JPH01259001A - 活性ジスルフイド基含有共重合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は活性ジスルフィド基を有する新規な共重合体に
関する。

本発明によシ提供される活性ジ、スルフィド基含有共重
合体は、医薬としての有用性が注目されているスーパー
オキンドジスムターゼの血中半減期を延長させるだめの
化学修飾剤として有用である。

従来の技術 従来、スーパーオキシドジスムターゼ〔以下、これをＳ
ＯＤと略記する〕は動物、植物、微生物などの生体内に
広く存在し、生体に有害なスーツく−オキシドを分解す
る酵素として知られている。

最近、単離されたＳＯＤを抗炎症剤として用いようとす
る試みが々されている〔ファルマシア、１７巻、４１１
頁（１９８１年）およびカレント・セラボイテインク・
すｇ−チ（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＲ
ｅｓｅａｒｃｈ）、１６，７０６（１９７４）参照〕。

ＳＯＤを静脈内投与した場合、その血中半減期は僅か４
〜６分とされており、ＳＯＤは速かに尿中に排泄代謝さ
れる。ＳＯＤの血中半減期を延長させるためにＳＯＤを
フィコール、ポリエチレンクリコールまたはアルブミン
で修飾し、巨大分子化することが試みられてきたが、フ
ィコールまたはポリエチレングリコールで修飾されたＳ
ＯＤではＳＯＤの酵素活性が大幅に低下し、またアルブ
ミンで修飾されたＳＯＤには抗原性があることが報告さ
れている。またイヌリンで修飾されたＳＯＤでは、その
血中半減期が大幅に延長されることが知られているが、
同時にＳＯＤに比べて酵素活性の低下が認められる〔特
開昭５８−３２８２６号公報参照〕。

また本発明者らのうちの１人は、ＳＯＤ分子表面にリジ
ン残基を介してスチレン−マレイン酸骨格を有する疎水
性有機酸構造を酸アミド結合により導入することによシ
得られたＳＯＤ誘導体は、血中でアルブミンを主体とす
る血清タンパク質と可逆的に結合・解離し、これによっ
てＳＯＤの血中半減期が延長され、また−臓器への移行
性が良好となることを報告した〔第３７回タンパク質構
造討論会講演要旨集、６１−６４頁（昭和６１年９月１
０日発行）参照〕。

発明が解決しようとする課題 上記のフィコール、ポリエチレングリコール、アルブミ
ンまたはイヌリンで修飾されたＳＯＤはすでに述べた理
由、または巨大分子化に伴う生体組織内浸透性の低下な
どの点でいずれも実用上問題がある。

従来知られている種々の修飾ＳＯＤはすべてＳＯＤにそ
の分子内のアミン基を介して各種の高分子物質を結合さ
せることによって得たものである。

ヒト型ＳＯＤは１分子当ジアミノ基を２２個または２４
個有しており、またウシ型ＳＯＤは１分子筋９アミノ基
を２０個有する。このよりにＳＯＤは多数のアミン基を
有しておシ、ＳＯＤに高分子物質を結合させるに際して
該ＳＯＤ分子内の結合部位となるアミン基を特定するこ
とは非常に難しい。しかしながら、医薬の有効成分化合
物は単一の化学構造を有する化合物であることが好まし
い状況にあることを考慮すれば、医薬用途に供する修飾
５ＯＳ）はＳＯＤ分子内の特定の部位に高分子物質を結
合させた化学構造を有する化合物であることが望まれる
。

ＳＯＤはアミノ基以外に官能基としてメルカプト基を有
している。ヒト型ＳＯＤには反応し得る遊離のメルカプ
ト基は２個存在する。これらのメルカプト基を利用して
ＳＯＤに前記のスチレン−マレイン酸骨格を有する疎水
性有機酸構造を導入することができれば、延長された血
中半減期と良好及臓器への移行性を有し、かつ単一の化
学構造を有するスーパーオキシドジスムターゼ誘導体が
得られることが期待される。

しかして、本発明の１つの目的は、ＳＯＤの酵素活性を
概ね保持したままで該ＳＯＤに比べて大幅に延長された
血中半減期と良好な臓器への移行性を有し、かつ単一の
化学構造を有する新規な非巨大分子化スーパーオキシド
ジスムターゼ誘導体を与えるＳＯＤの新規な化学修飾剤
を提供するにある。

課題を解決するだめの手段 本発明によれば、上記の目的は、 ♂ＯＯＲ６ よびＲ５はそれぞれ水素原子またはメチル基を表わし　
Ｒ２は水素原子、塩素原子、臭素原子またはメチル基を
表わし　Ｒ４は水素原子、炭素数１ないし６のアルキル
基または炭素数３ないし６のシクロアルキル基を表わし
、Ｒ６はメチル基まだはエチル基を表わす）で示される
基からなる群から選ばれる基ならびに すか、または炭素数１ないし８のアルカノール、炭素数
１ないし４のアルキル基部分を含むエチレングリコール
モノアルキルエーテルもしくハ炭素数１ないし４のアル
キル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテルから水
酸基を除いた残基を表わす）で示される基を構成単位と
し、かつ（ハ）片末端に式 ％式％） （式中、Ｘは隣接する硫黄原子と共に活性ジスルフィド
結合を形成し得る基を表わし、Ｗは前記定義のとおりで
ある） で示される基を有し、かつ平均分子量が４００ないし２
０，０００である共重合体（以下、これを活性ジスルフ
ィド基含有共重合体と称する）を提供することによって
達成される６ 式（１）で示される基におけるＷは２価の有機基を表わ
すが、前記の構成単位（イ）および（ロ）からなる共重
合体の片末端と硫黄原子とを結合させる基であｉｔばと
くに制限されるものではない。−８−Ｗ−の基・・・代
表例としては次の式（Ｉｌ）および（Ｉｔｌ）で示され
る基が挙げられる。

■ （Ｉｔ　）　　　　　　　　　　　（−ＩＩＩ　）（こ
れらの式中　ＱｌおよびＱ２はそれぞれ水素原子または
炭素数１ないし３のアルキル基を表わし、ｍはＯないし
４の整数を表わし、Ａは１個以上の酸素原子または硫黄
原子で中断されていてもよい２価の炭化水素基を表わし
、一つの硫黄原子の結合手はＣ３ＯＤ）と結合するもの
であることを意味する） 式（Ｉｆ）で示される基において、ＱｌおよびＱ２は同
一または異なっていてもよく、具体的には水素原子、メ
チル基、エチル基、プロピル基などを表わし、ｍは好ま
しくは０またはｌ″ｃある。式（ＩＩＩ）で示される基
において、Ａは酸素原子または硫黄原子で中断されてい
てもよい分枝を有するか有しないアルキレン基、置換基
を有していてもよいフェニレン基またはキンリレン基な
どの２価の炭化水素基を表わす。その具体例としては、
例えばエチレン基−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ）１２−１−鑓（Ｃ
Ｈ３）ＣＨ２−１−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ｐ−キ
ンリレン基、ｍ−キンリレン基、ｍ−フェニレン基、０
−フェニレン基、トリレン基、−ＣＨｚＣＨｚ−０−Ｃ
Ｈ２ＣＨ２−１−ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−な
どが挙げられる。

