KR900018374A - 바실루스 투린지엔시스 형질전환방법 - Google Patents

바실루스 투린지엔시스 형질전환방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

바실루스 투린지엔시스 형질전환방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제6도는 셔틀벡터 pXI61의 제한지도이며, 제7도는 pXI93의 제한지도.

Claims (107)

  1. 바실루스 투린지엔시스(Balcillus thuringiensis)의 유전자 조작에 적합한 재조합 DNA를 사용하는 간단한 형질전환 방법에 의하여 바실루스 투린지엔시스를 고효율로 형질전환시키는 것을 포함하는, 재조합, DNA기술을 이용한 바실루스 투린지엔시스의 직접적이고, 조절되며 또 재현가능한 유전자 조작 방법.
  2. 바실루스 세레우스(Bacillus cereus)의 유전자 조작에 적합한 재조합 DNA를 사용하는 간단한 형질전환 방법에 의하여 바실루스 세레우스를 고효율로 형질전환시키는 것을 포함하는, 재조합 DNA기술을 이용한 바실루스 세레우스의 직접적이고, 조절되며 또 재현 가능한 유전자 조작 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 엘렉트로포레이숀(electroporation)법을 이용하여 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스를 형질전환시키는 것을 포함하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, a) 바실루스 투린지엔시스 세포 성장에 적합하며 또 세포 성장에 적합하게 통기가 되는 배지내에 적당한 세포 밀도의 세포 현탁액을 제조하고, b) 이 세포 현탁액으로부터 세포를 분리하고 또 후속 단계의 엘렉트로포레이숀에 적합한 접종 완충용액에 재 현탁시키며, c) 엘렉트로포레이숀에 적합한 농도로 DNA시료를 부가하고 d) b) 및 c) 하에 기술된 뱃치를 엘렉트로포레이숀 장치에 도입시키며, e) 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포를 재조합 DNA로써 형질전환기에 적합한 기간 동안 높은 전계 강도를 단기간 생성하기 위해 세포 현탁액위에 1회 이상 짧게 콘덴서를 방전시키고, f) 엘렉트로포레이트된 세포를 임의로 재배양하며, g) 엘렉트로포오레이트된 세포를 적합한 선별 배지에 접종하고, 또 h) 형질전환된 세포를 선별하는 방법 단계를 포함하는 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스의 형질전환방법.
  5. 제4항에 있어서, 4a)에서 기술한 세포 현탁액을 제조하기 위해 바실루스 투린지엔시스 포자를 사용하는 방법.
  6. 제4항에 있어서, 4e)에서 기술한 세포 현탁액의 엘렉트로포레시숀에 급속 냉동된 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포를 사용하는 방법.
  7. 제4항에 있어서, 바실루스 투린지엔시스 세표를 배양하기 위해, a) 호기성 바실루스종을 배양하기 위해 통상적으로 사용되는 쉽게 동화 가능한 탄소 및 질소원을 갖는 복합 영양배지를 사용하고 a1) 필요에 따라서 비타민 및 필수 금속 이온을 a) 하에서 언급한 배지에 부가하거나 또는 b) b1) 복합물 또는 쉽게 동화 가능한 탄소 및 질소원 또는 이들의 결합물 및 b2) 필수 비타민 및 금속이온을 함유하는 완전 합성 또는 반합성 영양배지를 사용하는 방법.
  8. 제4항에 있어서, 바실루스 세포현탁액이 0.1 내지 1.0의 광학 밀도를 갖는 방법.
  9. 제4항에 있어서, b) 하에서 기술된 접종 완충용액이 삼투압적으로 안정된 인산염 완충욕액인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 인산염 완충용액이 안정화제로서 당 또는 당 알코올을 함유하는 방법.
  11. 제9항에 있어서, 안정화제가 사카로오스일 때 0.1M 내지 1.0M농도로 존재하는 방법.
