KR920009733B1 - 인플루엔자 바이러스의 정제방법 - Google Patents

인플루엔자 바이러스의 정제방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

인플루엔자 바이러스의 정제방법
본 발명은 인플루엔자 바이러스의 정제방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 인플루엔자 바이러스에 대한 효과적인 왁진을 얻는 방법에 관한 것이다.
인플루엔자는 국가적으로 또는 심지어 전세계적으로 널리 급속히 번지는 전염병이다.
예를들면, 세계적으로 널리 1918∼1921년과 1957년에 발생하였다. 전자의 경우에는, 약 6억명의 환자와 2천만명이상의 사망자가 발생하였고, 일본에서는 약 2천 4백만명의 환자와 39만명의 사망자가 발생하였다는 보고가 있었다. 일본의 과거 20년간의 통제에 의하면, 인구 10만명에 대하여, 0.3∼8.5명 정도가 인플루엔자에 의하여 사망하였다. 인플루엔자의 합병증으로 사망한 사망자의 수를 감안하여 보면, 인플루엔자에 의한 치사율은 보다 높아질 것으로 예상된다.
이와 같은 악성 인플루엔자의 예방의 단 하나의 가능한 방법은 왁진으로 왁진접종하는 것이며, 인플루엔자 바이러스를 정제하여 제조된 왁진을 사용하여 오고 있다. 인플루엔자 왁진을 제조하기 위한 인플루엔자 바이러스 정제의 대표적인 종래방법은 다음과 같다.
Figure kpo00001
상기에서와 같이, 종래의 방법은 저속 원심 분리와 화학적 기술에 의하여 정제 단계를 거친후에 밀도-균배 원심분리를 사용하여, 요막액내에 포함된 인플루엔자 바이러스를 정제하는 복잡한 단계를 필요로 하고 있다. 요막액을 밀도 균배 원심 분리에 직접 걸어서 인플루엔자 바이러스를 정제하는 것은 밀도 균배 액층에 손상을 가져오기 때문에 적합하지 않다. 따라서, 바이러스를 함유한 요막액은 대개 황산바륨으로 화학적 정제에 의하여 처리되는데, 이에 의하여 바이러스는 황산바륨의 표면에 흡착되어 정제된다.
그러나, 황산바륨으로 정제하는 이러한 기술은 용액을 대량으로 취급하는데에 곤란하고 사용후에 황산바륨을 처리하는데 어려움이 따른다. 기타 한외여과에 의한 농축 또는 고속원심분리와 같은 방법이 생각되어지나, 이들 방법도 번잡하고 대량의 요막액을 취급하는데에는 적합하지 않다.
또한, 상기한 종래의 방법은 인플루엔자 바이러스의 면역학적으로 활성인 성분을 추출하는데에 효과적이지 못하다. 인플루엔자 바이러스의 성분 원소중에 표면 항원으로 알려진 HA(Hemagglutinin)과 NA(Neuraminidase)양자 단백질은 면역학적으로 활성 성분으로 보통 알려져 있는데, HA는 전염예방항원으로서 역활을 하고, NA는 왁진이 인플루엔자 바이러스로 부터 제조될 때 전염 예방을 보조한다.
그러나, 종래의 정제 방법은 단자 지질을 다른 성분과 함께 제거하는 것 뿐이고, 이러한 방법으로 제조한 왁진을 여전히 면역학적으로 불활성 이거나 약간 활성인 단백질, 헥산, 지질 및 기타 물질, 그리고 인플루엔자 바이러스의 총단백질의 각각 30%와 약 2∼3%에 달하는 양으로 대개 함유되는 HA오 NA를 함유하고 있다. 왁진내에 비필수물질이 존재하고 있으면 원하지 않는 부작용의 원인이 된다. 따라서 이러한 왁진은 투여량이 제한되고, 달성되는 면역 효과에 한계가 있다.
그러므로 본 발명의 목적은 인플루엔자 왁진을 제조하기 위하여 간단한 방법으로 인플루엔자 바이러스가 정제될 수 있는 방법을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 인플루엔자 바이러스의 표면 항원으로 알려진 면역학적 활성성분이, 효과적이고 안전한 인플루엔자 왁진을 제조하도록 효과적으로 정제 될수 있는 방법을 제공하고자 하는 것이다.