式（Ｄで示される基におけるＸは隣シの硫黄原子と共に
活性ジスルフィド結合を形成し得る基を表わす。その代
表例として Ｙ　　　　　　　　　　　Ｙ 月 （式中、Ｙおよび２は同一または異なっていてもよく、
水素原子、ニトロ基またはカルボキシル基を表わす）な
どが挙げられる。式（ＩＶ）で示される基の具体例・・
・は２−ピリジルチオ基、４−ピリジルチオ基、４−ニ
トロ−２−ピリジルチオ基、４−カルボキシ−２−ピリ
ジルチオ基などである。

式（Ｖ）で示される基の具体例・・・は３−カルボキン
−４−二トロフェニルチオ基、２−ニトロフェニルチオ
基などである。

活性ジスルフィド基含有共重合体は例えば次の方法によ
り合成することができる。まず、保護されたＳＨ基を有
する連鎖移動剤を用いて、構成単位（イ）に対応する単
量体と無水マレイン酸とをラジカル共重合反応させ、片
末端に連鎖移動剤に起因する基を有する共重合体を得る
。次いで、共重合体の無水マレイン酸環を片エステル化
または／および加水分解したのち、共重合体の片末端に
存在する保護されたメルカプト基を脱保護し片末端にメ
ルカプト基を有する共重合体とし、さらに該メルカプト
基に活性ジスルフィド化合物を反応させることによシ活
性ジスルフィド基含有共重合体を得る。

保護されたＳ’Ｈ基を有する連鎖移動剤の代表例として
は、 （■）（■） （これらの式中　Ｒ８は炭素数１ないし３のアルキル基
を表わし　Ｑｌ、Ｑ２、Ａおよびｍは前記定義のとおり
である）で示される化合物が挙げられる。

いて説明する。

式（■）で示される化合物としては、例えばｐ−メチル
ベンジルメル力ブタン、ｐ−エチルベンジルメルカプタ
ン、ｐ−インプロピルベンジルメルカプタン、ｐ−メチ
ルチオフェノール、ｐ−エチルチオフェノール、ｐ−イ
ンプロピルチオフェノール、Ｏ−インプロピルチオフェ
ノールなどの酢酸、プロピオン酸、酪酸などとの各エス
テルが挙げられる。式（■）で示される化合物としては
、例えば１．２−エタンジチオール、１，３−プロパン
ジチオール、１．４−ブタンジチオール、２−メルカプ
トエチルスルフィド、ジ（２−メルカプトエチル）エー
テル、２．２’−ジチオビスエタンチオール、１、２−
ベンゼンジチオール、１．３−ベンゼンジチオール、３
．４−）ルエンジチオール、１，３−ビス（メルカプト
メチル）ベンゼン、１．４−ビス（メルカプトメチル）
ベンゼンなどの酢酸、プロピオン酸、酪酸などとの各片
エステルなどが挙げられる。

構成単位（イ）に対応する単量体としては、例えばスチ
レン、ｐ−クロロスチレン、ｐ−ブロムスチレン、α−
メチルスチレン；エチレン、フロピレン、α−ブチレン
、イソブチレン、１−ペンテン、２−メチル−１−フテ
ン、ビニルンクロヘキフン、１−ヘキセン、１−ヘプテ
ン；酢酸ビニル；（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）
アクリル酸エチルなどが挙げられる。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
ラジカル共重合反応はジクミルパーオキシド、アゾイン
ブチロニトリル、過酸化ベンゾイル、ｔ−ブチルパーベ
ンゾエートなどの触媒の存在下に行われる。触媒の使用
量は構成単位（−１’）に対応する単量体に対して約１
〜１０重量％である。ラジカル共重合反応を行うに際し
ては、前記の連鎖移動剤が重合系に加えられる。これら
の連鎖移動剤に重合溶媒としての役割を兼ねさせること
もでき、また、必要に応じてオクタン、ベンゼン、アセ
トン、エチルベンゼン、メ千ルエチルケトンｆｘト（Ｄ
有機溶媒を併用することができる。

無水マレイン酸の仕込み量は構成単位（イ）に対応する
単量体に対して約１〜５倍モル量、好ましくは約２倍モ
ル量である。かかる割合の構成単位（イ）に対応する単
量体と無水マレイン酸との仕込み総量は溶液中の濃度が
約５〜４０重量％、好ましくは約１０〜３０重量％とな
るように調整する。反応は約４０〜１８０℃の範囲、好
ましくは約１１０〜１６０℃の範囲の温度で行われる。

このラジカル共重合反応は、溶媒中に無水マレイン酸を
溶解させて得られた溶液に上記の温度下に構成単位（イ
）に対応する単量体を触媒とともに徐々に添加すること
によシ行うのが好ましい。かくしてラジカル共重合反応
させて得られた共重合体は、片末端に （■）（■） （式中、Ｒ８、Ｑｌ、Ｑ２、Ａおよびｍは前記定義のと
おシである）で示される基を有する共重合体である。

該共重合体はそのまま分別することなく、または分別し
て分子量分布を狭くしたのち、次の無水マレイン酸環の
片エステル化反応または／および加水分解反応に供され
る。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環を片エステル化して
得られるエステルとしては、メチルエステル、エチルエ
ステル、プロピルエステル、ｎ−ブチルエステル、ｎ−
アミルエステル、インアミルエステル、ｎ−ヘキンルエ
ステル、ｎ−オクチルエステル、メトキンエチルエステ
ル、エトキノエチルエステル、フロボキシエチルエステ
ル、２−ブトキンエチルエステル、１，３−ジメトキン
＝２−プロピルエステル、２．３−ジメトキシ−１−プ
ロピルエステル、１１３−シェドキン−２−７’口ビル
エステル、２−エトキシ−３−メトキン−１−プロピル
エステル、１，３−ジプロポキシ−２−プロピルエステ
ル、１．３−ジプトキンー２−プロピルエステル、ペン
ジルエステルナトカ挙ケラれる。これら片エステル化さ
れた共重合体は構成単位（イ）に対応する単量体と無水
マレイン酸との共重合体にそれぞれ対応するアルコール
を必要に応じて酢酸リチウムなどの触媒の存在下に約５
０〜１２０″Ｃの範囲の温度で反応させることによシ得
られる。対応するアルコールを過剰に用いて、そのアル
コールに溶媒としての役割を兼ねさせることができる。