  12. 제9항에 있어서, 인산염 완충용액이 pH 5.0 내지 pH 8.0의 pH값을 갖는 방법.
  13. 제4항에 있어서, 엘렉트로포레이숀 전, 도중 및 후에 0°내지 35℃에서 바실루스 세포를 배양하는 방법.
  14. 제4항에 있어서, 엘렉트로포레이숀 전, 도중 및 후에 2℃ 내지 15℃에서 바실루스 세포를 배양하는 방법.
  15. 제4항에 있어서, 부가된 DNA시료의 농도가 1ng 내지 20㎍인 방법.
  16. 제15항에 있어서, DNA시료가 벡터 DNA인 방법.
  17. 제4항에 있어서, 엘렉트로포레이숀 과정에서 DNA함유 세포현탁액을 가로질러 콘덴서로부터 잠깐 방전시키는 것에 의하여 매우 높은 전장 세기를 단기간 동안 세균 세포에 작용시킨 결과 현탁액중의 DNA가 바실루스 세포로 흡수될 정도로 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 세포의 투과성이 증가된 방법.
  18. 제17항에 있어서, 전장 세기가 100V/cm 내지 50,000V/cm인 방법.
  19. 제17항에 있어서, 전장 세기각 100V/cm 내지 10,000V/cm인 방법.
  20. 제4항에 있어서, 바실투스 세포 현탁액상에 작용하는 펄스의 지수적 분해 시간이 약 2분내지 약 50분 범위내로 존재하는 방법.
  21. 제4항에 있어서, 엘렉트로포레이트된 세포를, 적당히 배양한 후, 형질전환된 바실루스 세포의 선별에 적합한 첨가제를 함유하는 고체 배지상에 접종하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 첨가제가 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스의 선별에 적합한 테트라시클린, 카나마이신, 클로람페니콜, 에리트로마이신으로 구성된 군에서 선별된 항상물질인 방법.
  23. 제21항에 있어서, 첨가제가 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스의 선별에 적합한 색소원 기질인 방법.
  24. 제1항 또는 제2항에 있어서, 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스의 형질전환에 사용된 재조합 DNA가 상동 또는 비상동 기원이거나 또는 상동 및 비상동 DNA의 결합물인 방법.
  25. 제1항 또는 제2항에 있어서, 재조합 DNA가 1개 이상의 구조 유전자 및 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 양쪽에서 작용할 수 있고 또 구조 유전자와 기능적으로 연결되어 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 양쪽에서 구조 유전자의 발현이 확실히 되는 3' 및 5'측 조절 서열을 함유하는 방법.
  26. 제1항 또는 제2항에 있어서, 구조 유전자가 바실루스 투린지엔시스에서 천연적으로 존재하는 δ-내독소 폴리펩티드, 또는 이와 적어도 실질적으로 상동 즉 바실루스 투린지엔시스의 결정성 δ-내독소 폴리펩티드의 독성 특성을 적어도 실질적으로 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, δ-내독소 코딩 DNA서열이 살충 활성에 관여하는 천연적 δ-내독소 코딩 서열의 적어도 부분 실질적으로 상동인 방법.
  28. 제24항에 있어서, DNA가 벡터 DNA인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 벡터 DNA가 폴라즈미드 DNA로부터 유래하는 방법.
  30. 제28항에 있어서, 벡터 DNA가 파지 DNA로부터 유래하는 방법.
  31. 제1항 또는 제2항에 있어서, 형질전환시키기 위해, 바실루스 투린지엔시스 또는 밀접하게 관련된 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서 복제할 수 있을 뿐 아니라 적어도 1개 또는 수개의 이형 숙주생물에서 복제할 수 있고 또 상동 및 이형 숙주계 모두에서 확인될 수 있는 이 작용성 벡터를 사용하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 이형 숙주 생물이 a) 바실루스속, 포도상구균속, 연쇄상 구균속, 스트랩토마이세스속, 슈도모나스속, 에세리히아속, 아그로박테륨속, 살모넬라속, 에르위니아속등으로 구성된 군으로 부터 선정된 원핵 생물이거나 또는 b) 효모, 동식물 세포등으로 선정된 진핵 생물인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 이형 숙주 생물이 대장균인 방법.