기타 목적과 본 발명의 구성, 작용 및 효과를 상세히 설명하면 다음과 같다.
본발명은 셀룰로스 또는 가교 다당류의 황산 에스테르가 인플루엔자 전체로서 뿐만 아니라 표면 항원(HA와 NA단백질)과도 인플루엔자 바이러스와 특이적인 친화성이 있고, 이들을 포함하는 물질로 부터 이러한 바이러스 또는 바이러스 단백질을 분리, 정제하는 데에 효과적이라는 것을 발견한 것에 기초하고 있다. 따라서, 본 발명에 의하면, 가교 다당류 또는 셀룰로스의 황산에스테르를 크로마토그래피토의 겔로서 사용하는 컬럼 크로마토그래피토에 인플루엔자 바이러스를 함유하는 용액을 거치는 공정을 포함하는 인플루엔자 바이러스의 정제방법을 제공하고 있다.
본 발명에 사용되는 셀룰로스의 황산 에스테르는 결정성 셀룰로스 또는 결정영역과 비결정영역을 갖는 셀룰로스의 황산 에스테르를 포함한다. 이들 원료 셀룰로스는 상업적으로 구입이 용이한데, 예를들면, Abicel(일본국 아사히 카세히 제조), Cellulofine GC-15, GH-25, GC-100 또는 GC-200(일본국 칫소사 제조)등이 있다.
본 발명에 사용하는 가교 다당류의 황산 에스테르는, 덱스트란, 셀룰로스, 아가로스등의 다당류를 예를들면, 에피클로로 히드린, 디클로로히드린, 디브로모히드린, 에틸렌 글리콜비스 에폭시 프로필에테르등의 가료제로 가교하여 얻어진 가교다당 류를 황산에스테르화하여 얻어진 것이다. 가교 다당류는 상업적으로 구입하기 쉬운데, 예를들면, Sephadex G-10, G-25, G-50 및 G-100(스웨덴의 파르마시아사 제조)와 같은 가교 덱스트란, Sepharose Cl-2B, Cl-4B 및 Cl-6B(스웨덴 파르마시아제조)와 같은 가교 아가로스., 그리고 Cellulofine GCL-25, GCL-90(일본국 칫소사 제조)와 같은 가교 셀룰로스등이 있다.
이러한 가교 다당류 또는 셀룰로스의 황산화는 종래의 방법에 의하여 수행될 수 있다.
그러나 본 발명에 있어서 사용되는 크로마토그래피용 겔은, 예를들면 피리민등의 유기용매의 존재하에 클로로슬폰산, 무수황산 등의 황산화제로 작용시킴으로서, 물에 불용성인 셀룰로스 또는 가교 다당류를 직접 황산화 함으로서 제조되는 것을 특징으로 하고 있다. 따라서, 최종 겔은 물에 불용성이고 고도로 안정화 되어 있다.
또한, 이러한 셀룰로스, 또는 가교 다당류의 황산에스테르의 겔은 충분히 황산화되어 있기 때문에, 그 내부영역에서도 극히 높은 흡착력을 나타낸다. 이러한 겔은 저렴한 가격으로 쉽게 제조될 수 있기 때문에 경제적인 관점에 있어서도 사용에 유리하다. 가교 다당류의 황산화모(설포닐기의 함유량)는 가교다당류의 중량비로 보통 0.1∼40%의 범위내이며, 좋기로는 10∼40%이고, 셀룰로스의 황산화도는 셀룰로스의 중량비로 보통 0.1∼5.0%의 범위내이다.
가교 다당류 또는 셀룰로스의 황산에스테르를 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의하여 인플루엔자 바이러스 바이러스와/또는 표면항원(HA와 NA단백질)을 정제하는 공정은 통상의 컬럼 크로마토그래피에서와 유사한 방법으로 수행된다.