また溶媒としてジオキサン、テトラヒドロフランなどを
使用することができる。

構成単位（イ）に対応する単量体と無水マレイン酸との
共重合体における無水マレイン酸環の加水分解反応は、
水酸−化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウ
ムなどの塩基の水溶液を用いて常法により行われる。反
応液からの目的とする共重合体の分離精製は常法に従い
ゲル濾過法または酸沈殿法により行われる。

次に、片末端に式（■）または式（ＩＸ）で示される基
を有する上記で得られた共重合体の末端チオエステル部
分を加水分解することにより、片末端に（これらの式中
　Ｑｌ、Ｑ２、Ａおよびｍは前記定義のとおシである）
で示される基を有する共重合体を得る。この末端チオエ
ステル部分の加水分解は温和な条件で行うことが可能で
ある。例えば水溶媒中、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム
、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどを用いて
、氷冷下ないし室温で、数分ないし約１０時間までの反
応時間で行われる。

次に片末端に式（Ｘ）または式（Ｍ）で示される基を有
する共重合体の末端のメルカプト基に活性ジスルフィド
化合物を反応させることにより、片末端に ■ （式中、Ｘ、　Ｑｌ、Ｑ２、Ａおよびｍは前記定義のと
おυである）で示される基を有する活性ジスルフィド基
含有共重合体を得る。この反応は通常ｐｔ（６〜１０の
緩衝液またはアセトニトリル、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルム
アミドもしくはジメチルスルホキシドなどの有機溶媒中
または緩＠液をこれら有機溶媒の混合糸で行われる。共
重合体に対し活性ジスルフィド化合物は等モルないし１
０倍モル用いる。

反応温度は水冷下ないし約７０℃で、反応時間は１〜２
４時間が適当である。

以下余白 イド化合物としては、例えば、２−ビリ・ジルジスルア
　イト（ｅｓ−３−ＣＮ　　）、５，５′−ジチオビス
（２−ニトロ安息香酸） ピリジルジスルフィド （ＨＯＯ畦Ｂ　！　−Ｓ−＜ンＣ０ＯＨ）、Ｎ−オキシ
−２−二トロー２−ピリジルジスルフィド （’０ｚＮ−Ｑ−３−８−９−ＮＯｚ　）、　２−ペン
ゾチアゾイゾイミダゾイルジスルフイド 一フェニルイミノメチルジスルフイド きる。

以上の方法により得られた反応液からの活性ジスルフィ
ド基含有共重合体の分離精製操作を次に説明する。反応
を水溶媒中で行った場合には、得られた反応液をその１
まゲル濾過し、目的とする溶出液を分取し、凍結乾燥す
る。また反応を有機溶媒中で行った場合には、得ら九た
反応液全必要に応じてこれより有機溶媒を除去したのち
同様にしてゲル濾過し、目的とする溶出液を凍結乾燥す
るか、まｆｃは反応液を必要に応じて濃縮するか、もし
くはこｎより有機溶媒を除去したのち、展開液としてテ
トラヒドロフラン、クロロホルム、アセトンなど全周い
て行う分取液体クロマトグラフィーに付し、目的とする
溶出液を分取し、凍結乾燥する。

本発明の活性ジスルフィド基含有共重合体全化学修飾剤
として用いて、スーツシーオキシドジスムターゼ誘導体
全製造することについて説明する。

ＳＯＤと活性ジスルフィド基含有共重合体と金田６ない
し１０の水溶液中で反応させることにより、式 ％式％ 〔式中、（ＳＯＤ）Ｕメルカプト基に換えてメルカプト
基から水素原子を除いた基音１個または２個■するスー
パーオキシドジスムターゼヲ表ワし、〔Ｚ〕は ＩＲ３ ｔ 一１念は　−ＣＨ２−Ｃ−（コＡうｔ７）式中、Ｒ１、
Ｒ３オ０ＯＲ６ よびＲ５はそｎぞｎ水素原子またはメチル基金表わし、
Ｒ２は水素原子、塩素原子、臭素原子またはメチル基を
表わし　Ｒ４は水素原子、炭素数１ないし６のアルキル
基または炭素数３ないし６のシクロアルキル基を表わし
　Ｒ６はメチル基またはエチル基金表わす）で示される
基からなる群から選ばれる基ならびに （ｏ）　　−ＣＨＣＨ（式中、Ｒ７は水素原子を表わす
Ｃ００Ｒ７ＣＯＯＨ か、または炭素数１ないし８のアルカノール、炭素数１
ないし４のアルキル基部分を含むエチレングリコールモ
ノアルキルエーテルもしくは炭素数１ないし４のアルキ
ル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテルから水酸
基を除いた残基を表わす）で示さ几る基を構成単位とし
、かつ（ハ）片末端に −８−Ｗ−（Ｘ［［） （式中、Ｗは２価の有機基を表わし、硫黄原子の結合手
は〔ＳＯＤ〕と結合するものであることを意味する） で示さｎる基に有し、かつ平均分子量が４００ないし２
０，０００である共重合体の一価の基を表わし、ｎは［
ＳＯＤ］が有するメルカプト基から水素原子を除いた基
の数に対応する１またｉ″１．２の整数を表わす〕 で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体（以下
、こ′ｉ″ＬをＳＯＤ誘導体と称す）を製造することが
できる。

ＳＯＤと活性ジスルフィド基含有共重合体との反応は、
５ＯＤｉ通常トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
塩酸塩、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、酢酸ナト
リウム、リン酸ナトリウムなどの塩の水溶液中にその濃
度が０．５〜ｂ好ましくは１〜２０η／ｍ／′になるよ
うに溶解し、得られた溶液に、粉末状の活性ジスルフィ
ド基含有共重合体または該共重合体をジメチルスルホキ
シド、ジオキサン、アセトン、テトラヒドロフラン、エ
チルアルコールなどの有機溶媒もしくは上記の塩の水溶
液に溶解させた溶液全添加することによって行わ几る。