  34. a) 먼저 적합한 제한 효소를 사용하여 상동 또는 비상동 기원의 플르즈미드 DNA를 단편으로 절단하고, 또 b) 상이한 숙주계에서 복제 및 선별하는데 필수적인 기능이 포함되도록, 각각 소망하는 숙주계에서 복제 및 선별하는데 필수적인 영역을 함유하는 단편들을 적합한 효소 존재하에서 서로 연결시키는 것을 포함하는, 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스를 형질전환시키는데 적합한 이 작용성 벡터를 제조하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 완전히 비상동 기원의 플라즈미드 DNA를 사용하는 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, a) 상동 플라즈미드 DNA는 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스세레우스에 천연적으로 존재하거나, 또는 그와 실질적으로 상동인 DNA이고, b) 비상동 플라즈미드 DNA는 b1) 바실루스속, 포도상구균속, 연쇄상구균속, 스트렙토마이세스속,슈도모나스속, 에세리히아속, 아그로박테륨속, 살모넬라속, 에르위니아속등으로 구성된 군으로부터 선정된 원핵 생물이거나, 또는 b2) 효모, 동식물 세포등으로 구성된 군으로부터 선정된 진핵 생물에 천연적으로 존재하는 DNA이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 DNA인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 비상동 플라즈미드 DNA가 대장균에 천연적으로 존재하는 DNA 또는 그와 실질적으로 상동의 DNA인 방법.
  38. 상동 및 이형 숙주계에서 복제 및 선별하는데 필수적인 기능뿐 아니라 표현 가능한 형태의 1개 이상의 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열을 함유하며, 이들 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열을 적합한 효소를 이용하여 이 작용성 백테어 삽입되는 것을 포함하는 제34항에 따른 이 작용성 제조방법.
  39. 제38항에 있어서, 유전자 또는 기타 유용한 DNA 서열이 상동, 비상동 또는 합성 기원이거나 또는 이들 유전자 또는 DNA 서열의 결합물로 구성된 방법.
  40. 제38항에 있어서, 유전자가 1개 이상의 규조 유전자 및 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽모두 작용할 수 있고 구조 유전자(들)의 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 양쪽 모두에서의 발현을 확실히 하기 위해 구조 유전자(들)에 기능적으로 연결된 3' 및 5'측 조절 서열로 구성된 방법.
  41. 제40항에 있어서, 조절 서열이 프로모터 및 터미네이터 서열 뿐 아니라 3' 및 5' 비번역 영역의 기타 조절 서열도 포함하는 발혀뇨시그널인 방법.
  42. 41항에 있어서, 발현 시그널이 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 양쪽 모두에서 천연적으로 존재하거나, 또는 천연적 서열과 실질적으로 상동인 천연적 발현 시그널의 돌연변이체 및 변종인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 발현 시그널이 바실루스 투린지엔시스의 포자형성 의존성 프로모터를 포함하는 방법.
  44. 제40항에 있어서, 구조 유전자가 바실루스 투린지엔시스에 천연적으로 존재하는 δ-내독소 폴리펩티드 또는 이와 실질적으로 상동인, 즉 바실루스 투린지엔시스의 결정성 δ-내독성 폴리펩티드의 독성 특성을 적어도 실질적으로 갖고 있는 폴리펩티드를 코딩하는 방법.