예를들면, 다음과 같은 방법으로 수행되어진다; 먼저 가교 다당류 또는 셀룰로스(좋기로는 구형입자의 형태로)의 황산 에스테르를 컬럼에 충진시키고, 이것을 이온 강도가 0.001 2.0정도인 적당한 완충액, 예를들면, 0.01M인산 완충 식염수(pH7.4), 0.1M식염을 함유한 구연산 완충액(pH7.2)등으로 평형화 한다.
평형화한 후, 인플루엔자 바이러스를 함유한 처리 용액을 겔에 이바이러스를 흡착시키기 위하여 컬럼을 통과시키고, 상기 평형화에서 사용된 동일한 완충용액으로 세정한다.
그후, 이온 강도가 평형화 또는 세정시에 사용한 완충액의 이온 강도보다 큰 적당한 완충액, 예를들면 0.1M 또는 1.5M,식염을 함유한 인산완충액(pH6∼9)등으로 컬럼을 통과시켜서 컬럼으로 부터 흡착된 인플루엔자 바이러스를 용출하여 원하는 정도의 고순도 인플루엔자 바이러스를 얻는다.
본 발명 방법은 인플루엔자 바이러스 단백질의 정제에 있어 어느 단계에서도 채용될 수 있다.
예를들면, 본 발명 방법은 요막액 또는 인플루엔자 바이러스로 전염된 배양육즙에 직접 적용되어, 인플루엔자 바이러스 전체가 이러한 용액이나 액체에 함유된 다른 물질로 부터 특징적으로 분리될 수 있다. 또한 본 발명방법은 더욱 정제된 인플루엔자 바이러스를 얻기 위하여 미리 어떤 정제 공정을 거친 용액에도 적용될 수 있다.
예를들면, 에테르처리한 용액은 지질은 제거되나 HA와 NA단백질 뿐만 아니라 여러가지 단백질과 핵산을 함유하고 있는데, 이러한 용액은 용액내에 함유된 다른 물질로 부터 HA와 NA단백질을 특별히 분리시키기 위하여 본 발명 방법을 적용할 수 있다. 물론 두가지 이상의 이러한 정제방법이 결합될 수 있으며, 선택적으로는 종래의 분리기술(예를들면, 초원심분리 또는 이온교환 크로마토그래피)과 결합될 수 있는데, 특히 HA와 NA 단백질에 대하여 가능한한 높은 순도의 정제된 인플루엔자 바이러스를 얻기 위한 것이다. 또한, 본 발명은 어떤 형태 또는 어떤 원인의 인플루엔자 바이러스를 함유하는 용액에도 적용될수 있다.
따라서, 본 발명의 방법은 다른 형태의 인플루엔자 뿐만 아니라 A형 또는 B형의 인플루엔자 바이러스를 정제하는 데에도 채용될수 있다.
원료 인플루엔자 바이러스는 사람에서 뿐만아니라 말, 돼지, 닭, 칠면조 또는 갈매기 등 동물에서도 얻을 수 있다.
또한 본 발명 방법은 유전공학에 의하여 되는 인플루엔자 바이러스 단백질을 함유하는 용액에도 적용될수 있다.(예를들면, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 82, PP. 2019∼2023, 1985년 4월, 생화학)
본 발명의 정제방법에 의하면, 인플루엔자 바이러스는 고도로 정제될 수 있는데, 예를들어, 원료 용액에서의 순도보다 수배 내지 수십배로 정제되고, 설포닐기가 가교다당류 또는 셀룰로스의 황산에스테르에 있어서의 가교 다당류 또는 셀룰로스에 직접 결합하기 때문에, 회수율도 높고 따라서 설포닐기의 함유량이 높으며, 인플루엔자 바이러스에 대한 특이적인 흡착성능도 우수하게 나타난다.
본 발명의 정제방법은 공업적인 면에서도 고가의 장비가 필요없이 쉽게 수행될 수 있고, 저렴한 가격으로 공업적으로 원하는 순도의 정제된 인플루엔자 바이러스를 얻을 수 있다. 그외에, 여기에 사용되는 겔은 매우 안정되어 있으며, 이렇게 하여 얻어진 제품은 종래의 제품에서 자주보이던 불순물이 전혀 없는 것이다.
이하 본 발명을 제조예와 실시예에 따라 상세히 설명하면 다음과 같고, 이에 한정되는 것은 아니다.
