ｂ）
で得られた片末端にｎ　ｓ　−Ｑ−ｃ　（ＣＨ、）　ｔ
−で示される基を有し、かっ片ｎ−ブチルエステル化さ
れたスチレン−無水マレイン酸共重合体１．００　ｇ　
（０，５ｘ　１０−’ｍｏｌｅ）を約２０分間を要して
徐々に添加した。添加後、さらに２時間撹拌を続けた。

得られた反応液を濾過し、その濾液をこれより未反応の
２−ピリジルジスルフィドを除去する目的で分取ＧＰＣ
（溶出液：クロロホルム）に付し、得られた目的とする
溶出液から減圧下にクロロホルムを留去したのち、室温
で一夜真空乾燥することにより、片末端ににＬ　ｓ　Ｓ
　＜：ンＣ（Ｃｕｔ）ｔ−で示される基を有し、かつ片
ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸
共重合体を８２０ｍｇ得た。得られた共重合゛　体は還
元型グルタチオンと反応させることにより、紫外吸収ス
ペクトル３４０ｎ膳に吸収が現れた。この吸収は生成し
た２−チオピリドンによるものであるので、このことか
ら共重合体に活性ジスルフィド基が導入されたことが確
認された。

参考例２活性ジスルフィド基含有共重合体の合成参考例１　（ｂ
）で得られた片末端にｃＪｓ−Ｑ−ｃ（ｃＨｓ）　！−で示される基を有する
スチレン−無水マレイン酸共重合体の低分子分画を用い
、以降の操作は参考例１と同様に行って、片末端にｃ＞
５Ｓ−Ｑ−Ｃ（山）、−で示される基を有し、かつ片ｎ
−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共
重合体を得た。

参考例３無水マレイン酸２．１６ｇをエチルベンゼン２（ｌｓｌ
に加えて約１１０℃の温度で撹拌した。この溶液にアゾ
イソブチロニトリル１０８　ｒａｇ、スチレン２．０８
ｇおよび５−４−メルカプルトブチルチオアセート２８
９Ｂをエチルベンゼン１０ｍ１に溶解させて得られた溶
液を約１５分間を要して徐々に滴下した。滴下終了後、
１５分間加熱撹拌を続けた。

得られた反応液を冷却したのち、この反応液をヘキサン
２Ｑに撹拌下約３０分間を要して滴下した。

生成した沈殿物を濾別し、ヘキサンで洗浄したのチ乾燥
スルコトニヨリ、片末端１．：　ＣＩｌ、Ｃ０５−（Ｃ
Ｂ、）、−Ｓ−で示される基を存するスチレン−無水マ
レイン酸共重合体４．１０．を得た。

上記（ａ）で得られた共重合体２．０Ｑｇお上び無水酢
酸リチウム２０Ｂをイソアミルアルコール４゜１に加え
、９５℃の温度で撹拌下に２０時間加熱した。得られた
反応液から減圧下にイソアミルアルコールを留去した。

残留物にジオキサン２０ｍ１を加えて凍結乾燥すること
により、片末端にＣＨｓＣＯ８−（Ｃｕｔ）ｉ−８−テ
示される基を有し、かつ片イソアミルエステル化された
スチレン−無水マレイン酸共重合体を２．３８ｇ得た。

体の合成参考例１　（ｂ）と同様の方法で、上記（ｂ）で得られ
た片イソアミルエステル共重合体２．０ＯｇをＩＮ水酸
化ナトリウム水溶液ｌ９０１で処理して、片末端にＩｔ
ｓ−（ＣＨり、−Ｓ−で示される基を有し、かつ片イソ
アミルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重
合体を１．、．７２ｇ得た。この後、参考例１（ｃ）と
同様の方法で、片末端にＨ３−（Ｃｕｔ）＊−３−テ示
される基を有し、かつ片イソアミルエステル化されたス
チレン−無水マレイン酸共重合体１．０ｏｇと２−ピリ
ジルジスルフィドｔ、ｏｏｇとを反応させて、片末端に
にＬＳ　−Ｓ　−（ＣＨｔ　）、　−Ｓ−で示される基
を有し、かつ片イソアミルエステル化されたスチレン−
無水マレイン酸共重合体を７７０Ｂ得た。

得られた共重合体は還元型グルタチオンと反応させるこ
とにより、紫外吸収スペクトル３４０ｎｍに吸収が現れ
た。この吸収は生成した２−チオピリドンによるもので
あるので、このことから共重合体に活性ジスルフィド基
が導入されたことが確認された。