  45. 제40항에 있어서, 구조 유전자가 바실루스 투린지엔시스에 천연저으로 존재하는 δ-내독소를 코딩하는 DNA서열이거나, 또는 상응하는 천연적 서열과 적어도 실질적으로 상동인 천연적 DNA서열의 변종인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 폴리펩티드가 쿠르스타키, 베르리너, 알레스티, 소토, 톨워터, 덴드롤리무스, 테네브리오니스 및 이스레엘렌시스로 구성된 군으로부터 선정된 바실루스 투린지엔시스의 적합한 아종의 δ-내독성 폴리펩티드와 실질적으로 상동인 방법.
  47. 제45항에 있어서, δ-내독소 코딩 DNA서열이 살충 활성 능력이 있는 천연적 δ-내독소 코딩 서열의 부분 또는 부분들과 적어도 실질적으로 상동인 방법.
  48. 제44항에 있어서, δ-내독소 코딩 DNA서열이 하기 식(Ⅰ)의 뉴클레오티드 156과 3623사이에 위치하는 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타기 HDI의 DNA단편이거나, 또는 곤충 독성 특성을 갖는 폴리펩티드를 여전히 코딩하는 보다 짧은 DNA단편인 방법.
  49. 바실루스 투린지엔시스 또는 밀접하게 관련된 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서 복제할 수 있을 뿐 아니라 적어도 1개 또는 수개의 이형 숙주 생물에서 복제할 수 있고 또 상동 및 이형 숙주계 모두에서 확인될 수 있는 이 작용성 벡터.
  50. 제49항에 있어서, 이형 숙주 생물이 a) 바실루스속, 포도상구균속, 연쇄상구균속, 스트렙토마이세스속, 슈도모나스속, 에세리히아속, 아그로박테륨속, 살모넬라속, 에르위니아속등으로 구성된 군으로 부터 선정된 원핵 생물 또는 b) 효모, 동식물 세포등으로 구성된 군으로부터 선정된 진핵 생물인 이 작용성 벡터.
  51. 제50항에 있어서, 이형 숙주 생물이 대장균인 방법.
  52. 제49항에 있어서, 이 작용성 벡터가 바실루스 투린지엔시스 또는 밀접하게 관련된 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서, 및 1개 이상의 이형 숙주 생물에서 복제 및 선별하는데 필수적인 기능을 적어도 부분적으로 코드하는 상동 또는 비상동 기원의 플라즈미드 DNA로 구성된 이작용성 벡터.
  53. 제49항에 있어서, 이 작용성 벡터가 완전히 비상동 기원의 플라즈미드 DNA로구성된 이 작용성 벡터.
  54. 제52항 또는 제53항에 있어서, a) 상동 플라즈미드 DNA가 바실루스 투린지엔시스 또는 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서 천연적으로 존재하는 DNA, 또는 그와 실질적으로 상동인 DNA이고, b) 비상동 플라즈미드 DNA가 b1) 바실루스속, 포도상구균속, 연쇄상구균속, 스트렙토마이세스속, 슈도모나스속, 에세리히아속, 아그로박테륨속, 살모넬라속, 에르위니아속등으로 구성된 군으로부터 선정된 원핵 생물, 또는 b2) 효모, 동식물 세포등으로 구성된 군으로부터 선정된 진핵 생물에 천연적으로 존재하는 DNA이거나 또는 그와 실질적으로 상동의 DNA인 이 작용성 벡터.
  55. 제54항에 있어서, 비상동 플라즈미드 DNA가 대장균에서 천연적으로 존재하는 DNA 또는 그와 실질적으로 상동인 이작용성 벡터.
  56. 제49항에 있어서, 상동 및 이형 숙주계에서 복제 및 선별하는데 필수적인 기능이외에 발현 가능한 형태의 1개 이상의 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열을 함유하는 이 작용성 벡터.
  57. 제56항에 있어서, 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열이 상동, 비상동 또는 합성 기원이거나 또는 이들 유전자 또는 DNA서열의 결합물로 구성된 방법.