反応中、溶液のＦ４”ｌは６〜１０に維持されているこ
とが必要であり、田が６より低い場合には、活性ジスル
フィド基含有共重合体の溶解性が低下して反応は進行し
難くなる。また、…が１０より高い場合は反応時間にも
よるが、　ＳＯＤ自身の酵素活性に影響を与える。反応
温度としては室温以下の温度が好ましく、−５℃〜＋５
℃の範囲の温度がさらに好ましい。また、反応時間は反
応温度、活性ジスルフィド基含有共重合体の添１モルに
対して約０６５〜１００モルの範囲である。

このようにして得らｆ′した反応液にはＳＯＤ誘導体と
未反応のＳＯＤおよび活性ジスルフィド基含有共重合体
などが存在するが、かかる反応液を濾過し、濾液をゲル
濾過し、得られるＳＯＤ誘導体を含む溶出液を必要に応
じてハイドロフォービック・カラムクロマトグラフィー
、アフイニテイカラムクロマトグラフイー、イオン交換
カラムクロマトグラフィーなどに付し精製したのち、限
外濾過に付することにより濃縮し、凍結乾燥することに
よりＳＯＤ誘導体の固型物を取得することかできる。

上記の反応により、ＳＯＤが有するメルカプト基と活性
ジスルフィド基含有共重合体が有する活性ジスルフィド
基とが縮合反応金おこし、目的とするＳＯＤ誘導体が生
成する。ＳＯＤと活性ジスルフィド基含有共重合体との
結合部分の代表例を構造式で下記に示す。

（１）共重合体の片末端が式（ｎ）で示される基を有す
る場合 〔Ｚ１〕は構成単位（イ）および（ロ）からなる共重合
体の主鎖を表わす。

ＣＨ３ （ｓ、ｏＤ）−ｓ−Ｑ−ｃ−〔ｚｔ） ＨＩ ＣＨ３ ＣＨ３ ＣＨ３ ［：ＳＯＤ］−８−ＣＨ２ＣＨ２−Ｑ−Ｃ−［：Ｚ１］
さ。

さ。

（２）共重合体の片末端が式（ＴＩ［）で示さ九る基を
有する場合 〔Ｚ２〕は構成単位゛（イ）および（ロ）からなる共重
合体の主鎖を表わす。

［５ＯＤＩ−３−ＣＨ２ＣＨ２−８−［Ｚ２］［ＳＯＤ
］−８−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−８−［Ｚ２〕（５ＯＤ）
−８−ＣＨｚ−Ｑ−ＣＨｚ−３−（Ｚ２〕［：　Ｓ　Ｏ
Ｄ　］−８−ＣＨ２ＣＨ２−０−ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ　−
［Ｚ２］（ＳＯＤ〕−８−ＣＨ２Ｃ比−８−ＣＨ２ＣＨ
２−Ｓ　−［Ｚ２．］［ＳＯＤ　〕−〕８−Ｑ−３−［
Ｚ２］本発明の活性ジスルフィド基含有共重合体に（は
１分子中に活性ジスルフィド基が１個存在し、またＳＯ
Ｄが有するメルカプト基については、ヒト型５ＯＤＫは
反応し得る遊離のメルカプト基は２個存在する。それゆ
えに、上記の反応の条件により、ヒト型５ＯＤ１分子当
り活性ジスルフィド基含有共重合体が１分子もしくは２
分子線合反応することによりＳＯＤ誘導体またはそ几ら
ＳＯＤ誘導体の混合物が得られる。かかるＳＯＤ誘導体
の混合物全医薬の有効成分化合−物として用いることに
不都合はない。しかしながら、医薬の有効成分化合物は
単一の化学構造を有する化合物であることが好ましい状
況にあることを考慮すれば、上記のＳＯＤ誘導体の混合
物全カラムクロマトグラフィーなどの操作に付し、分離
さ几た各々のＳＯＤ誘導体を医薬の有効取分化合物とし
て用いることが好ましい。なお、前記の反応および反応
後の処理において、ＳＯＤ誘導体が有するカルボキシル
基がアルカリ金属塩″！たはアンモニウム塩を形成する
可能性があるが、かかる塩を形成したカルボキシル基を
有するＳＯＤ誘導体も医薬の有効成分化合物として用い
ることに不都合はない０ＳＯＤ誘導体は５ＯＤ１分子当
り高々２分子の活性ジスルフィド基含有共重合体が縮合
反応して得られたものであり、ＳＯＤの酵素活性が高く
保持され、かつ血中半減期が大幅に延長されるなどの特
長を有する。

５ＯＤＨ動物（ヒト、ウシなど）、植物、微生物などの
生物中に含まｎているものを公知の方法によりそｎぞれ
の生物体から抽出されたもの、ま之は遺伝子工学の手法
を用いて取得されたものなどである。ＳＯＤの化学構造
（配位金属、分子１、アミノ酸配列など）はかなり解明
されてきており、ＳＯＤはＦｅ配位ＳＯＤ、Ｍｎ配位Ｓ
ＯＤ、Ｃｕ−Ｚｎ配位ＳＯＤの３種類に分類され、存在
している生体組織によって異なるが３万〜８万の分子量
を有している。ＳＯＤのアミノ酸配列も存在している生
体組織によって若干相異しているが、その詳細は「スー
パーオキサイドと医学」（犬柳善彦著、共立出版刊、昭
和５６年５月２５日発行）；ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）、　　２４
６゜２８７５〜２８８０（１９７１）；同輩ユ、６１０
７〜６１１２（１９７５）；　プロシーデイングズ・オ
プ・ザ・ナショナル・アカデミイ・オプ・サイエンシス
（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ　）、
７０．３７２５〜３７２９（１９７３）；アルカリ金属
・オプ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジッ
クス（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ　）、　１７９．２
４３〜２５６（１９７７）などの文献の記載を参照され
たい。ヒト型のＣｕ・Ｚｎ配位ＳＯＤは分子量が３１，
２００であり、反応性の遊離のメルカプト基が２個存在
する。このヒト型ＳＯＤは、例えば、ヒトの血液を順次
熱処理、イオン交換、ゲル濾過に付することにより、ま
た遺伝子工学の手法を用いることによって取得されるＯ 本発明の活性ジスルフィド基含有共重合体はいずｎも疎
水性基と親水性基の両者を持つことによる適度な疎水性
を有し、かつ極性の高いカルボキシル基音有する。した
がって、かかる活性ジスルフィド基含有共重合体が結合
しているＳＯＤ誘導体は血清蛋白および生体膜との可逆
的な結合性を有しており、このことにより血中半減期が
延長され、また臓器への移行性が良好となる。なかでも
構成単位（イ）としてスチレン由来の基を有するＳＯＤ
誘導体および構成単位仲）として片エステル化された基
を有するＳＯＤ誘導体は疎水性がより高く、こ几らの効
果全発現する点で好ましい。