実施例１参考例１で得られた活性ジスルフィド基含有共等張リン
酸緩衝液（ｐＨ７，０４）　９　ｍｌにヒト型ＳＯＤ水
溶液１　ｍｌ　（６８ｍｇ／ｍ＋、　１．９９　Ｘ　１
０−”ｎｏｌｅ）と重炭酸ナトリウム２９４　ｍｇ　（
３，５０ｘ　ｔｏ−’＋ａｏｌｅ）を加え、４℃の温度
で撹拌した。この溶液に、参考例１で得られた活性ノス
ルフイド基含有共重合体４００　Ｂ　（２，００Ｘ　１
０−’ｌ１ｏｌｅ）を徐々に加えたのち、−夜撹拌を続
けた。得られた反応液をＡＨ−セファロース４Ｂ（ファ
ルマシア社製）を担体として用いるアフィニティークロ
マトグラフィー（ゲル４　ｌｌ）に付し、溶出液として
０．０５モル重炭酸ナトリウム水溶液６０ＩＩ＋ｌを用
いて未反応のＳＯＤを含む分画を分取し、次いで１モル
塩化ナトリウムを含むＱ、１モル重炭酸ナトリウム水溶
液６０ｍ１を用いてＳＯＤ誘導体を含む分画を分取した
。

ＳＯＤ誘導体を含む分画を限外濾過に付し、次いでその
濃縮液をセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）
を担体として用いるゲル濾過（溶出液：１０ミリモル重
炭酸アンモニウム）に付して脱塩を行ったのち、凍結乾
燥することにより、目的とするＳＯＤ誘導体を２８．９
ａ＋ｇ得た。このものの赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
　ｄｉｓｋ）を第１図に示す。

実施例２実施例１において、参考例１で得られた片末端にＣＨ＊
　ｅ　ｓ　−Ｑ−ｃ　（ＣＨｓ　）　ｔ−で示される基
を有するスチレン−無水マレイン酸共重合体の中分子分
画の代わりに参考例２で得られた片末端にＣＨｓａＳ−１０−Ｃ（ＣＨｓ）ｔ−’を示すｈ　ル基
ヲ有ｔ　ルＸ　チＬ／ンー無水マレイン酸共重合体の低
分子分画を使用する以外は、実施例１と同様に行って目
的とするＳＯＤ誘導体を得た。

実施例３参考例３で得られた活性ジスルフィド基含有共重合体と
ＳＯＤとの反応によるＳＯＤ誘導体の合実施例１におい
て、参考例１で得られた片末端に９ｓ　−ｓ　−Ｑ−ｃ
　（ＣＨｓ　）、−で示される基を有し、かつ片ｎ−ブ
チルエステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重合
体４００Ｂの代りに、参考例３で得られた片末端に　Ｑ
Ｓ−３−（ＣＨｔ）４−Ｓ−で示される基を有し、かつ
片イソアミルエステル化されたスチレン−無水マレイン
酸共重合体４００ｍｇを用いる以外は、実施例１と同様
に行って目的とするＳＯＤ誘導体を２５．４Ｂ得た。

試験例実施例１で得られたＳＯＤ誘導体および原料のＳＯＤの
それぞれと、ヒト血清アルブミンとの結合能を高速液体
クロマトグラフィーを用いて測定した。等張リン酸緩衝
液（ＰＢＳ）を用いて、ＳＯＤ誘導体、原料ＳＯＤまた
はヒト血清アルブミンの濃度がそれぞれ０．１％（ｆ／
Ｖ）である各試料名。

液、ＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブミンの各濃度ｂ＜０
．１％ｌ／Ｖ）である混合試料溶液および原料のＳＯＤ
とヒト血清アルブミンの各濃度が０．１％（１／Ｖ）で
ある混合試料溶液を調製し、高速液体クロマトグラフィ
ー（装置：島津製作所製ＬＣ−７Ａ。

カラム：東ソーＴＳＫ　ｇｅｌ　Ｇ３０００　Ｓ？、溶
出液：Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　ｂｕｙｅｒ　ｐＨ８，０２、
試料量：　１００μｍ）により各試料の溶出位置の変化
を測定した。得られた結果を第２図および第３図に示し
た。第２図の■はヒト血清アルブミン、■はＳＯＤ誘導
体、■はＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブミンとの混合物
の高速液体クロマトグラムを示し、第３図の■はヒト血
清アルブミン、■は原料ＳＯＤ、■は原料ＳＯＤとヒト
血清アルブミンとの混合物の高速液体クロマトグラムを
示す。

図から分かるように、原料のＳＯＤとヒト血清アルブミ
ンを混合した試料では、原料のＳＯＤはヒト血清アルブ
ミンとのアフィニティを示さないためヒト血清アルブミ
ンの溶出位置は変化しないが、ＳＯＤ誘導体とヒト血清
アルブミンを混合した試料ではＳＯＤ誘導体はヒト血清
アルブミンとアフィニティを示すためヒト血清アルブミ
ンの溶出位置は高分子量側にシフトしている。この上う
に、本発明のＳＯＤ誘導体がヒト血清アルブミンとアフ
イニテイを示すことにより、本発明のＳＯＤ誘導体の血
中半減期は延長され、また、臓器への移行性がよくなる
ものと考えられる。