[제조예 1]
0℃ 이하의 온도에서 피리딘(600ml)에 클로로 설폰산(117g)을 한방울씩 떨어드려 혼합한다. 혼합후에, 혼합액을 가열하여 65∼70℃로 승온한다. 이 혼합액에 결정 셀룰로스(크로마토그래피용 Abicel, 아사히 카세이제조)(80g)을 가하고 65∼70℃에서 4시간 교반한다. 반응 종료후, 냉각하고, 10%수산화 나트륨 수용액을 가하여 중화한다. 이렇게 하여 얻어진 겔을 여과 분리하여, 0.01M인산 완충 식염액으로 충분히 세정하여 셀룰로스 황산염겔을 얻는다.
[제조예 2]
0℃이하의 온도에서 피리딘(600ml)에 클로로 설폰산(117g)을 한방울씩 떨어트려 혼합한다. 혼합후에, 혼합액을 가열하여, 65∼70℃로 승온한다. 이 혼합액에, 결정셀룰로스겔(Cellulofine GC-15, 칫소사 제조)(80g)을 가하고, 65∼70℃에서 3시간 교반한다. 반응 종료후, 냉각하고, 10%수산화 나트륨 수용액을 가하여 중화한다. 이렇게 하여 얻어진 겔을 여과 분리하여, 0.01M인산 완충 식염액으로 충분히 세정하여 셀룰로스 황산염겔을 얻는다.
[제조예 3]
0℃이하의 온도에서 피리딘(200ml)에 클로로 설폰산(11ml)을 한방울씩 떨어뜨려 혼합한다. 혼합후에, 혼합액을 가열하여 65∼70℃로 승온한다. 이 혼합액에, 에피클로로히드빈-가교덱스트란(Sephadex G-50, 파르마시아제조)(7.5g)을 가하고, 65∼70℃에서 4시간 동안 교반한다. 반응종료후, 냉각하고, 수산화나트륨 수용액으로 중화한다. 이렇게하여 얻어진 겔을 여과분리하고 0.01M인산완충식 염액으로 충분히 세정하여 가교 황산 덱스트란을 얻는다.
[제조예 4]
상기 제조예 3과 같이하여 제조한 피리딘-클로로설폰산 혼합액(210ml)에 가교셀룰로스 겔(Cellulofine GCL-25 칫소사제조)의 건조물(7.5g)을 가하고, 65∼70℃에서 4시간 반응시킨다. 반응 종료후, 냉각하고 수산화 나트륨 수용액을 가하여 중화한다. 이렇게 하여 얻어진 겔을 여과 분리하여 0.01M 인산완충식염액으로 충분히 세정하여 가교 셀룰로스 황산염(7.2g)을 얻는다.
[제조예 5]
상기 제조예 3과 같이하여 제조한 피리딘-클로로설폰산 혼합액(210ml)에, 가교 아가로스겔(Sephgarose CL-6B, 파르마시아 제조)의 피리딘 포함체 30ml을 가하고, 65∼70℃에서 4시간 반응시킨다. 반응종료후, 냉각하고, 수산화 나트륨 수용액을 가하여 중화한다. 이렇게 하여 얻어진 겔을 여과분리하여, 0.01M인산완충식염액으로 충분히 세정하여 가교황산 아가로스(23ml)를 얻는다.
[실시예 1]
제조예 2에서 얻어진 셀룰로스 황산염겔을 컬럼(50mm φ×170mm)에 충진하고, 여기에 0.14M염화나트륨을 함유한 0.01M인산완충액(pH7.4)으로 평형화 한다. 그리고, 이 컬럼에, 계란(11일간 부화)에 34℃에서 48시간동안 접종배양한 A/필리핀(H3N2)형 인플루엔자 바이러스 감염요막액 4,200ml을 통과시킨다. 요막액에는, 로리법과 비활성 0.20(바이러스 함량/단백질 질소 함량)에 의하여 측정하면, 바이러스양이 77CCA(Chick cell agglutination), 단백질 질소량 377㎍/ml있다. 요막액을 통과시킨 후에, 컬럼을 0.19M염화나트륨을 함유한 0.01M인산완충 용액 2,500ml로 세정한다. 그리고 1.49M염화나트륨을 함유한 0.01M인산완충액으로 용출하고, 용출분 170ml를 얻는다. 그후, 0.01M인산완충액을 함유한 4.99M 염화나트륨 1,000ml로 컬럼내에 겔을 세정한다.