活性ジスルフィド基含有共重合体において、構成単位（
イ）と構成単位仲）の構成モル比「（イ）／（ロ）」は
実質的に約１〜１．３の範囲であることが好ましく、通
常は１である。構成モル比が１よりも小さいものは構成
単位（イ）に相当する単量体と無水マレイン酸との共重
合で得ることは困難である。また、構成モル比が１．３
よりも太きいものは、構成単位仲）が片エステル化され
たものである場合、かかる活性ジスルフィド基含有共重
合体を塩の水溶液中に溶解させてＳＯＤと反応させる際
に、活性ジスルフィド基含有共重合体の水浴液への溶解
性が不良となるので好ましくない。

上記の活性ジスルフィド基含有共重合体の重量平均分子
量は通常４００〜２０，０００の範囲である。

この活性ジスルフィド基含有共重合体から得られるＳＯ
Ｄ誘導体の疾患局所への移行性の点から、活性ジスルフ
ィド基含有共重合体の重量平均分子量は３，０００以下
であることが好ましい。活性ジスルフィド基含有共重合
体の分子量分布については特に制限はないが、重量平均
分子量と数平均分子量との比が約１．０２ないし１．３
の範囲にある活性ジスルフィド基含有共重合体が医−薬
の有効成分化合物として好ましいＳＯＤ誘導体を与える
。

ＳＯＤ誘導体は優れた抗不整脈作用、抗炎症作用、抗潰
瘍作用、抗虚血障害作用、抗脳浮腫作用などの薬理作用
を有する。

また、ＳＯＤ誘導体は毒性試験においても低毒性である
ことが確認されている。

以上の結果より、ＳＯＤ誘導体は活性酸素ラジカルが関
与する種々の疾患に対して有効であり、特に抗炎症剤、
抗潰瘍剤、虚血性疾患治療剤、脳浮腫治療剤、パラコー
ト中毒治療剤として使用することができる。またＳＯＤ
誘導体は活性酸素ラジカルに起因する制癌剤の副作用を
軽減するための医薬として有用である。さらにＳＯＤ誘
導体は火傷、外傷、各種の皮膚炎などの皮膚の疾病など
の治療薬としても有用である０ ３ＯＤ誘導体の投与量は疾病、患者の重篤度、薬物に対
する愚答性などにより異なるが、通常成人１日あたり０
．１〜５００■、好ましくは０．５〜１００■の量であ
り、こ′ｉ″Ｌを１回または分割して投与するのがよい
。投与に際しては投与ル−トに適した任意の形態ｔとる
ことができる。

ＳＯＤ誘導体は任意慣用の製剤方法を用いて投与用に調
製することができる。ＳＯＤ誘導体全少なくとも１種含
有する医薬組成物は任意所要の製薬用担体、賦形剤など
の医薬上許容さ九る添加剤などを使用して慣用の手段に
よって調製さ九る。

この組成物が経口用製剤でおる場合には、該製剤は消化
管からの吸収に好適な形態で提供さｎるのが望ましい。

経口投与の錠剤およびカプセルは単位量投与形態であり
、結合剤、例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、
ソルビット、トラガカント、ポリビニルピロリドンなど
；賦形薬、例えば乳糖、とうもろこし澱粉、りん酸カル
シウム、ソルビット、グリシンなど；潤滑剤、例えばス
テアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコ
ール、シリカなど；崩壊剤、例えば馬鈴薯澱粉など；ま
たは許容し得る湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム
などのような慣用の賦形剤を含有していてもよい。錠剤
は当業界において周知の方法でコーティングしてもよい
０経ば゛用液体−梨剤は水性まｆｃは油性懸濁剤、溶液
、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよく、あ
るいは使用する前に水または他の適当なビヒクルで再溶
解させる乾燥生成物であってもよい。このような液体製
剤は普通に用いられる添加剤、例えば懸濁化剤、例えば
ソルビットシロップ、メチルセルロース、グルコース／
糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウ
ムゲル、水素化食用脂など；乳化剤、例えばレシチン、
モノオレイン酸ソルビタン、アラビアゴムなど；非水性
ビヒクル、例えばアーモンド油、分別ココナツト油、油
性エステル、プロピレングリコール、エチルアルコール
など；防腐剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ンルビン酸などを含
有してもよい０ また注射剤を調製する場合には、ＳＯＤ誘導体全生理食
塩水、注射用ブドウ糖液などの溶剤に溶解シ、ＳＯＤ誘
導体２〜２０ｍｙ／溶剤２〜１０＋＋ｔｇの濃度に調整
し、常法により皮下、筋肉内、静脈内注射剤とする。調
製時に必要により水溶液に田調整剤、緩衝剤、安定化剤
、保存剤、可溶化剤などを添加することができる。

上記の医薬組成物は、その形態等に依存して、ＳＯＤ誘
導体を一般に約０．０１〜５０重量係、好ましくは約Ｏ
６１〜２０重食係の濃度で含有することができる。

実施例 以下に、実施例により本発明を説明する。なお、本発明
はこれらの実施例により限定さｎるものではない。

実施例１ −トの合成 イソプロピルベンゼン８０．０　？　（０，６７ｍｏｌ
ｅ　）　ｆクロロホルム３００　ｒｒｔｌに加え、〜１
０℃〜０℃の水浴で冷却しながら攪拌し７’Ｃｏこの溶
液に蒸留精製したクロ／ｌ／　ス／ｌ／　ホ７酸８９　
ｒｕｇ　（１，３４ｍｏｌｅ　）ｉ約３０分間に要して
徐々に滴下した。滴下終了後、室温で３０分間攪拌した
。得られた反応液を氷水中に注ぎ、次いでクロロホルム
２００　ｒｕｇで抽出した。

抽出液を氷水５００　ｗｅで３回洗浄したのち、無水硫
酸マグネシウム２加えて乾燥した。この抽出液から減圧
下に低沸点物全留去することにより、ｐ−インブロビル
ベンゼンスルホニルクロリトヲ５５．０ｙ（イソプロピ
ルベンゼンを基準として算出した収率：３８％）得た。