  58. 제56항에 있어서, 유전자가 1개 이상의 구조 유전자 및 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서 작용할 수 있고 구조 유전자(들)의 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 양쪽 모두에서의 발현을 확실히 하기 위해 구조 유전자(들)에 기능적으로 연결된 3' 및 5'측 조절 서열로 구성된 이 작용성 벡터.
  59. 제58항에 있어서, 조절 서열이 프로모터 및 터미네이터 서열 뿐 아니라 3' 및 5'비번역 영역의 기타 조절 서열도 포함하는 발현시그널인 이작용성 벡터.
  60. 제59항에 있어서, 발현 시그널이 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스에서 또는 양쪽 모두에서 천연적으로 존재하거나, 또는 천연적 서열과 실질적으로 상동인 천연적 발현 시그널의 돌연변이체 및 변종인 이작용성 벡터.
  61. 제60항에 있어서, 발현 시그널이 바실루스 투린지엔시스의 포자형성 의존성 프로모터를 포함하는 이작용성 벡터.
  62. 제58항에 있어서, 구조 유전자가 바실루스 투린지엔시스에 천연적으로 존재하는 δ-내독소 폴리펩티드 또는 이와 실질적으로 상동인, 즉 바실루스 투린지엔시스의 결정성 δ-내독성 폴리펩티드의 독성 특성을 적어도 실질적으로 갖고 있는 포립텝티드를 코딩하는 이작용성 벡터.
  63. 제58항에 있어서, 구조 유전자가 바실루스 투린지엔시스에 천연적으로 존재하는 δ-내독소를 코딩하는 DNA서열이거나, 또는 상응하는 천연적 서열과 적어도 실질적으로 상동인 천연적 DNA서열의 변종인 이작용성 벡터.
  64. 제62항에 있어서, 폴리펩티드가 쿠르스타키, 베르뢰너, 알레스티, 소토, 톨워티, 덴드로리무스, 테네브리오니스 및 이스라엘렌시스로 구성된 군으로부터 선정된 바실루스 투린지엔시스의 적합한 아종의 δ-내독소 폴리펩티드와 실질적으로 상동인 이작용성 벡터.
  65. 제63항에 있어서, δ-내독소 코딩 DNA서열이 살충 활성 능력이 있는 천연적 서열의 부분 또는 부분들과 적어도 실질적으로 상동인 이작용성 벡터.
  66. 제62항에 있어서, δ-내독소 DNA서열이 하기 식(Ⅰ)의 뉴클레오티드 156과 3623사이에 위치하는 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 HDI의 DNA단편이거나, 또는 곤충 독성 특성을 갖는 폴리펩티드를 여전히 코딩하는 보다 짧은 DNA단편인 이작용성 벡터.
  67. 제34항 내지 제48항중 어느 하나에 따른 방법으로 제조된 이작용성 벡터.
  68. 형질전환법에 의하여 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타기 HDIcryB(DSM 4572)로 도입된 이작용성 벡터 pX161(pK61).
  69. 형질전환법에 의하여 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키HDIcryB(DSM 4571) 및 바실루스 세레우스 569K(DSM 4573)로 도입된 이작용성 벡터
  70. 제49항 내지 제69항 어느 하나에 따른 이작용성 벡터를 함유하는 숙주 세포.
  71. 제70항에 있어서, 숙주 세포가 미생물인 숙주 세포.
  72. 제71항에 있어서, 숙주 세포가 세균인 숙주 세포.
  73. 제71항에 있어서, 숙주 세포가 대장균인 숙주 세포.
  74. 제71항에 있어서, 숙주 세포가 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스인 숙주 세포.
  75. 제70항에 있어서, 숙주 세포가 효모 및 동식물세포로 구성된 군으로부터 선정된 진핵 세포인 숙주 세포.
  76. 제49항 내지 제69항중 어느 하나에 따른 이작용성 벡터로써 형질전환된 바실루스 투린지엔시스.