그 결과를 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure kpo00002
표에서와 같이, 인플루엔자 바이러스는 용출분으로 거의 회수되고 정제도(용출분의 비활성도/원료 요막액의 비활성도)는 20.05로 나타낸다.
[실시예 2]
제조예 2에서 얻어진 셀룰로스 황산염겔을 컬럼(50mm φ×170mm)에 충진하고, 여기에 0.04M염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충액(pH7.4)으로 평형화 한다. 그리고, 이 컬럼럼에 상기한 종래의 방법으로 B/싱카폴형 인플루엔자 바이러스를 정제하고 그 중의 지질을 제거하기 위하여 에테르로 바이러스를 처리하여 얻어지고, 다른 단백질과 헥산뿐아니라 HA와 NA단백직을 함유하는 에테르처리 왁진용액 450ml를 통과시킨다. 그후에, 1.94M 식염수를 함유한 0.01M 인산완충액 500ml로 컬럼을 세정한다. 그리고, 흡착물질은 4.99M 염화나트륨을 함유하는 0.01M 인산완충용액으로 용출하여 용출분 130ml를 얻는다. 그리고, 겔을, 4.99M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출, 세정한다.
그 결과를 표 2에 나타낸다.
[표 2]
Figure kpo00003
표 2에서와 같이, 겔로서 정제한 정제도는 약 2.7이다. 단일 방사 면역확산에 의한 용출액의 분석은 용출액이 많은 양의 HA와 NA단백질을 함유하는 것을 나타낸다.
[실시예 3]
제조예 3에서와 같이하여 얻어진 가교 황산덱스트란겔을 컬럼(25mmφ×100mm)에 충진하고, 충진된 컬럼을 0.14M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충액(pH7.4)로 평형화하였다. 컬럼을 통하여 A/구마모토(H1N1)형 인플루엔자 바이러스로 감염된 요막액 50ml를 통과시켰다. 통과후, 컬럼을 0.01M 완충액을 함유한 0.14M 염화나트륨 100ml로 세정하고, 1.49M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출하여 30ml의 용출분을 얻는다. 그후, 겔을 4.99M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출, 세정한다.
그 결과를 표 3에 나타낸다.
[표 3]
Figure kpo00004
[실시예 4]
제조예 5에서 얻어진 가교 황산 아가로스겔을 컬럼(25mmφ×100mm)에 충진시키고, 충진된 컬럼을 0.14M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충 용액 (pH7.4)으로 평형화 시킨다. 컬럼을 통하여 A/이시가와(H3N2)형 인플루엔자 바이러스로 감염된 요막액 150ml를 통과시킨다. 통과후, 컬럼을 실시예 3와 같이 하여 세정 및 용출 처리하여 용출분 50ml를 얻는다. 그리고, 겔은 4.99M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출, 세정한다.
그 결과를 표 4에 나타낸다.
[표 4]
Figure kpo00005
[실시예 5]
제조예 2에서 얻어진 셀룰로스 황산염겔을 컬럼(50mmφ×70mm) 내에 충진하고, 충진된 컬럼을 0.14M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액(pH7.4)로 평화화 한다. 컬럼을 통하여 A/미아미(H3N6)형 마역인플루엔자 바이러스에 감염된 요막액 300ml를 통과시킨다. 통과후, 컬럼을 세정하고, 0.14M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출하여 용출분 50ml를 얻는다. 그리고, 겔을 4.99M 염화나트륨을 함유한 0.01M 인산완충용액으로 용출, 세정한다.
그 결과를 표 5에 나타낸다.
[표 5]
Figure kpo00006

Claims (5)

  1. 크로마토그래피용 겔로서, 셀룰로스 또는 가교 다당류의 황산 에스테르를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에, 인플루엔자 바이러스를 함유한 용액을 거쳐서 되는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 정제 방법.