発明の効果本発明によれば、ＳＯＤの酵素活性を概ね保持したまま
で、該ＳＯＤに比べて大幅に延長された血中半減期を有
する新規な非巨大分子化ＳＯＤ誘導体が提供される。Ｓ
ＯＤ誘導体は血清タンパク質との可逆的な相互作用を有
しており、ＳＯＤを疾患局所へ移行させるうえで非常に
有利である。

またＳＯＤ誘導体は優れた抗不整脈作用を有し、さらに
抗炎症作用、抗潰瘍作用、抗虚血障害作用、抗脳浮腫作
用などの薬理作用を併わせ有する。また本発明によれば
、ＳＯＤ分子内の特定の部位に前記の新規なマレイミド
基含有共重合体を結合させることにより単一の化学構造
を有する上記のＳＯＤ誘導体を製造する方法が提供され
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られたＳＯＤ誘導体の赤外吸収ス
ペクトルを示す図である。第２図はヒト血清アルブミン
（図中の■）、実施例１で得られたＳＯＤ誘導体（図中
の■）および該ＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブミンとの
混合物（図中の■）の高速液体クロマトグラムである。第３図はヒト血清アルブミン（図中の■）、実施例！で
用いられた原料ＳＯＤ　（図中の■）および該ＳＯＤと
ヒト血清アルブミンとの混合物（図中の■）の高速液体
クロマトグラムである。特許出願人　株式会社　り　ラ　し同　　井上正康代　理　人　弁理士本多　堅

Claims

【特許請求の範囲】１、式〔ＳＯＤ〕〔Ｚ〕ｎ〔式中、〔ＳＯＤ〕はメルカプト基に換えてメルカプト
基から水素原子を除いた基を１個または２個有するスー
パーオキシドジスムターゼを表わし、〔Ｚ〕は（イ）▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化
学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があり
ます▼ または▲数式、化学式、表等があります▼、（これらの
式中、Ｒ＾１、Ｒ＾３およびＲ＾５はそれぞれ水素原子またはメチル基
を表わし、Ｒ＾２は水素原子、塩素原子、臭素原子また
はメチル基を表わし、Ｒ＾４は水素原子、炭素数１ない
し６のアルキル基または炭素数３ないし６のシクロアル
キル基を表わし、Ｒ＾６はメチル基またはエチル基を表
わす）で示される基からなる群から選ばれる基ならびに（ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾
７は水素原子を表わすか、または炭素数１ないし８のア
ルカノール、炭素数１ないし４のアルキル基部分を含む
エチレングリコールモノアルキルエーテルもしくは炭素
数１ないし４のアルキル基部分を含むグリセリシンアル
キルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）で示さ
れる基を構成単位とし、かつ（ハ）片末端に−Ｓ−Ｗ−（式中、Ｗは２価の有機基を
表わし、硫黄原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合するもの
であることを意味する）で示される基を有し、かつ平均
分子量が４００ないし２０，０００である共重合体の一
価の基を表わし、ｎは〔ＳＯＤ〕が有するメルカプト基
から水素原子を除いた基の数に対応する１または２の整
数を表わす〕で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体。２、スーパーオキシドジスムターゼと（イ）▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化
学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があり
ます▼ または▲数式、化学式、表等があります▼（これらの式
中、Ｒ＾１、Ｒ＾３およびＲ＾５はそれぞれ水素原子またはメチル基
を表わし、Ｒ＾２は水素原子、塩素原子、臭素原子また
はメチル基を表わし、Ｒ＾４は水素原子、炭素数１ない
し６のアルキル基または炭素数３ないし６のシクロアル
キル基を表わし、Ｒ＾６はメチル基またはエチル基を表
わす）で示される基からなる群から選ばれる基ならびに（ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾
７は水素原子を表わすか、または炭素数１ないし８のア
ルカノール、炭素数１ないし４のアルキル基部分を含む
エチレングリコールモノアルキルエーテルもしくは炭素
数１ないし４のアルキル基部分を含むグリセリシンアル
キルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）で示さ
れる基を構成単位とし、かつ（ハ）片末端にＸ−Ｓ−Ｗ−（式中、Ｘは隣接する硫黄
原子と共に活性ジスルフィド結合を形成し得る基を表わ
し、Ｗは２価の有機基を表わす）で示される基を有し、
かつ平均分子量が４００ないし２０，０００である共重
合体とをｐＨ６ないし１０の水溶液中で反応させること
を特徴とする請求項１記載のスーパーオキシドジスムタ
ーゼ誘導体の製造方法。