  77. 제66항에 이작용성 벡터로 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 HDIcryB.
  78. 기탁번호 DSM 4572로 기탁된 이작용성 벡터 pX161(pK61)로써 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 변종쿠르스타키 HDIcryB.
  79. 기탁번호 DSM 4571로 기탁된 이작용성 벡터 pX161(pK93)로써 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 변종쿠르스타키 HDIcryB.
  80. 제49항 내지 제69항중 어느 하나에 따른 이작용성 벡터로써 형질전환된 바실루스 세레우스.
  81. 기탁번호 DSM 4573로 기탁된 이작용성 벡터 pX193(pK93)로써 형질전환된 바실루스 세레우스 569K.
  82. 제1항 또는 제2항에 있어서, 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 또는 이들 모두를 형질전환시키기 위해 제49항 내지 제69항중 어느 하나에 다른 이작용성 벡터를 사용하는 것을 포함하는 방법.
  83. 제82항에 있어서, 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 HDIcryB가 제49항 내지 제69항중 어느 하나에 따른 이작용성 벡터로 형질전환된 방법.
  84. a) 바실루스 투린지엔시스 내에서 천연적으로 존재하는 δ-내독소 폴리펩티드 또는 실질적으로 그와 상동인 폴리펩티드를 코딩하는 구조유전자를 함유하는 재조합 DNA분자로 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스, 또는 그들의 혼합물 또는 다르게는 b) 상기 형질전환된 바실루스 세포에 의해 생성되는 프로톡신을 함유하는 무세포 결정체 제제로 곤충 또는 그 서식지를 처리하는 것을 포함하는 곤충 방제법.
  85. 제84항에 있어서, a) 따른 형질전환된 생존 또는 사멸 바살루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포 및 형질전환된 바실루스 세포에 의하여 생산되는 프록톡신을 함유하는 b) 에 따른 무세포 결정체 제제로 구성된 살충성 혼합물을 사용하는 방법.
  86. a) 제49항 내지 제69항중 어느 하나에 따른 이작용성 벡터로 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 세포 또는 이들의 혼합물 b) 형질전환된 바실루스 세포에 의해 생성된 프로톡신을 함유하는 무세포 결정체 제제로 곤충 또는 그의 서식지를 처리시키는 것을 특징으로 하는 곤충의 방제방법.
  87. 제86항에 있어서, a)에 따른 형질전환된 생존 또는 사멸 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포 및 형질전환된 바실루스 세포에 의하여 생산되는 프로톡신을 함유하는 b) 에 따른 무세포 결정체제로 구성된 살충성 혼합물을 사용하는 방법.
  88. 제84항 내지 제87항중 어느 하나에 있어서, 곤충이 나비목, 파리목 또는 딱정벌레목의 곤충인 방법.
  89. 제88항에 있어서, 곤충이 나비목의 곤충인 방법.
  90. 통상적으로 사용되는 담체, 분산제 또는 담체 및 분산제와 함께 a) 바실루스 투린지엔시스 내에 천연적으로 존재하는 δ-내독소 폴리펩티드 또는 실질적으로 그와 상동인 폴리펩티드를 코딩하는 구조 유전자를 함유하는 재조합 DNA분자로 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스, 또는 그 둘의 혼합물 또는 다르게는, b) 상기 형질전환된 바실루스 세포에 의해 생성되는 프로톡신을 함유하는 무세포 결정체 제제를 함유하는 곤충 방제용 조성물.
  91. 제90항에 있어서, 통상적으로 적용되는 담체, 분산제 또는 담체 및 분산제와 함께 a)에 따른 형질전환된 생존 또는 사멸 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포 및 형질전환된 바실루스 세포에 의해 생산된 포로톡신을 함유하는 무세포 결정체 제제로 구성된 살충성 혼합물을 함유하는 곤충 방제용 조성물.