  2. 제1항에 있어서, 인플루엔자 바이러스를 함유하는 용액이 인플루엔자 바이러스로 감염된 요막액인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 정제방법.
  3. 제1항에 있어서, 인플루엔자 바이러스를 함유하는 용액은, 지질을 제거하기 위한 에테르 처리를 포함하는 전처리에 가하여 지는 용액인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 정제방법.
  4. 제1항 내지 제3항중 어느 1항에 있어서, 가교 다당류의 황산에스테르는, 가교 황산 셀룰로스, 가교 황산 아가로스 및 가교 황산 덱스트란으로 구성되는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 정제방법.
  5. 제1항 내지 제3항중 어느 1항에 있어서, 셀룰로스의 황산에스테르는, 결정성 셀룰로스 또는 결정영역과 비결정영역을 갖는 셀룰로스의 황산에스테르인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 정제방법.
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5215739A (en) * 1989-04-05 1993-06-01 Toko Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Spray gel base and spray gel preparation using thereof
US5158761A (en) * 1989-04-05 1992-10-27 Toko Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Spray gel base and spray gel preparation using thereof
FR2667622B1 (fr) * 1990-10-08 1994-10-07 Kaysersberg Sa Montisse lie hydrauliquement et son procede de fabrication.
IT1248075B (it) * 1991-06-18 1995-01-05 Sclavo Spa Processo per la purificazione del virus dell'epatite a (hav), virus cosi` purificato e composizioni vaccinali che lo contengono.
US5447859A (en) * 1993-07-16 1995-09-05 Viagene Method for the purification or removal of retroviruses using sulfated cellulose
EP1010981A1 (de) * 1998-12-18 2000-06-21 Diagor GmbH Konjugate zum Nachweis von Viren und deren Verwendung
JP2002142770A (ja) 2000-11-08 2002-05-21 Dnavec Research Inc 循環系への遺伝子送達用パラミクソウイルスベクター
PL354822A1 (en) * 2002-06-30 2004-01-12 Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PANwe Wrocławiu Method of receiving purified bacteriophage preparations and new applications of polysaccharide or its esterificated derivative
JP2007523621A (ja) * 2003-06-18 2007-08-23 オニックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド ウイルスを精製するための方法
JP4558652B2 (ja) * 2003-06-20 2010-10-06 マイクロビクス・バイオシステムズ・インコーポレイテツド ウイルス生産の改善
EP1690937B1 (en) 2003-11-04 2012-10-17 Dnavec Research Inc. Method of constructing transgenic dendritic cell
JP4969444B2 (ja) 2005-06-14 2012-07-04 ディナベック株式会社 抗体の作製方法
WO2007027321A2 (en) * 2005-07-25 2007-03-08 Avianax, Inc. Therapeutic antibodies for treatment and prophylaxis of transmittable viral diseases
US8877187B2 (en) * 2005-07-25 2014-11-04 Avianax, Llc Therapeutic antibodies for treatment and prophylaxis of transmittable viral diseases
EP1808697A1 (en) * 2006-01-13 2007-07-18 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of an ion exchange matrix for determining the concentration of virus particles and/or virus antigens
CA2636600A1 (en) 2006-01-17 2007-07-26 Dnavec Corporation Novel protein expression system
US20100297604A1 (en) * 2006-06-09 2010-11-25 Xing-Xiang Li Methods and reagents for virus isolation and detection
EP1878791A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 Bia Separations D.O.O. Method for influenza virus purification
US20100209974A1 (en) 2006-07-13 2010-08-19 Dnavec Corporation Non-replicating paramyxoviridae virus vector
EP2066418A4 (en) * 2006-09-29 2011-12-28 Ge Healthcare Bio Sciences Ab SEPARATION MATRIX FOR VIRAL PURIFICATION
EP1982727A1 (en) * 2007-04-17 2008-10-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Method for purification of viral proteins
US20100203027A1 (en) 2007-04-27 2010-08-12 Kyushu Univeristy National University Viral vector for gene therapy
US20090098143A1 (en) * 2007-06-29 2009-04-16 Avianax, Inc. Vaccine production for pathogenic bird viral diseases
JP5389342B2 (ja) * 2007-08-09 2014-01-15 デンカ生研株式会社 吸着担体及び吸着担体の製造方法