２を容器つロフラスコに氷５００ｆ”ｉ加え、次いで濃
硫酸ＩＱＯｍｌｉ注意深く加えた。得らｆｌ−た水溶液
を０℃に冷却したのち、これに上記で得らｎｆｃｐ−イ
ソプロピルベンゼンスルホニルクロリド５５．０　？　
（０，２５ｍｏｌｅ　）ｉ加え、次イ’ｔ’溶ｇノ温度
全０〜２℃に維持しながら亜鉛粉末１１Ｃ１’ｉ徐々に
添加したのち、攪拌下に２４時間反応させた。引続き、
反応液全加熱還流下に１．５時間攪拌した。得られた反
応液を室温まで冷却したのち、ｎ−ヘキサンで抽出した
。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥したのち、蒸留
することにより沸点１０６．５〜１０７．５℃／２１瓢
均のｐ−イソプロピルチオフェノール’ｔ　２４．２　
？　（ｐ−イソプロピルベンゼンスルホニルクロリド全
基準として算出した収率：６３％）得た。

得らｎたｐ−イソプロピルチオフェノール２４．２９　
（０，１３ｍｏｌｅ　）　ｆジエチルエーテル５００　
ｒａｔ！に溶解し、この溶液に塩化アセチル１０．７ｒ
ｕｌ　（０，１４ｍｏｌｅ　）　ｋ添加した。得らｎた
溶液を水浴で冷却しながら攪拌し、こ几にピリジン１１
．４　ｍｌ　（０，１４ｍｏｌｅ　）を約１０分間を要
して徐々に滴下した。滴下終了後、室温で一夜攪拌した
。得らｎた反応液から沈殿物を濾去した。濾液を蒸留水
で２回洗滌し念のち、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
蒸留することにより沸点１４８〜１５０℃／　２０　ｍ
Ｈｇの５−ｐ−’ｒソプロピルフェニル＝チオアセテー
トｉ２１．６ｙ（ｐ−イソプロピルチオフェノールヲ基
準として算出し之収率＝８５％）得た。

窒素雰囲気下、上記（ａ）で得られた５−ｐ−イソプロ
ピルフェニルエチオアセテート１５ｍＡ’に無水マＬ／
イン酸４．３０　？　（４４ｍｍｏｌｅ　）　ｆ加え、
約１５０℃の温度で攪拌下に溶解させた。この溶液に、
ジクミルパーオキサイド０．１６　ｆ’　（０，５９ｍ
ｍｏｌｅ　）およびスチレン２．３０ｆ（２２ｍｍｏｌ
ｅ　）　１ｓ−ｐ−イアプロピルフェニルエチオアセテ
ート１０ＷＬｇに溶解すせて得られた溶液を約１５分間
を要して徐々に滴下した。滴下終了後、１５分間加熱攪
拌した。得らｉ″した反応液を室温まで冷却したのち、
ｎ−ヘキサン２又に攪拌下に約３０分間を要して滴下し
た。

生成した沈殿物を濾別し、乾燥することにより、るスチ
レン−無水マレイン酸共重合体ｉ　７．６３　？得た。

次に該共重合体の分別沈殿を行う。すなわち、得らｆｌ
、たスチレン−無水マレイン酸共重合体７．６０２をア
セトン１５０＋＋＋／に溶解し、この溶液にｎ　−ヘキ
サン２２５ｔｒＬｌを攪拌下に約３０分間を要して滴下
するとアメ状物が器壁に付着した。９０分間静置後、白
濁したアセトン／ｎ−ヘキサン系混合液を別の容器に移
し、得らｎたアメ状物をアセトンに溶解させて回収した
。回収液からアセトンを減圧下に留去したのち、その残
留物全室温で一夜真空乾燥することにより、片末端に ンー無水マレイン酸共重合体の高分子分画を１．９４Ｆ
得た。このもののゲルハーミエーンヨンクロマトグラフ
ィー（こＢ　２　Ｇ　Ｐ　Ｃと略称する；溶出液として
テトラヒドロフランを用い、標準物質としてポリスチレ
ンを用いた。以下同様）分析による重量平均分子量（正
わは２８５０であり、数平均分子量０口）は２０７０で
あった（　万／Ｍｎ　＝１．３８）０次に、白濁したア
セトン／ｎ−ヘキサン系混合液にさらにｎ−へキサン３
７５ｍ／ｉ攪拌下に約４０分間を要して滴下すると再び
アメ状物が器壁に付着した。６０分間静置後、白濁した
アセトン／ｎ−ヘキサン系混合液を別の容器に移し、得
られたアメ状物全アセトンに溶解させて回収した。回収
液からアセトンを減圧下に留去したのち、その残留物を
室温で一夜真空乾燥することにより、るスチレン−無水
マレイン酸共重合体の中分子分画に２．９０？得た。こ
のもののＧＰＣ分析によるＭｗは１４５０であり、Ｍｎ
は１１８０であった（　Ｍｗ／Ｍｎ　＝　１．２３　）
。また、上記操作により得らｎたアセトン／ｎ−ヘキサ
ン系混合液よりアセトンおよびｎ−ヘキサンを減圧下に
留去したのち、得らｆ′した残留換金分取ＧＰＣ（装置
二日本分析工業製ＬＣ−９，カラムＨＪＡＩＧＥＬ　　
ＩＨ２０ｘ６００司φ２本、溶出液：テトラヒドロフラ
ン）に付し、得ら′ｒｌ−た目的とする溶出液から減圧
下にテトラヒドロフラン全留去したのち、室温で一夜真
空乾燥することにより、片末端に レンー無水マレイン酸共重合体の低分子分画を２．７４
Ｆ得た。このもののＧＰＣ分析によるＭｗは７００であ
り、Ｔは６１０であった（匹／正＝１．１５）。

上記で得らｎ７’（中分子分画の共重合体２．００！Ｐ
および無水酢酸リチウム２０ｍ１ｒ、ｎ−ブチルアルコ
ール４０ｒｒｔｌに加え、９５℃の温度で２０時間攪拌
した。得ら九た反応液から減圧下にｎ−ブチルアルコー
ルを留去した。残留物にジオキサン２０ｍ１　ｆ加えて
凍結乾燥することにより、片末端にＣＨ３ＣＳ−Ｑ−Ｃ
（Ｃ出）２−　で示される基を有し、かつ片ｎ−ブチル
エステル化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体’
ｅ２．４０ｆ得た。赤外吸収スペクトルの測定結果より
、このものには残存無水マレイン酸環は認められなかっ
た。また、ＧＰＣ分析からこのもののＭｗは１９５０で
あり、■は１５９０で６つた（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．２３　
）。