  92. 통상적으로 사용되는 담체, 분산제 또는 단체 및 분산제와 함게 a) 제40항 내지 제54항중 어느 하나에 따른 이작용성 벡터로 형질전환된 바실루스 투린지엔시스 또는 바실루스 세레우스 세포 또는 이들 바실루스 세포의 혼합물 또는 b) 형질전환된 바실루스 세포에 의해 생산된 프로톡신을 함유하는 무세포 결정체 제제를 함유하는 곤충 방제용 조성물.
  93. 제92항에 있어서, a)에 따른 형질전환된 생존 또는 사멸 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스 세포 및 형질전환된 바실루스 세포에 의하여 생산되는 프로톡신을 함유하는 b) 에 따른 무세포 결정체 제제로 구성된 살충성 혼합물을 함유하는 곤충 방제용 조성물.
  94. a) 유전자를 단리하고, b) 필요에 따라 단리된 유전자를 바실루스 투린지엔시스에서 작용할 수 있는 발현서열에 기능적으로 연결시키며, c) 적합한 벡터를 사용하는 형질전환에 의해 b)의 유전자 조립체를 바실루스 투린지엔시로 도입하고, 또 d) 필요에 따라 상응하는 유전자 산물을 발현하고, 또 필요에 따라 그것을 단리하는 것을 포함하는, 유전자를 바실루스 투린지엔시스에 삽입하고 클로닝하며 또 발현시키는 방법.
  95. a) 유전자를 단리하고, b) 필요에 따라서 단리한 유전자를 바실루스 세레우스에서 작용할 수 있는 발현 서열에 기능적으로 연결시키며, c) 적합한 벡터를 사용하는 형질전환법에 의해 b) 의 유전자 조립체를 바실루스 투린지엔시스로 도입하고 또 d) 필요에 따라 상응하는 유전자 산물을 발현하고 또 필요에 따라서 그것을 단리하는 것을 포함하는, 유전자를 바실루스 세레우스에 삽입하고, 클로닝하며 또 발현시키는 방법.
  96. 제94항 또는 제95항에 있어서, 유전자가 바실루스 투린지엔시스의 프로톡신 유전자인 방법.
  97. 제94항 또는 제95항에 있어서, 발현 서열이 바실루스 투린지엔시스의 포자 형성 의존성 프로모터를 포함하는 방법.
  98. 제94항 또는 제95항에 있어서, 직접적 클로닝 벡터를 사용하는 방법.
  99. 제94항 또는 제95항에 있어서, 이 작용성 (셔틀)벡터를 사용하는 방법.
  100. 제94항 또는 제95항에 있어서, 유전자 대신 기타 유용한 DNA서열을 바실루스 세포에 삽입하고 또 그안에서 클로닝한 방법.
  101. a) 적합한 제한 효소를 사용하여 바실루스 투린지에시스의 전체 DNA를 분해하고, b) 생성한 제한 단편면중 적합한 크기의 단편을 단리하며, c) 이 단편을 적합한 벡터에 삽입하고, d) 바실루스 투린지엔시스 세포를 벡터로써 형질전환시키며 또 e) 적합한 스크리닝 방법을 이용하여 신규 DNA서열을 형질전환체로부터 단리하는 것을 포함하는, 신규 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열을 바실루스 투린지엔시스에 직접 클로닝하고, 발현시키며 또 확인하는 방법.
  102. a) 적합한 제한 효소를 사용하여 바실루스 투린지엔시스의 전체 DNA를 분해하고, b) 생성한 제한 단편중 적합한 크기의 단편을 단리하며, c) 이 단편을 적합한 벡터에 삽입하고, d) 이 벡터로써 바실루스 세레우스 세포를 형질전환시키며, 또 e) 적합한 스크리닝 방법을 이용하여 신규 DNA서열을 위치 확인하거나 또는 필요에 따라 형질전환체로부터 단리하는 것을 포함하는 신규, 유전자 또는 기타 유용한 DNA서열을 바실루스 세레우스에 직접 클로닝하고, 발현시키며 또 확인하는 방법.