JP5716297B2 (ja) 2009-06-25 2015-05-13 Jnc株式会社 クロマトグラフィー用充填剤、その製造方法、およびそれを用いたウイルス用ワクチンの製造方法
SG184833A1 (en) 2010-04-14 2012-11-29 Emd Millipore Corp Methods of producing high titer, high purity virus stocks and methods of use thereof
ES2868093T3 (es) 2012-09-17 2021-10-21 Grace W R & Co Medio y dispositivos de cromatografía
JP6369467B2 (ja) * 2013-09-02 2018-08-08 Jnc株式会社 多孔性セルロース粒子の製造方法および多孔性セルロース粒子
DE102013017014B4 (de) 2013-10-14 2017-03-30 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Sulfatierte Cellulosehydrat-Membran, Verfahren zur ihrer Herstellung und Verwendung der Membran als Adsorptionsmembran für die Virenaufreinigung
US11389783B2 (en) 2014-05-02 2022-07-19 W.R. Grace & Co.-Conn. Functionalized support material and methods of making and using functionalized support material
EP2966093A1 (en) * 2014-07-07 2016-01-13 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Process for the preparation of magnetic sulfated cellulose particles, magnetic sulfated cellulose particles and their use
ES2896897T3 (es) 2015-06-05 2022-02-28 Grace W R & Co Agentes de clarificación para el bioprocesamiento de adsorbentes y métodos para producir y usar los mismos
US10626376B2 (en) 2016-11-14 2020-04-21 St. Jude Children's Research Hospital Method for isolating and purifying adeno-associated virus particles using salt
CN106622159B (zh) * 2016-12-22 2019-06-14 苏州楚博生物技术有限公司 用于蛋白药物纯化的亲和层析介质

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL131092C (ko) *
US3105012A (en) * 1961-10-19 1963-09-24 Parke Davis & Co Antigen products and means for producing the same
BE662899A (ko) * 1964-04-22
US3547779A (en) * 1968-12-18 1970-12-15 Merck & Co Inc Process for producing purified concentrated influenza virus
SE356735B (ko) * 1970-12-02 1973-06-04 Svenska Cellulosa Ab
US3842062A (en) * 1972-09-27 1974-10-15 Du Pont Water-soluble complexes of protein and anionic polyelectrolytes such as sodium carboxymethyl cellulose
US3920625A (en) * 1973-06-19 1975-11-18 Kabi Ab Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates
US4160018A (en) * 1973-06-25 1979-07-03 Bjorklund Knut B Stabilized cancer associated polypeptide antigen and preparation thereof
IL49752A (en) * 1975-07-09 1979-07-25 Kabi Ab Compositions having affinity for hepatitis virus and method for hepatitis virus removal or concentration
SE420977B (sv) * 1976-03-18 1981-11-16 Kabi Ab Forfarande for rening och isolering av hepatitvirus for vaccinframstellning
US4181713A (en) * 1978-10-30 1980-01-01 Merck & Co., Inc. Isolation of HBs Ag
DE3014189A1 (de) * 1980-04-14 1981-10-15 Europäisches Laboratorium für Molekularbiologie (EMBL), 6900 Heidelberg Verfahren zur herstellung eines immunogenen membranproteinaggregats von influenza-, parainfluenza- und rhabdo-viren
JPS57136528A (en) * 1981-02-09 1982-08-23 Hayashibara Biochem Lab Inc Preparation of viral vaccine
US4434093A (en) * 1982-07-26 1984-02-28 Ortho Diagnostic Systems Inc. Methods for preparation of HBs Ag free gamma globulins
US4515714A (en) * 1983-03-09 1985-05-07 Juridicial Foundation, The Chemo-Semo-Sero-Therapeutic Research Institute Method for purification of hepatitis B virus surface antigen

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Publication number Publication date
US4724210A (en) 1988-02-09
EP0171086A3 (en) 1988-01-13
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KR870001835A (ko) 1987-03-28
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CA1251399A (en) 1989-03-21
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ATE54468T1 (de) 1990-07-15

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