上記の片ｎ−ブチルエステル化共重合体２．００りｉｌ
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１６０１１Ｌｌに加え、室温
で２０分−間攪拌した。得られた反応液に２．５Ｎ塩童
ヲ攪拌下に徐々に加えて反応液の咀が１ないし２の範囲
内になるように調整した０析出した沈殿物を濾別し、水
洗したのち、アセトン１６０ｍ１に溶解させた。得ら几
た溶液に２．５Ｎ塩酸８　ｒｕｇを加え、均一な酸性溶
液を得た。この酸性溶液に水２４０ｒｎｌｋ加えたのち
、これより減圧下にアセトンを留去し、析出した沈殿物
を濾別し、水洗したのち乾燥することにより、片末端に Ｈ８÷Ｃ（ＣＨ３）２−で示さ几る基を有し、かつ片ｎ
−ブチルエステル化さ几たスチレン−無水マレイン酸共
重合体に１．８４Ｆ得た。このものの赤外吸収スペクト
ルは次のとおりである。

赤外吸収スヘク）　ル（ＫＢｒ　ｄｉｓｋ）　：３２０
０．２９６０゜１７４０、１７１０゜ １４５５、１１７０゜ ７０’５ｃｍ” ２−ピリジルジスルフィド１．０（１（４，５ｘ　１０
−３ｍｏｌｅ　）とトリエチルアミｙ　１８０Ｗ（１，
８ｘｌＯ−３ｍｏｌｅ）をアセトニトリル５０ｍ１に溶
解し、室温で攪拌しながら、この溶液に上記（′ｂ）で
得らｎた片末端にＨ３÷ｃ（ＣＨ３）２−で示される基
を有し、かつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−
無水マレイン酸共重合体１．０Ｃ１（０，５ｘｌＯ−３
ｍｏｌｅ）を約２０分間を要して徐々に添加した。添加
後、さらに２時間攪拌全続けた。得ら九た反応液を濾過
し、その濾液をこれより未反応の２−ピリジルジスルフ
ィドを除去する目的で分取ＧＰＣ（溶出液：りｏ。

ホルム）に付し、得らｆｌ、７４目的とする溶出液から
減圧下にクロロホルムを留去したのち、室温で一夜真空
乾燥することにより、片末端に Ω−３Ｓ−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示さ九る基を有し、
かつ片ｎ−ブチルエステル化さ九たスチレン−無水マレ
イン酸共重合体を８２０■得た。得ら几た共重合体は還
元型グルタチオンと反応させることにより、紫外吸収ス
ペクトル３４０ｎｍに吸収が現れた。

この吸収は生成した２−チオピリドンによるものである
ので、このことから共重合体に活性ジスルフィド基が導
入されたことが確認された。

以下余白 実施例２ ＣＨ３Ｃ８−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有す
るスチレー無水マレイン酸共重合体の低分子分画を用い
、以降の操作は実施例１と同様に行なって、片末端にΩ
−８Ｓ−〇−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有し、か
つ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−無水マレイ
ン酸共重合体を得た。

実施例３ 無水マレイン酸２．１６ｆｔ−エチルベンゼン２０ｍ１
に加えて約１１０℃の温度で攪拌した。この溶液にアゾ
イソブチロニトリル１０８■、スチレン２．０８１およ
びＳ−４〜メルカプルトプテルテオアセテート２８９■
をエチルベンゼン１０ゴに溶解させて得られた溶液を約
１５分間を要して徐々に滴下した。滴下終了後、１５分
間加熱攪拌を就けた。得られた反応液を冷却したのち、
この反応液をヘキサ７２ｇに攪拌下約３０分間を要して
滴下した。生成した沈殿物を濾別し、ヘキサンで洗浄し
たのち乾燥することによシ、片末端にＣＨ３ＣＯ３−（
ＣＨ２）４−　Ｓ−で示される基を有するスチレン−無
水マレイン酸共重合体４．１０Ｆを得た。

上記（ａ）で得られた共重合体２．００９および無水酢
酸リチウム２０■をイソアミルアルコール４０ａｔに加
え、９５℃の温度で攪拌下に２０時間加熱した。得られ
た反応液から減圧下にイソアミルアルコールを留去した
。残留物にジオキサ７２０ゴを加えて凍結乾燥すること
によシ、片末端にＣＨ３ＣＯ３−（ＣＨ２）４−３−　
Ｔ　示すし７：ｒ基を有し、かつ片イソアミルエステル
化されたスチレン−無水マレイン酸共重合体を２．３８
Ｆ得た。

逗−五！」３Ａ緋ヂ■病二辷二眠リリリリＩＬ１ユかつ
片イソアミルエステル化されたスチレン−無体の合成 実施例１（ｂ）と同様の方法で、上記（ｂ）で得られだ
片イソアミルエステル共重合体２．００２をＩＮ水酸化
ナトリウム水溶液１６０　＋＋ｔ／！で処理して、片末
端にＨ８−（ＣＨ２）４−　Ｓ−で示される基を有し、
かつ片イソアミルエステル化されたスチレン−無水マレ
イン酸共重合体を１．７２９得た。この後、実施例１（
Ｃ）と同様の方法で、片末端にＨ３−（ＣＨ２）４−　
Ｓ−で示される基を有し、かつ片インアミルエステル化
されたスチレン−無水マレイン酸共重合体１．００２と
２−ピリジルジスルフィド１．００ｙとを反応させて、
片末端にＱｌ−８−Ｓ　−（ＣＨ２）４−　Ｓ−で示さ
れる基を有し、かつ片イソアミルエステル化されたスチ
レン−無水マレイン酸共重合体を７７０■得た。

得られた共重合体は還元型グルタチオンと反応させるこ
とにより、紫外線吸収スペクトル３４０ｎｍに吸収が現
れた。この吸収は生成した２−チオピリドンによるもの
であるので、このことから、共重合体に活性ジスルフィ
ド基が導入されたことが確認された。

参考例１ 等張リン酸緩衝液（Ｆ！′１７．０４）９ｍｌにヒト型
ＳＯＤ水溶液１　”　（６８ｒｎＶ／ｍＡ’、　１．９
９　Ｘ　１０−６ｍｏｌｅ）と重炭酸ナトリウム２９４
ｑ（３，５０ＸＩ　Ｏ−３ｍｏｌｅ）を加え、４℃の温
度で攪拌した。この溶液に、実施例１で得られた活性ジ
スルフィド基含有共重合体４００　Ｗ　（２，ＯＯＸ　
１０−’　ｍｏｌｅ）を徐々に加、ｔ［）ち、−夜攪拌
を続けた。得られた反応液をＡＨ−セファロ−スト、４
　Ｂ　（ファルマシア社製）を担体として用いるアフィ
ニティークロマトグラフィー（ゲル４　ｒｌｌ　）に付
し、溶出液として０．０５モル重炭酸ナトリウム水溶液
６０ｔｕｌを用いて未反応のＳＯＤを含む分画を分取し
、次いで１モル塩化ナトリウムを含ｔｒ　０．１モル重
炭酸ナトリウム水溶液６０ｒｎｌを用いてＳＯＤ誘導体
を含む分画を分取した。ＳＯＤ誘導体を含む分画を限外
濾過に付し、次いでその濃縮液をセファデックスＧ〜２
５（ファルマシア社製）を担９体として用いるゲル濾過
（溶出液：１０ミリモル重炭酸アンモニウム）に付して
脱塩を行ったのち、凍結乾燥することにより、目的とす
るＳＯＤ誘導体を２８．９　ｒｒｑ得だ。このものの赤
外吸収スペクトル（ＫＢｒ　ｄｉｓｋ）を第１図に示す
。