  103. 제101항 또는 제102항에 있어서, 신규 유전자가 프로톡신 유전자인 방법.
  104. 제101항 또는 제102항에 있어서, 직접적 클로닝 벡터를 사용하는 방법.
  105. 제101항 또는 제102항에 있어서, 셔틀 벡터를 사용하는 방법.
  106. 제101항 또는 제102항에 있어서, 신규 DNA서열의 위치 확인을 위해 면역학적 스크리닝 방법을 사용하는 방법.
  107. 상동 및 특히 비상동 DNA, 또는 상동 및 비상동 DNA의 결합물을 클로닝하고 발현하기 위한 일반적 숙주 생물로서 바실루스 투린지엔시스 및/또는 바실루스 세레우스의 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100705338B1 (ko) * 2000-10-24 2007-04-11 주식회사 삼양제넥스 빙핵활성이 증가된 미생물 및 그것의 제조방법

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR910700343A (ko) * 1988-12-12 1991-03-14 원본미기재 바실러스 써린젠시스의 신규 균주
EP0382990A1 (en) * 1989-02-15 1990-08-22 Plant Genetic Systems, N.V. Strains of bacillus thuringiensis
US5683691A (en) * 1989-02-15 1997-11-04 Plant Genetic Systems, N.V. Bacillus thuringiensis insecticidal toxins
GB8910624D0 (en) * 1989-05-09 1989-06-21 Ici Plc Bacterial strains
US6270760B1 (en) 1989-12-18 2001-08-07 Valent Biosciences, Inc. Production of Bacillus thuringiensis integrants
IL96688A0 (en) * 1989-12-18 1991-09-16 Sandoz Ag Expression of delta-endotoxin proteins
AU643800B2 (en) * 1990-05-15 1993-11-25 Ecogen Inc. Shuttle vector for recombinant bacillus thuringiensis strain development
EP0471647A3 (en) * 1990-08-16 1993-02-24 Ciba-Geigy Ag Restriction-deficient mutants
WO1992014826A1 (en) * 1991-02-15 1992-09-03 Ciba-Geigy Ag Bacillus thuringiensis-promoter
DK0526397T3 (da) * 1991-07-25 1996-02-12 Ciba Geigy Ag Immunologisk påvisningsfremgangsmåde
CN1121733A (zh) * 1993-04-23 1996-05-01 山道士有限公司 含有编码杀虫蛋白质的基因的dna片段
US5441884A (en) * 1993-07-08 1995-08-15 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis transposon TN5401
US5843744A (en) * 1993-07-08 1998-12-01 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis Tn5401 proteins
DE69632205T2 (de) * 1996-01-26 2005-04-21 Valent Biosciences Corp Herstellung von bacillus thuringiensis integrants

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4503155A (en) * 1982-02-01 1985-03-05 Eli Lilly And Company Multifunctional, cloning vectors for use in Streptomyces, Bacillus, and E. coli
US4530904A (en) * 1982-09-03 1985-07-23 Eli Lilly And Company Method for conferring bacteriophage resistance to bacteria
JPS6034183A (ja) * 1983-08-05 1985-02-21 Ajinomoto Co Inc プラスミドｐＵＴ３２
GB8425487D0 (en) * 1984-10-09 1984-11-14 Agricultural Genetics Co Strain of bacillus thuringiensis
GB8630527D0 (en) * 1986-12-22 1987-02-04 Sandoz Ltd Organic compounds
US5080897A (en) * 1987-05-08 1992-01-14 Ecogen Inc. Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100705338B1 (ko) * 2000-10-24 2007-04-11 주식회사 삼양제넥스 빙핵활성이 증가된 미생물 및 그것의 제조방법

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Publication number Publication date
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IL90334A (en) 1995-07-31

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