参考例２ Ｋ　ＣＨ３Ｃ３−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−　テ示すｈル基
ｔ−有ｆ　；ｂ　スーｙ−レンー無水マレイン酸共重合
体の中分子分画の代わりに実施例２で得られた片末端に ＣＨ３Ｃ３−Ｑ−Ｃ（ＣＨ３）２−で示される基を有す
るスチレン−無水マレイン酸共重合体の低分子分画を使
用する以外は、参考例１と同様に行って目的とするＳＯ
Ｄ誘導体を得た。

参考例３ 参考例１において、実施例１で得られた片末端Ｋ　Ｇ　
Ｓ−８−Ｃ＞−Ｃ（ＣＨ３）２−　ｆ　示すレル基ｋ　
有Ｌ　−カつ片ｎ−ブチルエステル化されたスチレン−
無水マレイン酸共重合体４００■の代りに、実施例３で
得られた片末端にＱＬ　ｓ　−ｓ　−（ＣＨ２）４−　
Ｓ−で示される基を有し、かつ片イソアミルエステル化
すれたスチレン−無水マレイン酸共重合体４００■を用
いる以外は、参考例１と同様に行って目的とするＳＯＤ
誘導体を２５．４ダ得た。

試験例 参考例１で得られたＳＯＤ誘導体および原料のＳＯＤの
それぞれと、ヒト血清アルブミンとの結合能を高速液体
クロマトグラフィーを用いて測定した。等張リン酸緩衝
液（ＰＢＳ）を用いて、ＳＯＤ誘導体、原料ＳＯＤまた
はヒト血清アルブミンの濃度がそれぞれ０．１％（Ｗ／
Ｖ）である各試料溶液、ＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブ
ミンの各濃度が０．１％（Ｗ／Ｖ）である混合試料溶液
および原料のＳＯＤとヒト血清アルブミンの各濃度が０
．１％（Ｗ／Ｖ）である混合試料溶液を調製し、高速液
体クロマトグラフィー（装置：島津製作所製ＬＣ−７Ａ
１カラム：東ソーＴＳＫ　ｇｅｌ　Ｇ　３　Ｑ　Ｑ　Ｑ
　　ＳＷ。

溶出液：　Ｔｒｉｓ　−ＨＣＩ　ｂｕｆｆｅｒ　ｐｒ’
＋　８．０２、試料量：１００μりにより各試料の溶出
位置の変化を測定した。得られた結果を第２図および第
３図に示した。第２図の■はヒト血清アルブミン・■は
ＳＯＤ誘導体、■はＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブミン
との混合物の高速液体クロマトグラムを示し、第３図の
■はヒト血清アルブミン、■は原料ＳＯＤ、■は原料Ｓ
ＯＤとヒト血清アルブミンとの混合物の高速液体クロマ
トグラムを示す。

図から分かるように、原料のＳＯＤとヒト血清アルブミ
ンを混合した試料では、原料のＳＯＤはヒト血清アルブ
ミンとのアフィニティーを示さないためヒト血清アルブ
ミンの溶出位置は変化しないが、ＳＯＤ誘導体とヒト血
清アルブミンを混合した試料でｔｒｉＳＯＤ誘導体はヒ
ト血清アルブミンとアフイニテイを示すためヒト血清ア
ルブミンの溶出位置は高分子１側にシフトしている。こ
のように、ＳＯＤ誘導体がヒト血清アルブミンとアフイ
ニテイを示すことＫよυ、ＳＯＤ誘導体の血中半減期が
延長され、またこのものの臓器への移行性がよくなるも
のと考えられる。

発明の効果 本発明によればＳＯＤの酵素活性を概ね保持したままで
該ＳＯＤに比べて大幅に延長された血中半減期と良好な
臓器への移行性を有し、かつ単一の化学構造を有する新
規なＳＯＤ誘導体を与えるＳＯＤの新規な化学修飾剤と
なる活性ジスルフィド基含有共重合体が提供される。

【図面の簡単な説明】

第１図は参考例１で得られたＳＯＤ誘導体の赤外吸収ス
ペクトルを示す図である。第２図はヒト血清アルブミン
（図中の■）、参考例１で得らられたＳＯＤ誘導体（図
中の■）および該ＳＯＤ誘導体とヒト血清アルブミンと
の混合物（図中の■）の高速液体クロマトグラムである
。第３図はヒト血清アルブミン（図中の■）、参考例１
で用いられた原料５ＯＤ（図中の■）および該ＳＯＤと
ヒト血清アルブミンとの混合物（図中の■）の高速液体
クロマトグラムである。 特許出願人　　株式会社　り　ラ　し

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （イ）▲数式、化学式、表等があります▼ または▲数式、化学式、表等があります▼（これらの式
   中、Ｒ＾１、Ｒ＾３およびＲ＾５はそれぞれ水素原子ま
   たはメチル基を表わし、Ｒ＾２は水素原子、塩素原子、
   臭素原子またはメチル基を表わし、Ｒ＾４は水素原子、
   炭素数１ないし６のアルキル基または炭素数３ないし６
   のシクロアルキル基を表わし、Ｒ＾６はメチル基または
   エチル基を表わす）で示される基からなる群から選ばれ
   る基ならびに （ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾
   ７は水素原子を表わすか、または炭素数１ないし８のア
   ルカノール、炭素数１ないし４のアルキル基部分を含む
   エチレングリコールモノアルキルエーテルもしくは炭素
   数１ないし４のアルキル基部分を含むグリセリシンアル
   キルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）で示さ
   れる基を構成単位とし、かつ （ハ）片末端に Ｘ−Ｓ−Ｗ−（式中、Ｘは隣接する硫黄原子と共に活性
   ジスルフィド結合を形成し得る基を表わし、Ｗは２価の
   有機基を表わす）で示される基を有し、かつ平均分子量
   が４００ないし２０，０００である共重合体。